Brevet FR2073320A1 — publié le 19711001

La présente invention est relative notamment à un procédé de fabrication de nouveaux 7-0-alkyl-l-thio-a.~licosaminides d'alkyle répondant à la formule : CH. RO 2h. 2 10 3 17 (1) '4 1N \0h |3 2 S-alkvle oh 'dans laquelle R et "Alkyle" représentent un alkyle ne comportant pas plus de 4 atomes de carbonef par exemple le méthyle, l'éthyle., le 15 propyle, 1*isopropyle, le butyle, le butyle secondaire, l'isobutyle et le butyle tertiaire, l'invention se rapportant également à certaines 7-0-alkyllincoraycines en dérivant. On obtient les composés de la formule I de deux manières différentes. Suivant la première (Procédé A), on produit des compo-20 ses où R est le méthyle, tandis que, suivant la seconde manière (Procédé B), on produit des composés où R e sfc le méthyle ou un autre al-kyle inférieur. Suivant le Procédé A, on obtient des composés de la formule I dans laquelle R est le méthyle en faisant réagir du pen-taacétate de 7-O-méthyl-l-thio-ci-lincosaminide de 2 '-hydroxyéthyle 25 ou un autre 7-O-méthyl-l-thio-o-licosaminide de 2 '-hydroxyéthyle protégé d'une autre manière, répondant à la formula CH„ CH3°- AcHH— 30 AcO l\ OAc I \ \ ! (il) \j y s-ch2-ch2~o-ac i Ï OAc 35 dans laquelle Ac est un groupe carboxacyle protecteur »tel que de l'acétyle ou un autre groupe alkanoyle inférieur, par exemple le propionyle, le butyryle, le valéryle, l'hexanoyle, 1'heptanoyle, 1xoctanoyle et leurs formes isomères, cette réaction se faisant 70 39397 2073320 avec du brome dans un soivanjïiion aqueux inerte, par exemple du chloroforme , du chlorure de méthylène ou du tétrachlorure de carbone, avec ensuite traitement du tétraacylate résultant de 7-O-msthyl-l-bromo-lincosamine de la formule ; CEU a- CU3u AcNH- AcO y Br 10 OAc ï\ / \ / (ÏH) OAC .pour remplacer le brome par un groupe d'alkyl mercapto? puis enlèvement des groupes protecteurs. Suivant le procédé B, on obtient des composés de la formule I dans laquelle R est le méthyle ou un autœ alkyle inférieur de la façon suivante. On soumet à une hydrolyse non catalysée une formedîalkyl 6-N,7-0~oxazoline de 2-0-acyl-3,4-0-isopropylidène-l~ thio-cc-lincosaminide de la formule s CH. /°" CH3CX (xv) S-Alkyle dans laquelle. Ac et "Alkyle" ont la signification donnée précëdem-30 ment, pour ouvrir" le noyau d ro::azoline et pour former un H-acétyl-2-0-acyl-3,4-0-isopropylidène-l-thio-o-lincosaminide d*alkyle de la formule t 70 39397 3 2073320 ch c-nh- j/s-Alkyle (V) 10 On alkyle ensuite ce composé pour former un N-acétyl-2-0-acyl-7-0-alkyl-3/4-O-isopropylidène-l-thio-ct-lincosaminide d'alkyle répondant à la formule : 15 ch3-c-nh- 20 (VI) S-Alkyle Les groupes d'acétyle, d'acyle et d'isopropylidène sont ensuite enlevés pour former le composé désiré de la formule I. Le groupe d'a-cétyle est séparé par hydrazinolyse qui sépare aussi le groupe acy-25 le„ Le groupe d'isopropylidène est séparé par une hydrolyse acide qui peut aussi séparer le groupe acyle. De la sorte/ si 1'hydrazinolyse est la première opération et 1'hydrolyse acide est la seconde, 1'hydrazinolyse donne un 3,4-0-isopropylidène-7-0-alkyl-l-thio-a-lincosaminide d'alkyle de la formule : 30 ch. R0- h2n- 35 (VII) S-Alkyle 70 39397 2073320 et 1'hydrolyse donne un composé de la formule I. Si 1'hydrolyse acide est la première opération et 1'hydrazinolyse est la seconde, l'hydrolyse donne un N-acétyl-7-O-alkyl-l-thio-cc-lincosaminide d'alkyle de la formule : CHL .RO- O II CH C-NH- 10 (viii) S-Alkyle OH et 1'hydrazinolyse donne un composé de la formule I. On prépare les composés de départ des formules II et IV 15 respectivement par acylation de (1) 7-O-méthyl-l-thio-a-lincosamini-de de 2'-hydroxyéthyle ' (exemple 3 du brevet des Etats-Unis N° 3.208.996) et (2) 6-M, 7-0-éthylidyne-3,4-0-isopropylidène-l-thio-ct-lincosaminide d'alkyle (brevet des Etats-Unis n° 3.337.527). On peut