Brevet FR2004626A1 — publié le 19691128

La présente invention concerne une feuille poreuse stratifiée pour analyses par électrophorèse. On utilise jusqu'ici divers Types de feuilles poreuses pour des analyses par électropliorèse telles que du papier et des 5 feuilles de matière platique microporeuse d'une minceur et d'une souplesse tellés qu'elles doivent être placées sur un support. Ces feuilles sont difficiles à utiliser et présentent une stabilité incertaine pour la conservation des enregistrements. Divers gels supportés par des plaques de verre ou des éléments 1Q semblables sont utilisés couramment pour des: procédés d'essais en immunologie. Une migration électrophorétique et une diffusion peuvent se produire dans des. matières telles que de l'amidon, des gels, des: gels d'agar et des gels d'acrylamide» les inconvénients présentés par l'utilisation de telles matières, résident ^5 dans le soin nécessaire pour les préparer, pour éviter de faire sécher le gel, dans leur diffusion lente et dans la formation d'arcs de précipitine, ainsi que dans le lavage difficile des matières n'ayant pas réagi et des colorants. La présente invention fournit une feuille stratifiée cons-20 tituée par une feuille de base en matière plastique à laquelle est collée une feuille membrane en matière plastique microporeuse. La feuille membrane est constituée en grande partie de pores, qui débouchent sur la surface extérieure pour recevoir une solution d'électrolyte ainsi que la matière qui doit être analysée 25 par électrophorèse. La feuille stratifiée à deux éléments a été utilisée pour 1'immunoélectrophorèse en pressant une feuille gabarit perforée ou fendue sur la membrane en matière plastique poreuse afin de former une structure permettant une évaluation d'essai. Ceci né-30 cessite une pression régulière, réglée avec soin pour éviter d'abîmer la membrane poreuse „en matière plastique et pour obtenir l'uniformité de diffusion nécessaire. Une limitation pratique réside dans le fait que la feuille stratifiée ne peut pas être préparée et emmagasinée à sec pour être utilisée immédiate-35 ment lorsque les essais doivent être effectués. La feuille stratifiée suivant la présente invention est résistante, durable, elle peut être préfabriquée, emmagasinée bad original 69 05812 2 2004626 ou expédiée pour l'utiliser ultérieurement et elle présente des avantages techniques qui seront indiqués plus loin. Les réactions de diffusion type qui peuvent être mises en oeuvre d'une manière effectivé et efficace avec la feuille stra-5 tifiée selon l'invention comprennent l'immunodiffusion, 1*électrophorèse, 1.'immunoélectrophorèse, par exemple, pour l'analyse du sérum. D'une manière générale, la feuille stratifiée selon la présente invention comprend une feuille de base en matière plas-■'jO tique et une feuille membrane collée sur un coté de la feuille de base comme pour la feuille stratifiée à deux éléments décrite plus haut. En plus de ces feuilles, une feuille souple et mince est collée sur l'autre côté de la feuille membrane. De ce fait, la membrane en matière plastique poreuse est sérrée en sandwich ^ 5 entre la feuille de base et la feuille mince et souple. La feuille mince et souple présente une ou plusieurs ouvertures ou fentes permettant d'appliquer à la feuille de matière plastique poreuse les produits chimiques à essayer. Le collage des feuilles les unes avec les autres s'effectue avec un adhésif thermoplastique 20 sans altérer la capacité de transport capillaire des liquides dans les pores. De préférence, la feuille de base est une feuille de matière plastique transparente, raide, mais souple présentant la stabilité chimique nécessaire lui permettant d'être inerte vis à 25 vis des produits chimiques essayés et qui permet un bon collage sur la feuille membrane en matière plastique poreuse. La membrane poreuse doit présenter des pores dont les dimensions ont une importance critique telle que le collage de la feuille de base et de la feuille de matière plastique mince puisse s'effectuer 33 sans abîmer les pores, avec des caractéristiques