Brevet FR2011262A1 — publié le 19700227

La présente invention est relative à de nouveaux pep-tides abaissant le niveau du calcium dans le -sang, à leurs sels d'addition avec des acides et à leurs complexes, et à un procédé pour leur préparation. Dans le cas de ces peptides, il s'agit de 5 la calcitonine humaine dont la préparation à l'état pur (sous la forme de plusieurs composants actifs) a réussi. Il est connu que les hormones hypocalcémiantes se présentent chez les mammifères et chez l'homme. La structure de la thyrocalcitonine du cochon a déjà été éclaircie. C'est un amide 10 dotriacontapeptidique avec un anneau bisulfure de cystéine sur le terminus azoté. En ce qui a trait à la grande importance de la calcitonine dans le métabolisme du calcium et l'édification des os et à la thérapie correspondante, il est important de disposer sous forme pure de calcitonine humaine. On a maintenant réussi à 15 préparer sous forme pure la calcitonine humaine à partir de carcinomes médullaires, riches en cellules C de la thyroi'de ou de métastases correspondantes de cellules C. Le procédé de préparation de la calcitonine humaine est caractérisé par le fait qu'on extrait une ou plusieurs fois avec un système solvant renfermant de 20 l'eau et un alcanol inférieur, à un pH de l'ordre de 1 à 6, un carcinome médullaire (dégraissé par exemple à l'aide d'acétone ou d'éther) de la thyroi'de ou d'une matière de métastases de cellules C, qui a subi le cas échéant une extraction préalable avec de l'alcool ou une solution aqueuse d'acide trichloracétique, puis qu'on 25 traite d'une manière usuelle la solution obtenue, comme dans le cas de la thyrocalcitonine du cochon, en particulier par chroma-tographie sur gel en utilisant une solution aqueuse d'acide for-mique en tant qu'éluant et par une répartition de Craig dans un système solvant renfermant du n-butanol et de l'acide acétique. ^0 Le système solvant utilisé pour l'extraction renferme par exemple, comme alcanol inférieur, du méthanol, de l'ethanol, du propanol, du n-butanol ou du butanol secondaire. La teneur en eau du système peut se situer, par exemple, entre 4 et 50$, et elle est de préférence, de 5 à J>Q%. Le pH acide indiqué est àjus-55 té, par exemple, avec des acides minéraux comme l'acide sulfuri-que ou lracide chlorhydrique ou avec des acides organiques comme 1racide forroique, l'acide acétique, ou avec des tampons 69 16731 2011262 acides comme un acétate-tampon ou un citrate-tampon. Le système solvant peut, le cas échéant, renfermer d'autres solvants organiques comme l'acétone ou des bases organiques comme la pyridine ou la morpholine, et/ou des sels minéraux, par exemple du chlo-5 rure de sodium. Il y a lieu de faire ressortir particulièrement des systèmes renfermant du n-butanol et de l'acide acétique, surtout un système (75 : 7,5 : 21) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau. L'extraction peut être effectuée en plusieurs stades 10 avec le même système solvant ou avec des systèmes solvants différents . A partir de l'extrait, on obtient le produit brut par exemple par concentration, lyophilisation ou précipitation, par exemple avec de l'acétone ou de l'acide trichloracétique. 15 La purification chromatographique est, de préférence, effectuée sur du "Sephadex G-50" ou sur un matériau équivalent. Pour l'élution, on utilise par exemple de l'acide formique déci-normal. Pour la répartition de Craig sont particulièrement avan-20 tageux, comme déjà mentionné, des systèmes renfermant du n-butanol et de l'acide acétique, par exemple un mélange (4:1 : 5) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau. Le composant principal de la calcitonine humaine (désigné ici par HT-C^) est un amide dotriacontapeptidique de la com-25 position d'acides aminés Lys (1), His (1), Asp (3)» Thr (5)» Sér (1), Glu (2), Pro (2), &ly (4-), Ala (2), V2 Cys (2) , Val (1), Mét (1), Ile (1), Leu (2), Tyc (1), Phé (3), tandis que 4 des 5 chaînes latérales carboxylées se présentent sous forme amide. A côté de cela, on a préparé à l'état pur les autres composants 30 actifs : HT-C^, HT-C^ et HT-Cgvj. L'analyse des acides aminés du composant ÏÏT-C^ est identique à celle de Hî-C^. Le composant principal de la calcitonine diffère donc fortement dans sa composition d'acides aminés de celui de la thyrocalcitonine du cochon. Lors de la scission enzymatique avec de la trypsine, 35 HT-C^ et ET-G2 fournissent deux fragments Trj et Œrjj avec la composition d1acides aminés qui est indiquée dans le tableau 1 dans l'exemple 1. Les composants HT-G^, HT-G^, HT-C^ et HT-G^ sont 69 16731 3 2011262 unitaires dans une chromatographie en couche mince et dans une électrophorèse. On a trouvé que HT-Cg possède la formule structurale suivante : Asn-Lys -Phé-His-Thr -Phé ~Pr o - Gln-Thr-Ala-Ile—G1y-r.V al-Gly-Al a-Pr o- 10 HT-C^ est le dimère de ce composé. • Du fait que HT-C^, après dansylation et hydrolyse acide, : ne fournit pas de bis-dansyl-cystine, on peut conclure qu'il se présente à 1'état de dimère antiparallèle. Dans des conditions "basiques, par exemple avec de l'am-15 moniaque diluée., ou par réduction, par exemple avec du dimercap-to-éthanol ou du dithio-thréitol à la température ambiante dans de.la pyridine aqueuse, HT-C^ est converti en HT-C^. • Les composants HT-G^ et HT-Cg peuvent par oxydation, d'une manière connue en soi, par exemple avec une solution aqueuse 20 de peroxyde d'hydrogène, être transformés en leurs'suifoxydes. La caractérisation des suifoxydes est indiquée dans les exemples. La calcitonine humaine (composants KT-C^, HT-Cg, HT-C^ et HT-G^xj seuls ou en mélange quelconque) montre chez le rat une activité de l'ordre de 100 à 200 imités MRC par milli-25 gramme (de peptides) dans le test décrit par Eumar et ses collaborateurs dans la publication intitulée "J. Endocrinology" 33, (1965), page 470. Elle abaisse le niveau du calcium dans le plasma et le niveau de phosphate dans le plasma du sang des mammifères, comme on l'a montré par des essais effectués sur des rats 30 ^ pesant de 50 à 150 g. Pour des patients d'tin métabolisme osseux élevé, .elle abaisse le niveau du calcium dans le sang lors d'une administration par voie .intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée de 0,01 à 5 mg:, par exemple dans une solution décimolaire d'un acétate—tampon d'un ,pH de:-4:,6.;'Elle peut par suite être 35 utilisée pour le- traitement d'hypercalcémies ou de maladies des os comme la maladie de Paget ou 1'ostéoporosé. nh2 (I) , Les composants HT-C^, HT-C^, 'HT-C^ 'etsont des bases formant des selô' d'addition- aivec des acides minéraux 69 16731 4 2011262 ou organiques. A partir des sels d'addition avec des acides, on peut préparer la "base libre d'une manière connue en soi. Pour des buts pharmaceutiques, la base peut être convertie en des sels d'addition avec des acides thérapeutiquement utilisait bles, par exemple eh des sels avec des acides minéraux tels que les hydracides halogénés, par exemple l'acide chlorhydrique ou l'acide bromhydrique, l'acide nitrique, l'acide thiocyanique, l'acide sulfuriquô, l'acide phosphorique, ou avec des acides organiques comme les acides acétique, propionique, stéarique, 10 glyçolique., lactique, pyruvique, oxalique, citrique, benzoïque, cinnamique, salicylique, 2-phéiioxy-"benzoïque ou 2-acétoxy-benzoïque, mandélique, méthane-suifonique, éthane-sulfonique, hydroxy-éthane-s'ulf onique, benzène-suif onique ou toluène-suifo-nique, trichloracétique ou trifluoracétique. 