Brevet FR2126244A1 — publié le 19721006

Cabucala madagascariensls est un arbrisseau appartenant à la famille des apocynacées, que l'on trouve dans les régions sèches de la côte occidentale de Madagascar (cf. M.Pichon, "Notulae Systematicae" XIII (1948), pages 202-203). 5 II est déjà connu que Cabucala madagascariensis contient une substance cristalline à effet pharmacologique ayant des propriétés hypotensives. Selon le brevet belge No. 710.860 on obtient cette substance en extrayant avec un alcool inférieur la matière végétale séchée, de préférence des tiges, 10 éventuellement après une extraction préalable pour éliminer des graisses, des cires et des stérols, en extrayant le résidu sec de l'extrait alcoolique avec des acides dilués, en rendant alcaline la solution acide, en extrayant le dépôt qui a précipité successivement avec de l'éther ou un hydrocarbure halo-15 géné, par exemple le chloroforme, et tin alcool inférieur et en chromatographiant le résidu de la solution alcoolique. On obtient la substance active pure par élution avec des éluants neutres, par exemple avec chloroforme/acétone et benzène/acétone. On a également déjà proposé (brevet belge No.764007 20 de chromatographier l'extrait obtenu à l'aide d'un hydrocarbure halogéné à partir du précipité formé par alcalinisation et d'isoler une autre matière à action pharmacologique à l'aide d'un éluant alcoolique rendu alcalin. Or, la Demanderesse es-t-.parvenue à isoler une autre 25 substance à action pharmacologique à partir de Cabucala madagascariensis, substance qui exerce un puissant effet hypotenseur. La présente invention concerne un procédé d'isolement d'une substance à action pharmacologique à partir de Cabucala madagascariensis, procédé selon lequel on extrait Cabucala mada-50 gascariensis séché avec un hydrocarbure halogéné aliphatique qui contient de 1 à 3 atomes de carbone et jusqu'à 3 atomes d'halogène, de préférence des atomes de chlore, on extrait à l'eau la solution obtenue, on lave la solution aqueuse avec un ester carboxylique à bas poids moléculaire et on porte l'ex-35 trait aqueux à siccité. Il est bon d'employer en premier lieu les branches, les tiges et les racines de Cabucala madagascariensis séché et de soumettre celles-ci à une extraction préalable afin d'éliminer la quantité principale des graisses végétales, des cires 40 et des stérols. On utilise de préférence des hydrocarbures ayant 72 05738 2 2126244 de 5 à 7 atomes de carbone, de préférence l'éther de pétrole, le pentane ou l'hexane dans le rapport de 1 : 2 à 1 : 5 parties en poids de drogue au solvant. Pour l'extraction de la substance active de Cabucala 5 madagascariensis on.emploie des hydrocarbures halogénés aliphati-ques ayant de 1 à 3 atomes de carbone et jusqu'à 3 atomes d'halogène, de préférence jusqu'à 3 atomes de chlore. Parmi ces agents d'extraction on préfère le trichloro-éthylène et le trichloro-éthane, en particulier le chlorure de méthylène et 10 le chloroforme. Il convient d'utiliser les agents d'extraction en une proportion telle que le rapport pondéral de la matière au solvant soit de 1:2 à 1:6. Il est avantageux de concentrer l'extrait d'hydrocarbure halogéné avant d'extraire à l'eau par secouage. L'ex-15 traction par secouage avec de l'eau est répétée plusieurs fois, afin d'extraire toutes les portions solubles dans l'eau de la solution d'hydrocarbure halogéné. On lave ensuite les extraits aqueux combinés avec l'ester d'un acide carboxylique à bas poids moléculaire, tel 20 que l'ester méthylique de l'acide formique, l'ester éthylique de l'acide formique, l'ester méthylique de l'acide acétique, l'ester n-butylique de l'acide acétique, de préférence avec l'ester éthylique de l'acide acétique, afin d'éliminer les impuretés indésirées. 