Brevet FR2052949A1 — publié le 19710416

La présente invention est relative à la préparation de peptides-à effet AC'PH pouvant être administrés par voie orale, On a trouvé qu'on obtient des peptides présentant par voie orale un bon effet ACTH lorsqu'on acyle sur l'atome d'azote a des peptides à effet ACTH présentant comme premier amino-acide un acide aminé présentant la configuration D, ou ses amides, en particulier avec un reste alcanoyle compqrtant jusqu'à 30 atomes de carbone0 La-présente invention a en conséquence pour objet des peptides à effet AC2H présentant, comme premier amino-acide, uli acide aminé présentant la configuration D et dont le groupe a-aminogène est acylé, en particulier par un reste alcanoyle comportant au plus 30 atomes de carbone, par exemple un reste propionyle, butyryle, valéryle, caproyle, pélargonyle, lauroyle, myristoyle, palmytoyle, béhényle, et leurs amides et les sels d'addition avec des acides de ces composés, ainsi qu'à un procédé pour leur préparation. Comme peptides à effet LCTH comportant un D-amino-acide comme premier acide aminé, il y a lieu de citer, par exemple, des peptides comportant la séquence des corticotropines naturelles, mais comportant de la D-sérine sur le terminus azoté, par exemple la D-sérl-P-corticotropine, ainsi que des peptides sntlitiques comportant une séquence diacides aminés plus courte et/ou modifiée en ce qui a trait à différents amino-acides, et comportant un D-amino-acide N-terminal.Aux peptides synthétiques indiqués en dernier lieu appartiennent surtout ceux comportant de 18 à 28 amino- acides décomptés depuis l'extrémité aminée des corticotropines naturelles, le cas échéant avec des variantes de la séquence naturelle en ce qui a trait à l'un ou plusieurs des amino-acides 1 à 5, 11, 17, 18, 19 et 25.Le premier acide aminé peut, par exemple, aussi être de la D-alanine ou de la D-thréonine ; la tyrosine peut être remplacée, par exemple, par de la phénylalanine, la sérine3, par exemple par de la glycine, la méthionine par un reste a-alcoyl(inférieur)-a-amino-acétyle, par exemple par de la norvaline ou de la nor-leucine, de la leucine, de la valine ou de l'acide a-amino-butyrique, l'acide glutamique5, par exemple par de la glutamine, la lysine11 par de l'ornithine, la lysine 11,15,1@ par de l'ornithine, l'arginine 17,18 par de l'ornithine ou de la lysine, la proline 19 par de la valine, l'amino-acide25 par de la valine.Comme exemples pour les nouveaux petides, on mentionnera par exemple les N&alpha;-acyl-dérivés, par exemple N&alpha;-alcanoyl-dérivés du D-Sér1-corticotropine-arg18-amide, du D-Sér1-Orn17,18-ss1-18-ss1-18-corticotropine-Orn18-amide, du D-Sér1-Gly3-Lys17,18-ss1-18-corticotropine-Lys18-amide, du D-Sér1-Nle4-Lys17,18-ss1-18j-corticotropine-Lys18-amide, du D-Sér1-Lys17,18-corticotropine-Lys18-amide, de la D-Sér1-ss1-19-corticotropine, du D-Sér1-ss1-19-corticotropine-Pro19-amidem, de la D-sér1-Glu(NH2)5-ss1-19-corticotropine, du D-Sér1-Lys17,18-Vla19-ss1-19-corticotropine-Val19-amide du D-Sér1-Nle4-Lys17,18-Val19-ss1-19-corticotropine-Val19-amide, du D-Sér1-ss1-20-corticotropine-Val20-amide, du D-Sér1de la D-Sér1-ss1-21-corticotropine, du D-Sér1de la D-Sér1-ss1-23-corticotropine, du D-Sér1-Lys17,18-ss1-2-corticotropine-Val20-amide, du D-Sér1-@@-aminobutyryl4-Glu(NH2)5-ss1-20-corticotropine-Val20-amide, du D-Sér1-Lys17,18-ss1-19-corticotropine-Pro19-amide, du D-Sér1-deaminobutyryl4-ss1-20-corticotrophine-Val-20-amide, de la D-Sér1-ss1-24-corticotropine, de D-Sér1-Lys17,18-ss1-21-corticotropine-Iys21-aminde du D-Sér1-Lys17,18-ss1-22-corticotropine-Val22-amide, de la D-Sér1-Crn17,18-ss1-23-corticotropine, du D-Sér1-ss1-23-corticotropine-Tyr23-amide, du D-Sér1-Ala3-ss1-23-corticotropine-Tyr23-amide, du D-Sér1-Gly3-ss1-23-corticotropine-Tyr23-amide, du D-Sér1-Lys17,18-ss1-23-corticotropine-Tyr23-amide, de la D-sér1-ss1-24-corticotropine, de la D-Sér1-Glu(NH2)5-ss1-24-corticotropine, de la D-Sér1-Orn17,18-ss1-24-corticotropine, de la D-Sér1-Gly3-ss1-24-corticotropine, de la D-Sér1-Orn11,15-18-ss1-24-corticotropine, de la D-Sér1-MLe4-ss1-24-corticotropine, du D-Sér1-ss1-24-corticotropine-Pro24-amide, de la D-Ala1-ss1-24-corticotropine, de la D-sér1-Gly3-Lys17,18-ss1-24-corticotropine, du D-Sér1-Nle-4-Lys17,18-ss1-24-corticotropine-Pro24-amide, du D-Sér1-Orn17,18-ss1-24-corticotropine-Pro-24-amide, du D-Sér1-Nle-Orn17,18-ss1-24-corticotropine-Pro-24-aminde du D-Sér1-Gly3-Lys17,18-ss1-24-corticotropine-Pro24-amide, de la D-Sér1-Lys17,18-ss1-24-corticotropine. du D-Sér1-Lys17,18-ss1-24-corticotropine-Pro24-amide, du D-Sér1-Nva4-Val25-ss1-25-corticotropine-Val25-amide, de D-Sér1-Nle4-Val25-ss1-25-corticotropine-Val25-amide, du D-Sér1-Nle4-Val17,18-Val25-ss1-25-corticotropine-Val25-amide, du D-Sér1-ss1-25-corticotropine-Val25-amide, du D-Sér1-Nle4-Lys17,18-Val25-ss1-25-corticotropine-Val25-amide, de la D-Sér1-ss1-26-corticotropine, de la D-Sér1-ss1-28-corticotropine, de la D-Sér1-ss1-30-corticotropine, de la D-Sér1-ss1-31-corticotropine, de la D-Sérl-ssl 39-corticotropinee Il y a lieu de faire ressortir particulièrement les Na-alcanoyl- dérivés,surtout les acétyl-dérivés de la forme D1 de l'amide N-terminal du peptide comportant les 18 premiers amino-acides de la ss-corticotropine avec des restes lysine à la place des restes de l'arginine en position 17 et 18 (D-Sér1, Lys17'18-t3118 corticotropine-Lys18-amide) et du peptide correspondant avec de la non-leucine à la place de méthionine, ainsi que les Na-dérivés correspondants de la D-Sér, Bysl7al8-l 24-corticotropine et son amide0 Comme sels d'addition avec des acides, il y a lieu de citer en particulier des sels avec des acides thérapeutiquement utilisables comme l'acide chlorhydrique, l'acide acétique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, des acides gras à longue chaîne. Le procédé conforme à l'invention pour la préparation des nouveaux peptides, de leurs amides et sels d'addition avec des acides est caractérisé par le fait que 1) dans des peptides à effet ACTH, qui présentent comme premier amino-acide un acide aminé avec la configuration D et dans lesquels le groupe a-aminogène est acylé et dans lesquels au moins les groupes aminogènes des chalnes latérales et les groupes carboxyle terminaux et les groupes carboxyle des channes latérales- sont protégés, on élimine les groupes de protection, ou que 2) on acyle sur l'atome d'azote a des peptides à effet ACTH présentant comme premier amino-acide un acide aminé avec la configuration D et, si on le désire, qu'on transforme les composés obtenus en leurs sels d'addition avec des acides. Les substances de départ sont préparées suivant les méthodes décrites pour la préparation des peptides à longue chaîne, en particulier des peptides à effet ACTHo Comme groupes de protection pour la variante 1) du procédé et pour les produits intermédiaires des variantes 1) et 2), on-utilise les groupes connus pour la synthèse des peptides, en particulier ceux qui