Brevet FR2034540A1 — publié le 19701211

i 2034540 La présente invention a pour objet un nouvel antibiotl-■ que qui sera désigné par la suite SL 3238. L'invention concerne également un procédé de préparation de cet antibiotique ainsi que son application en thérapeutique, à titre de principe actif 5 de médicaments. Le nouvel antibiotique SL 3238 présente les caractéristiques suivantes: Il s'agit d'un produit répondant à la formule brute CgyH^iNO?, présentant un point de fusion de l60-l6l° et un pouvoir 10 rotatoire [a]^ égal à -102° (c = 0,47 dans le chloroforme). Spectre ultra-violet: maximumsà 203 nm (log£= 4,57) et à 291 nm (log 6 = 3*75) dans le méthanol. La figure 1 du dessin annexé représente le spectre ultra-violet du nouvel antibiotique. 15 Spectre infra-rouge: bandes à 3^50* 3300» 3150, 2900, 2840, 1650, 1580, 1560, 1540, .1460, 1380, 1350, 1245, 1150, 1130, 1105, IO95, 1045, 940, 790 cm~^ dans le nujol. La figure 2 du dessin annexé représente le spectre infra-rouge du 20 nouvel antibiotique. Conformément au procédé de l'invention, pour préparer le nouvel antibiotique SL 3238, on cultive, sur ou dans un milieu nutritif, une nouvelle souche de l'espèce Pénicillium purpurogenum Stoll, on isole l'antibiotique de la bouillie de 25 fermentation, par exemple par extraction ou adsorbtion,et on le purifie selon les méthodes habituelles. La nouvelle souche SL 3238 de Pénicillium purpurogenum Stoll, utilisée dans le procédé conforme à l'invention, a été isolée d'un prélèvement de terre provenant de l'Afrique Centrale 30 et un exemplaire de cette souche a été déposé, sous le n° NRRL 3364,au United States Department of Agriculture (Northern Utili-zation Research and Development Division), Peoria, Illinois/USA, où il est accessible. La nouvelle souche de l'espèce Pénicillium 35 purpurogenum Stoll se développe à une température de 18 à 37° dans un milieu constitué de gélose, de peptone, d'extraits de 70 04781 2 2034540 levure, de malt et de glucose, en formant une pelouse de conidies vert-jaunâtre foncé et une faible quantité de mycélium aérien de teinte claire. Sur la face arrière de la colonie, le substrat est coloré en rouge cerise éclatant. 5 Du point de vue morphologique et physiologique,.la souche SL 3238 correspond à la description donnée par K.B. Râper et Ch. Thom dans "A Manual of the Penicillia", The Williams and Wilkins Co. 19^9» Baltimore, pages 630 à 636. La nouvelle souche de Pénicillium purpurogenum Stoll 10 peut être cultivée sur des milieux nutritifs très variés qui contiennent les matières nutritives usuelles. C'est ainsi qu'elle utilise les matières nutritives couramment employées par les organismes hétérotrophes: comme source de carbonne on peut envisager par exemple le glucose, l'amidon, les dextrines, le lactose, 15 le saccharose etc., comme source d'azote des composés azotés organiques ou minéraux, tels que les peptones, les extraits de levure ou de viande, le sulfate d'ammonium, le nitrate d'ammonium, les amino-acides etc., et également les sels minéraux et les oligo-éléments courants. 20 Pour préparer le nouvel antibiotique, on peut procéder comme suit: v On ensemence un milieu nutritif liquide avec une suspension de spores de la nouvelle souche de Pénicillium purpurogenum Stoll et on incube la culture pendant 5 à 10 jours à 27°. La 25 culture peut être effectuée dans des conditions d'aérobiose, en culture superficielle ou encore en culture submergée et agitée ou dans des fermenteurs avec passage d'un courant d'air ou d'oxygène et sous agitation. Aussitôt qu'une quantité maximale d'antibiotique a été produite, on filtre et on recueille l'anti-30 biotique selon les méthodes habituelles, par extraction ou par adsorbtion, à partir de la solution de culture débarrassée du mycélium et à partir du mycélium qu'on a broyé au préalable mécaniquement. Selon une méthode qui s'est révélée particulièrement 35 appropriée, on broie mécaniquement le mycélium séparé de la bouillie de culture et on extrait avec du chlorure d'éthylène 70 04781 3 2034540 une suspension aqueuse du mycélium et la solution de culture débarrassée du mycélium; cependant, on peut également employer d'autres solvants organiques, comme par exemple le benzène, le chloroforme, l'acétate de butyle, le chlorure de méthylène ou le 5 butanol. On peut isoler le nouvel antibiotique directement à partir de l'extrait concentré en le faisant précipiter, par exemple par addition d'éther. Le nouvel antibiotique possède une activité fongista-tique très puissante vis-à-vis de divers agents pathogènes res-10 ponsables des mycoses. Il y a lieu de signaler en particulier la bonne activité du nouvel antibiotique qu'on a observée "in vitro" contre les organismes indiqués dans le tableau suivant. TABLEAU Organisme Concentration inhibitrice minimale en jug/ml Candida albicans 2 Candida tropicalis 4 Trichophyton mentagrophytes 1 Histoplasma capsulatum 10 Aspergillus fumigatus 40 Trichophyton tonsurans 2 Trichophyton rubrum 1 Epidermophyton floccosum 2 Microsporum audouinii 1 Microsporum canis 1 En outre, le nouvel antibiotique exerce "in vivo" une 30 action systémique contre les dermatophytes, par exemple lorsqu'il est administré chez le cobaye par voie orale à la dose de 10 à 50 mg/kg. Le nouveau composé de l'invention peut être utilisé en thérapeutique comme agent fongistatique. La dose à administrer 35 dépend de l'effet désiré ainsi que de l'application envisagée; on administrera des doses quotidiennes comprises entre 150 et 250 mg. 70 04781 4 2034540 Pour l'administration par voie orale, on administre de 150 à 250 mg de principe actif en mélange avec des supports solides ou liquides. Pour l'application topique, on peut utiliser des poudres, des liquides pour pulvérisation, des pommades ou des 5 teintures, contenant de 0,1 à 2.