de surface permettant au fluide de diffusion de se déplacer ainsi qu'une certaine mobilité électrophorétique. La feuille de matière plastique souple et mince est fendue ou pourvue avant collage d'une manière appropriée d'ouvertures 35 et elle remplit une fonction très importante. Elle limite la diffusion du liquide appliqué à la membrane en matière plastique poreuse à travers les ouvertures, à l'intérieur des pores de la bad original 1 69 05812 3 2004626 membrane en matière plastique, et ce qui est capital, elle évite que les liquides ne se sèGhcnt et elle peut être enlevée pour éliminer par lavage les matières chimiques n'ayant pas réagi de sorte que les matières chimiques ayant réagi et qui sont insolu-5 bles peuvent faire l'objet d'une évaluation. La feuille de matière plastique est suffisamment mince pour qu'on puisse la peler pour la séparer de la feuille membrane et suivant un angle aigu tel que le rayon de l'arc au bord de séparation est si petit que la séparation s'effectue pratiquement le long d'une li-10 gne de sorte que la feuille mince peut être enlevée sans enlever aucune quantité appréciable de la membrane en matière plastique poreuse qui y adhère. La feuille stratifiée selon l'invention peut êtx'e utilisée dans divers appareils électrophorétiques. Dans ia pratique 15 de l'immunodiffusion, on place un échantillon d'un sérum d'un malade sur une matrice poreuse telle qu'une membrane en matière plastique, poreuse ou un gel tel qu'un gel d'amidon ou un gel ^ .-----d'agar.. Près de cet échantillon on applique un échantillon de sérum anti-humain de cheval préparé par des techniques standards. ■ 20 On laisse alors cette préparation incuber dans un environnement humide pendant une période de durée appropriée. Le sérum humain et 1'anti-sérum de cheval commencent à se diffuser en s'écartant de leur point d'application. En se diffusant, le sérum humain • et 1'anti-sérum de cheval commencent à se diffuser l'un à tra- - 25 vers l'autre. Lorsque ceci se produit, des précipités d'anticorps-antigènes se forment. Si on rince alors la préparation pour éliminer le sérum et 1'anti-sérum qui n'ont pas réagi et si on les colore avec un colorant à base dé" protéines, le précipite anticorps-antigènes se manifeste sous la forme d'une li-30 gne ou line série de lignes nettes se trouvant entre les deux points d'application des échantillons. La présence de ces lignes indique à l'imsunologiste que des fractions de sérum sensibles à l1anti-sérum de cheval sont en fait présentes dans l'échantillon de sérum du malade. 35 En mettant en présence un échantillon du sérum d'un mala de et un anti-sérum connu d'intensités diverses, on peut déterminer quantitativement la quantité d'une matière particulière 69 05812 n 2004626 qui existe dans un échantillon.. Il existe un certain nombre de variantes des techniques et des configurations d'applications utilisées dans la technique de 1'immun©diffusion, et de l'interprétation des configurations résultantes. Cependant toutes 5 font appel aux mécanismes fondamentaux indiqués plus haut. Lorsqu'un anti-sérum est produit dans un animal, il doit contenir des anti-corps de toute fraction qui existait dans le sérum humain injecté à l'animal. Par la technique de l'éléctro-phorèse, on peut fractionner le sérum humain eh sine ou sept 10 fractions au plus. Chacune des bandes ou fractions produites pax-électrophorèse peut contenir cependant un certain nombre de structures particulières qui peuvent présenter la même mobilité électrophorétique.. En utilisant la technique de l'immunoélectro-» phorèse, on peut démontrer la présence d'un nombre beaucoup plus 15 grand de fractions distinctes et individuelles à l'intérieur des six ou sept fractions principales produites par 1*électrophorèse . L'immunoélectrophorèse s'effectue comme suit : on applique une goutte de sérum sur un milieu électrophorétique et on 2G effectue une électrophorèse pour séparer les éléments. Avec l'é-lectrophorèse, on applique une bande d'anti-sérum près du sérum fractionné. La bande est une ligne droite parallèle à la direction de