Brevet FR2081387A1 — publié le 19711203

à r-. 9 Q ? /u 2081387 L'inhibiteur de kallicréine et de "rypsine, appelé ci-après IKT (vendu sous le nom de "Tras.ylol " car la firrr.e Farbenfabriken Bayer Âktiengesellscnaft, Leverkusen) représente depuis de nombreuses années un médicament d'un intérêt tout particulier, destiné principalement à combattre des processus inflammatoires et des troubles de la coagulation. L'inhibiteur IKT s'accumule à forte dose dans les reins, ce qui a pour conséquence que le taux de IKT dans le sang diminue assez rapidement. C'est pourquoi on s'est efforcé de découvrir des dérivés de l'inhibiteur IKT, qui s'accumulent moins fortement dans les reins et qui donnent un taux sanguin élevé de plus longue durée. La Demanderesse vient de découvrir que des dérivés d'urée de dérivés acyliques de l'inhibiteur IZI satisfont à un haut degré à cette condition. Dans le présent mémoire, on entend désigner par "dérivés acyliques" de l'inhibiteur IKT, les dérivés qui sont décrits dans la Demande de brevet de la République Fédérale d'Allemagne 17e F 196 3733.3 du 19 Décembre 1969 déposée par la Demanue-resse. De même, on entend désigner par "dérivés d'urée" des dérivés dans lesquels le groupe g, -amino au reste de lysine en position 15 de l'inhibiteur IKT est remplac- par un groupe urée ou par un groupe guanidine. Les nouveaux composés conformes à l'invention sont tout aussi bien tolérés que l'inhibiteur IKT. Un avantage important des nouveaux composés réside dans 1s fait qu'ils ne sont pas très fortement accumulés dans les reins et qu'ils donnent par conséquent un taux sanguin élevé de longue durée. Les nouveaux composés sont en outre éliminés avec l'.irine et sont donc particulièrement intéressants dans le cas de maladies des voies urc^énitales. Ils ort ' i 0 LLZ1 S 5, T S'vl Z_'*î "15 ~ S ci C"*" IL VÎT*" G * .•ci Ai IKT lui-même. Cette activi*--' s4x:r:::.e en .nitéc 1 im.iciteur Vne unit ; "JI correspond à 1 'mnicition de l'activir- d1 milligramme de rrypsine mesurée avec le i-nitrc-anililc de la l^-d-cen^oyl-DL—arginïne comme substrat aans les conditions normales suivantes : BAD ORIGINAL COFY 70 43392 2 2081337 5 Volume total .3 ml Température 25°C Parcours de la lumière 1 cm 1 mg de substrat dans 1 ml d'eau distillée + 10 milli-unités de trypsine dans de l'acide chlorhydrique 10 0,001 E + x ml de solution d'inhibiteur On complète à 3,0 ml avec un tampon de triéthanolamine 0,2 M, à un pH de 7,8 On ajoute 0,02 mole de chlorure de calcium. Un autre avantage des nouveaux composés de l'invention réside dans le fait que la formation d'un complexe avec les enzymes, par exemple avec la tfypsinè, a lieu plus rapidement qu'avec l'inhibiteur IKT lui-même, et que, par conséquent, l'inhibition de 15 la trypsine est obtenue plus rapidement. en faisant réagir d'une façon connue les dérivés acyliques mentionnés ci-dessus de l'inhibiteur IK!P avec des- eyanàtes ou des O-alkylisourées, de préférence avec la O-méthylisoureeDans le 20 premier cas, on obtient au lieu de-la lysine, l'homocitrulline, et dans le second cas, on obtient au lieu de-la lysine, l-'homoargi-nine au centre de réactivité des dérivés acyliques de l'inhibiteur IKT, par exemple le tétra(maléoyl)-[15-homoarginine]-IKT ou le tétra(maléoyl)-[15-homocitrulline]-IKTo 25 Les nouveaux composés conformes à l'invention peuvent