Brevet FR2035842A1 — publié le 19701224

La maladie de Marek est un trouble très infectieux proliférant dans la lymphe chez la volaille, notamment les poulets. La maladie de Marek est également appelée leucose neurale, neuro-lymphomatose, leucose aviaire aiguë et leucose dermique. L'agent 5 ou les agents responsables de la maladie sont de nature.virale, un virus 15 les lésions qui apparaissent comprennent l'une ou plusieurs des suivantes : infiltration de lymphocytes dans les nerfs périphériques et/ou les follicules des plumes ; foyers de prolifération lymphomateuse , allant de microscopiques à des dimensions de plusieurs mm, dans tout tissu corporel, mais principalement 20 dans le foie, la rate, les reins, les glandes sexuelles, le coeur,le proventricule, les muscles thoraciques, la peau et les nerfs. Le Ministère de l'Agriculture des Etats-Unis d'Amérique estime que la maladie de Marek cause une perte annuelle de 200 millions de dollards à l'industrie de la volaille. Cette perte 25 est due à la mortalité et au rejet des carcasses d'oiseaux sacrifiés, du fait qu'elles sont impropres à la consommation humaine. Ce rejet est dû à la présence de foyers de prolifération lymphomateuse . La présente invention a donc pour objet de permettre 30 l'utilisation de benzimidazoles substitués dans le traitement de la maladie de Marek, pour prévenir la mort de la volaille, de même que pour réduire l'apparition de foyers de prolifération lymphomateuse. D'autres caractéristiques de la présente invention ressortiront de la description détaillée qui va suivre. 35 Les benzimidazoles substitués de l'invention répondent à la formule suivante : 70 10386 2 2035842 OH OH N. . j. i / Y^i - j, H 3, dans laquelle les symboles R peuvent être semblables ou différents 10 et représentent chacun un groupe alkyle inférieur, ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone. Des exemples de composés conformes à l'invention comprennent les suivants : 1,2-bis[5(6-méthoxy-2-benzi-midazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6)-éthoxy-2-benzimidazolylj-15 éthylène-glyeol, 1,2-bis[5(6)-propionoxy-2-benzimidazolyl]- éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6-pentoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6)-méthyl-2-benzimidazolyl]- éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6)-éthyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis [5(6)-propyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6)-20 n-butyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[5(6)-pentyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-méthoxy-2-ben-zimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-éthoxy-2-benzimi-dazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-propionoxy-2-benzimida-zolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-pentoxy-2-benzimidazolyl]-25 éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-mé thyl-2-b enzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-éthyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-propyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, 1,2-bis[4(7)-n-butyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol, et 1,2-bis[4(7)-pentyl-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol. 30 Dans la préparation des composés de l'invention, on con dense un 1 ,2-diaminobenzène avec une forme d'acide tartrique douée d'activité optique. l'acide tartrique, C00H(CH0H)2C00H , est un exemple classique de composé doué d'activité optique, du fait qu'il possède 35 deux atomes de carbone asymétriques semblables. Dans ce cas, les isomères optiques sont les acides tartrique D, L, méso et racémique. Les symboles "D" et "L" sont des signes conven 70 10386 3 2035842 tionnels désignant la configuration de la molécule, conformément à la projection dans le plan d'après Fischer, les formes D et 1 de l'acide tartrique sont respectivement lévogyre et dextrogyre. la forme méso est un isomère inactif à compensation interne, 5 ayant un plan de symétrie dans la molécule. L'acide racémique est un mélange en proportions égales des formes L et 1 , mais il ne possède pas d'activité optique du fait de la combinaison égale , et il s'agit d'un isomère compensé "extérieurement", les composés préparés à partir de la forme D de l'acide tartrique 10 ont été mentionnés dans la littérature. En outre, la Demanderesse a constaté que les composés obtenus avec la forme 1 et la forme méso de l'acide tartrique, de même qu'avec l'acide tartrique racémique, sont intéressants à utiliser contre la maladie de Marek. 