Brevet FR2119852A1 — publié le 19720811

La présente invention est relative à un nouveau produit biologique possédant des propriétés cicatrisantes importantes qui le rendent particulièrement utile en tant que pansement biologique, à un procédé de préparaticn de ce produit et à ses applications, notamment en médecine humaine et vétérinaire. Le produit de l'invention est caractérisé en ce qu'il est constitué par de la peau de foetus de boviné desséchée possédant les activités enzymatiques estérasique, carboxypeptidasique, @-amylasi que, catalasique, peroxydasique et protéolytique de la peau franche. L'invention a encore pour objet un procédé de préparation du produit biologique défini ci-dessus, caractérisé en ce qu on prélève de la peau de foetus de boviné âgé de 3 à 6 mois environ dont le sang foetal ne renferme pas d'antigènes A et/ou B, on met en contact la peau prélevée avec une solution aqueuse d'un produit antiseptique et on dessèche la peau ainsi traités. D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparal- tront au cours de la description qui va suivre. Le produit biologique de l'invention est essentiellement constitué par de la peall de foetus de boviné, et notamment de veau, desséchée qui présente des propriétés cicatrisantes remarquables et qui peut être conservée soit sous forme de lambeaux que l'on réhydrate avant utilisation, Roit sous une forme galénique appropriée, en particulier sous forme de poudre. Pour conserver 7e produit, on le place dans des récipients hermétiauement clos en atmosphère stérile, par exemple dans des sachets de matière plastique, en particulier de polyéthylène. Le prélèvement de peau est effectué sur un foetus âgé de 3 à 6 mois environ et dont on a vérifié que le sang foetal ne renferme pas d'antigènes A et/ou P. Le prélèvement est effectué sur de la peau tendue, à partir du derme, sur une épalsseur avantageusement comprise entre 0,4 et C,8 mm. La peau prélevée es tmise en contact avec une solution aqueuse d'un produit antiseptique, par exemple une solution de pénicilline et de streptomycine dans du sérum physiologique, ou une solution d'ur. sel d'ammonium quaternaire. Cn peut avantagellsement imprégrer ensuite la peau avec ine solution aqueuse d'un agent de conservation tel que la polyvinylpyrrolidone ou le glycérol. Le séchage de la peau peut être effectué par lyophilisation, celle-ci devant être auparavant amenée à une temperature comprise entre -200C et -80 C. Te échage peut aussi être obtenu par dessiccation à l'étuve pendant 24 h à des tempàratures comprises entre 40 C et 60 C. L'exemple non limitatif suivant illustre un mode de mise en ceuvre du procédé de l'invention. Exemple Sur dPs vaches pleines abattues en vue de la consemmation, et présertant une réactior négative à la tuberculine et un séro diag- nostic truccllique négatif, on prélève, après ligature de la corne utérine gravide l'ensemble foetus-utérus. Seuls sont utilisés les foetus âgés de 3 à 6 meis. en désinfecte l'utérus par un antiseptique convenable, un sel d'ammonium quaternaire par Pxemple, et l'ensemble est porté dans une pièce stérile. Après ircision de l'utérus sur sa grande courbure et ouverture dans annexes embryonnaires, on prélève stérilement le foetus. On prélève du sang foetal et on ligature le cordon ombilical. Sur le sang foetal, on effectue des recherches sérologiques ; on ccntrôle notamment qu'ill ne renferme pas d'antigènes 4 et P, afin qu'il ne puisse prevoquer de réactions allergiques ultérieures. Si ces contrôles sont négatifs, l'embryon est suspendu à un arochet, quis pelé : on prélève ainsi le derme et l'épiderme. La peau est alors tendue sur un martre, le derme étant la face upérieure Au moyen d'un dispositif morté sur un "couteau à quisse", on amineit le prélèvement de façon à obtenir une épaisseur comprise entre 0,4 m et o,8 mm. On peut également effectuer le prélève et au moyen d'n rasoir de Lagrot réglé pour des épaisseurs com- parables. La peau ainsi prélevée est placée aussitôt dans des récipients stériles et stockée à 44 C. Avant de procéder à la dessiccation, on plonge la peau dans une solution renferment 1.000.000 U de pénieilline et 1 g de streptemyeine pour 10 ml de sérum physiologique. On fait avantageusement sutir ensuite à la peau une imprégnation de quelques minutes dans ,ine solution aqueuse de polyvinyl pyrrolidune è 20 % en poids ou de glycérol à 7 % en poids, cette opération permettant une meil- leure conservation. la peau ainsi préparée est soumise à la dessiccation, qui peut être obtenue selon deux procédés a) Lyophilisation - Des plaques de verre sont préparécs par vaporisation de Teilon épolytétrafluoroéthvlère) et stérilisation à 180 C. La peau est étalée stérilement, épidemme sur la plaque, puis pertés dann un congélateur pendant 24 h à la températune de -50 C- Après cette congélation, la peau est placée dans l'epceinte de lyophilisation préalablement stérilisée pt refroidie et soumise à la lyophilisation pendant 24 h. b) Séchage à l'étuve - La peau étendue sur des