Brevet FR2145376A1 — publié le 19730223

La présente invention concerne un composé protéinique doué d'activité biologique, que itoil obtient à partir d'acariens et qui est intéressant pour le diagnostic et le traitement de l'asthme allergique ; son procédé de préparation et ses procédés d'utilisation à des fins diagnostiques. L'invention a également trait au traitement de l'asthme allergique. Elle concerne en particulier un composé protéinique agissant comme allergène, que l'on extrait d'acariens et et que Iton peut utiliser pour le diagnostic et pour le traitement de I'ashme allergique ; son procédé de préparation, et des compositions pharmaceutiques contenant cet allergène. On a trouvé que la poussière de ménage et les pellicules humaines et animales abritent des acariens. Parmi les divers acariens que l'on rencontre dans la poussière de ménage et les pellicules humaines et animales, le genre Dermatophagoides est le plus abondant et les espèces que l'on observe le plus souvent sont D. pteronyssinus, D. culinae et D. farinae. Les aca riensgenre et et du genre Acarus se rencontrent aussi cou- ramment dans la poussière de ménage et les pellicules humaines. Les acariens sont plus proches parents des araignées et des scorpions que des insectes, et sont de petits organismes dont la taille ne dépasse pas 1 mm. Contrairement aux insectes, les acariens ont un corps non segmenté, portant habituellement 8 pattes, aux stades imaginal et nymphal. On a découvert que les acariens contiennent une substance capable de provoquer une réponse respiratoire allergique chez les êtres humains et les animaux, réponse qui ressemble à de l'asthme. On a déterminé que plus de 80 fo des patients atteints d'asthme allergique montrent de telles réactions de sensibilité aux acariens, et on considère à présent que l'allergène de l'acarien est un agent responsable de l'asthme allergique.Cette découverte a entraîné la préparation d'extraits d'acariens que lton utilise 'a la fois pour le diagnostic de l'allergie et lue traitement d'êtres humains et d'animaux. Les extraits d'acariens que l'on utilise dans la pratique clinique ne sont pas définis, étant des produits bruts de macération laqueuse des acariens entiersss que l'on caractérise par les rapports de dilution poids/volume ou par les taux d'azote déterminés par la méthode Kjehldahl. De plus, les diverses descriptions des solutions connues d'extraits d'aca- riens sont dénuées dtinformatiolls caractérisant la nature de la matière active. Ainsi, bien qu'on considère l'allergène conme une protéine, on n'a trouvé aucune description de caracté ristiques qui puisse en confirmer la nature protéinique.Aucun essai d'identification des protéines n'a été décrit et aucune tentative nfa été faite pour en expliquer la structure chimique et physique. Outre le manque de définition des compositions contenant des allergènes d'acariens, le composé actif n'a jamais été isolé sous sa forme pure ni mme sous une forme solide, mais il a toujours été préparé sous la forme d'un mélange liquide d'extraction, protégé par un agent chimique. D'après la description des procédés d'extraction qui impliquent une macération des acariens entiers, il reste douteux que l'activité de l'allergène soit le fait d'une substance unique, parce que l'acarien contient une grande variété de composés susceptibles d'extraction, et rien n1a été tenté pour obtenir le composé sous la forme d'un extrait pur. On a constaté qutil est possible d'extraire des acariens, au moyen du procédé de la présente invention, un composé protéinique qui réunit toutes les propriétés de l'allergène de l'acarien. De plus, on a constaté que cette protéine nouvelle peut être divisee en trois fractions, possédant chacune des propriétés d'allergène, mais différant par la grandeur moléoculaire Le composé protéinique extrait de l'acarien, appelé jusqu'à présent antigène d'acarien, est un composé homogène reproductible, doué de propriétés caractéristiques, capable de provoquer une réponse allergique et la formation d'anticorps lorsqu'il est introduit dans la peau et dans le système circulatoire d'un mammifère.De plus, l'exposition à l'antigène d'acarien peut provoquer une réponse asthmatique chez le mam mifère sensible. L'antigène d'acarien peut etre utilisé pour mettre en évidence une sensibilité allergique à des acariens, de même que pour désensibiliser le patient sensible aux acariens et exercer ainsi un effet thérapeutique positif chez le patient asthmatique. Pour obtenir lrantigène d'acarien, OIl soumet les acariens à une extraction, on élimine les extraits inactifs et on en isole l'antigène d'acarien qui est formé. L'antigène d'acarien est une poudre amorphe dont la couleur va du blanc au blanc-crème, très soluble dans l'eau, la glycérine, le propylène-glycol et le polyoxyéthylène-glycol, ayant un poids moléculaire de 200 à 800, mais il est insoluble dans les alcanols anhydres, le benzène, l'éther de pétrole, les hydrocarbures halogénés et l'acétone. L'antigène d'acarien est également solu- ble dans des solutions aqueuses alcooliques obtenues en mélangeant de l'eau et un alcanol inférieur de formule ROIS, dans laquelle R est un groupe alkyle en C1 à C6.Le rapport de l'eau à l'alcanol liquide dans le mélange solvant doit être de 60-90 parties d'eau et 10-40 parties d'alcanol, en fonction de la longueur de la channe alkylique carbonée que l'on utilise. Pour obtenir une solution de l'antigène d'acarien dans un mélange aqueux alcoolique préféré, par exemple, on constate que l'antigène d'acarien se dissout dans un solvant contenant 80 parties d'eau et 20 parties d'éthanol (volume/ volume) La teneur en humidité de l'antigène d'acarien est inférieure à 1 % et le composé séché conserve ses propriétés biologiques lorsqu'il est conservé dans un récipient fermé pen dant des périodes prolongées de temps. L'antigène d'acarien a la composé chimique élémentaire suivante : carbone 50 % + 5 % hydrogène 7 % + 1 % oxygène 22 % + 3 % azote 17 + 3 % soufre 1,2 % + 0,6 %. Le pH d 9 une solution contenant l'antigène d'acarien, à une concentration de 1 ng % dans de l'eau distillée, se situe entre 6 et 7, lorsqu'on le détermine par potentiométrie. L'an- tigène d'acarien donne un résultat positif dans les essais suivants de recherche des protéines : essai au biuret, essai à la ninhydrine, essai xanthoprotéique et essai de Nillon. Une solution à 1 mg % d'antigène d'acarien dans de l'eau distillée est précipitée par la solution d'essai au chlorure d'aluminium, la la solution d'essai au chlorure de zinc et la solution d'essai au nitrate d'argent. L'acide tannique à I %, l'acide phosphotmngstique à 1 % et l'acide trichlor- acétique à 1 % forment tous des précipités lorsqu'ils sont ajoutés à des solutions de l'antigène d'acarien. Le point isoélectrique de l'antigène acarien, déterminé en milieu acide acétique-acétate de sodium, montre que le point isoélectrique pour l'antigène d'acarien se situe entre les pH 4 et 5. Le spectre infrarouge et le spectre ultraviolet de l'antigène d'acarien sont caractéristiques de composé. Lorsque antigène d'acarien est soumis à une chromatographie en couche mince dans laquelle un gel de silice sert de support chromatographique en particules de 250 microns et que le système de solvants qui s'écoule est un mélange de butanol, d'acide acétique et d'eau dans les proportions de 5:1:4 parties en poids, respectivement, on obtient trois bandes. La solution révélatrice est le réactif à la ninhydrine, consistant en 0,3 % de ninhydrine dans 100 ml de butanol et 3 ml d'acide acétique cristallisable.Les valeurs de R f des trois bandes séparées sont les suivantes Valeurs Gamme des Couleur de l'essai Intensité Bande de R f valeurs de R f à la ninhydrine des bandes A 0,16 0,14-0,18 orangé (teinte forte rosâtre) B 0,28 0,25-0,30 rose faible C 0,41 0,375-0,430 rose-orangé moyenne On obtient