室统帅波旁公爵夏尔三世·德·波旁因与法国国王的家族矛盾，愤而出卖国家，投奔查理五世，率领部分法国军队及一支哈布斯堡王朝军队在帕维亚城下袭击由弗朗索瓦一世亲自带领的法国军队，法军被各个击破后大败，弗朗索瓦被夏尔三世俘虏后转交给查理五世，查理五世将他囚禁在马德里，而最终两国签署马德里协议，迫使弗朗索瓦一世为了取得自由，不惜割让勃艮地（给查理）、布列塔尼（给英王亨利八世）等领土。但弗朗索瓦一世一回到法国，就宣布撕毁条约，不但拒绝割让土地给查理和英国，还继续出兵和查理作战。西班牙在帕维亚中大败法国，使很多义大利