Brevet FR2110465A1 — publié le 19720602

! 2110465 La présente invention concerne une composition d1aminoacides destinée au traitement des affections hépatiques et du surmenage intellectuel . L'association d'une ammoniémie élevée et des encéphalopathies 5 hépatiques ainsi que les efffets toxiques possibles de l'ammoniaque dans d'autres maladies sont bien connus. Lorsqu'on ingère des sels d'ammonium ou une alimentation riche en protéines, la quantité d'ammoniaque introduite dans la circulation porte augmente. Des hémorragies importantes du tractus gastro-intestinal peuvent avoir le même résultat. En cas de mauvais fonction-10 nement hépatique et/ou de communications collatérales entre la veine porte et les veines de la circulation générale si courantes dans les cirrhosest la concentration élevée de l'ammoniaque, présente dans le sang portal,évite la barrière hépatique,et la teneur en ammoniaque du sang périphérique peut alors atteindre des valeurs toxiques. Les efforts visant à réduire lrammo-15 niémie sont donc très importants. On sait, à ce jour,qu'un aminoacide, la L-argininej. est utile pour abaisser 1'ammoniémie. Il semble que cette propriété qu'a l'arginine de réduire 1'ammoniémie soit due à son rôle de précurseur de l'ornithine dans le cycle de l'uréogénèse de Krebs et Henseleit. L'arginine est trans-20 formée dans le foie sous l'effet de l'arginase en ornithine et urée. Le cycle d'uréogénèse comporte essentiellement 3 aminoacides à savoir l'arginine, l'ornithine et la citrulline. On a également indiqué que la L-ornithine abaisse 1'ammoniémie lorsqu'on l'injecte de façon massive par voie veineuse en des quantités trois à quatre fois supérieures à la quantité nécessaire 25 d'arginine. On a également signalé que la L-citrulline possède une action bénéfique, bien qu'à un degré moindre. La demanderesse a découvert qu'on peut traiter des malades ayant une ammoniémie élevée par un mélange de L-arginine et de L-ornithine, dans un rapport pondéral de trois parties de L-arginine pour une à deux 30 parties de L-ornithine, dont l'action est synergique et qu'on obtient de meilleurs résultats qu'en utilisant la L-arginine, la L-ornithine ou la L-citrulline séparément ou un mélange de cas trois aminoacides. En pratique, grâce au mélange synergique de l'invention, il suffit d'administrer des doses d'aminoacides bien inférieures et on obtient de meilleurs résultats 35 qu'avec un mélange quelconque de ces trois acides aminés ou avec un acide aminé seul. On peut utiliser le mélange synergique d'aminoacides de l'invention pour le traitement de l'insuffisance hépatique, du coma hépatique, 71 37199 2 2110465 des hépatites aiguës et chroniques, seul ou en combinaison avec d'autres agents thérapeutiques. De plus, on peut utiliser ce mélange synergique pour traiter le surmenage intellectuel, la débilité et l'asthénie physique et psychique. Le mélange synergique d'aminoacides de l'invention est même plus actif que 5 1'acétylglutamine. Les compositions selon l'invention sont constituées d'un mélange de trois parties en poids de L-arginine ou d'un de ses sels convenant en pharmacie résultant de l'addition d'acides organiques ou minéraux non toxiques et d'une à deux parties en poids de L-ornithine ou d'un de ses sels convenant 10 en pharmacie résultant de l'addition d'acides minéraux ou organiques non toxiques. On utilise cette composition pour traiter les affections hépatiques associées à une ammoniémie élevée et également pour traiter le surmenage intellectuel. Un mélange préférentiel de L-arginine et de L-ornithine est constitué de 0,607 millimole de L-arginine et de 0,169 millimole de 15 L-ornithine bien qu'on puisse utiliser d'autres mélanges correspondants à la gamme de rapports précédemment citée. Bien qu'on puisse utiliser le mélange synergique d'aminoacides de l'invention