Brevet FR2081441A1 — publié le 19711203

i. 2081^1 La présente invention concerne la 1-Dopa et la 1-m-ty-rosine, et plus particulièrement un procédé pour la préparation de ces substances et les intermédiaires qui sont utilisés dans un 'tel procédé » 5 La 1-Dopa s'est avérée être un agent précieux contre la maladie de Parkinson et la 1-méta-tyrosine qui, de par sa structure, est à rattacher à 1a. 1-Dopa et à ses dérivés$semble présenter des propriétés telles que cette substance également peut être utilisée comme matière première dans ce but» On a proposé d'ex-10 pliquer de différentes façons comment la 1-Dopa agit lors du traitement de la maladie de Parkinson. L'explication qui est acceptée par la majorité des chercheurs dans ce domaine est la suivante : la physiopathologie de la maladie de Parkinson chez l'être humain peut - au moins en partie - s1expliquer par une dégé-15 nérescence du système neurone-dopamine dans le cerveau,localisée dans les noyaux caudés, dans les noyaux lenticulaires et dans la substance noire du pédoncule cérébral» Une thérapeutique rationnelle consisterait alors à remplacer la dopamine déficiente par administration depuis l'extérieur. Malheureusement, la dopamine 20 administrée ne parvient pas à traverser la barrière sang-cerveau, et la dopamine administrée par voie orale ou par voie parentérale n'atteint donc pas le système neurone-dopamine» La dihydroxyphényl-alanine, qui est le précurseur de la dopamine, traverse la barrière sang-cerveau, et est décarboxylée 25 dans le cerveau en dopamine» COTZIAS et ses collaborateurs ont montré que la. Dopa racémique pouvait avoir une action bénéfique sur les symptômes de Parkinson» Cependant, des effets secondaires se produisent fréquemment. On peut les amoindrir lorsqu'on utilise la 1-Dopa» Il 30 est donc recommandé d'utiliser en thérapeutique de la 1-Dopa aussi pure que possible. COTZIAS et ses collaborateurs ont également montré que la 1-Dopa est décarboxylée dans le système vasculaire, ce pour quoi de fortes doses de I-Dopa sont nécessaires pour procurer l'action thérapeutique désirée» 35 On peut administrer la 1-Dopa par voie orale, ce que l'on fait alors par doses croIss-fntes, de 100 mg trois fois par jour, jusqu'à une dose quotidienne de S g, Le traitement avec de la 1-Dopa est apparu être particulièrement favorable en ce qui concerne la rigidité qui caractérise la maladie :le Parkinson » 40 La 1-Dopa est la 3_(3 j^-dihydrcxyphényl.i-l-alanine, q-.ii BADORKSfNAL 7.1 01534 2081441 a la formule développée suivante 5 CHoCHC0~H . *\ . Kïïo I La 1-m-tyrosine ou 3-(3-hydroxyphényl)-l-alanine a la formule dé-10 veloppée suivante i )H2ghco2H HE- II 15 OH m-tyrosine Des- deux inverses optiques sous lesquels on peut trou— 20 ver ces deux composés, seule la forme lévogyre présente l'effet désiré» On a eu antérieurement de grandes difficultés pour obtenir des quantités suffisantes de l'isomère 1 saus forme pure. Or, selon la. présente invention, il est apparu, de façon surpre-25 nante, qu'il était possible de dédoubler stéréo-sélectivement certains dérivés SF-acylamiao acides, en utilisant une acylase de E. coli de telle sorte que seuls les.dérives du 1-amino acide soient désacylés-. La matière première pour le dédoublement stéréo-sélectif avec l'acylase. de E-. coli est constituée par des 30 composés présentant la formule générale : X R! . CE0~CH—GG0H 1 ITHC0-0E. III S" dans laquelle X est de 1-'hydrogène, du fluor, du chlore, du brome ou le groupe -HO^; F" est un groupe "njô,vo2Cj ou un groupe alco- xy n'ayant pas plus de 40 -0CE, -0C2H5, -0G3H?; 3 atomes de carbone, ccme les groupes st dans laquelle R" 1 représente de l'hy- BAO ORIGINAL 71 01534 2081441 drogène, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy n'ayant pas plus de 5 atomes de carbone, comme les groupes -OCH^, -0C2Hcj, -OC^Hy, ou bien R" et R" ' peuvent, ensemble, représenter un groupe al-coylène-dioxy ayant 1 ou 2 atomes de carbone. On dédouble stéréo-sélectivement les composés de formule III en appliquant une acylase de E„ coli pour produire la forme lévogyre des composés de formule : 10 CHo-CH-C00H 