Brevet FR2140259A1 — publié le 19730119

La présente invention concerne un procédé de séparation d'alcaloTdes secondaires thérapeutiquement actifs de la petite pervenche commune Vinca minor L. - appelée pervenche dans la suite - de la liqueur mère qui reste après obtention des alca lourdes principaux. Il est connu que jusqu'à présent seuls les alcaloses principaux de la pervenche - La vincamine et la vincine / cette dernière étant désignée par la dénomination d'isovincamine, avant qu'on découvre sa structure - ont une application thérapeutique, par suite de leur action d'abaissement de la tension sanguine, d'élargissement des vaisseaux cérébraux et d'accélé- ration de l'irrigation sanguine. En ce qui concerne la préparation de la vincamine et de la vincine, on connatt plusieurs procédés, par exemple ceux qui sont décrits dans les brevets hongrois nO 146.703, 147.282 et 151.784, qui présentent cependant l'inconvénient qu'aucun d'entre eux ne permet d'obtenir les alcaloïdes secondaires qui accompagnent la vincapine et la vincine, dont la quantité dépasse d'un multiple celle des alcaloldes principaux, sous une forme thérapeutiquement active, bien qu'on ait fait plusieurs tentatives dans ce sens, - voir, par exemple, le brevet hongrois nO 146.703. Selon le procédé décrit dans le brevet hongrois nO 146.703, on sépare les alcaloïdes principaux des alcaloïdes secondaires en faisant passer les alcaloTdes principaux provenant de l'extrait de la drogue avec un solvant non miscible à l'eau qui renferme tous les alcaloldes de la drogue dans un domaine de pH étroitement délimité, au moyen d'une solution d'acide tartrique présentant une valeur de pH comprise entre 4,0 et 5,5, puis en extrayant les alcaloïdes de l'extrait débarrassé des alcaloIdes principaux à une concentration d'ions hydrogène supérieure, avec une solution d'acide tartrique présentant une valeur de pH d'environ 2.On ajuste le pH de cette dernière solution aqueuse qui renferme les alcaloïdes secondaires à une valeur de 8 au moyen d'ammoniaque, on l t extrait à l'éther et l'on évapore à sec la solution dans l'éther séché. On obtient les alcaloïdes secondaires, en même temps que des impuretés, sous forme d'un résidu rouge-violet amorphe. À cause des effets secondaires des impuretés, les alcaloides secondaires ainsi obtenus présentent une activité très faible et ne sont donc pas utilisables thérapeutiquement. Au cours d'essais ayant pour but de séparer sélectivement les alcaloldes secondaires accompagnant la vincamine et la vincine, on s'est aperçu que l'on obtient, en réalisant de façon particulière la cristallisation de vincamine et de la vincine ou en traitant de façon particulière la liqueur mère, des alca loIdes secondaires présentant une action pharmacologique et thérapeutique très précieuse qui se distingue de celle de la vincamine et de la vincine0 Lorsque, dans le développement ultérieur de l'exemple 1 du brevet nO 151.784, on isole du résidu rouge brun de la solution benzénique, qui contient l'ensemble des alcaloldes, le mélange vincamine-vincine, non par cristallisation dans l'éther diéthylique, mais dans une solution d'n-propanol et d'isopropanol, que l'on dilue la liqueur mère par de l'eau acidifiée, puis que l'on élimine I'n-propanol et/ou l'isopropanol en méme temps que les impuretés non basiques au moyen d'un solvant non miscible à l'eau, que l'on rend la phase aqueuse restante alcaline et sépare par filtration les alcaloses secondaires qui précipitent sous forme de base dans ce cas, et que l'on sèche avec ménagement après avoir lavé à fond, les alcaloT- des secondaires ainsi obtenus ont une action d'abaissement de la pression sanguine, d'élargissement des vaisseaux du cerveau et d'augmentation de l'irrigation sanguine.Les alcaloses secondaires ainsi obtenus se caractérisent par un intervalle d'action étendu et une toxicité très faible. Ces avantages, qui doivent être attribués à l'action synergique des différents alcaloïdes secondaires contenus dans la fraction d'alcaloldes secondaires obtenue, dont on n'avait pas examiné jusqu'à présent les propriétés pharmacologiques et que l'on avait pas utilisés thérapeutiquement, rendent le produit obtenu par le procédé selon l'invention intéressant du point de vue thérapeutique. (L'invention concerne donc un procédé de séparation sélective des alcaloïdes secondaires thérapeutiquement actifs de la pervenche commune, Vinca minor X, de la vincamine et de la vincine, par dissolution de la fraction globale d'alcaloldes obtenue de façon connue et évaporée à sec, dans un solvant non miscible à l'eau, séparation à l'état cristallin de la vincamine et de la vincine de la