Brevet FR2113774A1 — publié le 19720630

L'invention concerne un nouveau procédé de préparation de sels d'addition d'acides organiques de la L-ornithine et plues parti culièremet des sels d'addition diacides desdiacides organiques. On sait que lion a déjà préparé des sels d'addition d'acides de la L-ornithine soit par réaction de double décomposition en nhase aqueuse de sels d'acide carboxylique avec des sels m neuraux de L-ornithine, soit au moyen dune résine échangeuse d'ions. Dan le cas d'une résine échangeuse d'ions on connait notamner.t un procédé de préparation de l' -cétoglutaratede di-L-ornithine qui consiste à fixer l'anion a-cétoglutarique sur une résine échangeuse d'anions et à éluer avec un sel minéral d'ornithine. Jusqu'à présent, on n!a lamais su obtenir les sels d'addition d'acides organiques de la L-crnlthire par réaction directe des deu composés avec un rendement industriel, ceci en raison du fait qu'il n'est pas possible d'obtenir la L--ornithine base à l'étant pur en solution aqueuse suffisamment concentrée. La demanderesse a trouvé de façon surprenante qu'il était possible d'obtenir avec un rendement de 85 à 97% les sels d'addition d'acides de la L-ornithine avec des acides organiques par réaction directe de l'ornîthine base sur les acides organiques envisagés. Le procédé selon l'invention presente par rapport aux procédés de double décomposition l'avantage de conduire à des produits exempts d'impuretés minérales et par rapport aux procédés faisant appel à une résine échangeuse d'ions, il offre l'avantage de la simplicité; il permet surtout d'éviter la concentration des solutions aqueuses qui conduirait à la dégradation du produit, dégradation visible en raison de la coloration des produits formés. Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que a) on fait réagir en solution aqueuse à une température comprise entre 15 et 50 C des quantités équimoléculaires d'oxyde d'argent avec un halohydrate de L-ornithine et b) après filtration de l'halogénure d'argent, on fait réagir la solution aqueuse de L ornithine base ainsi obtenue avec un acide organique. La salification est effectuée de préférence en utilisant des quantités de produits voisines des conditions stoechiométriques quand il s'agit de préparer un sel de mono-L-ornithine, ou avec des rapports molaires ornithine/acide voisins de 2 ou 3 quand il s'agit de préparer des sels de di- ou tri L ornithine de polyacides organiques. Dlune manière générale, tos les acides organiques conviennent. Selon une caractéristique de l'invention, on préfère faire appel à des acides mono-, di- ou tri-carboxyliques afin de préparer des sels de mono-, di- ou tri-L-ornithine utiles en thérapeutique. Selon une autre caractéristique de l'invention, l'acide organique envisagé est un dérivé de l'acide phosphorique. Parmi les acides conformes au procédé selon l'invention, on peut mentlonner notamment les acides a-cétoglutarique, malique, fumarique, citrique, pyruvique. glutamique, 3-adènylique et 5-adénylique. L'oxyde d'argent est obtenu par précipitation d'une solution de nitrate d'argent par un hydroxyde alcalin. Du fait de l'insolubilité du chlorure d'argent qui se forme, on obtient, après filtration du chlorure d'argent formé lors de la préparation de l'ornithine base, un sel d'addition exempt d'impuretés minérales. L'invention concerne également en tant que produits industriels nouveaux les sels de L-ornithine préparés selon le présent procédé ou tout autre mode d'obtention, pour autant que lesdits sels soient nouveaux. L'invention concerne également les compositions thérapeutiques renfermant en association avec un véhicule physiologiquement acceptable au moins l'un desdits nouveaux sels comme principe actif. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention seront mieux compris à la lecture de la description des exemples nullement limitatifs qui vont suivre. EXEMPLE 1 Préparation de l' & cétoglutarate de di-L-ornithine. C15 H30 N4 O9 (P.M. = 410,4) On dissout 0,1 mole de chlorhydrate d'ornithine soit 16,866 g dans 33 ml d'eau pure à 50"C. On prépare, par ailleurs, 0,1 mole d'oxyde d'argent exempt de cations et d'anions étrangers par précipitation du nitrate d'argent avec un hydroxyde alcalin. On verse la solution de chlorhydrate d'ornithine à une température de 40"C, dans la suspension aqueuse d'oxyde d'argent en agitant On obtient immédiatement un précipité très dense de chlorure d'argent, après un repos de 15 mn, on filtre le chlorure d'argent formé et on obtient une solution aqueuse d'ornithine base limpide. On refroidit la solution aqueuse d'ornithine base ers environ 5 C, puis on ajoute l'acide ncétoglutarique (0,05 mole) à létal cristallisé, ou en solution darus e minimum dweau. On cherche dans la solution aqueuse d'&alpha;-cétogletatate d'ornithine l'excès éventuel d'ions chlorure ou d'ions argent. On élimine facilement le chlorure en excès, en ajustant avec précision par de l'oxyde d'argent; inversement si l'on constate la présence d'argent or ajoute une solution très diluée de chlorhydrate d'ornithine.On filtre la solution, et l'on obtient une solution aqueuse d'&alpha;-cétoglutarate d'ornithine, Par adjonction d'éthanol ou de méthanol, l'x-cétoglutarate de di--L=ornithine cristallise. Après 24 h de repos, on filtre puis on lave avec un peu de méthanol, et on sèche. On recueille avec un rendement de 90 à 97% un produit blanc et pur > sous forme de dihydrate, exempt de chlorure. Après déshydratation sous vide, le produit fond à 130-132 C. EXEMPLE 2 Préparation du malate de di-L-ornithine. P.M. = 398,41 On dissout 0,5 mole de chlorhydrate de L-ornithine soit 84,33 g dans 169 ml d'eau à 500 50 C, on verse cette solution dans une suspension aqueuse d'oxyde d'argent, contenant 0,5 mole d'oxyde d'argent, en agitant, puis on ajoute une solution concentrée diacide malique (0,25 mole soit33,5 g) dans 50 ml d'eau. On filtre le chlorure d'argent formé et on obtient une solution aqueuse de malate de di=L-ornithine. On élimine faclement les ions chlorure ou argent en excès en opérant dans les conditions citées dans l'exemple 1. Par adjonction d'étharol ou de méthanol, le malate de di-L ornithine cristallise. On obtient un rendement compris entre 85 et 90% par rapport au chlorhydrate d'ornithine. On obtient ce produit sous forme d'hydrate, contenant 6,6% d'eau de cristallisation. Le produit déshydraté a un point de fusion de 1790 à 181"C et un pouvoir rotatoir = 4 il 80 (C=2% dans l'eau). EXEMPLE 3 Préparation du fumarate de di-L-ornithine. P.M. = 380,4 On dissout 0,5 mole de chlorhydrate de L-ornithine dans 170 ml d'eau tiède que l'on verse dans une suspension d'oxyde d'argent contenant 0,5 mole d'oxyde d'argent, en agitant. On ajoute à cette suspension 0,25 mole d'acide fumarique, (29g). Par salification, l'acide fumarique se dissout très rapidement pour donner un fumarate de di-Lornithine entièrement soluble. On filtre le chlorure d'argent formé, puis on ajuste la solution aqueuse de fumarate d'ornithine en opérant dans les conditions indiquées à l'exemple 1. Par adjonction d'éthanol ou de méthanol, le fumarate de di-L-ornithine cristallise. On obtient avec un rendement de 85% un produit blanc anhydre qui fond à 207-209"C et qui a un pouvoir rotatoire & =11,80 (C = 2% dans l'eau). EXEMPLE 4 Préparation du citrate de tri-L-ornithine. P.M. = 588,62 Dans une suspension contenant 05 mole d'oxyde d'argent, on introduit 0,5 mole de chlorhydrate d'ornithineg soit 84,2. g en solution dans 130 ml d'eau puis on laisse reposer 1 h.On ajoute à cette suspension 35 g d'acide citrique en laisse reposer une demivheure, puis on recherche dans la solution aqueuse de citrate neutre d'ornithine, l'excès éventuel de chlorure d'argent On élimine par filtration le chlorure d'argent précipité La solution de citrate neutre d ornithine (800 à 850 ml) est concentrée sous ide jusqu'à un volume de 600 ml environ Par adjonction de 1500 ml de méthanol absolu, le citrate neutre d'ornithine cristallise.Après repos ae 24 h on filtre puis on lave avec un peu de méthanol puis on sèche. On recueille avec un rendement de 76 à 78% un produit blanc et pur exempt de chlorure. Le titre par analyse