Brevet FR2051563A1 — publié le 19710409

i 2051563 L'ara-eytidine aussi appelée eytarabia©s ojtosine arablnoside ou Ca, est connue depuis un certain temps en tant qu'agent efficace pour contrôler la croissance de certains types de cancers, spécialement la leucémie» Cependant, 3on utilisation a été gênée par la 5 difficulté deetablir et de maintenir un. contact efficace et ininterrompu entre 1® composé et les cellules traitéesQ Dans la demande de "brevet français rt° 69 24060 du 15 juillet 1969» au nom de la même Demanderesses s© trouve 1© 1~p=-D~arabino~ furanosylcytosine 5'-(l-adamantanec£rboxyla£e)s décrit comme possé-10 dant des propriétés de libération prolongé© et un effet "dépôt", le composé est synthétisé par adamaatoylatioa directe de l'ara-cynidine pour former d'abord le composé bis-adamantoylé, et ensuite une hydrolyse sélective donne le 5'-0-adamantoyl ester. Les 5'-0-dérivés, comprenant principalement des esters, de la 15 présente invention sont préparés en protégeant ou en bloquant d'abord l'azote amino primaire de 1!ara-cytidine avec de l'halogé-nure de 8, (3,(3-trihaloé thoxycarbonyle dana lequel "halo" est du chlore ou du brome, et "1'halogénure" est du chlorure, du bromure ou de l'iodure, et en faisant réagir ensuite le composé bloqué avec 20 un intermédiaire capable de réagir avec le substituant 5 f-0- hydroxylé. Il en résulte les 5'-O-dêrivés de la présente invention. Le procédé de la présente invention qui prévoit un blocage efficace de l'azote amino primaire, entraîne de moins grandes pertes d'agent estérifiant, et tout en étant d'un rendement global supérieur, 25 entraine aussi de moins grandes pertes d© la substance coûteuse, l'ara-cytidine. Le procédé rend valables uae grande quantité de 5'-0-dérivés nouveaux et utiles, comme il en sera discuté ci-après. Les composés de l'invention englobent les sels des 5®-0-dérivés avec des acides minéraux ou organiques pharmaceutiquement 30 acceptables ayant un pE de l'ordre Se 2 ou inférieur à 20 Les composés de la présente invention., lorsqu8 administré s, montrent les propriétés caractéristiques de lrara-eytidine, et de plus montrent la propriété désirable de libération prolongée de l'ara-cytidine sur de longues périodes fie temps après l'administra» 35 tion. De la sorte, les modes d'administration et les dosages pour l'utilisation sont ceux qu'on utilise ordinairement avec l'ara-cytidine. Par exemple, ils peuvent être administrés par voie orale ou intramusculaire. Leur utilisation par voie intraveineuse 3AD ORIGINAL 70 19441 2051563 est faisable, mais la nécessité d 'utiliser des dispositifs-" dosavan tageux tels que le compte-gouttes à utilisation intraveineuse évitée par la libération prolongée ou l'effet "dépôt" des nouveaux composés. 5 De plus, les composés de la présente invention montrent des propriétés d1antiphage, et, utilisés conjointement à un inhibiteur de l^âêsaminase, ils peuvent être utilisés pour protéger une fermentation menacée de contamination par un pliage. Les esters de la présente invention ont les activités 10 et utilisations qui caractérisent le composé non estérifié, la cytarabine ou l'ara-cytidine, à savoir une activité contre la leucémie aiguë chez les adultes et chez les enfants et contre le lymphosarcome chez les adultes, comme décrit dans le brevet U.S.A. n° 3.444.294. Comme dans le cas de l'ara-cytidine, des solutions 15 injectables stériles telles que dans l'huile de graines de coton, l'huile d0arachides et l'huile de graines de sésame ,ou des dispersions ou des solutions non aqueuses stériles ou des dispersions dans de l'eau, des solutions salines aqueuses ou des dispersions convenant pour être injectées, ou des poudres stériles convenant 20 pour la préparation extemporanée de dispersions ou solutions injec tables stériles peuvent être préparées en utilisant l'ester de la présente invention. Ces solutions sont préparées en incorporant l'ester dans le solvant ou dans le milieu de dispersion en même temps qu'avec des agents d'enrobage de particules appropriés, des 25 agents tensio-actifs, des agents bactéricides ou fongicides, des agents isotoniques,etç. Des poudres peuvent être préparées par séchage par congélation ,comme une dispersion ou solution préparée d'une façon appropriée. Des formes de dosages unitaires ,comme des fioles et ampoules sont faisables. Le dosage dépend de l'âge , du 30 poids et de la sévérité de l'état du malade, de la voie et de la fréquence d'administration, et il peut varier de 0,1 à environ 50 mgr/kg de poids de corps, ou suivant une dose totale journalière d'environ 3 à environ 4.000 mgr donnée en une fois ou en doses divisées. Un dosage unitaire peut contenir l'ester de la prê-35 sente invention en une quantité allant de 3 à environ 1000 mgr par unité. Le pourcentage en ester peut aller d'environ 0,5% à 25% en poids/volume de la composition totale. En utilisant la caractéris tique de libération prolongée des esters de la présente invention. BAD ORIGINAL 70 19441 2051563 des dosages unitaires peuvent être préparés et administrés par voie intramusculaire en des quantités variant d'environ 0,5 à environ 10 gr ou plus de dosage total , ou d'environ 10 à environ 50 mgr/kg ou plus. La quantité d'ester dans un tel dosage peut \.*a-5 rier jusqu'à celle s'indiquant comme étant suffisante pour contribuer à la régression et à- la palliation de la leucémie. C'êst ainsi qu'un dosage de 50 mgr/kg ne peut être donné qu'une fois par semaine ,ou bien des doses qui peuvent être plus grandes peuvent être administrées à des intervalles de temps plus largement espa-10 cés. Pour l'administration orale, des formes de dosages Unitaires solides ou fluides peuvent être préparées. Pour la préparation de compositions solides, telles que des tablettes, l'ingrédient set if principal est mélangé avec des ingrédients courants, 15 tels que le talc, le stéarate de magnésium, le phosphate dical-cique, le silicate de magnésium et d'aluminium, le sulfate de calcium, l'amidon, le lactose, l'acacia, la méthylcellulose et des matières fonctionnéllement similaires telles que des diluants siçpcrts pharmaceutiques. Des cachets sont préparés de la même manière que 20 les tablettes, en ne différent que par la forme et l'introduction de sucrose ou d'un autre agent adoucissant et donnant du goût. Dans leur forme de réalisation la plus simple, des capsules, comme les tablettes, sont préparées en mélangeant le composé actif de la formulation avec un diluant pharmaceutique inerte et en versant le 25 mélange dans une capsule de gélatine dure de grandeur appropriée. Dans une autrè forme de réalisation, des capsules sont préparées en remplissant des capsules de gélatine dure avec des perles contenant le composé actif enrobées de polymère-. Des capsules de gélatine molle sont préparées par 1'encapsulation à la machine d'une 30 pâte du composé actif avec une huile végétale acceptable, du pé-trolatum liquide léger ou avec une autre huile inerte. Des formes de dosages unitaires fluides pour l'administration orale , comme des sirops, des élixirs et des suspensions peuvent aussi être préparées. Les formes solubles dans l'eau du 35 composé actif peuvent être dissoutes dans un véhicule aqueux en même temps qu'avec du sucre, des agents aromatiques donnant du goût et des agents de conservation pour former un sirop. Un éiixir est préparé en utilisant un véhicule hydroalcoolique (éthanol) BAD ORIGINAL 70 19441 2051563 avec des agents adoucissants convenables tels que du sucrose, ainsi qu'avec un agent aromatique donnant du goût. Des suspensions insolubles peuvent être préparées avec véhicule sirupeux et à l!aide d'un agent de mise en suspension ,tel que l'acacia, la gomme adra-5 gante , la méthylcellulose,etç. Le procédé de la présente invention est généralement un procédé dEestérification et il peut être représenté illustrative-ment dans les réactions suivantes dans lesquelles X est du chlore ou du brome : 10 NH„ N O ii NHCOCfl2CX HOCEL 15 20 25 30 35 0 N 0 OH CX3CH20 U- CH n Jj. H0 2x0\ CX^CH^OCCl(environ 2 moles pyridine H HO/ _y o II NHC0CH„CX N- 2 3 H°9?2 o 0^ N base hydrolyse HO i 'H o II NHC0CH CX ^ J . , . Acyl-ocH„ agent acylant | 2 Acyl-OCH zinc, acide acétique BAD ORIGINAL 70 19441 2051563 Dans la réaction ci-dessus, des variations peuv--. . „• réalisées dans plusieurs stades» Par exemple, le composé inLr.r-médiaire ; O C-0-CH_CX. | Mi M HOÇH^ qJ-s.*? lO HO/ V 15 -H ' peut être réalisé en faisant réagir de la 5 8~0-trityl-ara-eyticîi-ne avec de l'halogénure de p,p,p-trihaloéthoxycarbonyle pour former le N-dérivé analogue,et en enlevant ensuite le groupe trityle par des méthodes connues. La réaction est illustrée de la façon suivante : 20 25 NH, ^o"^-fc-0-ÇHg^o ©1° CX CH ÛCCl (environ 1,-1 mole pyridine HOAc à 80% O ii NHC-OCH CX t J HHC-OCH„CX > ° 30 On peut utiliser de la 5'-O-trityl ara-cytidine comme matière de départ pour les autres réactions qui suivent dans lesquelles on utilise un excès de chlorure de P. P, p-fcrichloroéthoxy-35 carbonyle : BAD ORIGINAL 70 19441 10 ! Excès de: O 2051563 0 II NHCOChVjCC i ; (a- c-0 —çft - 0 ■Yt o-\, & 0 p C-OCHaCC' il CC1,CH 0CC1 J v pyridine COCHzCCls O Acide acétique à 80% j u -HOCf-b o0 ^ M 0 t NHCOCHaCCU »^S". agent acylant '' c-och2ccî3 )jÇ-0CH3CC1 3 0 25 NHE0CH2CCI3 acyl-0ÇH2 0 acyl-OCH2 c-0ch2cc13 » >c-och2cci3 ; 30 * Zn, acide acétique Zn, méthanol, A Dans la pratique de l'invention, et comme cela est décrit plus en détail dans ce qui précède et dans ce qui suit, le procédé englobe l'utilisation d*une nouvelle classe de composés inter-35 médiaires ayant la:formule'structurale suivante : 7 70 19441 2051563 O II NHCOCH-CX l 2 3 y-0 5 OH dans laquelle y = H, trityle ou un radical acyle. Ces composés intermédiaires dans lesquels y = H peuvent être transformés en la 10 vaste classe d'esters décrite dans le présent brevet, protégés, comme cela est indiqué, à l'endroit où se trouve l-'azote amino. Les esters sont également des intermédiaires et ils constituent des composés de la formule ci-dessus dans laquelle y = acyle. Ces esters intermédiaires peuvent aussi être transformés en enlevant 15 le groupe protecteur sur l'azote amino en les composés libres de l'amino ester, composés qui possèdent les propriétés pharmacologi-ques intéressantes mentionnées précédemment, comme on le verra d'apfès la description et les exemples suivants. 20 cytidine peut être protégé d'une acylation concomitante par protonation. Ceci est réalisé en faisant réagir l'ara-cytidine avec l'agent acylant, par exemple un halogénure d'acyle ou de l'anhydride d'acyle en présence d'une concentration en ions hydrogène suffisamment élevée , de telle sorte que le groupe amino primaire de 25 l'ara-cytidine soit protégé. On a découvert dans la présente invention que les espèces de nucléosides dont l'amino est ainsi protégé, est résistant aux processus dlacylation courants» Dans les équations ci-dessus, on considère comme particulièrement intéressantes dans le sens général celles dans lesquel-30 les le substituant acyle est celui d'un acide carboxylique organique RC^° où R peut avoir un nombre élevé de valeurs. Par exemple, R peut signifier en gros un radical aliphatique à chaîne droite ou ramifiée contenant de 1 à 20 atomes de carbone qui peut être substitué par des groupes halogènes, hydroxyles, carboxyles 35 ou mercapto, un radical aromatique, monocyclique ou bicyclique de 6 à 10 atomes de carbone, un radical hydrocarboné du type cage contenant de 7 à 20 atomes de carbone .R peut aussi représenter la série de substituants qui sont indiqués dans les tableauxI à XI Suivant une variante, le groupe am-ino primaire de l'ara- BAD ORIGINAL 8 70 19441 2051563 qui suivent. Des valeurs représentatives de R sont les suivantes méthyle, éthyle, t-butyle, 2,2-diraéthylpropyle, 1-chloro, 2,3-diméthylbutyle, 2,2-diméthylpropyle, 1-mercapto, 2,2-dimôthylt 5 pyle, phényl 2-méthylphényle,- 2,6-dimethylphényle, 2,4,6-trinu thylphényle, 1-naphtyle, 2-naphtyle, 10 15 -CHS - ch i J—ch; Pg CHa- 20 /T 7 —c h; ?, 25 et aussi des groupes qui avec le groupe -C-O- forment le groupe acyle d'acides , tels que l'acide glutamique, l'acide glutarique, l'acide succinique, l'acide fumarique, l'acide aconitique, l'acide itaconique, l'acide lévulinique/ l'acide 3,3-diméthylglutarique et d'autres acides 3,3-diarkylglutariques, ainsi que d'autres acides 30 tels qu'ils seront exemplifiés ci-après. • Parmi ceux-ci, sont d'application particulière les classes de composés intermédiaires protégés en N dans lesquels y = R^C^P où R£ est un radical aliphatique de 1 à 20 atomes de carbone, un radical aromatique de 6 à 10 atomes de carbone, un radical hydro-35 carboné du type cage de 7 à 20 atomes de carbone,, un radical aliphatique monocyclique de 4 à 10 atomes de carbone, un radical arali-phatique de 7 à 12 atomes de carbone ou un radical hétérocyclique monocyclique de 4 à 10 atomes de carbone ou dans lesquels R£c^° BAD ORIGINAL 70 19441 2051563 est le radical acyle d'un acide dicarboxylique aliphatique de 3 à 8 atomes de carbone. L'enlèvement du groupe protégeant l'amino conduit au composé libre de l'amino ester qui correspond par ailleurs à la formule immédiatement ci-dessus mais dans laquelle y -5 ; 10 Sàns laquelle R^ est un radical choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 10 15 atomes de carbone , les aral-^-iphatiques de 7 à 12 atomes de carbone et les hétérocycliques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone; ou bien, ou R^C1^ est le radical acyle d un acide dicarboxylique aliphatique de 3 à 8 atomes de carbone,, Une classe importante de ces nouveaux composés est celle 20 dans laquelle l'agent acylant utilisé est un halogénure d'acyle ou un anhydride d'un acide aliphatique contenant de 1 à 8 atomes de carbone, tel que de l'anhydride ou du chlorure d'acétyle, de l'anhydride ou du bromure d'isobutyryle, de l'anhydride ou du chlorure de caproyle, de lsanhydride ou du chlorure de palmityle, de 25 lIanhydride ou du chlorure de stéaryle, de l'anhydride ou du chlorure de lauryle, de l'anhydride ou du chlorure de lsoleyle, de l'anhydride ou du chlorure myristique, leurs isomères , etc, Une autre classe importante de nouveaux composés de la présente invention est celle dans laquelle le radical acyle de 30 R^C ou R^C^T^est celui d'un acide aliphatique dicarboxylique de 3 à 8 atomes de carbone, tel que l'acide glutarique, . 