Brevet FR2128600A1 — publié le 19721020

Cette invention concerne des nouveaux composés chimiques et la méthode de préparation de ces composés. Elle concerne encore l'utilisation des nouveaux composés pour traiter et prévenir la coccidiose. Plus particulièrement encore cette 5 invention concerne des nouvelles 6-amino-S-(benzyl substitué)— purines et leurs H^-oxydes correspondants, et l'utilisation de ces composés pour enrayer et traiter la coccidiose. La présente invention fournit un composé de formule développée : ÎC Zp_7 15 20 25 dans laquelle n est égal à O ou 1, et et R2 (a) sont chacun pris dans le groupe constitué de l'hydrogène, des halogènes, des groupements nitro et trihalométhyle, 1 2 pourvu que au moins un de R et R soit autre que l'hydrogène, 1 2 pas plus de l'un de R et R soit du groupe constitue des 12 30 groupements nitro et trihalomethyle, et R et R sont situes en positions 2 et 6 sur la partie carbocyclique du composé, ou bien (b) sont tous deux des groupements méthyle et sont situés en positions 3 et 4 de la partie carbocyclique du composé. 35 La présente invention fournit également une composition alimentaire additionnée d'un médicament composée d'une ration pour volailles contenant une quantité mineure du composé précédent. La présente invention fournit en outre la méthode de préparation de nouveaux composés utiles comme agents coccidio-40 statiques, méthode qui consiste à faire réagir l'adénine et un 72 07500 2 2128600 halogénure de benzyle contenant (a) un ou deux substituants du groupe comportant les halogènes, les groupements nitro et trihalométhyle en positions 2 et 6 de la partie cyclique, pourvu que pas plus d'un desdits substituants appartienne au groupe compor-5 tant les groupements nitro et trihalométhyle, ou bien (b) deux substituants méthyle en positions 3 et 4, en présence d'une base dans un milieu de réaction inerte pour obtenir un produit qui est une 6-amino-S-(benzyl substitué)purine. La coccidiose est une maladie de la volaille, très répandue, 10 qui est produite par des infections par des protozoaires du genre Eimeria et qui provoque des altérations pathologiques sérieuses dans l'intestin et le caecum des volailles. Quelques-unes des plus importantes de ces espèces sont E^_ tenella, E. acervulina, E. necatrix, E. brunetti et E_j_ maxima. Cette maladie est générale-15 ment disséminée par les volatiles qui prévèlent l'organisme infectieux en picorant les excréments qui se trouvent sur la litière ou le sol contaminés, ou bien par la nourriture ou l'eau de boisson. La maladie se manifeste par des hémorragies, une accumulation de sang dans le caecum, le passage de sang dans les 20 excréments, de la faiblesse et des troubles digestifs. La maladie se termine souvent par la mort de l'animal, mais les volailles qui survivent à des infections sévères voient leur valeur commerciale très abaissée à la suite de l'infection. C'est pourquoi la coccidiose est une maladie ayant une grande importance pour 25 l'économie et on a effectué de nombreux travaux pour trouver les méthodes nouvelles et améliorées pour enrayer et traiter les infections coccidiennes chez la volaille. Cette invention repose sur la découverte que certaines nouvelles 6-amino-S-(benzyl substitué) purines, ainsi que leurs 30 N^-oxydes correspondants, ont un degré d'activité contre la coccidiose des volailles qui a une valeur élevée inattendue. L'administration d'une petite quantité d'au moins un de ces composés, de préférence en association avec la nourriture de la volaille, est efficace pour prévenir ou réduire fortement les 35 risques de coccidiose. Les composés sont efficaces à la fois contre la forme caecale (due à E^_ tenella) et les formes intestinales (principalement dues à E^ acervulina, E. brunetti, E. maxima et Ej_ necatrix. Les agents coccidiostatiques de cette invention sont particulièrement actifs contre les espèces qui provoquent des 40 lésions intestinales. Outre le fait de prévenir les altérations 72 07500 3 2128600 pathologiques causées par les coccidies, ces composés exercent également un effet inhibiteur sur les ookystes en réduisant fortement le nombre et/ou la sporulation de ceux qui sont formés. 5 On prépare les nouveaux dérivés de type purine de cette invention en faisant réagir un halogénure de benzyle substitué approprié et l'adénine en présence d'une base dans un milieu de réaction convenable pour obtenir une nouvelle 6-amino-S-(benzyl substitué) purine en môme temps que d'autres-isomères. On soumet 10 ensuite l'isomère S ainsi formé, soit isolé soit mélangé avec les autres isomères, à un agent oxydant approprié comme le peroxyde d'hydrogène, ou un acide peraromatique ou peraliphatique, pour obtenir le nouveau 6-amino-S-(benzyl substitué)purine-ftp'-oxyde correspondant de cette invention. 