antigène d'acarien par extraction riens avec un solvant convenable. On peut utiliser une culture pure d'acariens d2une seule espèce, ou bien une culture mixte. L'antigène d'acarien, un une fois extrait, est purifié et séché. Le rendement en antigène est pratiquement quantitatif, parce que les matières résiduelles sont dénuées d'activité d'allergène. La première étape du procédé de préparation de l'antigène d'acarien consiste à obtenir une culture convenable d'acariens. On y parvient de la meilleure façon en faisant incuber acarien avec des matières alimentaires convenables jus qu'à ce que la colonie ait acquis une densité suffisante pour permettre une extraction rentable. Naturellement, on peut utiliser une seule espèce d'acariens dans le procédé d'extraction, mais ceci n'est pas éconornique et n'est pas désirable du point de vue technique, en raison des très petites dimensions de l'équipement et des difficultés opératoires qui sont nécessaires.Pour le développement des acariens, le milieu de culture est de préférence un milieu qui contient une certaine concentration en vitamines B, et une levure, des pellicules épidermiques, des pellicules humaines et des poudres de céréales préparées. En pratique, on peut trouver commode d'utiliser les produits préparés pour l'alimentation des animaux, qui sont enrichis en vitamines et substances minérales, par exemple les aliments solides pour jeunes chiens, qui sont vendus sous diverses marques commerciales et qui contiennent des céréales, des vitamines et des suppléments minéraux. Les aliments particuliers qu'il convient d'utiliser comme milieux de culture sont nombreux et variés, mais ils sont heu connu des spécialistes en ce domaine. On peut utiliser l'une quelconque des espèces d'acariens dont on dispose, comme indiqué ci-dessus, bien qu'on préfère les espèces suivantes, pour des raisons pratiques D. pteronyssinus, D. culinae, D. farinae, A. siro, G. domesticus, E. mayrei, I. putrescenticie. Dans la culture des acariens, on préfère utiliser une forte humidité, et on a trouvé qu'une humidité de 80 ffi est optimale. Lorsqu'on a obtenu une densité de culture suffisante, ce dont on s'assure par examen visuel en se basant sur le fait qu'il y a davantage d'acariens que de substances nutritives, on sépare les acariens des particules alimentaires.Cette opération de séparation peut être conduite selon un processus de flottation dans lequel les acariens et le produit alimentaire sont ajoutés à un solvant dont la densité diffère dc celle de l'acarien et du produit alimentaire. Ainsi, par exemple, les acariens qui ont un poids spé cifiquc inférieur à 1,30, flottent lorsqu'ils sont mélangés avec un solvant dont la densité est supérieure à 1,30, tandis qu'ils s'enfoncent si la densité du solvant est inférieure à 1,30. De même, les particules alimentaires ont généralement une densité supérieure à 1,30,et, par consequent, elles s'en foncent dans un solvant ayant une densité compr-ise entre 1,30 et 1,40.En plus de l'utilisation d'un solvant de flottation pour séparer les acariens des particules alimentaires, on peut procéder à une séparation dans l'air, selon laquelle les acariens et les particules alim-entaires sont amenés à s'écouler à contre-courant avec de l'air dont la pression est réglée pour maintenir un courant d'air suffisant pour permettre aux particules alimentaires plus lourdes de se sédimenter, tandis que les acariens plus légers restent en suspension et sont entratnés dans le courant d'air. Un troisième procédé de séparation des acariens des substances alimentaires consiste en un triage manuel qui utilise des tamis de porosité échelonnée, pour séparer les particules du mélange.Le procédé particulier à utiliser pour séparer les acariens du milieu nutritif dépend de l'importance du lot'que l'on prépare et de la préférence de 11 opérateur. Lorsque les acariens ont été séparés du milieu nutritif, on les dégraisse en les traitant avec un solvant de dégraissage, inerte vis-à-vis de 1antigène des acariens. On peut utiliser avantageusement des solvants tels que les hydrocarbures halogénés, le benzène dérivé du pétrole, et les alcanes supérieurs tels que, par exemple, l'hexane, l'octane et le décane. Les acariens dégraissés sont ensuite séchés et transformés en poudre. L'étape de transformation en poudre peut consister en une pulvérisation, un écrasement ou un broyage. La grosseur des particules de la poudre de broyage des acariens doit être d'au moins 0,250 mm, pour que l'extraction de antigène des acariens soit optimale, bien qu'on puisse utiliser un plus grand diamètre des particules, par exemple de 0,42 à 0,84 mm, de-meme que des particules de 0,149 mm ou d'un diamètre encore plus petit. La poudre brute d'acarien est ensuite extraite avec un solvant aqueux et, bien qu'on puisse utiliser l'eau distillée comme solvant, on peut juger préférable d'ajuster la pression osmotique du solvant avec des sels solubles ionisants, par exemple le chlorure de sodium, le chlorure de potassium et le chlorure de magnesium. Ainsi, on peut utiliser comme solvant pour l'extraction, une solution à 0,9 % de chlorure de sodium et la solution de Ringer. Un solvant préféré d'extraction conticnt 4,5 g de phosphate monosodique, 5 g de phosphate disodique, 4 g dc chlorure de sodium, dissous dans la quantité suffisante d'eau pour ajuster le volume à 1 litre.Le rapport du solvant d'extraction à la poudre brute d'acarien n'est pas déterminant, mais une gamme préférée va de 20 volumes de sol vant aqueux dSextraction par partie en volume de poudre brute d'acarien, à 200 volumes de solvant aqueux par partie en volume de la même poudre brute. L'extraction peut eAtre effectuée par de simples techniques de macération ou de percolation. On peut trouver désirable de mouiller tout d'abord la poudre brute d'åcarien avec le solvant choisi, avant de commencer étape d1extraction, et on peut y parvenir par une lévigation de la quantité désirée de poudre brute d'acarien avec un volume égal du solvant d'extraction que l'on choisit. On constate que l'extraction de la poudre brute d'acarien est pratiquement terminée en moins d'1 heure. Dans certaines conditions, on peut trouver désirable d'utiliser des périodes d'extraction plus longues ou plus courtes. Ainsi, par exemple, si l'on utilise un procédé d'écoulement continu pour la préparation de l'antigène acarien, on peut trouver qu'une quantité d'antigène d'acarien satisfaisante du point de vue économique esuextraite en moins d'une demi-heure de traitement avec le solvant, et que l'amélioration du rendement d'extraction ne justifie pas lTaugfllentation du coût d'une plus longue durée d'extraction.Par contre, on peut juger nécessaire, pour certaines opérations, d'arriver à un épuisement à peu près quantitatif de acarien, auquel cas on peut utiliser une plus longue durée d'extraction. Lorsque l'extraction est terminée, la matière solide est séparée du solvant d'extraction par tout moyen convenable, par exemple par filtration ou centrifugation. Le solvant limpide est alors placé dans un tube de dialyse en "cellophane" ou un tube de dialyse en viscose. On peut ajouter à la solution d'extrait une petite quantité dpun agent antiseptique de conservation, inerte du point de vue pharmaceutique vis-à-vis de l'antigèlle protéinique, par exemple 0,5 à 1 % de phénol ou de chlorobutanol. et on peut dialyser le mélange vis-à-vis d'eau distillée pour é]iminer les substances extraites de faible grandeur moléculaire. Le contenu du tube de dialyse est ensuite vidé et le solvant est évaporé à sec sous pression réduite.Le résidu que l'on obtient constitue l'antigène d'acarien. L'antigène d'acarien ainsi obtenu est conservé dans des récipients clos et il est stable pendant de longues périodes de temps. Un autre procédé d'isolement et de récupération de l'antigène d'acarien consiste à le précipiter avec une solution