反应通路中催化反应速率最慢的酶，是限制总反应速度的酶，同时也决定了总反应速率。限速酶一般催化不可逆反应。
代表性限速酶.
糖酵解.在糖酵解反应中，有三个限速酶：
三羧酸循环.在三羧酸循环中，有三个限速酶：