15 Un premier objectif de cette invention est donc de fournir des nouvelles 6-amino-9-(benzyl substitué) purines et leurs N^-oxydes correspondants qui sont utiles dans la lutte contre la coccidiose. Un autre objectif de cette invention est de fournir des 20 nouveaux agents anti-coccidiens. Un autre objectif encore de cette invention est de fournir des nouvelles compositions alimentaires utiles pour prévenir et enrayer la coccidiose chez la volaille. Un autre objectif de cette invention est de fournir une 25 méthode nouvelle et utile pour lutter contre la coccidiose chez la volaille, méthode qui consiste à administrer à la volaille des quantités mineures de substances anti-coccidiennes de cette invention. Un autre objectif enfin de cette invention est de fournir 30 une méthode de préparation de nouvelles 6-amino-S-(benzyl substitué) purines et de leurs N^-oxydes correspondants. Ces objectifs et d'autres objectifs de cette invention apparaîtront ou bien seront décrits au fur et à mesure que l'on avance dans la description de l'invention. 35 Selon cette invention, on traite ou on enraye la coccidiose chez la volaille en administrant à la volaille une dose non toxique, active contre les coccidies, d'un composé de formule développée : 72 07500 4 2128600 2 \ 5 10 \ R' 2 1 2 15 dans laquelle n est égal à o ou 1, et (a) R et R appartiennent séparément au groupe comportant l'hydrogène, les halogènes, c'est-à-dire le chlore, le brome, l'iode et le fluor, les groupements nitro et trihalométhyle, pourvu que au moins l'un de ces substituants soit autre que l'hydrogène et pas plus d'un 20 de ces substituants appartienne au groupe comportant les 1 2 groupements nitro et trihalométhyle, et R et R sont situés en positions 2 et 6 sur la partie carbocyclique du composé, ou 1 2 bien (b) R et R sont tous deux des groupements méthyle et sont situés en positions 3 et 4 sur le noyau carbocyclique. Les 12 25 composés préférés sont ceux où l'un des substituants R et R est l'hydrogène ou bien où les deux substituants sont des halogènes, soit identiques ou différents, ou des groupements méthyle. Les exemples spécifiques des nouveaux composés représenté par la formule développée précédente sont la 6-amino-9-(2-chloro-30 benzyl)purine; la 6-amino-9-(3,4-diméthylbenzyl)purine; la 6-amino-9-(2-nitrobenzyl)purine; la 6-amino-9-(2-bromobenzyl)-purine; la 6-amino-9-(2,6-dibromobenzyl)purine; la 6-amino-9-(2-iodobenzyl)purine; la 6-amino-S-(2-trifluorométhylbenzyl)-purine; la 6-amino-9-(2-chloro-6-iodobenzyl)purine et la 35 6-amino-S-(2-chloro-6-bromobenzyl)purine; et leurs N^-oxydes correspondants. Les composés ayant une préférence nette sont la 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine et la 6-amino-S-(2-chloro-6-fluorobenzyl)purine et leurs N^-oxydes correspondants, le 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine-N^-oxyde et le 6-amino-S-40 (2-chloro-6-fluorobenzyl)purine-N^-oxyde, respectivement. 72 07500 5 2128600 Lorsqu'on prépare les nouveaux agents coccidiostatiques de cette invention, on met l'halogénure de benzyle substitué approprié (c'est-à-dire chlorure, bromure, iodure ou fluorure) initialement en contact avec l'adénine dans un milieu dfe réaction 5 convenable, et on maintient le mélange de réaction résultant dans des conditions qui permettent à la réaction d'avoir lieu. Les halogénures de benzyle utiles peuvent être caractérisés comme étant ceux qui sont substitués de manière à produire les nouveaux composés tels qu'ils sont décrits ci-dessus par réaction avec 10 l'adénine, c'est-à-dire que ce sont des halogénures de benzyle contenant un ou deux substituants du groupe constitué des halogènes, des groupements nitro et trihalométhyle en positions 2 et 6 de la partie du cycle, pourvu que pas plus de l'un des substituants n'appartienne au groupe comportant les groupements 15 nitro ou trihalométhyle, ou bien contenant des substituants méthyle dans chacune des positions 3 et 4, les halogénures de benzyle préférés étant ceux qui ne contiennent que l'un des substituants précités en position 2 (c'est-à-dire halogène, groupements nitro et trihalométhyle) ou qui contiennent deux 20 halogènes ou deux groupements méthyle. Les halogénures de benzyle qui sont utiles dans la préparation des agents coccidiostatiques de cette invention comprennent le chlorure de 2,6-dichlorobenzyle, le bromure de 2-bromobenzyle, le bromure de 2-iodobenzyle, le chlorure de 3,4-diméthylbenzyle, le chlorure de 2-nitrobenzyle, 25 le chlorure de 2-chlorobenzyle, et le bromure de 2-chloro-6-fluorobenzyle. Les milieux de réaction convenables comprennent à la fois les solvants protiques et les solvants aprotiques qui sont inertes, c'est-à-dire qui ne réagissent pas avec les constituants du 30 mélange de réaction dans les conditions de réaction que l'on entretient. Les exemples de tels solvants comprennent les dialkyl alcano-amides, tels que diméthyl formamide et diméthyl acétamide, les alcools tels que éthanol, propanol, isopropanol, butanol, alcool amylique, cyclohexanol et alcool benzylique, y compris les 35 systèmes aqueux contenant jusqu'à environ 50 % d'un alcool tel que caractérisé précédemment, diméthyl suifoxyde, éthylène glycol et diéthylène glycol. Généralement, on peut utiliser dans la première étape de cette invention consistant à préparer les nouveaux agents coccidiostatiques l'un quelconque des solvants 40 qui sont décrits dans la technique comme étant utiles dans 72 07500 6 2128600 1'alkylation de l'adénine, catalysée par une base. Les bases qui sont utiles pour