Brevet FR2028974A1 — publié le 19701016

La présente invention concerne la production d'un antibiotique nouveau et utile connu chimiquement comme étant l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique et en particulier un procédé perfectionné pour la production de l'antibiotique par fermentations de milieux nutritifs avec des souches convenables de microorganismes comme, par exemple, des Streptomyces. L'acide (-)(cis-1,2-époxypropyl)phosphonique est formé en cultivant, dans des conditions contrôlées, les souches du genre Streptomyces qui produisent 11 antibiotique. Un de ces microorganismes, qui a été isolé du sol-, a été désigné par MA-2898 dans la collection de cultures de Merci & Co., Inc., New-Jersey; des sous-isolés s de la culture parente ont été désignés par BA-2911, MA-2912 et MA-2913.Ces cultures ont été placées en dépit permanent dans la collection de cultures de la Northern Utilization Research and Development de l'United States Department of Agriculture à Peoria, Illinois et ont reçu les numéros de culture NRRL B-3357, NRRL 3-3358, NRRL 3-3359, et NRRD B-3360 respectivement. Ces microorganismes ont été classés dans l'espèce Streptomyces fradiae. L'antibiotique est aussi produit en cultivant, dans des conditions contrôlées, d'autres souches de Streptomyces également isolées du sol et identifiées dans la collection de cultures de Merck & Co., Inc. sous les références MA-2867, NA-2903, MA-2916, EA-2917, MA-3270, MA-3272-et MA-3267 Ces cultures ont été classées comme membres de l'espèce Streptomyces viridochromo genets. Les cultures GA-2903, MA-2867, MA-2917 et HA-3270 ont été placées en dépit permanent dans la collection de cultures de la Northern Utilization Research and Development Division de l'Uni ted States-Department of Agriculture et ont reçu les numéros de culture NRRL-3413, NRRL-3414 > NRRL-3415, NRRL-3416 et' ERRD-3427 respectivement. La culture MA-3269 a été assignée à l'espèce Streptomyces wedmorensis et a reçu le numéro NRRL 3426. Outre les espèces ci-dessus de microorganismes, on envisage aussi l'emploi d'autres microorganismes, y compris des souches de Streptomyces isolées de la nature ou obtenues par mutatio de ces organismes, comme celles obtenues par sélection naturelle ou celles produites par des agents de mutation, comme, par exemple, irradiation aux rayons X, irradiation ultraviolette, moutardes à l'azote et analogues. L'emploi des sources de carbone qui font l'objet de la présente invention dans des milieux de fermentation contenant d'autres microorganismes capables de produire l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique est également envisagé. L'antibiotique est formé au cours de la fermentation de milieux nutritifs aqueux appropriés dans des conditions contr8lées. Les milieux aqueux comme ceux qui sont employés pour la production d'autres antibiotiques conviennent à la production de l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique. De tels milieux contiennent des sources de carbone et d'azote qui sont assimilables par le microorganisme, et des sels minéraux. En outre, le milieu de fermentation contient des traces de métaux nécessaires pour la croissance du microorganisme et qui sont communément apportées sous forme d'impuretés par les autres constituants du milieu. Les sources d'azote satisfaisantes comprennent les innombrables matières protéiniques comme les diverses formes dthy- drolysats de caséine, la farine de soja, la liqueur de trempage de mais, les distillers solubles, les hydrolysats- de levure, la pâte de tomate et analogues. Les diverses sources d'azote peuvent dtre utilisées seules ou en combinais-on-et sont utilisées dans des quantités allant de-0,2 à 6 % en poids du milieu aqueux. En raison de la difficulté inhérente de séparation de l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique pur de grandes quantités d'impuretés dans le bouillon de fermentation, il est très important de trouver un moyen permettant-d'accroRtre la concentration de l'antibiotique par rapport-aux solides totaux du bouillon. Selon l'invention, quand on--emploies oomme-source principale de carbone dans le milieu de fermentation, certains composés carbonés neutres contenant seulement du carbone, de l'hy- drogène et de l'oxygène qui permettent 'la croissance de microor anismes- capables de produire de 1' acide (-) (cis-1,2-époxypro- pyl)phosphonique, on observeune une amélioration marquée dans la production de l'antibiotique.Par