Brevet FR2134116A1 — publié le 19721208

La présente invention concerne le domaine de la médecine, et vim plus précisément un nouveau vaccin contre la grippe administré par voie pérorale et un procédé pour obtenir celuici. On utilise actuellement, à des fins préventives, un vaccin intranasal vivant contre la grippe, que l'on obtient en inoculant une souche du virus grippal dans la cavité allantoidique des embryons de poule âgés de 9 à î0 jours, en y cultivant ladite souche et en soutirant subséquemment les liquides extraembryonnaires qui la contiennent. Ce vaccin destiné à l'administration intranasale contient des substances protidiques résiduelles du blanc d'oeuf, présente une efficacité épidémiologique peu élevée, provoque pendant les premiers jours après son introduction une hausse de temperature au-dessus de 37,5 C, au moins chez 2 des sujets vaccinés. En outre, le vaccin en question ne peut être utilisé que pour la vaccination des enfants à partir de l'âge de 12 ans. A la différence du vaccin connu, le nouveau vaccin contre la grippe, qui fait 'objet de la présente invention, est employé aussi bien pour la prévention que pour le traitement de la grippe épidémique. lie vaccin proposé n'est pas réactogène, ce qui permet de l'administrer tant aux adultes qu'aux enfants à partir de l'âge d'un an. lia prise du vaccin par voie pérorale simplifie la pratique des vaccinations en masse. Conformément à l'invention, le vaccin contre la grippe administré péroralement contient une souche apathogene du virus grippal, adaptée à la culture tissulaire des rognons de poule et cultivée sur les cellules de rognon prélevées soit sur les embryons de poule à partir de l'âge de 17 jours soit sur les poulets âgés jusqu'à 3 semaines, et un milieu nutritif constitué par des sources de carbone et d'azote, du glucose et des sels minéraux, l'activité du vaccin étant d';u moins 1O4,5 ID 50 par ml. lie vaccin spécifique contre le virus grippal du type A2 contient une souche apathogène du virus du type A2, adaptée à la culture tissulaire des rognons de poule et cultivée sur les cellules de rognon prélevées-sur les embryons de poule âgés de 9 jours, du milieu nutritif Parker - 199, et présente une activité d'au moins 104'5 ID 50 par ml. lie vaccin spécifique contre la grippe du type B contient une souche apathogène du virus grippal du type B adaptée à la culture tissulaire des rognons de poule et cultivée sur les cellules de rognon prélevées sur les embryons de poule âgés de 19 jours, du milieu nutritif Parker-199, du sérum de gros bovidés à raison de 2 à 5% en volume par rapport au milieu nutritif, et présente une activité d'au moins 1O4,5 ID 50 par ml. Le vaccin antigrippal administré péroralement et qui fait l'objet de l'invention est employé pour la prévention de la grippe épidémique; il peut aussi, grâce à l'action interféronogène, être employé pour le traitement de la grippe et d'autres infections des voies respiratoires causées par les virus. lie nouveau vaccin a été essayé en tant que moyen de prophylaxie spécifique par vaccination ( on procède à la vaccination 1 à 3 mois avant le déclenchement de l'épidémie pour la prophylaxie urgente (en cas d'épidémie de grippe déjà apparue), ainsi que pour la médication des malades atteints de la grippe. Grâce aux résultats de l'étude, le vaccin est doué d'un pouvoir antigénique. L'accroissement de la quantité d'anticorps de 4 fois et au-dessus est généralement observé chez les sujets présentant avant la vaccination de bas titres dlantihémagglutinines. L'augmentation de le quantité d'anti-corps spécifiques pour le virus grippal du type A2 a été observée chez 23,7 à 50% des sujets examinés, et pour le virus grippal du type B chez 6,1 à 8,8% (groupe de sujets séronégatifs). Lors de la prophylaxie spécifique par vaccination le nombre total des vaccinés a été de 68.385, celui des non vaccinés a été égal à 50.356. L'indice d'efficacité variait de 1,5 à 2,9. On n'a pas constaté de corrélation entre les valeurs de l'activité antigénique et l'indice d'efficacité. L'efficacité la plus marquée a été observée lors de la vaccination contre l'épidémie déjà apparue. L'indice d'efficacité