，酶与胺酰-AMP复合物再与正确的tRNA分子结合，催化胺基酸从胺酰-AMP转移到tRNA的3'端最后一个碱基的2'-或3'-羟基上。一些合成酶还具有校对功能以确保tRNA结合的正确性：如果tRNA被发现与错误的胺基酸相连接，那么所形成胺酰tRNA会通过水解重新被打开。
反应式.胺酰tRNA合成酶所催化反应的反应式如下：总反应式：胺基酸 + tRNA + ATP → 胺酰-tRNA + AMP + PPi胺基酸是通过它们的羧基（-COOH）与腺苷上的羟基（-OH）连接。因此