Brevet FR2059499A1 — publié le 19710604

L'invention concerne des peptides courts, comportant une séquence d'amino-acides pratiquement semblable à une certaine partie des hormones adrénocorticotropes. Ces peptides, leurs sels, leurs dérivés et leurs complexes ont 5 un important pouvoir psychopharmacologique* La revue Science m» 318, (1966) indique que le décapeptide correspondant à la séquence des amino-acides 1 à 10 des hormones adrénocorticotropes, dans lequel la phénylalanine est présente sous la forme D, possède une certaine action sur le système ner-10 veux central* Or on a trouvé que de façon étonnante les peptides beaucoup plus courts ayant pour formule générale : X-(L ou D)-Met-L-Glu-(ou Gin)-L-His-D-Phe-L-Arg-(ou L-Lys)--L-Trp-Y, 15 dans laquelle, X représente un atome dfhydrogène, le groupe H-(L ou D)-Ser- ou H-Gly- et Y représente un groupe hydroxyle ou le groupe -Gly-OH, et leurs sels, leurs dérivés et leurs complexes, possèdent un pou-20 voir supérieur ou au moins égal sur le système nerveux central, par rapport au décapeptide connu, par administration à la môme dose, et que leur action est bien plus spécifique* Les peptides selon la formule générale ci-dessus accélèrent de façon particulièrement importante la vitesse de perte de la 25 réponse d'évitement, raison pour laquelle ils sont très utiles dans le traitement de certains troubles mentaux* Parmi les peptides selon la présente invention, on préfère le groupe ayant pour formule : X-(L ou D)—M3t—L—Slu—(ou Gin)-L-His-D-Phe-L-Arg-(ou L-Lys)-30 -L-Trp-OH, dans laquelle X a la même signification que ci-dessus, et leurs sels, dérivés et complexes. Ce groupe de peptides a la meilleure spécificité, de plus pour des raisons économiques (il correspond au plus petit peptide), il 35 est également préférable. Comme l'indiquent les formules générales ci-dessus, on peut utiliser dans la synthèse des peptides ci-dessus la glutamine au lieu de l'acide gLutamique. Il est bien sûr également possible d'obtenir le même résultat en transformant le groupe carboxyle 40 latéral du reste d'acide glutamique en groupe amide lors de la 70 25433 2 2059499 synthèse du peptide final. Comme indiqué, on peut remplacer l'arginine par la lysine, sans modifier l'activité des peptides. On préfère cette modification car elle facilite la synthèse. 5 On peut préparer les nouveaux peptides selon les procédés classiques utilisés pour 1*élaboration des peptides connus. Pour cela, on place sur les amino-acides des groupes protecteurs aux emplacements convenables, puis on les couple dans l*ordre correct, ou on combine de petits peptides en ensembles plus importants. Après 10 synthèse, les groupes protecteurs, présents dans la molécule de peptide, sont enlevés selon un procédé classique, après quoi, si on le désire, le peptide obtenu peut être transformé en tin sel, un dérivé ou un complexe. On prépare généralement le s peptides î 15 a) en condensant un acide aminé ou un peptide ayant un groupe a-amino protégé et un groupe carboxylique terminal activé avec un àmino-acide ou un peptide dont le groupe ct-amino est libre; b) en condensant un amino-acide ou un peptide ayant un groupe a-amino activé et un groupe carboxyle protégé avec un amino-acide 20 ou un peptide ayant un groupe carboxylique terminal libre et un groupe a-amino protégé; c) en condensant un amino-acide ou un peptide ayant un groupe carboxyle libre et un groupe a-amino protégé avec un amino-acide ou un peptide ayant un groupe a-amino libre et un groupe carboxylique 25 protégé. L'activation du groupe carboxyle peut être réalisée par exemple en transformant le groupe carboxyle en un halogénure d'acide, un azide, un anhydride ou un imidazolide, ou en un ester activé tel que 1'ester cyanométhylique ou 1*ester p-nitrophénylique. 30 On peut activer le groupe amino en le transformant par exemple en un phosphate d*amide. Les procédés les plus classiques de condensation des amino-acides ou des peptides sont : le procédé au carbodiimide, le procédé à l»azide, le procédé à l'anhydride et le procédé aux esters 35 activés, décrits par exemple dans "THE PEPTIDES" Volume I, 1965 (Academic Press) par E. Schroder et K. Lûbke. De plus, on peut utiliser pour réaliser les présents peptides le procédé dit en phase solide de Merrifield, décrit dans J. Am. Chem. Soc. 8£, 2 149 (1963). 40 Les groupes fonctionnels libres de l*amino—acide ou du peptide, 70 25433 3 2059499 qui ne doivent pas entrer dans la réaction de condensation, sont protégé* de façon efficace par des groupes dits groupes protecteurs, que l'on peut éliminer facilement par hydrolyse ou réduction. Ainsi, par exemple, le groupe carboxyle peut être protégé de 5 façon efficace par exemple par estérification avec le méthanol, i'éthanol, le butanol tertiaire, l'alcool benzylique ou l'alcool p-nitro-benzylique ou en le transformant en amide. Cependant ce dernier groupe est très difficile à éliminer si bien que l'on préfère ne l'utiliser que pour protéger le groupe hydroxylique 10 terminal du peptide terminé, c'est-à-dire le groupe carboxyle de la glycine ou du tryptophane. Les groupes protégeant l'azote sont généralement des groupes acides, par exemple un groupe acide dérivant d'un acide carboxylique aliphatique, aromatique, arylalipha-tique ou hétérocyclique tel que l'acide acétique, l'acide chloro-15 