2 I IY -, R" 15 ainsi que leurs sels thérapeutiquement actifs, pour lesquels R" et R" ' sont tels que définis ci-dessus, La présente invention concerne également des composés de formule : 20 CH--CH-C00H 2 ) NH- Y 25 sous forme lévogyre, une préparation pharmaceutique contenant ces composés sous leur forme 1 et l'application médicale de ces composés pour le traitement de la maladie de Parkinson, dans laquel- 2 30 le formule V R représente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy n1ayant pas plus de 5 atomes de carbone, comme les groupes -OCH^, -0C2Hç. et -OC^H^, et dans laquelle R^ représente de l'hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy n'ayant pas plus de 5 atomes de carbone, comme -OCH^, ~0C^E^ et -OC^H^, à la condition que 35 représente un atome d'hydrogène, un groupe hydroxy ou un grou- 2 3 pe alcoxy quand R est un groupe alcoxy et que R représente un O P -T groupe alcoxy quand R est un groupe hydroxy; ou bien R et R5 désignent ensemble un groupe alcoylène-dioxy ayant 1 ou 2 atomes de carbone„ 40 Les composés de formule III contiennent un atome de car- 71 01534 2081441 boue asymétrique et peuvent se présenter sous -la forme de racéma-te ou sous la forme des isomères optiquement actifs» La préparation de la matière première racémique de formule III qui est utilisée lors du dédoublement avec l1acylase de 5 E. coli peut s'effectuer selon le schéma réactionnel donné ci-dessous : 10 15 CHO + CHo-C00H i 2 raco-ciLv 20 R"' R!1' Ac20 ETaOAc ■HjÔ /acétone 25 30 CH=C-COOH I HH-GO-GHg CHo-CH-C00H 2 I ïïh-go-gh2 H2/Pd/C 35 dans les formules, X, R" et R"* ont les significations données plus haut„ Le dédoublement en les inverses stéréo-isomères de la matière première que l'on obtient selon les schémas de formules donnés précédemment s'effectue par incubation du racémate obtenu, 40 à un pH de 6 à 8 environ,,. avec une acylase de E„ coli, pendant la 71 01534 5. 2081441 durée nécessaire, habituellement entre 1 et 72 heures environ» On abaisse ensuite la valeur du pH entre 1 et 3 et on effectue l'extraction de l'acylamino acide qui n'a pas réagi, avec de l'acétate d'éthyle ou tout autre solvant approprié, 5 Des exemples illustratifs de radicaux le formule : 10 15 sont : -CE. -CE- -CH- 20 L'enzyme mentionnée pour cette application, 1'acylase de E.. coli, est de préférence une préparation exempte de cellules qui peut être liée ou non à un support polymère, ainsi qu'il est 25 décrit dans la demande de brevet suédois n° 1820/69. Une acylase d'E. coli particulièrement appropriée est celle qui est décrite dans la demande précitée. Il est cependant évident pour l'homme de l'art que l'on peut utiliser, pour l'hydrolyse ensymatique stéréo-spécifique, des suspensions bactériennes de- 3, coli non e-30 xemptes de cellules, des extraits "bactériens le E, coli eu des concentrés d'enzymes de E, coli contenant 1'acylase à activité stéréo-sélective L'invention est décrite r.r exemples de mise en 35 tre réalisé le procs oeuvre, démon or an •. e — .s a i'axae .s comment " A. Préparation des matières premières EXEMPLE 1 Préparation de la !)• 4~ ( 3-mé t hoxyb enzyl i; 40 On a a.jouté 41,8 g (0,2^ BAD ORIGINAL 71 01534 6. 2081441 cine et. 4-6,5 g (0,34-2 mole) dé 3-*méthaxy-^benzaldéhyde à un mélexige de 13,2 g d'acétate de sodium anhydre et de 54- ml d'anhydride acétique,. Après chauffage pendant une heure au baiït marie? on a. "versé le mélange dans 14-0 ml d'un mélange d'eau et de glace, et 5 on a. extrait "la substance formée à l'acétate d'éthyle, Après éva™ paration et - séchage 9 . on a- trituré le résidu avëc de l'éthanol,> on a filtré2'on a lavé à l' eau et on a séché, Point de fusion : . . 104,5 à 105°C (éthanQl).o ■ Analyse . : C 73»57%; H 5*26%; il 4,69%; 0 16,50% 10 Calculé pour C^H^IÏO^ ; G 73,"7'I%i "H 5S15%; N 4,.78%;'Q 16*36%. b} Acide alpha-phény 1 acétylamid.o-m-méthoxy-cinnamique " On a mis en suspension 39 g de 4-(3-méthoxy-bsnz.ylidè~ ne)-2-benzyl-oxazolone-5 dans un mélange"de 325 ml d'acétone, ds 115 ml d'eau et de 35-25 ml d'acide chlorhydrique 2 ïf5 'et on a 15 porté à ébullition pendant 3 "heures „ On a évaporé le solvant étonna.dissous le résidu par addition de bicarbonate de sodium. A-près lavage avec de l'acétate d'éthyle, on a acidifié la phase a-queuse jusqu'à un pH compris entre 2 et 3» et on a recueilli le • produit précipitée Point de fusion s 186t5 à 1.90 r 5 (éth.anol)0 20 Analyse - - : C 69*32%; H 5,67%; ET 4,32%; 0 20*71%, Calculé pour C-^H-^iïO^ : C 69s44%; H 5>5Ï%; N 4*50%; 0 20,56%, c) dl-ET-pliénylacétyl-3-(3'-méth.oxyph.