Brevet FR2100678A1 — publié le 19720324

i 2100678 Cette invention concerne un agent thérapeutique nouveau et utile constitué par une- dibenzoxëpine. Plus particulièrement,. elle concerne une nouvelle méthode thérapeutique pour combattre les états inflammatoires et poux- modifier les réponses immunitaires 5 de l'organisme dans les états leucémiques et hyper J.ymphocytair es & - - à l'aide de ce composé sous la forme de l'un de ses isomères. " . 6> v Dans le passe, on savait que l'on pouvait-obtenir le dichlorhydrate de 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)~6H-dibenz j/piS/ oxépine sous la forme d'un mélange ci s-tr ans 10 lorsqu'on les synthétisait en partant de 2-chlorodibenz ^),e/ oxépin-11 ( 6H) -one et de bromhydrate de bromure de triphényl / 3-(l-pipérazinyl)propyl/ phosphonium, en passant par une réaction de Wittig modifiée, selon le mode opératoire décrit par J.R. Tretter dans le Brevet E.U.A. N° 3.354.155. Ce produit- a quelques 15 propriétés psychotropes faibles et est utile comme intermédiaire chimique dans la préparation d'autres agents psychothérapeutiques encore. Dans la demande de Brevet E.U.A. K° 609.345, déposée le 16 janvier 1967, il est décrit une méthode de séparation de l'isomère dis pur et du composé trans contenus dans le mélange 20 précité.L'isomère cis pur est utile comme intermédiaire conduisant à l'obtention du dérivé cis-N-(B-hydroxyéfhvl) par correspondant, qui est connu pour être actif comme tranquillisant (par exemple, voir Brevet Britannique N°l.085.405). Toutefois, 1'isomère-ois ainsi isolé ici n'a aucune propriété pharmacologique importante en soi, 25 Selon la présente invention, on a été désormais très surpris de trouver que l'isomère trans pur de la 2-cIiloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène) -6H-dibenz/ b,e/-oxépine et sas sels d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptables constituent un groupe plutôt unique d'agents thérapeutiques utiles • lorsqu'on les- utilise 30 dans le domaine de la thérapeutique humaine et animale par les médicaments, pour soulager les états inflammatoires et les états hyperlymphocytaires. En outre, le nouvel agent anti-inflammatoire non stéroïde de cette invention agit également comme dépresseur de la fonction phagocytaire des leucocytes. Il diffère donc 35 radicalement des autres médicaments existant connus dans ce domaine (c'est-à-dire, agents anti-inflammatoires non stéroïdes) non seulement en raison de sa structure chimique mais encore comme résultat de son profil pharmacologique unique. En outre, il est également utile comme nouvel agent immunodépresseur en raison 40 de son aptitude particulière à induire ou à entraîner une 71 18184 2 2100678 atrophie réversible des tissus lymphoïdes, sans affecter la moelle osseuse ou la formule leucocytaire . C'est pourquoi il est particulièrement utile dans le traitement de la leucémie et de certains états hyperlymphocyta ires tels que la maladie de 5 Hodgkin, etc. Par conséquent, l'isomère trans pur de la 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz /p,e/oxépine trouve une triple utilité comme nouvel agent anti-inflammatoire non stéroîde, comme agent utile dansr le traitement de la leucémie et comme agent immuno-dépresseur pour modifier la réponse 10 immunitaire de l'organisme chez les animaux à sang chaud, y compr i s 1'homme. Selon le procédé utilisé pour isoler l'isomère trans pur de cette invention, un mélange isomère cis-trans.de 2-chloro-ll- (3-pipérazinylidène) -r6H-dibenz/ b,e/ oxépine, obtenu 15 de préférence sous la forme d'un sel d'addition d'acide par l'intermédiaire de la réaction de Wittig modifiée de J.R. Tretter, comme elle est lécrite dans le Brevet E. U. A. N° 3.354.155, est tout d'abord soumis à l'opération de séparation décrite par le même inventeur dans la demande de Brevet E.U.A. en 20 instance N°609.345, déposée le 16 Janvier 1957, pour l'isolement . de l'isomère cis correspondant. Le filtrat aqueux ainsi obtenu après élimination de l'is^mêre cis est ensuite agité à des températures plus basses (environ 0-15°C) pour donner une seconde récolte de cristaux d'isomère mixte qui est en prédominance 25 constitué du composé