Brevet FR2007370A1 — publié le 19700109

10:51 i 2007370 Cette invention concerne un procédé nouveau et les intermédiaires qui y sont utilisés pour la préparation de composés ayant la formule : 15 dans laquelle Y est une liaisons simple ou double; R est choisi dans le groupe composé de l'hydrogène et desradicaux acyle; P est l'hydrogène ou un radical alcoyle inférieur, halo-alcoyle inférieur, cycloalcoyle monocyclique, (cycloalcoyl monocyclique)-alcoyle inférieur, aryle monocyclique, (aryl monocyclique)-alcoyle inférieur, 20 monocyclique hétérocyclique ou (monocyclique hétérocyclique)-alcoyle inférieur; Q est un radical alcoyle inférieur, halo-alcoyle inférieur, cycloalcoyle monocyclique, (cycloalcoyl monocyclique)-alcoyle inférieur, aryle monocyclique, (aryl monocyclique)-alcoyle inférieur, monocyclique hétérocyclique, ou (monocyclique hétéro-25 cyclique)-alcoyle inférieur; et, réunis à l'atome de carbone auquel ils sont liés, P et Q forment un radical cycloalcoyle monocyclique ou monocyclique hétérocyclique. Cette invention concerne plus particulièrement la production de tels corps, englobant l'utilisation de certains nouveaux dérivés 30 11-hydroxylés. En particulier, les produits finaux de cette invention correspondant à la formule ci-dessus, dans laquelle Y représente une liaison simple, sont préparés selon le schéma réactionnel suivant, dans lequel Y, P et Q sont comme indiqués ci-dessus, et Ac représente un radical acyle. 10 5 /1\ iii °\ /O... ^ Xrr-" a a o=d y oh OP 0=0 ov0%0 ii ' 0 = 0 se 0£ SZ hozho ho^ho hosho /|\ 02 st 01 . O-D hozho oieiooz ISIOÏ 69 69 10151 3 2007370 10 15 CH.OAc I 2 co CK ✓ P \l/\ C Cr- CHjOAc l c=0 ^ P -CN, VII 20 25 30 35 CH^OAc W Q=o - JO> o ^ ^ I- - - - i VIII 40 69 10151 4 2007370 30 Dans la première étape du schéma réactionnel, oh fait réagir la 16«-hydroxycorteXolone avec un aldéhyde ayant au moins deux atomes de carbone ou avec une cétone. La réaction s1effectue de préférence en traitant une suâperisiûn bii une solution du stéro'ide dans l'aldéhyde ou la détone (ou bien dahà un polvanti organique , 35 si l'aldéhyde ou l'acétone est un solide) avec un catalyseur acide (par exemple l'acide perchloriqus, l'acide pertoluène sul-fonique, ou l'acide chlorhydrique), eh heutralisant l'acide et en récupérant le dérivé acétal cyclique de çétone ou d'aldéhyde formé. Cette.réaction, ainsi que les exemples représentatifs d'al-40 déhydes et d'acétals réagissants appropriés, sont exposés plus en 69 10151 5 2007370 détail dans le brevet E.U.A* n° 3 «>048.581, dont la description est incorporée ici en référence. Les acétals d'aldéhyde ou de cétone (composés I) ainsi formés sont ensuite soumis à l'action de micoorganismes d'hydroxylation 5 en 11 pour produire les dérivés lia- (Composés II) ou lip- (Composés III) hydroxylés, suivant les microorganismes employés. Pour produire les dérivés llos-hydroxylés, il vaut mieux employer des microorganismes du genre Colletotrichrati, par exemple, Ç. Phomoides, Ç„ pisi, Ç. linicola, etc... , du genre Tricothecium, par exemple, 10 T. roseum. T. flagrans. T. domestieum, etc... , ou du genre Asper-gillus, par exemple, A. ochraceus. etc0.. Pour produire les dérivés 11A-hydroxylés, il vaut mieux employer des microorganismes du genre Absidia» par exeiaple, A. coerulea. etc..., du genre Curvularia, par exemple, Ç» lunata, etc.., 15 ou du genre Cuiminghamella f par exemple, Ç. blakesleeana, Ç. elecrana etc Les composés selon la Formule III sont ensuite acylés, par exemple par traitement à l'anhydride acétique dans la pyridine, pour donner les dérivés 21-acylés (Composés IV). 20 On déshydrate ensuite ces dérivés acylés, par exeisple par traitement avec la pyridine et un chlorure de sulfonyle, comme le chlorure de méthanesulfonyle dans le diméthy1 for~taJaide„ pour produire les dérivés 9,11-déhydro (Composés ¥11). Pour produire des composés selon la Formule VII à partir des 25 dérivés lla-hydroxylés (Composés II), on commence par faire subir à ces composés une monoacylation, comme indiqué ei-dessiss, pour produire des dérivés 21-acylés selon la Formule V. La "Etésylation1' des Composés V, par exemple par réaction avec le chlorure de méthanesulfonyle, donne les 11-mésylates (Composés VI), les groupements 30 mésylates étant à leur tour éliminés par traitement avec un mélange d'acide acétique glacial et d'acétate de sodium anhydre, pour donner des composés selon la Formule VII. La réaction des composés VII avec la N-broffioaeétaKp.de ou la N-bromosuccinimide en présence de dioxane et d'acide perchlorique, 35 lorsqu'elle est conduite dans l'obscurité, produit les dérivés bromhydrine (Composés VIII). La débromhydratation des Composés VIII, par exemple par traitement avec de l'acétate de potassium fraîchement fondu dans l'éthanol absolu à reflux, donne les dérivés 9A, llp-époxydés 40 (Composés IX), qui sont "ouverts" par traitement au fluorure 69 10151 6 2007370 d'hydrogène pour donner les dérivés triamcinolone (Composés X), lesquels peuvent, à leur tour être hydrolyses par des méthodes connues pour donner les composés 21-hydroxylés correspondants selon la Formule XI. Les composés de Formule générale X peuvent aussi 5 être déshydrogénés en position 1,2 par réaction avec une quinone ayant, un potentiel redox suffisamment fort, comme la 2,3-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone, pour donner les dérivés 1-déhydro correspondants . Les composés selon la Formule I, dans lesquels Y représente 10 une double liaison, peuvent être préparés à partir de composés selon la Formule I, dans lesquels Y représente une liaison simple, selon un certain nombre de méthodes différentes, par exemple par traitement avec les enzymes de microorganismes de déshydrogénation en 1, comme Corvnebacterium simplex, Nocardia restrictus, ou 15 Mycobacterium rhodochrous. Sinon, les composés selon la Formule I, dans lesquels Y est une liaison simple, peuvent être acylés comme indiqué ci-dessus pour donner les dérivés 