catalyser la réaction entre l'halogénure de benzyle substitué et l'adénine sont celles qui sont décrites dans la technique comme étant utiles pour catalyser 5 1'alkylation de l'adénine. En général, les bases appropriées comprennent toutes celles qui sont suffisamment alcalines pour engendrer l'anion adénine dans le système solvant utilisé. Les exemples de bases appropriées comprennent les carbonates, par exemple carbonates de métaux alcalins tels que carbonate de sodium 10 et carbonate de potassium, les hydroxydes, par exemple, hydroxydes des métaux alcalins tels que hydroxyde de sodium, hydroxyde de potassium et hydroxyde de lithium, les aminés tertiaires, par exemple triméthylamine, triéthylamine, tripropylamine et diméthylanaline, et les alcoolates, par exemple éthylate de 15 potassium, éthylate de sodium, t-butylate de potassium. Les bases préférées sont celles qui ont un pK^ supérieur à lo,5 de sorte que l'adénine est pratiquement transformée totalement en son anion. Les proportions relatives des constituants du mélange de 20 réaction de la première étape peuvent varier dans une gamme relativement large. On peut utiliser les réactifs en quantités stoechiométriques, c'est-à-dire en nombres égaux de moles des deux réactifs, ou bien en excès, par exemple un excès molaire de 10 % ou même plus, de l'un ou l'autre des réactifs. De mSme la 25 quantité de base n'est pas cruciale et peut varier dans de larges limites, mais il est préférable de l'utiliser à raison d'une quantité au moins stoechiométrique, un léger excès étant nettement préféré. La quantité de solvant utilisée peut également varier dans de larges limites. Le solvant est utilisé en une quantité 30 suffisante pour permettre à la réaction de se faire à une vitesse raisonnable et pour faciliter l'isolement du produit de réaction. On combine les réactifs et la base catalyseur dans le milieu de réaction d'une manière classique quelconque et dans n'importe quel ordre. A titre illustratif d'une manière appropriée de 35 combiner les constituants du mélange de réaction, on ajoute l'adénine à une solution de la base dans le milieu de réaction, puis ensuite on ajoute l'halogénure de benzyle substitué, soit sans solvant soit dans un solvant approprié. D'autres méthodes pour combiner les réactifs et le catalyseur seront évidentes mais 40 il est préférable de combiner ces derniers de manière à ce que 72 07500 7 2128600 l'anion de l'adénine ne se forme pas après que l'on a ajouté l'halogénure de benzyle et de préférence encore avant ce moment, c'est-à-dire qu'il est tout à fait préférable d'ajouter l'halogénure de benzyle en dernier lieu. 5 Les conditions de durée et de température de la réaction ne sont pas absolument cruciales. Cependant, la durée de la réaction va diminuer au fur et à mesure que la température de réaction augmente. Le plus commode est d'effectuer la réaction à une température comprise entre environ 50° et environ 100° C. Toutefois, 10 on peut utiliser des températures très inférieures tant que l'on maintient le système de réaction à l'état liquide. On peut conduire la réaction à des températures sensiblement supérieures à 100° C pourvu que 1'on maintienne la tempé rature à une valeur inférieure à celle à laquelle les constituants du mélange de réaction se 15 décomposent. On met ainsi les réactifs en contact l'un avec l'autre en présence de la base dans le milieu de réaction pour s'assurer que la réaction est totale. Le produit de réaction, c'est-à-dire la 6-amino-9-(benzyl substitué)purine, soit sous forme d'un 20 composé pur soit avec les autres isomères qui se forment, par exemple les isomères 1, 3 et 7, va soit rester totalement en solution soit précipiter après un certain temps, ceci selon la quantité de solvant utilisée comme il est indiqué précédemment. Lorsque la réaction est achevée, on peut refroidir le mélange de 25 réaction, par exemple jusqu'à une température d'environ 0°C, pour précipiter un produit solide ou pour précipiter encore une certaine quantité de ce produit. On isole ensuite le produit de la manière usuelle, par exemple par filtration, et si on le désire, on le purifie par des méthodes classiques telles que lavage avec 30 de l'éthanol ou de l'eau et recristallisation dans un solvant approprié tel que l'acide acétique, l'acide acétique aqueux, le diméthyl formamide ou le diméthyl suifoxyde. On peut purifier la 6-amino-S-(benzyl substitué) purine si on l'utilise sous cette forme comme agent coccidiostatique selon cette invention au lieu 35 de la transformer tout d'abord en N^"-oxyde correspondant. On peut facilement transformer la 6-amino-S-(benzyl substitué) purine ainsi obtenue dans la réaction initiale en nouveau purine-N^-oxyde correspondant de cette invention en soumettant celle-ci à l'action d'un agent oxydant approprié, on peut accomplir ceci 40 en dissolvant tout d'abord le produit de réaction brut ou 72 07500 8 2128600 l'isomère 9 isolé dans un solvant acide approprié, minéral ou organique, tel que acide sulfurique, acide acétique, acide formique ou acide butyrique, dioxanne, éthylène glycol ou dioxanne aqueux, et en ajoutant ensuite un agent oxydant compatible avec 5 le