Brevet FR2103626A1 — publié le 19720414

La présente invention a pour objet un nouveau dérivé de l'acide diphénylacétique ainsi que son procédé de préparation. L'invention concerne également les applications dudit composé, notamment comme médicament anti-inflammatoire. 5 Plus particulièrement, le nouveau composé de l'inven tion correspond à la formule générale suivante : 10 15 25 o—a CHL-C- 0 -1 d l! . .0 20 et il présente une activité anti-inflammatoire intéressante, notamment du fait qu'il s'avère dépourvu de toxicité et d'autres effets secondaires indésirables. Le procédé de préparation du nouveau composé de l'invention consiste en ce que l'on fait réagir un dérivé, de l'acide 4-diphénylacétique,de préférence le chlorure, avec.la tétramé-thylène-ombelliférone (brevet italien n° 791 170)* La condensation a lieu en présence d'un solvant convenable, tel que le benzène, et d'un hydroxyde alcalin, tel que l'hydroxyde de sodium, à une température comprise entre 20°C et 30°C et pendant une durée comprise entre 3 et 6 heured.- • ' On peut représenter le schéma réaetionnel du procédé de l'invention comme suit : ?0 CHo-C0Cl'+ 71 30950 2 2103626 // v rv CH.-C - 0 d II 0 Le composé faisant l'objet de l'invention présente , comme déjà mentionné ei-dessus, une forte activité anti-inflammatoire que l'on a déterminée suivant les schémas utilisés pour 10 la caractérisation des indications biologiques des médicaments non-stéroïdaux présentant une activité anti-inflammatoire. En outre, la demanderesse a. déterminé la toxicité aiguë et l'activité ulcérogène des composés de l'invention par voie orale et par voie intrapéritonéale chez le rat. 15 On a évalué les activités biologiquesdu diphény1-4-acé- tate de tétraméthylène-ombelliférone (TMUDA) par comparaison avec les activités de certains composés anti-inflammatoires non -sté-roïdaux parmi les plus connus, tels que la phénylbutazone, l'in-dométacine, l'acide acétylsalicylique et, enfin, par comparaison 20 avec l'acide 4-diphényl-acétique, qui entre par sa structure dans la.molécule du nouveau composé de l'invention. On a utilisé les mêmes substances que cellés qui sont citées, ci-dessus comme composés de référence pour l'évaluation de la toxicité et de l'activité ulcérogène du nouveau composé 25 placé sous examen. En vue de mettre en évidence, l'activité du .-. médicament vis-à-vis de plusieurs types d'inflammations, on a employé trois méthodes, à savoir ; 1) Méthode de l'érythème par rayons UV chez le cobaye, selon Winder et coll. (Winder C.V. , Wax J., Burr V., Arch. int. 30 Pharmacodyn.Ther., 116,261-292,1958). A cet effet, on administre aux animaux par voie orale les composés mis en suspension dans de la gomme arabique à 5$, au volume de 1 ml/100g de poids du corps, 1 heure avant ou immédiatement après l'exposition aux rayons. UV. Les résultats ainsi obtenus sont indiqués dans le 35 tableau I suivant . 71 30950 2.103626 Tableau I 5 10 15 Composé Nombre d'animaux Doses, en mg/kg Inhibition de 1'érythème % TMUDA 9 18,75 31,7 9 37*5 48,4 10 75 91,67 Acide diphényl acétique 8 2,5 33,3^ 8 5 73 Phénylbutazone 10 10 15 . 5 15 56,67 8 20 70 Acide acétyl salicylique 10 100 33,4 8 200 96 Indométacine 7 3 9,7 7 6 31 8 12 66 2) Méthode de l'oedème podalique à la carraghénine, évalué chez le rat par l'essai de Winter et coll. (Winter C.A. Risley E.A. and Muss G.W., Proc. Soc. Exp. Biol. - N.Y.