seul dans un support stérile convenant en pharmacie tel que l'eau ou une solution saline isotonique, il" est également souhaitable de 20 combiner le mélange synergique d'aminoacides avec d'autres agents thérapeutiques tels que par exemple la méthionine, l'acide lipoîque, la cocarboxylase, la coenzyme coenzyme A, l'extrait de foie et 1'oxybétaîne. Comme exemples d'acides non toxiques qu'on peut utiliser pour former les sels convenant en pharmacie résultant de l'addition d'un 25 acide à la L-arginine et à la L-ornithine utilisables dans les mélanges synergiques de l'invention, on peut citer des acides minéraux tels que les aiides chlorhydrique, bromhydrique, sulfurique ou phosphorique et similaires, et des acides organiques carboxyliques tels que les acides acétique, propionique, glycolique, lactique, pyruvique, malonique, succinique, fuma-30 rique, malique, tartrique, citrique, ascorbique, maléique, benzoîque, phényl-acétique, cinnamique, salicylique et similaires. On peut administrer le mélange de l'invention à un hôte nécessitant un traitement contre des affections hépatiques ou le surmenage intellectuel par voies orale, intraveineuse ou intramusculaire. On obtient 35 généralement de bons résultats lorsqu'on administre les mélanges aux mammifères à des doses quotidiennes comprises entre environ 7 mg à environ 70 mg par kilogramme de poids corporel, réparties de préférence en deux à quatre doses journalières. La dose journalière totale est généralement comprise entre environ 500 mg et environ 12 g. 71 37199 3 2110465 10 Le mélange de l'invention favorise la synthèse de l'urée à partir de l'ammoniaque dans le foie de l'h&te auquel on l'administre et abaisse ainsi son ammoniémie. Les formulations suivantes constituent des exemples de de formulations administrables. Administration orale (A) Comprimés réalisés selon les techniques de fabrication classiques à partir de : Chlorhydrate de L-arginine 300 mg Chlorhydrate de L-ornithine 200 mg (B) Comprimés ou capsules façonnés selon les techniques classiques à partir de : Phosphate monohydraté de L-arginine 125 mg Phosphate monohydraté de L-ornithine 85 mg 15 Acide lipoïque 50 mg Oxybétaîne 250 mg Coenzyme 1 mg Administration intramusculaire Solutions de 20 (A) Chlorhydrate de L-arginine - - 300 mg Chlorhydrate de L-ornithine 200 mg Eau q.s. pour 3 ml (B) Chlorhydrate de L-arginine 300 mg Chlorhydrate de L-ornithine 200 mg 25 Cocarboxylase 50 mg Coenzyme A 1 mg Coenzyme B.^ 1 mg Extrait de foie q.s. pour 3 ml (c) Phosphate monohydraté de L-arginine 375 mg 30 Phosphate monohydraté de L-ornithine 255 mg Extrait de foie q.s. pour 3 ml (A) Chlorhydrate de L-arginine 3 g Chlorhydrate de L-ornithine 2 g 35 Solution de chlorure de sodium à 0,6% q.s. pour 100 ml D'autres caractéristiques et avantages de l'invention seront mieux compris à la lecture de la description qui va suivre de plusieurs exemples de réalisation en se référant aux dessins annexés dans lesquels : 71 37199 2110465 - la figure 1 représente un graphique des isoboles, les doses en mg/kg de l'un des composants étant représentées en ordonnées et celles de l'autre composant en abscisses; - la figure 2 représente les isoboles de protection contre la 5 mortalité provoquée chez la souris par le chlorure d'ammonium correspondant à des mélanges de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine; - la figure 3 représente les isoboles de protection contre la mortalité provoquée chez la souris par le chlorure d'ammonium correspondant à des mélanges de chlorhydrate de L-arginine et de L-citrulline; 10 - la figure 5 représente les isoboles de protection contre la mortalité provoquée chez la souris par le chlorure d'ammonium correspondant à des mélanges de L-citrulline et de chlorhydrate de L-ornithine; - dans la figure 5, le mélange chlorhydrate de L-arginine et chlorhydrate de L-ornithine dans le rapport 3/2 est représenté en ordonnées et 15 la L-citrulline en abscisses; - la figure 6 représente l'activité du chlorhydrate de L-arginine, du chlorhydrate de L-ornithine et du mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine par rapport à l'activité de la L-acétylglu- taminé. 