Brevet FR2120156A1 — publié le 19720811

k7623 1 2120156 La présente invention concerne la production d'un nouvel antibiotique dénommé XK-19-2 par fermentation à l'échelle industrielle et, plus particulièrement, un procédé qui consiste à cultiver une souche productrice de XK-19-2, appartenant au genre Streptomyces« dans un milieu de culture 5 approprié pour former l'antibiotique XK-19-2 et à récupérer ledit antibiotique du bouillon de culture. Les nouveaux antibiotiques sont toujours recherchés et, en particulier, ceux qui sont efficaces contre un large spectre de bactériœ. Cependant, même lorsqu'on découvre un nouvel antibiotique, il doit pouvoir 10 être produit à l'échelle industrielle pour être utilisable dans la pratique. Dans ce but, la demanderesse a découvert un procédé pour produire à l'échelle industrielle un nouvel antibiotique efficace contre les bactéries gram positives, gram négatives et résistantes aux acides. Selon l'invention, on prépare un nouvel antibiotique 15 dénommé XK-19-2. L'antibiotique est produit par des souches de micro-organismes appartenant au genre Streptomyces et, en particulier, un micro-organisme particulièrement approprié est Streptomyces verticillus var. tskushiensus qui a été isolé dans le sol à Ireyoho, Kasuga-machi, Tsukushigun, Fukuoha-Ken, Japon. Cette souche particulière a été déposée à 1'American Type Culture 20 Collection, Rockville, Maryland, sous le numéro 21.633. La souche ci-dessus mentionnée est caractérisée morphologiquement par sa croissance sur un milieu qui est incolore ou brun jaunâtre avec des mycélium aériens blanc grisâtre. On n'observe presque pas de formation de pigments solubles. La formation de spores n'est pas observée 25 sur presque tous les milieux, mais elle est confirmée sur le milieu de gélose-amidon. La surface des spores est lisse. On observe la formation de verticilles et de corps sphériques et le sporophore est droit ou légèrement ondulé. Les caractéristiques de culture de cette souche sur divers 30 milieux après culture pendant 3 semaines à 30°C sont indiquées dans le tableau I ci-après. L'assimilation des sources de carbone par la souche ci-dessus mentionnée est indiquée dans le tableau II ci-après. 71 47623 2 TABLEAU II 10 15 20 25 30 35 Source de carbone Assimila tion Source de carbone Assimilation Glucose ++ Mannitol Inositol ++ Arabinose Glycérol ++ Salicine Mannose Lactose Fructose + Rhamnose Raffinose + Saccharose Xylose On note en outre les propriétés physiologiques suivantes 1. Température de croissance : 25-35°C 2. pH de croissance : 5,5-8,5 3. Liquéfaction de la gélatine : positive 4. Hydrolyse de l'amidon : positive 5. Formation de tyrosinase : négative 6. Action sur le lait : peptonisation et coagulation 7. Réduction des nitrates en nitrites : négative 8. Décompœition de la cellulose : négative 9. Action chromogène : généralement négative, mais parfois positive. Les propriétés de la souche ci-dessus ont été comparées à celles d'espèces connues décrites par S.A. Waksman dans "The Actinomyces" Vol. II ; et on a reconnu que Streptomyces verticillus est l'espèce la plus voisine. Une comparaison des propriétés de la souche ci-dessus mentionnée et de celles de streptomyces verticillus sont indiquées dans le tableau III ci-dessous : TABLEAU III Propriétés ATCC 21633 Groissance sur la gélatine Croissance sur sérum de Loeffier Croissance sur gélose peptone-glucose Croissance sur lait de tournesol Assimilation de l'inositol pas de formation de mycélium aérien