réaliser 1*acylation d'une manière bien connue en pratique, par 20 exemple par réaction avec l'halogénure ou anhydride d'acide approprié en présence d'un agent de liaison acide, tel que de la pyridi-ne, de la triméthylamine, etc, avec ou sans utilisation d'un solvant inerte,tel que du dioxane,- du chloroforme ou du diméthylformamide. Procédé A 25 On traite le pentaacêtate de la formule II avec du brome càns un solvant inerte, par exemple du chloroforme," du chlorure de méthylène ou du tétrachlorure de carbone pour former un composé de la formule III. La réaction se développe spontanément à la température ambiante, bien que l'on puisse utiliser, si on le désire, 30 des températures plus élevées ou plus basses. Le remplacement du brome est réalisé par réaction du composé de la formule III avec de la thiourée en solution dans un solvant aprotique dipolaire d'amide tertiaire ,par exemple du triamide d'hexaméthyl phosphorique, du diméthylformamide, de la N-méthyl-2-35 pyrrolidone, etc, pour former un sel d'isothiouronium ré^-pondant à formule : 70 39397 5 On soumet ensuite ce sel d'isothiouronium à une hydrolyse 10 basique modérée et, en même temps, le thiose ainsi libéré est alky-lé pour former le thioglucoside d'alkyle désiré. On peut avantageusement inclure un anti-oxydant, tel que du bisulfite de sodium, de 1'hydrosuifite de sodium (Na2S20A) et du pyrosulfite de sodium (métabisulfite de sodium Na.S 0 ), pour empêcher une oxydation en le A 2. 5 15 disulfure ou pour réduire tout disulfure quelconque formé. On utilise avantageusement de l'iodure d'alkyle comme agent d'alkylation. On peut cependant utiliser d'autres agents d'alkylation, par exemple du sulfate de dialkyle et du p-toluènesulfonate d'alkyle. On réalise avantageusement 1'alkylation en sème temps que l'hydrolyse du sal 20 d'isothiouronium afin de réduire au minimum les réactions indésirables du thiose. En outre, la base soluble dans l'eau modérée, par exemple le carbonate de métal alcalin , utilisée dans l'hydrolyse, a un effet favorable sur 1'alkylation;.elle a tendance à rendre plus labile le proton du groupe SH et elle agit également comme 25 accepteur d'acide. On peut séparer le sel d'isothiouronium du mélange de réaction, si on le désire, avant l'hydrolyse et 1"alkylation , mais ordinairement ceci n'est pas nécessaire et il suffit simplement de diluer la solution du sel d'isothiouronium dans le solvant apro-tique dipolaire avec de l'eau et d'ajouter la base et l'agent d!al-30 kylation, et si nécessaire aussi 1'anti-oxydant, tout en procédant à tout refroidissement quelconque nécessaire. Pour dissiper le caractère' exothermique, la solution dans le solvant aprotique dipolaire est refroidie ordinairement dans un bain de glace , et l'eau et les autres réactifs sont ajoutés avec agitation, tandis que le 35 mélange de réaction est maintenu dans le bain de glace. Après que le caractère exothermique inital à été dissipé, on peut enlever le bain de refroidissement. L'utilisation d'un solvant aprotique dipolaire d'amide 2073320 CH, ch3o- AcNH- (IX) AcO / WUf : ... XHH, OAc > Br" 70 39397 2073320 fcèrtiaire constitua nn aspect important de 1*invention car d'antres types de solvants, comme l'acétone et le chloroforme , donnent exclusivement le (3-anomère. Les solvants aprotiques dipolairss d'amide tertiaire donnent , par contre, des mélanges de réaction contenant 5 des quantités importantes de 1sa-anomère et, par l'utilisation de ces solvants aprotiques, comme le triamide d'hexaméthyl phosphorique par exemple, on peut obtenir des rapports de 1 'Ct-anomère au p-anomè-re de 1/2 ou plus. On peut séparer les a- et {3-anomères par des procédés déjà lO bien connus en pratique, par exemple des fractionnements liquiderliquide ,tels qu'une distribution à contre-courant ou une chromatogra-phie de partage. Si on le désire, la séparation des a- et p-anomères peut être réalisée au stade du sel d*isothiouronium avant l'hydrolyse alcaline ,mais elle est avantageusement réalisée après la phase 15 d'alkylation. Ceci est désirable car il est possible que les phases d'isolation aient pour résultat une certaine mise en équilibre des anomères. On peut séparer facilement les groupes acyles protecteurs par hydrazinolyse de la manière déjà bien connue en pratique (voir . 