Brevet FR2120157A1 — publié le 19720811

4762^ 1 2120157 La présente invention concerne un procédé de production d'un nouvel antibiotique, dénommé ci-après XK-SS-F^spar fermentation et plus particulièrement un procédé qui consiste à cultiver une souche d'un microorganisme appartenant au genre Streptomyces qui est capable de produire 5 l'antibiotique XK-SS-F^ dans un milieu approprié pour former ledit antibiotique et à récupérer ce dernier du bouillon de culture. Il y a toujours une demande constante en nouveaux antibiotiques et,en particulier,on recherche fortement ceux qui sont efficaces contre un spectre étendu de bactéries, Cependant, même lorsque l'on découvre un 10 nouvel antibiotique, il doit pouvoir'être produit à l'échelle industrielle pour que sa production soit rentable. A cet effet, la demanderesse a isolé un nouvel antibiotique efficace contre les bactéries Gram-positives, Gram-négatives et résistantes aux acides. La demanderesse a également mis au point un procédé de production de cet antibiotique. 15 L'inventicn a donc peur objet la production du nouvel antibiotique XK-33-F2- L'antibiotique est produit par des souches de micro-organismes appartenant au genre Streptomyces. Un micro-organisme particulièrement approprié est Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus qui a été découvert et dénommé par la demanderesse. Une souche caractéristique qui a 20 été isolée dans le sol d:une région du Japon a été déposée à 1'American Type Culture Collection à Rockville, Maryland, Etats-Unis d'Amérique sous le n" ATCC 21.632. La souche ci"dessus mentionnée est caractérisée morpholi-giquement par des colonies brun jaunâtre avec un mycélium aérien blanc grisâtre 25 ou crème légèrement verdâtre. On observe la formation de mélanine sur divers milieux. Des sporophores sont formés secondairement à partir du mycélium aérien et forment des boucles. Dans la plupart des cas, les spores se forment en lignes de dix ou plus, formant une courbe ondulée; la surface des spores est lisse. On n'observe pas de spirale. 30 Les caractéristiques de culture de la souche ci-dessus mentionnée après culture sur 18 types de milieux à 36°C pendant deux semaines sont indiquées dans le tableau I ci-après. L'assimilation des sources de carbone par la souche selon l'invention est indiquée"dans le tableau II ci-après. 35 Cr. observe en euf.re les propriétés physiologiques suivantes : 1. Température de cr c iïsar.ce : 20°C - 35cC 2. pH de croissance : 5^0 - 9,0 3. Liquéfaction de la gélatine : observée à 25cC en 1 à 2 semaines 71 47624 2 2120157 4. Hydrolyse de l'amidon : fortement positive 5. Formation de tyrosinase : positive 6. Action chromogène : positive 7. Action sur le lait de tournesol : coagulation,, peptonisation, pH alcalin 8. Réduction des nitrates en nitrites : négative 9. Décomposition de la cellulose : fortement positive Par comparaison des propriétés de la souche de l'invention 10 avec celles des Actinomyces connus décrits par Waksman dans "The Actinomycetes", volume 2, la demanderesse a déterminé que la souche selon 11 invention appartient à la "sériés reticuli". Parmi les espèces connues de cette série, les plus voisines de la souche selon l'invention sont les suivantes : 15 1. Streptomyces olivoreticuli 2. Streptomyces verticillatus 3. Streptomyces luteoverticillatus La comparaison des propriétés de la souche de l'invention 20 et de celle des espèces voisines est indiquée dans le tableau III ci-après. Comme le micro-organisme selon l'invention semble avoir une ressemblance plus étroite avec Streptomyces olivoreticuli plutôt qu'avec Streptomyces verticillatus ou Streptomyces luteoverticillatus et comme il ressemble à Streptomyces olivoreticuli dans la plupart de ces caractéristiques, 25 sauf celles indiquées ci-dessus, il a été identifié comme une variété de Streptomyces olivoreticuli et