Brevet FR2187321A1 — publié le 19740118

La présente invention concerne un nouveau composé de très grande valeur thérapeutique ainsi qu'un procédé pour sa préparation à partir de sources végétales. Le nouveau composé faisant l'objet de la présente invention est la -vivianosyl-3-quercétine appelée "Peltatoside" qui répond à la formule suivante OH W+0 HO M.;;î0;;1 or' Ce composé est obtenu sous forme de cristaux jaunes ayant un pont de fusion de 200 - 2020C. f A 1'U. V. des pics sont observés à 257 nm et 361 mn. Le Peltatoside se trouve dans certaines plantes qui peuvent être caractéridées comme suit Nympholdes peltata, Kuntze : E : Angiospermes (faux nénuphar, petit nénuphar, C1 : Dycotylédones Nympheau, Villarsie) O : Contortales Synonymes botaniques de la plante : Limnanthemum nymphoides, Hoffg. et Link, Limnanthemum peltatum, S. G. Gmel ; Menyanthes nyniphoides, L. ; Menyanthes natans, Lam. ; Villarsia nymphoides Vent. ; Wallschmidia nymphoides Wigg. ; Schweyckerta nflphoides C. G. Gmel. Habitat naturel : eaux douces tranquilles d'Europe occidentale. La plante ne se trouve pas dans les régions arctiques mais on la retrouve hors d'Europe dans les pays suivants : Caucase, Perse, Himalaya, Chine, Japon et Amérique du Nord. Mode de reproduction (plante vivace) -végétatif : par rameaux souterrains dans la vase et par bulbilles adventives naissant sur les pétioles et les limbes et germant dans la vase -sexué : fruit tombant dans la vase à la fin de la période de végétation : les parois du fruit sont détruites dans la base, li bérant les graines. Le titulaire a trouvé que le Peltatoside peut être préparé à partir de ces sources végétales par la combinaison des opérations suivantes 1) Extraction méthanol-eau. 2) Evaporation, filtration à chaud. 3) Dégraissage par l'acétate d'éthyle. 4) Extraction par le butanol. 5) Evaporation de la phase butanolique, reprise par alcooleau. 6) Chromatographie dans l-'acide.acétique 15 %, élution au Soxlhet. 7) Chromatographie dans le T. B. A. , élution descendante à froid. 8) Purification sur colonne de polyamide. 9) Cristallisatitn dans l'éthanol au demi. En détail, le procédé pour préparer le Peltatoside est le suivant La plante, préalablement réduite en poudre et délipidée par du chloroforme ou du trichloréthylène, est soumise à une extraction à chaud au moyen d'un mélange à volume égal méthanol-eau. Le traitement par solvants polaires a pour résultat de rompre les liaisons chimiques hydrogène (fonctions phénoliques et alcooliques) assurant la cohésion des complexes naturels du Peltatoside dans les cellules végétales. Après évaporation du méthanol, la phase aqueuse obtenue est traitée successivement pat l'éther et l'acétate d'éthyle dans la proportion d'un volume pour un volume et demi La phase aqueuse résiduelle est saturée par NaCl et extraite quatre fois par du n-butanol. Après évaporation de l'alcool, le résidu est repris par un mélange éthanol-eau. On procède alors à une purification par chromatographie en acide acétique à 15 %, à front perdu pendant 12 heures, puis par chromatographie en T. B. A. (butanol-acétique) pendant 24 heures; les bandes sont éluées par un mélange éthanol-eau (7 volumes pour 3 volumes). On fait alors réagir l'acétate neutre de plomb à 5 ffi en solution alcoolique. Le sel de plomb est recueilli par centrifugation, lavé, remis en suspension dans l'alcool aqueux, et le produit naturel est régénéré par réaction de l'hydrogène sulfuré par barbotage sous atmosphère d'azote. Après passage sur colonne de polyamide, on peut cristal liser le produit dans l'éthanol au demi. Le Peltatoside ainsi obtenu a une activité prononcée sur la perméabilité et la résistance capillaires. Selon le procédé de l'invention, on peut traiter aussi bien les feuilles et les tiges que les fleurs de cette plante. On a donné ci-dessous, à titre d'illustration, quelques exemples d'extraction et de purification à partir de feuilles de Nymphoses