Brevet FR2125579A1 — publié le 19720929

D'une manière générale cette invention concerne des nouveaux composés chimiques. Mieux, elle concerne des nouveaux composés qui sont utiles dans le traitement et la prévention de la maladie de la volaille appelée coccidiose. Plus parti-5 culièrement, elle concerne des nouvelles l-phényl-6-azacytosi-nes substituées et leur efficacité pour enrayer et traiter la coccidiose. La coccidiose, une maladie de la volaille, est due à plusieurs espèces de protozoaires parasites du genre Eimeria, tels que E. tenella, E. necatrix, E. acervulina, 10 E. maxima, E. hagani. 13. tenella est l'agent responsable d'une infection sévère et souvent fatale du caecum des poulets qui se manifeste par des hémorrhagies étendues, une accumulation de sang dans le caecum, et le passage de sang dans les excréments. La coccidiose çst essentiellement une maladie intesti-15 nale qui est disséminée par les oiseaux prenant llorganisme infectieux dans les excréments se trouvant sur de la litière ou le sol contaminés.En raison des dommages causés à la paroi intestinale, l'animal hôte est incapable d'utiliser sa nourriture et élimine ses aliments. Dans les cas non traités la mala-20 die se termine soit par la mort de l'animal soit par la survie d'oiseaux chétifs connus sous le nom de "rébuts". On a découvert désormais que certaines l-phényl-6-azacyto-sines substituées possèdent un degré d'activité élevé contre divers protozoaires qui provoquent la coccidiose. Un objectif 25 de la présente invention est de fournir de tels composés. Un autre objectif est de fournir une méthode qui est utile dans le traitement ou la prévention de la coccidiose et qui consiste à utiliser les nouveaux composés révélés ici. 30 ici peuvent être représentées par la formule développée suivante : Les nouvelles l-phényl-6-azacytosines substituées révélées X Y 35 40 72 05479 2 2125579 1 2 dans laquelle chacun de R et R est l'hydrogène, un groupement alkyle inférieur, mono- ou di-alcoxyalkyle inférieur; chacun de X et Z est un atome d'hydrogène, de chlore, de brome, un groupement nitro, trifluorométhyle, cyano, ou alkyle 5 inférieur; Y est l'hydrogène, un groupement monochlorphényl-sulfonyle, monochlorophényl-carbonyle, monochlorophényloxy, monochlorophénylthio, ou monochlorophényl-amine à la condition que lorsque Y est autre que l'hydrogène, chacun de X et Z 10 soit un atome d'hydrogène, de chlore, de brome, ou un groupement alkyle inférieur. Tels qu'ils sont utilisés ici les termes "alkyle inférieur" et "alcoxyalkyle inférieur", sont sensés représenter des groupements alkyle et alcoxyalkyle ayant de 1 à 3 atomes de carbone. 15 Les composés décrits ici peuvent être administrés à la volaille seuls mais ils sont administrés de préférence en association avec un porteur inerte approprié tel qu'un aliment pour volaille équilibré du point de vue nutritif. Les composés peuvent également- être administrés par l'intermédiaire de l'eau 20 que boit la volaille. Bien que la voie d'administration préférée soit la voie orale, il est possible d'administrer ces composés coccidiostatiques par voie rectale. On prépare les composés de départ utilisés dans la fabrication des produits de cett~ xnvention, c'est-à-dire les 2-25 phényl-as-triazin-3,5-(2H,4H)diones, par des méthodes connues telles que celles qui sont décrites par Slouka, /(Monatsh. Chem. 96 ; 134-137, (1965J_/ et dans la demande de brevet n° 7136162 déposée en France le 7 octobre 1971 par la demanderesse, qui consistent à décarboxyler les dérivés 6-carboxylés 30 correspondants. On obtient les dérivés acides 6-carboxylés nécessaires par hydrolyse acide des composés cyanés correspondants qui sont, à leur tour, préparés selon le mode opératoire de Slouka, Monatsh. Chem. 94, 258-262 (1963). Ce procédé consiste à faire réagir le sel de phényl diazonium approprié avec 35 le cyanoacétyluréthane pour obtenir le phénylhydjrazono- sous 11 influence cyanoacétyluréthane correspondant ce qui,/d'un mélange base ou acétate de sodium-acide acétique ou bien acétate d'ammonium- acide acétique, fournit le composé 6-cyano qui est hydrolysé en acide carboxylique dans des conditions acides ou alcalines. 