Brevet FR2070116A1 — publié le 19710910

La présente invention est relative à de nouveaux agents antiviraux et à des procédés pour les utiliser. La présente invention a pour objet principal un nouveau complexe d'acide ribonucléique (ARN) à simple hélice et d'un polysaccharide, complexe qui possède une activité antivirale à large spectre La présente invention a aussi pour objet des composi- tions pharmaceutiques contenant le nouveau complexe L'invention a encore pour objet le constituant polysaccharide du complexe. L'invention a aussi pour objet des compositions pharmaceutiques contenant le constituant polysaccharide en question. L'invention a en outre pour objet un procédé pour traiter ou empêcher les infections en administrant à un mammifère à sang chaud infecté ou susceptible de litre, une quantité efficace, mais non toxique, du complexe susmentionné. L'invention a aussi pour objet un procédé pour traiter ou empêcher les infections en administrant à un mammifère à sang chaud infecté ou susceptible de l'être une quantité efficace, mais non toxique, du polysaccharide. L'invention concerne enfin des procédés de préparation du complexe et du polysaccharide. Le complexe selon la présente invention peut être isolé à partir. de la moisissure Cunninghamella, en particulier , des espèces C. Dlakesleeana et C; bainieri. La cunninffhamella blakesleeana est aisément disponible dans diverses collections de cultures, comprenant l'American Type-Culture Collection, comme ATCC 8688au D'autres soshes de Cunninghamella sont Co bainieri, ATCC 8987, C. bainieri, ATCC 9244, C. elegans, ATCC 7929, et C. echinulata, ATCC 8984. La moisissure est cultivée selon des procédés classiques, bien décrits dans des ouvrages et d'autres publications, dans un milieu favorable à son développement. Des milieux litai des tels que du bouillon nutritif,du bouillon de trypticase de soja, du bouillon de farine de graines de soja ou du bouillon de farine d'arachides sont préférés pour des fermentations submergées. Les milieux en question doivent contenir des sources de substances minérales, d'azote et de carbone disponibles. Des hydrates de carbone, tels que des amidons, des dextrines et des sucres comprenant des hexoses et des pentoses, peuvent être utilisés pour fournir les besoins en carbone et en énergie des microorganismes D'autres sources de carbone peuvent aussi être utilisées, par exemple, l'acide citrique et ses sels, l'acétate de sodium, des alcools ou des acides gras Comme sources d'azote sous forme assimilable, on peut citer l'azote provenant de protéines animales ou végétales solubles ou insolubles et de dérivés protéiniques, tels que la farine de graines de soja, la caséine, des extraits de viande et despeptones. Des acides aminés, des ses d'ammonium, des nitrates et de la liqueur de macération de mais ou de ltextrait -de levuré peuvent aussi être employés. Des matières minérales présentes à l'état naturel dans les sources d'azote et de carbone susmentionnées suffisent pour satisfaire les besoins des microorganismes. Une fourniture d'air stérile doit être maintenue au cours de la fermentation. Ceci s'effectue en exposant une grande surface du milieu de culture à l'atmosphère, sous agitation constante, ou encore par l'emploi de dispositifs d'aération submergés Ltaération á un débit d'environ 0,5 à 2 > 0 volumes dtair/volume du milieu de croissance/minute donne des résultats-satisfaisantsO Au cours de la fermentation, la température doit être maintenue dans une gamme d'environ 23 à 320C, de préférence, d'environ 25 à 30 C Un milieu préféré est constitué d'extrait de pommes de terre à 2 0 (p/v) (Difco) et de dextrose à2 O/o (p/v) ajusté à un pH de 695 à l'aide d'hydroxyde de sodium, dans des conditions