Brevet FR2164724A1 — publié le 19730803

La présente invention se rapporte aux substances antivirales , à un procédé pour leur préparation et aux compositions pharmaceutiques les contenant On sait , d'une façon générale , que le complexe à double channe de l'acide polyriboinosinique et de l'acide polyribocytidylique ( dénommé ci-après " Poly I : Poly C " ) est un inducteur d'interférons puissant et présente ainsi un intérêt dans la prophylaxie à large spectre des infections virales et à un moindre degré , dans le traitement de ces infections Toutefois , certaines expériences suggèrent que le Poly I : Poly C peut présenter une toxicité inacceptable chez les mammifères , et son utilité médicinale et vétérinaire peut être limitée . I1 est donc nécessaire de trouver un agent antiviral qui soit moins toxique que le Poly I :Poly C seul et qui ait une activité antivirale comparable ou même meilleure Des polybases comme la spermine, la spermidine , la cadavérine , la polylysine , la protamine et le diéthylaminoéthyl-dextrane ont été utilisées dans le passé pour stabiliser d'une façon générale les acides nucléiques (et certains acides ribonucléiques à double channe synthétiques en particulier ) vis-à-vis d'une dénaturation thermique et d'une dégradation par la nucléase . Lorsqu'on a découvert que les acides ribonucléiques à double chaine synthétiques étaient des inducteurs d'interférons , de nombreux chercheurs ont cru que le traitement de l'acide ribonucléique à double chaine par des polybases telles que celles mentionnées aurait pour conséquence une stabilisation vis-à-vis d'une dégradation par la ribonucléase , et ainsi une activité antivirale in vivo améliorée ou prolongée .La plupart des travaux biologiques se rapportant aux interférons, effectués dans le passé,ont fait intervenir l'addition séparée de la polybase aux acides ribonucléiques à double channe synthétiques , principalement Poly I : Poly C . Toutefois , les résultats de ces travaux n'ont pas été encourageants. Des taux d'interférons élevés ont été obtenus dans des cultures sur tissus ( Références i , 2 , 3 , 4, 5 et 6 ci-après )mais lorsque les activités des acides ribonucléiques synthétiques traités par des polybases ont été examinées chez des animaux vivants références w , 6 ) , ni la protection vis-à-vis des virus , ni la toxicité n'ont été sensiblement modifiées Références 1.- G.P. Lampson, A.A. Tytell , A Kirk Field M.M. Nemes, et M.R. Hillerman , Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. , 132,1969,212. 2.- F. Dianzani , S Baron , C.E. Buckler , et H.B. Levy Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. , 136, 1971 , 111 3.- J.Y. Richmond , Arch. fur die gesamte Virusforsc hunq , 33, 1971 , 242 4.- J.G. Tilles , Proc. Soc. Exptl Med. , 133 (4) 1970 , 1334 5.- A. Billiau , C.E. Buckler , F. Dianzani , C Uhlendorf , et S. Baron , Ann.N.Y. Acad. Sci., 173 (1) , 1970 , 657 6.- B.D.Rosenquist , Am.J.Vet.Res., 32(1) , 1971 , 35 Cette invention est fondée sur la constatation que les polycations polymères ayant des sites azote quaternaire forment des complexes puissants avec Poly I : Poly C , ces complexes étant généralement moins toxiques , au moins lors d'une administration par la voie intrapéritonéale , que le Poly I : Poly C lui-même , et ayant une bonne activité antivirale , au moins chez les petits mammifères On pourrait noter que Gabbay -et al (Ann. N.Y. Acad. Sci. , 171 (3 > , 1970 , 810 ; et Biochemistry , 10 (9), 1971 1665 ) ont étudié l'interaction de certains composés d'ammonium quaternaire monomères avec , entre autres, l'acide ribonucléique synthétique à double channe Poly A : Poly U . Toutefois , leurs rapports concernent simplement les propriétés physico-chimiques et la structure des complexes , et en outre ils ne se sont pas référés à des travaux effectués avec des composés d'ammonium quaternaire polymères L'invention