Brevet FR2100687A1 — publié le 19720324

La présente invention concerne des compositions perfectionnées contenant un lysozyme et, plus particulièrement, des compositions de ce type qui contiennent du peroxyde d'hydrogène et un troisième composant tel que l'acide citrique. Le lysozyme est une protéine enzymatique découverte par hasard par Alexander Fleming six ans avant la découverte de la pénicilline. Le lysozyme a été ainsi appelé parce qu'il exerce une action dissolvante rapide (lyse) sur certaines bactéries et à cause de son action enzymatique (zyme). Le lysozyme a d'abord été découvert dans la sécrétion nasale, mais aussit8t après, on a révélé sa présence dans des liquides corporels tels que les larmes, la salive, les sécrétions bronchiques,-de même que dans les globules blancs du sang, la peau, les ongles, etc. Peu après, on a découvert que certaines maladies sont associées avec un abaissement du taux de lysozyme, entre autres dans les larmes et les globules blancs.Certains efforts thérapeutiques ont été faits pour fournir cette substance dans des états ou des maladies dans lesquels son taux est normalement faible. Malgré les efforts visant à utiliser le lysozyme en thérapeutique et comme additif à diverses compositions, au cours d'une vingtaine d'années, les résultats ont souvent été décevants et n'ont pas correspondu aux espérances basées sur la découverte de Fleming qui a fait époque. L'invention concerne un procédé destiné à accroître les effets biologiques du lysozyme , et des compositions obtenues au moyen de ce procédé. D'autres caractéristiques et avantages de la présente invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre. D'une façon générale, et conformément à des exemples de réalisation de la présente invention, cette dernière offre une composition principale à trois composants, obtenue en mélangeant tout d'abord le lysozyme ou un sel acceptable du -point de vue pharmaceutique de ce lysozyme, par exemple le chlorhydrate, l'acétate, le sulfate, etc. ; avec un second composant qui est le peroxyde d'hy- drogène ; et en outre, une troisième substance choisie dans le groupe comprenant la cystéine, l'acide citrique, l'acide ascorbique, l'acide tartrique, des sels simples de cette substance, par exemple les sels de sodium, potassium, lithium, ammonium ou triéthylolammonium et des mélanges de ces substances.Selon un autre aspect de la présente invention, la composition principale qui vient d'être définie peut être incorporée, par exemple par dispersion, dissolution, etc., dans une composition secondaire telle qu'une pâte dentifrice, une poudre pour soins dentaires, des pastilles, un collyre liquide, une composition pour pulvérisations nasales, une pommade, une crème ou une lotion, des produits alimentaires pour nourrissons, etc. Les proportions relatives des divers ingrédients de la composition primaire qui vient d'être définie peuvent varier dans des limites considérables, sans s'écarter des aspects intéressants de l'invention. En général, le second composant, à savoir le peroxyde dthydrogène, doit être présent dans un rapport de poids d'environ 0,25 à environ 30 parties par partie du premier composant et le troisième composant, par exemple le citrate de sodium, l'acide tartrique, la cystéine, etc., doit être présent dans un rapport en poids d'environ 0,50 à environ 50 parties de citrate, tartrate ou cystéine ; et d'environ 0,02 à environ 2 parties d'ascorbate par partie de chacun des composants. Il y a lieu de remarquer que, attendu que les acides citrique, tartrique et ascorbique sont tous des acides organiques relativement faibles, dans toute solution aqueuse de ces acides et/ ou de leurs sels simples, plusieurs espèces ioniques sont présentes, leurs proportions relatives pouvant être calculées aisément d'après le pH de la solution et les constantes d'ionisation des acides en question. Ainsi, lorsqu'on prépare une composition conforme à la présente invention, comme défini ci-dessus, le fait d'utiliser l'acide citrique en ajustant ensuite le pH, par exemple avec de l'hydroxyde de sodium, ou d'utiliser des quantités équivalentes d'acide citrique et de citrate de sodium pour atteindre le pH choisi, est une simple question de commodité.A titre de sels simples, on mentionne les sels de sodium, de