stériles, à 26-280C. L'huile de lard est utilisée comme agent antimousse. On laisse la fermentation se poursuivre pendant 5 à 10 jours, de préférence, 5 jours, puis- les cellules sont récoltées et le complexe ARN-polysaccharide est isolé et purifié. Le schéma qui-termine le présent méireillustre la manière selon laquelle on isole le complexe. Les mycelia~obtenus par la fermentation sont mis en suspension dans un tampon d'un pH d'environ 8, le phosphate de sodium O iM étant préféré. Une agitation et un chauffage facilitent l'extrac- tion du complexe dans la solution tampon.Le mélange est filtré et le filtrat est traité par tout solvant organique approprié, y compris l'acétone et le méthanol, de préférence l'éthanol, de fa- çon à faire précipiter le complexe. L'homogénéisation du précipité avec un tampon de pH 7-8, de préférence du phosphate de sodium 0,01M, puis extraction par du phénol saturé d'eau, donne une solu tion aqueuse du complexe dont la Flus grande partie des protéines dénaturées a été éliminée. La solution est dialysée vis-à-vis d'un tampon au phosphate de sodium 0,01M d'un pH de 7,2 et davantage purifiée par chromatographie. Le complexe isolé possède un spectre ultraviolet typique d'un acide nucléique, avec un maximum à 257 m et un minimum à 230 m Les rapports d'absorption 260=280 mA et 260-230 m sont tous deux supérieurs à 2, ce qui indique l'absence de protéines ou de polypeptides. Les déterminations de protéinespar le procédé de Lowry [ J. Biol. Chez. 193, 269 (1951)] confirment cette conclusion. L'hydrolyse alcaline et acide du complexe ou de la fraction de ARN qui peut en etre séparée, donne les bases adénines guanine, uracile et cytosine, qui sont identifîées par chromatographie sur papier / BiochemO J. 46, 33 (1950)]. La co-chromatographie avec des étalons connus et des mesures de spectrophotométrie confirment cette identification. L'absence d'acide désoxyribonucléique est démontrée par le procédé à la diphénylamine. [ Méthodes of Biochemical Analysis, Interscience, N,Y,, 1 14) 7 La teneur en pentose du complexe purifié, telle que mesurée parla réaction à l'orcinol est beaucoup plus élevée (approximativement 3 fois) que celle trouvée dans le ARN pur ceci étant dû au polyaccharide. Les mesures chromatographiques en phase gazeuse du dérivé du type acétate d'alditol de la fraction polyssacharide purifiée, séparée, indiquent que du fucose, du galactose, du gluccse,du mannose et d'autres pentose et tétroses non identifiés se trouvent parmi les constituants monomères. De même, l'analyse chimique indique la présence de sulfate dans le polysaccharide. Le poids moléculaire du complexe est considéré comme étant de 500000-lOOoGOO étant donné que la SW20 du complexe, comme déterminée par une ultracentrifugeuse analytique du type Spinco modèle E est d'environ 4,8. Le poids moléculaire de la fraction ARN purifiée est estimé etre de l'ordre de 300U00-60oGOO 5 étant donné que la valeur de SW20 est de 2,2. L'analyse d'une courbe de dénaturation thermique du complexe prouve qu'il manque un point médian de transition thermique (point de fusion), ce qui indique que le ARN n'est pas à dou- ble hélice. Le complexe est extrêmement résistant vis-à-vis de l'action de la ARNase pancréatique mais, après l'élimination du poly saccharide par la chromatographie sur DEAE celluloses la fraction ARN devient aisément digérable par l'enzyme La résistance à l'action de la ARNase peut être due à la présence de la fraction polysaccharide qui peut soit inhiber l'action de I'enzyme, soit stabiliser le constituant ARN, rendant celui-ci inaccessible à la dégradation enzymatique. Le complexe ARN-polysaccharide selon la présente invention stest révélé posséder une activité vis-à-vis de diverses infections