est matérialisée en conséquence dans une substance antivirale qui est un complexe principalement ionique dans lequel les cations sont des polycations de polymère organique comportant plusieurs sites azote quaternaire placés à in tervalles le long des channes du polymère et dont les anions sont soit : (a) des polyanions de Poly I :Poly C à double chatne , soit (b) des polyanions d'un dérivé à double chaine de Poly I : Poly C L'expression " à double chaine " utilisée en relation avec le Poly I : Poly C se réfère à la caractéristique selon laquelle une molécule d'acide polyriboinosinique est associée à une molécule d'acide polyribocytidyliquè par une liaison hydrogène prévue entre des bases complémentaires dans chaque molécule Le Poly I : Poly C peut varier en ce qui concerne son degré d'appariage des chaines . L'expression "dérivé à double chaine de Poly I : Poly C" désigne le Poly I : Poly C qui a été soumis à une réaction chimique ou biochimique (par exemple enzymatique )modifiant la structure primaire et (ou) secondaire et (ou) tertiaire (par exemple les N-oxydes décrits dans le brevet français 71-14.303), à condition que le dérivé résultant conserve un degré notable de liaison par des bases entre les channes complémentaires. Le degré d'appariage du Poly I : Poly C ou d'un derivé de Poly I : Poly C peut être mesuré par deux paramètres qui sont dénommés l'hyperchromicité et Tm. Ces paramètres sont obtenus en enregistrant l'absorption des ultraviolets par la matière à 258 nm. , tout en élevant progressivement la température de cette matière . La valeur d'absorption u.v. d'une matière à double channe à cette fréquence augmente avec l'accroissement de la température jusqu'à ce qu'une valeurs constante soit atteinte qui correspond à l'absorption de l'acide ribonucléique thermiquement dénaturé ( c'est-à-dire à channe unique ) .La différence entre les deux extrêmes d'absorption , exprimée sous la forme d'un pourcentage de l'absorption de la matière à double chat- ne , est dénommée lthyperchromicité " de cette matière Quand l'absorption u.v. à 258 r d'une matière à double channe est représentée en fonction de la température,on constate que l'absorption est plus grande aux températures élevées qu' aux faibles températures . La température à laquelle l'absorption est intermédiaire entre l'absorption de la matière à double channe et celle d'une matière thermiquement dénaturée (c'est-à-dire à chaine unique ) est dénommée la Tm de la matiè re La partie cationique présente dans les complexes suivant l'invention a été définie comme étant un cation polymère organique présentant plusieurs sites azote quaternaire placés à intervalles le long de la channe du polymère.Un groupe de polycations de polymère organique est le groupe de structure (I Voir formule page suivante dans laquelle a et b sont des nombres entiers qui sont égaux ou différents et dont chacun va de 2 à 10 ; et x est un nombre entier ou fractionnaire supérieur ou égal à 2 , qui dépend de la longueur de la chaine du polymère Un autre groupe de polycations convenables est le groupe de formule (I) dans lequel la chaîne carbonée entre les sites azote quaternaire porte des substituants méthyles La substance antivirale suivant l'invention a été décrite comme étant un complexe principalement ionique . Le complexe est caractérisé par une forte interaction électrostatique entre la partie cationique du polymère et la partie anionique de l'acide ribonucléique . Toutefois, d'autres types d'interac tions peuvent très bien se produire .Par exemple , on pense qu'une certaine forme de liaison " hydrophobe " existe entre les deux constituants, bien que la nature précise d'une telle liaison ne soit pas encore comprise Les complexes préférés suivant l'invention sont ceux dans lesquels tous ou presque tous les sites anioniques sur les anions de Poly I : Poly C sont neutralisés par les