sont connus pour la synthèse des séquences ACTH, ainsi que le cas échéant des groupes nouvellement proposés, par.exemple ceux décrits dans le brevet français l.554e05lo Comme groupes de protection des groupes aminogènes, il y a lieu de citer par exemple des groupes aralcoyle éventuellement substitués, tels que des groupes diphénylméthyle ou triphénylméthyle, ou des groupes acyle tels que des groupes formyle, trifluoracétyle, phtaloyle, p-toluène-sulfonyle, benzyl-sulfonyle, benzène-sulfényle, o-nitrophénylsulfényle, ou surtout des groupes dérivant de l'acide carbonique ou thiocarbonique, tels que des groupes carbobenzoxy éventuellement substitiés dans le reste aromatique par des atomes d'halogène, par des groupes NO2, par des groupes alcoyle inférieur ou alcoxy inférieur, ou par des groupes carbalcoxy inférieur, par exemple des groupes carbobenzoxy, p-bromo-carbobenzoxy ou p-chloro-carbobenzoxy, p-nitro-carbobenzoxy, p-méthoxy-carbobenzoxy, des groupes benzyloxy-carbonyle colorés, comme le groupe p-phénylazo-benzyloxy-carbonyle et le groupe p-(p' -méthoxyphénylazo)- benzyloxy-carbonyle, les groupes t-olyloxy-carbonyle, 2-phénylisopropyloxy-carbonyle, 2-tolyl-isopropyloxy-carbonyle, et surtout le groupe 2-p-diphênyl-isopropyloxycarbonyle (voir le brevet français 105540051), ainsi que des groupes oxycarbonyle aliphatiques, par exemple des groupes ailyloxy-carbonyle, cyclo-pentyloxycarbonyle, tertio-pentyloxy-carbonyle, tertio-amyloxy-carbonyle, adamantyloxy-carbonyle et, en premier lieu, le groupe tertiobutyloxy-carbonyle, de même que, par exemple, des groupes carbamoyle, thio-carbamoyle, N-phényl-carbamoyle et N-phényl-thio carbamoyleO Les groupes carboxyle sont protégés, par exemple, par formation de l'amide ou de l'hydrazide ou par estérification0 Pour 1'estérification, conviennent par exemple des alcanols inférieurs éventuellement substitués, comme le méthanol, 1'éthanol, l'alcool cyanométhylique ou, en particulier, le tertio-butanol, ainsi que des aralcanols tels que des aryl-alcanols inférieurs, par exemple des alcools benzyliques éventuellement substitués comme l'alcool p-nitro-benzylique ou l'alcool p-méthoxy-beneylique, des phénols ou des thiophénols comme le p-nitro-thiophénol, le 2,4,5-trichlorophénol, le p-cyanophénol ou le p-méthane-sulfonyl- phénol, de même que, par exemple, le N-hydroxy-succinimide et le N-hydroxy-phta limide . Les groupes hydroxy des channes latérales, par exemple les restes de la sérine et/ou de la tyrosine, peuvent par exemple être protégés par estérification, par exemple avec de l'alcool benzylique ou, de préférence, avec du tertio-butanol, mais n'ont pas absolument besoin d'etre protégés. Pour protéger le groupe aminogène dans le groupement guanidino de l'arginine, on utilise surtout le groupe NO2 et le groupe tosyle, bien que le groupe guanidino n'ait pas besoin d'être protégé.De même, le groupe aminogène de l'histidine n'a pas absolument besoin d'etre protégé, mais il peut être avantageux de le protéger, par exemple par un reste benzyle, trityle, adamantyloxy-carbonyle ou par les groupes 2,2,-trifluoro-1-tertio-butyloxy-carbonylamino-éthyle ou -1 benzyloxy-carbonyl-amino-éthyle décrits dans la publication inti tulée "Ber". 100 (1967), pages 3838 à 3849. L'élimination des groupes de protection a lieu d'une manière connue, par hydrogénolyse ou hydrolyse, surtout par une hydrolyse acide, en un seul stade ou le cas échéant en plusieurs stades. Dans la variante 1) du procédé, on utilise de préférence un peptide de départ dans lequel les groupes aminogènes des chat- nes latérales sont protégés par le groupe tertio-butyloxy-carbonyle et dans lequel les groupes carboxyle de la channe latérale et de l'acide C-terminal, dans la mesure où ils ne sont pas amidifiés, sont protégés par le groupe ester tertio-butyliqueO Ces groupes de protection sont avantageusement éliminés à l'aide d'acide trifluoracétique0 Comme groupe de protection du groupe a-aminogène, on peut, dans la variante 1) du procédé, utiliser le groupe Na-alcanoyle inférieur, même déjà lors de la synthèse de la matière de départ, On l'utilise soit depuis le début pour protéger le groupe aminogène du premier amino-acide ou, de préférence, on édifie d'abord un fragment peptidique N-terminal, par exemple la séquence 1 à 4 ou 1 à 10, avec un groupe de protection usuel du groupe a-aminogène dans la synthèse des peptides à effet ACGH, par exemple le groupe tertio-butyloxy-carbonyle, élimine ensuite ce groupe et introduit le groupe alcanoyle inférieur dans le fragment peptidique, par exemple à l'aide drun ester activé de l'alcane(inférieur)-oïque. En vue de la préparation des peptides de départ, on lie les amino-acides dans l'ordre indiqué, individuellement ou après formation préalable d'unités peptidiques assez petites, La liaison des unités d'amino-acide et/ou des unités de peptide a lieu en faisant réagir un amino-acide ou un peptide comportant un groupe a-aminogène protégé et un groupe carboxyle terminal activé sur un amino-acide ou sur un peptide comportant un groupe aminogène libre et un groupe carboxyle terminal libre ou protégé, par exemple estérifié ou amidifi6, ou bien eh faisant réagir un amino-acide ou un peptide comportant un groupe a-aminogène activé et un groupe carboxyle terminal protégé sur un amino-acide ou sur un peptide comportant un groupe carboxyle terminal libre et un groupe a-amino gène protégé.Le groupe carboxyle peut être activé, par exemple par transformation en un aidez anhydride, imidazolide, isoxazolide ou an ester activé comme l'ester cyanométhylique, l'ester carboxyméthylique, lester p-nitrophénylique, l'ester 2,4,5-trichloro phénylique, l'ester pentachlorophénylique, l'ester du N-hydroxy succinimide, lester du N-hydroxyphtalimide, l'ester de la 8-hydroxy-quinoléine, lester de N-hydroxy-pipéridine, ou par réaction à l'aide d'un carbodiimide (le cas échéant avec addition de N-hydroxy-suceinimide) ou d'un N,N'-carbonyl-di-imidazole, et ie groupe aminogène par exemple par réaction sur un phosphitamide. Comme méthodes les plus usuelles, il y a lieu de citer la méthode au carbodiimide, la méthode à l'azide, la méthode des esters activés et la méthode à l'anhydride, de même que la méthode de Merrifield. Les groupes fonctionnels libres ne participant pas à la réaction sont avantageusement protégés, en particulier à l'aide de restes facilement éliminables par hydrolyse ou par réduction, comme mentionné ci-dessusO Dans la variante 2) du procédé, le peptide de départ est acylé sélectivement sur le groupe a-amincgène suivant des méthodes connues, de préférence à l'aide d'un ester activé de l'alcane(inférieur)olque,par par exemple à l'aide d'un ester phénolique ou thiophénolique comme l'ester p-nitrophénylique, l'ester 2,4,5 trichlorophénylique ou l'ester p-nitro-thiophénylique ou à l'aide de l'ester du N-hydroxy-succinimide ou du N-hydroxy-phtalimide. Suivant le mode opératoire choisi, on obtient les nouveaux composés sous