Brevet FR2092105A1 — publié le 19720121

La présente invention concerne de nouveaux inhibiteurs de pepsine, appelés ci-après "substance S-PI" et substance "Me S-PI", (ester méthylique de la première). Ces substances sont caractérisées par leur effet inhibiteur amélioré de l'activité enzymatique de la protéase acide, et en particulier de la pepsine. La substance S-PI et la substance Me S-PI conformes à la présente invention sont représentées par la formule : 10 CH„ CH, \ / 3 CH_ CH, CH, CH, CH o I 3 3V / 3 [ \ / \ / I CH CH CH2 CH3 CH5 \ CH CH_ CH. OH OH 15 20 25 CH, C O-M-CH-C 0-NH-CH-C 0-MH-CH-CH-CH„ -C O-NH-CH-C 0-HH-CH-CH-CHo -C OOR 5 d £ dans laquelle R est l'hydrogène ou un méthyle, quand R est l'hydrogène, la formule représente la substance S-PI, alors que, quand R est tua méthyle, la formule représente la substance Me S-PI. Suivant la présente invention, la substance S-PI est obtenue par fermentation du Streptomyces naniwaensis (E3? 44-20Î) dans un milieu nutritif approprié, et récupération de cette substance comme métabolite du bouillon de fermentation. L'autre substance, c'est-à-dire la substance Me S-PI, est obtenue par un traitement ultérieur de S-PI par un agent de méthylation. Il est bien connu que des substances ayant un effet inhibiteur de l'action enzymatique de la trypsine et des protéases microbiennes sont extrêmement répandues dans des sources naturelles, telles que les haricots, les céréales, les pommes de terre, le blanc d'oeuf, le sang et autres (Cf. "The enzymes" £, pages 128 et 213 (1960), par P.D. Boyer et col. ). Cependant, on ne savait pas, jusqu'à maintenant, qu'une substance ayant un effet inhibiteur de la protéase, et particulièrement de la protéase acide, se forme comme métabolite d'un microorganisme. K. Matsuhima et col. ont signalé qu'ils ont réussi à isoler un inhibiteur de la protéase dans un extrait de fermentation du 35 Pénicillium cyclopium /Cf. "Agricultural and Biological Chemistry" (Japan), £2, pages 544 et 549 (1969)/ . Dans cet article, les auteurs mentionnent que cet inhibiteur de protéase ne présente toutefois aucune action inhibitrice vis-à-vis de la pepsine qui est une 30 71 15153 2 2092105 protéase typique. Récemment, en même temps que l'on faisait de remarquables progrès dans les études pharmacologiques concernant l'ulcération des organes digestifs, on a dirigé des recherches nombreuses vers 5 l'aspect de l'action enzymatique de la pepsine afin de trouver les causes de l'ulcération ainsi que du développement des ulcères. On sait déjà que les esters d'acide sulfurique de polysaccha-ride sont des agents anti-ulcèreux efficaces. les effets pharmacologiques de ces substances reposent principalement sur leur activité 10 inhibitrice de la pepsine. Malheureusement, toutefois, il est connu que ces substances, lorsqu'on les administre, provoquent, en même temps, un effet secondaire nuisible, tel que l'empêchement de la coagulation du sang. la présente invention a d'abord pour objet de fournir de nou-15 veaux inhibiteurs de pepsine, c'est-à-dire la substance S-PI et la substance Me S-PI, qui ne présentent pas d'effet secondaire indésirable tel que ceux présentés par les esters d'acide sulfurique de polysaccharide connus. l'invention a aussi pour objet un procédé pour la production 20 de cette substance S-PI par fermentation d'un nouveau Actimomycetes. Elle a également pour objet tin procédé pour la production de la substance Me S-PI par traitement chimique de la substance S-PI. Elle vise également les applications thérapeutiques desdites substances. 