21-acylés, qui peuvent à leur tour être déshydrogénés par traitement avec une quinone ayant un potentiel redox 20 suffisamment fort, comme la 2,3-dichloro-56-dicyano-benzoquinone, pour donner les dérivés 1,2-déhydro correspondants. En suivant alors la série d'étapes exposées dans le schéma réactionnel ci-dessus, mais en employant ces dérivés 1,2-déhydro, on prépare les composés selon les Formules II à XI, dans lesquels Y représente 25 une double liaison. Les produits finaux de cette invention, selon la Formule XI, sont bien connus dans la technique comme substances à action physiologique possédant une activité glucocorticoîdale et antiinflammatoire . y /employés 30 Les radicaux acyle préférés sont ceux d1acides carboxyliques hydrocarbonés ayant moins de douze atomes de carbone, et peuvent être illustrés par les acides alcanoîques inférieurs (par exemple les acides formique, acétique, propionique, butyrique, valérique, triméthyl acétique et caproîque), les acides alcénoîques inférieurs 35 (par exemple les acides acrylique, méthacrylique, crotonique, 3-buténoïque et sénécioîque), les acides arylcarboxyliques monocycliques (par exemple les acides benzoïque et toluique), les acides aryl-alcanoîquœ inférieur monoeycliques/ par exemple, les acides phénacétique, P-phénylpropionique, a-phénylbutyrique, ou 5-(p-40 méthylphényl) pentanoîque_/, les acides cycloalcoyle carboxyliques 69 10151 7 2007370 (par exemple l'acide cyclobutane carboxylique, l'acide cyclopentane carboxylique ou l'acide ûyclohexane carboxylique), les acides cycloalcène carboxyliques (par exemple, l'acide 2-cyclobutène carboxylique ou l'acide 3-cyclopentène carboxylique), les acides 5 cycloalcoyle- et cycloalcényle-alcanoîques inférieurs / par exemple les acides cyclohexaneacétique, a-cyclopentanebutyrique, 2-cyclo-pentineacétique et 3-(3-cyclohexène)penténoiqueet les acides de ce genre. Le terme "alcoyle inférieur" tel qu'il est employé ici, englo-10 be les radicaux à chaîne droite et les radicaux à chaîne ramifiée ayant moins de huit atomes de carbone, par exemple les radicaux méthyle, éthyle, propyle, butyle, pentyle, hexyle, heptyle, octyle, isopropyle, tert-butyle, isobutyle, isohexyle, 4,4-diméthylpentyle, 2,2,4-triméthylpentyl, et les radicaux de ce genre. 15 Le terme "aryle monocyclique", tel qu'il est employé ici, englobe les radicaux aryle carbocycliques monocycliques, par exemple les radicaux phényle ou phényle substitué, comme les radicaux (alcoyl inférieur)phényle (par exemple les radicaux o-, m- ou £-tolyle, éthylphényle, butylphényle, etc. ..., di(alcoyl inférieur) 20 phényle (par exemple, 2,4-diméthylphényle, 3,5-diéthylphényle, etc...), les radicaux halophényle (par exemple chlorophényle, bromophényle, iodophényle, fluorophényle), les radicaux o-, m- ou £-nitrophényle, dinitrophényle (par exemple 3,5-dinitrophényle, 2,6-dinitrophényle, etc...), et les radicaux trinitrophényle (pi-25 cryle par exemple). Les termes "cycloalcoyle monocyclique" et "cycloalcényle monocyclique" englobent les radicaux cycliques contenant de 3 à 6 chaînons cycliques (par exemple cyclopropyle, cyclobutyle, cyclo-pentyle, cyclohexyle, cyclobutényle ou cyclohexényle). 30 Les réactions enzymatiques d'hydroxylation et de déshydrogéna- tion s'effectuent de préférence soit en plaçant le substrat sté-roîde dans une culture aérobie du microorganisme, soit en réunissant, dans un milieu aqueux, le stéroîde, l'air et le microorganisme. En général, les conditions de culture des microorganismes, aux 35 fins de cette invention, sont (sauf en ce qui concerne l'inclusion du stéroîde à transformer) les mêmes que celles utilisées pour cultiver diverses autres moisissures et bactéries utilisées dans les processus de fermentation. Le microorganisme est cultivé en milieu aérobie au contact de 40 (dans ou sur) un milieu de fermentation approprié. Un milieu 69 10151 8 2007370 approprié se compose essentiellement d'une substance azotée et d'une source de carbone et d'énergie. Cette dernière peut être un carbohydrate (comme le sucrose, la mélasse, le glucose, le maltose, l'amidon ou la dextrine), un acide gras, un corps gras 5 et/ou le stéroîde lui-même. Il vaut mieux cependant que le milieu contienne une .source assimilable de carbone et d'énergie en plus du stéroîde. La source de substances azotées peut être naturelle (par exemple farine de soja, liqueur de macération de maîs, extrait de viande et/ou résidus solubles de distillation de l'alcool) ou 10 synthétique (c'est-à-dire formée de composés organiques ou minéraux simples et synthétisables comme les' sels d'aaimonium, les nitrates alcalins, les amino acides ou l'urée). Il faut assurer une alimentation suffisante en air stérile au cours de la fermentation, par exemple selon les méthodes conventionnelles qui consistent à exposer 15 une grande surface du milieu à l'air, ou bien en utilisant une culture aérée immergée. On peut ajouter le stéroîde à la culture au cours de la période d'incubation, ou bien le placer dans le milieu avant la stérilisation ou l'inoculation. La gamme préférée (mais non limitative) de concentrations du stéroîde dans la culture 20 est d'environ 0,01 à 0,10% en poids. La durée de culture peut varier de façon considérable, par exemple dans la gamme d'environ 6 à 96 heures. On récupère ensuite le stéroîde du milieu de fermentation de la manière habituelle, telle qu'elle est détaillée plus complètement dans les exemples suivants. 