virales Bien qu'on a montré qu'il induisait de l'interféron dans un animal hôte, la corrélation entre l'activité virale et l'induction d'interféron n'a pas été établie jusqu'à présent Des essais dans une infection de souris à virus Mengo indiquent qu'une certaine activité antivirale est l'apanage de chacune des fractions polysaccharide et ARN purifiées séparées Un mélange de deux fractions est également actif, mais le complexe originel possède une activité même plus forte.Ces résultats sont indiqués dans le tableau I ci-dessous qui indique l'accroissement du pourcentage de souris survivantes auxquelles on a administré la matière à tester par voie intrapéritonéale 18 heures avant de provoquer l'infection par le virus engo. TABLEAU I Comparaison de l'activité antivirale du complexe, du mélange et des fractions séparées Matière d'essai Dose (mg/kg) Accroissement en C/O d'animaux survivants fraction ARN 29 40 fraction polysaczharide 29 40 mélange de 2 fractions 29 60 (14,5 mg chacune) domplexe 29 80 témoin = 0 Le complexe est bien toléré par les souris. La LD50 aigue chez les souris est supérieure à 200-mg/kg par la voie infra péritonéale. Ltadministration de 100 mg/kg par la voie intraperi- tonéale ne donne ni morQ5ni pertes de poids.Le complexe s'est révélé protégerdes cultures de cellules de reins de lapins primaires infectés du virus de la stomatite vésiculaire (VSV), L'infection des cellules par ce virus pendant 46 à 60 heures à 370C se traduit par la formation de plaques dues à la lyse des cellules consume résultat de la multiplication des virus Etant donné qu'il existe une corrélation directe entre le nombre de plaques formées et la concentration du virus utilisée pour infecter les cellules la réduction du nombre de plaques constitue une mesure de l'inhibi- tion de la croissance virale Les cultures de cellules de reins de lapins infectées sont traitées par le complexe ARNpolysacchariw de pendant 24 heures, apres quoi l'agent antiviral est enlevé et la feuille des cellules est lavée une fois avec le milieu d'entre tien. La monocouche de cellules est testee vis-a-vis du virus de la stomatite vésiculaire. Après une période d'incubation de 60 heures, les plaques de virus sont comptées et le pourcentage de réduction des plaques est calculé par rapport au nombre de plaques chez les témoins non traités Comme montré dans le tableau Il, 1,25 g de la préparation suffit à réduire le nombre de plaques de 82 %0 TABLEAU II Protection de culturesde cellules contre le VSV Dose ( g/4 ml) % d'inhibition de plaques 5 100 2,5 87 1,25 82 0,625 13 0,313 9 o,151 5 0,075 1 0,038 O témoin 0 Le complexe s'est également révélé protéger des souris contre le virus de la pneumonie (PVM) L'infection par PVM de souris par une exposition de 40 minutes à un aérosol de la suspension des virus se traduit Far une infection virale respiratoire culminant en une pneumonie . Approximativement 70 à 100 çlo des ani- maux témoins meurent en 'espace de 4 à 5 jours à dater de 8 à 9 jours après l'exposition à l'aérosol. La cause finale de la mort est la suffocation qui est le résultat tune consolidation pulmo naira Pour évaluer l'efficacité du complexe, une solution de celui-ci est administrée par la voie intranasale à 5 groupes de 20 souris de 8 à 10 g,18 heures avant de procéder à l'exposition à l'aérosol de virus (dose mortelle 90 %).Les résultats d'une telle expérience sont indiqués dans le tableau III ci-dessousO Ils indiquent qu'une quantité aussi faible de 5 4g par souris du complexe administré par la voie intranasale a pour résultat un accroissement de survivance de 40 % X , tandis qu'unie quantité de 20 g de complexe donne un accroissement de survivance de 80, TABLEAU III Protection de souris contre le virus de