Brevet FR2185416A1 — publié le 19740104

La présente invention a pour objet de nouvelles pré parations a effet retard, exerçant une action adrénocorticotrope. on sait que la stimulation surrénalienne provoquée par t'hormone adrénocorticotrope (ACTH) et ses dérives peut etre améliorée et retardée par l'association de ces polypeptides avec un polyphlorétine-phosphate. Ces associations, sous forme de préparations injectables a action adrénocorticotrope avec effet retard, contiennent habituellement envircn 40 mg/mi de polyphlorétine-phosphate. Cependant, il résulte des essais effectués sur les animaux de laboratoire que ces préparations peuvent occasionner des dommages aux tissons D'autre part, l'injection de ces solutions s'avère douloureuse. ta demanderesse a maintenant trouvé qu'on peut éviter ces inconvénients sans influer sur l'effet retard, si on utilise, à la place des solutions utilisées jusqu'à présent, des solutions injectables isotoniques dans lesquelles la concentration de polyphlorétine-phosphate est nettement moins importante que dans les solutions connues. L'invention concerne donc plus particulièrement une préparation contenant, en solution isotonique, un polypeptide constitué de la totalité ou d'une partie de la séquence naturelle ou d'une séquence modifiée de la molécule de l'hormone adrénocorticotrope, à une concentration de 10 à 200 u.i./ml, et un polyphlorétine-phosphate à une concentration de 0,01 à 5 mg/ml. Dans la préparation de l'invention, la concentration du polypeptide est de préférence comprise entre 25 et 100 u.i./ ml et la concentration en polyphlorétine-phosphate est de préférence comprise entre 0,1 et 1 mg/ml. Le poids moléculaire du polyphlorétine-phosphate est avantageusement compris entre 8000 et 12000, de préférence entre 10000 et 11000. Comme polypeptides appropriés constitués de la totalité ou d'une partie de la séquence naturelle ou d'une séquence modifiée de 1'ACTH, on peut citer, outre les corticotropines contenant 39 amino-acides, des peptides à activité adrénocorticotrope contenant au moins les 20 premiers amino-acides ce 1'ACTH dans lesquels certains amino-acides peuvent éventuellement etre remplacés par d'autres L-a-amino-acides, naturels ou non; le reste L-séryle en position 1 sera de préférence remplacé par un reste D-séryle. On peut utiliser en particulier des polypeptides contenant de 23 à 25 amino-acides, å l'état d'#-amides. Comme exemples de tels polypeptides, on peut citer la D-Ser1 Nle4-(Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine, la D-Ser1-Nle4-Lys17-Lys18 (Val-NH2)25ss1-25-corticotropine, etc... Ces polypeptides sont connus et peuvent être préparés selon les méthodes utilisées ordinairement dans la chimie des peptides. On a étudié chez des rats dont l'hypophyse a été bloquée par une administration préalable de dexaméthasone, les variations de l'effet retard obtenu en fonction de la concentration de polyphlorétine-phosphate, par la détermination fluorimétrique du taux plasmatique des corticostéroides [voir à ce sujet Endocrinology 72, 897 (1963)J. Les préparations étudiées contenaient, comme polypeptide, la D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25 ss1-25-corticotropine dont la séquence peptidique est une modification de celle de l'ACTH. Ces préparations ont été administrées par voie intramusculaire 2, 4 ou 8 heures avant la prise de sang. On a ainsi injecté aux animaux 10 u.i./kg du polypeptide et des doses variables de polyphlorétine-phosphate, correspondant à des concentrations comprises entre 0,001 et 40 mg/ml. Les valeurs obtenues pour le taux plasmatique des corticostéroï- des sont rassemblées dans le tableau I suivant. TABLEAU I Concentration en Taux plasmatique des corticostéroïdes (en g/100 ml polyphlorétine-phosphate prise de sang effectuée apres (en mg/ml) 2 heures 4 heures 8 heures sans polyphioretine- phosphate 26,9 6,4 5,1 40 46 44 26 10 32,7 35,9 37,9 3,16 36,4 39,7 42,8 1,0 39,8 36,8 41,2 0,316 39,6 43,9 44,0 0,1 43,0 - 43,6 43,7 TABLEAU I (suite) 0,0316 42,0 44,0 47,9 0,01 37,3 40,2 30,2 0,00316 38,3 20,5 11,0 0,001 32,6 8,4 4,5 I1 ressort du tableau I que 2 heures après une injec1-25 tion de D-Ser1-Nle4-(Val-NH2) 25 - -corticotropine seule (concentration nulle en polyphlorétine-phosphate), on observe encore un taux plasmatique des corticostéroïdes moyen a submaximal, tandis qu'après 4 et 8 heures, le taux de 5 à 6 > ig/ 100 ml trouvé ne correspond plus qu!