composés carbonés neutres" on entend ceux qui ne sont ni acides ni basiques et qui H ne sont pas chargés électriquement. Ilrest essentiel pour obtenir une production accrue de l'antibiotique que les sources principales de car bone soient des composés organiques neutres consistant seulement en carbone, hydrogène et oxygène et qu'elles permettent la croissance d'un microorganisme comme, par exemple, un Streptomyces, qui produira ltantibiotique. Des composés qui possèdent la pre mière propriété, c'est-à-dire des composés qui sont neutres et qui consistent uniquement en carbone, hydrogène et oxygène, mais qui ne permettent pas la croissance du microorganisme, ne permettront pas la production de l'antibiotique.Des composés qui permettent la croissance du microorganisme, mais qui possèdent des éléments autres que le carbone, l'hydrogène et l'oxygène, comme la cystéine et la biurée, se sont révélées etre de mauvaises sources de carbone pour l'antibiotique, car on n'observe qu'une production faible ou nulle quand de tels composés sont utilisés comme principale source de carbone dans le milieu de fermentation. Des composés qui permettent la croissance, mais qui ne sont pas neutres, comme le glycérate de calcium ou le gluconate de sodium, sont de même de mauvaises sources de carbone pour l'antibiotique. Quelques exemples de composés qui tombent dans le domaine de la présente invention sont le maltose, le glucose, l'arabinose, le glycérol, le galactose, le glycogène, l'amidon et la dextrine. Les composés neutres qui doivent servir de source principale de carbone peuvent eux-mêmes être ajoutés au milieu, ou ils peuvent eAtre présents dans le milieu de fermentation sous forme d'um nutritif brut ou complexe comme l'avoine ou le seigle, qui a une teneur élevée en produit désirés La source de carbone peut représenter 0,4 à 10 % du milieu de fermentation. Les meilleurs résultats sont toutefois obtenus quand la source de carbone représente environ 2~4 % du milieu. Bien auon observe un accroissement marqué dans la production de l'antibiotique Quand on emploie un composé de carbone neutre entrant dans la définition de l'invention, on peut employer une combinaison des composés de carbone neutres comme sources de carbone pour augmenter la pro duction de ltantitiotique. Pour démontrer l'effet des composés neutres entrant dans la définition de la présente invention sur la production de l'antibiotique, on a effectué aussi des fermentations dans lesquelles le composé de carbone neutre était ajouté au milieu de fermentation contenant des sources de carbone contenant des élé ments autres que le carbone, l'hydrogène et l'oxygène, 2 comme, par exemple, la biurée ou la L-cystéine et dans des-milieux contenant des sources de carbone qui sont chargées comme le glyce- rate de calcium. Ces derniers composés permettent la croissance du microorganisme mais n'en permettent pas une production appréciable.L'addition des composés de carbone neutres au milieu de fermentation n'a pas pour résultat un accroissement de la croissance du microorganisme, mais on a observé un accroissement net dans la production de l'antibiotiqoe. Bien que le nouvel antibiotique selon l'invention sou produit par culture en surface ou en culture submergée, on pré fère en fait conduire la fermentation en culture submergée. Des fermentations à petite échelle sont conduites de façon commode en plaçant des quantités appropriées de milieu nutritif dans des fioles, en stérilisant les fioles et leur contenu par chauffage à 1200C, en inoculant les fioles soit avec des spores, soit avec des cultures végétatives dtun microorganisme producteur d'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique, par exemple une souche de Streptomyces, en bouchant les cols des fioles avec du coton et en laissant la fermentation se produire à une température constante d'environ 280C pendant 4-7 jours.Pour le travail à plus grande échelle, il est préférable de conduire la fermentaton dans des cuves convenables munies dtun agitateur et de disposi -tifs pour aérer le milieu de fermentation. Dans cette méthode, le milieu nutritif est préparé dans la cuve et stérilisé par chauffage à 1200 C. Après refroidissement, le milieu stérilisé est inoculé avec une source convenable de culture végétative da microorganisme et la fermentation se poursuit pendant 4 - 7 jours tandis qu'on agite et/ou aère le milieu nutritif et qu'on maintient la température à 28 G environ.Cette méthode