trans(c'est-à-dire de plus de 50% de trans). Uhe autre recristallisation de cette récolte dans le chlorure d'ammonium aqueux 3M, suivie d'une remise en suspension, dans l'alcool bouillant, a alors donné l'isomère trans pur de la 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz /p,&/ oxépine 30 sous la forme d'un sel d'addition d'acide cristallin correspondant au sel d'addition d'acide de la substance de départ, du moins pour autant qu'il s'agit des analyses chimiques. Comme il a été indiqué antérieurement, l'isomère trans de cette invention, soit sous la forme de base libre soit sous la 35 forme d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable, tel que le dichlorhydrate, s'adapte facilement à être utilisé en thérapeutique comme agent anti-inflammatoire, comme agent anti-leucémique et comme immuno-dépresseur. Par exemple, on a trouvé que la 2-chloro-ll(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz 40 / b, e/oxépine, trans, sous forme du sel d'addition d'acideg^yj ORIGINAL 71 18184 3 .2100678 dichlorhydrate cristallin (p.f. 249-251°C), inhibe la phagocytose polymorphonucléaire (PMN) des granules d'amidon. . i'n vitro à des concentrations faibles comme 1 x et c.e composé est donc dix fois plus actif que 1'indométhacine ou, 5 la phénylbutazonë à cet égard, bien que ces deux derniers composés, soient "bien connus de l'homme de l'art comme agents.-anti-inflammatoires non stéroïdesclassiques (c'est-à-dire du commerce). En outre, dans la synovite induite par des cristaux d'urate, synovite qui ressemble à l'arthrite goutteuse de 10 l'homme en de nombreux points, on a trouvé que le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinyl-propylidène)-6H-dibenz /b,e/ oxépine inhibe définitivement la réponse à l'injection d'urate qui se manifeste par une pression du fluide.synovial, et qu'il diminue' également le nombre de leucocytes du fluide 15 synovial, lorsqu'on l'administre par voie intraveineuse à raison de 5 mg./kg. ou par voie intrapéritonéale à raison de 10 mg/kg., ou même par voie intra-articulaire à raison de 2 mg./articulation. On a également trouvé que, en outre, la trans-2-chloro-ll-(3-20 pipérazinyl-propylidène (-6H-dibenz /jo,e/ oxépine, sous forme de chlorhydrate,a un effet spécifique unique sur les tissus lymphoïdes. Par exemple, lorsqu'on donne le médicament à des singes par voie orale à raison de 30 mg./kg. par jour pendant une durée de 5-24 jours, on a mis nettement en évidence une 25 atrophie des follicules dans la rate et les ganglions lymphatiques mésentériques. En outre, on montre que ces méâifications sont réversibles lorsqu'on supprime le médicament et qu'elles sont analogues à celles décrites dans le passé pour les agents immuno-dépresseurs comme 1'hydrocortisone 30 ou la 6-mercaptopurine. Cependant, l'isomère trans de ]a présente invention diffère remarquablement des composés de la technique antérieure du dernier type en ce qu'il ne provoque pas de modifications dans la moelle osseuse ou dans la formule l-etcocytaire d'aucun des animaux ainsi étudiés. Par 35 conséquent l'isomère trans présent trouve nettement une utilité non seulement dans le traitement du rhumatisme articulaire, mais encore dans l'allégement des autres états hyperlymphocy-taires tels que la maladie de Hodgkin, etc. Selon une méthode de traitement de la présente invention, 40 le nouvel agent thérapeutique décrit ici,/constitué par une 71 1.8184 4 2100678 dibenzoxépine? peut iftfe. admiii:is,tré à un sujet hôte-, spit^ par :1a voie orale., soit par. .la-, voie parent ér a le. Généralement, ,j(on, préfère • nettement administrer. 1.' isomère, trans... de la.,2-chlorç>-ll-(3-» rs pipérazi^yX-propylidène)-Sïjr.dibenz ^g,.e/p»$çixie à, des .^s(esr»^,, , ^ 5 allant d'environ 20 mg. à environ 1,0 g. par .jourY bien .qvug^es* variantes interviendront nécessairement selon le pçids .du.sujet en .cours djj traitement., Cependant^ .on utilise avec une nette préférence, une dose posologique.qui se trouve dans la gamme de; O, 3 mg. à environ. 15 mg. par. kg. de poids corporel, par jour, 10 de manière.