Brevet FR2070182A1 — publié le 19710910

La présente invention concerne des composés peptidiques doués de précieuses propriétés pharmacologiques. Ces nouveaux peptides répondent à la formule générale I 5 X-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Xys-Y-m-CCH^-NÎ^ (I) dans laquelle X représente un radical p-alanyle, y-âmino-butyryle, D-séryle, p-hydroxy-propionyle ou un radical n-10 alkyloxy-carbonyle dont le radical alkyle contient de 1 à 4 atomes de carbone, Y représente le radical de la lysine ou de l'ornithine et n désigne un nombre allant de 2 à 6. 15 L'invention concerne également un procédé per mettant de préparer les composés de formule I, procédé selon lequel on condense un peptide répondant à la formule générale II A-Tyr-S e r-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (13) 20 dans laquelle A représente un radical Boc-(3-alanyle, Boc - ^ — amino-butyryle, Boc-D-séryle ou (3-h.ydroxyp rop i onyle ou un radical n-alkyloxy-carbonyle dont la partie alkylique contient de 1 à 4- atomes de 25 carbone, et Bu*7 désigne un radical tertio-butyle, avec .des peptides répondant à la formule générale III H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Y(Boc)-NH- (CHg)n-NH-Boc (III) dans laquelle 30 Boc représente un radical tertio-butyloxy-carbonyle et Y et n ont les significations données plus haut, avec le dicyclohexyl-carbodiimide, en présence de composantes activantes dont le p-g- est compris entre 4 et 8, telles que le 4—nitro-phénol, le 2,4-,5-trichloro-phénol, le pentachloro- 35 phénol, le thiophénol, le 4-chloro-thiophénol, le 4-nitro-thiophénol, le F-hydroxy-succinimide, le SJ-hydroxy -phtalimide, la saccharine, le N-hydroxy-benzotri.azole ou la 3-hydroxy-4~oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine, puis on 70 38524 2 2070182 élimine les groupes protecteurs au moyen d'acides forts, tels que l'acide trifluoracétique ou l'acide chlorhydrique. Le nonapeptide H-Tyr-Ser-Met-Glu(GBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH utilisé comme corpé de départ pour la 5 préparation de composés répondant à la formule II ainsi que 1'hexapeptide Z-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH utilisé pour la préparation des peptides répondant à la formule générale III sont des composés connus. Pour condenser les deux séquences peptidiques 10 on dissout le composé (II) avec le composé (III) dans un solvant, tel que le diméthylformamide, le diméthylacétamide, le tris^diméthylamide) de l'acide phosphorique, la tétra-méthyl-urée, la N-méthy1-pyrro1idone ou la pyridiné ou un mélange de ces solvants, on ajoute au moins 1 équivalent, 15 de préférence de 2 à 4 équivalents, d'un composé capable d'engendrer des esters actifs, puis on introduit, comme agent de condensation, un carbo-di-imide, de préférence le dicyclohexyl-carbc-di-imide, en une quantité représentant de 2 à 5 fois la.quantité molaire. Comme composés capables 20 de former des esters actifs, on utilisera des composés hydroxy, mercapto ou imino ayant un pK compris entre 4,0 et 8,0. On se servira surtout des composés couramment utilisés dans la chimie des peptides, tels que le 4-nitro-phénol, le 2,4,5-trichlorophénol, le pentachloro-phénol, le pentâfluoro-25 phénol, le N-hydroxy-succinimide, le N-hydroxy-phtalimide, le thiophénol, le 