peltata, et de toute espèce végétale à Peltatoside. Exemple nO 1 800 g de plante préalablement réduite en poudre, délipidée par 8 litres de trichloréthylène, sont extraits de façon continue dans un appareil de type Soxhlet, au moyen d'un mélange méthanol-eau (2-1 v/v). Le solvant est évaporé et il reste alors 2 1 d'une solution aqueuse. Celle-ci est affrontée 4 fois à 2 1 d'éther et 4 fois-à la même quantité d'acétate d'éthyle. La solution résiduelle-(pH 6) est saturée par NaCl, puis reprise 4 fois par 2 l de n-butanol. Après évaporation du butanol, le résidu est alors traité à douce ébullition par un alcool inférieur, de préférence ltéthnnol, mélangé à de l'eau dans la proportion de 50 %. On obtient, après refroidissement et filtration, une masse brunâtre pesant 9-10 g, représentant le totum flavoniqué. Ce mode d'extraction donne un rendement brut de 12 0/oxo à partir du poids de la plante, mais de 1,3 O/oc en produit purissime. Exemple nO 2 Pour obtenir un Peltatoside très pur, plusieurs méthodes ont été étudiées et on expose ici celles qui ont donné les meilleurs résultats. Une solution hydroalcoolique (50-50) du totum flavonique à 10 % est soumise à une série de chromatographies sur papier, en utilisant le solvant butanol acétique de PARTRIDGE. 24 chromatographies préparatives ont été nécessaires pour recueillir, après élution à l'ambiante et filtration sur creuset, 235 mg de Peltatoside cristallisé purissime (Rf0,3 - 0,35 ; fluorescence brune). Exemple nO 3 Une méthode permettant l'obtention de plus grandes quantités de produit, a consisté à reprendre 10 g de totum flavonique par un mélange d'éthanol et d'eau (dans les mêmes proportions que dans l'exemple nO 2). On a alors procédé à une première chromatographie sur colonne de cellulose avec de l'eau comme solvant d'élu tion (on utilise 900 g de cellulose), en laissant migrer le produit pendant 40 heures, à la température ambiante. L'éluat est concentré sous vide à 400 C et le résidu dissous dans 5 cm3 d'eau est paBSf, stij une colonne de polyamide. 1,1 g de cristaux jaimes de Peltatoside ont été recueillis après solubilisation hydroalcoolique (50-50) à douce ébullition de l'éluat. Ces cristaux ont un pont de fusion de 2000 à 2020. Ils sont assez solubles dans l'eau (plus dans l'eau alcaline, jusqu'à pH 11), modérément solubles dans l'alcool éthylique et le butanol, insolubles dans tous les solvants lipophiles. La microanalyse donne : C26H32018, 2H20 calculé % C = 49,37 H = 5t10 trouvé 46 C = 49,25 H = 5,27 et 5,09 Les études pharmacologiques et toxicologiquès effectuées avec le Peltatoside ont donné les résultats suivants A) L'étude pharmacologique du Peltatoside a porté son action sur la perméabilité et la résistance capillaires Expérience n 1 Il a été trouvé que le Peltatoside a une activité très supérieure à celle de la rutine sur la fragilité capillaire. Un lot de rats mâles a été soumis pendant deux mois à un régime alimentaire fortement appauvri en1,facteurs vitaminiques P. Au bout de ces deux mois, on a retenu les animaux pesant 300 g + 10. Le jour de l'expérience, ces rats ont été rasés sur une large partie de leur épiderme dorsal. Le premier tiers des animaux a reçu de la rutine en solution aqueuse par voie intrapéritonssale, le deuxième tiers a reçu du Peltatoside dans les mêmes conditions, le troisième tiers a reçu uniquement le solvant. On a mesuré leur fragilité capillaire selon la méthode de Charlier et Coll. (Arch. Int. Physiol. Bioch. 