Brevet FR2134088A1 — publié le 19721208

La présente invention se rapporte à un procédé qui permet l'obtention d'un extrait de lobe oculaire à partir de l'oeil de bovidés, extrait à efficacité élevée, destiné à la thérapeutique ophtalmologique et pouvant être également utilisé comme stimulant général. On connaît depuis longtemps des procédés et des extraits de tissus, comme ceux de foie et de pancréas, ayant une action limitée sur un groupe restreint d'affections et, ces dernières décennies, l'extrait de placenta, utilisé comme agent thérapeutique non spécifique. L'extrait de placenta est un extrait aqueux; pour l'obtenir, on laisse le placenta à l'autolyse, à la température de - l jusqutà - 40 C, on triture ensuite le placenta jusqu'à ce qu'il ait la consistance d'une pâte; on mélange celle-ci avec de l'eau; après avoir maintenu la suspension pendant quelque temps, d'abord à la température ambiante, puis à 700 C, on filtre plusieurs fois à l'aide de papier-filtre, jusqu'à ce que le filtrat devienne limpide et que sa teneur en albumine ne dépasse pas 0,06 7; on introduit alors le filtrat dans des flacons ou des ampoules et on stérilise par tyndallisation à une température ne dépassant pas 700 C; on conserve ensuite les récipients au froid. On fait également un examen bactériologique. Dans une autre variante du procédé, le placenta trituré est conservé au froid pendant un jour et le premier filtrat est porté pendant une heure à 100Q C; après refroidissement, on reprend la filtration; dans le filtrat final, limpide, on ajoute du chlorure de sodium, on introduit le filtrat dans des ampoules et on le stérilise par tyndallisation. Un procédé plus récent aboutit à l'obtention d'un extrait alcoolique de placenta, présenté comme plus riche en stimulants, contenant seulement des traces d'albumine et qui est obtenu limpide, d'une manière facile et qui ne dépose pas de sédiments, tout en étant plus actif et mieux toléré par les patients. Dans ce procédé, le placenta est soumis à l'autolyse; dans ce but, on coupe en morceaux le placenta et on le hache au hachoir; on submerge le achis dans de l'alcool et on laisse reposer pendant 12 heures; on décante ensuite l'alcool et on filtre; on laisse évaporer le filtrat au bain-marie; on solubilise le résidu avec autant de cm3 d'eau que de grammes de placenta utilisés; on filtre à nouveau; on introduit le filtrat limpide et on stérilise rapidement à l'autoclave pendant une heure.La littérature de spécialité montre que cet extrait de placenta a été utilisé avec de bons résultats dans la thérapeutique ophtalmologique. Après une série d'extraits partiels de globe oculaire, on a obtenu, il y a plus d'une décennie, un extrait de globe oculaire dont on a étudié l'action sur la glycémie et la cholestérolémie, en administration intraveineuse. On a réalisé ensuite un extrait alcoolique total de globe oculaire par un procédé similaire à celui utilisé pour l'extrait de placenta ci-dessus mentionné. Le procédé a consisté dans le prélèvement des globes oculaires, leur passage au hachoir, l'extraction du hachis par 2 à 3 parties d'alcool officinal qu'on laisse reposer pendant un jour, la filtration de l'extrait, sa concentration et son évaporation à sec, la dissolution dans l'eau et le conditionnement de l'extrait à raison de 1 ml-par gramme de globes préparés, la filtration répétée pour obtenir un liquide limpide, lipoidique, dépourvu de fractions protéiniques et ne présentant pas de culot. L'extrait a été examiné du point de vue biologique et dans la thérapeutique ophtalmologique, seul ou associé à d'autres traitements spécifiques et étiologiques.L'extrait a été administré quotidiennement en injections sous-conjonctivales, ou sous-cutanées, en série de 10 à 12 injections de 0,5 cm ou 1 cm ou mixte. On l'a également administré en instillations et applications locales de l'extrait. La présente invention se rapporte à un procédé amélioré qui permet l'obtention de l'extrait total de globe oculaire à partir de l'oeil de bovidés, destiné à la thérapeutique ophtalmologique et pouvant être également utilisé comme stimulant général, procédé qui, dans le but d'obtenir un produit plus riche