à obtenir des résultats efficaces. Néanmoins,.il faut ençore noter que,d'autres variantes peuvent également intervenir de ce point.d§ vue, selon l'espèce d'animal en cours de traitement et selon sa réponse individuelle audit médicament, ainsi que selon le type particulier de formulation pharmaceutique choisie et, 15 la durée et l'intervalle auxquels on effectue l'administration. Dans certains cas, des doses posologiques inférieures à la limite inférieure de la gamme d'ensemble précitée peuvent être plus que suffisantes, tandis que dans d'autres cas on peut être obligé d'utiliser des doses légèrement plus élevées mais on peut 20 effectuer ceci en toute sécurité sans donner lieu à l'apparition d4effets secondaires sensiblement nuisibles ou nocifs chez le sujet auquel on administre ces doses. A propos de l'emploi de l'isomère trans de cette invention pour le traitement d'un sujet hôte, il faut noter qu'il est 25 possible d'administrer le composé soit seul soit associé à des porteurs pharmaceutiquement acceptables, par l'une ou l'autre des voies indiquées antérieurement, et que l'on peut effectuer cette administration à la fois sous forme de dose simple et de dose multiple. Plus particulièranent on peut administrer 30 le nouvel agent thérapeutique de l'invention dans une grande variété de formes différentes, c'est-à-dire que l'on peut l'associer à divers porteurs inertes pharmaceutiquement acceptables sous la forme de comprimés, de gélules/ de pastilles, de dragées, de bonbons durs, de poudres, de suspensions aqueuses, de solutions 35 injectables, d'élixirs, de sirops, etc. Ces porteurs comprennent des diluants solides ou des charges, des milieux aqueux stériles et divers solvants organiques non toxiques, etc. En outre, cm peut adoucir et/ou parfumer convenablement ces compositions pharmaceutiques pour voie orale à l'aide de divers agents du type 40 couramment utilisé précisément dans ce but. Généralement, l'agent 71 18184 5 2100678 thérapeutiquement efficace de cette invention est présent dans Pour l'administration par voie orale, on peut utiliser des comprimés contenant divers excipients'comme le citrate de sodium, le carbonate de càLcium et le phoshate bicalcique ainsi que divers dêsagrégants comme l'amidon et de préférence l'amidon de" 10 pomme de terre ou de tapioca, l'acide alginique et certains silicates complexes, en même temps que des agents liants comme la polyvinylpyrrolidone, le saccharose, la gélatine et la gomme d'acâeia. En outre,des agents lubrifiants comme le stéarate de magnésium, le lauryl sulfate de"sodium et le talc 15 sont souvent très utiles pour faire des comprimés . On peut aussi utiliser des compositions solides d'un type analogue comme charges dans les gélules de gélatine remplies jusqu'à consistance molle ou dure ; à ce propos, les substances préférées comprennent également le lactose ou sucre de lait, ainsi que des polyéthylène, 20 glycols de poids moléculaire élevé. Lorsque l'on désire des suspensions aqueuses et/ou des élixirs pour une administration par voie orale, l'ingrédient actif essentiel peut y être associé à divers agents édulcorants ou parfumants, à divers colorants ou substances colorantes, et si on le désire, également à divers 25 agents émulsifiants et/ou de mise en suspension en même temps qu'à des diluants tels que eau, éthanol, propylëne glycol, glycérine et combinaisons diverses de ceux-ci. Pour faire une administration par voie parentérale , on ■ peut utiliser des." solutions de l'isomère trans de'cette inven-30 tion soit dans l'huile de sésame soit dans l'huile d'arachide ou encore dans le propylène glycol aqueux, ainsi que dès solutions aqueuses stériles des'sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, solubles dans l'eau, correspondants. Ces solutions aqueuses doivent être convenablement 35 tamponnées si nécessaire et le diluant liquide doit tout d'abord être rendu isotonique avec assez de solution., saline où glucosée. Ces solutions particulières conviennent spécialement pour faire des injections intraveineuses, intramusculaires et sous-cutanées. 