40 On prépare les composés actifs de cette invention, les 72 05479 3 2125579 l-phényl-6-azacytosines substituées, en traitant le phénylaza-uracile précédent par un agent chlorant approprié tel que pentachlorure de phosphore ou oxychlorure de phosphore et en traitant ensuite la l-phényl-5-chloro-6-azacytosine résultan-5 te par l'ammoniac, l'hydroxyde d'ammonium, ou une aminé. La proportion molaire des réactifs dans la chloration n'est pas cruciale mais peut être située dans des limites allant des proportions équimolaires à un grand excès d'agents chlorants. Généralement des températures allant d'environ 90°C 10 à environ 107°C (reflux) sont favorables. On conduit généralement la réaction sur une durée d'environ 2 à environ 24 heures. Lorsque la réaction de chloration est achevée, on élimine l'excès de réactif sous pression réduite et on ajoute un excès 15 d'ammoniac, d'hydroxyde d'ammonium, ou d'une aminé. Lorsqu'on utilise l'hydroxyde d'ammonium on une aminé à bas point d'ébul-lition telle que la méthylamine, on peut effectuer la réaction à la température ambiante ou même à une température un peu inférieure, une heure étant habituellement une durée suffisante 20 pour que la réaction soit achevée. Lorsqu'on utilise une aminé plus complexe, on peut effectuer la réaction à la température de reflux dans un système solvant approprié tout comme le benzène et on peut augmenter la durée jusqu'à environ 2 heures. On décolore le produit, si -éeessaire, et on le recristallise. 25 On prépare également les 2-phényl-as-triazine-3,5-(2H,4H)- diones décrites ici, qui contiennent des groupement s activa-teurs tels que les composés comportant un groupement 2-(2,4-dinitrophényl), par phénylation directe du composé de départ, as-triazine-3,5-(2H,4H)dione, connu sous le nom vulgaire de 30 6-aza-uracile. Le mode opératoire général comporte le traitement de la as-triazine-3,5-(2H,4H)dione dans un système solvant approprié en présence d'un accepteur d'acide par 1'halobenzène approprié tel que le 2,4-dinitrofluorobenzène. Les solvants appropriés sont l'eau, l'éthylène glycol, le N,N-diméthylfor-35 mamide, le diméthylsuifoxyde et les alcanols inférieurs. La proportion molaire des réactifs n'est pas cruciale mais peut se trouver dans la gamme allant des proportions équimolaires à un grand excès des réactifs. En général des proportions molaires de as-triazine-3,5-(2H,4H)dione à l'haloben-40 zène allant d'environ 1:1 à environ 1:2 sont satisfaisantes. 72 05479 4 2125579 La température de réaction n'est pas cruciale. En général des températures allant de la température ambiante à environ 60°C sont favorables. On peut naturellement utiliser des températures plus élevées ou des températures plus basses mais 5 ceci ne semble présenter aucun avantage. On conduit généralement la réaction sur une durée d'environ 2 à environ 8 heures. Lorsque la réaction est achevée, on décolore le mélange de réaction, si nécessaire; on acidifie jusqu'à obtention d'un pH d'environ 3 à environ 5; et on refroidit pour précipiter 10 le produit. On purifie le produit ainsi obtenu par des procédés connus de l'homme de l'art comme, par exemple par recristallisation dans des solvants appropriés, par chromatographie sur un adsorbant approprié, ou par une association de ces méthodes. 