Brevet FR2154314A1 — publié le 19730511

L'invention concerne un procédé de préparation sélective de trois alcaloïdes dimères suivants de Vinca rosez L (Catharanthus roseus Go Don), sous forme de bases ou de sels : vincaleucoblastine (VLB , nom généralement connu vinblastine ; appelé dans ce qui suit vinblastine), leurosine (VLR ; nom généralement connu : vinleurosine ; appelé dans ce qui suit vinleurosine) et leurocristine (VCR ; nom généralement connu : vincristine X appelé dans ce qui suit vincristine). Actuellement les pharmacologues du monde entier travaillent avec une intensité considérable à la préparation de composés qui ont une action cytostatique, convenant au traitement médical des personnes atteintes d'un cancer Parmi les résultats les plus importants de ces recherches, se trouve la découverte des alcaloïdes dimères de Vinca rosea Lo et leur introduction en thérapeutique Ces préparations se sont révélées depuis déjà maintenant presque une dizaine d'années, comme les agents relativement les plus efficaces en pratique clinique dans le domaine de l'onchologie La vinblastine est un produit utilisé en onchologie depuis 1959, dont l'application clinique a pour conséquence une diminution considérable du nombre des globules blancs dans le sang Elle s'est révélée efficace dans le traitement de la maladie de Hodgkin, de la leucémie aiguë et aussi du chorio-carcinome résistant (voir Johnson, I,S, Weright, H.F,, Svoboda G.Ho et Vlantis, J. Cancer Res 20 (1960) 1016J. L'action de la vinleurosine est moins bien connue Le domaine d'action semble etre le même que celui de la vinblastine E Johnson u. e Cancer Res 23 (1963) 1390 Antitumoral effects of Vinca rosea alkaloids Proceeding first symposium of the G.L.A Excerpta Medica Foundation, Amsterdam 1966J. La vincristine a été isolée et décrite pour la première fois par GH Svoboda [Svoboda, G.H. Alkaloids of Vinca rosea (Catharanthus roseus) IX Extraction and characterisation of Leurosidine and Leurocristine Lloydia 24 (1961) 173-178 I1 Il apparut bientot que ce nouvel alcaloïde, bien que ressemblant par son effet à la vinblastine découverte plus t8t, était considérablement plus avantageux du point de vue pharmacologique0 Dans des essais in vitro, la vincristine em peche la mitose de cellules plastiques nouvelles dans la méta- phase (voir Cardinals, G., Aboul Enein, M.I.M. : Studies on the Antimitotic action of Leurocristine (Vincristine).Blood 21 (1963) 102J Lors de lgapplication clinique, la vincristine s'est révélée plus avantageuse que les produits connus jusque là en chimiothérapie , dans des cas de leucémie aigue chez des enfants Alors qu'auparavant on n avait pu obtenir aucun succès thérapeutique dans la plupart des cas de cette maladie, on peut maintenant, grace à la vincristine, atteindre une rémission complète environ dans la moitié des cas (voir Haggard, M.E. : Vincristine (NSC-67574) therapy for Acute Leukemie in Children Cane, Chemother Rep 52 (1968) 477] ; la vincristine joue ainsi un rôle important en sauvant des vies.Dans des cas de tumeurs dures malignes chez des enfants, on a pu de la même façon obtenir une régression importante dans 65 à 94 % des cas [ Selavry, O., Hollande J.F. et Wolman, IoJo w Cane, Chemother. Repu, 52 (1968) 497] . Les alcaloldes dimères de Vinca rosea, la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine considérés du point de vue pharmacologique, sont des alcaloïdes mineurs de la plante, c'est-à-dire, parmi plus de 60 alcaloïdes présents dans la plante, ceux qui existent seulement en très petite quantité0 La vinblastine et la vinleurosine représentent ensemble seulement 1 à 2 % de la quantité totale d'alcaloïdes de la plante, la vincristine se présente à des concentrations encore inférieures de deux ordres de grandeurs On comprend donc que leur séparation des autres alcaloïdes, leur obtention et leur préparation dans un état