la migration électrophorétique. On laisse alors les é-léments du sérum et l'anti-sérum migrer l'un vers l'autre. L'an*-25 ticorps spécifique de 1'anti-sérum se précipite avec chacun des éléments du sérum qui se diffuse vers lui» Il en résulte une së= rie d'arcs de précipitine qui se trouvent entre le point d'appli-cation initial du sérum et la ligne de l'anti—sérum. La présence ou l'absence de tout arc spécifique ,de priseapi^I-is indique 30 la présence ou l'absence de 3.a fraction correspondante dans l'échantillon du sérum du malade. En étalant les éléments du sérum le long de l'axe de la migration électrophorétique, on sépare les divers éléments et on permet ainsi à raie série entière d'arcs d'être visibles individuellement après un seul es-35 sai. Dans i1im~unodiffusion, ces arcs tendraient à se trouver les uns au-dessus des autres du fait que le sérum et 1'anti-sérum proviennent tous les deux de sources ponctuelles= L'im-muriûélectrophor-èse permet d'obtenir ainsi.une quantité bad ûfhgînal 69 05812 5 2004626 d'informations très supérieures à celles qu'on obtient avec la simple immunodiffusion. Dans ces deux techniques, il faut un milieu de support qui : - est passif à la fois vis à vis du sérum et vis à vis de 5 1'anti-sérum; - permet une migration de diffusion libre et uniforme de tous les éléments; - peut être lavé pour le débarrasser des éléments n'ayant pas réagi; 10 - peut être coloré d'une manière ou d'une autre de telle sorte que les arcs de précipitine soient visibles pour l'analyste. Quel que soit le milieu de substrat qui est utilisé, on doit scrupuleusement éviter toute évaporation de liquide pendant l'étape de diffusion du procédé. Si de l'eau devait s'évaporer du substrat, en particulier suivant une configuration non uniforme {comme elle le ferait inévitablement) un écoulement hydraur-lique de liquide résiduel se produirait dans le milieu lorsque le liquide tendrait à se répartir de lui-même d'une façon uniforme à travers la matrice. Cet écoulement hydraulique déformerait 20 le trajet de diffusion des éléments et les lignes de précipitine résultantes seraient soit sévèrement déformées ou même oblitérées» De ce fait, la pratique actuelle consiste à utiliser une incubation dans des chambres saturées en humidité. Une technique qui est utilisée avec les membranes en matière plastique poreuse 25 consiste même à prendre la bande de membrane humide après l'é- lectrophorèse et l'application de 1'anti-sérum et à plonger cette bande humide dans Tin bain .d'huile. L'huile empêche ainsi toute évaporation du liquide. Il faut avoir grand soin de s'assurer que la bande est absolument de niveau dans un tel appareil. Le 50 procédé est en général très salissant. D'autres-avantages et caractéristiques ressortiront de la description détaillée qui va suivre faite en regard du dessin annexé qui donne à titre explicatif, mais nullement limitatif, une forme de réalisation conforme à l'invention. 55 Sur ce dessin, La figure 1 est une vue en plan d'une feuille stratifiée selon l'invention; 69 05812 6 2004626 La figure 2 est une vue en coupe à plus grande échelle suivant 2-2 de la figure 1 ; et La figure 3 est une vue en coupe à plus grande échelle de la figure 1 représentant la feuille souple et mince de dessus 5 partiellement enlevée. La feuille stratifiée selon l'invention qui est représentée sur le dessin comprend une feuille de matière plastique transparente B, une feuille membrane en matière plastique microporeuse 2 collée à la feuille de matière plastique 1. avec un adhésif thea?