3,3-di-alkylglutarique, succinique, itaconique ou fumariquef etc. En plus de ce qui a été dit ci-dessus, R peut aussi être un groupe amino substitue dans lequel les substituants peuvent être 35 des radicaux aliphatiques, aromatiques* hétérocycliques ou- du type cage, comme cela est illustré ci-après» R peut aussi être un groupe mercapto ou un groupe alkylmercapto MS- dans lequel M est tel qu'illustré ci-après. Le substituant acyle en 5 s-0 peut aussi être BAD ORIGINAL 10 70 19441 2051563 de ceux qui forment un ester carbonate , comme cela est illustré ci-après. En plus des groupes acyles de carboxyles, les groupes dérivés attachés à l'oxygène 5'-0 de l'ara-cytidine peuvent être 5 des groupes thio-acyles tels que s -S A s O O li i\ Il iî • f| • M. SC- ou xN-C- ou R -S- ou E,0-S- 1 / 2 | 3 jf . B1 O O dans lesquels M , A et B1, S et R„ sont tels quc illustrés ci-X X i, JL 3 10 après. Le groupe acyle attaché à 1'oxygène en position 5' de 18ara-cytidine peut aussi être celui d'un acide phosphorique estê- rifié tel que : O II R.OP- 4 | 15 OR_ dans lequel la valeur de et R être un aliphatique ou un aliphatique substitué, tel que cela sera illustré ci-après : A„ O 2\ !{ , N-P- OH dans lequel la valeur de 20 et de peut être de l'hydrogène ou un aliphatique, tel que cela sera illustré ci-après , ou S 2\ H N-P- OH dans lequel la valeur de A^ et de B^ est telle que donnée ci-dessus. 25 Les procédés de la présente invention tels que décrits ci-dessus rendent possible la préparation d'une grande quantité de 5s-0-esters d'ara-cytidine. Parmi ces produits, se trouvent plusieurs classes de nouveaux composés, jusqu'ici inconnus, soit sous la forme Dans les tableaux suivants seront formulée les agents d'acylation avec les groupes de substituants des agents d'acylation mentionnés ci-dessus et l'identification de l'ester d'ara-cytidine. 35 Ces agents sont mis en réaction avec de l'ara-cytidine protégée comme décrit ci-dessus, et dans chaque cas le produit intermédiaire 4 contenant le groupe protecteur N -trihaloéthoxycarbonyle est formé, lequel groupe est enlevé par la suite comme décrit ci-dessus et BAD ORIGINAL il 70 19441 2051563 dans les exemples qui suivent. Un certain nombre d'agents d'acylation comprenant le groupe trichloroéthoxycarbonyle cotnme substituant est donné illustrât ivement dans les tableaux. On doit comprendre que ces agents 5 d'acylation substitués peuvent être préparés par réaction avec du chlorure de trichloroéthoxycarbonyle comme décrit ci-dessus (pour 1'ara-cytidine et les composés apparentés) et comme illustré dans les exemples, suivants. Les groupes trichloroéthoxycarbonyles de ces r-adicaux 5'-O-acylœ sont enlevés en même tëmps que le groupe 10 trihaloéthoxycarbonyle protégeant le groupe amino de l'ara-cytidine dans la phase éliminative finale du procédé. • Les chlorures d'acides des acides carboxyliques, utilisés comme agents d'acylation, peuvent être préparés par des méthodes courantes ,comme par.exemple par réaction de l'acide RCOOH (a) 15 avec S0Clo,(b) avec PC1_ ou (c) avec POCl„. La méthode (a) con-A. b 3 vient pour la plupart des acides excepté pour ceux qui touillait dans les limites de 5-10°C du SOCl^ ,auquel cas la méthode (c) convient le mieux. On doit de plus comprendre que l'acide RCOOH peut être 20 transformé en un agent acylant actif en le faisant d'abord réagir avec du chlorure de p-toluène sulfonyle, et ce produit de réaction (tosylate) peut être utilisé à la place de l'anhydride ou du chlorure suivant les processus décrits dans J. Am. Chem. Soc. 77, 6214 (1955). 25 Un produit analogue à l'acide RCOOH ci-dessus peut être transformé en un agent acylant en le faisant d'abord réagir avec (CF^CO^O/ et ensuite en utilisant le produit comme agent acylant suivant les .processus décrits dans Chem.Rev. 55, 787 (1955). • Un autre processus d'estérification convenable consiste 30 à utiliser directement l'acide RCOOH, en réalisant la réaction-en présence de dicyclohexylcarbodiimide suivant les processus décrits dans Compt. Rend. 252, 896 (1961); Ibid. -255, 945 (1962) ; J. Org-. Chem. 27, 4075 (1962) et Tetrahedron 21, 3531 (1965). * Pour l'acylation de l'ara-cytidine uniquement en la po-35 sition 5'-0, suivant la présente invention, 1'acylation en coïncidence du groupe amino en la position 4 doit être évitée. Ceci est réalisé en protégeant d'abord le groupe amino. par un agent protecteur convenable. Dans une forme du procédé de l'invention, ceci BAD ORIGINAL 70 19441 12 2051563 est réalisé en faisant réagir l'ara-cytidine avec un halogénure de trihaloéthoxycarbonyle, dans lequel "halo" ëst du chlore ou du brome et "halogénure" est du chlorure ,du bromure ou de l'iodure. Des exemples de réactifs sont le chlorure de trichloroéthoxycarbo-5 nyle (Aldrich Chemical Co. Milwaukee, Wisconsin) et le chlorure de tribromoéthoxycarbonyle (J. Org. Chem. 33, 3589-93 (1968). Lorsque l'ara-cytidine est mise en réaction avec la proportion molaire appropriée (environ 2) d'halogénure de trihaloéthoxycarbonyle, le produit intermédiaire se forme, à savoir la 4 10 N ,5'-O-bis-trihaloéthoxycarbonyl ara-cytidine. Cette réaction a été montrée plus haut. La Réaction peut être réalisée dans de la pyridine, et le produit est récupéré par l'enlèvement du solvant par distillation. Les conditions réactionnelles pour l'enlèvement du groupe protecteur décrites dans l1exemple 1, peuvent être sui-15 vies. 4 La N ,5'-O-bis-trihaloéthoxycarbonyl ara-cytidine peut être hydrolysée en la traitant avec de l'oxyde de sodium dilué. Le composé dissous dans le tétrahydrofuranne est traité avec un volume égal d'une solution d'hydroxyde de sodium d'environ 0,3N, laissé 20 à la température ambiante jusqu'à ce qu'il s'équilibre ,et il est 4 ensuite neutralisé avec de l'acide acétique. Le produit, la N -tri-haloéthoxycarbonyl ara-cytidine ,peut être récupéré par cristallisation et purifié par recristallisation dans l'acétone. 4 Avantageusement, la N -trihaloéthoxycarbonyl ara-cyti- 25 dine peut être préparée en faisant réagir de la 5'-0-trityl ara- cytidine (brevet U.S.A. n° 3. 338.882, exemple 1) avec de l'halogé-4 nure de N -trihaloéthoxycarbonyle (halogénure de THEC) (exemple 1). La réaction est réalisée dans de la pyridine sèche à basse température, environ -5° à 5°, de préférence environ 3°C. Si. la propor-30 tion molaire de 5'-0-trityl ara-cytidine par rapport à l'halogénu- re de THEC est d'environ 1/1, le produit réactionnel est de la 4 . . N -trihaloethoxycarbonyl-5'-0-trityl-ara-cytidme. Si on utilise un excès d'halogénure de THEC, c'est-à-dire une proportion molaire inférieure à 1/3, de préférence d*environ 1/4 à 1/5, le produit 4 35 reactionnel est la N -2',3'-O-tris-trihaloéthoxycarbonyl-5'-0- trityl-ara-cytidine. On enlève le solvant et le résidu est extrait dans un solvant hydrocarboné chloré, par exemple du chlorure de méthylène, et il est ensuite lavé avec de l'eau. Dans le cas où le —■* BÂD ORIGINAL 70 19441 13 2051563 produit relationnel est la tris-trihaloéthoxycarbonyl-5-O-trityl-ara-cytidine, le groupe protecteur en 23-G et en 3r-0 peut être-enlevé à ce moment, si désiré - par hydrolyse avec une base .par exemple de 1'hydroxyde de sodium O,15W dans 50% de tétrahydrcfuran-5 ne-50% d'eau', pour donner le produit 5!-0-trifylé monoprotégé en 4 N qui est isolé. Ou bien, le résidu lavé dans un solvant hydrocarboné chloré est évaporé. Si désiré, les produits tritylés , protégés par THEC peuvent être recristallisés dans des solvants convenables, par exemple du chlorure de méthylène ou de l'acétone. 10 Les dérivé intermédiaire protégés,les mono- ou tris-THEC-5'-O-tri-tyl-ara-cytidines? sont traiëês avec de l'acide acétique à 80% , comme illustré dans l'exemple 2, pour enlever le groupe 5'-O-trityle 4 et donner le composé intermédiaire, la N -trihaloéthoxycarbonyl ara-cytidine. 15 En acylant en la position 5*-0 par l'utilisation des agents d'acylation exemplifiés dans les tableaux I à XI et illustrés dans les exemples* on obtient les nouveaux produits de l'invention, à savoir les 5'-O-esters d1ara-cytidine à groupe amino protégé. Le groupe protecteur est enlevable par le traitement de 20 l'ester avec du zinc métallique dans une solution de méthanol; par traitement avec du zinc métallique, par exemple sous la forme de poussière de zinc , et d'acide acétique ,par exemple dans une solution d'acide acétique à 80-90%; ou par traitement avec du chlorure de zinc ou de l'acétate de zinc dans le méthanol. 25 -La solubilité dans l'eau des 5"-0-dérivés de la présente invention peut être améliorée et c'est ainsi que leurs utilisations pharmaceutiques sont améliorées pr conversion en leur forme sel avec des acides pharmaceutiquement acceptables qui ont un pK de l'ordre de 2 ou inférieur à 2. Ces acides peuvent être classés en 30 gros comme acides organiques ou minéraux forts, et cette classe d'acides est appropriée parce que l'ara-cytidine et les S'-O-déri-vés de celle-ci qui caractérisent la présente invention sont des bases faibles. Des exemples d"acide forts sont les acides chlorhy-drique,sulfurique, phosphorique, glutarique, glutamique, tartari-35 que, trihydroxybenzoïque, formique , etc„ Ils sont formés* en mettant en suspension les 5'-0-dérivés désirés dans un milieu tel que du méthanol et en ajoutant de façon appropriée un équivalent de l'acide désiré. Le résultat est une solution du sel d'acide , le- 70 19441 14 2051563 quel sel peut être séparé par l'addition d'un milieu,.appropria , tel que de 'l'éther diéthyïique. Les sels peuvent être purifiés p&r recristallisation dans des mélanges de solvants, tels que du méthanol-éther. L'halogënhydrate peut aussi être obtenu simplement 5 en ne neutralisant pas le mélange d'acylation provenant de la réaction de RCOCl avant d'isoler le produit acyle du solvant» Dans le tableau I ci-dessoussont donnés illustrative- . ment des agents d'acylation typiques et les produits ara-cytidine-51 -O-acyla.tes résultants dans le cas où le groupe acyle est 10 où est tel que défini précédemment. TABLEAU I - R de FCO = R1 R, 15 20 jS_° 1 2 3 4 5 6 Agent d'acylation Produit CH„ (CH3Î3C-(ch3)2ch- CS3(CH2Î7" Œ3(CH2)l4- CH3(CH2>16- ? ch3(ch2)?ch= ch(ch2)7- ÇH 8 C1CH2^--3 9 NO, r®" 30 10 ,CH & anhydride acétique .5'-O-acéty1 ara-cytidine ou chlorure d'acétyle chlorure de pivaloyle 5'-0-pivaloy1 ara-cytidine chlorure d1isobutyry- 51-O-isobutyryl ara- le chlorure d°octanoyle (chlorure de ca-proyle) chlorure de palmityle chlorure de stéaryle chlorure d'oléyle cytidine « 5'-0-octanoyl ara-cytidine 5'-O-palmityl ara-cytidine 5'-O-stéaryl ara-cytidine 5 '-O-olé-^yl ara-cytidine chlorure de f3-chloro- 5 1-0-(3-chloropivaloyl pivaloyle chlorure de p-ni-trobenzoyle chlorure de o-toluoyle ara-cytid ine. 5 *-0-p-nitrobenzoy1 ara-cytidine 5'-O-o-toluoyl ara-cytidine 35 12 de ehlorure/benzoyle chlorure de 2,6-di-méthylbenzoyle 5-*0-benzoyl ara-cytidine 51-0-2,6-diméthyl-benzoyl ara-cytidine 70 19441 15 2051563 13 • _/H3 Ch3-{0>- H. TABLEAU I (suite) chlorure de 2,4, 6-triméthylben- zoyle 51-0-2,4,6-triméthyl benzoyl ara-cytidine 14 |0| I O 10 15 18 CH 0 V5V 20 0CH3 19 CH 0 -(O)- 20 25 21 22 30 23 35 24 chlorure de 1-fluo-rène carbonyle chlorure de 9-fluo-rène carbonyle chlorure de 1-naphtoyle chlorure de 1-indène-carbonyle chlorure de p-ani-soyle chlorure de 3,4,5-triméthoxybenzoyle chlorure de p-toluoyle 5 '-0-1-fluorène carbonyl ara-cytidine 51-0-9-fluorène carbonyl ara-cytidine 5'-0-1-naphtoyl ara-cytidine 5'- 5'-O-p-anisoyl ara-cytidine 5'-0-3,4,5-triméthoxy-benzoyl ara-cytidine 5'-O-p-toluoyl ara-cytid ine chlorure de 1-norbor- 1-norbornylcarbonyl nanecarbonyle ara-cytidine chlorure d'exo- ou d 1 exo ou exo/endo-mélange exo/endo- mélange de 5'-0-2-norbornyl de 2-norbornane carbonyl ara-cytidine carbonyle chlorure de 7-nor-bornane carbonyle chlorure de 2-ada-mantane carbonyle 51-0-7-norbornyl carbonyl ara-cytidine 5!-0-2-adamantyl carbonyl ara-cytidine 70 19441 16 2051563 25 Û TABLEAU I (suite) chlorure de 1-ada-mantyl acétyle' 5 '-O- (1-adamantvl acétyl ara-cytidine 15 20 28 29 30 31 □ O chlorure de ct-chloro-3,5,7-triraéthyl-1-adamantyl acétyle 5'-O-/(a-chloro-3,5,7-t r i mé thy 1-1- ad amanty 1 ) acétyl/ ara-cytidine 51-0-pentacyclo/4.2.0. ^ 2,5 3,8 4,7= . , 0. .O .O _/octyl- carbonyl ara-cytidine chlorure de pentacy- clo/4.2.0. ■2,5 _3 , 8 4,1~. ^ O .0 .0 _/octa- ne carbonyle (chlorure de cubane carbonyle anhydride d'acide cy- 5-0-r»cyclobutylcarbonyl clobutane carboxylique ara-cytidine chlorure de cyclopen- 51-O-cyclopentylcar-tane carbonyle bonyl- ara-cytidine chlorure de cyclo-hexane carbonyle 5'-O-cyclohexylcarbonyl ara-cytidine chlorure de picolinyle 5'-O-picolinyl ara- cytidine 25 30 36 [O 35 37 /, \ chlorure de tétrahydro- 5'-O-tétrahydro-2— furoyle (chlorure de « furoyl ara-cytidine tétrahydropyromuconyle chlorure de 10-xan- 5'-0-(10-xanthylcar-thane carbonyle bonyl) ara-cytidine chlorure de nico-tinyle chlorure de 6-métho-xy-4-quinoline carbonyle (chlorure de quininyle) chlorure de 4-cinno-line carbonyle chlorure de 2-thio-phène carbonyle 5'-O-nicotinoyl ara-cytidine 5 1 -0-6-méthoxy-4-qui-nol'ylcarbonyl ara->-cytidine 5'-0-4-cinnolylcarbonyl ara-cytidine 51-0-2-thénoyl ara-cytidine 70 19441 17 2051563 38 39 ch2- TABLEaU I (suite) chlorure de 4-thia-naphtène acétyle chlorure Je 2-furoyle 58--0-4-thianaphtène acétyl ara-cytidine 5 s-0-2~furoyl ara- cytidine 40 [j v Br chlorure de 5-bromo-2-furoyle 5 S-G-(5-bromo-2-furcyl) ara-cytidine 10 41 42 15 20 43 44 45 46 25 47 ^CECx chlorure de couma-lyle chlorure de coumarin-3-carbonyle chlorure d1isonico-tinoyle chlorure de 2~qui-nuclidine carbonyle chlorure de 3-quinu-clidine carbonyle chlorure de 4-quinu-clidine carbonyle chlorure de N-tri-chloroêthoxycarbonyl-2-pyrrole carbonyle 5s-0-coumalyl ara-cytidine 5 3-0-coumarin-3-carbo-nyl ara-cytidine 58-O-isonicotinoyl ara-cytidine 5 r-0-2-quinuclidinyl carbonyl ara-cytidine -5"-O-3-quinuclidinyl carbonyl ara-cytidine 5 ff-0-4-quinuclidinyl carbonyl ara-cytidine 51-0-2-pyrroiylcarhonyl ara-cytidine 30 48 ~~5 N'A. IcEC 49 35 m 4cec chlorure de K-tri-chloroêthoxycarbonyl-2-indole carbonyle chlorure de N-tri-chloroéthoxycarbonyl-3-indole carbonyle 50-0-2-indolylcarbonyl ara-cytidine 53 -O- 3 -- i nd o 1 y 1 c arbony 1 ara- cy t id ine ssTCEC signifie le sadical trichloroé choxyearbonyle BAD ORIGINAL 70 19441 18 2051563 TCECO 50 [Q 51 5 ?3 TABLEAU I (suite) 5 ' -O-hydroxybensoyl -ata-cytidine 52 hooc-ch cil - H trichlo.ro carbonate de chlorure d°hydro-xybenzoyle chlorured1 acide trans- 5'-0-trans-3-(n-propyl) 3- n-propylhygr ique, hygroy 1-ar a-cy t. ic ine chlorhydrate ' anhydride succinique 53 H00C-C=Ç- H chlorure de fumaryle CH, 54 H00C-CH„-C-CH - anhydride 3f3-dimë-' thylglutarique I CIi„ CH, 15 55 H00C—C—CH_— /. • H ÇOOH 56 H00C-C=C-CH2~ anhydride itaconique anhydride açonitique 5'-0-hémisuccinyl ara-cytidine 51-O-hêmifumaryl