de production de l'acide ( (cis-1,2-époxypropyî)phosphonique est particulie- rement adaptée pour la préparation de grandes quantités du nouvel antibiotique. La fermentation utilisant le microorganisme producteur d'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl > phosphonique peut être conduite à des températures allant de 280C à 400cl environ. Pour obtenir les meilleurs résultats, toutefois, il convient de conduire la fermentation à des températures comprises entre 260C et 300 C. Le pH des milieux nutritifs convenant à la croissance du microorganisme et à la production de l'antibiotique peut varier d'environ 5,0 à 9,0. L'intervalle de pH préféré est toutefois d'environ 6,0 à 7,5. Pour procéder à la fermentation, on prépare une suspension de cellules en ajoutant uni milieu stérile à une culture inclinée sur gélose d'un microorganisme producteur d'acide (-)(cis 1,2-épow;propyl)phosphonique. La croissance de la cultureincli- née est alors utilisée pour inoculer une fiole d'ensemencement et la fiole d'ensemencement est agitée à environ 280C pendant 1 - 3 jours de façon à obtenir une bonne croissance. La fiole d'ensemencement est utilisée pour inoculer les fioles de production. La fiole d'ensemencement peut aussi être inoculée à partir d'une culture lyophilisée ou d'un inoculum congelé. L'inoculation est en général effectuée en utilisant environ 1 ml par 30 ml de milieu de production contenant la concentration désirée du composé. neutre contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène et on laisse la fermentation se poursuivre pendant 4 à 7 jours tandis qu on agite et/ou aère le milieu nutritif et qu'on maintient la température à environ 280C, Toutes les fioles de production, c'est-à-dire celles qui contiennent la source de carbone neutre et les fioles servant de témoins, sont alors titrées, généralement après 4 .- 7 jours, pour déterminer la quantité d'antibiotique produite dans chaque fiole. L'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique est titré de façon commode par une méthode disque-plaque utilisant Proteus vulgaris MB-838 (ATCC 21100 et NRRD B-3361) comme organisme d'essai. La culture d'essai est maintenue sous forme de culture inclinée sur gélose nutritive (Difco) plus 0,2 /0 d'extrait de levure (Difco). Les cultures inclinées inoculées sont incubées- à 37 C pendant 18 - 24 heures et conservées jusqu'à usage, à la température du réfrigérateur; des cultures fraîches sont préparées. chaque semaine. L'inoculum pour les plaques de titrage est préparé chaque jour en inoculant une fiole d"Erlenmeyer de 250 ml conte nant 50 ml de bouillon nutritif (Difco) plus 0,2 % d'extrait de levure (Difco) avec un grattage de la culture inclinée. La fiole est incubée sur une machine à secousses à 370c pendant 18 - 24 heures. La culture est alors ajustée à une transmittance de 40 % à une longueur d'onde de 660 m/u, en utilisant un appareil Spectronic 20 de Bausch & Lomb, par addition d'une solution d'extrait de levure à 0,2 % à la culture. Du bouillon non inoculé est utilisé comme témoin pour cette détermination. On utilise 30 ml du bouillon ajusté pour inoculer 1 litre de milieu. Comme milieu de titrage on utilise de la gélose nutritive (Difco) plus 0,2 % d'extrait de levure (Difco). Ce milieu est préparé, stérilisé par autoclavage et abandonné au refroidissement jusqu'à 500cl Après inoculation du milieu, on en ajoute 10 ml dans des boîtes de Pétri stériles et on laisse le milieu se solidifier. L'activité est exprimée en unités, une unité étant définie comme la concentration de l'antibiotique par ml qui, sur un disque de papier de 12,7 mm donne un diamètre de zone de 28ru. On emploie quatre concentrations de l'antibiotique pour préparer lacourbe standard, à savoir 0,3, 0,4, 0,6, et 0,8 unité par Il, chaque concentration étant obtenue par dilutionians le tampon tris-(hydroxyméthyl)-aminométhane ajusté à pH 8,0. Quatre disques sont placés sur chacune des cinq plaques pour la préparation de la courbe standard, chaque plaque contenant un disque de chacune deys quatre concentrations de l'antibiotiqùe indiquées cidessus. Les plaques sont incubées pendant 18 heures à 370C et les diamètres des zones d'inhibition en mm sont mesurées. On calcule un diamètre de zone moyen pour chaque concentration et on en fait une courbe standard sur un papier semi-log. La pente de la ligne obtenue est entre 4 et 5. On titre les fioles de production en diluant l'échan- tillon dans un tampon 