Brevet FR2133926A1 — publié le 19721201

La présente invention concerne un nouvel agent thérapeutique pour le traitement et la prévention de certaines maladies du cerveau, en particulier des maladies d'autoimmunisation affectant cet organe. 5 Le terme "maladies d'autoimmunisation" comprend notam ment l'encéphalomyélite allergique, l'encéphalite postinfectieuse, la sclérose multiple, et la panencéphalite subaigUe. La sclérose multiple et la panencéphalite subaigUe seraient dues à la décharge de certaines protéines du cerveau dans le courant sanguin. La 10 sclérose multiple serait due à des lésions du cerveau (probablement d'origine mécanique), provoquant la décharge de ces protéines dans le courant sanguin, ce qui entraine cette maladie. L'encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) est une maladie d'autoimmunisation affectant le cerveau, et elle est Î5 provoquée chez les animaux de laboratoire par une injection de tissu de. cerveau, ou par une injection d'une protéine basique en-céphalitogène (BE) purifiée, dans un adjuvant complet de Freund. Cette maladie est caractérisée cliniquement par la paralysie des pattes arrière des animaux, et histologiquement par une infiltra-20 tion périvasculaire du tissu cérébral. Jusqu'à ce jour, deux méthodes générales ont été appliquées pour supprimer cette maladie (EAE) : l'une utilise les agents immuno-dépressifs, l'autre l'encéphalitogène.lui-même, sans adjuvant complet de Freund. 25 On a récemment découvert que d'autres protéines neura- les basiques pouvaient avoir une action analogue, lorsqu'on les injecte dans un adjuvant incomplet de Freund. EAE sert de maladie type pour la sclérose multiple, 1* encéphalite postinfectieuse et la panencéphalite subaigUe, cette 30 dernière étant une maladie à issue généralement fatale. La présente invention apporte un nouvel agent curatif, apte à guérir, ou tout au moins à réduire la gravité des maladies d'autoimmunisation du type décrit plus haut ; cet agent peut conduire à la guérison complète, lorsque l'application est faite aux 35 tous premiers stades de la maladie, ou bien à une diminution importante de la mortalité totale due à ces graves maladies. Le nouvel agent selon l'invention peut être également utilisé, pour obtenir une immunisation contre ces maladies. Les nouvelles compositions selon l'invention comprennent 4q un copolymère synthétique hydrosoluble, constitue par plusieurs 72 13911 2 2133926 amino-acides, de poids moléculaire supérieur à 10 000, et mieux dépassant 18 000, caractérisé par une charge électrique globale positive et une quantité moindre de charge électrique négative. Ce copolymère peut contenir, comme constituant supplémentaire, un 5 amino-acide neutre, et, éventuellement, aussi un amino-acide apte a communiquer des propriétés immunogènes. Les compositions selon l'invention comprennent un copolymère de base à charge électrique globale positive, comprenant une quantité adéquate d'un amino-acide de charge électrique posi-10 tive tel que lysine ou arginine, combiné avec une quantité moindre d'un amino-acide de charge électrique négative, tel qu'acide gluta-mique ou aspartique, et éventuellement un amino-acide électriquement neutre, comme alanine ou glycine, servant de charge, ainsi qu'un amino-acide apte à communiquer au copolymère des propriétés 15 immunogènes, par exemple un amino-acide aromatique. Conformément à l'invention, différents copolymères ont été préparés, et on a constaté que ceux qui possèdent un poids moléculaire approprié, une charge électrique globale positive et une teneur inférieure en amino-acide à charge négative, se révè-20 lent intéressants. Différents copolymères, du type décrit ci- dessus, ont été essayés quant à leur activité encéphalitogène, et au point de vue de leur aptitude à supprimer les maladies à traiter. Aucun de ces copolymères n'a présenté d'activité encéphalitogène., tandis que les copolymères remplissant pleinement les 25 critères ci-dessus se sont révélés intéressants comme agents cu-ratifs de EAE et des maladies du type EAE. Un copolymère, préféré conformément à l'invention, comprend un ensemble alanine, acide glutamique, lysine et tyrosine, de charge électrique globale positive et de poids moléculaire de 30 l'ordre de 20 000 à 25 000. La composition de ce copolymère, qui n'est donnée quà titre d'exemple sous la forme des rapports molaires des amino-acides dans le copolymère est sensiblement comme suit : alanine/acide glutamique/lysine/tyrosine=6/2/4,5/1. On obtient des résultats similaires avec un copolymère soluble com-35 prenant tyrosine, acide aspartique, alanine et lysine dans un rapport molaire de 1/1,5/5/3,5, ainsi qu'avec un autre copolymère comprenant acide glytamique, alanine et lysine dans un rappoirt molaire voisin de 1,5/5/3,5. Il est entendu que ces indications sont données à titre 40 d'exemples seulement et que la composition peut varier, tant en ce 12 13911 3 2133926 qui concerne les différents constituants que leurs proportions relatives, pourvu que les critères généraux définis plus haut soient respectés. Les copolymères du type décrit dans le passage précédent 5 se révèlent actifs pour supprimer EAE chez les cobayes, lorsqu'on les administre dans du sérum physiologique aussi tardivement que 5 jours après l'injection de la protéine basique (BE) ; ils réduisent la fréquence d'apparition d'EAE de 64%f dans le groupe témoin, à 22% ; les lésions bistologiques sont diminuées à la