25 Les exemples suivants illustrent l'invention (toutes les tempé ratures étant en degrés centigrade ) : Exemple 1 16,17-acétonide de 16a, 17cs,21-trihvdroxyprégn-4-ène-3,20-dione On maintient à la température ambiante pendant une heure une 30 solution de 1,0 g de 16a,17a,21-trihydroxyprégn-4-ène-3,20-dione dans 50 ml d'acétone contenant 0,25 ml d'acide perchlorique à 70%. On la neutralise ensuite avec du bicarbonate de sodium dilué et on la dilue progressivement avec de l'eau. On filtre le précipité qui se sépare, on le lave à l'eau et on le sèche pour obtenir 700 mg 35 de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégn-4-ène-3,20-dione 22 ayant un point de fusion d'environ 238-240° C, /. (s,19-CH3), 8,83 (s,£-CH3 de 1'isopropylidène), 8,81 (s,19-CH3), 40 8,53(s,a-CH3 de 1'isopropylidène), 5,32, 5,84 (ABq,21-CH2-)/ 69 10151 9 2007370 4,96 (d, J=4,16|ï-H) , 4,26 (s,4-H) . Anal. Cale, pour C24H34°5 (402,51) : C = 71,61; H •- 8,51 Trouvée : C — 71,87; H - 8,48 Exemple 2 5 21-acétate de 16.17-acétonide de 16a■17«.21-trihvdroxvpr éqna-1,4-diène-3,20-dione A une solution de 1,0 g (2,25 mmole) de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-rhydroxycor t exolone dans 40 ml de benzène sec, on ajoute 0,63 g (2,8 mmole) de 2,3-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone, 10 et on met le mélange à reflux pendant 42 heures. Après refroidissement, on filtre le mélange et on lave le précipité au benzène. On fait alors passer le filtrat et les eaux de lavage dans une colonne de 25 g d'alumine neutre woelm (Activité V), et on lave la colonne au chloroforme. On concentre l'éluat sous pression réduite 15 et on fait cristalliser le résidu dans le mélange acétone-hexane pour obtenir 742 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna-l,4-diène-3,20-dione ayant un point de fusion d'environ 230-233° C,/ô_7 25 +82,8° (chloroforme), ^ 244 m// (£ - 15.300),X 5,72, 5,80, 6,02, 6,19, 6,26^ ®^J4 9,28 (s,18-CH3), 8,76 (s,19-CH^, 8,76 (s,£-CH3 de 1'acétonide), 8,55 (s,a-CH3 de 1'acétonide), 7,82 (s,21-OAc), 3,91 (s,4-H), 3,76 (d,J=10 eps, 2-H), 2,95 (d,J=!0, 1-H). 25 Anal. Cale, pour C2gH3406 (442,53) : C = 70,56; H -- 7,74 Trouvée : C « 70,66; H 7,82. Exemple 3 16.17-acétonide de 16a. 17a.21-trihvdroxyprécrna-l,4?-diène-3.20-dione a) Via le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21- 30 trihvdroxyprécfna-1,4-diène-3.20-dione On traite un mélange de 5,0 g de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna-l,4-diène-3,20 -dione dans 100 ml de méthanol dépourvu d'oxygène, par 10 ml de carbonate de potassium à 10% (dépourvu d'oxygène), et on agite sous azote à la température 35 ambiante pendant une heure. On neutralise alors avec de l'acide acétique à 10%, on dilue à l'eau, et des cristaux se séparent. On les filtre, on les lave à l'eau et on les sèche pour obtenir 4,2 g de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna-l,4-diène-3,20- — — 25 dione ayant un point de fusion d'environ 208-210° C, /a_/ ^ + 106° 4q (chloroforme) ,X 242 m/s ( £ =,14.800),X ^o1 2,82, 5,86, ! î 69 10151 10 2007370 6,01.- 6,19, 6f26X/ , ^J4 9,35 (s,l8-CH3), 8,77 (s,19-CH3) , 8,85 (s,/î-CH3 de Ieacétonide) , 8,50 (s,os-CH3 de l'acétonide) , 3,92 (s,4-H) , 3,79 (q, J---1, 5,11 cps, 2-H) , 2,99 (d,J 10 cps, 1-H. Anal. Cale, pour C24H32°5 (400,50) : C 71,97; H 8,05 g Trouvée : C 71,90; H 8,15. b) Via le 16,17-acétonide de 16k, 17a,21-Trihvdroxypvréon-4-ène-3,20-dione On met en suspension, dans 5 roi d'une solution aqueuse à 0,01% de lauryl sulfate de sodium, la croissance superficielle de chacune lo de deux pentes d1agar-agar,âgées de deux semaines, de Corynebacterium simplex (ATCC-694G), les pentes contenant comme milieu nutritif (A) : Grammes Glucose 10 15 Extrait de levure 2,5 k2hpo4 1 Agar-agar 20 Eau distillée pour faire 1 litre On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ensemencer 20 cinq flacons Erlenmeyer de 250 ml, contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) : Grammes Extrait de boeuf 1,5 Extrait de levure 3 25 Peptone 6 Dextrose 1 Eau distillée pour faire 1 litre Après 24 heures d'incubation à 25° C avec agitation rotative continue (280 cycles à la minute, course de cinq centimètres), on 30 effectue des transferts de 5% (vol./vol.) à vingt flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml de milieu B fraîchement stérilisé. Au bout d'à peu près 24 heures d'incubation ininterrompue, en utilisant les mêmes conditions que celles décrites ci-dessus, on ajoute 500 microgrammes/ml de stéroîde en complétant chaque 35 flacon par 0,25 ml d'une solution stérile (100 mg/ml) de 16,17-acétonide de 16a,17oi,21-trihydroxyprégn-4-ène-3f '0-dione dans le N,N-diméthylformamide. On fait fermenter un total de 500 mg. Au bout d'à peu près 72 heures d'incubation supplémentaire en utilisant" des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, 69 10151 ii 2007370 on réunit le contenu des flacons. Le volume final du bouillon est d'à peù près 1000 ml. On extrait trois fois le bouillon avec des pottionà de 300 ml de chloroforme qui sont réunies, lavées à 11 eau et concentrées sous pression réduite. La cristallisation du résidu 5 dafis le mélange acétone-hexane donne le 16,17-acétonide de 16a, 17a, 21-trihydroxyprégna-l,4-diène-3,20-dione. c) Via le 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihvdroxvprégn-4-ène-3,20-dione On a préparé des cellules de Corvnebacterium simplex (ATCC-10 6946) séchées à l'acétone, selon la méthode décrite dans le brevet E.U.A. n° 3.360.439. A chacun de deux flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant 50 ml de tampon phosphate 0,05 M (pH 7,0), on ajoute 1 g de cellules de Corvnebacterium simplex (ATCC-6946) séchées à l'acétone. On 15 secoue ensuite soigneusement le mélange pour répartir les cellules. On ajoute ensuite un accepteur d'hydrogène, la 2-méthyl-l,4-naphtoquinone (3,44 mg), dans l'éthanol (0,25 ml), pour avoir une concentration finale de 0,4 mmole. On complète alors les flacons avec le stéroîde en ajoutant à chaque flacon 0,5 ml d'une solution 20 (100 mg/ml) de 16,17-acétonide de 16a-hydroxycortexolone dans le N,N-diméthylformamide. On utilise un total de 100 mg de stéroîde. Au bout d'à peu près 21 heures d'incubation à 30° C avec agitation rotative continuelle (280 cycles/minute; course de cinq centimètres), on réunit le contenu des flacons et on ajuste le raélan-25 ge à pH 4,0 à l'aide de H2S04 12 N. On filtre ensuite le mélange réactionnel acidifié sur un tampon de clarification Seitz. On lave le» flacons et le tampon avec 50 ml d'eau chaude. Le filtrat et les eaux de lavage réunis ont un volume de 150 ml. On extrait ensuite le filtre à l'acétone en utilisant des portions successives de 20 ml 30 d'acétone. On recueille un total de 100 ml d'extrait à l'acétone. On chasse en partie l'acétone sous pression réduite et on extrait au chloroforme l'extrait et les filtrats réunis. On lave soigneusement à l'eau le chloroforme, on concentre et on fait cristalliser le résidu dans le mélange acétone-hexane pour obtenir le 35 16,17-acétonide de 16a, 17a, 21-trihy'droxyprégna-l,4-diène-3,20-dione. 