二种可逆抑制剂竞争来预防不可逆抑制剂的结合。 这种保护作用是不可逆抑制剂与活性位点特异性反应的良好证据。通过将酶与抑制剂一起孵育并测定随时间保留的活性量来研究该反应的结合和失活步骤。 活动将以时间依赖的方式减少，通常跟随指数衰减。 将这些数据拟合至速率方程，给出该抑制剂在这个浓度下的失活速率。 这是在抑制剂的几种不同浓度下完成的。 如果一个可逆的EI复合物被涉及，则失活率将是可饱和的，并且拟合该曲线将给出"k"和"K"<sub>i</sub 。在这些分析中广泛使用的另一种方法是质谱法。 在这里，准确