Brevet FR2197581A1 — publié le 19740329

La présente invention a pour objet l'application en thérapeutique de l'acide hydroxyméthylacrylique employé seul ou en association. L'acide hydroxyméthylacrylique est déjà connu. On l'obient selon la méthode décrite par ROSENTHAL et Col. dans le brevet britannique nO 1 208 403 (et publiée dans le Journal of Organic Chemistry, 28, 2835 - 1963). Cette méthode consiste à faire réagir le nickelcarbonyle sur l'alcool propargylique en présence d'éthanol et d'acide acétique, le mélange réactionnel étant en fin de réaction acidifié par HC1 et extrait par l'éther. L'acide est finalement distillé, après que l'on a chassé l'éther du milieu. On caractérise ledit acide hydroxyméthylacrylique, de formule brute C4H603 - par ses constantes physico-chimiques, à savoir son point d'ébullition, soit : 1100 C sous 0,1 mm de mercure, 20 son indice de réfraction, soit : nD20 = 1,4748, - par son analyse élémentaire : 102 g, - par titrimétrie : 98 g, et - par son spectre d'absorption en infrarouge et son spectre de résonnance magnétique nucléaire. Jusqu'à présent, l'acide hydroxyméthylacrylique n' a été utilisé que pour son aptitude à polymériser. Dans l'industrie des caoutchoucs, notamment, on l'ajoute dans des latex comme par exemple les latex de styrène acrylate de butyle, pour améliorer l'aptitude à la fixation de colorants, et accroître l'adhérence du caoutchouc. Selon l'invention, on a maintenant découvert que l'acide hydroxyméthylacrylique (HMA) possède également des propriétés thérapeutiques, puisqu'il est diurétique, cholérétique et amphocholérétique. 1") Action diurétique Elle a été étudiée chez le lapin. L'animal, anesthésié à l'uréthane, est constamment perfusé par un soluté isotonique de NaCl, au débit de 2 cm3/mn. Après laparatomie, les deux uretères sont cathétérisés et l'urine qui s'écoule est recueillie dans de petits godets. Lorsque ces derniers sont pleins, ils basculent en donnant une impulsion à un contacteur, de sorte que le phénomène est enregistrable. (On obtient ainsi les courbes représentées sur les figures 2, 3, 7, 8 et 9, qui sont expliquées plus loin). En outre, chaque échantillon correspondant à un godet est recueilli dans un collecteur de fractions, et on dose les ions K+, Na+ et Cl contenus dans chaque échantillon. Lorsque la diurèse est stable, l'acide hydroxyméthylacrylique est admi nistré par voie intraveineuse à la dose de 35 mg/kg et à raison de 2 ml/m On obtient ainsi les résultats répertoriés dans le tableau I suivant TABLEAU I Elimination des ions Temps nécessaire Temps cumulé Volume de pour remplir le de diurèse diurèse Na+ K+ Cl godet de 8 cm (cm /mn) g/l mg mg/mn g/l mg mg/mn g/l mg mg/mn Témoin 5 mn 15 s 5 mn 15 s 1,38 2,56 20,4 3,52 0,225 1,8 0,311 6,47 51,7 9,4 Administration de HMA (dose:35mg/kg) ler godet 4 mn 15 s 9 mn 15 s 1,88 2,44 12,5 4,6 0,217 1,74 0,41 6,47 51,7 12,2 2ème godet 3 mn 30 s 13 mn 20 s 2,28 2,48 19,8 5,65 0,195 1,56 0,445 6,27 50,2 14,3 3ème godet 4 mn 12 s 17 mn 32 s 1,94 2,56 20,4 4,85 0,240 1,92 0,457 6,47 51,7 12,3 Ces résultats ont permis de tracer - la courbe représentée en figure 1 et donnant le volume de diurèse par minute, en fonction du temps de diurèse, et - les courbes représentées sur la figure 4 et donnant en fonction du temps de diurèse, la masse (en mg) d'ions K+, Na et Cl éliminés par minute, à la suite de l'administration de 35 mg/kg de HMA. Ces figures montrent que l'administration de HMA chez le lapin augmente sensiblement la diurèse et favorise l'élimination des ions K+, Na+ et Cl Par ailleurs, il ressort de la comparaison de l'enregistrement de la diurèse due au HMA et représenté en figure 2, à l'enregistrement (figure 3) de la diurèse induite par le furosémide administré à la dose de 4 mg/kg, que, à la dose choisie, l'action du HMA se prolonge au-delà de celle du furosémide. 