15 les 1,2-diaminobenzènes que 1'on utilise conformément à l'invention, peuvent être représentés par la formule suivante : /^\-nh2 20 dans laquelle R peut être un groupe alkyle inférieur ayant 1 à 5 atomes de carbone ou un groupe alcoxy inférieur ayant 1 à 5 25 atomes de carbone. Ces 1,2-diaminobenzènes se préparent à partir du dérivé de 1-amino-2-nitrobenzène convenablement substitué . le 1-amino-2-nitrobenzène peut prendre la forme du 1, 2-diaminobenzène sous l'action d'une hydrogénation catalytique. En outre, il est 30 évident pour un spécialiste en ce domaine que le dérivé de 1-amino-2-nitrobenzène peut être préparé conformément à diverses synthèses de la chimie organique. Tout benzène substitué qui peut finalement être transformé en composé 1,2-diamino peut être utilisé dans la mise en oeuvre de l'invention. 35 les procédés généraux utilisés dans la réaction de conden sation du benzène à substitution 1,2-diamino avec l'acide tartrique sont bien connus et ont été décrits dans la littérature. 70 10386 4 2035842 -Deux moles de la diamine sont chauffées au reflux avec une mole du diacide dans l'acide chlorhydrique ou sulfur.ique. On utilise une période relativement longue de reflux, soit environ 3 à 10 heures. La solution réactionnelle est ensuite refroidie 5 et_le produit de condensation , à savoir le bis-benzimidazole, est isolé sous la forme du dichlorhydrate ou du sulfate. Le dichlorhydrate ou le sulfate peut ensuite être utilisé tel quel ou transformé en base libre par réaction avec du bicarbonate ou une aminé en solution aqueuse. On utilise des techniques clas-10 siques de purification et de récupération. La base libre-peut aussi être produite in situ sans isolement séparée du sel d'acide. Les composés de l'invention sont soumis à un essai d'efficacité contre la maladie de Marek de la manière suivante : Des poulets sont infectés avec des lymphoblasets contenant le 15 virus, initialement obtenues d'un poulet présentant un cas typique de maladie de Marek. Le remède est administré chaque jour par voie parentérale sous la forme d'une suspension aqueuse de 1,2-bis[ 5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol à différentes concentrations. Après une période expérimentale 20 appropriée, au cours de laquelle plus de 50 i<> des témoins non traités succombent, tous les oiseaux survivants sont sacrifiés. On procède à l'autopsie de tous les oiseaux morts et sacrifiés, et on note l'apparition de lésions. Les résultats des essais sont donnés sur le Tableau I. La mortalité est exprimée le 25 par/pourcentage d'oiseaux morts pendant la période expérimentale . La durée comparative de survie se réfère à la comparaison du nombre moyen de jours au bout desquels la mort survient après le traitement.entre les divers groupes, sur la base des 30 témoins non traités. Le compte moyen des lésions fixe la sévérité des lésions observées à l'autopsie, la' note "5" désignant une sévérité maximale ou la mort, tandis que la note "1" désigne des lésions minimales sans rapport avec la maladie. 70 10386 5 2035842 TABLEAU I Dose mg/kg de poids corporel Hombre de poulets Mortalité Temps comparatif de survie Compte moyen des liaisons 10 20 8 5 ' 10 1 9 0 [témoins 71 non traités] 25 1° 30 1o 45 io 62 56 + 4 jours + 3 jours + 1 jour 0 2 2 3 4 Conformément à l'invention, les benzimidazoles substitués sont utilisés dans la lutte contre la maladie de.Marek par administration à la volaille exposée à la maladie, soit dans l'eau 15 de boisson, soit dans les aliments, soit par voie parentérale. La quantité de benzimidazoles substitués qui est requise en vue d'obtenir les meilleurs résultats dans le traitement de la volaille exposée à la maladie de Marek, varie naturellement en fonc-, tion du composé particulier que l'on utilise. En général, les 20 bis-benzimidazoles substitués montrent une activité à des concentrations de 1 à 100 mg de composé par kg de poids corporel. Lorsque les composés de l'invention sont administrés par voie parentérale, on peut utiliser une suspension aqueuse de la base libre.