Brevet FR2112422A1 — publié le 19720616

La présente invention concerne des médicaments actifs sur le système fibrinolytique, elle a trait notamment à des compositions fibrinolytiques se composant de sels alcalins de nucléo-tides. Par nucléotides, on entend dans l'invention les produits 5 d'origine extractive obtenus à partir de tissus d'animaux et de végétaux. Habituellement, ces produits sont appelés par les spécialistes dans ce domaine olygonucléotides et polynucléotides. Par polynucléotides, on désigne les produits d'origine naturelle se composant d'acide ribonucléique et/ou d'acide désoxy-10 ribonucléique de poids moléculaire élevé et par olygonucléotides on désigne les substances d'origine naturelle ayant une composition analogue à celle des polynucléotides mais avec un poids moléculaire inférieur» Il existe différents types de produits pharmaceutiques 15 ayant une activité sur le système fibrinolytique. Les produits pharmaceutiques fibrinolytiques connus à l'heure actuelle, tant d'origine animale que d'origine synthétique, sont fabriqués avec des procédés compliqués et ont fréquemment des effets secondaires dangereux* 20 L'invention crée des compositions ayant une activité sur le système fibrinolytique qui peuvent être fabriquées d'une façon très simple et qui ne montrent pas d'effets secondaires indé sirable s. Les compositions fibrinolytiques de l'invention se compo-25 sent des sels alcalins d*olygonucléotides d'origine extractive à partir de tissus d'animaux ou de végétaux et plus particulièrement il s'agit des sels alcalins de l'acide ribonucléique et/ou de l'acide désoxyribonucléique. Ces compositions sont caractérisées par une viscosité qui n'est pas inférieure à 1,05 30 centipoise, par une teneur en phosphore comprise entre 7,8 % et 9,7 et par une teneur en azote de l'ordre de 13,8 % à 17,6 Les compositions fibrinolytiques de l'invention peuvent être obtenues par voie extractive à partir de matières facile-35 ment disponibles comme des cultures appropriées de microorganismes, des tissus de végétaux et des organes d'animaux. Un procédé extractif pour obtenir d'une façon économique à partir d'organes d'animaux, comme les poumons, le placenta, les intestins, le duodénum, le pancréas, le foie, etc..., les 71 B9258 2 2112422 compositions fibrinolytiques de l'invention résident, par exemple, dans l'extraction de l'acide désoxyribonucléique. Les sels alcalins de l'acide ribonucléique et de l'acide désoxyribonucléique des olygonucléotides sont caractérisés par 5 une activité fibrinolytique qui peut être rendue évidente à la dose de 8 à 10 mg/kg après traitement par voie intraveineuse sur des animaux de laboratoire* Sous les mêmes conditions expérimentales, l'activité d'anticoagulation, mesurée comme le taux de prothrombine et le temps de recàlcification, est à peine 10 évidente même à la dose de 50 à 60 mg/kg. Ce comportement pharmacologique, et notamment l'activité sur le système fibrinolytique, des polynucléotides et des olygonucléotides n'ont jamais été décrits antérieurement. Administrés par voie intraveineuse, les sels alcalins des 15 nucléotides suivant l'invention ne provoquent pas de toxicité ou d'effets secondaires même à des doses de 300 mg/kg* Ces recherches cliniques réalisées sur des sujets sains ou sur des malades atteints d'artériosclérose, ont confirmé l'augmentation du potentiel fibrinolytique du plasma après des injec-20 tions de ces préparations. Les exemples suivants, qui illustrent l'invention mais qui ne limitent pas son étendue, se rapportent aux administrations effectuées par voie intraveineuse, néanmoins, il est évident que les compositions de l'invention peuvent être administrées par 25 d'autres voies. EXEMPLE 1 Cet exemple illustre l'activité pharmacologique des compositions de l'invention. Il se rapporte à la mesure sur des plaques de fibrine normales et préchauffées de l'activité fibri-30 nolytique de fractions euglobuliniques séparées à partir de plasma de rat activé in vitro avec de l'acide ribonucléique et de l'acide désoxyribonucléique d'origine bactérienne (procédé décrit par Prino et Mantovani dans "Europ. J., Pharmacol. 