% de principe "actif. En tant que médicament, l'antibiotique SL 3238 de l'invention peut être utilisé soit seul, sous forme d'une huile ou de concentré brut, soit sous forme de préparations médicamenteuses appropriées pour l'administration orale ou l'application 10 topique. On prépare les formes médicamenteuses appropriées en mélangeant l'antibiotique avec des excipients minéraux ou organiques indifférents du point de vue pharmaceutique. Comme excipients on utilisera par exemple: pour des comprimés et des dragées: le lactose, l'amidon, le talc, 15 l'acide stéarique etc.; pour des sirops : le saccharose, le sucre inverti, des solutions de glucose etc.; pour des pommades : l'eulénine, la glycérine, la vaseline, l'huile de paraffine 20 etc.. Outrevla substance active, les préparations peuvent contenir des agents de conservation, des stabilisants, des mouillants, des auxiliaires de dissolution, des édulcorants, des colorants, des aromatisants etc., appropriés. 25 L'exemple suivant illustre la présente invention sans aucunement en limiter la portée. Les températures sont toutes exprimées en degrés centigrades. Les points de fusion ou de décomposition ont été déterminés sur le banc Kofler. EXEMPLE: 30 Dans un fermenteur, on introduit 2900 litres d'une solution nutritive contenant par litre 40 g de cérélose 8,5 g de NaNO^ 2,7 g. de KH2F04 35 1,2 g de MgSO^ • 7 HgO 28 mg de FeSÛK • 7 HO 3 mg de ZnSO^ • 7 H20 70 04781 5 2034540 et pour le reste de l'eau déminéralisée. On ensemence cette solution nutritive avec une préculture de la souche NRRL 3364 de Pénicillium purpurogenum Stoll et on l'incube à 27° pendant 90 heures tout en aérant (1,2 litre 5 d'air/min./litre de solution nutritive) et tout en agitant (100 tours/min.). On centrifuge la bouillie de fermentation (2600 litres, pH 5,6). On désagrège le mycélium (165 kg) à deux reprises avec chaque fois 210 litres de méthanol dans un appareil "Ultra-Turrax!'.. Après filtration, on ajoute 50 litres d'eau, on 10 élimine le méthanol par distillation et on extrait ensemble la phase aqueuse et le filtrat de culture avec le même volume de chlorure d'éthylène. On concentre sous pression réduite la phase organique jusqu'à un volume de 5 litres et on répartit à trois reprises l'extrait ainsi obtenu chaque fois entre 4 litres 15 d'éther de pétrole et un mélange de méthanol et d'eau dans le rapport 9:1- On dilue avec de l'eau la phase eau-méthanol et on évapore ensuite le méthanol sous pression réduite. On extrait la phase aqueuse restante à trois reprises avec chaque fois 10 litres de chloroforme et on évapore la solution chloroformlque 20 jusqu'à un volume de 1,5 litre. On ajoute de l'éther à la solution chloroformlque concentrée, ce qui fait précipiter l'antibiotique SL 3238 à l'état pur; il fond à l60-l6l°. La préculture utilisée ci-dessus peut se préparer de 25 la manière suivante. On réalise la préculture en deux étapes, c'est-à-dire on prépare dans la première étape 50 litres et dans la seconde étape 300 litres, dans les mêmes conditions que celles décrites ci-dessus pour la culture principale. Pour ensemencer la première 30 préculture de 50 litres, on utilise une suspension de spores préparée à partir d'une culture de la souche initialement isolée que l'on incube pendant 19 jours à 27° sur un milieu gélosé dont la composition est la suivante: 20 g de cérélose 35 20 g de gélose filiforme 70 04781 6 2034540 2 g d'extrait de malt (Schweiz. Ferment AG) 2 g d'extrait de levure 2 g de peptone 2 g de KH2P04 2 g de MgSO^ • 7 HgO et de l'eau déminéralisée jusqu'à un volume de 1 litre. 70 04781 7 2034540 REVENDICATIONS 1.- Le nouvel antibiotique SL 3238 qui présente les caractéristiques suivantes. - Formule brute: C^H^NO^ 5 - Point de fusion: l60-l6l° PO - Pouvoir rotatoire spécifique: [ctî^ =■ -102° (c = 0,47 dans le chloroforme) maximums à 203 nm (log£= 4,57) et à 291 nm (logé = 3,75) dans le méthanol bandes à 3450, 3300, 3150, 2900, 2840, 1650, 1580, 1560, 1540, 1460, 1380, 1350, 1245, 1150, 1130, 1105, IO95, 1045, 940, 790 cm-1 dans le nujol. 2.- Un procédé de préparation du nouvel antibiotique SL 3238 spécifié à la revendication 1, caractérisé en ce que l'on cultive t. dans tin milieu nutritif la nouvelle souche NRRL 3364 de l'espèce Pénicillium purpurogenum Stoll, on isole l'antibiotique SL 3238 20 du milieu nutritif et on le purifie. 3.- Un médicament exerçant, notamment, une action fongistatique, caractérisé en ce qu'il contient, à titre de principe actif, le nouvel antibiotique SL 3238 spécifié à la revendication 1. 4.- Une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle 25 renferme, outre le principe actif spécifié à la revendication 3, les excipients et supports acceptables du point de vue pharmaceutique. - Spectre ultra-violet: 10 - Spectre infrarouge: 15