Brevet FR2000416A1 — publié le 19690905

On sait déjà quten partant d'une préparation radioactive pour microscopie électronique, on peut préparer à la fois une image et ce qu'on appelle un autoradjôgramme, en déposant sur la surface à reproduire de la préparation radioactive une mince couche d'une émulsion photographique qui doit entre impressionnée par le ngonne- ment radioactif de la surface de la préparation d'une façon correspondant & la distribution des substances radioactives, ce qui a pour effet de séparer l'argent dans la couche d1émulsion, dans les régions radioactives.Si lton produit ensuite une image de microscopie électronique de la préparation après développement, on obtient une nette correspondance entre la structure reproduite et sa radioactivité, du fait que, grace à l'argent séparé, les régions radioactives produisent dans l'image de microscopie électronique un noirciiseient supplémentaire superposé à l'image normales Jusqu'ici, la difficulté principale rencontrée dans la recherche d'un ne méthode efficace d'autoradiographie en microscopie électronique consistait & réaliser une pellicule d'émulsion aussi mince que possible. Par immersion d'une boucle dans une émulsion photographique, on sait déjà produire une mince lamelle d'émulsion liquide tendue dans cette boucle, en extrayant celle-ci de ltémulsion, puis déposer cette lamelle sur la surface de la préparation. Mais on a constaté que les~pellicules d'émulsion ainsi prépares donnent des images imprécises parce qu'elles sont trop épaisses La présente invention se propose dtindiquer un procédé et une installation avec lesquels on peut réaliser des pellicules extrêmement minces, de moins de 0,1 > i d'épaisseur, sur la surface d'une préparation. Le procédé prévu par la présente invention pour préparer des couches photographiques de moins de 0,1 d > épaisseur sur des couches supports et en particulier sur des préparations pour-microscopie électronique qui doivent outre étudiées par autoradiographie, consiste à produire une lamelle de liquide d'émulsion tendue à l'intérieur d'un cadre, par immersion de ce cadre dans l'émulsion photographique liquide puis par extraction de ce cadre, et à dOpo- ser ensuite cette lamelle sur le support, et il est caractérisé par le fait que, avant autre déposée sur-le support, la lamelle est dilatée par expansion de la surface entourée par le cadre qui comporte une partie mobile. On réalise ce procédé de préférence en dilatant la lamelle suffisamment pour que des couleurs interférentielles apparaissent sons un éclairage en lumière visible. Dans ces eonditioni, on peut en effet évaluer facilement l'épaisseur de la couche d'émulsion par les couleurs interférentielles, et déterminer l'instant ot l'on atteint une épaisseur inférieure d O, 0,1 , ce qui est le cas lorsque la coloration interférentielle disparatt quand l'épaisseur de la pellicule d'émulsion continue & diminuer. Dans ce cas, les ondes de lumière visible qui se réfléchissent respectivement sur la face avant et sur la face arrière de la pellicule s'annulent mutuellement quelle que soit la longueur d'onde. La présente invention permet d'utiliser des couches extrêm*- ment minces en autoradiographie par microscopie électronique, ce qui améliore de deux façons la netteté des image s. On ait déj & qu'une image autoradiographique d'une surface radioactive est d'autant plus nette que la pellicule d'émulsion déposée est plus mince, parce que le rayonnement de la surface de la préparation, sur un angle d'ouverture de près de 180 , produit une zone d'iipré cision (appelée "halo") beaucoup plus petite avec des pellicules minces qutavec des pellicules épaisses, et parce qutune pellicule autoradiographique mince trouble moins l'image obtenue ensuite par microscopie électronique. Pour mieux faire comprendre la présente invention on décrire maintenant le procédé de cette invention ainsi qu'une installation correspondante & titre d'exemple, à l'aide des figures jointes. La fig. 1 montre schématiquement le principe appliqué. On ntilise un cadre 1, qui est par exemple in fil métallique, et qui comporte un côté mobile 2 constituant une traverse coulissante, gracie à quoi on peut, en déplaçant cette traverse, faire varier la surface 3 délimitée par le cadre. Pour appliquer la présente invention, la boucle en fil mdtal- lique, avec la traverse placée dans une position correspondant à une petite surface 3, est immergée dans l'émulsion photographique liquide, puis est extraite de cette émulsiqn, et l'on obtient ainsi une lamelle d'émulsion photographique qui est maintenue par la boucle et la traverse. Cette lamelle liquide a une faible épaisseur, qui dépend de la nature de l'émulsion, de sa température, et de l'étendue et et -pourtour de la surface.Ensuite, on amincit la lamelle