ényl)-alanineo On a effectué l'hydrogénation de 16 g d'acide alpha-phénylacétylamido-m~mé thoxy-c innamique, èous preso 25 dans 320 ml d'éthanol,. en utilisant 10 % de Pd sur charbon comme-catalyseur, Jusqu'à ce que la quantité théorique d'hydrogène ait été absorbée» Après la séparation, du catalyseur et du solvant, on a obtenu le produit sous la forme de cristaux blancs. Point de fusion : 13Ô à 132°G (chloroforme), 30 Analyse. . ; C 68,83%; "H 6,29%; F 4,57%; 0 20,51%» Calculé pour C-^H^NO^ s C 682 99%; H 6,11%; K '4*47%; 0 20242%s EXEMPLE 2 : Préparation de IT-phényla.eétyI-3-(3,4-méthyIène-dloxy-phény13-alanine, a) On a préparé la 2-benzyl-4-(3,4-méthylène-dicxy-benzy-35 lidène)-oxâzolone-5 comme décrit dans l'exemple la, en utilisant 98 g de pipéroasl, 85 g de IT-phényl-acétylglycine, 105 "ml d'anhydride acétique et 27 g d'acétate de sodium- anhydre, comme matières premières. Le produit obtenu présentait un point de fusion de 14S à 147°C3(éthanol) et un spectre de SMÏT (Résonance Magnétique 40 Nucléaire) en accord avec.la structure. bad original 71 01534 7. 2081441 b) On a préparé l'acide alpha-phénylacétamido-3,4-méthy-lènedioxy-cinnamique de façon analogue à celle du procédé décrit à l'exemple lb, en utilisant 36 g de 2-benzyl-4-(3,4-méthylène-dioxy-benzylidène)-oxazolone-5, 240 ml d'acétone, 105 nil d'eau et 5 3 ml d'acide chlorhydrique 2N, comme matières premières» Le produit obtenu présentait un point de fusion de 197 à 200°C (étha-nol) et un spectre de EMïT correspondant à la structure» c) On a préparé la N-phénylacétyl-3-(3,4—méthylène-dio-xyphényl)-alanine comme décrit à l'exemple le, en utilisant 55 g 10 d ' acide alpha-phényl^acétamido-3,4-méthylène-dioxy-cinnamique , a-vec 10 % de Pd sur charbon (5,5 g) comme catalyseur, dans 1000 ml d'éthanol. L'hydrogénation a donné un produit final présentant un point de fusion de 154 à 158°C (éthanol/eau) et un spectre de EMU correspondant à la structure. 15 Analyse : G 65,94; H 5,08; H" 4,37; 0 24,60 Calculé pour C18H17N05 : C 66,05; H 5,24; N 4,28; 0 24,44 %. KX.HJVIPLE 3 : Préparation de N-phénylacétyl-3-(3^4-diméthoxyphényl)-alanine. a) On a préparé la 2-benzyl-4-(3,4-diméthoxy-benzylidè-20 ne)-oxazolone-5 comme décrit à l'exemple la en faisant réagir 200 g de N-phényl-acétylglycine et 256 g de 3,4-diméthoxy-benzaldéhyde dans un mélange anhydride acétique/acétate de sodium (246/46g). Point de fusion : 154 à 155,5°C (acétone/éthanol). Le spectre de ÉMÎT était en accord avec la structure. 25 b) On a obtenu l'acide alpha-phénylacé tamido-3,4-dimé- thoxycinnamique, de la même façon qu'il est décrit à l'exemple lb, à partir de 69 g de 2-benzyl-4-(3,4-diméthoxy-benzylidène)-oxazo-lone-5. Point de fusion : 211 à 217°C (éthanol). Le spectre de RMN était en accord avec la structure» 30 c) On a obtenu la F-phénylacétyl-3-(3,4-diméthoxyphény3)- alanine comme décrit à l'exemple le, à partir de 70 g d'acide al-pha-phénylacétamido-3,4-diméthoxy-cinnamique, dans 1,6 litre d'éthanol et 10 % (7g) de Pd sur charbon. Point de fusion : 145,5 à 149,5°0 (chloroforme). Le spectre de RMÏT était en accord avec la 35 structure. EXEMPLE 4 : Préparation de N-phénylacétyl-3-(3,4-dihydroxyphényl)-alanine. a) N-phénylacétyl~3-(3,4-dihydroxyphényl)-alaninate d1- éthyle. 40 On a ajouté successivement, en agitant, à un mélange re 71 01534 8. 