15 Les présents agents peuvent être administrés par voie orale à la volaille dans un porteur approprié. Il est généralement commode, et par conséquent préférable d'ajouter les agents à la nourriture de la volaille de manière à ce qu'une dose thérapeutique de l'agent soit ingérée avec la ration journa-20 lière de la c-Iaille. On peut ajouter l'agent directement à la nourriture, te^ ■ iel, ou sous forme d'un prémélange ou d'un concentré. Pour incorporer l'agent à la nourriture on utilise couramment un prémélange ou un concentré d'agent thérapeutique dans un porteur. Les porteurs appropriés sont au choix des li-25 quides ou des solides tels que l'eau, diverses farines, par exemple farine huileuse de soja, farine huileuse de graine de lin, farine d'épis de maîs, et des mélanges minéraux tels qu'on en utilise couramment dans la nourriture de la volaille. Un porteur particulièrement efficace est la nourriture de la 30 volaille elle-même, c'est-à-dire, une petite portion de nourriture pour volaille. Le porteur facilite une répartition uniforme des substances actives dans la nourriture finie à laquelle on incorpore le prémélange. Ceci est important car les présents agents actifs ne sont nécessaires qu'en petites quantités. 35 II est important de mélanger finement le composé au prémélange et ensuite à la nourriture. A cet égard, on peut disperser ou dissoudre l'agent dans un véhicule huileux approprié comme l'huile de soja, l'huile de maïs, l'huile de graine de coton, etc., ou dans un solvant organique volatil et ensuite le mé-40 langer avec le porteur. On notera que les proportions de 72 05479 5 2125579 substance active dans le concentré peuvent varier largement étant donné que l'on peut ajuster la quantité d'agents dans la nourriture finie en mélangeant la proportion appropriée de prémélange avec la nourriture pour obtenir une concentration 5 désirée en agent thérapeutique. Des concentrés fortement actifs peuvent être mélangés dans la fabrication d'aliments avec des porteurs protéinacés comme la farine huileuse de soja et les autres farines, telles que décrites précédemment, pour donner des suppléments concen-10 très qui conviennent pour être donnés directement comme nourriture à la volaille. Dans ces cas, la volaille peut se nourrir selon le régime habituel. Sinon, ces suppléments concentrés peuvent être ajoutés directement à la nourriture de la volaille pour donner une nourriture finie, équilibrée du point de 15 vue nutritif, contenant une dose thérapeutiquement efficace d'un ou de plusieurs des composés de cette invention. On malaxe intimement les mélanges par des procédés classiques, tels que dans un mélangeur-malaxeur, pour s'assurer de l'homogénéité. La nourriture finie pour volaille doit contenir sensiblement 20 entre 50 pour cent et 80 pour cent de grains, entre 0 pour cent et 10 pour cent de protéines animales, entre 5 pour cent et 30 pour cent de protéines végétales, entre 2 pour cent et 4 pour cent de minéraux, tout cela étant ajouté à des sources constituant des suppléments vitaminés. 25 II est naturellement évident à l'homme de l'art que les concentrations auxquelles sont utilisés les composés décrits ici varient lorsque les circonstances diffèrent. L'emploi continuel d'un médicament à faible concentration, pendant la période de croissance, c'est-à-dire pendant les 8 à 12 pre-30 mières semaines pour les poulets, est une mesure prophylactique efficace. Lorsqu'il s'agit d\-> traitement d'infections installées, des concentrations plus élevées peuvent être nécessaires pour vaincre l'infection. On peut utiliser les présents composés à des concentra-35 tions réellement faibles dans la nourriture pour la prévention ou le traitement de la coccidiose. Généralement, les compositions alimentaires de la présente invention comportent une quantité mineure de l'un des composés 1-phényl-as-triazines