25 On porte à siccité l'extrait aqueux lavé, de préfé rence par lyophilisation. De cette manière, on obtient la substance active sous forme d'une poudre jaune tirant sur le brun. Cette substance active fait également partie de 30 l'invention. La substance active se montre homogène à la chroma-tographie sur papier et présente une valeur de 0,89 dans le système constitué par le n-butanol (2), le diméthylformamide (1) et l'eau (1) (parties en volume). La tache donne les réactions 35 suivantes : réactif de Dragendorff : orange j hexa-iodo- platinate de potassium. : bleu violet j chlorure de fer III : bleu foncé ; trichlorure d'antimoine : bleu pâle ; ninliydrine t rouge carmin foncé. La substance active cristallise difficilement et 40 fond à 87°C. Elle forme un picrate cristallisé, qui fond à 235- 72 05738 3 2126244 240°C en se décomposant. Les résultats de l'analyse quantitative sont les suivants : C 51,1 & ; H 7,0 g ; N 4,9 0 24,4 On a trouvé à partir du spectre de masse un poids 5 moléculaire situé entre 780 et 800. Le spectre UV de la substance active ne montre pas d'absorption entre 210 et 400 mj-t . Le~ pouvoir rotatoire Z~—^20 ^ans l'eau est de -20°. Le spectre IR est représenté sur le dessin annexé. La substance active se dissout en particulier dans 10 l'eau, mais également dans d'autres solvants polaires, tels que la pyridine, le diméthylformamide, le diméthylsuifoxyde ainsi que dans1l'éthanol, dans des acides et dans le chlorure de méthylène. La substance active selon l'invention peut être 15 convertie en des sels : pour cela on ajoute des quantités équivalentes d'acides physiologiquement. acceptables. Ceux-ci peuvent être des acides organiques, tels que l'acide acétique , l'acide lactique et l'acide tartrique, ou des acides minéraux, tels que l'acide chlorhydrique et l'acide phosphorique. 20 La nouvelle substance active selon l'invention se signale par une très bonne action hypotensive. On observe à la périphérie une vasodilatation, et au centre une diminution de la pression intracardiaque. La fréquence cardiaque est ordinairement diminuée. ~ 25 Les expériences faites sur des chiens ayant une hypertension ont donné les résultats suivants. Après avoir injecté par voie intraveineuse 0,25 mg de substance active par kg de poids corporel, on observe en 20 minutes une diminution de la pression sanguine de 125/85 mm de Hg à 105/65 mm de Hg, baisse -i-30 qvi n'est toujours pas annulée au bout d'une heure. En même temps la fréquence cardiaque tombe en 50 minutes de 189 à 167 pulsations par minute. En outre, on observe une diminution progressive de la montée de la pression du ventricule gauche de 2600 à 1900 mm de Hg par seconde au bout de 50 minutes. Le 35 rythme respiratoire n'est pas affecté. Lorsqu'on perfuse par voie intraveineuse, à des chiens, 2 mg de substance active par kg de poids corporel, dans 5 ml d'une solution aqueuse, en 10 minutes, on observe une dilinution de la pression sanguine de 170/140 à 135/110 mm de Hg 40 et la pression ne revient à sa valeur première qu'au bout de 185 72 05738 4 2126244 minutes. La fréquence du coeur tombe en 10 minutes de 179 à 158 pulsations par minute. Le retour à la valeur initiale est atteint au bout de 185 minutes.. Le degré de montée de la pression dans le ' ventricule gauche est diminué de 5200 à 3200 mm de Hg par seconde 5 et se situe après 185 minutes à 4400 mm de Hg par seconde.Le débit sanguin au niveau du sinus coronaire monte en 2 minutes de 134 à 146 ml par minute et a repris sa valeur initiale au bout de 20 minutes. Le débit sanguin dans la jambe monte en 10 minutes de 16 à 4l ml par minute et retrouve son niveau premier au bout de 30 mi-10 nutes. On a pu observer l'effet hypotenseur de la substance active sur des rats qui,après un clampage des deux artères rénales, ont vu leur pression sanguine augmenter. Lorsqu'on applique par voie sous-cutanée une dose quotidienne de 10 mg par kg de poids 15 corporel pendant 3 jours, la pression sanguine diminue pendant 3 jours de 168 à 122 mm de Hg et conserve cette valeur pendant 3 jaurs. La toxicité pour la souris blanche est de 12-15 mg de substance active par kg de poids corporel. En raison de leur effet hypotenseur, la nouvelle subs- ' 20 tance active et les sels qu'elle forme avec des acides physiologi-quement acceptables conviennent pour le traitement de maladies car-diovasculaires, par exemple 1'hypertension chronique, l'insuffisance cardiaque, l'Angor pectoris et les troubles de l'irrigation périphérique. Le médicament peut être administré par la voie orale ou 25 par 3a voie intraveineuse; selon la gravité de la maladie et le poids du patient,la posologie peut aller de 1 à 50 mg par jour. Pour 1'administration par la voie orale conviennent en particulier les comprimés ou les dragées, qui contiennent la substance active ou ses sels en une quantité de 1 à 50 mg par 30 unité de prise, à côté des adjuvants et excipients