dénommé Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus. Comme c'est le cas avec d'autres souches d'Actinomyces, les souches selon l'invention peuvent donner des mutants sous l'action de 30 moyens artificiels, tels que l'irradiation en lumière ultraviolette, irradiation par Co^, irradiation par les rayons X et traitement par diverses substances induisant des mutations. En conséquence, on peut utiliser selon l'invention toute souche appartenant à Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus et capable de produire l'antibiotique XK-SS-F^, y compris les 35 mutants. On effectue la culture dans un milieu de culture liquide et le procédé de culture submergé avec agitation est particulièrement approprié. Généralement, les procédés ordinaires pour la culture des micro-organismes 71 47624 3 2120157 du genre Actinomyces peuvent être utilisés. On peut utiliser comme milieu de culture un milieu naturel cl synthétique pour autant qu'il contienne une source de carbone, une source d:azote, des composés inorganiques et de faibles quantités de substances nutritives additionnelles nécessaires pour 5 le micrc-organisme particulier. Comme sources de carbone, on peut utiliser le glucose, l'amidon, le glycérol, le mannose, le fructose, l'inositol, le mannitol, le saccharose et les mélassesspar exemple, seuls ou en combinaison. En outre, les hydrocarbures, alcoolsa acides organiques, etc. sont également appropriés selon leur degré d'assimilation par le micro-organisme particulier. 10 Comme sources d'azote organiques et inorganiques, on peut utiliser le chlorure d'ammonium, le sulfate d'ammonium, l'urée, le nitrate d'ammonium, le nitrate de sodium, etc. seuls ou en combinaison; la peptone, l'extrait de viande, l1extrait de levure, la levure séchée, la liqueur de trempage de maïs, la poudre de soja, le "casamino acide" conviennent comme sources naturelles 15 d'azote. Si nécessaire, on peut ajouter au milieu des sels inorganiques, tels que chlorure de sodium, chlorure de potassium, carbonate de calcium, phosphates, etc. et d'autres substances organiques ou inorganiques capables de favoriser la croissance du micro-organisme particulier. On effectue la culture à une température de 20 à 40°G, en 20 général de 25 à 30°C de préférence. En outre, on peut maintenir le pH au voisinage de la neutralité pour les meilleurs résultats. Il est préférable de faire pousser le micro-organisme initialement dans un milieu d'ensemencement avant de l'utiliser pour l'inoculation du milieu de culture. Le milieu d'ensemencement est incubé dans les 25 conditions de croissance favorables pendant une durée suffisante pour le développement d'une population appropriée de micro-organismes. On utilise ensuite le milieu d'ensemencement pour inoculer le milieu de culture. On effectue la culture ordinairement pendant 2 à 7 jours et l'antibiotique selon l'invention se forme et s'accumule dans le bouillon 30 de culture. Lorsque la quantité d'antibiotique forméedans le bouillon de culture atteint un maximum, on arrête la culture et on isole le produit désiré du bouillon de culture après séparation des cellules microbiennes, par exemple par filtration. Un procédé convenable pour isoler 15antibiotique du filtrat. 35 de culture comprend la chromatcgraphie sur une colonne de résine échangeuse d'ions. Par exemple, on ajuste à pH 8 le filtrat de culture obtenu par filtration du bouillon de culture avec un adjuvant de filtration du type Celite et 71 47624 4 2120157 on l'adsorbe sur une résine échangeuse de cations faiblement acide,telle qu'Amberlite IRC-50 (forme . Après lavage à l'eau, on effectue l'élution d'abord avec NH^OH 0,5N qui élue seulement l'antibiotique XK-33-F^, semblable à la destomycine A. Ensuite, on effectue l'élution avec HC1 0, 5N et on obtient 5 séparément deux fractions, La première fraction d'élution contient l'antibiotique XK-33-F^ selon l'invention et la seconde fraction d:élution contient un antibiotique dénommé XK-SS-F^ qui est identifié avec la viomycine. La fraction contenant l'antibiotique XK-33-F2 est ajustée à pH 8,0 et ensuite soumise à la chromatographie sur colonne de poudre de charbon. 