en substances biologiquement actives et à efficacité augmentée, soumet leB globes oculaires lavés, en vue de les séparer des tissus adhérents, à un lavage avec de l'eau renfermant du merthiolate à raison de 1 : 10.000 et à un processus d'autolyse pendant 4 jours à une température de O à + 4 C, l'extrait alcoolique étant obtenu à l'aide de 2 ml d'alcool officinal pour 1 gramme de hachis de globe oculaire, l'extacion s'effectuant par agitation mécanique pendant 6 heures, suivie d'une période de repos de 24 heures, la filtration de l'extrait de hachis étant effectuée d'abord au pressoir, puis sur une toile dense, et répétée 4 à 5 fois sur du papier-filtre; la concentration de l'extrait s'effectue jusqu a siccité partielle, sous vide à la température maximum de 52 C pour séparer l'alcool et une partie de l'eau, jusqu'à l'obtention d'une consistance pâteuse et ensuite, après le mélange du concentré à 10 7 de célite, à 90 - 100 C, jusqu a siccité, opération terminée par l'élimination des traces d'eau à l'exsicateur, en présence d'absorbants compacts; l'extrait sec, vérifié en ce qui concerne l'absence des albumines, est ensuite dissous dans l'eau en plusieurs étapes avec séparation à chaque étape du culot de sédimentation par centrifugation, jusqu'au lavage complet de la célite; le conditionnement, en tant que médicament, de l'extrait se réalise en calculant, par le facteur de convection 0,8, l'équivalent de 1 ml d'extrait par gramme de hachis. On donne ci-dessous un exemple d'application du procédé selon l'invention. Immédiatement après l'abattage de l'animal ou dans un intervalle de 30 minutes au maximum, on prélève les globes oculaires que l'on met dans des récipients contenant une solution aqueuse de merthiolate de sodium titrant 1 : 10.000. Les globes oculaires seront prélevés sur des bovidés sains, sacrifiés à l'abattoir pour l'alimentation de l'homme. Les globes oculaires devront être sains, sans vices de conformation congénitaux, On collecte environ 550 à 600 globes oculaires à la fois. Les globes oculaires collectés seront immédiatement traités. Au moyen de ciseaux, on sépare les tissus adhérents au globe oculaire (graisse, muscles, etc...). On pèse la masse obtenue; on la lave avec de l'eau renfermant du merthiolate à raison de 1 : 10.000 et on l'introduit dans des récipients émaillés munis de couvercle, qui sont conservés à la chambre frigorifique, à la température de O à + 4" C pendant 4 jours. On lave avec de l'eau distillée froide les globes oculaires autolysés, on les sectionne avec des ciseaux et on les introduit dans un hachoir. On collecte le hachis résultant et on le pèse.0n ajoute deux volumes d'alcool éthylique 96" pour une partie de hachis, exprimée en poids, en log.; on agite mécaniquement pendant 6 heures, à la température ambiante et on laisse au repos pendant 24 heures. On introduit dans un pressoir la suspension de l'extraction alcoolique et on presse. On filtre le liquide obtenu au travers de sacs de toile dense. On filtre le filtrat brut sur du papier-filtre, successivement sur une batterie de 4 ou 5 entonnoirs. On homogénéise le filtrat collecté et on l'introduit ensuite dans une installation de concentration sous vide en le concentrant et en collectant l'alcool distillé. Après la fin de la distillation alcoolique, on continue la distillation sous vide à 40-50" C, jusqu a ce que le produit ne distille plus. On obtient une masse brun foncé, pareille à une pâte, pesant environ 150-200 g. On introduit le concentré obtenu par l'extraction alcoolique dans une cap sule en porcelaine, on mélange à 10 % de célite et on fait sécher ensuite à 90-100 C, jusqu'à l'obtention d'une masse cassante. On continue le séchage à l'exsicateur, sous vide sur du chlorure de calcium anhydre. On effectue ensuite l'analyse dans 0,10 g de concentré et triture avec 10 ml d'eau distillée. On filtre. Le filtrat devra être limpide ou faiblement opalescent et ne pas précipiter lorsqu'on y ajoute une solution d'acide sulfosalicylique. Dans le cas contraire, on continue le séchage du produit. Dans étape suivante, on fait dissoudre par trituration le concentré sec dans environ deux litres d'eau distillée. On