同周边各庄建置台南州虎尾郡，虎尾自次取代土库成为周边政经、文化中心。虎尾郡役所设于今日虎尾镇林森路与中山路的路口。1928年，政府成立技职学校虎尾农业补习学校（今虎尾农工）。1933年，虎尾庄升格为虎尾街，人口已有2万余人。1936年，日本在虎尾设置虎尾飞行基地，曾为神风特攻队基地。同年虎尾首间戏院「虎尾座」开设。1939年成立虎尾家政女学校，次年更成立台南州立虎尾高等女学校（后来的省立虎尾女中，1981年併入虎尾高中）。1942年，因应学生数增长，日本在街内设立第二所国民学校虎尾街南国民学校（今日立仁国小