71 18184 6 2100678 EXEMPLE 1 On a dissous un échantillon de 25,4 kg. d'isomères mixtes de dichlorhydrate de 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz £ b,e/" oxépine (mélange cis-trans 60:40 obtenu par le 5 mode opératoire détaillé décrit dans la demande de Brevet E.U.A. N6609.345, déposéele 16 Janvier 1967) dans 232 litres d'eau chaude contenant 37,2 kg. de chlorure d'ammonium à 58°C (ceci représentait une solution aqueuse de NH^Cl 3M). On a alors agité la solution résultante pendant 30 minutes à la température 10 précitée et ensuite on l'a laissée refroidir lentement à 40°C en l'espace de six heures, en ne permettant qu'une agitation peu fréquente pendant l'étape de refroidissement (c'est-à-dire, en agitant à des intervalles de 30 minutes). Ensuite on a retiré la substance cristalline qui s'est séparée à ce moment là (essen-15 tiellement l'isomère cis pur) en utilisant la filtration par aspiration, et on a récupéré le filtrat aqueux ainsi obtenu et on l'a ensuite renvoyé à un récipient de 380 litres t pour l'utiliser dans l'étape suivante de l'opération. On a ensuite agité le filtrat aqueux à 5-lO°C pendant une 20 nuit (approximativement 16 heures), et on a recueilli la substance cristalline qui s'est séparée à ce moment là eh utilisant la filtration par aspiration, et on l'a lavée avec 26,5 litres d'acétone. Un séchage à l'air jusqu'à poids constant a alors donné 12,3 kg de produit cristallin qui titrait environ 25 60 % d'isomère trans (p.f. 210-233°C), sur 3a base de l'analyse par chromatographie en couche mince à l'aide du système acétate d'éthyle/diéthylamine/eau (90:15:5 en volume) comme solvant. On a ensuite recristallisé une portion de 7,5 kg. de la 30 récolte cristalline précédente d'isomères mixtes (60% de trans) quatre fois dans une solution aqueuse de chlorure d'ammonium 3M et ensuite on l'a remise en suspension dans environ 38 litres d'éthanol bouillant pendant une durée de six heures. Ensuite on a refroidi la suspension cristalline résultante à 25°C et 35 on l'a conservée dans ces conditions pendant encore 24 henes sans faire d'agitation supplémentaire. En recueillant ensuite cette seconde récolte de cristaux à l'aide d'une filtration par aspiration, puis en lavant avec des portions séparées d'éthanol froid et d'acétone on a alors obtenu 100 % d'isomère trans pur 40 comme produit final. En séchant à l'air la dernière substance 71 18184 ,7 2100678 jusqu'à poids constant, on a finalement obtenu 2,35 kg. (14,3%) de . dichlorhydrate de trans•-2-rchlor o-ll-(pjpérazinvlpropvlidène)-6H-dibenz^/.î^^oxépin^p.UÇ,, -*p.f *. .24gy251 «C.i. . ; y: f -EXEMPLE I3L- ■ A, -f\ 5 obtenu _de.s .J.eucocyt§p per.its>néaux .de. lapin -.par une ... ; modification,de 1$ méthode de;:Z.A. Çohn.,.eit■ al, .comme-il est. .. décrit dans-le.Jour,nal of. Expérimental -Medicine,. volume .110,. ^ page 419.7 443 (1959-), ,en.,utilisant des lapins de4la.race. nouvelle Zélande.'Deux jours ..aprè, s les .premièr es, doses (,50ml.. _ 10 de glycogène .à 0,1 % par voie intrapéritonéale, quotidiennement . pendant .une durée de 4 ..jours), .on. a injecté une. autre: dose .. de 250ml. Quatre,heures, plus tard, on a injecté,.dei la. solution de Hank (100 millilitres..-contenant 5 milligrammes d'héparine) à l'aide d'une aiguille perforée jj° 15. En laissant 15 l'aiguille en place on amassé doucanent l'abdomen et on a laissé le drainage se faire doucement par gravité, dans un récipient refroidi par de la glace. Ensuite on a fait sédimenter les leucocytes par centrifugation à lOOO t.p.m. (4?C), et on a remis le culot.résultant en suspension dans un tampon de 20 phosphate de Krebs-Ringer (contenant une quantité semi-normale de chlorure de calcium) à pH 7,4 pour obtenir une 7 concentration de 5 x 10 cellules/ml. On a déterminé l'effet du médicament sur la phagocytose 131 par la méthode avec albumine-I „ de Y.H. Chang, telle qu'elle 25 est décrite dans Expérimental Cell Research, volume 54, page 42 (1969)i On a introduit à la pipette le sérum de lapin (1,01 millilitre ) à pH 7,4 et 1,0 millilitre de suspension de leucocytes 7 polymorphonucléaires (POT) (5 x 10 cellules/millilitre ) dans un tampon de phosphate de Krebs-Ringer dans une fiole à sérum de 30 25 millilitres et on y a introduit 0,2 millilitre de la solution de médicament /soit de dichlorhydrate de trans-2-chloro- 11-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz /_ b,e/ oxépine (CP-17.299) soit de phénylbutazone ou d'indométhacine/ ou bien 0,2 millilitre d'eau distillée dans le cas d'un témoin. On a ensuite placé la 35 fiole dans une étuve à incubation Dubnoff-Metabolic à secousses, réglée au préalable à 37°C et faisant 80 mouvements de va-et-vient par minute. Après 30 minutes d'incubation dans ces conditions, on a ajouté rapidement dans la fiole 0,4 millilitre d'une suspension d'amidon (5 milligrammes/ 8 40 millilitre , contenant 6,7 x 10 grains d'amidon par milligramme ) 71 18184 8 2100678 faite dans Un tampon phosphate? de Krebs-Ringer contenant de la sérum-albumine humaine jnarquêe à 10, O^uc/millilitre et du glucose à 7,5 milligrammes/millilitre . On a ajouté une solution identique exempte d'amidon à une autre 5 fiole qui servait de témoin. On alors laissé l'incubation se . poursuivre pendant encore 30 minutes et ensuite on l'a arrêtée en mettant la fiole de sérum dans de la glace. Après avoir traité le contenu la fiole de sérum par la méthode de Chang, on a alors déterminé la radioactivité 10 de la solution résultante en utilisant les techniques classiques de comptage par scintillation de liquide pour faire ladite détection. Les résultats obtenus de cette manière, en ce qui concerne la présente inhibition de la phagocytose, sont résumés ci-après dans le tableau suivant : 15 Composé Concentration Inhibition CP-17.299 1 x 10 M 27 CP-17.299 1 X IO~5M 15 CP-17.299 1 X IO~5M 27 CP-17.299 1 X IO~5M 16 20 Phénylbutazone 1 X H O V 3 Phénylbutazone 5 X 10 M 7 Phénylbutazone 1 X IO~5M 18 Phénylbutaz one 1 X IO~5M 21 Phénylbutazone 1 X IO~4M 24 25 Phénylbutazone 1 X IO~4M 21 Indométhacine 1 X 10~5M 6 Indométhacine 1 X —A 10 M 23 D'après les données présentées dans ce tableau, il est évident que le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinyl-30 propylidène)-6H-dibenz-/ b, cj oxépine (CP-17.299) a un effet important d'inhibition de la phagocytose polymorphonucléaire (PMN) des grains d'amidon, causé par les leucocytes, 1' essai étant fait in vitro à une concentration aussi faible que 1 x 10 On a trouvé que l'activité inhibitrice de cet isomère 35 était approximativement équivalente à celle de la phénylbutazone ou de 1'indométhacine, ces dernières étant essayées à des concentrations dix fois supérieures (c'est-à-dire à 1 x lo~4 M, respectivement). 71 18184 9 2100678 EXEMPLE III On a fait une injection intrasvnoviale de cristaux d'urate de sodium dans 1'articulation du genou de chiens anesthésiés, cela selon le mode opératoire de D.J»McCarthy et al, 5 comme il est décrit dans le Journal of Expérimental Medicine, Vol.124,page 99-114 (1966), en utilisant des chiens bâtards des deux sexes comme animaux d'expérience. Il en est résulté une augmentation de la pression intrasynoviale et du nombre de globules , ainsi qu'une diminution du pH (doncune ressemblance 10 avec l'arthrite goutteuse de l'homme à beaucoup de points de vue), comparativement aux résultats obtenus lorsqu'on a injecté une solution saline dans le genou opposé selon ce même mode opératoire. Dans l'expérience, on a administré le dichlorhydrate- de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz /h,e/ 15 oxépine soit par voie intraveineuse soit par voie intrapéritonéale 30 minutes avant l'injection d'urate, et on a fait des mesures sur le fluide synovial cinq heures plus tard. On a utilisé les animaux seulement une fois au cours de l'expérience. On a trouvé que lorsque le dichlorhydrate de trans-20 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz /b, e/ oxépine était administré par voie intraveineuse à 5 milligrammes/kg et à 10 milligrammes/kg, respectivement, la synovite induite par les cristaux, chez le chien, était définitivement inhibée.On a également trouvé que lorsque le composé était administré par 25 voie intra-articulaire à 2 milligrammes/articulation, il annulait ou réduisait la réponse constituée par la pression du fluide synovial induite par 1'urate ainsi que le nombre de leucocytes du fluide synovial. Le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz/b,e/ oxépine inhibe également 30 la synovite induite par les cristaux (c'est-à-dire l'augmentation de pression du fluide synovial) lorsqu'il est administré par voie intrapéritonale à raison de 10 milligrammes/kg, mais il ne diminue pas la concentration en leucocytes dans l'exudat synovial dans ces conditions. 