en cas de prophylaxie urgente a été de 2,2 à 3,0. On a constaté une évolution de la grippe plus légère et moins prolongée chez les vaccinés. La durée moyenne de la maladie a été de 1,2 à 3 jours plus courte comparativement aux non vaccinés. Le nombre de complications post-grippales a diminué. Ainsi, les pneumonies parmi les vaccinés ont été de 1,5 à 2 fois plus rares. On a mis en évidence l'effet curatif produit par le vaccin. Le nombre total des malades ayant pris le vaccin a été de 846, celui des malades chez lesquels on a constaté l'amélioration des symptômes a été de 768. En dehors du raccourcissement de la période fiévreuse et outre la suppression de l'intoxication, l'action favorable du vaccin s'est traduite par une réduction de 2,5 à 3 fois du nombre de complications chez lestalades ayant pris le vaccin. Le vaccin antigrippal pour l'administration pérorale peut être à l'état liquide ou sec. Bevaccinsec sec est solubilisé extemporané- ment dans de l'eau bouillie refroidie. Les vaccinations préventives sont pratiquées trois fois à intervalles de 10 à 15 jours pendant les mois d'automne et d'hiver. La dose prophylactique unique pour les adultes et les enfants à partir de l'âge de 8 ans est de 2 ml, pour les enfants de 1 à 3 ans - 0,5 ml, de 3 à 7 ans - 1 ml. La dose unique pour la prophylaxie urgente et le traitement des adultes est de 5 ml; celle destinée aux enfants de 1 à 3 ans 1 ml, de 3 à 7 ans - 2 ml, de 8 à 16 ans - 3 ml. Dans les foyers où sévit la grippe il est recommandé d'administrer le vaccin aux malades et à toutes les personnes qui les contactent une fois par jour pendant les deux premiers jours consécutifs au moment de déclaration de la maladie. Pour endiguer la propagation de la grippe dans les collectivités, il est recommandé d'administrer le vaccin à intervalles de 6 à 8 jours 3 ou 4 fois. Le vaccin est pris indépendamment de la nourriture. Pour faire passer le goût du vaccin, on peut avaler de l'eau, du lait, du thé froid. Il ne faut pas diluer le vaccin liquide. Quant au vaccin sec solubilisé, il convient de le prendre immédiatement, il n'est pas recommandé de le conserver. La prise du vaccin ne provoque pas une hausse de température au-dessus de 37,500, ni chez les enfants, ni chez les adultes. On constate chez certaines personnes sensibles, des maux de tête passagers, des nausées, la sécheresse dans la gorge. Les contre-indications à l'emploi du vaccin sont les maladies chroniques du poumon, la forme active de la tuberculose, l'insuffisance cardio-vasculaires du deuxième degré, la grossesse et les affections fiévreuses d'étiologie bactérienne. Les vaccins liquide et sec sont stockés à une température ne dépassant pas 600.Le délai de validité du vaccin liquide à cette température est de 3 mois, à la température de -200C il est de 6 mois. Le délai de validité du vaccin sec est de 1 an. Le procédé de préparation du vaccin antigrippal conforme à l'invention pour l'administration pérorale consiste à ajouter à un tissu de rognon réduit, prélevé des embryons de poule à partir de l'âge de 17 jours ou de poulets âgés jusqu'à 3 semaines, un milieu nutritif contenant des sources de carbone et d'azote, du glucose, des sels minéraux, une souche apathogène du virus grippal adaptée à la culture tissulaire des rognons, et à faire incuber la culture pendant 48 à 120 heures à une température de 34 à 380C, en isolant subséquemment le produit visé. Pour préparer le vaccin sec, on ajoute au liquide recueilli à l'issue de la culture et contenant les virus un stabilisant permettant d'effectuer la lyophilisation, puis on sèche par lyophilisation. En tant que stabilisant il est avantageux d'utiliser une solution aqueuse à 10% de peptone, prise dans la proportion de 1:1 par rapport au liquide contenant les virus. Pour préparer le vaccin antigrippal contre le virus grippal du type A2, on ajoute au tissu de rognon réduit, prélevé des embryons de poule âgés de 19 jours, du milieu nutritif Parker-199, une souche apathogène du virus grippal du type A2, adaptée à la culture tissulaire des rognons de poule, celle-ci à raison de 106 à 107 ID 50 par litre de milieu nutritif, et on conduit la