acétique, l'acide butyrique, l'acide benzoïque, l'acide phényla-cétique, l'acide pyridine-carboxylique, ou un groupe acide dérivant de l'acide carbonique tel que les groupes éthoxy-carbonyle, benzyloxy-carbonyle, t-butyloxy-carbonyle ou p-méthyloxy-benzyl©~ xy-carbonyle, ou un groupe acide dérivant d'un acide sulfonique 20 tel que les groupes benzène-suifonyle ou p-toluène-sulfonyle, mais on peut également utiliser d'autres groupes, tels que des groupes aryles ou arylalkyles substitués ou non substitués,tels que par exemple les groupes benzyle ou triphénylméthyle. On protégera de préférence le groupe guanidine de l'arginine 25 par un groupe nitro, tandis que l'on protégera de préférence le groupé imino de l'histidine par un groupe benzyle ou trityle. On préfère en général utiliser un ester butylique tertiaire pour protéger le groupe carboxyle et un groupe butyloxy-çarbonyle, benzyloxy-carbonyle, ou tosyle pour protéger le groupe amino. 30 Les groupes protecteurs peuvent être éliminés selon divers procédés classiques selon la nature du groupe par exemple au moyen de l'acide trifluoro-acétique ou par réduction ménagée, par exemple par l'hydrogène et un catalyseur, par exemple le palladium, ou par l'acide bromhydrique dans l'acide acétique glacial® 35 On entend par sels, dérivés ou complexes ; _ 1) les sels résultant de l'addition d'un acide au peptide selon la formule générale ci-dessus; 2) les dérivés de substitution acylés d'un ou plusieurs groupes amino du peptide, par exemple les dérivés acétyliques, benzoyli- 40 ques ou phényl-propionyliques; 70 25433 4 2059499 3) les amides non substitués, ou substitués de préférence par des groupes aleoyles comportant plus de 8 atomes de carbone, et les esters, de préférence des esters assez longs dérivant des alcools aliphatiques, aromatiques ou arylaliphatiques comportant 5 de 8 à 18 atomes de carbone; 4) des complexes formés par l'addition au peptide de certains composés organiques ou minéraux permettant d'obtenir un prolongement d'activité. Comme sels résultant de l'addition d'un acide, on envisage 10 surtout les sels d'acides convenant à l'usage pharmaceutique, tels que par exemple les hydracides halogénés, l'acide phosphorique, l'acide acétique, l'acide ph ény1-pro pio ni que, l'acide maléique, l'acide tartrique et l'acide citrique. De préférence, on transforme les peptides selon la présente 15 invention en composés ayant une activité prolongée, non seulement pour prolonger l'action psychopharmacologique, mais également parce que cas composés ont un effet plus important par rapport à la plupart des peptides selon l'invention. On peut prolonger l'action de ces composés en combinant le pep-20 tide à des substances organiques polymères telles que l'oxypoly-gélatine, la carboxyméthyl-cellulose, des dextrans, des polyphénols, des polyalcools et des polymères ou des copolymères d'amino-acides, en particulier ces polymères ou ces copolymères comportant un grand nombre ou une majorité de diacides o-aminés, tels 25 que l'acide gpLutamique ou l'acide aspartique en position non terminale. Cependant, dans la préparation des polypeptides selon l'invention, on préfère les complexes métalliques ayant une action prolongée. Ces complexes métalliques peuvent ftre obtenus en combinant les peptides à des sels métalliques, hydroxydes métal-30 liques ou oxydes métalliques faiblement solubles compatibles avec l'organisme. On utilise généralement des sels àétalliques faiblement solubles tels que des phosphates métalliques, des pyrophosphate s métalliques et des polyphosphâtes métalliques® Les métaux que l'on peut utiliser dans ce procédé sont les aié=« 35 taux appartenant aux groupes b d© la classification périodiqueg par exemple le cobalt, le nickel, le cuivre, 1© fer et de préférence le zinc, ainsi que des métaux appartenant aux groupes principaux de la classification périodique ayant un pouvoir chélateur, tels que le magné si uni et l'aluminium. La préparation de ces dits 40 complexes métalliques est réalisée de façon classique. BAD ORIGINAL 70 25433 5 2059499 Par exemple, on peut obtenir le complexe métallique en mélangeant le peptide et un sel métallique faiblement soluble, un hy-droxyde métallique ou un oxyde métallique dans un milieu aqueux. On peut également obtenir le complexe métallique en ajoutant un 5 milieu alcalin à une solution aqueuse du peptide et d'un sel métallique soluble, ce qui forme le complexe insoluble peptide-hydroxyde métallique. Le complexe métallique peut être obtenu en ajoutant le peptide, un sel métallique soluble et un sel soluble à un milieu aqueux, 10 de préférence alcalin, formant ainsi M in situ n le complexe insoluble peptide- sel métallique. On peut utiliser directement le complexe sous forme d'une suspension ou on peut le séparer du milieu aqueux et le remettre ensuite en suspension pour préparer une composition injectable. 