la pneumonie Dose (mg/kg) Accroissement du pourcentage ~~~~~~~~~~~ d'animaux survivants 2,2 80 0,44 40 0,088 0 témoins 0 Des souris infectées de virus Mengo commencent à mourir d'encéphalite trois jours après l'infection Une dose mortelle du virus (mortalité de 75 à 100 /o) est administrée par la voie intrapéritonéaleo Pour déterminer l'efficacité de l'agent anti- viral contre cette infection, une solution du complexe est administrée à des souris (10-11 g) par la même voie On observe les souris pendant 10 à 14 jours, période au cours de laquelle la plupart ou toutes les souris non traitées sont mortes Comme indiqué dans le tableau IV ci-dessous, le pourcentage d'accroissement d'animaux survivants est de 45 % pour une dose minimale de 20 g (1,82 mg/kg) par souris TABLEAU IV Protection de souris contre le virus de l'encéphalite Mengo Dose (mg/kg) Pourcentage d'accroissement d'animaux i survivants 29,0 75 7,28 75 1,82 45 0,45 0 témoins 0 Le complexe est également efficace contre l'infection par le virus vaccinal o Des souris soumises à cette infection développent des fortes lésions après une période de 6 à 7 jours Lorsque le complexe est administré par la voie intrapêritonéale 18 heures avant l'introduction intraveineuse d'une dose de virus provoquant 15 à 25 lésions caudales et qu'au bout de 8 jours on compte le nombre de lésions caudales , on obtient les résultats indiqués dans le tableau V ci-dessous. Une dose minimale de 12 g par souris (0,6 mg/kg) du complexe réduit le nombre de lésions de plus de 50 %. TABLEAU V Protection de souris contre le virus vaccinal Dose (mg/kg) % de décroissement du nombre des des lésion caudales 60 95 6 46 056 56 témoins 0 Le complexe selon l'invention peut être séparé en ses constituants acide ribonucléique et polysaccharide par chromate graphie sur cellulose DEAEo Le polysaccharide possède un poids moléculaire de l'ordre de 10,000-300000 et es positif à ltorcinol. Il possède une teneur élevée en acide uronique, 30 à 50 % des sucres monomères ayant des groupes carboxyles La chromatographie en phase gazeuse indique la présence de fucose de glucose, de galactose, de mannose et de tétrose. Le tableau VI qui suit illustre l'efficacité du polysaccharide contre diverses infections virales chez la souriso La dose efficace minimale (MED) est définie comme étant la quantité de matière nécessaire pour accroître le pourcentage d'animaux sur- vivants de 30 % par rapport aux témoins. Dans l'essai du virus vaccinal sur les queues, la WiED est définie corme étant la quan- tité nécessaire Four réduire le nombre de lésions caudales de 30 a/o par rapport aux témoins. TABLEAU VI Infection MED (mg/kg) Pneumonie 0,2 Encéphalite Mengo 10 Virus vaccinal 2 Influenza A2 20 Le complexe ou le polysaccharide de la présente invention est introduit dans des compositions destinées à être utili sées comme agents antiviraux Les Les compositions sont administrées à un sujet ou à un hote soit pour empêcher, soit pour traiter une infection virale par diverses voies, y compris la voie orale, par injection ou par l'emploi d'un inhalateur ou d'un aérosol, l'ad- ministration se faisant en doses efficaces mais non toxiques La dose appropriée varie avec le sujet à traiter,avec la nature de l'infection et avec l'âge et le poids du sujet Cette dose est cependant de l'ordre de 10 à 500 mg. Ces facteurs peuvent être évalués de manière plus précise par les personnes administrant le complexe ou le polysaccharide, en utilisant l'information indiquée dans le présent mémoire ainsi que les connaissances et les expériences des techniciens. Une composition injectable peut être constituée d'une solution du constituant antiviral actif dans une solution saline physiologiques dans de l'eau ou dans une