Brevet FR2059541A1 — publié le 19710604

-1- 2059541 La présente invention concerne de nouvelles formulations de tétramisole ; elle concerne en particulier des formulations convenant pour l'administration par injection chez les animaux à sang chaud, comme le bétail (bovins ou chevaux), les porcs, 5 les moutons et la volaille. On connaît d'après le brevet britannique n° 1 043 489 l'action anti-helminthique puissante du D,L-2,3,5,6-tétrahydro-6-phénylimidazo-(2,1-b)-thiazole (désigné par la suite, pour plus de commodité, sous' le nom de D,L-tétramisole et de ses sels d'addition d'acides thérapeutiquement acceptables. 10 Le brevet.britannique n° 1 043 489 précité énumère de nombreux sels d'addition d'acides du D,L-tétramisole dérivant d'acides organiques ou minéraux courants. On sait également que le tétramisole lévogyre, ci-après désigné sous le nom de L-tétramisole, présente environ deux fois l'activité du D,L-tétramisole comme 15 agent anti-helminthique, c'est-à-dire que le L-tétramisole est responsable de la totalité ou de la plus grande partie de l'activité anti-helminthique, du moins chez les ruminants comme les moutons ou le bétail Dans la demande de brevet australien' n° 32 285/68 du 11 Janvier 1968 et déposée par la . mêi^e 20 Demanderesse, on a décrit et revendiqué un procédé de préparation de L-tétramisole sous une forme extrêmement pure. Comme la tolérance des mammifères au tétramisole dextrogyre (désigné ci-après sous le nom de D-tétramisole) est à peu près la même que celle manifestée par le L-tétramisole, la fabrication de L-tétramisole 25 pur a permis de réduire sérieusement le risque de réaction toxique chez l'animal en cours de traitement. Bien que le D,L-tétramisole racémique lui-même présente une marge de sécurité suffisamment large pour la plupart des espèces, la marge de sécurité de l'isomère L, qui est pratiquement le double, est particulièrement ap-30 préciable quand on administre le produit dans les champs sous surveillance variable, surtout dans les conditions extrêmes dans lesquelles a lieu l'élevage des moutons et du bétail à l'intérieur de l'Australie ou dans les grands espaces des Etats-Unis d'Amérique, où une sécheresse prolongée peut réduire de façon imprévisible la 35 résistance de certains animaux. En outre, la préparation de L-tétramisole pur facilite l'administration sous forme d'injection sous-cutanée puisqu'il faut de moindres doses de ce composé pur. 70 26720 -2- 2059541 Bien- que le tétramisole soit administrable "per os", il est souhaitable d'effectuer des administrations par injection. Le bétail, en particulier celui qui vit à l'état sauvage, résiste à l'administration de médicaments "per ôs" et il est né-5 cessaire de disposer d'un équipement complexe de harnachement pour effectuer un traitement satisfaisant. L'administration de médicament au bétail par injection est beaucoup plus simple, permet de traiter beaucoup plus de bêtes par unité de temps et implique beaucoup moins de risques pour l'homme et l'animal ; 10 même dans le cas des moutons, des porcs et de la volaille, il est parfois préférable de procéder par injection. Malheureusement, l'administration de solutions de tétramisole par injection ne s'est pas montrée entièrement satisfaisante. Dans le cas du bétail, la dose thérapeutique à injecter est proportionnelle au 15 poids de la bête et est donc relativement grande. Une très faible proportion des animaux présente, à l'endroit de l'injection, une sensibilité et même des réactions pathologiques indésirables, qui peuvent aller d'une légère irritation à la formation d'excrois-sances, dont le diamètre peut varier entre quelques millimètres 20 et plusieurs centimètres. Malgré l'incidence statistique particulièrement faible de ce phénomène, celui-ci a empêché jusqu'à présent l'adoption de l'administration par injection dans de nombreuses régions et l'élimination de ce phénomène reste donc éminemment souhaitable. 