15 Les peptides selon la présente invention et leurs sels, dérivés et complexes sont de préférence administrés sous forme de préparations injectables à 1* état de suspensions, émulsions ou solutions. £n les mélangeant à des additifs convenables,on peut également les mettre sous une forme convenant à l'administration orale, 20 ou sous forme de suppositoires ou de produits à pulvériser. De préférence, le composé actif est mis sous forme de doses unitaires de 1 mg à 1 g, selon la forme d'administration. Le procédé de détermination du pouvoir psychophanaacologique est le suivant : 25 On a conditionné des rats blancs mâles pesant entre 140 et léO g dans une cage de conditionnement. Le stimulus conditionnant était un bourdonnement durant 5 secondes. Le stimulus non conditionnant était un choc électrique appliqué aux pattes de l'animal à travers le plancher grillagé de la cage jusqu'à ce qu'il ait 30 répondu. Chaque jour on a réalisé des essais de conditionnement^ chaque essai étant séparé par un intervalle moyen de 60 secondes jusqu'à ce que l'animal ait atteint le critère de conditionnement de 80 c/o ou plus de réflexes d'évitements sur trois jours consécutifs. La perte du réflexe a été étudiée au cours des 8 jours sui-35 vants selon le même mode opératoire qu'au cours de l'acquisition du réflexe d'évitement mais sans utiliser de stimulus non conditionnant. A partir du nombre total de réflexes d'évitements noté pour chaque rat au cours ûe l'acquisition ou de la perte du réflexe 40 d'évitement, on a constitué un index de détermination du pouvoir 70 25433 6 2059499 psychophanaacologique* Le traitement par les peptides étudiés commence à partir du jour où 1*animal atteint le critère de conditionnement, immédiatement après le dernier essai de la séance* On effectue des injec-5 tions par voie sous cutanée sur les animaux chaque jour au cours de la période de perte. En ce qui concerne les exemples non limitatifs illustrant les peptides selon l*invention, il convient de faire les remarques suivantes : 10 A. Si aucune forme optique nTest indiquée, il s'agit de la forme L. B. On a utilisé les abréviations suivantes pour les groupes protecteurs. Z : benzyloxycarbonyle 15 Boc : butyl-tert-carbonyle t-Bu : tert-butyle Mb : méthyle NP : p-nitrophényle : hydrazide 20 T : trityle C. Les solvants utilisés correspondent aux abréviations suivantes: Bz : benzène EtOH : éthanol Âc : acide acétique 25 Fy : pyridine E : eau Bu : butanol d.m.f. î diméthylformamide Am î alcool amylique 30 D. Les amino-acides correspondent aux abréviations suivantes : Ser : séryle Met î méthionyle Glu î glutamyle Gin : glutaminyle 35 His : histidyle Ehe : phénylalanyle Arg î arginyle Lys : lysyle Trp : tryptophanyle 40 Gly î glycyle 70 25433 7 2059499 S. On a également utilisé les abréviations : ÛCCI : dicyclohexylcarbodiimide DCHA : dicyclohexylamine. Préparation des substances de départ 5 Al) Synthèse de Boc-Met-Glu-tOtBuJ-^H^ On dissout 24,9 g, 100 mmoles de Boc-Met-OH, obtenu à partir du sel de dicyclohexylamine dans 300 ml de chlorure de méthylène purifié. On ajoute à cette solution 26,75 g H Résultats : p.f. 95-98°G ; |j* J q - -18° (c — 1 dans 1'éthanol); 20 Rf : dans Bz-EtOH (9/1) - 0,74." Dans 25 ml d*éthanol,on dissout 4,6 g du dipeptide obtenu ci-dessus et l'on refroidit la solution à 0°C. On ajoute ensuite 1 ml d'hydrate d'hydrazine. On laisse reposer le mélange pendant 18 heures à 0°G, après quoi on sépare par filtration le précipité 25 obtenu et on cristallise dans l'éthanol (trois fois). Pif. 213-216°C (décomposition) ; [ a]j » - 15° (c = 2 dans 1*éthanol). A2) Synthèse de Bo c-D-îiet -Glu- ( OtBu ) - En partant du Boc-û-ket, on obtient une huile à partir du sel de dicyclohexylamine (p.f. 137,5-139°G ? Ca JD œ (c ~ 1 30 dans le méthanol); on obtient le Boc-D-Èet-Glu-(OtBu)-0Et obtenu selon le procédé décrit en Al.Rf. dans Bz-EtOH (9/lî = 0,70. On transforme l'huile en hydrazide de la même façon que pour 1® dipeptide décrit en Al. Qa ]jj m -3° dans 1 ' éthanol ; p.f. 200-204 A3) Synthèse de Boc-Gly-Met-N^H^ 35 On met en suspension 6 g de H-Jvfet-O&ie^HOl (3 mmoles ) dans lOttal de chlorure de méthylène. Après refroidissement à 0°C, on fait barboter un courant de gaz ammoniac sec dans la suspension pendant une demi-heure, en refroidissant. On filtre alors la suspension sur hyflo et on évapore le filtrat à sec sous vide (tempéra-40 ture du bain 40°C). On dissout l'huile obtenue dans 50 ml d'acéta- 70 25433 8 2059499 te d'éthyle. On refroidit la solution obtenue à 0°C, après quoi on ajoute 8,9 g de Boc-Gly-ONP et on agite le mélange obtenu pendant 3 heures à 0°C. On évapore à sec le mélange réactionnel et on lave deux fois le résidu à 1'éther exempt de peroxyde* On fil-5 tre le mélange et on reprend 1® résidu obtenu dans 100 ml d8acétate d'éthyl® aqueux» après quoi ©a 1m Iswm à 1 'acide cJilorfejdîrl® que 0D§ M, à l?eau, au bicarbonate de sodium à 10 '«-et encore-fois à l'eau® On sèche ensuite 1 "acétate d'éthyle- ©t l'oa chasse par distillation sous video Le résida cristallin est recristalis,"» .0 se dans la mélange méthanol/êther/éfc&er de pétroleo ?«f o 80=83 | ®1b ~ (dans 1© méthaaol) % Rf0 daas Bs-StOH (9/1) == 0j74o 0a dissout 5"g d® l'ester aéthyliqus du dipeptide dans 10 ail cl® ?aé= thaaol, après quoi on ajoute 1 al d'hydrate d'hydrazine. On a agi=> té la solution à la température d© la pièce pendant -20 heurss» Oa .5 agite ensuite la suspension jauae clair pendant 1 heure à C9G si l°oa filtre® Oa lave trois fois le filtrai à 13éther exempt ds perossyde puis oa a cristallisé dans le s-îtliasol 0 Pofo 170=174®c I C 0 3n 0 (c ° 1 dszis le d0mofo)f JJ Efo dans B«=»%-Ae=S ( 4/0a 75/0 r 25/1 ) = 0s'ô2o 20 A4) Synthèse de Oa dissout 7,72 g Boc«=Ser=0H, DGHâ daas 50 al d® chlorure ds méthylène purifié o Oa ajoute à cette solution un® suspension cî-s 4 g d® H=.