Brevet FR2106464A1 — publié le 19720505

La présente invention concerne des procédés nouveaux de préparation de dérivés d'acide prostanoïque. L'invention concerne un procédé de production d'un composé de formule : 5 (dans laquelle et désignent tous deux de l'hydrogène, ou bien R^ est un groupe méthyle et R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle), procédé qui consiste à extraire des colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper)f 1792, forme S, avec un solvant, puis à séparer le composé 10 de l'extrait résultant. L'invention concerne en outre un perfectionnement apporté au procédé d'extraction de l'ester méthylique de l'acétate de 15P-PGA2 de colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, ou à un pro-15 cédé d'extraction d'ester méthylique d'acétate de PGA2 de colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S, dans lequel les colonies ou les fragments de oolonies sont refroidis à une température s'abaissant au moins à +5°Cf moins d'une heure après que les-20 dites colonies ont été retirées de leur biotope, ces colonies ou fragments de colonies étant maintenus à une température s'a-baissant a» moins à +5°C jusqu'au moment de leur extraction avec un liquide organique neutre. L'invention concerne en outre un perfectionnement apporté 25 au procédé d'extraetion de dérivés d'acide prostanoïque de colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S ou de l'invertébré marin / | 3ZÔZO 21U0404 2 Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, dans lequel des colonies entières ou partielles, avant l'extraction, sont maintenues en contact avec de l'eau dans une gamme de températures atteignant 50°C, jusqu'à oe que les acétates G—15 des dérivés d'acide 5 prostanoïque initialement présents dans les colonies ou les fragments de colonies soient transformégèensiblement en totalité en dérivés C-15 hydroxy d'acide prostanoïque. cernent,âes dérivés d'acide prostanoïque, lequel, répond à la for-10 mule suivante, dont on indique également la numérotation : Certains des dérivés de l'acide prostanoïque sont appelés prostaglandines. L'une d'elles, à savoir la prostaglandine E2 (PGE2), répond à la formule suivante : En particulier, les divers aapects de l'invention con- C00H 0 Une autre protaglandine, à savoir la prostaglandine 15 P2a (PGF2a), répond à la formule : HO S 71 32825 3 2106464 Une autre prostaglandine, à savoir la prostaglandine P2p (PGrFgp) » répond à la formule : La formule I englobe les dérivés d'acide prostanoïque que constituent la prostaglandine et ses esters, à savoir 5 la prostaglandine PGA^ (R^ et R£ désignent des atomes d'hydrogène), l'ester méthylique de PGAg (R^ est un groupe méthyle et est un atome d'hydrogène), et l'ester méthylique de l'acétate de PGAg (R1 est un groupe méthyle et R^ est un groupe acétyle). Il s'agit de composésjbonnus, intéressants à des fins 10 pharmacologiquea. On renvoie par exemple au brevet britannique N° 1 097 533 et à Bergstrom et Collaborateurs, "Fharmacol. Rev." 20, 1 (1968). Ces composés de formule I sont également intéressants comme composés intermédiaires dans la préparation d'autres dérivés 15 de l'acide prostanoïque, à usage pharmacologique. Dans les formules I à IV et dans les formules reproduites plus loin, les liaisons en traits interrompus aboutissant au noyau de cydopentane désignent des substituants en configuration a, c'est-à-dire au-dessous du plan du noyau de cyclopentane. 20 Des liaisons en trait plein aboutissant au noyau de cyclopentane désignent des substituants en configuration 0, c'est-à-dire au-dessus du plan du noyau de cyclopentane. Le groupe hydroxy en chaîne latérale sur l'atome de carbone C-15 dans les formules I à IV est en configuration S 25 (alpha). Cette configuration est représentée par une liaison du groupe hydroxy de la ehaine latérale à 1 'atome de carbone C-15 par un segment en traits interrompus et l'atome d'hydrogène est représenté par un segaent en trait plein accentué. L'autre 71 32825 4 2106464 configuration du groupe hydroxy de la chaîne latérale sur l'atome de carbone C-15 est la configuration R ou épi (bêta) et elle est représentée, le cas échéant, par la fixation du groupe hydroxy de la chaîne latérale à l'atome de carbone C-15 par un trait plein accentué, tandis que l'hydrogène est représenté par un segment en traits interrompus, à savoir h' ^)H. La prostaglandine correspondant à PGE^ (formule II), mais de configuration fi. ou épi sur l'atome de carbone C-15, est désignée par I5P-PŒE2. Des détails concernant la stéréochimie des prostaglandines sont 10 donnés dans "Nature" 212, 38 (1966). Ces conventions concernant les formules, les noms et les symboles des dérivés d'acide prostanoïque, s'appliquent aux formules, noms et symboles chaque fois qu'on les rencontre dans ce qui suit. Lorsqu'on fait allusion ci-après aux composés de 15 formules I à IV, par l'emploi des symboles PGJL,, PG-Eg» ou PGKE^p» ou aux esters méthyliques de l'un quelconque d'entre eux, il s'agit de la configuration 15(S) et selon la coutume établie, la configuration "S" n'est pas mentionnée dans le nom ou dans le symbole. Pour tous les autres composés indiqués ci-après'», la 20 configuration sur l'atome de carbone C-15 est identifiée dans le nom par "15P", lorsqu'il s'agit de la configuration 15(H) ou 15-épi. Les molécules des prostaglandines connues portent chacune plusieurs centres d'asymétrie, et peuvent exister sous la forme 25 racémique (optiquement inactive) et sous l'une ou l'autr^&es deux formes énantiomorphes (optiquement actives) c'est-à-dire la forme dextrogyre et la forme lévogyre. Telles qu'on les a dessinées, les formules I à IV représentent la forme optiquement active particulière de la prostaglandine que l'on obtient à partir 30 de certains tissus de mammifères, par exemple les glandes séminales de moutons, les poumons de porc ou l^lasma séminal humain, ou par la réduction du groupe carbonyle et/ou de la double liaison d'une prostaglandine ainsi obtenue. Voir, par exemple, Bergstrom et Collaborateurs, "Pharmacol. Rev." 20, 1 (1968) et 35 les références bibliographiques qui y sont indiquées. Les divers aspects de la présente invention concernent donc des procédés nouveaux et perfectionnés d'extraction et de 71 32825 5 2106464 séparation de PGA2, de son ester méthylique et de l'ester méthylique de son acétate, à partir de Plexaura homomalla (Eaper), 1792, forme S, et de 153-PGA2, de son ester méthylique et de l'ester méthylique de son acétate à partir de Plexaura homomalla 5 (Esper), 1792, forme R. Ces procédés seront décrits ci-après et illustrés dans les exemples. On décrira également ci-après, en regard des schémas réactionnels A-E, et on illustrera dans les exemples de préparation, les transformations de ces composés de PGAg et ISp-PGAg en d'autres prostaglandines, notamment PŒE2, 10 Ces ■fcraas^orma'(:ions n'entrent pas dans le cadre de la présente invention, mais elles illustrent l'intérêt de l'invention. Les dérivés connus d'acide prostanoïque, PGE2, PGF2p et leurs esters et sels acceptables du point de vue phar-15 macologique, sont capables à un haut degré de provoquer des réponses biologiques diverses. Pour cette raison, ces composés sont intéressants à des fins pharmacologiques. On pourra consulter par exemple Bergstrom et Collaborateurs, "Pharmacol. Rev." 20, 1 (1968) et les références bibliographiques citées dans leur 20 article. Quelques-unes de ces réponses biologiques comprennent l'activité vaso-dilatatrice dans le cas des composés PGE2, et PGA2, comme mesurée par exemple chez des rats anesthésiés (sel de sodium du pentobarbital) traités au pentolinium, avec des canules en place dans l'aorte et le coeur droit 5 l'activité 25 vaso-motrice, mesurée de la même façon, pour les composés PCrF^a ; la stimulation des muscles lisses, comme indiqué par exemple par des tests effectués'sur des bandes découpées dans l'iléon du cobaye, le duodénum du lapin ou le colon de la gerbille ; l'ac-tivation d'autres stimulants des muscles lisses ; l'activité 30 antilipolytique comme indiqué par l'antagonisme de la mobilisation, provoquée par 11épinéphrine, des acides gras libres ou l'inhibition de la libération spontanée de glycérol de tampons adipeux isolés du rat ; l'inhibition de la sécrétion gastrique dans le cas des composés K©2 et PGA2 comme indiqué chez les 35 chiens dont la sécrétion est stimulée par injection intraveineuse lente de substance nutritive ou d'histamine ; l'activité exercée sur le système nerveux central ; l'inhibition des spasmes f ^ 2\ \JQHOH et le soulagement de la respiration dans des états asthmatiquesj la réduction de l'adhérence des plaquettes sanguines, comme indiqué par l'adhérence des plaquettes au verre, et l'inhibition de l'agglutination des plaquettes sanguines et de la formation 5 du thrombus provoquée par divers stimuli physiques, par exemple une lésion artérielle et divers stimuli biochimiques, par exemple ADP, ATP, sérotonine, thrombine et collagène ; et dans le cas des composés de PGE2, la stimulation de la prolifération épidermique et de la kératinisation comme indiqué par application 10 en culture à des embryons de poulets et des morceaux de peau prélevés sur le rat. Du fait de ces réponses biologiques, ces prostaglandine s connues sont intéressantes pour étudier, prévenir, combattre ou soulager de très nombreuses maladies et de très nombreux états 15 physiologiques indésirables chez les oiseaux et les mammifères, y compris les êtres humains, les animaux domestiques utiles, les animaux domestiques d'agrément et les spécimens zoologiques, et chez les animaux de laboratoire, par exemple les souris, les rats, les lapins et les singes. En ce qui concerne notamment 20 le composé PGE^, on consultera par exemple Karim et Collaborateurs, "Br. Med. J." 3, 198-200 (1970) et "J. Obstet. Gynaec. Br. Commonv," 77, 200-210 (1970) ; de même pour le composé on consultera par exemple Wigvist et Collaborateurs, "The Lancet" 889 (1970) et Karim et Collaborateurs "Lancet" 1, 157-25 159 (1970) et "J. Obstet. Gynaec. Brit. Commonv." 76, 769 (1969) ; en ce que concerne PG^r on renvoie, par exemple, au brevet britannique N° 1 097 533 précité. Par exemple, ces composés, notamment les composés de PGE2, sont Intéressants chez les mammifères, y compris l'homme, 30 comme agents de décongestion nasale ; les composés de PGE2 et PGA2 sont intéressants pour réduire et combattre l'hypersécrétion gastrique, en réduisant ou en évitant la formation d'un ulcère gastrointestinal, et en accélérant la guérison de ces ulcères déjà présents dans les voie gastrointestinales; 35 les composés de FjSB2 sont extrêmement puissants pour provoquer la stimulation de la musculature lisse ; les composés de PŒE2 et PG-P2p sont intéressants comme agents hypotensifs pour réduire $6* i 71 32825 7 2106464 la pression sanguine chez les mammifères, y compris l'homme ; les composés de PGA2 accroissent le flux sanguin dans les reins des mammifères, en augmentant ainsi le volume et la teneur en élec-trolyte de l'urine; les composés de PGE2, ^*F2f} 30ni 5 intéressants pour provoquer le travail et pour l'avortement chez des animaux femelles gravides, y compris des êtres humains. A ces fins, ces composés sont administrés par les méthodes usuelles d'injection intraveineuse , intramusculaire ou sous-cutanée , ou d'injection intraveineuse lente . 10 Les divers acides de PG$2, "^20 sont faciles à transformer en esters ou sels acceptables du point de vue pharmacologique, aux fins de l'administration, par des procédés connus. Comme indiqué ci-dessus, les composés de PGA2 de for-15 mule I sont des composés connus. Si l'on considère les composés de 15P-PGA2 correspondants, l'ester méthylique de l'acétate de 15P-K3A2 et le composé 15P-PG-A2 sont déjà connus. Voir par exemple Weinheimer et Collaborateurs, "Tetrahedron Letters" N° 59» 5185 (1969) ; et H.V, Toungken, Jr. (éditeur), "Food-Drugs from the 20 Sea", Proc. Marine Technology Society, pages 311-314 (1969)* Les composés de formule I et les deux composés de 15P-P&A2 indiqués ci-dessus s'obtiennent par extraction à partir de deux formes d'un invertébré marin. Les composés PGA^ de formule I sont extraits de colonies de Plexaura homomalla (Esper), 1792, 25 forme S ; les composés de IÇP-PGAg sont extraits de colonies de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. Il a été mentionné que le composé 15P-PGA2 et l'ester méthylique de son acétate sont présents dans le cortex séché à l'air de Plexaura homomalla, en proportion de 0,2 $ et 1,3 & respectivement. Voir Weinheimer 30 et Collaborateurs, supra. Ces formes de Plexaura homomalla sont des représentants de la sous-classe des Octocorallia, ordre des Gorgonacea, sous-ordre des Holaxonia, famille des Plexauridae, genre Plexaura. Voir, par exemple Bayer, "The Shallov-Water Octocorallia of the 35 West Indian Région", Martinus Nijhoff, La Haye (1961). Des colonies de ces formes de Plexaura homomalla abondent sur les récifs océaniques dans la zone comprise entre le niveau de marée basse 71 32825 8 2106464 et environ 25 mètres de profondeur dans les régions tropicales et subtropicales de la partie occidentale de l'Océan Atlantique, des Bermudes aux récifs du Brésil, y compris les récifs côtiers orientaux de la Floride, les récifs insulaires et continentaux 5 des Caraïbes et les récifs insulaires et continentaux du Golf© du Mexique, Ces colonies ressemblent à des buissons ou des arbustes et sont faciles à identifier à l'espèce Plexaura homomalla (Esper), 1792 par les spécialistes en ce domaine. Une méthode permettant de distinguer