potentiométrique est de 99,2%. EXEMPLE 5 Préparation de l'aspartate de mono=L-ornithine. P.M. = 265,26 En opérant selon les conditions opératoires indiquées dans l'exemple 4,avec des quantités équimoleculaires de réactifs à partir de l'acide aspartique, on obtient l'aspartate de mono-L=ornithine avec un rendement de 90 à 94%. Le produit est cristallise avec 6,5% d'eau. Le titre par analyse potentiométrique en milieu anhydre sur le produit déshydraté est de 99,1%. EXEMPLE 6 Préparation du pyruvate d'ornithine. P.M. = 220,22 En opérant comme indiqué à l'exemple 4 avec des quantités équimoléculaires de L-ornithine et d'acide pyruvique, on recueille avec un rendement de l'ordre de 60 à 65% un produit jaune, exempt de chlorure. Le titre par analyse potentiométrique est de 99,5%. EXEMPLE 7 Préparation du glutamate de mono-L-ornithine. P.M.= 279,29 En opérant dans les conditions décrites à l'exemple 4, avec des quantités équimoléculaires d'acide glutamique et d'ornithine, on recueille avec un rendement de 96 à 98%, un produit blanc et pur, exempt de chlorure. L'analyse potentiométrique sur le produit anhydre est de 99,5%. EXEMPLE 8 3-Adénylate de mono-L-ornithine. P.M. = 479,39 On dissout 0,1 mole de chlorhydrate d'ornithine, c'est-àdire 16,87 g dans 30 ml d'eau, on introduit 0,1 mole d'hydroxyde d'argente puis 34,69 g d'acide adénosine 3'-monophosphorique (acide 3-adenylique) à l'état cristallisé. On laisse reposer 1 heure, puis on vérifie l'excès des ions chlore ou argent. On filtre pour éliminer le chlorure d'argent puis on concentre la solution sous vide sans dépasser 22 -25 . On ajoute 400 ml de méthanol pur, puis on laisse cristalliser 24 heures. On obtient le 3-adenylate de mono-L-ornithine avec un rendement de 89 à 93%, sous forme d'un produit blanc et pur contenant 3 molécules d'eau de cristallisation. Le titre potentiométrique sur le produit anhydre est de 99,3%. En opérant comme indiqué à l'exemple 8, l'acide 5-adénylique remplaçant l'acide 3-adénylique3 en obtient le 5adénylate de L ornithine. Le procédé selon l'invention permet d'obtenir avec un excellent rendement des sels de mono-, di et tri-L-ornlthlne purs et exempts de chlorure. Par ailleurs, les sels de Lórnithine qui ont été préparés selon les exemples 2 à 8 sont des produits industriels nouveaux utilisables notamment en thérapeutique. -REVENDICATIONS- 1 - Procédé de préparation de sels d'addition d'acides organiques de la L-ornithine, caractérisé en ce que a) on fait réagir en solution aqueuse à une temperature comprise entre 15 et 500C, des quantités équimoléculaires d'oxyde d'argent avec un halohydrate de L-ornithine et b) après filtration de l'halogénure d'argent on fait réagir la solution aqueuse de L-ornithine base ainsi obtenue avec un acide organique. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'acide organique est un acide mono- ou polyearboxyllque. 3 - Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'acide organique est un acide organophosphorique, 4 - Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'acide mono- ou polycarboxylique est choisi parmi les acides -cétoglutrique, fumarique, malique, citrique, aspartique, pyruvique et glutamique. 5 - Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'acide organophosphorique est l'acide 3-Adénylique, 6 - Procédé selon la revendication 4, pour la préparation de l'aspartate de mono- I,ornithine caractérisé en ce que l'on fait réagir en solution aqueuse des quantités équimoléculaires d'oxyde d'argent et de chiorydrate de L-ornithine et en ce que, après élimination par filtration du chlorure d'argent ainsi formé, on fait rdagir la solution aqueuse de L-ornithine restante avec l'acide aspartique. 7 - Malate de di-L-ornithine. 8 - FUmarate de di-t-ornithine, 9 - Citrate de tri-L-ornitnine. 10 - Pyruvate de L-ornithine. Il - Glutamate de mono- L-ornothine. 12 - )-Adssnylate de L-ornithine. 13 - Coaposition thdrapeutique renfermant en association avec un véhicule physiologiquement acceptable au moins l'un des sels selon l'une quelconque des revendications 7 à 12, comme ingrédient actif.