15 La calcitonine humaine peut, d'une manière connue en soi, être transformée en des complexes pharmaceutiquement utilisables à effet activé, par exemple en des complexes avec des substances qui, comme on sait, prolongent l'activité des peptides, telles que des gélatines non-antigènes, en particulier des hy-20 droxy-polygélatines, la polyvinyl-pyrrolidone, le phosphate de polyphlorétine, l'acide phytique, la protamine, l'acide poly-glutamique, ou des composés métalliques difficilement solubles, par exemple des phosphates, des pyrophosphatés ou des hydroxydes de l'aluminium, du magnésium, du cobalt, en particulier du zinc. 25 Les sels et complexes peuvent être utilisés de la même manière que le peptide libre. t En vue de leur utilisation dans des préparations pharmaceutiques, les composés peuvent être mélangés avec une matière de support pharmaceutique, organique ou minérale, convenant 30 pour une application entérale ou parentérale. Des supports appropriés sont, par exemple, l'eau, des solutions salines physiologiques, la gélatine, le lactose, le glucose, l'amidon, des huiles végétales, des alcools benzyliques, des polyalcoylène-glycols et d'autres supports' pharmaceutiques connus. Les prépa-35 rations peuvent être stérilisées et/ou renfermer des substances auxiliaires, telles que des agents de conservation, de stabili-sation,, des agents mouillants ou émulsifiants. Elles peuvent 69 16731 5 2011262 aussi présenter encore d'autres additifs thérapeutiquement précieux. L'invention est décrite plus en détail dans les exemples non limitatifs 'qui suivent, dans lesquels les températures 5 sont indiquées en degrés centigrades. Dans la chromato graphie en couche mince, on utilise les systèmes suivants: Système 45 : mélange (7 î 3) de butanol secondaire et d'une solution aqueuse à 3 % d'ammoniac. 10 Système 52 1 : mélange (75 ' 7j5 s 21) de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 79 : mélange (1 : 1 : 1) de n-butanol, de pyridine et d'eau. ^ Système 101 A : mélange (42 i 24 : 4 : 30) de n-butanol, de pyridine, d'acide acétique glacial et d'eau. Système 104 ; mélange (41 : 41 : 18) de chloroforme, de métha-nol et d'une solution aqueuse à 17 % d'ammoniac. 20 La chromatographie en couche mince est, sauf indication contraire, effectuée sur MAlox-D-0" (Camag). Toutes les valeurs (Ss) sont rapportées au suifoxyde d1 a-thyrocalcitonine du cochon, pris pour unité. L'électrophorèse est effectuée sur de la cellulose 25 "Avicel" ou sur "Cellogel".(feuille d'acétate de cellulose) à un pH de 1,9 /avec un tampon constitué par un mélange (95 ï 26,5 : 980) d'acide acétique glacial, d'acide formique et d'eau.7* à 140 volts pendant deux heures. La plage de migration (d) est indiquée par rapport au suifoxyde d'a-thyrocalcitonine de cochon, 30 pris pour unité. EXEMPLE 1 ' On congèle immédiatement 10 g de carcinome médullaire et lyophilise. Après traitement avec de l'éther pour éliminer les fractions graisseuses, on extrait à fond le tissu sec (2 g) à trois reprises avec un volume décuple d'un mélange de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau (75 : 7}5 î 21), à 20°. 69 16731 6 2011262 On réunit les extraits, les débarrasse sous vide du butanol et lyophilise. On obtient 450 mg d'un résidu sec d'une activité de 12 unités IffîC par milligramme. On en purifie 300 mg dans de l'acide formique décinormal par filtration sur gel, sur une colonne 5 (450 ml) de "Bio Gel P6" ou de "Sephadex G-50" dans de l'acide formique décinormal ; après réunion et lyophilisation des fractions actives (.0,5 à 0,7 volume de colonne), on obtient 18 mg d'un produit présentant 50 unités MRC par milligramme. On soumet ensuite cette matière à une répartition multiplicative dans un 10 système de n-butanol, d'acide acétique glacial et d'eau (4 ; 1: 5) en 140 stades, en choisissant un rapport de phase de un et un volume de phase de 3 ml. On réunit en groupes de dix éléments chaque fois les fractions actives déterminées après essai, débarrasse du solvant et lyophilise. Pour les fractions présentant une 15 activité maximale, la