Brevet FR2101115A1 — publié le 19720331

La présente invention concerne un médicament pancréatique et son procédé de fabrication. On sait que le suc pancréatique contient trois séries de diastases essentielles pour la digestion et qui sont la lipase, l'amylase et les protéases, ces dernières étant secrétées par le pancréas à l'état inactif, sous forme de zymogènes et se transformant en trypsine et chymotrypsine par autocatalyse trypsique au moment où elles pénètrent dans le duodénum. En cas d'insuffisanoepancréatique, il est courant d'administrer aux malades des médicaments préparés à partir des glandes pancréas tiques de certains animaux, et plus particulièrement des porcs. Cependant les médicaments pancréatiques actuellement connus ne sont pas d'une grande efficacité et cela pour les raisons suivantes dans un organisme vivant, les protéases contenus dans le pancéas sont maintenues à l'état de proenzymes ou zymogènes inactives par des facteurs inhibiteurs de la réaction protéolytique qui retardent l'activation de ces zymogènes (trypsinogènes et chymotrypsinogènes) jusqu'S ce qu'ils parviennent dans le milieu duodénal. Par contre, après la mort de l'animal dont le pancréas est prélevé, les facteurs anti-protéolytiques disparaissent, les proenzymes s'activent très rapidement et les trypsines et les chymotrypsines qui en résultent attaquent et dénaturent ultérieurement la liapse et l'amylase, phénomène connu sous le nom d'au-to-digestion du pancréas. De ce fait les médicaments préparés à l'aide de glandes pancréatiques prélevées sur les animaux abattus ne contiennent que des protéases activées de sorte que les autres enzymes de la préparation telles que la lipase et l'amylase sont détruites en cours de fabrication ou de stockage du médicament dont l'activité lipasique et amylasique est variable et toujours insuffisante, alors que l'activité protéolytique peut être conservée.Jusqu'à présent, dans le cas d'affections pancréatiques graves, une amélioration sensible des fonctions digestives des malades ne pouvait être obtenu que par l'administration de pancréas frais, ce qui présente pratiquement des difficultés considérables. La présente invention a pour objet un médicament pancréatique dont les activités lipasique et amylasique sont conservées jusqu'à son administration et plus précisément, sous forme de médicament-retard, jusqu'à son introduction dans le duodénum, comme cela est le cas du suc pancréatique secrété par l'organisme. Ce nouveau médicament est caractérisé par le fait qu'il est constitué par des glandes pancréatiques fraiches contenant des protéases-non activées à l'état de zymogènes et additionnées de facteurs anti trypsiquesinhibant la réaction protéolytique de façon à conserver la teneur de la préparation en lipase et en amylase. En effet, les facteurs antiprotéolytiques contenus dans le pancréas, même s'ils sont conservés après la mort de l'animal, ne permettent d'inhiber que 20 à 30 % de l'activité trypsique et chymotrypsique potentielle, de sorte que pour conserver l'activité lipasique et amylasique de la préparation il faut, en plus de la conservation des facteurs anti-protéolytiques naturels, lui ajouter des inhibiteurs supplémentaires. Les facteurs anti-trypsiques utilisés conformément à l'invention sont constitués par des produits d'origine animale ou végétale, tels que le sérum sanguin , le blanc d'oeuf ou les graines de certaines céréales ou de certains légumineuses. L'invention concerne également un procédé de fabrication du médicament pancréatique retard défini ci-dessus et qui consiste en deux phases, la première étant destinée à bloquer l'activation des protéases tant que la préparation n'est pas introduite dans un milieu ayant les caractéristiques du milieu duodénal, c'est-à-dire une température de 379C et un pH égal à 8, et dont la deuxième phase est destinée à incorporer à la préparation les inhibiteurs supplémentaires mentionnés plus haut.Ce procédé est caractérisé par le fait qu'il consiste d'abord à bloquer l'activation des protéases