ara-cytidine 5 ' -0-hémi ^3,3-diîaéthyl-glutarylV ara-cytidine 5'-Q-itaconyl ara-cytidine 5a-0-aconityl ara-cytid ine 20 Dans le tableau II ci-dessous, sont donnés des groupes d'acylation typiques et les produits résultants dans le cas où le groupe acyle est A B î N-C- tableau II (R de RCO = b^N~) Produit final 30 h- H' h- ch3CH2- - a Agent d'acylation chlorure d'acide N- 5'-O-(carbaraoyl)ara- carbonylsulfamique, cytidine cyanure de sodium et acide trifluoro- acétique éthyl isocyanate cyclohexyl iso- . cyanate CH (CH ) - N-octyl isocyanate Ci ^ / C2V n-C4H9~ C2H5- n-c4Hg- diéthylamine et phosgène d i-n-butylamine et phosgène é'-O- (éthylcarbamoyl)-ara-cytidine 5'-0-(cyclohexylcarba-moyl)-ara-cytidine 5'-0-(n-octylcarbamoyl)-ara-cytidine 5 '-O- (diéthylcarbamoyl)-ara-cytidine 5'-0- (di-n-butylcarba-moyl)-ara-cytidine BAD ORIGINAL 70 19441 19 2051563 . . • ' TABLEAU II (suite) . ch ^ch-chg- /q\_ N-allylaniline et 51 -O- (N-allyl-N-phényl~ \ / phosgène carbamoyl)-ara-cytidine Opipyridine + 5'-O-(N,N-pentaraéthylène- phosgène carbamoyl)-ara-cytidine (pentaméthylène) Dans les formules précédentes, A et B sont des radicaux identiques ou différents choisis'parmi le groupe comprenant l'hydrogène, les aliphatiques de 1 à 10 atomes de carbone, les alipha-10 tiques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone et les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone, ou bien A et B forment ensemble une chaîne aliphatique de 3 à 6 atomes de carbone. Dans le cas où R de RCO = MS, des processus généraux pour la préparation des monothiol chlorocarbonates substitués comme 15 agents d'acylation sont donnés dans J. Am. Chem. Soc. 82, 4347 (1960) et dans Mo.natsch Chem. 81, 939 (1950). En quelques mots, on fait réagir le mercaptan MSH avec^COC^ en présence de NiCl^ pour produire l'agent d'acylation MSC^Cl. Dans cette classe, M est un radical choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 20 1 à 10 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone et les aralkyles de 7 à 12 atomes de carbone. Des agents d'acylation caractéristiques de ce' type et les produits finals résultants sont les suivants : 25 TABLEAU III M Réactif mercaptan (+CQC1 ) Produit final /OV-CHj- benzyl mercaptan ara-cytidine-5 '-S-benzyl- ^—' " thiocarbonate (CH^^CH- isopropyl mercaptan ara-cytidine-5'-S-isopro- pylthiocarbonate 20 CH^(CH,,)3~ n-butyl mercaptan ara-cytidine-5!-S-n-butyl~ thiocarbonate CTI^CHCH^- allyl mercaptan ara-cytidinè-5'-S-allyl- thiocarbonate 35 >—' thiocarbonate Cl Cl \ / ' Ci/q\_c1 pentachlorothiophénol ara-cytidine-5 °-S-penta- V / chlorophénylthiocarbonate cl^cl 20 70 19441 2051563 TABLEAU III (suite) cyclohexylmercaptan ara-cytidine-51-S-cyclo- hexylthiocarbonate CH^CH^Îg- n-décyl mercaptan 51 -ara-cytidine-5'-S-n- décylthiocarbonate 5 lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara- y S cytid ine est 1YL^S-C^ , l'agent d 'acylation peut être préparé suivant une manière analogue à celle décrite ci-dessus en substituant du'thiophosgène (CSCl^) au COCl^. Dans cette classe, M est un radical choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 1G 1 à 10 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à ÎO atomes de-carbone et les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone.Des agents d'acylation représentatifs de ce type et les produits finals résultants sont : TABLEAU IV M- Réactif mercaptan (+CSCI2 ) Produit final éthyl mercaptan + ara-cytidine-5'-S- thiophosgène éthyl xanthate phényl thiol + ara-cytidine-5'-S- \ / thiophosgène phényl xanthate benzyl thiol + ara-cytidine-5'-S- 20 \ / thiophosgène benzyl xanthate CH^(CH2)g- décyl thiol + 5'-ara-cytidine-5'-S- thiophosgène décyl xanthate Lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara- cytidine est A- . S N-C 25 Bl'/ ' "^a Préparation consiste à faire réagir un produit de la classe du tableau IV (c'est-à-dire lorsque le.- ra- - S dical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara-cytidine est M^S-C^ ) avec A^B^NH. Des processus généraux pour réaliser cette réaction sont donnés dans J. Chem. Soc., 2195 (1951). Dans cette classe, 30 A^ et B^ sont des radicaux identiques ou différats choisis parmi le groupe comprenant l'hydrogène, les alkyles de 1 à 7 atomes de carbone et les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone.; Des composés représentatifs inclus dans ce procédé sont les suivants : 35 70 19441 21 2051563 TABLEAU V r. R, Réactif h- ch3- C2H5- CH, C2H5- H-H- H- CH. SV 10 i_ CH„ ammoniac ' méthyl aminé éthyl aminé dimêthyl aminé diéthyl aminé N-méthyl aniline Produit final 5 !-0- {th iocarbamoy1)-ara-cytidine 5 8-O-(méthyl thiocarbamoy1}-ara-cytidine 5 &_q_(éthyl thiocarbamoyl)- ara-cytidine 5'-O-(dimêthyl thiocarbamoyl)-ara-çytidine 51-O- (diéthyl thiocarbamoyl)-ara-cytidine l'ara-cytidine est R2_S; 52-O- (mé thyIphényl thiocarbamoyl) • ara-cytidine Lorsque le radical acv'le attaché à l'atome d'oxygène 5! de '"Tq i 1s préparation est analogue à celle qui consiste à utiliser les chlorures d'acides carboxyliques, mais 15 en utilisant le chlorure de sulfonyle approprié» Dans cette classe, R2 est un radical choisi parmi le groupe comprenant les alkyles de £ à 7 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone et les aromatiques substitués de 6 à 12 atomes de carbone. Des agents d'acylation représentatifs et les produits finals sont: 20 TABLEAU VI Çj ch3- 25 Br-(o)- 30 CH (CH3) 2 Agent d'acylation chlorure de méthanesulfonyle - chlorure de benzènesulfonyle chlorure de p-bromobenzène-sulfonyle chlorure de p-nitro-benzènesulfonyle chlorure de p-toluè-nesulfonyle Produit final 5'-O-méthyIsulfonyl-ara-cytidine 5D-O-phényIsulfonyl-ara-cytidine 5'-0-(p-bromophénylsul-fôhyl)-ara-cytidine 5s-O- (p-nitrophénylsul-fonyl)-ara-cytidine 5!-0-(p~tolyIsulfonyl)-ara-cyt id ine (ch3)2ch 35 ch(ch3)2 5B- (2 „4b 6-triisopropyl-phényIsulfonyl)-ara-cytidine chlorure de 2/,4J,6-tri-isopropylbenzènesulfonyle Lorsque le radical acyle attache à 1aoxygène 58 de 1 ara-cytidine est R30-S^q , la préparation de 18 agent daacylation se fait par la méthode connue qui consiste à faire réagir ROH avec S0C12 BAD ORIGINAL 7019441 22 2051563 pour produire l'agent d'acylation ï^Q-sf^-Cl, qui est ensuite uti lisê d'une façon analogue aux chlorures d'acides carboxyliques. Dans cette classe» est un radical choisi parmi le groupe compre nant les aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, les aromatiques 5 de 6 à lO atomes de carbone et les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone » Des composés représentatifs sont les suivants s TABLEAU VII O H (R O-S-) e Réactif (+S0C1_) _ , . . .. 2' Produit final H- trioxyde de soufre ara-cytidine-5'-sulfate CH^- Méthanol + ara-cytidine-5'-méthyl chlorure cfe thionyle sulfate éthanol + ara-cytidine-5'-éthyl .j ^ chlorure de thionyle sulfate /q\ phénol + ara-cytidine-5'-phényl \ / chlorure de thionyle sulfate (0) C&2~ alcool benzylique + ara-cytidine-5'-benzyl >—' chlorure & thionyle sulfate 2Q ïx-CH (CH ) - alcool n-octadécylique + ara-cytidine-5'-octadécyl chlorure de thionyle sulfate Lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara-cytidine est R^O-P > la préparation de l'agent d'acylation peut être réalisée par des méthodes connues. Des processus généraux utilisant un alcool aliphatique en combinaison avec du dicy-25 clohexylcarbodiimide et de 1soxychlorure de phosphore (POCl^) sont décrits dans J. Am. Chem. Soc. 80, 6212 (1958). Des processus généraux utilisant des phosphochloirhydrates disufcstLtués (R^ et R^) comme agents d'acylation sont décrits dans'Angew. Chem. Internat. Edit. 6, 362 (1967). Des processus généraux utilisant des phos-30 phates substitués (R^) et du dicyclohexylcarbodiimide sont décrits dans Chem. Ber. 100, 2228 (1967). Dans cette classe, R^ et R^_ sont cfea radicaux identiques ou différents choisis parmi le groupe comprenant les alkyles de 1 à 7 atomes de carbone et les haloalkyles de 1 à 7 atomes de carbone. Des composés représentatifs sont les 35 suivants : bad original 70 19441 23 2051563 TABLEAU VIII ? (r4o-P- ) 0R5 R R 4 5 Réactifs Produit final 5 H- CCl^CB.^- P,p,p-trichloroéthyl- p; p, p-trichloroéthvl phosphate + DCC (5'-ara-cytidylate) CH^CH^- CH^CH^- diéthylphosphoro diéthyl-(5'-ara- chloridate cytidylate) CCl^CH^- CCI CHg- bis-p,p,p-trichloro- his-p,p,p-trichloro- éthylphosphoro éthyl-(5'-ara-cytidylate) 10 chloridate Lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara-cytidine est RgO-C^° , l'agent d'acylation est R^O-C"-^—Cl, et 1 acylation est réalisée en suivant les processus connus pour la préparation d"*esters carbonates. Dans cette classe, R.. est un ra- O 15 dical choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone et les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone. Des composés représentatifs sont les suivants : O TABLEAU IX (R^.0-1:-) R 20 6 Réactif Produit CH^ — méthyl chloroformate ara-cytidine-5'-méthyl carbonate éthyl chloroformate ara-cytidine-5'-éthyl carbonate /QY-CH2 chlorure de carbo- ara-cytidine-5'-phényl 25 ^—' benzoxy carbonate CH3^CH2^7~ octyl chloroformate octanyl(5'-ara-cytidylyl)- carbonate CH (CH ) - . hexadécyl chloroformate ara-cytidine-5'-hexadécyl carbonate ff~\ phényl chloroformate ara-cytidine-5'-phényl 30 XZJ carbonate Lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara-cytidine est j) N-P- b2// Ah , le produit final est préparé en fai- 35 sant réagir le composé intermédiaire , obtenu tel que décrit ci- û. dessus relativement au tableau VIII, le W"-trichloroéthoxycarbo-nyl-ara-cytidine-5 '-phosphate, avec 1'aminé appropriée en présence BAD ORIGINAL 24 70 19441 2051563 de dicyclohexylcarbod-iimide. Des processus généraux analogues sont décrits dans J. Ara. Chem. Soc. 80, 3752 (1958). Dans cette classe, A^ et sont des radicaux identiques ou différents choisis parmi. le groupe comprenant l'hydrogène et les alkyles de 1 à 7 atomes de 5 carbone. Des composés représentatifs sont les suivants : tableau x a (j) ' \jsr-p- E2^ àH A B 2 2 Aminé Produit final 10 (NTCEC) , . • V . -, H- H- pCa + DCC + ara-cytidme-5 '-phosphora- 1 11 midate ammoniac CH^- H- 1 + 11+méthyl aminé ara-cytidine-5(méthyl phosphoramidate) • 1 + 11 + éthyl aminé ara-cytidine-5(éthyl 15 20 phosphoramidate) CH^- CÎI3_ 1 + 11 + diméthyl aminé ara-cytidine-5'-(diméthyl phosphoramidate) C2H5~ 1 + 11 + diéthyl aminé ara-cytidine-5'-(diéthyl phosphoramidate) 4 1 = N -trichloroéthoxycarbonvl-ara-cytidine-5'-phosphate 11 = DCC = dicyclohexylcarbodiimi.de Lorsque le radical acyle attaché à l'oxygène 5' de l'ara-cytidine est A2 _P':"-^0B2 ' l'a^en^ d'acylation est préparé suivant J. Am. Chem',- Soc. 88, 4292 (1966) et Angew. Chem. Internai. Edit. 6, 362 (1967), dont il a été question précédemment dans le tableau 25 VIII. Dançfcette classe, A^ et ont lee significations données ci-dessus dans le tableau X. Des composés représentatifs sont les suivants : e P TABLEAU XI (A 0-Ç-) . • A B 30 2 2 Agent d'acylation • Produit final H- H- éthyl dichlorothio- ara-cytidine-5'-(o-éthyl phosphate phosphorothioate) C2HJ-- C2H5~ diéthyl dichlorothio- ara-cytidine-5'-(0,0-di-phosphate éthyl phosphorothioate) H- H- triimidazolyl-1- ara-cytidine-5'-phos- 35 phosphinesulfure phorothioate La demanderésse a découvert un nouveau procédé pour la préparation des S'-esters décrits dans la présente invention sans avoir recours à un groupe de blocage spécial pour la fonction amino. bad original 70 19441 25 . 2051563 Le nouveau procédé est avantageux du fait que lorsque le groupe-amino est protoné, il est non réactif envers les agents d'acylation. De la sorte, la demanderesse utilise simplement le proton comme groupe de blocage, en faisant réagir un acide convenablement 5 activé ,tel qu'un anhydride ou chlorure d0acide„ avec un sel d'acide, tel que le chlorhydrate, du nucléoside* Comme exemple pn laisse réagir un équivalent de chlorure de palmitoyle à la température ambiante avec une solution de chlorhydrate d8ara-cytidine dans du diméthylacétamide ou du diméthyl-10 formamide. Après quelques heures„ une chromatographie en couche mince montre que le produit principal est la 5'-O-palraityl ara-cytidine, avec de petites quantités de produits diestérifiés» Le solvant est évaporé sous vide, et l'huilé est convertie en un solide par trituration avec du bicarbonate aqueux. Le solide est re-15 cueilli sur un filtre et lavé avec de laeau, pressé à sec et lavé à fond avec de l'acétate d'éthyle pour enlever les impuretés. Les produits résultants, obtenus dans un rendement supérieur à 50%, montrent une seule tache d'ahsorption dans l'ultraviolet lors d'une chromatographie en couche mince et il est essentiellement analyti-20 quement pur. Le procédé est applicable à tous les nucléosides portant un groupe amino ,tels que les nulcéosides d'adénine et de guanine„ Le fragment acyle peut être celui de n'importe quel acide qui peut être convenablement activé, par exemple par la formation d'un 25 anhydride mixte, d'un anhydride ou d'un chlorure d'acide ,de sorte qu'il peut former une liaison ester avec un groupe alkyl hydroxyle mais est non réactif envers un groupe amino protoné. Les 5'-0- acyl - dérivés d'ara-cytidine décrits dans ce qui précède ,tels que réalisés par le procédé qui fait intervenir le groupe protec-4 30 teur N -trihaloéthoxycarbonyle, et illustrés dans les tableaux I à XI ci-dessus, peuvent aussi être réalisés en utilisant comme procédé de protection la protonation» Les agents dEaeylation 4 utilisés dans le procédé utilisant le groupe protecteur N -trihaloéthoxycarbonyle et exemplifiés dans les tableaux X à XI sont 35 applicables dans le procédé utilisant la protonation comme protection. Le procédé utilisant la protonation comme protection est illustré dans les exemples 21 à 25. &AD ORIGINAL 70 19441 EXEMPLE 1 26 4 2051563 - Préparation de N f-trichloroéthoxycarbonyl-5~0 • trityl ara-cytidine O II IpîCOCIï CCi. 5 io CCl3CH2OCCl pyr.,H2Ot OH" Un échantillon de 193,69 gr (0f40M) de 5*-0-trityl ara-cytidine est dissous dans 4 litres de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est refroidie jusqu'à 3° et elle est ensui-15 te traitée avec 84,4 gr (O,40M) de chlorure de trichloroéthoxy-carbonyle. La solution est agitée à 3° pendant 4 heures et on la laisse ensuite revenir à 25° sur une période d'environ 18 heures. La pyridine est distillée à 40° sous vide et le résidu gorameux est traité avec 1 litre de chlorure de méthylène. Un solide (23,7 gr) 20 se sépare et on l'enlève par filtration. La chromatographie en couche mince établit que la matière est de la matière de départ. La solution de chlorure de méthylène est lavée 3 fois avec de l'acide chlorhydrique 0,1N et 1 fois avec une solution saline saturée. Après séchage sur sulfate de sodium, on laisse le chlorure de méthy 25 lène s'évaporer lentement, de sorte que des cristaux se déposent. Les cristaux sont recueillis par filtration, lavés avec du chlorure de méthylène froid et séchés, ce qui donne 64,5 gr de produit désiré. La chromatographie en couche mince -des liqueurs mères de chlorure de méthylène montre des taches se déplaçant plus vite que 3G le produit qui sont probablement des matières acylées en position 2' et 3!. Celles-ci sont hydrolysées en traitant le résidu des liqueurs mères avec 1 litre de tétrahydrofuranne et 1 litre d *hy-droxyde de sodium 0,3N. Après 1,5 heure, toutes les taches se déplaçant plus rapidement que le produit lors d'une chrbmatogra-35 phie en couche mince ont disparu . La réaction est acidifiée jusqu'à pH 6,5 avec de l'acide chlorhydrique concentré. Le tétrahydrofuranne est distillé sous vide et le résidu aqueux est extrait au chlorure de méthylène. Le chlorure de méthylène est lavé et 70 19441 2051563 séché comme ci-dessus-'et il est. à nouveau évapore. A nouw . . à es cristaux sont déposes. Ceux-ci sont recueillis et lavés oui donne 42,5 gr de produit .Les liqueurs mères sont encore cv..: ;;r. . 