25 A la suite de recherches poussées sur une gamme étendue de microorganismes, la Demanderesse a réussi à découvrir une souche appartenant au genre Streptomyces qui est apte à produire un nouvel inhibiteur de pepsine comme métabolite de cette souche. La présente invention repose, en fait, sur la découverte et l'utilisation de ce 30 microorganisme pour la production de ce nouvel inhibiteur de pepsine, c'est-à-dire la substance S-PI. De manière imprévisible, la Demanderesse a découvert que la substance S-PI présente une activité remarquable comme inhibiteur de pepsine, son activité inhibitrice vis-à-vis de la pepsine se mon-35 tant à environ 10.000 fois celle présentée par les esters d'acide sulfurique de polysaccharide connus. La substance S-PI est un oli-gopeptide ayant la composition chimique représentée par la formule indiquée ci-dessus, qui est tout à fait différente de celle des 71 15153 3 2092105 esters d'acide sulfurique de polysaccharide connus, et ne présente pas d'effet secondaire indésirable tel que l'empêchement de la coagulation du sang. La substance Me S-PI présente aussi un effet inhibiteur de la 5 pepsine presque équivalent à celui de la substance S-PI. Les deux substances sont donc également utilisables pour le traitement en toute sécurité d'un patient souffrant d'un ulcère peptique. La souche utilisée pour la mise en oeuvre du procédé de la présente invention a été isolée,par les inventeurs,du sol au Japon 10 et appelée Streptomyces naniwaensis (EF 44-201). Des spécimens de cette souche ont été déposés à l'Institut de Recherche sur la Fermentation du Japon sous le numéro FERM-P n° 278, et aussi à 1' "American Type Culture Collection". Le mycélium végétatif de la souche forme de nombreux mycelia ramifiés ayant un diamètre d'environ 1 micron et forme d'abondants mycelia aérobies. Le mycélium aérien bien poussé de la souche est fragmenté par septation pour former un sporophore, mais non un sporange. Le mycélium végétatif de la souche ne subit pas de septation. De ce fait, la souche est identifiée comme étant un Streptomyces (Genre). Les autres caractéristiques biologiques de cette souche sont les suivantes : A. Caractéristiques morphologiques. (1) Mycélium aérien : Le mycélium aérien est abondant. Les sporophores sont de longues spirales lâches et de branche irrégulière. (2) Spore : Ovale ou elliptique, de dimensions irrégulières, de 0,5 à 0,8 x 0,9 à 1,5 microns inclus. Les surfaces des spores sont couvertes de longues épines. B. La croissance de la souche dans divers milieux nutritifs à 27°C pendant 14 .jours est indiquée dans le tableau suivant : 35 Tableau I. Milieu nutritif Etat de la croissance Mycélium aérien Pigment soluble Agar de Czapeck trace pas pas 15 20 25 30 71 15153 2092105 Milieu nutritif Etat de la croissance Mycélium aérien Pigment so-luble Agar asparagine- incolore à brun glucose pâle 5 Agar glycérol- incolore malate de calcium 10 Agar glucose-peptone Agar de bouillon bien poussé bien poussé ; brun pâle gris brûnatre clair légèrement produit; blanc grisâtre légèrement produit gris brûnatre clair pas légèrement brun pâle pas Agar triptone- légèrement poussé extrait de levure pas pas pas pas Agar amidon-15 caséine Agar amidon-peptone-extrait de viande Agar albumine d'oeuf bien poussé ; incolore à marron foncé bien poussé; brun jaunâtre pâle légèrement poussé ; incolore gris brûnatre pourpre bru-clair nâtre à marron foncé gris brunâtre ambre clair clair légèrement produit; poudre blanche pas Agar pomme de terre- glucose 25 Tampon de pomme de terre Agar arginine-glucose 35 bien poussé ; incolore à brun bien poussé ; noir bien poussé ; incolore à pourpre brunâtre 30 légèrement pourpre produit ; gris brunâtre brunâtre clair gris brunâtre brun foncé clair à noir pourpre clair pourpre à pourpre brunâtre brunâtre C, Propriétés physiologiques. (1) Action chromogène (2) Décomposition de la cellulose (3) Activité de thyrosinage (4) Formation d'hydrogène sulfuré (5) Réduction de nitrate (6) Hydrolyse de l'amidon (7) Activité de catalase (8) Coagulation du lait - avec forte peptonisation 71 15153 5 2092105 (9) Liquéfaction de la gélatine - D. Utilisation d'hydrate de carbone. (1) arabinose - (2) raffinose -5 (3) xylose (4) galactose + (5) rhamnose (6) mannose - (7) lactose ^ + 10 (8) maltose + (9) fructose - (10) inositol (11) salicine - (12) glucose + 15 Dans ce qui précède, le signe (-) indique l'utilisation néga tive ; le signe (+) l'utilisation positive, et le signe (i) l'utilisation incertaine, respectivement. La fermentation du Streptomyces naniwaensis (EF 44-201) pour la production de la substance S-PI conformément à l'invention peut 20 être effectuée suivant les techniques et les connaissances classiques connues en ce qui concerne la fermentation des Actinomycetes. Dans la préparation d'un milieu nutritif approprié, on peut employer, comme composants essentiels, une source d'azote telle que la farine de graine de soja, la liqueur de macération du blé, la peptone, 1' 25 extrait de levure, l'extrait de viande, la levure sèche, un nitrate inorganique, un sel d'ammonium, etc... ; et une source de carbone telle qu'un hydrolysat d'amidon, du glucose, des mélasses et autres. Si nécessaire, on peut utiliser tout autre sel inorganique approprié tel que E^HPO^, FeSO^, MnSO^, etc..., et des produits additifs ap-30 propriés tels qu'un agent anti-moussant et autres. La substance S-PI objet de la présente invention s'accumule dans le bouillon obtenu par la fermentation du Streptomyces naniwaensis (EF 44-201) dans un milieu nutritif conformément à un procédé classique tel qu'une culture immergée, une culture fixe, ou 35 une culture en surface, à une température comprise entre environ 20°C et environ 35°C pendant environ 10 à 96 heures. La substance S-PI obtenue peut être recueillie du bouillon fermenté de manière avantageuse, du fait de ses propriétés 71 15153 6 2092105 chimiques et physiques profitables, conformément au mode opératoire habituel. Par exemple, le bouillon fermenté peut immédiatement être évaporé à sec ; ou le bouillon peut être d'abord traité avec du charbon actif pour enlever la substance S-PI. Dans ce dernier cas, 5 le charbon actif récupéré est ensuite traité avec un solvant miscible à l'eau tel que le méthanol pour séparer la substance désirée. De la solution d'élution, on récupère la substance S-PI par évapo-ration à sec. Le charbon actif qui porte la substance S-PI peut aussi être 10 lavé avec une solution alcaline aqueuse préalablement au stade du traitement mentionné ci-dessus avec le solvant miscible à l'eau. Dans certains cas, on a trouvé désirable de répéter le traitement de la substance recueillie S-PI avec le charbon actif afin dréliminer toute matière colorée. Suivant une variante, la substan-15 ce brute S-PI peut être récupérée du bouillon fermenté au moyen d' une précipitation par le sulfate d'ammonium. Si nécessaire, la substance brute S-PI peut être encore purifiée par une chromatographie en colonne connue sur Sephadex LH-20 (marque de fabrique), du gel de silice, des résines échangeuses d' 20 ion et autres. En plus de ce qui précède, on peut obtenir une substance S-PI purifiée sous forme de précipité en acidulant la solution alcaline de la substance brute à concentration élevée avec un acide minéral. La production de la substance Me S-PI qui constitue l'autre 25 aspect important de la présente invention peut être effectuée en traitant la substance S-PI mentionnée ci-dessus brute, semi-purifiée ou purifiée, avec un agent de méthylation par estérifieation connu, tel que le diazométhane ou le méthanol, en présence de chlorure de thionyle ou d'acide chlorhydrique sec. La substance obtenue Me S-PI 30 peut être recueillie par un procédé connu sous la forme d'une poudre blanche. Comme la substance S-PI libre, la substance Me S-PI ainsi obtenue présente un effet inhibiteur notable vis-à-vis de la pepsine et des autres protéases acides. Ci-après, on donne les propriétés physiques de la substance 35 S-PI et de la substance Me S-PI : (1) Propriétés de la substance S-PI. La substance commence à se colorer à environ 215°C, puis suit une décomposition à environ 227 - 230°C. Elle ne donne pas de point 71 15153 7 2092105 de fusion net. La substance est peu soluble dans l'eau dans les limites de pH entre acide et neutre, mais est soluble dans les limites du pH alcalin ; soluble dans le méthanol et l'acide acétique ; moins solu-5 ble dans l'éthanol et le butanol ; et pratiquement insoluble dans le benzène, l'éther, l'éther de pétrole, le chloroforme, le tétrachlorure de carbone, l'hexane, et l'acétate d'éthyle. Si l'on considère le résultat de l'électrophorèse sur papier et autres, on reconnaît que la substance S-PI est une substance acide. 