potassium, de lithium, d'ammonium et de triéthylolammonium et, pour l'énumération parallèle des divers composés spécifiques, on a utilisé les appellations"citrate acide', "tartrate acide", etc., pour désigner l'acide correspondant. I1 y a lieu de remarquer,en outre,que les sels de triéthylolammonium tels que citrate, tartrate, etc., sont appelés couramment, bien que de façon erronée, citrate de triéthanolamine, tartrate de triéthanolamine, etc. On donne ci-après quelques exemples pratiques illustrant des compositions conformes à l'invention et montrant leur efficacité en solution aqueuse simple, contre diverses espèces bactériennes: T A B L E A U I Destruction des bactéries par des systèmes fluides à base de lysozyme Référence Système lysozymatique pH Pseudomonas Staphylococcus E. Coli B.Subtilis Aeruginosa Aureus LY 10 g/ml 1 mn 73 % 98 % 76 % (a) AA 200 g/ml 3,1 H2O2 300 g/ml 30 mn 100 % 100 % 93 % LY 10 g/ml 1 mn 86 % 91 % 76 % (b) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 300 g/ml 30 mn 100 % 100 % 98,7 % LY 10 g/ml 1 mn 100 % 100 % 70 % (c) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 3mg/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % LY 10 g/ml 1 mn 97 % 83 % 92 % (d) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 3mg/ml 30 mn 100 % 100 % 92 % LY 100 g/ml 1 mn 97 % 81 % 99,2 % (e) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 300 g/ml 30 mn 100 % 100 % 99,6 % LY 100 g/ml 1 mn 96 % 84 % 100 % (f) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 3mg/ml 30 mn 100 % 91 % 100 % LY 100 g/ml 1 mn 100 % 85 % 92 % 100 % (g) C 500 g/ml 3,7 H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 00 % 100 % 100 % T A B L E A U I (suite) Référence Système lysozymatique pH Pseudomonas Staphylococcus E. Coli B.Subtilis Aeruginosa Aureus LY 100 g/ml 1 mn 100 % 95 % 93 % 100 % (h) C 1mg/ml 3,5 H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % 100 % LY 100 g/ml 1 mn 100 % 97 % 100 % 100 % (i) C5mg/ml 3,3 H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % 100 % LY 100 g/ml 1 mn 100 % 100 % 97 % 100 % (j) Cystéine 5 mg/ml 4,4 H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % 100 % LY 100 g/ML 1 mn 100 % 15 % 15 % 12 % (k) Glycine 5mg/ml 4,3 H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 35 % 25 % 20 % LY 100 g/ml 1 mn 100 % 100 % 96 % 100 % (l) Acid tartrique 3,7 5mg/ml H2O2 1mg/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % 100 % LY 1mg/ml 1 mn 98 % 94 % 100 % (m) AA 20 g/ml 3,1 H2O2 300 g/ml 30 mn 100 % 100 % 100 % LY = Lysozyme C = Acide citrique AA = Acide ascorbique g = 10-6 gramme H2O2 = Peroxyde d'hydrogène Les abréviations données ci-dessus sont valables également pour le tableau II. I1 ressort des résultats reproduits sur ces tableaux que le système à trois composants,ou composition principale conforme à la présente invention, est remarquablement efficace en ce qui concerne son activité bactéricide. Le tableau II illustre l'efficacité d'un système lysozyma- tique conforme à la présente invention, dans une formulation pour pite dentifrice. La pâte dentifrice correspond à la formule C-1 définie de façon détaillée dans ce qui suit. Résultats des essais : Disques et cavités sur plaques de gélose ; mesures (en mm) des zones d'inhibition. T A B L E A U II Action antibactérienne du lysozy@e contenu dans la pâte dentifrice (Essais avec disoues et cavités) Bactéries Champignons Virus Système Pseudomonas Staphylococcus E.coli B.subtilis Strept. Strepto. Lacto. Candida Virus de la Virus de Virus lysozymatique aeruginosa aureus sanguis mitis acidophilus albicans grippe de l'Herpès poli@ Hong-Kong myélitique LY 0,6mg/ml 0 mn 106,0 106,3 107,7 H2O2 0,6mg/ml 2 7 2 0 3 2 5 Traces 5 mn 104,7 105,7 107,3 C 0.6mg/ml 10 mn 104,3 105,3 107,0 I1 ressort des résultats d'essais indiqués sur le tableau II qu'on obtient une excellente inhibition pour six des huit bactdries sur lesquelles portent les essais.De plus, la composition de pgte dentifrice réduit efficacement la population de virus de la grippe de Hong-Kong et de virus de l'Herpès, et elle est légèrement effi cace contre le virus poliomyélitique. On donne ci-aprèa quelques formulations illustrant, à titre non limitatif, l'utilisation des compositions principales décrites ci-dessus dans diverses formulations telles