2081441 froidi à -la glace de 8,3 g de chlorhydrate de 3-(3,4-dihydroxy-phényl)-alaninate d'éthyle dans '250 "ml de chlorure dé méthylène exempt d'oxygène, sous atmosphère d'argon, 8,7 ^1 10 b) ï[-phénylacétyl-3'-(3,4-dihydroxyphényl)-alanine» On a agité pendant 2 heures, à 25°C environ, un mélange de 7S1 g N-phénylacétyl-3-(3,4-dihydroxyphényl)-al-aninate d'éthyle, dans 32 ml.de HaOH 2- I, On a lavé la solution limpide résultante avec de l'acétate d'éthyle, 'on .a acidifié à pH 2 avec .15 H^SO^ concentré, et on a effectué, l'extraction avec de l'acétate d'ét'hyle » On a'lavé la-couche organique avec de" la saumur.e, on a séché et on a-évaporé pour laisser le produit, la N-phénylkcétyl-3-(3}4-dihydroxyphényl)-aranine,: sous la forme d'une huile brune, avec un. rendement presque quantitatif» 20 EXEMPLE 5 •" Préparation de N-phénylacétyl-3-(3-méthoxyphényl)-a-lanine » On a ajouté goutte à goutte 6,6 ml de" chlorure de phényl-acétyle dans'20. ml d'.étheràun mélange agité et refroidi à la glace de 10,2 g de 3-^éthoxy-phényl-alanine, 1/2 HgO, dans 250 25 ml d'eau et 20 ml d'éther,. tout eh maintenant le pH à 11,5 avec ïfaOH 5 $F. On a séparé la phase aqueuse, on. a.lavé à l'éther et on a acidifié jusqu'à un pH de 2,, avec de l'acide chlorhydrique concentré. On a'recueilli le produit cristallin qui a précipité et on l'a lavé à l'eau et à l'éther» Point de fusion : 130 à 133°G 30 (chci3)0 EXEMPLE 6 : Préparation de N-phénylacétyl-3-(3«4-méthylène-dioxy-phényl)-alanine.» -On a préparé la 0-phényl-acétyl-3-(3,4-méthylène-dioxy-phényl)-alanine, comme il est décrit à l'exemple 5} en partant de 35 3-(3j4-méthylène-d^.oxy^hényl)-alanine et de chlorure de phényl-acétyle» Le produit/identique à celui de l'exemple 2c» EXEMPLE 7 • Préparation de j\r-(4-fluorophénylacétyl)-3-méthoxyphé-nyl-alanine » On a obtenu la N-(4~fluorophényl-acétyl)-3-méthoxyphé-40 nyl-alanine ainsi qu'il est décrit à l'exemple 5 pour le composé 71 0153** 9o 2081441 ÎT-phénylacétyle parent, en partant de 7,8 g de 3-^éthoxyphényl-a-lanine et de 6,9 g de chlorure de 4-fluorophénylacétyle. On a obtenu des cristaux blancs, ayant un point de fusion de 115 à 120°C (CHClj)» 5 EXEMPLE 8 : Préparation de E-(4-nitrophényl-acétyl)-3-méthoxyphé-nyl-alanine. On a obtenu la N-(4-nitrophényl-acétyl)-3-méthoxyphé-nyl-alanine, ainsi qu'il est décrit pour le composé parent ?T-phé-nyl-acétyle (exemple 5), en partant de 7,8 g de 3-K-éthoxy-phényl-10 alanine et de 8,0 g de chlorure de p-nitrophényl acétyle. Gris-taux jaune clair, ayant pour point de fusion : 145 à 147°C (CHClj). EXEMPLE 9 : Préparation de N-phén~)rlacétyl-5-(3-méthoxy-4-hydroxy~ phényl)-alanine. 15 On a ajouté en agitant, en refroidissant à la glace, 1,4 ml (0,01 mole) de chlorure de phényl-acétyle dans 10 ml d'é-ther, à 2,11 g (0,01 mole) de 3-(3-méthoxy-4-hydroxyphényl)-ala-nine dans 50 ml d'eau et 10 ml d'éther, et on a maintenu la valeur du pH à 11,5« On a séparé la phase aqueuse, on lra lavée deux 20 fois avec de l'éther et on a acidifié jusqu'à un pH de 1 à 2. On a refroidi le mélange pendant 2 à 5 heures, on a recueilli le produit précipité, on a séché et lavé avec un peu de chloroforme. Point de fusion : 172 à 173°C (acétone). Analyse : C 65,54; H 5,96;. H 4,24; 0 24,36 %, 25 Calculé pour C^H^NO^ : C 65,64; H 5,81; N 4,25; 0 - 24,49 %, EXEMPLE 10 ; Préparation de N-phénylacétyl-m-tyrosine„ On a agité pendant 2 heures, à 25°C environ, un mélange de 0,05 mole de N-phénylacétyl-m-tyrosinate d'éthyle, dont la structure était confirmée par spectroscopie de PME", dans 75 ml 30 (0,15 mole) de NaOH 2 îî. On a lavé la solution limpide résultante avec de l'acétate d'éthyle, on a acidifié à pH 2 avec HgSO^ concentré et on a extrait avec de l'acétate d'éthyle» On a lavé la couche organique avec de la saumure, on a séché et évaporé, ce qui laissait le produit sous forme d'une huila reune avec ur ren-35 dement presque quantitatif. Le spectre de Bï."T était conforme à la structure et, par chrome.tograph.ie en "couche mince, on n'a décelé qu'une seule tache 'éthanol). B. Dédoublement enzymatique des composés de formule III» EXEMPLE 11 : Résolution de dl-lT~r>hérvi-cét"l-5-'3 ^-r-iétlïvlère- - - - - v ^ 40 d i oxyphényl)-alanine. 