Brevet FR2004727A1 — publié le 19691128

La présente invention concerne un nouveau procédé et de nouveaux produits intermédiaires pour préparer l'arginine ou des peptides contenant un ou plusieurs restes d'arginine. L'invention a plus particulièrement pour objet des produits 5 intermédiaires, dans lesquels la fonction amino du groupe guanido de l'arginine est protégé par un radical sulfonyle hydrocarboné, ainsi que le procédé permettant de séparer ce groupe protecteur par réaction avec l'acide fluorhydrique, opération s'effectuant avec un excellent rendement et sans 10 faire entrer en compétition des réactions secondaires. La protection des groupes amino du reste guanido de n 1'arginine, représentés ci-après par K , intéresse depuis longtemps l'homme de l'art spécialisé dans la synthèse des peptides. La découverte pour séparer facilement le groupe 15 tosyle N est particulièrement surprenante du fait de la révélation faite par.Sakakibara, Bull. Chem. Soc. Japon 40, 2164 (1967) qui mentionne que le groupe tosyle est stable dans l'acide fluorhydrique. Le procédé de l'invention présente un certain nombre 20 d'avantages par rapport ausprocédés précédents pour ouvrir le rt groupe tosyle N . Comme l'a remarqué Katz, Arch. Biochem. Biophys. 51, 293 (1954), l'acide fluorhydrique constitue un solvant excellent des peptides. Le point d'ébullition,c'est-à-dire 20°C, de l'acide fluorhydrique permet d'obtenir un contrôle 25 automatique de la température de la réaction et de fournir un intervalle de température ; effectif convenable suivant lequel on peut mener à bonne fin le procédé. L'acide fluorhydrique fait fonction à la fois de réactif et de solvant; on n'a pas besoin ainsi d'ajouter d'autressubstances. Par conséquent, 30 on n'a pas besoin d'utiliser d'autre réactif au cours de l'opération d'isolement du produit ; on effectue convenablement cette isole ment simplement par évaporation de l'acide fluorhydrique . On peut représenter les produits intermédiaires utilisés 35 selon le procédé de l'invention par la formule développée partielle suivante : ^ ,H ! -N-Çff-C- NH t If CHgCHgCEIgBHC-NHSOgR 69 08313 2 2004727 dans laquelle R représente un radical hydrocarboné. On préfère utiliser plus particulièrement comme radicaux hydrocarbonés des radicaux alkyle ne contenant pas plus de 8 atomes de carbone, par exemple les radicaux méthyle, éthyle, propyle, butyle, 5 pentyle, hexyle, heptyle, octyle, et leurs isomères à chaîne ramifiée; des radicaux aryle, tels que phényle et tolyle, ainsi que des radicaux arylalkyle, tels que benzyle et phénétyle. Dans cette représentation partielle les valences non satisfaites signifient que l'on considère l'arginine elle-même ou le 10 resté arginine comme un constituant d'un peptide. La mise en oeuvre du procédé de l'invention s'effectue convenablement à des températures qui ne sont pas supérieures à 20°C, c'est-à-dire le point d'ébullition de l'acide fluorhydrique. La durée de réaction varie bien entendu avec la tempé-15 rature, mais on constate qu'une durée totale d'une heure dans l'intervalle de 0 à 20°C donne satisfaction. Ainsi, le procédé est caractérisé par la réaction avec l'acide fluorhydrique de la L-arginyl(tosyl)-L-prolyl-L-prolyl-glycyl-L-phényl-alanyl-L-séryl-L-propyl-L-phénylalanyl-L-(tosyl)arginine (ditosylbra-20 dykinine) ; on opère à la température de 0 à 20°C pendant une heure pour obtenir le nonapeptide-détosylé , c'est-à-dire la bradykinine. On obtient le produit intermédiaire ditosylé par hydrogénation catalytique de la carbobenzoxy-L-arginyl(tosyl)-L-prolyl-L-prolyl-L-glycyl-L-phénylalanyl-L-séryl-L-prolyl-L-25 phénylalanyl-L-(tosyl)arginine . Les produits intermédiaires de l'invention sont en outre utiles dufèlb de 3ars précieuses propriétés pharmacologiques . La ditosylbradykinine par exemple présente la propriété de contracter les muscles lisses, propriété qui est caractéristique 30 de la bradikinine, agent hypotenseur connu. On utilise de plus les produits intermédiaires de l'invention dans la préparation d'autres