Brevet FR2043459A1 — publié le 19710219

-1- 2043459 La présente invention concerne un procédé de préparation de compositions à usage médical et les compositions ainsi obtenues contenant des_hématies, traitées en vue de permettre leur marquage avec un radioisotope. 5 Généralement, le marquage des hématies se fait à l'aide du chrome de nombre de masse 51 de période relativement longue (27,8J), émetteur d'un rayonnement \ de 320 Kev. "Afin de limiter les doses d1irradiation sur le malade les ra-dioisotopes ne peuvent être utilisées qJen très faibles quantités. 10 Aussi, les études dans ce domaine tendent-elles à rechercher les possibilités d'utiliser des radioisotopes de période plus courte et de rayonnement plus faible, principalement en rayonnement )(, permettant pour des doses d'irradiation souvent beaucoup plus faibles, d'utiliser une plus grande quantité d'isotopes et, de ce 15 fait, de favoriser une détection optimale lors des examens et d'obtenir de meilleures statistiques. De ce point de vue le technetium de nombre de masse 99 est particulièrement intéressant ; sa période est de 6 heures et il émet un rayonnement )[ pur de faible énergie (140 Kev). 20 Le technetium est actuellement utilisé, éventuellement avec différents produits supports, pour de nombreux examens scintigra-phiques tels que cerveau, thyroïde, foie (Te étant mis sous forme colloïdale), poumons (Te étant lié aux macroagrégats du sang humain) reins (Te étant sous forme de complexe citrate-fer etc...). 25 Une telle polyvalence est particulièrement appréciable car elle permet à l'utilisateur de limiter le nombre de radioéléments en stock. C'est ainsi qu'il peut disposer d'un ensemble tel que décrit au brevet français 1 5i8 130 permettant, par simple élution, d'obtenir le technetium au moment de l'utilisation sous forme 30 d'une solution isotonique de pertéchnétate de sodium, pour le mélanger au support adapté à l'examen à pratiquer. Des essais ont été faits pour préparer des compositions contenant des hématies traitées en vue de les marquer au technetium Les hématies sont traitées avec du chlorure stanneux en solution 35 (dilué généralement à 1 % dans de l'eau distillée) ; après un temps de contact de 20 mn environ, les hématies sont marquées à l'étain. On procède alors après centrifugation pour lavage au marquage au technetium (30 mn de contact) le technetium libre étant éliminé par plusieurs lavages successifs. 40 Les rendements de marquage obtenus sont faibles (de l'ordre 69 14179 _2- 2043459 de 30 fi). En outre, cette technique exige une solution de chlorure stanneux très fraîchement préparée et nécessite une manipulation de deux heures au moins. Dans ces conditions, les différents examens - analyses des masses sanguines, scintigraphies 5 spléniques - sont des opérations délicates, les préparations ne pouvant guère être effectuées au lieu et au moment de l'examen. La présente invention propose un nouveau procédé de préparation de compositions-supports contenant des hématies traitées pour fixer ultérieurement le technetium en vue de permettre dif-10 férents examens tels que l'analyse des masses sanguines, les scintigraphies spléniques etc... Selon l'invention, le procédé de préparation est remarquable en ce qu'on traite les hématies par une solution de chlorure stanneux complexée avec un tampon de manière à la maintenir à une 15 valeur de pH physiologique, puis on élimine soigneusement l'excès de solution de chlorure stanneux. Différentes caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture de la description ci-après, faite à titre d'exemple non limitatif. 20 Une solution de chlorure stanneux est complexée avec un tam pon, citrate trisodique par exemple, de manière à lui conserver une valeur de pH physiologique. Une quantité optimale de la solution ainsi préparée est versée dans le sang veineux prélevée. 