Brevet FR2085740A1 — publié le 19711231

La présente invention est relative à un groupe d'alca bides nouveaux extrait de plantes africaines appartenant à la famille des Annonacées et formant le genre WARIOPSIS- anciennement appelé TETRASTEMMA. L'intérêt de ces alcaloïdes réside dans leurs intéressantes propriétés pharmacodynamiques alliées à une faible toxicité pour les animaux de laboratoire. Les UVARIOPSIS sont des arbustes ou des arbres qui croissent en forêt tropicale où l'on peut rencontrer les variétés connues et décrites, U. bakeriana, U. guinéensis, U. glabiflora et U. dioSca, et en forêt équatoriale où l'on trouve U. subneidii. Les alcaloïdes faisant l'objet de l'invention sont obtenus à partir des feuilles ou des écorces de tronc et tiges ou de racines. Les alcalordes totaux convenablement purifiés sont caractérisés par deux bases principales, l'alcaloVde A et l'alcaloide B, dont l'isolement peut être réalisé par les méthodes chromatographiques habituelles. Les mêmes alcaloides se retrouvent qualitativement dans les feuilles et dans les écorces de tronc ou de racines. Les teneurs sont cependant différentes : on obtient de 1,7 à 2,9 g d'alcaloRdes totaux purifiés dans les feuilles, par kg de feuilles séchées, et de 1,7 à 3,2 g dans les écorces, par kg d'écorces sèches. La préparation des extraits alcalordiques est effectuée selon les techniques générales d'extraction de ces composés, c'est-à-dire : - Alcalinisation de la drogue végétale sèche au moyen d'une solution aqueuse d'ammoniaque ou de carbonate sodique ou du mélange de ces deux composés. - Epuisement de la masse végétale alcaline au moyen d'un sol vant organique tel que le benzène ou l'éther éthylique ou l'acétate d'éthyle , on peut également recourir aux solvants chlorés tels que le chloroforme. - Séparation des bases alcaloîdiques totales par épuisement du solvant d'extraction au moyen d'une solution aqueuse d'un acide minéral, tel que l'acide phosphorique ou l'acide sul furique, ou d'un acide organique tel que l'acide acétique. - Obtention des bases totales à partir des eaux acides par préci pitation au moyen d'un alcalinisant tel que la solution aqueuse de soude caustique ou I,anrnoniaque et séparation du précipité par filtration suivie de séchage à l'étuve. Dans une autre forme de procédé, les solutions aqueuses alcalinisées, au lieu d'être filtrées, sont traitées par un solvant dans une opération d'échange liquide-liquide et les bases alcaloldiques sont obtenues par évaporation à siccité du solvant. Purification des bases alcaloSdiques brutes par redissolution de celles-ci dans un solvant tel que le benzène ou le chlorure de méthylène et passage de cette solution sur un lit d'absorbant tel que le noir animal activé ou l'alumine activée ou la silice anhydride. Par évaporation à siccité du filtrat, on obtient les bases alcaloidiques totales purifiées. Caractères des alcalordes totaux wriiiiés, Les alcaloïdes totaux, obtenus selon la méthode générale décrite et ainsi qu'il est précisé plus loin par deux exemples de préparation, présentent les caractères suivants : Par chromatographie en couche mince sur plaque de silice alcaline, avec migration par le mélange chlorure de méthylène - méthanol 90/10, on révèle les deux alcaloïdes principaux A et B de rF 0,85 et 0,45 et deux alcaloldes mineurs C et D de rF 0,7 et 0,3. L'alcaloïde A, de rF 0,85 est le plus abondant et représente 60 % + 2 du total alcaloidique. L'alcaloSde A a été isolé et la base présente les caractères suivants - point de fusion = 9405 - 950 - 01D ='0 - formule brute : C20112103N L'alcaloide B de rF 0,45 représente 20 % + du total alcaloidiqué et la base présente les caractères