25 Dans l'application la plus répandue du tétramisole dans de nombreux pays, on emploie presque universellement pour des formulations aqueuses ses halogénures, en particulier son chlorure, la plupart du temps avec de faibles additions de tampons de phosphate ou de citrate, en quantité généralement inférieure à 0,03 mole/ 30 litre, pour ajuster le pH à une valeur quelque peu inférieure à celle du pH normal du chlorhydrate qui est de l'ordre de 4. Cet ajustement du pH n'a pour but que d'améliorer la stabilité des solutions lors de leur emmagasinage, car le tétramisole se transforme en un dérivé inactif par hydrolyse sous l'action de catalyseurs 35 basiques. La sensibilité pathologique observée chez certains animaux après injection du chlorhydrate a été attribuée jusqu'à présent à 70 26720 -3- 2059541 des réactions idiosyncrasiqu.es à la molécule organique de tétramisole, à savoir de l'irritation ou des libérations histaminiques. Pour cette raison, on a concentré jusqu'alors l'étude des facteurs caractérisant l'acceptation biologique, en particulier 5. l'acceptation des injections, sur la molécule de tétramisole ou de ses homologues. la Demanderesse vient de découvrir que les critères d'acceptation thérapeutique des sels de tétramisole par injection diffèrent de ceux des sels de tétramisole par administration "per os". 10 la Demanderesse a découvert en particulier que l'anion du sel de tétramisole présent dans la solution influe différemment sur le tissu vivant. Bien que ne désirant pas être limitée par une explication théorique, la Demanderesse considère que des effets osmoti-ques et/ou électro-osmotiques chez certains animaux sensibles peu-15 vent être la source des dégâts causés aux parois cellulaires et qu'on peut remédier à cette situation par le choix d'un anion convenable pour le sel de tétramisole. La Demanderesse a trouvé en outre qu'on peut obtenir une mesure de l'acceptation thérapeutique d'injections de solutions 20 aqueuses de sels d'addition de tétramisole par un simple essai d'hémolyse. Quand on mélange un sel de tétramisole, convenant moins bien à une injection sous-cutanée, avec du sang de bovin dans des conditions normalisées, une certaine proportion des globules rouges du sang subit l'hémolyse et le sérum sanguin se colore 25 avec une intensité qui est fonction du degré d'hémolyse. On n'observe pas ou très peu d'hémolyse dans le cas d'un sel convenant pour l'injection. Si on enlève alors les globules rouges du sang par centrifugation de la solution, la couleur résiduelle du sérum sanguin est une mesure quantitative de l'hémolyse. Bien qu'on 30 ignore s'il y a hémolyse in vivo dans les tissus de l'animal ou si l'hémolyse du sang qui se produit dans l'essai in vitro n'est qu'un phénomène en corrélation avec les dégâts causés aux tissus in vivo, la Demanderesse a trouvé qu'il existe une corrélation significative entre le degré d'hémolyse et l'apparition d'une sensi-35 bilité aux injections chez les animaux vivants présentant une sensibilité aux injections de chlorhydrate de tétramisole. 70 26720 -4- 2059541 En conséquence, l'invention concerne une solution aqueuse d'une quantité de sel de tétramisole équivalant à au moins 6 % en poids par volume de L-tétramisole base, cette solution ne produisant pas, par mélange avec du sang de bovin et soumission 5 à un essai d'hémolyse ci-après défini, d'hémolyse dans une proportion excédant l'estimation L de cet essai d'hémolyse. Essai d'hémolyse On exécute cet essai avec du sang veineux héparinisé provenant soit de certains animaux, soit de préférence, d'un impor-10 tant échantillon représentatif d'un certain nombre d'animaux qui vont être soumis par la suite à une injection. Dans une série de tubes à essai pour centrifugeuse, d'une contenance d'au moins 10 ml, on introduit à la pipette 2 ml de solution aqueuse du sel de tétramisole à analyser, on ajoute rapide-15 ment en agitant 4 ml de sang veineux héparinisé entier et l'on met le tube à essai dans un bain-marie à 38°C pendant 20 minutes. On centrifuge immédiatement à une force d'au moins 1500 g pour précipiter les globules rouges et on compare la couleur du plasma surnageant avec une série d'étalons préparés comme suit : 20 Solution 1 On prépare un lot de sérum de bovin provenant de préférence du même sang par centrifugation du sang non hémolysé comme décrit ci-dessus. Solution 2 25 On prépare du sang hémolyse en diluant 4 volu&es de sang par 2 volumes de chlorhydrate de tétramisole à 15 # en poids par volume, et on chauffe à 38°0 pendant 20 minutes. On prépare des étalons en mélangeant les solutions 1 et 2 dans les proportions indiquées ci-àprèe * . 