Brevet FR2152487A1 — publié le 19730427

La présente invention se réfère à un procédé pour la préparation dtun composé correspondant à la formule Cette composition est utilisée en thérapeutique pour réduire l'accumulation de l'ammoniaque dans le sang et dans les tissus. I1 est connu que dans les altérations hépatiques le contenu d'ammoniaque dans le sang et dans les tissus augmente en mesure proportionnelle avec la gravité de l'affection. Plusieurs essais expérimentaux et cliniques démontrèrent que l'accumula- tion dIanoniaque est responsable du coma hépatique et que, dans cette affection morbide, on a une altération du métabolisme azoté et en particulier de l'élimination de ltammoniaque sous forme durée.Parmi les substances variées proposées pour réduire l'ac cumulation d'ammoniaque dans le sang, le foie, les reins, le tissu aisculaire et qui compromet l'activité du système nerveux central (intoxication hépatocérébrale), l'acide glutamique et l'acide aspartique (et leurs sels et le N-carbamyl et le N- acyl dérivés) sont capables de fixer l'ammoniaque en présence de ATP, qui par ailleurs est absente dans les insuffisances hépatiques graves ; en réalité l'efficacité thérapeutique de ces composés est actuellement très discutée. L'arginine est plus efficace (ainsi que quelques uns de ses sels tels que glutamate, aspartate, phosphate, glycuronate, glucose-l-phosphate, pyrrolidon-carboxylate, pantothénate, orotate, etc..*) Elle exerce une action active sur le cyele de ltorni- thine (cycle de l'uréogènèse ou de Krebs-Henseleit) avec augmentation de la conversion de l'ammoniaque en urée. L'efficacité supérieure de l'arginine en comparaison des autres constituants du cycle de lturéogénèse est probablement dûe à sa majeure perméabilité cellulaire et à la présence de concentrations élevées dfarginase même dans un foie très atteint. En effet de nombreuses recherches cliniques confirment que l2adminis- tration d'arginine détermine la diminution de l'ammoniémie, l'augmentation de l'urée et la normalisation de ltélectro-encéphalo- gramne dans l'intoxication hépatocérébrale.Par ailleurs, les meilleurs résultats thérapeutiques ne s'obtiennent généralement pas avec le chlorhydrate d'arginine tamponné avec de lthydrate ou carbonate de soude, ni avec les associations de chlorydrate dtarginine et de sels sodiques d'acides organiques métaboliquement actifs, mais avec les sels obtenus par l'union de l'arginine-base avec lesdits acides libres. On ntaltère pas ainsi l'équilibre électrolytique (par absence de ions Na et C1 ) déjà compromis dans les affections hépatiques graves avec oedèmes et ascites. En suivant cette direction, étant donné que le cycle de luréogénèse est en étroite relation, au moyen de quelques composés intermédiaires, avec le cycle énergétique de acide citrique (cycle de Krebs), le demandeur a voulu mettre en valeur l'action de l'arginine avec ltacide malique, ce dernier agissant comme substratum générateur d'énergie et est capable de protéger à lui seul le foie de Itintoxication par CC14 chez le rat, en mesure non inférieure à quelques composés thioliques (cistéine, glutathion, acides thioglycoliques et thiomaliques) et supérieure à la méthionine, à la choline et aux acides aspartiques et glumatiques. On a ainsi réalisé la synthèse du malate d'arginine, d'après la présente invention. En ligne générale ce composé est préparé en faisant réagir des quantités équivalentes d'arginine et d'acide malique dans un solvant polaire tel que l'alcool éthylique ou l'eau et en isolant le sel ainsi obtenu par concentration sous vide et à basse température de la solution qui en résulte. Pour mieux illustrer l'invention, on cite, ci-après, à titre d'exemple non limitatif, une forme préférée de réalisation. Dans un ballon à trois cols, pourvu d'un agitateur, d'un thermomètre et d'un raccord pour distillation sous vide, on met 100 ml de solvant polaire, eau ou bien un alcool aliphatique pri ire à 1-3 atomes de carbone et 13,4 g d'acide aulique. Tout etn agitant, on y ajoute lentenent 34,8 g d'arginine finement pul vérisée, qui devient ainsi soluble. La solution qui en résulte est alors concentrée et séchée dans le vide à la teipérature de 3Oc @ le résidu, repris avec un peu d'alcool, est filtré et séché. On obtient ainsi 45 g d'un solide blanc cristallin à point de fusion de 227-228 C avec décomposition. Le rendement est de 95 %. Analyse : pour C16 H34 N8 9- Trouvé % : C. 39.99 : H. 7.21 : N. 23.19 Calculé % : 39.82 : 7.10 : 23.22 Essais expérimentaax effectués En partant de la démonstration que les rats intoxiqués par du NH4Cl qui ne sont pas protégés par la seule arginine, survivent par administration associée acide malique, on a démon- tré les propriétés suivantes du malate d'arginine 1-) Sécrétion biliaire (BSF-TEST) : le composé (25 - sous-cutanée pour 10 jours) atténue d'une manière significative les lésions hépatiques de CC14 (200 mg/kg en huile d'olive intramusculaire pour 10 jours). 