que compositions pour pulvérisations nasales, dentifrices, solutions ophtalmiques, etc. Solutions de lysozyme pour l'irrigation vésicale Formule 1 Chlorhydrate de lysozyme 0,20 g Peroxyde d'hydrogène 0,20 g Ascorbate de sodium 0,20 g Chlorure de sodium 0,60 g Acide tartrique 0,10 g EDTA (sel disodique) 0,10 g Acide acétique 0,10 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 ml Formule 2 Chlorhydrate de lysozyme 0,20 g Peroxyde d'hydrogène 0,20 g Acide lactique 0,10 g Chlorhydrate de glycine 1,00 g Ascorbate de sodium 0,20 g Thiourée 0,01 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 ml Formule 3 Chlorhydrate de lysozyme 0,06 g Peroxyde d'hydrogène 0,06 g Acide citrique 0,06 g Méthylparaben 0,10 g Menthol 0,06 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 0,80 g Glycérine 18,00 g Polymère oxyéthylène/oxypropylène 3,00 g Essence de menthe verte 0,12 ml Dioxyde de titane 1,00 g Phosphate monocalcique dihydraté 51,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 4 Chlorhydrate de lysozyme 0,06 g Peroxyde d'hydrogène 0,06 g Acide ascorbique 0,06 g Méthylparaben 0,01 g Menthol 0,06 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 0,80 g Glycérine 18,00 g Polymère oxyéthylène/oxypropylène 3,00 g Essence de menthe verte 0,12 ml Dioxyde de titane 1,00 g Phosphate monocalcique dihydraté 51,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 5 Chlorhydrate de lysozyme 0,06 g Peroxyde d'hydrogène 0,06 g Acide ascorbique 0,06 g Acide citrique 0,06 g Méthylparaben 0,10 g Menthol 0,06 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 0,80 g Glycérine 18,00 g Polymère oxyéthylène/oxypropylène 3,00 g Essence de menthe verte 0,12 ml Dioxyde de titane 1,00 g Phosphate monocalcique dihydraté 51,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 6 Chlorhydrate de lysozyme 0,06 g Peroxyde dthydrogène 0,12 g Acide citrique 0,06 g Méthylparaben 0,10 g Menthol 0,06 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 0,80 g Glycérine 18,00 g Polymère oxyéthylène/oxypropylène 3,00 g Essence de menthe verte 0,12 mi Dioxyde de titane 1,00 g Phosphate monocalcique dihydraté 51,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 7 Chlorhydrate de lysozyme 0,12 g Peroxyde d'hydrogène 0,24 g Acide citrique 0,12 g Méthylparaben 0,10 g Menthol 0,06 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 0,80 g Glycérine 18,00 ml Polymère oxyéthylène/oxypropylène 3,00 g Essence de menthe verte 0,12 ml Dioxyde de titane 1,00 g Phosphate monocalcique dihydraté 51,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 8 Larmes artificielles Chlorhydrate de lysozyme 0,500 g EDTA (sel disodique) 0,010 g Peroxyde d 'hydrogène 0,010 g Ascorbate de sodium 0,100 g Chlorure de sodium 0,800 g Chlorhydrate de naphazoline 0,020 g Phosphate de sodium (diacide, anhydre) 0,038 g Alcool polyvinylique (51-05, Dupont) 1,000 g "Pluronic" F68 (Wyandotte) 0,250 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,000 mi Formule 9 Chlorhydrate de lysozyme 0,500 g EDTA (sel disodique) 0,0t0 g Peroxyde d'hydrogène 0,010 g Ascorbate de sodium 0,100 g Chlorure de sodium 0,800 g Chlorhydrate de naphazoline 0,020 g Phosphate de sodium (diacide, anhydre) 0,038 g Méthylcellulose (4000 cPo, 65 Hg) 0,250 g "Pluronic" F68 (Wyandotte) 0,250 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,000 ml Formule 10 Gouttes à base de lysozyme, contre l'irritation des yeux par le brouillard Chlorhydrate de lysozyme 0,30 g EDTA (sel disodique) 0,01 g Peroxyde d'hydrogène 0,01 g Thiourée 0,01 g Ascorbate de sodium 0,01 g Chlorhydrate de naphazoline 0,02 g Tétrapyrophosphate de sodium 0,01 g Glycérine 1,50 ml Alcool polyvinylique (51-05, Dupont) 1,00 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 mi Formule 11 Chlorhydrate de lysozyme 0,30 g EDTA (sel disodique) 0,01 g Peroxyde dthydrogène 0,01 g Thiourée 0,01 g Ascorbate de sodium 0,01 g Chlorhydrate de naphazoline 0,02 g Tétrapyrophosphate de sodium 0,01 g Glycérine 1,50 ml Méthylcellulose 4000 cPo, 65 Hg 0,25 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 12 Shampooing à base de lysozyme Chlorhydrate de lysozyme 0,10 g Peroxyde d'hydrogène 0,02 g Acide "Crodafos" N3 2,00 g '3 "Miranol" 2MCA-ESF* 30,00 g Hydroxyéthylcellulose 250 1,00 g Acide citrique 0,30 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 