Brevet FR2100710A1 — publié le 19720324

i 2100710 10 La présente Invention concerne des compositions notamment utiles pour prévenir et traiter des infections virales, ainsi qu'un procédé pour la préparation desdites compositions. L'invention concerne, en particulier, les applications desdites compositions dans l'art vétérinaire. En particulier, l'invention concerne des compositions destinées à la prévention et au traitement des infections virales, qui contiennent des dérivés de la 3-formylrifamycine SV. Lesdits dérivés, qui résultent en pratique de la condensation de la 3-formylrifamycine SVavec des dérivés de 1-amino-pipérazine, ont.la formule générale suivante: Me Me 15 20 MeCOO Me MeO^ >»Me R' / \ CH=N-N N-R Y-7 R" dans laquelle R peut représenter un atome d'hydrogène ou un radical phényl-alkyle inférieur, R' et R" peuvent représenter 25 chacun un atome d'hydrogène ou un radical alkyle inférieur. Dans un article publié par E. Heller et coll. (Nature, Vol. 222 page 275, 1969» on a indiqué que la >-(4-méthyl-l-pipéra-zinyl-iminométhyl)-rifamycine SV (rifamplcine) inhibe sélectivement la reproduction de certains virus tels que, par exemple, les 350 virus du groupe de la vaccine. Toutefois, les produits qui sont les constituants actifs des compositions formant le sujet de l'invention présentent une activité antivirale supérieur et davantage spécifique. Les compositions renfermant le groupe de composés 35 précités selon l'invention peuvent contenir également, en même temps que le constituant actif, les agents courants tels que des excipients, stabilisants, agents épaississants, agents tensio-actifs 71 19539 2 2100710 et solvants, tels que des sucres, des dérivés de cellulose, des amidons, des dérivés de polyoxyéthylène, des p-hydroxybenzoates, du stéarate de magnésium, du métabisulfite de sodium, de l'eau distillée exempte de matières pyrogènes, qui les rendent propres 5 à une administration par voie orale ou parentérale. Un autre mode d'administration consiste en une application intranasale de suspensions ou de solutions que l'on peut pulvériser en imprégnant le tissu nasal. En vue de l'administration par voie orale, on 10 mélange les constituants actifs avec les agents précités en obtenant des compositions que l'on transforme en comprimés ou en capsules, contenant des doses de constituant actif comprises entre lOOmg et lg. Par exemple, un comprimé représentatif de l'invention peut avoir la composition suivante: 15 Constituant antiviral actif 200 Gélatine 10 Méthyleellulose 10 Amidon 40 20 Stéarate de magnésium 5 Une solution ou une suspension représentative de l'invention, convenable pour l'administration par voie parentérale, peut avoir la composition en pourcentage suivante: 25 £2iâ§/Y2lus®_l2?} Constituant antiviral actif 5,000 Métabisulfite de sodium 1,000 p-Hydroxybenzoate de méthyle 0,050 p-Hydroxybenzoate de propyle 0,010 30 Polyvinyl-pyrrolidone 10,000 Eau distillée, exempte de matières pyrogènes, q.s.p. 100,000 Un nébulisat représentatif pour l'administration par voie intranasale peut avoir la composition suivante: 71 19539 5 2100710 Quantité Constituant antiviral actif- 5 g Thimérosal 2 mg p-Hydroxybenzoate de méthyle 80 mg p-hydroxybenzoate de propyle 20 mg Phosphate de sodium 500 mg E.D.T.A., sel disodique 5 mg Eau distillée, exempte de matières pyrogènes, q.s.p. 100 ml 10 Afin de donner une indication en ce qui concerne les propriétés antivirales présentées par les constituants actifs desdites compositions, on mentionne ci-après certains résultats obtenus dans l'inhibition de la formation de plaques dans des ^ cultures de fibroblastes d'embryons de poulets, infectés par le virus de la vaccine, et des cultures de reins de lapins, infectés par le virus d'herpès simplex (herpès a frigore). On doit observer que d'autres virus typiques d'animaux, tels que les virus de la clavelée, de la variole aviaire, de la fièvre africaine du 20 porc, de la rhino-trachéite des -félidés et des bovidés, appartiennent aux groupes de virus précités. En procédant à des opérations représentatives, on effectue la détermination de l'effet direct de certains composés actifs de l'invention sur la formation de plaques par les virus, 25 de la manière suivante: a) Sous gélose. On fait adsorber les virus par des monocouches de cultures primaires de fibroblastes d'embryons de poulets. On récou vre ensuite la pellicule cellulaire par de la gélose contenant un 30 milieu nutritif et le médicament. Après 4 jours à 37°C, on ajoute du rouge neutre et on compte les plaques 3 jours plus tard. b) Dans_un_milieu_liguidei On utilise les mêmes cellules que ci-dessus et on les cultive dans des tubes de Leighton. Après l'adsorption des 35 virus (une unité de formation de plaque ou UFP par 1 à 3 cellules) on lave les cellules, on ajoute 1 ml de milieu nutritif contenant le médicament. 