Brevet FR2128026A1 — publié le 19721020

La présente invention a pour objet à titre de nouveau médicament à activité bactériostatique un nouveau composé, le diméthyl-3,4 (Trimetjl-2,4,4 pentyl-2)-6 phénol de formule Le nouveau composé selon l'invention se présente sous la forme d'une poudre blanche, cristalline, légèrement odorante. I1 est soluble dans l'alcool, le chloroforme et les lipides, insoluble dans l'eau et les solutions aqueuses alca lines.- Le point de fusion du nouveau composé selon l'invention est de 89 - 900C (déterminé en tube capillaire).- Il présente la réaction colorée typique des phénols avec l'Acide sulfurique nitreux (nitrite de sodium 1,80g et acide sulfurique pur 100 ml) A cinq gouttes de ce réactif on ajoute quelques cristaux du nouveau composé et on porte quelques secondes au bain-marie bouillant, il se développe une coloration rougebrun. Le spectre ultra-violet, déterminé sur une solution à 0,005% (p/v) dans l'alcool à 950 3, se situe entre 250 et 310nm et présente un maximum à 282 nm + 2. La valeur du coefficient d'extinction E 1cm à ce maximum d'absorption est de 119 + 4. Le diméthyl - 3,4 (triméthyl - 2,4,4 pentyl - 2) - 6 phénol peut ttre préparé de la manière suivante. Dans un ballon de un litre, on introduit 366g de diméthyl - 3,4 phénol (3 mol), 336 g de diisobutylène (3 Mol) et 18,3 g de résine cationique KU2. On maintient à la température à 135-140 durant 2 heures. Après refroidissement, on verse 200ml de benzène et par agitation, - on homogeneise la masse visqueuse. On sépare par filtration la résine cationique KU2.- On chasse sous vide le benzène et les réactif s n'ayant pas rEagi.- On reprend la résidu à 500 environ par 100 ml d'hexane On laisse cristalliser une nuit au rEfrigérateur.- On sépare les cristaux par filtration sous vide et on fait une seconde recristallisation dans l'hexane.- Le point de fusion des cristaux obtenus est 89 - 900 (en tube capillaire). La réaction peut titre conduite avec différents catalyseurs généralement utilisés dans la préparation des phénols comte le fluorure de bore, le chlorure de zinc, le chlorure d'aluminium, le phénate d'liuminium, le chlorure stannique. La température à laquelle doit ttre conduite la réaction varie selon le catalyseur utilisé de 70 à 15d C.- L'activité bactériostatique et bactéricide du nouveau médicament selon l'invention a été démontrée in vitro sur de nombreux germes. Le nouveau produit est particulière- ment actif sur le staphylocoque, le streptocoque et l'intero- coque. Les expérimentation ont été conduites selon une méthode classique consistant à effectuer des dilutions croissantes du composé à tester dans une gelose spéciale coule en boite à Pétri.Ces geloses sont ensemencées en stries par- lèles par différents geraes au moyen d'une pipette de Pasteur Les expériences suivants sont décrites à titre illustratif. Les souches expérimentées sont les suivantes t - Elebsiella pneumonie K 41 - Esoherichia Coli Monod - Staphylococcus souche Londres - Staphylococcus aureus souche 133 - Streptococcus foecaiis souche I.P. - Entérococcus Deval - Proteus vulgaris souche I.P. Ces différentes souches sont ensemencées sur des geloses inclinées, portées à l'étuve à 370 durant 24 heures puis conservées en glacière.- Pour l'expérimentation on prélève les colonies bactériennes sur les milieux de conservation et on les ensesence sur des bouillons nutritifs de formule suivante - Chair musculaire 500 g - Peptone 10 g - Cl Na............. 5 5 g - Eau 1000 cc après 24 heures à l'étuve à 370, ces bouillons sont prêts pour l'ensemencesent.- On prépare par ailleurs les solutions des composés à tester. On prépare une solution - mère contenant 20 mg/cm3 de composé à tester.Le solvant est l'eau. Par dilutions successives, on obtient des concentrations de 10ag/cm3, 5mg/ct3 etc. On prépare également les géloses dites pour antibiotiques en boites de Pétri. La composition de ces géloses est la suivante - Extrait de viande Liebig....................... Liebig 1,5 g - Autolysat de levure Byla....................... Ryla 3 g - Peptone Uclaf...................................Uclaf 6 g - Chlorure de sodiurn............................. sodium 5 g - Eau........................... 1 litre - Gélose........................ 15 g - Ehosphate disodique 9,3 g - Phosphate monopotassique 0,7 g - Glucose pur .................................... 