Brevet FR2100866A1 — publié le 19720324

i 2100866 L'invention a pour objet des acylpropanediol-(1,3)-phosphates de monocholine de grand intérêt pharmacologique répondant à la formule générale: CH-—0—CO—C H~ . I z n 2n+l 5 CH„ X I (+) " CH„—O—P0~—CH,.—CH~—N(CH_ ) _ | °C-) dans laquelle n désigne un nombre entier de 16 à 25; elle vise 10 en outre la fabrication de ces composés. On fabrique les nouveaux composés de formule I conformes à l'invention en formant, à partir de 1,3-propanediol, le monoester de formule : 15 CH0—0-C0—C H- „ | 2 n 2n+l CH~ II I 2 CH„0H dans laquelle n présente la signification susindiquée, en convertissant ensuite ce monoester à l'aide de dichlorophosphate de 20 mono-2-brométhyle en 1'acylpropanediol—(1,3)-phosphate de 2-brométhyle de formule : CH„—0—CO—C H0 . | 2 n 2n+l CH,. III l „ CH-—0—P0-—CH~—CH„—Br 25 ^ | Z Z 2 0H en aminant ce dernier au moyen de triméthylaminé et en le transformant par élimination de 1'ion bromure en le sel interne de formule I. 30 Les substances conformes à l'invention se présentent sous . la forme de poudres amorphes sans cohésion, sans point de fusion caractéristique; on les caractérise donc par chromatographie en couche mince et par l'analyse élémentaire. Les composés de formule générale I présentent une activi-35 té interfaciale et.provoquent, lorsqu'on les administre par voie parentérale à l'organisme animal, une modification de l'activité interfaciale des membranes cellulaires. Des concentrations relativement élevées provoquent en général une cytolyse, par exemple une hémolyse; à des doses inférieures à la valeur-seuil de 1'ef-40 fet cytolytique par contre, on constate une modification de COPY 71 2465S 2 2100866 l'activité interfaciale des membranes qui est fonction de la dose administrée. Les composés selon l'invention sont utilisables en particulier en tant qu'adjuvants immunologiques. Les exemples suivants, non limitatifs, décrivent 1'inven-5 tion d'une façon plus détaillée : Exemple 1 La stéaroylpropanediol-(1,3)-phosphorylcholine monohydra- tée. a)Le monostéarate de propanediol-(1,3). 10 Dans un mélange de 66 moles de propanediol-(l,3), de 5 ml de pyridine et de 5 ml de chloroforme, on fait tomber à la température de 0°C, goûte, à goutte et en agitant, 18 moles de chlorure de stéaroyle dissous dans 20 ml de chloroforme absolu. Au bout de 30 minutes, on enlève le bain de glace et on continue à 15 agiter durant 12 heures à la température ambiante. On évapore ensuite sous vide à une température (du bain) de 40 à 50°C et on verse le résidu huileux sur 800 ml d'acide sulfurique 0,2 N, refroidi par de la glace. On essore le précipité blanc, on le lave soigneusement avec de l'eau et on le sèche sur du gel bleu. 20 Par recristallisation dans de l'éther de pétrole (40-60°C), on obtient le produit brut constitué principalement par le monoester de propanediol. Après chromatographie sur silicagel et nouvelle recristallisation dans de l'éther de pétrole, on obtient le stéa-roylpropanediol-(1,3)pur. 25 b)La stéaroylpropanediol-(1,3)-phosphorylcholine. On prépare, à 0°C, un mélange de 15 ml de chloroforme absolu, de 45 moles de triéthylamine anhydre et de 18,5 moles de di-chlorophosphate de bêta-brométhyle. En agitant et en refroidissant avec de la glace, on introduit dans ce mélange, goutte à 30 goutte, une solution de 6,5 moles de monostéarate de propanediol-(1,3)dans 15 ml de chloroforme absolu. On maintient le mélange durant 6 heures à la température ambiante, puis durant 12 heures, à la température de 40°C. On refroidit ensuite la solution de coloration foncée jusqu'à 0°C et on ajoute, pour hydrolyser les 35 chlorures de phosphoryle, 15 ml d'une solution de chlorure de potassium 0,1N. On agite durant 1 heure, puis on ajoute 25 ml de méthanol, on amène le pH à environ 3 par addition d'acide chlo-rhydrique concentré et on agite le mélange. On sèche le résidu, obtenu par évaporation de la phase organique, sur du pentoxyde 40 de phosphore sous vide élevé. 