Brevet FR2138603A1 — publié le 19730105

La présente invention concerne un médicament utilisable notamment pour les traitements de la leucémie. La leucémie est considérée comme étant une maladie incurable. Comme on ne peut faire appel à la radiothérapie dans le cas de la leucémie, la chimiothérapie est le seul moyen connu pour traiter la leucémie. Divers médicaments tels que la 6-mercaptopurine, le méthotrdxate, le cytosine arabinoside, la L-asparaginase, la daunomycine, etc.. ont été mis au point pour le traitement de la leucémie. Toutefois, lorsqu'on administre le mEme médicament de manière continue à un malade, la leucémie acquiert progressivement une tolérance vis-d-vis du médicament particulier.En raison de cet inconvénient, qui a pour résultat une diminution de ltef- ficacité d'un médicament, et en raison des effets secondaires indésirables, il est souvent nécessaire dtinterrompre l'administration d'un médicament particulier. En conséquence, l'apparition de nouveaux médicaments pour le traitement de la leucémie est très importante. L'invention a pour objet un médicament utilisable, notamment pour le traitement de la leucémie chez l'homme et chez l'animal, qui comprend comme principe actif la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou l'un de ses sels thérapeutiquement acceptables. Le composé utilisé selon la présente invention, la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine, est une substance connue qui peut être obtenue par synthèse à partir de la cytidine comme matière de départ, par exemple, en chauffant la cytidine avec un mélange de diméthylformamide et d'un agent d'halogénation, ou en faisant réagir la cytidine sur un oxyhalogénure de phosphore ou un oxyhalogénure de phosphore partiellement hydrolysé dans un ester de l'acide acétique. Par exemple, on se référera au brevet des Etats Unis d'Amérique nO 55 966 déposé le 17 juillet 1970 pour "Procédé de préparation de la 1-5-D-arabinofuranosylcytosine" par T. Kanai et al. Comme la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine est instable vis-àvis d'une base et sthydrolyse progressivement en cytosine arabinoside mOme dans l'eau, il est avantageux de la transformer en son sel d'addition thérapoutiquement acceptable, formé avec un acide. Bes sels d'addition avec des acides répondent à la formule de structure suivante: dans laquelle X est un acide minéral ou organique qui est suffisamment non toxique dans les conditions d'administration. Comme exemples d'acides minéraux appropriés, on citera l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique, etc.. Comme exemples d'acides organiques appropriés on citera l'acide acétique, l'acide citrique, l'acide oxalique, etc.. Les cristaux de chlorhydrate de 2,2'-anhydroarabinosylcytosine sont blancs, inodores et hydrosolubles. Le pH d'une solution aqueuse du chlorhydrate à 1% en poids est d'environ 5. Les cristaux ont un point de décomposition d'environ 260 C, et la valeur d' j 200est de est de (solution aqueuse à 2%, en D poids). Leur solution aqueuse présente, à un pH de 1 à 5, des absorptions maxima à 231 mt et 265 m/u et des absorptions minima à 2t7 m/u et 245 m/u. Ce composé est très stable à l'état cristallin et tout-à-fait stable en solutions aqueuses, par exemple dans de l'eau pour injeetion, dans les solutions injectables glucosées et dans les solutions injectables contenant du chlorure de sodium lorsque le pH est compris entre 5 et 5. Le composé, ou son sel thérapeutiquement acceptable, peut être utilisé sous toute forme appropriée pour l'administration de médicaments. Par exemple, on peut l'utiliser en mélange avec un véhicule liquide, sous forme de comprimés, sous forme de poudre ou sous forme de gélule. On décrira ci-après quelques formes de préparation de la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine et de ses sels d'addition avec des acides. A. On charge des cristaux ou des cristaux broyés dans des flacons, en