2 g pH final 7,4 Ces géloses sont portées au bain-marie à une température voisine de 500 pour obtenir leur liquéfaction. Elles sont mélangées à raison de 28,5 cm3 pour 1,5 cm3 de la dilution de composé à tester précédemment préparée.- La gélose est coulée en boites de Pétri stériles après homogénéisation.On obtient ainsi tout un jeu de géloses coulées en boites de Pétri contenant des dilutions à titres croissants du composé à essayer. âpres solidification des géloses, celles-ci sont mises une heure à l'étuve à 370 pour entre séchées. L'ensenencement de différents germes sur les géloses contenant les dilutions du composé à essayer est effectué au moyen de pipettes Pasteur stériles étirées très finement et coudées à leur extrémité.- Elles sont remplies par capillarité des bouillons nutritifs dans lesquels ont cultivé les différents germes considérés. Ces germes sont ensemencés sur les geloses contenant le composé à essayer en y traçant des stries parallèles avec les pipettes remplies coime on vient de l'indiquer. On obtient ainsi, pour chaque boite de Pétri correspondant à une dilution donnée du compos à tester, un réseau de stries parallèles qui correspondent à chaque bactérie. Les boites de Pétri sont mises 24 heures à l'étuve à 370C. bu bout de ce temps, les lectures sont effectuées si le produit est actif pour une dilution déterminée, sur un germe déterminé, il n'y aura aucune poussée sur la strie correspondante; sinon, des colonies auront pris naissance tout le long de la strie. Les résultats obtenus pour la mise en évidence du pouvoir bactériostatique du nouveau composé selon linvention sont donnés dans le tableau suivant Germes Dilution Inhibitrice Limite glebsiella 41 1/1 000 Bacille Coli Monod 1/1 000 Staphylocoque Londrès 1/512.000 Staphylocoque 133 1/512.000 Streptocoque foecalis 1/256.000 Entérocoque Deval 1/128.000 Proteus vulgaris I.P. 1/4 000 Lorsque l'action inhibitrice du nouveau composé intervient mtae à des dilutions fortes, cela prouve que le composé est très actif contre le germe considérd.- Il apparait ainsi que le dimétbyl-3,4 (triméthyl-2, 4,4 pentyl-2)-6 phénol est un bactériostatique très actif sur les germes Gram + corme le staphylocoque, le streptocoque et I'ent0rocoque, un peu moins actif sur le proteus vulgaris, et légèrement actif sur le Klebsiella et le bacille Coli. Le pouvoir bactériostatique du nouveau composé permet son utilisation en thérapeutique humaine et vétérinaire pour la réalisation de préparations antiseptiques utiles pour la prévantion et le traitement de différentes affections notamment buccales, gynécologiques, dermatologiques ayant pour origine les germes cités plus haut. Le nouveau médicament selon l'invention se présente le plus généralement sous forme de solutions alcooliques à 1 i 5 % de produit actif.Le titre de l'abool utilisé est choisi en fonction de l'usage ultérieur et de la solubilité du compo- sé désirée L'alcool à 5003 convient particulièrement bien aux différentes applications. On peut également préparer des solutions huileuses, des onguents et des pommades contenant de 1 à 5 ffi de produit actif. Un onguent gingival à 2% de produit actif s'est montré particulièrement efficace dans les affections buccales. En dermatologie le nouveau médicament est utilisé comme antiseptique cutané et s'est montré très actif en association avec le resorcinol et le soufre colloïdal pour le traitement de l'acné. Dans le domaine vétérinaire le nouveau produit constitue un antiseptique intéressant utilisable à des teneurs de 5 à 25%. - REVENDICATIONS 10/ Procédé de préparation du dimétyl-3,4 (triméthyl-2, 4,4 pentyl-2)-6 phenol caractérisé en ce que l'on fait réagir du dimétyl-3,4 phénol avec du diisobutylène en présence d'une résine cationique à 1400C environ pendant deux heures. 20/ A titre de nouveau médicament bactériostatique particulièrement actif sur les germes Gram + comme le Streptocoque, l'entorocoque et le staphylocoque, le dimétyl-3,4 (trimétyl-2,4, 4 pentyl-2) - 5 phénol. 30/ Nouvelles préparations pharmaceutiques antiseptiques sous forme de solutions alcooliques, huileuses onguents, pommades caractérisées en ce qu'elles contiennent 1 à 5 %0 de produit actif, selon 1 revendication 10/ 40/ Nouvelles prépa-rations vétérinaires antiseptiques caractérisées en ce qu'elles contiennent de 5 à 25 % de produit actif, selon la revendication 10/