71 24655 3 2100866 Cn chauffe le produit de la phosphorylisation dans 50 ml de butancl avec 10 ml de triméthylamine durant 12 heures à 55°C? on refroidit la mélange ensuite.jusqu'à 0°C, on essore le produit cristallin précipité et on le lave successivement avec de 1'acéto-5 ne, avec de l'eau et à nouveau avec de l'acétone» On parachève la purification en traitant le produit durant 30 minutes, en agitant, avec une solution de 1g d'acétate d'argent dans du méthanol à 90%, en le chromatographiant sur du silicagel et en le recristallisant dans de la butanone. On obtient le stéaroylpropanediol- 10 (1,3)-phosphate de monocholine avec un rendement de 50% par rapport au mono-carboxylate aliphatique de propanediol-(1,3).Valeur Rf : 0,15 avec l'éluant cbloroforme/méthanol/eau = 65:30:4. C26H56N07P(525'7)Calculé: C 59'3 H 1Q>72 N 2>66 p 5>90 (Monohydraté) Trouvé : C 58,2 H 10,63 N 2,49 P 5,93 15 Conformément au procédé de l'exemple 1, on fabrique les composés réunis dans le tableau suivant : TABLEAU I Liste des acylpropanediol-(1,3)-phosphates de choline monohydra-tés synthétisés 20 Valeur Formule Analyse élémentaire Rf Poids moléculaire C H N P Exemple 2 Arachidoyl-propane- 0,15 C28H60N07P Calculé. 60,8 10,92 2,53 5,60 diol-(l,3)-phospho (553,8) Trouvé 59,3 11,05 2,40 5,58 rylcholine Exemple 3 Béhénoyl-propanediol 0,20 C30H64K07P Calculé 61,9 11,09 2,40 5,33 -(1,3)-phosphoryl (581,8) Trouvé 60,5 10,82 2,36 5,34 choline Exemple 4 Cérotoyl-propanediol 0, 25 C34H72N07P Calculé 64 , 0 11,3 8 2,^0 4,86 -(1,3)-phos phory1- (637,8) Trouvé 62,6 11,49 2,41 4,69 choline 35 On peut administrer les composés selon l'invention de formule générale I de la façon habituelle. On préfère tout particulièrement l'injection intrapéritonëale. La dose peut varier entre de larges limites. Selon le degré désiré de la potentiali-40 sation de la réponse d'immunisation, on peut administrer des 71 24655 4 2100866 doses de 0,01 à 5 mg/kg. Les exemples suivants décrivent quelques modes de préparation pharmaceutiques : EXEMPLE 1 Dragées contenant lOOmg de stéaroyl-propanediol-(1,3)-phosphorylcholine monohydratée. 1 noyau de dragée contient : Substance active 100,0 mg Phosphate dicalcique anhydre 73,0 mg Amidon de maïs 55,0 mg Procédé de fabrication : On humecte le mélange comprenant le phosphate de calcium, l'amidon de maïs et la substance active avec une solution alcoolique de la polyvinylpyrrolidone à 10%, on le fait passer par un tamis de 1,5 mm d'ouverture de maille et on le sèche à 45°C. On fait passer le granulé sec à nouveau par le même tamis et on le mélange avec la carboxyméthylcellulose et le stéarate de magnésium. On transforme le mélange fini par compression en noyaux de dragées. Poids d'un noyau: 240 mg; diamètre du poinçon: 9 mm. On recouvre, selon la technique connue, les noyaux ainsi formés d'un enrobage constitué essentiellement de sucre et talc et on polit les dragées finies à l'aide de cire d'abeilles. Poids d'une dragée : 450 mg. EXEMPLE II Tablettes contenant 200 mg de stéaroyl-propanediol-(1, 3)-phosphorylcholine monohydratée. 1 Tablette contient : Substance active 200,0 mg Lactose 100,0 mg Polyvinylpyrrolidone Carboxyméthylcellulose Stéarate de magnésium 5,0 mg 5,0 mg 2,0 rtig 240,0 mg Amidon de maïs Polyvinylpyrrolidone Cellulose microcristalline Stéarate de magnésium 80,0 mg 12,0 mg 54,0 mg 4,0 mg 450,0 mg 71 24655 5 2100866 Procédé de fabrication : On mélange la substance active avec le lactose, l'amidon de maïs et la polyvinylpyrrolidone et on humecte le mélange avec de l'eau. On fait passer la masse humide par un tamis de 1,5 mm 5 d'ouverture de maille, on sèche le granulé à 45°C et on le fait passer à nouveau par le même tamis. On le mélange ensuite avec la cellulose microcristalline et le stéarate de magnésium et on transforme le mélange par compression en tablettes. Poids d'une tablette : 450 mg; diamètre du poinçon :11 mm. 10 EXEMPLE III Gouttes buvables contenant 10 mg/mlde stéaroyl-propanediol- (î,3)-phosphorylcholine-monohydratée. 