酶聯螢光原位雜交

酶聯熒光原位雜交 ( catalyzed reporter deposition fluorescent in situ hybridization ， CARD - FISH ， 直譯爲催化報告沉積熒光原位雜交 ) ， 是熒光原位雜交 ( FISH ) 的一種變形 ， 可以更有效地增加信號強度 ， 避免背景干擾 。 在通常的FISH中 ， 核酸探針被熒光分子直接標記 ； 而在CARD - FISH中 ， 探針與辣根過氧化物酶 ( horse radish peroxidase, HRP ) 相連 。 完成雜交後 ， 洗去遊離的探針 ， 加入和熒光標記的tyramide和過氧化氫 ， 將熒光連接在有探針結合的細胞的蛋白質上 。 這樣 ， 一個探針可以將很多熒光分子沉積在細胞內 ， 起到放大信號的作用 ， 因此比普通的FISH更爲敏感 。 但由於辣根過氧化物酶比普通熒光分子要大得多 ， 無法通過細胞膜 ， 因此實驗中必須對細胞做通透性處理 。 這樣對於具有不同外圍結構的細胞 ， 通透性會相差很大並影響信號強弱 。 Category: 實驗室技術