la forme "S" de la forme "R" 10 est donnée ci-après dans le premier exemple de préparation. les colonies de ces deux formes de Plexaura homomalla sont faciles à diviser en un cortex externe ressemblant à de l'écorce et un tronc ou squelette protéinique interne, à structure filamenteuse. Des algues ou Zooxanthellae vivent également en sym-15 biose dans les colonies. Le choix du procédé d'isolement ou d'extraction est déterminé par le type particulier de composé PGA2 (Formule I) ou 15P-PGA2 que l'on désire. Ainsi, si l'on désire obtenir l'ester méthylique de l'acétate de PGA2, l'ester méthylique de PGA2 20 et le composé PGA2, on extrait des colonies entières ou partielles de la forme "S", fraîchement recueillies ou séchées à l'air ; pour le maximum de commodité et pour obtenir le rendement maximal en ester méthylique d'acétate de PGA2 ou ester méthylique d'acétate de 150-PGAg, on congèle,avant l'extraction,des colonies 25 entières ou partielles, fraîchement recueillies, de la forme "S" ou "R" respective .. Si l'on désire principalement PGA2 ou ISP-PGAg, on maintient des colonies entières ou partielles de la forme "S" ou "R" respective , au contact de l'eau jusqu'à ce qu'elles soient débarrassées des acétates C-15 en procédant 30 éventuellement à une congélation avant ou après le maintien au contact de l'eau. Avant l'extraction des produits de formule I, les colonies entières ou partielles fraîchement recueillies sont avantageusement rompues ou découpées en morceaux plus petits, de préférence 35 en morceaux pesant moins de 2 g, avant l'extraction. Dans certains procédés d'extraction, il est désirable de subdiviser les morceaux de colonies pour accroître leur surface spécifique dans 71 32825 9 2106464 la gamme de 100 à 100 000 fois la surface spécifique d'un poids égal de colonies. A titre de variante, les colonies ou leurs fragments sont séciaos à l'air avant l'extraction. Lorsqu'on procède à ce aocha^e, 5 il est avantageux de séparer le cortex épais du squelette protéi-nique filamenteux, puis de pulvériser le cortex avant l'extraction. La majeure partie des composés de formule I sô trouve dans ce cortex. Les solvants d'extraction consistent en l'un quelconque des liquides organiques neutres usuels utilisés & des fins d'extrac-10 tion, par exemple .un hydrocarbure, des hydrocarbures halogénés, des alcanols inférieurs, des cétones et des esters. De préférence, le solvant a un point d'ébullition inférieur à environ 100°C. Des exemples des solvants préférés comprennent le benzène, le dichlo-rométhane, le méthanol, l'éthanol, l'acétone et l'acétate d'éthy-15 le. Four séparer les produits de formule I de l'extrait, on utilise des procédés connue en pratique, par exemple une extraction liquide/liquide ou une chromâtographie sur gel de silice. Depuis la découverte des procédés nouveaux et perfection-20 nés de production de composés de formule I et de leurs 150-épi-mères, la Demanderesse a trouvé que de petites quantités des composés 5,6-trans de PGAp et 150-PGA2 et de leurs esters méthyli-ques et esters méthyliques d'acétate s'obtiennent également à partir de Plexaura homomalla (Esper),' 1792, formes R et S. Ces 25 composés 5,6-trans sont extraits avec les composés correspondants du type PaA. et les accompagnent dans beaucoup de leurs transformations. Par exemple, le composé PGA_ contenant le 5,6-trans-PGAp donne un mélange de PGE^ et de 5,6-trans-PGKEL au moyen du procédé illustré par le schéma E donne plus loin. 30 Lorsqu'on désire préparer, à des fins pharmacologiques, les produits principaux de l'invention sous une forme exempte des composés 5,6-trans, ces composés 5,6-trans sont séparés, soit des corps réactionnels de départ, soit des produits. Dans chaque cas, plusieurs procédés sont disponibles pour séparer 35 les composés 5,6-trans-PG2 dos composés P&2. L'un de ces procédés consiste à ùtiliser une résine d'échange ionique saturée d'argent (voir par exemple E.A. Emken et Collaborateurs, "J. Am. Oil Chemists* Soc." 41, 388 (1964), oe procédé étant illustré ci-dessous dans le deuxième exemple de préparation. 40 L'autre procédé consiste à former préférentiellement un produit d'addition d'acétate mercurique du composé 5»6-cis qui peut être extrait dans des solvants polaires mentionnés ci-après dans le troisième exemple de préparation. Par conséquent, pour éliminer l'ester méthylique d'acétate de 5»6-trans-PGA2 de l'ester méthy- 71 32825 10 210Ô4O4 lique d'acétate de PGA2, on utilise avantageusement le procédé du troisième exemple de préparation donné plus loin. Pour obtenir le rendement maximal en ester méthylique d'acétate de PGAg ou en ester méthylique d'acétate de ^P-PGAg, 5 on a apporté un perfectionnement au procédé d'extraction de colonies entières ou partielles de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S ou de Plexaura homomalla (Esper),"1792, forme R, re spe et iveme nt. Dans ce procédé perfectionné, les colonies entières ou 10 partielles sont refroidies à une température s'abaissant au moins à +5°C, moins d'environ une heure après que ces colonies ont été retirées de leur biotope, ces colonies ou leurs fragments étant maintenus à une température s'abaissant au moins à +5°C jusqu'au moment de leur extraction avec un liquide organique neu-15 tre. Lorsque ces colonies entières ou partielles sont traitées de cette manière, on observe une différence surprenante et inattendue dans la composition du mélange de dérivés d'acide prostanoïque qui est extrait, comparativement à la technique anté-20 rieure. Par exemple, Weinheimer et Collaborateurs (supra) décrivent l'extraction d'une partie de I5P-PGA2 et de 6,5 parties d'ester méthylique d'acétate de 15P-PGA2 du cortex séché à l'air de colonies de Plexaura homomalla. En utilisant le nouveau procédé perfectionné de l'invention, on obtient un 25 rapport sensiblement plus faible du composé hydroxy au composé acétate. Par exemple, dans l'exemple 3 donné plus loin, on obtient un rapport d'environ une partie de composé hydroxy à environ 25 parties de composé acétate. Ce résultat inattendu s'obtient en utilisant le perfectionnement apporté par la pré-50 sente invention, avec des colonies entières où partielles des deux formes R et S de Plexaura homomalla (Esper) 1792. Ce résultat est avantageux lorsque le composé acétate est désiré comme composé intermédiaire. Une température inférieure à environ +5°C est facile à 35 obtenir avec un mélange de glace et d'eau, et il est pratique d'immerger les colonies ou leurs fragments dans ce mélange, aussitôt qu'on peut le faire après que les colonies ont été enlevées 71 32825 n 2106464 de leur biotope. Toutefois, dans une forme préférée de réalisation du procédé perfectionné de l'invention, le refroidissement total ou une partie de ce refroidissement est effectué à une température inférieure à -20°C environ. Ainsi, les colonies ou 5 leurs fragments sont réellement congelés et maintenus à l'état congelé jusqu'au moment de l'extraction. De préférence, les colonies ou leurs fragments/sont congelés , à une température inférieure à environ -20°C, moins d'une heure environ après qu'on les a retirés de leur biotope, et on les maintient en dessous 10 d'environ -20°C jusqu'au moment de l'extraction. Dans une autre forme préférée de réalisation de ce procédé perfectionné, les colonies entières ou partielles sont congelées par contact aveo de 1'anhydride carbonique solide (neige carbonique) ou placées'dans Tin récipient qui contient de l'anhydride 15 carbonique solide, les colonies entières ou partielles étant maintenues,une fois congelées, au contact de cet anhydride carbonique ou à une température équivalente jusqu'au moment de l'extraction. Les colonies entières ou partielles à l'état oongelé sont 20 avantageusement brisées ou découpées en morceaux plus petits, de préférence d'un poids inférieur à 2 g, avant l'extraction. Pour certains procédés d'extraotion, il est désirable de broyer les fragments de colonies dans un oonoasseur,en particules dont la plus grande dimension mesure environ 5 mm. On choisit le degré 25 de subdivision, conformément à plusieurs facteurs, par exemple la manière dont les matières solides sont mises en contact avec le liquide d'extraction, le type de percolation, c'est-à-dire la percolation en lit statique ou sous agitation manuelle ou mécanique, la durée de contact, la nature et la viscosité du 30 solvant, etc. Le liquide organique neutre utilisé pour extraire les colonies entières ou partielles est l'un quelconque des solvants organiques usuels, de préférence un solvant qui a un point d'ébullltion inférieur à 100°C environ et dont la polarité va 35 de moyenne à forte. Les liquides particulièrement préférés pour cette extraction, comprennent le dichlorométhane, le méthanol et l'éthanol. Toutefois, on doit éviter un contact inutilement 71 32825 12 £ I U040H prolongé des colonies ou de leurs fragments avec un solvant organique hydroxylique tel que le méthanol ou l'éthanol, parce qu'une partie de l'acétate désiré peut être transformé^ûans le solvant en composé hydroxy correspondant. Une durée optimale de l'extrac-5 tion est facile à déterminer par les spécialistes en ce domaine, par exemple par une extraction répétée d'une petite quantité de fragments de la colonie avec des portions fraîches/iu solvant pour déterminer le temps requis pour l'obtention d'une extraction sensiblement totale. La température d'extraction n'est pas dé-10 terminante, poujjkutant que l'extraction n'est pas conduite à une température assez élevée pour que les produits désirés se décomposent. Une extraction dans la gamme de températures de 5 à 30°C est habituellement satisfaisante. Les dérivés d'acide prostanoïque sont isolés de l'extrait 15 et séparés les uns des autres au moyen de procédés connus en pratique. Ces procédés sont illustrés dans les exemples donnés plus loin. Pour obtenir le rendement maximal en PGA^ ou 15P-PGA2, on dispose à présent d'un procédé perfectionné d'extraction 20 de colonies entières ou partielles de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S, ou Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, respectivement. Dans ce procédé perfectionné, les colonies entières ou partielles, avant l'extraction, sont maintenues au contact de l'eau dans une gamme de températures atteignant 50°C 25 jusqu'à ce que les acétates C-15 des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les colonies entières ou partielles soient transformés pratiquement en totalité en dérivés C—15— hydroxy d'acide prostanoïque. L'eau indiquée ci-dessus peut être de l'eau cellulaire, 30 c'est-à-dire de l'eau renfermée dans la structure interne de l'invertébré marin, de l'eau renfermée dans la structure de l'endoderme et les spicules, de l'eau qui adhère aux colonies telles qu'on les recueille, ou de l'eau ajoutée en vue d'accroître le rendement en PGA^ ou 15f3-PGA2. En ce qui concerne 35 l'eau naturelle inerte de ces formes de Plexaura homomalla (Esper), 1792, environ la moitié du poids d'une colonie consiste en eau interne, comme le montre le chauffage du cortex ou écorce ! 71 32825 13 2106464 extérieure et du squelette protéinique filamenteux séparément à 50°C et sous pression de 0,2 mm pendant 24 heures, puis à 50°C et à la pression atmosphérique pendant une période supplémentaire de 48 heures. La quantité d'eau présente pendant la période 5 dans laquelle les C-15-acétates sont transformés en totalité en dérivés C-15-hydroxy est au moins égale, en poids,à la teneur en matières sèches des colonies entières ou partielles. Pour empêcher une perte d'eau par évaporation, les colonies entières ou partielles sont ou bien enfermées dans des récipients, ou 10 bien submergées. Dans une forme de mise en oeuvre de ce procédé perfectionné, pour faciliter la subdivision des colonies en morceaux plus petits, les colonies entières ou partielles sont congelées avant leur broyage ou concassage. Cette congélation est effectuée au 15 moyen de procédés connus en pratique. Pour une certaine raison qui n'est pas entièrement élucidée, des résultats supérieurs en ce qui concerne le rendement en PG^ ou 150-PGA2 sont obtenus si, après le maintien des colonies entières ou partielles dans l'eau jusqu'à ce que les 20 C-15-acétates soient transformés en dérivés C-15-hydroxy, ces colonies ou leurs fragments sont congelés et décongelés avant l'extraction. Dans leur état congelé, les colonies entières ou partielles peuvent être conservées de façon pratique sans détérioration grave ni transformations et réactions secondaires 25 chimiques indésirables. Pendant la période de passage des C-15-acétates aux dérivés C-15-hydroxy, le mélange de colonies ou de fragment s de colonies au contact de l'eau,dont une partie peut être de l'eau ajoutée, est maintenu à une température comprise dans la gamme 30 de 20 à 40°C jusqu'à ce que la modification chimique désirée ait eu lieu. A des températures plus hautes, c'est-à-dire au-dessus d'environ 50°C, la modification chimique a lieu plus rapidement, mais on court le risque d'une certaine dégradation du produit désiré. A des températures plus basses, c'est-à-dire 35 s'abaissant à environ 5°C, la modification chimique a lieu plus lentement. A 25°C environ, la réaction désirée est sensiblement complète en moins d'environ 15 à 20 heures. 71 32825 14 2106464 On détermine la fin de la réaction désirée, c'est-à-dire la transformation pratiquement totale des C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les colonies ou les fragments de colonies en dérivés C-15-hydroxy d'a-5 cide prostanoïque, en prélevant un morceau de la colonie ou quelques petits morceaux et en les extrayant au méthanol. Ce produit d'extraction en méthanol est soumis à une chromato-graphie en couche mince avec le système A-12. L'absence sensible éventuelle des 15-acétates est facile à observer. 