70 26720 -5- 2059541 Estimation de l'hémolyse • • 11 i Mélange ml de solution 1 ml de solution 2 0) acceptable 10 0 9,95 0,05 1 \ 9,9 0,1 2 9,75 0,25 5 9,0 1,0 4 7,5 2,5 5 \ non acceptable 6,0 4,0 6 f 4,5 5,5 7 5,0 7,0 8 1,5" 8,5 9 0,5 9,5 10 J 0 10 Une estimation de zéro correspond à une hémolyse nulle et 20 1 à un effet négligeable ; ces estimations caractérisent les sels de la présente invention. Des estimations de 1 à 10 définissent différents degrés d'hémolyse jusqu'à hémolyse complète et elles sont associées aux sels de l'art antérieur qui convenaient moins bien pour l'injection. 25 Jusqu'à présent, les propriétés irritantes des sels de tétramisole, et par exemple, du chlorhydrate de tétramisole largement répandu, ont imposé des limitations à la concentration de médicament que l'on peut injecter avec une bonne marge souhaitable de sécurité et elles ont rendu nécessaires des compromis entre le 50 volume injecté et la dose thérapeutique à administrer. C'est ainsi que, pour certaines espèces de vers, surtout sous forme immature, .pour une dose plus elevee est neeessaire/garantir leur destruction complète. On peut évidemment utiliser une dose plus élevée par injection d'un plus grand volume ou à l'aide d'une concentration plus 55 forte, mais avec les sels utilisés jusqu'à présent en pratique, chacune de ces deux possibilités expose les tissus du lieu de l'injection à des risques plus élevés de dégâts. 70 26720 -6- 2059541 Il est tout à fait remarquable que les sels de tétramisole utilisés jusqu'à présent presque exclusivement, aussi bien pour l'administration orale que par injection, à savoir le chlorhydrate et, dans une bien moindre mesure, l'acétate, conviennent tel-5 lement moins bien pour des injections que les sels préférés selon la présente invention. La Demanderesse a trouvé que les sels de tétramisole qui satisfont à l'essai d'hémolyse, par exemple ceux de l'acide citrique, de l'acide tartrique et, en particulier, ceux de l'acide 10 phosphorique, conviennent thérapeutiquement pour les injections ; convient particulièrement bien et est supérieur à tous les sels essayés, le sel de l'acide phosphorique, qui est donc de beaucoup préféré. En conséquence, l'invention concerne une solution aqueuse 15 de citrate, tartrate ou phosphate de tétramisole équivalant à au moins 6 i° en poids par volume de tétramisole base. Les sels de mono- et di-tétramisole avec les polyacides ayant des constantes de dissociation adéquates conviennent également ; toutefois, quelques sels de di-tétramisole, comme le phosphate de di-tétramisole, 20 sont franchement alcalins et leurs formulation aqueuses présenteraient donc un pH supérieur à 5, donc dépassant l'optimum souhaitable pour l'emmagasinage par suite de l'instabilité hydrolytique du tétramisole à des pH supérieurs à 5 ; par conséquent, il est donc souhaitable d'ajouter un excès d'anion thérapeutiquement 25 acceptable, comme l'acide tartriqua ou phosphorique, dans la mesure où on a l'intention de garder le produit un certain temps en magasin. C'est pourquoi les compositions aqueuses de loin préférées comprennent le phosphate diacide de tétramisole. La Demanderesse a également découvert que les solubilités 30 dans l'eau du citrate diacide, du tartrate acide et surtout du phosphate diacide de L-tétramisole sont particulièrement élevées, phénomène que les découvertes biologiques de la Demanderesse permettent d'exploiter d'une façon nouvelle. En particulier, la Demanderesse a trouvé que le phosphate diacide de L-tétramisole est 35 soluble à des concentrations étonnamment élevées (plus de 60 % en poids par volume à 0°C). Une réduction de la quantité de fluide injecté se traduit par une légère réduction de la sensibilité ; 70 26720 -7- 2059541 cependant, avec les formulations de sel de tétramisole de l'art antérieur, on a remarqué que toute augmentation de la concentration en sel des solutions d'injection correspondait à une augmentation marquée des réactions d'irritation. Au contraire, la 5 Demanderesse a montré que les solutions de phosphate diacide de tétramisole conviennent particulièrement bien, même à des concentrations élevées. En outre, des indices tendent à prouver que les sels de phosphate en solution plus concentrée sont thérapeutiquement acceptés plus facilement du point de vue hyperesthésie. 