c'est-à-dire la transformation des trypsinogènes et des chymotrypsinogènes en trypsine et chymotrypsine, en traitant les glandes pancréatiques prélevées, immédiatement après l'abattage des animaux, dans un bain glacé acide ayant un pH compris entre 4,5 et 5 pendant une durée comprise entre 30 minutes et I heure, puis à broyer les glandes retirées du bain avec un facteur anti-trypsique additionnel, le mélange homogénéisé étant deshydraté, de préférence par lyophilisation. L'acide utilisé pour la première phase du traitement peut être l'acide chlorhydrique, l'acide acétique, l'acide citrique ou de préférence l'acide lactique, la solution étant additionnée de bicarbonate de soude pour ajuster la valeur du pH. On choisira de préférence comme agent antiprotéolytique un extrait de farine de blé (préparé par extraction aqueuse, centrifugation, et déshydratation) dont I gramme peut inhiber l'activité de 5.000 à IO.OOO unités Armour de trypsine. L'extrait de farine de blé est mélangé aux glandes immédia tement après la sortie du bain acide, au moment du broyage. La quantité à utiliser peut varier de 50 à IOO grammes de produit sec par kilog de pancréas frais. Le mélange ainsi homogénéisé est alors déshydraté, de préférence par lyophilisation ou tout autre procédé permettant de conserver au maximum les enzymes pancréatiques. On obtient ainsi un produit sec dont l'équipement enzymatique est le reflet fidèle de celui du pancréas frais : protéases stabilisées à l'état de pro-enzymes, forte teneur en lipase et en amylase. Afin d'illustrer les caractéristiques de l'invention on a décrit ci-dessous un mode d'exécution du procédé de préparation du nouveau médicament, ainsi que les modes de présentation préférés et les résultats chimiques obtenus. EXEMPLE On prend 3 kg de pancréas de porc, prélevés dès l'abattage des animaux que l'on recueille dans I5 litres d'un bain glacé isotonique ayant la composition suivante Chlorure de sodium 6g Acide lactique 4,5g Eau distillée I litre Bicarbonate de sodium O.S. pour pH 4,5 Les glandes sont maintenues dans ce bain glacé pendant 30 minutes à une température voisine de +30C. Pour que la température ne remonte pas au-dessus de +30C, une partie du mélange est incorporé sous forme de glace. Les glandes sont retirées du bain, puis placées dans un broyeur et saupoudrées avec I50g de facteur anti-trysique de blé. Pour faciliter le broyage, on ajoute I,5 litre de la solution isotonique précédemment citée, dont la moitié sous forme de glace. Le broyage est effectué à la grille fine de 0,5 mm pour obtenir une bouillie bien homogène. On lyophilise en plaques. Le produit est à pH 4,5. CONTROLES Les dosages enzymatiques effectués comparativement sur le produit réhydraté, sur du pancréas frais, et sur une pancréatine du commerce, donnent les résultats suivants Pancréas frais Pancréas pré- Pancréatine paré selon la commerciale demande Chymotrypsine I00 UT 200 UI I3.500 UI Chymotrypsinogène I7.500 UI I7.000 UI O Lipase 64.000 UI 62.000 UI 25.000 UI Titre amylolytique Codex I68 I67 I08 Les dosages d'enzymes étant rapportés au gramme de ma- tière sèche, il apparait que l'équipement enzymatique du pancréas préparé selon la demande, est conforme à celui du pancréas frais. Par ailleurs l'étude de l'activation trypsique de deux échantillons, recueillis, dans le même bain acide, mais dont un seul a été préparé en présence de facteur anti-trypsique de céréale montre (I) (2) Pancréas seul Pancréas + Facteur anti-trypsique de blé Activité trypsique spontané 0,1 unité NF/mg O,OI unité NF/mg Activité protéolytique potentielle 200 unités NF/mg 200 unités NF/mg L'inhibition est donc IO fois plus forte en présence de facteur anti-trypsique de céréales. De même l'étude de l'activation spontanée des 2 produits à 370C, pH 8 en présence de calcium, montre que dans le premier échantillon, il faut 8 heures pour obtenir une activation complète de la trypsine, alors qu'il en faut I6 pour obtenir le même résultat dans le deuxième échantillon préparé selon l'exemple