Brevet FR2182106A1 — publié le 19731207

La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation d'un composé de formule dans laquelle R est un atome dthydrogène, un groupe acétyle ou propionyle, X est un groupe de formule Y est un groupe de formule et te composé I de la présente invention correspond au dérivé 4"-déacyle drun antibiotique macrolide de base tel que leucomycine, YL 704, SP-837, maridomycine ou carbomycine. Par exemple, la désignation chimique ou la structure du composé I et de son antibiotique macrolide correspondant sont indiquées ci-après TABLEAU I Composé E IJ Antibiotique macrolide correspodant Désignation| R X Y Composé Antibiotiques de la sé DHH -H \CHOH -CH=CH- rie de la leucomycine A1 (leucomycine Ai, A5, 5 t et A9) (remarque 1) Composé Antibiotiques de la sé DHA -COGH, aCHOH -CH=CH- rie de la leucomycine A3 A3 (leucomycine A3, A4, A6 et A8) ... (remarque 1) Composé Yt 704 A1, B1 DHP -COC2H5 N,011011 -CH=CH- (remarque 2) YL 704 C2 ,,. (remar que 3) SF-837 ... (remarque 4) Composé 0 EHA -COCH3 fCHOH -CH- CH- Yt 704C4 (=maridomycine II) ... (remarque 5) 0 Composé C'H- O EHP -COC2H5 oCHOH -0R- Yt 70401 (=maridomycine III) ... (remarque 5) Composé 0 EOA -COCHD > O -CH > B Carbomycine A ... (remarque 6) Composé DOA -COCH yCO -CH=CH- Carbomycine B (remarque 7) Composé DOP -COC2H bCO -CH=CH- Yl 704W ... (remarque 3) 5 z SP-837 A , A . r (remarqu; 8)4 Remarque 1 : The Journal of Antibiotics, volume 21, 272 (1968) 2 ; Tetrahedron Letters, N 5, 435 (1971) (Suite) Remarque 3 : The Journal of Antibiotics, volume 24, 904 (1971) 4 : The Journal of Antibiotics, volume 24, 460 (1971) 5 : Experimentia, volume 28 129 (1972) 6 : Journal of the American Chemical Society, volume 87, 4662 (1965) 7 : Journal of the American Chemical Society, volume 76, 5080 (1954) 8 : The Journal of Antibiotics, volume 24, 526 (1971). Conformément à la présente invention, le composé I peut entre préparé par hydrolyse de l'antibiotique macrolide de base de formule dans laquelle Rl est un groupe alcanoyle en C2 à C5, et R, X et Y ont les définitions données ci-dessus, avec des cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou un variant ou un mutant de ce micro-organisme, ou avec un extrait exempt de cellules, préparé à partir des cellules vivantes de ce micro-organisme. te micro-organisme Streptomyces platensis var. malvinus MCRt 0769 de la présente invention est obtenu par irradiation ultraviolette de Streptomyces platensis var. malvinus NRRS 3761 (souche productrice de Yt 704, brevet japonais N 28836/1971) ou par traitement de la souche productrice de YL 704 avec un mutagène chimique tel que la Nméthyl-N'-nitro-N-nitroso-guanidine. Une culture viable de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 a été déposée à llAgricultural Research Service Collection du Ministère de l'Agriculture des Etats-Unis dtAmérique, Peoria, Illinois, U.S.A., sous le m0 NRRL 5685. Streptomyces platensis var. malvinus MCRt - 0769 présente les caractéristiques microbiologiques suivantes Caractéristiques morphologiques La souche se développe bien et forme des mycéliums aériens poudreux, de couleur grisâtre, sur divers milieux. tes mycéliums aériens forment des spirales. tes conidiospores sont formés en chaînes ayant au moins 10 spores de forme ellip- tique à cylindrique de 0,6 x 1,0 . La surface des spores est lisse. tes mycéliums aériens de la souche MCRt 0769 ont rarement un caractère hygroscopique sur divers milieux. Température et pH de la culture La souche est aérobie, et elle se développe bien à 370C et à un pH de 6,0 à 8,0. Elle se développe également bien àdes pH de 5,0 et 9,0 à la même température. Lorsque la température est de 270C, elle se développe à un pH de 5,0 .à 9,0. Toutefois, on ne peut observer aucune croissance à un pH de 4,0 quelle que soit la température ; de même, à O ou 500C, quel que soit le pH. Caractéristiques physiologiques La souche est positive dans lthydrolyse de l:ami don, la coagulation du lait, la peptonisation du lait, la réduction des nitrates et la liquéfaction de la gélatine, et négative dans la réaction à la tyrosinase, l'action chro mogénique et la formation dthydrogène sulfuré. Assimilation des sources de carbone La souche assimile le fructose, le raffinose, le mannitol, l'amidon, le galactose, lé maltose, le glucose, le lactose, l'arabinose, le saccharose, l'inositol et le glycérol. L'assimi- lation du xylose par la souche est douteuse Le rhamnose et la salicine ne sont pas assimilés. Caractéristiques de culture tes nombres indiqués entre parenthèses correspondent à la numérotation des couleurs utilisée dans "Color Harmony Manual", 4ème édition, publié par la Container Corporation of America. TABLEAU II Milieu ( C) Résultats observés Gélose de Czapek (27 C) I Jaune pâle (2db) en boîte de Pétri II Jaune pâle (2gc) à jaune clair (2 fb) III Aspect poudreux, blanc grisâtre (b) IV Jaune pâle (2 db) Gélose au glucose et à ltas- I Gris jaunâtre (2cb) à jaune paragine, en boîte de Pétri pâle (2db) (270C) II Gris brunâtre clair (2ec) à jaune pâle (2db) III Aspect poudreux, gris brunâ- tre clair (3fe) à gris jau nâtre (2dc) IV Pas de production Gélose à l'asparigine et I Gris brunâtre clair (2ec) au glycérol, en boîte de à jaune pâle (2ba) Pétri (270C) II Gris brunâtre clair (2ec) à jaune pâle (2ba) III Aspect poudreux, gris jaunâ tre (2dc) IV Pas de production Gélose à la tyrosine en I Jaune pâle (2db) boîte de Pétri (27 C) II Brun jaunâtre pâle (2gc) à gris brunâtre clair (2ec) III Aspect poudreux, blanc gri sâtre (b) IV Pas de production Gélose à l'amidon, en I Vert jaunâtre pâle (1cb) boite de Pétri (27 C) à brun jaunâtre pâle (2gc) Il Vert jaunâtre pâle (1db) à brun jaunâtre (2ie) III Aspect poudreux, gris jaune tre (2dc) IV Pas de production TABLEAU II (suite) Milieu ( C) Résultats observés Culture inclinée sur I Jaune pâle (2db) à gélose nutritive brun jaunâtre pâle (2gc) (37 C) II Jaune pâle (2db-2gc) III Aspect poudreux, blanc gri sâtre (b) IV Pas de production Gélose au maltose et I Gris brunâtre clair (2ec) à la levure, en boîte à jaune pâle (2gc) de Pétri (270C) II Brun jaunâtre (21e) III Aspect poudreux, g-ris jaunâtre (2dc) IV Brun jaunâtre pâle (2gc) Gélose à la farine d'avoine, en boîte de Pétri (2700) I Brun jaunâtre pâle (2gc) II Brun jaunâtre pâle (2gc) III Aspect poudreux, gris bru nâtre clair (3fe) les colonies forment dans une légère mesure une masse hygros copique de spores IV Brun jaunâtre pâle (2gc) Remarque I : couleur de la surface des mycéliums sur le substrat II : couleur de la face inférieure de la colonie III : couleur de la colonie IV : pigment soluble de Il ressort clairement/ce qui précède que le microorganisme Streptomyces platensis var.malvinus MCRL 0769 de la présente invention diffère de Streptomyces platensis var. malvinus NRRS 7761 par quelques caractères. Par exemple, Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ne forme pas de pigment soluble sur un milieu synthétique. En outre, les mycéliums aériens de Streptomyces platensis var. malvinus MORS 0769 ne forment pas de masse hygroscopique de spores et la couleur de l'envers de sa colonie, formée sur un milieu synthétique, ne varie pas avec le pR. Toutefois, pour presque toutes les autres propriétés microbiologiques, Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 de l'invention et Streptomyces platensis var. malvinus NRRL 3761 sont très semblables. A ce propos, il y a lieu de mentionner que la présente invention ntest pas limitée à l2utilisation de Streptomyces var. malvinus MCRL 0769, mais concerne aussi ltutilisation de mutants ou variants naturels ou artificiels de cette souche. En outre, il y a lieu de remarquer que tous les mutants ou variants naturels ou artificiels de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769, lorsqu'ils sont capables dthydrolyser l'antibiotique macrolide tII7 de base en position 4", sont inclus dans la définition de "streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou ses variants ou mutants11, selon la présente invention. La culture de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme peut être effectuée soit sous agitation par secousses, soit en immersion dans des conditions d'aération et d'agitation. On peut recourir aux sources classiques qui ont été utilisées dans la culture d'un actinomycète. Par exemple, on peut utiliser comme source de carbone l'amidon, le glucose, la glycérine ou le dextrane. Des exemples de sources convenables d'azote comprennent l'extrait de viande, la peptone, l'extrait de levure, la farine de soja, la poudre de mals et extrait soluble de maïs. te chlorure de sodium, le carbonate de calcium, etc., comptent parmi les éléments minéraux convenables.Dans la mise en oeuvre de la culture en immersion, on peut ajouter au milieu un agent anti-mousse tel qu'une huile siliconée une huile végétale ou un agent tensio-actif. Il est préférable de conduire la culture à un pH à peu près neutre, et à 20-30 O, notamment à environ 26 C La culture est terminée en 72 à 96 heures. L'hydrolyse de ltantibiotique macrolide [II] de base en position 4" (c'est-à-dire la position 4 du radical mycarose) peut être effectuée par mise en contact de l'antibiotique Z-II7 avec les cellules vivantes résultantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou dXur variant ou mutant de ce micro-organisme. Par exemple, l'antibiotique [II] est ajouté au bouillon aqueux de fermentation mentionné ci-dessus, et le mélange est mis à incuber pendant une périoae suffisante de temps. On obtient le composé [I] de la présente invention.A titre de variante, les cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme peuvent être séparées du bouillon de fermentation avant la réaction avec l'antibiotique [II]. Par exemple, les cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme sont séparées par filtration ou centrifugation du bouillon de fermentation. tes cellules vivantes ainsi recueillies sont lavées avec une solution saline physiologique puis dispersées dans une solution tampon au phosphate. te composé [I] est produit par agitation ou par repos de la solution dispersée pendant une période suffisante de temps. En outre, dans les réactions décrites ci-dessus, les cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MORD 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme peuvent être remplacées par un extrait exempt de cellules préparé à partir de ces cellules vivantes. t1 extrait exempt de cellules est préparé par un procédé connu, par exemple par homogénéisation, destruction aux ultra-sons ou traitement au lysozyme (voir "Methods in Enzymologys', Academic Press, Inc., New York, volume 1, page 51 (1955)). Il est préférable de conduire l'hydrolyse à un pH de 7,5 à 9,0, notamment à un p11 d'environ 8,0. Il est également préférable de conduire l'hydrolyse à 15-48 C. Pour ajuster le pH de la solution réactionnelle, il convient d'utiliser une solution tampon de phosphate 0,2 à 0,05 M. Bien que la quantité d'antibiotique rII 7 que l'on ajoute à la solution réactionnelle ne soit pas déterminante pour la présente invention, sa quantité pratique est inférieure à environ 10 000g/ml. En outre, la quantité pratique de cellules vivantes d'une souche du genre Streptomyces que l'on ajoute à la solution réactionnelle se situe dans la gamme de 7 à 20 mg (poids sec), notamment 12 mg (poids sec). Dans les conditions indiquées ci-dessus, la réaction d'hydrolyse de la présente invention est terminée en 2 à 120 heures.Lorsque l'antibiotique macrolide [II] de base (200 g/ml) est hydrolysé avec une solution tampon au phosphate 0,1 M contenant les cellules vivantes (70 mg/ml à l'état humide) de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769, on obtient le taux de transformation (%) de l'antibiotique [II] en composés [I] qui est indiqué sur le tableau III (l'hydrolyse a été effectuée à un pH de 8,0 et à 28 C pendant 130 mn) TABLEAU III Antibiotique [II] utilisé Composé [I] pro duit et taux de R X Y R' transformation (%) YL 704A1 -COC2H5 #CHOH -CH=CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé DHP, 50 % YL 704B1 -COC2H5 #CHOH -CH=CH- -COCH2CH2CH3 Composé DHP, 60 % Leucomycine A3 -COCH3 #CHOH -CH=CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé DHA, 36 % Leucomy- -H #CHOH -CH=CH- -COCH2CH2CH3 Composé DHH, 100 % cine A5 #O# YL 704C1 -COC2H5 #CHOH -CH-CH- -COC2H5 Composé EHP, 57 % #O# YL 704C4 -COCH3 #CHOH -CH-CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé EHA, 26 % YL 704W1 -COC2H5 #CO -CH=CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé DOP, 64 % Carbomy- #O# cine A -COCH3 #CO -CH-CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé EOA, 33 % Carbomycine B -COCH3 #CO -CH=CH- -COCH2CH(CH3)2 Composé DOA, 58 % Lorsque l'hydrolyse de la présente invention est terminée, les cellules vivantes et autres composants solides sont enlevés de la solution réactionnelle par filtration et/ou centrifugation. te cas échéant, on peut utiliser la terre de diatomées comme auxiliaire de filtration. On peut aisément effectuer 11 extraction et l'isolement du composé [I] du filtrat ou de la liqueur surnageante.Par exemple, on ajuste le p11 du filtrat ou de la liqueur surnageante à 7-9 puis on extrait avec un solvant organique choisi entre des hydrocarbures halogénés (par exemple chloroforme,dichlorométhylène), des esters placides gras (par exemple acétate de méthyle, acétate d'éthylé, acétate de butyle), des cétones, par exemple méthylisobutylcétone ou des alcanols, par exemple butanol, alcool amylique. Ltextrait est réextrait avec de liteau acidifiée (pH 5,0). Après avoir ajusté le pH de la solution acide aqueuse à 8,0, on l'extrait encore avec le même solvant organique que celui qui est mentionné ci-dessus.Par évaporation de l'extrait, on obtient le composé [I] sous la forme d'une poudre brute faiblement basique. A titre de variante, le composé rI1 peut être isolé du filtrat. par traitement ou de la liqueur surnageante de la solution reactionnelle,/ vec une matière adsorbante telle que le carbone activé, la bentonite, ltoxyde d'aluminium ou le gel de silice, extraction de la matière adsorbante avec une solution aqueuse acide de méthanol ou d'acétone,puis évaporation de l'extrait pour chasser le solvant. La purification du composé brut [I] ou sa séparation en chacun de ses composants peut etre effectuée par chromatographie sur colonne ou distribution à contre-courant .Lorsqu'on effectue la chromatographie sur colonne, on utilise