sites cationiques quaternaires du polymère quaternaire. De tels complexes peuvent être dénommés " complexes 1 : 1 " ou " complexes fortement neutralisés " Les complexes suivant l'invention peuvent être préparés par un procédé consistant à mettre en contact,en solution , les cations de polymère organique ayant un grand nombre de sites azote quaternaire placés à intervalles le long des chaînes du polymère avec soit (a) des polyanions de Poly I : Poly C , soit (b) des polyanions d'un dérivé à double chaine de Poly I :Poly C. Bien que tous les complexes suivant l'invention puissent être obtenus par le procédé défini ci-dessus ,les caractèristiques physiques des complexes dépendent à un certain degré de la méthode détaillée par laquelle les polycations et les polyanions sont mis en contact . Pour les besoins de l'explica- tion ,les complexes suivant l'invention peuvent être divisés judicieusement en deux classes arbitraires ,à savoir ceux qui sont solubles dans une solution de NaCl 0,15 M (dénommés ciaprès " complexes solubles " ) et ceux qui sont insolubles dans NaCl 0,15 M ( dénommés ci-après " complexes insolubles " D'une façon générale,on a constaté que les "complexes insolubles " sont préparés en ajoutant lentement une solution du composant polyquaternaire à une solution diluée du composant Poly I :Poly C ( par exemple environ 0,5 mg/ml).Par exemple une solution d'un polymère organique contenant le polycation désiré peut être préparée dans une solution aqueuse d'un sel inorganique ,par exemple NaCl . Une solution semblable du composant Poly I : Poly C peut être préparée dans une solution aqueuse contenant un sel inorganique .La solution polyquaternaire peut alors être ajoutée à la solution de Poly I : Poly C, tout en agitant, et à condition que la molarité de la solution de sel résultante ne soit pas trop élevée ,le complexe désiré va précipiter directement .S'il ne précipite pas, la solution peut être diluée pour réduire la molarité au-dessous du niveau critique, et le complexe désiré précipite alors. Suivant une variante,un mélange physique d'un polymère neutre contenant le polycation et le Poly I : Poly C , ou bien le dérivé de Poly I : Poly C , peut être ajouté à une solution du sel et , si nécessaire , la solution résultante peut être diluée pour précipiter le complexe désiré . De préférence, au cours des deux processus précités de préparation de " complexes insolubles " , un excès molaire du polycation de polymère organique est mis en contact avec le polyanion de Poly I : Poly C (l'excès molaire étant calculé sur la base du nombre de sites basiques capables de réagir avec les sites acide phosphorique sur les polyanions d'acide ribonucléique ). Pour produire les complexes solubles,on ajoute lentement une solution du composé polyquaternaire ,tout en agitant, à une solution de Poly I : Poly C ou bien de dérivé de Poly I Poly C dans NaCl aqueux 0,15 M , jusqu'a un moment précédant juste la précipitation,ou bien jusqu'à ce que seul un faible degré de précipitation se soit produit .Le précipité est alors éliminé , ce qui laisse le complexe désiré en solution . En général , une précipitation poussée doit être évitée,étant donné que l'homogénéité du complexe laissé en solution ne peut pas être garantie si on laisse une forte précipitation se produire. Il est préférable d'ajouter la solution de composé polyquaternaire à une solution de Poly I : Poly C ou de dérivé de Poly I Poly C ne contenant pas moins de 5 mg/ml environ (par exemple de 5 à 20 mg/ml ) , étant donné qu'à des dilutions supérieures il semble que la presque totalité du Poly I : Poly C soit pré- cipitée sous forme de complexe insoluble Comme cela a déjà été indiqué, les complexes préférés suivant l'invention sont ceux ayant un degré élevé de neutralisation de la charge ,par exemple plus de 60% et de préférence plus de 75% . Par ailleurs, étant donné