25 Après agitation» et eentri^ugation on élimine le maximum de surnageant, l'opération étant renouvelée après avoir repris le résidu avec un solvant à pH neutre, éventuellement plusieurs fois. Exemple : On prépare deux solutions respectivement ï-et II. 30 Solution (I) : 10 mg de chlorure stanneux sont dilués dans 1 ml d'acide chlorydrique (concentration 10 N). ' Solution (II) : 2,715 gr de citrate trisodique sont dilués dans 30 ml d'eaU'distillée. En versant au goutte à goutte la solution (ï) dans la solu-35 tion (II) on obtient une solution de chlorure stanneux complexé dont onajusiésiè.pH à-7,# {valeur de pH physiologique) avec de l'eau distillée-^usqu'à-i00 ml. . - . • A 10 ml de sang veineux prélevé (Correspondant à 5 ml de concentré d'hématies), on ajoute 1 ml dé là* solution de chlorure 40 stanneux traité. Après agitation pendant 1 minute on ajoute I ml 14179 -3- 2043459 d'une solution de sel disodique de l'acide éthyldi aminé t é tra c é-tique (EDTA) à 5 % de manière à complexer le chlorure stanneux restant, ce qui facilite son élimination et limite ainsi le nombre de lavages ultérieurs. Après centrifugation, le maximum de surnageant est pipeté, lbpération étant renouvelée au moins une fois après dilution dans du sérum physiologique par exemple. Le produit ainsi obtenu est constitué d'hématies dont la molécule de globine a subi des modifications lui permettant de capter le technetium. L'ensemble du traitement est effectué dans les meilleures conditions d'aseptie,avec des produits stériles, en atmosphère close de préférence. La composition ainsi préparée contenant des hématies prétraitées est applicable notamment au marquage des hématies au technetium, celui-ci pouvant se faire, sans aucune diminution dans les taux de fixation, dans les 9 jours qui suivent la préparation de cette composition, la conservation et la stérilité du champ hé-matique pouvant être largement mises en doute au-delà de ce délai Le marquage peut être fait en utilisant le technétium sous forme de pertechnétate de sodium (Te 0^ Na),par ie médecin iso-topiste au moment de 1'utilisation; Dans les meilleures conditions de préparation d'une compod.-tion selon l'invention, concentrations respectées, emploi d'EDTA, lavages en nombre suffisant ^.e rendement de marquage obtenu avec une telle composition est supérieur à 90 & Les hématies prétraitées peuvent être conditionnées sous différentes formes, par exemple en flacon de préférence monodoses dans lesquels on ajoute la quantité nécessaire de pertechnétate de sodium ou, sous une forme préférentielle, en seringues monodoses permettant de prélever directement au contact des hématies la quantité de Te 0^ Ha. Cette seconde forme, de manipulation aisée, est particulièrement intéressante du point de vue stérilité. Afin de permettre 1'emploi de la composition quel que soit le groupe sanguin du malade on utilise pour la préparation des hématies provenant du groupe 0, Rh négatif. Les compositions selon l'invention sont particulièrement intéressantes pour la détermination des masses sanguines (car il n'y a pas d'élution secondaire du technetium), pour la scintigra- 69 14179 2043459 phie splénique (après fragilisation des hématies selon les techniques traditionnelles, thermiques ou chimiques) et pour les test fonctionnels vaseulaires classiques (débit cardiaque, débit cérébral, gammacardiographie). 69 14179 -5- 2043459 REVEMDICATIOWS 1. Procédé de préparation de compositions contenant des hématies selon lequel les hématies sont traitées par une solution de chlorure stanneux, caractérisé en ce que ladite solution de chlo-5 rure stanneux est complexée avec un tampon de manière à la maintenir à une valeur de pH physiologique, puis des quantités appropriées d'hématies et de solution de chlorure stanneux traitées sont mélangées, et on procède à au moins un lavage pour éliminer l'excès de chlorure stanneux. 10 2. Procédé de préparation de compositions contenant des hématies selon revendication 1, caractérise en ce que le tampon utilisé est une solution de citrate trisodique. 3. Procédé de préparation de compositions contenant des hématies selon revendication 1, caractérisé en ce que avant lavage on ajou- 15 te une solution de sel disodique de l'acide éthyldiaminetétracé-tique. 4. Procédé de préparation de compositions contenant des hématies selon revendication 1, caractérisé en ce qu'on ajoute 1 ml de solution de chlorure stanneux traitée pour 10 ml de sang ou 5 ml de 20 concentré d'hématies. 5. Compositions obtenues par le procédé selon revendication 1 à 4. 6.' Compositions selon revendication 5 caractérisées en ce qu'elles sont présentées en seringues monodoses. 25 T. Compositions selon revendication 5 caractérisées en ce que les hématies utilisées appartiennent au groupe 0 Rhésus négatif.