centrifuge pendant 15 minutes. On collecte le surnageant. On introduit le sédiment dans un mortier avec de l'eau distillée et on centrifuge à nouveau. On répète l'opération 3 ou 4 fois, jusqu'à ce que le sédiment soit presque exclusivement formé de célite. On introduit les surnageants collectés, avec de l'eau distillée, dans le volume calculé, en appliquant la formule suivante S = C x 0,8 dans laquelle S = quantité en millilitres de produit sous forme de soluté injectable; C = quantité en grammes de globes oculaires autolysés; 0,8 = coefficient de compensation des pertes technologiques. On filtre les surnageants collectés et complétés au volume calculé sur un filtre Seitz, à plaque EKS, et on répète la filtration jusqu'à l'obtention d'un filtrat limpide ou très faiblement opalescent. Pendant la filtration, on manipule aseptiquement la solution pour la garder entre O et + 40 C dans des flacons bien bouchés. On soumet l'extrait alcoolique limpide obtenu à l'analyse de liteau et on l'introduit ensuite dans des ampoules de 1 mî. Le produit obtenu est un activateur des processus biologiques et un stimulateur général des fonctions biologiques de l'organisme; il augmente la résistance envers les agents pathogènes et contribue à la guérison des affections oculaires, en intensifiant les processus de régénération de l'oeil et de l'or anisme en général. Le lavage des globes oculaires avec de l'eau renfermant du merthiolate à raison de 1 : 10.000 a été introduit dans ce procédé pour éliminer les bactéries des globes oculaires, à la suite des opérations de prélèvement effectuées dans les conditions spécifiques de l'abattoir. L'opé~ation d'autolyse augmente, dans les globes oculaires, la teneur en biostimtlateursaccessibles à l'extraction, en les rendant favorables à leur administration en thérapeutique. Quant à l'extraction alcoolique, l'augmentation et la modification des biostimulants sont favorisés par la température de O à i 42 C pendant 4 jours. Pour l'extraction alcoolique du hachis, en proportion de 2 ml/g, on a trouvé nécessaire de recourir à une agitation mécanique pendant 6 heures, dans une première étape qui disloque en cellules les parties actives susceptibles d'être solubilisées; dans l'étape suivante, ces parties diffusent du tissWdans le liquide alcoolique. De cette manière, on augmente la quantité d'extrait sec pur obtenue par gramme de hachis. Pour la filtration au pressoir, on a trouvé utile d'employer une toile dense qui retient la plupart des suspensions solides; on facilite ainsi la filtration des suspensions fines qui s'effectue plus vite au cours de la série de filtrations sur papier-filtre. La concentration jusqu'à siccité de l'extrait est réalisée, dans la premire étape, sous vide et à une température qui ne doit pas dépasser 52 C; l'alcool éliminé pourra ainsi être récupéré; l'opération se déroule beaucoup plus vite et à une température qui abaisse à un minimum l'inactivation des biostimulants, sous l'action de la température et de la durée de son application, ainsi que par leur isolation de l'action oxydante de l'atmosphère. Dans le même but, le concentré, sous forme de pâte, obtenu sous vide, est seché à siccité par son mélange à la célite qui lui confère une porosité augmentée et, par conséquent, une perte rapide du restant d'humidité. La température de 90 - 100" C, de courte durée, utilisée dans la dernière étape, fait coaguler le restant de protéines de l'extrait. Enfin, pour une bonne qualité de l'extrait, on a trouvé utile, dans une troisième étape, d'éliminer les traces d'eau, dans l'exsicateur, en présence des absorbants. Pour vérifier l'absence des albumines, qui pourraient provoquer des chocs anaphylactiques, on a introduit leur contrôle par l'essai bien connu à l'acide sulfosalicylique. La dissolution de l'extrait, qui se trouve sur un substrat de célite, a exigé plusieurs solubilisations, suivies de séparations par centrifugation, ayant pour but l'extraction totale des principes existant sur le substrat, sans que la solution contienne des suspensions mécaniques nuisibles. Lors du conditionnement, on a introduit le facteur de correction 0,8 pour compenser les pertes