20 par exemple le brevet des Etats-Unis n° 3.179.565, Procédé B Le succès du Procédé B dépend de la découverte que le noyau d'oxazoline peut être ouvert sans affecter le groupe 2-O-acyle protecteur , par une hydrolyse non catalysée , c'est-à-dire par uti-25 lisation d!eau (pH d'environ 7) sans addition d'un acide ou d'une base. Il suffit simplement d'ajouter de l'eau, par exemple au mélange & réaction de la phase d'acylation, et de chauffer modérément , par exemple au bain-marie. On réalise la phase d'alkylation d'une manière déjà bien 30 connue en pratique. A titre d'exemple, on la réalise grâce à de l'iodure de méthyle ou autre iodure d'alkyle inférieur ,avec un accepteur pour l'acide iodhydrique, par exemple de l'oxyde d'argent. , du carbonate d'argent, de l'oxyde de baryum et du carbonate de baryum. On peut utiliser un excès de l'iodure comme solvant. Cependant, si 35 on le désire, on peut réaliser la réaction dans un autre solvant inerte, tel que de l'éther, du tétrahydrofuranne et du dioxane. On peut employer un chauffage modéré allant, par exemple, jusqu'à environ 60°C, pour accélérer l'alkylation. Le groupe N-acétyle est sépa- 70 39397 2073320 re de la même manière que suivant le Procédé A. Si le groupe 2-O-acé-tyle n'a pas été préalablement séparé, il le sera en même temps. Le groupe de 3,4-0-isopropylidène est séparé par une hydrolyse acide. Il suffit simplement de mettre en contact l'acétonide 5 avec une solution diluée d'acide chlorhydrique sans chauffage. Si on le désire, on peut cependant utiliser un chauffage modéré, par exemple un bain-raarie„ Si le groupe 2-O-acyle n'a pas été préalablement séparé, il le sera également par l'hydrolyse acide. Les composés résultants (Formule I) peuvent alors être 10 convertis en 7-O-alkyl-lincomycines par acylation avec de l'acide trans-l-méthyl-4-prop.yl-L^2-pyrrolidinecarboxylique ou en leurs analogues par le choix de l'acide L-2-pyrrolidinecarboxylique approprié d'une manière déjà bien connue en pratique (voir par exemple le brevet des Etats-Unis n° 3.380.992). Les 7-0-alkyl--lincomycines 15 résultantes et leurs analogues sont intéressants pour les mêmes besoins que la lincomycine et ses analogues et on peut les utiliser de la même manière, en tenant compte de l'activité plus grande des composés 7-0-alkyles. C'est ainsi que la 7-0-méthyl-lincomycine est à peu près deux fois plus active que la lincomycine et peut par 20 conséquent être utilisée en des doses proportionnellement plus petites. L'invention sera mieux comprise encore grâce aux exemples suivants dans lesquels les parties sont données en poids à moins d'indications contraires. 25 EXEMPLE 1 Partie A N-acétyl-2',2,3,4-tétra-0-acétyl-7-0-méthyl-l-thio-a-lincosaminide de 2'-hydroxyéthyle CH. 30 (II) s-ch2-ch2-o-ac OAc 35 On laisse reposer pendant la nuit du 1-thio-ct-célestosa-minide de 2'hydroxyéthyle (1,0 gr) (exemple 3 du brevet des Etats-Unis n° 3.255.174) en solution dans de la pyridine (25 cc) et de 70 39397 s 2073320 l'anhydride acétique (12 ce). La séparation du solvant sous vide donne une huile incolore qui est dissoute dans du chloroforme /lavée à l'eau , avec une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique, de l'eau, une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium , 5 puis de lseau, pour être finalement séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La séparation du solvant sous vide donne un sirop (2,03 gr) qui, par