10 Comme indiqué ci-dessus, les principaux dérivés d'acide prostanoïque renfermés dans ces deux formes de Plexaura homomalla sont l'ester méthylique de l'acétate de PGA^ et l'ester méthylique de l'acétate de 1S-épi-PGAg. Le procédé perfectionné décrit ci-dessus change à peu près totalement les radicaux acé-15 tate en radicaux hydroxy. En même temps, la plupart des radicaux carboxyméthyle, c'est-à-dire -COOCH^, sont changés en radicaux carboxyle, c'est-à-dire -COOH. Toutefois, habituellement, au moment oîi pratiquement tous les radicaux acétate ont été changés en radicaux hydroxy» une petite quantité d'esters 20 méthyliques du composé 15-hydroxy est encore présente. Le cas échéant, le mélange d'eau et de colonies entières ou partielles décongelées peut être maintenu à une température au maximum égale à 50°C jusqu'à ce que ces esters méthyliques du composé 15-hydroxy soient transformés en 15-hydroxy-acides. Mais les 25 quantités restantes d'esters méthyliques de dérivés 15-hydroxy sont habituellement faibles et les esters sont faciles à séparer des 15-hydro:xy-acides. Par conséquent, dans ce procédé perfectionné, il est facultatif de poursuivre le maintien des colonies entières ou partielles décongelées à la tempé-30 rature indiquée au-delà du point où les composés 15-acétate sont sensiblement absents. Lorsque la transformation désirée des composés 15-acétate en composés 15-hydroxy est sensiblement terminée, les acides et esters méthyliques du composé hydroxy sont 35 isolés des colonies entières et partielles et de l'eau qui est également présente, par des techniques convenables d'extraction. A cette fin, on préfère utiliser un liquide organique miscible à l'eau, par exemple un alcanol inférieur tel que le 71 32825 15 2106464 méthanol ou l'éthanol,ou une cétone telle que l'acétone, ayant de préférence un point d'ébullition inférieur à 100°C environ. La solution de l'extrait et du liquide organique est 5 concentrée, de préférence à des températures inférieures à environ 50°C, par exemple sous pression réduite. Si la formation de mousse est gênante, on ajoute un agent anti-mousse, par exemple un polypropylène-glycol,de l'huile de saindoux, de l'huile de soja, une silicone ou une autre matière intéressante à 10 cette fin, comme cela est connu en pratique. En ce qui concerne les autres composés de formule I et leurs 15P-épimères mentionnés ci-dessus, la séparation de PGA^ ou 15P-PGA2 de l'extrait est effectuée au moyen de procédés connus en pratique, par exemple par chromatographie sur 15 gel de silice. De même, les composés 5,6-trans correspondants, sont séparés par les procédés décrits ci-dessus, par exemple en utilisant une colonne de résine portant des ions argent. Une autre façon d'obtenir PGvê^ ou 15P-P&&2 consiste à partir des esters méthyliques et esters méthyliques de 15-acéta-20 te correspondants, après que ces esters ont été extraits de colonies ou colonies partielles de Plexaura homomalla, comme indiqué ci-dessus. Un procédé convenable d'élimination du groupe acétyle de l'ester méthylique de 15-acétate de formule I ou de son 15p-épimère consiste à mélanger l'ester méthylique 25 d'acétate en solution dans un alcanol inférieur, de préférence en solution méthanolique, avec un acide fort, par exemple l'acide perchlorique, pendant environ 15 heures à 25°C. Un procédé qui convient pour éliminer le groupe méthyle de l'ester méthylique de formule I ou de son 15P-épimère consiste en l'hydrolyse 30 enzymatique décrite dans le brevet de la République Fédérale d'Allemagne mis à l'Inspection Publique sous le N° 1 937 912, dont une reproduction est donnée dans "Earmdoc Complété Spécifications", volume N° 14, N° 6869R, semaine R^, 18 Mars 1970. Des transformations des composés -P&Z^ et 1 SP-PGAg in-35 diqués ci-dessus en d'autres prostaglandines, par exemple PGEg, PG-E2a et ou leur&15P-épimères, sont décrites ci- après, mais n'entrent pas dans le cadre de la présente invention. 71 32825 16 2106464 lorsqu'on désire des composés du type PG-E, on transforme les composés du type PGA de formule I et leurs 150-épimères par les réactions chimiques dont le type général est illustré par le schéma A. 5 Sur le schéma A, R^ désigne un atome d'hydrogène, un groupe méthyle ou un groupe -Si-(A)^, dans lequel A est un groupe alkyle en à C^, aralkyle en C^ à C^2, phényle ou phényle substitué avec un ou deux radicaux fluoro, chloro ou alkyle en y\ C1 à ; G- est un groupement H OR^ ou H OR^ , dans le-10 quel est un atome d'hydrogène, un groupe acétyle ou un groupe -Si-(A)^, dans lequel R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle,et R^ est un groupe -Si-(A)^ lorsque R^ est un groupe -Si-(A)^ ; R1 est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle /\ /\ et B est un groupe H OH ou H OH. 15 Ainsi, sur le schéma A, la formule V englobe les composés de formule I et leurs 15P~épimères tirés de Plexaura homomalla, ainsi que les composés de formule : dans laquelle R^ a la définition donnée ci-dessus et Z est un ,-'S S\ groupement H O-Si-(A)^ ou H u-Si-(A)^, A ayant la défi-20 nition donnée ci-dessus. 32825 17 SCHEMA. A 2106464 (osydation) Ni/ VI (réduction) S/ (hydrolyse) 'COORi VII VIII 71 32825 's 2106464 Dans la formule VI du schéma A, le symbole cL désigne la fixation de i1oxygène du groupe époxy au noyau en configuration alpha ou bêta. Dans les formules VII et VIII du schéma A, le signe a/ désigne la fixation du groupe hydroxy au noyau 5 en configuration alpha ou bêta. Il ressort du schéma A que les produits de formules VII et VIII englobent chacun quatrqferoupes stéroisomères de composés. Il s'agit des composés à configuration 11a,15(S) de PGE2 (formule II, ci-dessus) et les composés à configuration 11a,15{3-10 PGE^ tels qu'on les extrait de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. Si le produit de formules VII ou VIII doit avoir la configuration 15(S), par exemple le composé PGE2, la matière première de formule V doit avoir la configuration 15(S), c'est-à-dire que G- doit être H 0R^, Si l'on désire un composé 15P de for-15 mule VII ou VIII, par exemple 150-PGE2, la matière première de formule V doit avoir la configuration 15P, c'est-à-dire que G- doit être H OR^. Comme indiqué ci-dessus, les matières premières de formule V, dans laquelle R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe mé- \ 20 thyle et & est H 01^, c'est-à-dire les matières de configuration 15(S), sont tirées de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. Ces mêmes composés sont aussi produits par réaction du composé 15p correspondant avec un chlorure ou bromure d'hydro-carbyl- ou d'halogénohydrocarbyl-sulfonyle, de préférence un 25 chlorure ou bromure de (alkyle inférieur)-suifonyle, notamment le chlorure ou le bromure de méthanesulf ony le, ou un chlorure ou bromure de benzène- ou (benzène substitué)-suifonyle, par exemple le chlorure de p-toluène-sulfonyle. Cette réaction est conduite en présence d'une quantité au moins suffisante d'a-30 mine tertiaire, par exemple de triéthylamine, pour absorber le gaz chlorhydrique ou bromhydrique formé comme sous-produit, et à une basse température, de préférence dans la gamme de -15 à +15°C. La présence d'un diluant liquide inerte, par exemple le tétrahydrofuranne, contribue à maintenir un mélange réactionnel 71 32825 19 2106464 homogène mobile. A 0°C et en présence de chlorure de méthane-sulfonyle, une durée de réaction de 30 à 60 minutes est habituellement suffisante. Le produit est un mélange de produit 15(S) (alpha) et de matière première 15(R)(bêta). On les sépare 5 au moyen de procédés connus en pratique, et on purifie le produit 15(S) par des procédés également connus en pratique, avantageusement par chromâtographie sur gel de silice. Cette réaction est également utilisée pour transformer des substances de formule I à configuration 15(S), dans lesquelles est un atome 10 d'hydrogène ou un groupe méthyle et R2 est un atome d'hydrogène, en composés 15(R) correspondants.Dans chaque cas, on obtient un mélange de produit 15(R) et de matière première 15(S), dont on sépare les composants comme décrit ci-dessus. En se référant de nouveau au schéma A, on mentionne que 15 la transformation de la matière première V en époxyde VI est conduite par réaction du composé V avec tout agent connu pour époxy-der une cétone à insaturation ccfS sans réaction avec des doubles liaisons carbone-carbone isolées, voir par exemple "Steroîd Reactions", Cari Djerassi, éd., Holden Day, Inc., 1963» page 593 . 20 On préfère en particulier une solution aqueuse de peroxyde d'hydrogène ou un hydroperoxyde organique tertiaire. "Voir, par exemple, "Organic Peroxides", A.V. îobolsky et Collaborateurs, Interscience Publishers, N.Y., 1954. A cette fin, on utilise le peroxyde ou 1*hydroperoxyde en une quantité 25 d'au moins un équivalent par mole de corps réactionnel de formule V en présence d'une base forte, par exemple un hydroxyde de métal alcalin, un alcoolate métallique ou un hydroxyde d'am-' monium quaternaire. Par exemple, on utilise 1'hydroxyde de lithium, de sodium ou de potassium, l'éthylate de lithium, l'octyla-30 te de lithium, le méthylate de magnésium, l'isopropylate de magnésium, 1'hydroxyde de benzyltriméthylammonium, 1'hydroxyde de tétraéthylammonium, l'hydroxyde de butyltriméthylammonium, l'hydroxyde de butyldiéthylphénylammonium, l'hydroxyde de benzyléthyldiméthylammonium, l'hydroxyde de benzyldiméthyl-35 octadécylammonium, l'hydroxyde de benzyldodécyldiméthylammo-nium, l'hydroxyde de décyldiméthylphénylaamonium, etc. Voir par exemple Sidgwick, "Organic Chemistry of Nitrogen", troisième édition, révisé par Miller et Springall, Oxford, 1966, pages 116-127. 71 32825 2 I U0 Il est avantageux d'utiliser un diluant liquide inerte dans l'étape d'époxydation pour produire un mélange réactioimel homogène mobile, par exemple un alcanol inférieur, le dioxanne, le tétrahydrofuranrie, le diméthosyéthane, le diméthylsulfoiyde 5 ou la diméthylsulfone. Lorsqu'on préfère 1'époxyde alpha, il est particulièrement préférable d'utiliser comme diluant le tétrahydrofuranne ou le diméthoxyéthane qui est moins polaire. On préfère généralement une températtire de réaction comprise dans la gamme de -60 à 0°0, notamment inférieure à -10°C, Les tempé-10 ratures plus basses, au-dessous de -30°C, sont particulièrement préférables pour favoriser la formation de 1'époxyde alpha par rapport à 1'époxyde bêta, A une température de -20°C, l'époxy-dation est habituellement complète egfcrois à six heures. 11 est également préférable que la réaction soit conduite dans 15 une atmosphère de gaz inerte, par exemple azote, hélium ou argon. Lorsque la réaction est terminée, comme l'indique l'absence de matière première sur des plaques de chromâtographie en couche mince (3 i° d'acétone dans le dichlorométhane), on neutralise le mélange réactionnel et on isole le produit époxy 20 par des procédés connus en pratique, par exemple par évapora-tion du diluant et extraction du résidu avec un solvant approprié non miscible à l'eau, par exemple l'acétate éthylique. Cette transformation de V en VI donne habituellement un mélange d'époxyde s alpha et bêta de formule VI, à configuration 25 15(R) ou 15(S), suivant la configuration au niveau de l'atome C-15 de la matière première de formule V. Bien que ces mélanges soient séparés eijdaomères alpha et bêta individuels, par exemple par chromatographie au moyen de procédés connus comme étant intéressants pour séparer des mélanges d'époxydes alpha et bêta, 30 il est habituellement avantageux de transformer le mélange de formule VI d'époxydes alpha et bêta en mélange correspondant des composés 11a et 1ip-hydroxy de formule VII. Ce dernier mélange est ensuite facile à séparer en composés 11a et 11(3, par exemple par chromatographie sur gel de silice. 35 Comme mentionné ci-dessus, les matières premières de formule V comprennent non seulement les composés de formule I et leurs 15P-épimères tirés de Plexaura homomalla, mais aussi 71 32825 21 2106464 les composés silyliques de formule Va. Lorsqu'on désire les utiliser comme corps réactionnels, on prépare ces composés silyliques par silylation de PGA2, IÇP-PGrAg, ou leurs esters méthyliques. Ces opérations de silylation sont conduites au moyen de 5 procédés connus en pratique. Voir par exemple Pierce "Silylation of Organic Compounds", Pierce Chemical Co., Rockford, 111. (1968). Le groupe hydroxy porté par l'atonie C-15 de PGA2, 150-PGA2 ou leurs esters méthyliques, est transformé en un radical -O-Si(A)^ dans lequel A la définition donnée ci-dessus, une 10 quantité suffisante d'agent de silylation étant utilisée conformément aux procédés connus pour effectuer cette opération. Les agents de silylation nécessaires à cette fin sont connus en pratique ou préparés par des procédés connus. Voir, par exemr-ple,Post, "Silicones and Other Organic Silicon Compounds", 15 Reinhold Publishing Corp., New York , N.Y. (1949). Dans le cas de PC^ et 15P-PGA2» un excès d'agent de silylation et un traitement prolongé transforment le groupe -COOH en groupe -COO-Si-(A)^. Dans la transformation de V à VI, il importe peu que ce groupe -COOH de PGA2 ou ISP-PGA^ soit ou non estérifié en 20 groupe -COO-Si-(A)^, parce que ce groupe ester est transformé en -COOH pendant la formation et la séparation du produit époxyde de formule VI. Les divers symboles A d'un group^-Si-(A)^ sont semblables ou différents. Par exemple, un groupe -Si-(A)^ peut être un 25 groupe triméthylsilyle, diméthylphénylsilyle ou méthylphényl-benzylsilyle. Lorsqu'on désire garder le radical -Si-(A)^ sur l'atome C-15 dans 1'époxyde de formule VI, par exemple pour se rendre maître d'une réaction stérique subséquente, il importe, lorsqu'on 30 isole 1'époxyde, que la présence d'un acide soit évitée et que le contact avec l'eau soit réduit au minimum, à,moins de maintenir inférieure l'eau à une basse température, c'est-à-dire/à 10°C environ . En se reportant de nouveau au schéma A, on mentionne que la transformation de 1'époxyde VI en composé hydroxy VII 35 est effectuée par réduction avec des sels de chrome (II), par exemple le chlorure ou l'acétate de chrome (II). On prépare ces sels par des procédés connus en pratique, comme décrit, par 71 32825 22 2 ! 