plaques de verre ou des cadres métalliques avec crnchets est portée à l'étuve à une température de 50 C pendant 24 h. En fin d'opération, la température est augmentée et maintenue à 600 pendant une durée de i h. Il est possible d'obtenir un résultat similaire en prscédant à un séchage plus rapide et à une température moins elevée.Les peaux étalées sur des plaques de verre sont introduites dans l'éture maintenue à une température comprise entre 25 et 35 C, et à l'aide d'un radiateur soufflant, réglé pour déhiter un courant d'air chauffé à la même température que l'étuve, on établit une circulation d'air. La durée du séchage ainsi effectué varie entre 1 h et 12 h. Après la phase de dessiccation, la peau est prélevée stérilement et placee dans des sachets de polyéthylène préalablement stérilisés par irradiation ai'x rayons ultra-violets, qui en assurent la parfaite conservation. Ainsi préparée, la peau se présente sous l'aspect d'une mince pellicule de consistance dure, de couleur jaunâtre, Elle peut être identifiée par Ime réaction immunologique permettant de mettre en évidence l'espèce bovine. On utilise à cet effet un sérum antibovin préparé chez la lapin (Bacto hovine serum - antiserum (abbit). te produit de l'invention possède des propriétés qui le rendent précieux en médecine humaine ou vétérinaire : 101 il présente, au point de vue de l'antigénicité sur l'homme, une bonne marge de sécurité, ce qui r'esF pas le cas pour les espèces porcine et équine; 2 ) il ne présente pas d'alitérations morphelogiques ; 3 ) les essais d'activité antibactérienne effectués in vitro ont mis en lumière son activité antibactérienne. Des beîtes de gélose de Pétri sont ersemenqées avec différents germes. On dispose sur la gélose des disques de peau non traités par un antiseptique ou un artibiotique, découpés à l'emperte-pièces, de 1 em de diamètre.Après 24 h à l'étuve, on constate que les zones d'inhibition de pousse des germes autour des disques de peau sont importantes; 40) les essais d'activité enzymatique ont montré que la peau desséchée de l'invention conservait intégralement les activités enzyma- tiques de la peau fpaRche. Une auantité de peau est broyée avec du sérum physiologique et centrifugée.Le liquide surnageant est utilisé pour la recherche des activités enzymatielles par électrophorèse sur agarose. On caractérise ainsi: a) 11 activité estérasique par la coloration au ss-naphtyl-acétate et bleu diazo; b) l'activité carboxypeptidasique par la carbonaphtoxyphényl alanine et bleu diazo; c) l'activité a-amylasique par la coloration de l'amidon par l'iode; d) l'activité catalasique par la décomposition de l'eau oxygénée; e) l'activité peroxydasique par la coloration à la benzidine; f) enfin, on recherche l'activité protéolytique par la méthode Nagase. Le produit de l'invention peut être utilisé notamment dans le traitement des brûlures, tel qu'il se présente après son insertion dans les sachets en polyéthylène,c'est-à-dire en lambeaux plus ou moins réguliers, ayant par exemple des dimensions approximatives de 20 cm x 5 cm. La peau est alors réhydratée à l'aide de sérum physiologique et directement appliquée sur les surfaces à traiter, en prenant soin qlltelle adhère parfaitement. Il peut être parfois préférable d'étaler la peau, après réhydratation,sur un support tel qu'une gaze résorbable ou non, avant de l'ap- pliquer. Dans le cas de plaies anfractueuses, d'ulcères ou d'escarres, le produit est de préférence utilisé sous forme de poudre. En chambre stérile, la peau est alors broyée et conditionnée sous forme de doses unitaires, par exemple en sachets comprenant de 2 à IO g de poudre, assurant ainsi, au moment de l'emploi, une manipulation rigoureusement aseptique. Après saupoudrage de la plaie, la poudre est éventuelliment maintenue en place par une pulvérisation de fibrine ou par une gaze résorbable ou non. On peut aussi mettre le produit pulvérulent dans une bombe à aérosol avec un propulseur stérile, tel qu'un vréor.. Les résultats d'essais cliniques ci-après montrent l'efficacité thérapeutiqMe du produit de l'inventton. De la peau d'embryon de veau desséchée suivant l'invention a été utilisée en tant que pansement biologique sur des malades pre- sentant des brûlures graves du 2ème ou 3ème degré cui occupaient de 10 % à 60 % de leur surface conporelle, ou des lésions telles qu'escarres, plaies torpides, @@@@@@ Dans tous les cas, les résultats ont eté favorables, tant sur les syndromes douleureux et l'état général que sur la cicatrisation, qui a été nettement accélérée. Observation N 1 - Mme Marie F., ôgée de 54 ans, présente une brûlure étendue à l'intérieur du bras gauche avec perte de substance importante. On pratique, à 5 jours d'intervalle, deux hétérogreffes avec de la peau lyophilisés de l'invention. T1 apparait alors une très nette dimiration de l'exsudat et un aspect normal indiquant une réhabilitation vasculaire, ainsi qu'un état général nettement amélioré. La plaie préparée est nettement plus propre qu'avant l'application