10 Dans la région qui va de 1'ultra-violet aux rayons visibles, la substance ne montre pas de photo-absorption particulière. Les photoabsorptions dans la région des rayons infra-rouge mesurées dans une pastille de bromure de potassium sont indiquées graphiquement dans la Fig. 1 annexée, dans laquelle on donne les longueurs d'ondes en 15 unités de cm~^ en abscisses, et le pourcentage d'absorption en ordonnées. Sur ce graphique, on observe des absorptions marquées pour les longueurs d'ondes suivantes : 3320, 3090, 2970, 1635, 1520-1555, 1387, 1370, 1290, 1223, 1175, 1155, 1070 et 855. 20 La rotation spécifique de la substance est de -90° à -93° (e = 1,0 dans le méthanol). Dans la réaction à la ninhydrine, la substance per se est négative, alors que son hydrolysat est positif. La réaction de Rydon-Smith de la substance ^H.N. Rydon et 25 P.W.G. Smith, "Nature" 162, 922 (1952)7 est positive. -j La chromatographie en couche mince de la substance sur du gel de silice ®254 (n^rque de fabrique déposée, vendu par Merk A.G., en Allemagne) donne les valeurs suivantes de R^ respectivement. 0,40 à 0,50 dans du méthanol-benzène (1:1) 30 0,1 à 0,2 dans du méthanol-chloroforme-benzène (1 : 1 : 1) et 0,28 à 0,32 dans du benzène-méthanol-acide acétique (80 : 20 : 5). (2) Propriétés de la substance Me S-PI. La substance Me S-PI a un point de fusion de 247 à 249°C. Elle est peu soluble dans l'eau pour toute la gamme des limi-35 tes de pH ; soluble dans le méthanol et l'acide acétique ; peu soluble dans l'éthanol et le butanol. Dans le benzène, l'éther, l'éther de pétrole et le chloroforme, la substance est pratiquement insoluble. 71 15153 8 2092105 Du fait du résultat de l'électrophorèse sur papier et autres, on reconnaît que la substance est une substance neutre. Dans la région de l'ultra-violet aux rayons visibles, la substance ne montre pas de photo-absorption particulière. 5 Le spectre infra-rouge du 'composé dans une pastille de bromure de potassium est indiqué graphiquement dans la Fig. 2 annexée, dans laquelle les longueurs d'ondes sont données en abscisses et les pourcentages d'absorption en ordonnées. Sur le graphique, on observe des absorptions marquées pour les longueurs d'ondes suivantes : 10 3330, 3080, 1730, 1610-1660, 1520-1570, 1440, 1380, 1370, 1295, 1263, 1225, 1175, 1153, 1072, 990, 927, 892, 865, 650, 820, 795, 755 et 715. La rotation spécifique de la substance est comprise entre -91° et -93° (c = 0,1 dans le méthanol). 15 Dans la réaction de la ninhydrine, la substance per se est négative, alors que son hydrolysat est positif. y- La réaction de Rydon-Smith de la substance ,'_H.N. Rydon et P.W.G. Smith ; "Nature" 169, 922 (1952)7 est positive. J. La chromatographie en couche mince de la substance sur du 20 gel de silice (marque de fabrique déposée, vendue par Merk A.G. en Allemagne) donne les valeurs suivantes de R^. respectivement : 0,80 à 0,90 dans le méthanol-benzène (1 : 1) 0,85 à 0,95 dans le méthanol-chloroforme-benzène (1 : 1 : 1) ; et 0,35 à 0,40 dans le benzène-méthanol-acide acétique (80 : 20 : 5). 25 II résulte des analyses par divers moyens, tels que l'analyse d'amino-acide, l'analyse chromatographique gazeuse, la spectrométrie dans 1'infra-rouge, la spectrométrie de masse à haute résolution, et la résistance nucléaire magnétique, qu'il se confirme que la substance S-PI a la formule suivante : 30 35 CEL CE N CH CH^ CH. , 3 -3 CH CH, V 3 CH CH ! CH. CH CH, CH, \f 3 CH ! CHg OH I OH I CH^C 0-IîH-CH-C 0-NH-CH-C O-NH-CH-CH-CI^ -CO-NH-CH-C O-NH-CH-CH-C^ -C 00H L'effet inhibiteur de la pepsine représenté par la substance S-PI et la substance Me S-PI a été démontré par 11 essai suivant : 71 15153 9 2092105 A deux lots% de 2,5 csP d'une solution aqueuse de caséine (pH 2,5), on a ajouté respectivement 0,2 cm d'une solution aqueuse de la substance S-PI ou 0,2 moled'une solution aqueuse de méthanol de la substance Me S-PI, les concentrations des substances dans les so-5 lutions respectives variant de l'une à l'autre. A chacun des mélanges obtenus, maintenus à la température de 37°C, on a ajouté 0,5 cm d'une solution aqueuse à 5 °/° de pepsine, et on a laissé incuber le tout à 37°C pendant 10 minutes. On ajoute 2 cm d'une solution aqueuse à 10 ?'