solution et filtration caractérisé en ce qu'après cristallisation dans l'n-propanol et/ou l'isopropanol, on dilue 10 à 100 fois le filtrat par une solution à 0,1 à 10,0% d'un acide organique complexant, on traite la solution par un solvant organique qui n'y est pas soluble et l'on ajuste la valeur de pH de la solution acide aqueuse séparée à une valeur comprise entre 8,0 et 9,0, on récupère ensuite les alcaloldes secondaires séparés, et on les sèche avec ménagement. On peut résumer comme suit les effets pharmacologiques des alcalordes secondaires selon l'invention a) la pression sanguine de l'artère carotide, mesurée chez deS chats narcotisés au chloral-uréthane est abaissée en fonction de l'importance de la dose appliquée (0,5 à 2,0 mg/kg, par voie intraveineuse), l'action est persistante. L'action d'abaissement de la pression sanguine de la matière est de deux fois plus importante et trois fois plus persistante que celle de la papavérine. b) L'action favorable d'élargissement des vaisseaux du cerveau de la matière est prouvée par le fait que la quantité de sang qui s'écoule par l'artère carotide par unité de temps est d'environ 20 à 80 % supérieure (0,5 - 2,0 mg/kg)par voie intraveineuse). le tableau ci-dessous permet de comparer les effets pharmacologiques des alcaloides secondaires obtenus selon l'in- vention et de la papavérine Matière Abaissement de Durée Débit de sang à travers pression sanguine l'artère carotide Papavérine 1 1 1 Alcaloïdes secondaires du substrat 2 3 4 c) Eh plus de l'action importante sur les vaisseaux, on constate également un effet favorable sur le système nerveux central. Pour une action sédative plus faible, aucune relaxation musculaire n'est provoquée. les convultions provoquées par la nicotine et les électro-chocs sont supprimées à 50 76 par des doses de 20 ou 17,5 mg/kg. L'hypermobilité provoquée par l'amphétamine est inhibée par des doses de 40 mg/kg appliquées par voie intrapéritonéale. On ne constate pas d'action d'apaisement de la douleur. d) Toxicité, Lors d'une application pendant 6 semaines ou 3 mois de doses journalières de 50 mg/kg, par voie orale, on n'observe pas d'effets secondaires faucheux et pas de modifications pathologiques des organes examinés par voie macroscopique ou microscopique. Une dose de 450 mg/kg par voie orale fait mourir 50 % des sujets sur lesquels on fait les expériences. On utilise les alcaloSdes produits par le procédé selon l'invention pour traiter des patients qui souffrent dtartério- sclérose du cerveau et de différentes maladies des yeux, qui sont dues à une défectuosité du système vasculaire. les documents cliniques affirment induscitablement que, dans le traitement de l'artériosclérose cérébrale, les alcaloses secondaires obtenus selon l'invention ont une action plusieurs fois supérieure aux composés de papavérine et de dihydroergotoxine utilisés jusqu'à présent.D'après les expériences faites pour les maladies des yeux, l'application de 3 x 10 mg par jour sous forme de comprimés, lors du traitement de maladies des yeux dues à des perturbations circulatoires locales, s'avèrent avoir un effet favorable en premier lieu dans les cas où la modification est provoquée par un rétrécissement spasmodique des artères de la rétine ou du nerf optique Selon l'invention, on prépare les alcaloldes secondaires de la pervenche en isolant les-alcaloldes principaux - la vincamine et la vincine - du mélange rouge brun pâteux renfermant l'ensemble des alcaloldes, obtenu selon le brevet hongrois nO 151.784, après concentration par évaporation de la solution benzénique renfermant l'ensemble des alcaloïdes, par cristallisation dans l'n-propanol et/ou l'iso-propanol, en diluant 10 à 100 fois, après séparation par filtration des alcaloïdes principaux, la liqueur mère déjà débarrassée des alcaloïdes principaux par une solution aqueuse de 0,1 à 10,0 % d'un acide organique complexant, en éliminant la partie principale du propanol et/ou de l'isopropanol et les impuretés non basiques de la solution acide aqueuse par épuisement au moyen d'un solvant non miscible à 1'eau - par exemple l'essence, le benzène, le dichloroéthane, on laisse les phases se séparer, on ajuste le pH de la solution acide aqueuse séparée, au moyen d'une solution alcaline ou d'ammoniaque, à une valeur de 8,0 à 9,0 et l'on sépare par filtration le précipité comprenant les alcaloses secondaires, les autres composés qui ne sont pas des alcaloldes restant en solution.On lave le précipité à l'eau et l'on sèche avec ménagement le gâteau de filtre à l'état fluidisé dans un courant d'air à une température de 40 à 500 C. le produit ainsi obtenu est une poudre de la couleur