Brevet FR2100722A1 — publié le 19720324

La présente invention concerne un procédé de préparation de composés nouveaux qui sont des sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutaminé. Les nouveaux sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutaminé selon l'invention présentent d'excellents effets thérapeutiques lors du traitement des ulcères gastriques 0 Les sels d'aluminium de H-acétyl-L-gLutaminé constituent un genre de sels d'acides organiques mais la U-acétyl-glutamine présente des propriétés si étonnamment différentes des acides organiques ordinaires qu'il est difficile de préparer les sels d'aluminium selon les procédés habituels de préparation de sels d'acides organiques0 La N-acétyl-L-glutamine est un solide dont le point de fusion est élevé et il existe peu de solvants dans lesquels l'acide soit très soluble. Gomme on peut le voir d'après sa structure, la N-acétyl-L-glutamine est instable à la chaleur, aux acides forts et aux alcalis forts. En outre, le sel d'aluminium U-acétyl-L-glutaminé est très soluble dans l'eau<> En conséquence, les procédés habituellement appliqués pour la synthèse d'un sel d'aluminium d'un acide organique tels que 1) le chauffage d'un acide organique avec de l'aluminium ou l'alumine, 2) la double décomposition d'un sels alcalin d'un acide organique et d'un sel d'aluminium en solution aqueuse pour précipiter un sel d'aluminium de l'acide organique, 3) la réaction d'un acide organique et d'un alcoolate d'aluminium dans un solvant indifférent comme un alcool, etc..., ne sont pas applicables lors de la préparation des sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutaminé » De plus, la préparation des sels d'aluminium par chauffage d'un acide organique avec l'hydro-xyde d'aluminium n'est pas pratique puisqu'il est difficile de préparer un sel d'aluminium de haute qualité approprié aux besoins médicaux et pharmaceutiques. Ceci est dû au fait qu'il est difficile de préparer des échantillons d'alumine et d'hy-droxyde d'aluminium qui ne contiennent pas d'autres sels minéraux, à échelle industrielle. La présente invention concerne un nouveau procédé de synthèse pour la préparation de sels d'aluminium de N-aeétyl-L~glutamine présentant un degré de pureté élevé et qui 2 1 19906 2100722 sont appropriés aux besoins médicaux et pharmaceutiques,, Grâce à la présente invention, on peut effectuer la synthèse d'un sel d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine, présentant le degré désiré de qualité en faisant réagir la N-acétyl-L-glutaminé avec tua alcoolate d'aluminium en présence d'une grande quantité d'eau. Le volume réel d'eau utilisé dépendra de la quantité de N-acétyl-L-glutamine utilisée lors de la réaction,, On obitent le sel d'aluminium par cristallisation à partir de la solution aqueuse0 sont compris ceux des sels qui se forment à diverses étapes au cours de la réaction et qui présentent des proportions molaires variables entre la N-acétyl-L-glutamine et l'aluminium,, Tel est également le cas pour les sels d'aluminium des acides organiques ordinaires. Lorsqu'on applique le procédé selon la présente invention, on peut préparer des sels présentant une proportion molaire entre la N-acétyl-L-glutamine et l'aluminium comprise entre 1:1 et 3 s 1, simplement par modification de la proportion molaire entre la N-acétyl-L-glutamine et 1'alcoolate d'aluminium. La composition résultante peut être représentée par la formule t dans laquelle n représente un nombre entre 3 et 9, Le solvant préféré pour la réaction est l'eau ou un mélange d'eau et d'un solvant organique miscible à l'eau» On peut utiliser des solvants organiques comme l'acétone ou des alcanols inférieurs comme le méthanol, l'éthanol et le propa-nol. On prépare le sel par réaction d'un alcoolate d'aluminium, soit comme solide:, soit comme solution alcoolique, avec une solution aqueuse de N-acétyl-L-glutamine 0 On conduit la réaction sous agitation» que approprié dans la réaction, par exemple des alcoolates inférieurs tels que le méthylate d'aluminium, l'éthylate d'aluminium, le