35 EXEMPLE IV On a déterminé l'effet d'un médicament sur la réaction d'Arthus ou réaction RPA (Reverse Passive Arthus Reaction) comme il est décrit ci-après, en utilisant des rats normaux de la race Charles River. Les rats, chacun pesant 200-220 grammes, 40 ont reçu une injection intraveineuse de 1,0 millilitre de 'BAD ORIGINAL 71 18184 10 2100678 solution saline physiologique contenant 2,5 milligrammes de bleu d'Bran*5,0 milligrammes de blanc d'oeuf et 2,0 x lo6CPM 131 d'iode radio-actif (I } contenu dans de la sérum-albumine humaine (65-90^ c/milligramme }, puis immédiatement après 5 des injections intracutanées de 0,03 millilitre, d'antisérum de lapin anti-albumine d'oeuf, dilué de manière à contenir 3,65 milligrammes d'anticorps/milligramme en deux points situés sur le dos. On a alors sacrifié les animaux trois heures après l'injection et on a séparé la peau par la méthode de 10 desquamation. Ensuite on a prélevé à l'aide d'un emporte-pièces à rondelle de 2 cm, les points d'injection intracutané e -, indiqués par une couleur bleue, on a également prélevé un fragment de peau en voisinage du point d'injection pour qu'il serve de témoin. On a alors hydrolysé les échantillons de 15 peau dans 5 millilitres de solution aqueuse d'hydroxyde de sodium ION en chauffant le dit système sur un bain de vapeur Rendant 30 minutes, et on a déterminé la radioactivité de l'hydrolysat résultant par comptage gamma dans un système de comptage gamma automatique, modèle n°4230, de Nuclear,-Chicago. 20 On a administré les médicaments par voie intrapéritonéale une heure avant injection de la solution de colorant et d'albumine d'oeuf. Les résultats obtenus de cette manière sont résumés ci-dessous dans le tableau suivant, où les effets du dichlorhydrate de tçans-2-chloro-3(11-pipérazinylpropylidène)-6H-25 6H-dibenz/b,e7-oxépine (CP-17.299), de 11indométhacine et du salicylate de sodium (Na) sur la Réaction RPA sont clairement exposés à diverses doses : Composé Dose (mq.Aq.) %Inh. + E.T. CPt17.299 33 35+8 30 CP-17.299 64 64+4 CP-17.299 64 47 +13 CP-17.299 100 58 +14 Indométhacine 100 3 +12 Indométhacine 200 63+3 35 Indométhacine 200 18+7 Salicyte de Na 400 36+6 B'après les données présentées dans ce tableau, on voit nettement que le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène) -6H-dibenz /-b,e/ oxépine (CP-17.299) 40 provoque très nettement une inhibition dans BAD 0RIQiNAl 71 18184 ii ; 2100678 la réaction d'Arthus à un degré plutôt élevé lorsqu'on l'administre par voie intrapéritonéale à raison de 33 mg./kg, 64 milligrammes/kg et 100 milligrammes/kg, respectivement. Il est donc beaucoup plus actif que 1'indométhacine ou le - s ' • - - - 5 salicylate de sodium (tous deux agents anti-inflammatoires connus, utilisés dans le traitement du rhumatisme, arti.çulaire), qui ne sont efficaces qu'à des doses très élevées (à savoir, à 200 milligrammes/kg et 400 milligrammes/kg respectivement) lorsuq'ils sont utilisés exactement dans ces mêmes conditions. 10 . EXEMPLE V On.a étudié les effets du dichlorhydrate de trans -2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz / b,e/ oxépine sur les tissus lymphoïdes sur les chiens bâtards à 12,5 milligrammes/kg, 25 milligrammes/kg, et 50 milligrammes/kg respectivement, 15 et sur des singes Rhésus à 3 milligrammes/kg, 10 milligrammes/kg, et 30 milligrammes/kg respectivement, dans les deux cas en administrant le composé par la voie orale. On a fait la biopsie des ganglions lymphatiques mésentériques et on en a fait l'exament histologique, tout en faisant chaque semaine 20 une électrophorèee du sérum et un examen hématolog.ique (c ' est-à-dire, formule globulaire, vitesse de sédimentation et numération ~ des éosinophiles). Lorsque ces opérations ont été achevées, on a également fait 1'examen histologique des amygdales, des ganglions lyirçphatiques périphériques, du thymus, de la 25 rate, des plaques de »Peyer de l'intestin, et de la moelle osseuse. Chez le chien, l'examen histologique