Brevet FR2042388A1 — publié le 19710212

,15758 2042388 La'présente invention concerne un procédé de préparation d'un"médicament "utile en obstétrique pour empêcher la sensibilisation des mères àRh=négatif contre les érythrocytes Rh-positifs du foetus. A la suite des premiers travaux de R. Finn; C.A. Clarke; 5 W.T.A. Donohoe; R.B. McConnell; P.M. Sheppard; D. Lehane; W. Kulke : Expérimental Studies, Brit. medf. J., l£1486-90; 1961, on utilise 1 'immunoglobuline anti-Rh (D) humaine à grande échelle pour prévenir la sensibilisation des o • • - : S mères à Rh-négatif contre les érythrocytes Rh-positifs" des foetus. L'activité du produit repose sur les anticorps anti-RhQ(D) de concentration suffisante 10 dans 1'immunoglobuline anti-RhQ(D). t'OMS a déjà publié des directives quant à la contenance en mcg d'anticorps anti-D dans ce produit (Editorial ; The Suppression of Rh Immunization by passively Administered Human Immunoglobulin (IgG) Anti-D (Anti-Rl^). Bulletin of World Health Organization. 36:467-74, .1967) . 15 II est possible d'obtenir 1'immunoglobuline anti-RhQ(D) par fractionnement (sels neutres ou alcool) de sérum humain contenant de l'anti-D. D'après les analyses par électrophorèse, les anticorps font partie de la fraction de gamma-globuline du sérum humain : il s'agit ici d'un anticorps contre les antigènes érythrocytaires D (RhQ). 20 II est également possible de fractionner ces gamma-globu- lines comme suit : fraction principale IgG (poids moléculaire 150.000) et fraction IgM (poids moléculaire 1.000.000), IgA, IgD et IgE. L'immunoglobuline antf-RhQ(D) fait partie de la fraction immunoélectrophorétique IgG. Certaines difficultés apparues lors de l'administration de 25 1'immunoglobuline anti-Rh^tD) sont dues au fait que le produit n'est que peu stable, c'est-à-dire que les préparations doivent être utilisées dans un délai de six mois (Cf. Tentative Technical Standards of The National Institutes of Health of December 29, 1967). Les efforts visent une prolongation, en solution concentrée, de la durée de stockage, au moyen d'un 30 stabilisant non antigénique pour l'homme et exempt de tout agent infectieux. Une autre exigence imposée à un produit aussi important est l'assurance qu'il ne sera pas administré à des sujets de Rh-positif. Dans ce but, on utilisait jusqu'alors la méthode de séro-agglutination avec un sérum anti-D. Quand ce test-sérum n'était pas contenu dans l'emballage des immunoglobulines anti-RhQ(D), 35 le médecin traitant devait se le procurer séparément. 70 15758 2 2042388 _. Il est évident qu'une grande simplifie'atioriret'uiïe "grande sé.çuriçé d'emploi du produit seraient apportées, s'il'■ëtrrfït ptiSsibie de procéder^ soi-même,au test d'agglutination au moyen de 1 ' irnitrari6glo"buiine anti-ShQ(D) que contient le produit,, permettant ainsi de rs'assurer de 5 l'innocuité du produit pour le malade. J i On atteint ce but selon l'invention au moyen d'une solution d1 immunoglobuline ,-anti-Rh (D) qui est mélangée à une solution d'albumine humaine préparée ,à partir -de sérum ou placenta en proportions telles que le rapport- immunoglobuline anti^Bh^CD)/albumine soit de 1:2 à 1:10. 10 ...... L'albumine humaine se trouve en solution de 15 à 25%, la meilleure étant de 20%; 1'immunoglobuline anti=RhQ(D) est en solution de 10 à 18%,. la meilleure concentration étant de 16%. Le contenu en substances actives du mélange est dosé de telle sorte qu'il y ait au minimum 100 y, mieux encore 250 %,d'immunoglo- 3 15 buline anti-Bh (D) par.cm , déterminé d'après la méthode radio-immunologique 0 125 d'Erna Rochna & Hughes-Jones : The Use bf Purified I-Labëlled Anti- Globulin in the Détermination of the Number of D Antigen Sites on Red Cells of Différent Phenotypes. Vox Sang., 10:675-86, 1965. La solution d'albumine humaine additionnée contient les 20 stabilisants suivants ' 0,02 mole d'acétyltryptophane 0,„02 mole de caprylate "de sodium. La solution est maintenue pendant 10 heures à 60°C afin d'inactiver le virus séro-hépatitique homologue. 