solution de sucres du Merthiolate ou des parabens étant éventuellement ajoutés à titre d'agent de préservation. Une composition pour aérosol est préparée en combinant une matière antivirale actives dissoute ou dispersée dans un solvant convenableg éventuellement combinée à des propulseurs, et en introduisant la cbmposition dans un récipient distributeur convenable. Les exemples qui suivent servent à illustrer la mise en oeuvre de la présente invention sans pour autant limiter celle ci. Les températures sont indiquées en degrés centigrades sauf indication contraire La DEAE-cellulose est, ainsi que le savent parfaitement bien les techniciens, la diéthylaminoéthylscelluloseo EXEMPLE 1 La moisissure Cunninghamella blakesleeanas ATCC 8688a, est cultivée dans 90 1 d'un milieu constitué d'extrait de pommes de terre à 2 % p/V- (Difco) et de dextrose à 2 6/0 p/vX ajusté a un pH de 6,5 avec de l'hydroxyde de sodium.Le milieu est passé à l'autoclave à 1210, pendant 15 minutes sous une pression d'environ 1 > 05 kg/cm2. 10 litres d'une culture cultivée dans le même milieu pendant 24-72 heures à 26-280 servent d'inoculum pour la fermentation. La fermentation se déroule pendant 5 jours à 260-280 sous un débit d'aération de 0,5-0,75 VVM et à une vitesse d'agitation de 75 à 125 tpm.On utilise de l'huile de lard à titre d'agent antimousseo Les mycelia (7 kg) obtenus à partir de la fermentation sont mis en suspension dans 30 litres dgun tampon constitué de phosphate de sodium 0,1 M , préalablement chauffés à 55. Cette suspension est agitée vigoureusement pendant 2 heures, période au cours de laquelle la température est maintenue à 55-600, Au bout de cette période, les débris cellulaires sont séparés par filtra tion et le filtrat ou extrait est retenu Au filtrat, on ajoute 73 litres d'éthanol à 95 % (2 1/2 x le volume de l'extrait originel). Après un mélange in time, on maintient la solution à 4 jusqu-au lendemain afin de permettre au précipite qui s'est formé de se déposer La couche surnageante claire est soigneusement décantée et le précipité qui contient encore une certaine quantité de mélange tampon-alcool, est soumis à une centrifugation à lOoOOO x go La couche surnegea te est séparée et le précipité est homogénéisé avec 1 litre d'un tampon au phosphate de sodium 0,01 M > pH de 7,2 dans lequel le ARN polysaccharide est soluble. On agite la matière homogénéisée pen dant 1 heure afin de permettre une extraction efficace du complexe On sépare ensuite la matière insoluble par centrifugation à 10.00C x g. On mélange ensuite le produit homogène à une quantité égale de phénol saturé d'eau et on secoue le mélange à la tempéra- ture ambiante pendant 2 heures. Ce stade est essentiel, en ce sens qu'il élimine la plus grande partie des protin dénaturées qui pourraient être toxiques Si on les injectait à des animaux. On sépare les phases par centrifugation à 5,000-10,000 x g et on rem cueille la couche aqueuse (habituellement la phase inférieure) et on la lave à plusieurs reprises avec de l'éther de façon à éliminer les traces de phénol. On dialyse l'extrait vis-à-vis de trois fractions de 10 litres d'un tampon au phosphate de sodium 0,01 M d'un pH de 7,2.La matière dialysée est riche en complexe ARNpolysaccharide et peut être employée telle quelle Cependant, une purification plus poussée peut s'effectuer en utilisant une chromatographie sur DEAE-cellulose de façon à éliminer tout polysaccha-ride inactif qui est précipité au stade utilisant l'méthanol La DEAE-cellulose, obtenue conmercialement, est lavée selon un procédé classique et ensuite équilibrée avec du tampon tris 0,01 M à un pit de 7,2. On prépare une colonne de 20 cm x 2 cm. Un échantillon, après le stade deerGr2ction au phénol; cor, tenant 