48 h plus tard, on congèle les cellules accompa 71 19539 4 -2100710 gnées du milieu fluide, à -7Û°C. On titre le virus après avoir brisé les cellules en procédant à 3 congélations et décongélation successives et à un traitement pendant 30 secondes au moyen d'ondes soniques. On détermine le nombre de UFP en comptant 5 les plaques comme dans la méthode sous gélose, précitée. On compare les résultats obtenus avec ceux des cultures témoins, c) §ous_méthylçellulosei Dans le cas du virus d'herpès simplex, on utilise des cultures primaires de reins de lapins. On applique la même xo méthode que dans le cas de a), ci-dessus, excepté que l'on utilise, au lieu de gélôse, 2% de méthylcellulose. Lesdits composés ont généralement une faible toxicité vis-à-vis des cellules. On a trouvé, dans le cadre de l'invention, que certains d'entfrçf eux sont dépourvus de toxicité, même aux concentrations 5 fois plus grandes que celle qui produit une nette inhibition de la croissance virale. On détermine la toxicité selon les mêmes méthodes que pour l'essai sous gélose, décrites ci-dessus, en excluant toutefois l'addition des agents infectieux et en prenant en considération la concentration du 20 produit qui inhibe la coloration des cellules par le rouge neutrè. Lorsqu'on les soumet à des essais sur les animaux, les composés de 1'invention,qui.sont les constituants antiviraux actifs desdites compositions, présentent une activité remarquable mêmes aux doses inférieures à 90 mg/kg par voie parentérale. 25 A titre d'exemple, on soumet à l'essai,au cours d'opérations représentatives, le composé 1, par voie intrapéritonéale à la dose de 10 mg/kg chez des souris infectées par le virus de la vaccine. On compte les lésions dues à la vaccine sur la queue des souris 8 jours après l'injection initiale de la vaccine. On compare le 30 nombre moyen des lésions chez les animaux traités avec celui que l'on observe chez les témoins. Le composé soumis à l'essai abaisse le nombre moyen des lésions jusqu'à 16,5 par rapport au nombre de 23 qui est observé dans le cas des témoins. L'activité antivirale supérieure des composés dé 35 l'invention est confirmée par l'essai de leur effet inhibiteur vis-à-vis du virus du sarcome de Rous, selon Diggelman et Coll. (Nature, 224, 1277, 1969)- En fait, tandis que les concentrations 71 19539 5 2100710 de 30yug/ral de rifampicine sont nécessaires pour abaisser jus-qu'à environ 30# le nombre de formations de foyers dans les cellules infectées par le virus du sarcome de Rous, les composés de l'invention abaissent déjà la formation des foyers jusqu'à 5 environ 15# aux concentrations variant entre 0,2 et 2^ug/ml. L'activité biologique est accompagnée, dans le cas des composés de l'invention, d'une faible toxicité,car lesdits composés ont des valeurs de DL^q supérieures à 2000 mg/kg par voie orale et à 700 mg/kg par voie intrapéritonéale chez les 10 souris. On illustre la préparation de quelques composés de l'invention dans les exemples suivants, indiqués à titre d'illustration sans nullement limiter ladite invention dans son cadre et son esprit. 3-5 BŒMPIE.l 3-(l-Pipérazlnyllminométhyl)-rifamycine SV On dissout 3,75g de 3-formyl-rifamycine SV dans environ 40 ml de tétrahydrofuranne. Ensuite, on ajoute 875mg de chlorhydrate de N-aminopipérazine (quantité stoechiométrique) 20 et 1,48ml de triéthylamine (environ 5 milliéquivalents). On agite le mélange à la température ambiante pendant 20 mn, on l'évaporé à siccité, on le traite avec du chloroforme (100 ml) et le lave avec de l'eau acide (3 x 100 ml), afin d'éliminer le sel de triéthylamine. Ensuite, on le sèche et on évapore la phase organique 25 à siccité. On cristallise le composé à partir de tétrahydrofuranne. Rendement 2g. Pt F.170°C (avec décomposition). Miçroanalyse: Calculé pour 5 C* 62,36 6,98 6,93 Trouvé : C# 62,06 H# 6,89 N# 6,87 30 Bandes significatives dans les spectres ultraviolet et visible (en solution méthanolique tamponnée à pH = 7,38): A max. 335 nyu; X max. 475 nyu. EXEMPLE_2 35 3-(2.