0 b 4 0 4 exemple dans "Inorganio Syntheses", VIII, 125 (1966) ; ibid., VI, 144 (1960) ; ibid. III, 148 (1950) ; ibid. I, 122 (1939) ; et dans les références bibliographiques qui y sont citées. Cette réduction est effectuée au moyen de procédés connus en 5 pratique, utilisant les sels de chrome (II) pour réduire des époxydes de cétones à insaturation ap en P-hydroxy-cétones. Voir, par exemple Cole et Collaborateurs, "J. Org. Chern." 19, 131 (1954) et ïïeher et Collaborateurs, "Helv. Chem. Acta" 42, 132 (1959). Dans ces réactions, l'absence d'air et d'acides 10 forts est désirable. Si l'on désire maintenir un radical -Si-(A)^ sur l'atome C-15, on préfère un mélange réactionnel neutre. Un procédé particulièrement préféré consiste à engendrer l'ion chrome (II) en présence de 1'époxyde de formule VI, par exemple en mélangeant 1'époxyde avec un sel de chrome (III) tel 15 que le chlorure, avec du zinc métallique en présence d'acide acétique. Le composé de formule VII désiré est isolé du mélange réactionnel de réduction par des procédés connus en pratique, en prenant soin de réduire au minimum le contact du produit avec un acide et de l'eau, notamment de l'eau chaude, si l'on 20 désire retenir un groupement -Si-(A)^ sur l'atome C-15. On a découvert le fait surprenant que l'aluminium métallique amalgamé est également intéressant comme agent réducteur, à la place des sels de chrome (II) pour transformer les époxydes de formule VI en composés hydroxy de formule VII. On prépare 25 l'aluminium amalgamé par des prooédés connus en pratique, par exemple par mise en contact d'aluminium métallique sous la forme de clinquants, de feuilles minces, de tournures ou de granules, avec un sel de mercure (II) par exemple le chlorure mercurique, avantageusement en présence d'une quantité suffisante d'eau 30 pour dissoudre le sel de mercure (II). De préférence, la surface de l'aluminium métallique est exempte d'oxyde. On arrive facilement à l'en débarrasser par élimination physique de la couche usuelle d'oxyde, par exemple par abrasion ou grattage, ou chimiquement, par exemple par attaque corrosive avec une solution 35 aqueuse d'hydroxyde de sodium . Il suffit simplement que la surface de l'aluminium soit amalgamée^filtre fraîchement préparée/et maintenue à^L'abri de l'air et de l'humidité jusqu'à 71 32825 25 2106464 son utilisation. L'ouverture par voie de réduction du noyau d'époxyde de formule VI est effectuée par mise en contact de cet époxyde avec l'aluminium amalgamé en présence d'un solvant hydroxylique 5 et d'une quantité suffisante d'un diluant liquide organique inerte pour donner un mélange réactionnel mobile et homogène par rapport au solvant hydroxylique et à 1'époxyde. Parmi les solvants hydroxyliques, on préfère particulièrement l'eau, bien qu'on puisse également utiliser des alcanols inférieurs 10 tels que le méthanol et l'éthanol. Des exemples de diluants liquides organiques inertes comprennent des éthers normalement liquides tels que l'éther diéthylique, le tétrahydrofuranne, le diméthoxyéthane , le di-glyme (éther diméthylique de diéthylène-glycol), etc. On pré-15 fère particulièrement le tétrahydrofuranne. Lorsqu'on utilise un diluant liquide non miscible à l'eau, il est particulièrement intéressant d'utiliser dans cette réaction un mélange d'eau et de méthanol ou d'éthanol, parce que ces deux derniers solvants contribuent également à former le mélange réactionnel homogène 20 désiré. Par exemple, on utilise un mélange d'éther diéthylique et d'eau avec suffisamment de méthanol pour donner un mélange réactionnel homogène. L'ouverture de 1'époxyde par voie de réduction est effectuée par mélange d'une solution de 1'époxyde dans le diluant 25 organique avec l'aluminium amalgamé et le solvant hydroxylique. Etant donné que la réaction est exothermique, il est habituellement avantageux de refroidir la solution à une basse température, par exemple entre -20 et 0°C, avant l'addition de l'aluminium amalgamé et du solvant hydroxylique et de maintenir le mélange 30 réactionnel dans la gamme de 20 à 30°C par refroidissement extérieur. Ceci est particulièrement avantageux lorsqu'on utilise l'eau comme solvant hydroxylique. De plus hautes températures de réaction sont utilisables mais non préférées lorsqu'on désire obtenir Tin fort rendement en produits de formule VII. On préfère 35 effectuer une agitation pendant la réaction, parce que le mélange réactionnel est hétérogène par rapport à la solution et à l'aluminium amalgamé. 71 32825 24 210 o 4 b 4 On contrôle avantageusement la progression de la réaction en prélevant de petites portions de la solution et en déterminant la présence ou l'absence de matière première, par chromatographie en couche mince. Par exemple, lorsque est un groupe méthyle 5 et que G désigne H OCOCH^ dans les formules 71 et VII, un système convenable de chromatographie en couche mince consiste en acétate éthylique-cyclohexane-acide acétique (40/60/2), la matière première de formule VI ayant une valeur de R^ de 0,64 et les deux produits de formule VII ayant des valeurs de R^ 10 de 0,25 (HP) et 0,20 (11a). Les produits hydroxy de formule XII désirés sont isolés par filtration du mélange réactionnel, avantageusement après addition de sulfate de magnésium comme auxiliaire de filtration, et évaporation des diluants organiques. Les produits de formule 15 VII sont ensuite hydrolysés,le cas échéant, pour éliminer le groupe -Si-(A)^ de l'atome C-15 et les produits 11a et 11P de formule VIII sont séparés, le cas échéant, par des procédés connus en pratique, par exemple par chromatographie sur gel de silice. 20 Les produits de formule VII sont tous du type PGS^ et comprennent PGE2, 15-acétate de PGE2, ester méthylique de PGE2, ester méthylique de 15-acétate de PGEg, PGEE2 et ester méthylique de PGE2 portant un groupe -O-Si-(A)^ sur l'atome C-15, les composés 15P correspondants et les composés correspondant à 25 tous ceux dans lesquels le groupe hydroxy est attaché à l'atome C-11 en configuration bêta. En ce qui concerne en outre les composés de formule VII et VIII, soit en mélange, soit séparément, l'un quelconque de ces composés est transformé en d'autres composés ou mélanges 30 intéressants par transformation de ces composés du type PGE en produits du type PGE par réduction du groupe carbonyle du noyau en C-9 en groupe alpha-hydroxy ou bêta-hydroxy. Ces transformations sont illustrées sur le schéma B. Sur le schéma B, est un atome d'hydrogène, un groupe 35 méthyle ou un groupe -Si-(A)^, R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe méthyle, IL est un atome d'hydrogène ou un groupe 71 32825 25 2106464 /A S\ -Si-(A)^ et G est un groupe H OR^ ou H OR^, R^ désignant un atome d'hydrogène ou un groupe -Si-(A)^, lorsque et R^ sont des atomes d'hydrogène ; R^ est un atome d'hydrogène, un groupe acétyle ou -Si-(A)^, lorsque R1 et R^ sont des groupes méthyle ; 5 et R^ est un groupe -Si-(A)^ lorsque R^ est un groupe -Si-(A)^, A ayant la définition donnée oi-dessus, à condition que lorsque R^ est un groupe -Si-(A)^, R^ soit aussi un groupe -Si-(A)^. De plus, sur le schéma B, le symbole B de la formule XVI représente .-A. /\ H OH ou H OH et le signe s\J désigne la fixation au noyau 10 de cyclopentane en position alpha ou bêta. La matière première VII du schéma B est préparée comme indiqué sur le schéma A. Les composés de formule VIII sur le schéma A sont inclus dans la formule VII. Comme indiqué ci-dessus, les composés 15P-PŒEL» ester méthylique de 15P-PGE0 et 15 d'ester méthylique d'acétatej ^p-PŒEg sont tirés de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. Tous ces composés répondent à la formule VII et par conséquent, l'extraction de cette forme de Plexaura homomalla constitue une autre source de ces matières premières. 20 Sur le schéma B, la matière première VII peut être un mélange de composés qui diffèrent par la configuration de l'atome C-11, ou bien la matière première peut être pure du point de vue stéréochimique, en ce qui concerne l'atome C—11, selon qu'on a procédé ou non à une séparation préalable des isomères 11a et 25 11 {3 (voir ci-dessus les commentaires sur les réactions du schéma A). la transformation de la matière première VII du type PGE en produit 21 du type PGF implique la réduction d'un groupe carbonyle du noyau en un groupe hydroxy. Ce procédé est connu 30 en pratique pour certains des composés répondant à la formule VII, par exemple lorsque la configuration de l'atome C—11 est en alpha et que la configuration de l'atome C-15 est en S. 71 32825 26 2106464 SCHEMA B (silylation) COORa VII IX RsO (réduction) (hydrolyse ou alcoolyse) X 71 32825 27 2106464 Pour cette réduction du groupe oarbonyle en groupe hydroxy, on utilise des procédés connus en pratique. Voir par exemple Pike et Collaborateurs,"J. Org. Chem.M 34» 3552 (1969). On utilise l'un quelconque des agents cétoniques de réduction 5 du groupe carbonyle qui ne réduisent pas les groupes ester ou acide ou les doubles liaisons oarbone-à-carbone. Des exemples de ces agents comprennent les borohydrures métalliques, notamment les borohydrures de sodium, potassium, lithium et zinc, l'hy-drure de lithium- (tri-tertio-butojy)-aluminium, les trialkoxy-10 borohydrures métalliques, par exemple le triraéthoxyborohydrure de sodium et l'hydrure de diisobutylaluminium. On préfère pour cette réduction les borohydrures de sodium, potassium et zinc, notamment le dernier. Cette réduction du groupe carbonyle donne habituellement 15 un mélange de composés des types PŒFa et PG-F0, c'est-à-dire des composés à configuration alpha et des composés à configuration bêta en ce qui concerne le groupe hydroxy de l'atome C-9. Ce mélange d'isomères alpha et bêta est séparé par des procédés connus en pratique, par exemple par chromatographie sur gel 20 de silice. Voir Pike et Collaborateurs, ibid., par exemple. Si la matière première de formule VII est un mélange des isomères 11a et 110, cette réduction produit alors habituellement quatre isomères, c'est-à-dire les isomères 9a, 11a ; 9a, 110 ; 90, 11a et 90 , 110. Ces composés sont également séparés de ces 25 mélanges par chromatographie sur gel de silice. En ce qui concerne la transformation de VII en IX sur le schéma B, on observe que les paramètres concernant VII sont tels que tous les composés VII soient inclus dans IX. En d'autres termes, la transformation de VII en IX est une 30 étape facultative du procédé, pour passer de VII à X. lia raison en est expliquée ci-après. Pendant la réduction ^®r^sen le rapport des composés 9a-hydroxy et 90-hydroxy/est différent selon que du composé IX est un atome d'hydrogène ou un groupe -Si-(A)^. Par exemple, avec le composé de formule IX, dans laquelle S\ 35 R-j est un atome d'hydrogène, G- est H OH, et R^Q^V représente HO , c'est-à-dire 11a-hydroxy, la réduction au borohydrure 71 32825 28 2 IUD^o^ 10 de sodium donne 42 parties du composé 9a-hydroxy du composé de formule X correspondant et 58 parties du composé 9p-hydro^. Mais avec le composé de formule IX, dans laquelle est/ atome d'hydrogène, G est H O-Si-(CH^)^ et R^CW représente (CH^)^Si-O , la réduction au borohydrure de sodium donne 85 parties du composé 9«-hydroxy de formule X correspondant et 15 parties du composé 9P-hydroxy. Des différences analogues s'observent avec les autres isomères répondant à la formule IX, bien que ce ne soit pas nécessairement dans le môme sens. Par conséquent, le fait que R^ de la formule IX est un atome d'hydrogène ou un groupe -Si-(A)^ dépend de l'isomère C-9 particulier de formule X que l'on désire et de l'influence exercée par la silylation sur le rapport des isomères. Pour toute matière première particulière de formule IX, ce rapport est facile 15 à déterminer par réduction à petite échelle avec et sans silylation. Lorsqu'une silylation avant la réduction du groupe carbonyle est indiquée, en grande partie pour des raisons d'ordre économique, on préfère que A soit un groupe méthyle, c'est-à-dire que Rp. soit un groupe (CH^)^-Si-. 20 En ce qui concerne le produit de réduction du groupe carbonyle de formule X (schéma B), lorsque le procédé utilisé pour isoler ce produit n'élimine aucun des groupes -Si-(A)^ qui peuvent être présents, on procède comme décrit ci-dessus pour l'élimination desdits groupes des produits de formule VII 25 (schéma A, VII —* VIII). De même, lorsque G de la formule X est ✓'A /\ H OCOCH^ ou H \)C0CH^, le groupe acétyle est éliminé par alcoolyse, également comme décrit ci-dessus pour changer le groupe acétoxy de l'atome C-15 en groupe hydroxy. Ces réactions sont illustrées sur le schéma B, à savoir le passage de X à XI. 30 Lorsque R^ de la formule XI est un groupe méthyle, et que l'on désire le composé dans lequel R^ est un atome d'hydrogène, l'ester méthylique est saponifié par des procédés connus en pratique. Voir par exemple Just et Collaborateurs, "J. Am. Chem. Soc." 91, 5371 (1969). Cette saponification trans-35 forme également un C-15-acétate en C-15-hydroxy. 