2 ) Action cholérétique L'acide hydroxyméthylacrylique, à la dose de 35 mg/kg, est légèrement 3 3 actif puisqu'il fait passer la cholérèse de 0,08 cm /mn à 0,12 cm /mn. 3 ) Action amphocholérétique Elle correspond à un retour de la cholérèse à la normale lorsque celle-ci est augmentée artificiellement par du déhydrocholate de sodium ou diminuée par de l'azoture de sodium. Après anesthésie des rats par de l'uréthane une fistule biliaire est réalisée, la bile s'écoule dans une pipette permettant à la fois de mesurer le débit et de recueillir les échantillons. a) Variations de la cholérèse sous déhydrocholate de sodium Le débit de base de la bile, mesuré sur des animaux témoins par la méthode indiquée ci-dessus est égal à 0,13 cm3/15 mn. A la suite de l'injection de déhydrocholate de sodium par voie intraveineuse, (veine du pénis) à la dose de 10 mg/kg, on observe une hypercholérèse significative, correspondant à un débit moyen de 0,188 cm /15 mn au cours des 15 premières minutes suivant l'injection, le débit de base étant recouvré quarante cinq minutes après l'injection. L'acide hydroxyméthylacrylique, administré à la dose de 200 mg/kg en même temps que le déhydrocholate de sodium, réduit l'action de ce dernier puisque, au cours des 15 minutes suivant l'administration, le débit moyen de bile 3 n'est plus que de 0,166 cm /15 mn, le retour à la cholérèse normale étant obtenu 30 minutes après l'administration, comme on peut le lire sur la figure 11a. b) Variations de la cholérèse sous azoture de sodium Le débit de base de bile, mesuré sur des témoins par la même méthode que précédemment, est de : 0,15 cm /15 mn. On administre aux rats par voie intraveineuse, 1,5 mg/kg d'azoture de sodium en solution extemporanée. Il en résulte une diminution sensible de la cholérèse qui, au cours des 15 minutes suivant l'administration, passe à 3 3 0,12 cm /15 mn, pour se stabiliser ensuite à 0,125 cm /15 mn. Le HMA, administré à la dose de 200mgssg 10 minutes avant l'injection d'azoture de sodium diminue sensiblement l'effet de ce dernier. En effet, ces conditions permettent de ramener le débit de bile à 0,13 cm /15 mn au cours des quinze minutes suivant l'injection de l'azoture,le débit de base étant recouvré 30 minutes après ladite injection. Ces résultats sont illustrés sur la figure llb. On a en outre découvert que l'association de l'acide hydroxyméthylacrylique (HMA) aux acides malique (M), succinique (S), et citrique (C), se traduit par des résultats thérapeutiques inattendus, compte tenu de l'activité de chacun de ces acides pris séparément. Pour préparer un mélange administrable thérapeutiquement, on dissout les quatre acides dans l'eau à concentrations variables, puis les neutralise par addition de bicarbonate de soude. Des compositions préférées pour le mélange selon l'invention sont Acide malique (M) 2 parties Acide succinique (S) 2 parties Acide citrique (C) 2 parties Acide hydroxyméthylacrylique (HMA) 1 ou 2 parties les parties étant exprimées en poids. Les différents acides présents dans la solution peuvent être caractérisés par chromatographie en couche mince (CCM) et dosés par chromatographie gazliquide (CGL). 