de chlorure d'aluminium 0,5 M du sulfate de zinc, après son extraction de la poudre brute d'acarien. Le précipité de complexe métallique d'antigène d'acarien est recueilli par centrifugation, lavé à l'eau distillée, puis mis en suspension dans une solution 0,2 M de phosphate mono-ammonique. Le mélange est agité puis centrifugé pour isoler le phosphate d'aluminium ou le phosphate de zinc qui est insoluble. La solution surnageante limpide est ensuite dialysée vis-à-vis d'eau distillée en utilisant une membrane de dialyse en "cellophane" ou viscose. L'antigène d'acarien, après purification, est récupéré par élimination du solvant aqueux sous pression réduite. A la place des solutions de chlorure d'aluminium ou de sulfate de zinc que l'on utilise pour précipiter l'antigène d'acarien extrait, on peut utiliser l'un quelconque des composés de métaux lourds tels que les sels solubles de plomb, d'argent ou de baryum, ou des solutions précipitant les protéines, par exemple l'acide tannique, l'acide phosphotungstique et l'acide trichloracétique. Chacun des agents mentionnés ci-dessus possède certains avantages dans des procédés particuliers adoptés pour l'isolement de l'antigène d' acarien après son extraction. Un autre procédé permettant d'obtenir l'antigène d'acarien sous la forme pure consiste à utiliser une technoque d'ad solution, puis à isoler l'antigène d'acarien adsorbé de la surface de agent d'adsorption. A ces fins, on peut utiliser du gel d'alumine, du kaolin, du gel de silice ou les résines échangeuses d'ions, du type polyamine. Lors de l'isolement de l'antigène d'acarien par un procédé d'adsorption, on peut procoder à l'adsorption en ajoutant la quantité appropriée de matière adsorbante choisie à la solution aqueuse d'extrait conte nant l'antigène d'acaricn, et séparer la substance adsorbante choisie en même temps que l'antigène d'acarien. L'antigène la d'acarien est ensuite isolé de/ matière adsorbante par élution. La solution aqueuse d'extrait contenant l'antigène d'acarien peut aussi te amenée à passer à travers une colonne de la matière adsorbante choisie, cette opération étant suivie de I'éltion de antigène adsorbé d'acarien de la substance adsorbante. La solution éluante que l'on utilise pour isoler l'antigène d'acarien de la substance adsorbante peut astre une solution-tampon de phosphate monosodique et de phosphate disodique, une solution de phosphate mono-ammonique 0,2 M, une solution-tampon d'acide acétique à l'acétate de sodium ou tout autre solvant d'élution acceptable du point de vue pharmaceutique. L'antigène d'acarien élué est ensuite débarrassé par dialyse de la solution-tampon et le solvant est évaporé sous pression réduite pour donner l'antigène actif d'acarien, à l'état sec. L'antigène d'acarien est particulièrement intéressant pour le diagnostic de la sensibilité allergique vis-à-vis d'acariens et pour la désensibilisation thérapeutique d'un patient allergique aux acariens. Du fait de la relation de cause à effet qui existe entre l'allergie à l'antigène d'acarien et les acariens, d1une part, et l'asthme, d'autre part, le diagnostic de la sensibilité allergique à l'antigène d'acarien et aux acariens, de moine que la désensibilisation thérapeutique d'un patient atteint d'asthme allergique, peuvent Autre effectués avec l'antigène d'acarien. Lorsqu'on désire utiliser l'antigène d'acarien dans l'essai de diagnostic de la sensibilité allergique aux acariens, on prépare des solutions diluées pour ltadministration de l'antigène par voie intracutanée. En présence d'une sensibilité allergique à l'antigène d'acarien, on note la réponse caractéristique qui se traduit par un érythème, la formation de papules et les autres symptômcs classiques d'une réaction allergique de ltépiderme. La concentration de l'antigène d'acarien dans ces solutions d'essai destinées au diagnostic, va de 1 partie par million à 100 parties par million, en fonction de la préférence particulière du clinicien et des besoins individuels du patient. Dans la préparation de la solution d'essai d'antigène d'acarien destinée au diagnostic, les solvants que l'on préfère consistent en une solution de chlorure de sodium à 0,9 %, la solution de Ringer ou l'eau distillée. L'antigène d'acarien esu rès soluble dans l'eau et des concentrations précises peuvent être préparées d'une façon pratique. Bien qu'on préfère des solvants aqueux, on peut trouver désirable, dans certains cas, d'utiliser jusqu'à 10 % de glycérine, de propylène-glycol ou d'éthanol à la place d'une partie équivalente de l'eau contenue dans le solvant pour préparer les solutions d'essai destinées au diagnostic. En pratique, on trouvera avantageux d'utiliser pour l'application d'une dose unitaire, un applicateur à tube capillaire pour effectuer sur les patients une cuti-réaction destinée au diagnostic de sensibilité à l'antigène des acariens. Cet applicateur constitue un autre avantage, du fait qu'il sert également dtemballage unitaire de la solution d'essai destinée au diagnostic, contenant l'antigène d'acarien, de même que d'instrument permettant l'introduction intradermique de la solution d'antigène acarien. Dans la conduite de cette opération, on plonge partiellement un tube capillaire creux en verre, d'environ 5,08 cm de longueur, de diamètre intérieur microscopique, de manière que le tube se remplisse de liquide par ascension capillaire. Les deux extrémités de ce tube sont ensuite scellées.Le scellement du tube peut être effectué de façon pratique par enfoncement de chaque extrémité du tube dans un bloc de cire minérale molle ou argile, pour former un tube scellé contenant une dose de volume unitaire de la solution d'antigène acarien destinée au diagnostic. Le tube rempli et scellé peut ensuite entre emballé individuellement dans des bandes d'une matière correcte d'emballage pour former une en veloppe destinée à contenir chaque tube.Lorsque l'essai est effectué en vue du diagnostic, l'enveloppe est ouverte etle tube est retiré, puis l'une des extrémités scellées est rompue et T extrémité grossièrement ouverte du tube capillaire con- tenant ] a solution diluée d'antigène d'acarien destinée aki diagnostic, est alors utilisée pour "scarifier" la peau dans la région désirée, en tucAme temps que la solution d'essai de l'antigène d'acarien est introduite. Le tube est jeté après usage. L'observation de la région épidermique et l'estimation du résultat de l'essai sont ensuite effectués de la manière usuelle, afin d'enregistrer une réponse positive ou négative. On peut utiliser une grande variété de tubes capillai res en verre comme récipients unitaires pour la solution d'es sai d'antigène d'acarien destinée au diagnostic, et en général la gamme de diamètre intérieur du tube capillaire, de meme que sa longueur totale, n'est pas déterminante. Le tube capillaire rempli et scellé peut être stérilisé par immersion dans une solution stérilisante, par exemple une solution d'alcool à 70 % ou une solution contenant de l'iode, ou bien toute autre solution germicide convenable ayant pour caractéristique de ne pas réagir chimiquement avec la substance utilisée pour sceller les deux extrémités du tube, puis on emballe le tube stérilisé dans une enveloppe convenable. La matière utilisée pour sceller les extrémités ouvertes du tube capillaire, après que le tube a été rempli avec la solution diluée d'antigène d'acarien destinée au diagnostic, peut être toute substance analogue à la cire qui est inerte vis-a-vis de l'antigène d'acarien et insoluble dans le solvant que l1on utilise pour préparer la solution mise en tube. Pour la fermeture des extrémités du tube, on peut utiliser des agents tels que des cires minérales, la paraffine, la pate à modeler, et des matières moulables du type du caoutchouc et des matières plastiques. On peut ajouter des colorants inertes convenables au composé destiné à fermer le tube