71 32825 29 2106464 Les composés répondant à la formule XI comprennent les composés PŒF2a» et leurs esters méthyliques, tous ces composés étant connus. La formule XVI désigne également les composés 15P-Hx]?2a» ^P-PGï^p esters méthyliques. 5 Lorsque l'un de ces composés de formule XI a la confi guration R ou épi, en ce qui concerne le groupe hydroxy en C-15, et que l'on désire le composé correspondant de configura^ tion S sur l'atome C-15, ou bien lorsque l'un de ces composés de formule XI a la configuration S en ce qui concerne le groupe 10 hydroxy sur l'atome C-15 et que le composé correspondant à configuration R ou épi sur l'atome C-15 est désiré, ces composés désirés sont obtenus au moyen des procédés du schéma C. Sur le schéma C, R^, R^, R^, B et le signe r\J ont les définitions données ci-dessus. 15 Le procédé général conforme au schéma C consiste à partir d'un isomère C-15 particulier d'un composé répondant à la formule XI, c'est-à-dire l'isomère 15(S) ou 15(E)• Le composé C-15-hydroxy de cet isomère est oxydé en un carbonyle cétonique (XII). Ensuite, après une silylation éventuelle des groupes hydroxy 20 en C-9 et C-11 (XIII), le groupe carbonyle de l'atome C-15 est réduit en retour à un groupe hydroxy secondaire. Cette réduction produit deux isomères C-15-hydroxy, l'un à configuration S et l'autre à configuration R ou épi. Après élimination de tous les groupes silyle, les isomères XIV et XV sont séparés. L'un 25 des isomères est le môme composé que celui que l'on utilise comme matière première (XI). L'autre isomère constitue le produit désiré. L'isomère utilisé comme matière première est recyclé pour produire une plus grande quantité de l'isomère désiré. Ce schéma réactionnel 30 a déjà été utilisé pour transformer en 150-PG-F^. Voir Pike et Collaborateurs, "J. Org. Chem." 34, 3552 (1969). 71 32825 30 2 l-UOHQ** SCHEMA C (réduction) (hydrolyse) COORi H' uH H" XI XII XIII XIV 71 32825 31 2106464 En se reportant au schéma C, on mentionne qu'on peut utiliser tout agent oxydant capable d'oxyder urj&lcool allylique en une cétone ou un aldéhyde à insaturation a, {3. Des exemples de ces agents oxydants comprennent la 2,3-dichloro-5,6-dicyano-5 1,4-benzoquinone, le dioxyde de manganèse activé ou le peroxyde de nickel (voir Pieser et Collaborateurs, "Reagents for Organic Synthesee", John Wiley & Sons, Inc., New York, N.Y., 1967, pages 215, 637 et 731). A titre de variant^ ces oxydations sont effectuées par oxygénation en présence de/déshydrogénase de 15-10 hydroxyprostaglandine du poumon de porc (voir "Arkiv fffr Kemi" 25, 293 (1966)). Ces réactifs sont utilisés conformément aux procédés connus en pratique. Voir par exemple "J. Biol. Chem." 239, 4097 (1964). En ce qui concerne la transformation de XVII en XVIII 15 sur le schéma C, ces silylations sont effectuées comme décrit ci-dessus pour la silylation selon les schémas A et B. La réduction du groupe carbonyle de XIII à XIV est effectuée comme décrit ci-dessus pour la transformation des composés de formule IX du type PGE en composés de formule X du type PFG. 20 Comme pour ces réductions, on préfère utiliser comme agents réducteurs les borohydrures de sodium, potassium et zinc, notamment le borohydrure de zinc. Lorsque le procédé utilisé pour isoler le produit de réduction du groupe carbonyle n'élimine aucun des groupes 25 -Si-(A)^ qui peuvent être présents, on effectue cette élimination comme décrit ci-dessus pour éliminer les groupes -Si-(A)^ des produits de formule.VII (schéma A, VII —4 VIII). Les produits de formules XIV et XV sont séparés l'un de l'autre par des procédés connus en pratique, par exemple par 30 chromatographie sur gel de silice. Voir, par exemple Pike et Colloborateurs, "J. Org. Chem." 34, 3552 (1969) pour ce type de séparation. Si l'un des isomères ou mélanges d'isomères de formule XIV ou XV n'est pas désiré,pour un usage pharmacologique, sous 35 sa forme propre ou après transformation en esters ou sels acceptables du point de vue pharmacologique, comme décrit ci-dessus, cet isomère ou ce mélange d'isomères est recyclé comme/première & 71 32825 32 J. « V.- , W de formule XI dans les procédés du schéma C pour produire une quantité supplémentaire de l'isomère désiré. Le schéma D représente une variante de l'obtention du composéPGF , en partant de l'ester méthylique de l'acétate 5 de 15P-KtA2, c'est-à-dire le composé le plus abondant renfermé par Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. Le schéma E représente vin moyen d'obtenir le composé PGE2, en partant de PGA2, que l'on extrait aisément, comme décrit ci-dessus, de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. 10 Toutes les réactions des schémas D et E et tous les corps réactionnels permettant de conduire ces réactions sont décrits en général et en particulier dans ce qui précède, et tous sont illustrés ci-après dans les exemples de préparation. De plus amples détails de l'invention sont donnés dans 15 les exemples de préparation et les exemples pratiques suivants: Toutes les températures y sont indiquées/en degrés centigrade s. Les spectres ultraviolets ont été enregistrés sur un spectrophotomètre Cary, modèle 15. 20 On commence à recueillir les fractions d'éluat chromato- graphique lorsque le front de l'éluant atteint la base de la colonne. Le terme "saumure" utilisé dans le présent mémoire désigne une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium. 25 Le système de solvant A-IX utilisé dans la chromatographie en couche mince est préparé à partir d'acétate éthylique, d'acide acétique, de 2,2,4-triméthylpentane et d'eau (90:20:50:100) conformément à M. Hamberg et B. Samuelsson, "J. Biol.Chem ." 241 ,- 257 (1966). 32825 33 2106464 SCHEMA. D Esters méthyliques de Ester méthylique d'acétate de I5P-PGA2 ^ (oxydation) Ester méthylique d'acétate de IÇP-PGAg» 10,11-époxydes a et (réduction) 5-acétate de 15P-PGE2 et 11p,15P-PGE2 ^ (séparation) Ester méthylique de 15-acétate de 150-PGE2 ^ (silylation) Ester méthylique de 15-acétate d'éther 11-Si-(A)j de I5P-PGEE2 (réduction, hydrolyse) Estergéiéthy 1 iques de 15-acétate de 15p-PŒI?2a 15P-PG-E2p ^ (séparation) Ester méthylique de 15acétate de 15f3-PGr]?2a ^ (saponification) 15P-PGP2a ^ (oxydation) 15-oxo-PGï12a ^ (silylation) Ether 9,11-di~Si-(A)5 de 15-oxo-PGF2a ^ (réduction, hydrolyse) 15P-PGP2a et PGF2a (séparation) 15P-PGE2a ~ PGE, 2a 71 32825 34 £. i SCHEMA. E ÏGA, (silylation) Ether 15-Si-U)^ de PGA2 (oxydation) Y 10,11-époxydes a et P d'éther 15-Si-(A)^ de PGA2 (réduction, hydrolyse) V PGE2 et 11P-PGE2 (séparation) V PG-E, 71 32825 35 2106464 Préparation 1 Pour distinguer la forme R de Plexaura homomalla (Esper), 1792 de la forme S de ce même invertébré, on utilise une méthode de chromatographie en couche mince. On recueille un échantillon 5 d'environ 2 cm de longueur que l'on place dans une petite fiole, avec, éventuellement, une petite quantité d'eau pour assurer son maintien à l'état humide, et on le maintient enfermé pendant 6 à 24 heures. On ajoute ensuite environ 1 ml de méthanol et on agite 1'échantillon par secousses pendant deux heures à 25°C 10 environ, ou bien on le conserv^endant 16 à 24 heures à environ 10°C. Une goutte d'un échantillon du liquide (10-21 X ) est déposée sur une plaque de chromatographie en couche mince. On préfère utiliser une plaque de gel de silice rendue fluorescente par un traitement approprié, par exemple une plaque "Uniplate 15 Silica Gel GF" (Analtech, Inc., Nevark, Del.). Comme étalons de référence, on applique également des gouttes de PGA^ et 150-PGA2« On développe la plaque dan^système A-IX. Finalement, on fait apparaître les taches par pulvérisation d'un mélange de vanilline et d'acide phosphorique (McAleer,"Arch. Biochem. E. 20 Biophys." 66, 120 (1957)). On effectue ensuite une comparaison de la tache inconnue avec les deux taches de référence et on établit l'identité du corail (forme S correspondant à PGA£, forme R correspondant à ^P-PGA^). Préparation 2 25 PGA2 et 5,ô-trans-PGA^. On sépare le composé PGA2 du composé 5,6-trans-PGA2 sur une colonne chromatographique, en utilisant une résine d'échange ionique saturée d'argent. On utilise, de préférence, une résine d'échange ionique macroréticulaire, par exemple un copolymère 30 de styrène sulfoné et de divinylbenzène ayant une surface spé-cifique de 40 à 50 m /g, une porosité de 30 à 40 % et une capacité totale d'échange de 4,5 à 5,0 milliéquivalents. par gramme de résine sèche, par exemple la résine "Amberlyst 15",produite par la firme Rohm and Haas Co., Philadelphie, Pa. la résine sous 35 la forme acide est introduite dans une colonne, lavée à l'eau chaude et amenée à la forme argent par passage d'une solution à 10 % de nitrate d'argent sur la colonne jusqu'à ce que le courant 71 32825 36 2 1 U O 4 0 sortant ait un pH de 3,5 à 4,0. La colonne est ensuite lavée avec de l'eau pour éliminer les ions argent, et finalement avec de l'éthanoljdénaturé (Type 3A). On charge sur la colonne une solution ' d'un mélange de PGA2 et 5,ô-trans-PGA^, par exemple les fractions 5 15-18 de l'exemple 7 donné plus loin. L'élution avec de l'alcool 3A donne ensuite des fractions que l'on rassemble selon leur teneur en 5, ô-trans-PGAg (moins polaire ) ou PGA^ La recherche de 5,ô-trans-PGAg ou de PGAg dans l'éluat est effectuée avantageusement par chromatographie en couche mince en utilisant des 10 plaques de gel de silice traité au nitrate d'argent (par exemple des plaques "Analtech Uniplates" plongées dans une solution étha-nolique saturée de nitrate d'argent puis séchées) en effectuant le développement avec un système A-IX. La valeur R^ de PGA^ est de 0,45; la valeur R^ de 5,6-trans-PGA2&st de 0,50. Les fractions 15 rassemblées sont concentrées, réparties entre du dichlorométhane et un peu d'eau, séchées sur du sulfate de sodium et concentrées sous pression réduite pour donner les composés indiqués dans le titre de cet exemple. Pour le dosage quantitatif de la teneur en 5,6-trans-20 PGA^ de mélanges de PGA2 et 5,ô-trans-PŒ^, on utilise une combinaison d'une chromatographie en couche mince et d'tm titrage spectrophotométrique. On imprègne de nitrate d'argent des feuilles de fibres microscopiques de verre imprégnées de gel de silice (par exemple les feuilles ITLC de la firme Gelman Instrument Co., 25 Ann Arbor, Michigan), en utilisant une solution à 5 % de nitrate d'argent dans l'éthanol, puis on fait sécher ces feuilles. On applique des gouttes de 100 à 200 ng du mélange de PGA2 et on les développe dans le système de solvant composé de 2,2,4-triméthylpentane, acétate éthylique, acide acétique et eau 30 (100:35:8:10, phase supérieure). On fait sécher la feuille et on la traite par pulvérisation aveo de la "Hhôdamine 6(x"(Applied Science Co., State College, Pa.) et on l'examine en lumière ultraviolette. Les zones portant les composés cis et trans (Rf de P&&2 =0,6 } Rf de 5,ô-trans-PGA^ = 0,7) soni/délimitées, 35 puis découpées et éluées avec du méthanol (1,9 ml) et une solution d'hydroxyde de potassium (0,1 ml de solution à 45 #). Après incubation à 40°C pendant 30 minutes, les solutions respectives 71 3282S 37 2106464 sont centrifugées et analysées par spectrophotométrie à 278 nm. En suivant le mode opératoire de la préparation 2, on sépare le composé 5,6-trans-15P-PGA2 du composé 15P-PGA2. Préparation 5 5 Ester méthylique de 15-acétate de PGA2 et sa séparation de l'ester méthylique de 15-acétate de 5,ô-trans-PGAg. On dissout un mélange d'ester méthylique de 15-acétate de Pkâ^ et d'ester méthylique de 15-acétate de 5,6-trans-PGA2 (11,0 g, 85:15) dans 415 ml d'une solution de méthanol, eau 10 et acide acétique (95-5-0,4) et d'acétate mercurique (6,1 g), et on laisse reposer la solution à environ 25°C pendant 30 minutes. On ajoute 250 ml d'eau et on extrait le mélange deux fois avec 700 ml de "Skellysolve B". On lave la phase de "Skellysolve B" avec 1 OCtal de méthanol à 60 %, on la sèche sur du 15 sulfate de sodium et on la concentre pour obtenir 4,35 g d'une huile à forte teneur en ester méthylique de 15-acétate de 5,6-trans-PG-A^p. On acidifie la phase méthanolique aqueuse avec 32 ml d'acide chlorhydrique 6N et on extrait le mélange avec deux portions de 700 ml de "Skellysolve B". On sèche la phase organique sur du 20 sulfate de sodium et on la concentre pour obtenir 5,53 g d'une huile. On soumet à nouveau cette dernière substance aux mômes opérations en utilisant 350 ml du mélange méthanol-eau-acide acétique et 4,6 g d'acétate mercurique. Par traitement de la phase méthanolique aqueuse, on isole une fraction de 3,92 g du composé 25 indiqué dans le titre, ne contenant qu'un faible pourcentage du composé 5,6-trans-PGA. En suivant le mode opératoire de la préparation 3, on sépare l'ester méthylique de 15-acétate de 5,6-trans-1SP-PGA^ de l'ester méthylique de 15-acétate de 15P-PGA2. 