suivants - point de fusion : 1170C + 2 - o( D = + 205 - formule brute C19H1902N Les alcaloïdes C et D sont en v indre et peuvent être considérés comne mineurs quantitativement. Les alcaloïdes totaux provenant des feuilles et ceux provenant des écorces de racines ou de tiges présentent des tests chromatographiques identiques. La séparation des deux constituants principaux s'effectue par chromatographie en couche mince préparative ou par chromatographie sur colonne de silice. Les caractères pharmacodynamiques des alcaloïdes totaux purifiés sont résumés ci-après DL50 1.300 mg/kg Action-Eypothermisante : Abaissement de 10 pendant 4 heures, après administration per os, 200 mg/kg Action tonicardiaque : à 250 mcg, sur le coeur isolé, action très nette, in situ, à 100 mg/kg antifibrillant (stimulation électrique) Action spasmolytique : sur le duodénum et l'iléon Action cholérétique : augmentation du débit biliaire de 33 % 60 min. après l'ingestion - à la dose de 200 mg/kg. EXEMPLES 10) Préparation d'alcaloïdes totaux à partir de 10 kg de feuilles d'UvarioDsis bakeriana. Une cinquantaine de kg de feuilles fraiches 'Uvariopsis bakeriana sont séchées à 1sombre sur les lieux de récolte jusqu'à obtenir une teneur en eau de 10 à 12 %. Ces feuilles sont broyées et l'extraction est effectuée sur 10 kg de poudre fine. La poudre de feuilles est alcalinisée par imprégnation au moyen de 10 litres d'une solution contenant par litre 80 ml d'ammoniaque concentré du commerce et 80 g de carbonate de sodium cristallisé. La masse végétale alcalinisée est laissée au repos pendant 1 heure et est ensuite placée dans un appareil à épuisement continu du type soxhlet. L'épuisement est réalisé par le benzène pendant une durée de 3 heures au moins, ce qui dans les conditions expérimentées de lssessai, correspond à 11 à 12 lavages. Le benzène chargé des principes extraits de la drogue végétale est lavé par agitation avec 2 litres d'eau phosphori- que à 6 %, décantation et soutirage de l'eau. On pratique successivement 4 lavages acides. Les eaux acides réunies sont dégraissées par lavage avec 2 litres d'éther de pétrole ou d'hexane puis désolvantées par chauffage sous vide pendant 1 heure à la température de 450C. Elles sont ensuite avantageusement agitées, à chaud avec 250 g de noir animal puis filtrées. Après refroidissement, les eaux acides sont additionnées de 2 litres de solution de soude caustique à 20 S, lentement et sous agitation. Les bases précipitent et sont aussitôt dissoutes dans 3,5 litres de chloroforme par agitation suivie de décantation et soutirage du solvant. On effectue deux autres lavages avec chaque fois 1 litre de chloroforme. Les solvants réunis sont lavés avec 1 litre d'eau distillée puis séchés sur sulfate de sodium sec. Ils sont ensuite évaporés à sec, sous pression réduite. Le résidu de distillation pèse 25 g. Ce résidu est repris par 2,5 litres de benzène, au bain-marie à 400C. On sépare par filtration à froid un insoluble de 2,2 g. La solution est agitée avec 250 g d'alumine pour chromatographie, grade III, pendant 15 minutes puis filtrée sur un lit de 250 g du même absorbant. Le solvant ainsi filtré est évaporé à siccité sous pression réduite. Les bases alcaloldiques totales pèsent 19 g ; elles présentent les caractères physico chimiques et pharmacodynamiques décrits plus haut. 20) Préparation des alcaloides-totaux à partir de 5 kg d'écorces de tronc d'Uvarionsis bakeriana. On pèse exactement 5 kg de poudre fine d'écorces d'Uvariopsis, de teneur en eau contrôlée à 12,7 %. L'opération d'extraction est conduite comme il a été décrit pour les feuilles, avec cette différence qu'en l'absence de chlorophylle, il-nest pas utile de