solvant. Les agents oxydants qui peuvent être utilisés comprennent le peroxyde d'hydrogène, les acides peraromatiques tels que les acides perbenzoique et métachlorobenzoîque, et les acides peraliphatiques tels que les acides peracétique et pertrifluoro-acétique. On laisse reposer le mélange oxydant ou bien on le le chauffe pendant une durée suffisante pour permettre à la réaction d1 oxydation d1 être pratiquement complète. Ensuite on récupère le 6-amino-9- (benzyl substitué) pur ine-N"*"-oxyde solide, mais non les produits oxydés correspondants des autres isomères, par exemple isomères 1, 3 et 7, en refroidissant le mélange 15 d'oxydation pour précipiter le produit, ou bien on peut utiliser d'autres méthodes d'isolement appropriées connues. On ne récupère pas de produits oxydés des isomères autres que l'isomère 9, apparemment en raison du fait que les autres isomères ne sont pas oxydés ou bien, s'ils sont oxydés, les produits ainsi formés 20 ne sont pas faciles à isoler ou ils subissent d'autres réactions pour former d'autres composés que l'on ne récupère pas avec 1' isomère 9 oxydé . Habituellement on purifie ultérieurement le produit brut ainsi obtenu par des méthodes classiques telles que recristallisation dans un acide organique comme l'acide acétique. 25 On administre les nouveaux composés de cette invention à la volaille par voie orale pour enrayer et prévenir la coccidiose. De nombreuses méthodes classiques sont appropriées pour administrer les agents coccidiostatiques de cette invention à la volaille, ainsi par exemple on peut les administrer dans la nourriture de 30 la volaille. La quantité réelle d'agents coccidiostatiques adminis-tré^ à la volaille selon cette invention variera dans de larges limites et peut être adaptée à chacun des besoins, en fonction de l'espèce de coccidies mise en jeu et de la sévérité de l'infection. Les critères limitatifs demandent que la quantité 35 minimale soit suffisante pour enrayer la coccidiose et que la quantité maximale soit telle que l'agent coccidiostatique n'ait pas pour résultat un effet indésirable. Une nourriture contiendra typiquement d'environ 0,0005 à environ 0,05 %, de préférence environ 0,0025 à environ 0,01 % 40 en poids de l'un des agents coccidiostatiques de cette invention. 72 07500 9 2128600 Les concentrations optimales varieront naturellement avec le composé spécifique utilisé et avec l'espèce d'Eimeria mise en jeu, et peuvent être facilement déterminées par l'homme de l'art. Des concentrations en 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine et 5 son N"*"-oxyde correspondant, qui sont parmi les agents coccidiostatiques nettement préférés de cette invention, dans l'alimentation de la volaille allant d'environ 0,0035 % à environ 0,0075 % en poids du régime sont particulièrement utiles pour enrayer les phénomènes pathologiques associés à tenella, tandis que la 10 concentration préférée pour lutter de la même manière contre les espèces habitant l'intestin est d'environ 0,0025 % à environ 0,0065 % en poids du régime. Des quantités d'environ 0,0045 % et 0,0065 % en poids pour la 6-amino-S-(2,6-dichlorobenzyl)purine et le 6-amino-S-(2,6-dichlorobenzyl)purine-N^-oxyde, respectivement, 15 sont avantageuses pour diminuer les effets pathogènes à la fois de la coccidiose caecale et de la coccidiose intestinale. Selon le composé utilisé, des concentrations de 0,001 % à C,0035 % ont les nouvelles propriétés c'abaisser le nombre des ookystes passés dans les excréments des jeunes poulets infectés 20 et/ou d'inhiber la division ultérieure et la maturation en organismes infectieux, désignées scientifiquement sous le nom de phénomène de sporulation. Donc, la prévention des phénomènes pathologiques associée à l'effet inhibiteur sur l'élément reproducteur de ces organismes, les ookystes, constitue une méthode double 25 unique pour lutter contre la coccidiose chez la volaille. La quantité ou la concentration d'un nouvel agent coccidio-statique de cette invention dans un quelconque mélange dans lequel il est administré à la volaille variera naturellement selon le type de mélange utilisé. 30 Parmi les diverses méthodes d'administration des agents coccidiostatiques de cette invention à la volaille, la plus commode est de les administrer sous forme de constituant de composition alimentaire. On peut facilement disperser les nouveaux agents coccidiostatiques en les mélangeant mécaniquement sous une forme 35 finement broyée avec la nourriture de la volaille, ou avec une formulation intermédiaire (prémélange) que 11 on mélange ensuite avec d'autres constituants pour préparer l'aliment final de la volaille que l'on donne à la volaille. Les constituants typiques des aliments pour volailles comprennent les mélasses, les résidus 40 de fermentation, la farine de mais, l'avoine broyée et roulée,les 72 07500 10 2128600 issues de blé, la luzerne, le trèfle,et les déchets de viande,avec des suppléments minéraux tels que farine d'os et carbonate de calcium et vitamines. Les exemples suivants non limitatifs servent à illustrer 5 plus en détail la présente invention. EXEMPLE I On a préparé initialement la 6-amino-S-(2,6-dichlorobenzyl) purine