69 10151 12 2007370 Exemple 4 16,17-Acétonide de 16«-Hvdroxyépihydrocortisone A) Fermentation - On met en suspension, dans 5 ml d'une solution aqueuse à 0,01 % de lauryl sulfate de sodium, la croissance 5 superficielle de chacune de deux pentes d'agar-agar,âgées de deux semaines, d'Aspergillus ochraceus (NRRL-405), les pentes contenant comme milieu nutritif (A) : Glucose 10 10 Extrait de Levure 2,5 k2hpo4 1 Agar-agar 20 Eau distillée pour faire 1 litre On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ense-15 mencer huit flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) : Grammes Liqueur de Macération de Maïs 40 Glucose 20 20 Eau distillée pour faire 1 litre pH ajusté à 6,5 à l'aide de NaOH avant stérilisation. Après 24 heures d'incubation à 25° C avec agitation rotative continuelle (280 cycles/minute; course de 5 cm), on effectue des transferts de 10 % (vol./vol.) dans cinquante flacons Erlenmeyer 25 de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (C) : Grammes Liqueur de Macération de Maîs 10 Glucose• 5 'Eau distillée pour faire 1 litre 30 pH ajusté à 6,5 à l'aide de NaOH avant stérilisation. On ajoute ensuite le stéroîde (200 microgrammes/ml) en complétant chaque flacon avec 0,25 ml d'une solution stérile (40 mg/ ml) de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégn-4-ène-3,20-dione dans le N,N-diméthylformamide; on fait fermenter un total 35 de 500 mg. Au bout d'à peu près six jours d'incubation supplémentaire, en utilisant des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, on réunit le contenu des flacons et on filtre alors le bouillon sur un tampon de clarification Seitz. On lave les flacons, le mycélium 69 1015 13 2007370 et le filtre avec des portions successives de 100 ml d'eau chaude. Le filtrat et les eaux de lavage réunis ont un volume de 2600 ml. On extrait trois fois le filtrat avec des portions de 500 ml de chloroforme qui sont réunies, lavées à l'eau et concentrées sous 5 pression réduite. Le résidu que l'on obtient est soumis à une chro-matographie sur lame sur un gel de silice m?2.54 en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle et de chloroforme (1:1,en volume) comme solvant de développement. La bande correspondant à # 0,6, décelable par spectrographie U.V., est éluée avec du méthanol à 40 % 10 dans de l'acétate d'éthyle, et après évaporation du solvant on fait crirfcallioer dans le mélange acétone-hexane pour obtenir 200 mg de 16,17-acétonide de 16oc-hydroxyépihydrocortisone ayant un point de fusion d'environ 236-238° C, 103°,X cdCI^4 ^ 9,34 (s,18-CH3)/ 8,82 (s, P-CH3 de 1'isopropylidène), 8,68 (s, 19-CH-) , 8,51 (s,«-CH- de l'isopropylidène) , j 240 (€ = 15.200). Analyse Cale, pour C^H^Og (418,51): C= 68,877 H= 8,19 Trouvée : C= 68,57; H= 8,17. Exemple 5 20 16,17-Acétonide de 16oi-hvdroxvépiprednisolone En suivant la méthode de l'Exemple 4 mais en substituant le 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna-1,4-diène-3,20- dione au 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégn~4-ène-3, 20-dione, on obtient le 16,17-acétonide de l6a-hydroxyépipredniso- 25 25 lone ayant un point de fusion d'environ 255-257°C, +63° (chloroforme) , A 247 m/^ ( £ = 16.400) ,% cJcî4 9, 32 (S'18"CH3>' 8,69 (s,19-CH3), 8,85 (s,/3-CH3 de 1 'acétonide) , i,55 (s,a-CH3 de 1 'acétonide) , 6,04 (m,ll/3-H) , 4,95 (d,J=4 cps, 16/3-H) , 3,91 (s,4-H)„ 3,72 (q,J=210 cps, 2-H), 2,24 (d,J=l0, 1-H). 30 Analyse Cale, pour C24H320g (416,50): C=69,21; H= 7,74 Trouvée : C=68,79; H= 8,04. Exemple 6 16,17-Acétonide de 16a-Hvdroxyhydrocortisone A) Fermentation - On met en suspension, dans 5 ml d'une solu- 35 tion aqueuse à 0,01 % de lauryl sulfate de sodium, le résultat de la croissance superficielle de chacune de deux pentes d'agar-agar, âgées de deux semaines, d'Absidia coerulea (CBS) (Centraalbureau voor Schimmel Cultures, Baarn, Hollande ), les pentes contenant comme milieu nutritif (A) : 69 10151 2007370 Grammes Glucose 10 Extrait de. Levure - 2,5 k2hpo4 1 5 Agar-agar .20 Eau distillée pour faire 1 litre On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ensemencer huit flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) : 10 Grammes Liqueur de macération de maîs 6 NH4H2P04 3 Extrait de Levure 2,5 Dextrose 10 15 CaC03 2,5 Eau distillée pour faire 1 litre Après 24 heures d'incubation à 25° C avec agitation rotative continuelle (280 cycles/minute; course de 5 cm), on effectue des transferts de 10 % (vol/vol) dans vingt flacons Erlenmeyer de 250 20 ml contenant chacun 50 ml de milieu (B) fraîchement stérilisé. On ajoute alors le stéroîde (300 microgrammes/ml) en complétant chaque flacon avec 0,25 ml d'une solution stérile (60 mg/ml) de 16,17-acétonide de 16ci-hydroxycortexolone dans du N,N-diméthylformamide). On fait fermenter un total de 300 mg. 25 Au bout d'à peu près 26 heures d'incubation supplémentaire, en utilisant des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, on réunit le contenu des flacons et on filtre alors le bouillon sur un tampon de clarification Seitz. On lave les flacons, le mycélium et le filtre avec des portions successives de 100 ml d'eau chaude. 