-10 moplastique 3 et une feuille de matière plastique mince 4. qui est également collée à la feuille membrane 2 avec un adhésif thermoplastique 5- La coupe est très agrandie, les pores étant agrandi q d'une manière disproportionnée à titre d'illustration. La feuille stratifiée est de préférence réalisée de la fa— 15 çon suivante : la feuille de base est en une matière plastique présentant les caractéristiques physiques et chimiques nécessai- res. Elle est de préférence transparente et elle est raide et é— lastique de telle sorte que lorsqu'on l'utilise pour 1'électrophorèse dans le dispositif selon la présente demande, elle conses-20 ve la position cintrée utilisée dans le dispositif et présente une épaisseur qui peut varier de 150 à 300 microns et de préférence égale à 250 microns. Elle ne doit pas être conductrice det l'électricité dans les conditions où on l'utilise. En ce qui concerne ses caractéristiques chimiques, la feuïL-25 le de base ne doit pas être altérée par la solution tampon utilisée dans le récipient. Diverses matières plastiques satisfont aux exigences ci-dessus, telles qu'un polyester ("Mylar", le 1000 D de duPont) qui est particulièrement efficace, une polyamide, ou des polycarbonates. 30 La feuille de membrane en matière plastique microporeuse. 2 doit être formée à l'aide d'un mélange de nitrate de cellulose et d'acétate de cellulose ou entièrement en acétate de cellulose suivant le brevet des Etats Unis d'Amérique n° 1.421.34-1 ou le brevet des Etats Unis d'Amérique n° 2.944.017- De préférence, la 35 feuille est en acétate de cellulose. Une feuille efficace présente une épaisseur d'environ 125 microns et des dimensions de pores moyennes qui varient de 0,5 à 1,5 micron. Dans un essai d'électrophorèse, la feuille transporte la solution tampon par effet 69 05812 7 2004626 capillaire et permet au transport électrophorétique de se produire . " La matière de liaison ou adhésif 3 doit également répondre à des spécifications caractéristiques. L'adhésif est, d'une ma-5 nière avantageuse, une matière thermôplastique, de préférence une matière qui/^iécessite pas de catalyseur ou d'agent de mûrissement et qui présente une température de collage inf^rie^rg^au point de déformation à la chaleur de la feuille membrane/plasti-que poreuse 2. Une matière fabriquée par duPont de Nemours con-10 nue comme adhésif en caoutchouc synthétique modifié (duPont 56016) s'est montrée très efficace. L'épaisseur de l'enduit sec terminé d'adhésif déposé sur la feuille de base doit se maintenir dans des limites étroites. L'épaisseur optimale est comprise entre 6,25 et 8,75 microns. 15 Si on applique un adhésif d'une épaisseur inférieure à 6,25 microns sur la feuille de base, cette quantité est insuffisante ; pour coller la feuille membrane poreuse. Si on applique une é-paisseur supérieure à 12,5 microns, une certaine quantité de l'adhésif lorsqu'il est chauffé pour coller les deux feuilles 20 est absorbée dans les pores et fait obstacle aux caractéristiques de diffusion. La feuille 4 est de préférence en une matière plastique imperméable non poreuse transparente telle qu'un polyester de préférence d'une épaisseur d'environ 50 microns et. .qui est col-25 lée à la feuille membrane 2 à l'aide d'un adhésif thermôplastique 5 tel que celui décrit plus haut. Avant le collage, des configurations d'ouvertures 6 ou de fentes 7 ou d'autres perforations de forme géométrique peuvent être découpées sur la feûil-' le de sorte que les matières utilisées pour les évaluations peu-50 vent être appliquées directement sur les parties à découvert de la feuille 2.. Pour former la feuille stratifiée-suivant une opération préférée, on enduit une feuille de base 1 de longueur indéfinie avec de l'adhésif 3, par exemple à l'aide d'un dispositif râcleur 55 suivant par exemple une épaisseur de 8,75 mm et on laisse la surface enduite en contact avec une feuille membrane-poreuse en mouvement 2, également de longueur indéfinie. La feuille-de 69 05812 8 2004626 matière plastique 4 de longueur indéfinie, qui est également enduite d'un adhésif d'une épaisseur d'environ 8,75 microns est mise en contact avec le côté opposé de la feuille 2. Les feuilles superposées en sandwich sont avancées sur une courro:' 5 tallique sans fin et entre la courroie et un rouleau de presse/ qui chauffe la feuille stratifiée à une température d'environ 120°C pendant une minute et demie à une pression manométrique d'environ 4,2 bars. Cette opération colle ou scelle d'une manière effective ensemble les trois feuilles sans colmater ni 10 abîmer les pores. La stratification de la feuille imperméable 1 et de