10 La présente invention vise par conséquent des solutions aqueuses injectables et thérapeutiquement acceptables, comprenant du phosphate diacide de L-tétramisole à des concentrations allant de 12,5 io en poids par volume jusqu'à la limite de solubilité à la température d'emmagasinage souhaitée. C'est ainsi que la Deman-15 deresse a préparé et administré avec succès des solutions comprenant jusqu'à 50 % en poids par volume,, et même au-delà, de phosphate diacide de tétramisole. La L-tétramisole étant thérapeutiquement plus acceptable que le racémique et étant une forme plus concentrée de l'ingré-20 dient actif, on peut l'administrer en quantités inférieures de fluide à injecter ; les sels préférés sont donc à base de L-tétramisole, mais les sels du racémique sont également visés. La Demanderesse a trouvé en outre que l'on pouvait réduire davantage les effets secondaires résiduels indésirables des sels 25 d'addition de tétramisole par addition de sels solubles dans l'eau et thérapeutiquement acceptables, en particulier les sels de sodium, et elle s'est assurée que des solutions ainsi préparées sont thérapeutiquement plus acceptables pour des injections à des animaux. On peut donc utiliser l'addition de ces sels, et en par-30 ticulier de sels de sodium, telle que décrite dans une demande de brevet français déposée ce jour par la même Demanderesse et intitulée : "Solution aqueuse injectable d'un sel de 2,3,5,6-tétra-hydro-6-phénylimidazo-(2,1-b)-thiazole", pour rendre plus acceptables les solutions de tétramisole moins avantageuses de 1'art an-35 térieur, par exemple, les solutions de chlorhydrate ou d'acétate de tétramisole ; on peut également l'utiliser pour procurer une amélioration légère mais appréciable dans les formulations des 70 26720 -8- 2059541 sels de tétramisole préférés selon la présente invention, tels que le citrate et le tartrate de tétramisole, et en particulier les phosphates de tétramisole. Les sels de sodium qui conviennent sont ceux dont les anions se sont montrés thérapeutiquement plus 5 acceptables dans les sels de tétramisole eux-mêmes, à savoir le citrate de sodium, le tartrate de sodium ou le phosphate de sodium ; là aussi, on préfère les phosphategéLe sodium et, plus particulièrement, le phosphate diacide de sodium-. D'autres sels, qui sont moins pratiques, sont ceux de magnésium et, aux basses 10 teneurs où ils sont biologiquement acceptables, les sels de potassium. On peut également utiliser des mélanges de sels convenables, tels que définis. Le sel monosodique est généralement utilisé, bien qu'on ne saurait exclure les sels plus alcalins du point de vue de leur acceptation thérapeutique1 et: biologique ;;:ils ne 15 sont cependant pas pratiques par suite des conditions exigées pour l'emmagasinage, comme on l'a vu à propos de l'instabilité hydrolytique du tétramisole. Par conséquent, l'invention vise également une solution aqueuse injectable comprenant un sel de tétramisole tel que défini 20 précédemment, en une concentration équivalant à au moins 6 % en poids par volume de tétramisole base libre et comportant en outre de 0,1 à 0,5 mole, limites comprise^, et de préférence 0,15 à 0,5 mole, limites comprises, d'un sel de sodium ou de potassium soluble dans l'eau, par litre de solution» 25 Dans tous les cas où, par suite du choix d'un sel particu lier de tétramisole ou d'un sel particulier de sodium, le pH dépasse l'optimum de 4, on peut ajuster le pH par addition d'un acide ayant un anion thérapeutiquement acceptable, comme les acides tartrique, citrique, ou de préférence phosphorique. 