peptides contenant de l'arginine, par exemple langiotensine, la vasopressine et l'hormone d'ac:ivation de l'a-mélanocyte„ 35 Lesexemples suivants illustrent l'invention sans toute fois en limiter la portée; Dans ces exemples, les températures s'entendent en °C et les quantités de substances en parties en poids„ 69 08313 3 2004727 ■ Exemple 1 On part d'une solution de 7,5 parties de carbobenzoxy-L- ri N-tosyl-arginyl-L-prclyl-L-prolyl-glycyl-L-phénylalanyl-L-séryl-L-propyl-L-phénylalanyl-L-N -tosylarginlne dans 250 par-5 ties en volume d'acite acétique à 90# ; on y ajoute 0,75 partie de noir de palladium, et on agite ce mélange avec de l'hydrogène à température ambiance sous une pression de 4 atmosphères jusqu'à ce que la réaction soit complète. Après séparation du catalyseur par filtration, on isole le produit 10 brut en éliminant le solvant sous pression réduite. On purifie cette substance par dispersion à contre-courant dans un système de solvant consistant en méthanol, en eau, en chloroforme rt rt et en tétrachlorure de carbone. On obtient la N , N -ditosyl-bradykinine à l'état pur sous la forme d'une pouire amorphe; 15 son homogénéité est démontrée sur un chromatogramme en couche mince de silice dans un mélange d'eau et d'acide n-butanolacé-tique. Ce composé présente un pouvoir rotatoire jlans l'acide acétique de -56e. On détermine de plus sa pureté par une analyse .d'amlnoacides. 20 Exemple 2 On part d'une solution de 0,5 partie de NG, NG-ditosyl-bradykinine dans 25 parties d'acide fluorhydrique liquide ; on agite cette solution à la température de 0°C pendant 30 mi-25 nutes environ, puis on la débarrasse du solvant à la température de 20°C environ pendant 30 minutes approximativement. On sèche le résidu résultant sur de l'hydroxyde de potassium, puis on le purifie en procédant à une chromatographie par élu-tion à gradient de concentration sur une résine édaangeusa d'Ions 30 faiblement acide, en faisant varier linéairement la concentration de l'acide acétique 0,1 N à l'acide acétique glacial. On mélange les fractions appropriées et on procède à leur lyo-phylisation pour obtenir la bradykinine sous la forme d'une poudre blanche. On détermine sa pureté par analyse d'aminoacides, 35 et également par son activité de contraction de muscles lissés puissants, égale à 1,25, 1*35 de celle de la bradykinine commerciale. 69 08313 4 2004727 R_E_V_E_N_D_I_C_A_T__I_0_N_S 1°- Procédé de préparation d'arginine ou d'un peptide contenant de l'arginine, ledit procédé étant caractérisé en 5 ce que l'on met en contact avec de l'acide fluorhydrique un composé de formule développée partielle suivante : - NH-CHC- jjjj 10 15 20 LÎ2CH2CH2NHÏ-NJISO2R dans laquelle R représente un radical hydrocarboné de 1 à 8 atomes de carbone, et les valences mai satisfaites signifient que l'on considère l'arginine elle-même ou les restes arginine comme un constituant d'un peptide. 2°- Procédé selon la revendication 1 pour préparer de l'arginine ou des peptides contenant de l'arginine, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on met en contact avec de l'acide fluorhydrique•an composé de formule développée partielle suivante : î -NHCHC- NH 1 ' /—V CH2CH2CH2NHC-NHS'02-—P V- CH^ 25 dans laquelle les valencesncn satisfaites signifient que l'on considère l'arginine elle-même ou le reste arginine comme un constituant d'un peptide. 3°- Procédé selon la revendication 1 pour préparer la bradykinine, ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on met f1 c 30 en contacc avec de l'acide fluorhydrique la N ,N -di-(hydroear- turesulfonyl ) -bradykinine. 4°- Procédé selon la'revendication 1 pour préparer la bradykinine , ledit procédé étant caractérisé en ce que l'on . p f1 met en contact avec l'acide fluorhydrique la N ,N -ditosyl- 35 bradykinine. 5°- Procédé selon la revendication 1, pour préparer la bradykinine , ledit procédé étant caractérisé en ce que lion met en contaet avec l'acide fluorhydrique à la température de 0-20°C la NG,N®-'ditosylbradyklnine. 6°- La NG,NG-ditosylbrady,cinine.