être utilisés en médecine pour les mêmes indications que celles pour lesquelles on utilise l'inhibiteur IKT lui-même avec succès depuis de nombreuses années. De même, les formes d'application et les doses à utiliser correspondent dans une large mesure à celles 30 qui sont connues pour l'inhibiteur IKT. Exemple 1 ambiante une solution de 19 mg de tétra(maléoyl)-IKT dans 4 ml de O-méthyl-isourée- 1,0 M et d'acide éthylènediamine-tétracétique 35 0,02 M à un pH de 9»5S puis on ajoute 4,0 ml de solution de chlorure d2ammonium 0P5 M à un pH de 7.i6? après quoi on fait incuber pendant encore 14 heures à la température ambiante. Ensuite, on charge la solution réactionnelle sur une colonne de "Sephadex-G—50" qui a été équilibrée avec un tampon d'acétate d'ammonium 0,02 Ma Les nouveaux composés conformes a l'invention s'obtiennent On laisse reposer pendant 60 heures à la température 70 4^392 3 2081337 un pH égal à 6, et on procède à l'élution avec le même tampon. La fraction contenant le tétra(maléoyl)-[l5-homoarginine]-IKT est concentrée dans un appareil rotatif d'évaporation sous vide et les sels sont éliminés au moyen d'une colonne de "Biogel-P-2". 5 On lyophilise la solution d'inhibiteur IKT modifié, après l'élimination des sels. Rendement : la solution débarrassée des sels donne,après lyophilisation, 13 mg de tétra(maléoyl)-[l5-homoarginine]-IKT sous la forme d'une poudre incolore peu cohérente, ce qui correspond à 10 un rendement total de 68 fo. L'activité spécifique s'élève à 3-3,6 unités d'inhibiteur par mg. Exemple 2 On fait incuber pendant 56 heures à 20°C 10 mg de tétra(maléoyl)-IKT dans 0,75 ml de la solution réactionnelle pré-15 parée à partir de 1,5 ml de N-éthyl-morpholine dans 5 ml d'eau distillée additionnée d'acide acétique cristallisable à un pH égal à 8,0, et de 500 mg de cyanate de potassium. Le mélange réac-tionnel est ensuite chargé sur une colonne de "Sephadex-G-50" qui a été équilibrée à un pH de 7,0 avec un tampon de tris-(hydroxy-20 méthyl)-aminométhane 0,01 M. Les fractions des premiers pics d'absorption apparaissant dans l'éluat, de teneur élevée en albumine, sont recueillies et concentrées au dixième du volume initial dans l'appareil rotatif d'évaporation sous vide. La concentration du tétra(maléoyl)-[15-homocitrulline]-IKT contenu 25 dans la solution est déterminée par mesure de l'absorption à 275 nm, par rapport à une solution de concentration connue de tétra-(maléoyl)-IKT dans un tampon de tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane 0,1 M à un pH égal à 7,0. Rendement : la concentration en tétra(maléoyl)-[15-homocitrulline]-30 IKT s'élève à 0,67 mg/mi soit un total de 5,33 mg, c'est-à-dire un rendement de 53 ?° par rapport à la quantité utilisée de tétra(ma-léoyl)-IKT. L'activité spécifique est de 1,5-2,0 IJl/mg. ~7Ç\ A'LOOn 4 2081337 REVENDICATIONS 1. Nouveaux dérivés, d'urée de dérivés acyliques de l'inhibiteur de kallicréine et de trypsine. 2. Procédé de préparation de dérivés d'urée de dérivés 5 acyliques de l'inhibiteur de kallicréine et de trypsine, caractérisé par le fait qu'on fait réagir des dérivés acyliques de l'inhibiteur de kallicréine et de trypsine avec des cyanates ou avec la O-méthyl-isourée. 3. Médicament caractérisé par le fait qu'il contient des 10 dérivés d'urée de dérivés acyliques de l'inhibiteur de kallicréine et de trypsine.