30 C'est pourquoi l'invention vise également des formulations telles que définies ci-dessus, dans lesquelles le pH est ajusté dans une gamme de 2 à 4 par addition d'acide citrique, tartrique ou phosphorique. L'invention vise également le traitement de l'helminthiase 35 chez les animaux à sang chaud, qui comporte l'injection à l'animal d'une solution de tétramisole telle que précédemment définie. 70 26720 -9- 2059541 l'invention va être maintenant illustrée à l'aide d'exemples qui n'ont aucun caractère limitatif et dans lesquels toutes les proportions sont données en poids par volume équivalant au tétramisole base libre, sauf indication contraire. 5 Exemples 1 à 7 inclus On a préparé des solutions aqueuses stériles, convenant pour des injections, avec du phosphate diacide de L-tétramisole, du tartrate acide de l-tétramisole, du citrate diacide de L-tétramisole, de l'acétate de L-tétramisole et du chlorhydrate de 10 L-tétramisole à des concentrations indiquées aux tableaux I et II. Outre ces sels, on ajoute également les composés suivants qui sont utilisés d'une manière classique dans les formulations de tétramisole de l'art antérieur : 2 g de métabisulfite de sodium î 0,5 g de para-hydroxybenzoate de méthyle et 0^05 g de para-hydro-15 xybenzoate de propyle pour 1000 ml d'eau. On a sélectionné dans plusieurs grands troupeaux des bestiaux qui, au cours d'essais antérieurs, avaient montré une sensibilité marquée aux injections de chlorhydrate de tétramisole. Une telle sélection était nécessaire, car la grande majorité des ani-20 maux ne manifeste absolument pa3 de réaction indésirable à des injections de tétramisole et l'apparition d'une sensibilité dans un lot de bétail normal est si remarquablement faible qu'il aurait été nécessaire de faire des essais sur un très grand nombre de bêtes pour pouvoir déceler une tendance appréciable à l'irritation. 25 On sait que, d'une manière tout à fait générale, la sensibilité aux injections d'un médicament quelconque varie beaucoup chez les animaux et varie même pour un animal donné selon le lieu de l'injection ; pour éliminer ou réduire à leur minimum ces effets secondaires, on a fait varier selon les lois du hasard les lieux 30 d'injection et les bêtes elles-mêmes selon différents traitements, en utilisant dans toute la mesure du possible des lieux d'injection identiques, mais l'un à droite et l'autre à gauche. Les formulations stériles ont été injectées par voie sous-cutanée et on avait rasé les poils des lieux d'injection pour faciliter les observations. 35 On a évalué, dans la mesure où. il y en avait, lea réactions des tissus aux lieux d'injection à intervalles réguliers'pendant une période allant jusqu'à 14 jours. On évalué le type de réaction à chaque lieu d'injection comme suit : 70 26720 —10— 2059541 aucune réaction léger gonflement de la peau et des tissus sous-cutanés à la limite de la détection au toucher seulement analogue à 1, mais un peu plus étendu gonflement visible ayant jusqu'à 5 cm de diamètre et s'élevant légèrement au-dessus de la surface du corps gonflement important jusqu'à 10 co de diamètre et s'élevant de 0,6 à 2,5 cm au-dessus du niveau du corps gonflement supérieur à 8. 10 L'augmentation exponentielle des valeurs de ces évaluations tient compte de l'ampleur croissante de l'irritation. Les évaluations de 0 à 4 compris passeraient inaperçues en pratique si les poils n'avaient pas été rasés, mais des évaluations de 8 et au-dessus sont notables et sont à éviter ; une 15 évaluation de 16 ne saurait être tolérée. Du fait qu'avec un grand nombre de traitements pratiqués en une seule fois il n'est pas possible d'effectuer des essais satisfaisants en double et au hasard avec un nombre restreint d'animaux, et pour obtenir également une indications des variations dues 20 aux conditions climatiques, biologiques (âge, condition physique, sexe) et autres facteurs aussi hasardeux, on a effectué plusieurs séries d'expériences dont les résultats sont indiqués sur des ta- - * bleaux séparés. La somme des évaluations de tous les animaux d'un groupe (évaluation totale) divisée par le nombre d'animaux donne 25 le paramètre évaluation par bête, qui représente une expression inverse de l'acceptation de la formulation injectable. Des évaluations inférieures à 4,0 sont satisfaisantes, inférieures à 2,0 bonnes et inférieures à 1,5 excellentes. Tous les-chiffres indiqués dans les tableaux sont statistiquement significatifs au ni-30 veau de 1 pour 100 et même mieux. 