capillaire, de manière à identifier le contenu de ce tube.Ainsi, on peut établir un code de coulcurs d'après lequel une couleur particulière est identifiée par une concentration particulière d'an tigène diacarien contenu dans la solution que renfermc le tube capillaire. Cette mesure supplémentaire évite donc au médecin de commettre des erreurs, et il dispose donc d'un moyen pratique d'identifier la dose unitaire particulière qui est utilisée. Lorsquion utilise ce code de couleurs, le colorant est ajouté directenent au composé de scellement, pour produite une dispersion homogène. Les critères d'utilisation d'une substance colorante pour colorer le composé de scellement comprennent son inertie vis-à-vis des composants doués d'activité biologique de la solution contenue dans le tube capillaire son insolubilité dans ladite solution ; sa compatibilité avec le composé de scellement que l'on utilise, de même que sa stabilité pharmaceutique et sa sauret physiologique. La désensibilisation du patient allergique à l'antigène d'acarien et aux acariens est effectuée par l'injection de quantités croissantes de l'antigène d'acarien pendant une période de deux à quatre mois. Antigène d'acarien est injecté sous la forme d'une solution dans un solvant inerte acceptable du point de vue pharmaceutique. La concentration de l'antigène d'acarien que lton utilise pour la désensibilisation thérapeutique va de 1 partie par million à 100 parties par million d'antigène d'acarien, suivant la sévérité de la sensibilité allergique que présente le patient. A mesure que le patient est désensibilisé vis-à-vis de l'antigène acarien on observe une tolérance à la plus forte concentration en antigène d'acarien.Les concentrations inférieures doivent être utilisées au début de l'opération de désensibilisation, tandis que la concentration la plus forte s'utilise à mesure que le régime thérapeutique progresse. Des exemples de solvants acceptables du point de vue pharmaceutique, qui conviennent pour la préparation de la solution thérapeutique de désensibil-isation, comprennent l'eau distillée, une solution de chlorure de sodium à 0,9 %, la solution de Ringer, la glycérine, le propylène-glycol, le polyoxyéthylène-glycol de poids moléculaire égal à 200-800, les alcanols liquides de formule ROIS dans laquelle R comprend 1 à 6 atomes de carbone, et leurs mélanges. Les volumes injectés de la solution thérapeutique sus-mcntionnée pour la désensibilisation vis-à-vis de l'antigène d'acarien, peuvent aller de 0,01 à 1,0 ml. Un avantage particulier de l'utilisation de l'antigène d'acarien isolé pour le diagnostic et la désensibilisation thérapeutique du patient allergique, réside dans la facilité avec laquelle les solutions necessaires de forte dilution peu- vent être préparées, de 8mc que dans la conservation de l1an- tigène actif acarien pour permettre la préparation extempo- ranée de la solution destinée au diagnostic et de la solution destinée au traitement clinique. Etant donné que l'antigène d'acarien est utilisé en solution très diluée, on devrait ordinairement produire de grands volumes de solutions préparées, ce qui présenterait des problèmes particuliers de stockage et de transport.Les inconvénients d'ordre économique de cette manipulation technique sot totalement évités par l'utilisation de l'antigène diacarien sous la forme dSune composition solide contenant des quantités d'antigène d'acarien mesurées avec précision. Ainsi, lorsqu'on désire préparer des solutions d'antigène d'acarien, soit pour le diagnostic, soit pour la désensibilisation clinique, il suffit de dissoudre la composition lide dans le volume approprié de solvant, puis d'utiliser cette solution pour l'application clinique désirée. En pratique, ces compositions préparées sont de préférence présentées sous la forme de comprimés contenant 0,001 à 0,01 mg d'antigène d'acarien chacun, et que l'on doit dissoudre dans 10 ml d'un solvant inerte acceptable du point de vue pharmaceutique. On peut aussi utiliser des poudres et des granulés. Le diluant utilisé comme véhicule des compositions solides préparées d'antigène d'acarien permet également de rendre la solution isotopique, par exemple de manière quelle contienne 0,9 % de chlorure de sodium ou d'autres sels organiques intéressants à cette fin. On peut aussi utiliser, comme diluants, le lactose, le dextrose, le saccharose et les amidons hydrosolubles.La quantité appropriée de l'antigène d'acarien pré- paré comme décrit ci-dessus, est mélangée avec la quantité déterminée de diluant et le tout est humidifié avec une solution permettant la formation de granulés, par exemple de l'alcool, de l'eau et leur mélange. La masse granulée humidifiée est ensuite placée d;ins un moule dc dimensions et de forme convenables, séchée et emballée dans des récipients unitaires, et elle est alors disponible pour 1 Tusage clinique.Des solutions destinées au diagnostic et à la désensibilisation clinique se préparent par dissolution de la composition préparée, ciest-à-dire dZun comprimé, de grínules ou d'une poudre, contenant lTan.t,igène d'acarien, dans Je volume approprié d eau, de préférence 10 ml. On peut utiliser tout dispositif pratique de mesure précise du volume requis de solvant, par exemple le cylindre d'une 3 seringue hypodermique ou tout récipient gradué de 10 cm . La composition préparée étant entièrement soluble dans le solvant, donne alors une solution prête à l'injection et capable de fournir la dose requise d'antigène d'acarien pour le but particulier de destination. L'invention est illustrée par les exemples suivants, donnés à titre non limitatif. Exemple 1. On prépare un élevage d'acariens dans un récipient correct. Bien qu'on puisse utiliser l'un quelconque des acariens des genres Dermatophagoides, Glycophagus et Acarus, ou leurs mélanges, le genre Dermatophagoides constitue un genre d'acarien convenable pour 11 élevage. Le milieu nutritif peut être une levure ou une poudre préparée enrichie pour l'alimentation des animaux, par exemple des aliments pour jeunes chiens, ou un mélange de ces milieux.Les daphnies séchées constituent un milieu nutritif particulièrement intéressant pour la culture de acarien D. farinae, la poussière de ménage, la farine de poisson et les pellicules de desquamation de la peau humaine étant également des milieux nutritifs intéressants à utiliser pour le développement des acariens, notamment lorsqu'on ajoute certaines quantités de levure. On ajoute un mélange de D. pteronyssinus, D. culinae et D. farinae à un mélange nutritif contenant 50 parties de farine de poisson, 30 parties de daphnies séchées, 10 parties de levure de brasserie et 10 parties de pellicules de peau humaine. Le mélange est mis à incuber à une température d'environ 25OC et à une humidité relative de 80 fo, pendant une période d'environ 6 semaines. Lorsque l'examen visuel de la culture en cours d'incubation indique qu'il y a plus d'acariens que de substances nutritives, on sépare les acariens du milieu nutritif. Pour séparer les acariens du milieu nutritif, on peut procéder par tamisage en utilisant des tamis dont la porosité est progressive, et dont les pores ont une grosseur suffisante pour retenir les acariens tout en laissant passer la substance nutritive en poudre. Si l'on désire utiliser ce procédé de séparation des acariens de la substance nutritive, cette substance doit d'abord être broyée cn particules plus petites que les acariens, dont la taille se situe généralement entre 200 et 500 microns. Les acariens restent à la surface du filtre poreux pendant que les substances nutritives le traversent. En utilisant un ensemble de deux filtres dont la porosité couvre la gamme de taille des acariens, on obtient un taux d'isolement des acariens du milieu nutritif d'au moins 80 . Les acariens séparés sont ensuite mis en suspeiision dans 25 ml d'éther, en vue du