en ajoutant lentement environ 67,5 grammes (0,5 mole) d'adénine sèche à une solution d'environ 57 grammes (0,6 mole) 1G de t-butylate de potassium dans un litre d'éthanol absolu. On a agité ce mélange pendant environ deux heures et ensuite'on a ajouté environ S7,5 grammes (0,5 mole) de chlorure de 2,6-dichlorobenzyl e en l'espace d'environ 4 heures, on a chauffé le mélange résultant au reflux en agitant et on l'a laissé réagir pendant 15 environ 42 heures, après lesquelles on l'a refroidi à environ -10° C. On a isolé par filtration la 6-amino-S-(2,6-dichlorobenzyl) -purine brute ainsi formée et ensuite on l'a lavée avec de l'éthanol glacé et de l'eau glacée pour obtenir 118 grammes de produit brut. 20 On a dissous la 6-amino-S-(2,6-dichlorobenzyl)purine brute obtenue dans la réaction initiale dans un litre d'acide acétique. Ensuite on a ajouté une solution aqueuse à 30 % de peroxyde d'hydrogène à raison de 350 millilitres. On a laissé la solution reposer pendant 5 jours à la température ambiante, puis ensuite 25 on a ajouté environ 400 millilitres d'eau et on a refroidi la solution. On a récupéré le précipité résultant par filtration, on l'a remis en suspension dans 500 ml d'une solution aqueuse à 30 % d'acide acétique, et ensuite dans un litre d'eau. On a séché sous vide les solides récupérés de la suspension aqueuse 30 pour obtenir 75 grammes de 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine-N^-oxyde brut ayant un point de fusion de 2S6°-30l° C, soit un rendement de 40 %. On a préparé un échantillon analytique du même produit ayant un point de fusion de 2SS°-302°C par recristallisation dans l'acide acétique. 35 EXEMPLE II On a élevé des jeunes coqs de race "itfhite Rock" provenant d'une couveuse industrielle, alors qu'ils étaient âgés de un jour , de manière à éviter toute exposition à une infection coccidienne externe jusqu'à ce qu'ils soient âgés de quatorze jours. Lorsque 40 ces jeunes coqs ont eu quatorze jours, on les a pesés séparément 72 07500 ii 2128600 et on les a divisés en groupes comportant chacun dix poussins de manière à ce que tous les groupes soient pratiquement uniformes du point de vue taille et poids moyen des poussins. on a dispersé soigneusement le composé à l'essai, soit le 6-amino-S-(2,5-5 dichlorobenzyDpurine-N^-oxyde préparé comme il est décrit dans l'Exemple i, dans des quantités séparées d'un régime constitué d'une pâtée carencée en vitamine k à des concentrations de 0,01, 0,0075, 0,005, G,0025 et 0,001 % en poids. On a donné chacune de ces rations à volonté à un groupe de poussins. 10 D'autres groupes de poussins ont été alimentés avec le même régime de pâtée ne comportant pas de composé à l'essai. Deux jours après le début de ce régime, on a inoculé à tous les groupes sauf trois (30 poussins), désignés sous le nom de témoins non infectés ou normaux (TNI), par voie orale 100.000 ookystes sporulés de 15 JL. tenella dans le gésier. Deux des groupes (20 poussins) qui ont été ainsi inoculés ont été alimentés avec le régime de pâtée ne comportant pas de composé à l'essai, de manière à servir de témoin infecté ou positif (TI). L'expérience a été achevée six jours après l'inoculation aux poussins. 20 On a noté les mortalités et les valeurs obtenues pour les fecès (valeurs fécales) tout au long de l'expérience. La valeur fécale désignait l'augmentation graduelle de la quantité de sang passée dans les excréments, à l'aide de l'échelle de valeurs suivante : 25 O = quantité nulle 1 = moins de lo % 2 = 10 % à 50 % 3 = plus de 50 % On a également déterminé le nombre d' ookystes pendant les deux 20 derniers jours des essais en faisant un examen microscopique des excréments pour déterminer le nombre d' ookystes passés pour chaque poussin. A la fin de l'essai, on a déterminé les gains de poids et les microhématocrites. Pour déterminer les microhémato-crites, on a recueilli un échantillon de sang de chaque poussin 35 à l'aide d'un tube microcapillaire "héparinisé" que l'on a ensuite centrifugé pour déterminer le pourcentage en volume de globules sanguins tassés. Les résultats de cette expérience sont donnés dans le Tableau I. 72 07500 12 2128600 TABLEAU I" Médication Nombre Gain de poids % Hémato- Mortali-valeur % en poids de du régime poussins TNI TI crite % té % fécale Nombre d'ookystes, (xlOb) Nulle,TNI 30 100 181,9 31 0 C 0 Nulle,TI 20 55,0 100 30 70 •ù , 0 25,64 0,001 10 85,3 155,2 27 70 2,7 42,32 0,0025 10 37,S 69,0 27 40 2,3 56,95 0,005 10 86,3 156, S 28 0 2,3 31,0 0,0075 10 100,0 181,9 30 0 0,7 4,96 0,01 10 73,5 133,6 34 0 0 0,11 EXEMPLE III On a conduit cette expérience sensiblement comme il est 15 indiqué dans l'Exemple il si ce n'est que l'on a inoculé aux poussins 3.000.000 d'ookystes sporulés de E;_ acervulina. On a limité les observations aux gains de poids, valeurs fécales et nombre d'ookystes. on a basé les valeurs fécales sur la quantité de mucus et la consistance au lieu de les baser sur la quantité de 20 sang trouvé dans les excréments, et on a utilisé l'échelle de valeurs indiquée dans l'Exemple il. Les résultats de cette expérience sont donnés dans le Tableau II suivant : TABLEAU II Gain de poids % 25 Médication % en poids du régime Nombre de poussins TNI TI Valeur fécale Nombre d1ookystes (x 106) Nulle, TNI 30 100 159,8 0 0 Nulle, TI 20 62,6 100 2,5 14,15 0,001 10 55,9 89,4 2,7 14 0,0025 10 71,6 114,4 1,7 17,0 0,005 10 93,8 150,0 0 1,22 0,0075 10 89,6 143 ,2 0 0 0,01 10 77,7 124,2 0 0,23 35 EXEMPLE IV On a de nouveau utilisé le mode opératoire de l'Exemple n si ce n'est que l'on a infecté les poussins avec cinq espèces d'Eimeria simultanément. On a fait à chaque poussin une inoculation au total de 510.000 ookystes sporulés comportant 10.000 E.tenella, 40 200.000 E_j_ acervulina, 50.000 E. necatrix, 100.000 brunetti et 150.000 E_j_ maxima. Le Tableau III qui suit expose les résultats de cette expérience. 