4-chloro-thiophénol, le 4-nitro-thiophéno1 ou la saccharine, également le 1-hydroxy-benzotriazolg, -des 1-hydroxy-benzotriazoles substitués sur le noyau où la 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-1,2,3-benzotriazine. Les peptides 30 de formule III doivent se trouver, lors de cette condensation, sous la forme de sels d'acides forts, par exemple à l'état de benzène-suifonates, de toluène-suifonates ou de chlorures. On agite à la température ambiante pendant 35 une durée qui varie avec le composé ajouté èt qui peut aller de 3 heures à 5 jours. Il est également possible d'opérer à une température plus basse par exemple à"0°, ou à une température modérément élevée', pouvait aller jusqu'à environ 60° : la durée de la réaction s'en trouve alors respectivement 40 allongée ou. raccourcie, La'condensation terminée, on élimine 70 38524 2070182 éventuellement par filtrat ion l'urée qui a. précipité, par exemple la dicyclohexyl-urée, et on fait précipiter les produits réactionnels bruts par addition d'un solvant dans lequel les peptides sont pratiquement insolubles, solvant 5 qui pourra être par exemple l'éther ou l'acétate d'éthyle. Dans le but d'éliminer les groupes protecteurs on dissout ensuite les produits réactionnels pour 1 heure environ dans de l'acide trifluoro-acétique contenant avantageusement une petite quantité d'eau et d'acide thioglycolique et pouvant 10 également contenir de l'acide chlorhydrique. La réaction terminée, on ajoute de l'éther afin de faire précipiter les peptides (I) débarrassés des groupes protecteurs. Pour parfaire la purification on peut avoir recours à des procédés connus, par exemple à la chromatographie sur carboxy-méthyl-» 15 cellulose. Les peptides qui font l'objet de l'invention sont des amides à substitution basique qui dérivent d'hepfca-décapeptides ou de ÏTa-acyl-hexadécapeptides, amides qui ont une activité adrénocorticotrope extrêmement élevée. 20 On sait que 3es peptides dont la chaîne ne comporte que la séquence des 19 premiers acides aminés de la corticotrophine naturelle (ÀCTH) ont encore la pleine activité biologique de celle-ci lorsqu'ils sont à l'état d'amides, c'est-à-dire lorsqu'ils sont protégés contre la 25 dégradation provoquée par des carboxy-peptidases. Toutefois, lorsqu'on raccourcit davantage la chaîne, l'activité biologique diminue rapidement. On a également déjà signalé que le remplacement du premier acide aminé, à savoir la L-sérine, par d'autres 30 radicaux, par exemple par le radical de la D—serine, de la B-alanine, de la D-thréonine, de la j3-alanine, de l'acide Y -amino-buty.rique ou de l'acide (3-hydroxy-propionique, accroît considérablement l'activité biologique, qui peut ainsi être multipliée par 5 à 10, par rapport au peptide non modifié 35 qui a un motif de L-sérine en position 1. On sait également remplacer les acides aminés des positions 17 et 18 de la corticotrophine par la lysine ou l'ornithine sans que l'action en soit abaissée. Le tableau comparatif suivant illustre cette 40 situation. 70 38524 * 2070182 du composé 5 (1) (2) (3) (*> (5) 10 (6) Séquence de l'ACTH à 19 état d'amide 1-19 1-18 1-1? 