71 01534 2081441 On a obtenu la l(-)-3-(3»4-méthylène-dioxyphé:nyl)-ala-nine et la d(-)-F-phénylacétyl-3-(354-méthylène-dioxyphényl)-ala-nine par incubation de 5 g de dl~]\T-phénylacé'tyl-3-(3 ,4-méthylène-dioxyphényl)-alanine avec 6000" unités d'acylase de E» coli dans 5 50 ml cL'eau, à pH 7385 en utilisant, comme, base pour régler le pH, de l'ammoniaque, de l'hydroxyde de sodium ou de l'hydroxyde de lithium» On "a effectué "diverses-"expériences d'incubation, et on a fait varier les durées entre 1 et 72 heures et les températures d'incubation entre 25 et 37°C» Une fois l'incubation ache-10 vée, on a réglé-le pH à 1,5 avec de l'acide chlorhydrique ou avec de 1''acide suifurique 2 ÏT, après quoi, on a extrait à l'acétate d'éthyle 1'"amino-acide phényl-acétylé non dédoublé» On a concentré la phase aqueuse restante et cela a donné, après ajustèment du pH à 5,5, un am-ino acide lévogyre 1(~) qui n'était-plus prêté— 15 gé sur l'atome d'azote de l'aminé, sous 1a. forme de cristaux — PO blancs ayant un point de fusion de 202 à 210,5°C (eau) / a_7 ^ = -28,12° (eau, c = 1)» . Analyse : trouvé - : C 57,53j H 5,26; F 6,82; 0 30,70 %; Calculé pour C'^H^NO^ : C 57,41; H 5,30; H" 6,70; 0 30,59 %. 20 La phase acétate d'éthyle contenait l'amino acide d(-)E-phényl-acétylé, qui présentait un point de fusion de 143 à 157°C (étha-nol) /_a_7^ = -59,46° (acétate d'éthyle, c = l}a EXEMPLE 12 : Dédoublement de dl~K-ph.énylacétyl-5-(3~méthoxyphé-nyl)-alanine a 25 On a préparé, de la mtïne façon que décrit à l'exemple 11 ci-dessus, la -l(-)-3-(3--méthoxyphényl)-alanine et la d(-)-îî-phénylacétyl-3-(3-méthoxyphényl)-,alanine » La matière première é-tait de 5 S Analyse, trouvé s C 56,18-; H 6,98; ET 6,70; 0 30,01 Calculé pour-C^H^NOaH^-Oï' C 56,33; H 7,09; N 6,57; 0 30,02 %„ 35 L'anino acide d(-)-Iï-phénylaeétyié avait un point de fusion de 117,5 à.l33°C / oc_7^® - -435-93° (acérate d'éthyle, c = 1) » EXEMPLE 15 s Dédoublement .de dl-jf-phéaylacétyl-3-(3,4-dimétlioxy-phényl)-alanine » On a préparé la l(-)-3-(3,4-diméthoxypliényI)-alanine et 40 la d(-)-F-phénylacéty 1-3-X3*4-diméthoxyphériy 1 )-alan ine par iïicu- 71 01534 H. 2081441 "bation.de 5 g 10 Le produit, la l(-)-3-(3,4-diméthoxyphényl)-alanine, a précipité — 20 sous forme de cristaux blancs; / a_7D = -5}64° (HC1 1 F, c = 1). Point de fusion : 209 à 214,5°C. On a obtenu la forme d(-) de l'amino acide phénylacétylé à partir de la phase acétate d'éthyle; son point de fusion était de 117 à 142°C; /~a_7^p = -49,75° (acé-15 tate d'éthyle, c = l). - EXEMPLE 14 : Dédoublement de dl-N-phénylacéty 1-3-(3-ffl-éthoxyphényl)-alanine. On a préparé la l(-)-3-(3-méthoxyphényl)-alanine et la d(-)~ïr-phénylacétyl-3-(3-méthoxyphényl)-alanine par incubation de 20 10 g de dl-F-phénylacétyl-3-(3-méthoxyphényl)-alanine avec 2145 unités d'acylase de E. coli exempte de cellules dans 160 ml d'eai^ à pH 6,5 (avec comme base), pendant 3 h 1/4, à une température de 45°C. On a ensuite agité le mélange pendant quelques minutes avec du "hyflo" et avec du charbon actif, et on a filtré. On 25 a ajusté le pH du filtrat à 2,6 avec de l'acide sulfurique concentré et on a extrait le mélange avec de l'acétate d'éthyle. Cta a évaporé la phase aqueuse dans un cylindre-évaporateur jusqu'à 15 ml environ et on a ajusté la valeur du pH à 6,5» L'amino-acide l(-) a été obtenu par filtration. /~a_7^ = -6,18° (HC1 1 M", c = 30 1). On a lavé la phase acétate d'éthyle jusqu'à neutralité, on a séché et évaporé. On a traité le résidu avec de l'éther, ce qui a précipité la forme d(-) de l'amino acide N-phénylacétylé, sous — 20 forme de cristaux blancs. / oc 7-n - -44,93° (acétate d'éthyle, _ 20 — — JJ c = 1). / a_7D après une recristallisation dans l'acétate dféthy- 35 le : -51,35° (acétate d'éthyle, c = 1). EXEMPLE 15 : Dédoublement de dl-N-phénylacétyl-3-(3-métho:xy-4- hydroxyphényl)-alanine. 1(-)-3-(3-méthoxy-4-hydroxyphényl)-alanine„ 71 01534 2081441 CHoCHC00H d\ NHCOGH. ^ 1_C-) .CHoCHC00H d\ HHn -, On a fait incuber pendant ;3_,5 heures à 50°.C, ..