72 07500 13 2128600 TABLEAU III Médication Nombre % en poids de de régime poussins Gain TNI de poids TI Kéma- tocrite % Mortalité % Valeur fécale Nombre d ' ookyS' tes , (xlo ) Nulle,TNI 30 100 458,7 31 0 0 0 Nulle,TI 20 21,8 100 24 50 3,0 24,30 0,001 10 29,8 137,0 20 60 3,0 32,55 0,0025 10 73,S 339,1 27 40 2,7 47,02 0,005 10 93,8 430,4 29 0 0,7 3,18 0,0075 10 92,9 426,1 32 0 0 0,24 0,01 10 83,4 382,6 31 0 0,3 0 EXEMPLE V Dans cette expérience on a de nouveau suivi le mode opératoire 15 général exposé dans l'Exemple n, expérience que l'on a effectuée pour comparer l'efficacité du composé à l'essai, c'est-à-dire le 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine-KT^-oxyde, avec cinq agents coccidiostatiques disponibles dans le commerce. On a administré le composé à l'essai de cette invention aux poussins à raison de 20 0,0065 % en poids du régime et on l'a comparé aux composés énumérés ci-après aux concentrations de régime utilisées. Composé % en poids Nom chimique du régime A 0,0125 Chlorure de 1-(4-amino-2-N-propyl-5- 25 pyrinidinylméthyl)-2-picolinium chlorhydrate B 0,0125 & Composé A plus 4-acétamide-2- 0,0004 éthoxybenzoate de méthyle C 0,00825 4-hydroxy-6,7-diisobutoxy-3- 30 quinoMne-carboxylate d ' éthyle D 0,0125 3,5-dichloro-2,6-diméthyl-4- pyridinol E 0,0125 3,5-dinitro-0-toluamide On a administré les composés aux poussins dans la nourriture 35 pendant neuf jours au total, ce qui représentait la durée de cette expérience. Comme dans les exemples précédents on a fait l'inoculation aux poussins deux jours après le début de l'expérience. on a déterminé la valeur de tous les composés par rapport à des infections séparées dues à chacune des cinq espèces 40 d'Eimeria et à un mélange des cinq espèces données simultanément. Les espèces utilisées et le nombre d'ookystes sporulés administrés sont donnés dans la liste suivante : 72 07500 14 2128600 infection séparée infection mixte par une seule par 5 espèces espèce E. tenella 75.000 10.000 5 E. acervulina 2.000.000 200.000 E. necatrix 200.000 50.000 E. Brunetti 200.000 100.000 E. maxima 240.000 150.000 Total 510.000 10 On a évalué la sévérité des infections, de nouveau en utilisant un témoin non infecté ou normal (TNI) et un témoin infecté ou positif (TI). Chacun de ces deux groupes témoins comportait 20 poussins et chacun des autres groupes auxquels on avait administré les agents coccidiostatiques à l'essai comportait dix poussins. 15 Les critères utilisés pour évaluer l'efficacité des six préparations anticoccidiennes à l'essai comprennent les gains de poids ainsi que l'une au moins des observations suivantes : pourcentage de mortalité, pourcentage d'hémàtocrite et/ou valeur fécale, comme il est indiqué dans l'Exemple II. 20 Les résultats de cette expérience sont représentés dans le Tableau IV qui suit : tableau iv pas de médication Composé — à TNI TI l'essai E. tenella Gain de poids %/tni Gain de poids %/ti Mortalité % Hématocrite % E. acervulina Gain de poids %/tni Gain de poids %/ti Valeur fécale E. necatrix Gain de poids %/tni Gain de poids %/ti Mortalité % E. brunetti Gain de poids %/tni Gain de poids %/ti valeur fécale E. maxima Gain de poids %/tni 100,0 Gain de poids %/tI 166,7 Valeur fécale o infection mixte 5 spp. Gain de poids %/tni 100,0 Gain de poids %/ti 223,5 Mortalité % 0 valeur fécale o 100,0 202 ,8 0 30 100,0 220,5 O 100,0 254,8 0 100,0 291,5 0 49,3 100,0 55,0 20 45,3 100,0 3 39,2 100,0 80 34, 3 100,0 60,0 100,0 3 44, 7 100,0 40 3 95,2 193,1 O 30 100,0 220,5 O 95,6 243,5 0 87,8 255,9 O 89,5 149,2 O 91,7 204,9 0 0 Agents coccidiostatiques commerciaux KJ A B CD E 0 99,3 96,6 97,3 97,3 96,6 o 201,4 195,8 197,2 197,2 195,8 o O 0 0 O O 28 28 28 30 30 89,0 98,3 100,0 86,6 54,6 196,2 216,7 220,5 191,0 120,5 3 0 113 56,0 72,8 70,2 93,7 57,0 i- 141,9 185,5 179,0 238,7 145,2 01 0 0 9 0 0 40,1 39,5 92,5 96,5 61,0 116,9 115,2 274,6 281,4 178,0 3 3 0 0 2 73,3 73,8 86,7 74,8 64,3 122,2 123,0 144,4 124,6 107,1 3 3 113 N3 67,5 67,1 83,3 89,5 69,7 151,0 150,0 186,3 200,0 155,9 0 0 0 0 0 2 2 113 K> OO o- O O 72 07500 16 2128600 EXEMPIE VI Les modes opératoires étaient pratiquement les mêmes que dans les Exemples il et III, si ce n'est que l'on a achevé l'essai avec E. tenella cinq jours après l'inoculation et que l'on a 5 donné à chaque poussin infecté 200.000 ookystes sporulés de E. tenella ou 5.300.000 ookystes sporulés de E_^ acervulina. Les résultats représentés dans le Tableau v démontrent l'activité anticoccidienne du composé à