milieu stérile. Le flacon contient d'environ 100 à 300 mg de composé. On utilise les cristaux en les dissolvant dans une solution pour transfusion , par exemple dans de l'eau pour injection, dans une solution glucosée pour injection, dans une so lution physiologique pour injection, une solution de dextrane, etc., juste avant utilisation. La concentration du compose, dans la solution, est habituellement d'environ 0,2 mgXml à 100 mg/ml. B. On prépare des comprimés en mélangeant le composé avec des diluants, tels que le lactose, la poudre de cellulose, etc.. ainsi qu'avec des lubrifiants pharmaceutiquement acceptables,etc. puis on met le mélange sous forme de comprimés par des procédés classiques. On peut également enrober les comprimés, par exemple à l'aide d'un enrobage sucré, afin d'en améliorer le goût. Le comprimé contient habituellement d'environ 50 à 200 mg de composé actif. C. On prépare une poudre en ajoutant des diluants approprisés à des cristaux ou cristaux broyés. La teneur en composé, dans un paquetdose est habituellement d'environ 50 à 500 mg. D. On charge dans des gélules des cristaux, cristaux broyés ou des granulés préparés par un procédé évitant leur passage par un état neutre ou alcalin. La teneur en composé, par gélule, est d'environ 50 à 300 mg. L'efficacité de la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine vis-à-vis d'une tumeur particulière implantée chez la souris utilisée pour l'essai est aussi bonne que l'efficacité des meilleurs médicaments anticancéreux du commerce utilisés pour lutter contre cette sorte de tumeur. En outre, la plupart des médicaments anti-cancéreux du commerce ne sont efficaces que vis-d-vis de types de tumeurs limités, mais la 2,21-anhydroarabinosylcytosine est très efficace vis-à-vis d'une grande variété de tumeurs implantées. Parmi tous les médicaments anticancéreux du commerce, seule le cyclophosphamide est efficace vis-à-vis de la grande variété de tumeurs qui peuvent Entre traitées selon la présente invention. Outre les essais d'efficacité contre la leucémie, on a soumis la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine à des essais de toxicité sur des souris, rats, chiens et singes. La toxicité du composé selon la présente invention est m9me basse, par comparaison avec la toxicité du cytosine arabinoside connu comme étant peu toxique. La différence de toxicité est particulièrement notable lorsqu'on effectue des administrations quotidiennes successives des composés. Lorsqu'on utilise la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine pour le traitement de la leucémie chez l'homme, on observe une rémission des souffrances, fournissant la preuve de l'efficacité du composé précité vfs-a-vis de la leucémie humaine. La dose totale utilisée est d'environ 50 à 500 mg par kg de poids corporel et la dose quotidienne est d'environ 1 à 10 mg par kg de poids corporel. Toutefois, la dose peut varier de manière sensible suivant les cas particuliers. En outre, on n'a pas observé d'effets secondaires aigus ou chroniques de la part du composé selon l'invention dans la gamme du protocole d'administration du traitement jusqu'à une dose quotidienne de 4 mg par kg de poids corporel. Les exemples non limitatifs suivants sont donnés à titre d'illustration de l'invention. Sauf indication contraire, les parties sont exprimées en poids et le composé est administré sous forme de solution dans de liteau pour injection. Exemple 1 Cet exemple met en évidence l'effet du chlorhydrate de 2,2' -anhydroarabinosylcytosine -sur des tumeurs implantées chez la souris. On implante diverses sortes de tumeurs chez des souris. Puis on traite ces souris par le chlorhydrate de 2,2'-anhydroarabinosylcytosine comme indiqué ci-après , par administration intrapéritonéale, à raison d'une fois par jour pendant 5 jours de suite.On obtient les résultats suivants Type de tumeur Dose Effet Leucémie L-1210 100 mg/kg accrott la durée de