la feuille pellicule 4 sur les deux surfaces de la membrane microporeuse 2 sert à bloquer le passage des liquides allant à ces faces ou en provenant. Le liquide est cependant libre de diffu-15 ser librement à travers la structure poreuse de la membrane 2 entre les surfaces de séparation stratifiées. A travers les ouvertures découpées sur la feuille supérieure mihce du stratifié, on peut introduire des liquides pour des processus de migration contrôlée tels que des processus de diffusion, de chromotogra-20 phie ou d'électrophorèse. La couche de couverture supérieure évite 1'évaporation des éléments se trouvant dans la feuille membrane microporeuse 2 en tous points sauf à l'endroit des ouvertures formées sur la feuille supérieure 4. 25 de de dimensions appropriées peut être représentée par la technique de l'imnunoélectrophorèse. La feuille supérieure souple 4-est un peu plus courte que la longueur hors-tout de la bande stratifiée, comme on le voit sur la figure 1, de sorte que l5une ou l'autre extrémité de la feuille membrane poreuse.2 est à dé-30 couvert pour venir en contact avec les électrodes qui sont nécessaires pour- la migration électrophorétique. Lorsqu'on utilise une telle bande dans un dispositif tel que celui de la demande,, les extrémités sont plongées dans une solution tampon et ell^s sont mises en contact avec les électrodes. On peut également 55 commencer par faire tenir la bande sur son bord dans un plateau peu profond ou dans une solution tampon. Pu fait que la feuille de membrane microporeuse est à découvert sur les bords de la L'utilisation de cette feuille stratifiée suivant une ban™ bM) orig|NM- 69 05812 9 2004626 bande, elle tend à se charger ou à former une mèche entre les deux feuilles imperméables, lorsque la bande est complètement imprégnée de la solution tampon, un microlitre d'échantillon de sérum est appliqué à l'acétate de cellulose par l'ouverture cen-5 traie 6 de la feuille 4» la bande est placée dans une cellule d'électrophorèse et une tension est appliquée aux extrémités de la bande. Le sérum se déplace entre les deux feuilles imperméables pendant la migration et suivant une direction parallèle à la grande dimension de la bande. On laisse l'échantillon de sé-10 rum migrer par électrophorèse jusqu'à ce eju'on ait obtenu une séparation appropriée. Après avoir effectué lrélectrophorèse pendant une période * de durée appropriée, on enlève la bande de là cellule. Cn appli-- " , que une quantité appropriée., d'jinJi-eJiyipt. d|.une manière uniforme^ dans chacune des gorges allongées 7- Pour la plupart des anti-séruas commerciaux, on a trouvé que la quantité optimale appli-t qué^à chaque gorge doit être d'environ 40 microlitres. Cette quantité varie ïien entendu suivant la force des anti-sérums, la quantité de l'échantillon de sérum appliquée à 1'ouverture een-20 traie 6 et avec d'autres éléments particuliers de la séparation» On a trouvé que lorsgu'on applique 1'anti-sérum dans les gorges avec une seringue hypodermique, on peut obtenir une concentration suffisamment uniforme d1anti-sérum le, long des gorges. Après avoir appliqué 1'anti-sérum de cette manière, on place immédia-25 tement la bande dans une chambre saturée d'humidité, afin d'éviter toute évaporation sur les surfaces à découvert de la feuil-le membrane 2. lia diffusion des éléments du sérum et des éléments de 1'anti-sérum les uns vers les autres commence et on la laisse se poursuivre pendant une période de durée appropriée, en 50 général de 24 à 48 heures. Pendant cette période, des arcs de précipitine 8 commencent à se former aux endroits où les éléments du sérum et de 1'anti-sérum réagissent les uns avec les autres. Du fait que le sérum et 1'anti-sérum sont relativement incoloresj ces arcs de précipitine ne sont pas visibles à tra-55 vers la feui3.1e de dessus transparente 4. A la fin de la période de diffusion, on enlève la bande de la chambre d'incubation. Avec un objet aigus on soulève un 69 05812 10 2004626 coin de la feuille 4- de telle sorte qu'on puisse saisir la patte entre les doigts et la peler pour la