cristallisation dans de l'acétate d'éthyle-Skellysolve B, donne le N-acétyl-21,2,3,4-tétra-0-acétyl-7-0-méthyl-l-thio-a-linco-saminide de 2 ^hydroxyéthyle (Formule II) en prismes incolores ramas-10 sés, d'un point de fusion de 143-144°C. Le Skellysolve B est une marque d'hexane technique. Analyse ; Calculé pour C21H33°11NS : CÎ49/68; H:6,54; N:2,76; S:6,32% Trouvé : C:49,66; H:6,50; N:2,91; S:6,34% .5 /ci/ = +216' Partie B (ci 0,7746, CHC13) N-acétyl-2,3,4-tri-0-acétyl-7-0-méthyl-l-thio-a- et p-liicosaminides de méthyle CEL CH 20 ch3o- AcNH- et ch3o-AcNH" AcO OAc Y y se OAc AcO r "N / -0, SCH3 OAc 25 On ajoute une solution de 5,05 gr (1,62 cc) de brome dans 100 cc de cHoroforme sur environ 30 minutes en utilisant un entonnoir à robinet à uniformisation de pression sous des conditions anhydres, à une solution agitée de 10 gr de N-acétyl-2*,2,3,4-tétra-0-acétyl-l-thio-cc-célestosaminide de 2'-hydroxyéthyle préparé par le procédé 30 de la Partie A dans 200 cc de chloroforme. Au départ, la couleur du brome disparait immédiatement; ensuite, une couleur rouge-orange foncé se développe. Après agitation pendant 30 minutes supplémentaires à la température ambiante, on sépare le solvant à 1'évaporateur rotatif à 40°C/7 mm ,ce qui donne un résidu sirupeux de couleur 35 jaune-orange. Ce résidu est redissous dans du chloroforme , le solvant est séparé sous vide et le procédé est répété jusqu'à ce que le distillât devienne incolore, en laissant un résidu amorphe jaunâtre de tétraacétate de l-bromo-7-0-méthyl-p-lincosamine de la formule : 70 39397 2073320 CH_ ch3o- AcNH- -AcO Y K Br (III) OAc OAc On dissout le résidu dans 200 cc de diméthylformamide sec, on ajoute 4,5 gr de thiourée et on agite le mélange de réaction (solution incolore) pendant la nuit à la température ambiante. Il 10 se forme de la sorte les sels d'isothiouronium ayant les formules : CH. ch30-AcNH- et AcO 15 .OAc S-C OAc *NH, OAc Sans isoler ces sels et après refroidissement dans nn bain de glace, on ajoute lentement 100-cc d'eau, puis 8,3 gr de carbonate 20 de potassium anhydre, 10,6 gr de bisulfite de sodium et 28 gr (12,3 cc) d'iodure de méthyle. On agite énergiquement le mélange par voie magnétique pendant 3 heures ,1e bain de refroidissement étant enlevé après 20 minutes. On sépare les matières volatiles sous vide à 40°C et fina-25 lement à 80°C/^.l mm. On dissout le résidu jaune dans un mélange de chloroforme et d'eau, on extrait la couche aqueuse au chloroforme, et on lave deux fois à l'eau les extraits au chloroforme combinés et on sèche sur du sulfate de sodium anhydre. La séparation du solvant sous vide donne un résidu amorphe incolore (6,48 gr). Une chromato-30 graphie en couche mince (1 acétone/1 Skellysolve B) montre une zone majeure de produit avec une petite zone de 3^ légèrement supérieur. On chromatographie cette matière sur gel de silice (1,2 kg, dimensions de la colonne de 5,8 x 90 cm) dans le système l^cétone/. 1,5 Skellysolve B. Après une tête de distillation de 500 cc, on ré-35 coite automatiquement des fractions de 50 cc et l'élution des matières est suivie par une chromatographie en couche mince. Les fractions 145-173 inclusivement correspondent à la matière de R^ supérieur, les fractions 185-310 inclusivement correspondent au produit 10 70 39397 2073320 principal, et les fractions 174-184 inclusivement constituent un mélange des deux. La séparation du. solvant sous vide à partir des fractions combinées 145-173 inclusivement donner un sirop incolore (570 mgr) 5 qui,, par cristallisation dans de- l'acétate d 'éthyle-Skellysolve B, donné du N-acétyl-2,3,4-tri-0-acëtyl-7-Û-fftéthyl-l-thio-ct-lincasarai-nide de méthyle en petits prismes incolores d'un point de-fusion de 212-213°C, celui-ci n'étant pas abaissé lors d'un mélange avec l'échantillon de l'exemple II, Partie C, d'un point de fusion de 211,5-10 213°C, tout en