culture pendant 48 à 72 heures, sous agitation et à une température de 36 à 370C, avec isolement ultérieur du produit visé. Pour préparer le vaccin antigrippal contre le virus grippal du type B, on ajoute au tissu de rognon réduit, prélevé des embryons de poule âgés de 19 jours, du milieu nutritif Parker-199, du sérum réchauffé de gros bovidés à raison de 2 à 5% en volume relativement au milieu nutritif, une souche apathogène du virus grippal du type B, adaptée à la culture tissulaire des rognons de poule, celle-ci à raison de 103 à 104 ID 50 par litre de milieu nutrifif, et on conduit la culture pendant 96 à 120 heures, sous agitation et à une température de 36 à 37 C, avec isolement ultérieur du produit visé. Le procédé de préparation du vaccin antigrippal est mis en oeuvre de la manière suivante. On ajoute au tissu de rognon réduit, prélevé des embryons de poule à partir de l'âge de 17 jours ou de poulets âgés jusqu'à 3 semaines, de préférence des embryons de poule âgés de 19 jours, un milieu nutritif, en qualité duquel on utilise par exemple le milieu Parker-199 ou bien du milieu Parker-199 additionné, à raison de 2 à 5% en volume, de sérum réchauffé de gros bovidés auquel on fait avantageusement appel lorsqu'il s'agit du virus grippal du type B, en vue d'améliorer les conditions de la culture et pour le prolongement de l'aptitude à vivre des cellules de rognon. Cella fait, on inocule une souche du virus grippal du type A2 ou B, adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule. On conduit la culture pendant 48 à 120 heures, sous agitation et à une température de 36 à 370C. lies délais de culture optimaux du virus grippal du type A2 sont compris entre 48 à 72 heures. Pour le virus-grippal du type B ils s'étendent de 96 à 120 heures. A l'issue de la culture on obtient un vaccin antigrippal liquide présentant une activité d'au moins 104,5 ID 50 par ml. On contrôle le vaccin fini en activité biologique, stérilité bactériologique et spécificité. Après le contrôle, le vaccin obtenu est mis en flacons et stocké aux températures ne dépassant pas +600. Pour préparer le vaccin sec, le liquide contenant les virus qui résulte de la culture est mélangé avec un stabilisant et soumis à la lyophilisation. En tant que stabilisant on a intérêt à utiliser une solution aqueuse à 10% de peptone, engagée dans le rapport de 1:1 relativement au liquide contenant les virus. Pour une meilleure compréhension de la présente invention on donne ci--après des exemples non limitatifs de mise en oeuvre du procédé de préparation du vaccin antigrippal administré par voie pérorale. Exemple 1. A 10 litres de milieu nutritif Parker-199, on ajoute du tissu de rognon réduit, extrait de 40 embryons de poule âgés 8 de dix neuf jours, puis on inocule, en quantité de 10 ID 50, une souche du virus grippal du type A2 , adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule. On conduit la culture pendant 72 heures, sous agitation et à une température de 36 à 3700. A l'issue de la culture on obtient le vaccin dont on contrôle l'activité, la stérilité et la spécificité. Le vaccin obtenu est spécifique, stérile et présente une activité de 105'5 ID 50 par ml. Exemple 2. A 10 litre de milieu nutritif Parker-199, on ajoute du sérum réchauffé de gros bovidés à raison de 200 % en volume et du tissu de rognon réduit, extrait de 40 embryons de poule âgés de dix neuf jours On inocule ensuite dens mélange, en quantité de 104 ID 50, une souche du virus grippal du type B, adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule. On conduit la culture pendant 120 heures, sous agitation et à une température de 36 à 3700. On obtient finalement un vaccin dont on contrôle l'activité, la stérilite, la spécificité. Le vaccin obtenu est spécifique, stérile et présente une activité de 105,0 ID 50 par ml. Exemple 3. On opère comme dans l'Exemple 1. A 10 litres de vaccin liquide ayant une activité de 1O5,5 ID 50 par ml on ajoute 10 litres d'une solution aqueuse à 10 % de peptone, puis on soumet le mélange obtenu au séchage par lyophilisation. On obtient un vaccin sec ayant une activité de 104'5 ID 50 par ml. Bien entendu, l'invention n'est nullement limitée aux modes de réalisation décrits qui n'ont été donnés qu'à titre d'exemple. En particulier, elle comprend tous les moyens constituant des équivalents techniques des moyens décrits ainsi que leurs combinaisons, si celles-ci sont exécutées selon l'esprit de l'invention. R E V E N D I G A T I O N 8 1.