gélatine liquéfiée pigments bruns Pigments brun noirâtre formation de mycélium aérien blanc grisâtre pas de formation de mycélium aérien coagulation peptonisation positive Streptomyces verticillus formation de mycélium aérien blanc, pas de liquéfaction de la gélatine, pas de pigments pas de pigments pas de formation de mycélium aérien, pigments orangés formation de mycélium aérien blanc grisâtre négative 71 47623 3 .1120156 Au vu des ressemblances de Streptomyces verticillus par ses propriétés physiologiques et sa croissance sur divers milieux, la souche découverte par la demanderesse a été identifiée comme une variété de Streptomyces verticillus et dénommée Streptomyces verticillus var. 5 tsukushiensus. Comme c'est le cas avec d'autres souches d'Actinomyces les souches selon l'invention peuvent subir des mutations sous 1'action de moyens artificiels, tels qu'irradiation aux rayons ultraviolets, au cobalt 60, aux rayons X, et sous l'action de diverses substances chimiques 10 induisant des mutations. En conséquence, n'importe quelle souche appartenant à l'espèce Streptomyces verticillus var. tsukushiensus est capable de produire un antibiotique XK-19-2, même ayant subi des mutations, peut être utilisée selon l'invention. Les procédés classiques pour la culture des micro-organismes 15 de l'espèce Actinomyce s peuvent être utilisés dans la culture selon l'invention On préfère effectuer la culture par le procédé de culture submergée dans un milieu liquide de culture agité. Le milieu de culture peut être naturel ou synthétique, pour autant qu'il contienne une source de carbone, une source d'azote, des composés inorganiques et de faibles quantités de substances 20 nutritives supplémentaires nécessaires pour le micro-organisme particulier. Cpmme source de carbone, on peut utiliser le glucose, l'amidon, le glycérol, le mannose, le fructose, l'inositol, le mannitol, le saccharose, les mélasses, etc., seuls ou en combinaison. En outre, on peut également utiliser des hydrocarbures, des alcools, des acides 25 organiques, etc. selon leur assimilation par les micro-organismes. Comme source d'azote, on peut utiliser le chlorure d'ammonium, le sulfate d'ammonium, l'urée, le nitrate d'ammonium, le nitrate de sodium, etc., seuls ou en combinaison. Comme source naturelle d'azote, on peut utiliser la peptone, l'extrait de viande, l'extrait de levure, la levure sèche, la 30 liqueur de trempage de mai's, la poudre de soja, le "casamino'acide", etc., seuls ou en combinaison. Si nécessaire, on peut ajouter au milieu des sels inorganiques tels que chlorure de sodium, chlorure de potassium, carbonate de calcium, phosphates, etc. En outre, on peut utiliser des substances organiques ou inorganiques capables de provoquer la croissance des micro-organismes 35 selon l'invention. On effectue la croissance à une température de 20°C à 50°C et, de préférence de 25°C à 30°C. En outre, le pH dcit être maintenu au voisinage de la neutralité pour les meilleurs résultats. 