la forme des bases ou de leurs sels. A partir des sels, on peut obtenir les bases d'une manière cornue en soi. A partir des bases, on peut à nouveau, par réaction sur des acides convenant à la formation de sels thérapeutiquement utilisables, obtenir des sels tels que, par exemple, ceux avec des acides minéraux comme les hydracides halogénés, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide bromhydrique, l'acide perchlorique, l'acide nitrique ou l'acide thiocyanique, l'acide sulfurique ou l'acide phosphorique, ou avec des acides organiques comme les acides formique, acétique, propionique, glycolique, lactique, pyruvique, oxalique, malonique, succinique, maléique, fumarique, malique, tartrique, citrique, ascorbique, hydroxy-maléique, dihydroxymaléique, benzoïque, phénylacétique, 4-amino-benzoique, 4-hydroxybenzoïque, anthranilique, cinnamique, mandélique, salicylique, 4-amino-salicylique, 2-phénoxy-benzoique > 2-acétoxy-benzoique, méthane-sulfonique, éthane-sulfonique, hydroxy-éthane-sulfonique, benzène-sulfonique, p-toluène-sulfonique, naphtalène-sulfonique ou sulfaniliqueO Les peptides obtenus conformément au procédé peuvent être utilisés sous la forme de préparations pharmaceutiques0 Ces dernières renferment les peptides en mélange avec une matière de support pharmaceutique, organique ou minérale, convenant pour l'application orale, Pour la formation de cette matière de support, on envisage des substances ne réagissant pas sur les polypeptides, comme par exemple la gélatine, le lactose, l'amidon, la cellulose, par exemple le produit dénommé "Avicel" (cellulose microcristal line) et des dérivés-de la cellulose, comme la carboxyméthyl cellulose, la méthyl-cellulose ou l'éthyl-cellulose, le talc, le stéarate de magnésium , des gonÜes, des poly-alcoylène-glycols, l'eau, des mono-alcools ou des poly-alcools, comme l'éthanol, l'isopropanol, le glycérol, l'hexitol, des huiles végétales ou d'autres esters d'acides gras comme l'huile d'arachides, l'huile de graines de coton, l'huile d'amande, l'huile d'olive, l'huile de ricin, 1'oléate d'éthyle, le myristate d'isopropyle, le palmitate d'isopropyle, le produit dénommé "Cetiol V" (esters oléiques d'alcools gras liquides), le produit dénommé "Eliglyol" de chez "Labrafac" (mélange de triglycérides d'acides gras comportant de 8 à 12 atomes de carbone), le produit dénommé "Labrafil M 2735" ou le produit dénommé "Labrafac WL 1219" (mélanges de glycérol et d'éthers polyoxy-éthyléniques acides gras)le produit dénommé "Arlacel" (ester gras du sorbitan), le produit dénommé "Tween" (mono-oléate de polyoxy-ét-hylène-sorbitan) ou d'autres excipients connus, Les préparations pharmaceutiques peuvent se présenter, par exemple, à l'état de comprimés, de dragées ou de capsules, ou sous forme liquide à l'état de solutions, de suspensions ou d'émulsions0 Le cas échéant, elles sont stérilisées et/ou renferment des substances auxiliaires telles que des agents de conservation, de stabilisation, des agents mouillants ou émulsionnants. Elles peuvent aussi renfermer encore d'autres substances thérapeutiquement précieuses. Les préparations pharmaceutiques renferment, par exemple, de 0,5 à 50 mg du peptide pour l'application orale, par exemple une ou plusieurs fois par jour. L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs qui suivent, dans lesquels les températures sont indiquées en degrés Gelsius. Dans la chromatographie en couche mince, on utilise les systèmes suivants Système 40 : mélange (40 : 40 : 20) de n-butanol, d'éthanol et d'eau0 Système 43A : mélange (100 : 40 : 10) d'alcool amylique ter tiaire, d'isopropanol et d'eau. Système 43C : mélange (51 : 21 : 28) d'alcool amylique ter tiaire, d'isopropanol et d'eau0 Système 43E : mélange (32 : 32 : 36) d'alcool amylique ter tiaire, d'isopropanol et d'eau. Système 52 : mélange (75 : 7,5 o 21) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau, Système 52A z mélange (67 : 10 : 23) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau Système 87 : mélange (77 .: 4 : 19) d'isopropanol, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 89 : mélange (72 : 24 : 4) d'acétate d'éthyle, d'acétone et d'eau0 Système 96 : mélange (67 : 10 t 23) de butanol secondaire, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 100 : mélange (62 : 21 : 6 : 11) d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 101 : mélange (38 : 24 : 8: 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. Système lOlA : mélange (42 : 24 : 4 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. Système lOlB : mélange (40 : 24 : 6 o 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 102A : mélange (50 : 30 : 10 : 10) d'acétate d'éthyle, de méthyl-éthyl-cétone, d'acide formique Système 102E : mélange (50 : 30 : 10 : 10) d'acétate d'éthyle de méthyl-éthyl-cétone, d'acide acétique glacial et d'eauO Système 104 : mélange (41 : 41 :18) de chloroforme, de méthanol et d'une solution aqueuse à 17 % d'ammoniac c Système 111A : mélange (42 : 24 : 4 : 30) de n-but-anol, de pyridine, d'ammoniac à 26 Vo et d'eau. Système lllB : mélange (40 : 24 o 6 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'ammoniac à 26 , et d'eau Système 111 : mélange (38 : 24 : 8 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'ammoniac à 26 % et d'eau. Système 115 : mélange (63 : 21 : 10 : 6) d'acétate d'éthyle, de pyridine, d'acide formique et d'eau. Système 121 : mélange (70 : 10 : 20) d'isopropanol, d'ammoniac, à 26 % et d'eau. Système 121A : mélange (85 : 5 : 10) d'isopropanol, d'ammoniac à 26 % et d'eau. BOC = tertio-butyloxy-carbonyle, tBu = tertio-butyle Ac = acétyle EXEMPLE 1 Acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH Tout en refroidissant à la glace, on dissout, dans 7 ml d'acide trifluoracétique à 90 %, 144 mg d'acétyl-D-Sér-Dyr-Sér- Mét-Glu(OtBu)-HIs-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOOC) Lys(BOC)-Lys (BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val)-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu et laisse reposer pendant une heure et demie à la température ambiante sous atmosphère d'azote.Tout en refroidissant bien, on ajoute ensuite 30 ml d'éther exempt de peroxyde, sépare par filtration le produit qui a précipité et le lave à l'éther. On dissout le résidu blanc dans 10 ml d'eau et pour transformer en acétate fait passer à travers une colonne (1,6 cm, 15 cm) d'un échangeur d'ions ("Dowez 2-X 8", forme acétate). On lyophilise l'éluat suivi à laide dUum contrôle UV et obtient 114 mg d'une poudre blanche, La préparation s'avère unitaire dans un chromatogramme an couche mince et présente les valeurs de Rf suivantes Sur le l'oxyde d'aluminiu, (firme Camag, avec une addition de 8 % de sulfate de calcium), la valeur de Rf est de 0,26 dans le système 5?. A, de 0,53 dans le système 101, de 0,31 dans le système lOlA et de 0,46 dans le système 104. Dans le spectre ultra-violet, dans une solution décinormale d'hydroxyde de sodium, le