du sable. La quantité en est d'environ le dixième de celle de la vicamine et de la vincine obtenues précédemment à l'état cristallin.la teneur en alcaloïdes exprimée en équivalents de vincamine, obtenue par titrage en milieu anhydre, est comprise entre 75 et 100 %. La chromatographie sur papier descendante, sur papier "Whatman 4" imprégné de formaldéhyde et de formiate d'ammo niqua, donne, lorsqu'on développe au moyen d'un mélange benzène- cyclohexane 2/1 saturé de formaldéhyde trois taches d'alcaloides non encore identifiés, dont les valeurs de l'indice de réfraction sont un peu inférieures à la valeur de l'indice de réfraction de la vincamine, en fait de 0,14, 0,07 et 0,00.On n'observe pas de taches pour les valeurs d'indice de réfraction caractéristiques de la vincamine. L'exemple qui suit se rapporte à un mode d'exécution pratique du procédé selon l'invention. EXEMPLE Selon l'exemple 1 du brevet hongrois nO 151.784; on sépare de 25 kg de pervenche Vinca minor B. l'ensemble des alca bides par concentration par évaporation sous pression réduite, jusqu'à débarrasser de solvant la solution benzénique séchée débarrassée de CIfCOOH par une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium à 20 %, et l'on dissout le résidu sec, dans 125 ml d'npropanol et d'isopropanol, tout en chauffant.On fait cristalliser dans ce mélange, à des températures d'environ OOC, la vincamine et la vincine, on filtre, on ajoute à la liqueur mère ainsi obtenue 1.000 ml d'une solution aqueuse d'acide tartrique à 2 ffi et l'on épuise deux fois, avec chaque fois 500 ml de benzène, pour éliminer le propanol et les impuretés ne renfermant pas d'alcaloIdese On ajuste le pH de la solution aqueuse à une valeur comprise entre 8,0 et 9,0 au moyen d'une solution d'ammoniaque, et l'on filtre les bases d'alcaloÏdes secondaires précipitées sur un entonnoir-filtre, on lave à l'eau et l'on essore bien. On sèche à l'état fluidisé la matière humide sous l'effet de l'essorage à 40-500C dans un courant d'air. On obtient 12,5 g d'alcalordes secondaires. Dans ce produit, on peut mettre en évidence, par le procédé de chromatographie décrit plus haut, trois alcaloIdesS présentant des valeurs d'indices de réfraction de 0,14, 0,07 et 0,00, tandis qu'on ne peut observer de taches caractéristiques pour la vincamine et pour la vincine. On peut utiliser directement le produit ainsi obtenu pour une application thérapeutique. REVENDICATIONS 1. Procédé de séparation sélective d'alcaloides secondaires thérapeutiquement actifs de la pervenche commune (Vinca minor T.) de la vincamine et de la vincine, en dissolvant la fraction globale d'alcaloPdes obtenue de façon connue en soi et évaporée à sec, dans un solvant non miscible à l'eau, en séparant à l'état cristallin la vincamine et la vincine de la solution et en filtrant, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'une fois achevée la cristallisation dans l'n-propanol et/ou l'isopropanol, on dilue 10 à 100 fois le filtrat par une solution à 0,1 à 10,0 % d'un acide organique complexant, on traite la solution par un solvant organique qui n'y est pas soluble et l'on ajuste le pH de la solution acide aqueuse séparée à une valeur de pH de 8,0 à 9,0, puis l'on retire les alcaloldes secondaires séparés et l'on sèche avec ménagement. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on utilise, comme acide organique complexant, l'acide tartrique. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'on utilise, comme solvant non miscible à la solution aqueuse renfermant les alcaloïdes secondaires, de l'es- sence, du benzène et du dichloro-éthanG. 4. Procédé selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'on ajuste le pH de la solution aqueuse d'acide à la valeur souhaitée en utilisant une solution d'hydroxyde de sodium ou d' ammonium. 5. Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que l'on sèche à l'état fluidisé les alcaloldes secondaires actifs. 6. Préparation pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle renferme les alcaloïdes secondaires thérapeutiquement actifs obtenus par un procédé selon l'une des revendications 1 à 5. 7. Procédé de préparation de compositions à action d'élargissement des vaisseaux et d'abaissement de la pression sanguine, caractérisé en ce que l'on transforme en comprimés, capsules, pilules, gouttes, suspensions, solutions à injecter etc. les alcaloïdes secondaires thérapeutiquement actifs obtenus selon l'une des revendications 1 à 5, seuls ou avec des supports, liants, lubrifiants, etc. utilisés couramment lorsqu'on prépare des médicaments, éventuellement avec une ou plusieurs autres préparations à action similaire.