l'essai, soit la 6-amino-9-(2,6-diàhlorobenzyl)purine, comparativement aux agents coccidio-10 statiques du commerce identifiés par les noms de composé B (chlorure de 1-(4-amino-2-N-propyl-5-pyrididinyl-méthyl)-2-picolinium, chlorhydrate plus 4-acétamide-2-éthoxy-benzoate de méthyle) et composé D (3,5-dichloro-2,6-diméthyl-4-pyridinol) dans l'Exemple v. 15 TABLEAU V E. acervulina Médication dans le régime Médication Nombre Gain % en poids de total du régime poussins moyen(g) Gain de poids % Valeur fécale TNI TI 20 Nulle, TNI — 5 218 100 144, 4 0 Nulle, TI — 5 151 68,8 100 3 Composé B 0,0125 5 221 101,4- 146, 4 0 Composé à 1'essai 0,0035 5 223 102,3 147, 7 0 25 E. tenella Médication Médication Nombre dans le en poids de Gain total Gain de poids Héma-% tocri- Morta^ lité régime du régime poussins moyen (q) TNI TI te 30 Nulle, TNI — 5 198 100 176,8 33 0 Nulle, TI — 5 112 56,5 100 14 60 Composé D 0,0125 5 203 102,5 181,2 33 0 Composé à l'essai 0,0045 10 197 99,5 175,9 32 0 35 EXEMPLE VII On a de nouveau suivi les modes opératoires utilisés dans l'Exemple VI si ce n'est que l'on a donné 125.000 ookystes sporulés de JSj. tenella aux poussins infectés. L'infection par E. acervulina a été effectuée de la même manière. L'efficacité 40 du 6-amino-9-(2-chloro-6-fluorobenzyl)purine-N^-oxyde (ccmposé à l'essai) est comparée à celle du composé B de 1!Exemple v vis-à-vis de deux espèces. Les résultats sont donnés dans le-Tableau VI. 72 07500 J-7 2128600 TABLEAU VI E. tenella Médication Médication Nombre Gain Gain de poids % Hémato- Morta- dans le % en poids de total crite lité 5 régime du régime poussins moyen TNI TI iSÙ % Nulle,TNI Nulle,TI Composé b 0,0125 10 Composé à l'essai 0,005 E. acervulina 5 189 100 148,8 5 127 67,2 100 5 186 99,6 146,6 5 203 107,4 159,8 32 16 30 30 O 50 O Médication Médication Nombre Gain total dans le en poids de moyen (g) 15 régime du régime poussins Gain de poids valeur % fécale TNI TI Nulle, TNI Nulle, TI Composé B 0,0125 Composé 20 à l'essai 0,005 5 5 5 224 162 218 211 100 138,3 0 72,3 100 3 97,3 134,6 1 94,2 130,2 0 EXEMPLE VIII Pour démontrer l'effet de la 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl) purine (Composé à l'essai A) et dé son N^-oxyde correspondant (Composé à l'essai b) sur les ookystes on a utilisé les modes 25 opératoires suivants. On a soumis chacun de ; deux groupes de cinq poussins (même type que ceux utilisés dans l'Exemple il) à chacun de quatorze on a donné à ces poussins line nourriture contenant diverses concentrations de l'un ou l'autre des Composés A ou b 30 à l'essai ceci 24 heures avant de les infecter par acervulina. On a donné une nourriture sans médicament à quatre groupes de poussins témoins pendant la même durée. Les modes opératoires utilisés avec les deux composés à l'essai étaient identiques sauf pour le nombre de jours pendant lesquels on a recueilli les 35 ookystes; on a recueilli les ookystes pendant cinq jours consécutifs pour les poussins recevant une nourriture contenant le composé à l'essai A tandis qu'on a recueilli les ookystes pendant quatre jours consécutifs dans l'étude avec le composé à l'essai b. On a inoculé dans les gésiers de tous les poussins 40 500.000 ookystes sporulés. On a commencé à recueillir les matières fécales quotidiennes totales le cinquième jour après l'inoculation. 72 07500 18 2128600 On a recueilli les excréments de chacun des groupes et on les a mélangés avec une solution aqueuse à 2,5 % de bichromate de potassium et on a homogénéisé puis prélevé une aliquote de 200 grammes, pour chaque groupe on a alors déterminé la production 5 totale d1ookystes par des méthodes de comptage au microscope. On a rassemblé, mélangé et fait sporuler les échantillons quotidiens provenant des deux groupes soumis à chaque traitement dans une quantité supplémentaire de solution de bichromate de potassium à 2,5 % en faisant barboter de l'air dans chaque 10 suspension pendant 48 heures à 28° C. Pour chaque traitement on a fait deux séries de comptages microscopiques différentiels des ookystes, c'est-à-dire formes sporulées par rapport aux formes non sporulées. Les résultats donnés dans le Tableau VII illustrent l'effet inhibiteur unique que possèdent ces composés 15 sur les ookystes coccidiens de la volaille. tableau vii 20 Médication et % dans le régime Nombre Production % moyen (%)d'ookys- d'échan-d'ookystes tes par tillons xlO /pous- rapport aux sporulés sin/jour témoins Sporulation Diminution (%) par totale(%) + rapport aux d'ookystes témoins sporulés Composé à l'essai A Absent 35.728 100,00 36,71 100,00 — O,0045 0,051 0,14- 0 0 100,oo 25 0,0035 1,200 3,36 0 0 100,00 0,0025 9,589 26,84 2,90 7,90 97,88 0,0015 16,858 47,84 5,36 11,24 94,62 0,001 14.151 39,61 6,67 16,84 93,33 Composé à l'essai B 30 Absent 109,77 100,00 22,5 100,00 — 0,0065 0, 33 0,30 0 0 100,00 0,0055 0,88 0,80 0 0 100,00 0,0045 0,39 0,36 0 0 100,00 0,0035 10,70 9,75 0,6 2,67 99,74 35 0,0025 168,89 +* 153,82 2,1 9,33 86,65 0,0015 77,35 71,38 3,1 13,78 90,16 0,001 107,35 97,81 6,0 26,67 73,91 ■f 100 moins % de production d'ookystes par rapport aux témoins x % de sporulation par rapport aux témoins = total de % 40 de diminution des ookystes sporulés. Nombre élevé peut-être dû à une erreur d'échantillonnage ou de comptage. 