30 Le filtrat et les eaux de lavage réunis ont un volume de 1200 ml. On les extrait trois fois avec des portions de 400 ml de chloroforme qui sont réunies, lavées à l'eau et concentrées sous pression réduite. La cristallisation du résidu dans le mélange acétone-hexane donne le 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocortisone ayant 35 un point de fusion d'environ 205-206° C. Exemple 7 16,17-Acétonide de 16os-Hydroxyprednisolone a) Via le 16.17-Acétonide de 16a:, 17a,21-Trihvdroxvprécma-1,4-diène-3,20-dione 40 A) Fermentation - On met en suspension, dans 5 ml d'une 69 1015 is 2007370 solution aqueuse à 0,01 % de lauryl sulfate de sodium, le résultat de la croissance superficielle de chacune de deux pentes d"agar-agar, âgées de deux semaines, de Curvularia lunata (MRRL-2380), les pentes contenant comme milieu nutritif (A) : 5 Grammes Glucose . 10 Extrait de Levure 2,5 k2hpo4 1 Agar-Agar 20 10 Eau distillée pour faire 1 litre On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ensemencer huit flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) : Grammes 15 Glucose 30 Farine de Soja 20 Huile de Soja 2,2 CaC03 2,5 Eau distillée pour faire 1 litre 20 Au bout d'à peu près 48 heures d'incubation à 25° C avec agitation rotative continue (280 cycles/minute; course de 5 cm), on effectue des transferts de 10 % (vol./vol.) dans vingt flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (C) : 25 Grammes Liqueur de macération de maïs 6 HH4H2P04 3 Extrait de Levure 2,5 Dextrose 10 30 CaC03 2,5 Eau distillée pour faire 1 litre On ajoute alors le stéroîde (500 microgrammes/ml) en complétant chaque flacon avec 0,25 ml d'une solution stérile (100 mg/ml) de 16,17-acétonide de I6ci,l7o:,21-trihydroxyprégna-l,4-diène-35 3 20-dione dans le N,N-diméthyl-formamide. On fait fermenter un total de 500 mg. Au bout d'à peu près cinq jours d'incubation supplémentaire en utilisant des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, on réunit le contenu des flacons et on filtre alors le bouillon 40 sur un tampon de clarification Seitz. On lave les flacons, le 69 10151 16 2007370 mycélium et le filtre avec des portions successives de 100 ml d'eau chaude. Le filtrat et les eaux de lavage réunie ont un volume de 1200 ml. On les extrait trois fois avec des portions de 400 ml de chloroforme qui sont réunies, lavées à l'eau et concen-5 trées sous pression réduite. La cristallisation du résidu dans le mélange acétone-hexane donne le 16,17-acétonide de 16o:-hydroxy-prednisolone ayant un point de fusion d'environ 263-265° C. b) Via le 16,17-acétonide de 16o:-Hvdroxvhvdrocortisone Fermentation - On met en suspension, dans 5 ml d'une solution 10 aqueuse à 0,01 % de lauryl sulfate de sodium, le résultat de la croissance superficielle d'une pente d'agar-agar, âgée de deux semaines, de Corvnebacterium simplex (ATCC-6946), la pente contenant comme milieu nutritif (A) : Gramme s 15 Glucose 10 Extrait de Levure 2,5 k2hpo4 1 Agar-agar 20 Eau distillée pour faire 1 litre 20 On utilise des portions de 1 ml de cette suspension pour ensemencer trois flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml du milieu stérilisé suivant (B) : Grammes Extrait de Boeuf 1,5 25 Extrait de Levure 3 Peptone 6 Dextrose 1 Eau distillée pour faire 1 litre ,Après 24 heures d'incubation à 25° C avec agitation rotative 30 continue (280 cycles/minute? course de cinq centimètres), on effectue des transferts de 5 % (vol./vol.) dans dix flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant chacun 50 ml de milieu B fraîchement stérilisé. Au bout d'à peu près 24 heures d'incubation ininterrompue, en utilisant des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, 35 on ajoute le stéroîde (500 microgrammes/ml) en complétant chaque flacon avec 0,25 ml d'une solution stérile (100 mg/ml) de 16,17-acétonide de 16cs-hydroxyhydroçortisone dans le Si,N--diméthylforma-mide. On fait fermenter tin total de 250 mg. Au bout- d'à peu près cinq jours d'incubation supplémentaire 40 en utilisant des conditions identiques à celles décrites ci-dessus, 69 10151 17 2007370 on réunit le contenu des flacons. Le volume final du bouillon est d'à peu près 500 ml. Ôn extrait le bouillon avec trois portions de 150 ml de chloroforme qui sont réunies, lavées à l'eau et concentrées sous pression réduite. La cristallisation du résidu donne 5 200 mg de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyprednisolone. c) Via le 16,17-Acétonide de lôos-Hyâroxyhvdrocortisone On a préparé des cellules de Corvnebacterium simplex (ATCC-694-6), séchées à l'acétone, selon les méthodes décrites dans le brevet E.U.A. N° 3.360.439. 10 A chacun de cinq flacons Erlenmeyer de 250 ml contenant 50 ml d'un tampon de phosphate 0,05 M (pH 7,0), on ajoute 1 g de cellules de Corvnebacterium simplex (ATCC-6946) séchées à l'acétone. On secoue soigneusement le mélange pour répartir les cellules. On ajoute alors 3,44 mg d'un accepteur d'hydrogène, la 2-méthy1-1,4-15 naphtoquinone, dans 0,25 ml d'éthanol, pour avoir une concentration finale de 0,4 millimole. On complète alors les flacons avec le stéroîde (mg/ml) en ajoutant à chaque flacon 0,5 ml d'une solution (100 mg/ml) de 16,17-acétonide de lôas-hydroxyhydrosortisone dans le N,N-diméthylformamide. On utilise un total de 250 mg de stéroîde. 20 Au bout d'à peu près 17 heures d'incubation à 30° C avec agitation rotative continue (280 cycles/minute: course de cinq centimètres), on réunit le contenu des flacons et on ajuste le mélange réactionnel à pH 3,5 en utilisant du E^SO^ 12H, On filtre ensuite le mélange acidifié sur un tampon de clarification Seitz. 