3 et on obtient un autre dépôt de 45,5 gr de matière ,laquelle ; . • ; e 5 fois contient environ 50% de produit et 50% de matière de u comme on peut le voir par chromatographie en couche mince1 Los 45,5 gr sont chauffés avec 500 ml d!acétonë et la matière vin- aire est enlevée par filtration. Celle-ci se révèle comme 6' ant de la-trityl ara-cytidine. Les liqueurs mères d'acétone sont, tva-10 porées à sec et cristallisées dans le chlorure de méthylène pur. évaporation lente, ce qui donne 19 gr de produit. Le rendement total est donc de 126 gr de produit ou de 43% du rendement théorique. Un échantillon est préparé pour analyse 'en le cristallisant deux fbis dans le chlorure de méthylène. 15 Analyse : Calculé pour c3^28*"**"3^3°7 : C: 56,30; H; 4,27; .Cl: 16,11; N: 6,36 Trouvé : C: 56,46; H: 4,30; Cl: 15,25; N: 7,26 Spectre ultraviolet /^Et0H m;x ( îo-3)/.- 232 (11,8), 296 (5,38). v H13JK ^ — Spectre infrarouge ('/pâte) : 3380, 3200, 3120 (ép)-, 1765, 1650, 20 1620, 1570, 1505, 1330, 1245, 1200, 1100 m, 1085, 1065, 810, 785, 770, 750,'740, 715 et 705. I . 4 EXEMPLE 2 - Préparation de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine 0 • ^>a°T°N ' Tï>0^ $ W - \... 3° . ÔH , - HOAC à 80% ^ Une quantité de 116,2 gr (0,175 M) de N —trichloroéthoxy- carhonyl-5'-O-trityl ara-cytidine est traitée avec 1 litre d'acide acétique à 80% (volume/volume) pendant 48 heures à 25°, Le mélan- 35 ge dépose de la matière cristalline contenant du trityle au cours de cette période,laquelle matière est enlevée par filtration. Le filtrat est évapore à sec sous vide et les dernières tracesc?acide ' sont enlevées par codistillation sous vide avec plusieurs portions O O IÏHC0CH2CC13 r NHC0CH2CC1 BAD ORIGINAL 28 70 19441 2051563 d'éthanol. Le résidu vitreux est cristallise dans l'étham ' , donne 62,5 gr de produit. Ces matières se révèlent par a: • RMN comme contenant de 10 à 15% de triphényl méthyl carbino' de son éther éthylique. Le composé est purifié pour l'analy:;, • 5 chromatographie sur gel de silice, en élvaant avec du cycle-:-..; . acétate éthyl-éthanol (5/3/1) et en cristallisant ensuite dar.-.-; chlorure de méthylène. Analyse : Calculé pour : : C: 34,43; H; 3,37; Cl: 25,41; N: 10,04 . 10 Trouvé : C: 34,59; Iï: 3,61; Cl: 24,82; N: 9,99 Spectre infrarouge ) : 3400, 1765, 1640, 1575, 1510, 133' 1275, 1235, 1195, 1120, 1105, 1070, '1055, 1035, 810, 745. Spectre ul 296 (8,3). Spectre ultraviolet / A ( £ x 10 3)/: 212 (21,8), 239 (l--,?), ~ » ÏTl3.X 4 15 EXEMPLE 3 - Préparation de 51-O-pivaloyl-N -trichloroethoxycarbonyl ara-cytidine 20 î S nhc0ch2cc13 nhc0ch2cc13 HOÇH2 o (f (CH_) C-CC1 25 pyridrne 4 Un échantillon de 4,18 gr (10 Kimoles) de N -trichloroethoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec 1,32 gr (1,4ml s 11 mmoles) de chlorure de pivaloyle dans 10 ml 30 de pipidine à 25°C. La chromatographie en couche mince /gel de silice; cyclohexane-acétate d1éthyle-éthanol (5/3/1)^/montre que la réaction n'a pas progressé d'une façon significative après 48 heures. De-la sorte, on ajoute encore 1,32 gr (11 mmoles) de chlorure de pivaloyle dans 10 ml de pyridine et ensuite on. laisse la réac-35 tion au repos encore pendant 24 heures . La chromatographie ci: couche mince indique qu'il reste un peu de matière de départ. Le mélange réactionnel est versé dans 60 ml d'eau et le mélange est évaporé géec sous vide. Les dernières traces de pyridine sont en- BAD ORte'NAL 29 70 19441 205Î563 levées par codistillation plusieurs fois avec du toluène z.-.\ . : Le résidu est dissous dans le chloroforme et lavé avec de du chlorure de sodium saturé et séché sur sulfate de sodium. Ic-chloroforme est distillé sous vide et le résidu est cristallir.à 5 dans- l'acétone en donnant 1,75 gr de produit. A la place du chlorure de pivaloyle, on peut utiliser ce-l'anhydride de pivaloyle comme agent de pivaloylation dans l'échantillon ci-dessus. A la place du chlorure de pivaloyle, on peut y substituer lO du chlorure d ' isobutyryle ou du chlorure de f5-chloropivaloyle, en 4 produisant ainsi respectivement de la 5!-Q-xsobutyryl-N -trichloro-éthoxycarbonyl ara-cytidine et de la 5'-0-(3-chloropivaloyl-îr~-trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine. EXEMPLE 4 - Préparation de 5'-O-pivaloyl ara-cytidine 15 O it NHCOCII _CC1 • 23 O 20 .1 (CH3)3C£OÇHe ^-11 (CH3)3CCDÇH2 Zn -îs> HOAc Un échantillon de 1,50 gr (3,0 mmoles) de 5'-0-pivaloyl- 4 . 25 N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est traité avec 25 ml d'acx de acétique à 90% (vol/vol) et 2,0 gr (31 mmoles) de poussière de zinc , et le mélange est agité pendant environ 18 heures à 25°C. Le mélange réactionnel est e'nsuite filtré et lè filtrat'est évaporé à sec sous vide. Le résidu est 4 en substituant à la matière de départ, de la 5'-0-isobutyryI-Nx~ trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine et de la 58-0-p-chloropiva- BAft ORÎGfNAL 70 19441 A 30 2051563 loyl-N-1-trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine, ce qui donne . c- tivement de la 5'-O-isobutyryl--ara-cytidine et de la 5*-0-: ropivaloyl ara-cytidine. . À la place du chlorure de pivaloyle dans 1° exemple 3, on 5 peut y substituer du chlorure de 7eensoyle pour former la 5 ' -C-4 benzoyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine qui peut être substituée dans le procédé de 11 exemple 4 ci-dessus pour fermoir de la 58-O-benzoyl ara-cytidine EXEMPLE 5 - Préparation de chlorhydrate de 5'-O-benzoyl cytesine arabinoside On dissout 65 gr de 5'-O-benzoyl cytosine arabinoside dans 250 ml de méthanol avec l'aide de 19 ml d'acide chlorhydrique concentré. De 1'éther (500 ml) est ajouté jusqu'à opalescence. Le chlorhydrate cristallise rapidement . Il est recueilli, lavé avec 15 du méthanol-éther (1/2) ,avec de 1'éther et séché; on obtient ' 60,5 gr de produit, point de fusion 204-205°C avec décomposition. De l'êther est ajouté à la liqueur mère jusqu'à opalescence . La seconde récolte est recueillie, lavée à l'êther et séchée ;on obtient 6g5 gr de produit , point ôb fusion de 200-201°C avec décom-20 position (rendement total de 67 gr, 98,5%). EXEMPLE 6 - Préparation de 5'-0-palmityl ara-cytidine 25 hqch; 0 l! NHC0CH_CC1_ . 2 3 ? CH (CH.) 2'14 O CH3 (CH2) 14CC1 pyridine 30 35 Zn HOAc NHC0CH_CC1_ 2 3 CH3(CH2}14eDîH2/0 4 bad orîgfnal 70 ,W" " 2051563 4 Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine redistillée anhydre et est traité goutte à goutte à la température ambiante avec 3,0 gr (11 mmoles) de chlorure de palmityle disso.ia 5 dans 10 ml cfe chlorure de méthylène. Après un repos de 18 heures à 25°C, le mélange réactionnel est versé dans 60 ml d'eau et le solvant est distillé sous vide jusqu'à ce qu'il en reste 10 ml. Une matière semi-solide se sépare et est obtenue par décantation suivie d'un lavage avec de l'eau. La masse résultante est cristal- 10.lisée dans le méthanol, ce qui donne 5,5 gr de matière qui est 4 presumee être de la 5 '-0-palmityl-N -trichloroéthoxycarbonyl r.rc-cytidine sur la base de sa conversion en le produit désiré. Cette matière est dissoute dans 100 ml d'acide acétique à 90% et traitée avec 10 gr de poussière de zinc. La réaction est agitée pendant 15 6 heures à 25°C . Le zinc restant est enlevé par filtration et le filtrat est évaporé à sec sous vide. Les dernières traces d'acide acétique sont enlevées par codistillation répétée sous vide avec de lléthanol. Le résidu est ensuite chromatographié sur 100 gr de gel de silice, tassé et élué avec du cyclohexane-acétate d'éthyle-20 éthanol (5/3/1). Après avoir pris 10 fractions de 100 ml, le solvant Utilisé est cfe hméthyl éthyl cétone-acétone-eau (72/20/8) et 10 autres fractions de 100 ml sont prises. Les fractions 14 à 20 sont combinées et évaporées à sec. Le résidu est cristallisé dans le méthanol ,ce qui donne 870 mgr de produit de point de fusion de 25 139-141°C. Un échantillon est soumis à l'analyse après deux nouvelles cristallisations dans le méthanol, point de fusion de 143-146°C. Analyse;: Calculé pour C2^H^3N30g: Ç: 62,34; H: 9,00; N: 8,7-2 30 Trouvé : C: 62,86; H: 9,19; N: 8,47, 8,72 Spectre ultraviolet / /\ Et0H mjJ- (£x 10 3)/ : 273 (8,30). Spectre infrarouge (Y , ; 3430_ 3330_ 328Q (.p)^ 1?40> 1665 (ép), 1635, 1600, 1535, 1495, 1485, 1290, 1255, 1195, 1175, 1110, 1095, 1040,.860, 790, 785, 780. 35 Spectmë RMN : confirme la structure proposée. EXEMPLE' 7 - Préparation de .chlorhydrate de 5'-O-palmityl cyto-sine arabinoside On dissout 55 gr (0,114 mole) de 5'-palmityl cytosine ara- BAD ORIGINAL 70 19441 32 2051563 binosi.de dans un mélange de 350 ml de méthanol et de 10,5 d'acifb chlorhydrique concentré. La solution est diluée avec l'êther jusqu'à ce qu'il s'ensuive une cristallisation, et î: est ensuite à nouveau diluée jusqu'à 4 litreà avec de l'éther. Le chlorhydrate cristallin est recueilli, lavé à l'êther et Rendement de 53,8 gr (91/4), point de fusion de 180-182 °C. • >; EXEMPLE 8 - Préparation de 5'-0-octanoyl ara-cytidine 10 h 0ch2 15 O II NHCOCI^CCl nhcoc:i c ch3(ch2) 0 CH_ (CH ) CCI .3 2 6 pyridine Zn ch {ch ) j.qch 20 HOAc x En utilisant de l'acide sulfurique, phosphorique, glutamique, di-hydroxytartarique, trihydroxybenzoîque ou formique dans les pro- cessus ci-dessus, il en résulte le sel correspondant. 4 25 Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroétho xycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine redistillée anhydre et là solution résultante est traitée goutte à goutte avec une solution de 1,8 gr (11 mmoles) de chlorure d'oc-tanoyle dans lO ml de chlorure de méthylène. Le mélange réaction- 30 nel est agité pendant 18 heures à la - température ambiante e.t il est ensuite versé dans 60 ml d'eau. Le solvant est réduit en volume jusqu'à environ 10 ml par distillation sous vide. Lës liqueurs mères sont décantées du solide qui se sépare . Le solide est lavé avec de l'eau, filtré, séché et cristallisé dans le tué- 4 35 thanol ,ce qui donne 3,5 gr de 5'-O-octanoyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine. Cette matière est dissoute dans 50 ml d'acide acétique à 90% et la solution est traitée avac 5 gr de poussière de zinc. Après avoir secoué le mélange, r. .ctionnel bad original 70 19441 33 2051563 pendant 5 heures ^25°C, le zinc solide est enlevé par filti .. .ion et le filtrat est évaporé à sec sous vide. Les dernières tï.-.cos d'acide acétique sont enlevées par distillation sous vide avec plusieurs portions de méthanol. Le résidu est chromatographie r 5 100 gr de gel de silice, tassé et élué avec de la méthyl éthyl cc- tone-acétone-eau (72/20/8). Des fractions d'un volume de 100 ;r.l sont recueillies. Les fractions 4 à 8 sont combinées et évaporées • à sec . Le résidu est cristallisé dans le méthanol, ce qui donne 1,2 gr de produit de point de fusion de 161,5-162,5°C. Un échan- lO tillon est soumis à l'analyse après une autre cristallisation dans le méthanol aqueux, point de fusion de 124-125°C.Le changement de point de fusion reflète apparemment un changement dans l'état d'hydratation ou un changement dans la structure cristalline car la chromatographie en couche mince indique que la matière n'a pas 15 changé . Analyse : Calculé pour C1_H N O H O JL / /. J 3 o ^ C: 52,69; H: 7,55; N: 10,85 Trouvé : C: 52,81; H: 7,97; N: 11,32 x 10~3)/: 274 (8,15). Spectre ultraviolt /~/\m|X ( £ 20 Spectre infrarouge ) : 3530, 3480, 3450, 3390, 3320, 3280, 3210, 1725, 1710, 1655, 1630, 1530, 1490, 1280, 1240, 1195, 1175, 1130, 1115, 1100, 1090, 1050, 1040, 810, 780, Spectre RMN : confirme la structure proposée. * Les processus des exemples 5-6 peuvent être suivis, en 25 substituant du chlorure de stéaroyle et du chlorure d'oléoyle aux agents d'acylation des exemples, ce qui donne respectivement la 5*-0-stéaryl ara-cytidine et la 5'-0-oléyl ara-cytidine. EXEMPLE 9 - Préparation de 5'-O-acétyl ara-cytidine 30 35 0 ii nhcoch2cc13 .HOÇHs/0 ch3coch2 AcgO pyrî di ne > 0 IL nhcoch2cc13 BAD ORIGINAL 34 70 19441 2051563 nh2 5 HOAc Zn > O1 oh 4 Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroéthc- 10 xycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution résultante est traitée goutte à goutte avec 1,03 gr (10 mmoles) d'anhydride acétique. Le mélange réactionnel est agité à 25°C pendant 18 heures, il est ensuite versé dans 60 .ml d'eau et il est évaporé à sec. Le résidu est 15 chromatographie sur 100 gr de gel de silice et élué avec du cyclo-hexane-acétate d'éthyle-éthanol (5/3/1). Les fractions contenant la matière avec un Rf seulement légèrement plus rapide que la matière de départ sont combinées et évaporées à sec. La cristallisation du résidu donne 1,05 gr de matièr^qu'on croit être de la 20 5-0-acétyl-N^-trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine sur la base de sa conversion ultérieure en 5'-O-acétyl ara-cytidine. Cette matière est dissoute dans 50 ml d'acide acétique à 90% (vol/vol) et la solution est traitée avec 1,0 gr de poussière de zinc. Le mélange réactionnel est secoué' pendant 6 heures à 25°C . Lessolidesde zirc 25 restant sont ensuite enlevés par filtration et le filtrat est évaporé à sec sous vide.La gomme résiduelle est exempte-de traces d'acide acétique par codistillation "sous vide avec plusieurs portions d'éthanol. Le résidu est chromatographie sur 100 gr de gel de silice, tassé et élué avec du cyclohexane-acétate d'éthyle-éthanol 30 (5/3/1). Le solvant utilisé est de- 3améthyl éthyl cétone-acétone-eau (72/20/8). Les fractions contenant les produits désirés sont combinées et évaporées à sec. La matière est ensuite rechromato-graphiée sur 50 gr de gel de silice comme décrit ci-dessus. Les fractions provenant de cette colonne qui contient la matière dési-35 rée, sont combinées et évaporées à sec. Le résidu est cristallisé dans du méthanol aqueux-benzène, ce qui donne 300 mgr de produit de point de fusion de 115-117 ; 5°C. 70 19441 35 2051563 Calculé pour C, _ II^ ,_N O 1/2 H„0 ; 11 15 3 6 2 Trouvé C: C: Spectre ultraviolet //} m!