Brevet FR2120033A1 — publié le 19720811

•71 46806 1 2120033 Il est connu que divers composés chimiques peuvent être utilisés pour inhiber le développement de microorganismes tels que des levures et des moisissures. Bien qu'il soit désirable de disposer d'un agent chimique unique capable d'inhiber la crois— 5 sance de tous les micro organisme s indésirables, un tel agent chimique n'est pas disponible. Par conséquent, pour inhiber et combattre efficacement des infestations de ces microorganismes,-la pratique a consisté à combiner plusieurs agents chimiques pour obtenir le résixltat désiré. 10 Ces mélanges d'agents chimiques attaquent souvent avec succès ces microorganismes. Toutefois, des réactions secondaires peuvent se développer par suite de la sensibilité à l'un ou plusieurs des agents chimiques contenus dans le mélange. De même,, il peut se développer des souches de levures et moisissures 15 qui résistent aux agents chimiques utilisés de façon répétée dans leur traitement, ce qui réduit ou supprime les capacités dîinhibition de ces agents chimiques. L'invention concerne une nouvelle série de composés chimiques et un procédé nouveau pour inhiber le développement de 20 microorganismes. l'invention concerne aussi un procédé de préparation de ces nouveaux composés. Elle a plus particulièrement trait à une série de dérivés de flavanone qui se sont montrés particulièrement intéressants à utiliser pour inhiber le développement de levures et de moisissures telles que Trichophyton 25 mentagrophytes et Candida albicans» Les composés de l'invention peuvent être représentés par la formule générale t 1 2 dans laquelle R est un atome d'hydrogène, R est un groupe OH ou 71 46806 2 2120033 1 2 O-acyle inférieur, ou bien E et S s*associent pour former 3 un atome d'oxygène, R est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, R^ est un atome d,hydrogène ou un groupe 2 *5 alkyle inférieur, ou bien ER R est un radical hétéro cyclique 5 hexagonal, X est un atome d'halogène, un groupe alkyle inférieur ou alkozy inférieur et Y est un halogène, un groupe alkyle inférieur ou alkoxy inférieur. De préférence^ conformément à l'invention, les groupes acyle inférieurs, alkyle inférieurs et alkoxy inférieurs comprennent 1 - à 5 atomes de carbone. les radi-10 eaux hétérocycliques sont- avantageusement choisis entre les radicaux morpholino, pipéridino, pipérazino et les noyaux hexagonaux analogues. L'halogène renfermé dans cette structure est choisi avantageusement entre le chlore, le brome et le fluor» Les composés de l'invention peuvent être préparés con-15 formément à une série de réactions chimiques dans lesquelles les produits finals pëiiyent être sélectivement séparés du mélange réactionnel ou soumis à une réaction ultérieure sans séparation.,, pour former d'aut'r-es produits finals. Cette séquence commence par une réaction de Mannich, impliquant une flavanone, le formal-20 déhyde et une aminé primaire, secondaire ou tertiaire. La flavanone substituée en position 3 que l'on obtient peut ensuite être séparée, ou bien la réaction peut être poursuivie par une réduction de ce produit en présence d'un catalyseur convenable pour former un flavane-4-ol substitué en position 3. Ce produit final 25 peut être séparé, le cas échéant, ou bien on peut le laisser en solution et on peut l'acyler pour former un 3-aminoalkyl-4-acyloxyflavane. L'un quelconque des produits finals indiqués ci-dessus peut être amené à réagir conformément à des procédés connus pour former des sels d'addition d'acides et, de préférence, 30 des sels d'addition d'acides acceptables du point de vue pharma— cologique. Cette synthèse peut être illustrée par Inéquation chimique suivante î COPV 71 ^6806 3 2120033 ' COPY 71 46806 4 2120033 Dans cette équation, Z et W désignent des halogènes qui peuvent être identiques ou différents et m est un nombre entier de 1 à 4» Le développement de microorganismes est efficacement 5 inhibé, conformément au procédé de 1*invention, par exposition du microorganisme à un composé choisi dans le groupe décrit ci-dessus. Le mode dtinhibition de ltorganisme n^est pas considéré comme déterminant et dépend de la nature de cet organisme, de la zone dTinfestation et de l'hôte qui en est affecté. 