fois 10 en noabre et en gravité. On obtient un effet protecteur analogue chez les lapins. EAE provoqué par 500/Mg. de BE par lapin, est supprimé par 3 injections de 8 mg. chacune de la solution du premier copolymère dans 1 ml de sérum physiologique, faites un, six et onze jours après 15 l'administration de BE. La fréquence d'apparition de la maladie diminue de 70/6, dans le groupe témoin, à 19%, pour le groupe traité. On utilise chaque fois des groupes de 20 animaux. Comme ces nouveaux copolymères sont sans activité encéphalitogèhe, et comme ils ne sont pas iiiauno-dépresseurs, ils se révèlent bien plus 20 intéressants que les agents curatifs utilisés jusqu'ici. Les copolymères selon l'invention se préparent facilement par des procédés classiques. Le premier des copolymères ci-dessus est préparé à partir des N-carboxyanhydrides de tyrosine, alanine, glutamate de V'-benzyle et fc,N-trifluoroacétyllysine. La 25 polymérisation s'effectue à température ambiante dans du dioxane anhydrè avec de la diéthylamine comme inducteur. Le déblocage du groupement carboxylique de l'acide glutamique s'effectue au moyen d'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial, et il est suivi de l'élimination des groupements trifluoroacétyle des 30 résidus de lysine au moyen de pipéridine 1 M. Conformément à une autre forme de réalisation de l'invention, les nouvelles compositions peuvent être utilisées d'une manière différente. Le mode d'application le plus simple consiste à injecter une quantité appropriée du nouveau copolymère dans un 35 milieu convenable, le plus tôt possible après avoir soumis le corps à la protéine BE, Une injection des copolymères avant soumission à l'action de la protéine BE, n'est pas efficace, et les copolymères ei^ant que tels ne conviennent pas comme agents de vaccination si 40 on les injecte en milieu physiologique. 72 13911 4 2133926 On a constaté d'autre part, que, si l'on injecte d'abord une petite quantité de protéine BE, puis à certains intervalles de temps des quantités prédéterminées d'un copolymère selon l'invention, on obtient une protection efficace contre l'action ul-5 térieure de BE, même utilisée en quantités importantes. Ainsi, par exemple, on injecte à des cobayes 10/^g de BE. Cette quantité est suffisante pour entraîner l'apparition de EAE. Si l'on injecte 1/100 de cette quantité, c'est-à-dire 0,1yU-g, à des cobayes, que l'on traite ensuite par des injections renfermant 1 mg de copoly-10 mère chacune, au bout de 1, 5 et 10 jours, on constate que ces animaux sont entièrement protégés contre une injection de grande quantité de BE effectuée 10 jours après la dernière injection du copolymère. Ce processus d'action fournit une possibilité de protection contre les maladies de ce type. 15 II est bien entendu que les exemples précédents cons tituent une illustration non limitative de l'invention. 72 13911 5 2133926 REVENDICATIONS 1. Agent thérapeutique, à base de copolymère hydrosoluble d'acides aminés, pour le traitement ou la prévention d'affections du cerveau, caractérisé en ce que le poids moléculaire du copolymère est supérieur à 15 000, et de préférence à 18 000, le copolymère étant constitué par au moins un amino-acide à charge électrique positive, et une proportion moindre d'au moins un amino-acide à charge électrique négative, la charge globale étant positive. 2. Agent thérapeutique suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le copolymère contient également un amino-acide électriquement neutre et peut comprendre en outre un amino-acide aromatique procurant des propriétés immunogènes. 3. Agent thérapeutique suivant la revendication 1. ou 2, caractérisé en ce que 1*amino-acide à charge positive est la lysine ou l'arginine. 4. Agent thérapeutique suivant une des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que 1'amino-acide à charge négative est l'acide glutamique ou est l'acide aspartique. 5. Agent thérapeutique suivant une des revendications 1 à 4, caractérisé en ce que 1*amino-acide électriquement neutre est 1'alanine ou est la glycine. 6. Agent thérapeutique suivant une des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend alanine, acide glutamique, lysine et tyrosine, de préférence dans des rapports molaires de l'ordre de 6/2/4,5/1. 7. Agent thérapeutique suivant une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend tyrosine, acide aspartique, alanine et lysine, de préférence dans des rapports molaires de l'ordre de 1/1,5/5/3,5. 8. Agent thérapeutique suivant une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend acide glutamique, alanine et lysine dans des rapports molaires de l'ordre de 1,5/5/3,5. 9. Nouveau produit chimique constitué par un copolymère d'acides aminés, caractérisé en ce que ce copolymère présente les caractéristiques selon une des revendications 1 à 8. 10. Procédé pour la prévention des maladies d'auto-immunisation affectant le cerveau des mammifères, caractérisé en ce qu'il comprend d'abord l'administration d'une petite quantité de protéine basique, trop faible poui/provoquer la maladie, suivie 72 13911 6 2133926 par une ou plusieurs injections d'un copolymère selon l'une des revendications 1 à 9. 11. Traitement des maladies d'auto-immunisation affectant le cerveau telles que encéphalomyélite allergique, sclérose multiple, panencéphalite subaigtie et encéphalite postinfectieuse, caractérisé en ce qu'on utilise un copolymère selon l'une des revendications 1 à 9.