passer les eaux acides dégraissées sur noir animal. D'autre part, on a procédé à l'épuisement acide du benzène pour moitié avec l'acide phosphorique à 6 % et pour l'autre moitié du solvant avec l'acide acétique à 15 %. Acide DhosDhorizue Acide acétique Bases totales brutes : 3,0 g/kg 3,2 g/kg Bases totales purifiées : 2,1 g/kg 2,15 g/kg 30) Essais réalisés avec des échantillons d > Uvariopsis de trovenances diverses. En suivant les méthodes décrites ci-avant adaptées par leurs proportions de réactifs aux quantités pondérales des échantillons1 on a obtenu les rendements suivants, exprimés en grammes par kilo de drogue sèche : Feuilles écorces de Ecorces de tronc et racines et petites tiges racines entières U. guineensis 1,9 à 2,15 1,85 à 2,4 1,7 à 2,45 U. bakeriana 1,9 à 2,4 2,1 à 2,8 1,65 à 2,8 U. diolca 1,75 à 2,4 1,9 à 2,75 1,5 à 2,4 U. solneidii 2,0 à 2,2 2,3 à 3,0 1,5 à 2,8 U. globiflora 2,1 à 2,7 2,0 à 2,9 pas d'échantillon Les variations enregistrées sont attribuées aux modalités de récolte, soit principalement : âge du végétal, saison de la récolte, ensoleillement, terrain. Les écarts parfois considérables observés chez une même variété sont attribués aux nombreux paramètres qui conditionnent la croissance du végétal ainsi que la récolte de l'échantillon étudié, soit par exemple : zone de récolte, nature du sol, ensoleillement, saison de récolte, âge du végétal. Bien entendu diverses modifications peuvent être ap portées par homme de l'art aux procédés qui viennent daêtre décrits uniquement à titre d'exemples non limitatifs sans sortir du cadre de l'invention. REVENDICATIONS 1. Nouveaux alcaloïdes caractérisés en ce quia ils sont extraits de plantes africaines appartenant à la famille des Annonacées et formant le genre WARIOPSIS -anciennement appelé TETRASTEN 2. Nouveaux alcaloïdes suivant la revendication 1, caractérisés en ce que les alcaloïdes totaux convenablement purifiés comprennent deux bases principales, l'alcaloïde A (rF 0,85) et l'alcaloïde B (rF 0,45) dont l'isolement peut être réalisé par les méthodes chromatographiques habituelles. 3. Nouveaux alcaloïdes suivant les revendications 1 et 2, caractérisés en ce qu'ils comprennent aussi deux alcaloïdes mineurs C et D (rF : 0,7 et 0,3). 4. A titre de nouvel alcaloïde suivant les revendications 1 et 2, l'alcaloïde A dont la base présente les caractères suivants Point de fusion : 9405 - 950 o(D= O formule brute : C20H2103N. 5. A titre de nouvel alcaloïde suivant les revendications 1 et 2, l'alcaloïde B dont la base présente les carac stères suivants Point de fusion : 117 C + 2 &alpha; D = + 205 formule brute : C1gHlgC2N. 6. Nouveaux alcaloïdes suivant les revendications 1, 2 et 3, caractérisés en ce que les deux alcaloïdes principaux et les deux alcaloïdes mineurs peuvent être révélés par chromatographie en couche mince sur plaque de silice alcaline avec migration par le mélange chlorure de méthylène-méthanol 90/10 et en ce que la séparation des deux constituants principaux peut s'effectuer par chromatographie en couche mince préparative ou par-chromatographie sur colonne de silice. 7. -Nouveaux alcaloïdes suivant les revendications 1 et 2, caractérisés en ce que les caractères pharmacodynamiques des alcaloïdes totaux purifiés sont en résume T > L50 1.300 mg/kg Action hypôthermisante : Abaissement de 10 pendant 4 heures, après administration per os, 200 mg/kg. Action tonicardiaque : à 250 mcg, sur le coeur isolé, action très nette, in situ, à 100 mgykg antifibrillant (stimulation électrique). Action spasmolytique : sur le duodénum et l'iléon. Action cholérétique : augmentation du débit biliaire de 33 % 60 min. après l'ingestion - à la dose de 200 mg/kg.