|fet=>0M3, H Cl dans 15 aû. de chlorure d® méthylènes Oa agite la suspension pendant 20 Minutes à la température de la pis» 25 * ce puis l8on refroidit à 0®C« Oa ajouta-alors 4,2 g de DC0I st aa agite le mélange obtenu pendant 4 heures à 0°C puis pendant 13 heures à la température de la pièce (au cours de e® traitement ,0s peut ajouter le cas échéant une petite quantité de solvant)3 On filtre ledit mélange et on lave le précipité au chlorure de aéf&y=» 30 lène. On évapore les fractions d© chlorura c@ méthylène recueillies à 250 ml, après quoi on ajoute 100 ml d8étfc©r pour précipiter la dipeptide# P.f. 68-69®C | SE © 3D ~ œ30p?-® Ce - 2 dans le métlianol) Rf« dans Bz-EtOH (8/2) " 0,70. On dissout 2,3 g de dipeptide daas 15 aL de aéthaaol, après 35 quoi oa a ajouté 1 ml d8hydrate d8hydraziss3. On a agité le siSlan» ge à la température de la pièce peadant JL8 heures, après quoi oa a séparé par filtration 1® précipité obtenu, oa l8a lavé au sétlaa-nol froid et recristallisé dans le mélange méthanol et eau® Pdo 189-191 °C ; La] D = -13,9° (c = 1 dans le d.m.f.). BAD ORIGINAL 70 25433 9 2059499 A5) Synthèse de Boc-D-Ser-Ket-N^H^ En partant du Boc-D-Ser-OH,DGHA, p.f» 138-140 °C; «-12,8° dans le méthanol, on a préparé l'éther méthylique du Boc-D-Ser-JSêt de la même façon que décrit en A4. P.f# 68-70°C ; C® Jp * -1»5° 5 (c » 1 dans le méthanol). En faisant réagir 1'ester"dipepti de ci-dessus avec l'hydrate d'hydrazine, comme indiqué, on a obtenu le Boc-D-Ser-Jfet-NjjH-j. P.f. 145-147°C. A6) Synthèse du Boc-Ser-Met-Glu-tOtBuJ-NgH^ On dissout 1,15 g (3,3 mmoles) de Boc-Ser-Met-N^H^ obtenu selon 10 A4, dans 10 ml de d.m.f. purifiée et refroidi à -10°C. On ajoute à cette solution 6,6 milliéquivalents d'acide chlorhydrique dans du tétrahydrofuranne fraîchement préparé, après quoi on refroidit la solution jusqu'à -20°C. Cta ajoute alors goutte à goutte 0,48 ml de nitrite d'isoamyle et on a agité vigoureusement la solution 15 pendant 5 minutes. On doit maintenir la température entre -20 et -25®C. Dans l'intervalle, on dissout 0,88 g (3,3 mmoles) de H-Glu-(0tÉu)-0Et,HCl dans 10 ml de diméthylformamide. On refroidit cette solution à 0°C, après quoi on ajoute 1,4 ml de triéthylamine. On refroidit la solution jusqu'à -20°C, après quoi on ajoute la solu-20 tion d'azide. On fait réagir le mélange pendant 73 heures à 0°G, après quoi on évapore le solvant sous vide dans un bain à la température de 40°C et on reprend le résidu dans l'acétate d'éthyle aqueux. On lave l'acétate d'éthyle par l'acide chlorhydrique 0,1 N, l'eau, le bicarbonate de sodium à 5 ji et à nouveau l'eau, et on 25 sèche sur sulfate de sodium. Après filtration, on évapore sous vide l'acétate d'éthyle et on cristallise le résidu dans le mélange acétate d'éthyle/éther de pétrole (40/60). P.f. 182-184°C I C. a =* -17,4® (c-1 dans le d.m.f.). Rf. dans le Bz-EtOH (8/2) - 0,70. 30 On transforme 1 g du dérivé de tripeptide en hydrazide selon le procédé décrit pour le Boc-Ser-Èiet-ûïïie en A4. P.f# 217°C (dec.); Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) = 0,58. De la môme manière que décrit en A6 on a préparé : A7) Boc-O-Ser-Met-Glu-(OtBu)î |L « Œ +1»1° dans le d.m.f.; 35 p.f. 190-195°C (décomposition). A8) Boc-Gly-Met-Glu-(OtBu)-N2H3 î HD * -5,3® dans le d.m.f.; p.f. 187-190°C (décomposition). B) Synthèse du T(T)-His-D-Phe-Arg-Trp-OH 1) On dissout 8 g (10 mmoles) de ditrityl-His-D-Rie^NgH^ dans 40 35 ml de diméthylformamide purifié. On refroidit cette solution 70 25433 10 2059499 à -20°C. On. ajoute ensuite 2 équivalents d'acide chlorhydrique dans le tétrahydrofuranne (fraîchement préparé en faisant barboter du gaz chlorhydrique sec dans du tétrahydrofuranne), après quoi on a à nouveau refroidi la solution à -20°C. A cette tempé-5 rature, on ajoute 1,48 ml (11 mmoles) de nitrite d'isoamyle puis on agite la solution pendant 5 minutes (au cours de cette opération la température doit rester inférieure à -20°C). Dans l'intervalle on prépare une solution de 3,7 g (8,3 mmoles) d * H-Arg-Trp-OMe, 2HC1 dan* 20 ml de diméthylformamide. Op refroi-10 dit cette solution puis on ajoute 4 ml de triéthylamine. On mélange les deux solutions après quoi on a poursuivi la condensation azidique pendant 72 heures à 0°C. La solution colorée est évaporée à sec sous vide, après quoi le résidu obtenu est repris dans l'acétate d'éthyle aqueux et lavé par un peu d'acide acétique 2N, 15 de l'eau, du bicarbonate de sodium à 5 % et à nouveau de l'eau. On sèche le mélange sur sulfate de sodium, puis l'on a évaporé sous vide l'acétate d'éthyle. On recristallise le résidu dans le mélange méthanol/éther. P.f. 202-210°C (décomposition) ; * -39,8° (c * 1 dans le méthanol) ; Rf. dans Bz-EtOH (8/2) =» 20 o,82. 