avantageusment une matière adsorbante telle que le gel de silice, l'oxyde d'aluminium, l'acide silicique ou le silicate d'aluminium. Il convient d'utiliser comme solvant révélateur des hydrocarbures halogénés (par exemple chloroforme, tétrachlorure de carbone), des esters d'acides gras (par exemple acétate de méthyle ou d'éthyle), des cétones (par exemple acétone, méthyl othylcétone), des alcanols (par exemple méthanol, éthanol), un mélange de ces solvants ou un mélange de l'un de ces solvants et d'un solvant non polaire (par exemple benzène).Par ailleurs, lorsqu'on applique le procédé de distribution à contre-courant, il convient d'utiliser deux solvants non miscibles tels qu'un solvant organique (par exemple benzène, acétate d'éthyle), et un solvant aqueux de pH égal à 6,0. Les propriétés physico-chimique composés [I] ainsi obtenues sont indiquées ci-après (1) Aspect tes composés DHH, DHA, DHP, EHP, EHA, DOA, DOP et EOA sont tous des poudres blanches. (2) Points de fusion Composé DHH: 118-120 C Composé DHA : 120-124 C Composé DHP : 121-124 C Composé EHP : 117-120 C Composé EHA : 118-121 C Composé DOP : 92-94 C Composé DOA : 83-86 C Composé EOA : 133-136 C (3) Analyse élémentaire : Composé DHH : C% H% Calculé pour C35H59NO13 : 59,91 8,42 2,00 Trouvé : 59,99 8,36 1,92 Composé DHA: C% H% Calculé pour C37H61NO14 : 59,70 8,21 1,88 Trouvé : 60,03 8,20 1,77 Composé DHP : C% H% N% Calculé pour C38H63NO14 : 60,24 8,32 1,85 Trouvé : 60,17 8,29 1,87 Composé EHP : C% H% N% Calculé pour C38H63NO15 : 58,99 8,15 1,81 Trouve : 59,03 8,07 1,83 Composé EXA : C % H % N % Calculé pour C37H61N015 : 58,50 8,4 1,84 Trouvé : 58,71 8,07 1,87 Composé DOP : C% H% Calculé pour C36H61NO14 : 60,40 8,08 1,85 Trouvé : 60,63 8,06 1,95 Composé DOA C% H% Calculé pour C37 H59NO14 ; 59,92 7,96 1,89 Trouvé : 59,80 7,79 1,93 Composé EOA C% H% N% Calculé pour C37H59NO15 : 58,63 7,79 1,85 Trouve : 58,39 7,81 1,78 (4) Poids moléculaire Composé DHH : 701 Composé DHA : 743 Composé DHP : 757 Composé EHP : 773 Composé EHA : 759 Composé DOP : 755 Composé DOA : 741 Composé EOA : 757 (5) Solubilité : Tous les composés DHH, DHA, DHP, EHP, EHA, DOP, DOA et EOA sont solubles dans le méthanol, l'éthanol,le butanol, l'acétate de méthyle, l'acétate d'éthyle, l'acétate de butyle, le chloroforme, l'acétone, l'éther éthylique et le benzène, légèrement solubles dans l'eau et insolubles dans le cyclohexane, le n-hexane et l'éther de pétrole. (6) Réaction colorée Tous les composés DHH, DHA, DHP, EHP, EHA, DOP, DOA et EOA sont négatifs aux réactions à la ninhydrine et au chlorure ferrique. Ils sont décolorés par une solution de brome ou de permanganate de potassium. Il virent au violet rougeâtre en présence d'acide sulfurique concentré et au pourpre avec l'acide chlorhydrique concentré. (7) Valeurs de Rf dans la chromatographie en couche mince tes valeurs de Rf des composés DHK, DHA, DHP, EHP, EPH, BHA, DOP, DOA et BOA, dans la chromatographie en couche mince, sont indiquées sur les tableaux IV et V. TABLEAU IV \ Couche Oxyde Oxyde dlaluminium Gel de silice \ [solvant : benzène [solvant : Composé \ acétone (1:1)] acétate d'étby le-méthanol (19:1)] r Composé DIIH 0,20 0,35 Composé DHA 0,40 0,42 Composé DH? 0,45 0,45 TABLEAU V Couche mince Gel de silice Oxyde d2alumi solvant : benzène- nium -gel de acétone (1:1)] silice (6:1) [soîvant : ben eène-acétone Composé (1:1)1 Composé EH? 0,40 0,76 Composé BITA 0,33 0,72 Composé DOP 0,58 0,90 Composé DOA 0,50 0,85 Composé BOA 0,45 0,80 Le composé [I],ainsi obtenu selon la présente invention est intéressant à utiliser comme composé intermédiaire dans la synthèse d'un antibiotique macrolide. Trois (ou quatre) groupes hydroxy en positions 2', 3" et 4" (et 9), du composé [I] montrent, les uns par rapport aux autres, des réactivités ou des comportements différents.En autres termes, le ou les groupes nydroxy en positions 2' et 9 montrent une plus grande réactivité à l'égard d'un agent acylant que le groupe hydroxy en position 4", et le groupe hydroxy en position 3" est à peine sensible à un agent d'acylation. Pour cette raison, l'antibiotique macrolide semi-synthétique décrit dans la demande de brevet français N 73 02 026 déposée le 19 Janvier 1973 par la Demanderesse, peut entre préparé à partir du composé D11P ou DHA, comme décrit dans ladite demande. En outre, il est connu en pratique que la 9-0-acétyl-leucomycine A1 (ou A3) est l'antibiotique le plus intéressant du point de vue thérapeutique dans la série de la leucomycine A1 (ou A3).En outre, la 9-0-acétyl-maridomycine I déploie une plus grande activité antimicrobienne que la maridomycine III ou son dérivé 9-0acétylique. te procédé de la présente invention permet de produire la 9-0-acétyl-leucomycine A1 (ou A3) à partir d2un mélange d'antibiotiques de la série de la leucomycine A1 (ou A3), ou la 