de la première hétérogreffe. La brûlure est complètement guérie par l'application d'une autogreffe. Excellente tolérance et très bonne préparation à l'autogreffe. Observation N 2 - M. Hean L., âgé de 61 ans, est un paraplégique présentant des escarres fessières avec exsudation plasmatique. Il est soumis à un treitement antibiotique, sans amélioration apparente. On décide alors de le traiter par l'application d'hétérogreffes de peau d'embryon de veau lyophilisée et d'arrêter toute administration d'antibiotiques. Il apparait-alors que l'état générai du patient s'est très nettement amélioré et qu'il y a disparition de l'exsuda- tion. Excellente tolérance, guérison des escarres et arrêt de l'exsu- dation par simple application d'hétérogreffe sans administration d'antibiotiques. Observation N 3 -M. Louis V.., âgé de 31 ans, présente une brâlure électrique aux deux pieds. On lui applique une homogreffe au pied droit et une hétérogreffe de neau d'embryon de veau séchée à l'étuve au pied gauche. Deux jours après, il présente une berne co :vertue -aiix deux pieds et ne souffre plus. L'hétérogreffe est éliminée 4 jours après et on procède à une autogreffe au pied garche, alors qu'on est obligé d'amputer le pied droit @n saison ù'une necrese évolutive grave. Excellente tolérance de la peau d'embryon de veau. Disparition des douleurs. Observation N% 4 Mme Angèle C.., êgée de 36 ans, présente une brûlure au pied gauche. Après l'échce de plusiours autogreffes, il est décidé de lui appliquer la peau desséchée de l'invention, sous forme de poudre. On constate une disparition des douleurs et un pettoyape efficach de la plade, ce qui permet de noter une amélieration de l'état général ; l'antegreffe devient alors possible; elle est suivie de la gréri@@@. Excellente telérance de la poudre. Chservation N 5 M. Albert @,,. âgé de 80 ans, est admis dasn le service pour brûlune du pied avec allongement du talon d'Achille et perte de subs tance sous-malléolaire. Pose d'une homogreffe puis d'une hétérogreffe (peau d'embryon de veau lycphilisée). On pete un réel bourgeonnement au niveau de la plaie. Le greffe ne prend pas et il y a suppuration. Dos d'une nouvelle peau d'embryon de veau lyophilisée. On nete 48 h après, une cicatrisation marginale et une granulation. Trois jours après, il apparaît une excellente évelution, iine contraction d la plaie et une cicatrisation en cours quoi que hyperbourgenppante. Excellente tolérance. Bonne évolation. Les résultats cliniques obtenus ont été très favorables. On constate en particulier : a) une diminution rapide de la douleur permettant la suppression des antalgiques majeurs ; b) un pouvoir antibaetérien supérieur à celui attendu lorsque les antibiotiques sont appliqués sur un pansement inerte, cette action étant due à l'activité propre de la peau de boviné. c) un séchage de la plaie et une diminution importante de l'ex- sudation plasmatique. d) une modification des processus de cicatrisation. en particulier lersqu'il p a des pertes de substances importantes, due aux actiors enzymatiques de la peau de foctus de boviréqui accélère copsidérablement les processus métabeliques des parties lésées et agis en sypergie evec les défenses de l'organisme blessé. REVENDICATIONS 1 - Un produit biologique à activité cicatrisante, caractérisé en ce qu' il est constitué par des lambeaux de peau réhydratables avant utilisation provenant de peau de foetus de boviné desséchée et possédant les activités enzymatiques estérasique, carboxypeptidasique, a-amylasique, catalasique, peroxydasique et protéolytique de la peau fratche. 2 - Un produit suivant la revendication 1, caractérisé en ce qu'il est présenté en récipients ou sachets stériles hermétiquement clos. 3 - Un procédé de préparation du produit biologique suivant la revendicatrion 1, caractérisé en ce qu'on prélève de la peau d'un foetus de bovlné~âgé de 3 à 6 mois environ dont le sang foetal ne renferme pas d'antigènes A et/ou B, on met en contact la peau prélevée avec une solution aqueuse d'un produit antiseptique et on dessèche la peau ainsi traitée. 4 - Un procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce qu'on prélève du foetus; à partir du derme, des lambeaux de peau ayant une épaisseur de 0,4 à 0,8 mm environ. 5 - Un procédé suivant la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que la solution de produit antiseptique est une solution de pénicilline et de streptomycine dans du sérum physiologique. 6 - Un procédé suivant l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce qu'après la-miseen contact avec l'antiseptique, on imprègne la peau avec un agent de conservation, notamment une solution aqueuse de polyvinylpyrrolidone ou de glycérol. 7 - Un procédé suivant l'une quelconque des revendications 3 à 6, caractérisé en ce que la dessiccation de la peau est effectuée par lyophilisation ou dessiccation à l'étuve. 8 - De la peau de boviné desséchée à activité cicatrisante telle qu'obtenue par un procédé suivant l'une quelconque des revendications 3 à 7.