20 EXEMPLES 1 à 14 On injecte par voie intrapéritonéale à des souris pesant de 18 à 25 g 20 ml/kg de la solution aqueuse préparée selon les compositions figurant dans les tableaux 1 à 14 et après 30 mn, on injecte par voie intrapéritonéale 20 ml/kg d'une solution de chlorure d'ammonium à 4% (poids/volume). 25 On observe les animaux pendant une semaine; la mortalité apparaît en 3 h. Les résultats figurent daas les tableaux suivants qui indiquent les doses, le nombre d'animaux utilisés, la valeur des DE,_q et les limites de confiance. TABLEAU I 30 Action protectrice du chlorhydrate de L-arginine contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (millimole/kg)i.p. Mortalité % Logarithme de la dose 0,25 18/20 90,0 - 0,6021 0,50 26/40 65,0 - 0,3010 35 1,00 39/70 55,7 0,0000 2,00 23/50 46,0 0,3010 4,00 4/20 20,0 0,6021 DE = 1,316 millimole/kg (0,954 - 1,817) correspondant à 277,23 mg/kg (200,97 - 382,77) de L-arginine, HCl. 71 37199 5 2110465 TABLEAU II Action protectrice du chlorhydrate de L-ornithine contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. (millimole/kg) i.D. Mortalité % Logarithme de la dose 0,25 19/20 95,0 - 0,6021 0,50 41/60 68,3 - 0,3010 1,00 27/70 38,6 0,0000 2,00 14/50 28,0 0,3010 4,00 1/20 5,0 0,6021 10 DE = 0j857 millimole/kg (0,713 - 1,032) correspondant à 144,54 mg/kg (120,23 - 174,02) de L-ornithine, HCl TABLEAU III Action protectrice de la L-citrulline contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. 15 Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité 7» Logarithme de la dose 0,25 30/40 75,0 - 0,6021 0,50 41/60 68,3 - 0,3010 1,00 48/90 53,3 0,0000 2,00 27/70 38,6 0,3010 20 4,00 4 1/40 2,5 * Les résultats correspondant à cette dose n'ont pas été utilisés dans les calculs. DE = 1,026 millimole/kg (0,817 - 1,949) correspondant à 179,74 mg/kg (143,13 - 341,45) de L-citrulline. TABLEAU IV Action protectrice d'un mélange (mélange A) de chlorhydrate de L-arginine (81,79% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (18,21% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. % Logarithme de la dose - d'arginine 57,5 - 0,3237 55,0 - 0,2744 72,5 - 0,2232 47,5 - 0,1743 32,5 - 0,1249 Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité 30 35 (L-arginine, (L-ornithine (L-arginine, (L-ornithine (L-arginine, (L-ornithine, (L-arginine, (L-ornithine HCl 0,4746 HCl 0,1304 HCl 0,5316 HCl 0,1482 HCl 0,5981 HCl 0,1660 HCl 0,6693 HCl 0,1838 (L-arginine, HCl 0,7500 (L-ornithine, HCl 0,2075 23/40 22/40 29/40 19/40 13/40 71 37199 6 2110465 TABLEAU IV (suite) 10 15 20 25 Action protectrice d'un mélange (mélange A) de chlorhydrate de L-arginine (81,79% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (18,21% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. 5 Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité (L-arginine, HCl 0,8449 (L-ornithine, HCl 0,2372 (L-arginine, HCl 0,9493 (L-ornithine, HCl 0,2668 (L-arginine, Hcl 1,0680 (L-ornithine, HCl 0,2965 9/40 7/40 5/40 % 22,5 17,5 12,5 Logarithme de la dose d'arginine 0,0732 - 0,0226 0,0286 DE = 0,607 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,561 - 0,656) associée à 0,169 millimole/kg de L-ornithine,HCl (0,156 - 0,182) correspondant à 127,87 mg/kg de L-arginine,HCl (118,18 -138,19 associés à 28,50 mg/kg de L-ornithine,HCl (26,30 - 30,69). TABLEAU V Action protectrice d'un mélange (mélange B) de chlorhydrate de L-arginine (59,90% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (40,10% en poids) contre l'intoxication aiguB