dégraissage. On utilise un solvant de dégraissage tel que le pétrole, le benzène, l'éther ou le chloroforme, l'éther étant le solvant préféré. On sépare les acariens du solvant de dégraissage à l'aide dtun entonnoir de Buchner, avec un léger effet de succion. Les acariens sont ensuite lavés avec deux portions de faible volume de solvant de dégraissage, puis ils sont séchés à 11 air. Les acariens séchés sont alors pulvérisés en une poudre dont les particules ont un diamètre égal ou inférieur à 0,250 mm, au moyen d1un mortier et d'un pilon ou dtun broyeur mécanique convenable, suivant le volume d'acariens que lton doit pulvériser. Il y a lieu de remarquer que les acariens ont un poids extrêmement faible et qu'environ 1000 acariens pèsent entre 1 et 2 mg. La poudre d'acarien est ensuite extraite à laide d'un solvant correct. L'extraction de la poudre d'acarien peut être effectuée au moyen d'une colonne de percolation, avec recyclage éventuel du produit percolé. Pour la conduite de l'extraction par percolation, on garnit avec la poudre d'acarien une colonne de verre qui peut contenir des perles de verre comme interfaces de sépa ration, le cas échéant. Le solvant extraction est ensuite versé par la partie supérieure de la colonne, ct on le laisse ensuite s'intiltrer dalls la colonne par gravité, à un débit d'unc goutte par minute. Lorsqu'on utilise la technique de percollation, le rapport préféré de la poudre d'acarien au solvant est de 1 volume d'acarien par 50 volumes de solvant d'extraction par percolation que l'on utilise.Le produit de percolation est recueilli dans un récipient correct en verre, et le solvant est éventuellement recyclé. L'étape de recyclage peut etre répétée plusieurs fois, suivant le pourcentage de produit d'extraction que l'on compte obtenir. A la fin de l'étape de percolation, l'extrait limpide est recueilli et placé dans un sac de dialyse en 'cellophane" ou en viscose. Le sac de dialyse est alors traité à l'eau distillée pour éliminer les impuretés extraites solubles dans l'eau, de grandeur moléculaire inférieure. Un moyen simple de s'assurer de la fin du processus de dialyse consiste à stassu- rer qu'aucun trouble ne se forme lorsque quelques gouttes de réactif au nitrate d'argent sont ajoutées au liquide en cours de dialyse. Le contenu du tube de dialyse est alors vidé dans un récipient de verre et évaporé à sec sous pression réduite, sans chauffage. Le résidu constitue l'antigène d'acarien qui est formé. L'antigène d'acarien formé est une poudre amorphe allant de la couleur blanche à la couleur crème, soluble dans 11 eau, dans la glycérine, dans le propylène-glycol et dans le polyoxyéthylène-glvcol, de poids moléculaire compris entre 200 et 800, et insoluble dans les alcanols anhydres, le benzène, lléther de pétrole, l'éther diéthylique, les hydrocarbures halogénés et l'acétone. Lorsqu T on mélange une petite portion, par exemple 0,1 mg, de antigène d'acarien ainsi obtenu, avec 2 gouttes de solution à 10 % d'hydroxyde de sodium, et qu'on ajoute à ce mélange 2 gouttes de solution à 0,5 % de sulfate de cuivre, il se développe une couleur rougeatre-pourpre qui indique que le test au biuret pour la recherche des protéines est positif.On ajoute à un autre échantillon de antigène d'acarien formé, par exemple un échantillon de 0,01 mg d'antigène, une goutte diacide nitrique concentré, et il se forme un précipité blanc qui vire au jaune par chauffage, en donnant une réaction xan tiloprotéique positive.0n obtient d'une façon analogue des résultats positifs dans la réaction de Millon et le test de Hopkins-Cole pour la recherche des protéines, lorsque ces]es- sais sont effectués avec ltanSigène acarien. L'analyse chimique élélrentaire de l'antigène d'acarien ainsi formé est la suivante carbone 50 % + 5 % hydrogène 7 % + 1 % oxygène 22 % + 3 % azote 17 % + 3 % soufre 1,2 Vt + 0,6 % Le pH d'une solution contenant 1 mg % d'antigène d'acarien dissous dans de l'eau distillée se situe entre 6 et 7. On prépare une solution-mère d'antigène d'acarien contenant 0,25 mg % d'antigène d'acarien dans 1 ml d'eau distillée et on ajoute à cette solution-mère 0,5 ml de solution d'hydroxyde de sodium 1 N et 0,5 ml de solution d'acide acétique 1 N. Le volume du mélange est ensuite ajusté à 2,5 ml avec de l'eau distillée.On place dans une série de 5 tubes exactement 0,5 m de la solution-mère indiquée ci-dessus. On ajoute au premier tube exactement 0,44 ml d'eau distillée et 0,013 ml d'acide acétique 0,1 N. On ajoute au tube no 2 0,44 ml d'eau distillée e-t 0,025 ml d'acide acétique 0,1 N. On ajoute au tube n9 3 0,40 ml d'eau distillée et 0,5 ml d'acide acétique 0,1 N. On ajoute au tube no 4 0,35 ml d'eau distillée et 1,0 ml d1a- cide acétique 0,1 N et on ajoute au tube n 5 0,25 ml d'eau distillée et 2,0 ml d'acide acétique 0,1 N. Les mélanges contenus dans les tubes sont mélangés soigneusement et observés après 30 minutes de repos. Le trouble est plus grand dans les tubes no 3 et no 4 et il diminue dans les tubes n 5 et n 2. Il nty a pas de trouble dans le tube no 1. Le pli des tubes respectifs est le suivant : tube no 1, pH 5,2 ; tube no 2, pH 4,9 ; tube no 3, pli 4,6 ; tube no 4, pH 4,3 ; tube no 5, pli 4,1. Sur la base du degré d'opacité que l'on trouve, le point isoélectrique de l'antigène d'acarien extrait, déterminé dans le système acétate de sodium-acide aee- tique, se situe entre 4 et 5, la valeur moyenne du point isoélectrique correspondant à un pli de 4-,6. Par chromatographie en couche mince sur gel de silice de l'antigène d'acarien, effectuée en utilisant un système de solvants à base de butanol-acide acétique-eau, on obtient trois bandes ayant les valeurs de R f correspondantes suivantes Valeurs de Rf Bande A 0,16 Bande B 0,28 Bande C 0,41 Par développement avec le réactif à la ninhydrine à 0,3 ffi de ninhydrine dans 100 mi de butanol et 3 ml d'acide acétique eristallisable, la bande A prend une couleur orangée avec une nuance rosatre, la bande B prend une couleur rose et la bande C prend une couleur rose-orangé.La bande A a une forte intensite ; la bande B a une faible intensité et la bande C a une intensité moyenne. Exemple 2. On ajoute un élevage de l'acarien C domesticus à un milieu nutritif à base de levure de brasserie et on fait incuber le tout à la température ambiante et à une humidité relative de 80 %, pendant une période de 4 à 8 semaines. Lorsque l'examen visuel de l1élevage d'acarien après incubation indique une densité suffisante d'acariens, ctest-à-dire qu'il y a davantage d'-acariens présents que de milieu nutritif, on sépare les acariens de la levure. On ajoute le mélange d'acariens et de milieu nutritif à un litre d'iodure de 1-octyle, de densité t33. Les acariens, étant moins denses que le solvant, surnagent, et la levure, étant plus lourde, trnbe au fond. Lorsque la séparation des acariens est terminée, la phase supérieure est versée avec soin par décantation dans un entonnoir de Buchner garni d'un papier-filtre, puis elle est séchée à l'air. Les acariens séchés sont recueillis à la surface du papier-filtre et broyés en une poudre fine. On peut utiliser tout dispositif correct de broyage, par exemple un broyeur à billes ou un mortier et un pilon. On fait ensuite macérer la poudre d'acarien avec de l'eau distillée dans un rapport préféré de 1 partie en volume de poudre d'acarien à 200 parties en volume d'eau. La macération est conduite à la température ambiante pendant une période de 30 minutes à 4 heures, selon le degré d'extraction que l'on désire et la grosseur des particules de la poudre d'acarien que l'on utilise. Les particules solides sont séparées du solvant par filtration ou centrifugation. Les matières solides séparées sont lavées avec deux portions de 10 ml de solvant et les liqueurs de lavage sont ajoutées au reste du solvant d'extraction. On ajoute ensuite du sulfate d'ammonium à la solution