qu'ils sont administrés plus facilement et qu'ils possèdent dans certains cas des propriétés biologiques avantageuses par rapport aux " complexes insolubles " , les complexes qui sont solubles en solution saline isotonique sont préférés.Toutefois, les "complexes solubles " ne peuvent pas être préparés facilement en utilisant tous les composés polyquaternaires, étant donné qu'avec certains d'entre eux une précipitation d'un " complexe insoluble " se produit avant l'addition d'une quantité de composé polyquaternaire suffisante pour obtenir un degré élevé de neutralisation de la charge .Bien que , finalement ,on doive avoir recours à l'expérience pour déterminer si un"complexe soluble" peut être réalisé avec un composé polyquaternaire particulier quelconque, certaines règles peuvent être définies Ainsi ,on a noté que lorsque des composés polyquaternaires de structure (I) sont utilisés, il semble exister une certaine relation entre le poids équivalent du composé polyquaternaire et le degré de neutralisation pouvant être obtenu avec ce composé polyquaternaire avant que la précipitation du " complexe insoluble " ne commence . (Le poids équivalent est le poids moléculaire du polycation divisé par le nombre de sites azotés basiques par molécule ). On a noté qu'avec les polycations quaternaires de structure (I) ayant un faible poids équivalent ,davantage de polycation peut être mis sous forme de complexe avec le Poly I : Poly C avant que la précipitation du complexe insoluble " ne commence,par rapport à ce qui est le cas avec des polycations quaternaires de structure (I) ayant un poids équivalent plus élevé. Ainsi, on a été incapable ,jusqu' ici, de préparer des " complexes solubles " avec des polycations de structure (I) ayant un poids moléculaire équivalent plus élevé que le composé (I) (a = 3 , b = 4 , 2x = 7,8 ). I1 est peut être utile d'insister encore sur le fait que , lorsqu'on parle de " complexes insolubles " suivant l'invention,on entend les complexes qui sont insolubles dans une solution de NaCl 0,15 M . En fait , la plupart , si ce n'est la totalité de ces " complexes insolubles " peuvent être dissous dans des solutions d'électrolyte concentrées , mais dans un tel électrolyte concentré ,les complexes sont dissociés.Ceci est en opposition avec les " complexes solubles " qui , lorsqu'ils sont en solution dans NaCl 0,15 M , semblent être sensiblement non dissociés Les complexes suivant l'invention (à la fois "solubles" et "insolubles " ) ont une activité antivirale , avec un large spectre d'activité contre divers virus DNA et RNA , par exemple le virus de l'encéphalomyocardite (EMC),le virus Semliki Forest, le virus des maladies des pieds et de la bouche et le virus Herpes Simplex. I1 semble que leur mode d'action corresponde principalement à l'induction d'interférons chez les cellules hottes , en leur conférant de cette façon une protection contre l'attaque par le virus .Pour cette raison ,il semble que leur utilité principale réside dans la prophylaxie des infections à virus , plutôt que dans le traitement des infections déclenchées . Les complexes sont en général plus résistants à la dégradation par la ribonucléase que le Poly I : Poly C lui-même. Les exemples donnés ci-après à titre non limitatif permettront de mieux comprendre comment l'invention peut être mise en oeuvre EXEMPLE 1 Préparation du complexe à partir de Poly I : Poly C et de bromure dthexadiméthrine On ajoute à une solution sous agitation de Poly I Poly C ( 100 mg) dans du chlorure de sodium 015 M ( 200 ml) à la température ambiante , une solution de bromure d'hexadimé- thrine (200 mg) dans du chlorure de sodium 0,15 M ( 200 ml I1 se produit une précipitation . On agite le mélange réactionnel pendant 16 heures à la température ambiante,puis on soumet à une centrifugation. La mesure du spectre u.v. de la solution' qui surnage indique qu'elle ne renferme pas de Poly I : Poly C. On lave le précipité avec de l'eau (200 ml),puis avec du méthanol (200 ml) , et on sèche à la température ambiante sous vide, ce qui donne le produit sous forme d'une boulette (158 mg Propriétés et caractérisation du complexe 1.