à une secrétion basale. La stimulation surrénalienne due à 1'ACTH est donc complètement absente après 4 heures. Lorsqu'on associe la même dose de D-Ser1-NLe4-(Val 25-ss1-25 NH 2 - -corticotropine avec du plasmatique des cortico- à différentes concentrations, le taux plasmatique des corticostéroïdes mesuré après 2 heures correspond à une stimulation cortico-surrénalienne maximale. Par contre, les taux mesurés après 4 et 8 heures présentent, pour un large domaine de con centrationsdu polyphlorétine-phosphate, une importante augmentation qui permet d'apprécier l'effet retard. On constate par exemple qu'à la concentration extrêmement faible de 0,00316 mg/ml de polyphlorétine-phosphate (plus de 10 000 fois inférieure à celle des préparations connues), on obtient un effet retard significatif. A la concentration de 0,0316 mg/ml, on observe après 4 et 8 heures un taux plasmatique des corticostérodes pratiquement maximum: on a donc un effet retard optimal de 4 a 8 heures avec une concentration 1000 fois plus faible que celle des préparations connues. L'effet retard obtenu avec des concentrations extrêmement faibles de polyphlorétine-phosphate a également été mis en évidence dans l'essai de déplétion en acide ascorbique, comme décrit dans Endocrinology 42, 379 (1948). D'une façon générale, le polyphlorétine-phosphate administré en association avec un peptide a activité adrénocorticotrope, comme par exemple la D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine, retarde de façon significative la stimulation surrénalienne de ce dernier, à des concentrations partant de 3 rg/ml, On a par ailleurs étudié l'action adrénocorticotrope des nouvelles préparations chez l'homme. Les volontaires agés de 25 à 32 ans, tous en bonne santé, étaient normalement alimentés pendant la durée des essais. Afin d'exclure la sécrétion endogène d'ACTH, ils ingéraient 2 mg de dexaméthasone toutes les 8 heures. Les préparations à essayer ont été administrées à B heures du matin, un intervalle d'au moins 1 jour étant observé entre les différentes injections.Les prises de sang pour le dosage des corticostéroïdes plasmatiques ont été faites a 8, 12, 16 et 20 heures; le dosage a été effectué selon une modification de la méthode de Porter et Silber. On a administré comme poly- peptide la D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine, sous forme d'ampoules de 100 u.i./ml, à des doses de 300, 400 et 500 u.i. Pour 100 u.i. du polypeptide, on a ajouté 2 mg de polyphlorétinephosphate. Dans ces essais, l'addition de polyphlorétine-phosphate au polypeptide retarde et prolonge la stimulation surréna- lienne. L'élévation maximale est généralement obtenue 8 a 12 heures après l'injection de la préparation, å la dose de 300 comme de 500 u.i. Tous les sujets présentent après 24 heures un taux encore anormalement élevé de la stéroidimie. Des essais analogues effectués sur des domaines étendus de concentrations du polypeptide et du polyphlorétine- phosphate ont abouti aux résultats suivants: Après administration intramusculaire d'une préparation contenant 10 à 200 u.i./ ml de D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine et 0,01 à 5 mg/ml de polyphlorétine-phosphate, on observe chez l'homme un effet retard d'environ 12 a 24 heures et une très bonne tolé- rance locale. On a trouvé par ailleurs que l'action favorable obser après injection intramusculaire d'une préparation selon l'invention contenant une faible dose de polyphlorétine-phosphate, dépend de la solution isotonique utilisée. Exemples de compositions pharmaceutiques A. Ampoules