d'extraction, jusqu'à satura- tion, et on met le tout de coté. Au bout de 1 à 2 heures, un trouble est formé par la séparation de matière solide et le me- lange est centrifugé. La solution surnageante limpide est mise de côté en vue d'obtenir un second lot de composé précipité. On répète la séparation de matière solide de la solution d'extraction saturée de sulfate h'ammonium, et on rassemble la matière solide. Le composé solide est dissous dans 10 ml d'eau distillée et la solution est placée dans un tube de dialyse en "cel lophalle" ou viscose.La solution indiquée ci-dessus,contenue dans le sac de dialyse, est alors dialysée vis-à-vis d'eau distillée, de manière à éliminer les impuretés consistant en sulfate d'ammonium. Lorsque l'eau de dialyse est exempte d'ions sulfate, le tube de dialyse est ouvert et son contenu est versé dans un récipient convenable, puis le solvant chassé sous pression réduite à la température ambiante, et le résidu est séché. Le résidu sec constitue l'antigène d'acarien formé, et correspond au produit que l'on obtient dans l'exemple 1 cidessus. Exemple 3. A la place des genres d'acariens indiqués dans les exemples 1 et 2 ci-dessus, on peut utiliser tout représentant de l'ordre des organismes appelés acariens. On utilise les milieux nutritifs appropriés, connus comme étant préférés par espèce particulière d'acariens, pour l'élevage des acariens, des exem ple s de ces matières comprenant des céréales, la levure, les pellicules animales, les pellicules de desquamation, la pous si ère de ménage, les produits préparés pour l'alimcntation des animaux, les alimentes à ha se de pois son, et les daphnie s séchées.Les autres étapes étant les montes, antigène d'acarien que lion obtient correspond en tous points à celui de i' exem- ple 1. Exemple 4. A la place de l'étape de filtration que l'on utilise pour séparer les acariens du milieu nutritif dans l'exemple 1 ci-dessus, on peut recourir à une étape de flottation comme décrit dans l'exemple 2, cette flottation consistant à ajouter le mélange d'acariens et de milieu nutritif à un solvant liquide dont la densité à 20"C est comprise entre 1,30 et 1,40, à laisser le mélange se sédimenter et à isoler la phase supérieure. Les acariens, étant plus légers, flottent à la partie supérieure, tandis que la matière nutritive, étant plus lourde, tombe au fond. Un autre avantage des solvants organique s utilisés dans l'étape de flottation pour séparer les acariens du milieu nutritif réside dans le fait qu'on évite l'étape de dégraissage décrite dans l'exemple 1, parce que les solvants organiques mentionnés ci-dessus sont aussi des solvants des graisses, capables de dégraisser les acariens. Les autres étapes étant les mêmes, l'antigène d'acarien que l'on obtient est comparable à celui de exemple 1 ci-dessus. Exemple 5. A la place de l'iodure de 1-octyle utilisé dans l'étape de flottation de l'exemple 2, on peut utiliser un solvant organique inerte de densité comprise entre 1,30 et 1,40, par exemple le dichlorométhane, le dichlorobenzène, l'éther dichlorométhylique, le carbonate de dichloro-chloro-6-éthyle, le 2-bromopropane, le 1-bromopropane, le méthylchloroforme, le 1 ,2,2-trifluoro-1-chloréthane et le 1,1 ,2-trichloropropane. Les autres étapes sont les mêmes et l'antigène d'acarien que l'on isole est comparable à celui que l'on obtient dans les exemples 1 et 2 ci-dessus. Exemple 6. A la place de l'eau utilisée comme solvant d'extraction dans les exemples 1 à 5, on peut utiliser une solution à 0,9 fo de chlorure de sodium, la solution de Ringer, ou des solutions diluées d'alcanols, ces solutions d'alcanols consistant en un mélange aqueux d'un alcanol de formule ROIS, dans laquelle R est un groupe alkyle en C1 à C6, à une concentration de 5 à 20 parties d'alcanol, et SO à 95 parties d'eau. Si l'on désire ajouter un agent chimique de conservation à la solution d'extraction, on peut alors ajouter au solvant 0,5 % de phénol, 0,5 % dc chlorobutonol ou 0,1 % de diméthylsulfoxyde. Exemple 7. On ajoute à l'extrait liquide de poudre d'acarien pré- paré comme indiqué dans les exemples 1 à 6 ci-dessus, 1 % en poids de gel de silice, et on agite le mélange. Après repos pendant 4 heures, on sépare le gel de silice du solvant par filtration ou centrifugation et on procède à l1élution de l'antigène d'acarien avec de l'eau acidulée contenant 1 % d'a- cide acétique. On utilise environ 10 volumes dtçau acidulée par volume de gel de silice. On recueille l'éluat et on l1é- vapore à sec sous pression réduite pour récupérer l'antigène d'acarien qui est forme. Exemple 8. A la place du gel de silice utilisé dans l'exemple 7, on peut utiliser une quantité égale de kaolin activé, de gel d'ulumine ou d'une résine d'échange ionique de type polyamine, venduc dans le commerce sous le nom de résine "Amberlite". Exemple 9. Lorsqu'on désire préparer une composition solide contenant l'antigène d'acarien, on mélange intimement une quantité appropriée antigène d'acarien avec un diluant choisi dans le groupe comprenant le chlorure de sodium, le dextrose, le glucose, le lac-tose et leurs mélanges. Lé rapport de 11 anti- gène d'acarien au diluant varie de 1 partie antigène d'acarien /1000 parties de diluant à une partie d'antigène d'acarien /10 000 parties de diluant. Si l'on désire préparer un comprimé, on broie le mélange d'antigène d'acarien et de diluant pour former une dispersion uniforme et on humidifie le tout avec de l'']canol en solution aqueuse à 50 % pour produire une masse lég(remellt humidifiée qu'on introduit ensuite dans un moule pour former un comprimé de dimensions et de forme convenables. On fait sécher les comprimés et on les démoule, puis on les munit d'un emballage pour la vente.Si l'on dé sire utiliser un procédé de compression pour préparer la composition sous la forme de comprimés, on comprime légèrjement le mélange dc diluant et d'antigène d'acarien prépare comme indiqué ci-dessus, en petits "lingots" qu'on broie ensuite en particules de grosseur uniforme pour permettre la réalisation de comprimés de dimensions et de forme convenables, contenant chacun la quantité désirée d'antigène acarien. Si l'on dé sire préparer la composition solide sous la forme d'une poudre, on broie le mélange d'antigène d'acarien et de diluant en particules de grosseur uniforme comprise entre 0,42 et 0,84 mm. La poudre est ensuite pesée avec précision en quantité appropriée, de manière à délivrer la concentration désirée d'antigène d'acarien, et elle est emballée dans des récipient'; conve- nables, par exemple dans des ampoules ou des fioles de verre. Lorsquron désire utiliser la composition sous la forme de granulés, on humidifie le mélange d'antigène d'acarien et de diluant avec une petite quantité d'une solution de granulation, par exemple de l'alcool dilué, et on fait passer le tout à travers un tamis de 2,38 mm d'ouverture de maille. Les particules sont ensuite séchées à l'air et un poids précis de particules est introduit dans un récipient correct, pour qu'il y ait la concentration appropriée en antigène acarien par dose unitaire. Lorsqu'on désire préparer une solution de l'antigène d'acarien pour le diagnostic de la sensibilité allergique à l'antigène d'acarien ou pour la désensibilisation clinique vis å-vis de ce meme antigène, la composition indiquée ci-dessus, à savoir un comprimé, une poudre ou des granulés, est ajoutée à un volume approprié d'un solvant acceptable du point de vue pharmaceutique. En pratique, on prépare des solutions d'antigène d'acarien en dissolvant la dose unitaires de la composition, à savoir le comprimé, la poudre ou les granulés, dans le solvant choisi. Le récipient destiné à contenir les granulés et la poudre peut etre utilisé directement comme récipient de nlélangeX avec addition du volume nécessaire de solvant pour préparer la solution.Lorsqu'on utilise des comprimés, la solu