-!. max Analyse 44,90; H: 5,48;• N: 14,28 45,13; H: . 5,95; N:- 14,55 (£ s lO-3)/: 273 (8,65). 3400, 3340, 3210, 1745, 1660 ôp,, 1640, 1610, 1535, 1490, 1280, 1255 ëp., 1245, 1230, 1105, 1COO, 1070, 1050, 810, 780, 690. Spectre RMN : confirme la structure proposée* EXEMPLE 10 - Préparation de 5'-O-(2,4,6-triméthylbenzovl)ara- 5 Spectre infrarouge (y 10 15 cytidine 0 NHCOCHaCCls HOÇHs ch3-/Ôn) ch. ch (J ^CH- • OCH CH. .-©r- Cl 0 I! nhcoch;;ccîa 20 ■ch. pyr id ine ch. ' ^ 0 ch. 25 Zn HOAc o-= -OCH h. Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine redis-30 tillée anhydre et la solution résultante est traitée goutte à cputte avec 2,0 gr (11 mmoles) de chlorure de 2,4,5-triméthylben-zoyle -dissous dans 10 ml de chlorure de méthylène» Après 3 jours à 25°C, une chromatographie en couche mince indique que de la matière de-départ est encore présente. De la sorte, on ajoute encore 35 2,0 gr de chlorure, de 2,4,6-triméthylbenzoyle et on laisse la réaction au repos pendant encore 25 heures à 25°C.Le mélange réactionnel est ensuite versé dans de l'eau et il est évaporé à sec sous vide. Le résidu est chromatographié sur 100 gr de gel de silice, BAD ORIGINAL. 70 19441 36 /U 2051563 Le produit est élué avec du méthanol-benzène (5/95) . Les fractions contenant la matière avec un Rf qui n'est que légèrement plus rapide que la matière de départ sont' combinées et évaporées à sec. Le résidu est cristallisé dans le méthanol, ce qui donne 2,0 gr de 4 5 matière qu'on croxt être de la N -trichloroéthoxycarbonyl-5'-G- (2, 4,6-triméthylbenzoyl) ara-cytidine sur la base de sa conversion en 5'-O-triméthylbenzoyl ara-cytidine, point de fusion de 122-125°C (décomposition). Cette matière est dissoute dans 50 ml d'acide acétique à 90% (vol/vol) . La solution est traitée avec 2 gr de 10 poussière de zinc et elle est secouée pendant 6 heures. Les solides contenant du zinc sont filtrés du mélange réactionnel et le £il: trat est évaporé à sec sous vide. Le résidu est* chromatographié sur 100 gr de gel de silice, en éluant avec des mélanges de méthanol-benzène (5/95) jusqu'au méthanol pur. La matière désirée se 15 trouve dans les fractions au méthanol , lesquelles fractions sont ensuite combinées et évaporées à sec. Le résidu est cristallisé dans le mé^thanol , ce qui donne 670 mgr de 51-0-(2,4,6-triméthylbenzoyl) ara-cytidine, point de fusion de 252-253°C (décomposition) . Un échantillon cristallisé encore une fois dans le 20 méthanol est soumis à l'analyse, point de fusion de 255-256°C (décomposition) . - - ' Analyse : Calculé pour c^9Hx3N3°6* H2° : C: 57,28; H: 6,07; N: 10,55 Trouvé ; C: 57,15; H: 6,34; N: 10,86 25 Spectre ultraviolet / ^ 10 3)/: 273 (9,40). Spectre infrarouge (y 3430 ép., 3400, 3340, 3280, 3210, 3120, 1720, 1695, 1655, 1635, 1625, 1535, 1490, 1285, 1175, 1120, 1115, 1095, 1070, 1055, 810 et 780. Spectre RMN : confirme la structure proposée. 30 L'utilisation comme agent acylant de chlorure de p-riitro- benzoyle,chlorure de o-toluoyle, chlorure de benzoyle, chlorure de 2 g 6--dirnéthylbenzoyle, chlorure de 2,4,6-triméthylbenzoyle, chlorure de 1-fluorène carbonyle, chlorure de p-anisoyle, chlôrure de 3,4,5-triméthoxybenzoyle, chlorure de p-toluoyle, chlorure de 35 cyclohexane carbonyle, chlorure de picolinyle, ou de chlorure de 2-thiophène carbonyle, produit respectivement les 5'-O-p-nitroben-zoyl ara-cytidine, 5'-0-o-toluoyl ara-cytidine, 5'-0-benzoyl ara-cytidine, 5'-0-2,6-diméthylbenzoyl ara-cytidine, 5'-0-2,4,6-tri- 70 19441 37 /U 1 - 1 2051563 méthylbensoyl ara-cytidine, 5:-0~l-fluorène carbonyl ara-cytidine, 5*-0-p-anisoyl ara-cytidine, 58-0-3,4,5-triméthoxybenzoyl ara-cytidine, 5'-O-p-toluoyl ara-cytidine, 5"-O-cyclohexane carbonyl ara-cytidine, 5'-O-picolinyl ara-cytidine et 5°-0-2-thiophène car-5 bonyl ara-cytidine,, EXEMPLE 11 - Préparation de 5=-O-adamantoyl ara-cytidine De la 5*-0-trityl ara-cytidine (2,42 gr, 5,0 mmoles) est dissoute dans 50 ml de pyridine redistillée et refroidie dans un bain de carfeoglace et d5acétone jusquBà ce qu'une pâte se forme. 10 La pête est traitée avec du chlorure de [3, «8, p-trichloroéthoxycar-bonyle (TCEC) (3,2 gr, 15 mmoles). Le mélange est agité à fond eton le laisse ensuite reposer à 0°C pendant 20 heures. Le mélange réactionnel est chauffé jusqu'à 25°C et il est maintenu à cette température pendant 4 heures. La-pyridine est distillée à une tempéra-15 ture inférieure à 40°C sur un rotavapeur. La gomme résiduelle est dissoute dans 100 ml de chlorure de méthylène et lavée 4 fois avec de l'acide chlorhydrique O,IN. La couche au chlorure de méthylène est séchée (Na^SO^) et distillée» La gomme résiduelle est traitée avec 200 ml d'acide trifluoroacétique à 1% dans le chloroforme 20 pendant 2 heures à 25°C pour enlever le groupe trityle. La solution au chloroforme est évaporée à sec et la gomme est dissoute dans de la pyridine et traitée avec du chlorure d"acide adamantane-1-carboxylique (chlorure de 1-adamantane carbonyle) (1,0 gr, 5 mM). La solution est chauffée jusqu'à 50°C et elle est maintenue à 25 cette température pendant 24 heures. La pyridine est distillée au„ un rotavapeur et le résidu est dissous dans 100 ml de chloroforme. La solution chloroformique est lavée avec 200 ml d'eau, 200 ml de bicarbonate de sodium à 4% et deux fois avec 200 ml d'eau. La solution chloroformique est séchée (^2^0^) et distillée :.au _ ro-30fcavapeur. Le résidu est dissous dans 25 ml d3 acide acétique à 90% auquel on ajoute 2 gr de poussière de zinc. Après un repos de 2 heures à la température ambiante, le mélange est filtré et le filtrat est distillé. Le résidu est dissous dans une quantité minimum de chloroforme et absorbé sur une colonnë de 300 gr de gel 35 de silice. Le produit désiré est élué avec du chloroforme-méthanol-acide acétique (80/20/1). La matière est cristallisée dans le méthanol ,ce qui donne 250 mgr de produit. bad original y - j.--- *> 70 19441 38 EXEMPLE 12 - Préparation de chlorhydrate de 5 cytosine arabinoside 42 gr de 5 '-O-adamantoyl cytosine arabinoside sont n;'.;.- «ne cristallisation rapide et le mélange est dilué jusqu'à- 1 Ir. vr avec de l'êther.Le produit cristallin est recueilli ,-lavê à 1' et séché , son poids est de 32,9 gr et son point de fusion de 245°C avec décomposition., La liqueur mère est concentrée et on 10 obtient une seconde récolte, poids de 3,5 gr, point de fusion do 241°C avec décomposition(rendement total = 36,4 gr, 79%). En substituant, comme agent acylant, les chlorure; de 1-norborane carbonyle, chlorure de 2-adamantàne carbonyle, chlorure de 1-adamantaneacétyle, chlorure de ot-chloro-3,5,7-triméthyl-l-15 adamantane acétyle, et chlorure de 2-qùinuclidine carbonyle, on obtient respectivement les l.-norbornane carbonyl ara-cytidine, 51 -0-2-adamantane carbonyl ara-cytidine, 5'-0-1-adamantane acétyl ara-cytidine, 5'-O-a-chloro-S,5,7-triméthyl-l-adamantane ara-cytidine et 5 B-0-2-quinuclidine carbonyl ara-cytidine. 20. EXEMPLE"13 - Préparation de 53-0-(p-toluènesulfonyî ara-cytidine NHTCEC - - NHTCEC 25 CH, hoçha/0 i-Q-®0— i. TSCl pyridine 30 35 zinc meOH -> BAD ORIGINAL -- m 70 19441 4 . Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec 2,85 gr de chlorure de p-toluènesulfonyle (15 mmoles) dissous 5 dans 10 ml de pyridine. Le mélange réactionnel est laissé au repos à la température ambiante pendant le weekend, il est ensuite versé dans 60 ml d'eau et concentré à sec à 50°C sur un évaporateur rotatif. La gomme brute est ensuite dissoute dans 50 ml de méthanol et on y ajoute 5 gr de poussière de zinc. Le mélange réactionnel 10 est ensuite chauffé jusqu'à ébullition pendant 15 minutes. On réalise un contrôle par une chromatographie en couche mince et celle-ci n'indique aucune trace de matière de départ. Le zinc est filtré et la préparation est concentrée à"sec. Le résidu est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice tassée avec du 15 cyclohexane, de l'acétate d'éthyle , de l'alcool éthylique à 95% (5/3/1). La colonne est éluêe avec 1 litre de ce même solvant„ Ce solvant n'élue que la matière qui se déplace le plus vite, et cette matière est écartée. La colonne est ensuite éluée avec 15 fractions de 100 ml de méthyl éthyl cétone, d'acétone et d'eau 20 (72/20/8). Les fractions 5 à 10 contiennent ce qui apparaît comme étant le produit désiré. Ces fractions se déplacent un peu plus lentement que la matière de départ sur chromatographie en couche mince, et elles sont•combinées et cristallisées dans du méthanol. Rendement de 950 mgr, point de fusion de 158-168° (décomposition 25 à 195°C). Un échantillon est recristallisé dans le méthanol pour analyse, point de fusion de 171-174°C. Analyse : Calculé pour ci5Hig°-7N3's : C: 48,36; H: 4,82; N: 10,57; S: 8,04 Trouvé : C= 48,46; H: 5,25; N: 10,49; S: 8,13 30 Spectre ultraviolet /^ ^°H , (£ x i0~3)/: 224 (19,7); 269 ép. , (8,60); 273 (8,95). Spectre infrarouge (7 ): 3480, 3330.ép., 3280 ép., 3240 ép., 3210 ép., 1650, 1615, 1560 , 1535, 1500, 1360, 1355, 1290, 1195, 1175, 1070, 1040, 980, 835, 820, 800, 785, 665. 35 Le spectre infrarouge est celui du sulfonate. EXEMPLE 14 - Préparation de 5'-O-cyclobutyl carbonyl ara-cytidine 39 2051563 bad onieiN/yf 40 70 19441 2051563 NHTCEC " NZiiÀ. •: OH / 4 Un-échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de N -trichloroétho- ' xycarbonyl ara-cyfcidine est dissous dans 50 ml de pyridine anhydre 20 fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte à la température ambiante avec agitation avec 4,0 gr (environ 22 mmoles) d'anhydride d'acide cyclobutanecarboxylique dans 10 ml de CH0Cl . Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à la tem-& 2. » ■ pérature ambiante pendant la nuit et une chromatographie en couche •25 mince est réalisée sur le mélange réactionnel brut dans la matinée La chromatographie en couche mince montre encore quelques traces de matière de départ, aussi la préparation est chauffée à 50°C dans un bain d'eau pendant 3 heures. La chromatographie en couche mince (TLC) reste inchangée ,aussi le mélange réactionnel est ver-30 sé dans 300 ml d'eau et êst concentré à sec à 50°C sur l'évapora-teur rotatif» Le résidu est ensuite dissous dans CH^Cl^ et il est lavé une fois .avec du bicarbonate saturé, deux fois avec de l'eau A ce moment, il y a un amas de précipité dans la couche de C^Cl^ . Celûi-ci est filtré et lavé avec une petite quantité 35 de . Rendement de 3,4 gr. Cette matière montre une tache majeure sur TLC avec une trace de la matière de départ qui se déplace plus lentement. La solution de CH^C^ (les liqueurs-mères) •contient trois taches se déplaçant plus rapidement,une trace du 70 19441 41 2051563 solide cristallin plus la matière de doDart. Los cristallin sont dissous dans 100 ml de méthanol et c'r.nuf qu'à ébullition avec 3,5 gr de poussière de zinc pendant .!>' tes au bain de vapeur. TLC ne révèle aucune trace do r.;atièr 5 cëpart laissée à ce momen -LJVJ me esc séparé nai solution de méthanol est concentrée à sec à : rotatif. Le résidu clair est ensuite absorbé :rar. coj onr 200 gr de gel dg s: „ice cassée avec de la Kiéthvl étnvl cé l'acétone et de l'e-au (72/20/8) et la colonne dst élues 10 fractions de 50 ml du mê-r.e solvant. En se basant obtenus en TLC, les fractions 13 sont coinbin! ir les res; recr xt: lisées dans 1"acétone. Rendement de 1,045 gr. Recristallisé c l'acétone pour l'analyse,, un échantillon- a un point de fus;- or. 200,0-200,5°C. La chromatographie en couche mince.-ést la mêr/.r-15 celle obtenue pour la matière de la première récolte. Analyse : Calculé pour C, JI,_0,N_ JL4 J.7 6 3 C: 51,68; H: 5,39; N: 12,92 Trouvé : C: 51,29; H: 6,13; N: 13,25 Spectre ultraviolet /ps ^2/s ^30 ép„ , (7,90); 20 273 (9,00). Spectre infrarouge (y ) s 3440, 3330, 3260, 3210, 1700, 1655^ 1635, 1600, 1525, 1295, 1255, 1105, 1135, 1105, 1050, 810. Le spectre ultraviolet, le spectre infrarouge' et le spectre RMïî t sont ceux de la structure proposée. 25 EXEMPLE 15 - Préparation de 5'-O-(p-anisoyl)ara-cytidine NHTCEC O ; CH3° -o-* -0Ç H2 30 H0ÇH2/O 35 Zinc MeOH BAD ORIGINAL 70 19441 " 2051563 J Un échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de ii ' - trichi :i zhc" xycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 rai de pyridine -rJn-fire fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec agitation à la température ambiante avec 3.75 gr (22 mmoles) 5 de chlorure d ^anisoyle dans 10 ml de CH^Cl^. Le mélange réactionnei est laissé sous agitation à la température ambiante pendant la nuit et une plaque pour TLC est réalisée sur le mélange brut clans la matinée. La chromatographie en couche mince montre encore quelques traces de matière de départ „ La préparation est chauffée jus-10 qu*à 50°C au bain-marie pendant 3 heures. La chromatographie en couche mince est inchangée, aussi le mélange réactionnel est versé dans 30 ml d'eau et est concentré à sec à 50°C sur un évaporâteur rotatif,, Le résidu est dissous dans CHgCl^ et il- est lavé une fois avec 100 ml de" bicarborate saturé, une fois avec H^O et il est 15 séché sur sulfate de sodium. La solution de CB^Cl^ est ensuite absorbée sur une colonne de 200 gr-de gel de silice et éluée avec 20 fractions de 50 ml de cyclohexane, d:acétate d'éthyle et de EtOH à 95% (5/3/1). En se basant sur les résultats de TLC. les fractions 10 à 18 sont combinées dans du méthanol (100 ml ) et traitées 20 avec 4 gr de poussière de zinc pendant 15 minutes à reflux" au bain de vapeur. TLC à cet instant ne montre aucune trace de matière de départ, aussi la solution est filtrée pour être exempte de zinc et la préparation est concentrée à sec au rotavapeur. Le résidu est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gèl de silice tassée 25 avec de la méthyl éthyl cétone , de l'acétone et de l'eau et éluée avec 20 fractions de 50 ml du même solvant. En se basant sur le résultat de TLC, les fractions 10-16 sont combinées et recristallisées dans le méthanol. Rendement de 795 mgr, point de fusion de 225-227°C (décomposition). Recristallisé dans le méthanol, un 30 échantillon pour analyse a un point de' fusion de 225-227°C (décomposition) . Analyse : Calculé pour ci7H^gO n C: 54,11; H: 5,08; N? 11,14 Trouvé : C: 53,95; H: 4,81; N: 11,09 35 Spectre ultraviolet /^^x*1 ' ^)/: ^58 (14,50); 271 léger ép. (19,20); 278 léger ép. (13,00); 283 léger ép. (4,90). Le changement dans l'absorption principale est dû au groupe BAD ORIGINAL 70 19441 43 2051563 o ii CH^O-^p-C-CH au légers épaulements 278 et 283. Le spectre -.rl i.r violet confirme la structure proposée. Spectre infrarouge (Y ^"5 ) ? 