- Le produit est soluble dans NaCl 0,6 M et à des molarités supérieures 2.- Des déterminations du spectre ultra-violet avec des quantités pesées du complexe indiquent qu'il renferme 68+ 10% de Poly I : Poly C .Un complexe neutre (1N par phosphate) contiendrait 76% de Poly I : Poly C Le produit est probablement le complexe neutre 1 : 1 , mais un séchage incomplet résultant d'un solvant étroitement fixé peut fournir un faible titrage de Poly I : Poly C 3.- En solution dans du chlorure de sodium de molarité élevée , le complexe semble être dissocié L'addition d'un même volume d'éthanol à une solution du complexe dans du chlorure de sodium 1,5 M provoque une précipitation quantitative du Poly I : Poly C Le Poly I : Poly C ainsi obtenu a des caractéristiques physiques identiques (absorption des ultra-violets , hyperchromicité ,Tm ) à celles du Poly I : Poly C d'origine .En outre, une chromatographie par passage à travers un gel d'une solution du complexe dans du chlorure de sodium 1,5 M , sur une colonne de Bio Gel 150 M , donne une trace u.v. identique à celle du Poly I : Poly C initial 4.- La réduction de la molarité d'une solution du complexe au-dessous de 0,6 M dans le chlorure de sodium provoque la précipitation de ce complexe Activité antivirale du complexe On administre par injection intrapéritonéale le composé testé à des souris de 16-20 g de la souche CD1 . 24 heures ou 72 heures plus tard , on traite ces souris avec le virus de l'encéphalomyocardite (EMC),qui est également administré par la voie intrapéritonéale . On observe les animaux pendant 12 jours et on compare les taux de mortalité et les temps de survie moyens des souris traitées,avec ceux des souris témoins non traitées. Les temps de survie moyens sont calculés comme suit : où N = nombre des animaux dans un groupe n = nombre des animaux au jour x Temps en- Dose a Attaque par 4 Attaque par 5 tre le mé- (pig/ le virus 10 le virus 10 Composé dicament souris) et le virus Mort a Temps Morta- Temps ultérieur lité de lité de (heures ) Survie survie Complexe Poly I : 1 9/10 4,9 8/10 6,9 Poly C b 72 10 10/10 5,6 8/10 7,6 -hexadim éthrine 100 3/10 16,7 4/10 13,0 1 i 8/10 6,6 2/10 42,7 24 10 3/9 20,7 1/10 59,9 100 3/10 20,0 4/10 23,1 Poly I : 1 10/10 4,9 9/10 5,3 Poly C c 72 10 9/10 6,3 7/10 7,9 100 7/10 8,4 5/10 11,4 1 9/10 6,3 0/10 0,0 24 10 6/10 8,3 0/10 0,0 100 3/10 21,4 0/10 i 0,0 Non-traitées 11/10 4,7 19/20 5,2 a La dose se rapporte à la quantité de Poly I : Poly C présente dans chaque cas b Administré sous forme d'une solution dans le chlorure de so dium 1,5 M c Administré sous forme d'une solution dans le chlorure de so dium 0,15 M Toxicité du complexe Poly I : Poly C - hexadiméthrine La toxicité de la matière de départ Poly I : Poly C et celle du complexe hexadiméthrine-Poly I :Poly C sont comparées chez des souris de 16 à 20 g de la souche CD1 . Les composés sont administrés par injection intrapéritonéale et les animaux sont observés pendant encore 10 jours Composé Dose a Mortalité Temps auquel LD50 (mg/kg) se produit (mg/kg ) la mort Complexe Poly I b 20 0/10 Poly C - 40 0/10 160 -hexadiméthrine 80 o/lo 160 0/10 Poly I : 20 0/10 Poly C c 40 4/10 12-17heures 80 10/10 après l'ad- 40 160 7/7 ministration. a La dose se rapporte au Poly I : Poly C présent dans chaque cas b Administré sous forme d'une solution dans NaCl 1,5 M c Administré sous forme d'une solution dans NaCl 0,15 M EXEMPLE 2 (a) Préparation du composé d'ammonium polyquaternaire servant de matière de départ On chauffe au reflux dans le méthanol (300 ml) pendant 5 heures 0,1 mole de N , N, N', N' - tétraméthyl-propane-1f3- diamine et 