9-0-acétyl-maridomycine (I) à partir de la maridomycine III. Par exemple, la 9-0-acétyl-leucomycine A1 peut être préparée par acétylation du composé D1111 (que lton obtient à partir d'un mélange d'antibiotiques de la série de la leucomycine A1) avec le chlorure d'acétyle dans un solvant anhydre, jusqu'à ce que le composé DHH soit acylé en positions 9 et 2, estérification du composé 9,2'-O-diacétyl-DHH résultant avec le chlorure d'isovaléryle ou l'anhydride isovalérique dans un solvant anhydre contenant un agent alcalin, puis hydrolyse du composé 9,2-0- diacétyl-4"-isovaléryl-DHH résultant avec l'acétone aqueuse pour en éliminer le groupe 2'-acétyle. ta 9-0-acétyl-leucomycine A3 ou la 9-0-acétyl-maridomycine I. peut aussi être préparée respectivement à partir du composé DITA ou du composé EHP, comme décrit ci-dessus. De même, les composés DOP, EOP, EHA et EOA peuvent être utilisés pour effectuer d'autres recherches en vue d'obtenir des antibiotiques macrolides semi-synthétiques nouveaux. On peut y parvenir en utilisant ces composés dans les réactions mentionnées ci-dessus. Le cas échéant, le chlorure d'isovaléryle ou l'anhydride d'acide isovalérique utilisé dans la réaction mentionnée ci-dessus peut être remplacé par d'autres agents acylants. En outre, le composé EOA de l'invention peut encore 8tre utilisé comme précurseur dans la production par fermentation d'un antibiotique macrolide. Par exemple, la maridomycine II, IV ou VI peut tre préparée par fermentatinn de Streptomyces platensis var. malvinus NRRL 3761 en présence du composé BOA. ta quantité de composé EOA à ajouter au milieu est d'environ 0,2 à 0,6 % en poids/volume. La fermentation peut être conduite comme décrit dans la demande de brevet japonais N0 28 836/1971. tes exemples suivants illustrent des formes de réalisation pratiques et préférables de la présente invention. Exemple 1 On charge dans un récipient de fermentation de 200 1 de capacité, 100 1 d'un milieu nutritif aqueux contenant 1,5 ss en poids/volume d'amidon soluble, 0,5 % en poids/volume de glucose, 3,0 % en poids/volume de farine de soja (on utilise le filtrat que l'on obtient en extrayant la farine de soja avec dix fois son volume d'eau chaude), 0,5 % en poids/volume de chlorure de sodium et 0,075 % en poids/volume d'une huile siliconée. On ajuste le pH du milieu nutritif à 6,0 puis on le stérilise par autoclavage.On prépare une culture d2ense- mencement en cultivant Streptomyces platensis var. malvinus MURS 0769 à 26 C pendant 44 heures dans un milieu (pH 6,5-) contenant 2 % en poids/volume de glucose, 1 % en poids/volume de peptone, 0,75 % en poids/volume d'extrait de viande, 0,25 % en poids/volume d'extrait de levure et 0,3 % en poids/volume de chlorure de sodium. On inocule 1 litre de la culture d'ensemencement dans des conditions aseptiques dans le milieu nutritif. Ensuite, on cultive le milieu nutritif à 2600 pendant 72 heures dans des conditions dtaération et d'agitation. te rendement maximal en cellules du micro-organisme peut être obtenu après 48 à 72 heures de culture. te bouillon de fermentation ainsi obtenu est filtré par succion et les cellules microbiennes sont recueillies. Ces cellules sont lavées deux fois avec dix fois leur volume d'une solution saline physiologique, avec refroidissement à la glace. Ensuite, les cellules microbiennes (200 g sous la forme humide) sont dispersées dans trois litres de solution tampon au phosphate 0,1 M (pH 8,0) et une solution de 600 mg de l'antibiotique YL 704 B1 dans 20 ml méthanol est ajoutée à la solution de tampon au phosphate. Cette solution est agitée à 28 C pendant 130 mn. Lorsque la réaction est terminée, on extrait la solution tampon au phosphate trois fois avec 1,5 litre d'acétate d'éthyle.La phase d'extraction à l'acétate d'éthyle est concentrée à sec sous pression réduite.te résidu (540 mg) ainsi obtenu est soumis à une chromatographie sur colonne de 100 g de gel de silice (fabriqué par la firme Mallinckrodt Chemical Works et vendu sous le nom de "AR.CC-7") en utilisant un mélange de benzène et d'acétone comme solvant, et on recueille des fractions de 10 ml. La teneur en acétone du solvant est ajusté 10 % dans les fractions N 1-10, à 20 0 dans les fractions N 11-40 et à 40 % dans les fractions N 41-80. tes éluats des fractions N0 50-65 sont rassemblés et concentrés à sec. te résidu ainsi obtenu est recristallisé dans un mélange de benzène et de n-hexane.On obtient 250 mg de composé DHP sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 2 On utilise 600 mg de l'antibiotique Yt 704C2 à la place de l'antibiotique YL 704B1, comme matière première de l'exemple 1. On obtient,sous la forme d'une poudre blanche, 66 mg de composé DHP. Exemple 3 On utilise 600 mg de l1ntibiotique YL 704A1 à la place de l'antibiotique YL 704B1, comme matière première de l'exemple 1. On obtient, sous la forme d'une poudre blanche,210 mg de composé DHP. Exemple 4 On utilise 60C mg d'antibiotique de la série de la leucomycine A3 (c'est-à-dire un mélange de leucomycines A3, A4, A6 et A8) à la place de YL 704B1 comme matière première dans l'exemple 1. On obtient, sous la forme d'une poudre blanche 140 mg de composé DITA. Exemple 5 On utilise 600 mg de leucomycine A5 au lieu du composé YL 704B1 comme matière première de l'exemple 1. On obtient 450 mg de composé DHH sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 6 On utilise 600 mg de l'antibiotique YL 704C1, (c'est-à-dire la maridomycine III) à la place du composé YL 7O4B1 comme matière première de exemple 1. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 260 mg de composé EHP. Exemple 7 On utilise 600 mg de 11 antibiotique Yt 704C4 (maridomycine II) à la place de l'antibiotique Yt 704B1 comme matière première de l'exemple 1. On obtient 82 mg de composé EHA sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 8 On utilise 600 mg de carbomycine A à la place de l'antibiotique YL 704B1 comme matière première de l'exemple 1. On obtient 120 mg de composé EOA sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 9 On utilise 600 mg de carbomycine B à la place de l'antibiotique YL 704B1 comme matière première de l'exemple 1. On obtient 200 mg de composé DOA sous la forme d'une poudre blanche. Exemple 10 On utilise 600 mg de ltantibiotique YL 704W1 à la place de l'antibiotique YL 704B1 comme matière première de l'exemple 1. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 310 mg de composé DOP. Exemple 11 On extrait avec 30 litres d'eau chaude pendant trois heures un mélange de 3 kg de farine de soja (fabriquée par la firme Ajinomoto Co. Inc. et vendue sous la marque "Prorich"), 1 kg de farine de soja fabriquée par la firme Ajlnomoto Co. Inc., et vendue sous la marque "Ajipron 60") et 0,3 kg de gluten. On dissout 0,5 kg de chlorure de sodium, 20 kg de sirop de maltose (teneur en maltose de 50-60 ?jo ; fabriqué par la firme Hayashibara Co. Std, et vendu sous la marque "Malt Rup") et 0,06 kg d'huile siliconée dans 100 litres d'extrait aqueux. Le p11 du milieu nutritif aqueux (100 litres) ainsi obtenu est ajusté à 6,0, et ce milieu est chargé dans un récipient de fermentation de 200 litres de capacité, puis stérilisé. On inocule dans le milieu nutritif aqueux un litre de culture d'ensemencement de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 préparé comme décrit dans l'exemple 1, et on cultive le milieu à 26 C pendant 72 heures dans des conditions d'aération et d'agitation. te bouillon de fermentation ainsi obtenu est refroidi à environ 1000 et filtré. tes cellules microbiennes ainsi recueillies sont lavées deux fois avec dix fois leur volume de solution saline physiologique, avec refroidissement à la glace. Ensuite, les cellules microbiennes (200 g) sont dispersées dans 500 ml de solution tampon au phosphate 0,02 M (pH 8,1). ta solution dispersée est soumise à un traitement aux ultra-sons (20 KHz, 20 mn) puis à une centrifugation (40 C, 10.000 tr/mn, 15mn).Ta solution surnageante ainsi obtenue contient 18 mg/ml de protéine. On ajoute à cette solution surnageante 2,5 litres d'eau distillée, un litre de solution tampon au phosphate 0,2 M (pH 8,1) et une solution de 600 mg de l'antibiotique YL 704A1 dans 30 ml d'éthanol.On laisse reposer le mélange à 35 C pendant trois heures. Ensuite, on l'extrait deux fois avec quatre litres d'acétate éthylique. La phase d'extraction à l'acétate éthylique est concentrée à sec sous pression réduite. te résidu (510 mg) ainsi obtenu est soumis à une chromatographie sur colonne de 100 g de gel de silice (fabriqué par la firme Nalinckrodt Chemical Works et vendu sous la marque "AR. CC-7"), en utilisant comme solvant un mélange de benzène, et d'acétone et en recueillant des fractions de 10 ml. On ajuste la teneur en acétone du solvant à 10 % dans les fractions N 1-10,à 20 % dans les fractions I4 11-40, et à 40 % dans les fractions N 41-80. On rassemble les éluats des fractions N 48-64 et on les concentre à sec. On recristallise le résidu dans un mélange de benzène et de n-hexane. On obtient sous la forte d'une poudre blanche ,250 mg de composé DHP. Exemple 12 On utilise 600 mg de leucomycine A3 à la place de l'antibiotique YL 704A1, comme matière première de l'exemple 15. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 160 mg de composé DHA. Exemple 13 On utilise 600 mg de leucomycine A5 à la place de l'antibiotique YL 704A1, comme matière première de l'exemple 11, On obtient 460 mg de composé DHH sous la forme d'une poudre blanchie. Exemple 14 On utilise 600 mg de l'antibiotique YL 704C1 (maridomycine III) à la place de l'antibiotique YL 704A1 comme matière première de l'exemple 11. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 300 mg de composé EHP. Exemple 15 On utilise 600 mg de l'antibiotique YL 704C4 à la place de l'antibiotique YL 704A1 comme matière première de l'exemple 11. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 140 mg de composé EHA. Exemple 16 On utilise 600 mg de carbomycine A à la place de l'antibiotique YL 704A1 comme matière première de l'exemple 11. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 170 mg de composé BOA. Exemple 17 On utilise 600 mg de carbomycine B à la place de l'antibiotique YS 704A1 comme matière première de exemple 11. On obtient sous forme d'une poudre blanche 30C mg de compose DOA. Exemple 18 Un utilise 600 mg de l'antibiotique YL 704W1 à la place de l'antibiotique Yt 704A1 comme matière première de l'exemple 11. On obtient sous la forme d'une poudre blanche 340 mg de composé DOP. Exemple 19 On extrait avec 700 ml d'eau chaude pendant trois heures un mélange de 30 g de farine de soja (fabriquée par la firme Ajinomotc Co. Inc. et vendu sous la marque "Prorich"), 10 g de farine de soja (fabriquée par la firme Ajinomoto Co. Inc. et vendue sous la marque "Ajipron 60") et 3 g de gluten. On dissolut dans 100 ml de extrait aqueux 0,5 g de chlorure de sodium, 20 g de sirop de maltose (teneur en maltose de 50-60 % fabriqué par la firme ilayashibara Oo. Ltd. et vendu sous la marque "Xalt Rup") et 0,06 g d'huile siliconée.On ajuste à 6,0 le pH du milieu nutritif aqueux (100 ml) ainsi obtenu, on charge ce milieu dans une fiole d'agitation par secousses de 500 ml puis on le stérilise à 120 C pendant 20 mn par autoclavage. On inocule dans des conditions aseptiques dans le milieu nutrit if aqueux, 1 ml de la culture d'ensemencement de Streptomy- ces platensis var. sp. MORt 0769 préparée de la même manière que dans l'exemple 1. Ensuite on cultive le milieu nutritif aqueux à 26 C pendant 72 heures, en l'agitant par secousses. te bouillon de fermentation ainsi obtenu est refroidi à la glace et filtré. tes cellules microbiennes ainsi recueillies sont lavées avec 10 fois leur volume de solution saline physiologique, avec refroidissement à la glace. Ensuite, les cellules microbiennes ( 10 g ) sont dispersées dans 30 ml de solution tampon au phosphate 0,02 M (pH 7,0). ta solution dispersée est soumise à un traitement aux ultra-sons (20 KHz, 10 mn),pais à une centrifugation (4,0 C, 10.000 tr/mn, 15 mn). La solution surnageante ainsi obtenue est utilisée comme extrait (a) exempt de cellules. Sa teneur en protéines est de 19 mg/ml. On ajoute progressivement du sulfate d'ammonium à 25 ml de solution surnageante jusqu'à ce que la concentration en sulfate d'ammonium atteigne 20 % de la saturation dans la solution, et le précipité résultant est séparé par centrifuga- tion. On ajoute encore du sulfate d'ammonium à la solution surnageante jusqu'à ce que sa concentration atteigne 60 % de la saturation dans la solution. tes précipités ainsi obtenus sont recueillis par centrifugation. Ils sont dissous dans 10 ml de solution tampon au phosphate 0,02 M (pH 7,0) et on fait passer la solution sur une colonne de dextrane réticulé (fabriquée par la firme Pharmacia Fine Chemical Co. et vendue sous la marque "Sephadex G-25"). On utilise 14 ml de l'éluat ainsi obtenu comme extrait (b) exempt de cellules. Sa teneur en protéines est de 6,3 mg/ml. On ajoute 0,04 ml d'une solution éthanolique contenant 0,8 mg de ltantibiotique [II] décrit sur le tableau VI, à un mélange de 2,5 ml d'eau distillée, 1,0 ml de solution tampon au phosphate 0,2 M (pH 8,1) et extrait exempt de cellule (a) ou (b) . Après avoir laissé reposer le mélange à 55 O pendant 120 mn, on obtient le taux de transformation (%) de l'antibiotique [Il] en produit [I] indiqué sur le tableau VI TABLEAU VI Antibiotique [II] Extrait exempt Produit [I] Taux de utilisé de cellules transforma utilisé tion (%) YL 704A1 (a) 29 (b) 8 Composé DHP YL 704B1 (a) 33 (b) 8 YL 704C2 (a) 6 (b) 2 Leucomycine A3 (a) Composé DHA 16 (b) 8 Leucomycine A3 (a) Composé DHH 33 (b) 15 YL 704C1 (a) Composé EHP 34 (b) 10 YL 704C4 (a) Composé EHA 25 (b) 10 Carbomycine A (a) Composé EOA 18 (b) 6 Carbomycine B (a) Composé DOA 31 (b) 9 YL 704W1 (a) Composé DOP 28 (b) 12 Exemple 20 On charge dans une fiole d'agitation par secousses de 500 ml de capacité, 100 ml d'un milieu nutritif aqueux (pH 6,0) contenant 1,5 % en poids/volume d'amidon soluble, 0,5 00 en poids/volume de glucose, 3,0 % en poids/volume de farine de soja, 0,5 % en poids/volume de chlorure de sodium et 0,075 ç en poids/volume d'huile siliconée.On inocule dans des conditions aseptiques dans le milieu une culture d'ensemencement de Streptomyces platensis var. sp. MORS 0769 et on cultive le milieu à 25 C sous agitation par secousses. On ajoute au milieu l'antibiotique de la série YL 704 (ctest-à-dire un mélange de YL 704A1, A2, B1 