10 Après l'élution avec HC1 055N-Me0H à 80%s on fait passer l'éluat résultant sur une colonne de résine échangeuse d'ar.ions, telle que Dowex 1x2 (forme OH ) et on élue par l'eau. Par lyophilisation de la fraction active de l'éluat, on obtient une base libre blanche XK-33-F2. La substance ainsi obtenue est relativement stable en milieu neutre ou acide mais légèrement instable en milieu 15 alcalin. On décrit ci-après en détail le nouvel antibiotique produit selon l'invention en référence auxdessins annexés dans lesquels : - la figure 1 représente le spectre d'absorption ultraviolet de l'antibiotique selon l'invention; et 20 - la figure 2 représente le spectre d'absorption infrarouge de l'antibiotique selon l'invention. L'antibiotique produit par le procédé de l'invention est une poudre basique blanche qui ne présente pas de point de fusion net, mais vire au brun à 200°C et se décompose à 205-210°C. Il est soluble dans l'eau et 25 légèrement soluble dans leméthanol, mais insoluble dans les solvants organiques, tels qu'éthanol, butanol, acétone, benzène, acétate d1éthyle,chloroforme, éther, éther de pétrole, hexane, etc. Comme le montre la figure 1, le spectre d'absorption dans l'ultraviolet présente un maximum d'absorption à 268 m^u en solution dans l'eau et dans HC1 N/10 et à 283 m^u dans NaOH N/'IO. L'analyse élémentaire du chlorhydrate dans les résultats suivants C : 33,28%, H : 5,51%, N : 21,73%. — —25 En outre, il présente une rotation spécifique ]_ oc_/D égale à -12,4° (C=l, dans ^0) . L'antibiotique selon l'invention est positif aux tests de 35 la ninhydrine et de Sakaguchi et donne une couleur jaune dans le permanganate de potassium, mais est négatif dans la réaction de Fehlir.g, la réaction de Molisch et la réaction à l'anthrone. 71 4762k 5 2120157 Le spectre d'absorption infrarouge illustré à la figure 2 présente les pics caractéristiques à 945, 985, 1050, 1160, 1230, 1330, 1500, 1670 et 3300 cm"1. Pour une autre identification, les valeurs de Rf dans la 5 chromatographie en couche mince sur gel de silice utilisant trois types de révélateurs sont indiquées dans le tableau IV .ci-après. Le spectre antimicrobien de l'antibiotique selon l'invention est indiqué dans le tableau V ci-après. Comme indiqué ci-dessus, l'antibiotique selon l'invention 10 est efficace contre des bactéries Gram-positives, telles que Bacillus subtilis, Bacillus cereus et les analogues, des bactéries Gram-négatives, telles que Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Salmonella typhosa, etc. ou les bactéries résistantes aux acides, telles que Mycobacterium phlei, etc. Cependant, il est inefficace contre les moisissures, les levures, etc. 15 En outre, il est également actif in vitro contre Mycoplasma gallisepticum qui est résistant à la spiramycine. En ce qui concerne la toxicité pour les animaux, la demanderesse a découvert que dans un essai de toxicité aiguë avec des souris, aucune souris n'est tuée, même à une dose de 740 mg/kg en injection intraveineuse 20 (observation pendant 14 jours). En comparaison avec les antibiotiques connus, l'antibiotique XK-33-F2 est semblable aux antibiotiques du groupe de la viomycine, de la tubéractinomycine et de la tubéractinomycine N par les spectres infrarouges et ultraviolets, l'analyse élémentaire, la solubilité et les spectres anti-25 microbiens. Une comparaison plus détaillée est indiquée dans le tableau VI ci-après. Comme il ressort clairement des données du tableau VI ci-après, les valeurs de Rf de chromatographie en couche mince sur gel de silice avec les révélateurs 1 et 3 indiqués dans le tableau