0,08 mole de 1,4-dibromo-butane . On refroidit la solution et on concentre sous pression réduite . On fait dissoudre le résidu dans l'eau (250 ml) et on extrait la solution avec de l'acétate d'éthyle ( 3 x 150 ml) .On concentre la solution aqueuse extraite sous pression réduite et on triture trois fois le concentré résultant avec de l'isopropanol à l'ébullition (3 x 500 ml) ,on filtre et on sèche . On obtient le produit sous forme d'une fine poudre blanche ; il est dénommé : " Composé Il (b) Caractérisation de la matière de départ formée par le com posé d'ammonium polyquaternaire Dans leur article sur les propriétés macromoléculaires du bromure d'hexadiméthrine , Barlow et co-auteurs2 suggèrent que des réactions qui pourraient interrompre la polymérisation sont la cyclisation et la déshydrobromation 2 G.H. Barlow, L.J. Coen , E.T. Kimura et S. Keresztest Nagy Proc. Soc. Exp.Biol. Ned. , 113 , 884 ( 1963) Le spectre r.m.n. (déterminé dans D20) du bromure d'hexadiméthrine et des autres composés d'ammonium polyquaternaire saturés synthétisés dans l'article considéré ne fournissent pas d'évidence de la présence de protons vinyliques , qui seraient présents si une terminaison de chaîne se produisait par suite d'une déshydrobromation . Toutefois ,il existe dans chaque cas un singulet à G = 2,2-3 p.p.m , qui peut être affecté aux protons -N(CH3)2.Le spectre de r.m.n. suggère en conséquence que les channes de polymère se terminent par des groupes diméthylamines .Si l'on suppose que ceci est correct ,il est possible de calculer un poids moléculaire moyen pour les polymères à partir du rapport des intensités des résonances affectées aux protons -N(CH3)2 (propagation de la chaine ) et ceux affectés aux protons - N(CH3)2 ( terminaison de la chatne ) . Malheureusement, les bandes ne peuvent pas être intégrées avec précision à cause du chevauchement des autres résonances, mais étant donné que.les bandes sont toutes deux des singulets pointus,les hauteurs de pic relatives sont considérées comme première approximation. Par exemple ,pour le bromure d'hexadiméthrine ( " Poly brène " (I) a = 6 b b = 3 Intensité Par suite ,il existe deux terminaisons de channe pour 23,6 propagations En conséquence , P.M. = 116 + ( 23,6 x 187,1 ) + 44 = 4590 Cette valeur correspond de façon raisonnable aux valeurs 2 de 3.800 et 4.100 trouvées par Barlow et co-auteurs pour une charge standard de bromure d'hexadiméthrine ,en utilisant des méthodes de mesure de la vitesse de sédimentation et d'équilibre de sédimentation Les données structurelles et analytiques obtenues pour le composé II sont résumées ci-après .Le polymère est extrêmement hygroscopique et en conséquence des analyses élémentaires précises sont difficiles à obtenir COMPOSE (II) : a = 3, b = 4 Rendement 51,3 X Analyse : C H N Br calculé 40,5 8,1 9,3 42,1 trouvé 37,7 8,0 8,3 43,3 R.M.N. (D,O) + -N ( CH3 )2 a ppm = 3,23 Hauteur de pic = 24,6 -N ( CH3 )2 ppm = 2,48 Hauteur de pic = 6,3 Nombre total de sites quaternaires (2x) = 7,8 Poids moléculaire = 1480 Poids équivalent = 151 CPM ) (2x + 2 (c) Préparation de complexes solubles en solution saline isoto nique de Poly I : Poly C et de composé (II) (i) On maintient une solution de Poly I :Poly C (9Omg) dans du chlorure de sodium 0,15 M ( 6 ml) à 37C C pendant deux jours . On ajoute goutte à goutte à cette solution, sous agitation constante ,une solution du composé (II) (24 mg) dans du chlorure de sodium 0,15 M ( 3 ml) . I1 se produit une très faible précipitation . On sépare le précipité par centrifugation et on constate que la concentration en Poly I : Poly C dans la liqueur qui surnage ,déterminée par absorption des ultra-violets, est égale à 9,8 mg/ml. On désigne le complexe par C15 et on utilise des dilutions de la solution pour effectuer des tests biologiques (ii) On procède comme décrit sous (i),mais en utilisant 32 mg du composé (II) . Dans