-, 111, 544-547; 1963). On a administré par voie orale aux animaux les médicaments, mis en suspension dans une solutioijde gomme arabique à 5f°j en utilisant un volume de 1 ml/100g de poids du corps, une heure avant l'injection de la carraghénine effectuée dans l'aponévrose plantaire droite. On évalue le volume de l'oedème développé en mesurant le volume de la patte au moment de l'injection de 1a. carraghénine et trois heures plus tard. Les résultats ainsi obtenus sont indiqués au tableau II. 71 30950 4 2103626 Tableau II Composé Nombre d'animaux Doses, en mg/kg Inhibition de l'oe dème de la patte, % TMUDA 11 37,5 12,5 11 75 28,4 12 150 66,42 Acide di- phényl«acé • tique 11 25 37,5 11 50 56,8 11 100 62,5 Phény1-bu 12 25 34,62 tazone 12 50 61,72 Acide acétyl- 10 75 38,4 salicylique 10 150 69,3 10 300 78,5 Indométacine 10 2,5 31,9 9 5 48,0 9 10 62,0 3) Méthode de l'arthrite expérimentale par administra-tion d'un adjuvant , selon les modes opératoires proposés par 20 Pearson et Wood (Arth. and Rheum., 2, 440-459,1959) et par Werd et Jones (Arth. and Rheum. 5., 125-126,1962). On a employé dans le cadre de l'invention des rats mâles adultes, à l'abri de germes pathogènes , divisés en 5 groupes de 12 animaux chacun. Un groupe d'animaux , recevant uniquement une injection 25 d'adjuvant, comprend les animaux arthritiques témoins (A.T.); un autre groupe d'animaux, qui ne reçoit uniquement que le véhicule, représente les animaux témoins normaux (T.N.); on traite les trois groupes restants, ayant tout d'abord reçu une injection d'adjuvant avec des doses graduelles du nouveau médicament placé sous examen. 30 On administre les médicaments, mis en suspension dans de la gomme arabique à 5$, quotidiennement par voie orale au volume de 0,5 ml/ 100g de poids du corps pendant une succession de 20 jours. On emploie comme adjuvant le mycobacteriûm butyrique,que l'on a tué par la chaleur ,mis en suspension à 0,5# dans de l'hui-35 le minérale et on l'injecte (0,2 ml) dans l'aponévrose plantaire de la patte arrière gauche. A temps fixes, on détermine les paramètres suivants :poids du corps, température rectale,vitesse de sédimentation globulaire (V.S.G.),unité inflammatoire (U.I.), volume de 1a. patte ayant reçu l'injection (V.P.),pourcentage d'arthritisme et indice d'arthrite (I.A.). Les ^.résultats relevés le 21ème jour après l'inoculation sont indiques dans le tableau III, Tableau III Traitement Dose en mg/kg par injection dans l'aponévrose plantaire Nombre d'animaux Y.S.G. + E.M. * U.I. + E.M. Volume de la patte, ml t E.M. I.A. + E.M. Nombre de rats arthritiques sur le nombre total le rats T.N. A..T. Arthrite ^ TMUDA j . 25 5° , , 100 8 11 9 9 7 0,25 + 0,06 2,85 + 0,49 4,28 + 1,40 1,25 + 0,35 1,03 + 0,22 5,67 + 1,12 31,60 + 2,74 28,22+ 4,06 16,88 + 3,08 14,70 + 1,56 2,27 + 0,10 5,27 + 0,27 4,91 ± 0,29 3,99 + 0,36 3,63 + 0,27 2,82 + 0,64 3,33 ± 0,93 1,78 + 0,62 0,57 + 0,26 0/8 9/11 (81,8#) 6/9 (66,6#) 6/9 (66,6#) 4/7 (b2,B%) T.N. \ A.Té' \ Arthrite•+ 25 50 100 11 10 . 10 9 8 0,13 + 0,05 1,46 + 0,62 1,37 + 0,60 1,05 + 0,21 1,25 + 0,54 9,8 +1,98 66,0 +18,83 98,8 +12,30 78,7 +12,50 44,2 +10,96 2,81 + 0,07 5,33 + 0,40 4,01 + 0,19 4,07 + 0,14 3,57 + 0,13 2,25 + 0,70 1,33 + 0,58 1,40 + 0,58 0,13 + 0,13 0/11 (60 #), 6/10 (60 #) 6/10 (60 #) 4/9 ( 44,4#) 1/8 (12,5#) U> O vO Lrt O ui * E.M. =-erreur moyenne NJ O (Jj a- K> a» 71 30950 6 2103626 De plus, le diphényl-4-acétate de tétraméthylène-ombelli-férone présente une activité antipyr-étique tandis qu'il est inactif" dans le blocage de la douleur provoquée par une stimulation noniceptive des récepteurs de la peau. Le composé de l'invention 5 est, par suite , dépourvu d'effets sur le système nerveux central. L'absence d'effet analgésique, également observée dans nl' essai de contorsion 11 permet de classer le composé de l'invention parmi les produits qui peuvent être considérés comme des médicaments purement anti-inflammatoires. En outre, le nouveau composé 10 de l'invention montre, par comparaison avec les autres agents antiinflammatoires, une dissociation intéressante entre l'activité anti-inflammatoire et les autres effets tels que l'effet ulcérogène et en particulier, toutes les activités toxiques qui peuvent se manifester à l'extrême par la mort. 15 On évalue l'activité ulcérogène chez des rats miles de l'espèce Sprague-Dowley , pesant chacun 100-120g mis au jeûne pendant 24 heures en vue de favoriser' l'apparition des ulcères expérimentaux. On administre les substances, mises en suspension dans de la gomme arabique à 5#,. au moyen d'une sonde gastrique,au 20 volume total de 1 ml par rat. Les témoins reçoivent 1 ml de gomme arabique. Après avoir retiré les estomacs, 4 heures après l'administration des substances, et les avoir remplis avec 10 ml d'air, on les ouvre suivant leur grande courbure. On compte les lésions (ulcères) présentes dans la. portion 25 glandulaire de l'estomac en employant à cet effet "une lentille grossissante. On exprime le degré de gravité des lésions par le nombre moyen d'ulcères par animal (quantité totale d'ulcères/nombre d'animaux) et par le pourcentage de rats ulcéreux. En outre, on fixe un indice thérapeutique, défini par le rapport existant 30 entre la dose ulcérogène minimale et la dose inhibitrice de l'é-rythème par rayons U.V. chez 50# des animaux. La dose ulcérogène minimale est la première dose expérimentale qui est susceptible de produire chez les animaux traités des lésions gastriques statistiquement significatives, en nombre 35 supérieur par rapport au nombre de lésion des animaux témoins (jeûne de 24 heures +1 ml de gomme arabique par rat). L'indice thérapeutique ainsi défini est arbitraire , de même que d'autres indices similaires, et, par suite, on a mutuellement comparé les résultats obtenus avec deux espèces d'animaux 40 différentes. Cela est dû au fait que l'activité anti-phlagistique 71 30950 7 2103626 chez le rat ne se prête pas toujours à une évaluation strictement quantitative. Dans le tableau IV, on a reporté les résultats ainsi obtenus (nombre moyen d'ulcères et pourcentage d'animaux ulcéreux) 5 par suite de l'administration de doses croissantes des divers produits examinés. Tous les composés produisent des lésions ulcéreuses chez le rat à jeun. Le nombre moyen d'ulcères par rat constitue le paramètre le plus satisfaisant pour évaluer la gravité des lésions ulcéreuses. Cependant, une bonne proportionnalité n'existe 10 pas toujours entre la dose et l'effet obtenu. Cette proportionnalité n'est satisfaisante que pour certains composés (Indometacine et Phénylbutazone) et ne l'est pas pour d'autres composés, tels que l'aspirine. Dans ce dernier cas, après avoir atteint la valeur la 15 plus élevée, l'activité ulcérogène décroît au fur et à mesure que l'on augmente la dose administrée. L'indométacine et la phénylbutazone sont susceptibles de produire plusieurs ulcères par animal (nombre moyen d'ulcères élevé) , tandis que le composé de l'invention (TMUDA) présente, même aux doses élevées soumises à l'essai 20 un pouvoir ulcérogène inférieur à celui des composés précités. Dans le tableau V, on a indiqué les doses ulcérogènes minimales chez le rat, l'activité anti-phlogistique chez le cobaye (DE,_0) et les indices thérapeutiques relatifs. Les résultats mentionnés dans ledit tableau indiquent 25 clairement que les deux activités, à savoir l'activité anti-phlo-gistique et l'activité ulcérogène , ne sont pas étroitement liées, contrairement à ce que l'on admettait jusqu'à présent. Si l'on considère que pour les principaux produits anti-inflammatoires examinés, les lésions gastriques bien connues ap-30 paraissent aux doses strictement anti-inflammatoires et que les indices thérapeutiques, confirmés par les résultats cliniques, sont inférieurs ou légèrement supérieurs à 1 dans le cas de la phény lbutazone, le diphényl-4-acétate de tétraméthylène-ombelli-férone devrait se révéler moins dangereux du point de vue gastri-35 que chez l'hommê. En fait, son indice thérapeutique est clairement satisfaisant. Dans le tableau IV ci-après on a indiqué llactivité ulcérogène des produits anti-inflammatoires non-stéroïdaux, tandis que dans le tableau V, on a indiqué les doses ulcérogènes minima-40 les chez le rat, lractivité anti-phlogistique chez le cobaye 71 30950 8 2103626 (DE^q) et les indices thérapeutiques relatifs. Tableau IV Traitement Dose,mg/kg par voie orale Nombre de rats Nombre moyen d'ulcères/ rat Rats ulcéreux % Témoins 93 1, 04 57,5 Indométacine 1, 56 6 0, 66 50,0 3, 12 12 2, 16 83,5 6, 25 12 8, 00 91,5 12, 5 16 9, 15 100,0 25, 0 10 8, 40 90,0 5o, 0 10 13, 40 100,0 Phénylbutazone 25, 0 6 1, 16 83,0 50, 0 12 2, 08 83,5 100, 0 17 3, 74 88,0 200, 0 18 10, 20 95,0 Aspirine 6, 25 6 2, 16 100,0 12, 5 6 2, 81 100,0 25, 0 6 3, 00 83,5 50, 0 15 4, 00 100,0 100. 0 18 6, 55 100,0 200, 0 16 6, 95 100,0 400, 0 6 5, 35 67,0 800, 0 5 5, 80 100,0 EMUDA 200 400 800 1200 6 6 12 4 2, 1, 1, 5, 00 î6 77 00 83,5 83,5 58,0 100 Tableau V Composé Dose ulcérogène minimale chez le rat mg/kg, par voie orale DE,-,, chez 5U le cobaye mg/kg,par voie orale Indice " thérapeutique Indométacine 3,125 - 6,25 6,5 0,4b - 0,96 Aspirine 12,5 125,0 0,1 Phénylbutazone 50 20 2,5 TMUDA 400-1200 31 2,9 - 38,7 35 On effectue les essais de toxicité aiguë en employant comme animal d'essai le rat adulte de l'espèce Alal (variété suisse), des deux sexes, ayant un poids initial moyen de 20 g+ 2g, demeurant à jeûn pendant deux heures, placé pendant quelques jours dans les conditions de la stabulation. Pour chaque détermination 40 de la valeur DL^q, on emploie trois niveaux de doses, administrées 71 30950 9 2.103626 chacune à 10 sujets (5 mâles + 5 femelles) : on administre les produits par voie orale (au moyen d'une sonde gastrique) ou par voie endopéritonéale (e#p.) de toute manière véhiculés dans une par pseudo-solution de gomme acacia à 5# dans l'eau, au viume de 5 ml/ 5 100 g de poids du corps. On traite statistiquement les résultats cumulatifs concernant le pourcentage de mortalité par la méthode des probits (Finney D.J., Probit Analysis, 1952), afin de calculer la et les limites de sécurité correspondantes pour P = 0,05. 10 Les résultats indiqués dans le tableau VI montrent que le nouveau composé de l'invention est bien supporté par les animaux même aux très hautes doses (7,5gfcg de poids du corps). Tableau VI 15 20 25 Composé DL^q mg/kg (limites de sécurité ï>= 0,05) voie orale e.p. TMUDA 7500 (supportée) 2812 (2108-3749) Acide diphényl acétique 382,8 (234,1-626) 490,9 (441,6-539,7) Phénylbutazone 1029 ( 882,5-1199) - Acide acétylsa cylique li- 999,7 ( 885,6-1307) Indométacine 182,8 (145 ,9-229,1) L'exemple unique suivant est destiné à illustrer l'invention avec plus de détails, sans nullement la. limiter dans son 30 cadre et son esprit. EXEMPLE - Dans un ballon de 3 litres, on verse, en le secouant rapidement, 24,4g d'hydroxyde de sodium et 310 ml d'eau. A la solution ainsi constituée, on ajoute 121,09 g de tétraméthylène-35 ombelliférone et on secoue le mélange jusqu'à ce que l'on obtienne une solution complètement brune. On y ajoute alors 230 ml de benzène et, toujours en- secouant rapidement, on ajoute goutte à goutte une solution de 129,19 g de chlorure de 4-diphéhyl-acétyle dans 510 ml de benzène. 40 On poursuit les secousses rapides pendant'4 à 5 heures 71 30950 10 2103626 à la température ambiante. Au fur1 et à mesure que 1a. couleur devient plus claire, on observe "la formation d'un précipité de couleur crème. A la fin de l'agitation, on dilue l'ensemble avec 5 5 litres de benzène, on le secoue de nouveau et on lave la solution benzénique rouge-orange, séparée, avec 300 ml d'une solution de bicarbonate de sodium à 5#, puis avec une solution de chlorure de sodium jusqu'à neutralité. On sèche le produit sur du sulfate de sodium anhydre, on évapore le solvant et on ob-10 tient 240"g de produit brut. On redissout le dit produit dans de l'acétate d'éthyle chaud et on y ajoute de l'éther de pétrole (proportion 3:1)• Après avoir laissé reposer le mélange , ainsi obtenu, à la température ambiante, on obtient 184 g du produit brut; 15 pt. F. « 146-148QC, rondement 80#. On contrôle la pureté du composé par voie chromâtographique sur du gel de silice (mis dans le commerce sous le nom de TLC)^éluant : benzène-essence-acétate d'éthyle (25:5:70). On décèle une seule tache soit/par la lumière de Wood^ 20 soit par pulvérisation d'une solution diluée de permanganate de potasse. En spectroscopie I.R. (KBr) , on observe les bandes suivantes : 700,750, 825, 1115, 1725, 1780 cm"1. 25 En spectroscopie'U.V. (éthanol à 95#) les résultats sont les suivants : ^ max= 250 m/U = 28 5°0)î ^ max= 511 ra/u (£ = 14 000) 71 30950 n 2103626 REVENDICATIONS 1 - Procédé pour la préparation du diphényl-4-acétate de tétraméthylène-ombelliférone, ledit procédé étant caractérisé en ce qu'on fait réagir la tétraméthylène-ombelliférone avec un 5 dérivé de 1 'acideitHÏjphénylacétique en présence d'un solvant convenable, tel que le benzène. 2 - Procédé selon 1a. revendication 1, caractérisé en ce que le dérivé d'acide 4-diphénylacétique est le chlorure, et en ce qu'on effectue la réaction en présence d'un bydroxyde alcalin, 10 notamment l'hydroxyde de sodium. 3 - Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce qu'on effectue la réaction à une température comprise entre 20 et 30°C pendant une durée comprise entre 3 et 6 heures. 15 4 - A titre de produit industriel nouveau , le diphé- nyl-4-a.cétate de tétraméthylène-ombelliférone. 5 - Compositions pharmaceutiques renfermant le composé selon la revendication 4, en association avec un véhicule pharmaceutique convenable. 20 6 - Formes pharmaceutiques en vue de l'administration des compositions selon la revendication 5 par voie orale et paren-térale.