ci-dessus, comme le montre le tableau ci-après Temps (heures) 2 2 4 8 I6 24 h -Trypsine activé (Unité s NF/mg) (I) : Pancréas seul 0,8 2 200 200 200 (2) : Pancréas + F.anti-trypsique 0,3 0,8 T 200 200 PRESENTATION Le produit obtenu selon la demande peut être présente, à titre d'exemples non limitatifs - en flacons contenant 5 à IOg de poudre orale - en sachets contenant I à 2 g de principe actif - en gélules ou en comprimés dosés à 500 mg de principe actif ESSAIS CLINIQUES I1 a été utilisé chez des malades présentant une insuffisance pancréatique sévère, secondaire à une pancréatite chronique, une pancréatectomie, une gastrectomie ou une fistule digestive, à la dose quotidienne de 5 à IO g, après échec des extraits pancréatiques du commerce. Des résultats cliniques spectaculaires ont été enregistrés réduction de la diarrhée dès les premiers jours du traitement, amé lioration voire disparition des phénomènes douloureux, réparation progressive de l'état de dénutrition. Par ailleurs, l'étude des débits fécaux de graisses et d'azote ont montré une réduction consi érable de la stéatorrhée (élimination des graisses) et de la créatorrhée (élimination d'azote), comme le montre le tableau ci-après: : STEATORRHEE CREATORRHEE g/24 heures g/24 heures Avant traite Sous trai- Avant trai Sous trai ment tement tement tement Pancréatite chronique calcifiante 52,8 I4,3 9,2 3,2 Fistule pancréatique 45,2 I6,6 6,5 2,8 Pancréatectomie sub totale 22,5 5,2 4,8 2,3 Syndrôme carentiel postgastrectomie 19,3 3 3,4 0,9 REVENDICATIONS I - Médicament pancréatique constitué par une préparation à base de glandes pancréatiques fraîches contenant des protéases non actives à l'état de zymogènes, caractérisé par le fait que cette préparation contient des facteurs anti-trypsiques inhibant la réaction protéolytique de façon à conserver l'intégralité du potentiel enzymatique des glandes. 2 - Médicament suivant la revendication I, caractérisé par le fait que les facteurs anti-trypsiques sont constitués par des produits d'origine animale ou végétale, tels que le sérum sanguin, le blanc d'oeuf ou les graines de certaines céréales ou de certaines légumineuses. 3 - Médicament suivant la revendication 2, caractérisé par le fait que les facteurs anti-trypsiques sont constitués par des extraits de farine de blé ou de soja. 4 - Procédé de préparation d'un médicament pancréatique suivant les revendications I et 2, caractérisé par le fait qu'il consiste d'abord à bloquer l'activation des protéases, c'est-à-dire la transformation des trypsinogènes et des chymotrypsinogènes en trypsine et chymotrypsine, en traitant les glandes pancréatiques prélevées, immédiatement après l'abattage des animaux, dans un bain glacé acide ayant un pH compris entre 4,5 et 5 pendant une durée comprise entre 30 minutes et I heure, puis à broyer les glandes retirées du bain avec un facteur anti-tryptique additionnel, le mélange homogénéisé étant deshydraté, de préférence par lyophilisation. 5 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé par le fait que le milieu acide est constitué par un acide tel que l'acide chlorhydrique, acétique, citrique ou de préférence lactique, additionné de bicarbonate de sodium pour ajuster le pH. 6 - Procédé suivant la revendication 4, caractérisé par le fait que l'on utilise pour 3 Kg de pancréas de porc 15 litres d'un bain glacé isotonique ayant la composition suivante 6 g de chlorure de sodium 4,59 d'acide lactique pour I litre d'eau distillée Bicarbonate de soude pour amener le pH à 4,5 ce bain étant maintenu à une température uniforme de +30C en ajoutant une partie du mélange sous forme de glace. 7 - Procédé suivant les revendications 4,5 et 6,caractérisé par le fait que pour faciliter le broyage on ajoute au produit sorti du bain I,5 litre de solution isotonique dont une partie sous forme de glace. 8- Procédé suivant la revendication 4, caractérisé par le fait que l'on ajoute comme facteur antitrypsique de l'extrait de farine de blé dans une proportion de 5 % par rapport au poids du pancréas frais.