de pureté nécessaire pour les médicaments exigent un procédé tres minutieux, qui est considérablement plus compliqué que les méthodes connues pour la séparation des alcaloïdes. On connaît de nombreux procédés pour l'obten- tion de la vinblastine, de la vinleurosine ainsi que de la vincristine [ Nobel, R.L, Anno Nç AcadO SciO 76 (1958) 882 brevet britannique N 870 723 ;; brevet américain N 3 097 131 et 3 205 220 i Svoboda, G.H J je Arn Assoc Sci. ed. 48 (1959) 659 s brevet hongrois NQ 153 200 et 154 715 i brevet belge N 624 046], qui reposent tous sur l'attaque acide ou basique ou sur un pré-traitement acide ou basique de la drogue séchée , sur l'extraction avec un solvant organique non miscible à l'eau, sur le transfert des alcaloïdes de la solution aqueuse dans les solvants organiques , effectuée à un meme pH ou à deux pH differents et enfin sur le fractionnement chromatographique du mélange d'alcaloldes transféré dans le solvant or ganique Bien que, au cours de l'évolution ultérieure, on ait amélioré la quantité et le rendement des trois alca lofes dimères utilisables en pharmacologie et isolés de la drogue par les méthodes citées, le changement de phase répété mais surtout la séparation chromatographique compliquée en trament encore des difficultés dans l'application technique de ces procédés.La complexité de la séparation chromatographique est facilement caractarisée par le fait que les trois alcaloldes dimères vinblastine, vinleurosine et vincristine, dont la fraction dans la quantité totale d'alcaloïdes contenant plus de 60 alcaloïdes s'élève à 1 à 2 * , doivent être concentrés, puis isolés et enfin préparés dans un état de pureté correspondant à l'utilisation comme médicament La séparation chromatographique de la totalité des alcaloïdes est une opération très compliquée, très longue et demandant un grand soin, et exige des colonnes de séparation chromatographique de très grandes dimensions L'importance de l'installation de chromatographie est caractérisée, en dehors de la dimension de la colonne de séparation, aussi bien par la quantité de A1203 à utiliser pour la séparation : d'après le brevet hongrois nO 154 715, 240 kg de A1203 sont nécessaires pour l'obtention de 150 g de vinblastine à partir d'une tonne de drogue, L'invention permet, par rapport aux procédés connus, une simplification importante et une élimination des inconvénients reposant sur des changements de phases répétés et sur une séparation chromatographique compliquée, une diminution considérable des dimensions de l'appareillage de chromatographie et de plus l'obtention simultanée des trois alcaloï- des dimères à préparer avec des rendements meilleurs qu'auparavant et de qualité équivalente L'invention est caractérisée par le fait qu a partir du mélange contenant des quantités im- portantes d'alcaloïdes bruts et préparés à partir de la drogue on précipite directement un sel d'alcaloïde, constitué principalement de vinblastine, de vinleurosine et de vincristine, et qu a partir de ce sel on peut obtenir les composés ci-dessus de façon relativement simple, Au cours des essais, on a établi effectivement qu'on pouvait obtenir ces trois alcaloïdes dimères de façon beaucoup plus simple que dans la technique antérieure en les concentrant avant la séparation chromatographique et en chromatographiant le concentrat d'alcaloïdes enrichi contenant les alcaloïdes dimères désirés à une concentration de 70 % environ0 L'enrichissement est effectué en épuisant la drogue avec du méthanol en solution aqueuse neutre, sans soumettre la drogue avant ou pendant l'extraction à un traitement basique ou acide et à partir de cette masse d'alcaloïdes délicate, se décomposant facilement, obtenue avec difficulté par traitement de l'extrait , on sépare les trois alcaloïdes dimères de la majeure partie des autres alcaloïdes sous forme de sels d'addition acides, de préférence sous