71 47623 4 2120156 Il est préférable de faire pousser le micro-organisme initialement dans au moins un milieu d'ensemencement avant l'inoculation du milieu de culture. Le milieu d'ensemencement est incubé pendant une période de temps suffisante pour développer une population appropriée 5 d'organisme et ensuite utilisé pour inoculer le milieu de culture principal. On effectue la culture ordinairement pendant 2 à 7 jours, ce qui a pour résultat la formation de l'antibiotique et son accumulation dans la liqueur de culture. On arrête la culture lorsque la quantité de l'antibiotique selon l'invention formé dans la liqueur de culture atteint 10 un maximum et on isole la substance désirée de la liqueur de culture après en avoir séparé les cellules microbiennes, par exemple par filtration. Pour isoler l'antibiotique du filtrat de culture, on peut utiliser les procédés habituellement utilisés dans l'isolement d'antibiotiques basiques solubles dans l'eau. Autrement dit, on peut utiliser un procédé 15 basé sur l'adsorption et la désorption sur des résines êchangeuses de cation^ un procédé reposant sur l'adsorption et la désorption sur des poudres de charbon activé, la chromatographie sur colonne de cellulose, la chromatographie sur colonne de carboxyméthylcellulose Sephadex (CM) et d'autres procédés, en combinaison appropriée. Dansle cas présent, il se forme 20 en plus de l'antibiotique XK-L9-2 un antibiotique du type streptothricine (XK-19-1-1) et XK-19-1-2 identifié avec l'antibiotique LL-AC-541 (voir Applied Microbiology 16 614 (1968)). Ces antibiotiques peuvent donc être séparés et éliminés du filtrat de culture pour recueillir l'antibiotique 25 XK-19-2. Plus particulièrement, on ajuste le filtrat de culture à un pH de 8 et on le soumet à l'adsorption sur une colonne d'Amberlite IRC-50 (suus la forme NH^+). Après lavage à l'eau, on élue d'abord avec NH^OH 0,3N, de sorte que l'XK-19-1-1 (streptothricine) et l'XK-19-1-2 30 (LL-AC-541) sont élués. Ensuite, après lavage de la colonne à l'eau, on élue à nouveau par HC1 0,5-iN, de manière à éluer l1antibiotique XK-19-2. La fraction active est ajustée à pH 8,0 et ensuite soumise à l'absorption sur des poudres de charbon activé. Après lavage à l'eau, on effectue l'élution d'abord avec du méthanol à 80 % et ensuite avec du méthanol à 80 % à pH 2. 35 On combine les éluats actifs, on neutralise par une résine Dowex 44 (forme 0H ) et on concentre sous pression réduite. On ajoute au concentrât ainsi obtenu 5 à 10 fois son volume d'acétone pour précipiter la substance active. On 71 47623 5 2120156 dissout le précipité dans une faible quantité d'eau et on ajoute à cette solution un mélange de n-butanol, pyridine, acide acétique et eau (3:2:1:2). Ensuite, soumet la solution à la chromatographie sur colonne de cellulose. On prépare la colonne de cellulose en mettant en suspension de la poudre 5 de cellulose Avicell) dans un solvant de développement. On effectue le développement avec un mélange n-butanol, pyriiine, acide acétique et eau (3:3:1:2). La fraction active est dissoute dans l'eau et soumise à la chromatographie sur colonne de CM-Sephadex C-25 (forme NH^+). On fait passer sur la colonne une solution de formiate d'ammonium 0,1 M en quantité d'environ 10 trois fois le volume de la résine suivant d'élution avec un gradient de 0,1 M-0,0 M de formiate d'ammonium. Les fractions actives sont ensuite recueillies et soumises successivement à la même chromatographie sur colonne de CM-Sephadex pour recueillir l'antibiotique XK-19-2 pur. Le nouvel antibiotique préparé selon l'invention est 15 décrit ci-après en référence aux figures des dessins annexés dans lesquels : - la figure 1 représente le spectre d'absorption dans l'ultraviolet de l'antibiotique selon 1'invention, et - la figure 2 représente le spectre d'absorption dans l'infrarouge de l'antibiotique selon 1'invention. 