pouvant encore se distinguer de celui-ci par les spectres dans l'infrarouge, de résonance magnétique nucléaire et de masse, ainsi que par la rotation optique. La séparation du solvant sous vide à partir des fractions combinées 185-310 inclusivement donne un solide amorphe légèrement 15 jaune (4,23 gr) qui, par cristallisation , donne du N-acétyl-2,3,4-tri-O-acétyl-7-O-méthyl-l-thio-p-lincosaminide de méthyle en prismes incolores, d'un point de fusion de 187-188°:C. Analyse ; Calculé pour C,Jt-X„„G„NS : i.o £,^5 y * C : 49,64- ; H: 6,71? N;3,22; S: 7,36 20 MeO : 7,13; P.M. : 435,49 Trouvé ; C:49,73 ; H:6,95; N:3,18; S:7,64 MeO ; 7,41 /§/D = +24° (c: 0,7484, CHC13) Poids moléculaire : (spectre de masse, M+ ) : 435. 25 Le rendement global de l'introduction du groupe -SMe (c'est- à-dire et- + p-anomères) était de 49,2% (6,7% de a , 42,5% de P) ,1e rapport ct/p étant de 1/6,35. On peut recycler le p-anomère à la Partie B en rehaussant ainsi le rendement global du cx-anomèrè le plus désiré. 30. Partie "C On répète le procédé de la Partie B en substituant le diméthylformamide par du triamide d'hexaméthyl phsophorique /"(Me_N) P = 0/ , ce qui donne un rendement global de 65,5% (22,7% de a, 42,8% de P) et„ de la sorte, un rapport a/p de 1/1,9. 35 Partie D-l 7-0-Méthyl-l-thio-oc-l-incosaminide de méthyle 70 39397 10 Le tétraacétate de 7-O-méthyl-l-thio-a-lincosaminide de méthyle (1,46 gr) est dissous dans 50 cc d'hydrate d'hydrazine et chauffé sous reflux modéré dans un bain d'huile à 155°C pendant 24 heures. On sépare ensuite le solvant volatil aussi complètement que possible par distillation à 110°C/15 mm, ce qui donne un résidu 15 cristallin incolore qui est trituré avec de l'acétonitrile anhydre. On sépare le solide par filtration et on sèche. Par cristallisation dans un concentré d'éthanol à 95%, on obtient 430 mgr de l'hémihy-drate de 7-0-méthyl-l-thio-a-lincosarainide de méthyle (Polymorphe I) sous forme d'aiguilles aplaties incolores, d'un point de fusion de 20 126—126,5°C. Analyse ; Calculé pour C^H^-jOHS. 1/2^0 : C:43,46; H:8,03; N:5,07; 8:11,60 OMe : 11,23; P. M. (anhydre) : 267,35 Trouvé : C:43,63; H:8,30; N:5,18; S:ll,67 25 OMe : 11,74 pKar : 7,1 /â/ = +263° (c: 0,8284, HO) D Poids moléculaire : (spectre de masse; M ) ; 267. Partie D-2 30 On répète le procédé de la Partie D-l, sauf qu'on réalise la cristallisation de manière lente dans une solution plus diluée dans de l'éthanol à 95%. On obtient 1'hémihydrate de 7-0-méthyl-l-thio-a-lincosaminide de méthyle sous forme de petites tables incolores, d'un point de fusion de 162-163°C (Polymorphe II). 35 Les deux formes polymorphes montrent un comportement chromatographique identique (R^ de 0,2 en chromatographie en couche mince sur gelcfe silice dans 1 méthanol/15 chloroforme en volumes) . Le point de fusion de mélanges des formes I et II donne ce 11 2073320 CH, R-O H0 ' "*> / \! ■4 N \0H /I S-Alkyle 0H (D 70 39397 12 2073320 qui suit ; I et I point de fusion de 126-126,5°C II et II point de fusion de 162-163 °C I et II point de fusion de 162-163°C De la sorte, en présence de la forme II, la forme I est convertie en forme II à une température se situant en dessous de 162°C. Partie E Chlorhydrate de 7-0-méthyllincomycine CH, 10 .HC1 SCH. On agite par voie magnétique un malange de 3,08 gr de chlorhydrate d 5 acide 4-trans-propylhygrique et de 75 cc d*acétonitrile dans un ballon de 500 cc, à-trois cols, équipé d'un tube de séchage 20 et d'un thermomètre s'étendant en dessous de la surface du liquide. Par addition de 3,31 gr de triéthylamine, le solide se dissout rapidement pour donner une solution de couleur tan pâle. Par refroidissement jusqu'à -5°C dans un bain de glace/ méthanol, un précipité incolore de chlorure de triéthylammonium se 25 sépare.. Sans enlèvement de ce précipité, on ajoute 2,02 gr (1,94 cc) de chloroformiaté d'isobutyle à une