usuels, tels que le talc, l'amidon, le lactose etc. Pour l'administration par la voie intraveineuse on utilise avantageusement des solutions aqueuses de la substance active ou de ses sels. Les exemples de préparation suivants illustrent l'ex-35 traction de la nouvelle substance active à partir de Cabucala madagascariensis. Les possibilités d'obtention, cependant, ne sont pas limitées à ces exemples. EXEMPLE 1 : Dans un extracteur de Soxhlet on traite par 30 litres 40 d'éther de pétrole 7,4 kg de branches et de tiges moulues de 72 05738 5 2126244 Cabucala madagascariensis afin d'en éliminer les graisses végétales, les cires et les stérols. Ensuite on extrait complètement les branches et tiges, dans le même extracteur, avec 60 litres de chlorofoime. On filtre la solution chlo.ro-5 formique brun violet et on la concentre sous pression réduite jusqu'à un volume de 500 ml. On extrait la solution concentrée par secouage trois fois avec chaque fois 200 ml d'eau. Après avoir séparé les couches aqueuses de la couche chloroformique, on lave encore trois fois les extraits aqueux combinés avec 10 chaque fois 100 ml d'acétate d'éthyle. On lyophilise ensuite l'extrait aqueux lavé. On obtient 9,6 g d'une poudre brun jaune qui se comporte comme un corps unique à la chromatographie sur papier et qui a les propriétés indiquées dans la partie générale de la description. 15 EXEMPLE 2 : On dégraisse, comme indiqué à l'exemple 1, 8,3 kg de racines moulues de Cabucala madagascariensis et on extrait ensuite complètement avec 60 litres de chlorure de méthylène. On concentre à un litre la solution de chlorure 20 de méthylène brun tirant sur le rouge, et on extrait par secouage trois fois avec chaque fois 500 ml d'eau. Après avoir séparé les couches aqueuses de la solution de chlorure de méthylène, on extrait trois fois par secouage les extraits . aqueux combinés avec chaque fois "g6Q-ml..._d'acétate d'éthyle. 25 On soumet 'ënsuite l'extrait aqueux ainsi lavé à la lyophilisation. On obtient 35,2 g de la substance active ayant les propriétés indiquées dans la partie générale de la description. 72 05738 6 2126244 REVENDICATIONS 1.- Substance à effet pharmacologique isolée de Cabucala madagascariensis, caractérisée en ce qu'elle fond à ' 87°C, correspond à la formule brute C^8H56°12N3G1' a un P°^s 5 moléculaire, déterminé à partir du spectre de masse, situé entre 780 et 800, a un spectre UV ne présentant pas d'absorption entre 210 et 400 mj-i et a un pouvoir rotatoire dans l'eau de -20°, ainsi que ses sels formés avec des acides physiologiquement acceptables. 10 2.- Procédé d'isolement d'une substance à effet pharmacologique à partir de Cabucala madagascariensis, procédé caractérisé en ce qu'on extrait Cabucala madagascariensis séché avec un hydrocarbure aliphatique halogéné contenant de 1 à 3 atomes de carbone et jusqu'à 3 atomes d'halogène, on extrait 15 par secouage la solution obtenue avec de l'eau, on lave la solution aqueuse avec un ester carboxylique à bas poids moléculaire et on porte à siccité l'extrait aqueux. 3.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on utilise des branches des tiges et des racines 20 de la plante et qu'on soumet celles-ci d'abord à une extraction préalable à l'aide d'un hydrocarbure ayant de 5 à 7 atomes de carbone. 4.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on utilise en tant qu'hydrocarbures aliphatiques 25 halogénés aux fins d'extraction le trichloro-éthylène, le • trichloro-éthane, le chlorure de méthylène ou le chloroforme. 5.- Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'on lave la solution aqueuse avec l'ester méthylique de l'acide formique, l'ester éthylique de l'acide formique, 30 l'ester méthylique de l'acide acétique, l'ester éthylique de l'acide acétique ou l'ester n-butylique de l'acide acétique. 6.- Procédé de préparation d'un médicament à' action hypotensive, caractérisé en ce qu'on présente la substance active mentionnée dans la revendication 1, ou un de ses 35 sels formés avec un acide physiologiquement acceptable, sous une forme appropriée à des fins thérapeutiques. 7.- Médicament à action hypotensive, caractérisé en ce qu'il contient une substance active selon la revendication 1, ou un de ses sels formé avec un acide physiologiquement acceptable, 40 en une quantité de 1 à 50" mg par unité de prise.