10 Typiquement, l1inhibition peut être obtenue par application locale de composés de 1*invention. Dans d*autres cas, on peut obtenir une action systémique avec une forme posologique orale ou injectable* Ces composés peuvent être incorporés dans des poudres, des onguents, des lotions, des crèmes, des solutions, 15 des suspensions, des suppositoires ou d*autres formes qui con-viennen-typour le contact avec le micro-organisme-* La quantité requise de composés actifs pour le traitement dTune infestation peut varier conformément à l*état du micro organisme,, à lTam-pleur de 1*infestation et à la sensibilité du microorganisme 20 aux composés de la présente invention. On donne cl—après quelques exemples préférés de synthèse des composés de IHnvention. Exemple 1 Chlorhydrate de 3-(4-morpholinylméthyl)flavanone 25 On chauffe au reflux un mélange de 112,1 g (0,5 mole) de flavanone, 61,6 g (0,5 mole) de chlorhydrate de morpholine, 31,6 g (1 mole) de paraformaldéhyde à 95 250 ml de 2-propanol et 25 gouttes dtacide chlorhydrique concentré. Au bout d'environ 15 minutes, la majeure partie de la matière solide sTest dis-30 scute. Des cristaux commencent alors à se former et au bout de 5 à 10 minutes, un précipité abondant est présent. On refroidit le mélange et on le dilue avec de lléther anhydre. On recueille le sel, on le lsve à l'étirer et on le sèche. On agite la substance brute pendant 10 minutes avec 500 ml de 2-propanol bouillant. 35 La majeure partie de la matière solide reste non dissoute. On sépare le sel de couleur blanche du mélange chaud par filtration et on le lave avec du 2-propanol. On obtient 88,3 g de produit copy' 71 46806 2120033 fondant à 172-173°C. Le filtrat et les liqueurs de lavage sont concentrés par évaporation et le résidu est dilué avec de l'éther anhydre. La substance solide ainsi obtenue est mélangée avec 200 ml de 5 2-propanol chaud* La substance solide insoluble est recueillie et lavée au 2-propanol* On obtient une seconde récolte de 17j2 g de cristaux blancs du sel fondant à 171-172DC. .Le rendement total est de 105*5 g« Analyse : HC1 i° ¥(basique) "fo U(total) $ 10 Calculé pour C^H^MyHCl : 10,13 3,89 3,89 Trouvé t 10,05 3,89, 3,89 Exemple 2 Chlorhydrate de 3-fdiméthylaminométhyl)flavanone On chauffe au reflux pendant une heure un mélange de 15 44,9 g (0,2 mole) de flavanone, 16,3 g (0,2 mole) de chlorhydrate de diméthylamine, 9»5 g (0,3 mole) de paraforttaldéhyde à 95 f0t 100 ml de 2-propanolét 10 gouttes d'acide chlorhydrique concentré. Ensuite, on introduit encore 4,8 g (0,15 mole) de pa-raformaldéhyde en rinçant avec 25 ml de 2-propanol et on con-20 tinue de chauffer pendant 2 heures. Le solvant est chassé par distillation sous pression réduite et le résidu sirupeux est agité par secousses avec 150 ml d'éther et 150 ml d'eau. La portion aqueu.se est séparée et traitée avec un excès de carbonate de potassium* La base libre siru-25 peuse est reprise dans l'éther et l'extrait est séché sur du sulfate de magnésium. Après séchage, on traite la solution dans l'éther avec un excès de solution de gaz chlorhydrique dans l'éther. On lave par décantation avec de l'éther le sel poisseux qui se sépare. Le sel brut est dissous dans de l'acétate éthylique chaud 30 et la solution est clarifiée par filtration. On obtient le sel en cristaux blancs par concentration par évaporation et dilution avec de l'éther anhydre. Rendement i 14,6 g j point de fusion i 165-166°C (décomposition). AtipI yse î HC1 fo ÎT(basique) $ U(total) 35 Calculé pour C18HigN02.HCl i 11,47 4,41 4,41 Trouvé t 11,33 4,35 4>42 COPY 71 46806 6 2120033 Exemple 3 3-(digéthylaminométhyl)flavane-4-ol On agite par secousses sous pression initiale d'hydrogène de 22î5"Eg't un mélange de 13g (0,043 mole) de chlorhydrate de 5. 