30 Préparation 4 Ester méthylique de 15P-PGA2 » On ajoute une solution aqueuse d'acide perchlorique à 70 $ (50 gouttes) dans 50 gouttes d'eau, à une solution d'ester méthylique d'acétate de I5P-PGA2 (exemple 3 ci-dessous, 2,0 g) 35 dans 100 ml de méthanol. On agite le mélange pendant 15 heures à 25°C puis on le dilue avec 80 ml d'eau. On chasse le méthanol sous pression réduite et on extrait le résidu aqueux avec de 71 32825 38 2. i l'acétate éthylique. On lave l'extrait successivement avec de l'eau et une saumure, on le déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on l'évaporé. On chromatographie le résidu sur 200 g de gel de silice, on procède à l'élutlon avec 2,5 litres d'un 5 gradient de 20-70 d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B" (mélange d'hexanes isomères) et on recueille des fractions de 100 ml. On rassemble les fractions 15 à 19 et on les évapore pour obtenir 727 mg d'ester méthylique de ISP-PGAg. Préparation 5 10 Ester méthylique de P&A^. On refroidit à 0°C dans une atmosphère d'azote une solution d'ester méthylique de ISfS-PG-A^ (préparation 4» 250 mg) dans 20 ml de tétrahydrofuranne anhydre. On ajoute 1,5 mi de tributyl-amine et on agite le mélange à 0°C tout en ajoutant goutte à 15 goutte un millilitre de chlorure de méthane suif onyle. On agite le mélange pendant 30 minutes à 0°C. Ensuite, on ajoute 10 ml d'eau et on laisse le mélange se réchauffer à 25°C, puis on agite pendant une heure. On évapore le tétrahydrofuranne sous pression réduite et on extrait le résidu aqueux avec de l'a-20 cétate éthylique. On lave l'extrait successivement avec de l'acide chlorhydrique 1N , de l'eau et une saumure, on le déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on l'évaporé. On chromatographie le résidu sur 30 g de gel de silice en l'éluant avec 800 ml d'un gradient de 20-70 % d'acétate éthylique dans le 25 "Skellysolve B", en recueillant des fractions de 25 ml. On rassemble les fractions 14-16 et on les évapore pour obtenir 58 mg d'ester méthylique de PG^. On rassemble les fractions 12 et 13 pour obtenir 49 mg de la matière première, à savoir l'ester méthylique de ISP-PG-Ag. 30 En suivant le mode opératoire de la préparation 5, on transforme l'ester méthylique de PG^ en un mélange d'esters méthyliques de PGA2 et ISP-PG-A^, les deux composés étant séparés comme dans la préparation 5* Préparation 6 * 35 Ester méthylique d'acétate de 10,11-époxyde de IÇP-PG^» On ajoute 350 ml d'une solution aqueuse à 30 % de peroxyde d'hydrogène, tout en agitant, à une solution d'ester méthylique 71 32825 2106464 d'acétate de 1 5P-PGA. (exemple 3 ci-dessous, 265 g) dans 5000 ml d de méthanol sous atmosphère d'azote à -20°C. Ensuite, on ajoute progressivement une solution aqueuse d1 hydroxyde de -ctas iun 1 !■' (50 ml) en une heure sous agitation, à -20°C. On agite le mélange 5 pendant encore deux heures à -20°C. Ensuite, on ajoute 80 ml d'acide chlorhydrique 1N et on chasse le méthanol sous pression réduite à 55°C. On dissout le résidu dans 500C ml d'acétate d'éthyle et on lave la solution trois fois avec des portions de 500 ml d'eau. Après avoir rassemblé les eaux de lavage, on 10 les extrait avec 300 ml d'acétate d'éthyle. On rassemble les deux solutions d'acétate éthylique, on les lave avec une saumure, on les déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on les évapore pour obtenir 2,75 g d'un mélange des 10,11-époxydes a et Me l'ester méthylique de l'acétate de 150-PGA2. 15 Préparation 7 Ester méthylique de 15-acétate de 15P-PGE2 et ester méthylique de 15-acétate de 11p,15P-PGE2. On ajoute de l'aluminium métallique granulaire (50 g) à une solution de chlorure mercurique (50 g) dans deux litres 20 d'eau. On brasse le mélange jusqu'à ce que le dégagement d'hydrogène gazeux devienne vioient (environ 30 secondes). Ensuite, on verse par décantation la plus grande partie de la solution aqueuse et on sépare le reste par filtration rapide. L'aluminium amalgamé est lavé rapidement et successivement avec deux portions 25 de 200 ml de méthanol et deux portions de 200 ml d'éther diéthy-lique an/iydre. L'aluminium amalgamé est ensuite récouvert d'éther diéthylique anhydre, jusqu'à son utilisation. Oi, ajoute 250 ml de méthanol et 25 ml d'eau à une solution d'un mélange des 10,11-époxydes a et (3 de l'ester méthylique 30 d'acétate de 15S-PGA2 (préparation 6, 275 g)t dans 2500 ml d'éther diéthylique. On refroidit le mélange à -10°C et on ajoute l'aluminium amalgamé préparé comme indiqué ci-dessus à partir de 50 g d'aluminium métallique. On agite le mélange et on le maintient à environ 25°C, avec refroidissement extérieur. Au bout d'une 35 heure, on ajoute l'aluminium amalgamé préparé comme ci-dessus à partir de 50 g d'aluminium métallique. Après avoir agité pendant 71 3282S 210O464 4U encore une heure à 25ÛC, on ajoute de 1'aluminium amalgamé préparé comme ci-dessus à partir de 50 g d'aluminium métallique, ainsi que 25 ml d'eau. Au bout d'encore une heure d'agitation à 25°C, on ajoute 100 g de sulfate de magnésium comme auxiliaire de fil-5 tration, et on filtre le mélange. Le résidu de filtration est lavé à fond avec du dichlorométhane,et le filtrat et les eaux de lavage rassemblés sont évaporés à 25°C sous pression réduite pour donner un mélange de 247 g d'ester méthylique de 15-acétate de 15P-PGE2 et d'ester méthylique de 15-acétate de 11 j3,15P-PGE2• 10 Une partie de ce mélange (210 g) est chromâtographié sur une colonne garnie de 30 kg de gel de silice à l'état humide avec 60 1 d'acétate éthylique à 25 % dans le" SkellyEolveB" (diamètre de la colonne 15,24 cm), on élue successivement avec des portions de 60 litres d'acétate éthylique à 25 "7°, 30 fo, 35 15 40 a/o, 45 50 55 f- et 60 % dans le "Skellysolve B", et on recueille des fractions de 4 litres. On rassemble les fractions 71 à 76 et on les évapore pour obtenir 27 g d'ester méthylique de 15-acétate de 11p,15P-PGE2. On rassemble les fractions 81 à 98 et on les évapore pour obtenir 115g d'ester méthylique de 20 15-acétate de 15P-P&E2. Préparation 8 Ester méthylique de 15-acétate de l'éther 11-Si-(CH^)^ de 15P-PGE2. On ajoute 100 g d'hexaméthyldisilazane puis 20 g de 25 triméthylchlorosilane à une solution d'ester méthylique de 15-acétate de 15P-PGE2 (préparation 7) dans 400 ml de tétrahydrofuranne en agitant énergiquement à 25°C sous atmosphère d'azote. On maintient le mélange réactionnel dans la gamme de 20 à'25°C par refroidissement extérieur, et on l'agite pendant 30 deux heures sous atmosphère d'azote. Ensuite, on évapore le mélange à 50°C sous pression réduite. On mélange le résidu avec 150 ml de toluène et on filtre le mélange sur un tampon de terre de diatomées. On évapore le filtrat à 50°C sous pression réduite. On mélange le résidu avec 150 ml de toluène et on chasse 35 de nouveau le toluène sous pression réduite à 50°C pour obtenir 75 g d'ester méthylique de 15-acétate d'éther 11-Si-(CH^)^ de 15P-PGE2. 71 32825 41 2106464 En suivant le mode opératoire de la préparation 8, on transforme l'ester méthylique de15-aoétate de 110,15P-PGE2 en éther 11-Hi-(CH^)^ correspondant. De môme, en suivant le mode opératoire de la préparation 5 8, mais en utilisant de plus grandes quantités d'hexaméthyldisilazane et de triméthylchlorosilane, on transforme l'ester méthylique de 150-PGE2, le composé 150-PGE2, l'ester méthylique de 110,1 5P-*HtE2 et le composé 11 0,150-PGE2 en éthers 11,15-di-Si-(CH^)^ correspondants. 10 Préparation 9 Ester méthylique de 15-acétate de 150-PGï^ et ester méthylique de 15-acétate de 150-PGrP2^. On ajoute 1,42 g de borohydrure de sodium, en une seule portion, à une solution d'ester méthylique de 15-acétate d'éther 15 11-Si-(0H^)^ de 150-PGE2 (préparation 8, 30,7 g) dans 500 ml d'éthanol absolu à 0°C, sous agitation. On agite le mélange à 0°C pendant 3,5 heures. Ensuite, on ajoute lentement 10 ml d'acide acétique cristallisable, en agitant à 0°C. On ajoute ensuite 100 ml d'eau, et on laisse le mélange se réchauffer à 25°C sous 20 agitation, et on l'agite pendant 15 heures à 25°C. On chasse l'éthanol par évaporation sous pression réduite et on mélange le résidu avec 400 ml de saumure. On extrait le mélange avec trois portions d'acétate éthylique (400 ml, 250 ml et 150 ml). Les extraits rassemblés sont lavés successivement avec deux 25 portions de 100 ml d'eau, 100 ml de solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, deux portions de 100 ml de saumure, puis ils sont déshydratés sur du sulfate anhydre de sodium et évaporés sous pression réduite pour donner 24,5 g d'un mélange d'ester méthylique de 15-acétate de 1 50-PGï12a ^,es^er 30 méthylique de 15-acétate de 150-Krî?2p. Préparation 10 150-PGF2a et 1 50-PGï>2j3* On ajoute une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium (10 % ; 275 ml) à une solution de 48 g d'un mélange d'ester 35 méthylique de 15-acétate de 150-PGF2a et d'ester méthylique de 15-acétate de 150-PGî,2p (préparation 9) dans 350 ml de méthanol à 0°C en agitant sous atmosphère d'azote. On laisse le mélange 71 32825 42 2106464 se réchauffer à 25°C sous agitation, et on agite pendant trois heures à 25°0. Ensuite, on chasse le méthanol par évaporation sous pression réduite à 35°C. Le résidu aqueux est refroidi et extrait une fois avec un mélange d'éther diéthylique et de di-5 chlorométhane (1:1). Ensuite, le résidu aqueux est acidifié avec 260 ml d'acide chlorhydrique 3N, saturé avec du chlorure de sodium et extrait avec trois portions d'acétate éthylique (400 ml, 250 ml et 150 ml). Les extraits rassemblés sont lavés successivement avec deux portions de 100 ml d'eau et deux portions de 10 100 ml de saumure, déshydratés, sur du sulfate anhydre de sodium et évaporés pour donner 42 g d'un mélange de 15P-PŒF2a et ISP-PGFgp. Préparation 11 15-oxo-PGrP2a et 15-oxo-PG]?2p. 15 Le mélange de 15P-PGF2a et 15p-PGF2p (42 g), obtenu comme dans la préparation 10,est dissous dans 950 ml de dioxanne. On ajoute à cette solution, à 25°C, 40 g de 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone. On agite ce mélange pendant 18 heures à 50°C sous atmosphère d'azote. Le mélange est ensuite refroidi 20 à 25°C et filtré. Le résidu de filtration est lavé avec du dichlorométhane,et le filtrat et la liqueur de lavage combinés sont évaporés sous pression réduite à 45 °C pour donner un mélange de 66 g de 1 5-oxo-PŒF2q. et 15-oxo-PGF2p. Une partie de ce mélange (33 g) est chromatographiéejfeur 25 . 3 kg de gel de silice lavé à l'acide, puis on procède à l'élution, successivement avec 10 litres à 60 $, 10 litres à 70 #, 10 litres à 80 % et 20 litres à 90 % d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B", 15 litres d'acétate éthylique et 10 litres de méthanol à 5 f<> dans l'acétate éthylique et on recueille des fractions 30 de 650 ml. On rassemble les fractions 42 à 53 et on les évapore pour obtenir 8,3 g cLe 15-oxo-PGî'2a. On rassemble les fractions ,64 à 85 et on les évapore pour obtenir 3,3 g de 15-oxo~PŒF2p. Préparation 12 PGF2a et 15P-P®2a. 35 On ajoute 70 ml d'hexaméthyldisilazane et 14 ml de tri méthylchlorosilane en agitant énergiquement, à une solution de 15-oxo-PŒF2a (préparation 11, 3,0 g) dans 350 ml de tétrahydrofuranne à 25°C sous atmosphère d'azote. On agite le mélange pen 71 32825 43 2106464 dant 18 heures à 25°C sous atmosphère d'azote. Ensuite, on évapore le mélange sous pression réduite à 50°C. On ajoute 100 ml de toluène au résidu et on filtre le mélange sur un tampon de terre de diatomées.On évapore le filtrat et on ajoute au résidu 100 ml 5 de toluène. On évapore ce mélange sous pression réduite pour obtenir le 9,11-di-Si-(CH^)^-éther de 15-oxo-PGF2a. Cet éther de disilyle est dissous dans 20 ml de 1,2-diméthoxyéthane. On met en suspension 680 mg de borohydrure de sodium dans 65 ml de 1,2-diméthoxyéthane à 0°C sous atmosphère 10 d'azote. On ajoute 1,23 g de chlorure de zinc anhydre à cette suspension et on agite le mélange pendant 30 minutes à 0°C. Ensuite,on ajoute goutte à goutte la solution de 1'éther disi-lylique en 10 minutes, sous agitation à 0°C. On laisse le mélange résultant se réchauffer à 25°C soua agitation, et on l'agite 15 pendant 4 heures à 25°C. Ensuite, on ajoute 30 ml d'eau, puis 8 ml d'acide acétique cristallisable. On agite ce mélange pendant 15 heures à 25°C. On le verse ensuite dans un mélange de glace et de 100 ml d'acide chlorhydrique 0,5N. On sature ce mélange de chlorure de sodium puis on l'extrait avec plusieurs 20 portions d'acétate éthylique. Les extraits rassemblés sont lavés avec une saumure, déshydratés sur du sulfate anhydre de sodium et évaporés sous pression réduite. Le résidu (3,2 g) est chro-matographié sur 600 g de gel de silice lavé à l'acide, puis on procède à l'élution, successivement avec 5 litres d'acétate 25 éthylique à 75 % dans le "Skellysolve B", 5 litres d'acétate éthylique à 90 $ dans le "Skellysolve B" et 5 litres d'un gradient de 90 i<> d'acétate éthylique et de 10 $ de méthanol dans l'écétate éthylique, et on recueille des fractions de 550 ml. On rassemble les fractions 21 à 26 et on les évapore pour obtenir 30 543 mg de 15P-PGF2a. On rassemble les fractions 28-36 et on les évapore pour obtenir 1,62 g de PGï^a * Préparation 15 15-oxo-PG-F„ D. C. p En suivant le mode opératoire de la préparation 11, on 35 oxyde le composé 150-PGF2p en coniPos® 15-oxo-PGF2p. Préparation 14 PGF2p et 15P-PGF2p. En suivant le mode opératoire de la préparation 12, on 71 32825 ^ 2 10o4o4 silyle le composé 1 ^oxo-PG-^p puis on le réduit en un mélange de PŒP2p et 150-PG-F2p que l'on sépare comme décrit pour les composés alpha dans la préparation 12. Préparation 15 5 PGE2 et 11 {3-PGE2. On ajoute 1 ml d'hexaméthyldisilazane et 0,2 ml de tri-méthylchlorosilane sous agitation à une solution de 250 mg de PG-A2 dans 4 ml de tétrahydrofuranne à 0°0 sous atmosphère d'azote. On maintient ce mélange à 5°C pendant 15 heures. On évapore en-10 suite le mélange sous pression réduite. On ajoute du toluène et on l'évaporé deux fois. Ensuite, on dissout le résidu dans 6 ml de méthanol et on refroidit la solution à -20°C. On ajoute 0,45 