Brevet FR2128159A1 — publié le 19721020

La présente invention concerne la préparation d'un inhibiteur de processus pathol.ogiques,- capable notamment d'inhiber le développement de leucémies et d'autres cancers. On a déjà décrit un procédé de préparation d'un inhibiteur de processus pathologiques qui consiste à soumettre une préparation cellulaire à une première précipitation par du polyéthylène-glycol, à séparer le précipité obtenu du liquide surnageant, à soumettre ce liquide surnageant à une seconde précipitation, notamment par de l'acide silico-tungstique, à séparer le précipité obtenu par cette seconde précipitation et à recueillir le liquide surnageant pour constituer ltinhibiteur. On a également pu mettre en évidence l'efficacité de l';nh;- biteur ainsi préparé, à partir de cellules pathologiques infectées par le virus leucémique ou à partir de cellules de tissus normaux, dans I' inhibition des processus pathologiques du développement de leucémies et d'autres cancers de type leucémique. La présente invention concerne un autre procédé permettant la préparation d'un inhibiteur en s'affranchissant notamment de l'emploi de l'acide silico-tungstique. Elle propose un procédé de préparation d'un inhibiteur de processus pathologiques, qui se caractérise essentiellement en ce que l'on soumet un extrait cellulaire à une précipitation par du sulfate d'ammonium, on sépare le precipité obtenu et l'on en élimine les particules virales. la précipitation s'effectue avantageusement par du sulfate d'ammonium saturé, ajouté en volume égal à l'extrait cellulaire, ou plus généralement dans un rapport variant de 0,5 à 3 par rapport à cet extrait. Le procédé ainsi défini, peut être mis en oeuvre, par exemple, en utilisant un extrait cellulaire préparé à partir de tissus lymphoïdes normaux ou de cultures de cellules dérivées de tels tissus, ou encore, de préférence, à partir de cultures cellulaires infectées par un virus leucemique. En plus du procédé de préparation défini ci-dessus et des inhibiteurs tels qu'obtenus par ce procédé, la présente invention couvre également les applications thérapeutiques de ces inhibiteurs au traitement préventif ou curatif de leucémies animales ou humaines ou d'autres cancers, notamment de type leucémique. Pour pouvoir être injecté, l'inhibiteur est purifié par dialyse et lyophilisé selon les techniques classiques. Le procédé selon l'invention est illustré ci-après par la description d'un mode de mise en oeuvre particulier choisi à titre d'exemple non limitatif. L'inhibiteur est préparé à partir dtune préparation virale constituee par un extrait d une culture de fibroblastes de rats (souche 78 A1) chroniquement infestée par le virus du sarcome murin type Moloney. Cette culture est mise en suspension dans une solution physiologique et soumise à des -entrifugations répétées selon les techniques connues. Lt extrait cellulaire ainsi obtenu, est soumis à une précipitation provoquée par addition de sulfate d'ammonium jusqu'à demisaturation. le produit ainsi obtenu, purifié par dialyse et lyophilisé, constitue un inhibiteur dont 1 t efficacité a été en particulier vérifiée sur la formation de foyers sarccmatogènes in vitro. Le tableau joint rapporte en particulier les résultats d'expérience montrant l'efficacité de l'inhibiteur sur la transformation de fibroblastes embryonnaires de souris par le virus du sarcome murin type Moloney. La préparation virale contenatn 3800 FFU par millilitro d'unités formatrices (nombre de foyers par millilitre) était conservée à -190 C. Après décongélation, on ajoutait 1 ml d'une solution diluée de cette préparation à une culture confluente de fibroblastes embryonnaires. Après deux heures de contact et un lavage, on ajoutait 5 ml de milieu de culture contenant des quantités variables d'inhibiteur, rapportées en poids dans la première colonne du tableau. Le nombre de foyers formés (FFU) était compte après six jours d'incubation à 370C et comparé dans chaque cas au nombre correspondant de foyers pour une culture témoin ayant reçu 5 mi de milieu de culture, sans inhibiteur. Ces chiffres sont rapportés dans les colonnes 2 et 3 du tableau. Dans les colonnes 4 et 5 on en a déduit le rapport des nombres de foyers dans la culture protégée et dans la culture témoin et l'efficacité inhibitrice du produit Les coilditions de ces expériences établissent en outre que l'inhibiteur agit après l.a phase dEabsorption et de pénétration du virus sarcomatogène dans la cultures fibl-oblastique. Son activité ne relève donc, ni d'une compétition pour les Récepteurs cellulaires, ni d'un mécanisme analogue à celui d'un interféron. 1 2 3 4 5 FFU Témoin Inhibition Inhibiteur FFU Témoin % % 0,5 mg 114 600 19 81 0,25 mg 78 600 13 87 0,5 mg 40 300 13 87 0,25 mg 44 300 15 85 1 mg 110 230 48 52 0,500 mg 163 230 71 29 1 mg 229 390 59 41 REVENDICATIONS 1.- Procédé de préparation d'tm inhibiteur de processus pathologiques, caractérisé en ce que l:on soumet un extrait cellulaire à une précipitation par du sulfate d'ammonium, on sépare le précipité obtenu et l'on en élimine les particules virales. 2.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la précipitation s'effectue par du sulfate d'ammonium saturé, ajouté en volume égal à l'extrait cellulaire. 3.- Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'extrait cellulaire utilisé est préparé à partir d'une culture cellulaire infectée par un virus leucémique. 4.- Inhibiteur de processus pathologique tel qu'obtenu selon lune quelconque des revendications 1 à 3. 5.- Application de l'inhibiteur à la prévention et au traitement de leucémies et de cancers de type leucémique.