de 1 ml à administrer par voie intramusculaire ou sous-cutanée a) Acétate de D-Ser1-Nle4-(Val-NH2) 25 1-25 p -corticotropine (50 u.i.) 0,121 mg Polyphlorétine-phosphate de sodium (poids moléculaire: 11000) 1,150 mg Acétate de sodium.3H20 4,000 mg Mannitol 45,000 mg Polyéthylèneglycol 400 200,000 mg Eau pour injection: q.s.p. une ampoule de 1047,000 mg b) Polyacétate de D-Ser1-Nle4-Lys17-Lys18 (Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine poly hydraté (50 u.i.) 0,121 mg Polyphlorétine-phosphate de sodium (poids moléculaire: 11000) 1,150 mg Acétate de sodium.3H20 4,000 mg Mannitol 45,000 mg Polyéthylèneglycol 400 200,000 mg Eau pour injection: q.s.p. une ampoule de 1047,000 mg B.Ampoules de 1 ml pour l'administration par voie intramus culaire ou sous-cutanée, a mélanger peu de temps avant l'administration c) Polyphlorétine-phosphate de sodium (poids moléculaire: 10000 à 12000) 2,3 mg Acétate de sodium.3H2O 5,0 mg Mannitol 40,0 mg Polyéthylèneglycol 400 250,0 mg Hydroxyde de sodium 1N "Merck": q.s.p. un pH de 6,5 à 7,5 Eau pour injection : q.s.p. 1055,0 mg d) Polyacétate de D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25 1-25 ss -corticotropine polyhydraté (12 CH3COOH + 10 H20; 100 u.i.) 229,0 mg Acétate de sodium.3H20 0,2 mg Chlorure de sodium 10,0 mg Acide chlorhydrique N/10 "Merck": q.s.p. un pH de 5,0 Eau pour injection: q.s.p. 1005,0 mg On soumet les solutions c) et d) à un traitement antimicrobien, selon les méthodes habituelles (filtration et traitement par la chaleur) et on les conserve de préférence séparément. Dans la solution d), on peut remplacer le polypeptide utilisé par 100 u.i. de polyacétate de D-Ser1-Nie4-Lys17-Lys18- (Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine polyhydraté. REVENDICATIONS 1.- Nouvelle préparation à effet retard, exerçant une action adrénocorticotrope, caractérisée en ce qu'elle contient, en solution isotonique, un polypeptide constitué de la totalité ou d'une partie de la séquence naturelle ou d'une séquence modifiée de la molécule de l'hormone adrénocorticotrope, à une concentration de 10 à 200 u.i./ml, et un polyphlorétine-phosphste à une concentration de 0,01 à 5 mg/ml. 2.- Une préparation selon la revendication 1, caractérisée en ce que la concentration du polypeptide est comprise entre 25 et 100 u.i./ml. 3.- Une préparation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce qu'elle contient, comme polypeptide, la D-Ser1-Nle4-(Val-NH2)25-ss1-25-corticotropine. 4.- Une préparation selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce qu'elle contient, comme polypeptide, la D-Serl-Nle4-Lysl7-Lysl8 (V 1 25 1-25 corticotropine. 5.- Une préparation selon la revendication l,caracté- risée en ce que la concentration du polyphlorétine-phosphate est comprise entre 0,1 et I mg/ml. 6.- Une préparation selon l'une quelconque des revendications 1 et 5, caractérisée en ce que le poids moléculaire du polyphlorétine-phosphate est compris entre 8000 et 12000. 7.- Une préparation selon l'une quelconque des revendications 1 et 5, caractérisée en ce que le poids moléculaire du polyphlorétine-phosphate est compris entre 10000 et 11000. 8.- Une préparation selon llune quelconque des revendications 1 et 5 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient un polyphlorétine-phosphate de sodium. 9.-Une composition pharmaceutique a effet retard, exer çant une action adrénocorticotrope, caractérisée en ce qu'elle contient, en solution isotonique, un polypeptide constitué de la totalité ou d'une partie de la séquence naturelle ou d'une séquence modifiée de la molécule de l'hormone adrénocorticotrope, a une concentration de 10 à 200 u.i./ml, un polyphlorétine- phosphate à une concentration de 0,01 à 5 mg/ml, ainsi que des excipients et véhicules acceptables du point de vue pharmaceutique. 10.- Une composition pharmaceutique selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle est présentée sous forme d'ampoules à administrer par voie intramusculaire ou souscutanée.