valeur de E est de 0,6. Le peptide HT-Cg obtenu à partir de ces fractions s'avère unitaire dans une chromatographie en couche mince et dans une électrophorèse. Il présente sur le rat une activité de l'ordre de 100 à 200 unités MRC par milligramme de peptide. La plage de migration par rapport 20 au suifoxyde d'a-thyrocalcitonine du cochon, dans le système 52, sur "Alox-DO", est de 1,16 ; dans le système 79 j sur "Alox DO", elle est de 1,79 ; dans le système 104, sur "Alox D0n, elle est de 1,28 et dans le système 45, sur "Alox DO", elle est de 1,37* Dans un mélange d'acide acétique glacial, d'acide formique et 25 d'eau (95 : 26,5 : 980) d'un pH de 1,9, le produit migre à 140 volts, en deux heures, sur de la cellulose "Avicel", vers la cathode, rapporté au suif oxyde de thyrocalcitonine du cochon pris pour unité, d'une longueur d = 0,77» Le produit fournit des réactions colorées positives avec la ninhydrine, la chlorotoli-30 dine, avec un mélange d'hexacyanoferrate de potassium-(II) et de chlorure de fer-(III), avec 1'amide diazoté de l'acide sulfa-nilique, et il ne fournit pas de réaction avec un mélange de 4— diméthylamine-benzaldéhyde et d'acide chlorhydrique, ou avec le réactif de Sakaguchi, pas de fluorescence en U.V. : absence de 35 tryptophane. L'analyse des acides aminés après hydrolyse acide fournit le résultat suivant : lysine (1), histidine (1), acide aspartique (3)» thréonine (5), sérine (1), acide glutamique (2), proline (2), glycine (4), alanine (2), 1/2 cytine (2), valine (1), 69 16731 7 2011262 10 15 20 méthionine (1), isoleucine (1), leucine (2), tyrosine (1), phénylalanine (3) î Le suif oxyde de HT-C2 présente les va leurs de Rs suivantes : Es = 1,07 dans le système 52, Rs = 1,20 dans.le système 45, Rs = 1,66 dans le système 79» Pour caractériser davantage, on utilise la scission enzymatique du peptide avec la trypsine. On obtient deux fragments, notamment ÎTj.qui comprend les acides .aminés 1 - 18, et Trji qui comprend les. acides aminés 19 à 32. La composition d'acides aminés des deux fragments ressort du tableau 1. Le. fragment Trjj est nettement plus lipophile que Trj dans.-une chromatographie en couche mince sur "Alox DO" et, dans une électrophorèse, il migre plus rapidement vers la cathode que . Fragment s Rs = 0,53 dans le système 52, Rs = 0,54 dans le système 79, Rs = 0,51 dans le système 104. Electrophorèse sur de la cellulose "Avicel" : d = 0,81. Fragment Tr^j ï 25 Rs = 1,38 dans le système 52, Rs = 1,45 dans le système 79} Rs = 1,43 dans le système 104. Electrophorèse sur de la cellulose "Avicel" : d = 0,94. 69 16731 8 2011262 TABLEAU 1 Tri ^11 5 NH3 0) (2) Lys 1 His • 1 10 Asp ' ' 3 Thr 3 2 Sér 1 Glu 1 1 15 20 25 30 Pro 2 Gly 2 2 Ala 2 1/2 Oys 2 Val 1 Mét 1 Ile 1 Leu 2 Tyr 1 Plié 1 2 18 14 EXEMPLE 2 On dégraisse à l'éther 110 g d'un matériau de métastase de cellules C - profondément congelé que l'on a retiré de la cage thoracique et extrait ensuite comme décrit dans l'exemple 1 avec un'mélange'(75 : 7,5 21)" dë n-butanol,-d'acide acétique glacial et d'eau.- On obtient 6 g d'extrait- sec sous la forme d'une poudre brun-fôncé. On secoue à plusieurs reprises avec de 69 16731 2011262 l'acide formique décinormal (au total 150 ml). Dans ce cas, 3,6 g du résidu sec passent en solution. On chromatographie sur gel la solution, en deux portions, sur une colonne de "Bio Gel P6" (5 cm ; 85 cm ; •volume environ 1.600 ml) avec de l'acide 5 formique décinormal et recueille en fractions de 20 ml. Il existe deux pointes de matière active, et à vrai-dire les fractions 13 à 21 avec un maximum de pointe à 0,4 volume de colonne et les fractions 25 à 34 avec le maximum de pointe à 0,55 volume de colonne. Les fractions 25 à 34 réunies fournissent, lors de la 10 lyophilisation, 105 mg d'un produit brut qui est identique au produit obtenu suivant l'exemple 1 lors de la