forme de sulfates0 De cette façon, la concentration de ces composés est de 30 à 40 fois plus élevée que dans les mélanges d'alcaloldes soumis au fractionnement chromatographique selon les procédés de la technique antérieure La séparation chromatographique est ainsi beaucoup plus simple et peut être effectuée avec des colonnes de séparation de dimensions beaucoup plus petites, car les alcaloldes dimères désirés doivent être séparés des substances d'accompagnement se présentant en quantités plus petite s0 La simplification avantageuse et la diminution des dimensions des colonnes dans la séparation chromatographique effectuée suivant le procédé de l'invention peuvent être à nouveau caractérisées de la façon la plus simple par la quantité de A1203 nécessaire pour le fractionnement du mélange d'alcaloïdes obtenu à partir d'une tonne de drogue ç cette quantité, dans le procédé conforme à l'invention s'élève à environ 20 kg, alors qu'elle était auparavant de 240 kg L'invention est ainsi un procédé d'obtention sé= lectif de trois alcaloïdes dimères de Vinca rosea L., à savoir la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine ou de leurs sels produits par l'addition avec un acide, par épuisement de la drogue avec du méthanol aqueux9 concentration de l'extrait pratiquement jusqu'à l'absence de méthanol, acidification de la solution concentrée par évaporation, filtration, épuisement avec des solvants non miscibles à l'eau, alcalinisation de la phase aqueuse , recristallisation des alcaloïdes dans des solvants organiques non miscibles à l'eau et évaporation à sec de la solution exempte d'eau et obtention de tous les alcalo- des présents t,ar chromatographie avec de l'alumine partiellement désactivée.Ce procédé possède les caractéristiques suivantes : on épuise la drogue avec du méthanol neutre, on dissout le mélange d'alcaloïdes obtenu de la façon connue dans ltéthanol ou dans de l'éthanol contenant au maximum 10 % d'acide, puis dans le cas d'une solution éthanolique, on cristallise la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine sous forme de sels d'addition avec un acide et, après filtration du mélange de sels enrichi, contenant encore de faibles quantités d'autres substances, on chromatographie, soit le mélange de sels soit les bases libérées par alcalinisation de ces sels/d'alumine partiellement désactivée par l'eau, puis on récupère si nécessaire la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine ou leurs sels par fractionnement et élution, on les purifie si nécessaire on transforme ensuite le cas échéant les bases d'alcaloldes dimères ainsi isolées en sels d'addition avec un acide, ou on libère les alcaloïdes à partir des sels d'alcaloïdes dimères iso lésO La mise en pratique du procédé conforme à l'invention a lieu de préférence de la manière suivante On épuise plusieurs fois la drogue broyée (Vinca rosea L.) avec du méthanol contenant 5 à 20 % , de préférence lO5Yo d'eau et on concentre les extraits filtrés et purifies, sous pression réduite, jusqu'à élimination pratiquement complète du méthanol.Puis on acidifie, avec de l'acide sulfurique dilué, le résidu aqueux pour éliminer les composants n'appartenant pas aux alcaloïdes et on sépare par filtration le précipite formé. On épuise la solution aqueuse acide plusieurs fois avec du benzène, puis on rend alcaline la phase aqueuse acide séparée et on puise la solution aqueuse alcaline de la même façon plusieurs fois avec du benzène jusqu'à libération des alcaloïdes0 tes solutions de benzène réunies, obtenues par épuisement de la solution aqueuse alcaline, sont évaporées à sec sous pression réduite.On obtient ainsi un mélange d'alcaloïdes bruns amorphes de structure lâche On dissout le mélange d'alcaloïdes dans une solution éthanolique contenant au maximum 10 % d'acide sulfurique la valeur du pH de la solution est amenée -par là à 4,O5,0o La solution