10) Chromatographie en couche mince Elle peut être réalisée sur Silicagel G (Merck) avec l'un des solvants suivants - toluène - formiate d'éthyle - acide formique dans les proportions volumiques suivantes : 5/4/1 - éthanol - chloroforme - ammoniaque à 25 %, dans les proportions volumiques suivantes : 68/15/17 - méthyléthylcétone - n propanol - éthanol - ammoniaque dans les proportions volumiques suivantes : 45,5/4,5/18/32, et des réactifs de révélation particulièrement adaptés. A titre d'exemple, on donne les réactions de caractérisation utilisées avec le premier solvant. a) les fonctions acides sont révélées sous forme de taches brunes à l'aide du réactif de Schweppe. b) les fonctions réductrices, en l'occurrence les fonctions alcools, colorent en bleu le réactif phosphomolybdique. c) 1'HMA est caractérisé par la formation d'une tache brune, sous l'action du réactif chromotropique. L'acide malique agissant sur le réactif chromotropique donne une tache vertjaune qui, en U.V., montre une fluorescence jaune intense, agissant sur le réactif naphtorésorcinol sulfurique ou sur le réactif orcinol sulfurique, entraîne une fluorescence bleue à 366 nm. L'acide citrique colore en bleu-violet le réactif d'Haussler, forme une tache rose sous l'action du réactif de Furth et Casarès. La figure 5 donne le relevé des taches obtenues par chromatographie en couche mince des acides malique (M), succinique (S), citrique (C) et hydroxyméthylacrylique (HMA), seuls ou en mélange, le solvant utilisé consistant en ledit mélange toluène - formiate d'éthyle - acide formique. Sur cette figure, on mesure le R f de chacun des acides utilisés dans le mélange selon l'invention. Les valeurs mesurées sont répertoriées dans le tableau II suivant TABLEAU II t Rf de Rf de R f de R f de Réactifs l'acide l'acide l'acide Solvant A : citrique malique succinique HMA Schweppe 0,17 0,22 0,43 0,50 Phosphomolybdique 0,17 0,22 0,50 Chromotropique 0,22 0,50 Naphtorésorcinol 0,22 Orcinol 0,22 Haussler 0,17 Furth et Casarès 0,17 On constate ainsi que l'on retrouve, dans le mélange, les quatre acides de départ qui n'ont pas réagi entre-eux. 2") Dosage des acides Le dosage est réalisé par chromatographie en phase gazeuse, les acides devant d'abord être transformés en leurs dérivés silylés. Le mode opératoire utilisé est le suivant Les acides libres sont dissous dans la pyridine et laissés 30 mn en contact avec le-réactif contenant la n-o-bis-silylacétamide, puis les esters silylés formés sont injectés à raison de lrl dans l'appareil CIRDEL réglé à la sensibilité 128, et soumis aux conditions opératoires suivantes colonne SE 30,5 %, température programmée à 15 C/mn de 110 à 250"C. température de détecteur : 275"C température de l'injecteur : 2250C gaz porteur : azote au débit de 25 cm3/mn. On obtient ainsi le chromatogramme représenté à la figure 6. Le dosage est fait par comparaison avec des gammes étalons de chaque acide dont les distances de rétention, en cm, sont HMA : 2,9 cm succinique : 3,5 cm malique : 5,6 cm succinique : 8,9 cm. On vérifie, par ce dosage, que le mélange selon l'invention contient deux parties en poids de chacun des acides malique, succinique et citrique, pour une partie d'acide hydroxyméthylacrylique, ce qui correspond à la composition d'origine du mélange analysé. Le mélange selon l'invention a été testé sur l'animal de laboratoire. On a ainsi montré qu'il présente des propriétés diurétique et amphocholérétique, et qu'il agit sur la bilirubine et le cholestérol biliaires. 