filtration sur gel et, qui lors de la répartition multiplicative comme dans l'exemple 1, fournit à l'état pur le composant HT-Cg» Les fractions 13 à 21 réunies fournissent, lors de la lyophilisation, 202 mg 15 de produit brut. On soumet ce produit à une répartition multiplicative en 400 stades dans un système constitué par un mélange (4:1 : 5) de butanol normal, d'acide acétique glacial et d'eau, en éléments de chacun 3 ml de volume de phase. Le maximum de l'activité est trouvé pour X = 0,19« Le produit pur ainsi obtenu / 20 (HT-Cyj) est, dans le test du rat suivant Eumar et ses collaborateurs, loc. cit., sensiblement aussi actif que le produit obtenu suivant l'exemple 1 (HT-G^). Il peut être transformé en le suifoxyde également actif, par exemple avec de l'eau oxygénée à 50 %o Dans une chromatographie en couche mince sur "Alox DO", 25 la valeur de Es est de 1,04 dans le système 52, de 1,42 dans le système 79, et de 1,20 dans le système 45. Le suifoxyde présente les valeurs suivantes : Rs = 0,88 dans le système 52, 30 Rs = 1,29 dans le système 79» Rs = 1,09 dans le système 45. Dans une électrophorèse sur de la cellulose "Avicel", d = 0,90 pour HT-C^j et son suif oxyde. Sur "Gellogel", jtj .d = 1,15 pour HT-C^ et d = 1,55 pour son suif oxydé. Le composant HT-C^ donne des réactions positives avec la ninhydrine, la chlorotolidine, le réactif de Pauly et le réactif de Bar ton. Les réactions suivant Sakaguchi et suivant Ehrlich et la fluorescence en ultra-violet sont négatives. 69 16731 10 2011262 L'analyse des acides aminés après hydrolyse acide fournit : lysine (1), histidine (1), acide aspartique (3), thréonine (5)» sérine (1), acide glutamique (2), proline (2), glycine (4), alanine (2), 1/2 cystine (2), valine (1), méthio-5 nine (1), isoleucine (1), leucine (2), tyrosine (1), phényla-lanine (3), Lors de la scission à la trypsine, on obtient des fragments avec les mêmes compositions d'acides aminés que celles indiquées pour HT-G^ dans le tableau 1 de l'exemple 1. Le frag-10 ment Trjj est identique pour HT-C^ et HT-Cg. Pour le fragment Tr^, la valeur de Es est de 0,55 dans le système 52 (sur "Alox")» de 0,86 dans le système 101 A (sur de la cellulose). Lors d'une électrophorèse sur de la cellulose "Avicel", d = 0,91» 15 Pour le fragment Tr^-j-, la valeur de Rs est de 1,38 dans le système 52 (sur "Alox"), et de 1,31 dans le système 101 A (sur de la cellulose). Lors d'une électrophorèse sur de la cellulose "Avicel", d = 0,94. On dissout HT-Cg dans une quantité cinquantuple d'une 20 solution à 0,1 % de chlorhydrate de cystéine et maintient pendant une heure à 45°. On chromatographie ensuite la solution. Parmi les produits, le chromatogramme montre une tache qui correspond au dimère HT-C^. Si l'on traite pendant une heure HT-C^ à 45° par une 25 solution demi-normale d'ammoniaque, il est transformé en HT-Cg. EXEMPLE 3 Lorsqu'on extrait comme décrit dans l'exemple 1 le carcinome médullaire, purifie le résidu sec par filtration sur 30 gel et soumet le produit ainsi obtenu, présentant 50 unités MRC par milligramme, à une répartition multiplicative comme dans l'exemple 1, on obtient, à côté des fractions présentant un maximum d'activité avec K = 0,6, des fractions avec E = 2,7 de peptide HT-C™ obtenu à partir de là, s'avère unitaire dans une chro- 35 ' matographie en couche mince et dans une électrophorèse. 69 16731 2011262 Il possède la même composition d'acides aminés que HT-C2, mais ne présente pas de groupe a-aiainogène libre. Il présente sur le rat une activité d'environ 100 à 200 imités MRC par milligramme de peptide. 