séparer de la feuille membrane. La feuille souple 4 est tirée vers l'arrière suivant un angle aigu de telle sorte que les tensions dues au pelage ou ar-^ rachage sont concentrées à la surface de séparation d'adhérence entre la feuille 4 et la feuille membrane 2. Il en résulte que l'acétate de cellulose relativement délicat qui sert à composer la feuille 2 reste uniformément en place au lieu d'être pelé et arraché avec la feuille 4. Si on utilisait une feuille plus é-'10 paisse pour la feuille souple et mince 4, le pelage voulu pourrait ne pas se produire ou devenir irrégulier,des morceaux d'acétate de cellulose étant arrachés avec la feuille qui est plus raide. Après la séparation, toute la face de la membrane en acé-tate de cellulose est mise à découvert. Des arcs de précipitine tels que ceux qu'on voit sur la figure 1 se trouvent à l'intérieur de la matrice poreuse de la membrane en acétate de cellulose ainsi que des éléments du sérum et de 1'anti-sérum qui / ?as , , n'ont/réagi. Ces éléments qui n'ont pas réagi sont d'abord éli-20 minés par rinçage de la membrane en acétate de cellulose en la plongeant dans une solution saline chaiide. La porosité de la membrane microporeuse permet une élimination par lavage beaucoup plus rapide de ces éléments n'ayant pas réagi que cela n'est possible avec les structures de gel utilisées pour l'immunoélectro-25 phorèse. Une ou deux: heures suffisent pour une élimination com-- plète par lavage des éléments n'ayant psre réagi» La bande lavée est alors mise dans une solution de colorant qui colore la protéine qui s'est précipitée. La bande est colorée pendant une période de durée suffisante pour lier les 50 molécules de colorant au complexe de protéine. Ceci peut être compris entre quelques minutes et quelques, heures, suivant le colorant particulier utilisé. A. la suite de la coloration, on rince la bande dans un milieu de rinçage approprié» Les molécules de colorant qui ne se sont pas liées à la protéine sont libérées par rinçage de la feuille ruembrane niicroporeu.se et laissent la configuration distdnctive des arcs de précipitine contre un fond blanc 69 05812 11 2004626 relativement clair de la membrane -an acétate de cellulose. A volonté, la bande peut être rendue transparente d'une ~anièr,e semblable à celle utilisée pour la densitométrie d'un stratifi-à deux éléments de la dite dezande. 5 Les arcs de précipitine présentent cependant une s'.rucôu- re extrêmement fine et du fait de la perte de résolution qui en résulte, le procédé servant à rendre la feuille transparente n'est ni nécessaire ni avantageux. De ce fait, les configurations d' immunoélectrophorèse ne sont pas en général rendues 10 transparentes mais sont observées directement. Bien que l'application immédiate de la feuille stratifiée selon l'invention soit du domaine de l'immunoélectrophcrèse et de 1'immunodiffusion, elle peut présenter d'autres utilisations analytiques telles que pour d'autres procédés de diffusion ou -Ç d'autres procédés de chromatographie. Par exemple, certaines régions de la membrane plastique microporeuse pourraient être imprégnées avec des réactifs chimiques particuliers avant d'y coucher la feuille de matière plastique de dessus. Les substances faisant l'objet de la chromatographie à travers la membrane de 20 matière plastique pourraient être contraintes de traverser ces couches imprégnées, de façon à produire des réactions, des couleurs ou donner des indications appropriées. En bloquant certaines régions à l'intérieur de la membrane en matière plastique poreuse, on pourrait délimiter les trajets de migration par 25 diffusion. Il existe plusieurs feuilles ou pellicules imperméables et adhésifs que l'on peut utiliser pour former la structure m de feuille stratifiée selon l'invention. Comme indiqué plus• haut, l'utilisation d'une feuille de matière plastique souple et 30 mince pour une couche et une feuille épaisse relativement rigide pour l'autre couche présente l'avantage de pouvoir régler la séparation par collage lorsqu'on enlève la feuille mince. Bien qu'une certaine quantité d'acétate de celli:Iose sous la forme d'une peau très mince adhère à la feuille mince, ceci n'altère pas l'efficacité de la masse principale d'acétate de cellulose qui reste collée sur la feuille de base en matière plastique. 