20 L'antibiotique produit selon l'invention est une poudre basique blanche. Elle ne présente pas de point de fusion défini, mais se décompose progressivement au-delà de 200°C. Elle est soluble dans l'eau, soluble dans le méthanol, mais peu soluble dans l'éthanol et insoluble dans les solvants organiques tels que butanol, acétone, benzène, acétate d'éthyle, 25 acétate de butyle, chloroforme, éther, éther de pétrole, hexane, etc. Dans la figure 1, le spectre d'absorption dans l'ultraviolet indique qu'en solution aqueuse neutre, dans HC1 1/10 et dans NaOH 1/10N, il n'y a pas de maximum d'absorption mais une absorption finale. En outre, dans la figure 2, le spectre d'absorption dans 30 l'infrarouge présente les pics classiques des peptides à 3400 cm \ 1650 cm ^ et 1540 cm \ L'analyse élémentaire de l'antibiotique donne les résultats suivants : C : 35,82 H : 8,15 % et N : 15,22 %, Comme autres moyens d'identification, on donne dans le tableau IV ci-après les valeurs 35 de Rf de chromatographie sur papier et de chromatographie en couche mince. 71 47623 6 2120156 10 20 25 30 TABLEAU IV 1) Chromatographie ascendante sur papier Révélateur Rf Temps de développement Solution à 20 % de chlorure d'ammonium 0,97 4 h n-butanol saturé d'eau 0,00 15 h n-butanol saturé aTeau -&cià& acotiqu»; (3:1) 0,01 15 h Acétate d'éthyle saturé d'eau 0,00 1 h n-butanol saturé d'eau contenant 2 % en poids d'acide p-toluènesulfonique et 2 % en volume de pipéridine 0,00 15 h 2) Chromatographie en couche mince sur gel de silice (Temps de développement 3 h) Rf Méthanol-acétate d'ammonium à 10 %-ammoniaque à 10 % (10:9:1) °'34 n-butanol-pyridine-acide acétique-eau (3:2:1:2) 0,15 Les spectres antimicrobiens de l'antibiotique selon l'invention contre divers micro-organismes sont représentés dans le tableau V ci-dessous : TABLEAU V Concentration inhibitrice minimale par le procédé de dilution sur gélose Mi cro-organismes CIM (r/ml) Streptococcus faecalis ATCC 10541 1,3 Staphylococcus aureus ATCC 6538P 0,16 Staphylococcus aureus KY 8942 0,65 (résistant à la kanamycine, à la paromycine et à la streptomycine) Staphylococcus aureus KY 8943 0,16 (variante de KY 8942) Staphylococcus aureus KY 8953 (S-3192) (résistant à la kanamycine, à la paromomycine, à la streptomycine, à la tétracycline, à 1'érythromycine, à la pénicilline G, au sulfonamide et à la néomycine) ^ 21 Staphylococcus aureus KY 8957 (S-3523) 35 (résistant à la paromomycine, à la streptomycine, à la tétrgcycline, au chloramphénicol, à la pénicilline G et au sulfonamide) y 21 71 47623 7 2120156 Mi' cro-organismes GIM (r/ml) Bacillus subtilis n'1 10707 0,082 Baclllus cereus ATCC 9634 0,16 Bacillus mycoldes ATCC 9463 0,082 5 Serratia marcescens ATCC 4003 83 Sarcina lutea ATCC 9341 >83 Klebsiella pneurtioniae ATCC 10031 0,082 Neisseria catarrhalis AICC 7900 5,2 Aerobacter aerogenes ATCC 13048 ) 83 10 Escherichia coli ATCC 26 0,0051 Escherichia coli ECR^ (résistant à la streptomycine, à la kanamycine, à la néom>i. ins, à \a parjmvcine, à la spectinomycine, à la cétracyci ine ei. au ch i oramphénicol ) 0,16 Escherichia coli K-I2-ML Ib29 (ECR5) 15 (résistant au chloramph£r.icol, à la kanamycine, à la tétracycline et à la néomycine) 0,65 Escherichia coli ML 1878 ;ECR ) (résistant à la streptomycine; 0,16 Escherichia coli ML 3306 (ECR^) (résistant à la streptomycine, à la kanamycine, 20 à la paromomycine et à la néomycine 0,04 Pseudomonas aeruginosa BMH n°l 83 Paracolon sp. Abbott P-l 83 Proteus vulgaris ATCC 6897 5,1 Shi.gella sonnei ATCC 9290 0,32 25 Salmonella thyphosa ATCC 9982 0,32 Mycobacterlum smegmatis ATCC 607 83 Mycobacterium avi um F fShiga