70 26720 -ii- 2059541 On a effectué simultanément des essais d'hémolyse tels que décrits ci-dessus pour trouver une corrélation entre l'hémolyse et les chiffres d'évaluation par "bête qui sont fonction de l'acceptation. 5 On a indiqué les résultats des expériences 1 à 7 inclus aux tableaux I et II; chaque tableau est le résultat d'une série distincte d'expériences. Les expériences 1 à 4 sont faites selon la présente invention et les expériences 5 à 7 selon l'art antérieur. 10 Comme aux concentrations classiques de chlorhydrate de L- tétramisole (6,38 $ en poids par volume exprimés en base libre), même avec des animaux sélectionnés comme étant sensibles aux essais, l'apparition de l'irritation est trop rare pour être décelée, sauf dans des essais à très grande échelle, on a augmenté 15 la concentration du chlorhydrate et de l'acétate de L-tétramisole (à 12,75 i° en poids par volume exprimés en base libre) pour augmenter la sensibilité. TABLEAU I t • Evaluation Expérience N° Sel de L-tétramisole Concentration (exprimée en 70 p/v de base .libre) 8 4 2 1 0 Nombre d'injections Evaluation totale Evaluation /bête Estimation de l'essai d'hémolyse Nolabre groupe dans d'éi chaque raluation 1 phosphate diacide' 12,75 -■ - 1 6 2 9 8 0,89 0 2 citrate diacide 12,75 - 1 5 2 1 9 16 1,78 0 ? tartrate acide 12,75 1 1 0 4 3 9 16 1,78 0 .. TABLEAU II Expérience N° i Sel de L-tétramisole Concentration (exprimée en % p/v de base Libre) Evaluation Nombre d'injections Evaluation totale Evaluation par bête Estimation de l'essai d'hémolyse 16 8 4 2 1 0 Nombre d'animaux dans chaque groupe d'évaluation 4 phosphate 12,75 — — 5 4 19 : 8 36 47 1,31 0 diacide • 5 sulfate 12,75 1 6 16 11 2 0 36 152 4,2 3-4 acide (art antérieur) 6 chlorhydrate 12,75 3 7 19 7 _ 36 194 5,3 10 (art antérieur) 7 acétate 12,75 1 12 11 6 6 -36 174 4,8 10 (art antérieur) 70 26720 -13- 2059541 Exemples 8 à 15 Avec les formulations de l'art antérieur, on a trouvé que la sensibilité augmente quand la concentration en sel de tétramisole augmente, alors que des concentrations supérieures sont souhaita-5 bles pour faciliter grandement l'administration et l'efficacité contre certaines espèces de parasites particulièrement résistantes. Pour pouvoir comparer les augmentations des apparitions d'irritation avec les formulations de l'art antérieur et celles obtenues avec les formulations de la présente invention, on a effec-10 tué deux séries d'expériences en utilisant des concentrations progressivement croissantes de L-tétramisole de la manière décrite dans les exemples 1 à 7 inclus. Les résultats figurent aux tableaux III et IV et montrent qu'avec les formulations de l'art antérieur du tableau III, en utilisant là aussi des animaux sélectionnés pour C0IPTU6 15 leur sensibilité / ex relativement élevée, on dépasse rapidement les concentrations supérieures limites auxquelles l'acceptation était excellente ; dans des conditions identiques, les formulations selon la présente invention, du tableau IV, montrent au contraire l'absence de toute limite supérieure d'acceptation, même à des con-20 centrâtions cinq fois plus élevées que celles employées couramment jusqu'à présent avec les formulations de l'art antérieur. Ainsi le tableau IV prouve la remarquable acceptation du phosphate diaeiàe, même à des concentrations particulièrement élevées du sel. TABLEAU III Expérience N° Sel de L-tétramisole Concentration (exprimée en fo p/v de base libre ) Nombre de bêtes Evaluation par bête 8 chlorhydrate (art antérieur) 15 36 5,3 9 chlorhydrate (art antérieur) 10 31 4,1 10 chlorhydrate (art antérieur) 7,5 14 2,0 j ! 70 26720 -14- 2059541 TABLEAU 17 5 Expérience N° Sel de L-tétramisole Concentration (exprimée en io p/v de base libre) Nombre de bêtes Evaluation par bête 11 phosphate diacide 42,3 2 1,5 10 12 phosphate diacide 28,2 2 1,5 13 phosphate diacide 21,15 2 1,5 15 14 phosphate diacide 14,1 2 1,5 15 phosphate diacide 10,5 - 2 0,5 Exemples 16 à 18 20 On a effectué une autre série d'injections comme décrit dans les exemples 1 à 7» mais, outre le phosphate diacide de L-tétramisole, on a incorporé un sel de sodium à la solution injectée (exemples 17 et 18). L'exemple 16 est un témoin selon la présente invention, mais sans sel de sodium. 