1-16 1-15 1-13 Test de Savers, voie sous- cutanée, ea IToIa/mp; 121 33 1,* 0,2 "0.1 Sécrétion d1 hormone stéroïdique xîî tIt© 9 ©a TJuI/ 150 ' 136 35 Les résultats consignés dans ce tableau montrent que, lorsque la séquence n'est pas modifiée. un heptadécapeptide-amide n'a plus qu'un tiers de l'activité de 11ACTH tandis que 1'hexadécapeptide-amide n'a plus qu'1% 15 de cette activité. Il est donc d'autant plus surprenant que les peptides conformes à l'invention, qui n'ont plus que 17 ou 16 amino-acides,fassent preuve d'une activité biologique prolongée et surpassant de beaucoup,dans le test de Sayers, 20 celle de la corticotrophine naturelle, ainsi que le montre le tableau II ci-dessous. TABLEAU II 25 30 35 N° du composé Composé Unités internationales par milligramme dans le test de Sayers,voie sous-cutanée, 3ème étalon inte rnational (7) p-Ala -Lys ^Jcorticotrophine- env. 800 (1-17)-heptadécapeptide-4~ amino-n-butylamide (8) [D-Ser^-Lys^Jcorticotrophine- 400-600 (1-17)-heptadécapeptide-4-amino-n-butylamide (9) N0" ( p-hyd roxyp rop i ony1)-[ Lys ^ ] 350-500 corticotrophine-(2-17)-hexadéca— peptide-4-amino-n-butylamide (10) [^Aia1-Lys1^jcorticotrophine- 150-250 (1-17)-heptadé c apept ide-aminé(témoin) 70 38524 5 2070182 On voit, à la lecture de ce tableau, qu'un composé, en l'espèce le composé (10), dont le groupe amide terminal ne porte pas de substituant • basique, bien qu'il ait une activité accrue du fait du remplacement de Ser par 5 tin radical de p-alanine, n'atteint pas l'activité des peptides conformes à l'invention. La différence est encore plus saisissante dans le cas de 1*hexadécapeptide (9) dont l'activité est de 100 à 200 fois plus grande que celle de 1'hexadécapeptide (4-). 10 Etant donné que l'uni,on d'acides aminés, même d'un seul de ceux-ci, à un peptide entraîne d'importantes dépenses de main-d'oeuvre et de matières on comprend que la supression d'un acide aminé constitue un important progrès technique dans la préparation des composés peptidiques. C'est 15 ainsi que la simple union de H- Lys(Boc)-NH2 à un peptide exige 6 étapes réactionnelles; en revanche, les mono-tertio-butyloxy-carbonyl-diaminesutilisées selon l'invention peuvent se préparer très facilement, avec des rendements élevés, en deux étapes. 20 Les nouveaux*composés ont le spectre d'activité de la corticotrophine (ACTH) naturelle et ils ont donc les mêmes indications thérapeutiques que cette hormone naturelles toutefois, les dosés des composés de l'invention, qui sont nettement plus actifs que l'hormone 25 naturelle, peuvent être plus faibles que cellesde cette dernière substance. Les exemples suivants illustrent la présente invention. Les températures y sont exprimées en degrés Celsius-et les abréviations qui y sort employées ont les signi-30 fications indiquées ci-dessous. Et oc = éthyloxy-c arb onyD? TCP = 2,4-, 5-trichlorophényle Np = 4—nit rophény le ,^Abu = acide -amino-butyrique 55 EXEMPLE 1 Ï Acétate de £Ala- Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg- Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-NH- (CH2)^ - HHg » hydraté. "70 38524 2070182 a) Z-Iya(Boc)-BH-(OH2)4-!lB-Boc. On agite à 20° pendant 20 heures 7,0 g (31 mMole) de Boc»HH«(CH2)4-KI^.HC1 et 4,2 ml (30 millimoles.) de triétfcylamine dans 100 ml de diméthylformamide avec 16,8 g 5 (30 millimoles) de Z-Lys(Boc)-0TCP. On élimine le chlorure de triéthyl»ammonium par filtration et on évapore le filtrat à siocité sous pression réduite. On reprend le