tertio-butylate d'aluminium et 1'isopropylate d'aluminium, les alcoolates correspondants contenant jusqu'à 6 Parmi les sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine, On peut utiliser un alcoolate d'aluminium quelcon- 1 19906 3 2100722 atomes de carbone dans le groupe alcoyle0 La proportion molaire entre les réactifs, c'est-à-dire, la N-acétyl-L-glutamine et 1'alcoolate d'aluminium peut varier selon une composition de produit désiré, et on applique ordinairement une proportion comprise entre 1:1 et 3»1 environ, Mais la quantité d'alcoolate d'aruminium comme réactif dépend de sa pureté en un sens et il est désirable d'en appliquer un léger excès relativement à ce qui est calculé. Un excès de 2 à 6 $ est habituellement préférable. Lorsque des impuretés - comme des polymères d'hydroxyde d'aluminium sont présentes dans 1'alcoolate, il est préférable de les séparer par distillation avant d'ajouter 1'alcoolate d'aluminium à la solution de N-acétyl-L-g lut aminé ou par filtration après achèvement de la réaction» Lorsque le solvant utilisé pour la réaction est l'eau ou une solution constituée en majeure partie d'eau, la réaction entre 1'alcoolate d'aluminium et la N-acétyl-L-glutamine s'effectue rapidement donnant une solution du sel d'aluminium de"• N-acétyl-L-glutamine. On peut conduire la réaction dans une gamme de températures comprise entre la valeur ambiante et 80°C environ» On peut obtenir le sel d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine analogue à des cristaux, par concentration du mélange réactionnel et déshydratation de la solution résultante du sel en une masse sèche ou par précipitation du sel à partir de la solution par addition d'un solvant comme un alcool ou l'acétone dans lequel le sel est insoluble, à la solution concentrée a Les sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine sont précieux pour les besoins médicaux comme le mettent en évidence les résultats excellents obtenus dans l'essai d'action antiulcère effectué sur des animaux d'expériences pour essayer l'effet du sel sur des ulcères gastriques induits expérimentalement résultant de diverses causes tels par exemple que l'ulcère dû à la réserpine, l'ulcère induit par une contrainte, l'ulcère dû à la"cortisone, l'ulcère dû à l'histamine, l'ulcère chez le Rat Shay, l'ulcère dû à l'acide acétique et l'ulcère dû au blocage de la cortisone» En outre, les sels de sodium 71 19906 4 2100722 présentent une faible toxicité dans l'essai de sécurité. On peut utiliser les sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine dans le traitement des ulcères gastriques ou bien on peut les appliquer à la prévention des ulcères gastriques» On 5 peut administrer les sels par voie orale, sous-cutanée, intra-péritonéale ou intra-veineuse0 On obtient des bons résultats lorsque les sels sont administrés à des niveaux de doses compris entre 0,5 à 2 g/kg et par jour, mais du fait que les sels ont line faible toxicité, on peut administrer des doses supé-10 • rieures dans des cas graves. On peut utiliser pour administrer les sels un véhicule pharmaceutiquement acceptable quelconque par exemple la maimite, le lactose, etc. La présente invention sera expliquée en plus amples détails en référence aux exemples, mais la présente invention 15 n'y est pas limitée, EXEMPLE 1 : On chauffe à 60°G un mélange de 47,0 g de N-acétyl-L-glutamine et 600 ml d'eau et on ajoute 32,6 g d'isopropylate d'aluminium au mélange chaud en agitant. On continue l'agita-20 tion pendant 30 minutes0 On filtre le mélange réactionnel et on concentre le filtrat et le déshydrate en une masse sous dépression. Après séchage on obtient 53,8 g du sel d'aluminium cristallin de N-acétyl-L-glutamine, Les valeurs analytiques sont présentées au tableau 25 suivant" : 30 valeur réelle valeur calculée pour : fNHpCOCHpCHpÇHCOO \ \ HHCOCH,) a13^0h)4 5 aluminium 7,35 1o 7,46 fo azote total 12,7 12,9 azote d'amide 6,4 6,5 35 EXEMPLE 2 : On chauffe à 40°0 un mélange de 37,6 g de N-acétyl- 1 19906 2100722 L-gultamine et 1000 ml d'eau, et on ajoute 900 ml d'une solution