3420, 3310, 1720, 1665, 1630,1.'-:: 5 1530, 1510, 1490, 1275, 1250, 1170, 1100, 1035, 850, 825, 7lV ... : 770. Les spectres RMN et infrarouge sont ceux de la structu:-:' proposée. EXEMPLE 16 - Préparation de 5'-0-cyclohexylcarbonyl ara'-çy t ic;ino 10 NHTCEC NHTCEC 15 O O' •OC h'2 20 Zinc {^y~c —0ÇH2 MeOH 25 Un échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de N -trichloroétho xycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ral de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec agitation et à la température ambiante avec 3,22 gr (environ 22 mmoles) de chlorure de cyclohexane carboxylique dans 10 ml de 30 Œ^C^ . Le chlorure est obtenu en chauffant à reflux de l'acide cyclohexane carboxylique dans du chlorure de thionyle, en enlevant le chlorure de thionyle au rotavapeur et en distillant le chlorure qui a un point d'ébullition de 180-181°C. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à la température ambiante pendant la nuit. 35 Une TLC est réalisée sur le mélange brut dans la matinée. La TLC montre encore quelques traces de matière de départ, aussi la préparation est chauffée jusqu'à 50° au bain-marie pendant 3 heures. Le mélange réactionnel est versé dans 30 ml d'eau et est concentré BAD yj 70 19441 44 2051563 à sec à 50°C au rotavapeur. Le résidu est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice, et élué avec 25 fractio:..s ùo 50 ml de cyclohexane, d'acétated'éthyle et de EtOH à 95% (5/3/1), La colonne est tassée avec le même solvant. Bes TLC sont réalisées 5 sur -les fractions 5 à 14 et sur la fraction 23. En se basant sur les résultats des TLC, les fractions 6 à 11 sont combinées. 3,387 gr dans 100 ml de méthanol sont traités avec 4 gr de poussière de zinc à reflux pendant 15 minutes-. La TLC ne montre aucune trace de matière de départ à ce moment. Le zinc est séparé par filtra- 10 tion et le filtrat est concentré à sec à 50°C au rotavapeur. Le résidu est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de si- lise tassée avec de la méthyl éthyl cétone, de l'acétone et de l'eau (72/20/8) et élué avec 20 fractions de 50 ml du même solvant. En se basant sur les résultats des TLC, les fractions 10 à 14- sont 15 combinées et recristallisées dans du méthanol-acétone. Rendement de 1,384 gr, le point, de fusion suinte à 206°C, décomposition à 229°C (une tache par TLC). Un échantillon pour analyse de 100 mgr recristallisé dans le même solvant , suinte à environ 210°C et se décompose à 231°C. 20 Analyse : Calculé pour C,„H„_0„N_.1/2 H_0 16 23 6 3 2 C: 53,03; H: 6,68; N: 11,60 Trouvé ; C: 52,85; H: 6,66; N: 11,95 Spectre ultraviolet / , (£ x 10~3]_/: 315 léger ép. (10,20) ; 230 ép. (7,65); 273 (8,75). 25 Spectre infrarouge (y ) : 3420, 3340, 3210, 1735, 1715, 1655, 1640, 1625, 1530, 1490, 1285, 1245, 1200, 1180, 1110, 1095, 1055, 815 et 780. Le spectre ultraviolt soutient la structure proposée. Les spectres RMN et infrarouge sont ceux de la structure proposée. 30 EXEMPLE 17 - Préparation de 5 '-O-p-chloropivaloyl ara-cytidine NHTCEC NHTCEC I ÔH OH BAD ORIGINAL 70 19441 2051563 ■CH„Cl ! 2 MeOH OH f 4 Un échantillon de 8, 36 gr '20 ramolec) de N -1 r icfc lor oo ^ -10 xycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ail de pyridine crJv\,re fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec agitation à température ambiante avec 3,4 gr (environ 22 mmoles) de chlorure d'acide ,5-chlorcpivalicjue. Le chlorure esr obtenu en chauffant au reflux de l'acide P-chloropivalique t'/.l'"."ich) 15 dans un excès de chlorure de thionyle ,en séparant par distillation le chlorure de thionyle, ensuite le chlorure d8acide de peint fusion de 158-160°C. Après 13 heures à la température ambiante, on observe encore de la matière de départ sur chromatographie en couche mince. Une nouvelle quantité de 3,4 gr du chlorure dEacide 20 est ajoutée dans 10 ml de CK^Cl^. Après 4 heures a la température ambiante, la TLC est toujours pratiquement inchangée. Le mélange réactionnel est chauffé au bain de vapeur pendant 5--10 minutes. Une TLC à ce moment ne révèle qu'une trace œ la matière de départ. La préparation est versée dans 60 ml d'eau et est concentrée à sec 25 au rotavapeur à 50°C. Le résidu est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice tassée avec du cyclohexane, de 3'acétated'éthyle , du EtOH à 95% (5/3/1) et élué avec 20 fractions de 50 ml du même solvant. Les fractions 6 à 20 sont délayées dans une petite quantité de méthanol, filtrées et lavées avec 10-15 ml 30 de méthanol froid. Cette matière se révèle comme ayant une tache majeure par TLC avec une trace de matière se déplaçant plus rapidement et une trace de la matière de départ.Le rendement est de 6,85 gr. Cette matière rc dissoute dans 100 ml de méthanol et elle est chauffée à reflux avec 7 gr de poussière de zinc pondant 35 15 minutes. La TLC montre aucune trace de matière de départ, aussi le zinc est séparé par filtration, lavé avec du méthanol et le filtrat est concentré à sec à 50°C à lsévaporateur rotatif. Le- ré-sidu est absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice et / • 3AD QBK3INAL 70 19441 46 2051563 élué avec 25 fractions de 50 ml do.méthyl éthyl cétcno, d! et de 11^0 (72/20/8). Des TLC sont réalisées sur les fraet , . cristallines 11, 15 et 21. En se basa t sur les résultats :-?.r C; 46,48- H: 5,57; H; 11,61; Cl; 9£ 80 C; 46,42; H: 5,68; N: 11,46; Cl: 10,16 Spectre ultraviolet / p\ rouve J.D ,lx . (tx 10 3).7'- 216 léger ép. (10,20) ; 229 ép. (7,90); 273.(9,05). Spectre infrarouge (y ): 3410, 3440, 3340, 3260, 3220, 1730, cm 'i 1655, 1635, 1600, 1565, 1525, 1485, 1300, 1255, 1190, 1125, 11O0, 1055 et 810. EXEMPLE 18 -Préparation d'ara-cyfcidine 5*-méthyl carbonate NTCEC . ' NTCEC 20 £ O -... •ce H0ÇHs/O> O CH JGCO- ch? 3 CH 0-C-C1 3 il O • Zinc 30 Méthanol CH30C0- çh2 Un échantillon de 4,18 gr (10 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissout dans 25 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte à la température ambiante avec 1,0-gr de chloroforme de méthyle (22 mmoles) dissous dans 10 ml de Cf^C^. La solution est laissée sous agitation à la température ambiante pendant 1 nuit et on réa- bad original 70 19441 2051563 lise une TLC dans la matinée. La TLC ne montre aucune trac. ... -Matière de départ. La préparation est concentrée à sec à" 5050 rotavapeur et le résidu est absorbé sur une colonne de 15G cjr J.-gel de silice tassée avec du cyclohexane, de • 11 acétatqd 'éthyl.- or 5 du EtOH à 95% (5/3/1). La colonne est éluée avec 20 fracticri ... 50 ml du même - solvant. Les TLC des fractions 9 à 17 montrent q;;o les fractions 10 à 13 contiennent le dérivé Cil OC -"^-O désira c,o 4 3 K -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine. Ces fractions de 2,455 gr sont combinées dans 50 ml de méthanol et traitées à reflux pen-10 dant 15 minutes au bain de vapeur avec 3 gr de poussière de zinc. La TLC ne montre aucune trace de matière de départ. Le zinc est ensuite filtré et la préparation est concentrée à sec à l'évapcra--teur rotatif. Le résidu est ensuite absorbé sur une color.ne do 150 gr de gel de s'ilice tassée avec de la méthyl éthyl cétons, de l'a-15 cétone et du méthanol (5/2/3), et élué avec 25 fractions de 50 ml du même solvant. Des TLC sont réalisées sur les.fractions 17 à 22 et en se basant sur les résultats des TLC, les fractions 19 à 22 sont combinées et recristallisées dans le méthanol. Le ren-' dement est de 390mgr, point de fusion de 188,5-190°C avec décom-20 position ( déborde du tube en moussant). Analyse : Calculé pour cuH;l507N3 : C: 43,85; H: 5,02; N: 13,95 Trouvé : C: 44,16; H: 5,26; N: 13,64 Spectre ultraviolet / ^ #' (£x lO-3)./: 215 léger ép (10,35); 25 230 (8,00); 273 (9,15). Spectre infrarouge {y ) : 3460, 3340, 3250, 3230, 3180, 1765, 1640, 1625, 1560, 1530, 1500, 1315, 1280, 1090, 1070, 1035, 990 et 780. Les- spectres ultraviolet, infrarouge, RMN correspondent 30 tous à la structure proposée. EXEMPLE 19 - Préparation de 5'-0-(p-nitrobenzoyl)ara-cytidine NHTCEC I 35 o' HOÇH2/O ho2-C>- ?rcl — _o pyridine 48 70 19441 2051563 NIÎ 5 *4- Un échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de N -trichlorc Zinc MeOH xycarbonyl. ara-cytidine est dissous dans 25 ml de pyridine anhy--10 dre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à rroucv.e avec 4,08 gr (environ 22 mmoles) de chlorure de p-nitrobenzoy".1; distillés dans 25 ml de la pyridine anhydre fraîchement distillée. La solution est laissée sous agitation pendant la nuit à la température ambiante«Une TLC dans la matinée ne montre qu'une petite 15 quantité de matière de départ. Le mélange réactionnel est versé dans 25 ml d'eau et concentré à sec à 50°C au rotavapeur. Le résidu est absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice tassée avec du cyclohexane, de l'acétate d'éthyle , de l'éthanol à 95% ■ et élué avec 20 fractions de 50 ml du même solvant. 2jes fractions 20 7-16 sont combinées après avoir réalisé des TLC sur les fractions , délayées dans du méthanol, le solide cristallin est filtré et lavé avec une petite quantité de méthanol. Rendement de 4,0 gr . Cette matière est ensuite dissoute dans 100 ml de méthanol et traitée - avec 4,0 gr de poussière de zinc à reflux pendant 15 minutes au bain 25 de vapeur„ Aucune matière de départ n'est laissée à ce moment. Le zinc est séparé par filtration et la préparation est concentrée à sec. Le solide est extrait au méth anol et les extr-^aits sont ajoutés, à une colonne de 200 gr de gel de silice et élués avec 20 fractions de 50 ml de méthyl éthyl cétone, d'acétone et d'eau 30 (72/20/8). La fraction 14 contient quelques mgr de cristaux .qui sont recristallisés dans l'acétone-^O/ point de fusion de 244-245°C avec décomposition. Cette matière se déplace lors d'une TLC à environ la même vitesse que les 5'-0~benzoyl ara-cytidine, 3'-0-benzoyl et 2'-O-benzoyl ara-cyt-idines. 35 EXEMPLE 20 - Préparation de 5'-0-2,4,6-triisopropylbenzène- ulfonyl ara-cytidine BAD QfttâlNAi: 70 19441 2051563 NHTCEC. Kl lïCKC ■ OH 4 Un échantillon de 4,18 gr (10 mrnoles) de lï -trichlcro-éthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 50 ml de pyridine r.n-hydre fraîchement distillée* La solution est traitée goutte V 20 goutte avec 4,54 gr (15 mmoles) de chlorure de 2,4,6-triisoj;rc-;yl~ benzènesulfonyle dissous dans 10 ml de pyridine.Le mélange tionnel est laissé sous agitation a la température ambiante 3..U cours du weekend ,il est ensuite versé dans 60 ml d'eau et con- f ■ centré à sec à 50°C. Cette gomme brute est ensuite dissoute dur.s 25 50 ml de méthanol, 5 gr de poussière de zinc sont ajoutés et le mélange réactionnel est chauffé jusqu*à ébullition pendant 1/2 au bain de vapeur. La TLC ne montre aucune trace de matière cie départ. On sépare le zinc de la préparation pàr filtration et on la concentre à sec .au rotavapeur. La gomme brute est ensuite absorbas 30 sur une ^colonne de 200 gr de gel de silice et éluée avec 20 fractions de 3.00 ml de méthyl éthyl cétone, dEacétone et de II^û. Les fractions 7-20 montrent toutes une tache par TLC qui se ch-oi.--ce un peu plus lentement que la matière de départ et qui se présente comme le produit désirë0 Une fraction d "élimination de 1 35 litre de méthanol est prélevée et elle contient aussi un peu ce-matière qui consistait en une tache se déplaçant avec les fractions 7-10. Les fractions 7-20 et la fraction de méthanol do 2 litre sont combinées, concentrées à sec et cristallisées une fois BAD QRKSi1" '^ 50 70 19441 2051563 dans du méthanol-eau, ensuite à nouveau de le mcthanol. Re.. i\t de 1,175 gr, point, de fus ion de 188,5-139,S°C avec légère .-opposition. Un autre point de fusion effectué sur le même écha. . ; l'Ion montre qu'il ne fond pas avant 228°C et* qu'il se décor.tj, 5 Recristallisé dans le méthanol, on obtient un échantillon y.cur analyse de point de fusion de 228°C avec décomposition. Analyse s Calculé pour s C„ „II_ „0_N_S ; r 24 35 / 3 C; 56,56; Ils 6,92; N: 8,25; S: 6,29 Trouvé j C: 56,58; H: 6,94; K; 8,23; S: 6,08 10 Spectre ultraviolet /[\ {£ x io ~J)/: 228 (17,85); 274 (10,60) 283 léger ép. (8,60). Spectre infrarouge (7 j^-ï ) : 3350, 3280, 3160 ép, 1665, 1640,3220 1615, 1575 ép. , 1530, 1495, 1350, 1290, 118Q, 1100, 1090, 3010, 980, 960 et 790. 15 Les spectres RMN et infrarouge sont ceux du sulfonate EXEMPLE 21 - Préparation de 5 e-0-isobutyryl ara-cytidine NHTCEC 20 0 CH3 HOÇHa^Ov ^>CHCOhÇH2^0 CH3 Pyridine ' anhydride butyrique 25 CH3 "^CHCOaÇHs JQ Zinc ^ . CH3 MeOH 4 Un échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 10 ml de pyridine arihy-?5 dre fraîchement distillée. La solution est traitée goutte à goutte avec 3,5 gr (environ 22 mmoles) d'anhydride isobutyrique à la température ambiante avec agitation. Le mélange réactionnel est laissé sous agitation à la température ambiante pendant la nuit. BAD ORIGNAL 70 19441 2051563 Une TLC est réalisée sur le mélange réactionnel brut dans la matinée. 25 ml d'eau sont ajoutés à la préparation et la préparation est concetrée à sec à 50°C. Le résidu, vitreux est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice et élué avec 5 10 fractionsde 100 ml de cyclohexane, d'acétate d 'éthyle ,de EtOH à 95% (5/3/1). Des TLC sont réalisées sur les premières fractions. Les fractions 5 et 6 sont combinées sur la base des résultats des TLC et recristallisées dans le méthanol. Rendement de 2,0 gr, point de fusion de 255°C avec dér-composition. Une tache 10 est observée par chromatographie en couche mince. Ces 2,0 gr de matière sont ensuite dissous dans 50 ml de méthanoi et traités avec 2,0 gr de poussière de zinc à reflux pendant 10 minutes au bain de vapeur. La TLC ne montre aucune matière de départ laissée. Le zinc est séparé par filtration et le méthanol 15 est enlevé à 50°C au rotavapeur. Le résidu vitreux clair est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice tassée avec du cyclohexane, de 1'acétated'éthyle et du EtOH à 95% (5/3/1). La colonne est éluée avec 1 litre du même solvant. Seulement une petite quantité d'huile est éluée. La colonne est ensuite éluée 20 avec 12 fractions de 100 ml de méthyl éthyl cétone, d'acétone , de ^0 (72/20/8). Des TLC sont .réalisées sur les fractions 5 à'9. Sur la base des résultats, les fractions 7, 8 et 9 sont combinées et recristallisées dans J.'eau.Rendement de 990 mgr, point de fusion de 179-184°C. Recristallisé dans l'eau juste pour l'analyse, un 25 échantillon a un point de fusion de 206-208"C. (vitesse de chauffage d'environ 3°C par minute. Le point de fusion varie.) Si placé dans un bain à 180°C J.'