0,05 molaire à pH 8 à une concentration appropriée. L'organisme d'essai est Proteus vulgaris KB-838 et le milieu de titrage est de la gélose nutritive plus 0,2 % d'extrait de levure. Qu'on emploie le titrage par plaque à disques ou par plaque à cylindres, on verse par plaqué -10 15 ml du milieu. Quand on emploie le procédé par plaque A-disques, les disques sont plongés dans 0,4 unititar ml de la solution antibiotique et sont placés sur la plaque en position alternée par rapport à l'échantillon. Les plaques sont incubées à 570C pendant 18 heures et on détermine le diamètre des zones en mm. Quand on emploie le procédé par plaque à cylindres on utilise par plaque 6 cylindres, 3 de l'échantillon et 7 de la solution témoin en alternant les échantillons et la solution témoin. Cette dernière contient 1 y &gamma;/ml d'acide libre. On utilise cinq plaquis standard contenant 6 valeurs du standard allant de O 25 &gamma; /ml à 3,0 &gamma; &gamma;/ml. Le titre est calculé au moyen d1un Nomographe et les résultats sont reportés en unités ou gnPlma par ml Une unité d'acide libre est égale à 2,8 &gamma;. . L'antibiotique peut être purifié et récupéré sous forme plus pure par un certain nombre de méthodes. Un de ces procé-- dés comporte l'adsorption de l'antibiotique sur-alumine; l'alumine basique ou l'alumine lavée à l'acide convient pour cette purification. L'antibiotique adsorbé peut être élué de l' alumine le .plus commodément par des solutions aqueuses ou hydroalcooliques d'hydroxyde d'ammonium ayant un pH d'environ 11,2 en recueillant l'éluat par fractions.La purification des fractions solides impures contenant le sel d'ammonium de l'acide (-) (cis-1,2- époxypropyl)phosphonique peut aussi être effectuée en dissolvant ce produit dans le méthanol, en ajoutant un volume égal de nbutanol, en évaporant le méthanol et en obtenant une solution butanolique contenant le sel d1 asmonium de l'antibiotique sous une forme plus pure. Le sel d'ammonium peut alors etre obtenu sous forme solide en évaporant à sec la solution butanolique sous pression réduite. Le sel d'ammonium peut aussi être extrait de la solution butanolique par l'eau pour obtenir une solution aqueuse du sel d'ammonium de 11 acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)- phosphonique.On prépare le sel de calcium de l'antibiotique en ajoutant de l'hydroxyde de calcium à la solution aqueuse du sel d'ammonium et en chauffant la solution résultante sous pression réduite. On peut aussi obtenir le sel de calcium en faisant passer une solution d'un autre sel de l'antibiotique sur une résine échangeuse de cations sur le cycle calcium. Le sel de calcium cristallise de solutions aQueuses ayant une concentration de 10 mg/ml par repos ou par agitation. Ces procédés de purifica tion sont décrits plus en détail dans la demande de brevet de Louis Chalet N 699.377 déposée le 22 Janvier 1968. L'acide libre est un solide cristallin blanc qui se décompose à 1700 C. Laide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique et ses sels sont des agents antimicrobiens utiles qui sont actifs pour empêcher la croissance des bactéries pathogènes gran-positives et gram-négatives. Cet antibiotique et surtout ses sels sont ac tif s contre les pathogènes Bacillus, Escherichia, Staphylocogues Salmonella et Proteus et leurs souches résistant aux antibio tiques Des exemples de ces pathogènes sont Esoherichia colt, Salmonella schottmuelleri, Salmonella gallinarwi, Proteus vulsa- ris, Proteus mirabilis, Proteus sorgXnii et Staphylococcus an- reus.Ainsi l'acide (-) (cis-1,2-epoxypropyl)phosphonique et se sels peuvent être utilisés comme agents antiseptiques pour éli- miner les organismes nuisibles des appareillages pharmaceutiques, dentaires et médicaux et en d'autres lieux soumis à l'infection par de tels organismes. De meme ils peuvent être utilisés pour séparer certains microorganismes de mélanges de microorganismes Les sels de l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique sont aussi utilisables pour le traitement des maladies causées par les infections bactériennes chez lthomme et les animaux et ils sont particulièrement précieux dans ce domaine car ils sont actifs contre des souches résistantes de pathogènes.Ces sels ont une valeur particulière car ils sont efficaces quand ils sont ad- ministrés par voie orale bien qu'ils puissent aussi être admi nistrés par voie parentérale. Les exemples qui suivent sont données,pour illustrer l'invention et non