allure telle que la température reste comprise entre -5°C et 8°C, puis on poursuit l'agitation à -5°C pendant 15 minutes. Oh ajoute ensuite rapidement 2,0 gr de 7-0-méthyl-l-thio-30 a-lincosaminide de méthyle dans 25 c'c d'eau à la solution mixte précédente, ce qui donne une solution de couleur tan pâle que l'on agite à 0°C pendant 45 minutes. Une chromatographie en couche mince (gel de silice,8 acétate d'éthyle/5 acétone/1 eau en volumes) montre une trace seulement d'amino-sucre résiduel, et une nouvelle zone 35 principale de = 0,4. Le solvant volatil est séparé sous vide à 40°C ,on ajuste la solution aqueuse résiduelle de couleur tan au pH de 10 par l'additfon d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (N), on extrait trois fois le mélange avec des portions de 70 39397 13 2073320 100 ce de chloroforme, et les extraits combinés sont lavés à l'eau et sêchês sur du sulfate de sodium anhydre. La séparation du solvant sous vide à 40°C donne un solide amorphe de couleur tan (2,32 gr). Une chromatographie sur gel de silice (450 gr, dimensions 5 de la colonne de 3,8 x 95 cm) dans le système 1 méthanol/15 chloroforme en volumes donne d'abord une tête de distillation de 250 cc, puis on récolte des fractions de 25 cc de façon automatique, ce qui donne de la 7-O-méthyllincomycine dans les fractions 44-70 inclusivement, que l'on obtient par séparation du solvant sous vide , sous 10 forme d'un sirop incolore (2,20 gr) . On dissout ce sirop dans de l'eau (5 cc) par agitation et addition d'acide chlorhydrique (concentré) pour atteindre un pH de 3, on filtre la solution à la trompe, la matière agglomérée est lavée à l'eau (3 cc) et le filtrat et les liquides de lavage sont refroidis dans un bain de glace-méthanol. 15 Après agitation , on ajoute de l'acétone (200 cc), puis de lëther (100 cc) , ce qui donne un précipité cristallin incolore que l'on récolte et sèche dans un dessiccateur sous vide à la température ambiante. On obtient le solide (1,71 gr) sous forme de petites tables incolores, allongées , d'un point de fusion de 155-157°C. 20 Analyse : Calculé pour C^gH^gO^N^S.HCl 5 C:49,93 ; 11:8,16; n:6,13; S:7,02; Ci:7,76 OMe : 6,79; P.M. (base libre) : 420,57 Trouvé : (correction pour 4,83% H^O) : C: 50,09 ; H:8,22; N:6,02; S:7,20; Cls7,46 25 OMe : 7,03 /â/ = +145° (c: 1,063, HO) pKa' : 7,6 "* + Poids moléculaire : (spectre de masse, M de la base libre) :420 Activité bactéricide : 2 fois la lincomycine EXEMPLE 2 30 Partie A-l N-Acétyl-2-0-acétyl-3,4-0-isopropylidène-l-thio-a-lincosaminide de méthyle 70 39397 14 2073320 C;i acétyls du 6-N, 7-0-éthylidyne-3,4-O-isopropylidène-l-thio-cs-l iconsaminid e de méthyle (5 gr) (Exemple 1 C du brevet des Etats-Unis n° 3.337.527) par abandon pendant la nuit à la température ambiants dans un mélange de pyridine(25 cc) et d'anhydride acéti-5 que (12 cc) „ LEnelëvement du solvant à l'évaporateur rotatif sous vide à 40°C donne un sirop jaune pâle qui est dissous dans le chloroforme i lavé à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, puis de nouveau à l'eau, pour être ensuite séché sur du sulfate de sodium anhydre. Une chromatographie en couche min-10 ce (gel de silice,- 75 méthyl éthyl cétone/25 acétone/10 eau en volumes) montre l'absence__de_ matière de départ et la formation d'une nouvelle zone d'un R_^ légèrement plus élevé. La séparation du solvant sous vide à 40°C donne du 2-0-acétyl-6ï3', 7-Q-éthylidyne-3,4-0-isopro-pylidène-l-thio-a-lincosaminide de méthyle sous forme d'un sirop 15 presque incolore qui ne peut pas être amené à cristalliser. On ajoute dé l'eau (75 cc) au pH de 7 et, avec agitation magnétique, on chauffe le mélange su bain-marie. Après 6 heures, on sépare le solvant sous^ride à 40°C pour obtenir un solide cristallin, incolore (5,95 gr) qui est ch-romatographiê sur gel d e silice (600 gr 20 dimensions de la colonne de 4,8 x 