vie de 300 % Leucémie C-1498 500 mg/kg accroft la durée de vie de 77 % Ascite (sarcome) 300 mg/kg poids de la tumeur 0 S-i80A Ascite d'Ehrlich 100 mg/kg " n n n 2 (carcinome) Sarcome de Nakahara Fukuoka 500 mg/kg n n tt n tr 9 Adénocarcinome 755 100 mg/kg n i, " tt o Lorsqu'on traite des souris, à qui on a implanté la leu cémie L-1210 par administration orale de chlorhydrate de 2,2'anhydroarabinosylcytosine à une posologie de 500 mg/kg/jour,une fois par jour pendant cinq jours consécutifs, l'accroissement de la durée de vie est de 121 %. Exemple 2 Cet exemple met en évidence la faible toxicité du chlorhy drate de 2,2'-anhydro-arabinosylcytosine. On administre du chlorhydrate de 2,2'-anhydroarabinoxylcytosine à des souris, par voie intra-péritonéale, une fois, et on les met sous observation pendant 14 jours. La D50 est de 2 700 mg/kg. Lorsqu'on administre le composé par voie intrapéritonéale cinq jours de suite, à raison d'une fois par jour, et poursuit l'observation pendant 14 jours après la fin de l'administration, la DLBo s'avère être de 850/mg/kg chez la souris et 730 mg/ kg/jour chez le rat. Lorsqu'on administre le composé par voie orale une fois et continue 11 observation pendant 14 jours, la D50 s' avère autre de plus de 4 000 mg/kg chez la souris et de plus de 3 000 mg/kg chez le rat. Lorsqu'on administre le composé par voie intraveineuse, 7 jours de suite, à raison d'une fois par jour, et qu'on poursuit l'observation pendant 30 jours après la fin de l'administration, les doses léthales minimales sont de 80 mg/kg/jour chez le chien et de 160 mg/kg/jour chez le singe. Lorsqu'on administre le composé par voie intraveineuse à des chiens et des singes, 7 jours de suite, à raison de 40 mg/kg/ jour, le nombre des leucocytes baisse tandis que les teneurs en phosphatase alcaline, en transaminase glutamique-oxaloacétique, en transaminase, glutamique-pyruvique et en azote sous forme d'urée augmentent, l'animal d'essai revenant à l'état précédant l'administration au 13ème jour après la fin de l'administration. il n'y a pas de modifications notables du nombre de globules rouges, du temps de prothrombine et des observations anatomo-pathologiques tant au moment où on termine l'administration que 13 jours plus tard. Lorsqu'on administre le composé à des rats par voie intrapéritonéale, pendant 35 jours consécutifs, à raison d'une fois par jour, on n' observe pas de différence dans la mortalité ni de modification de poids entre rats traités et témoins tant que la dose est de l'ordre de 100 mg/kg/jour. On ne note pas de modification notable lors des observations anatomo-pathologiques à cette exception près qu'on observe une atrophie du thymus à une dose supérieure à 50 mg/kg/jour. Exemple 3 Cet exemple met en évidence la fonction pharmacologique du chlorhydrate de 2,2'-anhydro-arabinosylcytosine. Lorsqu'on administre ce composé par voie intraveineuse à des chiens ou des singes à une dose supérieure à 80 à 160 mg/kg, on provoque une salivation, mais cette fonction est réduite par administration répétée. Lorsqu on administre le composé à des chats et des lapins, par voie intraveineuse, à la dose de 300 mg/kg, il n'y a pas d'effet sur l'électroencéphalogramme. Lorsqu'on l'administre à des chiens et chats, par vote intraveineuse, à la dose de 20 mg/kg, il n'y a pas d'effet sur l'électrocardiogramme. La dose de 40 mg/kg, administrée par voie intraveineuse, n'influence ni la pression artérielle ni l'aspiration chez le chien et le lapin. 