échantillon fond immédiatement. Si la vitesse de chaufîage est de 15-20°C par minute, le pointz'de fusion est de 212-214°C. 30 Analyse : Calculé pour cx3Hxg°gN3-V2 H^O Ci 48,44; H: 6,25; N: 13,04 Trouvé : C: 48,62; H: 5, 98; N: 13,33 Spectre ultraviolet / s\ , (r x 10 )/; 233 léger ép. (7,60); ïïlâX — 273 (8,70)/ 35 Spectre infrarouge (Y ) : 3400 , 3340 , 3280ép., 3210, 3120, ép., 1740, 1715, 1655, 1640, 1625, 1535, 1490, 1285, 1205, 1165, 1110, 1095, 1050, 815 et 780. BAD ORIGINAL 52 70 19441 2051563 EXEMPLE 22 - Préparation de 5'-0-3,4,5-triméthoxybonzoyl cytidine NTCEC 10 15 CH3°x_ O C^3^ ~~Ç C -OC Hg^p ch3o/ - NH, CH. A °t 1 /}—\ i ok / y—C-OÇHa 0 ch3 Un échantillon de 8,36 gr (20 mraoles) de N -trichloro-20 êthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 100 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée . La solution est traitée avec agitation et à-la température ambiante avec 4,85 gr (environ 22 mmoles) de chlorure de 3,4,5-triméthoxybenzoyle. La réaction est laissée sous agitatibn pendant la nuit à la température ambiante. 25 La TLC est réalisée au cours de la matinée dans le système gel de silice, cyclohexane, acétate d'éthyle, EtOH à 95%. La solution montre encore des traces de matière de départ. Le mélange réactionnel est chauffé jusqu'à 50°C dans un bain d'huile pendant la nuit. Une nouvelle TLC ne montre aucune matière de départ dans le mélan-30 ge brut. Le composé laisse des traînées et est difficile à reconnaître. Un solide blanc qui précipite de la solution est aussi réparti en gouttes. Cette matière ne se déplace pas du point de départ. Le mélange réactionnel est versé dans 60 ml d'eau et concentré à sec au rotavapeur. La gomme est absorbée sur une colonne de 35 200 gr de gel de silice et éluée avec 15 fractions de 100 ml de cyclohexane, d'acétate d'éthyle et de EtOH à 95%. La colonne est aussi tassée avec ce solvant. Sur la base des résultats de TLC, les fractions 4-9 sont combinées dans du chlorure de méthylène, BAD ORIGINAL 53 70 19441 2051563 lavées une fois avec du bicarbonate saturé et une fois l'eau, séchées sur sulfate de.sodium et concentrées à sec. Oc1 enlève toute la matière se déplaçant le plus lentement quis de triméthoxybenzoyle par TLC. Les extraits^'de CH^Cl^ (8,17 ' } 5 sont absorbés sur une colonr.e de 200 gr de gel de silice t;.; . :■ avec de la mcthyl éthyl cétone, de l'acétone - «n h o f 17 et élués avec 12 fractions de 100 ml du H 0 (72/2C Blême solvant. Les tions 6, 7, 8 et 9 sont réparties en gouttes sur une plaque ï.our TLC et essayées daris le même solvant. En se bfe—sant sur les rérjul-10 tats desTLC, les: fractions 7,8 et S sont combinées et recristslli-sées dans le méthanol. Rendement de 2,410 gr, point de fusion ce . 143-145°C. Recristallisé dansle méthanol, un échantillon pour analyse indique un point de fusion de 137-139°C. Analyse : Calculé pour cjgH2309K3 ° H2° : 15 C: 50', 11; Trouvé : C: 50,50; H: 5,53? N: 9,23 H: 5,41;' N; 9,15 — p-f- OH Spectre ultraviolet / r) t - max (t X 10~3)/: 214 (40,30); 269 (17,75); 305 léger ép. (2,55). Spectre infrarouge {y ) s 3420, 3320, 32GO, 3220, 1715, 1645, 20 1600, 1520, 15OO, 1340, 1280, 1225, 1125, 1095, 1075, 1065, 1030, 995, 860 et 805. Les sepctres ultraviolet et infrarouge correspondent à la'structure proposée EXEMPLE 23 - Préparation de 51-0-2,6(diméthylbenzoyl ara-cytidine 25 NTCEC NTCEC HOCH? 30 35 ORIGINAL 70 19441 2051563 4 Un échantillon de 8,36 gr (20 mmoles) de N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine est dissous dans 100 ml de pyridine anhydre fraîchement distillée, ta solution est traitée à la température ambiante avec 3,70 gr (environ 22 mmoles) de chlorure de 2,6-5 triméthylbenzoîque„ Le mélange réactionnel est agité pendant la nuit. Le chlorure est dissous dans 10 ml de CH^Cl^ et ajouté goutte à goutte. Une TLC dans la matinée indique un peu de matière de départ laissée» Une autre potion de 3,70 gr dans 10 ml de CH^Cl^ est ajoutée goutte à goutte et la préparation est laissée au re-10 pos pendant la nuit à températuje ambiante. Dans la matinée,, une TLC ne révèle presque plus de trace de matière de départ. 50 ml d'eau sont ajoutés et la préparation est concentrée à sec à 50°C ai^totavapeur. Le résidu est dissous dans 200 ml de CH^Clj et extrait deux fois avec chaque fois 100 ml de bicarbonate saturé. La 15 solution de CH^Cl^ est lavée une fois avec 200 ml de et séchée sur sulfate de sodium , ensuite concentrée à sec. La gomme est ensuite absorbée'sur une colonne de 200 gr de gel de silice tassée avec du cyclohexane, de l'acétate d'éthyle ,du EtOH à 95%. La colonne est éluée avec 20 fractions de 100 ml du même solvant. Des 20 TLC sont réalisées sur les fractions 7-15. En se basant sur les résultats des TLC, les fractions 7-12 sont combinées et recristallisées dans le méthanol. Rendement de 3,0 gr. Cette matière montre une tache par TLC et se déplace à la même vitesse sur la plaque 4 que la 2,4,6-triméthylbenzoyl N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cy-25 tidine. Ces 3 gr de matière sont dissous dans 100 ml de méthanol, 3 gr de poussière de zinc sont ajoutés et la préparation est chauffée jusqu'à reflux pendant 15 minutes au bain de vapeur. A cet instant, une TLC ne montre plus aucune trace de matière de départ. Le zinc est séparé par filtration et la méthanol est enlevé dans 30 18évaporateur. Le résidu vitreux clair est ensuite absorbé sur une colonne de 200 gr de gel de silice-tassée avec de la méthyl éthyl cétone , de l'acétone, du H20 (72/20/8) et élué avec 10 fractions de 100 ml du même solvant. Des TLC sont réalisées sur les fractions 3, 4, 5 et 7» Les fractions 4,9 sont combinées et recris-35 tallisées dans le méthanol. Le rendement est de 1,24 gr, point de fusion de 238-240°C avec décomposition. Un échantillon est recristallisé une fois dans le méthanol pour l'analyse. Point de fusion de238-240°C avec décomposition. 70 19441 2051563 Analyse : Calculé pour ci8H21°6N3* 1/2 E^0 d 56,24; H: 5,77; N: 10,93 Trouvé ; C: 56,31; H: 6,03; N: 11,17 Spectre ultraviolet / (f x 10 ^l/: 233 léger ép. (10,25); 5 273 (9,55). Spectre infrarouge ("Y ): 3500 ép. , 3400, 3340, 3280 v, 3220 1740 ép., 1715, 1655,"1635, 1615, 1530, 1485,1285 , 1270, 1245, 1110, 1095, 1070, 1050, 815 et 710. EXEMPLE 24 - Préparation de 5'-O-palmityl ara-cytidine 10 Du chlorhydrate d1ara-cytidine (2,80 gr ,0,01 mole) est dissous dans 25 ml de diméthylformamide et on ajoute 3,05 gr (0,011 mole) de chlorure de palmityle. La solution est laissée au repos à la température ambiante pendant 7 heures. Le solvant est évaporé sous vide (pompe à huile) et l'huile résultante est agitée 15 avec 70 ml de bicarbonate de sodium 0,3N. Le solide résultant est recueilli sur un filtre, lavé plusieurs fois avec de l'eau, pressé à sec et ensuite lavé trois fois avec 25 ml d'acétate d'éthyle et séché à l'air. Rendement de 2,52 gr (52%), point de fusion 135- 145°C. La chromatographie en couche mince indique une seule tache 20 d'absorption dans l'ultraviolet dans plusieurs systèmes de solvant. Un échantillon est recristallisé une fois dans le méthanol (82% de récupération) pour l'analyse, point de fusion de 145-148°C. Analyse : Calculé pour C„_H._N O : 25 43 3 6 C: 62,34; H: 9,00; N: 8,72 25 Trouvé : C: 62,65; H: 9,29; N: 8,75 Les courbes d'absorption infrarouge et ultraviolette sont identiques à celles d'un échantillon témoin, et la matière est chromatographiquement idantique à l'échantillon témoin dans plusieurs systèmes de solvants. 30 EXEMPLE 25 - Préparation de 5'-pivaloyl ara-cyfcidine Du chlorhydrate d'ara-cytidine (3,5 gr, 0,0lmole sur la base de 20,5% de solvant de cristallisation), est mis en suspen-sionj&ans 25 ml de diméthylacétamide et on ajoute 1,3 gr (excès de 10%) de chlorure de pivaloyle. Le mélange est agité à la températu-35 re ambiante. Au fur et à mesure que la matière réagit, elle se dissout .'lentement. Après agitation pendant la nuit, le mélange est clair. La solution est concentrée en un faible volume sous vide (pompe à huile) et l'huile résiduelle est agitée avec 100 ml BAD ORIGINAL 56 70 19441 2051563 d'acétate d1éthyle-éther (1/1). Ce traitement est répété encore deux fois en décantant et en centrifugeant. Le semi-solide est ensuite trituré avec 20 ml de NaHCO^ N, filtré et lavé plusieurs fois sur le filtre avec de l'eau. Le solide cristallin blanc est 5 séché dans un courantd'air.Rendement de 2,24 gr (66%), point de fusion de 252-258°C avec décomposition. La TLC (EtOAC-DMF-H^O, 75/15/5) montre que la matière se compose d'une seule tache x, Rf = 0,38. Environ 1 gr de cette matière est recristallisé dans 15 ml de méthanol. La récupération est de 0,4 gr, point de fusion 10 de 261-262°C avec décomposition. Le restant de la matière (1,24 gr) est agité avec du butanol chaud. On observe des changements dans la forme cristalline et celle-ci devient légèrement soluble dans le butanol. On utilise un total de 25 ml de butanol chaud ,mais une grande quantité reste insoluble. La récupération est de 1,4 15 gr, point de fusion de 259-260°C avec décomposition. Les liqueurs mères sont combinées, évaporées à sec, et le résidu est recristallisé dans le méthanol. Récupération de 0,36 gr, poin^de fusion de 254—256°C avec décomposition. EXEMPLE 26 - Préparation de 5 ' -octanoyl ara-cyt-idine 20 Du chlorhydrate d'ara-cytidine (5,6 gr, 0,02 mole) est dissous dans 50 ml de diméthylformamide et on ajoute 3,6 gr (0,022 mole) de chlorure d1octanoyle „ La solution claire est laissée au repos au cours du weekend. - La TLC montre qu'un bon rendement du produit (Rf = 0,38, 25 essayé avec un échantillon témoin comme étalon) est obtenu, avec une trace d'un composant de Rf = ©,95 , de petites quantités d'autres produits de Rf = 0,70, 0,52, 0,24, et avec une matière de faible Rf laissant une trace à l'origine. Le solvant est évaporé sous vide et l'huile est agitée trois fois avec environ 100 ml 30 d'éther. Le semi-solide est ensuite agité à fond avec 30 ml' de NaI-IC0_ M, le solide résultant est recueilli et lavé avec H_0 jus- •3 2 qu'à la neutralité»Le solide est séché à l'air. Poids de 4,89 gr. La TLC (comme ci-dessus) montre que le produit à ce stade a une petite quantité de matières de Rf égaux à 0,70 et 0,52 et une 35 infime quantité de matière laissant une trace derrière le produit. Le produit est cristallisé dans 60 ml d'acétate-xi*éthyle chaud sous la forme d'aiguilles . Récupération de 4,07 gr (55%) point de fusion 158-161°C. bad ORIGNAL 70 19441 57 2051563 x Rf identique à celui dJun échantillon témoin. EXEMPLE 27 - Préparation de 5'-eyclohexylcarbonyl ara-cytidine Du chlorhydrate d'ara-cytidine (20% en poids de solvant; 17,5 gr , 0,05 mole) est dissous dans 125 ml de diméthylfor~.amide 5 et on ajoute 8,06 gr (10% d'excès) de chlorhydrate d'acide cyclo-hexanecarboxylique. La solution claire est laissée au repos à la température ambiante pendant la nuit. Le solvant est évaporé sous vide ett l'huile est agitée plusieurs fois a-~vec de l'êther. L'huile est ensuite triturée à 10 fond avec 100 ml de bicarbonate de sodium M. Le solide est filtré, lavé avec de l'eau et séché a lsair0 La matière est cristallisée dans 100 ml d'acétate d'éthyle. La matière se dissout immédiatement dans de l'acétate d1éthyle chaud et elle se sépare ensuite en cristaux dans une forme qui ne se redissolvera pas dans ce solvant. 15 La matière cristalline est recueillie, lavée à l'acétate d'éthyle , à 1 'éthei/ét séchée. Poids de 5,58 gr, point de fusion de 232°C avec décomposition. La liqueur mère est évaporée à sec et le résidu cristallin est trituré avec de l'acétate d'éthyle chaud, refroidi et recueilli comme ci-dessus. Poids de 3,86 gr, point de fusion 20 de 227-229°C avec décomposition . Rendement total de 9,44 gr (53%). Le Rf est identique à celui de l'échantillon témoin. EXEMPLE 28 - Préparation de 51acétyl-ara-cytidine Du solvant chlorhydrate d'ara-cytidine -diméthylformami-de (17,5 gr, 0,05 mole) est dissous dans 125 ml de diméthy1forma-25 mide et on ajoute 4,32 gr (10% d'axcès) de chlorure d1acétyle. La solution claire est laissée au 'repos pendant la nuit à la température ambiante. Le solvant est évaporé sous vide, et 1'huile résultante est agitée plusieurs fois avec de 18éther. L'huile résiduelle est 30 dissoute dans l'eau,le pH est ajusté à 1,5. et la solution est extraite trois fois avec des volumes égaux d'acétate d'éthyle. Le pH de la solution aqueuse est ajusté à 7, et le solvant est évaporé sous vide. L'huile résiduelle est dissoute dans de 1*éthanol et le chlorure de sodium est enlevé par filtration. Le solvant est 35 évaporé sous vide pour laisser une huile pesant 16,5 gr. Environ 13 gr de es produit sont purifiés par chromatographie sur gel de silice (Merck-Darmsfcadt, 0,05-0,2 mm) en utilisant le système de solvants méthyl éthyl cétone-acétone-eau , BAD 0Rf®iï#iL 58 70 19441 2051563 (72/20/8), Environ 800 gr d'adsorbant pour une colonne de 5S jn?n de diamètre sont utilisés. La matière est dissoute dans un petit volume d'eau pour 11adsorption sur.la colonne, et ensuite on commence 1'élution avec le solvant. Le volume de chaque fraction est 5 de 100 ml, et 1'élution de la matière est suivie par TLC. La 5*-acétyl ara-cytidine est éluée dans les fractions 33-51 , lesquelles fractions sont combinées et évaporées sous vide pour laisser un résidu cristallin pensant 7,O gr„ Le produit est recristallisé dans 60 ml de 1-butanol, récupération de 4,05 gr et le point de 1C fusiv- 184-185 °C. La TLC dans plusieurs systèmes de solvants mont'. :a la matière est chromatogranhiquement identique à un échantillon témoin de 5'-acétyl ara-cytidine. Une petite quantité de produit additionnel est récupérée de la liqueur mère ci-dessus pour donner ùr^endement total de produit purifié de 38%. 15 EXEMPLE 29 - Préparation de 5iadamantoyl-ara-cytidine Du chlorhydrate d1ara-cytidine (63 gr ? O,225 mole) est mis en suspension dans 1100 ml de dimëthylacétamide. Environ 51 gr (10% d'excès) de chlorure d'acide 1-adamantanecarboxylique sert-ajoutés et le mélange est agité pendant la nuit à la température 20 ambiante. Le mélange est filtré pour enlever environ 4,8 gr de solide . La TLC du filtrat montre une quantité considérable de cytosine arabinoside n'ayant pas réagi. 