résidu par, de l'acétate d'éthyle, on secoue bien, à 0°, avec de l'acide citrique binormal, avec une solution normale 10 de bicarbonate et avec de l'eau et on sèche la solution sur sulfate de sodium. Après avoir chassé le solvant par distillation on recristallise le résidu à deux reprises dans un mélange d'isopropanol et d'éther. On obtient ainsi 14,1 g du composé cherché, soit 83% de la quantité théori-15 que. S c28h46n4°7* (pm =568'7) Calculé j C 59,12 H 8,52 N 9,86 Trouvé ï C 59,2 H 8,6 N 9,6 20 b) ToSylate de H-Lys(Boc)-NH»(Ci^)^-NH-Boc. On hydrogène catalytiquement, au moyen de palladium,11,4 g du composé protégé par Z (benzyloxy- carbonyle), dont la préparation est décrite sous a)t dans 80 ml de méthanol en présence d'une solution méthanolique d'acide toluène-suifonique, à pH 5. .La réaction 25 terminée on élimine le catalyseur par filtration, on chasse le méthanol par distillation sous pression réduite et on triture le résidu avec de l'éther. Pour la purification on le dissout dans de l'isopropanol chaud et on f.ait précipiter par de l'éther. Le rendement est de 88% (10,3 g)* 30 Pour l'analyse on effectue une reprécipitation dans un mélange d'isopropanol et d'éther. (PM3 588'8> - Calculé *--N 9,51 S 5,4-5 Trouvé ï N 9,6 S . 5,5* 35 c) Z-Lys Lys(Boc)-HH-(CH2)4-î}H-.Boc. A 10,9 g (10 millimoles) de Z-Lys(Boc)-Pro- 70 38524 '7 2070182 Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH et 5*89 g (10 millimoles) de tosylate de Boc-îîH- (CH2 )4.-^2 ^ans ''OO ml de diméthylformamide on ajoute 12,8 ml (10 millimoles) de îï-^éthyl-morpholine et 2,7 g (20 millimoles) de 1-fcydroxy-benzotriazole. 5 A une température de -10e on ajoute 2,2 g de dicyclohexyl-carbodi-imide (11 millimoles). On laisse le mélange revenir à la température ambiante, on l'agite pendant encore 5 heures, on chasse le solvant par distillation sous pression réduite, on laisse macérer le résidu 10 avec une solution normale de bicarbonate et de l'eau et, après séchage, on le recristallise dans l'acêtonitrile. Rendement ï 74,2 % (10,6 ^). Point de fusion 150-155° (avec formation de mousse). - 24,0° (c =» 1 dans le diméthyl formamide). 15 c73h125n13°19-h2° (pm - 1506,9) Calculé: C 58,20 H 8,4-9 N 12,07 HgO 1,20 Trouvé : C 58,2 H 8,4 JS 12,4 H20 1,3. d) Tosylate dihydraté de H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Bo c)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-KH-(CB^)^- 20 ÏJH-Boc. On hydrogène catalytiquement, en présence de palladium, 15,1g (10 millimoles) du composé protégé par Z,préparé selon (c), dans 300 ml de méthanol, opération au cours de laquelle on maintient le pH à 5 par addition d'une solution 25 méthanolique d'acide toluène-suifonique. La réaction terminée on chasse le méthanol par distillation et on reprécipite le résidu dans un mélange de pyridine et d'éther et dans un mélange de méthanol et d'eau. L'huile qui se forme d'abord se solidifie au bout d'un court moment. Le rendement 20 est de 77,5 % (12,1 g)* C73H127K13020S*2H20 (PM . 