Brevet FR2005516A1 — publié le 19691212

La présente invention est relative à une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier (dit ci-après sang) d'homme ou d'animaux» Le sang de l'homme ou des animaux est chimiquement composé de 5 divers constituants, par exemple de constituants inorganiques, de protéines, de glucose, d' acides organiques, d'enzymes, de vitamines, etc.» Le taux sanguin de ces constituants varie selon la maladie et, en conséquence, la mesure quantitative de ces constituants est importante pour le diagnostic de diverses maladies. Be 10 nombreux procédés de mesure ont été utilisés jusqu'à présentî par exemple des procédés de précipitation, d'analyse à la flamme, de t^ration, de détermination colorimétriquer de réaction enzymati— que, de chromatographie gazeuse, d'analyse turbidimétrique, d' analyse par électrophorèse, par chromatographie, etc.. (l.Kanai î 15 Rinsho Kensa-ho Teiyo, Ed.21, Kanehara Shuppan K.K., Japon). Cependant, en clinique, il faut souvent obtenir des résultats rapides et, en conséquence, il est souhaitable de disposer dans ce domaine d'un procédé plus simple et plus rapide. Récemment, des bandes de papier pour diagnostic, par exemple 20 pour la détermination de l'urée (azote), pour la détermination de la cholinestérase du sérum, pour la détermination du calcium ou du magnésium se sont avérées remplir ces conditions et on a estimé qu' on pouvait les utiliser, de manière appropriée, pour la détermination de la teneur du sérum en ces constituants, ou pour la déter— 25 mination de l'activité de ces constituants dans le sérum, en les trempant dans le sérum et en observant la coloration apparaissant sur celles-ci. Cependant, le procédé utilisant ces bandes est encore insuffisant pour permettre un diagnostic clinique rapide, pour la raison 30 suivante, à savoir que ce procédé a pour inconvénient que le sérum doit être séparé de l'échantillon de sang entier en laissant reposer pendant plus de 30 minutes avant de pouvoir tremper la bande de papier, car celle-ci devient si rouge, du fait de l'hémoglobine du sang qu'il est impossible d'observer l'apparition d'une coloration 35 sous l'effet du constituant à déterminer si la bande est trempée dans l'échantillon de sang entier* La présente invention a pour buts: - de fournir une bande de papier perfectionnée pour diagnostic 69 10008 2 2005516 utilisable sur un échantillon de sang entier; - de fournir un procédé de préparation de la bande de papier perlectionnée pour diagnostic. D'autres buts, avantages et caractéristiques de l'invention 5 apparaîtront dans la description détaillée qui va suivre. Par suite de recherches effectuées pour atteindre les buts précités, la Demanderesse a découvert que si on traite une bande pour diagnostic par du cholestérol, de la colophane ou leurs esters on peut empêcher l'adsorption et la pénétration des globules sur la 10 bande sans empêcher l'adsorption des constituants à doser et qu'on peut rapidement et de manière précise déterminer l'apparition d'une coloration due à la présence d'un constituant en trempant la bande ainsi traitée dans du sang entier, si on vient de prélever celui-ci. L'invention repose sur ces nouvelles découvertes et a pour Î5 objet une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier, préparée en plongeant une bande de papier pour diagnostic dans une solution, dans un solvant organique, de cholestérol et/ou de colophane et/ou leurs esters et en séchant la bande. 