ce cas,il se produit une précipitation plus importante et la concentration finale en Poly I Poly C dans la liqueur qui surnage est égale à 8,5 mg/ml . Ce complexe est désigné par C16 et on utilise des dilutions de la solution pour des tests biologiques La neutralisation de la charge en % (basée sur un poids moléculaire moyen d'un nucléotide ( sel de Na ) = 340,7 Daltons pour les deux acides nucléiques ) est égale à 60% pour le complexe C15 et à 80% pour le complexe C16.Le pourcentage de pré- cipitation de Poly I : Poly C est , pendant la préparation du complexe C15 , de 2% et , pendant celle du complexe C16 , de 15%. (d) Propriétés biologiques des Complexes C15 et C16 (i) Activité antivirale On administre à des souris de la souche CD1 , pesant de 18 à 22 g ,les composés considérés par la voie intrapéritonéale 24 heures avant l'infection par le virus EMC , également par voie intrapéritonéale . On enregistre les morts de façon continue pendant 13 jours ( Voir tableau page suivante a La dose concerne dans chaque cas le composant acide nucléique. (ii) Toxicite On détermine la toxicité aigüe pour des souris de la Complexe Dose a Nombre de morts/ Nombre total dans (mg/kg) chaque groupe Dose de virus 10-4 Dose de virus 10-5 C15 0,5 3/10 0/10 0,05 8/10 4/10 C16 0,5 3/10 2/10 0,05 8/10 6/10 Poly I 0,5 7/10 3/10 Poly C 0,05 10/10 2/10 Non traitées 19/10 19/10 souche CD1 , pesant 18 à 22 g . On observe les animaux pendant 7 jours après l'administration par la voie intrapéritonéale et on enregistre les morts. Complexe Nombre de morts/Nombre total dans LD50 N0 chaque groupe à la dose indiquée a approx. (mg/kg) (mg/kg) 400 100 1 80 50 40 25 20 C15 1/5 2/5 0/5 80 C16 3/5 0/5 1/5 72 a La dose concerne dans chaque cas le composant acide nucléique. (iii) Sensibilité à la ribonucléase On compare la vitesse de-dégradation des complexes C15 et C16 par la ribonucléase pancréatique avec celle de Poly I Poly C . On ajoute 10 micro-litres d'une solution à Img/ml de l'enzyme dans du chlorure de sodium 0,15 M à une solution de 100 rg de l'acide nucléique dans 2,5 ml de chlorure de sodium 0,15 M et on détermine la densité optique à 260 nm à des inter valles de 5 minutes Temps après l'ad- Hyperchromicité % t 260 nm ) dition de la ribonucléase Poly I ; Poly C CîS C16 Poly I ; Poly C C15 C16 5 min. 29,0 O 2,2 10 min. 36,3 1,0 3,3 15 min. 38,7 2,0 4,4 20 min. 38,7 3,0 4,4 25 min. 38,7 4,0 4,4 30 min. 38,7 5,0 4,4 1 h. 38,7 16,0 10,9 2 h. 38,7 38,0 1 34,8 Après deux heures, une précipitation se produit dans le cas de C15 et C16 . Ainsi ,les deux complexes sont dégradés par la ribonucléase plus lentement que Poly I : Poly C Des modifications peuvent être apportées aux modes de mise en oeuvre décrits , dans le domaine des équivalences techniques ,sans s'écarter de l'invention REVENDICATIONS 1.- Procédé pour la préparation d'un complexe antiviral, caractérisé en ce qu'on met en cotact,en solution , des polycations de polymère organique présentant des sites azote quaternaires placés à intervalles le long des chaines du polymère avec (a) des polyanions de Poly (I) : Poly (C) , ou (b) des polyanions d'un dérivé à double chaine de Poly (I) :Poly (C) 2.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les polycations du polymère organique répondent à la formule (I) dans laquelle a et b sont des nombres entiers qui sont égaux ou différents, chacun allant de 2 à 10 ; X est un nombre entier ou fractionnaire supérieur ou égal à 2 et qui dépend de la longueur de la chai ne du polymère 3.- Procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que les polycations de polymère organique répondent à la formule I suivant la revendication 2 , sauf que la chaine carbonée entre des sites azote quaternaire contient des liaisons oléfiniques ou acétyléniques ou porte des substituants méthyles 4.