80003-10.000 unités K260 2 préalablement dialysé vis-a-vis du tampon équilibreur, est appliqué à la colonne au débit de S ml par minute. pes application de l'echantillon, on lave la colons ne avec 150 ml de tampon tris e,01 M d'un pH de 7,2 et avec 150 ml de NaCl 0,1 M dans ce tampon. Le complexe ARN-polysaccharide actif est ensuite élué avec du NaCl 0,8 M dans du tampon tris 0,01 M d'un pH de 7,2, On recueille des fractions--de 10 ml et on lit l'absorption à 260 m .On réunit les fractions qui présentent we absorption élevée à '260 m (supérieure à l'unité) et on les dia lyse vis-à-vis de 10 volumes d'un tampon au phosphate de sodium 0,01 M d'un pH de 7,2 ou dgeau distillée Environ 80 % à 90 % de lVactivicé appliquée à la colonne se récupèrent. Après la dialyses la fraction totale peut être utilisée telle quelle ou être concentrée par lyophilisation ou précipitation avec de l'alcool La matière concentrée.peut être reconstituée avec un tampon au phosphate 0,01 M d'un pH de 7. EXEMPLE 2 Lorsque, au lieu de procéder à la fermentation de C. blakesleeana et en mettant en oeuvre les procédés d'isolement décrits à l'exem- ple 1, les espèces suivantes : C bainieri, ATTCC 8987 ou 9244, C elegans , ATCC 79299 C. echinulate, ATCC 8984, ou d'autres espèces de Cunninghamella sont utilisées en appliquant les mêmes procédés, on obtient le complexe constitué de ARN à simple hélice et de polysaccharide. EXEMPLE 3 Une composition antivirale destinée à l'usage intranasal peut posséder les constituants suivants complexe ARN polysaccharide ou polysaccharide seul 20 mg tampon aqueux 20 mg un agent de préservation peut etre ajouté Emballage sous forme de spraypack(atomiseur). EXEMPLE 4 Une composition antivirale destinée à être injectée peut être constituée du complexe ou du polysaccharide en suspen sion ou dissous dans un véhicule isotonique convenable 9 tel qu'une solution saline physiologique EXEMPLE 5 Le complexe ARN-polysaccharide peut être séparé en une fraction acide rubonucléique et une fraction polysaccharide par chromatographie sur DEAE-cellulose > de la manière suivante : une colonne de DEAE-cellulose de 40 cm x 2 cm est équilibrée par un tampon tris 0 > 01 M, de pH 7,2.Un échantillon contenant 90 mg sur la base de la teneur en ARN (ou 180 mg sur la base de la te neur totale en hydrate de carbone, comme déterminé par le procédé àX'orcinol), est appliqué à la colonne à un débit de S ml par minute. On élue ensuite l'échantillon à l'aide d'un gradient lie néaire de chlorure de sodium dans du tampon tris 0 > 01 M d'un pH de 7,20 Le gradient est formé par deux chambres contenant 1 litre de tampon tris 0,01 M de pH 7,2 et 1 litre de NaCl 1 M dans du tampon tris 0,01 M de pH 7,2 respectivement. Le débit de l'éluant est de 1 ml par minute. On recueille des fractionsde-10 ml et la teneur en hydrate de carbone ainsi que l'absorption à 260 m de chaque fraction sont déterminées.La fraction d'hydrate de carbone est éluée dans les fractions 20 à 30 et le ARN est élué immédiatement ensuite, dans les fraction 32-50 Ceci correspond à une concentration de sel de 0,15 M pour le polysaccharide et de 0,3 M pour le ARN. La teneur en polysaccharide des fractions est déterminée selon le procédé à l'orcinol, cependant que la teneur en Art des fractions contenant celui-ci est déterminée selon leur absorption à 260 m. Les fractions contenant le polysaccharide sont réunies et celles contenant le ARN sont réunies, chacune étant ensuite dialysée vis-a-vis d'un tampon au phosphate de sodium 0,01 M de pH 7.2. Chaque matière est dialysée vis-t-vis de l'eau et est ensuite lyophilisée.On obtient ainsi environ 60 mo de chaque mati8re. - EXEMPLE 6 Une capsule antivirale peut présenter la composition suivante Complexe ou polysaccharide 