79 cm) dans le système 1 méthanol/ 7 chloroforme en volumes. Après une tête de distillation de 650 cc, on récolte automatiquement des fractions de 25 cc, 1'élution étant suivie par une chromatographie en couche mince. La matière désirée est présente dans les fractions 35-41 inclusivement. La séparation 25 du solvant donne un solide amorphe incolore (1,57 gr). Une recristallisation dans dé l'acétone-Slcellysolve B (hexane technique) donne des aiguilles incolores de N-acétyl-2-0-acétyl-3,4-0-isopropyli-dène-1-thio-ctT-lincosaminide de méthyle, P„F. de 178-179°C. Analyse ; Calculé pour c^gH 0 NS : 30 c:50,92 ; H:7,21,; N:3,71; S:8,49 P.M. ; 377,46 Trouvé : C:50,50j H:7,20j N:3,77; S:8,50 /â? = +194° (c: O,7342, CHC1_). ~ ™ 3 ^ Poids moléculaire ; (spectre de masse, M ) • 377. 35 Partie A-2 On répète le procédé de la Partie A-l sauf que le solvant est séparé après une période de chauffage de 2 heures (au lieu de 6 heures). Le rendement de N-acétyl-2-0-acétyl-3,4-0-isopropylidène- 70 39397 15 2073320 i-i-iio-cï-lincosatiiinide de méthyle esc accru à 60, Partie B N-Acétyl-2-0-acétyl-7-Q-méthyl-3,4-O-isopropylidène-l-thio-ct-lincosarairiide de méthyle ch, (VI) s-Alkyle 10 *7 OAc On chauffe et on agite sous reflux modéré pendant 16 heures du N-acêtyl-2-0-acétyl-3,4-0-isopropylidène-l-thio-cx-lincosami-nide de méthyle (1,0 gr; 1 mole), de l'iodure de méthyle (37,6 gr, 16,5 cc, 100 moles) et de l'oxyde d'argent (3,1 gr, 5 moles). On sé-15 pare l'iodure de méthyle sous vide à 40°C et la poudre résultante de couleur gris-jaune est extraite à fond avec du chlorure de méthylène. La séparation du solvant sous vide donne un sirop jaune (1,09 gr). On soumet ce produit brut à une distribution à contre-courant (500 transferts) dans le système l'.acétate d'éthyle/l éthanol/1 eau/ 20 2 cyclohexane en volumes, en utilisant des volumes égaux de la phase supérieure et de la phase inférieure. On trouve un pic principal de K = 0,34, ce qui correspond à la courbe théorique. La séparation du solvant à partir des fractions combinées de la matière de K =0,34 donne un sirop (250 mgr) qui cristallise au 25 repos. Une recristallisation dans de l'acétate d'éthyle-Skellysolve B donne du N-acétyl-2-0-a.cétyl-7-0-méthyl-3,4-0-isopropylidène-l-thio-ct-lincosaminide de méthyle sous forme d'aiguilles incolores tronquées deun point de fusion de 152-154°C (160 mgr).Une seconde recristallisation dans le même mélange de solvant donne le produit 30 pur d'un point de fusion de 153,5-154°C. Analyse : Calculé pour C^H29°7NS : C:52,15 ; H:7,47; N:3,58; S:8,19 P.M. : 391,48 35 Trouvé : C:52,24; H:7,48; N:3,92; S:7,98 Poids moléculaire : (spectre de masse, M+) : 391 /â/D = +188° (c: 1,185, CHCl3). 70 39397 16 2073320 Partie C N-Acatyl-7-O-méthyl-l-thio-a-lincosaminide de méthyle et son triacétate CH. CH C-Î5ŒI (VIII) 10 On agite du N-acétyl-2-0-acétyl-3,4-0-isopropylidène-l- thio-a-1 incosaminide de méthyle (100 mgr) avec de 1*6311 (20 cc) et de 11 acide chlorhydrique aqueux (N, 5 cc) à la température ambiante pendant la nuit. On neutralise la solution par agitation avec du carbonate d'argent (3 gr), on sépare les solides-par filtration èt 15 on les lave à l'eau, puis le filtrat et les liquides de lavage sont amenés à siccité à l'évaporateur rotatif à 60°C/7 mm, ce qui donne du H-acétyl-7-O-méthyl-l-thio-ot-lincosaminide de méthyle sous forme d'un sirop incolore qui ne cristallise pas. Celui-ci est encore caractérisé par sa conversion possible en le triacétate . 20 On ajoute 5 cc de pyridine et 3 cc d'anhydride acétique, on brasse le mélange jusqu'à dissolution du sirop, et on laisse reposer le mélange pendant la nuit à température ambiante. On sépare ensuite le solvant aussi "complètement que possible à 40°C/ Analyse : Calculé pour C, J3,„0_NS : i-o j_y 9 C:49,64; H:6,7L; N:3,22; S:7,36 35 MeO î 7,13; P.M. : 435,49 Trouvé î C:49,72; H:6,77; N:3,36; S:7,27 MeO : 7,08 /§/D = +229° (c: 0,7174, CHC13). 