2) Saponification du tétrapeptide précité en ditrityl-His-D-Phe-Ârg-Trp-OH On dissout 2,3 g du chlorhydrate du tétrapeptide précité dans un mélange de 17*5 ml de méthanol et de 2,5 ml d'eau. A la tempé-25 rature de 4®C, on ajoute 2,3 ml d'hydroxyde de sodium 4N refroidi également à 4°C. On agite la solution alcaline pendant une heure à la température de la pièce, refroidi à nouveau à 4°C, puis on ajoute rapidement goutte à goutte à 100 ml d'acide acétique IN, que l'on a.vigoureusement agité et également refroidi à 4°0> pour 30 précipiter le tétrapeptide sous forme acide. On laisse reposer le mélange réactionnel pendant une heure à 0°C puis l'on filtre. P.f. 225-234°C (décomposition) ;La]D- -39,1® (c - 1 dans le méthanol) ; Rf. dans Bz-EtOH (8/2) - 0,27. C) Synthèse du T(T)-His-D-Phe-Arg-Trp-ŒLy-OH 35 1) Synthèse de T(T)-His-D-Phe-Arg-Trp-hydrazide,HCl. On dissout 4,6 g de l'ester obtenu selon B1 dans 30 al de méthanol, après quoi on ajoute 1 ml d'hydrate d'hydrazine. On laisse reposer le mélange pendant 20 h à 20°C et pendant 1 h à 0°C, après quoi on filtre. Le produit brut est recristallisé dans le méthanol 40 chaud en donnant 15j^âraziide» P»f« 253 °C (décomposition) ; 70 25433 ii 2059499 C ®3j) ™ -44° (c = 1 dans le d.m.f.) ; Rf : dans Am-Py-E (5/3/2) - 0,4. 2) Synthèse du T(T)-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0H,HC1. On dissout 2,24 g (2 mmoles) de l'hydrazide ci-dessus en chauf-5 fant, puis l'on refroidit à -2C°C. On ajoute alors 4 mmoles d*acide chlorhydrique dans le tétrahydrofuranne ©t 0S3 roi (22 mmoles) de nitrite dTisoamyle et l'on a agité le mélange pendant 5 a® à -20 ®C. On a ajouté cette solution à une solution de 300 mg (4 affito-= les) de glycine et d© 1,12 ml {S mmoles) de triéthylamine dans 10 10 ml de diméthylformamide, également refroidi à -20®Co Ensuit® on agite la solution à C°G et lfon vsrse dans 3CG ml d5eau contenant de 1"acide acétique pour précipiter le pentapeptideo J?®£o 210 °C (décomposition) | La = -35,3® (e - 1 dans le d.m.fc) ; Rf dans Bz-iitOH (8/2) = 0,24. 15 D) Synthèse du ï(T)-His-D-Phe-Ârg-îrp-Qly-0-G^foH^.^ 1 ) Synthèse du H-Gly-OG-j On ajoute 2,09 g (10 mmoles) de Z-dLy-QH à 18ester sulfltique de l'alcool hexadéeylique3 obtenu à partir d® 4S8 ml dsalcoolB refroidi à -10 °C, et 2,4 ml de chlorure de tMcnyle purifié» On 20 laisse le mélange reposer pendant 4 jours à la température de la pièce, après quoi un chrarxiatograiwns montre que la majeure parti® de 1*acide est transformée. On évapore le chlorure d© thionyleP puis l'on verse le mélange dans la glacea L'huile obtenue est reprise dans l'acétate d'éthyle. Après extraction de la solution 25 par du bicarbonate à 5 > et de l'eau, on sèche sur sulfate de îb&= gnésium. On évapore l'acétate d'éthyle. Le résidu huileux obtenus, qui contient encore de l'alcool en C-j^a mais est exempt d® carbc= benzoxyglycine, est purifié par chromatographie. On.isola 6,4 g d'un ester qui n:esc pas cristallisable-, 30 L'hydrogénation de l'ester protégé dans 12saur/ contenant de l'acide chlorhydriquep fournit l'ester de glycine sous fome de chlorhydrate, Après lyophilisation et cristallisation dans un mélange d'eau ©t de méthanol, on obtient le chlorhydrate d'ester ©s glycine® P.f., 235-240°G ; Rf dans Âm-Py-E (5/3/2)•= 0„50 35 2) On transforme 2 millimoles de -T(T)-His-D~P!ie=Ârg=Trp-N^9HGL en azide comme précédemment décrit^ qu® lf on condense avec 0P67 g (2 mmoles) de H-Gly-QC^H^-, HCla dissous daas 20 ml de diméthylformamide et 0,84 ml de triéthylamine précédemment refroidis à -20°G. Le mélange réactionnel est abandonné pendant 96 h à 0°C, 40 après quoi on le verse dans 500 ml d'eau contenant de l'acide BAD ORIGINAL 70 25433 12 2059499 10 15 acétique pour précipiter le pentapeptide. Deux jours plus tard, on isole le pentapeptide sous forme d*une substance amorphe. Rf dans Am-Py-E (5/3/2) = 0,71 i ™ -32° (c - 0,5 dans le d.m.f.J, E) Elimination des groupes trityle des tétra et pentapeptides décrits dans les exemples B2, 02 et D2. Les deux groupes trityle sont êlimiaés en dissolvant ou en met™ tant ®n suspension les peptides protégés décrits ci-dessus dans 1®acide acétique (1 mmole de produit dans 5 ml) et; en les chauffant au bain de vapeur pendant 10 am3.La solution ou la suspension est refroidie et versée dans 100 ml d'éther, après quoi on a dissous dans l'eau le précipité formé et on 1*a agité avec d® l?am» berlite, ISA 410, pour éliminer tout 1*acide présent. On lyophilise le filtrat. A partir de 1*ester hexadécylique du peptide, on prépare le chlorhydrate. Analyse en amino-acides selon Stein et î^ohr; et autres résultats î Peptide Bf (1*) £a 1B en ® (G) His Phe Arg Gly | H-His-Fhe-Arg-Trp-OH 0,25 -16 (1) H01 IN 1,00 0,95 1,03 . H-His-D-Phe-Arg-O,22 Trp-Gly-OH I -15 (D H CL IN 0,95 1,01 1,02 1^00 20 H-His-D-Phe-Arg-O,33 Trp-Gly-OR (2*)| -18,7 (0,5)HC1 IN 0,95 1,01 0,99 1,00 (1* ) Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) (a* ) r - ^33 F) Synthèse de His-D-Phe-(Boe)-Lys-Trp-OMe. 25 1) Synthèse de Z-(Boc)-Lys-Trp-OMe. On met en suspension 11,6 g (46 aiillimoles) de H-Trp-OJfe, HC1 dans 150 ml de chlorure de méthylène. On refroidit la suspension à 0®C, puis on fait barboter du gas ammoniac dans la suspension pendant une demi-heure. Après filtration sur hyflo, on évapore 1© 30 filtrat à sec sous vide (température du bain 40°G) et on reprend le résidu dans 150 ml de chlorure de méthylène dans lesquels on dissout 17,6 g de Z-»(Boc)-Lys-QHo Le-Mélange est refroidi à 0 ®GS après quoi on ajoute 9,5 g d© diclyclokexylcarbodiimide et l'on agit© le mélange réactionnel psadanfe 65 heures à 0®G„ Puis lson 35 ajoute 150 ml d*acétate dséthyle, après quoi on filtre le mélange et on lave le filtrat par 18acide chlorhydrique 0,1N, l»eau, le bicarbonate de sodium à 5 fo et à nouveau l*eau. On évapore la couche organique à sec et on recristallise le résidu dans le benzène bouillant. P.f. ll/r-122°C; bad original 70 25433 13 2059499 C a 3 D - -30 ° ( c « 1 dans le méthanol ) ; Rf dans le Bz-EtOH (8/2) » 0,83. Far hydrogénation au palladium sur charbon, (10 dans le méthanol) en présence d'un équivalent d*acide chlorhydrique, on 5 obtient 1*ester du dipeptide sous forme de chlorhydrate. Rf î dans Am-Py-E (5/3/2) - 0,71. 