1963, 21, 1). La dépression liminaire appliquée pendant 30 secondes sur la peau rasée des rats, dépression nécessaiiffie à provoquer l'apparition de pétéchies, s'est révélee très signigicativement supérieure chez les animaux traités par la rutine. Expérience n 2 Un lot de cobayes mâles de 300 à 450 g a été soumis pendant deux mois à un régime alimentaire fortement carencé en vita ne C. Le jour de l'expérience, ces animaux ont été rasés sur une large partie de leur épiderme dorsal. La moitié du lot a reçu du Peltatoside en solution aqueuse par voie I. P. ; l'autre moitié a servi de témoin. La résistance capillaire a été calculée d'après la méthode Levollay et Goal. ( Pharmacology of Plant Phenolics Sympsium d'0xford, 1958, 103 - 122) à l'aide du capillo-dynamomètre. il a été trouvé que le temps d'apparition de pétéchies était considérablement prolongé chez les animaux traités au Peltatoside. Expérience nO 3 Il a été trouvé que le Peltatoside agit sur la perméabilité capillaire. Un lot de cobayes a été soumis pendant deux mois a un régime scorbutigène. Un deuxième lot a été soumis à un régime normal. Le jour de l'expérience, tous ces animaux ont été tondus sur la majeure partie de leur épiderme dorsal. 1) On a provoqué chez tous ces animaux l'apparition d'une pupille intra-dermique d'histamine 2) On a injecté à tous, par voie I. V., une solution de Bleu d'Evans. 3) Une partie des animaux de chaque lot a reçu par voie I. P. une solution aqueuse de Peltatoside. Leur perméabilité capillaire a été calculée selon la méthode de Halpern et Coll. (Arch. Int. Pharm. 1959, 1t9, 56) et Lefèvre et Coll. (C. R. Soc. Biol. 1962, 156, 183). Il a été trouvé que le Peltatoside a normalisé la perméabilité capillaire chez les animaux carencés et qu'il a amélioré la P. C. chez les animaux qui avaient été soumis au régime normal. B) La toxicité a été recherchée par voie orale, intra péritonale et intraveineuse en perfusion. Il a été trouvé qu'une dose 100 fois supérieure à la dose thérapeutique n'avait aucune toxicité. Grâce à ses diverses activités pharmacologiques et son manque de toxicité, le Peltatoside peut etre utilisé en thérapeutique humaine dans tous les états pathologiques s'accompagnant d'une augmentation de la fragilité capillaire et de la perméabilité capillaire notamment dans 1) la prophylaxie et le traitement des hémorragies céré cérébrales et meningées chez les artério-scléreux et les hypertendus, syndromes hémorragiques, purpura, oedèmes de toute nature, accidents allergiques 2) la prévention des accidents hémorragiques post-opératoires des vasculaires, des hypertendus et des diabétiques 3) la fragilité capillaire de la parturiente en obstétri que 4) les eczémas aigus et chroniques, érythrodermie, engelures, radiodermites précoces. Le médicament peut être administré par les voies orale, rectale ou parentérale sous de nombreuses formes pharmaceutiques telles que comprimés, dragees, gélules, capsules, gouttes, sirops, ampoules buvables et injectables, suppositoires. Il peut être associé aux véhicules appropriés à ces formes pharmaceutiques. Les formes orales sont dosées de 2 à 70 mg de Peltatoside par prise, les suppositoires de 5 à 20 mg, le soluté injectable de 10 à 20 mg par ampoule de 2 ou 5 ml. Le médicament peut être utilisé en association à d'autres médicaments tels que - des vasodilatateurs (acide nicotinique) dans les troubles circulatoires périphériques - des spasmolytiques (papavérine) dans l'insuffisance circulatoire cérébrale et l'hypertension artérielle - des dérivés iodés dans le traitement prophylactique des accidents de l'athérosclérose - de l'acide ascorbique dans le traitement prophylactique des accidents de l'athérosclérose. La posologie moyenne est A titre préventif : de trois prises quotidiennes par cures prolongées. A titre curatif : en traitement d'attaque 1 à 3 ampoules de soluté injectable en traitement d'entretien 3 prises quotidiennes. REVENDICATIONS I - Nouvel hétéroside naturel extrait par les méthodes chromatographiques habituelles, caractérisé en ce qu'il provient du Nyvphoides Peltata, répondant à la formule 0 Ho OH KO > ; vicianosyl II - Nouvel hétéroside suivant la revendication I, caractérisé en ce qu'il possède une action sur la perméabilité et la résistance capgillaires très supérieure à celle de la Rutine. III - Nouvel hétéroside suivant la revendication I, caractérisé en ce qu'il ne présente aucune toxicité.