100 ml de solution pour gouttes contiennènt : Substance active 1,0 g 15 p-oxybenzoate de méthyle 0,035 g p-oxybenzoate de propyle 0,015 g Propylène-glycol 45,0 g Essence d'anis 0,05 g Menthol -9,05 g Saccharinate sodique 1,0 g Ethanol" 1,0 g Eau distillée q.s.p. .100,0 ml 20 Procédé de fabrication : On mélange les 45 g de propylène-glycol avec 45 g d'eau 25 et on dissout la substance active dans ce mélange. On dissout l'acide benzoïque, le menthol et l'essence d'anis dans l'éthanol. On réunit les deux solutions, on ajoute le saccharinate de sodium et puis de l'eau jusqu'au volume de 100 ml. EXEMPLE IV 30 Ampoules contenant 50 mg de stéaroyl-propanediol-(1,3)- phosphorylcholine monohydratée. 1 ampoule contient : Substance active 50,0 mg Polypropylène-glycol 2500,0 mg 35 Acide tartrique 15,0 mg Eau distillée q.s.p. 5,0 ml Procédé de fabrication : On chauffe 200 g d'eau distillée à environ 50°C et on ajoute la quantité nécessaire de propylène-glycol; on dissout 40 dans ce mélange, la substance active et l'acide tartrique et oh 71 24655 e 2100866 ajoute de l'eau jusqu'au volume indiqué. On filtre la solution sous des conditions stériles et on la conditionne dans des ampoules de 5 ml. EXEMPLE V Procédé de fabrication : Conformément aux ampoules de l'exemple IV contenant 50 mg de substance active. Comme il va de soi et comme il résulte d'ailleurs déjà-de ce qui précède, l'invention ne se limite nullement à celui de ses modes d'application, non plus qu'à ceux des modes de réalisation de ses diverses parties, ayant été plus spécialement indiqués; elle en embrasse, au contraire, toutes les variantes. Ampoules contenant 20 mg de stéaroyl-propanediol-(1,3)-phosphorylcholine monohydratée. 1 ampoule contient : Substance active Polypropylène-glycol Acide tartrique Eau distillée q.s.p. 20,0 mg 1000,0 mg 6,0 mg 2,0 ml 71 24655 7 2100866 5 - REVENDICATIONS - 1. Acylpropanediol-(1,3)-phosphate de monocholine de formule générale : CH„ —C—CO—C H_. . j n 2n+l CH„ I I CH„-0-P0„-CHo-CH„-N(CH-,)0 ^ | 2 2 £ 3 3 °(-) 10 dans laquelle n désigne un nombre entier de 16 à 25, ainsi que les hydrates de ces composés. 2. Procédé de fabrication d'acylpropanediol-(1,3)-phosphates de monocholine de formule générale I, caractérisé par le fait qu'on prépare à partir de propanediol-(1,3) le monocarboxylate 15 aliphatique de formule générale : CH„—O—CO—C H0 „ j 2 n 2n+l CH„ II I 2 CH2OH 20 dans laquelle n présente la signification susindiquée, qu'on fait réagir l'ester avec du dichlorophosphate de mono-2-brométhyle-pour former 1'acylpropanediol—(1,3)—phosphate de 2—brométhyle de formule : 25 CH„—0—CO—C H0 . | 2 n 2n+l CH„ III I ' CH„-0-P0„-CH,-CH0-Br ^ j ^ ^ 2 OH dans laquelle n a la signification susindiquée, qu'on aminé le 3 0 composé résultant au moyen de triméthylamine et qu'on le convertit par élimination de l'ion bromure en le sel interne de formule I. 3. Application d'acylpropanediol-(1,3)-phosphates de mono choline de formule.I en tant qu'adjuvants immunologiques. 35 4. Adjuvant immunologique caractérisé par le fait qu'il contient, en tant que substance active, au moins l'un des acylpropanediol -(1,3)-phosphates de monocholine selon la revendication 1. 5. Adjuvant immunologique selon la revendication 4,caractéri sé par le fait qu'il est administré à des doses de 0,01 à 5 mg/]