produit présente les maxima suivants #max = 283 m;i (s = 2 650) 290 mu (8 = 3 700). Dans une électrophorèse sur papier (Schleicher et Schüll 2043 , une heure, 2.00 volts) à un pH de 1,9, la substance migre de 2,5 cm en direction de la cathode0 La matière de départ peut être préparée comme suit : 1) AcOH-H-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 Dans 32 ml d'une solution glacée d'acide trifluoracétique à 90 %, on dissout 4,0 g de BOC-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 et laisse reposer pendant 30 minutes à la température ambiante0 Par dilution répétée avec de l'eau, tout en refroidissant bien et en concentrant sur l'évaporateur rotatif, on élimine l'acide trifluoracétique0 On dissout le résidu obtenu dans 20 ml d'eau et. en vue d'échanger le trifluoracétate contre des ions acétate, laisse la solution s'écouler à travers une colonne (2,6 cm, 40 cm) d'un échangeur d'ions fortement basique sous la forme acétate ("Dowex 2 - X 8"), puis élue avec de l'eaux On suit l'éluat sur un analyseur W en continu, puis combine les fractions renfermant le produit et lyophilise0 On obtient 3,4 g d'un lyophilisat brun amorphe qui présente, dans un chromatogramme en couche mince, les valeurs de Rf suivantes sur du gel de silice R = 0,29 dans le système 40 Rf = 0,64 dans le système 101 Rf = 0,19 dans le système 52 2) Acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 Dans 190 ml de pyridine absolue, on dissout 3,3 g de AcOH-H-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 et ajoute 1,60 g g d'acétate de 4-nitrophényle dans 45 ml de pyridine.On ajoute encore à cette solution 1,26 ml de triéthylamine et laisse reposer à 240 pendant 25 heures0 On sépare ensuite sous vide la pyridine par essorage sur l'évaporateur rotatif, secoue le résidu à trois reprises avec chaque fois 100 ml d'éther et élimine celui-ci par filtration0 "e produitpeut êtrepréparé à l'état pur par recristallisation dans un mélange d'éthanol et d'eau (8 : 1) ou dans un mélange (9 4 1) d'acétonitrile et d'eau. Il présente dans un chromatogramme en couche mince les valeurs de Rf suivantes sur du gel de silice Rf = 0,38 dans le système 40, Rf = 0,69 dans le système 101, Rf = 0,38 dans le système 52e 3) Acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Pré-Arg-Trp-Gly-OH Dans 23 ml de diméthylformamide absolu, on refroidit, à - 150, 2,80 g (5,1 m.moles) d'acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2. Tout en agitant bien, on ajoute au tout 4,50 ml d'une solution 2,6-normal d'acide chlorhydrique dans l'acétate d'éthyle (11,7 m.moles) et ensuite 0,65 ml (5,6 m.moles) de nitrite de tertio butyle dans 10 ml d'acétate d'éthyle, puis laisse réagir pendant 10 minutes à une température de - 13 à -260. On ajoute ensuite au tout goutte-à-goutte 1,6 ml (11,6 m.moles) de triéthylamine et filtre toute la solution à travers un entonnoir filtrant en verre G-3, dans une solution froide préparée interméediairement au préalable (- 160) de 3,66 g (3,7 m. moles) de H-Glu(OtBu)-His Phé-Arg-Trp-Gly-OH et de 0,5 ml de triéthylamine dans 115 ml de diméthylformamide0 On agite ensuite pendant une heure en refr@@@ dissant avec un mélange de glace et de chlorure de sodium et place ensuite pendant une nuit en glacière (2 - 5 ). Le lendemain matin, on sépare le précipité par filtration, le lave avec de pe- tites portions d'un mélange froid de diméthylformamide et d'eam, puis sèche0 On purifie le produit brut par recristallisation dans un mélange d'acétonitrile et d'eau (L : 1).Dans un chromatogramme en couche mince, le produit pur présente les valeurs de R f sui vantes sur du gel de silice R f 0,16 dans le système 52, Rf = = 0,55 dans le système 101, Rf = 0,05 dans le système 100e 4) Acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-PHé-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC) Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC) Val-Tyr-Pro-OtBu Tout en ajoutant, 0,18 ml d'une solution aqueuse normale d'acide chlorhydrique, on met en suspension, dans un mélange de 4 ml de pyridine absolue et de 0,2 ml d'eau, 311 mg de H-Lys(BOC) Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BDC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC) Val-Tyr-Pro-OtBu conjointement avec 264 mg d'acétyl-D-Sér-Tyr Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-PHé-Arg-Try-Gly-OH. On ajoute au tout 93 mg de dicycolhexyl-carbodiimide et agite à une température de bain de 500. Au bout de quatre heures, on ajoute à nouveau 93 mg de dicyclohexyl-carbodiimide. On agite à 500 pendant une nuit, place ensuite en glacière et sépare par filtration la dicyclohexylurée qui a précipité, A partir du filtrat, on obtient le produit sous la forme d'une poudre blanche amorphe, en le faisant précipiter avec beaucoup de benzène, On peut purifier le produit par une chromatographie en colonne sur gel de silice : on dissout 258 mg du produit brut dans un mélange (9 : 1) de chloroforme et de méthanol et le fait passer sur une colonne (1,4 cm; 33 cm) de gel de silice, puis élue avec un mélange de chloroforme et de méthanol d'une teneur croissante en méthanol0 Pour un rapport du mélange solvant de ( 1 : 1) environ, la substance quitte la colonne0 On réunit les fractions pures et les concentre, Dans un chromatogramme en couche mince, la substance présente les valeurs de Rf suivantes sur du gel de silice Rf = 0,62 dans le système 52 A Rf = 041 dans le système 100 sur de l'oxyde d'aluminium Rf = 0,84 dans le système 52Ao EXEMPLE 2 Acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-HIs-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Giy-Lys -Lys -Lys -Lys NH2 Tout en agitant, on dissout, dans 20 ml d'acide trifluoracétique à 90 %, 840 mg d'acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-(OtBu) His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) Bys(BOC)-NH2, puis agite la solution, sous atmosphère d'azote, pendant 45 minutes encore à la température ambiante0 Tout an refroidissant et en agitant, on ajoute ensuite, au cours de 10 minutes, 120 ml d'éther exempt de peroxyde et sépare par filtration le trifluoracétate de l'amide octapeptidique qui s'est séparé, le lave à l'éther et le sèche sous vide, On dissout alors le produit incolore dans 15 ml d'eau, verse (pour transformer en acétate) lentement dans une colonne remplie de 20 ml de Amberlite IR-45" (forme acétate) et élue à l'eau0 près avoir lyophilisé l'éluat, on obtient 680 mg d'acétyl-D-Sér1-Lys17,18-ss1-18-corticotropine- Lys18-amide chromatographiquement pur sous la forme du pentaacétate0 Le produit présente un pouvoir rotatoire spécifique [a]20U = - 59 # 2 (c = 1 dans l'acide acétique à 1%) et, en ultra-violet, il présente des maxima à 283 et 290 m (dans l'acide chlorhydrique décinormal).Dans un chromatogramme en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium, on obtient les valeurs de Rf suivantes 0,1 dans le système 52A 0,4 dans le système 101 0,25 dans le système lOlB. La