ml de solution aqueuse à 30 fo de peroxyde d'hydrogène. Ensuite, on ajoute goutte à goutte 0,9 ml d'une solution d'hydroxyde de 15 sodium 1N, en agitant à -20°C. Au bout de deux heures à -20°C, on ajoute un volume supplémentaire de 0,3 ml de la solution d'hydroxyde de sodium, sous agitation à -20°C. Après encore une heure, dans la gamme de températures de -10 à -20°C, on ajoute encore 0,1 ml de la solution d'hydroxyde de sodium. On ajoute 20 ensuite 1,5 ml d'acide chlorhydrique 1N et on évapore le mélange sous pression réduite. On extrait le résidu avec de l'acétate éthylique et on lave l'extrait successivement avec de l'acide chlorhydrique 1N et de la saumure, on le déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on l'évaporé. On dissout le résidu 25 dans 5 ml d'éther diéthylique. On ajoute à cette solution 0,5 ml de méthanol et 0,1 ml d'eau. Ensuite, on ajoute de l'aluminium amalgamé préparé à partir de 0,5 g d'aluminium métallique, comme décrit dans la préparation 7,par petites portions pendant trois heures à 25°C. Ensuite, on ajoute de l'acétate éthylique 30 et de l'acide chlorhydrique 3N et on sépare la phase d'acétate éthylique, puis on la lave successivement avec de l'acide chlorhydrique 1N et de la saumure, on la déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on l'évaporé. On chromatographie le résidu sur 50 g de gel de silice lavé à l'acide, en éluant d'abord avec 35 400 ml d'un gradient de 50-100 $ d'acétate d'éthyle dans le "Skellysolve B" puis avec 100 ml de méthanol à 5 f° dans l'acétate d'éthyle, en recueillant des fractions de 25 ml. On rassemble les / 71 32825 45 2106464 fractions 9 et 10 et on les évapore pour obtenir 18 mg de 11P-PGE2. On rassemble les fractions 17-25 et on les évapore pour obtenir 39 mg de PG-E^. Préparation 16 5 pge2. On renvoie à ce propos au schéma C. a) Silylation. On agite sous atmosphère d'azote pendant deux heures à environ 25°C,un mélange d'environ 0,68 g de PGA2, 4 ml de tétrahydrofuranne (THF) et 1 ml de solution de tri- 10 méthylchlorosilane (5 1» dans l'hexaméthyldisilazane). Ensuite, la matière silylée est concentrée par élimination du tétrahy- utilisant une drofuranne sous pression réduite en/addition de 10 ml de benzène pour faciliter l'élimination du tétrahydrofuranne. b) Oxydation. On mélange une solution froide (-40°C) 15 de la matière silylée indiquée ci-dessus dans 15 ml d'alcool isopropylique avec 1,2 ml de peroxyde d'hydrogène en solution aqueuse à 50 puis on ajoute goutte à gouttai,5 ml d*hydroxyde de lithium en solution aqueuse 3N. On laisse la température monter à -30°C. On poursuit la réaction jusqu'à ce que le composé PGA2 20 ait été épuisé comme indiqué par l'absence de HïA,, dans un essai de chromatographie en couche mince portant sur une goutte, en utilisant le système A-IX (Hamberg and Samuelsson, "J. Biol. Chem." 241. 257 (1966). A moins 30°C, la durée de la réaction est d'environ 3 à 4 heures. Lorsque la réaction est terminée, 25 on ajoute 5 ml d'acide chlorhydrique 1N et on concentre le mélange sous pression réduite. On extrait le résidu avec de l'acétate tuis vee de la saumure, on le déshydrate sur du sulfate anhydre de sodium et on le concentre pour former 1'époxyde. 30 c) Réduction et hydrolyse. On agite une solution de l'é- poxyde indiqué ci-dessus dans 20 ml de THE" et 2 ml de méthanol, avec 4 ml d'une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et on refroidit le mélange à 15°C. On ajoute à ce mélange, par portions sous agitation énergique, un amalgame d'aluminium préparé 35 à partir d'un gramme d'aluminium en poudre (préparation 7). Après agitation à environ 25°C pendant 45 minutes, on analyse un échantillon par chromâtographie en couche mince pour pouvoir doser 71 3282b 2105404 PŒB^ et 1'époxyde. On poursuit la réaction si cela est nécessaire. Lorsqu'il n'y a plus d^égoxyde, on verse par décantation la suspension surnageante/la séparer de l'aluminium qu'on lave ensuite avec de l'acétate u'éthyle. Après avoir rassemblé 5 le produit décanté et les liqueurs de lavage, on les concentre sous pression réduite. On reprend le résidu dans environ 15 à 20 ml d'acétate éthylique et on agite par secousses avec 20 ml d'acide chlorhydrique 1N. On sépare les phases, on lave lq&hase organique avec de l'acide chlorhydrique 0,5 N puis de la saumure, 10 on la déshydrate et on la concentre pour obtenir un résidu huileux pesant 0,837 g. d) Séparation. On applique une solution du résidu indiqué ci-dessus dans une petite quantité d'acétate éthylique à 20 % dans le "Skellysolve B" (hexanes isomères) à une colonne chromato-15 graphique de 65 g de silice lavée à l'acide, par exemple de "Mallinckrodt Silicar CC-4". On obtient des fractions par élution avec un gradient de 20-100 % d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B". Les fractions qui contiennent le composé désiré, comme indiqué par chromatographie en couche mince, sont rassemblées et 20 concentrées. On obtient dans des fractions séparées 0,5 g de PGEg et 0,05 g de 11P-PSE2. A titre de variante, le produit huileux provenant de c) ci-dessus est trituré dans un mélange d'acétate éthylique et de cyclohexane (1:1) refroidi à environ 10°C et ensemencé 25 pour donner des cristaux de PGE2 en quantité d'environ 0,4 g. La liqueur-mère est soumise à une chromatographie sur gel de silice pour donner des fractions séparées d'environ 0,1 g de PGE2 et 0,05 g de 11p-PŒB2. Exemple 1 30 PGA2t ester méthylique de PGA^ et ester méthylique d'acétate de PGAg extraits de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. On broie en morceaux de plusieurs centimètres de longueur et on congèle des colonies de Plexaura homomalla (Esper 1792, forme S, recueillies sur des récifs au large de la côte 35 septentrionale de la Jamaïque. Les morceaux (500 g) sont ensuite recouverts de méthanol et le mélange est maintenu pendant trois heures à 25°C. Le mélange est ensuite broyé dans un mélangeur 71 3282S 47 2106464 Waring et filtré, et le filtrat est évaporé sous pression réduite. Le résidu est dissous dans de l'acétate éthylique et la solution est lavée successivement avec de l'acide chlorhydrique 1N, de l'eau et une solution aqueuse saturée de 5 chlorure de sodium, déshydratée sur du sulfate anhydre de sodium et évaporée sous pression réduite. Le résidu huileux est chro-matographié sur deux kilogrammes de gel de silice lavé à l'acide, mis en place à l'état humide avec du "Skellysolve B" (mélange d'hexanes isomères), l'élution étant effectuée avec 24 litres 10 d'un gradient de 25-100 fi d'acétate d'éthyle dans le "Skellysolve B". Les fractions qui contiennent l'ester méthylique d'acétate de PGA^ l'ester méthylique de PGA2, et PGA2, comme indiqué par chromatographie en couche mince avec le système A-IX, sont rassemblées séparément et évaporées en donnant les 15 trois composés indiqués, dans la proportion respective de 60:20:20. Exemple 2 Composés de ^P-PGAg extraits de Plexaura homomalla (Esper), 1792, foime R. 20 En suivant les modes opératoires de l'exemple 1, mais en remplaçant Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S par Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, prélevé sur des récifs au large de la côte Sud-Est de la Floride, près de Miami, on obtient l'ester méthylique d'acétate de 15|3-PGA2, 25 l'acétate de 15P-PGA2 , l'ester méthylique de 15P-PGA2 et le composé 15P-PGA2. De même, en suivant les modes opératoires des exemples 1 et 2, mais en remplaçant le méthanol par l'acétone, on obtient les composés de PGA2 et ISP-PGA^ correspondants. 30 Exemple 3 Composés de 15P-PGA2 extraits de Plexaura homomalla (Esper), - 1792, forme R. Des colonies de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, recueillies soir des récifs au large de la côte Sud-Est de la 35 Floride, près de Miami, sont broyées en morceaux de plusieurs centimètres de longueur. Les morceaux sont congelés par contact avec de l'anhydride carbonique solide moins d'une heure après 71 32825 48 210 b 4 b 4 le prélèvement dans les eaux baignant les récifs. Les morceaux congelés de la colonie sont maintenus dans des boîtes isolées contenant de 11 anhydride carbonique solide (température inférieure à environ -20°C) jusqu'au moment de l'extraction. Ensuite, 5 les morceaux congelés de la colonie sont broyés en petites particules (broyeur Mitts et Merrill} dimension maximale moyenne d'environ 5 mm). Les particules (poids total de 1500 g) sont ensuite agitées à grande vitesse avec environ 19 litres de dichlorométhane pendant 20 minutes à environ 25°C (température 10 extérieure). Le mélange de dichlorométhane et de particules est ensuite filtré sur un tampon de terre de diatomées et le filtrat est évaporé à un volume d'environ 2 litres à 30°C sous pression réduite. Le liquide qui reste est lavé à l'eau, déshydraté sur du sulfate de sodium et évaporé à 30°C sous pression réduite. 15 Le résidu huileux (60 g) est chromatographié sur 3 kg de gel de silice mis en place à l'état humide dans du "Skellysolve B" (mélange d'hexanes isomères), puis on procède à l'é-lution successivement avec un gradient de 4 litres de "Skellysolve B" et 4 litres d'acétate éthylique à 20 fi dans le"Skelly-20 solve B", 27 litres à 20 fi, 18 litres à 50 fi> et 8 litres à 75 fi d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B", et on recueille des fractions de 600 ml. On rassemble les fractions 39-60 et on les évapore pour obtenir 24,3 g d'ester méthylique d'acétate de ISP-PCr^. Entre les fractions 60 et 74, celles dans lesquelles 25 la chromatographie en couche mince montre la présence d'acétate de 15P-PGA2, sont rassemblées et évaporées pour donner ce composé. Les fractions 74-76 sont rassemblées et évaporées en donnant 1,03 g d'ester méthylique de ^P-PG-.^. Les fractions 83-91 sont rassemblées et évaporées en donnant 1,08 g d'ester méthylique de 30 15-acétate de 15p-PGE2. D'autres fractions subséquentes dans lesquelles la chromatographie en couche mince révèle la présence d'ester méthylique de 15P-PGE2 sont rassemblées et évaporées en donnant ce composé. La détection des composés respectifs par chromatographie 35 en couche mince est effectuée par des procédés connus en pratique, par exemple, en déposant des .gouttes des fractions d'extraits sur une plaque de gel de silice en chromatographie en couche mince le long de taches de composés authentiques, en développant 71 32825 49 2106464 la plaque avec le système A-IX et en observant les taches des fractions d'extraits qui correspondent exactement aux taches des composés authentiques. En suivant les modes opératoires de l'exemple 3» mais en 5 substituant Plexaura homomalla (Esper), 1792 forme S à Plexaura homomalla (Esper), 1792 forme R, de cet exemple, on obtient les composés correspondants de configuration 15(3), à savoir l'ester méthylique d'acétate de PGA^, l'acétate de PGA2, l'ester méthylique de PGAg, l'ester méthylique du 15-acétate de PG-E^ et 10 l'ester méthylique de PGE^. Exemple 4 En suivant les modes opératoires de l'exemple 3, mais en remplaçant Plexaura homomalla (Esper), 1792,forme R,par Plexaura homomalla (Esper) 1792 forme S, recueilli dans les 15 récifs au large de la côte septentrionale de la Jamaïque, et en remplaçant le dichlorométhane par du benzène, on obtient d'acétate l'ester méthylique/de PGA2, l'acétate de PGA2, l'ester méthylique de PGAg, l'ester méthylique de 15-acétate de PGE2 et l'ester méthylique de PGE2• 20 Exemple 5 PGA2 extrait de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. Des colonies de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S, prélevées sur des récifs au large de la côte spetentrionale de la Jamaïque, sont broyées en morceaux pesant moins d'environ 25 2 g. La matière broyée, humidifiée~aVêe de -l'eau, est conservée dans des récipients fermés pendant environ 24„heuresà^2G .. de ou jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de composés/14-acétate de PGA^, comme indiqué par analyse chromatographique en couche mince. L'échantillon de chromatographie en couche mince est prélevé 30 dans la phase liquidç&'un mélange d'un petit échantillon représentatif du corail, auquel adhère du liquide, et il est agité ou secoué dans un volume au moins égal d'acétone. On agite ensuite environ 1 kg de Plexaura homomalla broyé, humidifié avec de l'eau, dans tin litre d'acétone pendant environ 35 une heure, puis on filtre. Les matières solides sont encore extraites quatre fois de cette façon avec de l'acétone, et finalement une fois avec du dichlorométhane. Les liqueurs aqueuses 71 32825 50 2106464 acétoniques ae lixiviation sont concentrées sous vide à environ tin dixième de leur volume initial. Pour empêcher la formation d'une mousse, on ajoute un agent anti-mousse, par exemple un polypropylène-glycol tel que le produit "Ucon LB-625" (Union 5 Carbide) à un taux d'environ 1 g par kg de morceaux humides de la colonie. Le concentré est ensuite extrait trois fois avec du dichlorométhane et les produits, rassemblés d'extraction au dichlorométhane sont concentrés à environ tin cinquième de leur volume initial. .10 Le concentré de dichlorométhane est extrait sept fois avec une solution aqueuse d'orthophosphate disodique 0,5 M en utilisant 1,5 fois le volume de la phase organique. Pour empêcher la formation d'émulsions, on ajoute une solution méthanolique à 1 io d'agent anti-mousse, par exemple "Ucon LB-625", en une 15 quantité ne dépassant pas un dixième du volume de la phase aqueuse. Les extraits aqueux rassemblés sont ensuite acidifiés à un pH de 2-3 avec de l'acide chlorhydrique 4 N et extraits au dichlorométhane. Les produits d'extraction au dichlorométhane sont décolorés avec du carbone activé, déshydratés sur du sul-20 fate anhydre de sodium et concentrés sous vide. Le résidu est chromâtographié sur 2 kg de gel de silice lavé à l'acide et mis en place à l'état humide avec du "Skellysolve B", puis on procède à l'élution avec un gradient de 25-100 i* d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B". Les frac-25 tions qui contiennent l'ester méthylique àefPG-A^ et le composé PG-A^, comme l'indique la chromatographie en couche mince avec le système A-IX, sont rassemblées séparément et évaporées pour donner ce s omposé PGA^ étant le produit principal. En suivant les modes opératoires 30 en soumettant les morceaux humides de Plexaura homomalla, forme S, à une opération de congélation avec de l'anhydride carbonique solide après conservation à 25°C pendant 24 heures, on conserve les morceaux solides congelés à une température inférieure à environ -20°C pendant une semaine. Ensuite, on les décongèle, 35 on les agite dans de l'acétone puis on les traite pour obtenir les mêmes produits que ci-dessus. 