Brevet FR2096983A1 — publié le 19720303

la présente invention a pour objet, à titre de médicaments nouveaux, les extraits d'espèces végétales qui sont caractérisés par leur nature polyflavanique, éventuellement hétérosidique, leur poids moléculaire compris entre 500 et 5 3 000 environ, et leur solubilité dans l'eau. Elle concerne également les compositions pharmaceutiques administrables par voie orale, parentérale ou rectale contenant de tels principes actifs, seuls ou associés à d'autres principes actifs et notamment des tonicardiaques, des sédatifs et des tranquil-10 lisants. La demanderesse a en effet constaté que les extraits d'espèces végétales, quels que soient la nature de la source végétale et le procédé d'extraction utilisé, ont des propriétés coronarodilatatrices et vasodilatatrices périphériques, dès 15 lors que ces extraits remplissent les trois conditions énoncées ci-dessus. En d'autres termes, pour disposer d'un médicament coronarodilatateur et vasodilatateur, il suffit d'extraire une espèce végétale, et de vérifier sur l'extrait, avant purifica-20 tion, que celui-ci a une nature polyflavanique, éventuellement iiétérosidique, que son poids moléculaire est compris entre 500 et 3 000 environ, et qu'il est soluble dans l'eau. Toutes ces opérations sont à la portée de l'homme du métier. Parmi les espèces végétales qui se prêtent plus 25 particulièrement à la mise en oeuvre de l'invention, on peut mentionner, à titre non limitatif : Poterium spinosum (rosacées), Schinopsis lorentzii, Acacia mollissima, Uncaria gambir, Rhus coriara, etc... En ce qui concerne, par exemple, Poterium spinosum, arbuste épineux de la famille des rosacées, il y a 30 lieu de noter que seules ont été décrites jusqu'à présent les propriétés hypoglycémiantes que certains auteurs ont d'ailleurs attribuées à l'acide (3-glycyrrh.étinique, à ses sels ou esters. Les procédés d'extraction font appel à des solvants tels que l'eau, le méthanol, le îT-butanol, etc... ou à des 35 mélanges de ceux-ci. Dans le cas de Poterium spinosum, on obtient les meilleurs rendements par extraction aqueuse ou méthanolique de l'écorce de la racine de cet arbuste. On peut aussi opérer 70 27189 2 2096933 line extraction liquide-liquide faisant intervenir -un mélange eau-N-butanol comme solvant d'extraction. Selon le procédé adopté, le rendement en extrait brut peut varier entre 15 et 23 % de la drogue (à partir de l'écorce de la racine)0 5 Les extraits acueux ou méthanoliques peuvent être purifiés jusqu'à obtention des principes actifs faisant l'objet de la présente invention par différents procédés : les meilleurs sont ceux qui consistent soit à faire passer l'extrait aqueux ou méthanolique sur gel vendu dans le commerce sous 10 la dénomination Sephadex, soit à précipiter les principes actifs à partir d'une solution méthanolique par un mélange d'acétone et d'éther éthylique. D'autres procédés, tels que l'utilisation de résines échangeuses d'ions, le relargage au sulfate d'ammonium ont été employés mais avec de moins bons 15 rendements. C'est la purification sur gel Sephadex qui a été mise en oeuvre pour isoler les principes actifs et en déterminer les caractéristiques physico-chimiques et la structure, comme cela est décrit plus loin. Les exemples suivants illustrent l'extraction de 20 principes particulièrement actifs, à partir d'écorce de racines de Poterium spinosum. Exemple 1 Des écorces de racines de Poterium spinosum finement broyées (100 g) sont extraites par 1 litre d'eau à ébullition 25 pendant 30 minutes. Après filtration, le résidu végétal est soumis à une deuxième extraction dans des conditions identiques. Après séparation du végétal épuisé, les deux phases aqueuses réunies sont évaporées sous vide (15 mm de mercure) 30 à une température n'excédant pas 50°C. Le résidu sec ainsi obtenu, se présente sous la forme d'une poudre