University) KB 44 21 Mycobacterium phlei KB 45 83 Mycobacterium phlei IFO 3158 5,2 30 Mycobacterium koda KB 47 5,2 Candida albicans ATCC 10231 83 Asper^i 1 '■ us niger 83 Comme indiqué dans le tableau V, l'antibiotique selon l'invention est efficace contre diverses bactéries gram positives et gram négatives et résis- 35 tantes aux acides, il est également efficace contre Staphylococcus aureus quiest normalement résistant à la kanamycine, à la paromycine, à la streptomycine, etc., et contre Escherichia col i , Klebsiella pneumoniae, Shigella sonnei et Salnonella thypfosa. Une analyse ultérieure de l'antibiotique selon l'invention indique que c'est un peptide consistant en plusieurs types 40 d'aminoacides. Par hydrolyse de 11 antibiotique .par HC1 6N à 110°C pendant 24 h et analyse par un analyseur d'aminoacide, on trouve que l'antibiotique 71 47623 8 2120156 selon l'invention est un pgtide basique consistant en 5 moles de lysine, 4 moles de thréonine, 3 ou 4 moles d'arginine, 3 ou 4 moles de glycine, 1 ou 2 moles de proline, X mole d'acide aspartique, 1 mole d'histidine, 1 mole d'alanine, 1 mole d'isoleucine et 1 mole de phénylalanine. 5 Si on le compare avec les antibiotiques connus, 1 Sîitibiotique selon l'invention est semblable à des antibiotiques tels que la solémycine (publication de brevet japonais n° 6350/62), le BD-12 / Journal of Antibiotics 21. (A) 307 (1968) /, le 43-127 (publication de brevet japonais n° 9836/70), la dihydrostreptomycine (brevet des Etats-Unis d'Amérique 10 n° 2.931.756), 1'hydroxystreptomycine (brevet des Etats-Unis d'Amérique n° 2.617.755), les streptolines (journal of American Chemical Society 75. 2029 (1953)), etc., en ce que la substance selon l'invention est produite dans un bouillon par des Actinomvces et elle est efficace contre les bactéries gram positives et gram négatives. On observe également une similitude 13 contre teneur en carbone et en azote dans l'analyse élémentaire, l'absence de coloration, le spectre d'absorption ultraviolet, la basicité, la solubilité dans l'eau et la non-extrabilité par un solvant organique, etc. Cependant, la solémycine a un point de décomposition de 188°C, tandis que la substance selon l'invention a un point de décomposition supérieur à 200°C 20 et s'en distingue donc. Les antibiotiques BD-12, 43-127 et les streptolines sont des substances du type streptothricine et contiennent la strepolidine, consistuant courant des substances du type streptotrhicine, mais l'antibiotique selon l'invention ne contient pas de streptolidine et n'est pas une substance dite du type streptothricine et, par conséquent, il est 25 évidemment différent de ces dernières. La dihydrostreptomycine, 1'hydroxystreptomycine, etc., sont des composés ayant une structure d'aminoglycoside, mais la substance selon l'invention a une structure de polypeptide et, par conséquent, est différente de ces composés. Cette différence apparaît également dans la comparaison des spectres d'absorption dans l'infrarouge. 30 En conséquence, il ajjaraît que l'antibiotique XK-19-2 est un antibiotique totalement nouveau. Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 1 35 Dans cet exemple, on cultive Streptomyces verticillus var. tsukushiensus (ATCC 21633) d'abord dans un milieu d'ensemencement contenant 2 % de glucose, 0,1 °L d'extrait de levure, 0,5 % de peptone et 0,1 % de CaCO^ (pH 7,2 avant stérilisation) en inoculant avec le micro-organisme au moyen 71 47623 9 2120156 d'une boucle de platine, 30 ml du milieu d'ensemencement chargés dans une fiole JEtlenmeyer de 250 ni et on cultive avec agitation à 30°C pendant 48 h. On inocule 30 ml de cette liqueur de culture d'ensemencement dans 300 ml d'un second milieu d'ensemencement chargé dans une fiole d'Erlenmeyer de 2 1 munie de chicanes. La composition du second milieu d' ensemencement est la suivante : 2 % de glucose, 2 % de poudre de soja dégraissée et 0,1 % de CaCO^ (pH 7,2 avant stérilisation). On soumet également le second milieu d'ensemencement à la culture avec agitation à 30°C pendant 48 h. On inocule ensuite 900 ml du second milieu de culture d'ensemencement (correspondant au contenu de trois fioles de 2 l)dans 15 1 d'un milieu de fermentation principal de même composition que le second milieu d'ensemencement, que l'on charge dans une cuve de fermentation en verre de 30 1 et on cultive à j0°C pendant 65 h par le procédé d'aération avec agitation (300 tr/mn, débit d'aération 15 1/mn. Après 65 h, les antibiotiques XK-19-2, XK-19-1-1 (streptothricine) et XK-19-1-2 (LL-AC-541) sont formés simultanément dans la liqueur de culture. Pour isoler l'antibiotique, on ajoute 1,5 kg d'un adjuvant de filtration du type Célite, fabriqué par la Société Showa Kagaku, sous le nom de Radiolite 600, à la liqueur de culture à pH 4,8 et on agite le mélange pendant 15 mn et on filtre. On ajuste 12 1 du filtrat de culture à pH 8,0 par l'ammoniaque aqueuse et on fait ensuite pasœr le filtrat sur une (Dlonne de 600 ml d'Amberlite IRC-50 (forme NH^+). Après lavage avec 3 1 d'eau, on effectue l'élution avec 3 1 d'ammoniajue aqueuse 0,3 N à une vitesse . horaire ie 1, de manière à éluer les deux antibiotiques XK-19-1-1 (streptothricine) et XK-19-2 (LL-AC-541). On lave ensuite la colonne avec horaire de 1. 3 1 d'eau et on effectue à nouveau l'élution avec HC1 0,5 Nà la vitesse spatiale/ La fraction active est concentrée sous pression réduite à environ 500 ml et ensuite ajustée à pH 8,0 par l'ammoniaque aqueuse et on fait passer sous une colonne garnie avec environ 100 ml de charbon activé (charbon pour chromatographie produit par la Société Wako Junyaku K.K.). Après lavage à l'eau, on effectue à nouveau l'élution avec d'abord environ 2 1 de méthanol à 80 % et ensuite 500 ml de méthanol à pH 2. La fraction active de l'éluat est neutralisée par la résine Dowex 44 (forme OH ) et concentrée sous pression réduite. On ajoute ensuite au concentrât 5 à 10 fois son volume d'acétone pour effectuer la précipitation. Ensuite, on dissout le précipité dans une faible quantité d'un mélange de n-butanol, pyridine, acide acétique et eau (3:2:1:2). 0n fait passer la solution sur une colonne 71 47623 10 2120156 (5,0x50cm) garnie avec 500 ml de cellulose pour chromatographie (fabriquée par la Société Funakoshi Yakuhin K.K) et on effecute l'élution avec un mélange de n-butanol, pyridine, acide acétique et eau (3:2:1:2), avec un débit de 1,5 ml/mn. Les fractions actives sont recueillies, concentrées sous pression réduite et lyophilisées. Ensuite, le produit ainsi obtenu est dissous dans une faible quantité d'eau et on fait passer la solution résultante à travers une colonne (2,0 x 30 cm) garnie avec 50 (ml de CM-Sephadex C-25 (forme NH^+). On fait d'abord passer sur la colonne 150 ml de formiate d'ammonium 0,1 M puis on élue avec un gradient d'élution de 0,1 M à 1,0 M de formiate d'ammonium avec un débit de 1 ml/mn. On soumet chaque fraction d'éluat à la chromatographie en couche mince sur gel de silice en utilisant un mélange de n-butanol, pyridine, acide acétique et eau (3:2:1:2) comme révélateur. On recueille les fractions active ayant un Rf d'environ 0,15. On concentre sous pression réduite les fractions réunies et on soumet à nouveau la liqueur concentrée à la chromatographie sur CM-Sephadex en utilisant le procédé décrit ci-dessus. La liqueur concentrée ainsi obtenue, à partir des fractions actives, est liophilisée et on obtient l'antibiotique XK-19-2 pur sous forme d'une poudre blanche. 