1") Action diurétique Elle est mise en évidence de la façon déjà exposée à propos de l'étude des propriétés thérapeutiques de 1'HMA, et comparée a à la diurèse induite par chaque acide employé seul, à la même dose, a à la diurèse induite par différents mélanges binaires ou ternaires possibles, et a à la diurèse provoquée par un diurétique couramment employé, tel le furosémide (administré à la dose de 4 mg/kg). Ainsi, par administration du mélange ternaire, acide malique, acide succinique et acide citrique à la dose de 10 mg/kg de chaque acide, et par administration du mélange quaternaire acide hydroxyméthylacrylique, acide malique, acide citrique et acide succinique, à la dose de 5 mg/kg du premier et de 10 mg/kg de chacun des trois autres, on obtient les résultats répertoriés dans les tableaux III et IV, respectivement. TABLEAU III Temps nécessaire Temps cumulé Volume de pour remplir le de diurèse diurèse godet de 4 cm (cm /mn) Témoin 3 mn 3 mn 1,34 Administration du mélange ternaire (30mg/kg) ler godet 2 mn 10 s 5 mn 10 s 1,90 2ème godet 2 mn 55 s 8 mn 05 s 1,38 TABLEAU IV Temps nécessaire Temps cumulé Volume de Elimination des ions pour remplir le de diurèse diurèse Na+ K+ Cl godet de 4 cm (cm /mn) g/l mg/mn g/l mg/mn g/l mg/mn Témoin 2 mn 30 s 2 mn 30 s 1,6 3,19 5,07 0,405 0,640 8,43 13,45 Administration du mélange quaternaire (35mg/kg) ler godet 1 mn 15 s 3 mn 45 s 3,2 2,82 9 0,282 0,9 7,69 25,07 2ème godet 1 mn 4 mn 45 s 4 2,90 11,55 0,232 0,295 6,76 26,9 3ème godet 1 mn 05 s 5 mn 50 s 3,64 3,17 11,5 0,277 1,05 8,33 30,2 4ème godet 2 mn 10 s 8 mn 1,82 3,3 6 0,337 0,61 8,92 16,2 Ces résultats ont permis de tracer - d'une part les courbes représentées sur la figure 1 et donnant, en fonction du temps, le volume de diurèse obtenu par minute à la suite de l'administration du mélange ternaire et du mélange quaternaire et, - d'autre part, les courbes représentées sur la figure 10 et donnant, en fonction du temps de diurèse, la masse (en mg) d'ions K , Na + et Cl - éliminés par minute à la suite de l'administration du mélange quaternaire. On met ainsi en évidence - sur la figure 1, l'importante potentialisation de l'action diurétique du mélange ternaire acide malique, acide succinique et acide citrique, par l'acide hydroxyméthylacrylique, et - sur la figure 10, l'importante élimination des ions Na , Cl et K + à la suite de l'administration intraveineuse du mélange quaternaire. Par ailleurs, il ressort de la comparaison de l'enregistrement de la diurèse due à la préparation selon l'invention, à l'enregistrement(figure 3) de la diurèse induite par le furosémide à la dose de 4 mg/kg, que, à la dose choisie, l'action de ladite préparation se prolonge bien au-delà de celle du furosémide. Enfin, on souligne que le bicarbonate de sodium utilisé pour neutraliser les acides ne participe pas à l'action diurétique, au contraire (comme cela ressort de la figure 9). 2") Action amphocholérétique: Les méthodes expérimentales mises en oeuvre sont les mêmes que celles ayant permis de montrer l'action amphocholérétique de l'HMA. a) variation de la cholérèse sous déhydrocholate de sodium La préparation selon l'invention, administrée à la dose de 35 mg/kg en même temps que le déhydrocholate de sodium, réduit l'action de ce dernier puisqu'elle ramène le débit moyen de bile à 0,159 cm /15 mn au cours des quinze premières minutes suivant l'administration, le débit de base étant recouvré trente minutes après l'administration. Ces résultats sont illustrés sur la figure lla. b) variation de la cholérèse sous azoture de sodium La préparation selon l'invention, administrée à la dose de 35 mg/kg dix minutes avant l'injection d'azoture de sodium, s'oppose à l'action de ce dernier puisqu'elle ramène la