35 II va de soi que la présente invention a été décrite et représentée à titre d'exemple préférentiel explicatif, mais nullement limitatif, et que l'on peut introduire toute équivalence dans ses éléments constitutifs sans sortir ce son cadre difini par les revendications annexées. COPV j 69 05812 12 2004626 REVENDICATIONS 1. Feuille stratifiée permettant de déterminer et d'évaluer les réactions de diffusion caractérisée en ce qu'elle corn- 5 prend une feuille de base en matière plastique qui est souple, mais suffisamment raide pour se supporter d'elle-même, une feuille membrane en matière plastique microporeuse présentant un grand nombre de pores de petites dimensions reliée par collage à un cSté de la feuille de base et une feuille souple très 10 mince reliée par collage au coté opposé de la" feuille membranes cette feuille souple présentant au moins une ouverture à travers laquelle la feuille membrane est mise à découvert. 2. Feuille stratifiée suivant la revendication 1, carcte-risée en ce que la feuille de base est suffisamment élastique 15 peur se maintenir elle-même suivant une position cintrée dans un dispositif d'essai. 3. Feuille stratifiée suivant la revendication 1 caractë-: risée en ce que la feuille de base et la feuille souple et mince sont collées à la feuille membrane en matière plastique poreuse 20 avec un adhésif thermoplastique qui vient en prise avec les parties-massives de la feuille membrane en matière plastique poreuse en laissant une proportion très importante des pores ouverts pour recevoir un liquide. 4-., Feuille stratifiée suivant la revendication 1, caracté-25 risée en ce que les pores de la feuille membrane de matière plastique présentent un diamètre compris entre 0,5 et 1,5 micron et sont à peu près complètement ouverts afin de recevoir un é-chantillon liquide devant subir un essai. 5. Feuille stratifiée suivant la revendication "i, caracts-30 risée en ce que la feuille de base est un polyester d'une épaisseur d'environ 250 microns, l'adhésif n'ayant pas une épaisseur supérieure à 12,5 microns et la feuille souple et mince étant également un polyester d'une épaisseur d'environ 50 microns. 5» Feuille stratifiée suivant la revendication 1, carac-35 térisée en ce que la feuille membrane en matière plastique poreuse est réalisée en acétate de cellulose. - BAD ORIGINAL 69 05812 13 2004626 7. Feuille stratifiée sous la forme d'une bande caractérisée en ce qu'elle comprend une feuille de base en matière plastique qui supporte la bande, une feuille membrane en matière plastique microporeusë aont un côté est relié en le collant à 5 la feuille de base, et une feuille de dessus imperméable non poreuse et souple reliée en la collant au coté opposé de la feuille membrane en matière plastique et qui présente une épaisseur d'environ 5Q microns de sorte que la feuille souple peut être pelée suivant un angle, aigu pour la séparer de la membrane en 10 matière plastique microporeuse sans enlever ni altérer des quantités importantes de cette membrane. 8. Bande stratifiée suivant la revendication 7S caractérisée en ce que la membrane en matière plastique poreuse est réalisée essentiellement en acétate de cellulose présentant dea po- 15 res dont les dimensions moyennes sont comprises entre 0,5 et .1,5 micron, la feuille souple mince présentant une ou plusieurs ouvertures à travers lesquelles la membrane en matière plastique est mise à découvert. 9 » Eande stratifiée suivant la revendication 7 caractéri-20 sé'e en. ce qu'un, adhésif thermoplastique sert à coller la feuille de base et la feuille souple mince à la feuille membrane poreuse.. 10. Eande stratifiée suivant la revendication 7j caractérisée en ce que la feuille souple et mince est plus courte que 25 la feuille membrane poreuse afin de laisser ses extrémités à découvert pour pouvoir réaliser dea connexions électriques.