5 Lors d'une chromatographie en couche mince sur "Alox D0", la valeur de Rs est de 1,4-0 dans le système 52, de 1,40 dans le système 104 et de 1.,80 dans le système 79- Lors d'une électrophorèse sur de la cellulose "Avicel", d = 0,56. Le produit présente des.réactions colorées positives 10 avec la ninhydrine, la chlorotolidine, avec un mélange d'hexa-cyanoferrate de potassium-(II) et de chlorure de fer-(III), et avec l'amide diazoté de l'acide suifanilique. , EXEMPLE 4 15 - y Lorsqu'on extrait, comme décrit dans l'exemple 2, un carcinome médullaire, purifie le résidu sec de l'extrait par filtration sur gel et soumet le produit des fractions 13 à 21 à une répartition multiplicative, on obtient, en dehors des fractions actives avec K = 0,19, celles avec K = 4,0. Le peptide 20 obtenu à partir de là est unitaire dans une chromatographie en couche mince et dans une électrophorèse. Il présente sur le rat une activité de l'ordre de 100 à 200 unités MRC par milligramme de peptide. Lors d'une chromatographie en couche mince sur "Alox DO", la valeur de Rs est de 1,45 dans le système 52, 25 de 1,60 dans le système 104 et de 1,60 dans le système 79* Lors d'une électrophorèse sur de la cellulose "Avicel", d = 0,54. Le produit donne des réactions colorées positives avec la ninhydrinej la chlorotolidine, avec un mélange de cyanoferrate de potassium-(II) et avec du chlorure de fer-(III), ainsi qu'avec 1*amide ^ diazoté de l'g.cide suif anilique. EXEMPLE 5. Dans un millilitre d'une solution aqueuse de 20 g de 35 mannitol. et 4,6 g d'acide formique, on dissout 0,5 mg de 69 16731 2011262 ( 1 Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-Cys-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp- Pfré-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Ero-Gln-Tïir-Âla-Ile-Gly-Val-Gly- Ala-Ero-NHg (I), soit (HT-Cg). On filtre la solution jusqu'à 5 stérilité et la place, dans des conditions aseptiques, dans une ampoule de 5 ml, refroidit de façon poussée et lyophilise. Avant l'emploi, on dissout le lyophilisât dans de l'eau distillée. Le contenu de l'ampoule correspond à environ 70 unités MRC. On utilise la solution par voie intramusculaire ou intraveineuse, par 10 exemple à raison de 10 à 70 unités par jour. f 69 16731 13 2011262 REVENDICATIONS r 1. Procédé de préparation de calcitonine humaine sous forme pure, caractérisé par le fait qu'à un pH d'une valeur de 1 à 6 environ, on extrait, avec de l'eau et avec un système solvant renfermant un alcanol inférieur, un carcinome médullaire dé-5 graissé de la thyroi'de ou une matière de métastase de cellules C qui est éventuellement préalablement purifiée avec de l'alcool ou une solution aqueuse diluée d'acide trichloracétique, et qu'on-traite la solution obtenue d'une manière usuelle, le cas échéant en extrayant à plusieurs reprises conformément au procédé. 10 2. La calcitonine humaine sous la forme de ses compo- ' sants HT-C^, HT-C2, HT-C-^ et HT-C21 et ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 3* L'amide dotriacontapeptidique présentant la composition d'acides aminés Lys(l), His(l), Asp (3)* Thr (5)* Sér (l), 15 Glu (2), Pro (2), Gly (4), Ala (2), 1/2 Cys (2), Val (l), Met (1), Ile (l), Leu (2), Tyr (l), Phé (j5), quatre au moins des cinq chaînes latérales carboxylées se présentant sous forme amidique, et ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 4. Le composant HT-C^ de la calcitonine humaine. 20 5- Le composant HT-C^ de la calcitonine humaine. 6. Le composant HT-C^ de la calcitonine humaine." 7- Le composant HT-C^ de la calcitonine humaine. 8. Les préparations pharmaceutiques renfermant ion produit suivant l'une des revendications 2 à J. 25- 9* L'amide dotriacontapeptidique de formule Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-C^s-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes. 10. Le dimère de l'amide dotriacontapeptidique de 30 formule Cys-Gly-Asn-Leu-Sér-Thr-C^s-Mét-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phé-Asn-Lys-Phé-His-Thr-Phé-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NHg, ses sels d'addition avec des acides et ses complexes.