pour la limiter. EXEMPLE 1 Le présent exemple est le mode opératoire utilisé pour illustrer l'effet de l'emploi de composés neutres contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène dans les milieux de fermentation sur la production d'acide (-) (cis-1,2- époxypropyl )phosphoni que. Une cuillerée de cellules d'une culture inclinée sur gélose de Streptomyces fradiae MA-2913 (NRRL B-336O) ayant la composition suivante : A. Milieu de la culture inclinée quantité r Amidon de mais 1 % L-asparagine 0,1 - v P04 Q,1 % K2HPO4 0,1 % 2 % culture inclinée sur gélose est utilisée pour inoculer une fiole dlErlenmeyer de 250 ml à chicanes contenant 40 ml d'un milieu d'ensemencement stérilisé ayant la composition suivante B.Milieu d'ensemencement quantité Amidon-de mais 2 % L-asparagine 0,5 % D-L méthionine 0,1 % L-glutamate monosodique 0,1 % Citrate de sodium 0,4 % K2PO4 0,1 % CaCl2,2H2O 0,05 % MgSO4,7H2O 0,02 % CoClt6E20 o501 % L H20 distillée pH = 7,0 On ajoute une solution d'oligoéements pour donner-les concentrations finales suivantes C. Mélange doligoéléments quantité mg/l EnS04,7H20 10 CuOl2 ,2H20 0,25 FeS04,7H20 10 - H3303 0,56 La fiole inoculée est incubée à 280C pendant 2 jours sur un agitateur rotatif tournant à 220 t/mn et est alors conservée à 50C jusqu a emplqi. On prépare lé nombre voulu de fioles d'Erlenmeyer d'Erlenmeyer de 250 ml contenant chacune 30 ml d'un milieu ayant la composition suivante D. Milieu de production quantité L-asparagine 0,5 % D-L méthionine 0,1 % L-glutamate monosodique 0,1 % Citrate de sodium 0,4 % 0,1 % CaOl2 2H20 0,05 % MgSo4,7H2o 0,02 % CoCi2, 6H20 0,01 % FeS04, 7H20 0,001 % H2O distillée pH = 7,0 Les fioles sont stérilisées, refroidies et inoculées par addition de 1,0 ml du milieu d'ensemencement préparé comme indiqué ci-dessus.Le composé neutre contenant seulement-du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène à essayer-comme constituant principal est ajouté à la concentration désirée et le pH est ajusté dans toutes les fioles à 7,0 avant autoclavage. Les fioles inoculées sont incubées à 280C sur agitateur rotatif tournant à 220 t/mn pendant 4 - 7 jours Quand la fermentation est termi > 6e, les cellules sont séparées, centrifugées et le bouillon est dilué avec le tampon tris 0,05 M (pH 8,0). Les bouillons surnageants sont titrés en utilisant Proteus vulgaris MB-838 comme organisme d'essai. Les titres obtenus avec Ie'bouillon après incubation de 5 jours sont donnés ci-après : E.Source de carbone Croissance Antibiotique Z~/ml Néant médiocre 4 2 Amidon de maSs bonne 15,3 Glycérol bonne 18,7 Glycérate de; calcium bonne -L-cystéine, HCl bonne (2 EXEMPi 2 On suit le procédé général décrit dans l'exemple I en utilisant le glycérol ou le glucose comme composé neutre contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène.On a obtenu les résultats de titrage suivants Principale source de carbone Quantité% Antibiotique Néant ~ - 0,6 Glycérol 0,5 6,8 Glycérol 1,0 18,3 Glycérol 2,0 33,8 Glycérol 3,0 27,2 Glycérol 4,0 24,2 Glucose 0,5 2,6 Glucose 1,0 18,7 Glucose 2,0 34,4 Glucose 3,0 30,8 Glucose 4,0 27s7 EXEMPLE 3 On suit le mode opératoire de l'exemple I en utilisant la L-cystéine, HCl, en présence et en l'absence de glycérol, comme source principale de carbone.On a obtenu les résultats de titrage suivants Principale source de carbone Poids des cel- Antibio lules sèches tique mg/ml y /ml L-cystéine,HCl 0,5 % 1,7 0,9 L-cystéine,HCl 1 % 4,3 0,8 L-cystéine,ECl 2 % 17,8 0,9 L-cystéine,HCl 4 % 24,1 Q,7 L-cystéine,HCI 2 % + glycérol 0,5 % 14,3 3,4 L-cystéine,HCl 2 % + glycérol 1 % 12,5 3,3 L-cystéine,HCl 2 % + glycérol ? % 14,8 4,4 L-cystéine,HCl 2 % + glycérol 3 % 18,5 5,1 L-cystéine,HCl 2 % + glycérol 4 % 18,5 6,2 L'exemple ci-dessus montre que- l'addition d'un composé neutre contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'o- xygène à un milieu de fermentation contenant-la L cystéines HCl, composé contenant du soufre et de l'azote en plus de l'hydrogène et de l'oxygène, a pour résultat un accroissement dans la production de l'antibiotique sans augmenter la croissance du microor ganisme EXILE 4 On suit le mode opératoire général de l'exemple 1 en utilisant la biurée en présence ou en l'absence de glycérol comme source de carbone principale.On a obtenu les résultats de titrage suivants Poids de cel- Antiblo- Principale source de carbone lules sèches tique Principale source de carbone mgZml f-/ml /ml Néant 1,6 0,6 Biurée 0,5 % 7,7 0,7 