- Procédé suivant l'une quelconque des revendicationsprécédentes, caractérisé en ce que le complexe antiviral,qui est insoluble dans une solution de NaCl 0,15 M , est préparé par mise en contact d'un excès molaire du polycation de polymère organique avec le polyanion de Poly (I) : Poly (C) ,l'excès molaire étant calculé sur la base du nombre des sites basiques capables de réagir avec les sites acide phosphorique des polyanions de Poly (I) : Poly (C) 5.- Procédé suivant la revendication 42 caractérisé en ce qu'on ajoute un mélange du composant Poly (I) : Poly (C) et di composant polymère organique ,tout en agitant,à une solution aqueuse de NaCl 0,15 M. 6.- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé en ce qu'on ajoute lentement une solution aqueuse d'électrolyte du composant polyquaternaire à une solution aqueuse d'électrolyte diluée du composant Poly (I) : Poly (C) 7.- Procédé suivant la revendication 6 , caractérisé en ce qu'on ajoute une solution du composant polyquaternaire dans une solution aqueuse de NaCl 0,15 M à une solution de Poly (I) Poly (C) dans une solution aqueuse de NaCl 0,15 M. 8.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3 , caractérisé en ce qu'on prépare un complexe antiviral soluble dans une solution de NaCI 0,15 M par l'addition d'une solution aqueuse de NaCl 0,15 M du composant polyquaternaire, en opérant lentement et sous agitation,à une solution du composant Poly (I) : Poly (C) dans une solution aqueuse de NaCl 0,15 M , jusqu'à un moment qui précède immédiatement la précipitation ou bien jusqu'à ce que seule une faible précipitation se soit produite 9.- Procédé suivant la revendication 8 ,caractérisé en ce que la solution de Poly (I) : Poly (C) renferme de 5 à 20 mg/ml du composant 10.- Procédé suivant l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le composant polyquaternaire et le composant Poly (I) :Poly (C) sont choisis de telle sorte qu'on obtienne un complexe dans lequel la neutralisation de la charge est supérieure à 60% 11.- Complexe antiviral formé par un complexe principalement ionique dans lequel les cations sont des polycations de polymère organique qui comportent des sites azote quaternaire placés à intervalles le long des chaines de polymère les anions sont (a) des polyanions de Poly (I) :Poly (C) , ou bien (b) des polyanions d'un dérivé à double chaine de Poly (I) : Poly (C) 12.- Complexe antiviral suivant la revendication 11, caractérisé en ce que les polycations de polymère organique correspondent à la formule (I) : ( Voir formule page suivante ) dans laquelle a et b sont des nombres entiers qui sont identiques ou différents et qui vont chacun de deux à 10 ;X est un nombre entier ou fractionnaire supérieur ou égal à 2 et qui dépend de la longueur de la chaine du polymère 13.- Complexe antiviral suivant la revendication 12 , caractérisé en ce que les polycations de polymère organique ré- pondent à la formule (I) telle que définie dans la revendication 12 , sauf que la chaine carbonée entre les sites azote quaternaire renferme des liaisons oléfiniques ou acétyléniques ou pQr- te des substituants méthyles 14.- Complexe antiviral suivant l'une quelconque des revendications Il à 13 , caractérisé en ce qu'il est insoluble dans une solution aqueuse de NaCl 0,15 M. 15.- Complexe antiviral suivant l'une quelconque des revendications 11 à 13 , caractérisé en ce qu'il est soluble dans une solution aqueuse de NaCl 0,15 M. 16.- Complexe antiviral suivant l'une quelconque des revendications 11 à 15 , caractérisé en ce que plus de 60% de la charge initiale sont neutralisés . 17.- Composition pharmaceutique renfermant un complexe antiviral suivant l'une quelconque des revendications 11 à 16 et un ou plusieurs véhicules pharmaceutiquement acceptables 18.- Composition pharmaceutique suivant la revendication 17 , caractérisée en ce qu'elle se présente sous une for me convenant à une injection ou à une application à une muqueuse