71 32825 51 2106464 Exemple b 15p-PGAg extrait de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. En suivant les modes opératoires de l'exemple 5, mais en remplaçant Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S de cet 5 exemple par des morceaux broyés d'une colonie de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, on obtient l'ester méthylique de 15P-PGA2 et le composé ^p-PGA^. Ce dernier constitue le produit principal. Exemple 7 10 PGA2 extrait de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. Des colonies de Plexaura homomalla (Esper) , 1792, forme S, recueillies sur des récifs au large de la côte septentrionale de Jamaïque, sont congelées par contact avec de l'anhydride carbonique solide moins d'une heure après le prélèvement dans 15 les eaux du récif. Les colonies congelées sont maintenues dans des boîtes isolées contenant de l'anhydride carbonique solide (température inférieure à environ -20°C) jusqu'à ce qu'elles soient pr&tes/^îsFdécongélation. Ensuite, les colonies congelées (700 g) sont broyées en petites particules (mélangeur Waring) 20 et mélangées avec 1500 ml d'eau. Le mélange est maintenu pendant environ 20 heures à environ 25°C sous agitation. Ensuite, le mélange est filtré sur un tampon de terre de diatomées et le filtrat est acidifié avec de l'acide chlorhydrique concentré à un pH d'environ 2-3. Le filtrat acidifié est extrait quatre 25 fois avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits sont ressemblés, filtrés, lavés avec une saumure, déshydratés sur du sulfate anhydre de sodium et évaporés sous pression réduite pour donner 11 g de résidu huileux. " * ~ ^—I,© réaidu"solide restant sur le tampon filtrant de terre 30 de diatomées est agité pendant deux heures dans du méthanol (quantité suffisante pour recouvrir le résidu) à 25°C. Le mélange est ensuite filtré et le filtrat est évaporé pour donner 14 g de résidu huileux. Les résidus huileux sont rassemblés et chromatographiés 35 sur 1500 g de gel de silice lavé à l'acide, puis on procède à l'élution, successivement avec 8 litres d'un gradient de 25-65 d'acétate éthylique dans le "Skellysolve B", 8 litres d'un gradient de 65-100 % d'acétate éthylique dans le "Skelly_ 71 32825 52 2106464 solve B" et 5 litres de méthanol à 2 % dans de l'acétate éthylique et on recueille des fractions de 500 tnl. (Le "Skellysolve B" est un mélange d'hexanes isomères). On rassemble les fractions 8-12 et on les évapore pour obtenir une petite quantité de 5 PG-A^ contenant des traces d'ester méthylique de PG-A^. On rassemble les fractions 15-18 et on les évapore pour obtenir 9,54 g de PGA2. On rassemble les fractions 35-40 pour obtenir 0,414 g de pge2. Exemple 8 10 15P-PGA2 extrait de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. Des colonies de Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, recueillies sur des récifs au large de la côte Sud-Est de la Floride, près de Miami, sont broyées en morceaux de plusieurs centimètres de longueur. Les morceaux sont congelés par contact 15 avec de l'anhydride carbonique solide, moins d'une heure après le prélèvement dans les eaux du récif. Les morceaux congelés de la colonie sont maintenus dans des boîtes isolées contenant de l'anhydride carbonique solide (température inférieure à environ -20°Cl), jusqu'à ce qu'ils soient prêts pour la décongélation. 20 Ensuite, les morceaux de la colonie (600 g) sont mélangés avec 1500 ml d'eau. Le mélange est agité et maintenu à 25°C pendant 23 heures. Le mélange est ensuite filtré sur tua tampon de terre de diatomées et le filtrat est acidifié à un pH de 2-3 environ, avec de l'acide chrorhydrique concentré. Le filtrat acidifié est 25 extrait quatre fois avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits sont rassemblés, filtrés, lavés à la saumure, déshydratés sur du sulfate anhydre de sodium et évaporés pour donner 9,2 g de résidu huileux. Le résidu solide restant sur le tampon de terre de diato-30 mées est agité pendant 15 heures dans du méthanol (quantité suffisante pour recouvrir ce résidu) à 25°C. Le mélange est .ensuite filtré et le filtrat est ensuite évaporé. Le résidu est dissous dans de l'acétate d'éthyle et la solution est lavée sucessivementâvec de l'acide chlorhydrique 3N et de la saumure, 35 déshydratée sur du sulfate anhydre de sodium et évaporée pour donner 5,83 g de résidu huileux. Le second résidu huileux et 8,2 g du premier résidu hui 32825 53 2106464 leux sont rassemblés et chromatographiés sur un kilogramme de gel de silice lavé à l'acide, puis on procède à l'élution, successivement avec des portions de trois litres d'acétate éthylique à 25 35 %, 45 a/°, 55 et 65 -$> dans le "Skellysolve B", en recueillant des fractions de 500 ml. Les fractions 18-22 sont rassemblées et évaporées en donnant 5,54 g de I5P-PGA2. Les fractions 15-17 sont rassemblées et évaporées en donnant 1,37 g d'ester méthylique de I50-PGA2. 71 32825 54 2106464 REVENDICATIONS 1. Procédé de production d'un composé de formule : (dans laquelle et R^ sont des atomes d'hydrogène ou bien R.j est un groupe méthyle et ^ est un atome d'hydrogène ou un 5 groupe acétyle), caractérisé par le fait qu'il consiste à extraire des colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S,avec un solvant, et à séparer ledit composé de l'extrait résultant. 2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par 10 le fait que le solvant est un liquide organique neutre. 3. Procédé suivant la revendication 2, caractérisé par le fait que le solvant est le méthanol, l'acétone, le dichlorométhane, l'acétate éthylique ou un hydrocarbure, par exemple le benzène. 15 4. Procédé d'extraction de l'ester méthylique d'acétate de 15|3-PG-A„ de colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, ou d'extraction de l'ester méthylique d'acétate de PGA^ de colonies entières ou partielles de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, 20 forme S, procédé caractérisé par le fait que les colonies ou leurs fragments sont refroidis à une température s'abaissant au moins à +5°C, moins d'une heure après le prélèvement des colonies de leur biotope, ces colonies ou leurs fragments étant maintenus â une température s'abaissant au moins à +5°C, jusqu'au moment 25 où on les extrait avec un liquide organique neutre. 5. Procédé suivant la revendication 4, caractérisé par le fait que l'invertébré marin est Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. 71 32825 55 2106464 6. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé par le fait que les colonies ou leurs fragments sont congelés à une température inférieure à -20°C, moins d'une heure après le O O O Y"1 IL. 6 S prélèvement desdites colonies dans leur biotope, les/ént'ikres 5 ou colonies partielles congelées étant maintenues au-dessous de cette gamme de température jusqu'au moment de l'extraction. 7. Procédé suivant la revendication 5, caractérisé par le fait que les colonies ou leurs fragments sont congelés par contact avec de l'anhydride carbonique solide ou placés dans un 10 récipient qui contient aussi de l'anhydride carbonique solide, moins d'une heure aprègle prélèvement desdites colonies dans leur biotope, les colonies ou leurs morceaux congelés étant maintenus au contact d'anhydride carbonique solide ou à une température équivalente jusqu'au moment de l'extraction. 15 8. Procédé suivant l'une quelconque des revendications 4 à 7, caractérisé par le fait que le liquide organique neutre est le dichlorométhane, le méthanol ou le benzène. 9. Procédé d'extraction de dérivés d'acide prostanoïque de colonies ou de morceaux de colonies de l'invertébré marin 20 Plexaura homomalla (Esper), 1792, foime S, ou de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, procédé caractérisé par le fait que les colonies ou leur fragment s, avant l'extraction, sont maintenus au contact d'eau dans une gamme de températures atteignant au maximum 50°C jusqu'à ce que les 25 C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les colonies ou leurs fragments soient à peu près totalement transformés en dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque . 10. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par 30 le fait que les colonies ou leurs fragments sont refroidis à une température s'abaissant au moins à +5°C avant leur maintien au contact de l'eau. 11. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que les colonies ou leurs fragments sont congelés et 35 décongelés avant leur maintien au contact de l'eau. 12. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que, après que les colonies ou leurs morceaux ont été 71 32825 56 2106464 maintenus au contact de l'eau jusqu'à ce que les C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les gté colonies ou leurs morceaux aient/ a peu près totalement transformés en dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque, on les 5 refroidit à une température s'abaissant au moins à +5°C avant 1'extraction. 13. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que, après que les colonies ou leurs morceaux ont été maintenus au contact de l'eau jusqu'à ce que les C-15-acétates 10 des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les /' "t/é transformés à peu près en totalité en dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque, ces colonies ou leurs morceaux sont congelés et décongelés avant l'extraction. 15 14. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que l'invertébré marin est Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S. 15. Procédé suivant la revendication 14, caractérisé par le fait que les dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque sont 20 le composé PG-A^ et l'ester méthylique de P&ô^. 16. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que l'invertébré marin est Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R. 17. Procédé suivant la revendication 16, caractérisé 25 par le fait que les dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque sont le composé I5P-PGA2 et son ester méthylique. 18. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que la gamme de températures va de 20 à 40°C. 19. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé 30 par le fait que la quantité d'eau qui entre en contact avec les colonies ou leurs morceaux est au moins égale en poids à la teneur en matières sèches des colonies ou de leurs morceaux. 20. Procédé suivant la revendication 9, caractérisé par le fait que les colonies ou les morceaux de colonies de l'inver- 35 tébré marin sont maintenus au contact de l'eau dans une gamme de températures d'environ 20 à 40°C jusqu'à ce que les C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque initialement'présents 71 32825 57 2106464 dans les colonies ou leurg&orceaux soient à peu près totalement transformés en dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque, l'eau étant au moins égale en poids à la teneur en matières sèches des colonies ou de leurs morceaux, puis les colonies ou leurs 5 morceaux sont congelés et maintenus dans la gamme de températures d'environ -20 à -80°C jusqu'à la décongélation. 21. Procédé suivant la revendication 20, caractérisé par le fait que l'invertébré marin est Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S ou forme R. 10 22. A titre de produit industriel nouveau, un produit consistant essentiellement en colonies ou morceaux de colonies de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792 , forme S ou de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, qui ont été maintenus/feu contact de l'eau dans une gamme de 15 températures s'élevant au maximum à 50°C, jusqu'à ce que les C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque, initialement présent dans les colonies ou leurs morceaux, aient été à peu près totalement transformés en dérivés C-15-hydroxy d'acide prostanoïque, puis congelés. 20 23. A titre de produit industriel nouveau, un produit consistant essentiellement en colonies ou morceaux de colonies de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme S ou de l'invertébré marin Plexaura homomalla (Esper), 1792, forme R, qui ont été congelés sans avoir perdu leur eau naturelle 25 interne, puis décongelés, et maintenus ensuite au contact de l'eau dans une gamme de températures s'élevant au maximum à 50°C jusqu'à ce que les C-15-acétates des dérivés d'acide prostanoïque initialement présents dans les colonies ou leurs morceaux aient été à peu près totalement transformés en dérivés 30 C-15-hydroxy d'acide prostanoïque.