2) Synthèse de Z-His-D-Phe-(Boc)-Lys-Trp-OJfe. A partir de 10 millimoles de Z-His-D-Fhe-NgH^, on prépare l'azide selon le procédé précédemment décrit. On ajoute le produit 10 obtenu à une solution de 8,3 millimoles de H-(Boc)-Lys-Trp-OMe, HC1 dans 20 ml de d.m.f. et 4 ml de triéthylamine. On abandonne le mélange pendant 70 heures à 0°C. On évapore ensuite le mélange I réactionnel à sec sous vide et on reprend le résidu huileux obtenu dans l'acétate d'éthyle aqueux. La substance obtenue est lavée 15 à l'acide citrique à 5 l*eau, le bicarbonate de sodium à 5 "/<> et à nouveau l'eau (température du bain 40°C). On sépare la phase organique et on évapore le solvant, après quoi on cristallise le résidu obtenu dans le mélange acétate d'éthyle/éther de pétrole (40/60). P.f. 185-190°C ;C « 31 -14° (c » 1 dans le méthanol); 20 Rf dans Bz-EtOH (9/1) - 0,70. 3) Par hydrogénation en présence de palladium sur charbon et d'un équivalent d'acide chlorhydrique dans le méthanol,on obtient le chlorhydrate de l'ester de tétrapeptide. Rf dans Bu-Ac-E (4/l/U - 0,42. 25 EXEMPLE I H-Mst-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH et son chlorhydrate. A. Synthèse du Boc-#fet-Glu-(OtBu)-His-D-Phe-Arg-Trp-Glv-OH On dissout 1,97 g (4 millimoles) de Boc-Jfet-GLu-(0tBu)-N2H^, selon Al, dans 10 ml de d.m.f. On refroidit la solution à 0°G 30 après quoi l'on ajoute 8 milliéquivalents d'acide chlorhydrique fraîchement préparé dans le tétrahydrofuranne. On refroidit la solution ainsi obtenue jusqu'à -20°C, après quoi on ajoute 0,6 ml (4,4 millimoles) de nitrite d'isoamyle pour préparer l'azide. On agite la solution pendant 5 mn et on l'ajoute à une solution de 35 2,8 g de His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (selon l'exemple E) dans 15 ml de d.m.f. On refroidit à nouveau le mélange à -20°G, après quoi on ajoute 1,68 ml de triéthylamine. On laisse reposer le mélange réactionnel pendant 96 heures, on le verse dans de l'eau contenant de l'acide acétique (pH 6-7), et on lave par un mélange de 40 diméthylformamide et d'eau (1/10) le précipité obtenu que l'on 70 25433 14 2059499 isole. P.f. 210° (décomposition) ; Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/ 0,25/l) * 0,72. (Soufre positif, Pauly positif, Ehrlich positif). B. Elimination des groupes protecteurs. L'heptapeptide obtenu ci-dessus est dissout dans un mélange à 5 90 % d'acide trifluoroacétique et d'eau (100 mg pour 2 ml). La solution rose est abandonnée pendant une demi-heure puis évaporée à sec sous vide (température du bain 20°). On sèche le résidu pendant une nuit sur hydroxyde de potassium solide. Le résidu moussant obtenu est dissout dans le mélange eau/butanol tertiaire 10 (l/l) et traité, par fractions, par de la résine Dowex, traitement au cours duquel l'acide trifluoroacétique est échangé par de l'acide acétique. On lyophilise la solution aqueuse obtenue. Le peptide lyophilisé obtenu contenait environ 2 moles d'acide acétique. Rf : Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) " 0,24. Analyse en amino-15 acides : His : 0,90 ; Arg : 1,02 ; Glu : 1,06 ; Gly : 1,08 ; Met : 0,9 ; Fhe : 1,04. A une solution aqueuse du peptide obtenu,on a ajouté 2 équivalents d'acide chlorhydrique. Puis on a lyophilisé le mélange et l'on a isolé le sel d'addition de l'acide chlorhydrique. Rf dans 20 Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) = 0,24. EXEMPLE II De la même façon que décrite dans 1'exemple I, on obtient : 1) H-D-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-0H,HC1 à partir de Boc-D-Met-Glu-(0tBu)-N2H3 (A2) et de H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (E). 25 Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) = 0,26. 2) H-D-Ser-ifet-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH à partir de Boc-D-Ser-Ket-Glu-(OtBu)-N2H3 (A7) et de H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (E). Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) - 0,22. 3) H-Gly-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH à partir de Boc-Gly-Met-30 (OtBu)-N2H3 (A8) et de H-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OH (E). Rf dans Bu-Py-Àc-E (4/0,75/0,25/1) » 0,23. EXEMPLE III 1) Synthèse de H-Ser-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Glv-OH et de l'ester hexadécylique correspondant. 35 On prépare l'octapeptide à partir du Boc-Ser-Met—Glu-(OtBu)— NgH^ de l'exemple A6 de la même façon que décrit ci-dessus. La durée de réaction nécessaire à la combinaison des produits mise en oeuvre dure une semaine, en fonction des résultat* des chroma— togrammes. L'octapeptide protégé est obtenu en versant le mélange 40 réactionnel dans de l'eau contenant de l'acide acétique (pH 6-7) 70 25433 15 2059499 et en lavant le précipité obtenu par un mélange de d.m.f. et d'eau (1/9)• On purifie ensuite à nouveau le peptide en le lavant par le mélange méthanol et eau (9/U. P.f. du peptide 215° (décomposition) ; [ « = -62,-8° dans le d.m.f. Analyse en amino-5 acides : Ser 0,94 ; Glu 0,94 î His 1,01 ; Arg 1,02 ; Phe 1,05 I Gly 1,00. On obtient l'octapeptide libre ©n éliminaat le groupe protec» teur de la façon précédemment décrite, que l'on caractérise ensuite par analyse des amino-acides. 