de cette invention et une quantité importante de nourriture 40 équilibrée du point de vue nutritif, comme il est décrit 72 05479 6 2125579 précédemment. Les compositions alimentaires contenant une quantité aussi faible que 0,0008-0,0125 pour cent du présent agent se révèlent coombattre efficacement la coccidiose. On peut également utiliser des grandes quantités de l'agent, 5 jusqu'à 0,0250 pour cent et plus. Des concentrations inférieures à 0,0008 pour cent enrayent naturellement en partie les infections. La gamme de concentration préférée dans les compositions alimentaires est la gamme allant d'environ 0,0008 pour cent à environ 0,0016 pour cent de la ration. Lorsqu'on 10 administre les composés décrits ici en les incorporant à l'eau de boisson, de préférence comme sel de métal alcalin ou de métal alcalino-terreux, on les utilise à des concentrations égales à la moitié de la dose indiquée précédemment pour la nourriture. 15 Les présents suppléments et compositions alimentaires peuvent également contenir d'autres agents thérapeutiques efficaces tels que des antibiotiques pour favoriser la croissance et le bon état général de la volaille, ainsi que des composés de type sulfamide qui peuvent accroître l'efficacité 20 des présents composés coccidiostatiques. EXEMPLE I Dans un flacon de 200 ml à trois tubulures on a mélangé 5,1 g de 2-(3,5-dichlorophényl)-as-triazin-3,5-(2H, 4H)dione avec 4,6 g de pentachlorure -3^ phosphore et 25 ml d'oxychlorure 25 de phosphore. On a chauffé le mélange jusqu'à la température de reflux en l'agitant pendant 6 heures et ensuite on a éliminé les produits volatils à la pression de la pompe aspirante. On a ajouté 80 ml d'hydroxyde d'ammonium concentré , froid , on a agité le mélange, et on a séparé le solide restant par fil 30 tration. On a séché le filtrat et on l'a recristallisé dans l'alcool éthylique pour obtenir 2,6 g de 2-(3,5-dichlorophényl) 2,3,4,5-tétrahydro-5-imino-as-triazin-3-one cristalline ayant un point de fusion de 254-256°C et un poids moléculaire de 257,08 sa détermination étant faite par analyse spectrale de 35 masse. Analyse : Calculée pour CgH6ON4Cl2 - C = 39,30; H = 2,93; N = 20,37 pour cent Trouvée - C = 39,70; H = 2,37; N = 20,57 pour cent EXEMPLE II 40 On a ajouté 9,0 g de 2-(3, 5-dichlorophényl)-as-triazin- 72 05479 7 2125579 3,5-(2H, 4H)dioœ, après chloration comme dans l'Exemple I, à 100 ml de méthylamine aqueuse à 40% froide, on a agité le mélange pendant 1 heure et on l'a filtré. On a séché le filtrat et on l'a recristallisé dans le diroéthylformamide. 5 On a obtenu 2,4 g de 2-(3,5-dichlorophényl)-2, 3,4,5- tétrahydro-5-méthyl-imino-as-triazin-3-one ayant un point de fusion de 340-342°C et un poids moléculaire de 271,10, sa détermination étant faite par analyse spectrale de masse. Analyse : Calculée pour Cl0H80N4Cl2 : C = 44,30? H = 2,37; 10 N = 20,67 pour cent Trouvée . C = 43,87; H = 3,01; N = 20,65 pour cent EXEMPLE III Dans un flacon de lOO ml on a ajouté 5,2 g de 2-(3,5-dichlorophényl)-as-triazin-3,5-(2H,4H)dione à 4,6 g de pen-15 tachlorure de phosphore et 25 ml d'oxychlorure de phosphore. On a chauffé le mélange à la température de reflux pendant 2 heures en agitant, on a concentré le liquide résultant jusqu'à : obtention d'un solide sur la pompe aspirante, on a mis en suspension deux fois dans le benzène et on a finalement 20 concentré de nouveau jusqu'à obtention d'un solide. On a dissous ce solide dans 50 ml de benzène et on l'a mélangé à 5,3 g d'amino acétaldéhyde-diéthylacétal et 30 ml de benzène. On a chauffé le mélange à la température de reflux pendant 2 heures et ensuite on l'a co"c-ntré sous vide jusqu'à obtention 25 d'une gomme. On a trituré la gomme avec de l'éther isopropy-lique, on l'a filtrée, et on a recristallisé