• d'acide trichloracétique à cha-10 cune des solutions et on laisse reposer les mélanges à 37°C pendant 30 minutes. L'excès de caséine précipité est enlevé par filtration. 3 A chaque partie aliquote de 1 cm des filtrats récupérés, on 3 ajoute 5 cie d'une solution aqueuse 0,44 molaire de carbonate de 15 sodium et 1 cm d'un réactif au phénol (réactif de Eolin), et on agite bien le tout. Après 60 minutes, on examine la photo-absorption à une longueur d'ondes de 660 mp. de chacun des mélanges obtenus. En même temps, on effectue deux essais témoins dans les mêmes conditions que celles mentionnées ci-dessus, sauf que la substance S-PI 20 et la substance Me S-PI sont éliminées. On a déterminé, en comparaison avec les essais témoins, la quantité individuelle de la substance S-PI et de la substance Me S-PI nécessaire pour une diminution de 50 % de l'activité de pepsine, que l'on désigne par le terme comme mesure de l'effet 25 inhibiteur de pepsine de ceux-ci. Les résultats ainsi obtenus sont : A/50 r1'2»1'8 ■jig pour la substance S-PI, et 50 ^ = 1,2 à 1,8 jug pour la substance Me S-PI. Du fait des caractéristiques physiques et chimiques ainsi que 30 biologiques mentionnées ci-dessus de la substance S-PI et de la substance Me S-PI, celles-ci se distinguent des inhibiteurs de protéase connus jusqu'à présent. Les exemples ci-après servent à illustrer le mode de réalisation de l'invention, et ne sont pas limitatifs. 35 Exemple 1. A 14 litres d'un milieu nutritif aqueux, qui contient 4 f° de glucose, 2 fo d'extrait de viande, 2 % de polypeptone et 0,2 % de chlorure de sodium, on ajoute 1 litre de liquide fermenté préparé 71 15153 10 2092105 au préalable en faisant incuber le Streptomyces nanivaensis (EF 44-201) sous agitation à 27°C pendant 24 heures dans un milieu nutritif aqueux ayant la même composition que ci-dessus. Le tout fermente à 27°C pendant 24 heures sous agitation à 5 300 tours par minute et avec aération à la vitesse de 15 litres par minute. Le bouillon est ensuite filtré pour enlever les cellules. On amène 11 litres du filtrat (pH environ 5,4) à un pH 2,0 par addition d'acide chlorhydrique. On ajoute 2,5 % (poids/volume) de charbon actif au filtrat et on agite le mélange pendant environ 30 mi-10 mîtes pour effectuer l'adsorption de la substance S-PI obtenue sur le charbon. On récupère le charbon actif par filtration et on 1' extrait trois fois avec chaque fois 4 litres de méthanol. Les extraits combinés de méthanol sont soumis à une distillation sous pression réduite pour enlever le solvant. 15 On dissout le résidu dans 1,1 litres d'eau. La solution est de nouveau traitée avec du charbon actif. Ce dernier est récupéré par filtration et lavé deux fois avec chaque fois 1 litre d'une solution alcaline aqueuse chaude. Dans ce traitement, toutes les matières colorées se présentant comme impuretés sont presque com-20 plètement enlevées. L'élution hors du charbon actif de la substance S-PI se fait avec 300 cm de méthanol, et le méthanol est chassé par distillation sous pression réduite. On obtient 2,78 grammes de résidu, quel'on dissout à nouveau dans du méthanol. On verse la solution de méthanol dans une colonne de 3 cm de diamètre et 45 cm 25 de hauteur remplie de Sephadex LH-20, et on fait l'élution avec du méthanol. On recueille 150 à 210 cm des fractions de l'éluat et on enlève le solvant par distillation. On obtient 1,58 grammes de la substance S-PI sous forme d'une poudre blanche amorphe. 