par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (millimole/kg)i.p 30 (L-arginine, HCl o, 1898 (L-ornithine,HCl o, 1601 (L-arginine ,HC1 0, 2990 (L-ornithine,HCl 0, 2490 (L-arbinine,HC1 0, 3797 (L-ornithine,HCl 0, 3202 (L-arginine,HC1 0, 4746 (L-ornithine,HCl 0, 3973 (L-arginine ,HC'l 0, 5933 (L-ornithine,HCl 0, 4981 (L-arginine,HCl 0, 7500 (L-ornithine,HCl 0, 6286 Mortalité 15/20 28/40 22/40 17/40 3/20 2/20 %. Logarithme de la dose d'arginine 75,0 - 0,7216 70,0 - 0,5243 55,0 - 0,4206 42,5 - 0,3237 15,0 - 0,2267 10,0 - 0,1249 35 DE = 0,383 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,340 -0,432) associée à 0,320 millimole/kg de L-ornithine,HCl (0,284 - 0,361) correspondant à 80,68 mg/kg de L-arginine,HC1 (71,62 - 91,01) associés à 53,96 mg/kg de L-ornithine, HCl (47,89 -60,87) 71 37199 7 2110465 TABLEAU VI 10 15 20 25 30 35 Action protectrice d'un mélange (mélange C) de chlorhydrate de L-areinine (33,63 % en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (66.37% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité (L-arginine,HCl 0,2990 (L-ornithine,HCl 0,7413 (L-arginine,HCl 0,3370 (L-ornithine,HCl 0,8302 (L-arginine,HCl 0,3750 (L-ornithine,HCl 0,9310 (L-arginine,HCl 0,4224 (L-ornithine,HCl 1,0437 (L-arginine,HCl 0,4746 (L-ornithine,HCl 1,1683 (L-arginine,HCl 0,5316 (L-ornithine,HCl 1,3106 (L-arginine,HCl 0,5981 (L-ornithine,HCl 1,4707 (L-arginine,HCl 0,6693 (L-ornithine,HCl 1,6486 (L-arginine,HCl 0,7500 CL-ornithine,HCl 1,8562 * Les résultats correspondant à cette dose n'ont pas été utilisés dans les calculs. DEÇ_ = 0,490 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,453- 0.529 associée à 1,208 millimole/kg de L-ornithine,HCl (1,117-1,304) correspondant à 103,22 mg/kg de L-arginine,HCl (95,43 - 111,44) associés à 203,69 mg/kg de L-ornithine,HCl (188,35 - 219,88) TABLEAU VII Action protectrice d'un mélange (mélange A') de chlorhydrate de L-arginine 30/40 13/20 15/20 15/20 25/40 21/40 11/40 8/40 3/40 % 75,0 65,0 75,0 75,0 62,5 52,5 27,5 20,0 7,5 Logarithme de la dose d'arginine -0,5243 -0,4724 -0,4260 -0,3743 -0,3237 -0,2744 -0,2232 -0,1743 par le chlorure d'ammonium. chez la souris. Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité % Logarithme de la (L-arginine,HCl 0,2990 (L-citrulline 0,1198 33/40 82,5 - 0,5243 (L-arginine,HCl 0,4746 (L-citrulline o,1883 30/40 75,0 - 0,3237 'L-arginine,HCl 0,7500 'L-citrulline 0,3025 21/40 52,5 - 0,1249 (L-arginine,HCl 1,1914 (L-citrulline 0,4794 15/40 37,5 0,0760 71 37199 2110465 DE^q = 0,848 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,662- 1,085) associée à • 0,340 millimole/kg de L-citrulline (0,265 - 0,435) correspondant à 178,65 mg/kg de L-arginine, HCl (139,46 - 228,57) associés à 59,55 mg/kg de L-citrulline (46,49 - 76,19) 5 TABLEAU VIII Action protectrice d'un mélange (mélange B') de chlorhydrate de L-arginine (507° en poids) et de L-citrulline (50% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. % Logarithme de la dose d ' arginine 77,5 - 0,6247 57,5 - 0,4260 52,5 - 0,2232 40,0 - 0,0226 DEj_0 = 0,625 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,450 - 0,867) associée à 0,751 millimole/kg de L-citrulline (0,541 - 1,042) correspondant à 20 131,66 mg/kg de L-arginine,HCl (94,80 -182,64) associés à 131,66 mg/kg de L-citrulline (94,^0 -182,64) TABLEAU IX Action protectrice d'un mélange (mélange C') de chlorhydrate de L-arginine (25% en poids) et de L-citrulline (75% en poids) contre l'intoxication aiguë 25 par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité % Logarithme de la dose d'arginine 10 15 Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité (L-arginine,HCl 0,2373 (L-citrulline 0,2854 (L-arginine,HCl 0,3750 (L-citrulline 0,4509 (L-arginine,HCl 0,5981 (L-citrulline 0,7192 (L-arginine,HCl 0,9493 (L-citrulline 1,1416 31/40 23/40 21/40 16/40 30 (L-arginine,HCl 0,1898 (L-citrulline 0,6792 (L-arginine,HCl 0,2373 (L-citrulline 0,8562 (L-arginine,Hcl 0,2990 (L-citrulline 1,0788 29/40 20/40 16/40 72,5 50,0 40,0 0,7216 -0,6247 - 0,5243 35 (L-arginine,Hcl 0,3750 inm m r ^ (L-citrulline 1^3585 13/40 32'5 " °>4260 DE 0,249 millimole/kg de L-arginine,HCl (0,227 -0,272) associée à 0,898 millimole/kg de L-citrulline (0,819 -0,981) correspondant 52,45 mg/kg de L-arginlne,HCl (47,82 - 57,30) associés à 157,35 mg/kg de L-citrulline (143,46 -171,91) 71 37199 2110465 TABLEAU X Action protectrice d'un mélange (mélange A") de L-citrulline (75% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (25% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. 5 Dose (millimole/kg) i.p. 10 15 L-citrulline o, 4566 L-ornithine ,HCl o, 1601 L-citrulline o, 5708 L-ornithine,HCl o, 1957 L-citrulline o, 7192 L-ornithine,HC1 o, 2490 L-citrulline o, 9018 L-ornithine,HCl o, 3143 L-citrulline 1, 1416 L-ornithine ,HC1 0, 3973 L-citrulline 1, 4327 L-ornithine,HCl 0, 4922 Mortalité 33/40 25/40 25/40 31/60 10/40 6/40 % Logarithme de la dose de cltrulline 82,5 - 0,3404 62,5 - 0,2435 62j5 - 0,1432 51,7 - 0,0449 25,0 0,0576 15,0 0,1561 20 DE = 0,815 millimole/kg de L-citrulline (0,745 - 0,893) associés à 0;282 millimole/kg de L-ornithine,HCl (0,258 -0,309) correspondant à 142,78 mg/kg de L-citrulline (130,52 - 156,44) associés à 47,59 mg/kg de L-ornithine, HCl (43,51 - 52,15) TABLEAU XI Action protectrice d'un mélange (mélange B") de L-citrulline (50% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (50% en poids) contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. 25 Dose (millimole/kg) i.p. 30 35 L-citrulline 0,2854 L-ornithine,HCl 0,2965 L-citrulline 0,4566 L-ornithine,HCl 0,4744 L-citrulline 0,5080 L-ornithine,HCl 0,5278 L-citrulline 0,5708 L-ornithine,HCl 0,5930 L-citrulline 0,6393 L-ornithine,HCl 0,6642 L-citrulline 0,7192 L-ornithine,HCl 0,7472 L-citrulline 1,1416 L-ornithine,HCl 1,1860 Mortalité 28/40 26/40 27/40 23/40 16/40 8/40 5/40 % Logarithme de la dose de citrulline 70,0 -0,5446 65,0 -0,3404 67,5 -0,2941 57,5 -0,2435 40,0 . -0,1943 20,0 -0,1432 12,5 0,0566 71 37199 2110465 DE = 0,539 millimole/kg de L-citrulline (0,483 - 0,602) associée à 0,560 millimole/kg de L-ornithine,HCl (0,502 - 0,625) correspondant à 94,43 mg/kg de L-citrulline (84,62 - 105,46) associés à 94,43 mg/kg de L-ornithine,HCl (84,62 - 105,46) TABLEAU XII Action protectrice d'un mélange (mélange C") de L-citrulline (25% en poids) et de chlorhydrate de L-ornithine (75% en poids) contre l'intoxication 10 aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (millimole/kg) i.p. Mortalité % Logarithme de la dose de citrulline 15 (L-citrulline 0,1141 (L-ornithine,HCl 0,3558 36/40 90,00 -0,9427 (L-citrulline 0,1826 (L-ornithine,HCl 0,5693 32/40 80,00 -0,7384 20 (L-citrulline 0,2283 (L-ornithine,HCl 0,7116 (L-citrulline 0,2854 (L-ornithine,HCl 0,8895 19/40 32/60 47,50 53,33 -0,6415 -0,5446 25 (L-citrulline 0,3596 (L-ornithine,HCl 1,1208 39/60 65,00 -0,4454 (L-citrulline 0,4509 (L-ornithine,HCl 1,4114 31/80 38,75 -0,3459 30 (L-citrulline 0,5708 (L-ornithine,HCl 1,7791 5/40 12,50 -0,2435 DE = 0,330 millimole/kg de L-citrulline (0,296 - 0,369) associée à 1,028 millimole/kg de L-ornithine,HCl (0,922 - 1,149) correspondant à 35 57,81 mg/kg de L-citrulline (51,86 - 64,65) associés à 173,43 mg/kg de L-ornithine,HCl (155,58 -193,95) 71 37199 11 2110465 TABLEAU XIII Action protectrice du mélange dans le rapport 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine associé avec de la L-citrulline 5 à doses croissantes contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. 