脲试剂中真正起作用的是硫酸铜，而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境，因此它可被其他碱，如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾，可延长试剂的使用寿命。使用方法：先将双缩脲试剂A（氢氧化钠溶液）加入组织样液，振荡均匀（必须营造碱性环境），再加入双缩脲试剂B（硫酸铜与酒石酸钾钠的混合溶液），振荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu络合成紫红色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。