Biurée 1 % 11,0 0,7 Biurée 2 % 39,7 0,7 Biurée 4 % 20,0 0,7 Biurée 2 % + Glycérol 1 % 32,0 6,6 Biurée 2 % + Glycérol 2 % 30,0 12,1 Biurée 2 % + Glycérol 3 % 28,3 15,1 L'exemple ci-dessus montre que l'addition d'un composé neutre contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène à un milieu de fermentation contenant de la biurée, composé contre nant de l'azote en plus du carbone, de l'hydrogène et de l'oxy- gène, conduit à la production de l'antibiotique sans augmenter la croissance du microorganisme. - R$VENDICAtIONS - n - Procédé de préparation de l'acide (-) (cis-1,2époxypropyl)phosphonique dans lequel on cultive un microorganisme producteur dudit acide dans un milieu nutritif aqueux dans des conditions aérobies jusqu'à donner audit milieu une activité antibiotique substantielle, caractérisé en ce qu'on ajoute ai milieu nutritif comme source principale de carbone un composé neutre qui permet la croissance du microorganisme et qui contient seulement du carbone, de lthydrogène et de l'oxygène, pour augmenter la production de l'antibiotique. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le microorganisme' est un Streptomyces. 3 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé neutre est le glycérol. 4 - Procédé selon la revendication I, caractérisé ce que le composé neutre est le glucose. 5 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé ce que le composé neutre est l'amidon. 6 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé ce que la source de carbone est un complexe consistant substantiellement en un composé neutre contenant seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène qui permet la croissance du microorganisme. 7 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le composé neutre est présent dans le milieu de fermentation à une concentration de 2 à 4 % environ. 8 - Procédé de préparation de l'acide (-) (cis-1,2époxypropyl)phosphonique, dans lequel on cultive un microorganisme producteur dudit acide dans un milieu aqueux nutritif dans des conditions aérobies jusqu'à donner audit milieu une activité antibiotique substantielle, caractérisé en ce quton ajuste dans le milieu de fermentation la teneur en un composé neutre qui permet la croissance du microorganisme et qui contient seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène jusqu'ce qu'on obtienne une concentration substantiellement non toxique du composé en excès de 0,4 %. 9 - Procédé selon la revendication 8, caractérisé en ce que le microorganisme est un Streptomyces. 10 - Procédé de préparation de l'acide (-) (cis-1,2- époxypropyl)phosphonique, dans lequel on cultive un microorganisme producteur dudit acide dans un milieu nutritif aqueux dans des conditions aérobies jusqu ta donner audit milieu une activité antibiotique substantielle, caractérisé en ce qu'on ajoute au milieu nutritif, comme source principale de carbone, un composé neutre qui permet la croissance du microorganisme et qui contient seulement du carbone, de lthydrogène et de l'oxygène pour augmenter la production dudit antibiotique et on récupère l'acide (-) (cis-1,2-époxypropyl)phosphonique du bouillon de fermentation résultant. 11 - Procédé selon la revendication 10, caracterisé en ce que le microorganisme est un Streptomyces. 12 - Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que le composé de carbone neutre est présent dans le milieu de fermentation à une concentration environ 2 - 4 %. 13 - Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces fradiae. 14 - Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces wedxo- rensis. 15 - Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces virido chromogenes. 16 - Procédé de préparation de l'acide (-) (cis-1,2- époxypropyl)phosphonique dans lequel on cultive un Streptomyces producteur dudit acide dans un milieu nutritif aqueux dans des conditions aérobies jusqu'à donner audit milieu une activité antibiotique substantielle, caractérisé en ce qu'on ajoute audit milieu, comme source principale de carbone, un composé neutre qui permet la croissance du microorganisme et qui contient seulement du carbone, de l'hydrogène et de l'oxygène, pour augmenter la production dudit antibiotique. 17 - Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces fradiae. 18 - Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces wedmorensia 19 - Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que le Streptomyces est une souche de Streptomyces viridochromogenes.