d'isopropanol contenant 40,8 g d'isopropylate d'aluminium au mélange chaud en agitant. On continue d'agiter pendant 10 minutes. On filtre le mélange réactionnel et on concentre le filtrat sous dépression. On ajoute de 1'isopropanol à la solution aqueuse et le sel précipite de la solution,, On receuille le précipité par filtration et on obtient- par séchage 48,5 g du sel d'aluminium cristallin de IT-ac étyl-L-glut aminé « les valeurs analytiques sont données ci-dessous : valeur réelle valeur calculée pour î fNH9C0CH9CHoÇHC00 \ V LC0CHJAV0H)6 5 3 aluminium 10,5 1° 10,9 1° azote total 11,4 11,28 azote d'aminé 5,7 5,64 EXEMPLE 5 : On examine les sels d'aluminium de ÏT-acétyl-L-gluta-mine préparés selon les procédés des exemples 1 et 2 respectivement, pour leur toxicité en utilisant des Souris, souche LD, des-Rats souche YJistar et des Lapins 0 Les résultats expérimentaux pour des composés préparés selon le procédé de 1'exemple 1 sont donnés par le tableau suivant et on trouve que le- composé préparé selon le procédé de l'exemple 2a presque la même toxicité que celle du premier composé0 Les composés sont administrés en doses orales, sous-cutanée, intra-péritonéale et intra-veineuse0 La toxicité est exprimée comme dose léthale à 50 $ (DL^q) en gramme par poids en kg de l'animal, calculée conformément au procédé de Van Der ¥aerden0 6 71 19906 2100722 TABLEAU Animal Type d'Administration Sexe DL50g»/kg. 5 Souris Orale M F 14,3 13,1 10 sous-cutanée M F >10,2 intrapéritonéale M F 5,0 4,8 15 int r a-ve ineu s e M F 0,46 Rat orale M >14,5 20 F >44,5 sous-cutanée M F "T=»10,5 ^0,5 25 • intrapéritonéale M F 4,2 3,5 intr a-veireus e M F 0,40 0,40 30 Lapin orale M F 7,5 35 Comme le montre le tableau, la toxicité varie légè rement en fonction du type d'administration et du gente d'animal utilisé, mais dans tous les cas de faibles toxicités sont indiquées. Lorsqu'on continue 1'administration du sel pendant 1 19906 7 2100722 des durées prolongées on n'observe aucune anomalie au cours d'examens hémato logique s et pathologiques. le post-examen ne révèle aucune tendance à provoquer de déformation chez l'animal sous essaie EXEMPLE 4 : On examine le sel d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine obtenu par le procédé de l'exemple 1, pour son effet sur les ulcères induits par contrainte chez le Rat. On confine dans des cages de contrainte dix Rats mâles pesant 250 - 10 g qui ont jeûné pendant 16 heures et on les plonge jusqu'au cou dans de l'eau à température de 22 £ 1°0 pendant 7 heures. Des ulcères gastriques sont induits à 100 $ chez les Ratsc On traite les ulcères induits de la sorte avec le sel d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine, On administre le composé à des Rats -oralement juste avant de les soumettre à la contrainte. Après que les Rats ont été traités avec les sels d'aluminium, on xjuvre leur estomac le long de la grande courbure et on mesure les zones des lésions, Le taux d'inhibition $ est calcule par comparaison dés -valeurs ainsi mesurées0 On conduit cet examen avec des groupes comptant chacun dix Rats0 La formation des ulcères est totalement inhibée par administration de 0,5 à 2 g de composé par kg pour chaque rat, Lorsqu'on répète l'expérience ci-dessus avec le composé préparé par le procédé de l'exemple 2, on obtient des résultats similaires EXEMPLE 5 : On examine les sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine préparés par les procédés des exemples 1 et 2, quant à leur effet sur l'ulcère dû à la réserpine et l'ulcère dû à l'histamine chez le Rat0 Dans le cas d'ulcères dûs à la réserpine, on injecte à des Rats pesant 150 - 10 g, qui ont jeûné pendant 48 heures, 8 mg/kg de réserpine par voie intrapéritonéale et on les abandonne pendant 18 heures0 En résultat de ce traitement, il se forme des ulcères gastriques„ Dans le cas des ulcères dûs à l'histamine, on injecte 300 mg/kg d'histamine au lieu de ré- 8 1 19906 2100722 serpiae par voie intrapéritonéale et on abandonne les rats pendant 4 teures» En résultat de ce traitement, il se forme des ulcères