20 11 peut être préférable de préparer la bande de papier pour diagnostic en plongeant une bande de papier pour diagnostic préalablement préparée (c'est-à-dire une bande pour la détermination de l'urée (azote), de la cholinestérase du sérum, du calcium ou du magnésium) dans une solution à une concentration de 1 à lO^fa, dans 25 un solvant organique, d'un ou plusieurs des composés suivants: le cholestérol ou ses esters (par exemple acétate de cholestérol, ben— zoate de cholestérol), la colophane ou ses esters (par exemple la gomme de colophane, la gomme d'ester (ester glycérinique de colophane) ), l'abiétate de méthyle, l'ester diéthylène glycolique de 30 l'acide abiétique, l'ester diéthylène glycolique de l'acide 2-hydr L'n pralsîqmie, la bande de papier pour diagnostic selon l'invention peut être utilisée comme suits on plonge la bande directement 69 10008 3 2005516 êaos du sang humain ou animal et on l'y maintient pendant un laps de "femps suffisant pour qu'une coloration apparaisse; puis, après lavage àl'eau, on compare la coloration obtenue avec celles d'une table d' étalonnage. On ne remarque ni souillure ni virage au rouge de la 5 bande et on peut rapidement et de manière précise mesurer la concentration ou l'activité du constituant à déterminer. Essai. On prélève du sang sur un homme en bonne santé , et .sur.ies malades souffrant d'insuffisance rénale, et .on sépare le sérum de la 10 moitié des échantillons de sang. On dose la teneur, en.urée en utilisant une bande de papier pour diagnostic non traitée pour dosage de l'urée (azote) ainsi qu'une bande de papier perfectionnée selon 1' invention pour dosage de l'urée (azote), toutes deux étant décrites à 11exemple 1. 15 Les résultats obtenus sont rapportés au tableau suivant: Teneur du sang en urée (azote) Echantillon Sérum Sérum Sang entier Sang entier procédé au diacétyl mono-oxime ;(mg/dl) + bande non traitée (mg/dl) bande non traitée (mg/dl) bande perfectionnée selon 1" invention (mg/dl) homme sain 13 10 10 " malade des reins I 28 30 — 30 malade des reins II 42 40 - 40 ♦ procédé au diacétyl mono-oxime: Ormsby, J. Biol.Chem.146:595,1942 — signifie qu'il est impossible de doser la teneur Il est évident, d'après le tableau, que l'utilisation de la 30 bande de papier pour diagnostic permet de mesurer rapidement et de manière précise la teneur en urée, l'activité de la cholinestérase ou autre dans le sang, en utilisant un échantillon de sang entier» Comme la bande est facile à préparer en grandes quantités et à bas prix, la bande selon l'invention est très précieuse dans le domaine 35 médical. Les'exemples suivants sont donné à titre d'illustration non limitative de 1'invention 69 10008 4 2005516 Exemple 1 On plonge du papier a la résine échangeuse d'ions de type Am-berlite SA-2 dans une solution d'acide chlorhydrique 0,05 N contenant 0,V?o de p-diméthylamino cinnamaldéhyde, pendant 30 minutes. On 5 sèche le papier imprégné résultant, à température ambiante ^ bande de dosage de l'urée (azote), non traitée_/. On plonge la bande de dosage de l'urée (azote) ainsi obtenue dans une solution chloroformique de cholestérol à 5/pendant 10 minutes et on sèche à température ambiante, obtenant ainsi une bande 10 de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier. Exemple 2 On plonge la bande de papier pour dosage de l'urée (azote) obtenue à l'exemple 1 dans une solution éthanolique de gomme de colo-15 phane à 4c,î>, pendant 10 minutes, et on sèche à température ambiante, obtenant ainsi une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier. Exemple 3 On plonge la bande de papier pour dosage de l'urée (azote) ob-20 tenue à l'exemple 1 dans une solution éthanolique de gomme d'ester (ester glycérinique de colophane) à 2,5°/°, pendant 10 minutes, et on sèche à température ambiante, obtenant ainsi une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier. 25 Exemple 4 On plonge une bande de papier pour diagnostic, pour dosage de la cholinestérase du sérum (ACHOLEST: marque déposée, fabriquée par 0STEEIcEICIIISCIIE STICKSTOFFWEKKE A.G., Autriche, et vendue au Japon par CHUGAI SEIÏAKU KABUSIIIKI KAISIIA) dans une solution de 30 palmitate de cholestérol et d'acétate de cholestérol (l/2) à 3,5/" dans du tétrachlorure de carbone, pendant 10 minutes, et on sèche à température ambiante, obtenant ainsi une bande