- Un vaccin contre la grippe administré par voie pérorale, ledit vaccin étant caractérisé en ce qu'il contient une souche apathogène du virus grippal, adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule et cultive sur des cellules de rognon prélevées d'embryons de poule à partir de l'âge de 17 jours ou de poulets âgés jusqu 3 semaines, un milieu nutritif constitué par des sources de carbone et d'azote, du glucose et des sels minéraux, et en ce qu'il présente une activité d'au moins ID 04'5 in 50 par ml. 2.- Un vaccin contre la grippe selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient une souche apathogène du virus grippal du type A2 , adaptée à la culture tissulaire de rognons et cultivée sur les cellules de rognon prélevées d'embryons de poule âgés de 19 jours, du milieu nutritif Parker-199. et en ce qu'il présente une activité d'au moins 1O4,5 ID 50 par ml. 3 .- Un vaccin contre la grippe selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient une souche apathogène du virus grippal du type B, adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule et cultivée sur des cellules de rognons prélevées d'embryons de poule âgés de 19 jours, du milieu nutritif Parker-199, du sérum de gros bovidés, à raison de 2 à 5 % en volume par rapport au milieu nutritif, et en ce qu'il présente une activité d'au moins 104'5 ID 50 par ml. 4.- Un procédé de préparation du vaccin contre la grippe, selon l'une des revendications 1 à 3, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'au milieu nutritif contenant des sources de carbone et d'azote, du glucose et des sels minéraux on ajoute du tissu de rognon réduit, prélevé d'embryons de poule à partir de l'âge de 17 jours ou de poulets âgés jusqu'à 3 semaines, et une souche apathogène du virus grippal,adaptée à la culture tissulaire des rognons des embryons de poule, et en ce- qu'on conduit ensuite la culture pendant 48 à 120 heures à une température de 34 à 36 C avec isolement ultérieur du produit visé. 5.- Un procédé selon la revendication 4, caractérisé ce ce que pour préparer un vaccin sec on ajoute au liquide cottcnant les virus et résultant de la culture zm stabilisant permettarlt d'effectuer la lyophilisation, apyres quoi on sèche par lyophili- sation le mélange obtenu. 6.- Un procédé selon la revendication 5, carAct;f risf en ce qu'en tant que stabilisant permettant d'effectuer Lt lyophilisation on utilise une solution aqueuse à 10% de peptone, prise dans le rapport de 1 : 1 relativement au liquide contenant les virus. 7.- Un procédé de préparation du vaccin contre la grippe selon la revendication 2 et l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'au milieu nutritif Parker-199, on ajoute du tissu de rognon réduit, prélevé d'embryons de poule âgés de 19 jours et engagé à raison d'au moins 4 embryons par litre de milieu nutritif, une souche apathogène du virus grippal du type A2, adaptée à la culture tissulaire de rognons des embryons de poule, celle-ci à raison de 106 à 107 ID 50 par litre de milieu nutritif,et en ce qu'on conduit la culture pendant 48 à 72 heures, sous agitation à une température de 36 à 370C, avec isolement ultérieur du produit visé. 8.- Un procédé de préparation du vaccin contre la grippe selon la revendication 3 et l'une des revendications 4 à 6, caractérisé en ce qu'au milieu nutritif Parker-199, on ajoute du sérum réchauffé de gros bovidés à raison de 2 à 5% en volume par rapport au milieu nutritif, du tissu de rognon réduit, prélevé d'embryons de poule âgés de 19 jours et engagé à raison d'au moins 4 embryons par litre de milieu nutritif, une souche du virus grippal du type B à raison de 107 à 104 ID 50 par litre du milieu nutritif, et en ce qu'on conduit la culture pendant 96 à 120 heures, sous agitation et à une température de 36 à 370G, avec isolement ultérieur d produit visé.