tiqn peut castre préparée dans le corps d'une seringue hypoder- inique ou dans un récipient gradué normal. Par l'ajustement du volume que l'on doit utiliser, par exemple entre 1 et 100 ml du solvant choisi, on obtient des multiples dsune concentration diluée de l'antigènc diacarien présent dans chaque dose unitaire de composition solide. On peut ainsi préparer aisément et avec précision des solutions ne contenant qu'unie partie par million d'antigène d'acarien par millilitre. Les solvants acceptables du point de vue pharaceuti que pour la préparation de solutions de l'antigène d'acarien comprennent lteau, une solution de chlorure de sodium à 0,9 %, la solution de Ringer, la glycérine, le propylène-glycol, le polyoxyéthylène-glycol de 'poids moléculaire compris entre 200 et 800, et des mélanges de ces solvants. On préfère utiliser pour la préparation d'une solution d'antigène d'acarien, un solvant qui contient au moins 60 yc d'eau. Il peut être désirable de conserver ces solutions, auquel cas on peut ajouter un agent de conservation acceptable du point de vue pharmaceutique, tel que phénol, chlorobutanol ou diméthylsulfoxyde, à une concentration de 0,1 à 0,5 Exemple 10. On introduit dans un récipient convenable en verre, 900 ml de solution de chlorure de sodium à 0,9 (oc, que T on vient de faire bouillir, et on ajoute à cette solution 5 g de chlorobutanol. On agite le mélange et on peut chauffer pour obtenir la dissolution. On refroidit la solution à la température ambiante et on ajoute exactement 1 mg d'antigène d'acarien dissous dans 50 m de solution de chlorure de sodium à 0,9 . On agite la solution et on ajuste le volume exactement à i litre. On filtre ensuite la solution sur un filtre bactériologique et on en garnit des ampoules ou des fioles stériles. La concentration de l'antigène d'acarien dans la solution indiquée ci-dessus est d'une partie par million. Par le réglage approprié du rapport du solvant à l'antigène d'aca- rien, on peut préparer des concentrations variant de 1 à 100 parties par million d'antigène d'acarien, ou des solutions de coiicentrati on encore plus forte.Bien que a gamme préférée de concentrations d'antigène d'acaricn dans les solutions utilisées dans la pratique clinique soit comprise entre 1 et 100 parties par ilion d'antigène d'acarien, il existe des cas dans lesquels des concentrations plus fortes peuvent cotre re quises, en fonction de la préférence des cliniciens et des besoins des patients. Lorsque la solution d'antigène acarien est adminis trée par voie intradermique à un patient qui est sensible ou allergique à antigène d'acariens la réponse allergique caractéristique à l'antigène d'acarien se manifeste en 4 à 24 heures. La zone en question présente une éruption érythémateuse de macules ou papules ou bien elle peut présenter une élevure rosée irritée, de grosseur variable, de mëme que la réaction typique d'inflammation locale du tissu. L'intensité de la réponse observée reflète le degré de sensibilité allergique à l1anti- gène d'acarien du patient.Cette méthode est couramment utilisée comme méthode diagnostique pour la détermination de la sensibilité à antigène d'acarien. Des solutions contenant des concentrations appropriées de l'antigène d'acarien sont également utilisées dans les méthodes de désensibilisation du patient allergique à l'antigène d'acarien, notamment dans le traitement de l'asthme allergique. La méthode de désensibilisation comprend l'injection répétée de doses croissantes de solution de l'antigène d'acarien, pendant des périodes de 2 à 4 mois. On trouve généralement, en pratique, que les solutions diluées contenant t à 10 parties par million d'antigène dta.carien doivent etre utilisées dans les premiers stades de la désensibilisation et que des concentrations de plus en plus fortes peuvent etre utilisées à mesure que la. désensibilisation progresse. Des solutions de concentration égale à 100 parties par million d'antigène d'aca- rien et contenant meme des quantités plus grandes de cet antigène, sont couramment utilisées pour la désensibilisation spécifique du patient allergique à l'antigène d'acarien. Exemple 11. Llélément capillaire à dose individuelle constitue un emballage unitaire préféré pour les solutions d'antigène d'acarien destinées à être utilisées dans le diagnostic de la sensibilité diun patient à l'antigène acarien. Des tubes de verre, de très petit diamètre intérieur, sont découpés en tron çons de 5,08 cm de longueur. Les tubes capillaires en verre sont stérilisés à la chaleur et une extrémité est plongée dans une solution de l'antigène d'acarien destinée à entre utilisée dans la méthode de diagnostic. Lorsque l'ascension de la solu tion dans le tube capillaire atteint un équilibre, le tube est retiré de la solution et les deux extrémités sont fermées avec un composé approprié.La matière utilisée pour fermer les extrémités ouvertes du tube capillaire, après remplissage du tube avec la solution antigène d'acarien destinée au diagnostic, peut être toute substance analogue à une cire, qui est inerte vis-à-vis de antigène d'acarien et insoluble dans le solvant utilisé pour préparer la solution mise en tube. Ces substances comprennent des cires minérales, la paraffine, la pate à modeler, les matières modulables à consistance de caoutchouc et de matières plas-tiques. Des matières colorantes inertes convenables peuvent être ajoutées au composé de scellement du tube capillaire pour identifier le contenu de ce tube. C'est ainsi qu'on peut établir un code de couleur par lequel une couleur pa.rticulière est identifiée avec la concentration particulière de 1' antigène d'acarien contenu dans la solution que renferme le tube capillaire. Le médecin dispose ainsi d'un moyen supplémentaire dévider une erreur, ainsi que d'un moyen immédiat d'identification de la dose unitaire particulière qui est employée. Lorsqu'on utilise ce code de couleur, le colorant est ajouté directement au composé de scellement pour former une dispersion homogène.Les caractéristiques déterminantes de la substance colorante que l'on utilise pour colorer le composé de scellement, comprennent 11 inertie vis-à-vis des composants doués d'activité biologique de la solution contenue dans le tube capillaire ; son insolubilité dans ladite solution ; sa compatibilité avec le composé de scellement que l'on utilise, de même que sa. stabilité pharmaceutique et sa sûreté physiologique. JJe tube capillaire rempli et scellé est ensuite stérilisé p" r immersion dans une solution germicide, par exemple une solution à 70 y' d'éthanol. On peut aussi utiliser tout agent stéri.lisallt germicide convenable, par exemple des solutions iodophores, le formaldèhyde, des solutions de phénol et d'autres agents bien connus en pratique.Le choix de imagent stérilisant particulier dépend de la nature du composé de scellement auquel on a reeours. Le critère essentiel est l1i- nertie du milieu de stérilisation vis-a-vis du composé de scellement. A)rèt; la stérilisation, les tubes capillaires individuels peuvent être placés dans des enveloppes stériles ou enveloppés d'une feuille extra mince, et ils sont ainsi prêts à entre utilisés. En pratique, le tube capillaire est retiré de l'enveloppe et I'ne de ses extrémités est cassée de saunière à présenter une surface grossière.Lorsque le tube est placé sur la peau, la solution d'antigène d'acarien ren fermée dans ce tube sort du tube en s'écoulant sur la peau, et le bord grossier du tube est utilisé pour sacrifier la peau à travers la gouttelette de solution d'antigène d1acarien pour permettre l'introduction intradermique de la solution dganti- gène. L'essai diagnostic de sensibilité allergique à l'antigène d'acarien est ensuite apprécié de la manière usuelle. L'utilisation de tubes capillaires de plus grand diamètre intérieur fait disposer le clinicien d'emballages unitaires de solution