est ensemencée avec des cristaux de sulfate d'alcaloïde dimère et la cristallisation est amorcée en grattant sur la paroi du récipient, puis on laisse cristalliser pendant deux jours à température ambiante. On dissout et on chromatographie directement le mélange de cristaux séparé par filtration et contenant des sulfates de vinblastine, vinleurosine, vincristine et autres alcaloïdes.Pour la dissolution et l'élution, on utilise un mélange de chlorure de méthylène-chloroforme dans le rapport 2:1 ; pour la séparation chromatographique, on utilise une colonne de séparation contenant de l'alumine partiellement inactivée par l'eau. Les fractions 1 à 3 contiennent la plus grande partie des alcaloïdes d'accompagnement existant encore, les fractions 2 à 9 la vinblastine et la vinleurosine. La vincristine commence à apparaître sous forme de traces dans la fraction 9 et on termine l'élution avec la fraction 18.On évapore à sec les fractions contenant la vinblastine et la vinleurosine, on dissout le résidu sec dans méthanol, et après la cristallisation de la vinleurosine, on précipite de la liqueur mère sous forme de sulfate, la vinblastine par acidification avec de méthanol contenant au maximum 10 % d'acide sulfurique, on filtre et on recristallise ensuite pour une purification ultérieure. On peut aussi traiter les fractions contenant la vincristine, en dissolvant dans l'éthanol le résidu sec en fai zant recristalliser la vincristine, qu'on dissout de la même manière que ci-dessus dans une solution éthanolique d'acide sulfurique et qu'on purifie par recristallisation sous forme de sulfate. On peut aussi procéder en chromatographiant les bases alcaloïdes. Dans ce cas, on dissout dans l'eau le mélange cristallin composé de sulfates de vinblastine, vinleurosine, vincristine et autres alcaloldes et on amène le pH de la solution à 8,0 - 9,0 avec de l'ammoniaque. On extrait les bases alcaloldes de la solution alcaline plusieurs fois à l'aide de chloroforme, on sèche les solutions chloroformiques réunies avec du sulfate de sodium anhydre, on filtre et on évapore ensuive à sec sous pression réduite. On dissout le mélange de bases alcaloldes contenant principalement les trois alcaloïdes dimères dans un mélange de benzène et de chloroforme dans le rapport 1:1 et on le chromatographie sur une colonne de séparation à l'aide d'alumine partiellement inactivée par l'eau.On utilise pour l'élution un mélange de solvants de même composition. Les fractions 1 à 10 contiennent la vinblastine et la vinleurosine, les fractions 13 à 17 la vincristine Le traitement des fractions contenant la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine identifiées par chromatographie sur papier ou sur couche mince, est effectué de a manière déjà indiquée ci-dessus Les détails du procédé conforme à l'invention sont donnés dans les exemples suivants Exemple 1 On épuise 100 kg de plante de Vinca rosea Le (Catharanthus roseus Go bon), constituée essentiellement de feuilles séchées et broyées , une fois avec 600 1 et deux fois avec 400 1 d'une solution aqueuse de méthanol à 90 %. On concentre sous pression réduite les extraits méthanoliques filtrés et réunis, pratiquement jusqu'à l'absence de méthanol, à 140 150 1. Puis on acidifie pour éliminer les divers composés extraits n'appartenant pas aux alcaloïdes avec un volume égal d'une solution aqueuse d'acide sulfurique à 5 ,4 jusqu'à un pH de 2 et on filtre le précipité formé de couleur foncée.On extrait la solution aqueuse ainsi filtrée chaque fois avec 500 1 de benzène et on amène ensuite la valeur du pH de la phase aqueuse acide séparée contenant les alcaloïdes à 8,5 - 9,0 avec une solution aqueuse concentrée d'hydroxyde d'ammonium Puis on extrait la solution aqueuse alcaline jusqu'à libération des al caloïdes, trois à quatre fois avec chaque fois 600 1 de benzène On sèche les solutions benzéniques réunies