2日，詹姆斯五世再迎娶了法国王室贵族吉斯公爵弗朗索瓦·德·洛林之姐──美丽的寡妇玛丽·德·吉斯。婚礼一度因英王亨利八世对玛丽的求婚而有取消的可能（亨利想要借此打击法国与苏格兰的老同盟关系），但因法王力促玛丽与詹姆斯的婚事而成功缔结。1541年英苏爆发索维莫斯战役，以苏格兰军大败终结，许多人认为这加剧了詹姆斯五世的病情，促使他在1542年死于病床上。玛丽·德·吉斯与詹姆斯五世有两个儿子，但是均早夭。1542年12月8日玛丽一世出生，六天后詹姆斯五世疑因霍乱于30岁时逝世，出生才六天的玛丽于1542年12月14