3-(diioétbylaminométhyl)flavanone (voir exemple 2), 0,2 g d'oxyde de platine, utilisé comme catalyseur et 200 ml de méthanol. On agite le mélange par secousses pendant environ 16 heures et on note l'absorption d'une quantité d'hydrogène légèrement supérieure à la quantité théorique requise pour réduire le groupe 10 carbonyle« On sépare le catalyseur par filtration et on le lave avec du 2-propanol. Ensuite, on citasse les solvants du filtrat et des liqueurs de lavage par distillation sous pression réduite« On reprend le résidu sirupeux dans 200 ml dteau et on lave la solution par agitation par secousseq4vec un peu d,éther« la 15 base libre est libérée par addition de carbonate de potassium en excès» la substance solide est recueillie, lavée à l'eau et recristallisée dans de l'éthanol aqueux. Rendement : 9,8 g j point de fusior. î 157-158°C« Analyse î ÏT(basique) i<> ïT(total) $ 20 Calculé pour 0J[^2]S02 î - 4,94 4,94. Trouvé î 4,91 4,96 Exemple 4 Chlorhydrate de 3~(diméthylaminométhyl)flavane-4-ol On dissout la base libre (12,5 g) préparée conformément à 25 l'exemple 3 dans 100 ml de 2-propanol chaud et on ajoute un excès de solution de gaz chlorhydrique dans ltéther. Ensuite, on dilue le mélange avec de l'éther anhydre. On recueille le sel, on le lave à l'éther et on le recristallise dans un mélange de méthanol et de 2-propanol, On obtient 12,3 g de cristaux 30 blancs. Le filtrat et les liqueurs de lavage sont concentrés par évaporation et dilués avec de l'éther anhydre, ce qui donne un supplément de 1,2 g du sel. Rendement î 13,5 g J point de fusion % 224-225°C. Analyse : HC1 ÏT(basique) °/o ïf(total) / 35 Calculé pour 01 gH^lTO^ECl î 11,40 4,38 4,38 Trouvé î 11,30 4*27 4,42 | COPY 71 46806 2120033 Exemple 5 3- ( 4-r:;o'"n]".olin7'lmdi'hyl) flavar.g-4-ol On agite par secousses, sous pression initiale dThydrogène de 22,5 kg, un mélange de 16,0 g (0,045 mole) de chlorhydrate 5 de 3-(4^c^pholinylméthyl)flavanone (voir exemple 1 ) , 0,2 g d1oxyde de platine (catalyseur) et 200 ml de méthanol. Après agitation par secousses pendant 24 heures, on note 1*absorption d'une quantité d*hydrogène légèrement supérieure à la quantité théorique requise pour réduire,le groupe carbonyle* le catalyseur 10 est séparé par filtrat-ion et lavé au 2-propanol. le solvant est chassé du filtrat et des liqueurs de lavage par distillation sous pression réduite, le résidu sirupeux est repris dans 200 ml d'eau et la solution est lavée par agitation par secousse§4vec un peu dréther. On ajoute ensuite un excès de carbonate de po— 15 tassiua. On recueille la base libre solide, on la lave à lIeau et on la recristallise dans de l!éthanol aqueux. Rendement t 11,0 g j point de fusion : 182-183 °C. Analyse t • ÏT(basique), fi ISr(total), fi Calculé pour C^H^HO^ î 4,31 4,31 20 Trouvé ; 4*25 4y33 Exemple 6 Chlorhydrate de 3-(4-moi'pholinylméthyl)flavane-4-ol. On dissout 10,5 g de la base libre préparée dans ltexemple 5 dans 300 ml de 2-propanol bouillant, et on ajoute un excès -de 25 solution de gaz chlorhydrique dans le 2-propanol» Ensuite, on concentre le mélange par évaporation. On recueille les cristaux blancs qui se forment pendant le refroidissement et on les lave avec du 2-propanol» Rendement ï 9,1 g J point de fusion t 205-206°C (décomposition). 50 Analyse t HC1 fio ÏT(basique), fi ÏT(total)y$ Calculé pour C^H^ïFO^.HCl î 10,08 3,87 3,87 Trouvé s 9,95 3,84 3,89 Exemple 7 Chlorhydrate ce 3~(4~ttorpholin7~lgiéthyl)~4--pro"Pionoxyflavane 35 On dissout 14,9 g (0,046 mole) de 3-(4-morpholinylméthyl)- flavane-4-ol (voir exemple 5) dans 100 ml de chloroforme et on ajoute 8,5 g (0,092 mole) de chlorure de propionyle» la solution sT échauffe sensiblement. .Après refroidissement du mélange à la COPY 71 46806 " 2120033 température ambiante, on le chauffe au reflux modéré pendant deux heures. On chasse le solvant par distillation sous pression réduite et on dissout le résidu solide dans de l'éthanol aqueux. On clarifie le mélange avec du carbone et on chasse la majeure partie de 5 l'éthanol par évaporation, les cristaux qui se forment pendant le refroidissement sont recueillis et lavés à l'eau. On recueille un sel de couleur beige. Rendement î 10,0 g j point de fusion : 