Brevet FR2108081A1 — publié le 19720512

i 2108081 La présente invention concerne de nouveaux sels des acides chondroîtines sulfuriques présentant un intérêt thérapeutique et plus particulièrement des sels de ces acides avec des bases azotées. Les bases azotées des atomes peuvent être, par exemple, 5 des aminés primaires, secondaires ou tertiaires, ou des ammoniums quaternaires. Parmi les bases azotées, sont plus particulièrement intéressantes la bétaïne et la pyridoxine. L'acide chondroïtine sulfurique existe sous différentes 10 formes mais seules les formes A et C peuvent être utilisées en raison de leur haute activité thérapeutique. Les composés de 1'invention peuvent être préparés en faisant réagir directement les acides chondroîtines sulfuriques -obtenus par toute voie usuelle telle que, par exemple, la technique par 15 échange d'ions- sur la base choisie ; la réaction s'effectue en phase aqueuse à la température ambiante. Les acides chondroîtines sulfuriques formes A et C sont couramment disponibles sous la forme de leurs sels de sodium ; cependant, ces produits ne sont pas, dans tous les cas, d'un haut 20 degré de pureté, et de préférence doivent être purifies avant utilisation. Si cette purification est nécessaire, elle peut être effectuée comme suit : - dissolution, sous agitation, du chondroïtine sulfate de sodium dans l'eau à une température d'environ 60°C, à une concentration 25 d'environ 100 g par litre ; la solution chaude obtenue est ensuite filtrée sous pression ; - précipitation du chondroïtine sulfate de sodium ; la solution obtenue précédemment est portée à 90°C et il lui est ajouté 1,5 volume d'alcool éthylique bouillant sous agitation ; cette 30 agitation est maintenue quelques heures et également pendant la période de refroidissement du mélange qui doit s'étendre sur une durée de 10 à 12 hetires, un refroidissement très long étant indispensable. - Le chondroïtine sulfate de sodium est séparé : 35 . par sédimentation directe, ce qui donne 9 5 % du produit . par centrifugation de la liqueur surnageante, ce qui donne les 5 % restants. Les deux fractions ainsi récupérées sont rassemblées et redissoutes dans l'eau chaude. La solution est refroidie et peut 40 être utilisée soit telle quelle pour être traitée selon le procédé U. COPY 71 32358 2 2108081 de l'invention, soit lyophilisée si le produit ne doit pas être utilisé immédiatement. Ce procédé de purification s'applique indifféremment aux formes A et C du chondroïtine sulfate de sodium. 5 Les nouveaux composés selon l'invention présentent un inté rêt dans le domaine thérapeutique, notamment en tant qu'agents anti-athéromateux à action puissante et sûre. L'invention sera mieux comprise grâce aux exemples de préparation qui suivent : 10 Exemple 1 - Chondroïtine sulfate (forme A) de bétaïne 30 g de chondroïtine sulfate de sodium forme A sont dissous dans 150 ml d'eau puis lentement passés à travers une colonne remplie de résine Anberlite IR 120. Dès que la solution émergeante qui doit contenir l'acide chondroïtine sulfurique présente un pH 15 acide, elle est directement versée sous agitation dans line solution aqueuse de 50 g de bétaïne dans 50 ml d'eau. Cette solution est évaporée sous pression réduite, à une température ne dépassant pas 50°C, ce qui donne un résidu jaune qui est ensuite retraité par le méthanol. Après lavage au méthanol puis à l'éther, on 20 obtient 26 g de chondroïtine sulfate (forme A) de bétaïne. Le rendement est de 70 % en poids. La décomposition intervient avant la fusion à 220°C si bien que le point de fusion ne peut être déterminé. Exemple 2 - Chondroïtine sulfate (forme C) de bétaïne 25 Les mêmes conditions opératoires que dans l'exemple 1 sont utilisées pour la synthèse de ce composé. La différence entre les deux produits est très ténue. Le chondroïtine sulfate de sodium de départ ne diffère, en effet, selon qu'il est sous la forme A ou C que par quelques pics dans le spectre U.V. Ceci est facile 30 à contrôler sur les- produits de départ mais est beaucoup plus dificile à vérifier sur le sel de bétaïne. Cependant, en raison de la nature de la différence existant entre les formules des formes A et C, il n'existe aucun risque de transposition lors de la réaction de synthèse. Le rendement de cette préparation 35 est de 72 % en poids et la décomposition se produit aux environs de 210°C avant la fusion du composé. Exemple 3 - Chondroïtine sulfate (forme C) de pyridoxine On procède comme dans l'exemple 2 ci-dessus avec 30 g de chondroïtine sulfate de sodium forme C dissous dans 150 ml d'eau, 40 cette solution étant traitée par 60 g de pyridoxine base dissous 71 32358 3 2108081 dans 0,5 ml d'eau. On obtient ainsi 26,3 g de chondroïtine sulfate (forme C) de pyridoxine. Le rendement est de 67 % en poids et la décomposition intervient vers 210-220°C, sans qu'un point de fusion puisse être déterminé. 