Brevet FR2005189A1 — publié le 19691205

i 2005189 La présente invention se rapporte à de nouveaux dérivés de synthèse de l'agarose en vue de l'application à l'analyse chroma tograjahique d'échange ionique. Les dérivés synthétisés ont un vaste domaine d'usage, capables diêtre utilisés dans la recherche, 5 l'isolation et la purification d'un grand nombre de composés comme les virus, les protéines, les acides nucléiques, les enzymes, etc. On connaît des produits semblables mais obtenus en partant de la cellulose et destinés à des buts similaires. 10 En réalisant de nouveaux échangeurs d'ions basiques de puis sance moyenne, la présente invention étend la gamme des produits utilisables dans l'analyse chromatographique. Le procédé d'obtention des dérivés selon l'invention consiste en la réaction entre l'agarose simple ou liée transversalement 35 par des ponts glycériques et un mélange équimoléculaire d'épichlo-rhydrine et triéthanolamine ( ECTEOLA ). Deux modes de mise en oeuvre du-procédé selon l'invention sont décrits ci-après : Exemple 1. 2D On introduit 10 g d'agarose dans 35 ml de solution d'hydro- xyde de sodium 10 N refroidie à environ 0° C. Après une homogénéisation effectuée pendant 60 mn environ, on ajoute, en 2-3 portions, un mélange composé par 14 g d'épichlorhydrine et 8f 7 g de triéthanolamine préparé préalablement et refroidi, en homogé-25 néisant chaque fois le mélange réactionnel. On introduit ensuite le récipient et le mélange réactionnel dans un bain d'eau à 75-80° C. Après 30 mn, on écrase et broie mécaniquement le gel obtenu lave à l'eau sur un entonnoir filtrant, en premier lieu avec de l'hydroxyde de sodium 0.5 N, puis avec de l'acide chlo-30 rhydrique 0.5 N et de nouveau avec de l'hydroxyde de sodium 0.5N. On met ensuite la masse isolée en suspension dans 800 ml d'eau distillée et.on laisse au réfrigérateur durant la nuit. Le lendemain, on décante le surnageant, lave le produit de la réaction à l'eau jusqu'à l'élimination complète de l'hydroxyde, déshydra-35 te avec de l'éthanol et/ou de l'acétone et l'on sèche. On obtient 10 g d'échangeur ( ECTEOLA-agarose ) renfermant environ o.7 millL-équivalents de groupements basiques par gramme. Exemple 2. On répète le premier exemple mais en utilisant au lieu de 4o l'agarose simple, l'agarose liée transversalement ( agarose. X-7.5 S * BAD QRK3INH, \ 09614 2 2005189 de granulométrie 50-100 mesh) . On obtient environ 11 g de produit final (ECTEOLA-agarose X) ayant une teneur en groupements basiques d'approximativement 0.7 milliequivalent par gramme. Les dérivés obtenus selon la présentçinvention, sont insolubles dans les solutions aqueuses, même à chaud. Leurs gels sont d'abord broyés mécaniquement, puis déshydratés, séchés et tamisés sélectivement pour l'isolement des particules de dimensions désirées. Par réaction des deux types d'agarose avec un mélange équi-moléculaire d'épichlorhydrine ettriéthanolamine, on obtient de nouveaux échangeurs d'ions basiques, de puissance moyenne, qui se prêtent notamment à l'étude, la séparation et la purification des acides ribo et desoxyribonucléiques, des nucléopeptides, des nucléotides, des nucléoprotéines, des différents enzymes etc.. 09614 3 2005189 REVENDICATIONS 1. Procédé d'obtention des dérivés d'agarose avec application en chromatographie d'échange ionique, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir l'agarose simple ou liée transversalement par des ponts glycériques avec un mélange équi-moléculaire d'épichlorhydrine et de triéthanolamine, les composés résultant étant insolubles dans les solutions aqueuses même à chaud et pourvu de propriétés d'échange d'ions basiques. 2. Procédé de préparation des dérivés de l'agarose,selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à traiter l'agarose en milieu alcalin avec un mélange équimoléculaire d'épichlorhydrine et de triéthanolamine » en chauffant à 75-80 ° C, pendant JO minutes. 3. Procédé de préparation des dérivés d'agarose, selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à traiter l'agarose liée transversalement avec un mélange équimoléculaire d'épichlorhydrine et de triéthanolamine dans un milieu alcalin en chauffant à 75-80° C pendant 30 minutes.