1562,9) Calculé : C 55,15 H 8,4-5 N 11,64- S 2,05 Trouvé î C 55,4- H 8,6 N 11,6 S 1,8 e) On dissout 1,65 g (1,1 millimole de Boc-35 pAla-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-^i.rg-Trp-Gly-OH, 4- E^O et 1,56 g (1 millimole) de tosylate dihydraté de H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-KH-(CE^)^- NH-Boc dans 30 ml de diméthylformamide avec 540 mg (4 millimole« ) de 70 38524 2070182 i-fcyàroxy-benzotriazole c On prépare par ailleurs ira®- solu-tion de 1,25 g (6 millimoles) de &ieyclohexyl~eaïbodî%iide dans 4- ml de diméthylformamide, on ajoute 1/3 de cette solution, on agite pendant 1 heure »puis on ajoute encore 1/3 de ladite 5 solution et, au bout d'une heure supplémentaire, on ajoute le dernier tiers. Après avoir continué d'agiter pendant 2 à 3 heures on fait précipiter le produit réactionnel par de l'éther. On en recueille 3,1 g. Sans le purifier davantage on débarrasse le com-10 posé de ses groupes protecteurs ea le laissant reposer pendant 1 heure dans de l'acide trifluoro-acétique à 80-90 % contenant une petite quantité dfacide thioglycolique et on le fait précipiter par addition de 160 ml d'éther. On recueille ainsi 3,06 g de trifluoro-acétate du peptide à l'état brut. 15 Après purification sur carboxyméthyl-cellulose on obtient, à l'état d'acétate, 1,4-5 g du peptide chromât ©graphiquement pur. -68,6° + 2° (c= 0,5 dans l'acide acétique à 1 %)• Résultats de l'analyse portant sur les acides aminés : SerQ gg 20 G-luo^gProQ^^Glyg^QVal^ ^05Met0^8Tyr0^92Phe1 î00^-la1,01 Lys4-,00His1,02Arg0,94.' EXEMPLE 2 • Acétate de D-Ser~Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-îrp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys -Lys-Lys-NH- ( CH^ ^-NHg , hydraté. 25 On fait réagir, en opérant comme décrit à l'exemple 1(e), 1,65 g (1 millimole) de Boc-D-Sez—Tyr-Ser-Met-Glu(OBu )-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH avec 1,56 g (1 millimole) de l'hepta-peptide-amide préparé selon l'exemple 1(d) et, après élimination des groupes protecteurs et purification par chromatogra- 30 phxe sur carboxy-méthyl-cellulose, on obtient 1,28 g du com- 20 posé chromatographiquement pur. [kJjj = -69° + 2° (c =, 0,5 dans l'acide acétique à 1 %). Analysé des acides aminés: Ser^ o^Glu. nPPron QAGlyP nnVal>, n2L -*0.95^0,90«-1f * ' 35 EXEMPLE 3 j Acétate de (à-hydroxypropionyl-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-MH-(CH2)hydraté. bad ORIGINAL 70 38524 "9 ^ 2070182 a) f3-hydroxypropionyl-îyr-Ser-Met-Glu(0Bu )-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH. A partir de 4-,15 g (40 mmoles) de l'hydrazide de l'acide {3-hydroxy-propionique on prépare, en opérant comme décrit dans Liebig's Ann. Chem. 726 (1969), page 177 sqq. l'azide correspondant que l'on fait ensuite réagir avec 3,35 g ^ (25 mmoles) de H-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH.4- HgO. Après ébullition avec du méthanol à 90 % on obtient 2,68 g du composé soit 71 % de la quantité théorique. c68h93n150i8s.4- hgo (p.m. 1510,7) 10 calculé : C 5^,02 H 6,74- N 13,90 S 2,14- trouvé C 53,8 H 6,8 N 14-, 1 S 2,0. b) En opérant comme décrit à l'exemple 1 e.) on fait réagir 1,54- g (1,1 mmole) du composé préparé selon a) avec 1,56 g (1 mmole) de l'heptapeptide-amide* Après avoir éliminé 15 les groupes protecteurs et avoir purifié le produit par chromatograpïiie sur carboxyméthyl-cellulose on obtient 1,33 g du composé chromatographiquement pur. [oc3^ « - 69° + 2° (c =0,5 dans l'acide acétique à 1 %) Analyse des amino-acides ï SeTg g^Glu^ Q^PrOQ 95^72 OO^H ,01 *rto,96^0,91^1 .oo^.oaM),98 Ar80,97* EXEMPLE 4- : 25 Acétate de