25 Les résultats figurent au tableau Y'et montrent qu'on peut encore obtenir une réduction très appréciable de l'évaluation par bête qui est fonction de l'irritation. TABLEAU Y 30 Expérience N° Sel de L-tétramisole Cohcentration (exprimée en îo p/v de base libre) Additif et concentration io p/v Nombre de bêtes Evaluation par bête 16 phosphate diacide 15,3 (=0,75 mole ) Aucun-Témoin 24 1,83 35 17 phosphate diacide fe2S04, 1,5 ^ (=0,11 mole) 19 1,0 18 phosphate diacide Na H2P04,2H20, 3i3$ (=0,21 mole) 19 0,63 70 26720 -15- 2059541 Exemples 19 et 20 On a remplacé les animaux traités au oours des expériences 1 à 18 qui avaient été sélectionnés pour leur sensibilité élevée par un troupeau normal. On a soumis ces animaux à des injections 5 de solutions de phosphate diacide de l-tétramisole comme décrit dans les exemples 1 à 7, en utilisant les concentrations indiquées au tableau VI. La suppression complète de toute irritation, qui équivaut à l'absence de toute réaction indésirable, ressort des évaluations par bête particulièrement basses qui ont été observées. 10 Ces résultats sont représentatifs de réactions de bétail normal dans des conditions de vie à l'air libre. TABLEAU VI Expérience N° Formulation Concentrât ion (exprimée en io p/v de base libre) Nombre de bêtes Evaluation par bête 19 phosphate diacide de L-tétramisole 12,75 94 0,18 20 phosphate diacide de L-tétramisole + 2,0 i> p/v NaHgPO^ (0,167 mole) 12,75 . ...... 94 0,03 Exemples 21 et 22 On a effectué une nouvelle série d'essais avec un troupeau normal comme décrit dans les exemples 19 et 20 en utilisant des concentrations élevées à la fois en sel de tétramisole et en sel 30 de sodium. les résultats du tableau VII montrent l'acceptation remarquable obtenue dans tous les cas. 70 26720 -16- 2059541 TATtT.BATT 7TT 5 Expérience N° , Formulation Concentration en tétramisole (exprimée en % p/v de base libre) Hombre de bêtes Evaluation par bête 21 phosphate diacide de L-té tramis oie 15» 3 40 0,5 10 + 2,54 i> p/v NaH2P04 (0,212 mole) 22 phosphate diacide de L-tétramisole 30,6 40 0,7 15 + 5,08 % p/v ÎTaH2P04 (0,424 mole) \ Exemples 23 à 25 les exemples 19 et 20 avaient été effectués sur du bétail en pâture dans des régions du sud de l'Australie ayant un climat tem-20 péré. Dans le cas présent, les essais ont été effectués sur des troupeaux de bétail se trouvant dans différentes régions du Queensland ayant des climats allant de sous-tropicaux à tropicaux. On a injecté aux animaux des solutions de phosphate diacide de L-tétramisole préparées selon 1*exemple 1. Les solutions contenaient 25 en.outre 0,071 mole de citrate diacide de sodium et 0,142 mole de phosphate diacide de sodium dihydraté. On a ajusté lé pH des solutions à un pH de 3,5 par addition de faibles quantités d'acide phosphorique. Les différentes concentrations de phosphate diacide de L-30 tétramisole utilisées, le nombre total de bêtes soumises aux essais et l'évaluation par bête figurent au tableau VIII.. Les résultats du tableau VIII montrent l'excellente acceptation du phosphate diacide en présence de citrate diacide de sodium dans les conditions climatiques plus rigoureuses du Queensland. 70 26720 -17- 2059541 TfflT.MTT VTTT 5 Expérience N° Sel de L-té tramis oie Concentration (exprimée en p/v de base libre) Nombre de bêtes Evaluation par bête 23 phosphate diacide 6,36. 