a montré que les biopsies des ganglions lymphatiques mésentériques faites avant d'administrer les doses n'étaient pets anormales mais 30 qu'après avoir administré des doses pendant sept jours, on constatait que les nodules lymphatiques soumis à une biopsie (c'est-à-dire après traitement par le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-l-dibenz-/ b,e/ oxépine ) contenaient des follicules avec co.ronas mal définies 35 et centres germinaux composés de cellules réticulaires primitives (histiocytes) où la vacuolisation cytoplasmique était négative en ce qui concerne les glucides, les protides et les lipides. Après avoir reçu des doses pendant 14 jours, les follicules des ganglions lymphatiques présentaient un 40 accroissement de la quantité des cellules œnfermant des 71 18184 12 2100678 vacuoles dans leurs centres germinaux avec disparition, c'est-à-dire absence nette, de leurs çoronas respectives. Les ganglions lymphatiques ssumis à une biopsie après avoir reçu des doses pendant 21 jours présentent-' également des modifications 5 histologiques prononcées constituées spécifiquement par des agrégats séparés d'histiocytes excessivement vacuolisés dans tout le cortex, en même temps que l'absence de follicules corticaux discernables avec leur couronne respective et en outre la présence de plusieurs histiocytes vacuolisés occupant less 10 sinus médullaires. Les ganglions examinés 28 jours après une administration par voie orale ne différaient que quantitativement des ganglions examinés le 21ème jour. Cependant, lorsqu'on supprimait le médicament pendant 2 semaines, on observait de nouveau que des modifications importantes 15 intervenaient dans les follicules, c'est-à-dire que les cellules vacuolisées observées dans les centres germinaux au cours de la période d'administration voyaient désormais leur nombre diminua:et l'on notait que les grandes cellules embryonnaires usuelles qui occupent le centre germinal normal étaient de nouveau 20 présentes. Dans toute cette étude, on a toujours trouvé que les formules leucocytaires étaient normales chez tous les animaux examiné s. Chez les singes qui ont reçu le dichlorhydrate de trans 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz/ b,^/ oxépine 25 par voie orale (sous forme de gélule ) à raison de 30 milligrammes/kg par jour pendant 5-24 jours, on a noté des modifications histologiques importantes dans la rate et dans les ganglions lymphatiques mésentériques desdits animaux. Ces modifications folliculaires particulières consistaient en une diminution 30 de la taille des follicules, ainsi qu'en une disparition apparente des cellules du centre germinal et une diminution de la taille et de la cellularit^ des coronas. En . outre, 25% des animaux présentaient des modifications similaires des follicules des ganglions lymphatiques spléniques et mésentériques 35 lorsqu'on leur administrait le médicament à raison de 10 milligrammes Ag par jour, par la voie orale pendant 34 jours. Dans les deux cas, on a trouvé que ces modifications des tissus lymphoïdes, après administration orale de dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-40 6H-dibenz/b, e/ oxépine, étaient analogues à celles décrites pour des 71 18184 13 2100678 agents imrauno-dépr esseurs comme l'hydrocortisone ou la 6-mercaptopurine. Cependant, on a trouvé que le présent isomère trans de cette invention ne provoque aucune modification de la moelle osseuse ou de la formula leucocytaire chez aîseun des :5 animaux ainsi traités et il diffère donc très fortement des agents immuno-dépresseurs de la technique antérieure sous cet : aspect très important. 10 associant les substances suivantesdans les proportions pondérales indiquées ci-après : Dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène) Après avoir mélangé intimement le mélange séché, on fait des comprimés au poinçon dans le mélange résultant, chaque 20 comprimé étant d'une taille telle qu'il contient 50 milligrammes de l'ingrédient actif. On prépare également d'autres comprimés de la même manière contenant 5, 10'et 25 milligrammes de l'ingrédient actif respectivement, simplement en utilisant la quantité appropriée du composé isomère trans dans chaque cas. 25 ~ EXEMPLE VII' On prépare une composition pharmaceutique solide sèche en associant ]es substances suivantesdans les proportions pondérales indiquées ci-après : Dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll- ( 3-p'ipérazinylpropylidène) 30 6H-dibenz/ b, e/ oxépine ... 