N-éthyloxycarbonyl-Tyr-Ser-Met-Glu-His- Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-V al-Gly-Ly s -Lys -Lys -NH-(CH^^-NHg, hydraté. a) Etoc-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH, 2 S^O. On agite à la température ambiante pendant 20 heures 3,35 g de H-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Gly-OH. 4- HP0 -TQ y (25 mmole^dans 50 ml de diméthylformamide avec' 1,36 g (4-0 mmoles) de carbonate d'éthyle et de pentachloro-phényle• On fait précipiter-,au moyen d'acétate d'éthyle, un produit réactionnel presque pur que l'on recristàllise dans du méthanol à 60 % en ajoutant un équivalent de N-éthyl-morpholine. On recueille ^ ainsi 2,86 g du composé, soit 78 % de la quantité théorique. C68H93N15°18S-2 H2° (P,M- = W4»7). calculé : C 55,38 H 6,63 N 14-,24-trouvé : 0 55,2 H 6,7 N 14-,3. 20 70 38524 1° 2070182 ï>) En opérant comme décrit à l'exemple 1 e) on fait réagir 1,55 g du composé préparé selon a) avec 1,56 g de l'hepta- peptide-amide. Après avoir éliminé les groupes protecteurs et avoir purifié le produit par chromatographie sur carboxyméthyl- 5 cellulose on obtient 1,40 g du composé chromâtographiquement pur. [0-329 = -68,5° + 2° (c =0,5 dans l'acide acétique à 1 ® Analyse des acides aminés : SerQ r^Glu^ 02Pro0 96^^2 OO^a^1 04 Met0i95Tyroj92Hie0.)99lys4io1Hls1)oi 10 argo,95- EXEMPLE 5 Î • "X-Abu-Tyr-Ser-Met-Glu-His—Phe-Arg-Irp-Gly-Lys-Pré-V al-Gly-Lys-Lys-Lys-NH-CCHg^-N^. a) Boc-"tf-Abu-Tyr-Ser-Met-Glu(OBuk)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH, 4 H20. . 15 On agite à la température ambiante pendant 20 heures 5,36 g (4 mmoles) de H-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg- Trp-Gly-OH. 4 HgO avec 3,06 g (8 mmoles) de Boc-X-Abu-OTCP. On fait précipiter, à l'aide d'un mélange de parties égales d'acétate d'éthyle et d'éther, un Boc-décapeptide pratiquement pur. On en recueille 5,35 g, quantité qui correspond à un rendement de 87,8 % . On purifie ce produit par cristallisation dans du méthanol à 60 %• C69H96ïï16017S*4 H2° 1525,7). 25 Calculé : C .54,21 H 6,88 N 14,67 S 2,10 Trouvé : C 54,3 H 6,8 N 14,5 S 2,1. b) On fait réagir, en opérant comme décrit à l'exemple 1 e), 1,68 g cLu composé préparé selon a) avec 1,56 g de l'hepta-r peptide-amide . Après élimination des groupes protecteurs 50 et purification par chromatographie sur carboxyméthyl-cellulose on obtient 1,29 g du composé chromatographiquement pur. Ca]^S= -67,8° + 2° (c =0,5 dans de l'acide acétique à 1 %). Analyse des amino-acides : SerQ g0Glu^ q^PtOq ^gGly2 0QVal^ 55 Met0,93T7r0,90Phe1,00tou1,02Lys4,02 His1,02Ars0,96* EXEMPLE 6 Î (3-Ala-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys- Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Orn-NH-CH^-CHg-N^ a) Z-0rn(Boc)-WH-CH2-CH2-NH-Boc. Sa opérant comme décrit à l'exemple 1 a), on 20 70 38524 11 2070182 fait réagir 4-8,7 g de Z-0rn(Boc)~0NP (0,1 mole) et 21,6 g (0,11 mole) de NH2-CH2-CH2-IÎH-Boc.HC1 en présence de 14-,1 ml de N-éthyl-morpholine dans du diméthylformamide. Après avoir effectué le traitement complémentaire on obtient 30,84- g 5 (75,5 % de la quantité théorique) du composé fondant à 126°. C25H40%°7 &'M' 508,6) Calculé : C 59,00 H 7,93 N 11,00 . Trouvé : C 58,7 H 8,1 N 10,8. "b) Tosylate de H-Orn(Boc)-NH-CHg-CHg-NH-Boc. 10 Par le mode opératoire décrit à l'exemple 1 "b) on hydrogène 15,3 g du composé-Z (c'est-à-dire du composé benzyloxycarbonylé) en même temps qu'on le transforme en p-toluène-sulfonate (tosylate). Le rendement est de 74,4- % (12,2 g). ' 15 c) Z-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Orn(Boc)-NH-(CH2)2-NH-Boc. En opérant comme à l'exemple 1 c) on fait réagir 5,^-7 g (10 mmoles) du composé préparé selon "b) avec 10,9 g (10 mmoles) du Z-hexapeptide.Le rendement est de 70,3$ (10,3 g). 