IV ci-après sont 30 évidemment différentes de celles de la viomycine, de la tubéractinomycine et —tZ 5 de la tubéractinomycine N. En outre, le pouvoir rotatoire ]_ de l'anti biotique XK-33-F2 est plus faible et il est différent de ceux des trois autres antibiotiques. En outre, l'analyse élémentaire de l'antibiotique selon l'invention indique une teneur en carbone plus faible que les antibiotiques 35 connus. De plus, l'activité antimicrobienne de la substance selon l'invention est plus faible que celle des trois autres antibiotiques et d'environ une fraction ou environ l/10e. Enfin, la toxicité de l'antibiotique selon l'invention est considérablement plus faible que celle des trois autres. 71 kl 62k 6 2120157 L'exemple sui-.ant illustre 1r ir.ver.tion sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 5 Dans cet exemple, en cultive ur.e souche de Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus ATCC 21.632 tout d'abord dans un milieu d'ensemencement contenant 2%. de gluccse, 0,1% d'extrait de levure, 0., 5% de peptone et 0,1% de CaC0_ (pH 7S2 avant stérilisation). On inocule le micro-organisme d'ensemencement au moyen d'une boucle en platine dans 30 ml dudit 10 milieu d'ensemencement dans une fiole d'Erlenmeyer de 250 ml et on effectue la culture avec agitation â 3G°C pendant 48 heures. On inocule 30 tr;l du bouillon de culture dfensemencement ainsi obtenu dans 300 ml d'un second milieu de culture d'ensemencement comprenant 2% de glucose, 2% de poudre de soja dégraissée et 0,1% de CaCO^ (pH 7,2 avant stérilisation) dans une 15 fiole d'Erlenmeyer de 2 litres munie de chicanes. On cultive le second milieu de culture d'ensemencement avec agitation à 30°C pendant 48 heures. Ensuite, on inocule 900 ml du second bouillon de culture d'ensemencement dans 17 litres du milieu de fermentation principal de même composition que le second milieu de culture d'ensemencement 20 dans une cuve de fermentation en verre de 30 litres. On effectue la culture à 30°C pendant 72 heures par le procédé d'aération avec agitation (300 tr/mns débit d'aération 15 1/mn). Après 72 heures de culture, il y a formation, dans le bouillon de culture des antibiotiques XK-33~F.,3 XK-33-F^ (substance semblable à la 25 destomycine A) et XK-SS-F^ (viomycine). Pour isoler les antibiotiques, en ajoute à 16 litres du bouillon de culture 1,5 kg d:un adjuvant de filtration du type Celite fabriqué par la Société Showa Chemical Industry., Ce., Ltd sous le nom de Radiclite 600, on agite pendant 15 mn et en filtre. On ajuste ensuite 11 litres du bouillon 30 de culture à pH 8 et on fait passer sur une colonne de 500 ml d'Amberlite 1RC-5G +• (forme NH^). Après lavage avec environ 3 licres d'eaus on effectue i!élution d'abord avec NH.OH 0,5 N et on obtient environ 3 litres d'éluat. Cette fraction H- contient la substance XK-33-F^ qui est un antibiotique semblable à la destomycine A. Ensuite, on élue encore avec HCl 0,5 N. On obtient d'abord 35 l'antibiotique XK-33-F2 dans la fraction d'élution de 150 à 200 ml et ensuite l'antibiotique XK-33-F^ dans la fraction d'élution de 450 à 850 ml. La substance XK-33-F^ est identifiée avec la viomycine. On ajuste la fraction 71 47624 7 2120157 de XK-33-F2 à pH 8 et or. fait passer sur une color_r.e de 10C ml de charbcr. actif. Le charbon actif est du type approprie pour la chromatographie, produit par la Société Wako Pure Chemical Industries Ltd. Or. élue ensuite la substance adsorbêe avec une solution de HC1 5 N dans le méthanol à 80'% après lavage avec 300 ml d:eau. On fait passer la fraction active sur une cclonne de 50 ml de résine Dcwex 1x2 (forme 0H ) fabriquée par la Société Dow Chemical Co. peur la neutraliser. Par lyophilisation, de la solution, on obtient er-viron. 