25 On lave les flacons et le filtre avec des portions successives de 50 ml d'eau chaude. Le filtrat et les eaux de lavage réunis ont un volume de 500 ml. On extrait alors le tampon de filtration à l'acétone en utilisant des portions successives de lOO ml d'acétone» On recueille un total de 500 ml d'extrait acétonique. On chasse er* 30 partie l'acétone sous pression réduite et on extrait au chloroforme les filtrats réunis. On lave le chloroforme à l'eau, on le concentre et on fait cristalliser le résidu dans le sr»êlange acétone-hexane pour obtenir le 16,17-acétonide de 16os-hydroxyprednisolone. Exemple 8 35 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16ci-HvdroKyhvdrocortisone On maintient à la température ambiante pendant 16 heures une solution de 214 mg de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocortisone dans 3 ml de pyridine sèche et 1 ml d'anhydride acétique, puis on la dilue avec de l'eau glacée et on l'extrait au chloroforme. On 40 lave le chloroforme successivement avec de l'acide chlorhydrique 2N, I 69 10151 2007370 du bicarbonate de sodium à 5 %, et de l'eau, et on le concentre sous pression réduite. La cristallisation du résidu dans le mélange acétone-hexane donne 200 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocortisone ayant un point de fusion d'environ 244-5 246° C, Â_7 J5+ 145° (chloroforme),2 alc' 240 mMé = 16.000), HlclX • ' ^maî?1 2 '98 ' 2'74' 2'80' 6'04' 6,19/^,T^®4 9,08 (s.'l8-CH3) ,- 8,55 (s, 19-CH3) , 8,77 (s,/3-CH3 de 1 'acétonide) , 8,55 (s,«-CH3 de 11acétonide), 7,82 (s,21-0Ac), 5,49 Çm,lla-H), 4,32 (s,4-H). Analyse Calculée pour C^H^O^ (460,55): C=67,80; H= 7,88 10 Trouvée : C=67,79; H= 8,06. Exemple 9 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16«-Hydroxvprednisolone a) A partir du 16,17-Acétonide de 16«-Hvdroxvprednisolone En suivant la méthode de l'Exemple 8 mais en substituant le 15 16,17-acétonide de l6a-hydroxyprednisolone au 16,17-acétonide de lôoî-hydroxyhydrocortisone, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de l6ci-hydroxyprednisolone ayant un point de fusion d'environ 246-248° C, Mjl5 + 107° (chloroforme), X a=C" 243 m/V JJ IïïclX m / (É =14.000) 2,98, 5,72, 5,SO, 6,02, 6,20, 6,26//,^^Cl4 20 9,07 (s,18-CH3), 8,78 (s,/î-CH3 de 1 « acétonide) , 8,57, 8,55, (s, s,19-CH3 et c2-CH3 de 1 'acétonide) , 7,82 (s,21-0Ac) , 5,49 (m,lla-H) , #5,0 (m,16/î-H), 3,97 (s,4-H) , 3,74 (//,J=2,l0 cps,2-H), 2,73 (d,J=l0, 1—H) . Analyse Calculée pour C25H3407(458,53)s C= 68,10; H= 7,47 25 Trouvée : C=68,19; H= 7,41. b) A partir du 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16a-HydrOxyhydrocorti sone 'En suivant la méthode de l'Exemple 2 mais en substituant le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocortisone au 30 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxycortexolone, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyprednisolone. Exemple 10 21-Acétate de 16,17-Acétonide de l6a-Hydroxvépihvdrocortisone A 100 mg (0,239 mmole) de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépi-35 hydrocortisone, on ajoute 3,4 ml d'une solution -jc"tenant 188,3 mg d'anhydride acétique dans 25 ml de pyridine, et on maintient la solution obtenue à la température ambiante pendant une nuit. On concentre alors le mélange réactionnel sous pression réduite et 69 10151 2007370 on soumet le résidu à une chromatographie sur lame sur gel de silice HF254 en utilisant un mélange d'acétate d'éthyle et de chloroforme (1:1 en volume) comme solvant de développement. La bande correspondant à # 0,7, décelable par spectrographie U.V., est éluée 5 par le mélange méthanol-acétate d'éthyle (2t3 en volume), et après évaporation du solvant on fait cristalliser le résidu dans l'acétone pour obtenir 73 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépihydrocortisone qui a un point de fusion d'environ 270-272° C, /â_722 + 107° (chloroforme) 240 nyM £ = 16.000), 10 ^Si(Ch3)4 9/29(s,18-CH_), 8,76 (s,p-CEU de 1'isopropylidène), CjDC-L^ -3 8,69 (s,19-CH3), 8,52 (s,c-CH3 de 1'isopropylidène), 7,82 (s, 21- OAc) , 5,93 (m, 11/5-H) , 5,07 (centre ABq,21-CH2~) , 5,01 (m,16/î-H) , 4,27(s,4-H). Analyse Calculée pour C^H^O^ (460,55) : C=67,80; H=7,88 15 Trouvée s C=67,65; H=8,04. On transforme de même le 16,17-acétonide de 16c;-hydroxyépi-prednisolone en 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépi-predni solone. Exemple 11 20 21-Acétate de 11-Mésylate de 16; 17-Acétonide de 16c:-Hydroxyépi-hydrocorti sone A une solution de 206 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépihydrocortisone dans 5 ml de pyridine sèche, refroidie à 5° C, on ajoute 0,5 ml de chlorure de méthanesuifonyle 25 et on maintient le mélange à cette température pendant 16 heures. On ajoute alors de la glace au mélange et au bout de 30 minutes on le dilue à 1'eau et on 1'extrait au chloroforme. On lave le chloroforme successivement avec du HCl 2N, du bicarbonate de sodium à 5 %, et de l'eau, et on le concentre sous pression réduite. La 30 cristallisation du résidu donne le 21-acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16cs-hydroxyépihydrocortisone. De même le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépi-prednisolone donne le 21-acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépiprednisolone. 35 Exemple 12 21-Acétate de 16,17-acétonide de 16ù: 69 10151 2007370 A une solution de 262 mg de 21-acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépihydrocortisone dans 10 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 1,0 g d'acétate de sodium anhydre et on met le mélange à reflux pendant 1,5 heure. On refroidit le mélange, on 5 le dilue à l'eau et on filtre les cristaux qui se séparent, on les lave à l'eau et on les sèche, pour obtenir 167 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a-21-trihydroxyprégn-4,9 (11) -diène-3,20- — —22 dione ayant un point de fusion d'environ 226-228° C, Z°i_/D +97° (chloroforme) ,^*^1 238 ( £ = 16.900) cdc?^4 9,38 10 (18-CH3) , 8,75 (s,/î-CH3 de 1 'isopropylidène) , 8,67 (s,19-CH3) , 8,54 (s,os-CH3 de 11 isopropylidène) , 5,20-4,95 (ABq^l-CH^) , 4,96 (m,16p-H), 4,43 (m,11-H), 4,26 (s,4-H). Analyse Calculée pour C26H34°6 (442'53): c= 70,56; H= 7,74 Trouvée : C= 70,70; H= 7,93. 