Brevet FR2081402A1 — publié le 19711203

La présente invention con-cerne un nouveau médicament actif sur les virus du groupe Picorna, le l,2-bis-(5-méthoxy-2-benzimidazolyl)-l,2 éthanediol. Le composé chimique utilisé comme médicament selon l'invention répond a la formule de structure Formule A I1 peut être préparé par un procédé décrit en détails dans J. Org. Chem., 26 462-7(1961). Le 1,2-bis-(5-méthoxy-2-benzimidazolyl)-1,2-éthanediol est une substance antivirale active en tant qu'agent curatif ou plus spécialement agent prophylactique ou préventif sur les petits virus RNA non lipidiques, entre autres les virus Polio, Coxsackie, Echo et les virus Rhino. L'activité antivirale du médicament selon l'invention s'accompagne d'une faible toxicité conduisant å un haut indice thérapeutique. Le médicament selon l'invention est, de préférence, administré par voie orale, spécialement sous forme de comprimés à libération prolongée. On a constaté que le composé de formule A ci-dessus était actif dans l'essai au tube vis-à-vis de différentes souches de virus Rhino avec un indice chimiothérapeutique supérieur ou égal a 100 ; l'indice chimiothérapeutique (ICT) est le rapport de la toxicité à l'activité, c'est-à-dire le rapport de la dose maximale non toxique à la concentration minimale active. L'essai au tube mentionné ci-dessus est l'essai préliminaire d'orientation sélective sur culture primaire de tissu effectué dans des cuvettes d usage unique en matière plastique ou dans des tubes de culture de tissu. Le tableau I ci-après rapporte le spectre d'activité antivirale du composé A ; on constatera que ce composé présente une haute activité sur les 55 souches de virus de Rhino soumises aux essais.Il est également actif sur les virus Coxsackie A-9, B-3 et Polio I, II et III. Le tableau II ci-après rapporte l'activité chimiothérapeutique du composé. On a infecté des cellules de culture de tissus de la souche de cellule Wistar WI-38 par le virus Rhino 1 A et on a traité à des moments différents par des concentrations de 1 ug/ml à 10,0 /ug/ml du composé de formule A. On peut constater que le composé peut être introduit tardivement, 80 heures après l'infection, et qu'il présente encore une activité antivirale même lorsque l'effet-viral cytopathogénique (ECP) a progressé au stade 3+. Le composé présente également une bonne activité partielle pendant 96 heures à 0,1 /ug/ml. Les stades de l'effet cytopathogénique sont~exprimés par une échelle dans laquelle le coefficient zéro indique l'absence d'effet cytopathogénique, le coefficient 1+ indique un effet cytopathogénique de 25 %, 2+ un effet cytopathogénique de 50 %, 3+ un effet cytopatüogénique de 75 % et 4+ un effet cytopathogénique de 100 %. TABLEAU II Activité chimiothérapeutique du composé de formule A vis-à-vis du virus Rhino 1 A Délai d'introduction du ECP du témoin Concentration active minimale composé -après le virus du médicament 8 heures 0 1 g par ml 24 houres 1 10 g par ml 32 heures 1+ 48 heures 2+ 72 heures 3 " 96 heures 3 - 4+ " On a étudié la biorétention chez ies souris du compose de formule A pour déterminer la concentration du composé dans le sérum de souris auxquelles on a administré une dose orale unique de 500 mg/kg, mesurée par l'activité antivirale vis-a-vis de plusieurs virus.Les échantillons de sérum ont été prélevés 2 h, 4. h, 6 h ét 24 h après administration du composé et examinés dans leurs effets sur le virus Rhino I A dans des cellules de culture de tissus de la souche de cellule Wistar W-38. Les virus Polio I, II, III et Coxsackie A-9 et B-3 ont été introduits dans des cellules de rein de singe (RS). Les échantillons de sérum des souris traitées et les échantillons témoins ont été essayés sur le virus Rhino I A. Les virus énumérés dans la moitié inférieure du tableau ont été exposés à l'échantillon de. sérum de souris traitée prélevé au bout de 2 heures. Le compose présent dans le sérum est actif sur tous les virus, ce qui indique que le composé initial a été absorbé et reste aussi actif. TABLEAU III Etude de la biorétention chez les souris du composé de formule A. Délai 2 h 4 h 6 h 24 h Sérum de souris traitées sur Rhno 1A 1:320 1:80 1:20 t1:2Q Sérum de souris normales (témoin) C1:20 Composé de formule A (témoin) actif jusqu'à 0,1 /ug/ml Polio I 1:100 Polio II 1:400 Polio III 1:200 Coxsackie A-9 1:100 Coxsackie B-3 - 1:100 Rhino lA 1:320 Rhino 42 1:320 Va ccinia Adeno-4 t1:100 Dilution maximale du sérum conduisant à une inhibition complète de l'effet cytopathologique. On a étudié la biorétention chez les singes du composé de formule A pour déterminer la dose du composé dans le sérum de deux singes auxquels on a administré une dose unique de 100 mg/kg. Les échantillons de sérum ont été prélevés avant administration du composé et a des délais de I h, 2 h, 4 h et 6 h après administration ; on a étudié effet de ces échantillons de sérum sur les virus Rhino 1 A et Coxsackie A-9. Les résultats obtenus indiquent que le composé de formule A est absorbé et que dans un délai d'une heure, on peut le déceler à des concentrations antivirales nettes dans le sérum. La période (durée au bout de laquelle on atteint la moitié de la concentration maximale) est de 4 h. TABLEAU IV Essai de biorétention du composé de formule A chez les singes Rhino 1A Coxsackie A-9 Délai Singe n 1 Singe n 2 Singe na 1 Singe n 2 oh * Dilution maximale du sérum conduisant à une inhibition complète de l'effet cytopathologique. L'activité antivirale et la réponse sérologique des chimpanzés dans .la lutte contre la souche Na 30 de virus Rhino ont été déterminées par infection des chimpanzés au moyen de 100 TCID5O (dose infectieuse de culture de tissu, 50 % du point fiual) de souche N 30 de virus Rhino. On a administré aux animaux sous anestésie l ml de produit par chimpanzé, 0,5 ml par voie intranasale et 0,5 mi par nébolisation. Le composé de formule A a été administré 3 fois par jour pendant 4 jours : une administration avant l'infection et ll admihistrations après l'infection.Toutes administrations ont été faites par voie orale a des doses de 100 mg/kgljour (25,25 et 50 mg/kg). On a prélevé des échantillons de sérum avant infection et traitement. on a également effectué des prélèvements dans la-gorge une fois immédiatement avant l'infection, une fois'après l'infection, p-uis quotidiennement pendant 10 jours apres l'infection. Sur un groupe de 6 chimpanzés, on en a traité 3. TABLEAU V Réponse sérologique des chinpanzés à la lutte contre le Rhinovirus N 30 Chimpanzé N titres du sérum vis-à-vis de 50 TCID 50 présérum 3 semaines 5 semaines traité par le composé de formule A I 2 3 4 7lt; 1 : 2 1:32 1:16 5 6- t 1:2 1:2 Antisérum spécifique Rhinovirus N 30 = > 1 : 1.280 Nouveaux animaux titres-du sérum a 1:8 b 1:16 c 41:2 d e 41:2 41:2 g l:ló La réponse sérologique des chimpanzés à la lutte vis-à-vis de la souche N 30 de virus Rhino est indiquée dans le tableau V Les rapports indiquent la dilution qu'on peut réaliser sur le sérum en conservant cependant une activité de neutralisation du virus. I1 est clair que les animaux témoins ont une plus forte teneur en anticorps et que, par conséquent, ils ont répondu à une infection. Les résultats obtenus montrent également que deux des trois animaux traités présentent des titres de neutralisation du sérum élevés vis-à-vis de la souche N 30 de virus Rhino trois semaines après l'inoculation du virus. Le troisième animal a un passé de faibles conversions du sérum avec plusieurs autres antigènes.Tous les animaux traités par le composé de formule A ne présentent qu'une conversion nulle ou faible du sérum à la souche N 30 de virus Rhino au prélèvement de sérum de 3 semaines. Mais les trois animaux présentent une augmentation nette du titre de neutralisation au prélèvement de 5 semaines. Les titres de neutralisation du sérum à 3 semaines pour les animaux traités sont en très banne relation avec les chiffres d'isolement du virus rapportés dans le tableau VI. Le chimpanzé N 1 qui ne présente pas de titre décelable à 3 semaines ne porte pas non plus de virus décelable dans ses prélèvements de gorge pendant 7 jours après la fin du traitement. Le chimpanzé n 2 qui présente un très faible titre de sérum à 3 semaines porte le premier virus décelable plusieurs jours après qu'on a cessé d'administrer le composé.Le chimpanzé Na 3 qui présente un titre à 3 semaines de 1 : 8 porte le premier virus 6 Jours après la fin du traitement. Le fait que tous les animaux traités présentent de faibles titres 3 semaines après inoculation et des titres nettement plus élevés à 5 semaines montre que les titres de sérum sont probablement dus à une réinfection des animaux traités par les animaux non traités. Tous les animaux utilisés dans l'essai ont été logés ensemble, dans une salle unique,bien que dans des cages individuelles.Les autres résultats rapportés dans le tableau V.montrent qu'un certain nombre de nouveaux animaux qui n'ont pas été utilisés dans l'essai au virus Rhino N" 30, et chez lesquels on a prélevé des échantillons de sérum au même moment que le prélèvement de 5 semaines sur les animaux infectés par le virus,présentent également des titres de neutralisation à ce virus. Comme plusieurs de ces animaux ont été soumis au préalable à des essais et ont été trouvés négatifs pour les anticorps vis-à-vis du virus N" 30 Rhino, il est clair qu'une infection par ce virus s'est étendue dans toute la colonie des primates. Les résultats rapportés dans le tableau VI montrent que les chimpanzés non traités sont tous sensibles à une lutte de 100 TCID50 de la souche N 30 de virus Rhino. Ces chiffres montrent également que l'on ne peut isoler aucun virus des animaux traités jusqu'au 9ème jour après l'installation du virus et jusqu'au 6ème jour apres le dernier traitement par le composé de formule A. Le virus isolé des chimpanzés traités reflète une infection tardive provoquée par une contagion secondaire provenant des animaux non traités-au mont où le médicament s'est ép'uisé dans le groupe traité.Le phénomène est clair car le fait qu'on n'ait pas pu isoler de virus du groupe traité avant le jour 9 indique que l'on n 'a pas atteint deErotection par anticorps. Les études de neutralisation de sérum effectuées avec les virus isolés dans le tableau V montrent qu'il s'agit en fait du virus Rhino Na 30. L'expérimentation sur la pathogénèse, la prévention et le traitement des infections humaines par Rhinovirus a été handicapée faute d'un animal d'expérience susceptible de réactions semblables à celles de l'homme. Dick, dans l'étude "Experimental Infection of Chimpanzees with Human Rhinovirus (types 14 and 43, ProcSo1. Exp. Biol. med., 127, 1079-1081, (I968)a montré que des souches de Rhinovirus humain pouvaient infecter des chimpanzés, de sorte que des agents antiviraux prometteurs pourraientetre soumis à des effets d'efficacité in vivo. Dans les exemples ci-dessus, le composé a été administré par dispers-ion dans un véhicule.liquide. Cependant, le composé actif peut être administré sous la forme de granulés, de comprimés, de capsules, d'élixirs, d'émulsion, et d'autres formes d'administration bien connues. Les -résultats obtenus dans les exemples qui précèdent mettent en évidence une activité marquée du 1,2-bis-(5-méthoxy-2-benzimidazolyl)-1,2- éthanediol vis-à-vis des virus spécifiés, en particulier les virus Rhino. Le comDA de formule A présente, par exemple, un spectre d'activité antivirale étendu vis-à-vis des virus Rhino, car il présente une forte activité sur les 55 souches de virus soumises aux essais.Par conséquent, tenu compte du spectre d'activité vis-a-vis des virus Rhino, de l'inhibition de l'effet cytophatologique, de l'activité chimi@thérapeutique, des bons effets de biorétention chez les souris et les singes et, en particulier, de la réponse sérologique et de l'activité antivirale chez les chimpanzés, le composé de formule A constitue un médicament utile pour le traitement des infections provoquées par ces virus chez l'homme et les animaux. T A B L E A U I Indice d'activité chimiothérapeutique du composé de formule A+ sur plusieurs souches de virus. Souche Rhino 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Composé #100 #32 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 Souche Rhino 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 Composé #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 Souche Rhino 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 Composé #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 Souche Rhino 49 50 51 52 53 54 55 Composé #100 #100 #100 #100 #100 #100 #100 WI-38 RS Polio I #100 #100 Polio II #32 #100 Polio III #100 #100 RS RB Coxsackie A-9 #100 Coxsackie B-3 #10 RS : rein de singe ; RB # rein de b@euf primaire + :la concentration maximale essayée est de 1 mg/ml (l'indice #100 indique que le composé n'est pas toxique à 1 mg/ml et qu'il est actif à 10 microgramme/ml. T A B L E A U VI Activité antivirale du composé de formule A vis-à-vis du Rhinovirus N 30 chez les chimpanzés. Isolement du virus à partir des prélèvements de gorge des chimpanzés. EPOOUE DU PRELEVEMENT Chimpanzé Traitement avant O h Jour 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 après (TCID50 par ml) 1 100 mg/kg/jour 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 " 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 102,0 3 " 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 102,5 101,5 4 Néant 0 0 102,0 104,0 103,0 102,0 101,5 101,5 102,0 101,5 101,0 0 5 Néant 0 0 102,0 103,5 102,5 102,5 0 0 0 101,0 101,0 0 6 Néant 0 0 102,5 104,0 103,0 102,5 102,0 101,0 101,5 101,5 0 102,0 REVENDICATIONS 1. Nouveau médicament utile notamment pour la prévention et le traitement des infections provoquées par les virus du groupe Picorna, en particulier les virus Rhïno, Coxsackie, Echo et Polio, caractérisé en ce qu'il consiste en 1,2 bis-(5-m6thoxy-2-henzimidazolyl)-1,2-éthanediol 2 Compositions thérapeutiques contenant comme constituant actif le 1,2-bis-(5-m6thoxy-Z-benzimidazolyl)-1,k2=éthanediol 3. Formes d'administration des compositions thérapeutiques selon la revendication 2, caractérisées en ce qu'olles omsïstent en granulés, comprimés, capsules, élixirs et émulsions, en particulier comprimés-retard. 4. Nouveau médicament vétérinaire, utile notamment comme antiviral, en particulier contre les virus Rhino, Coxsackie, Echo et Polio, caractérisé en ce qu il consiste en 1,2-bis-(5-méthoxy-2 benzimidazolyl)-1,2 éthanediol.