$lu bis-benzimidazole, ou une solution aqueuse de la 25 forme du sel. On ajuste la concentration du composé dans la composition injectable afin d'administrer la quantité désirée du composé par kg de poids corporel, généralement entre environ 0,1 et 100 mg/kg. Le bis-benzimidazole peut aussi être administré par voie 30 orale à la volaille . Il peut être incorporé dans les aliments des oiseaux ou dans l'eau 70 10386 6 2035842 contre la maladie de Marek s'obtiennent avec des aliments contenant environ 0,001 à 0,1 $ en poids de bis-benzimidazole. Les taux de dose des aliments ou de l'eau de la volaille sont exprimés ici par la concentration en pourcent, du fait que la 5 quantité exacte d'aliments ou d'eau consommée par un oiseau individuel n'est généralement pas mesurée. Les compositions alimentaires sont celles que l'on utilise normalement dans l'industrie de la volaille. Il peut s'agir de "pâtée" contenant du grain broyé, une protéine et des concen-10 très minéraux et vitaminiques. A titre de variante, il peut s'agir d'aliments pour volaille composés principalement de maïs , en association avec des protéines et des facteurs de croissance. Lorsque les bis-benzimidazoles sont administrés à la vo-15 laille au moyen de l'eau de boisson , les doses de traitement sont généralement égales à la moitié de celles que l'on utiliserait dans le cas d'aliments solides, car les oiseaux boivent environ deux fois plus qu'ils ne mangent. Les compositions qui représentent l'une des formes préfé-20 rées de l'invention sont des suppléments alimentaires ou des mélanges préparés dans lesquels le bis-benzimidazole désiré est présent en quantités relativement grandes. Le véhicule ou diluant de ces suppléments alimentaires doit essentiellement être incapable de réagir avec le composé, il doit pouvoir être ad-25 ministré avec sûreté à la volaille, et il représente ou peut représenter un ingrédient normal de l'aliment prêt à la consommation. Les diluants que l'on utilise normalement sont des additifs solides pour l'alimentation de la volaille, pouvant être ingérés, par exemple des grains séchés de distilleries, 30 de la farine de maïs, de la farine d'agrumes, des résidus de fermentation, des remoulages de froment, du gluten de maïs, des coquilles d'huitres broyées, de l'attapulgite, des brisures de froment, des extraits solubles de mélasses, de la poudre d'épis de maïs, des substances végétales comestibles, de la 35 farine de soja décortiqué et grillé , des résidus de broyage des graines de soja , des mycéliums antibiotiques, du gruau de soja, etc. Les supports nutritifs sont préférés pour les 70 10386 7 2035842 compositions de l'invention. Ces suppléments sont incorporés dans l'alimentation de la volaille soit directement, soit après une étape intermédiaire de dilution ou de mélange . En général, les formulations concentrées contenant environ 10 5 à 40 $ en poids de bis-benzimidazols conviennent particulièrement pour.l'addition aux aliments de la volaille. L'invention est illustrée , à titre non limitatif, par les exemples suivants, qui décrivent des procédés de préparation des bis-benzimidazoles. 10 EXEMPLE 1 Préparation du dichlorhydrate de L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzi- midazolvll-éthylène-glycol On dissout 8,4 g (0, 05 mole) de 4-méthoxy-2-nitro-1-aminobenzène dans 50 ml d'acide chlorhydrique 4ÏT, on ajoute 1 g 15 de palladium à 5 % fixé sur de l'alumine et on procède à une hydrogénation dans une bombe de Parr. Après absorbtion de la quantité théorique d'hydrogène, on isole le catalyseur par fil-tration et on mélange le filtrat contenant le 4—méthoxy-1,2-diaminobenzène avec 3,75 g (0,05 mole) d'acide L-tartrique et 20 3 ml d'acide sulfurique concentré, et on chauffe le mélange ré-actionnel pendant 8 heures au reflux. Le dichlorhydrate de L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol est recristallisé dans de l'acide chlorhydrique 6N et on l'obtient sous la forme analytiquement pure. 25 EXEMPLE 2 Préparation du L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène- glycol _ __ Le dichlorhydrate de L-1, 2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-ét]3ylène-glycol préparé dans l'exemple 1 est extrait avec 30 une solution diluée chaude d'hydroxyde d'ammonium et lavé à l'eau. Le produit obtenu, à savoir le L-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl}-éthylène-glycol, est recristallisé dans un mélange d'éthanol et d'eau en présence de carbone destiné à la décoloration. 