30 Exemple 2. Le Streptomyces naniwaensis (EE 44-201) est inoculé à 100 cm d'un milieu nutritif contenant 5-$ de peptone, 0,1 $ de chlorure de sodium, 0,1 % de phosphate di-potassique, 0,05 % de sulfate de magnésium, 0,001 % de sulfate ferreux, 0,0001 fo de sulfate de man-35 ganèse, 0,0001 % de sulfate de cuivre et 0,0001 $ de sulfate de zinc. Le tout est incubé à 27°C pendant 48 heures sous agitation. Après ce temps, on trouve une accumulation de 1,2 mg/cm de la 71 15153 2092105 substance S-PI dans le bouillon fermenté. On traite à nouveau le bouillon après filtration, successivement par fractionnement avec du sulfate d'ammonium, adsorption avec du charbon actif, et chromatographie en colonne avec du Sephadex 5 LH-20 et du gel de silice. On obtient 13 mg de la substance S-PI purifiée. L'analyse élémentaire du sel de sodium de la substance S-PI donne : C^HcjgN^OgîIa (poids moléculaire = 665,8) 10 G H ET Calculé (fo) 55,92 8,48 10,52 Trouvé {%) 55,74 8,71 10,66 Exemple 3. On dissout 500 mg de la substance S-PI obtenue dans l'exemple 3 3 15 1 dans 10 cm de méthanol. A la solution additionnée de 15 cm d'é-ther, on ajoute goutte à goutte une solution éthérée de diazo-métha-ne, avec refroidissement par de la glace jusqu'à ce que la coloration jaune de la solution soit persistante. Après la fin de la réaction, on enlève le solvant par distillation sous pression réduite. 20 Le résidu est soumis à des traitements successifs de chroma tographie sur du gel de silice et du Sephadex LH-20. On obtient 350 mg de la substance Me S-PI sous la forme d'une poudre blanche amorphe. Le produit ne donne qu'une seule tache en chromatographie en 25 couche mince. L'analyse élémentaire de la substance obtenue donné : C„_H,_.JîirOn (poids moléculaire =657,8) 32 59 5 9 C H Calculé (%) 58,42 9,03 10,64 30 Trouvé {fo) 58,59 9,04 10,80 Exemple 4. On dissout 500 mg de là substance S-PI obtenue dans l'exemple 1 dans 50 cm de méthanol absolu. La solution obtenue est saturée avec de l'acide chlorhydrique sec. Le solvant est ensuite enlevé de 35 la solution par distillation sous pression réduite. Le résidu est 3 dissous dans une petite quantité (environ 5 cm ) de méthanol et ensuite soumis à une concentration sous pression réduite. Les traitements avec du méthanol sont de nouveau répétés trois fois. Le 71 15153 12 2092105 résidu obtenu est dissous dans une petite quantité (environ 5 cm ) de méthanol, et on enlève toute matière solide par filtration. Le filtrat est soumis à une chromatographie sur du gel de silice et ensuite sur du Sephadex LH-20. On obtient 300 mg de la substance Me S-PI sous la forme d'une poudre blanche amorphe. Le produit ne donne qu'une seule tache par chromatographie en couche mince. 71 15153 13 2092105 BEVEHDICATIOHS. 15 20 25 30 1 - Un inhibiteur de pepsine, désigné par le terme de substance S-PI, qui est le métabolite de fermentation du Streptomyces naniwaensis (EF 44-201) et a pour formule : CH. * / \ FE3 CH. CH • ,CH* 'v/ 5 CH CH, CH, \ / 3 CH 0H3 fS CH 10 CH. 0H CH5. CH. OH CH,C O-M-CH-C 0-KH-CH-C 0-ÏÏH-CH-CH-CHo-C O-HH-CH-C 0-ÏÏH-CH-CH-CH„ -C 00H 3 2 2 2 - Un inhibiteur de pepsine, désigné par le terme de substance Me S-PI, qui est l'ester méthylique de la substance S-PI revendiquée à la revendication 1 et a pour formule : 0H3 /0H3 CH CH, CH. \ CH 3. n CH CH, \/ 3 CH CH CH f CH. CH^ C^ OH f OH I CH^C O-NH-CH-C 0-HH-CH-C O-NH-CH-CH-C!^ -C 0-HH-CH-C O-HH-ÇH-CH-CI^-C OOCH^ 3 - Un procédé pour la préparation de la substance S-PI, caractérisé par le fait qu'on fait fermenter le Streptomyces naniwaensis (EF 44-201) dans un milieu nutritif, et on recueille la substance S-PI dans le bouillon fermenté. 4 - Un procédé pour la préparation de la substance Me S-PI, caractérisé par le fait que l'on fait réagir la substance S-PI, avec un agent de méthylation par estérification, et on recueille la substance obtenue Me S-PI du mélange de réaction. 5 - Un médicament notamment pour lutter contre les ulcères, caractérisé en ce qu'il comprend la substance S-PI ou Me S—PI.