25 L'utilisation du médicament obtenu par le procédé de 11 invention, se fait de telle sorte que 1'immunoglobuline anti-RhQ(D) doit être administrée aux mères négatives au plus tard 72 heures "post partum" ou "post abortum" afin d'éviter le phénomène de sensibilisation consécutif au passage d'érythrocytes D-positifs du foetus dans le système circulatoire 30 maternel» Afin' d'éviter que 1!immunoglobuline anti-ShQ(D) ne soit injectée à une mère positive, ce qui ne manquerait pas d'avoir des conséquences , nocives pour les érythrocytes D-positifs de la mère, il est opportun de s'assurer de l'innocuité de 1 'immunoglobuline anti-RlWD) au chevet du sujet avant de procéder à l'injection du produit. Il faut'donc faire un test au 35 cours duquel une goutte de sang de la patiente sera mélangée à une goutte d'immunoglobuline anti-RhQ(D) sur une plaquette d'analyse. À cet effet, il est possible de prendre la goutte d'immunoglobuline anti-Rho(D)' du flacon 70 15758 3 2042388 prévu pour l'injection avec la seringue. Si le sang du sujet est D-positif, il y aura agglutination qui n'est rendue possible que par la présence d'albumine à une concentration déterminée. La présence d'albumine humaine en solution dans le produit à injecter (immunoglobuline anti=RhQ(D) présente 5 l'avantage de n'avoir pas à utiliser d'autres réactifs, par exemple l'albumine et autres conglutinines, etc. Il est avantageux de pouvoir stocker ce produit assez longtemps sans que celui-ci ne perde son efficacité. Tous les produits d1 immunoglobuline anti-Rho(B) actuellement sur le marché peuvent être 10 stockés pendant un maximum de quelques mois,, tandis que le produit préparé selon l'invention peut être conservé pendant 2 ans sans perte d'anticorps. L'exemple suivant illustre l'invention sans toutefois en limiter la portée. EXEMPLE 15 On dissout une fraction d'immunoglobuline humaine IgG anti- Rh (D) faite d'immunoplasma humain anti-Rh (D) suivant la méthode de frac-: ;.0 - o tionnemenÇ par l'alcool mise au point par Gohn, voir E.L. Cotm et al., J.A. Chemical Society, vol. 68, page 459, 1946, ou J.L. Oncley et al., J.A. Chemical .^Society, vol. 71, page 541, 1949, lyophilisée dans l'eau distillée 2 0 apyrogëne pour obtenir une solution de protéine à 16 grammes %. 2,25% de glycine et 0,3% de chlorure de sodium et du Merthiolate à une concentration de 1;10.00Q y sont ajoutés à pH 7,0. La solution ainsi obtenue est ajustée avec une solution de 16% de sérum-immunoglobuline (fabriqué à partir d'au moins 5.000 donneurs ou placentas) dans une relation telle que la concentra-25 tion en .immunoglobuline I> soit 1„GOO^ug/ml. Le sérum^immunoglobuline est de même;obtenu par fractionnement (éthanol froid, sels neutres ou alcool -méthode accordée à Cohn) et dissous avec 2,25% de glycine, 0,3% de chlorure de sodium et du Merthiolate dans une concentration de 1:10.000, le pH est 11 - OO ajusté à 7,0. Le mélange est clarifié et ensuite stérilisé avec des filtres 30 Seitz EKS II* La contenance d!immunoglobuline anti-Rh^D) dans cette solution est déterminée par la méthode radio-immunologique découverte par Hughes-Jones et collaborateurs. Quand le résultat est connus cette solution est diluée en conditions stériles avec une solution à 20%. d:albumine humaine, préparée à partir de plasma, sérum ou placenta, de composition suivante : albumine 35 d'une pureté de 97% (par électrophorèse); 0,02 mole de sodium dl-N-acétyl-tryptophane et 0,02mole de caprylate de sodium, le pH ajusté à 7,0. Ensuite, la. solution est filtrée eh conditions stériles, puis elle est chauffée pendant no3S- i «o 10 heures a 60°C au bain^marie. pour inactiver le virus du sérum hépatite homologue. 70 15758 4 2042388 REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation d'un médicament utile en obstétrique pour éviter la sensibilisation des mères à Rh-négatif par les érythrocytes Rh-positifs du foestus, caractérisé en ce qu'on mélange une solution drimmunoglobuline anti»Rho(D) avec une solution d'albumine 5 humaine dans un rapport quantitatif immunoglobuline anti-Rh (D)/albumine variant de 1:2 à 1:10. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'albumine humaine est en solution de 15 à 25%, de préférence»20%. 3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, avec la particularité 10 que la solution d'immunoglobuline anti=RhQ(D) est employée en concentration de 10 à 18%, de préférence, 16%. 4. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, avec la particularité que le mélange contient un minimum de 100 mcg, mieux 3 encore, de 250 mcg d'immunoglobuline anti=RhQ(D) par cm , déterminé par la 15 méthode radio-immunologique d'après Hughes-Jones.