de papier perfection née pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier. Exemple 5 35 On plonge une bande de papier pour diagnostic, pour dosage de la cholinestérase du sérum (ACHOLEST: marque déposée, fabriquée par OSTEkkEICHISCHE STICKSTOFFWEKKE A.G., Autriche, et vendue au Japon par CHUGAI SEIYAKU KABUSIIIKI KAISIIA) dans une solution de benzoate 69 10008 5 2005516 de cholestérol à 3?o dans le tétrachlorure de carbone, pendant 15 minutés, et on sèche à température ambiante, obtenant ainsi une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier. 69 10008 6 2005516 REVENDICATIONS 1. Un procédé de préparation d'une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier, caractérisé en ce qu'on plonge une bande de papier pour diagnostic 5 dans une solution, dans un solvant organique, de cholestérol et/ou de colophane et/ou de leurs esters et qu'on sèche la bande. 2. Un procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que la bande de papier pour diagnostic est une bande de papier pour dosage de l'urée (azote), pour dosage de la cholinestérase du sé- 10 rum , pour dosage du calcium ou du magnésium» 3. Un procédé suivant la revendication T, caractérisé en ce que le solvant utilisé pour dissoudre le cholestérol, la colophane ou leurs esters est l'alcool méthylique, l'aleool éthylique, le tétrachlorure de carbone ou le benzène. 15 4. Un procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que l'ester de cholestérol est l'acétate de cholestérol ou le pal-mi tate de cholestérol. 5. Un procédé suivant la revHndication 1, caractérisé en ce que l'ester de colophane est choisi parmi la gomme de colophane^ la 20 gomme d'ester, l'abiétate de méthyle, l'ester diéthylène glycolique de l'acide abiétique et l'ester diéthylène glycolique de l'acide 2-hydroabiétique * 6. Un procédé suivant la revendication 1, caractérisé en ce que le temps de trempage est de 5 à 20 minutes dans une solution 25 de cholestérol, de colophane ou de leurs esters à 1 à 10fa dans un solvant organique. 7. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic caractérisée en ce qu'elle contient environ 0,5 à 2,5 mg de cholestérol, de colophane ou de leurs esters par cm2 . 30 8. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic utilisable sur un échantillon de sang entier, caractérisée en ce qu'elle est obtenue en plongeant une bande de papier pour diagnostic dans une solution, dans un solvant organique, de cholestérol et/ou de colophane et/ou de leurs esters et en séchant la bande. 35 9. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic suivant la revendication 8, caractérisée en ce que la bande de papier pour diagnostic est choisie parmi les baildes pour dosage de l'urée (azote), pour dosage de la cholinestérase du sérum, pour dosage du mag 69 10008 7 2005516 nésium et pour dosage du calcium. 10. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic suivant la revendication 8, caractérisée en ce que le solvant organique utilisé pour dissoudre le cholestérol, la colophane ou leurs'esters est 5 l'alcool méthylique, l'alcool éthylique, le tétrachlorure de carbone ou le benzène. 11. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic suivant la revendication 8, caractérisée en ce que l'ester de cholestérol est l'acétate de cholestérol ou le palmitate dé cholestérol. 10 12. Une bande de papier perfectionnée pour diagnostic suivant la revendication 8, caractérisée en ce que l'ester de colophane est choisi parmi la gomme de colophane, la gomme d'ester, l'abiétate de méthyle, l'ester diéthylène glycolique de l'acide abiétique et 1' ester diéthylène glycolique de l'acide 2-hydroabiétique. 15 13. tfne bande de papier perfectionnée pour diagnostic suivant la revendication 8, caractérisée en ce que le temps de trempage est de 5 à 20 minutes dans une solution de cholestérol, de colophane ou de leurs esters à 1 à 10fo dans un solvant organique.