72 07500 19 2128600 L'homme de l'art verra d'après ce qui précède que les nouvelles 6-amino-S-(benzyl substitué)purines et les N^-oxydes correspondants de cette invention sont des agents coccidiostatiques efficaces. Ceci ressort en particulier des résultats 5 des expériences exposés dans les exemples précédents. Dans ces essais l'agent coccidiostatique préféré de cette invention, c'est-à-dire la 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine et son N"*"-oxyde correspondant, administré aux poussins expérimentaux dans un régime de pâtée était efficace pour enrayer la 10 coccidiose lorsque les poussins étaient inoculés avec des ookystes sporulés d'espèces de Eimeria. Le composé à l'essai était efficace contre les deux formes, forme caecale et forme intestinale de coccidiose. Le composé à l'essai supportait également une comparaison très favorable avec cinq composés qui 15 sont des agents coccidiostatiques couramment disponibles dans le commerce. Bien que cette invention ait été décrite pour des modes de réalisation spécifiques, il ressort que des modifications évidentes peuvent être faites par l'homme de l'art sans qu'il 20 s'écarte du champ d'application de l'invention tel que défini par les revendications annexées. 72 07500 20 2128600 REVENDICATIONS 1. Composé de formule développée ; 1 2 15 dans laquelle n est égal à O ou 1, et R et R (a) sont chacun compris dans le groupe constitué des atomes d'hydrogène, d'halogène, des groupements nitro et trihalo- 1 2 méthyle, pourvu que 1'un au moins de R et R soit autre que 1 2 1'hydrogéné, un seul de R et R soit dans le groupe constitue 1 2 20 des groupements nitro et trihalomethyle, et R et R sont situés en positions 2 et 6 de la partie carbocyclique du composé, ou bien, (b) sont tous deux des groupements méthyle et sont situés en positions 3 et 4 de la partie carbocyclique du composé. 12 25 2. Compose selon la revendication 1, dans lequel R et R sont des atomes de chlore. 3. Composé selon la revendication 1, dans lequel R"*" est un 2 atome de chlore en position 2, R est un atome de fluor en position 6. 30 4. Composition alimentaire à base d'un médicament constituée d'une ration pour volailles contenant une quantité mineure du composé de l'une des revendications 1, 2 et 3. 5. Composition alimentaire selon la revendication 4, dans laquelle ladite ration pour volailles contient environ 0,0005 à 35 environ 0,05 %. en poids dudit composé. 6. Composition alimentaire selon la revendication 4, dans laquelle ladite ration pour volailles contient environ 0,0025 à environ 0,001 % en poids dudit composé. 7. Composition alimentaire selon la revendication 4, 72 07500 21 2128600 contenant environ 0,0025 % à environ 0,01 % en poids de 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine. 8. Composition alimentaire selon la revendication 4, contenant environ 0,0025 % à environ 0,01 % en poids de 5 6-amino-9-(2,6-dichlorobenzyl)purine-N^-oxyde. 9. Composition alimentaire selon la revendication 4, contenant environ 0,0025 % à environ 0,01 % en poids de 6-amino-9-(2-chloro-6-fluorobenzyl)purine. 10. Composition alimentaire selon la revendication 4, 10 contenant environ 0,0025 % à environ 0,01 % en poids de 6-amino-9-(2-chloro-6-fluorobenzyl)purine-N^-oxyde. 11. La méthode de préparation des nouveaux composés utiles comme agents coccidiostatiques, qui consiste à faire réagir l'adénine et un halogénure de benzyle contenant (a) un ou deux 15 substituants du groupe constitué des halogènes, des groupements nitro, et trihalométhyle en positions 2 et 6 de la partie cyclique, pourvu que pas plus de l'un desdits substituants soit du groupe constitué des groupements nitro et trihalométhyle, ou (b) deux substituants méthyle en positions 3 et 4, en présence d'une base—.— 20 dans un milieu de réaction inerte pour obtenir un produit qui est une 6-amino-9-(benzyl substitué)purine. 12. Méthode selon la revendication 11, dans laquelle ladite base est du groupe constitué des carbonates, des hydroxydes, des aminés tertiaires et des alcoolates. 25 13. Méthode selon la revendication 11 ou 12, dans laquelle ladite base a un pK^ supérieur à environ 10,5. 14. Méthode selon la revendication 11, 12 ou 13, dans laquelle on fait réagir ladite adénine et ledit halogénure de benzyle à une température d'environ 50° à environ 100° C. 30 15. Méthode selon la revendication 11, 12, 13 ou 14, dans laquelle ledit halogénure de benzyle est le chlorure de 2,6-dichlorobenzyle. 16. Méthode selon la revendication 11, 12, 13.ou 14, dans laquelle ledit halogénure de benzyle est un halogénure de 35 2-chloro-6-fluorobenzyle. 17. Méthode selon l'une des revendications 11 à 16, dans laquelle ledit produit qui est une 6-amino-9~(benzyl substitué) purine est séparé dudit milieu de réaction et oxydé'. 72 07500 22 2128600 18. Méthode selon la revendication 17, dans laquelle ledit produit qui est une 6-amino-9-(benzyl substitué)purine est dissous dans un solvant et ensuite oxydé par un agent oxydant du groupe constitué du peroxyde d'hydrogène, des acides 5 peraromatiques et des acides peraliphatiques.