1 g de poudre blanche de XK~ô2-F„. On disscut ensuite la poudre dans le métharoi tiède et on peut ebter.ir 1 antibiotique XK-33-F2 P1-*" par addition 0 da:étor.e. Les propriétés pbysiccchimiques et biologiques de la substance ïor.t celles déjà décrites précédemment. 71 47624 s 2120157 -- TABLEAU I- Milieu Croissance Mycélium dans le substrat , ® Myce1ium aérien Formation de mycélium aérien © Pigment soluble gélose extrait de levure extrait de malt bonne brun ©S (3hg) R (3hg) gris (b) modérée non gélose amidon bonne brun S (3ng) R (3ng) gris (d) modérée non gélose glycérol asparagine bonne brun jaunâtre S (2 le) R (2 le) crème verdâtre (2 ba) modérée non gélose de Czapek médiocre incolore gris (b) médiocre non gélose glucose asparagine modérée brun S (2 le) R (3 ng) crème (2 ca) médiocre brun (3 ne) gélose nutritive bonne brun S (3 ni) R (3 ni) gris (2 fe) modérée brun (3 ni) gélose glycérol malate de calcium bonne vert j aunâtre S (1 ea) R (1 ea) crème verdâtre (1 ba) médiocre non gélose pure médiocre incolore blanc (a) médiocre non gélose albumine d'oeuJ . médiocre incolore incolore médiocre non gélose Tyrosine modérée brun S (3 le) R (3 le) crème (2 ca) médiocre non gélose peptone glucose bonne brun verdâtre S (1 1/2 1 g) V. (2 li) gris verdâtre (1 de) modérée brun verdâtre (2 li) gélatine modérée brun verdâtre S (2 ni) R (2 ni) crème verdâtre ba) modérée brun 71 4762k 9 2120157 •TABLEAU I - (suite) Milieu Croissance m © Mycel mm dans le substrat © Mycélium aérien Formation de mycélium aérfen Pigment soluble lait modérée brun S (J 1g) R (3 lg) gris (b) médiocre pigment rougeâtre liqueur de Czapek modérée croissance dans le bouillon sous forme de petites sphères crème verdâtre crème verdâtre (1 ba) médiocre non cellulos de papier filtre modérée incolore non non ... pomme de terre : bonne gris S (2 ih) R (3 1ï) crème verdâtre (2 ta) modérée brun (4 li) gélose cellulose en poudre peptone de viande modérée brun verdâtre S (2 lg) R (2 lg) modérée non sérum de Loeffler bonne brun S (2 ie) R (5 pn) non ï brun noirâtre (4 ni) un peu seulement Remarques : (T) - Les indications entre parenthèses sont conformes à la classification des couleurs basées sur le Color Harmony Manual (Container Corporation of America) ; (2)' S : couleur de la sarface du mycélium de substrat R ; couleur de l:envers du mycélium de substrat. 71 k7 62k 10 212015/ -TABLEAU ÏI « Assimilation des sources de carbone Source de carbone Assimilation Source de carbone Assimilation glucose 4+ raffinose - fructose + mannitol - lactose _ rhamnose + arabinose - saccharose - inositol 44- mannose -H- glycérol ++ salicine - xylose TABLEAU III Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus Streptomyces olivoreticuli Streptomyces verticillatus Streptomyces luteoverticillatus gélose nutritive mycélium aérien gris mycélium aérien blanc grisâtre pas de mycélium aérien mycélium aérien blanc j aunâtre pomme de terre mycélium aérien crème verdâtre mycélium aérien crème verdâtre mycélium aérien vert jaunâtre lait de tournesol mycélium aérien gris, coagulation, peptonisation, pH alcalin coagulation, peptonisation, pH inchangé coagulation, peptonisation mycélium aérien brun,œagu-lation incertaine mais nette peptonisation cellulose décomposé non décomposé non décomposé réduction des nitrates négative négative positive assimilation des sources de carbone mannitol (-) lactose (-) mannitol (-) lactose (+) mannitol (+) lactose (-) production d'antibiotiques XK-33-F^, viomycintt (antibiotique voisin de la destomycine A) viomycine 4> "vj ON IV) -F> ro N> o y-± VJ1 VJ 71 k762k 12 2120157 TABLEAU IV - Révélateur Rf (1) 0,50 (2) 0,67 (3) 0S71 (1) Couche supérieure d'un mélange chloroforme-méthanol-ammoniaque aqueuse à 17 % (2:1*, 1) (2) Mélange d'acétate d'ammonium à 10 % et de méthanol (1:1) (3) Mélange d'acétate d'ammonium à 10%-acétone-ammoniaque aqueuse à 10 % (9:10:0,5). 