70 39397 17 2073320 + Poids moléculaire : (spectrçde masse , M ): 435. Au lieu de l'iodure de méthyle, on peut y substituer de l'iodure d'éthyle, de propyle, de butyle, d'isobutyle, de butyle se condaire et de butyle tertiaire pour.donner les analogues de 7-0-5 alkyle inférieur correspondants. Au lieu de chlorhydrate d'acide 4-propylhygrique (chlorhy drate d'acide l-méthyl-4-trans-propyl-L-2-pyrrolidinecarboxylique), on peut y substituer les chlorhydrates d'autres acides L-2-pyrroli-dine carboxyliques de la formule : 10 ^1 R„ 15 dans laquelle R^ est de l'hydrogène ou un alkyle inférieur, par exemple le méthyle ou l'ëthyle, et R^ représente de l'hydrogène, un alkyle inférieur, par exemple le méthyle, 1'éthyle, le propyle, le butyle, le pentyle, l'hexyle, 1'heptyle. et 1'octyle, ainsi que leurs formes isomères, ou un cycloalkyle inférieur, par exemple le 20 cyclopentyle, le cyclohexyle et le cyclohexylméthyle,. pour donner des composés T1 ■Ns 25 Alkyle 30 dans laquelle "Alkyle", R^ et P-2 ont la signification donnée précédemment. Des composés d'une importance particulière que l'on peut produire de la sorte sont ceux dans lesquels "Alkyle" représente le méthyle ou l'éthyle et (1) R^ est l'hydrogène et R2 le pentyle; (2) 35 R^ est l'hydrogène et R^ est le propyle; (3) R^ est le méthyle et R2 est le pentyle. On peut obtenir ces composés sous forme d'isomères cis ou trans ou sous forme de mélanges des deux. 70 39397 18 2073320 REVENDICATIONS l.Un procédé de fabrication de composés répondant à la formule s CH, CH30- , EH, lOC \| V ^ S-Alkyle OH OH 10 caractérisé en ce qu'on fait réagir un composé de,la formule : CH3 ch30" AcNH- 15J AcO À—"û Br - ' ' &L >I avec de la thiourée dans un solvant aprotique dipolaire d'amide ter tiaire pour former le sel d1isothiouronium : . CH. 20 25 Br on soumet le sel d*isothiouronium ainsi formé à une hydrolyse alcal .ne modérée pour former le thiose : 30 OAc 35 on alkyle le thiose ainsi formé pour former un thioglucoside de la formule : . 70 39397 19 2073320 j/ U S-Alkyle ÔAc et on enlève les groupes protecteurs Ac, "Alkyle" étant un alkyle ne comportant pas plus de 4 atomes de carbone et Ac étant un grou-10 pe carboxacyle protecteur. 2. Un composé répondant à la formule : ch3o- nh 15 HO, 0s OH -Alkyle ' ÔH dans laquelle "Alkyle" ne contient pas plus de 4 atome de carbone. 3. Le 7-O-méthyl-l-thio-ci-lincosaminide de méthyle sous 20 la forme de petites tables incolores ayant un point de fusion d'environ 162-163°C. 4. Le 7-O-méthyl-l-thio-a-lincosaminide de méthyle sous la forme d'aiguilles aplaties incolores ayant un point de fusion d'environ 126-126,5°C. 2 5 5. Un procédé de fabrication de composés répondant à la formule : R0-NEL 30 j HO / 0 OH S-Alkyle OH et de ses sels d'addition d'acide, ce procédé étant caractérisé en 35 ce qu'il comprend l'ouverture du groupe dloxazoline d'un composé de la formule : 70 39397 20 2073320 S-Alkyle dans laquelle Ac est un gtoupe carboxacyle protècteur et "Alkyle" est un alkyle inférieur, par une hydrolyse non catalysée, l'alkyla-10 tion pour former un composé de la formule : CH. .R-0- 15 ' V S-Alkyle OAc dans laquelle R représente un alkyle inférieur, et ensuite l'enlèvement du groupe CH^C- par hydrazinolyse ,et le groupe de 3,4-0-20 isopropylidène par hydrolyse acide. 6. Le chlorhydrate de 7-0-méthyllincomycine 7. Un procédé de fabrication de composés répondant à la formule 25 30 S-Alkyle dans laquelle "Alkyle" ne comporte pas plus de 4 atomes de carbone, R^ est de l'hydrogène, du méthyle ou de l'éthyle, et R2 est un alkyle inférieur ou un cyclo—alkyle inférieur, ce procédé étant ca-35 ractérisé en ce qu'il comprend 1'acylation d'un composé de la formule : 21 70 39397 CH. ch3o-NH„- HQ vOH /S-Alkyle 10 OH avec un acide carboxylique de la formule : îi ,N. 2073320 OH