20 C70Hin9N15019.H20 (P.M. » 14-64-,8). Calculé : C 57,36 H 8,32 H 9,56 Trouvé : C 57,2 H 8,4- N 9,4-. d) On hydrogène le composé-Z par le même mode opératoire que celui de l'exemple 1 d) et on obtient ainsi 8,6 g de 25 tosylate, soit 81,6 % de la quantité théorique. On fait réagir, selon le mode opératoire de l'exemple 1 e), 1,5 g de ce composé (1 mmole) avec 1,65 g (1,1 mmole) de Boc-(3Ala-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH.4- B^O et, après avoir isolé le produit, on en chasse les groupes protecteurs. La 30 purification s'effectue comme décrit à l'exemple 1 f). On obtient ainsi 1,31 g du composé. ~69° +2° (c = 0,5 dans l'acide acétique à 1"#). Analyse des acides aminés : SerQ ggGlu^ 05?ro0 98^-^2 00^a^0 99 55 Met0,94^0,91Pt^i02Pela1.01 lys+0ra4 02His0 ogirgQ 9?> EXEMPLE 7 : Acétate de (3 Ala-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe—Arg—Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-NH- ( CHg ) 5-^2 ' ky&r^é • a) Z-Lys(Boc)-NH-(CH2)6-NH-.Boc. 4-0 En opérant de la même façon qu'à l'exemple 1a), 70 38524 12 2070182 on. fait réagir 16,8 g de Z-Lys(Boej^OTCIP s.irec 7S7 C A® (CH^g-NH-Boc.HCl. On recueille ainsi 12,7 g du composé (rendement = 70,8 $) fondant à 78-80°. 30H50N407.H20 (P.M.= 596,7). Calculé : C 60,40 H 8,78 N 9,39 5 Trouvé : C 60,6 H 8,6 5 9,3. t>) Après hydrogénation et conversion simultanée en tosylate, effectuées comme à l'exemple 1 b),on obtient 9,4- g (72,3 %) de tosylate de H-Lys-(Boc)-NH-(CH^)g-NH-Boc. c) Selon le mode opératoire de l'exemple 1 c) on fait 10 réagir 6,2 g (10 mmoles) du composé préparé selon b) avec 10,9 g du Z-hexapeptide» Le rendement est de 70 % (7,95 g)» ^75^129^13^19 (P. M. — 1534-, 9). Calculé : C 58,65 H 8,60 N 11,86 Trouvé : C 58,5 H 8,4- N 11,9, 15 d) En opérant de la même façon qu'à l'exemple 1 d) on hydrogène catalytiquement et on transforme simultanément en tosylate le composé préparé selon c). On fait réagir 1,6 g de ce tosylate, selon l'exemple 1 e), avec 1,65 g de Boc-f3Ala-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)—His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH. 4- i^O. Après élimination des 20 groupes protecteurs et purification,on obtient 1,38 g du composé. [a]2S = -67,8° +2° (e = 0,5 dans l'acide acétique à 1 Analyse des acides aminés î SerQ g^Glu^ Q^Pro^ (X)Gly3 00Va^1 02 Met0,92Tyr0,90"Piiei,01 PAla1 ? 