le filtrat dans un mélange de méthanol et d'eau. Il s'est formé 2,7 g de produit cristallin, soit la 2-(3,5-dichlorophényl)-5-/2,2-(diéthoxy)-éthylamino/-as-triazin-3(2H)-one ayant un point de 30 fusion de 163-165°C. On a trouvé que le poids moléculaire était égal à 373,23. Analyse : Calculée pour C-^H^gOgN^ Cl2 ; C = 48,26; H = 4,86; N = 15,01 pour cent Trouvée : C = 48,13; H = 4,83; N = 15,23 pour cent 35 EXEMPLE IV On peut également préparer les autres composés suivants par les méthodes précédentes ; 72 05479 8 2125579 R1 R2 h h h h h h h h C3H7 h h h h ch3 CH3 5 h h h C3H7 C3H7 ,0CH_ x h h h ch3 CH„—CH 2. N. 0Œ3 10 Cl h h h h Cl h Cl h h Br h Br CH2° h C3H7 h h h h ch3 h ch3 H CH3 15 no2 h h h h h h cf3 ch3 h CN h h H H h monochl or c> nény 1 sulfonyle h h H ch3 monochlorophényl carbonyle cr3 H CH3 20 Cl monochlor ophêny1oxy Cl H CH2OCH3 H monochlorophëny1thio H H H H monochlorcphénylamino H H H EXEMPLE V Dans le programme de sélection réalisé pour déterminer 25 1'efficacité des composés révélés ici comme composés coccidiosta- tiques , on utilise Eimeria tenella comme organisme test, car ledit organisme est probablement 11 espèce la plus largement répandue. On alimente des groupes de trois à cinq jeunes coqs 30 de race Barred Rock Cross âgés de neuf jours en leur donnant une ration de base dans laquelle le composé à l'essai est incorporé à diverses concentrations. La ration de base, une composition commerciale de démarrage pour poulets (Purina Commercial Chick Starter, que l'on peut se procurer auprès 35 de Ralston Purina Co., St. Louis, Missouri), et qui comprend les constituants ci-après, est présentée à volonté aux poulets 72 05479 9 2125579 vingt-quatre heures avant 11 infection et ensuite continuellement pendant toute la durée des essais. Composition de la ration de base Protéine brute, pas moins de 18,0% 5 Matière grasse brute, pas moins de 3,0% Fibres brutes, pas plus de S, 0% Minéraux ajoutés, pas plus de 3,5% fournis par les ingrédients suivants : Farine de viande et d'os, farine de poisson, farine 10 de soja, orge broyée, avoine broyée, maîs jaune broyé, farine de luzerne déshydratée, issues de blé, supplément de vitamine > éthoxyquine (agent de conservation), graisse animale conservée avec du HAB , chlorure de cholme, niacme, supplément 15 de vitamine A, supplément de riboflavine, pantothé- nate de calcium, stérol animal activé D, supplément de vitamine E, ménadione-bisulfite de sodium (source ■M1 de vitamine K) , carbonate de calcium, phosphate naturelle à faible teneur en fluor, sel iodé, sulfate 20 de manganèse, oxyde manganeux, sulfate de cuivre, oxyde de zinc. * HA3 = hydroxyanisole butylé ménadione-bisulfite de sodium = 2-méthyl-l, 4- naphtaquinone- 25 bisulfite de sodium. Vingt-quatre heur-ras après avoir commencé le traitement par le médicament, on inocule aux poulets par voie orale 200.000 ookystes sporulés (Eimeria tenella) et on détermine le poids moyen par volatile par groupe. En outre, on alimente un groupe 30 de 6-10 poulets avec la ration de base qui ne contient aucun des composés à l'essai (témoins infectés, non traités). Un autre groupe de 6-10 poulets sert de témoins non infectés, non traités. On examine les poulets le cinquième et le sixième jour après l'infection pour voir s'il existe des signes 35 d'hémorrhagie. Le septième jour après l'infection, on détermine le poids corporel moyen par volatile par groupe, on autopsie les volatiles, on examine le caecum par voie macroscopique, et on détermine un indice pathologique (degré moyen d'infection / D.M. I_j_/). On considère que les poulets qui meurent avant 40 le cinquième jour après l'infection sont morts en raison de 72 05479 10 2125579 la toxicité. On considère que ceux qui meurent cinq jours après l'infection ou plus