15 t) Via le 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16oc-Hvdroxv- hydrocorti sone A une solution de 500 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocortisone dans 13,2 ml de diméthylformamide et 1,95 ml de pyridine sèche, maintenue à 80° C, on ajoute 0,88 ml de 20 chlorure de méthanesuifonyle et on maintient le mélange obtenu à 80° C pendant 1,5 heure. On le refroidit alors et on le dilue lentement dans l'eau glacée, ce qui provoque la séparation de cristaux de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a, 17a,21-trihydroxyprégna-4,9(11)-diène-3,20-dione. On les filtre, On les lave à l'eau et on 25 les sèche pour obtenir 444 mg de produit. Exemple 13 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16a,17a,2l-Trihvdroxvpréqna- 1,4.9(11)-triène-3.20-dione ' a) Via le 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 16cs, 17k,21- 30 Trihydroxyprégna-4,9(11)-diène-3,20-dione En suivant la méthode de l'Exemple 2 mais en substituant le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna- 4,9(11)-diène-3,20-dione au 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a- hydroxycortexolone, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide 35 de 16a,17a,21-trihydroxyprégna-l,4,9(11)-triène-3,20-dione ayant 25 un point de fusion d'environ 208-210° C, ^/a_/D + 34° (chloroforme), A aie. 238 m . £ ^13,500) ^Nujol 5 ?0 5f80/ 6,01, 6,17, 6,24/\ max. s max. _ ' C *j Ma ^ CDCl4 9,34 ^s' 18-CH^) , 8,60 (s, 19-CH3) , 8,76 (s,(î-CH3 de l'acétonide F, 8,57 (s,os-CH3 de l'acétonide) , 7,82 (s, 21-0Ac) . 69 10151 2007370 Analyse Calculée pour C26H52°6 C- 70,89? H - 7,32 Trouvée : C= 71,04; H = 7,49 b) Via le 21-Acétate de 16.17-Acétonide de iSg-Hydroxvpred-nisolone 5 En suivant la méthode de l'Exemple 12b mais en substituant le 21-acétate de 16,17-acétonide .de 16cî-hydroxyprednisolone au 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyhydrocorfcisone, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de IScî, 17o2„21-trihydr©xyprégna-1,4,9(11)-triène-3,20-dione. 10 c) Via le 21-Acétate de 11-Mésvlate de 16,17-acétonide de 16os-Hydroxvépipredni solone En suivant la méthode de l'Exemple 12a mais en substituant le -21-acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16«-îiydroxyépi~ prednisolone au 21-acétate de 11-mêsyiate ee 16,17-acétonide de 15 16e(-hydroxyépihydrocortisone, on obtient la 21-acêtate de 16,17-acétonide de 16a,17«,21-trihydroxyprégna-1, 4 „ 9 (il)-triène-3,20-dione. Exemple 14 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 9a-Bromo-16(s-lavdroxylwdrocortisone 20 A une solution de 700 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna~4s9 (ll)-diès:ia-3,20-dioae dans 16 mi de dioxane purifié et 2,06 ml d'acide perchlorique Q,5 M, on ajouta 442 mg de N-bromoacétamide et on maintient la réaction â l'abri de la lumière et à la température ambiante pendant 30 minutes. On 25 décompose l'excès de N-bromoacétamide à l'aide de sulfite de sodium dilué et on dilue le mélange â l'eau» On filtre les cristaux qui ss séparent, on les lave à l'eau et on les sèche pour obtenir 700 mg de 21-acétate de 16,17-acétoniâe de 9os-bromo-16ce-hydroxyhydrocor-tisone ayant un point de fusion d'environ 163-165° C, 2pL7D + 109° 30 (chloroforme) , ^ 242 ^ " 15*500)' ^cdc?*3*4 9,09 3 (s,18-CHjl 8,74 (s,/ï-CHg de 1 "isopropylidène) , 8,44 (s,cs-CH3 de 11 isopropylidène), 8,55 (s,19-CH_), 5,09 (m,21-CH.,-) , 5,31 «3 (m, lla-H), 4,26 (s,4-H). Analyse Calculée pour C2gH3507Br(539,45) : C=57,89? H= 6,54 35 Trouvée : C=57,97; H= 7,05. Exemple 15 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 9a-Bromo-16a-hvdroxvprednisolone En suivant la méthode de l'Exemple 14 mais en substituant le 21-acétate de 16,17-acétonide de 16cs,l7a,21-trihydroxyprégna-40 1,4,9(11)-triène-3,20-dione au 21-acétate de 16,17-acétonide de 69 10151 2007370 16a,17a,21-trihydroxyprégna-4,9(11)-diène-3,20-dione, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-bromo-16a-hydroxypred-nisolone ayant un point de fusion d'environ 202-203° C, + 111° (chloroforme) , A llZ' 241 m Ht = 13.000), ^ 2,92, inox • niuX • 5 3,06, 5,72, 5,80, 6,02, 6,16(sh), S«20. Analyse Calculée pour C26H3307Br (537,43): C= 58,11; H= 6,19 Br= 14,87 Trouvée : C = 58,52; H= 5,93 Br = 15,41. . Exemple 16 10 21-Acétate de 16,17 -Acétonide de 9/3»llfi-époxv-16a,17a.21-trihydroxy-préqn-4-ène-3,20-dione On met à reflux sous azote pendant une heure une solution de 600 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-bromo~l6a-hydroxy-hydrocortisone et de 980 mg d'acétate de potassium fraîchement fon-15 du dans 25 ml d'éthanol absolu, puis on la dilue à l'eau. On filtre les cristaux qui se séparent, or les lave à l'eau et on les sèche pour obtenir 410 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 9|S, llp-épo-xy-16a,17a,21-trihydroxyprégn-4-ène~3,20-dione ayant un point de fusion d'environ 238-240°C, /xX727+ 23° (chloroforme), afc* 241 m,A •®~ ■* D max. ' 2C ( t= 15.100) «^cdcÎH3)4 9,16 (s,X3-CH3) , 8,76 (s,JÎ-CH3 de 1'isopropylidène) , 8,58 (s,19-CH3), 8,53 (s,œ-CH3 de 1'isopropylidène), 6,53 (m,lla-H) , 5,30, 4,92 (ABq-CH2) , 5,02 (d,J=4, 16/1-H) , 4,22 (s»4-H). Anal. Cale, pour C26H34°7 (458,53) : C = 68,10; H = 7,47 25 Trouvée : C = 68,27 ; H = 7,59 Exemple 17 21-Acétate de 16,17-Acétonide de 9f3,llfi-époxv-16 En suivant la méthode de l'Exemple 16 mais en substituant le 30 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-bromo-16a-hydroxyprednisolone au 16,17-acétonide de 9a-bromo-16o:-hydroxyhydrocortisone, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de 9/3, ll|3-époxy-16a, 17a, 21-trihydroxyprégna-1,4-diène-3,20-dione ayant un point de fusion d'environ 210-215°C, A ma^?1 5,71, 5,80, 6,01, 6,16, 6,24 y#. 35 Exemple 18 21-Acétate de 16.17-Acétonide de 9a-fluoro-16a-hydroxvhvdrocortisone et 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-fiuoro-16a-hvdroxypredni-solone. 69 10151 23 2007370 A une solution de 250 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 9/3,11/3-époxy- 16a, 17a,2l-trihydroxyprégn-4-ène-3,20-dione dans 10 ml de chloroforme et 2,2 ml de tétrahydrofuranne, contenue dans une bouteille en polyéthylène et refroidie dans un bain d'acétone et de 5 glace sèche, on ajoute 2,0 ml de fluorure d'hydrogène au moyen d'une pipette en polyéthylène. On remplace le bain d'acétone et de glace sèche par un bain d*«s.u glacée et on agite le mélange pendant quatre heures. On le transfère ensuite dans un bêcher en polyéthylène,on le dilue avec 50 ml d'eau et 50 ml de chloroforme, et on le neutra-10 lise lentement par addition de bicarbonate de sodium. On sépare le chloroforme, on le lave soigneusement à l'eau et on le concentre sous pression réduite. On fait cristalliser le résidu dans un mélange acétone-hexane pour obtenir 115 mg de 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-fluoro-16a-hydroxyhydrocortisone ayant un point de fusion 15 d'environ 220-222°C. De même, en partant du 21-acétate de 16,17-acétonide de 9/3,11/3-époxy-16a,17a,21-trihydroxyprégna-l,4-diène-3,20-dione, on obtient le 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-fluoro-16a-hydroxyprednisolo-ne. 20 Exemple 19 16,17-acétonide de 9c-fluoro-16oc-hydroxyhydrocortisone et 16,17-Acétonide de 9 a-fluoro-16«-hvdroxypredni solone. En suivant la méthode de l'Exemple 3a mais en substituant le 21-acétate de 16,17-acétonide de 9a-fluoro-16a-hydroxycortisone 25 et le 21-acétate de 16,17-acétonide de 9ci-fluoro-16a-hydroxypredni-solone au 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxy-prégna-l,4-diène-3,20-dione, on obtient le 16,17-acétonide de 9a-fluoro-l6a-hydroxyhydrocortisone et le 16,17-acétonide de 9a-fluoro-16a-hydroxypredni solone. 69 10151 24 2007370 revendications 1. Un composé de formule : ch2or' } c=0 Oy Q 0 S/\ / S' V/ dans laquelle Y est une liaison simple ou double; R est choisi dans le groupe composé de l'hydrogène et des radicaux hydroxyle et mé-syloxy; R' est choisi dans le groupe composé de l'hydrogène et des 5 radicaux acyle ; P est choisi dans le groupe composé de l'hydrogène et des radicaux alcoyle inférieur, halo-alcoyle inférieur, cycloalcoyle monocyclique, (cycloalcoyl monocyclique)-alcoyle inférieur, aryle monocyclique ,(aryl monocycliqué-alcoyle inférieur, hétérocyclique monocyclique et(hétérocyclique monocycliqu^-alcoyle infé-10 rieur; Q est choisi dans le groupe composé des radicaux alcoyle inférieur, halo-alcoyle inférieur, cycloalcoyle monocyclique,(cycloalcoyl monocyclique)-alcoyle inférieur, arylfimonocyclique, (aryl mono-cycliqu^-alcoyle inférieur, hétérocyclique monocyclique et(hétérocyclique monocycliqu^-alcoyle inférieur ; et, réunis à l'atome de 15 carbone auquel ils sont liés, P et Q sont choisis dans le groupe composé des radicaux cycloalcoyle monocycliques et hétérocycliques monocyc1iques. 2. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 16,17-acétonide de 16ci-hydr oxyépihydrocort i sone. 20 3. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 16,17- acétonide de 16cs-hydroxyépipredni solone. acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépihydrocortisone. 5. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 21-25 acétate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépiprednisolone. 6. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 16,17-acétonide de 16os,17cs,21-trihydroxyprégn-4-ène-3,20-dione. 7. Un composé selon la revendication 1, doux: le nom est 16,17-acétonide de 16a,17a,21-trihydroxyprégna~l,4r-diène-3,20-dione. 30 8. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 21- acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16a- 4. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 21- 69 10151 25 2,007370 hydroxyépihydrocorti sone. 9. Un composé selon la revendication 1, dont le nom est 21-acétate de 11-mésylate de 16,17-acétonide de 16a-hydroxyépiprednisolone. 5 10. Un composé ayant la formule : CH20Ac °-c p -O "Q dans laquelle Ac représente un radical acyle et P et Q sont comme définis dans la revendication 1. 11. Un composé selon la revendication 10, dont le nom est 21-acétate de 16,17-acétonide de 16a,17es,21-trihydroxyprégn-4,9 (11)-10 diène-3,20-dione. 12. Un composé ayant la formule P CHo0Ac i=ê - °-c - O ' "'Q fiv Brj 0 '\ 1 dans laquelle Ac représente un radical acyle et P et Q sont comme définis dans la revendication 1. 13. Un composé selon la revendication 12, dont le nom est 21-15 acétate de 16,17-acétonide de 9a-bromo-16a-hydroxyhydrocortisone. 14. Un composé ayant la formule : CH2OAc r . >oi i. /w X./"' 69 1015 : 2007370 dans laquelle Ac représente un radical acyle et P et Q sont comme définis dans la revendication 1. 15. Un composé selon la revendication 14, dont le nom est 21-acétate de 16,17-acétonide de 9£,HA-époxy-16a, 17a,21-trihydroxy-prégn-4-ène-3,20-dione„ 16. Un procédé de préparation de composés à action pharmaceutique ayant la formule : CHjOAc dans laquelle Y, P et Q sont comme définis dans la revendication 1 et Ac est un radical acyle; qui comprend la soumission d'un composé de formule ; CH2OH C=0 „0 0/ à l'action des enzymes d'un micro-organisme d'hydroxylation en lies, l'acylation du composé lla-hydroxylé obtenu, la réaction du dérivé 21-acylé obtenu avec le chlorure de méthane-suifonyle pour produire le 11-mésylate, la soumission du 11-mésylate a une réaction d'élimination, la récupération du produit 9,11-déhydro ainsi obtenu et sa tranaforffiation en composé 9-a-hrorao, la transformation de ce dernier eoq©osé pour former le composé 9-P,ll-A-époxy, et la fluoruration de ce dernier en composé 9-a-fluoro. 17. Un procédé de préparation de _com£>osés ayant la formule : CH-v *-{..0 Q ^ / P // O 69 10151 27 2007370 dans laquelle Y, P et Q sont comme définis dans la revendication 1 et Ac est un radical acyle ; qui comprend la soumission de composés de.formule : à l'action des enzymes d'un micro-organisme d1hydroxylation en 11/3 5 pour obtenir le composé substitué 11/3-hydroxylé correspondant, l'acylation de ce composé pour obtenir le dérivé 21-acylé, la réaction du composé 11/3-hydroxylé et 21-acylé ainsi obtenu avec le chlorure de méthanesulfonyle pour obtenir le dérivé 9,11-déhydro désiré, et la récupération de ce produit du mélange réactionnel. ch2oh /nA: ' - o % C=0 q .^p ! - - - ' y