02Lys3,98 25 Hiso,97Argbf98* EXEMPLE 9 î Indications générales relatives à la préparation des bis-Boc-diamino-alcanes et des chlorhydrates de mono-Boc-diamino-alcanes. jq a) On ajoute 200 ml df acide chlorhydrique 5N à 131 g (1 mole) de Boc-NH-HHg dans 600 ml de dioxanne à 0°. Tout en agitant, on introduit, à +5°, en 10 à 15 minutes, 70 g de NaHOg dans 180 ml d'eau. On continue d'agiter pendant 15 minutes à la température ambiante . A la solution obtenue on ajoute 0,5 mole 35 du diamino-alcane dans 150 ml de dioxanne, 140 ml de triéthylamine et on agite à 50° pendant 24- heures. On élimine ensuite le solvant sous pression réduite. On fait macérer les cristaux restants dans de l'eau et on les recristallise dans de l'isopropanol. BAD ORIGINAL 70 38524 •13 2070182 Composé préparé Point de fusion Rendement Boc-NH-(CH2) -NH-Boc n = 2 n = 3 n = 4 n = 5 n = 6 140-143° 108-112° 135-137° 91-93° 103-105° 75.7 % 69.8 % 78,4 % 70,3 % 76,6 % 10 "b) On met 0,5 mole d'un de ces composés en suspension dans 1,2 1 d'une solution éthérée binormale de chlorure d'hydrogène et on agite pendant 3 heures à la 15 température ambiante à l'abri de l'humidité (pour les composés dont l'indice n est égal 5 ou à 6 il suffit d'agiter de 1 à 2 heures). La partie non dissoute est le chlorhydrate du mono-Boc—diamino-alcane cherché . Par évaporation du filtrat on récupère le corps de départ qui n'a pas réagi. Compte tenu 20 de ce corps de départ récupéré le rendement est presque quantitatif. Les essais de pureté par chromatographie en couches minces sur des plaques prêtes de Merck (gel de silice) avec,pour éluant, un mélange de n-butanol, d'acide acétique 25 glacial et d'eau dans la proportion 3 : 1 î 1 donnent les résultats suivants : Valeur Rj, du composé bis-Boc 0,9 Valeur R^ du composé mono-Boc 0,4 - 0,6 Valeur Rj, de la diamine 0,1. 70 38524 14 2070182 EEVENDICATIONS 1.- Procédé de préparation de peptide répondant à la formule générale I X-Tyr-Ser-î'. X représente un radical (3-alanyl^ y -ami nobutyryle, D-séryle ou 3-hydroxypropionyle ou un radical n-alkyloxycarbonyle dont la partie alkylique contient de 1 à 4 atomes de carbone, T représente le radical de la lysine ou de l'ornithine et n désigne un nombre pouvant aller de 2 à 6, procédé caractérisé en ce qu'on condense un peptide répondant à la formule générale II A-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu^)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (II) dans laquelle A désigne un radical Boc-(3-alanyle, Boc-X-aminobutyryZs, Boc-D-séryle ou f3-hydroxypropionyle ou un radical n-alkyloxycarbonyle dont la partie alkylique contient do 1 à 4 atomes de carbone et Bu^ désigne un radical tertiobutyle, avec des peptides répondant à la formule générale III H-Lys(Boc)-Pro-Val-Gly-Lys(Boc)-Lys(Boc)— Y(Boc)-HH-(CHp) -ÎIH-Boc ^III') 25 dans laquelle X et n ont les significations précédemment données et Boc désigne le radical tertio-butyloxycarbonyle, à l'aide du dicyclohexyl-carbodi-imide, en présence de composantes capables de former des esters actifs et dont le p^ est compris entre 4- et 8 puis on élimine les groupes protecteurs avec des acides forts. 2.- Peptides répondant à la formule générale I X-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-T-im-(CH2)n-NH2 (I) dans laquelle X représente un radical (3-alanyle, X-^iB-obutyryle, D-séryle 70 38524 -15 2070182 ou p-hydroxypropionyle ou un radical n-alkyloxy-carbonyle, dont la partie alkylique contient de 1 à 4- atomes de carbone, Y désigne le radical de la lysine ou de l'ornithine et 5 n désigne un nombre pouvant aller de 2 à 6. 3»- Médicaments doués notamment d'une activité adrénocorticotrope, médicaments caractérisés en ce qu'ils renferment, à titre de substance active, un composé peptidique selon la revendication 2.