10 Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) =0,26. En condensant l'azide de Boc-Ser-ket-Glu-COtBtt), selon A6, avec l'ester hexadécylique de H-His-D-Phe~Arg-Trp~Gly (E), on ob» tient l'octapeptide protégé correspondant. En éliminant le groupe protecteur dans un trifluoroacétate à 90 >, on obtient l'H-Ser-15 Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OC^H^» que l'on transforme en acétate selon le mode opératoire précédemment décrite Analyse en amino-acides l Ser 0,94 » &£t 0,90 £ Glu 0,98 $ His IpGSf Arg 0,97 ; Gly 1,00. Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) - 0,32. 20 Dans l'infra-rouge, cette substance présente un pic d'absorp= tion caractéristique à 1 736 cm"1. On obtient de la même façon : 2) H-îfet-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OC^H^ et 3 ) H-D-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-OC-^H^ 25 en condensant respectivement le Boc-Ket-Glu-(Ot Bu}-NgH^ (Al) et le Bo c- û-î-ie t-Glu- ( Ot Bu ) -N (A2) avec 1 ' H-Hi s-û-Phe-Arg-Tr p-Giy™ OCl6H33 ^ et en éliminant les groupes protecteurs dans un trifluoroacétate à 90 Résultats : 30 ester d'heptapeptide (2) : Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1)" 0P3% ester de D-Èiet-heptapeptide (3) : Hf dans Bu-Py-Ac~E (4/0,75/0,25/1) = 0,38. Les analyses selon la méthode Stein-Mohr des deux substances sont pratiquement semblables. 35 SXEflJPiiS- IV 1) Synthèse de H-jfet-Glu-His-D-Phe-Arg~Trp-QH On transforme en azide 4 millimoles de Bo c-iwet-Glu«> ( Ot Bu )— N2H^ (Al) de la même façon que décrit dans l'exemple IA. On ajoute le produit obtenu à une solution de 2,57 g d'H-His-D-Phe-Arg-40 Trp-OH (E) dan* 15 ml de d.m.f. et 1,68 ml de triéthylamine. Le 70 25433 i6 2059499 mélange réactionnel est abandonné pendant 96 heures à 0°C après quoi la solution rose est versée dans l'acide acétique aqueux (pH = 5). On filtre et sèche le précipité formé. Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) de l,hexapeptide protégé était 5 de 0,65. L'hexapeptide obtenu ci-dessus est traité par 1*acide trifluoroacétique, comme précédemment décrit, après quoi on évapore à sec sous vide le mélange réactionnel. Après traitement du trifluo-roacétate de peptide par la résine Dowex dans le mélange tert® 10 butanol et eau l/l, traitement au cours duquel les groupes acides trifluoroacétiques sont échangés par des groupes acétates, coma© décrit dans l'exemple IB, on lyophilise la solution obtenue ©t l'on sèche à nouveau. Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) = 0,24. 15 Se la même façon que précédemment décrit, on a préparé les peptides suivants : 2) H-D-Met-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH4* 20 3) H-Ser-Met-Glu-His-D^Rie-Arg»Trp-OH 4) H-D-Ser-fêet-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH** 5) H-Gly-Met-Glu-His-D-Fhe-Arg-Trp-QH * Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1) 25 La réaction avec la leucine aminopeptidase n'a entraîné au cune dégradation (hydrolyse) du produit. aYRî.iPr.ff. v 1) Synthèse de H-Met-Glu-His-P-Phe-Lys-Trp--0,Me On ajoute 4,4 moles de l'azide obtenu dans l'exemple IV à une 30 solution de 2,92 g de H-His-I>-Phe» ( Bo c )-Lys-Trp-Oîfe, HC1 (F) dans 12 ml de d.m.f® et 1,68 ml de triéthylamine® Après avoir laissé reposer le mélange réactionnel pendant 65 h, on l'évaporé à son*» sistanc© sirupeuse et on dissout se sirop dans un mélange d'acétate d'éthyle ©t d'eau (9/1). On lave la solution par une solution 35 d'acide citrique à 5 de l*eaus «ae solution de bicarbonate de sodium et à nouveau de l'eau. Puis oa évapore sous vide la eoueb.® organique. L'ester d'feexapeptide .protégé est ensuite séché® P.f. 137-14L °C; Rf dans Bz-EtOH (8/2) = 0,75. L'ester d'hexapeptide obtenu ci-dessus est traité par l'acide 40 trifluoroacétique, après quoi on échange les groupes trifluoro- Rf* Produits de dé paît- 0,21 A2 et E 0,19 A6 et E 0,20 A7 et E 0,23 A8 et E 70 25433 17 2059499 acétiques par des groupes acide acétique de la façon précédemment décrite. Rf dans Bu-Fy-Ac-E (4/0,75/0,25/1) - 0,42. On a préparé les esters méthyliques des peptides suivants de 5 la même manière. Rf* Produits de départ 2) H-D-Ser-Met-Glu-ms-D-Phe-Lys-Trp-Oliis 0,40 A7 et F 3) H-Ser-Met-Glu-His-D-Fhe-Lys-Trp-O&e 0,39 A6 et F 4) H-D-Met-Glu- Hi s- D- Phe-Ly s-Trp-OMe 0,42 A2 et F 5) H-Gly-Met-Glu-His-û-Phe-Lys-Trp-OMe 0,45 À8 et F * Rf dans Bu-Py-Ac-E (4/0,75/0,25/1). EXEMPLE VI On amène à pH 2 par de l'acide chlorhydrique IN une solution 15 contenant 10 mg/ml de l'heptapeptide indiqué dans l'exemple I, 8,33 mg/ml de zinc et 3,5 mg/ml de phosphate disodique dihydraté. Le zinc est apporté sous forme de chlorure de zinc. On ajoute simultanément en agitant 15 ml de cette solution et de l'hydroxyde de sodium 0,5 M (pour que la suspension obtenue ait un pH de 8) à 20 25 ml d*un mélange ayant la composition suivante : Alcool benzylique 20 mg/ml NaCL 4 mg/ml. Pour maintenir le pH à 8,0 au cours du traitement, il a fallu utiliser 8,2 ml d'hydroxyde de sodium 0,5 M. Le volume de la sus-25 pension est amené à 50 ml par de l'eau distillée. La suspension a une composition finale de : Alcool benzylique 10 mg/ml