常切成片状的干酪夹在刚出炉经过烹调的汉堡排后夹入，在遇到汉堡排的肉后干酪往往会遇热而融化，有时候也会使用磨碎过后的干酪。一般速食餐厅中普遍使用的是加工干酪（Processed cheese），但也有些起司堡则使用如切达起司、瑞士干酪、马苏里拉起司、蓝干酪、辣杰克起司（Pepper jack cheese）等食材，另外为了配合宗教上的要求也有时候会改使用模拟干酪。依据所使用的干酪种类或者数量不同可能让汉堡本身的营养价值有所改变，例如1片切达起司的营养成分可以让起司堡增加95卡路里的热量以及4.5克的饱