50 Carbonate de calcium 20 Polyéthylène glycol, poids moléculaire moyen 4000 30 On agite alors soigneusement le mélange solide séché . ainsi préparé de manière à obtenir un produit pulvérulent 35 qui est totalement homogène à tout point de vue. On prépare ensuite des gélules de gélatine élastique molle et dure comtenant cette composition pharmaceutique, en utilisant une quantité suffisante de substance dans chaque cas pour que chaque gélule contienne 100 milligrammes de l'ingrédient actif. EXEMPLE VI On prépare une composition pharmaceutique solide sèche en 6H-dibenz / b,e/ oxépine Citrate de sodium 50 25 10 10 5 15 Acide alginique Polyvinylpyrrolidone. Stéarate de magnésium 'jjAD ORIGINAL 71 18184 14 2100678 EXEMPLE VIII On prépare une solution aqueuse de propylène glycol contenant le dichlorhydrate de trans-2-chloro-ll-(3-pipérazinyl-propylidène)-6H-dibenz/ b,e/oxépine en dissolvant ce dernier composé dans un mélange propylène glycol-eau (1:3 en poids) en aidant en chauffant doucement. La quantité de composé utilisée est telle que la solution résultante contient 5 milligrammes de l'ingrédient actif par millilitre de solution. Après l'avoir refroidie jusqu'à la tenpérature ambiante, on la stérilise par filtration sur un filtre Seitz. La solution stérile faite avec le propylène glycol aqueux ainsi obtenue est alors appropriée à être administrée aux animaux par voie intramusculaire. ^ fiftû ORIGINAL 71 18184 15 2100678 REVENDICATIONS 1. L'isomère trans cristallin " pflr de la 2-chloro-ll-(3-pipéra-zinylpropylidène)-6H-dibenz/ b,e/. oxépine qui forme un dichlorhydrate fondant à 240-251°C. 5 2. Une méthode pour récupérer l'isomère trans-pur de la 2-chloro-ll-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz/ b,e/ oxépine dans un mélange des deux isomères cis et trans de ladite oxépine , qui comporte les étapes consistant à : (1) dissoudre ledit mélange d'oxépine se trouvant sous la 10 forme du sel d'aminé obtenu par addition d'acide, dans une solution aqueuse d'un sel ayant la formule MX, dans laquelle : M est le sodium, le potassium, le lithium, le radical ammonium, monométhylammonium, diméthylammonium ou tétraméthylam-monium, et 15 X est un anion chlorure, bromure, nitrate ou sulfate ; ledit sel MX utilisé est choisi de telle sorte que son anion X est identique à 1'anion dudit sel d'aminé (2) cristalliser et séparer de la solution de l'étape (1) le sel d'aminé cis moins soluble sous la forme cristalline et 20 laisser une solution constituée d'un mélange des isomères cis et trans ? (3) refroidir le filtrat résultant de l'étape (2) et séparer de la solution une récolte cristalline constituée d'un mélange des isomères cis et trans ; 25 (4) recristalliser la récolte cristalline résultante provenant de l'é.tape (3) dans une solution aqueuse de chlorure d'ammonium ; et (5) remettre en suspension le produit cristallin résultant obtenu dans l'étape (4) pour obtenir l'isomre trans pur. 30 3. Un procédé selon la Revendication 2,dans lequel on dissout le mélange d'oxépine sous la forme du sel d'aminé dans la solution aqueuse de sel (étape 1) à une température de 65 à 70°C ? on cristallise le sel d'aminé cis (étape 2) en refroidissant le mélange obtenu dans l'étape 1 à 20-25°C ; on refroidit le filtrat 35 obtenu dans l'étape 2 à 0-15°C (étape 3), et on remet le produit cristallin obtenu dans l'étape 3 en suspension (étape 4) dans l'alcool bouillant. 4. Une-composition pharmaceutique comprenant la trans-2-chloro 11-(3-pipérazinylpropylidène)-6H-dibenz/b,e7 oxépine ou un sel 40 d'addition d'acide pharmaceutiquement acceptable de-,celle-ci et un 71 18184 16 2100678 porteur ou un diluant convenais! 5. Une composition selon la dose unitaire. 6. Une composition selon la 1'oxépine est sous la forme du e pharmaceutiquement acceptable. Revendication 4, sous forme de Revendication 4 ou 5, dans laquelle dichlorhydrate.