gastriques. L'effet de chaque composé est indiqué par le pourcentage d'inhibition de formation de l'ulcère qu'on calcule par comparaison A) de la zone ulcérée chez le Rat qui a reçu oralement le composé avant d'administrer l'agent ulcé-rogène et B) la zone ulcérée chez un Rat témoin qui n'a pas reçu de composé. Les résultats sont donnés au tableau suivant : ulcère Dose Taux d'inhibition de expérimental g./kg. formation d'ulcère ($) I* II** dû à la réserpine 1)2,0 88 85 2)1,0 75 • 72 3)0,5 38 26 dû à l'histamine 1)2,0 75 74 2)1,0 50 51 3)0*5 27 22 X* = composé préparé par le procédé de l'exemple 1 II** : composé préparé par le procédé de l'exemple 2 EXEMPLE 6 : On examine le composé préparé par le procédé de l'exemple 1 quant à son effet sur l'ulcère du pylore ligaturé On anesthésie des Rats mâles pesant 200-250 g qu'on a laissé jeûner pendant 48 heures après quoi on ligature le pylore de chaque Rat. On abandonne ensuite les Rats sans eau ou nourriture pendant 18 heures après quoi on ouvre l'estomac de long de la grande courbure pour observer les ulcères qui s'y sont forméso On utilise les ulcères ainsi induits pour décider de l'effet du sel d'aluminium0 On trouve que pour les groupes qui ont reçu oralement le composé à raison de 0,5-1,0 g/kg la formation d'ulcère est complètement inhibée0. EXEMPLE 7 î On examine les sels d'aluminium de N-acétyl-L-glutamine préparés selon le procédé de 1'exemple 1 quant à leur 71 19906 9 2100722 effet de remède sur les ulcères dûs à l'acide acétique chez le Rat0 On. injecte à dix Rats mâles par groupe, pesant 230 £ 10 g qu'on a laissé jeûner pendant 16 heures, 0,05 ml d'une 5 solution aqueuse à 30 $ d'acide acétique dans la membrane séreuse et la partie ouverte est suturée. On donne le jour suivant l'opération des aliments et des quantités constantes d'échantillon sont administrées oralement aux Rats une fois par jour. Après que les Rats ont reçu des doses continues pendant 10 -15 jours, on ouvre l'estomac le long de la grande courbure et on mesure les zones de lésions0 l'effet de chaque échantillon est indiqué par le pourcentage d'effet de remède què l'on calcule A) par comparaison des zones de lésion chez le Rat qui a reçu le composé oralement et B) celles de Rats témoins qui n'ont 15 pas reçu de composé. On trouve que dans les groupes qui ont reçu oralement 2,0 g de sels d'aluminium de IT-ac étyl-L-glut aminé par kg de chaque Rat, l'effet de remède est saisissanto Les résultats sont donnés au tableau suivant : 20 . ; Dose Effet de remède Composés go/kg. ' (*) I* 2,0 48 II** 2,0 7 Témoin 0 30 I* = composé préparé par le procédé de l'exemple 1 II** = N-acétyl-L-glutamine, matière première de l'exemple .1 - 10 - 71 19906 2100722 - HEVEHDICATIONS - 1o Procédé de préparation d'un sel d'aluminium de N- acétyl-L-glutaminé, caractérisé en ce qu'on fait réagir la N- . acétyl-L-glutamine avec un alcoolate d'aluminium en milieu aqueuxo 2» Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'alcoolate d'aluminium est un alcoolate inférieur d'aluminium o 2*. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'alcoolate inférieur d'aluminium est l'isopropylate d&lu-minium. Le. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'on conduit la réaction à température comprise entre la valeur ambiante et 80°C. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que la proportion entre la N-acétyl-L-glutamine et l'aluminium est comprise entre 1:1 et 3î1o 6o Composé de formule : NH2C0CH2CH2ÇHC00 \ ( NHCOCH^ j Al3^OH^9-n dans laquelle n est compris entre 3 et 9<> Lu Composé selon la revendication 6, caractérisé en ce que n est égal à 3» 80 • Composé selon la revendication 6, caractérisé en ce ■ que n est égal à 5, 9» Composition utile dans le traitement des ulcères gas triques caractérisée en ce qu'elle comporte un composé selon la revendication 6, de formule : r nh2coch2ch2chcoo \ OCOH)^ ^ kcocHj ) 5 9~n n et un véhicule pharmaceutiquement acceptable, formule dans laquelle n est compris entre 3 et 90 10„ A titre de médicament nouveau, un composé selon l'une des revendications 6 à 80 J