et C2) après trois ou quatre jours de culture, et on cultive encore le milieu pendant trois jours dans les mêmes conditions que ci-dessus. le taux de transformation (%) de l'antibiotique de la série YL 704 en un mélange de composés DHP et DHA est indiqué sur le tableau VII. TABLEAU VII Moment de Quantité ajoutée Taux de transfor l2addition d'antibiotique de mation (%) la série YL 704 ( g/ml) Après trois jours de culture 3000 75 5000 64 7000 67 Après quatre jours de culture 3000 70 5000 -54 7000 59 Exemple 21 On extrait avec 300 ml d'eau chaude pendant trois heures, un mélange de 30 g de farine de soja (fabriquée par la firme Ajinomoto Co. Inc. et vendue sous la marque "Prorich"), 10 g de farine de soja (fabriquée par la firme Ajinomoto Co.Inc. et vendue sous la marque "Ajipron 60") et 3 g de gluten. On dissout dans 100 ml de extrait aqueux 0,5 g de chlorure de sodium, 20 g d'un sirop de maltose- (teneur en maltose de 5060 % ; fabriqué par la firme Hayashibara Oc. td. et vendu sous la marque "Malt Rup") et 0,06 g d'huile siliconée. On ajuste à 6,0 le pH du milieu nutritif aqueux (100 ml) ainsi obtenu, on charge ce milieu dans une fiole d'agitation par secousses de 500 ml, puis on le stérilise à 12000 par autoclavage pendant 20 mn. On inocule dans des conditions aseptiques dans ce milieu 1 ml de la culture d'ensemencement de Streptomyces platensis var. sp.MCRL 0769 et on cultive le milieu à 26 C pendant 5 jours en agitant par secousses.On ajoute 1000 pg/ml de carbomycine A au milieu après le début de la culture. te taux de transformation (%) de carbomycine A en composé EOA est indiqué sur le tableau VIII. TABLEAU VIII Moment de l'addition Taux de transformation, Immédiatement après la culture 45,9 Après deux jours de culture 48,0 Après trois jours de culture 55,3 Exemple 22 On utilise la carbomycine B (1000 mg/ml) à la place de la carbomycine A comme matière première de ltexemple 21. te taux de transformation (%) de carbomycine B en composé DOA est indiqué sur le tableau IX. TABLEAU IX Moment de l'addition Taux de transformation, % Immédiatement après la culture 57.2 Après deux jours de culture 63,1 Après trois jours de culture 74,0 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation d'un composé de' formule (dans laquelle R est un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle ou propionyle, X est un groupe de formule et Y est un groupe de formule : -CH=CH- ou procédé caractérisé par le fait qu'il consiste à hydrolyser un composé de formule (dans laquelle R' est un groupe alcanoyle en C2 à Cg, et R, X et Y ont les définitions données ci-dessus) avec des cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou un variant ou mutant de ce micro-organisme ou avec un extrait exempt de cellule préparé à partir des cellules vivantes de ce micro-organisme. 2. Procedé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on utilise des cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769. 3. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que lshydrolyse est effectuée dans une gamme de pd de 7,5 à 9,0, par exemple à un pI-I d'environ 8,0. 4. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que l'hydrolyse est effectuée dans une gamme de températures dé 15 à 48 C, par exemple à environ 3500. 5. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que l'hydrolyse est effectuée à un pH de 7,5-9,0 et à 15-48 C dans une solution tampon au phosphate 0,2 à 0,05 N. 6. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que l'hydrolyse est conduite avec 7 à 20 mg (poids sec) de cellules vivantes de Streptomyces platensis var. mal- vinus M0RL 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme. 7. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que la quantité du composé [Il] dans la solution de la réaction d'hydrolyse est ajusté à moins de 10 000 Fg/mlQ 8. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que l'extrait exempt de cellules de Streptomyces platensis var. malvinus MORS 0769 ou d'un variant ou mutant de ce micro-organisme est préparé par homogénéisation,extraction aux ultra-sons ou traitement au lysozyme des cellules vivantes de ce micro-organisme. 9. Procédé de préparation d'un composé de formule (dans laquelle R est un atome . d'hydrogène, un groupe acétyle ou propionyle, X est un groupe de formule Y est un groupe de formule et -CH=CH- ou procédé caractérisé par le fait qu'il consiste à hydrolyser un composé de formule : (dans laquelle R' est un groupe alcanoyle en G2 à C5 et R, X et Y ont les définitions données ci-dessus), avec 7 à 20 mg (poids sec) de cellules vivantes de Streptomyces platensis var. malvinus MCRL 0769 ou avec un extrait exempt de cellules,pré- paré à partir de cellules vivantes dudit micro-organisme, à un pH de 7,5-9,0 et à 15-48 C dans une solution tampon au phosphate 0,2-0,05 M.