brun-rouge. Rendement : 25 à 30 $. Purification : Il est possible d'obtenir des polyflavanes particulièrement actifs en opérant de la façon suivante î 35 100 mg de la poudre obtenue ci-dessus sont mis en solution dans 1 à 2 ml d'éthanol à 60 ^ et chargés sur une colonne de gel de Sephadex G- 25 de 1 cm de diamètre et 20 cm environ de hauteur utile (soit 5 g de gel). Par élution par de 70 27189 3 2096983 l'éthanol à 60 on obtient -une zone très colorée à la limite d'exclusion du gel. Cette fraction comprise entre le 6ème et le Sème ml, après, évaporation à sec sous pression réduite, donne 35 mg environ de polyflavanes particulièrement actifs. 5 Exemple 2 100 g d'écorces de racines de Poterium spinosum finement broyées sont épuisées à la température ambiante par deux extractions successives de 1 litre de méthanol. Après réunion des deux phases méthanoliques et évapo-10 ration du solvant sous pression réduite, à une température n'excédant pas 50°C, on obtient 20 à 25 g d'une poudre brun-rouge . Gelle-ci est reprise par 500 ml d'eau. Après filtration de l'insoluble, la solution aqueuse 15 est évaporée dans les mêmes conditions que ci-dessus et donne 1 5 à 20 g de produit brun-rouge riche en polyflavanes„ Purification : Elle s'effectue selon le procédé décrit dans l'exemple 1. Rendement : 50 à 60 fo„ Avec Poterium spinosum, on obtient ainsi un hétéroside 20 polyflavanique, hydrosoluble, ayant un poids moléculaire de 2000 à 3000 environ. Plus précisément, les caractéristiques de l'extrait sont les suivantes : Solubilité : le produit est soluble dans l'eau, le méthanol et 25 les alcools à bas poids moléculaire, faiblement soluble ou insoluble dans l'acétone, le benzène, l'éther, les solvants chlorés» Spectre d'absorption dans l'ultra-violet et le visible Solvant : Méthanol - Eau distillée - Acide chlorhydrique (25/ 75/0,1). 30 On note deux maximum d'absorption aux longueurs d'onde de 279 et 440 nm et deux minimum aux longueurs d'onde de 258 et 410 nm. Spectre d'absorption dans 1'infra-rouge (pastille KEr à 2 fo) Position des bandes en cm"' : 780, 825, 880, 1070, 1110, 1290, 35 1390, 1450, 1530, 1620, 1740, 2860, 2940, 3420. Poids moléculaire : (filtration sur gel Sephadex G- 25 médium)» Une colonne de 1 cm de diamètre et 20 cm de hauteur est remplie avec 5 g de gel G- 25 ayant gonflé préalablement une nuit dans 70 27189 4 2096983 le solvant suivant î Ethanol - eau (60-40). La colonne est étalonnée avec du Jaune Dextran (PM 20 000) et de la Vitamine B 12 (PM 1 357). La moyenne des volumes d'exclusion obtenus permet de penser qu'il s'agit d'un produit d'un poids 5 moléculaire de 2 000 à 3 000. Réactions d'identification ï 1) Réactions des tannins : les réactions mentionnées ci- dessus sont positives. - précipitation par la gélatine, 10 - précipitation par les aminés et les amides, - précipitation par les sels : carbonate d'ammonium, iodure de potassium, acétate de plomb basique, - réactions colorées avec les sels ferriques. 2) Réactions d'identification_destannins catéchiques î 15 positives. - réaction au formol chlorhydrique : précipité abondant, - réaction à l'eau de brome : précipité jaune intense et surnageant incolore, - pas de trouble ou précipité avec le sulfure d'ammonium. 20 3) Après hydrolyse une quantité notable de glucose a pu être mis en évidence. Bien entendu, les méthodes de détermination de caractéristiques explicitées pour l'extrait d'une plante particulière sont applicables aux autres extraits, et permettent d'effectuer 25 le choix des substances pharmacologiquement intéressantes. \ La toxicité aiguë a été déterminée chez la souris par voie intraveineuse et intrapéritonéale : elle a été calculée selon la méthode de MILLER & TAINTER en décomptant la mortalité 48 heures après l'administration du produit en solution dana le 30 sérum physiologique. Les résultats sont les suivants : DL 50 voie intraveineuse : 100 mg/kg environ DL 50 voie i.p. r 150 mg/kg environ. Les intéressantes propriétés des différents lots de 35 produits se sont manifestées à l'égard du système cardio-vasculaire notamment le débit coronarien, la vasomotricité périphérique et la fragilité capillaire. L'appréciation de l'action sur le débit coronarien a 70 27189 5 2096933 été faite sur coeur isolé de lapin (lapin de 600 g environ) maintenu en fibrillation, selon la technique de Langendorff modifiée par Charlier. Sur les coeurs fibrillants, on a constaté avec les 5 produits faisant l'objet de la présente invention une corona-rodilatation très marquée, jusqu'à 16 fois supérieure à celle provoquée par une même dose de papavérine prise comme substance de référence. 15- a été observé également une action plus soutenue lorsque la perfusion cesse. 10 Sous chlorure de baryum, ces produits sont capables de lever le spasme au même titre que la papavérine..Ils sont par contre sans action sur le spasme de l'iléon de cobaye induit par la même substance, ce qui semble montrer leur activité élective sur la motricité vasculaire coronaire. 15 La vasomotricité périphérique a été étudiée par perfusion du train postérieur de rat. Le produit est injecté par la partie 'distale de 1'aorte. Le débit de la circulation de retour est mesuré sur la veiné cave. Dans ce domaine également, ces produits ont développé une action 10 à 16 fois supérieure 20 à celle de la papavérine prise comme substance de référence. La 'pression artérielle du rat a été mesurée après administration du produit par voie intraveineuse : paradoxalement, elle ne baisse pratiquement pas, le rythme cardiaque ne varie pas. 25 Les premiers essais cliniques obtenus permettent de confirmer les résultats de l'expérimentation animale, 1°) dans les affections des coronaires et 2°) dans les troubles de la circulation périphérique. Aucun phénomène secondaire indésirable n'a pu être objectivé : 4 à 30 5 gélules à 10 mg de principe actif sont prises quotidien nement . Outre les gélules indiquées ci-dessus, les principes actifs peuvent être présentés sous toutes les formes pharmaceutiques convenables. La posologie dépend, bien entendu, de l'extrait 35 utilisé et de la gravité de l'affection, ainsi que de l'état du patient. 70 27189 6 2096983 REYENDXCATIOHS 1. A titre de médicaments nouveaux, les extraits d'espèces végétales qui sont caractérisés par leur nature polyflavanique, éventuellement hétérosidique, leur poids 5 moléculaire compris entre 500 et 3 000 environ, et leur solubilité dans l'eau. 2. Médicaments selon la revendication 1, caractérisés en ce que les extraits sont obtenus à partir d'écorces de Poterium spinosum, Schinopsis lorentzii, Acacia mollissima, 10 Uncaria gambir, Hhus Coriara. 3. Médicaments selon la revendication 2, caractérisés en ce que les extraits sont obtenus par extraction aqueuse ou méthanolique d'écorces Aesdites plantes, et sont purifiés soit par filtration sur gel Sephadex, soit par précipitation 15 par un mélange à parties égales d'acétone et d'éther éthylique. 4. Compositions pharmaceutiques à action coronarodila-tatrice et vasodilatatrice périphérique, contenant au moins un médicament selon l'une des revendications 1 à 3, et administra-bles par voie orale, parentérale ou rectale. 20 5. Compositions selon la revendication 4, caractéri sées en ce qu'elles contiennent en outre d'autres substances médicamenteuses telles que des tonicardiaques, des sédatifs ou des tranquillisants, 6. Procédé d'obtention de principes actifs à action 25 coronarodilatatrice et vasodilatatrice périphérique, caractérisé en ce qu'on extrait par solvant une espèce végétale, on vérifie que cet extrait est de nature polyflavanique, éventuellement hétérosodique, a un poids moléculaire compris entre 500 et 3 000 environ et est soluble dans l'eau, et on purifie l'extrait 30 satisfaisant à ces conditions.