à. différentes valeurs, de pH, (selon le tableau I ci-après), une solution de 3,29 g (0,.01 mole) de ïï-phénylacétyle-3-(3-ni-éth.o:xy-4-hydro:xy-phényl)-alanine dans 100 ml. de H^HPO^ 0,2 M et .de .l'acylase de 10 E. coli en des quantités variables,. selon le tableau I„ Ensuite, . on a filtré- la solution avec de 1'"hyflo" et avec du charbon actif et. on a ajusté le pH à l,5v avec de l'acide sulfurique concentré. .On. a décanté le liquide qui surnageait pour le: séparer de l'huile précipitée et- on a lavé à l'acétate d'éthyle» -0n a évaporé 15 la phase aqueuse jusqu'à 25-. ml environ, sous -10 mm de -Hg environ, et on a précipité l'amino acide, en ajustant le pH à 5,5» . On a d'abord précipité l'huile depuis-la phase aqueuse et on l'a combinée avec.la phase acétate d'éthyle, et on a chassé le solvant sous vide.. .On- a agité le résidu avec du chloroforme et 20 on a obtenu par filtration la d{-)-ïtf-phényl.acétyl-3-(3-méthdxy-4-hydroxyphényl)-alanine cristallisée» •• On a-modifié les conditions de réaction ainsi qu'il est indiqué au tableau I, et l'on.a obtenu les résultats indiqués» 25 .pH 30 6,25 6,25 6,50 6S75 35 6,75 7,00 " "7,10 '7,25 7,50 7,75 4-0 8,00 CH^O 3 HO ..GHo0HC0oH .. =2, 2 HH0 Unités d'acylase s 720 /0,01 mole de sup- / oc 7tvU (G = 2.HC1 1 N"). Rendement % sss "port ~ " . " 1500 1750 1500 1500 1750 1500 1500^ 1750 1500 1500 1500 •5,74 '. 5,78 6,06 5,40 6,10 .5,62 • .5,39 6,4-7 5,99 6,02 .6,04 -68,6 85.2 83.3 81.4 76,9*' 69,4 71,1 75,-6 49,7 34,1 30,0 71 01534 2081441 3£ Une unité d'acylase est la quantité d'enzyme qui, à 35°C, pro-duit\0,5 mg d'acide 6-aminopénicillanique à partir de benzyl-pénicilline, en 90 minutes, ses La réaction de la moitié de la quantité de support racémique 5 était considérée comme 100 %Q EXEMPLE 16 : Dédoublement de dl-F-phénylacétyl-m-tyrosinea l(-)-m-tyrosine : On a ajouté 3000 unités d'acylase à une solution de 6 g (0,02 mole) de F-phenylacétyl-m-tyrosine dans Fa^HPO^ 0,025 M à pH 6,75 (pH réglé avec FaOH 2 F) et on a laissé 10 incuber le mélange pendant 4 h à 40°C„ On a ensuite soumis la solution à. du charbon de bois, on a acidifié à pH 2 avec HgSO^ concentré et on a lavé à l'acétate d'éthyle. On a concentré la phase aqueuse jusqu'à 17 ml et .on a précipité le produit, à pH 5, avec de l'ammoniaque concentrée. Après refroidissement à 4°G pendant — PO 15 15 h, on a recueilli par filtration la. l(-)-m-tyrosine. /~oc_7p = -9,25° (c = 2, HC1 1 F); teneur en eau : H,7 %» La phase acétate d'éthyle a fourni, après évaporation, la d(-)-F-phénylacétyl-m-tyrosine non hydrolysée. EXEMPLE 17 : Dédoublement de dl-N-phénylacét,yl-3-(3-méthoxy-4-20 hydr oxyphény 1 ) - al an in e . 1 (-)-3-raéthoxy-4-hydroixyphény 1-alanine : On a ajouté 1500 unités d*acylase à une solution de 3,29 g de F-phénylacétyl-3-(3-méthoxy-4-hydroxyphényl)-alanine dans Fa^HPO^ 0,025 M, à pH 6,75 (pH réglé avec FaOH 2 F), et on a fait incuber le mélange 25 pendant 3,5 h à 50°C. On a ensuite soumis la solution à du charbon de bois, on a acidifié à pH 2 avec du HgSO^ concentré et on a lavé à l'acétate d'éthyle. On a concentré la phase aqueuse à 20 ml et on a précipité le produit à pH 5-6 avec de l'ammoniaque concentrée. Après refroidissement à 4°C pendant 15 h, on a recueilli PO 30 par filtration la l(-)-3-méthoxy—4-bydroxyphényl-alanine. = -5,27° (c = 2, HC1 1 F). Teneur en eau : 8,7 %» La phase acétate d'éthyle a. fourni après évaporation la d(-)-F-phénylacétyl-3-(3-iaéthoxy-4-hydroxyphényl)-alanine non hy-drolysée que l'on peut racémiser et réutiliser pour l'hydrolyse 35 enzymatique stéréo-spécifique. EXEMPLE 18 : Dédoublement de dl-F^4-fluoroph.énylacétyl)-3-Hiéth.oxy-phényl-alanine et de dl-F-(4-nltrophényl-acétyl)-3-méthoxyphényl-alanine. On a. préparé la l(-)-3-®étho:xyp3iényI-alanine de la même 40 façon que celle décrite pour la l(-)-3-aiéthoxy-4-hydroxyphén,yl-a- 3AD ORIGINAL 71 01534 i4» 2081441 lanine (exemple 1?), en partant de E-(4-fluorophénylacétyl)-3-méthoxyphényl-alanine, ou de N-(4-nitroph.énylacétyl)-3-méthoxyphé-nyl-alanine respectivement, et d1acylase„ Le produit obtenu était identique au produit cibtenu à l1 exemple ,13» 5 EXEMPLE 19 . : Dédoublement .de àl-K~phénylacétyl-3 phényl )-al'anine, " . On a obtenu la l(-)-3--(3s4-dihydroxyphériyl)-alanine et la d(~)-J$-phénylacétyl-3~(3s4--dih.ydroxyph.ényl)-alanine ainsi qu'il a été décrit pour les dérivés"3~hydroxylés correspondants, en 10 partant de ï?