'St injection intradermique d'une solution aqueuse du composé à 10% en poids ne produit aucun effet, aucun effet n'étant non plus obtenu lorsqu'on fait tomber la solution goutte à goutte sur la conjonctive oculaire et la muqueuse intestinale du lapin. La concentration de 10 5 g/ml n'a aucun effet sur l'iléon isolé du cobaye ou du rat ni sur l'utérus isolé du rat selon la technique de Magnus, ni sur le coeur isolé du lapin dans la méthode de Langendorff. Exemple 4 Traitement de la leucémie myélogène aigu. Malade: femme de 33 ans; diagnostic de leucémie myélogène aigue le 25 avril 1967. Rémission pendant 2 ans et 3 mois après le dernier traitement par le cyclophosphamide, la 6-mercaptopurine et par hormone stérotde. La malade a ensuite été traitée par plusieurs thérapeutiques associées, comprenant la vincristine, la daunomycine et le méthotrexate jusqu'en février 1971. La malade a présenté trois périodes de rémission pendant ce laps de temps. Le 17 février 1971, le nombre des cellules nucléées de la moelle osseuse atteint 349 000 et les myéloblastes atteignent 92 670, et on diagnostique une rechute. On dissoutlOOmg de chlorhydrate de 2,2'-anhydroarabinosylcytosine dans 20 ml de glucose pour injection à 5% et on administre par voie intraveineuse à raison de 100 mg/jour (2 mg/kg de poids corporel/jour). il y a réduction notable des cellules leucémiques de la moelle osseuse au 4ème jour après le début du traitement. Le traitement est terminé au bout de 10 jours, la dose totale ayant été de 1 000 mg. On ne remarque ensuite pas d'augmentation appréciable des cellules leucémiques de la moelle osseuse pendant un mois. L'état général est extremement bon et il n'y a pas de symptOmes de réactions secondaires ni de modification notable dans les examens cliniques, à part la réduction des leucocytes. Exemple 5 Traitement de leucémie lymphoblastique aigu. Malade : home de 42 ans; diagnostic de leucémie lymphoblastique aigus le 17 août 1970. Une rémission de 4 mois a été obtenue avec un traitement par la vincristine, 1'hormone stéroïde, la 6-mercaptopurine et le cyclophosphamide, mais suivie de rechute. On obtient une rémission partielle d'un mois en répétant le meme traitement. En février 1971 les cellules leucémiques dans la moelle osseuse augmentent à nouveau avec apparition de fièvre et de douleur dans la région lombaire et le dos, et l'activité de la déshydrogénase lactique du sérum augmente. On administre 100 mg de chlorhydrate de 2,2'-anhydroarabinosylcytosine dissous dans 20 ml de solution glucosée pour injection à 5%, à raison de 1,6 mg/kg/ jour. Le septième jour, la fièvre ainsi que la douleur lombaire et dorsale disparissent et, à partir de la deuxième semaine, l'activité de la déshydrogénase lactique s'améliore nettement. Les lymphoblastes disparaissent de la circulation périphérique et le malade présente une rémission partielle. On n'observe pas de signes de toxicité aiguë. On interrompt le traitement après avoir utilisé, au total, 2 800 ing en 28 jours. Une cystite aigus provoquée par le traitement antérieur par le cyclophosphamide est complètement guérie pendant ce laps de temps. Cette rémission se poursuit pendant 19 jours. Les résultats des examens urinaires et les essais des fonctions hépatiques ne révèlent aucune modification pendant et après ce traitement. REVENDICATIONS 1 - Médicament utilisable notamment pour le traitement de la leucémie, caractérisé en ce qu'il contient à titre de principe actif, la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou l'un de ses sels thérapeutiquement acceptables. 2 - Médicament suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou son sel thérapeutiquement acceptable est sous forme de comprimé. 3 - Médicament suivant la revendication t, caractérisé en ce que la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou son sel thérapeutiquement acceptable est sous forme de gélules. 4 - Médicament suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou son sel thérapeutiquement acceptable est sous forme de poudre. 5 - Médicament suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la 2,2'-anhydroarabinosylcytosine ou son sel thérapeutiquement acceptable, présenté en mélange avec un véhicule liquide thérapeutiquement acceptable. 6 - Médicament suivant la revendication 1, présenté sous une forme permettant l'administration d'environ 1 à 10 mg/kg/jour de principe actif.