192-193°C. Analyse i HC1 fi ÏT(basique) , fi ÏT(total) ,7° 10 Calculé pour C^H^TO^ECl : 8,72 3r35 3 *-3 5 Trouvé î 8,57 3,39 3y35 l'évaluation pharmacologique a été effectuée dTaprès les exemples suivants t Exemple 8 15 l'aptitude des composés de l*invention à inhiber le développement de Trichophyton mentagrophytes est déterminée de la façon suivante î On prépare une suspension de spores et on la normalise de manière qu'elle contienne environ un million de spores par 20 millilitre, dans une solution saline k 0,9 fi« On prépare une série de tubes contenant 0,9 ml de dilutions en série (facteur de dilution égal à 2) du composé à expérimenter dans du bouillon de Sabouraud et on ajoute 0,1 ml de la suspension indiquée ci-dessus, le bouillon de Sabouraud a la composition suivante, 25 exprimée en grammes par litre d'eau distillée, TABLEAU I Produit de digestion pancréatique de la caséine 5*0 Produit de digestion peptique d'un tissu animal 5,0 Dextrose 20,0 30 pH final de 5*7 + 0,1. la gamme de dilution en série va en diminuant depuis 50 microgramines par millilitres0 On fait incuber les tubes à 37°C et on note la présence ou l'absence de développement aux intervalles de temps indiqués sur le tableau II. 35 On choisit comme limite inférieure le tube dans lequel la croissance est totalement inhibée, comme l'indique l'absence de trouble. Des tubes témoins contenant des antibiotiques nor' COPY 71 46806 9 2120033 maux et des tubes ne contenant pas de substances inliibitrices sont inclus à des fins de comparaison. TABLEAU II Composé Concentration inhibitrice minimale» jig/ml Temps (heures) 24 ; 48 72 96 Chlorhydrate de 3-(4*-morpho-linylméthyl)-flavanone (composé A) 12,5 25 50 >50 Chlorhydrate de 3-(diméthyl~ aminométhyl)flavanone (composé B) .10 20 30 Chlorhydrate de 3-(diméthyl-aminométhyl)-flavane-4-ol (composé C) 25 50 La concentration ihhibitrice minimale de la griséofulvine' pour cette concentration des spores, au bout de 72 heures, est de 1,9-2,1 ]ig/ml« • L*effet observé dans cet exemple démontre que les composés de l'invention sont des inhibiteurs efficaces du développement de microorganismes. Ce résultat est confirmé par la comparaison de la concentration ihhibitrice minimale de ces composés avec celle de la griséofulvine qui est très utilisée en thérapeutique. Exemple 9 L,aptitude des composés de ltinvention à inhiber le développement de Candida albicass est déterminée de la façon suivante» On prépare une suspension de cellules et on la nor- environ malise de manière qufelle contienne/1 000 000 de cellules par millilitre dans une solution saline à 0,9 vf° «On ajoute 0,1 ml de cette suspension à une série de tubes contenant chacun 0,9 ml de dilutions en série (facteur de dilution égal à 2) du composé expérimenté dans du bouillon 1,Eugon", ayant la composition suivante, exprimée en grammes par litre d'eau distillée* ' COPY 71 46806 10 2120033 MISAT III Produit de digestion pancréatique de la caséine 1 5,0 Produit de digestion par la papaîne 5 de la -farine de soja 5,0 Chlorure de sodium 4,0 Sulfite de sodium 0,2 L-cystine 0,7 Dextrose 5,5 10 pH final 7,0 +0,1 la gamme de dilutions en série va en diminuant depuis 50 \ig par ml. On fait incuber les tubes à 37°C et on observe la présence ou lrabsence de développement aux intervalles de temps indiqués sur le tableau IY» On choisit comme limite inférieure 15 le tube dans lequel le développement a été complètement inhibé, comme l*indique l'absence de trouble* Des tubes témoins contenant des antibiotiques normaux et des tubes, ne contenant pas de substances ihhibitrices sont inclus à des fins de comparaison. TABLEAU TV 20 Composé Concentration inhibitrice minimale, jj-g/tol Temps (heures) 24 48 72 96 A 25 B . C La concentration inhibitrice minimale de la nystatine pour cette concentration des cellules au bout de 72 heures est de 2-10 jig/mi. 30 Les effets observés dans cet exemple démontrent que les composés de l'invention sont des inhibiteurs efficaces de la croissance de microorganismes. Ceci est vrai en particulier lorsque la concentration inhibitrice