6, 190, 1969"). CN CN •sa-CN CN (A 00 un CN o m Substance Y/ml de plasma Plaques normales Plaques préchauffées Zones de lyse 2 en mm Valeur moyenne + erreur standard % Zone de lyse 2 en mm Valeur moyenne + erreur standard % Acide ribonucléique 25 50 100 200 50.6 + 2,5 72.7 ± 3,9 81,0 + 2,6 100,3 + 2,5 113,3 + 1,5 + 22 + 36 + 78 + 90 41,4 + 0,9 53,4 ± 0,4 70,2 + 1,3 83,4 +_ 1,6 98,7 + 1,4 + 29 + 69 + 101 + 138 - 34,7 + 6,7 - 35,3 + 1,0 - 25 71,2 + 3,6 + 105 43,5 + 0,7 + 23 Acide désoxy- 50 76,2 + 3,0 + 119 46,3 + 0,8 + 31 nucléique 100 86,1 + 4,5 + 248 53,4 + 0,8 + 51 200 88,3 + 2,7 + 154 56,0 + 0,6 + 58 lf\ O V lf\ O eu 71 39258 2112422 ma™ p Cet exemple illustre également l'activité pharmacologique des compositions de l'invention et se rapporte à la mesure sur des plaques de fibrine normales et préchauffées de l'activité fi-5 brinolytique de fractions euglobuliniques séparées à partir de plasma de rat activé in vitro avec des olygonucléotides d'origine animale à des degrés de viscosité différents. 10 15 20 ï /ml de plasma Plaques normales Plaques préchauffées Viscosité en centipoise Zone de Lyse 2 en mm Valeur moyenne + erreur standard % Zone de Lyse 2 en mm Valeur moyenne + erreur standard % - 47,3 + 2,1 - 39,3 + 1,0 mm 1,348 25 67,6 + 2,1 + 43 52,1 + 0,8 32,6 50 80,0 + 4,2 + 69 63,4 + 1,3 + 61 100 117,7 +_ 7,2 +148 82,0 + 2,2 +109 - 59,5 + 3,0 - 46,5 + 1,3 - 50 66,0 + 4,6 + 11 51,9 + 1,7 + 11,8 1,070 100 57,7 + 2,1 - 3 53,1 + 1,4 + 14,1 200 76,8 2,4 + 29 53,1 1,0 + 14,1 La viscosité des matières décrites dans cet exemple et 25 dans les exemples suivants a été mesurée dans une solution 0,5 M de chlorure de sodium dans laquelle le produit a été dissous dans le rapport de 1 %. Les essais ont été effectués à 20°C dans un viscosimètre Hoppler (diamètre interne du tube de 15,950 mm, distance de chute de 100 mm) en utilisant la sphère 30 N.1 (diamètre de 15,805 mm, poids de 4,9848 g). Sous cette condition, la solution 0,5 H de chlorure de sodium fournit un temps de chute de la sphère de 70 secondes 8/10ème, ce qui correspond à xrne viscosité de 0,9841 centipoise. 71 39258 5 2112422 kX HIMPLE 3 Ii'exemple suivant, qui illustre l'activité pharmacologique, se rapporte à un traitement avec des olygonucléotides d'origine animale, administrés par voie intraveineuse chez le lapin. 5 l'effet de renforcement sur l'activité fibrinolytique d'une petite quantité fixée d'urokinase ajoutée in vitro au plasma des animaux est conforme au procédé décrit par Prino et Mantovani dans "Min. med. 60, 5015 (1969)"• 10 15 Traitement par voie intravei o Zones de lyse (mm ) mesurées dans les échantillons amenés à des temps différents à partir du traitemen neuse mg/kg 0 mn 5 mn 10 mn 15 mn 8 82,6 + 0,9 125,2 + 3,2 109,0 + 4,1 98,5 + 6,4 16 69,0 + 2,7 113,0 + 7,5 108,3 + 4,7 96,6 + 8,8 32 86,1 + 6,1 160,1 + 5,1 141,7 + 8,5 135,3 + 8,9 EXEMPLE 4 Cet exemple illustre l'activité d'anticoagulation in vitro sur du sang de rat en comparaison à l'activité de l'héparine qui est un anticoagulant connu donné à des fins de comparaison. 20 Subr-stance X/ml de sang Temps dé coagulation en secondes Valeur moyenne + erreur standard % - — 175,87 + 1.5 100 Héparine 3 281,5 +_ *.3 160 Héparine *,5 339,2 _+ 4,9 193 25 Héparine 6,75 452,0 + 20 257 Héparine 10,125 735,2 + 38,8 418 30 Compositions suivant la présente invention 50 100 200 400 153,5 165,2 170,2 188,7 + + _+ 1.3 0,9 1,2 9,65 87,3 94,9 96,8 107,3 71 39258 6 2112422 Comme cela ressort du Tableau (voir page 5), les compositions suivant l'invention ont une activité anticoagulante remarquablement basse. EXEMPLE 5 5 Cet exemple concerne l'activité clinique et se rapporte à l'activité fibrinolytique d'olygonucléotides chez l'homme en comparaison avec le placebo. Préparations Temps de lyse des frac- p tions euglobuliniques Zone de lyse (mm ) 0 mn 30 mn 60 an 120 mi 0 mn 30 mn 60 mn 120 mn Placebo n - 25 - -12* -15% - 8% 79,4+10 8Q2+6 98^+12 84,3+ 9 olygonucléotides extract if s - -25* -69% i *8,2 + 7 139 +6 201,6+ 3 150,2+10 Le temps de lyse des fractions euglobuliniques est exprimé 15 en pourcentage par rapport au temps zéro. 71 39258 7 :-> 2112422 REVENDICATIONS 1 - Compositions de matières utiles comme médicaments pour le système fibrinolytique, caractérisées en ce qu'elles se composent de solutions aqueuses de sels alcalins de nucléotides d'origine extractive ayant une teneur en phosphore comprise dans la gamme de 7,8 à 9,7 %, une teneur en azote de l'ordre de 13,8 à 17,6 % et une viscosité qui n'est pas inférieure à 1,05 centipoise. 2 - Compositions suivant la revendication 1, caractérisées en ce que leur viscosité est comprise dans la gamme de 1,25 à. 1,85 centipoise. 3 - Compositions suivant l'une des revendications 1 et 2, caractérisées en ce qu'elles renferment des sels alcalins d'acides nucléiques.