10-500 mg Lactose, amidon ou terra alba 10-500 mg EXEiPLE 7 Un comprimé antiviral peut présenter la composition suivante Complexe ou polysaccharide 10-100 mg Stéarate de magnésium 2,5 Amidon 15,0 Terra alba 150,0 Granulation avec sirop ou gélatine (solution à 5 > ) Terra alba q.so ad 300 Isolement du complexe ARN-polysaccharide Fermentation extraire par tampon phosphate jeter les - - ' filtrer mycelia - Précipiter par éthanol Jeter couche I précipiter surnageante extra ire avec tampon phosphate et ensuite phénol jeter phase t phase phénolique aqueuse dialyser puis chromas ;ographier jeter liqueurs I éluat au NaCl de lavage 0,8M contes nant le com plexe R E V E N D C A T I O N S l-Complexe d'acide ribonucléique a simple hélice et d'un polysaccharide, ayant une activité antivirale, présentant une absorption maximale à 257 mp et une absorption minimale à 230 dans le spectre ultraviolet, les ?apports dUabsorption à 260-280 et à 260-230 m étant supérieurs a ?, y-drolyse alcaline ou acide du complexe donne de l'arénîne, de la guanine, de l'uracile et de la cytosine; la courbe de dénaturation thermiQue du complexe en question ne présente pas de point médian de transition thermique et le complexe est résistant à fraction de la ARNase pancreatique 2-Complexe suivant la revendication 1, présentant un poids moléculaire de l'ordre de 50.000 à 100.000 , la fraction acide ribonucléique du complexe ayant un poids moléculaire de tordre de 30.000 à 60.000 , les constituants acide ribonucléique et polysaccharides du complexe étant séparables sur DEAE-cellulose 3-Complexe suivant la revendication 2, caractérisé en ce que le constituant polysaccharide contient du fucose, du galactose, du glucose, du mannose et du sulfate 4-Composition antivirale caractérisée en ce qu'elle est constituée par une quantité efficace mais non-toxique du complexe suivant l'une quelconque des revendications 1 à 3, et par un véhicule pharmaceutiquement acceptable 5-Polysaccharide ayant une activité antivirale, obtenu à partir de la moisissure Cunninghamella, ledit polysaccharide possédant un poids moléculaire de 10.000-30.000: 30-5Q% de sucres monomères dudit polysaccharide ayant des groupes carboxyle et contenant des monomères de fucose, de mannose, de galactose, de glucose et de tétroses. 6-Polysaccharide suivant la revendieatton 5, obtenu à partir de cellules de la moisissure Cunninghamella que Ivon a cultivée pendant 5 à 10 jours 7-Composition antivirale caractérisée en ce qu'elle est constituée par une quantité efficace mais non toxique du polysaccha- ride suivant la revendieat 32 5 et par un véhicule pharmaneutique- ment acceptable 8-Procédé pour préparer un complexe antiviral d'acide ribonucléique à simple hélice et d'un polysaccharide, caractérisé en ce que l'on fait crotte les cellules d'une moisissure du genre Cunninghamella dans un milieu nutritif convenable pendant 5 à 10 jours, en ce qu'on récolte les cellules, en ce qu'on extrait les cellules avec un tampon à un pH environ 8, en ce coupon filtre le mélange ainsi obtenu, en ce qu'on précipite le complexe du filtrat par l'addition d'un solvant organique, en ce qu'on extrait le précipité a l'aide d'un tampon de pH 7-8 et ensuite avec du phénol et an ce qu'on dialyse la solution aqueuse résultante vis-à-vis d'un tampon d'un pH de 7,2 afin d'obtenir le com plexe 9-Prscéde pour préparer un polysaccharide antivirale carac téris en ce qu'on prépare un complexe d'acide ribonucléique à simple hélice et d'un polysaccharide suivant la revendication 1 et en ce qu on sépare le polysaccharide du complexe par chromatographie sur DEAE cellulose et an ce qu'on procède à une solution avec un gradient linéaire de chlorure de sodium dans du tampon tris 0,01 M , de pH 7,2.