71 47624 13 2120157 -TABLEAU V- Micro-organismes C/M (y/ml) Streptococcus faecalis ATCC 10541 Staphylococcus aureus ATCC 6538 P Staphylococcus aureus ATCC 209 P Staphylococcus aureus MS 537 Résistant à la streptomycine, à la tëtracycline, à la pénicilline G et au sulfonamide. Staphylococcus aureus S - 3192 Résistant à 1"érythromycine, à la kanamycine, à la paromomycine., à la streptomycine, à la tëtracycline, à la pénicilline G, au sulfonamide et à la néomycine. 1000 105 700 700 700 Bacillus subtilis n0 10707 26 Bacillus cereus ATCC 9634 44 Bacillus mycoides ATCC 9463 73 Sarcina lutea ATCC 9341 1000 Serratia marcescens ATCC 4003 > 700 Klebsiella penumoniae ATCC 10031 26 Neisseria catarrhalis ATCC 7900 210 Aerobacter aerogenes ATCC 13048 700 Escherichia coli ATCC 26 13 Escherichia coli (ECR.^) 200 Résistant à la streptomycine, à la kanamycine., à la néomycine, à la paromomycine, à la spectinomycine, à la tëtracycline et au chloramphénicol. Escherichia coli K-12 ML 1629 (ECR^) Résistant au chloramphénicol, à la kanamycine, à la tëtracycline et à la néomycine. 36 71 47624 14 2120157 TABLEAU V - (suite) Micro-organisnes C/M (y/ml) Escherichia coli ML 1878 (ECR0) o 36 Résistant à la streptomycine Escherichia coli ML 3306 (ECR^) 145 Résistant à la streptomycine, à la kanamycine, à la paromomycine et à la néomycine. Pseudomonas aeruginosa BMH n° 1 52 Paracolon sp. Abbott P-l ^100 Proteus vulgaris ATCC 6897 52 Proteus mirabilis Firland-9 I^IOOO Proteus morganii Jenkins Z>iooo Proteus rettgeri Booth 700 Shigella sonnei ATCC 9290 52 Salmonella typhosa ATCC 9992 26 Mycobacterium avium F (Shiga University) KB44 200 Mycobacterium phlei IFO 3158 13 Candida albicans ATCC 10231 > 1000 Aspergilus niger >1000 TABLEAU VI Valeur de Rf en chromatographie en couche mince sur gel de silice XK-33-F2 Viomycine 1 2 Tubéractinomycine 3 Tubéractinomycine N Révélateur (1) Révélateur (2) Révélateur (3) 0,50 0,67 0,71 0,12 0,67 0,36 0,12 0,67 0,58 0,12 0,67 Os58 Maximum d'absorption dans l'ultraviolet (Ef ) 1 cm 268T(348)H^)(HCl N/10) 283T(237.) (NaOH N/10) 268(339) (HC1 N/10) 280-281,5(219) (NaOH WîD) 268(310) (HO) 268,5(250) (HC1) 285,5(180) (NaOH) 268(342)(H20,HC1 N/10) 288(215) (NaOH N/10) Analyse élémentaire C (%) H N 33,28 5,51 21,73 (chlorhydrate, cendre 0,14 %) 41,75-42,81 6,35-6,99 25,78-24,96 35,64 5,96 17,14 (sulfate) 37,70 6,12 22,50 (Cl: 13,32) i~7 25 h,i D -12,4° (C=l, H20) (chlorhydrate) -33,5° (chlorhydrate) -31,5° (chlorhydrate) -19,1° (chlorhydrate) Réactions colorées Ninhydrine Sakaguchi KMn04 (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) Toxicité DL^q (souris, voie intraveineuse) >740 mg/kg 240 mg/kg 183 mg/kg 385 mg/kg VJ -C" ■VJ ON ro IV) »-* l>0 o t-* U1 Vi Références - 1 : I.J. Friedman: U.S.Patent 2.827.417 (1958) 2 : A. Nagata et al: J.Antibiotics 21, 681 (1968) 3 : Takuji Ando et al: 175ème"Meeting of antibiotic-study"(25 septembre 1970) 71 k762k « 2120157 REVENDICATIONS 1. Procédé pour la production d'un nouvel antibiotique dénomme XK-33-F23 caractérisé en ce que l'on cultive une souche de micro-organismes du genre Streptomyces capable de produire ledit antibiotique dans un milieu nutritif contenant une source de carbone et une source d'azote jusqu'à accu- 5 mulation dudit antibiotique dans ledit milieu nutritif et on sépare et on recueille ledit antibiotique. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le micro-organisme est Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus ou un de ses mutants. 10 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que ledit micro-organisme est Streptomyces clivoreticuli var. cellulophilus ATCC 21.632. 4. Nouvel antibiotique produit par fermentation de Streptomyces olivoreticuli var. cellulophilus ATCC 21.632 dans un milieu 15 r.utritifs ledit antibiotique étant caractérisé en ce que son chlorhydrate donne l'analyse élémentaire suivante C : 33,28%, H : 5,51%, N : 21,73% et - —25 qu'il présente une rotation spécifique ]_ a_/ de -12,4° (C = 1, ^0) .