比較基因組雜交

比較基因組雜交 ( CGH ） 是一種分子細胞遺傳學方法 ， 在不培養細胞的情況下 ， 分析相對於參照樣品 ， 測試樣品的DNA中 （ CNV ） 的多倍性程度 。 其目的是快速有效地比較兩個來源的兩組DNA樣本 ， 這兩組DNA通常是密切相關的 ， 因爲兩者在整個染色體或亞染色體區域 （ 整個染色體的一部分 ） 上都可能有獲得或丟失 。 該技術最初是爲了評估實體瘤和正常組織的染色體互補差異而開發的 ， 相比更傳統的Giemsa顯帶技術和熒光原位雜交技術 （ FISH ） （ 受限於所使用的顯微鏡分辨率 ） ， 它的分辨率提高到了5 - 10Mb 。 這項技術是通過競爭性熒光原位雜交實現的 。 簡言之 ， 從待比較的兩個樣品 （ 通常是測試和參照樣品 ） 中分離DNA ， 用不同顏色 （ 通常是紅色和綠色 ） 的熒光團 （ 熒光分子 ） 分別標記兩組DNA樣品 ， 變性DNA使其成爲單鏈 ， 再將兩組的1 ： 1混合物與正常中期染色體進行雜交 ， 並且結合在原位 。 然後使用熒光顯微鏡和計算機軟件 ， 縱向比較雜交染色體熒光信號的着色差異 ， 以鑑別兩組的染色體差異 。 雜交染色體特定區域中的測試樣品顏色較強 ， 表示測試樣品中該區域有獲得 ， 而參照樣品顏色較強表示測試樣品中有丟失 。 中性色 （ 黃色 ， 當同時標記紅色和綠色 ） 則表示兩個樣品在該區域沒有差異 。 CGH只能檢測不平衡的染色體異常 ， 這是因爲平衡的染色體異常 （ 例如易位 、 倒位或環狀染色體 ） 不影響拷貝數 。 不過CGH確實能夠在單次測試中探測全部46條人類染色體 ， 並且可以發現缺失和重複 ， 甚至在微觀尺度上 ， 可以再用其他細胞學技術進一步鑑定候選基因 。 通過結合CGH技術和DNA微陣列 ， 已經開發出更特效的陣列CGH （ aCGH ） ， 它可以逐點檢測CNV ， 分辨率精確到100kb （ 千鹼基 ） 。 這種改進的技術可以發現已知和未知的致病位點 。