avec du sulfate de sodium ou du carbonate de potassium anhydres et on évapore ensuite la solution benzénique filtrée sous pression réduite. On obtient environ 700 g d'un mélange d'alcaloïdes brun de structure lâche. On dissout le mélange d'alcaloïdes dans de l'éthanol contenant au maximum 10 % d'acide sulfurique, en veillant à ce que la valeur du pH de la solution soit comprise entre 4,0 et 5,0. On évapore la solution contenant le sulfate de vinblastine et le dépôt des cristaux commence aussitôt après qu'on ait gratté la paroi du récipient. On laisse cristalliser pendant 2 jours à température ambiante et on filtre ensuite les cristaux déposés à l'aide d'un filtre de verrez On obtient, suivant la qualité de la drogue, 20 à 100 g d'un mélange cristallin de sulfates de vinblastine, vinleurosine et de vincristine ainsi que de sulfates d'autres alcaloïdes.On dissout le mélange cristallin brut de sulfates d'alcaloldes dans un mélange chlorure de méthylèneochloroforme 2:1, dont on utilise 7 ml par gramme, On chromatographie cette solution sur colonne à remplissage d'alumine partiellement désactivée par l'eau, en quantité égale à 100 fois celle de la solution, et on élue ensuite avec un mélange chlorure de méthylène:chloroforme 2: li On recueille des fractions de 40 à 50 ml. Les trois premières fractions contiennent la majeure partie des alcaloïdes d'accompagnement On trouve la vinblastine et la vinleurosine dans les fractions 2 à 90 La vincristine commence à apparaître à l'état de traces dans la fraction 9 et est éluée jusqu'à la fraction 18. On sépare et on évapore à sec les fractions contenant la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine identifiées par chromatographie sur papier ou sur couche mince.Rendement : 15 à 75 g d'un résidu sec amorphe contenant la vinblastine et la vinleurosine et 0,6 à 3,0 g d'un résidu sec amorphe contenant la vincristine0 On dissout le résidu sec contenant la vinblastine et la vinleurosine dans une quantité d'éthanol aqueux 15 fois plus grande La vinleurosine cristallise, on la filtre, on la lave et on la sèche0 Rendement : selon la qualité du produit de départ, 5 à 17 g de vinleurosine9 Point de fusion : 2022050C ; EaJ D = + 72 (CHCl3). On dilue jusqu'à deux fois son volume la solution mère de leurosine, qui ne contient plus que de la vinblastine, avec de l'éthanol anhydre et on ajuste la valeur du pH de la solution à 4,0 avec une solution éthanolique d'acide.sul- fu=nueO La cristallisation du sulfate de vinblastine commence dès l'addition de la solution éthanolique d'acide sulfurique. On laisse ensuite cristalliser pendant 16 heures dans le réfri aérateur, Rendement : selon 1a qualité de la matière première, 15 à 70 g de sulfate de vinblastine brut, On dissout le sulfate de vinblastine brut séché et pulvérisé, à température ambiante dans 20 fois sa quantité de méthanol anhydre 3 et on ajoute à un volume de solution filtrée 4 volumes d'éthanol anhydre0 Pour obtenir la cristallisation complète de la vinblastine, on laisse reposer la solution 16 heures dans le réfrigérateur0 Au cours de la recristallisation, on obtient un rendement de 90 e;; Rendement ç selon la qualité de la matière première, 13 à 63 g de sulfate de vinblastine Eag D26 - 280 (CHC13)o Dans un but d'identification, on transforme la vinblastine en base et à partir de celle-ci, par recris tallisation dans l'éther, on obtient l'éthérate de vinblastine Point de fusion : 201-2110C ; rag 26 = + 420 (CHC13)o D On dissout le résidu sec amorphe de 0,6-3,0 g séparé par voie chromatographique et contenant la vincristine, dans 10 fois sa quantité d'éthanol anhydre et on amène 1; valeur du pH de la solution à 4,0 avec une solution éthanolique d'acide sulfurique0 Pour obtenir la cristallisation complète du sulfate de vincristine, on laisse reposer la solution 16 heures dans le réfrigérateur0 La quantité de sulfate de vincristine