-phénylacétyl-.3~(3s4-dihydroxyphényl)-alanine et dla-cylase & — PQ alanine ainsi obtenue présentait \me rotation optique /"a 7D - -10,5?° (c = 2, HCl IN); et, pour la d(-)-F-phénylacétyl-3-(3,4- — PO 15 dihydroxyphényl)-alanine, / a_7s = -35,0° (c = 1, acétate d'éthyle) . C» Hydrolyse des isomères 1(-)» EXEMPLE 20 s Hydrolyse de l(-)-3-(3-méth.oxyphényl)-alanine » On a 'obtenu la l(-)-m~tyrosine en portant à reflux un 20 mélange de'l g de l(-)-3~(3-méth.oxyph.ényl)-alanine à température constante d'ébullition} de 5 ml dJacide iodhydrique à 57 %, de 5 ml d'acide acétique cristallisable et de 0,33 g &.© phcrsphore rouge, pendant 3 heures sous atmosphère d'argon» On a ensuite filtré le mélange et on l'a évaporé plusieurs fois avec de l'eau» Le ré-25 sidu cristallin finalement obtenu a été dissous dans une petite quantité d'eau et on a ajusté le pH à 5-6» Des cristaux blancs ont précipité, qui présentaient, après récriâtallisaticrt dans de-l'eau, un point de fusion de 243- à 259°C« /"a 7^ = -Sr4° (c = 1, HCl 2 3T)* 30 Analyse r C 59,42; H 6,78; ÏT 7,59; 0 26,44 %t Calculé poiir Cq&j^O, : C 59,33; H 6,64; N 7,69; 0 26,35 %. EXEMPLE 21 : Ijydrolyse de l(-)-3-(3,4-méth.ylène-diox^-phényl)-ala-nine „ On a obtenu la l(-)-3-(3,4-dihydroxyphényl)-alanine par 35 ébullition de 1,5 S ûe l(-)-3-(3,4-méthylène-dioxyphényl)-alanine dans un mélange (1:1) de 20 ml d!a.cide iodhydrique à 57 % et d'anhydride acétique et avec 4 g de phosphore rouge, sous atmosphère d'argon, pendant 3 h» On a ensuite filtré le mélange, on a refroidi et évaporé plusieurs fois avec de l'eau, sous atmosphère 40 d'argon, et sous pression .réduite» On a filtré le résidu avec 10 bA0 OFttGtNM- 71 01534 2081441 ml d'eau et on a réglé le pH à 4,5 avec de l'ammoniaque, en fournissant simultanément de l'argon au mélange. On a ajouté 10 ml d'hexane et, après conservation au froid pendant 12 heures, on a recueilli le produit. La substance obtenue présentait un point de 5 fusion de 276 à 278°C„ ... EXEMPLE..22 : Hydrolyse-de ^(—)-3-*-(3-méthoxy-4-hydrdxyphényl)-ala- nine, On -a mélangé 2,14 g (0,0095 mole) de l(-)-3-(3~méthoxy-4-hydroxyphényl)-alà.nine avec 7S5 ml de HBr à 47 % et 2,3 g de 15.phénol, et on a fait bouillir à reflux pendant 3 heures. On a é-vaporé le mélange sous vide. On a dissous le résidu dans 3 ml d'eau et 7 ml d'acétate d'éthyle. On a traité la phase aqueuse avec du charbon actif traité, au SC^, on a ajouté un peu de îTaHSO^ et on a élevé la valeur du pH à 4 avec de 1'amnoniaque concentrée, — 20 20 en refroidissant, ce gui a précipité l'amino acide / oc_7-q -11,5° (c = 2, HCl 1 F) (recristallisé une fois dans l'eau). 71 01534 16. 2081441 REVENDICATIONS» 1. Procédé pour la préparation de substances thérapeu-tiquement actives de formule : / CHo-CH-C00H 2 I NH~ R' » i 10 R" dans laquelle R" représente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy ayant au plus 5 atomes de carbone, comme les groupes -OCH^, -oc2h5, -OC^H,-,; et dans laquelle R" ' représente un atome d'hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy ayant au plus 5 ato-15 mes de carbone, comme —OCH^, -OCgH^, -OC^H^, ou dans laquelle R" et R"' représentent, pris ensemble, un groupe alcoylènedioxy a-yant 1 ou 2 atomes de carbone, caractérisé en ce que l'on fait incuber un composé de formule : 20 R •CHo-CH-C0oH 2 y 2 nh-cq-ch. " i R" 25 dans laquelle R" et R"' sont tels que définis ci-dessus et où X représente un atome d'hydrogène, de fluor, de chlore, de brome ou le groupe avec une acylase de E. coli à action stéréo-sé- lective, en vue de la formation de la forme 1(~) d'un composé de formule : " - 30 CHo-CH-C00H 2 i HH, 35 dans laquelle R" et R"' sont tels que définis ci-dessus, après quoi, si on le désire, les groupes R" et R"1, si tous deux désignent un radical autre que l'hydrogène, peuvent être transformés 40 en groupes hydroxy selon des procédés en soi connus, ou bien le. 71 01534 17. 2081441 groupe R" peut être.transformé en un groupe hydroxy, selon des procédés en soi connus, à la condition que R"' soit de l'hydrogène. 2» Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce 5 que les groupes R" et R"' sont transformés en le groupe hydroxy correspondant, par traitement avec de l'acide iodhydrique et du phosphore rouge» • 3» Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que l'on effectue l'incubation à un pH de S à 8, 10 pendant une durée de 1 à 72 heures, et à température comprise entre 0 et 60°C, de préférence à 45°C environ» 40 Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce qu'on règle le pH, après incubation, entre 1,5 et 3,5.st qu'on extrait le N-acylamino acide non dédoublé a-15 vec un solvant organique, de préférence l'acétate d'éthyle, l'amino acide l(-) étant ensuite isolé de la phase aqueuse» 5» Composé intermédiaire destiné à servir de matière première pour la préparation des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'il a pour formule: 20 CHo-CH-C0oH 1 2 M-C0-CH2 R"' 25 R" dans laquelle X, R" efc R"' ont les mêmes significations que celles données dans la revendication 1. 6» Composé intermédiaire selon la revendication 5» cs_ 30 ractérisé en ce qu'il est constitué par la dl-iT-phénylacétyl-3-(3,4-mé thy1èn e-di oxyphény1)-a1an in e » 7« Composé intermédiaire selon la revendication 5, caractérisé en ce qu'il est constitué par la dl-R-ph.énylacétyl-3-(3-méthoxyphényl)-alanine » 35 8. Composé intermédiaire selon la revendication 5, ca ractérisé en ce qu'il est constitué par le il-IT-phénylacétyl-3-(3-méthoxy-4-îiydroxyp]iényl)-alanine » 9» Composé intermédiaire selon ls revendication 5, caractérisé en ce qu'il est constitué par la dl-iT-ph.énylaoétyl-3-40 (3-hydroxy-4-méth.oxyphényl)-alanine» 71 01534 2081441 10» Composé intermédiaire selon la revendication 5} caractérisé en ce qu'il est constitué par la dl-E-phénylacétyl-(3,4-dihydroxyphényl)-alanineo 11. Composé intermédiaire selon la revendication 5? ca-5 ractérisé en ce qu'il est constitué-par la dl-H~ph.énylacétyl-(3-îiydr oxypîiényl)-alanine o . 12o Composé intermédiaire s.eiôn la revendication 55 caractérisé en ce qu'ai est -constitué par le 5F-ph.énylacétyl-m-tyro-sinate d'éthyle de formule développée ; 10 ^ CHo-CH-C00CoHc d | a > NH-CO-CH,- / ^ 15 OH 13» Matière première pour la préparation des composés intermédiaires selon l'une quelconque des revendications 5 ou 6, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un composé de for-20 mule : 25 / l I1, R CH=C-C0oH t 2 NH t C0CH. / ^ R dans laquelle R désigne le groupe. -OCH^, ou tien les deux grou- O - pes R désignent ensemble un groupe méthylène-dioxy „ 30 14. Matière première pour la préparation des composés intermédiaires selon l'une quelconque des revendications 5, 6 ou 13, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un composé de formule 35 CH=C - C " I l ¥ ' 0 0 /Y %-CS R R 40 dans laquelle R est tel que précédemment défini. 71 01534 19. 2081441 15» Matière première pour la préparation d'un composé intermédiaire selon l'une quelconque des revendications 5 ou 7, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un composé de formule : 10 16. Matière première pour la préparation d'un composé intermédiaire selon l'une quelconque des revendications 55 7 ou 15, caractérisée en ce qu'elle est constituée par un composé de formule : 15 20 17. Forme l(-) des composés de formule 25 ainsi que de leurs sels therapeutiquement acceptables, caractéri-2 sée en ce que E représente un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy ayant au plus 5 atomes de carbone, et B représente un atome d'- 30 hydrogène, un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy ayant au plus 5 atomes de carbone, a la condition que ~&r représente l'hydrogène, 2 un groupe hydroxy ou un groupe alcoxy lorsque E represente un 3 2 groupe alcoxy et que E^ soit un groupe alcoxy lorsque E repré- 2 3 sente un groupe hydroxy; ou bien E et E^ pris ensemble désignent 35 un groupe alcoylène-dioxy ayant 1 ou 2 atomes de carbone. 18. Préparation pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient, comme composant actif, au moins un composé selon la revendication 17, ou l'un de ses sels thérapeutiquement acceptables. 40 19» Application d'une préparation pharmaceutique selon la revendication 18 au traitement de la maladie de Parkinson. I