71 47623 11 2120156 Milieu T A B Croissance L E A U I Mycélium dans le substrat Mycélium aérien Formation de mycélium aérien Pigments solubles gélose extrait de levure extrait de malt bonne brun jaunâtre S* (2 ni)3 R (2 ng) blanc grisâtre (b) modérée non gélose-amidon bonne brun jaunâtre i ; ffïï?2 «) blanc (a) modérée non gélose glycérol- asparagine bonne brun jaunâtre S : (2 lg) R : (2 lg) blanc (a) modérée non gélose de Czapek médiocre incolore blanc (a ) médiocre non gélose glucose- asparagine bonne brun jaunâtre S : (2ec) R : (2 gc) crème (3 ba) médiocre non gélose nutritive brun jaunâtre S : (2 lg) R : (2 lg) blanc grisâtre (b) modérée non gélose glycérol-malate de calcium bonne brun jaunStre S : (2 ie) R : (2 ie) crème verdâtre (2 ba) médiocre non gélose pure médiocre incolore incolore médiocre non gélose albumine d1 oeuf médiocre incolore incolore médiocre non gélose tyrosine modérée brun jaunâtre S : (2 ie) R : (2 ie) crème verdâtre (2 ba) modérée non gélose peptone- glucose bonne brun jaunâtre S : (2ie) R : Ê ie) blanc grisâtre (b) modérée non géla tine modérée vert grisâtre S : (1-1/2 gc) R : (1-1/2 gc) non brun (3 pl) lait de tournesol médiocre croissance invisible à l'oeil nu,mais coagulation et peptonisation évidentes non non 71 47623 12 2120156 TABLEAU I (suite) ..... _ Mycélium dans Mycélium Formation Pigments Milieu Croissance , , ^ „ i . , . r ,, le substrat aenen de mycélium solubles aérien Liqueur de croissance en Czapek-glucose modérée écaille coton- non non neuse dans la liqueur (2 ec) brun-_punâtre cellulose papier filtre médiocre incolore non non pomme de terre modérée brun jaunâtre S : (2 lg) R : (2 lg) blanc modérée rougeatre-grisâtre non gélose-cellulose (en poudre)peptone de viande modérée brun jaunâtre S : (2 ie) R : (2 ie) non non Sérum de Loeff1er bonne brun jaunâtre S : (2 gc) R : (2 gc) non brun noirâtre (4 ni) 1. S : couleur de la surface du mycélium de substrat 2. R : couleur de l'envers du mycélium de substrat 3. Les indications entre parenthèses sont conformes à la classification des couleurs 71 47623 2120156 13 REVENDICATIONS 1. Procédé pour la production d'un antibiotique dénommé XK-19-2 par fermentation, caractérisé en ce que l'on cultive une souche d'un micro-organisme appartenant au genre Streptomyces et qui est capable de produire ledit antibibiotique dans un milieu nutritif, de manière à accumuler ledit antibiotique dans ledit milieu et on sépare et on recueille ledit antibiotique • 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le micro-organisme consiste en Streptomyces verticillus var. tsukushiensus ou un de ces mutants. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le micro-organisme est Streptomyces verticillus var. tsukushiensus ATCC 21633. 4. Nouvel antibiotique dénommé XK-19-2 produit par fermentation par Streptomyces verticillus var. tsukushiensus ATCC 21633, caractérisé en ce que ledit antibiotique est un polypeptide basique présentant l'analyse élémentaire suivante : C 35,82 % ; H 8,15 % et N 15,22