70 10386 8 2035842 Préparation du dichlorhydrate de D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimi-daz olyl 1 - é thylène-glyc ol On dissout 8,4 g (0,05 mole) de 4-méthoxy-2-nitro-1 -amino-5 benzène dans 50 ml d'acide chlorhydrique 4H , on ajoute 1 g de platine à 5 i° fixé sur de l'alumine, et on effectue l'hydrogénation dans une bombe de Parr. Après absorption de la quantité théorique d'hydrogène, on isole le catalyseur par filtration et on mélange le filtrat contenant le 4-méthoxy-1,2-diaminoben-10 zène avec 3,75 g (0,05 mole) d'acide D-tartrique et 3 ml d'acide sulfurique concentré, et on chauffe le mélange réactionnel pendant 8 heures. Le dichlorhydrate de D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-b enz imidaz olyl]-éthylène-glyc ol est recristallisé dans de l'acide, chlorhydrique 6N et obtenu à l'état analytiquement pur» 15 EXEMPLE 4 Préparation du D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène- glycol , " Le dichlorhydrate de D-1,2-bis[5-(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol préparé dans l'exemple 3 est extrait avec une 20 solution aqueuse chaude de bicarbonate de sodium et lavé à l'eau. Le produit obtenu,à savoir le D-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimi-dazolyl]-éthylène-glycol,est recristallisé dans un mélange d'étha-nol et d'eau à l'aide de carbone décolorant. EXEMPLE 5 25 Préparation du dichlorhydrate de mé.so-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl^— éthylène-glycol On suit le même mode opératoire général que celui de l'exemple 3, à la différence qu'on fait réagir l'acide méso-tartrique avec le 4-méthoxy-1,2-diaminobenzène. Le produit récu-30 péré est le dichlorhydrate de méso-1,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzi-midazolyl]-éthylène-glycol. Ce dernier composé peut ensuite être converti en la forme hydrogène libre du méso-1 ,2-bis[5(6)-méthoxy-2-benzimidazolyl]-éthylène-glycol par extraction avec une solution diluée chaude d'hydroxyde d'ammonium comme dans 35 l'exemple 2. 70 10386 2035842 BBTBmTnATTQHa 1. Composition caractérisée par le fait qu'elle contient un aliment pour la volaille, additionné d'une quantité d'environ 0,001 à 0,1 % en poids d'un benzimidazole substitué répondant à la formule générale : 10 15 H H (dans laquelle les symboles R peuvent être semblables ou différents et représentent chacun un groupe alkyle inférieur en C^ à ou un groupe alcoxy inférieur en C^ à C^), ou leurs sels solubles. 2. Composition pouvant être administrée par voie parentérale, contenant un benzimidazole substitué répondant à la formule : 20 H B 25 30 (dans laquelle les symboles R peuvent être semblables ou différents et chacun représente un groupe alkyle inférieur en à C^ ou un groupe alcoxy inférieur en C^ à C^), ou leurs sels solubles, la concentration du benzimidazole étant telle qu'une quantité de 0,1 à 100 mg/kg de poids corporel soit administrée à un individu. 3. Composition vétérinaire, utile notamment pour le traitement de la volaille exposée à la maladie de Marek, caractérisée par le fait qu'elle comprend une quantité efficace d'un benzimidazole substitué de formule : 35 70 10386 10 2035842 (dans laquelle les symboles R peuvent être semblables ou différentf et chacun représente un groupe alkyle inférieur en à ou un groupe alcoxy inférieur en à C^), ou leurs sels solubles. 4. Coéposition selon l'une quelconque des revendications 1, 2 ou 3, caractérisée par le fait que le benzimidazole substitué est le 1,2-bis[ 5 (6 )^néthoxy-2-benzimidazo^l-]éthjrlène^glyaol, 5. Composition selon l'une quelconque des revendications 1,2,3 ou 4, caractérisée par le fait que le benzimidazole substitué est utilisé sous la forme D, la forme L ou la foxme méso.