5 Exemple 4 - Chondroïtine sulfate (forme A) de pyridoxine On emploie la même technique que dans l'exemple 3 en remplaçant le chondroïtine sulfate (forme C) de sodium par la forme A correspondante. Le rendement est de 69 % en poids et, comme précédemment, la décomposition intervient vers 210-220°C sans 10 qu'un point de fusion puisse être déterminé. TOXICITE La toxicité a été mesurée pour les 4 composés décrits dans l'exemple ci-dessus sur la souris per os et par voie intrapéri-tonêale. 15 Per os, aucune mort n'a été notée pour des doses de 4,5 g/kg, ce qui correspond à la dose maximum administrable par cette voie. Intrapéritonéalement, le composé de l'exemple 1 présente line DL 50 de 1,2 g/kg, le composé de ltexemple 2 une DL 50 de 1,25 g/kg tandis que la DL 50 n'a pu être déterminée pour les composés des 20 exemples 3 et 4 pour lesquels aucune mort n'est intervenue à 2,10 g/kg. PHARMACOLOGIE 1) L'action anti-athéromateuse a été vérifiée, chez le rat, par la méthode de l'infarcttis du myocarde (avec nécrose dégénérescente) 25 provoqué par 1'isoprotérénol. Cette expérimentation a été entreprise sur 80 rats de souche Wistar (10 témoins traités par 1'isoprotérénol à 0,1 g/kg, 10 témoins ne recevant aucun traitement, 4 groupes de 10 rats chacun étant traité par 1 g/kg de l'un des 4 composés synthétisés, 10 rats traités par le chondroï-30 tine sulfate de sodium forme A et enfin 10 rats traités par le chondroïtine sulfate de sodium forme C). Les rats de chaque lot ont ensuite été tués, la moitié après 24 heures et le reste après 48 heures. L'examen macroscopique immédiat des animaux permettait de noter 35 que les témoins traités par 1'isoprotérénol présentent des artères coronaires plus fines que les témoins non traités et que leur myocarde est ischémique. Les animaux traités par 1'isoprotérénol plus un quelconque des 6 composés testés présentent, à première vue, le même aspect que les animaux n'ayant pas reçu d'isopro-40 térénol. 71 32358 4 2108081 On peut en conclure que les 6 composés testés présentent à première vue une action anti-athéromateuse. 2) Une autre expérimentation portant sur l'agrégation des plaquettes a été effectuée avec les 6 composés de l'expérimen-5 tation précédente. On a pu noter que l'action inhibitrice à l'induction de l'agrégation des plaquettes par le collagène a été obtenue à une dose de 1 mg par ml pour les 4 composés de l'invention ; une dose de 4 mg par ml est nécessaire pour les deux autres composés, c'est-à-dire les formes A et 10 C du chondroïtine sulfate de sodium. En ce qui concerne maintenant l'agrégation induite par les 3 autres facteurs (ADP, adrénaline et fibrinogêne), seuls les 4 composés de l'invention présentent une activité. En conclusion de cette expérimentation, les 4 composés 15 de l'invention ont présenté une activité très supérieure à celle des deux formes de chondroïtine sulfate de sodium déjà connues. POSOLOGIE EN MEDECINE HUMAINE Pour le traitement en médecine humaine, les doses à utiliser 20 par voie orale sont de 1,5 g à 10 g par jour, 10 g par jour représentant line dose d'attaque à employer en début de traitement tandis que 1,5 g peut être considéré comme la dose normale d'administration en traitement suivi. Les composés de l'invention peuvent être présentés sous 25 forme de gélules ou de comprimés comprenant chacun 0,5 g de principe actif associé avec un excipient approprié. Pour l'administration par injection, le composé retenu est lyophilisé dans de petites ampoules qui en contiennent 0,5 g. Les doses à utiliser par voie intrapéritonéale après dissolu-30 tion dans un solvant approprié sont de 0,5 g à 3 g par jour. 71 32358 5 2108081 REVENDICATIONS I) Procédé de préparation des sels d'acides chondroîtines sulfuriques A et C avec la bétaïne ou la pyridoxine consistant à faire réagir l'acide chondroïtine sulfurique choisi sur la base choisie en solution aqueuse à la température ambiante. 5 2) Procédé selon la revendication 1 dans lequel on fait réagir l'acide chondroïtine sulfurique, forme A, sur la bétaïne. 3) Procédé selon la revendication 1 dans lequel on fait réagir l'acide chondroïtine sulfurique, forme C, sur la bétaïne. 4) Procédé selon la revendication 1 dans lequel l'acide chondroï-10 tine sulfurique forme C est traité par la pyridoxine. 5) Procédé selon la revendication 1 dans lequel l'acide chondroïtine sulfurique forme A est traité par la pyridoxine. 6) Nouveaux sels de l'acide chondroïtine sulfurique formes A et C avec la bétaïne ou la pyridoxine. 15 7) Chondroïtine sulfate (forme A) de bétaïne. 8) Chondroïtine sulfate (forme C) de bétaïne. 9) Chondroïtine sulfate (forme C) de pyridoxine. 10) Chondroïtine sulfate (forme A) de pyridoxine. II) Une nouvelle composition thérapeutique pour le traitement des 20 infarctus du myocarde et des affections coronariennes consistant essentiellement en l'un des composés selon les revendications 6 à 10 comme principe actif essentiel, associé avec un excipient approprié. 12) Une composition selon la revendication 11 qui est dosée à 25 0,5 g de principe actif par dose unitaire. 13 ) La composition selon la revendication 12 présentée pour administration par voie orale. 14) La composition selon la revendication 12 présentée pour administration par injection.