g * Le produit "Miranol" 2MCA-ESF peut être remplacé par la togobétaine. Formule 13 Chlorhydrate de lysozyme 0,10 g Peroxyde d'hydrogène 0,01 g Acide citrique 0,30 g Hydroxyéthylcellulose 2,00 g "Triton" X-200 32,00 g Eau déminéralisée, quantité suffisante pour 100,00 g Formule 14 Chlorhydrate de lysozyme 1,00 g Peroxyde d'hydrogène 1,00 g Ascorbate de sodium 0,20 g Thiourée 0,10 g EDTA (sel disodique) 0,10 g Noréphédrine 3,00 g Maléate de chlorprophènpyridamine 0,50 g Méthylparaben 0,10 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 ml Formule 15 Com9osition pour pulvérisation nasale à base de lysozyme Chlorhydrate de lysozyme 100,00 g Peroxyde d 'hydrogène 1,00 g Ascorbate de sodium 0,20 g Thiourée 0,10 g EDTA (sel disodique) 0,10 g Noréphédrine 3,00 g Maléate de chlorprophènpyridamine 0,50 g Méthylparaben 0,10 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,00 ml Formule 16 Gel contre l'acné Peroxyde de benzoyle 5,0 g Peroxyde d'hydrogène 1,0 g Chlorhydrate de lysozyme 0,3 g Acide citrique 0,5 g Ethanol 25,0 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 3,0 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,0 ml Formule t7 Peroxyde d'hydrogène 1,0 g Chlorhydrate de lysozyme 0,3 g Acide citrique 0,5 g Allantoine 2,0 g Alcool éthylique 25,0 g Hydroxyéthylcellulose 250 H 3,0 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,0 ml Formule 18 lotion contre l'acné Peroxyde d'hydrogène 1,0 g Chlorhydrate de lysozyme 0,3 g Acide citrique 0,5 g EDTA (sel disodique) 0,2 g Soufre précipité 3,0 g Allantoine 2,0 g "Carbopol" 934 2,0 g Triéthanolamine 2,0 g Alcool isopropylique 25,00 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,0 ml Formule 19 ComPosition Pour injection vaginale Chlorhydrate de lysozyme 0,200 g Acide citrique 2,000 g Perborate des sodium 2,000 g Lactose 2,000 g Eau distillée, quantité suffisante pour 100,000 ml Dans les formules données ci-dessus, les noms commerciaux et les abréviations, etc., ont les significations données ci-après EDTA Sel disodique de l'acide éthylènediamine tétracétique "Pluronic" F68 Produit de polycondensation d'oxyde d'éthylène et d'une base hydrophobe poids moléculaire environ 8000 "Pharmagel" A Gélatine, N 1 (U.S.P.) "Carbopol" 934 Poly(acide acrylique) Acide "Crodafos" N3 Alkoxyphosphate à longue chaîne alkylique "Miranol" 2 MCA-ESF Sulfate de dicarboxyalkylimidazolinium à longue chaîne alkylique "Triton" X-222 Sel de sodium d'alkyl-arylpolyéther sulfonate à longue chaîne alkylique il est évident que les compositions de l'invention peuvent être incorporées dans une grande variété de produits dont certains sont indiqués dans l'énumération suivante Produits administrés par voie orale :Pâte dentifrice, solutions pour bains de bouche, comprimés, chewing gum, et autres formes de dentifrices, compositions pour le nettoyage de dentiers. Produits ophtalmologiques : Gouttes antiherpétiques pour les yeux, larmes artificielles, gouttes contre l'irritation des yeux par le brouillard, compositions pour verres de contact hydrophiles et hydrophobes, gouttes antibactériennes pour les yeux dans le traitement de diverses ophtalmies infectieuses. Compositions pour pulvérisations nasales : Pour le traitement de diverses infections nasales dues à des virus (grippe) et à des bactéries. Produits dermatologisues : Produits de traitement et dthumidifi- cation de la peau, produits contre l'acné, shampooings, savons, produits contre des défauts de la peau, pour le traitement de maladies virales (herpès zoster), diverses maladies de la peau (dermites, psoriasis, etc.) Maladies infectieuses des oreilles d'origines virale et bactérienne (otites). Additifs pour produits alimentaires - Additifs destinés à "humaniser" le lait de vache. Protection contre les radiations chez des patients présentant diverses formes de cancer,exposés à l'action thérapeutique des rayons X et Gamma, ou des patients rendus malades par irradiations. Maladies virales - Hépatite virale, herpès, herpès zoster. Applications vétérinaires - Fièvre aphteuse (d'origine virale). Champignons (mycoses) : Candida albicans (muguet), mycoses de la cavité buccale, de la peau et des voies vaginales. Désinfectants : Nettoyage des instruments uchirurgicaux, irrigation de la vessie. APplications