20) Activités métaboliques hépatiques : dans le rat in toxiqué avec OCi4 (400mg/kg en huile d'olive intramusculaire pour lOJours) le composé (30mg/kg souE-cutanée pour 10 jours) maintient en état normal les activités transaminasiques et la consommation de 2 de l'homogénate de foie. 3 ) Toxicité subaigüe du CC14 : dans le rat intoxiqué tous les trois jours par CCl4 en huile d'olive à 50 % (4 d/kg intrapéritonéale) le composé (200 mg/kg sous-cutanée pour trois jours augmente la survivance de 50 %. 4 ) Action antiammoniémique : dans le rat intoxiqué avec NH4cl (200mg/kg intramusculaire) le composé (500 mg/kg intrapéritonéale) réduit l'ammoniémie dtune façon significative supérieure en comparaison à une quantité équimoléculaire d'arginine. 5') Toxicité aigüe du NH4C1 : dans le rat intoxiqué avec NS4C1 intramusculaire, le composé (800mg/kg intrapéritonéale) réduit la DL50 de 35 %. 6 ) Toxicité aigüe : dans le rat le composé a une DL50 intrapéritonéale de 4,86 g/kg (4,11 - 5,73) ; chez le lapin 0,5 g/kg intraveineuse, ne provoquent pas dtaltération de la pression ni de la respiration. 7 ) Toxicité subchronique et chronique ; chez le rat 0,5 g/kg/die/120jours (doses 30-40 fois supérieures à celles prévues pour usage clinique) ne provoquent pas une altération de la croissance, de la crase hématique, du temps de la coagulation, de la glycémie, des transminases sériques, de l'exerétion du BSF, de la réserve alcaline, des lipides, glycogène et transaminases hdpatiques, des protéines musculaires, du poids, de ltaspect macro- et microscopique des viscères : enfin absencede toxicité foetale et d'activité tératogène et carcinogène. Tous ces résultats obtenus avec le malate d'arginine sont interprétables comme effets d'une potentialisation qui, sur les propriétés de l'arginine connues, exerce le composé malique.Celle-ci, en effet, outre à fournir l'énergie indispensable pour la synthèse de 1'ATP, donne naissance dans l'organisme à de l'acide pyruvique par décarboxylation et à de l'acide oxalacétique par déshydrogénation et enfin à de l'acide x - chétoglutarrique. I1 se forme ainsi trois x - cheto-acides capables de fixer l'ammoniaque qui se transforment respectivement en alanine, acide aspartique et acide gluta moque, mais sans consommation d'ATP ; ces deux amino-acides peuvent, à leur tour, fixer de l'amnoniaque en se transformant respectivement en glutamine et asparagine, mais avec consommation d'ATP. I1 en résulte que le composé malique contribue, tant au niveau énergotique qu'au niveau métabolique, à la désintoxication ammoniacale (fixation de l'ammoniaque en amino-acides) en synergie avec celle exercée par l'arginine (élimination de ltammoniaque sous fore deurEe). ESSAIS CLINIQUES Chez de nombreux patients atteints dthépatopathies aiguës et chroniques, d'hépatoscléroses précirrhogènes et cirrhogènes, de toxicoses et hyperammoniémies ésogènes et endogènes, dtintoxica- tions hépatocérébrales, le galate d'arginine à doses journalières de 0,5 - 1 g intramusculaire ou 1,5 - 3 g perfusés par voie veineuse 1 - 2 fois par jour pour des périodes même de 1 - 2 mois, détermine une rapide diminution de l'amnoniémie avec régression des symptomes neurolologiques, une amélioration progressive des paramètres biohumorales, des tests de fonction hépatique et des conditions générales, avec parfaite tolérance locale et générale. REVENDICATIONS 10) Procédé pour la préparation dtun composé correspondant à la formule c a r a c t é r i s é par l'addition, sous agitation, d'une quantité équivalente d'arginine, un équivalent dtacide malique, dissous dans liteau ou dans un alcool aliphatique primaire à 1 - 3 atomes de carb e, la concentration de la solution qui en résulte jusqu'à sec, la reprise du résidu avec un peud1alcool, la filtration et le séchage pour obtenir, avec un rendement de 95 %, un solide cristallin blanc à point de fusion de 227 - 2280C avec décomposition. 20) Composé réalisé suivant le procédé de la revendication précédente. 30) Composé suivant la revendication 1, c a r a c t é r i s é par le fait qu'il est utilisé en thérapie pour réduire l'accumulation d'ammoniaque dans le sang et dans les tissus.