d'antigène d'acarien sous une forme pratique. Lorsqu'il utilise les tubes capillaires de plus grand diamètre intérieur, le médecin extrait l'antigène acarien avec une fine aiguille, ce qui facilite'injection intradermique de la solution d'antigène d'acarien. Le diagnostic utilisant l'antigène d'acarien est conduit par l'introduction intradermique de l'antigène d'acarien en quantités de 0,02 à 0,05 ml et par observation de la réponse du tissu. Exemple 12. A la place de la solution de chlorure de sodium à 0,9 % que l'on utilise comme solvant pour préparer la solution d'antigène d'acarien des exemples 8 et 9, on peut utiliser un volume équivalent de glycérine, de polyoxyéthylène-glycol de poids moléculaire égal à 200-800, de propylène-glycol, d'eau et de leurs mélanges. Bien qu'on préfère utiliser desvsolvants aqueux pour l'administration intradermique, les solvants polyhydroxyliques ont des propriétés particulièrement désirables pour l'administration dans les tissus plus profonds.Un solvant préféré pour la préparation de solutions d'antigène d'a cari on est un solvant contenant 4,5 g de phosphate monosodique, 5 g de phosphate disodique et 4 g de chlorure de sodium, en solution dans la quantité suffisante d' eau pour ajuster le volume à i litre. Exemple 13. On fait macérer 1 g d'acariens dégraissés, en poudre, dans 100 ml d'eau distillée, pendant au moins 1 heure. On filtre ensuite le mélange et on lave la substance solide avec deux portions de 5 cm3 d'eau distillée, et on ajoute lieu de lavage à la liqueur de macération. On ajoute à la liqueur filtrée de macération, 25 ml d'une solution 0,5 M de chlorure d'aluminium et on laisse reposer le tout pendant environ 16 heures. Un précipité blanc se sépare ; on le centrifuge et on jette le liquide surnageant. Le précipité est mis en suspen sion dans 10 ml d'eau distillée, et de nouveau centrifugé. Le précipité est le sel d'aluminium de 11 antigène d'acarien. Ce dernier est élué à partir de son sel d'aluminium par mise en suspension, après sa forma-tion, du sel d'aluminium de l:antigène acarien dans 10 ml de solution d'acétate de sodium 0,1 M. Au repos à la température ambiante, le sel d'aluminium de l'antigène d'acarien se dissout dans la solution d'acétate de sodium. Le mélange est ensuite dialyse vis-à-vis d'eau distillée pour éliminer les ions hydrosolubles, et le solvant est chassé sous pression réduite pour isoler l'antigène d'acarien formé. REVENDICATIONS 1. Composé antigène obtenu à partir dfacariens, caractérisé par le fait qu'il consiste en une protéine en poudre, ayant les particularités suivantes : a) couleur blanc à blanc crème ; b) réaction positive à essai au biuretZà l'essai xanthoprotéique et à I1 essai de Millon ; c) solubilité dans l'eau, la glycérine et le propylène-glycol, mais insolubilité dans le benzène, l'éther de pétrole, l'éther méthylique et les solvants hydrocarbonés halogénés ; d) précipitation en solution aqueuse par le chlorure dfaluminium, le chlorure de zinc, le nitrate d'argent, l'acide tannique, l'acide phosphotungstique et acide trichloracétique ; e) 45 à 55 fio de ca.rbone, 6 à 8. d'hydrogène, 19 à 25 % d'oxygène, 14 à 20 % d'azote et 0,6 à 1,8 % de soufre ; f) point isoélectrique compris entre pH 4 et pH 5 ; g) première, deuxième et troisième bande chromatographiques par chromatographie en couche mince sur gel de silice avec un mélange de butanol/eau/acide acétique comme solvant, la première bande ayant une valeur de R f de 0,16, la deuxième bande ayant une valeur de R f de 0,28 et la troisième bande ayant une valeur de Rf de 0,4 ; h) après développement au réactif à la ninhydrine des bandes chromatographiques mentionnées, la première bande a une forte intensité, avec une couleur orangé rostre,la deuxième ba.nde a une fa.ible intensité avec une couleur rose et la troisième bande a une intensité moyenne avec une couleur orangé rosatre ; i) réaction allergique positive du tissu en cas d'administration intracutanée à un mammifère allergique à l'antigène d'acarien et j) stimulation de la formation d'anticorps de l'antigène acarien par administration systémique à un mammifère. 2. Procédé de préparation du composé antigène suivant la revendication 1 , caractérisé par le fait qu'il consiste a) à extraire une poudre d'acarien avec un solvant choisi en tre4'eau, une solution à 0,9 % de chlorure de sodium, la solution de Ringer, un mél.ange d'eau et d'un alcanol liquide de formule ROII dans laquelle R est un groupe alkylc en C1 à C6, ce mélange contenant au moins 80 parties en poids d'eau, et une solution contenant 4,5 g de phosphate monosodîque, 5 g de phosphate disodique, 4 g de chlorure de sodium et là quantité suffisante d'eau pour ajuster le volume à 1 litre ; b) à sé- parer la poudre d'acarien du solva.nt d'extraction ;c) à placer le solvant d'extraction dans un tube de dialyse en "Cello- phane" ou viscose et à dialyser le solvant d'extraction avec de l'eau distille et d) à évaporer le solvant d'extraction dialysé pour récupérer dans ce solvant l'antigène d'acarien qui est formé. 3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé par le fait qu'il consiste en outre à saturer le solvant d'extraction obtenu comme produit de l'étape (b) avec du sulfate d'ammonium, à séparer le précipité formé, à dissoudre ce précipité dans de l'eau distillée, à dialyser la solution de précipité vis-a-vis d'eau distillée jusqu'à ce que Ie produit de dialyse soit exempt d'ions sulfate et à évaporer à sec la solution dialysée de précipité pour en récupérer l'antigène d'acarien for mé. 4. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé par le fait qu'il consiste en outre à ajouter 1 % en poids de gel de silice au solvant d'extraction obtenu comme produit de 1 'é- tape (b), à séparer le gel de silice du solvant d'extraction, à éluer le composé antigénique du gel de silice séparé avec un solvant consistant en une solution aqueuse à 1 % d'acide acétique, puis à évaporer l'élut à sec pour récupérer l'antigène d'acarien formé. 5. Préparation solide sous la forme posologique unita.i- re, caractérisée par le fait qu'elle contient le composé suivant la revendication 1 , et un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique pour ce composé, la concentration du composé de la revendication 1 dans le véhicule étant comprise entre 1 partie de composé suivant la revendication 1 pour 1000-10 000 parties de véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. 6. Solution antigène acarien destinée au diagnostic, c-aracterisée par .le fait qu'elle contient au mbins 1 partie par million du composé suivant la revendication 1 et un solvant ac acceptable du point de vue pharmaceutique. 7. Solution dantigène d'acarien destinée au diagnostic, suivant la revendication 6, caractérisée par le fait que le copposé de la revendication 1 est sous la forme dsune prépare ration solide à la dose posologique unitaire, comprenant le conposé die la revendication 1 t un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique pour ce composé, la concentration de ce dernier dans le véhicule étant dsune partie dudit composé par 1000-10 000 parties de veEicuSe acceptable du point de vue pharmaceutique. 8. Elément unitaire de diagnostic, renfermant lsanti- gène d'acarien, caractérisé par le fait qu'il comprend un tube de verre à alésage capillaire, dont les deux extrémités sont fermes ; l'alésage capillaire microscopique étant partiellement rempli avec une solution contenant au moins 1 partie par million du composé suivant la revendication 1 et un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique. 9. A titre de médicament nouveau, intéressa.nt notam- ment pour le traitement de asthme allergique chez les etres humains, le composé suivant la revendication I ou une solution contenant au moins 1 partie par million de ce composé et un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique.