Brevet FR2005188A1 — publié le 19691205

i 2005188 La présente invention se rapporte à la préparation de nouveaux dérivés de synthèse de l'agarose en vue de l'application en chromatographie d'échange ionique. Ces dérivés permettent l'étude, l'isolation et la purification surtout des compo-5 sés biologiques macromoléculaires. On connaît des produits semblables obtenus en partant de cellulose ou dextrane et qui sont destinés à des buts similaires. En réalisant de nouveaux échangeurs d'ions fortement basiques, la présente invention étend la gamme des produits utili-10 sables dans l'analyse chromatographique. Le procédé d'obtention de ces dérivés selon l'invention, consiste dans l'introduction du groupement triéthylaminoéthyle ( TEAE ), soit dans la molécule d'agarose simple, soit dans la molécule d'agarose liée transversalement au préalable par des 15 ponts glycériques avec l'aide de l'épichlorhydrine. On donne par suite deux exemples d'application de l'invention. Exemple 1. On amène à ébullition un mélange composé de 10 g de dié-20 thylaminoéthyle-agarose ( ayant une capacité d'éshange d'approximativement 0.6 milliéquivalent/g ) pendant 5 heures au bain d'eau, sous réfrigérant ascendant, et de 7 œl bromure d'éthyle dissous dans 70 ml d'éthanol. On filtre, lave avec 250 ml solution d'hydroxyde de sodium à 1 % dans l'éthanol 75 % puis immé-25 diatement avec de l'éthanolà 75 % jusqu'à l'élimination complète de l'hydroxyde, On déshydrate avec de l'acétone et l'on sèche. On obtient 10 g de triéthylaminoéthyl-agarose - ( TEAE-agarose ). Exemple 2. jJD On répète le premier exemple mais en utilisant 10 g dié- thyiaminoéthyle-agarose liée transversalement ( DEAE-agarose X-7.5. de granulométrie 50-100 mesh,)ayant une capacité d'échange d'approximativement 0,8 milliéquivalent/g au lieu de l'aga-* rose simple. Après 1'ébullition du mélange de réaction, sous 35 réfrigérant ascendant, on filtre le produit de réaction sur un entonnoir G1 et lave avec 250 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium à 1 î On lave ensuite à l'eau jusqu'à l'élimination des traces d'hydroxyde, déshydrate avec de l'acétone et sèche» On obtient 10 g de triéthylaminoéthyle-agarose liée transver-4 0 salement ( TEAE-agarose X ). ORIGINAL 69 09613 2 2005188 Les dérivés obtenus, selon la présents invention, en partant de la DEAE-agarose simple, sont golubles à chaud dans les solutions aqueuses et par refroidissement donnent des gels qui peuvent être transformés en granules d'après des méthodes connues 5 dans la littérature. Les dérivés obtenus en partant de la DEAE-agarose liée transversalement selon la présente invention,, sont insolubles dans les solutions aqueuses. La DEAE-agarose simple ou la DEAE-agaro.'s liée transversale lement par des ponts glyeériques, devenues quaternaires, donnent des nouveaux échangeurs des ions fortement basiques, qui permettent l'analyse chromatographique des protéines acides de différentes origines, des enzymes, des vitamines, etc. ORJG/NAI. 69 09613 3 2005188 REVENDICATIONS 1. Procédé de préparation des dérivés d'agarose en vue de l'application en chromatographie d'échange ionique, caractérisé en ce que l'on introduit des groupements triéthylaminoéthyle, soit dans la molécule d'agarose, obtenant ainsi des dérivés, qui 5 après dissolution à chaud, forment par refroidissement des gels échangeurs d » ions, soit dans la molécule d'agarose liée transversalement par des ponts glycériques, les produits résultant étant pratiquement insolubles et doués de propriétés d'échange ionique. I) 2. Procédé de préparation des dérivés d'agarose, selon la revendication 1, caractérisé en ce que la quaternisation de la diéthylaminoéthyle-agarose s'obtient par réaction avec le bromure d'éthyle en milieu alcoolique, sous ébullition à reflux. 3. Procédé de préparation des dérivés d'agarose, selon la 15 revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à traiter à l'ébullition la diéthylaminoéthyle-agarose liée transversalement avec le bromure d'éthyle en milieu alcoolique, dans un réacteur pourvu d'un réfrigérant ascendant. BAOORiQNttL " ■ ->