10 L-arginine,HCl (a) L-ornithine,HCl L-citrulline Composition mg/kg 100,00 66,95 25,00 191,95 52,10 34,88 13,02 Mortalité DE trouvée 25/40 37,5 DE théorique 50 15 L-arginine,HCl (b) L-ornithine,HCl L-citrulline 100,00 66,95 50,00 216,95 46,09 30,86 23,05 30/40 25 50 20 L-arginine,HCl (c) L-ornithine,HCl L-citrulline 100,00 66,95 100,00 266,95 37,46 25,08 37,46 31/40 22,5 50 25 L-arginine,HCl (d) L-ornithine,HCl L-citrulline 100,00 66,95 200,00 366,95 27,25 18,25 54,50 22/40 45 50 30 L-arginine,HC1 (e) L-ornithine,HCl L-citrulline 100,00 66,95 400,00 566,95 17,64 11,81 70,55 31/40 22,5 50 L-arginine,HCl 100,00 10,34 35 (f) L-ornithine,HCl 66,95 6,92 L-citrulline 800,00 82,74 29/40 27,5 50 966,95 71 37199 2110465 10 TABLEAU XIV Action protectrice d'un mélange (fe 50 % de chlorhydrate de L-arginine, 25% de chlorhydrate de L-ornithine et 25% de L-citrulline contre l'intoxication aiguë par le chlorure d'ammonium chez la souris. Dose (mg/kg) Mortalité % Logarithme de la dose d ' arginine. (L-Arginine,HCl 79,4 (L-ornithine,HCl 39,7 36/50 72 1,90 (L-citrulline 39,7 (L-arginine,HCl 100,0 (L-ornithine,HCl 50,0 30/50 60 2,00 (L-citrulline 50,0 (L-arginine,HCl 112,2 (L-ornithine,HCl 56,1 31/50 62 2,05 (L-citrulline 56,1 (L-arginine,HCl 125,9 (L-ornithine,HCl 63,0 18/50 36 2,10 (L-citrulline 63,0 (L-arginine,HCl 141,3 (L-ornithine,HCl 70,6 12/50 24 2,15 20 (L-citrulline 70,6 DE = 110,80 mg/kg de L-arginine,HCl (104,00 -118,10) associés à 55,40 mg/kg de L-ornithine,HCl (52,00- 59,05) 55,40 mg/kg de L-citrulline (52,00 - 59,05) 15 25 Total 221,60 mg/kg (208,00 - 236,20) Pour montrer de façon plus détaillée l'activité de chaque composant dans les mélanges des tableaux, les résultats sont illustrés dans les figures 1 à 5 des dessins soie la forme graphique proposée par Loewe, Arzneim. Forsch. J3 285 (1953); Loewe, Pharmacol. Rev. 9 237 (1957) 30 et Loewe, Arzneim. Forsch. j) 449 (1959). Les doses en mg/kg de l'un des composants sont représentées en ordonnées et celles de l'autre composant en abscisses. Sur les coordonnées figurent les doses de chaque composant séparé ayant un effet quantitativement ou qualitativement similaire, c'est-à-dire la DE5Q. 35 La figure 1 représente les courbes obtenues appelées "isoboles" par Loewe. Si l'effet est dû aux activités communes des deux composants, comme c'est par exemple le cas de la toxicité, les lignes peuvent : 71 37199 „ 2110465 1. ne pas s'influencer mutuellement (lignes a et b); 2. s'additionner (ligne c); 3. se renforcer (courbe d); 4. être antagonistes (courbese et f). L'antagonisme peut être absolu lorsque les isoboles se dirigent en dessous de l'angle droit formé par les deux doses d'action égale des deux composants non mélangés (courbe f) ou relatif lorsque l'isobole est convexe mais reste à l'intérieur de l'angle droit (courbe e). La figure 2 montre que les mélanges de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine présentent tout d'abord un synergisme de renforcement jusqu'à un certain rapport déterminé, puis un antagonisme absolu. La figure 3 montre que les mélanges de chlorhydrate de L-arginine et de L-citrulline se comportent de même avec tbufc d'abord une addition des effets puis un antagonisme relatif. La figure 4 montre que les mélanges de L-citrulline et de chlorhydrate de L-ornithine ne présentent d'abord qu'un antagonisme relatif puis un antagonisme absolu. ' - Dans ces figures, les rayons partant de l'origine des coordonnées correspondent aux divers mélanges A, B, C, A', B', C', A", B", C". Ces résultats montrent que lorsqu'on étudie les mélanges de deux composants, le mélange de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine donne les meilleurs résultats lorsqu'on mélange ces composants dans un rapport de 3/2 comme c'est le cas du mélange de 80,68 mg/kg de chlorhydrate de L-arginine et de 53,96 mg/kg de chlorhydrate de L-ornithine; voir tableau V et figure 2. On n'a pas modifié ce rapport et dans les expériences ultérieures on a considéré le mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine comme une substance unique à laquelle on a ajouté la L-citruL-line . Les résultats obtenus montrent que l'addition de L-citrulline diminue l'action protectrice; voir tableau XIII et figure 5. Dans la figure 5, les rayons partant de l'origine des coordonnées correspondent aux divers mélanges dont la composition figure dans le tableau 13. L'arc de cercle raccordant l'axe des ordonnées (1Q07„ de mélange 3/2 chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine) à l'axe des abscisses (1007= de L-citrulline) correspond à la théorique calculée à partir de la somme des effets, tandis que la courbe située au-dessus correspond à la DE.trouvée. Chaque rayon coupant la courbe de la DE^q est divisé en parties proportionnelles; la est située à l'origine des coordonnées 71 37199 2110465 10 15 20 25 et la DEq à une distance du point d'intersection égale à la distance entre l'origine des coordonnées et le point d'intersection. La du mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlo rhydrate de L-ornithine de l'invention correspond à 134,64 mg/kg d'aminoacides totaux, ce qui est inférieur de 39,247- à la somnede chacun des aminoacides. EXEMPLE 15 Pour illustrer l'action protectrice du mélange de l'invention dans le traitement du surmenage intellectuel, on injecte,à des souris pesant de 18 à 25 g» 20 ml/kg d'une solution aqueuse aux doses indiquées dans le tableau XV et après 30 mn, une seule injection intraventriculaire de 0,03 ml de chlorure d'ammonium à 47» (poids/volume). On observe les animaux pendant une semaine; la mortalité se produit en 3 h. Le tableau 15 montre que le traitement préalable par le chlorhydrate de L-arginine ou le chlorhydrate de L-ornithine a un faible pouvoir protecteur bien qu'il soit statistiquement significatif, déterminé à partir de la mortalité provoquée par l'injection intracérébrale de chlorure d'ammonium 2 (détermination de X avec correction de Yates). Le mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine a une action protectrice nettement supérieure, à des doses inférieures, à celles de chacun des aminoacides. TABLEAU XV Action protectrice du chlorhydrate de L-arginine. du chlorhydrate de L-ornithine et d'un mélange dans un rapport de 3/2 de ces composés dans l'intoxication aiguë provoquée par injection intracérébrale de chlorure d'ammonium à la souris. Substance 30 35 Dose (mg/kg) Mortalité Action protectrice (%) Solution physiologique 10 ml/kg i.p. 50/50 L-arginine,HCl 400 mg/kg i.p. 32/40 L-arginine,HCl L-ornithine,HCl L-ornithine,HC1 L-arginine,HCl + L-ornithine, HCl 800 mg/kg i.p. 31/40 400 mg/kg i.p. 31/40 800 mg/kg i.p. 33/40 ( 400 mg/kg i.p. 23/40 (+267 mg/kg i.p. 0,00 -- 20,00 8,645 ^ o'o05 22.50 10,125 j 22,50 10,125 { 17,50 7,205 42,50 23,498 0,005 71 37199 2110465 EXEMPLE 16 On étudie le pouvoir protecteur du chlorhydrate de L-arginine, du chlorhydrate de L-ornithine et du mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine contre l'intoxication aiguë 5 provoquée chez la souris par l'injection intracérébrale de chlorure d'ammonium (0,03 ml/souris de chlorure d'ammonium à 4%), par rapport à la L-acétylglutamine. On administre ces substances par voie intrapéritonéale à des souris des deux sexes pesant de 18 à 25 g, 1 h avant injection intra-ventriculaire de chlorure d'ammonium à 4% comme indiqué dans le tableau XVI. ° TABLEAU XVI Mortalité provoquée après 1 heure par l'injection intracérébrale de chlorure d'ammonium. Substance protectrice Dose Total des morts Mortalité (mg/kg) % L-acétylglutamine 100 38/40 95,0 200 34/40 85,0 400 33/40 82,5 800 31/40 77,5 1600 28/40 70,0 L-arginine,HCl 100 36/40 90,0 200 34/40 85,0 400 32/40 80,0 800 31/40 77,5 1600 27/40 67,5 L-ornithine, HCl 100 35/40 90,0 200 34/40 85,0 400 31/40 77,5 800 33/40 82,5 1600 29/40 72,5 L-arginine,HC1 167 31/40 77,5 + 334 28/40 