ô-Dlméthyl-^-benzyl-l-plpérazinylimlnométhyl)-rifamycine SV On dissout 3g de 3-formylrifamycine SV dans 20 ml de tétrahydrofuranne et on y ajoute 1,2g de l-amino-4-benzyl-2,6-diméthylpipérazine, dissous dans 10 ml de tétrahydrofuranne, 71 19539 6 2100710 en agitant. Après 30 mn, la réaction est complète. On concentre la solution sous vide pour éliminer le solvant et on cristallise le composé à partir de méthanol. Rendement 2,4-5 g. Pt F.150-l60°C (avec décomposition). Calculé pour C^HggN^O^ : C# 66,07 H# 7,18 N# 6,04 Trouvé : C# 65,49 H# 7,39 N# 6,01 Bandes significatives dans les spectres ultraviolet et visible (en solution méthanolique tamponnée à pH = 7,38); 10 A max. 325 nyu A max. 475-4-80 nyu. EXEMPLE_3 3-(4-Benzyl-l-pipérazinyliminométhyl)-rifamycine SV On prépare le composé cité ci-dessus selon le mode 15 opératoire décrit dans l'exemple 2. Rendement 95#. Pt F.143-144°C. ??i2r°§S§lï§® Calculé pour C^H^N^O-^: C# 65,46 H# 6,95 N# 6,23 Trouvé : C# 64,86 H# 7,10 N# 5,99 Bandes significatives dans les spectres ultraviolet 20 et visible (en solution méthanolique tamponnée à pH = 7,38): A max. 334 nyuj A max. 470 nyu. EXEMPLE_4 3-(4-Phénéthyl-l-pipérazinyllminométhyl)-rlfamycine SV 25 On prépare le composé cité ci-dessus selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 2. Rendement 9,2 % .Pt F l49°C. Miçroanalyse Calculé pour C50H60N^012 : C# 65,77 H# 7,06 N# 6,14 Trouvé : C# 65,15 H# 7,28 N# 6,24 30 Bandes significatives dans lesspectrès ultraviolet et visible (en solution méthanolique tamponnée à pH = 7,38): X max. 338 nyu; A max. 480 nyu. EXEMPLE^ 35 3-/ÏÏ'-(3-Phénylpropyl)-l(pipérazinyllmlnométhyl7-rifamycine SV On prépare le composé cité ci-dessus selon le mode opératoire décrit dans l'exemple 2» Rendement 16,5# Pt F 174-175°C. 71 19539 7 2100710 Microanalyse Calculé pour : C# 66,07 H% 1A7 N# 6,04 Trouvé : C% 65,85 H# 7,31 N# 5,92 Bandes significatives dans les spectres ultraviolet 5 et visible (en solution méthanolique tamponnée à pH = 7,38): \ max. 334 nyu; \ max. 474 nyu. On prépare les aminopipérazines de départ selon la demande de brevet français intitulée "Compositions antivirales 10"contenant des dérivés d'amino-pipérazine, et procédé de préparation desdites compositions et desdits dérivés" déposée le même jour par la demanderesse sous n° TABLEAU__I Concentration produisant une nette inhibition de la croissance virale ■1/ ug/ml) Composé V-irus de la vaccine sous gélose dans un milieu liquide Herpès sous méthylcellulose vQ (_n OJ O 1) Me Me Me MeCOCV MeO. / \ CH=N-N NH \ / 1 - 5 Jl -CHg-C^ 1 - 5 2-5 2-5 2-5 oo o CD o TABLEAU I (suite) Concentration produisant une nette inhibition de la croissance virale (^ug/ml) Virus de la vaccine Herpès Composé sous gélose dans un milieu liquide sous méthylcellulose 5) Me Me Mel OH II MeCOOs>l utl 0 IlsMe Me | OH OH j Me°Y^Me^v>N^ï^NH J- CH-N-/ VoHg-CgiL m—r s—' Me "0 10 3-(4-méthyl-1-pipérazinyl lm inométhyl) rifamycine SV (rifampicine) 100 50 S > 400 O en UJ o vo NJ O O ""-4 71 19539 10 2100710 REVENDICATIONS 1. Compositions pharmaceutiques, notamment destinées au traitement des maladies virales,, caractérisées en ce qu'elles contiennent comme constituants actifs un ou plusieurs composés de formule générale suivante : 5 Me Me 15 dans laquelle R est choisi parmi un atome d'hydrogène et un radical phényl-alkyle inférieur, R' et R" sont, chacun, choisis parmi un atome d'hydrogène et un radical alkyle inférieur. 2. Procédé pour préparer une composition selon la 20 revendication 1, caractérisé en ce qu'on mélange un ou plusieurs composés actifs définis comme spécifié dans la revendication 1 avec un véhicule pharmaceutique convenable. 3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle renferme comme constituant actif la 3-(l-pipérazi- 25 ny lim lnométhyl)-rifamycine SV. 4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le constituant actif est la 3-(2,6-diméthyl-4-benzyl-l-pipérazinyliminométhyl)-rifamycine SV. 5. Composition selon la revendication 1, caractérisée 30 en ce que le constituant actif est la 3-(4-benzyl-l-pipérazinyl- iminométhyl)-rifamycine SV. 6. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que le constituant actif est la 3-(4-phénéthyl-l-pipérazinyl-iminométhyl)-rifamycine SV. 35 T. Composition selon la revendication 1,caractérisée en ce que le constituant actif est la 3-Z~^C3-phénylpropyl)-l-pipé- 71 19539 ii 21007-10 razinyliminométhyl7 - rifamycine SV. 8. Formes pharmaceutiques en vue de l'administration des compositions selon la revendication 1 par voie orale, par voie parentérale et par voie intranasale, notamment comprimés et capsules à 100 mg - 1 g de constituant actif; solutions, suspensions, nébulisats à 5 g de constituant actif pour 100 ml de composition. 9. Compositions selon la revendication 1, caractérisées en ce qu'elles forment des médicaments vétérinaires.