brut filtré s'élève à 60-70 % du résidu sec amorphe dissous, contenant la vincristine0 Pour la recristallisation, on dissout le sulfate brut de vincristine dans une quantité d'éthanol aussi faible que possible, on ajoute ensuite 4 fois la quantité o'étha- nol, on laisse cristalliser la solution pendant 16 heures dans le réfrigérateur et on filtre, Rendement e 0,3 - 1,5 g de sulfate de vincristine0 Point de fusion: 218-2200C, On peut aussi procéder de la manière suivante on dissout le résidu sec amorphe de 0,6 - 3,0 g séparé par voie chromatographique et contenant la vincristine dans 5 à 10 fois sa quantité de méthanol anhydre et on fait cristalliser la vincristine sous forme de base, puis on la purifie par recristallisation sous forme de sulfite à partir de l'éthanol, comme indiqué ci-dessus. Exemple 2 On dissout dans l'eau le mélange cristallin brut obtenu selon l'exemple 1 et contenant, selon la qualité de la drogue, 20 à 100 g de sulfate de vinleurosine, de vinblastine, de vincristine et d'autres alcaloïdes et on ajuste le pH de la solution à 8,0 - 9,0 avec de l'ammoniaque On extrait les alcaloïdes de la solution en quatre fois avec chaque fois un litre de chloroforme, on sèche les fractions de chloroforme réunies sur du sulfate de sodium anhydre, on filtre et on évapore ensuite à sec sous pression réduite, Rendement 16 - 80 g d'un mélange de bases alcaloïdes. On dissout cette masse dans trois à quatre fois sa quantité d'un mélange benzène: chloroforme 1 : 1 et on chromatographie ensuite sur colonne à remplissage d'alumine partiellement désactivée par l'eau en quantité égale à environ 40 fois celle du mélange. Comme mélange d'élution, on utilise un mélange benzène.chloroforme 1 : 1. Après l'écoulement des premiers 2 à 10 litres d'éluant, qui ne contiennent /de très faibles quantités d'al caloldes d'accompagnement, on recueille des fractions de 0,6 à 3,0 litres0 Les fractions 1 à 10 contiennent la vinblastine et la vinleurosine, les fractions 11 et 12 sont déjà exemptes de vinblastine et de vinleurosine Puis, on continue à éluer, en fonction de la quantité de mélange cristallin utilisé , avec 3 à 18 litres du mélange benzène:chloroforme 1:1, on recueille alors des fractions de 0,6 à 3,6 litres0 Les fractions 13 à 17 contiennent la vincristine0 On traite les fractions contenant la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine identifiées par chromatographie sur papier ou sur couche mince, de la façon décrite dans l'exemple 1. REVENDICATIONS I -. Procédé pourl'obtention sélective de trois alcalotdes dimères de Vinca rosea L., la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine ou de leurs sels d'addition, par épuisement de la drogue avec du méthanol en solution aqueuse, concentration de l'extrait jusqu'à absence pratiquement complète de méthanol, acidification de la solution concentrée par évaporation, filtration, épuisement à l'aide de solvants non miscibles à l'eau, alcalinisation de la phase aqueuse, recristallisation des alcaloses dans des solvants non miscibles à l'eau et obtention de l'ensemble des alcaloïdes présents par évaporation à sec de la solution exempte d'eau, concentration des alcaloïdes dimères et chromatographie avec de l'alumine partiellement désactivée, caractérisé par le fait que, pour l'épuisement de la drogue au moyen de méthanol, on utilise du méthanol aqueux neutre et que pour larmcentration des alcaloïdes dimères, on dissout le mélange d'alcalotdes dans méthanol et, par addition d'éthanol contenant au maximum 10 % d'acide, on amène le pH de la solution à 4-5 ou encore on dissout le mélange d'alcaloSdes dans de l'éthanol contenant au maximum 10 % d'acide pour amener le pH à 4-5, puis on cristallise et on isole le mélange d'alcalotdes contenant les alcaloïdes dimères désirés à partir de la solution sous forme de sels d'addition diacides et on dissout les sels d'addition d'acides