minimale des nouveaux composés est comparée avec celle de la nystatine très utilisée 35 es. thérapeutique. Exemple 10 La toxicité orale des composés de la présente invention est déterminée par administration de ces composés à des 12 12 12 12 10 10 20 42 42 50 ! COPY 71 46806 2120033 rats» Des groupes de rats sont choisis au hasard et on leur administre respectivement, par voie orale, des doses progressives des nouveaux composés dans une solution saline. Après l'administration, on observe les effets secondaires et les effets mortels 5 produit-s_sur les animaux. D'après les cas mortels observés, on calcule une dcse (dose à laquelle la mort survient chez 50 fi des animaux expérimentés), cette dose étant indiquée sur le tableau Y. Un groupe témoin de rats reçoit une quantité correspondante de solution saline, 10 Exemple 11 composés lorsqu'ils sont administrés par voie intrapéritonéale. Des groupes de souris sont choisis au hasard et reçoivent, respectivement, par voie intrapéritonéale, des doses progressives 15 des nouveaux composés dans une solution saline. On administre une quantité égale de solution saline à un groupe de souris, servant de témoins. Après l'administration, on observe les effets secondaires et les effets mortels produits sur les animaux* D'après les effets mortels observés, on calcule une dose DL^ 20 indiquée sur le tableau Y, On détermine chez des souris la toxicité de ces Composé TABIEAU Y Rat - administration orale Souris — administration intrapéritonéale, mg/kg 25 mg/kg A B C 891 681 215 355 100 21,5 COPY 71 46806 ~ïd 2120033 REVENDICATIONS 1. Nouveau composé, caractérisé par le fait qu'il appartient au groupe des composés répondant à la formule î CH Nr R2 2 \r4 1 "2 (dans laquelle E. est un atome dThydrogène, R est un groupe OH 1 2 5 ou 0-acyle inférieur ou "bien.R et R forment, en association, un atome d'oxygène, R est un atome drfrydrogène ou un groupe alkyle inférieur,. R^ est un atome dfhydrogène ou un groupe alkyle 2 3 inférieur ou ÏTR R est un radical hétérocyclique hexagonal, X est un atome d*halogène, un groupe alkyle inférieur ou alkozy 10 inférieur et T est un halogène, un groupe alkyle inférieur ou alkoxy inférieur) et leurs sels acceptables du point de vue phar tttac o lo gique « 2. Composé suivant la revendication 1t caractérisé par le fait qu'il est lTun des composés suivants : 15 3- (4-morpholinylméthyl) flavanone j 3-(diméthylaminométhyl)flavanone ; 3- (diméthjrlaminotaéthyl) flavane-4-ol ; 3-(4-morpholinylméthyl)flavane-4-ol } et 3-(4-morpholinylméthyl)—4-propionosyflavane. 20 3« Procédé de préparation d'un composé suivant la re vendication 1, caractérisé par le fait qu'il consiste à mélanger ' COPY 71 46806 13 2120033 avec le formaldéhyde, et un composé de formule t .HZ 5 (dans laquelle Z est un halogène) pour former un composé dans 1 2 lequel R R représente l'oxygène, à réduire le composé dans 1 2 lequel R R désigne de l'oxygène pour former un composé dans 1 2 lequel R est un atome d'hydrogène et R est un groupe OH,. •j à mélanger le composé dans lequel R représente lThydrogène et 2 10 R est un groupe OH avec un composé de formule t 0 0 - H , il (dans laquelle ¥ est un halogène et m est un nombre entier de 1 1 à 4) pour former un composé dans lequel R désigne lThydrogène 2 15 et R est un groupe 0-acyle inférieur. 4* Médicament utile notamment pour inhiber le développement d'un microorganismer caractérisé par le fait qu'il comprend un composé suivant la revendication 1, 5. Médicament suivant la revendication 4, utiler notamment 20 contre le microorganisme connu sous le nom de Trlchophyton mentagrophytes» caractérisé en ce qu'il contient de la 3-(4-morpholinylméthyl)flavanonet de la 3-(diméthylaminométhyl)~ flavanone ou du 3-(diméthylaminométhyl) flavane-4-ol. 6. Médicament suivant la revendication 4# utile 25 notamment contre le microorganisme connu sous le nom de Oandida alMcans, caractérisé par le fait qu'il contient de la 3~ (4-morpholinylméthyl)flavanone, de la 3~(diméthylaminomé~ thyl)flavanone ou du 3- (diméthylaminométïiyl) flav8.ne-~4.-ol. l COPY