cholérèse à 0,14 cm3 /15 mn au cours des quinze minutes suivant l'administration, le retour à la normale étant obtenu 30 mn après l'administration. Ces résultats sont représentés sur la figure llb. Les propriétés amphocholérétiques du mélange selon l'invention sont inattendues, puisque - aucun des acides malique, succinique et citrique ne présente une action amphocholérétique, et que - parmi les mélanges binaires ou ternaires réalisés à partir de l'ensemble formé par les trois précédents acides et 1'HMA, seul le mélange de deux parties des acides malique et succinique et d'une partie d'HMA présente une faible activité, bien inférieure toutefois à celle du mélange préconisé. 3 ) Action sur la bilirubine biliaire On obtient les résultats consignés dans le tableau V ci-dessous TABLEAU V Débit de base Concentration Elimination de Forme après (cm /30 mn) en bilirubine la bilirubine 24 h. de (mg/l) en 30 mn ( g) vieillisse ment. Témoin 0,16 42 6,72 surtout libre Déhydrocholate de 0,30 20 6 surtout libre sodium (lOmg/kg/IV) 0,30 réparation Smg/kg/Iv) + éhydrocholate de sodium 0,25 40 10 surtout (lOmg/kg/IV) . h administré 15 mn après simultanément préparation déhydrocholate 0,25 18 4,5 surtout de sodium aux conjuguée doses précitées I1 ressort de ce tableau que l'administration du mélange selon l'invention entraîne, après vieillissement de la bile recueillie, une importante conjugaison de la bilirubine. 4 ) Action sur le cholestérol biliaire Les résultats obtenus sont rapportés dans le tableau VI suivant TABLEAU VI Cholestérol Cholestérol Cholestérol Cholestérol libre estérifié total libre Chloestérol estérifié Témoin 1,60 g/l 0,60 g/l 2,2g/l 2,66 Déhydrocholate de so dium (lOmg/kg/IV) produit de référence 1,35 g/l 0,95 g/l 2,3 g/l 1,42 augmentant la cholérèse Préparation selon l'invention (35mg/kg/IV) et déhydrocholate de j 1,30 g/l 0,90 g/l 2,2 g/l 1,44 sodium (lOmg/kg/IV) 15 mn après simultanément préparation selon ,l'invention et z 0,90 g/l 1,05 g/l 1,95 g/l 0,86 déhydrocholate de sodium (aux doses précitées) L'administration du mélange selon l'invention entraîne donc une nette augmentation de la proportion de cholestérol estérifié par rapport au cholestérol libre. Par ailleurs, on note que le HMA et la préparation selon l'invention sont peu toxiques puisque, par voie intraveineuse chez la souris, en solution amenée à-pH 7, ils présentent respectivement une DL 50 de 700 mg/kg, et de 630 mg/kg (soit 90 mg/kg de HMA, et 180 mg/kg pour chacun des acides malique, succinique et citrique), l'étude étant faite comparativement à une solution de carbonate de sodium pur amené au même pH. L'acide hydroxyméthylacrylique et son association aux acides malique, succinique et citrique sont donc utilisables en thérapeutique humaine et, notamment, comme diurétique et amphocholérétiques. La dose préférée est de 35 mgtkg pour la préparation selon l'invention, et est comprise entre 100 a 200 mg/kg pour HMA. REVENDICATIONS 1. - A titre de médicament utilisable en particulier comme diurétique cholérétique, l'acide hydroxyméthylacrylique. 2. - A titre de médicament utilisable en particulier comme diurétique amphocholérétique, l'acide hydroxyméthylacrylique, en association aux acides malique, succinique et citrique. 3. - A titre de médicament, l'association selon la revendication 2, contenant une même proportion en poids de chaque acide. 4. - A titre de médicament, l'association selon la revendication 2, contenant deux parties en poids des acides malique, succinique et citrique, pour une partie en poids d'acide hydroxyméthylacrylique.