培养的MEF细胞使用加有10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养即可。可以根据需要，加入1%青霉素-链霉素以减少细菌污染风险。MEF传代时，使用胰酶消化细胞，再以1:5的比例将细胞转入新的培养皿中。
应用.1963年，两名纽约大学医学部的研究人员，即乔治·托达洛（George Todaro）和哈沃德·格林（Howard Green）通过反覆传代取得了永生化的MEF细胞。这些细胞经过鑑定、发展，成爲了今日生物实验室常用的NIH 3T3经过丝裂霉素或伽玛射线处理的MEF细胞不再