du mélange d'alcaloSdes dans un mélange de solvants organiques ou on dissout le mélange de bases alcalotdes obtenu alcalinisation des sels d'addition d'acides dans un mélange de solvants organiques, puis on soumet la solution obtenue à une chromatographie sur de l'alumine partiellement désactivée par l'eau, en utilisant comme éluant le même mélange de solvants que mentionné ci-dessus, on récupère les alcaloses dimères à partir des fractions obtenues, on les purifie si nécessaire, on libère ensuite, le cas échéant, les alcaloses dimères individuels à partir des sels d'addition d'acides ou on les transforme en sels d'addition d'acides au moyen d'un acide. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait qu'on effectue la concentration de la vinblastine, de la vinleurosine et de la vincristine sous forme de sulfates. 3 - Procédé selon les revendications 1 et 2, caractérisé par le fait qu'on effectue la précipitation des sulfates de vinblastine de vinleurosine et de vincristine avec une solution éthanolique d'acide sulfurique. 4 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'on chromatographie la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine sous forme de sels, de préférence sous forme de sulfates. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'on chromatographie la vinblastine, la vinleurosine et la vincristine sous forme de bases. 6. Procédé selon ltune quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait qu'on dissout le mélange de sels enrichi en vinblastine, vinleurosine et vincristine dans un mélange chlorure de méthylène:chloroforme 2:1 et qu'on chromatographie ce mélange. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1, 2, 3, 4 et 6 caractérisé par le fait qu'on effectue ltélution avec un mélange chlorure de méthylène:chloroforme 2: le 8e Procédé selon la revendication 5, caractérisé par le fait qu'on dissout le mélange de bases enrichi en vinblastine, vinleurosine, et vincristine dans un mélange chloroforme:benzène 1:1 et qu'on chromatographie ensuite ce mélange. 9. Procédé selon les revendications 5 et 8, -ca- ractérisé par le fait qu'on effectue l'élution avec un mélange benzène: chloroforme 1:1. lOo Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'on élue ensemble les fractions contenant la vinblastine et la vinleurosine ou leurs sels et que ces deux alcaloïdes dimères sont séparés ultérieurement. 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé par le fait qu'on sépare la vinleurosine du mélange vinblastine-vinleurosine obtenu après séparation chromatographique, par dissolution dans l'éthanol anhydre et cristallisation sub séquente. 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait qu'on obtient la vinblastine à partir de la solution mère de vinleurosine sous forme d'un sel d'addition avec un acide, de préférence sous forme de sulfate, 13. Procédé selon la revendication 12, caractérisé par le fait qu'on précipite le sulfate de vinblastine avec une solution éthanolique d'acide sulfurique et qu'on le purifie le cas échéant par recristallisation 14. Procédé selon la revendication 11, caractérisé par le fait qu'on libère la base alcaloïde à partir du sel de vinblastine et qu'on la purifie le cas échéant. 15. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé par le fait qu'on dissout dans l'éthanol anhydre la vincristine obtenue à partir des fractions contenant la vincristine, le cas échéant par évaporation à sec, et qu'on précipite le sulfate de vincristine avec une solution éthanolique d'acide sulfurique0 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé par le fait qu'on purifie le sulfate de vincristine par recristallisation. 17. Procédé selon la revendication 15, caractérisé par le fait qu'on libère éventuellement la base alca loïde à partir du sulfate de vincristine, et qu'on la transforme si nécessaire en un sel d'addition avec un acide0