matière de départ peut être préparée comme suit : Tout en chauffant légèrement, on dissout un gramme de N-acétyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Ph6-Arg-Trp-Gly-OH dans un mélange de 50 ml de diméthylformamide et de 0,12 ml d'acide chlo rhydrique 6,5 normal, puie ajoute une solution de 1ss2 g de H Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 (BSM 5849 M) dans 5 ml de diméthylformamide0 Après avoir ajoute 21,5 mg de dicyclohexyl-carbodiimide et 160 mg de N-hydroxy succinimide, on agite le mélange réactionnel pendant 20 heures à 450 et aboute ensuite 250 ml éther. On sépare par filtrat le produit réactionnel qui s'est formé, le lave à l'éther et 16 sèche sous vide.Pour purifier, on soumet le produit brut à une répartition de Craig dans un système solvant constitué par un mélange (10 : 3 o 7 : 4) de méthanol, d'un tampon, de chloroformep et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant constitué par un mélange de 57 ml d'acide acétique glacial et de 7,7 g d'acétate d'ammonium dans 750 mi d'cau, avec des volumes de phase de 20 ml chacune Après 370 stades au total, on obtient à partir des éléments 178 à 195 (rmax = 186 ;K = 1,02) le dérivé octadécapeptituque sous la forme dUune poudre amorphe qui s'avère unitaire dans un chiomatogramme en couche mince, en concentrant à sec et en éliminant l'acétate d'ammonium par sublimation à 400 sous un vide poussé, Le produit présente les valeurs de R suivantes sur du gel de silice Rf = 0,3 dans le système 52 R f = 0,25 dans le système 190 sur de l'oxyde d'aluminium Rf = 0,45 dans le système 115. EXEIPLE 3 Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2 (acétate). On dissout à 00, dans 20 ml d'acide trifluoracétique à 70 % 268 mg de myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) Nh2 et le laisse reposer pendant 16 heures en vase clos à la température ambiante. On dilue la charge dans 200 ml d'éther fra1che- ment purifié, exempt de peroxyde et refroidit à - 160, sépare par filtration le précipité blanc et le lave à l'éther. On dissout ce trifluoracétate de l'amide octa-décapeptidique dans de-l'acide acétique à 1 % et transforme en acétate sur une colonne (22 cm, 10 mm) de "Amberlite C-45" (échangeur d'ions faiblement basique sous la forme acétate)0 On lyophilise ensuite l'éluat qui est contrôlé, quant à la substance qu'il renferme, à l'aide d'un analyseur continu en ultra-violet.Il seforme 238 mg d'un lyophilysat blanc volumineux0 On chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium (Camag) R = 0,40 dans le système 52 = 0,40 dans le système lOlA Rf = 0,50 dans le système 101B Rf = 0,27 dans le système 111B Rf = 0,34 dans le système lllC. W (solution décinormale de soude) @max = 283 m (s = 6 500), = 290 m (s = 20300)o Dans une électrophorèse sur des plaques finies de cellulose :'Selecta" (Schleicher et Schüll N 1440), le composé migre, pour une tension de 200 volts, des quantités suivantes vers la cathode au cours d'une heure à un pH de 1,9 tampon à l'acide acétique et à l'acide formique) 5,6 cm à un pH de 6,4 (tampon à l'acétate de pyridine) avec formation @@ d'une queue à un pH de 9,1 (tampon au carbonate d'ammonium) avec formation d'une queue 3,4 cmO La matière de départ peut être préparée comme suit 1) Myristoyl-D-Sér-OCH3 A 10,0 g de chlorhydrate de l'ester méthylique de la D-sérine (64,5 m.moles) dans 50 ml de diméthylformamide, on ajoute en refroidissant 20,7 g (84 m.moles) de chlorure de myristyle et 18,8 ml (169 m.moles) de N-méthylmorpholine, chaque fois en solution dans 15 ml de diméthylformamide, ce qui fait qu'il se forme une suspension épaisse que l'on dilue avec 50 autres millilitres de diméthylformamide et agite pendant une nuit à la température ambiante. On reprend ensuite dans beaucoup de chloroforme et secoue à trois reprises avec de l'acide chlorhydrique dilué, à trois reprises avec une solution diluée de carbonate de sodium et à cinq reprises avec une solution saturée de chlorure de sodium, sèche sur du sulfate de sodium et concentrez On dissout la substance dans 30 ml d'éthanol et y ajoute 600 ml d'un mélange (1 : 3) d'éther et d'éther de pétrole, puis laisse reposer en glacière pendant une nuit0 On sépare par filtration le produit qui a précipité et le sèche0 Il fond à 75 - 76 et présente un pouvoir rotatoire spécifique [a]20 = + 8 # 0,5 (c = 2 dans l'éthanol). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, on obtient les valeurs de Rf suivantes 0,68 dans le système 430 0,65 dans le système 89 0,72 dans le système 52 0,86 dans le système 102E. 2) Hydrazide de myristoyl-D-Sérine Dans 250 ml de méthanol à 00, on mélange 25,0 g (76 m.moles) de myristoyl-D-Sér-OCE3 avec 40 ml d'hydrate d'hydrazine et laisse reposer pendant 17 heures à la température ambiante0 On sépare le produit par filtration, le lave à l'éther, le fait brièvement bouillir dans 200 ml de méthanol et, après refroidissement à la température ambiante, filtre et sèche0 On obtient de petites aiguilles fondant à 169 - 1710e Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rf sont de 0,63 dans le système 52, de 0,75 dans le système 100 et de 0,66 dans le système 96 ; dans un mélange de chloroforme et de méthanol (1 : 1), la valeur de Rf est de 0,580 3)Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-OCH3 Dans 40 ml de diméthylformamide, on met en suspension 7,67 g (23,3 m.moles) d'hydrazide finement pulvérisé de myristoyl- D-Sérine et agite sous atmosphère d'azote, à -390, avec 19,4 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans du dioxanne (58,2 m.moles)O On dilue la suspension épaisse avec 20 mol de diméthylformamide et ajoute, à - 200, 1,99 g de nitrite de sodium dissous dans 4 ml d'eau On agite pendant 30 minutes à une température de - 20 à - 100, dilue alors peu à peu avec 50 ml de chloroforme et ajoute ensuite 5,0 ml de triéthylamine et 8,67 g (20,9 m.moles) de H-Tyr-Sér-Mét-OCH# sous forme solide On refroidit alors suffisamment pour que la température ne monte jamais audessus de - 150. On ajoute ensuite encore 3,0 ml de triéthylamine et agite pendant une heure à basse température, pendant deux heures à 0 et pendant dix sept heures à 240e Le produit est obtenu en filtrant le mélange réactionnel, en concentrant le filtrat sous vide et en secouant, dans beaucoup d'acétate d'éthyle, à plusieurs reprises avec une solution diluée d'acide chlorhydrique, avec une solution diluée de carbonate de sodium et avec une solution semisaturée de chlorure de sodiums On concentre la solution obtenue à l'acétate d'éthyle et traite le produit brut dans de méthanol par du charbon actif. A partir de la solution éthanolique, le dérivé tétrapeptidique se sépare sous forme pure, après un repos prolongé en glacière. I1 fond à 165 - 1680 en se décomposant et présente un pouvoir rotatoire spécifique [a]D 20 = - 120 + 0,5 (c = 2 dans le diméthylformamide)0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,75 dans le système 43C, de 0,86 dans le système 100 et de 0,73 dans le système 121A. 4) Hydrazide de myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét Dans 100 ml de méthanol, on dissout 4,88 g de myristoyl D-Sér-Tyr-Sér-Mét-OCH3 (6,86 m0 moles) et laisse reposer à 0 en glacière pendant 48 heures avec 10 ml d'hydrate d'hydrazine. I1 se forme alors un volumineux précipité de l'hydrazide. On le sépare par filtration, le lave au méthanol et le recristallise ensuite dans 450 mî de méthanol Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,49 dans le système 43A, de 0,51 dans le système 102E et de 0,70 dans le système 96. 5) Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH Dans 8 ml de diméthylformamide absolu, on met en suspension 899 mg (1,26 m.moles) d'hydrazide finement pulvérisé de myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét- , refroidit et ajoute 1,16 ml d'une solution 3,0-normale (3,48 m.moles) d'acide chlorhydrique dans le dioxanne A la solution qui est alors devenue limpides on ajoute, à 220 > 0,24 mi (2,0 m.moles) de nitrite de tertio-butyle et agite pendant 15 minutes ce qui fait que la température atteint - 160* Après avoir à nouveau refroidi, on ajoute 0,25 ml de triéthylamine, filtre et verse le filtrat dans une solution préalablement refroidie de 1,13 g (1,14 m.mole) de H-Clu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH et de 0,16 mi de triéthylamine dans 26 ml de diméthylformamide0 On agite le mélange réactionnel pendant une demi-heure sous at atmosphère d'azote à une température de - 100 environ, en ajoutant en 3 portions 0,30 mi de triéthylamine pour que le pH soit de 8 environ. On agite ensuite pendant 24 heures encore à la température ambiante sépare par filtration, après refroidissement en glacière, le produit qui a précipité, le lave à l'acétonitrile, avec un mélange (1 : 1) d'acétonitrile et d'eau et avec de l'eau, puis le sèche sur du pentoxyde de phosphore sous un vide poussé. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice Rf = 0,51 dans le système 43E R f = 0,69 dans le système 87 Rf = 0,48 dans le système 96 Rf = 0,63 dans le système 101 Rf = 0,70 dans le système 1210 6)Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 Dans 9 ml de diméthylformamide, on agite sous atmosphère d'azote 1,23g (0,78 m.mole) de myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét~ Glu(OtBh)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH finement pulvérisé avec 0,26 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne (0,78 m.mole).On ajoute au tout, sous forme solide, 1,21 g (0,85 m.mole) de H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)- Lys(BOC)-NH2 et 118 mg de N-hydroxy-succinimideO On ajoute à la température ambiante 220 mg de dicyclohexyl-carbodiimide (1,06 m.mole) et agite pendant 21 heures à une température de bain de 35 après avoir à nouveau ajouté 9 mi de diméthylformamide. La suspension passe peu à peu en solution et un peu de dicyclohexylurée commence à se séparer sous forme cristalline. On introduit ensuite la totalité du mélange réactionnel dans 600 ml d'un mélange (1 : 1) purifié d'éther et de toluène, filtre et sèche le résidu sous un vide poussé.On soumet le produit brut ainsi obtenu, à savoir 35 g, à une répartition multiplicative en 250 stades dans un système constitué par un mélange de méthanol, d'un tampon à 11 acétate d'ammonium, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone (10 : 3 7 : 4)0 Le myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg- Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) NH2 se trouve alors dans les récipients 38 à 60 (r max = 46, K = 0,22, volume des phases 20 ml) et est isolé avec une bonne pureté.Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice; Rf = 0,57 dans le système 52A Rf = 0,54 dans le système 100 Rf = 0,43 dans le système 102A Rf = 0,50 dans le système 520 EXEMPLE 4 Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pre-OH On recouvre 505 mg de myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-18Iét- Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys-BOC)-Lys(BOC) Lys (BOC)-Lys(BOC) -Pro-Val-Lys(BOC) -Val-Tyr-Pro-OtBu avec 20 ml d'acide trifluoracétique à 90 % glacé, dissout et laisse reposer pendant deux heures à la température ambiante.On verse ensuit la charge dans 400 ml d'éther absolu, exempt de peroxyde, qui est refroidi avec un mélange de glace et de chlorure de sodium, On filtre le précipité, le lave à l'éther et le dissout dans peu d'acide acétique dilué. On transforme cette solution du trifluoracétate du myristeyl-tétracosapeptide sur une colonne de "Amberlite CG-45" (forme acétate, colonne : 14 mm, 23 cm) en une solution de l'acétate correspondant et lyophilise l'éluat0 On obtiens 413 mg d'un lyophilisat blanc volumineux, Dans un chromatogramme en couche mince sur "Alox" (Camag) Rf = 0,49 dans le système lOlB Rf = 0,58 dans le système 52A Rf = 0,38 dans le système lllBo La matière de départ peut etre préparée comme suit :: Myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC) Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC) Val-Tyr-Pro-OtBu Dans 10 ml de diméthylformamide absolu, on agite, sou atmosphère d'azote, 1,39 g (0,89 m.mole) de myristoyl-D-Sér-Tyr Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH avec 0,30 ml d'une sol tion 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne (0,9 m.mole).On ajoute à la suspension 2,00 g (0,89 m.mole) de H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu, en solution dans 10 ml de diméthylformamide et 175 mg de H-hydroi-succinimide, puis 247 mg Ca dicyclohexyl carbodiimide dans 7 ml de diméthylformamide0 On agite pendant 22 heures à une température de 35 à 40 , ce qui faiffi que de la dicyclohexulurée se sépare de la solution. On sépare cette dernière par filtration à la température ambiante et verse le filtrat dans 40 mi d'éther exempt de peroxyde0 Il se forme alors un fin précipité que l'on isole et que l'on sèche.On soumet cc produit brut à une répartition à contre-courant dans un système constitue par un mélange (10 : 3 : 7 : ) de méthanol, d'un tampon, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone, le tampon étant constitué par 19 g d'acétate d'ammonium et 29 ml d'acide acétique glacial complétés à un litre avec de l'eau. Après 1.200 stades de répartition, le myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mé Glu(OtBu)-His-Ph6-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC) Lys(BOC)-Lys(BOC) -Lys(BOC) -Pro-Val-Lys (BOC) -Val-Tyr-Pro-OtBu se trouve dans les récipients 72 à 95 (KsV 0,08) et il est isolé en concentrant la solution et en éliminant l'acétate d'ammonium à 400 sous un vide poussé. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, dans un mélange de chloroforme et de méthanol (75 : 25), la valeur de Rf est de 0,61 ; elle est de 0,63 dans le système 52A et de 0,63 dans le système 100. EXEMPLE 5 Valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-His-Ph6-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2 (acétate)0 Dans 25 ml d'acide trifluoracétique glacé, à 70 %, on dissout 420 mg de valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mé-Glu(OtBu)-His-Phé- Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) Lys(BOC)-NH2 et laisse reposer pendant 15 heures en vase clos à la température ambiante. On verse ensuite la solution limpide dans 300 ml d'éther fraîchement purifié, exempt de peroxyde, qui est refroidi à - 160, sépare par filtration le précipité blane et le lave à l'éther On dissout ce trifluoracétate de l'amide octadécapeptidique dans peu d'acide acétique à 1 % et transforme en acétate sur une colonne (23 cm, 14 mm) de "Amberlite CG-45" (échangeur d'ions faiblement basique sous la forme acétate). On lyophilise l'éluat. On obtient 738 mg d1un volumineux lyophilisat blanc. Chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium (Camag) Rf = 0,22 dans le système 52 Rf = 0,25 dans le système 101A Rf = 0,45 dans le système lOlB R f 0,74 dans le système 104 Rf = 0,30 dans le système 111A. UV (solution décinormale de soude) max. = 282 m ( = 6.750) 289 m (8 = 6,600). Dans une électrophorèse sur des plaques finies de cellulose "Selecta" (Schleicher et Schüll N 1440), le composé migre vers la cathode, pour une tension de 200 volts, au cours d'une heure, des quantités suivantes à un pH de 1,9 (tampon à l'acide acétique et à l'acide formique) 6,2 cm à un pH de 6,4 (tampon à l'acétate de pyridine) 5,2 cm à un pH de 9,1 (tampon au carbonate d'ammonium) 3,5 cm Sur une feuille d'acétate de cellulose ("Cellogel"), le composé migre au cours de 30 minutes de 6,9 cm vers la cathode, pour une tension de 280 volts et à un pH de 1,9 (tampon à l'acide acétique et à l'acide formique). La matière de départ peut être préparée comme suit 1) Valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH Ce dérivé décapeptidique est préparé d'une manière tout à fait analogue au myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His- Phé-Arg-Trp-Gly-OH décrit dans l'exemple 3e Les produits intermédiaires présentent-les caractéristiques suivantes s Valéryl-D-Sér-OCH3: Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silices la valeur de Rf est de Q,70 dans le système 43C, de 0,66 dans le système 89, de 0,73 dans le système 102E et de 0,62 dans le système 52. Dans un système (1 : 1) de chloroforme et de méthanol, la valeur de a est de 0,79e Valéryl-D-Sér-NH-NH2 Le produit fond à 184 - 1850 et présente un pouvoir rotatoire spécifique COI fflDO = + 220 # 10 (c = 1 dans le méthanol)0 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,48 dans le système 43C, de 0,27 dans le système 89, de 0,56 dans le système 102E et de 0,48 dans le système 52. Dans un mélange (1 : 1) de chloroforme et de méthanol, la valeur de Rf est de 0,440 Valéryl-D-Sér-yr-Sér-Iiét-OCH3 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de R f est de 0,70 dans le système 100e Valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,55 dans le système 96, de 0,51 dans le système 52A, de 0,52 dans le système 100 et de 0,66 dans le système lOlÂe Valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,47 dans le système 43E, de 0,47 dans le système 96, de 0,61 dans le système 101 et de 0,70 dans le système 121. 2)Valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) Lys(BOC)-NH2 Dans 10 ml de diméthylformamide, on met en suspension 1,36 g (0,95 n. mole) de valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His- Phé-Arg-Trp-Gly-OH et agite sous atmosphète d'azote, à la température ambiante, avec 0,33 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne (0299 m.mole). La substance insoluble passe alors en majeure partie en solution. On ajoute alors 1,40 g (0,99 m.mole) de H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)- Lys(30C)-NH2, agite pendant 10 minutes et ajoute ensuite, sous forme solide, 202 mg de N-hydroxy-succinimide et 284 mg de dicyclohexyl-carbodiimide.Après avoir dilué avec 10 ml diméthyl formamide, on agite pendant 23 heures à une température de bain de 35 à 40 . Pendant ce temps, il se sépare sous forme cristalline un peu de dicyclohexylurée. On la sépare par filtration à la température ambiante et lave à trois reprises avec deux millilitres de diméthylformamide. On introduit le filtrat dans 200 ml de toluène et filtre le précipité, puis lave avec du toluène et de l'éther.Ce produit brut, à savoir 2,8 g, est purifié par un partage à contre-courant dans un système constitué par du méthano par un tampon à l'acétate d'ammonium, par du chloroforme et pa du tétrachlorure de carbone (10 : 3 :7 4). Au bout de 200 stades, le valéryl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(CtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly Lys(BOC)-Pro-Val-Gly Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH@ se trouve dans les récipients 50 à 70 (rmax. = 59, K = 0,42, volume des phases 20 ml) et il est isolé avec une bonne poureté. Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,49 dans le système 52A, de 0,44 dans le système 100 et de 0,39 dans le système 102A. EXEMPLE 6 Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu-His-Phé-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-NH2 (acétate) Dans 30 ml d'acide trifluoracétique glacé, à 70 %, & dissout 379 mg de pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé. Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) Lys(BOC)-NH2 et conserve pendant 18 heures à la température a- biante, en vase close On introduit alors la solution limpide C' 300 ml d'éther absolu, exempt de peroxyde, qui est refroidi à - 150 filtre le précipité blanc, le lave à l'éther et le dis@@t dans un peu d'acide acétique dilué, puis fait passer à traver colonne (25 cm, 16 mm) de "Amberlite CG-45" (échangeur d'ions- faiblement basique sous la forme acétate). On recueille l'élu@@ sous contrôle ultra-violet et lyophilise, On obtient 329 mg de volumineux lyophilisat blanc0 Chromatographie en couche mince sur de l'oxyde d'aluminium (Camag) Rf = 0,42 dans le système 52A Rf = 0,68 dans le système 96 Rf = 0,71 dans le système 101 Rf = 0a53 dans le système lOlB Rf = 0,43 dans le système 1110 UV (solution décinormale de soude) #mex. =282 m (8 = 6,400), 290 m (8 = 6,200). Dans une électrophorèse sur des plaques finies de cellulose "Selecta" (Schleicher et Schüll N 1440) et pour une tension de 200 volts, le composé migre au cours d'une heure vers la cathode des quantités suivantes à un pH de 1,9 (tampon à l'acide acétique et à l'acide formique) 5,9.cm à un pH de 6,4 (tampon à l'acétate de pyridine) 5,1 cm à un pH de 9,1 (tampon au carbonate d'ammonium) avec formation 3,2 cm d'une queue La matiere de départ peut être préparée comme suit :: 1) Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Nét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH Ce dérivé décapeptidique est préparé d'une manière tout à fait analogue au myristoyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)- His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH décrit dans l'exemple 3e Les produits intermédiaires présentent les caractéristiques suivantes Pélargonyl-1)-Sér-CGH3 Le composé fond à 48 - 490 et présente un pouvoir rotatoire spécifique = + 11 3 0,55 (c = 2 dans l'éthanol). Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,83 dans le système 102E et de 0,69 dans le système 52 dans un système de chloroforme et de méthanol (1 : 1), la valeur de Rf est de 0,830 Pélargonyl-D-Sér-NH-NH2 : Le composé fond à 170 - 1720 dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur 'de Rf est de 0,69 dans le système 102E, de 0 51 dans le système 52 et de 0,63 dans le système 100 ; dans un mélange de chloroforme et de méthanol (1 : 1), la valeur de Rf est de 0,50. Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-OCH3 Le composé fond à 154 - 1590 en se décomposant et présente un pouvoir rotatoire spécifique = - 13 # 0,5 (c = 2 dans le diméthylformamide). dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,70 dans le système 43E, de 0,87 dans le système 100 et de 0,80 dans le système 52Ao Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-NH-NH2 Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,70 dans le système 52A, de 0,62 dans le système 43E et de 0,56 dans le système 100. Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly-OH Dans un chromatogramme en couche mince sur du gel de silice, la valeur de Rf est de 0,45 dans le système 43E, de 0,34 dans le système 52A et de 0,15 dans le système 100. 2)Pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)-His-Phé-Arg-Trp-Gly Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 Dans 11 ml de diméthylformamide, on met an suspension 1,50 g (1,0 m.mole) de pélargonyl-D-Sér-Tyr-Sér-Mét)-Glu(OtBu) His-Phé-Arg-Tip-Gly-OH et agite sous atmosphère d'azote avec 0,34 ml d'une solution 3,0-normale d'acide chlorhydrique dans le dioxanne (1,0 m.mole).On ajoute successivement sous forme solide: 54 g (1,1 m.mole) de H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC) Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2, 150 mg ae N-hydroxy-succinimide et 278 mg de dicyclohexyl-carbodiimide. après avoir dilué avec 12 mi de diméthylformamide, on agite pendant 27 heures à une température de bain de 35 à 40 , introduit la suspension dans 750 ml d'un mélange (1 : 1) d'éther et de toluène, et sépare le précipité par filtration, puis le sèche sous un vide poussé.Ce produit brut, à savoir 229 g? est purifié dans une répartition à contrecourant dans un système constitué par un mélange (10 : 3 : 7* 4) de méthanol9 d'un tampon à l'acétate d'ammonium, de chloroforme et de tétrachlorure de carbone. Au bout de 250 stades, le pélargonyl-D-S6r-Tyr-Sér-Mét-Glu(OtBu)His-Phé-Arg-Trp-Lys(BOC) Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 se trouve dans les récipients 51-à 76 (K = 0a33 ; rmax. = 62)o L'amide octadécapeptidique protégé présente, dans une chromatographie en couche mince sur du gel de silice, les valeurs de Rr suivantes: 0,48 dans le système 52S 0,46 dans le système 100e REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation de peptides à effet adrénocorticotrope, de leurs amides et sels d'addition avec des acides, caractérisé par le fait que 1) dans des peptides à effet ACTH, qui présentent comme premier amino-acide un acide aminé avec la configuration D.et dans lesquels le groupe a-aminogène est acylé et dans lesquels au moins les groupes aminogènes des chaînes latérales et les groupes carboxyle terminaux et les groupes carboxyle des channes latérales sont protégés, on élimine les groupes de protection, ou que 2) on acyle sur l'atome d'azote a des peptides à effet AC2X présentant comme premier amino-acide un acide aminé avec la configuration D et, si on le désire, quton transforme les composés obtenus en leurs sels d'addition avec des acides0 2e Les peptides à effet adrénocorticotrope qui présentent, comme premier amino-acide un acide aminé avec la configuration D et dont le groupe a-aminogène est acylé, leurs amides et sels d'addition aec des acides. Ues peptides à effet adrénocorticotrope qui présentent, comme premier amino-acide, un acide aminé présentant la configuration D et dont le groupe a-aminogène est substitué par un reste alcanoyle comportant jusqu'à 30 atomes de carbone, leurs amides et sels d'addition avec des acides0 4e Les peptides à effet adrénocorticotrope qui présentent, comme premier amino-acide, un acide aminé avec la configuration D et dont le groupe a-aminogène est substitué par un reste acétyle, leurs amides et leurs sels d'addition avec des acides. 5 . Les peptides ou amides peptidiques e -acylés comportant de 18 à28 amino-acides de la séquence iV-terminale des corticotropines naturelles où toutefois le premier amino-acide est remplacé par de la D-sérine, de la D-alanine, de la D-proline ou la D-thréonine et/ou, le cas échéant, le deuxième est remplacé par de la L-phénylalanine et/ou le troisième est remplacé par de la glycine ou de la L-alanine et/ou le quatrième est remplacé par de la L-valine, par de la B-leucine, par de la L-norvaline, par de la N-norleucine ou par de l'acide L-a-amino-butyrique et/ou le cinquième est remplacé par de la L-glutamine et/ou le onzième ou le 11ème et le 15ème et le 16ème, ou le 11ème et le 15ème au 18ème sont remplacés par de la L-ornithine et/ou le 17ème et 18ème sont remplacés par de la L-ornithine ou de la L-lysine et/ou le 19ème et/ou le 25ème sont remplacés par de la L-valine, et leurs sels d'addition avec des acides. 6. Les peptides ou amides peptidiques Na-acylés comportant de 18 à 25 amino-acides de la séquence N-terminale des corticotropines naturelles, où toutefois la sérine1 est remplacée par de la D-sérine et/ou la méthionine4 est remplacée par de la 5 L-nor-valine ou de la N-nor-leucine et/ou l'acide glutamique est remplacé par de la L-glutamine et/ou l'arginine 17,18 est remplacée par de la L-ornithine ou de la L-lysine, et/ou l'aminoacide en 25 est remplacé par de la L-valine, et leurs sels d'addi- tion avec des acides c e Les peptides ou amides peptidiques N&alpha;;-acylés comportant de 18 à 25 amino-acides de la séquence N-terminale des corticotropines naturelles, où toutefois le premier amine-seide est remplacé par de la D-sérine et/ou le quatrième est remplacé par de la L-nor-leucine et/ou le 17ème et le 18ème sont remplacés par de la L-lysine et/ou le 25ème est remplacé par de la L-vallna, et leurs sels d'addition avec des acides. 8 8. Les composés suivant l'une quelconque des revendica- tions 5 à 7 , dans lesquels le groupe acyle est un: groupe acétyle. 9. La N&alpha;-acétyl-D-Sér1-Lys17,18-ss1-24-corticotropine et ses sels d'addition avec des acides. iGo Le Na-acétyl-D-Sér1-Lys17,18-ss 1-18 ti Lys18-amide et ses sels d'addition avec des acides. llc Les préparations pharmaceutiques renfermant les composés indiqués dans l'une quelconque des revendications 2 à 10.