technologiques du hachis au cours des différentes opérations du procédé et à la suite des mesures technologiques; de cette manière, l'extrait conditionné est calculé effectivement aux équivalents indiqués de 1 ml/g de hachis. L'extrait total de globe oculaire préparé selon l'invention est utilisé dans la thérapie ophtalmologique, à savoir : chorio-rétinite myopique, asthénopie oculaire, dans toutes ses formes, opacités du corps vitré, iritis et iridocyclites, ulcères de la cornée, etc... Dans ces traitementS on utilise quotidiennement une ampoule de 0,5 cm en injection conjonctivale, pendant 3 10 à 12 jours, ou alternativement, chaque jour une ampoule de 1 cm en injec- tion sous-cutanée, pendant 24 jours. L'extrait peut être également utilisé en instillations, compresses et bains oculaires. L'extrait total de globe oculaire préparé selon l'invention est supérieur à celui déjà connu, préparé aussi à partir d'un extrait alcoolique, par les caractéristiques suivantes : il augmente l'adaptation rétinienne chez les patients atteints d'artériosclérose dans une proportion plus élevée; il diminue la période de résorption des épanchements sanguins, spontanés ou après les traumatismes dans le corps vitré; dans les complications de la myopie forte, il améliore la fonction visuelle et la maintient comme telle longtemps; il favorise la cicatrisation des plaies cornéennes et, en général, conduit à l'atténuation plus rapide des phénomènes inflammatoires post-traumatiques; dans la cataracte débutante, il arrête la progression des lésions et, dans certains cas, produit la résorption des opacités; il a une action marquante dans le glaucome chronique avec lésions dégénératives du nerf optique ainsi que dans la rétinopathie musculaire sénile. L'extrait total de globe oculaire selon l'invention donne des résultats nettement supérieur à l'extrait d'aloès et à l'extrait de placenta, dans toutes les affections où ces produits tissulaires sont recommandés. REVENDICATIONS 1.- Procédé amélioré pour l'obtention d'un extrait total de globe oculaire partir de ltoeil de bovidés, destiné à la thérapeutique ophtalmologique et à être utilisé étalement conne stimulant général, qui se prépare en prélevant les globes oculaires en séparant les tissus adhérents, en hachant les globes oculaires, en effectuant leur extraction au moyen de l'alcool, en filtrant l'extrait obtenu à partir du hachis, en concentrant et en obtenant un extrait sec, en dissolvant, en conditionnant et en stérilisant ltextrai , caractérisé par le fait que, dans le but d'obtenir un produit enrichi en substances biologîquement actives et à efficacité augmentée, on soumet les globes oculaires, séparés des tissus adhérents, à un lavage avec de l'eau renfermant du mcrthiolate à la concentration de 1 : 10.000 et à un processus d'autolyse pendant 4 jours, à une température comprise entre O et - 4 C, l'obtention de l'extrait alcoolique s'effectuant avec 2 ml d'alcool officinal par gramme de hachis de globe oculaire, l'extraction étant effectuée d'abord par agitation mécanique pendant 6 heures, suivie d'une période de repos de 24 heures, la filtration de l'extrait de hachis étant d'abord effectuée au pressoir, ensuite sur une toile dense, puis 4 à 5 fois sur du papier-filtre, la concentration de l'extrait s'effectuant jusqu'à siccité partielle, sous vide, à une température qui ne doit pas dépasser 520 C pour éliminer l'alcool et une partie de l'eau, jusqu'à l'obtention d'une consistance pâteuse et ensuite, après le mélange du concentré avec de la célite à raison de 10 7, à 90 - 100-C, jusqu'à siccité, séchage complété par l'élimination des traces d'eau dans l'exsicateur, en présence d'absorbants compacts, après quoi l'extrait sec, contrôlé quant à l'absence des albumines, est dissous dans l'eau en plusieurs étapes avec la séparation à chaque étape du sédiment par centrifugation jusqu'au lavage complet de la célite, l'extrait étant enfin conditionné comme médicament renfermant autant de grammes de hachis que de millilitres d'extrait multiplié par le facteur de correction 0,8. 2.- A titre de médicament, l'extrait obtenu par la nise en oeuvre du procédé selon la revendication 1.