industrielles : Traitement au lysozyme de filtres pour cigarettes et du sucre pour empêcher la formation de cavités. I1 y a lieu de remarquer que les systèmes lysozymatiques réalisés conformément à l'invention sont particulièrement stables. Même en solution aqueuse diluée, le titrage du peroxyde montre seulement une légère diminution avec le temps, sur des périodes de l'ordre de plusieurs mois. On suppose que les divers composants des systèmes de l'invention, en agissant d'une façon qui n'est pas évidente, stabilisent le peroxyde en empêchant sa décomposition, ce qui est naturellement un grand avantage pour des préparations destinées à des établissements hospitaliers, et même pour l'utilisation industrielle en général. Comme le montre ce qui précède, la composition principale conforme à l'invention peut entre présentée sous diverses formes, le plus avantageusement sous la forme de mélange en poudre sèche ou d'une solution dans l'eau, l'alcool éthylique, la glycérine, etc.; et elle peut être formulée de manière à donner, en solution aqueuse diluée, toute valeur de pH choisie entre 2 et 9 environ. En règle générale, on préfère les compositions de l'invention qui donnent un pH d'environ 5 à environ 8, parce qu'elles sont les plus compatibles avec les conditions physiologiques, par exemple le pH normal de la peau, des membranes muqueuses, des larmes, de la salive, etc. De même, comme on l'a expliqué dans ce qui précède, les compositions principales de l'invention peuvent être utiliséés comme composants très désirables d'un grand nombre de compositions dtintérêt pharmaceutique, thérapeutique, cosmétique, etc. Un grand nombre de formulations de ce type général ont été donné dans ce qui précède. il va de soi que l'invention nta été décrite, en ce qui concerne les divers composants spécifiques, les proportions relatives, les concentrations, les additifs éventuels, etc., qu'à titre illustratif, mais nullement limitatif, et qu'elle est suscéptible de diverses variantes sans sortir de son cadre. REVENDICATIONS 1 - Nouvelle composition, caractérisée par le fait qu'elle contient comme premier composant un lysozyme ou l'un de ses sels acceptables du point de vue pharmaceutique; comme second composant le peroxyde d'hydrogène ; et comme troisième composant une substance choisie entre les acides citrique, tartrique ou ascorbique, les citrates, tartrates et ascorbates de sodium, potassium, lithium, ammonium et triéthylolammonium ; et la cystéine, ainsi que leurs mélanges, le second composant étant présent dans un rapport en poids d'environ 0,25 à 30 parties par partie du premier composant, le troisième composant étant présent dans un rapport en poids d'environ 0,5 à 50 parties de citrate, tartrate ou cystéine ; et 0,02 à 2 parties d'ascorbate pour chaque partie du premier composant ; le pH de la composition en solution aqueuse étant compris entre 2 et 9. 2 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que le troisième composant est un citrate. 3 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que le troisième composant est un tartrate. 4 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que le troisième composant est un ascorbate. 5 - Composition suivant la revendication 1, caractérisée par le fait que le troisième composant est la cystéine. 6 - Composition dentifrice en poudre sèche, caractérisée par le fait qu'elle contient essentiellement la composition conforme à la revendication 1 en dispersion dans une substance minérale abrasive en poudre. 7 - Composition suivant la revendication 6, caractérisée par le fait que la substance minérale est le phosphate dicalcique. 8 - Une composition sous la forme d'une solution aqueuse constituée essentiellement par la composition de la revendication I dissoute dans l'eau, cette composition étant présente en quantité suffisante pour que la concentration du premier composant soit comprise dans la gamme de 10 mg à 10 g par litre. 9 - Une pite dentifrice constituée essentiellement par la composition suivant la revendication 8, contenant en outre une substance minérale abrasive en poudre et une quantité suffisante de polymère hydrophile pouvant gonfler dans l'eau, pour faire épaissir la composition jusqu'à ce qu'elle ait acquis unie consistance cohérente, mais se prêtant à l'extrusion