195 0,62 10 24 phosphate diacide 11,6 318 1,26 25 phosphate diaaide 17,4 143 1,49 15 Exemple 26 On a injecté deux solutions (a) et (b) décrites ci-dessous à un taux de 1 ml de solution pour 18 kg de poids de l'animal à 20 veaux de lait de type hybride mélangé dont les poids variaient de 55 à 100 kg. les solutions avaient été préparées selon l'exem-20 pie 1 mais elles contenaient du phosphate diacide de L-tétramisole équivalant à 11,6 io en poids par volume de base libre. On a ajusté le pH des solutions à 3,5 par addition d'acide phosphorique et on a ajouté également 0,212 mole de citrate diacide de sodium par litre de solution (a)- et 0,424 mole de citrate diacide de sodium 25 par litre de solution (b.).Pour chaque bête, on a injecté la solution (a) d'un côté et la solution (b) de l'autre. Au bout de 14 jours l'évaluation par bête était de 0,45»pour la solution (a) et nulle pour la solution (b). Cet exemple montre l'effet des concentrations croissantes de sels de sodium solubles dans l'eau dans les 30 formulations. Exemple 27 On a injecté à 24 têtes de bétail prises dans un troupeau normal dévolutions de phosphate diacide de L-tétramisole telles que décrites dans les exemples 1 à 7. La concentration en phosphate 35 diacide de L-tétramisole exprimée en tant que base libre était de 17,3 f° en poids par volume. La solution contenait 0,212 mole de phosphate diacide de sodium par litre et on avait ajusté son pH à 3,5 par addition d'acide phosphorique. L'évaluation par bête a été de 2,6. 70 26720 -18- 2059541 Exemple 28 On a répété l'exemple 27 mais on a remplacé le phosphate diacide de sodium de cet exemple 27 par 0,212 mole de phosphate acide de potassium par litre. L'évaluation par bête a été de 2,2. 5 Exemple 29 On a injecté à 12 têtes de bétail une solution préparée selon le procédé des exemples 1 à 7. Lâ formulation comportait du citrate de L-tétramisole ayant une concentration de tétramisole exprimée en tant que base libre de 15,3 en poids par volume plus 10 0,212 mole de HaH^PO^,2^0 par litre. On a ajusté le pH de la formulation à 3,5 par addition d'acide citrique. L'évaluation par bête a été de 3,9. Exemple 30 On a injecté à 12 têtes de bétail une solution préparée selon 15 le procédé des exemples 1 à 7. La formulation comportait du tartrate de L-tétramisole à une concentration exprimée en tétramisole base libre de 15,3 i° en poids par volume plus 0,212 mole de NaEyPO^^HgO. par litre. On a ajusté le pH à 3,5 par addition d'acide tartrique. L'évaluation par bête a été de 2,7. 70 26720 -19- 2059541 BKTnmiCtTIONS 1. Solution aqueuse d'une quantité de sel de tétramisole (2,3,5,6-té trahydro-6-phénylj mi.dazo-( 2, t -b )-thiazole-) équivalant à au moins 6 fo en poids par volume de Ir-tétramisole base,. cette solution, mélangée avec du sang de bovin et soumise à l'essai 5 d'hémolyse tel que défini dans la présente demande, ne donnant pas lieu à une hémolyse dans une proportion excédant l'estimation L de cet essai d'hémolyse. 2. Solution aqueuse comprenant du citrate, du tartrate ou du phosphate de tétramisole équivalant à au moins 6 $ en poids par 10 volume de tétramisole base. 3. Solution aqueuse comprenant du phosphate diacide de tétramisole équivalant à au moins 6 i en poids par volume de" tétramisole base. 4. Solutions aqueuses injectables, thérapeutiquement accepta- 15 bles,comprenant du phosphate diacide de l-tétramisole à des concentrations allant de 12,5 en poids par volume à" la limite de solubilité à la température d'emmagasinage souhaitée. 5. Solutions aqueuses injectables et thérapeutiquement acceptables, comprenant du phosphate diacide de l-tétramisole à des con- 20 centrations allant de 12,5 i> à 23 i> inclus en poids par volume. 6. Solutions aqueuses injectables selon l'une quelconque des revendications précédentes comprenant un sel de tétramisole à une concentration équivalant à au moins 6 i> en poids par volume de tétramisole base libre et comprenant, en outre, par litre de solution,de 25 0,1 à 0,5 mole,inclus,de sel de sodium soluble dans l'eau. 7. Solutions aqueuses injectables selon la revendication 6 dans lesquelles la concentration du sel de sodium soluble dans l'eau est de 0,15 à 0,5 mole, inclus, par litre de solution. 8. Solutions aqueuses injectables selon l'une quelconque des 30 revendications précédentes comprenant un sel de tétramisole à une concentration équivalant à au moins 6 io en poids par volume de tétramisole base libre et comprenant en outre, par litre de solution, de 0,1 à 0,5 mole inclus de sel de potassium soluble dans l'eau. 9. Solutions aqueuses injectables selon l'une quelconque des 35 revendications 6 à 8 dans lesquelles le pH de la solution a été ajusté dans une gamme de 2 à 4 par addition d'acide citrique, tartrique ou phosphorique.