tard sont morts de la maladie. On évalue l'efficacité du composé à l'essai en utilisant la prévention ou la mortalité et en comparant 1'indice pathologi-5 que avec celui de témoins infectés non traités. Le degré de développement pathologique à l'autopsie est exprimé par le degré moyen sur la base du schéma suivant : 0 = pas de lésions caecales; 1 = lésions légères; 2 = lésions modérées; 3 = lésions importantes; 4 = mort. 10 On trouve ainsi que la concentration du composé à l'essai dans la nourriture qui produit des gains de poids normaux en ce qui concerne les témoins non infectés, non traités, et une pathologie normale en ce qui concerne les témoins infectés, non traités, et qui est désignée sous le nom de concentration 15 efficace minimale (CEM), est égale à 0,0004 pour cent. On obtient les résultats expérimentaux suivants en appliquant le mode opératoire expérimental précité : Tableau I. Activité anticoccidienne de la 2-(3,5-dichlorophényl) -2, 3,4,5-tétrahydro-5-imino-as-triazin-3-one chez 20 des poulets infectés par E„ tenella. Traitement Dose (ppm) dans la nourriture Gain de poids (%) D.M.I, Infectés, traités 7,5 103 0,4 Infectés, traités 3,8 97 1,0 Infectés, traités 1,9 63 2,8 Infectés, non traités 63 3,7 Non infectés, non traités Tableau II. Activité anticoccidienne de la 2-(3,5-di-30 chlorophényl)-2,3,4,5-tétrahydro-5-méthylimino-as-triazin-3-one chez des poulets infectés par 13. tenella. Essai N° Traitement Dose (ppm) dans la nourriture Gain de poids (%) D.M.I. 1 Infectés, traités 30 99 0,0 15 91 0,4 7,5 56 3,0 3,8 76 2,4 Infectés, non traités 12 3,3 4-0 Non infectés, non traités 72 05479 ii 2125579 Tableau IX (SUITE) Essai Dose (ppm) Gain de dans la poids N° Traitement nourriture (%) D.M.I. 2 Infectés, traités 60 112 0,0 25 96 0,0 15 86 1,4 3,8 31 3,4 Infectés, non traités 2 3,6 Non infectés, non traités 3 infectés, traités 60 123 0,2 30 119 0,2 15 111 0,4 Infectés, non traités 23 1,9 Non infectés, non traités Tableau III. Activité anticoccidienne de la 2-(3,5-di- chlor ophény1)-5-/2,2(diéthoxy)éthylamino/-as-triazin-3(2H) - one chez les poulets infectés par -E-, tenella. Dose (ppm) Gain de Essai dans la poids N° Traitement nourriture (%) D.M.I. 1 Infectés, traités 60 65 2,0 15 31 3,0 3,8 0 3,6 Infectés, non traités 44 3,2 Non infectés, non traités 2 Infectés, traités 1,2 109 0,4 Infectés, non traités 12 3,3 Non infectés, non traités 72 05479 12 2125579 REVENDICATIONS 1. Composé de formule- X 10 R 1 2 dans laquelle chacun de R et R est l'hydrogène, un groupement alkyle inférieur, mono- ou di- alcoxyalkyle inférieur? chacun de X et Z est l'hydrogène, le chlore, le brome, 15 un groupement nitro, trifluorométhyle ou alkyle inférieur? Y est l'hydrogène, un groupement monochlorophényl sulfonyle, monochlorophényl carbonyle, monochlorophényloxy, monochloro-phénylthio, ou monochlorophényl aminé pourvu que lorsque Y est autre que l'hydrogène, chacun de X et Z soit l'hydrogène, 20 le chlore, le Ironie ou un groupement alkyle inférieur. 2. Le produit - la revendication 1, dans lequel chacun de X et Z est le chlore, Y est l'hydrogène et 2 R est l'hydrogène. 3. chacun de R et Le produit de la revendication 1, dans lequel chacun de 25 X et Z est le chlore, Y est l'hydrogène, R"*" est l'hydrogène, 2 et R est un groupement méthyle. 4 Le produit de la revendication 1, dans lequel chacun de X et Z est le chlore, Y est l'hydrogène, R^" est l'hydrogène, 30 et R est un groupement CI^-CH' -OC2H5 -OC2H5 5. Composition pour enrayer la coccidiose chez la volaille, comportant eoitoie ingrédient actif le composé selon la revendication 1. 6. Composition selon la revendication 5, caractérisée en ce 35 qu'elle comporte le composé selon la revendication 1 et un aliment pour volaille équilibré du point de vue nutritif. l