70,0 L-ornithine,HCl 668 23/40 57,5 dans le rapport de 3/2 1356 25/40 62,5 (les doses correspondent à la somme des deux aminoacides). Si l'on attribue à la L-acétylglutamine une activité 35 égale à 1,000 (standard), les autres substances ont les activités suivantes : 71 37199 16 2110465 TABLEAU XVII Substance Activité Limites de confiance (P = 0,05) 5 L-acétylglutamine L-arginine,HCl L-ornithine,HC1 1,000 1,337 1,094 (0,441 -4,046) (0,350 -3,322) L-arginine,HCl + 3/2 5,676 (1,195 -26,970) L-ornithine,HC1 10 La figure 6 illustre les résultats ci-dessus. Le chlorhydrate de L-arginine et le chlorhydrate de L-ornithine ont une bonne activité protectrice contre l'intoxication par l'ammoniaque réalisée par voie intracérébrale chez la souris. Cependant leur efficacité 15 est pratiquement semblable à celle de la L-acétylglutamine utilisée comme substance standard. Au contraire, le mélange 3/2 de chlorhydrate de L-arginine et de chlorhydrate de L-ornithine est bien plus actif que la substance standard et son taux d'acitivité est très significatif car la limite inférieure de 20 confiance est supérieure à l'unité. Bien entendu diverses modifications peuvent être apportées par l'homme de l'art aux dispositifs ou procédés qui viennent d'être décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention . 71 37199 n 2110465 REVENDIC ATIONS 1 - Mélange d'aminoacides caractérisé en ce qu'il est constitué de trois parties en poids de L-arginine ou d'un de ses sels convenant en pharmacie et de deux parties en poids de L-ornithine ou d'un de ses sels pharma- 5 ceutiquement acceptable. 2 - Mélange d'aminoacides selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient 0,607 mole de L-arginine ou d'un de ses sels convenant en pharmacie et 0,169 mole de L-ornithine ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptable. 10 3 - Nouveaux médicaments utiles notamment pour le traitement des affections hépatiques et du surmenage intellectuel, caractérisés en ce qu'ils consistent en un mélange selon l'une des revendications 1 ou 2. 4 - Compositions thérapeutiques caractérisées en ce qu'elles contiennent comme ingrédient actif un médicament selon la revendication 3, 15 associé à un support convenant en pharmacie. 5 - Composition thérapeutique selon la revendication 4, caractérisée en ce qu'elle contientune ou plusieurs substances thérapeutiques additionnelles. 6 - Composition thérapeutique selon la revendication 5, caracté- 20 risée en ce que les substances thérapeutiques additionnelles sont choisies parmi la méthionine , l'acide lipoîque, la cocarboxylase, la coenzyme la coenzyme A, l'extrait de foie et 1'oxybétaîne. 7 - Composition selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle est dissoute dans l'extrait de foie. 25 8 - Composition selon l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisée en ce que la L-arginine et la L-ornithine sont sous forme de leur chlorhydrate. 9 - Préparation pharmaceutique pour l'administration par voie orale,caractérisée en ce qu'elle est constituée d'une composition selon l'une 30 quelconque des revendications 4 à 8, la dose journalière d'administration de l'ingrédient actif étant comprise entre 7 mg et 70 mg/kg de poids corporel. 10 - Préparation pharmaceutique pour l'administration par voie intraveineuse,caractérisée en ce qu'elle est constituée d'une composition selon l'une quelconque des revendications 4 à 8, la dose journalière d'administration 35 de l'ingrédient actif étant comprise entre 7 mg et 70 mg/kg de poids corporel. 11 - Préparation pharmaceutique pour l'administration par voie intramusculaire caractérisée en ce qu'elle est constituée d'une composition selon l'une quelconque des revendications 4 à 8, la dose journalière d'administration de l'ingrédient actif étant comprise entre 7 mg et 70 mg/kg de poids corporel.