d'épaisseur déterminée qui a été ainsi obtenue, en- accroissant la surface 3 par déplacement de la traverse 2o Comme on l'a déj & indiqué, on peut poursuivre cette expansion de la surface jusqu'à ce que les couleurs interférentielles visibles à la lumière disparaissent et que l'épaisseur de la pellicule soit très inférieure à 0,1 La lamelle ainsi dilatée et amincie est ensuite déposée d'une façon déjà connue sur la préparation, et le traitement de celle-ci se poursuit de la façon habituelle. Pour le but de cette invention, on trouve dans le coinierce certaines émulsions à grain fin, qui conviennent particulièrement bien. La fig. 2 montre unelinstallation pratique permettant d'appliquer le procédé de la présente invention. Cette installation est caractérisée par le fait qu'elle est constituée par un dispositif de tenue pouvant basculer autour d'un axe horizontal et est destinée à-tenir une boucle de fil métallique avec traverse coulissante, et qu'elle comporte des organes de manoeuvre pour faire basculer le dispositif de tenue de la boucle autour de l'axe horizontal et pou déplacer la traverse mobile relativement & cette boucle. Sur la fig. 2, on aperçoit en 4 le dispositif de tenue de la boucle en fil métallique 5, conformée conime sur la fig. 1 et munie de la Traverse 6. Ce dispositif de tenue est monté sur une table, et lton peut l'incliner autour d'un axe horizontal gracie à un mécanisme approprié, en tournant la poignée moletée te Parmi les organes comandant ce mouvement d'inclinaison, la figure montre des parties des deux revues coniques 9 et 10 qui engrènent l'une avec l'autre.Le dispositif de tenue inclinable est également le support d'un deuxième mécanisme permettant de commander un déplacement relatif entre le cadre 5 et la traverse 6 qui est tenue par le fil métallique 16. Le mécanisme commandant ce mouvement de translation est actionné par une rotation de la poignée moletée Il. Cette dernière rotation est transmise par l'intérieur de l'arbre creux 12 à la poulie 13, puis de cette dernière, par un ble 14od'entratnement, à la tige 15 qui est guidée dans une outure du dispositif de tenue 4. Le cadre en fil métallique 5, qui est fixé d cette tige 15, est ainsi déplacé relativement à la traverse 16, ce qui permet de faire varier la surface limitée par la traverse et le cadre. Les mécanismes commandant le mouvement d'inclinaison du dispositif de tenue et le mouvement de translation du cadre et de la traverse ne font pas partie par eux-mtmes de la présente invention. Ces mécanismes peuvent évidemment titre modifies de nombreuses façons. La table 7 supporte un dispositif 18 de tenue de la préparation 19, installé de façon que l'on puisse faire descendre la lamelle de liquide d'émulsion sur la préparation quand le cadre 5 est entièrement sorti. L'installation décrite convient pour titre installée dans des installation de vide. On peut l'employer dans une installation de vaporisation sous sous vide, pour garnir par vaporisation une préparation de microscopie électronique avec une autre substance, avant de couvrir la préparation avec la pellicule mince photosensible. Cette autre substance peut-etre par exemple le carbone, pour produire une réplique, ou bien un mental lourd pour accrottre le contraste dans l'image de microscopie électronique. Une combinaison de l'installation de la présente invention avec une installation de vaporisation sous vide permet en particulier de traiter des échantillons d'étude surcongelés. REVEND I CA T IONS Procédé de préparation de couches photographiques de moins de O;l P d'épaisseur sur des couches supports, et en particulier sur des préparations pour microscopie électronique qui doivent être étudiées par autoradiographie, ce procédé comprenant la production d'une lamelle de liquide émulsion tendue à l'intérieur d'un cadre, par immersion de ùe cadre dans l'émulsion liquide phographique puis par extraction de ce cadre, et ensuite le dépôt de cette lamelle sur le support, et possédant es caractéristiques suivantes : : 1) Avant autre déposée sur le support, la lamelle est dilatée par expansion de la surface entourée par le cadre qui comprend une partie mobile 2) Procédé conforme à la revendication 1, et caractérisé par le fait que la lamelle est dilatée jusqutà ce que les colorations interférentielles produites sur elle par la lumière disparaissent. 3) Installation appliquant le procédé de la revendication 1 et caractérisée par le fait qu'elle est constituée comme un dispositif de tenue inclinable autour d'un axe horizontal et supportant une boucle en fil métallique avec traverse mobile, et que l'on prévoit des mécanismes pour incliner le dispositif de tenue de la boucle en fil métallique autour de l'axe horizontal et pour déplacer la traverse relativement à cette boucle.