32 gr (0,16 mole) de chlorure d'acide 1-adamantanecarboxylique sont à nouveau ajoutés et on laisse la réaction se poursuivre pendant une période addition-25 nelle de 24 heures. La solution est concentrée sous vide en un faible volume et l'huile est triturée trois fois avec 500 ml d'acétate d éthyle -éther (1/1). L'huile est triturée à fond avec 650 ml de HaîICO^ N, le solide cristallin résultant est recueilli par filtration et lavé plusieurs fois avec de l'eau. Le gâteau de;filtra-30 tion est pressé à sec et le solide est lavé deux fois avec de 1'acétate d"éthyle et ensuite avec de l'êther , et il est séché. Rendement de 63 gr ( 69%), pointde fusion de 282°C avec décomposition. La recristallisation dans 400 ml de diméthylacétamide -1600 ml d'acétate d'éthyle donne 61,1 gr , point de fusion de 291°C avec dé-35 composition. La TLC dans plusieurs systèmes de solvants, et des déterminations de point de fusion comparatives montrent que le produit est identique à un échantillon témoin de 5'adamantoyl-ara-cytidine. 70 19441 59 2051563 EXEMPLE 30 - Préparation de l'ester d'acide 51-0-L-trans-3-/n-propyl/-hygrique d'ara-cytidine Du chlorhydrate d'acide L-trans-3-/n-propyl/hygrique est chauffé à. reflux dans un excès de chlorure de thionyle jus-5 qu'à ce que l'acide se soit complètement dissout. L'excès de chlorure de thionyle est ensuite enlevé par distillation sous pression réduite. Le résidu est concentré à sec trois fois avec 5 volumes de benzène sec.Le résidu peut ensuitre être dissous dans une quantité minimum de diméthylacétamide sec et ajouté à une sorution-10 de chlorhydrate d1ara-cytidine dans le même solvant et agité à la température ambiante pendant la nuit. Le 5'-ester est ensuite isolé comme décrit dans l'exemple 22. BAD ORIGINAL 60 70 19441 2051563 REVENDICATIONS 1. Un procédé pour la préparation 5'-0-oster 5 -cytidine , ce procédé étant caractérisé en ce que l'on faiit- -ir de l'ara-cytidine (1) ou de la 5'-trityl-ara-cytidine (2) a\ 5 l'halogénure de p» p, (3-trihaloéthoxycarbonyle dans lequel '"halo" est chloro ou bromo et "halogénure" est du chlorure , du bro;'.u::o ou de l'iodure pour former un groupe amido protecteur respectivement sur l'azote amino primaire de (1) ou (2), et en ce que 1. ' oa fait réagir le composé ainsi protégé avec un agent d ' acylatic;-. lû pour former le 5'-0-ester corresi^ondant eten ce que l'on forme facultativement un sel du produit par réaction av.ec un acid ^ O X" . ci— nique ou minéral fort pliarmaceutiquerr.ent acceptable. 2. Un procédé suivant lai revendication 1, caractérisa en ce que le groupe 6, P, p-trihaloéthoxycarbonyle est enlevé pr.r 15 la suite. 3„ Un procédé suivant' la revendication 1, caractérisé en ce que la 5'-trityl-ara-cytidine est la matière de départ et le groupe 5'-trityle est enlevé dans une étape avant la réaction avec l'agent d'acylation. 20 4. Un procédé pour la préparation d'un 5'-0-ester d'ara- cytidine suivant la revendication 3, ce procédé étant caractérisé en ce qu'on utilise suffisamment de chlorure de p,p,p-trichloro-éthoxycarbonyle pour ^réagir avec dos groupes hydroxyles non esté-rifiée de la 5!-trityl-ara-cytidine et en ce que tous les groupes 25 p,p,p-trichloroéthoxycarbonyles sont enlevés après la formation du 5!-0~estero 5. Un procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce eue l'agent d'acylation est un halogénure d'acide carboxylique. 30 S, D'n composé, caractérisé en ce qu'il a la structure suivante ; HI-3 OCH2CX3 Y-OCHa H 0 BAD ORIGINAL 61 70 19441 2051563 dans laquelle X est du broae eu du chlore et Y est un choi si parmi le groupe comprenant i'hydrogène, les radicaux tri-..;. .I.-et acyles. 7. Un composa suivant la revendication 6, carac'cc: ' -n 5 ce qu'il a la formule suivante s O M "V ÎÏHCOCH-CX-, 2 c> o cr"* rr p ' ron!-:. ! io ■ ~ ï | HO 7 / / OH dans laquelle X est dû brome ou du chlore et R'^eet un radical 15 choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à- 10 atomes de carbone, les hydrocarbures du type cage de 7 à 20 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone, les aralJphatiques de 7 à 12 atomes de carbone, les hétérocycliques monocy- i 20 cliques de 4 à 10 atomes de carbone; ou caractérisé en ce que R®i~ 8. Un composé suivant la revendication 7 : 25 «HCGCH?CC13 M I . o 0 H - t il I P, COCHs „ ! I 30 V""* Hoy \ î / j/ caractérisé en ce que R% est un radical aromatique de 6 à 10 »5 atome de carbone; "9. Un composé savant la revendication 7 s BAD ORIGINAL 70 19441 62 2051563 NHC0CHoCCl. , O « il R CGCH2 „ 1 I /° \ N ' I 0" "Il HO / î/ p- OH O 10 caractérisé en ce que R^'C- est le radical acyle d'un acide dicarboxylique aliphatique de 3 à S atomes de carbone. 10. Un compose suivant la revendication 7 : O NHCOCH„CC1_ | 2 3 H ^ Mi & R C0CH2 ' î s H0 ÎO caractérisé eh ce que est un radical aliphatique de 1 à 20 atomes de carbone. 11. Un composé, caractérisé en ce qu'il a la formule structurale suivante ; NH„ 3L) dans laquelle est un radical choisi :'parmi le groupe comprenant 35 les aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone, les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone et les hétérocyliques monocyliques de 4 à 10 atomes de carbone; BAD ORlGfNAL 10 70 19441 63 2051563 OU. caractérisé en ce que est le radical acyle d'un dicarfcpxylique aliphatique de 3 à 8 atomes de carbone, efe- § sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables. 12, Un composé suivant la revendication-11, caractérisé en ce que R^C- ^s° est le radical acyle d'un acide dicarbc::ylique aliphatique de 3 à 8 atomes de carbone , ou ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables. 13. Un composé, caractérisé en ce qu'il a la forme struc-" turale suivante s NH, 30 15 OH dans laquelle A et B sont des radicaux identiques "ou différents choisis parmi le groupe comprenant l'hydrogène, les aliphatiques de 1 à 10 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 20 10 atomes.de carbone et les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone, et de plus dans laquelle A et B .ensemble peuvent former une chaîne aliphatique de 3 à 6 atomes de carbone,, ou ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables. 14. Un composé, caractérisé en ce qu'il a la formule 25 structurale suivante : 0 MS-C°ÇH 0H dans laquelle M est un radical choisi parmi le groupe comprenant les aliphatiques de 1 à 10 atomes de carbone, les aliphatiques monocycliques de 4 à 10 atomes de carbone, les aromatiques de 6 à 35 10 atomes de carbone et les aralkyles de 7 à 12 atomes de carbone, ou ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables. BADQRIGK 70 19441 64 2051563 15. Un composé , caractérisé en ce qu'il a la formule dans laquelle A1 et 31 sont des radicaux identiques ou différents choisis parmi le groupe comprenant l'hydrogène, les alkyles de 70 19441 65 2051563 1 à 7 atomes de carbone et les aroiaa tiquas de S à 10 atomes cru bone , ou ses sels d'addition d'acides pharmaceutigueœent acceptables . 15. Un composé, caractérisé an ee guci3,a la, for nui le structurale suivant© ? ME.- m 5 1? o JL i [I 0^ ^ \ / x© ^ _ >./ OH dans laquelle R_ est un radical choisi parmi le groupe ccrcpre-d nant les alkyles de 1 à 7 atomes de carbone, les aromatiques de 13 S à 10 atomes de carbone et les aromatiques substitués de 6 à 12 fttomes de carbone, ou ses s@ls d'addition d'ac-ides pharmaceutiquement acceptables0 17. Un composé, caractérisé en ee qu'il a la formule structurale ■ suivante s llî^ 20 û t ^^O-S-OÇHg q 1 S \) 1 ko/ V_K 25 0H dans laquelle est un radical choisi parai le groupe comprenant les aliphatiques de 1 à 20 atomes 5:a carbone, les aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone, et les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone , ou ses sels d'addition d 5acide -pharmaceutiquement 30 acceptables. 18» Un composé, caractérisé'en ee qu'il a la formule structurale suivante s HHL 1 M & (i ô M 24Ô-P-0CHs | 0s5 if* ho j \ J/ ^ ' 0H BA3>QpiGïMAl 19441 66 2051563 / dans laquelle R^ et R sont des radicaux identiques ou cil choisis parmi le groupe coraprenant les alkyles de 1 à 7 cte, ■carbone et les haloalkyles de 1 à 7 atomes de carbone, ou ir-a.1--d "additiond" acides ph ar mac aut iqu e:r.ent acceptables. 19» Un compose, caractérisé en ce qu ' il a la forrr.v.ls structurale suivante ; ô R.Ô-C-OCH 6 dans" laquelle est un radical choisi parmi le groupe comprenant 7i.es aliphatiques de 1 à 20 atomes de carbone, l'es aromatiques de 6 à 10 atomes de carbone et les araliphatiques de 7 à 12 atomes de carbone , ou ses sels d'addition d:3acides pharmaceutiquement acceptables . 20„ Un composé» caraet 0 xm-p-och2 / ! Bl OH oh dans laquelle A2 et" sont des radicaux identiques ou différents choisis parai le groupe coraprenant l'hydrogène et les alkyles de .1 à 7 atomes de carbone, ou ses sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables, 21 » Un composés caractérisé en ce qu'il a la formule stsm BAD ORIGNAL- 70 19441 67 2051563 NH2 1 oh dans laquelle et sont des radicaux identiques ou différants 10 choisis parmi le groupe comprenant l'hydrogène et les alkyles de 1 à 7 atomes de carbone, ou ses sels d'addition d'acides ph~n.;n--ceutiquement acceptables. 22; Un procédé suivant la revendication 1, ce procéd-3 ét^ant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 1: 23. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé . • 4 étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de N -tri- 20 chloroéthoxycarbonyl ara-cytidine qui consiste à faire réagir de 4 • la N -trichloroéthoxycarbonyl-5'-O-trityl ara-cytidine avec un acide. 24. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-O-4 25 pivaloyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cy'tidme qui consiste a 4 faire réagir de la N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec un halogénure de pivaloyle en présence-d'une base. 25. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de S'-O-pi- 30 valoyl ara-cytidine qui consiste à faire réagir de la 5'-0-piva-4 loyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec du zinc et de l'acide acétique. 26. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend xe. préparation de 5 '-0-4 35 palmityl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidme qui consiste à faire réagir de la N^-trichloroéthox^carbonyle ara-cytidine avec urytiembre du groupe comprenant l'halogénure de palmityle et l'anhydride palmitylique en présence' d'une base. BAD ORIGINAL 70 19441 68 2051563 27- Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-G- palmityl ara-cytidine qui consiste à faire réagir de la 5'-0-4 palmityl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec du zinc 5 et de l'acide acétique. 28,' Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de S'-O-oc-4 tanoyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine qui consiste à fai- d re réagir de la N'-trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec un 10 membre du groupe comprenant 1'halogémure d'octanoyle et l'anhydride d'octanoyle en pré—sence d'une base. 29. Un procédé'suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-0- octanoyl ara-cytidine qui consiste à hydrogénolyser de la 51-0- 4 15 ostanoyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec du zinc et d® l'acide acétique. 50. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-0- 4 acétyl-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine qui consiste à fai- 4 20 re réagir de la N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec un ■ membre du groupe comprenant 1'halogénure d1acétyle et l'anhydride d'acétyle en présence d'une base. 31* Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-0- 25 acétyl ara-cytidine qui consiste à faire réagir de la 5'-0-acétyl 4 N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec du zinc et de l'acide acétique. 320 Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-0- 4 30 (2,4,6-triméthylbenzoy1)-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine 4 qui consiste a faire réagir de la N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cytidine avec un membre du groupe comprenant 1' r halogénure de 2,4, 6-triméthylbenzoy3e et l'anhydride de 2,4,6-triméthylbenzoyle en présence d'une base. 35 33,. Un procédé suivant la revendication 1, ce procédé étant caractérisé en ce qu'il comprend la préparation de 5'-0-(2,4,6- triméthylbenzoyl) ara-cytidine qui consiste à hydrogénolyser de la 4 • 5'-O-(2,'4,6-triméthylbenzoyl)-N -trichloroéthoxycarbonyl ara-cyti- r 70 19441 69 2051563 dîne avec du zinc et de l3acide acétiqueè 34. Composé suivant la revendication 6P caractérisé en ce qu'il s®agit de la iF-trichloroéthosycarbonyl-S*-O-trityl araeytidine., la H^-trdehloroétha^earbonyl ara-cytidine? la 51 -O-pivaloyl-ET^-tricSiloroéthosycarbonyl s:^-oytiitneP la 5 s-0-palmityl-N^-tricîilo-ro é tliosysarboayl ara-cytidine, la 55 «O-oetsmoyl-iï^-tricîiloroéthoxy-oarboajl ara-eyt id'ine 9 la 50 -O-aeétyl-N^trichlcjroétho xycarbonyl ara-cytiàia®, ou la 5 » ~0-trimétbyl'benaoyl-lfi'-trichloroéthoxycarbonyl ara-eytidin 35o Composé de la revendication 11? caractérisé en ce qu'il s'agit de la 5'-0-pivaloyl ara-cytidines la 5»-O-palmityl ara-cyti dine, la 5*-0-octanoyl ara-cytidine j, la 5»-0=acétyl ara-cytidine,la 51 -0-(2,4,6-triméthylbensoyl}ara-cytidineP la 5 *-0-stéaryl ara-cytidine, la 51-0-cyclobutane esrbonyl ara-cytidine» la 5*-O-(p-anisoyl) ara-cytidine, la 5«-O-cyclohexsnecarbonyX ara-cytidines la 5'-0«p» ehioropivaloyl ara-cytidine, le aéthyl (5!-ara=cytidylyl)carbonate9 la 53«-0-(p-aitrobensoyl) ara-cytidine, la 52-O-isobutyryl ara-cyti-dine, la 5 * -0-3 * 4 * 5-trimétfcoxybsazojrl ara-eytidia®, ou la 58 -0-2, 6= diméthylbenzoyl ara«cytiûine0 "360 Composé suivant la revendication 16? caractérisé en ce quBxl s'agit de la 5*-O-Çp-toluènesulfonyl/aa^-cytidine, ou de la 51-0-2,4,ô-triisopropylbenaènesulfonyl ara=cytidine0 37. Un procédé pour la préparation- de 5s'-esters d'un nucléoside d * ara-cytidine 9 ce procédé étant caractérisé an ce qu'il consiste à faire réagir un agent d1acylation du groupe comprenant les chlorures d'acides et les anhydrides diacides axree vue forme protonée de ce nucléoside d*ara-cytidine dana un solvant inerte0 38. Un procédé suivant ls revendication 319 caractérisé en ce que le nucléoside protoné est du chlorhydrate d5ara-cytidine et l'agent d'acylation du chlorure de palaityleo 39. Le chlorhydrate de 52-0-paliaityl ara-cytidine0 40. Le chlorhydrate de 55-O-fcenaoyi ara~c-ytidine8 BAD ORIGINAL