NaCL 6,8 mg/ml Heptapeptide 3 mg/ml 30 Zinc 2,5 mg/ml PO, 0,56 mg/ml EXEMPLE VII On amène à pH 2 par de l'acide chlorhydrique IN me solution contenant 10 mg/ml de l'octapeptide libre,, indiqué dans l'exemple 35 III, 8,33 mg/ml de zinc et 3,5 mg/ml de phosphate disodique dihydraté. Le zinc est apporté sous forme ds chlorure de zinc» On ajoute simultanément 45 ml de cette solution ©t de l'hydro-xyde de sodium 0,5 M, en agitant, à 75 elL du mélange (voir exemple VI). Il est ici nécessaire d'utiliser 25,2 ml d'faydroxyde de 40 sodium 0,5 M pour maintenir le pH à 8,0. On complète le volume de 70 25433 i8 2059499 la suspension à 150 ml par de l'eau distillée. La composition finale de la suspension est : Alcool benzylique 10 mg/ml NaGl 6,9 mg/ml 5 Octapeptide 3 mg/ml Zinc 2,5 mg/ml P0^ 0,56 mg/ml EXEMPLE YIII On procède comme dans l'exemple VII, mais en utilisant 6,67 mg/ 10 ml d'octapeptide au lieu de 10 mg/ml d'octapeptide. On ajoute simultanément 30 ml de la solution d'octapeptide, de zinc et de phosphate disodique ainsi que de l'hydroxyde de sodium 0,5 1 à 50 ml du mélange (alcool benzylique-KaCl). On complète le volume de la suspension à 100 ml par de l'eau distillée. Il a été néces-15 saire d'utiliser 16 ml de NaOH 0,5 M pour maintenir le pH de la suspension à 8. La composition finale de la suspension est : Alcool benzylique 10 mg/ml NaCl 6,7 mg/ml Octapeptide 2 mg/ml 20 Zinc 2,5 mg/ml PO^ 0,56 mg/ml EXEMPLE IX On amène à pH 2 par de l'acide chlorhydrique IN une solution contenant 10 mg/ml de l'ester liexadécy 1 ique de l'octapeptide de 25 l'exemple III, 8,33 mg/ml de zinc et 3»5 mg/ml de phosphate disodique dihydraté. Le zinc est ajouté sous forme de chlorure de zinc. On ajoute simultanément en agitant 30 ml de cette solution et de l'hydroxyde de sodium 0,5 M à 50 ml du mélange (alcool benzylique/ NaCl)• Pour maintenir le pH à 8,0,il est nécessaire d'ajouter 30 dans cet exemple 16,6 ml d'hydroxyde de sodium. La composition finale de la solution est : Alcool benzylique 10 mg/ml NaGl 6,9 mg/ml ester d'octapeptide 35 (Ex. III) 3 mg/ml Zinc 2,5 mg/ml PO. 0,56 mg/ml 70 25433 19 2059499 EXEMPLE I De la même façon que décrite dans l'exemple VI, on prépare le complexe de zinc des peptides suivants : a) hexapeptide : ftiet-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-OH (Exemple IV, 1) b) hexapeptide : D-idet-Glu-His-û-ïîie-Arg-Trp-OH (Exemple IV, 2). 70 25433 20 2059499 REVENDICATIONS 1 - Procédé de préparation de peptides courts comportant une séquence d*amino-acides sensiblement semblable.à une certaine partie des hormones adrénocorticotropes, caractérisé en ce qu'on 5 prépare des peptides ayant pour formule générale î X-Met-L-Glu- (ou L-Gln )-L-His-D-Phe»L-Arg«= (ou L-Lys )-L-Trp-Ys dans laquelle^ X représente un atome d'hydrogène ? 1© groupe H-Se,r ou le groupe H-Gly 10 I représente un groupe hydrossyle ou le" groupe -Gly-OH, et les groupes Mat et Ser sont sous for«® L ou Dr, ainsi que leurs sels, leurs dérivés et leurs complexes» d'une façon connue en sol® 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on prépare un peptide ayant pour formule générale : 15 X-Met-L-Glu-(ou L-Gln)-L-His-D-Phe-L-Arg-(ou L-Lys)-L-Trp-QH et sas sels- ses dérivés et ses complexes, dans laquelle X a la signification indiquée dans la revendication 1 et Met et Ser se présentant sous forme L ou D, 3 - Procédé de préparation dsun complexe ayant une action pro-20 longée, caractérisé en ce qu'un peptide -selon l'une des revendications 1 ou 2, ou un de ses sels ou dérivés,est mis au contact d'une substance organique polymère ou d'un sel métallique, d'un hydroxyde métallique ou d'un oxyde métallique faiblement solubles. 4 - Procédé selon la revendication 3» caractérisé en ce que 25 1® composé métallique est un sel, un hydroxyde ou un oxyde de zinc faiblement solubles» 5 - Les composés de formule générale : X-Ifet-L-Glu- (ou L-Gln)-L-His-D-Plie-L-Arg-{ou L-Lys)-L-Trp-Ï, dans laquelle, 30 X représent® un atome d'hydrogène, le groupe H—Ser— ou H-Gly» et Y représente un groupe hydroxyle ou le groupe -Gly-OH, ©t Met. et Ser se trouvent sous la forme L ou D, et ses sels, dérivés et complexes» 6 - Les composés de formule générale % 35 X-Kst-L-Glu-(ou L-Gln)-L»His-D°Fhe»L-Arg»L-Trp-OH, dans laquelle, X a la signification indiquée dans la revendication 5, et Met et Ser se trouvent sous la forme L ou D, ses sels, ses dérivés et ses complexes. 40 7 - Les composés de formule générale : 70 25433 21 2059499 XrKet-L-Glu- ( ou L-Gln ) -L-Hi s-D-Fhe-L-Lys-L-Trp-OH , dans laquelle X a la signification indiquée dans la revendication 5, et Met et Ser se trouvent sous la forme L ou D, et ses sels, dérivés et complexes. 5 8 - Les complexes ayant un pouvoir prolongé, constitués par un peptide ayant la formule générale de la revendication 5t et une substance organique polymère ou un sel métallique, hydroxyde métallique ou oxyde métallique faiblement solubles. 9 - Complexes selon la revendication 8, caractérisés en ce 10 que le composé métallique faiblement soluble est. tin sel, un hydroxyde ou un oxyde de zinc faiblement solubles. 10 - Complexes selon la revendications8, caractérisés en ce que la substance organique polymère est choisie dans le groupe constitué par la gélatine, la carboxyméthylcelluLose, le dextran, 15 un polyphénol, tin poly alcool ou un polyamino-acide.