对者仍然不停地筹计将玛丽推上英苏二国的宝座。英国在西班牙大陆美洲及大西洋的私掠行为（西班牙视其为海盗）严重影响西班牙的王室收入。英国的跨大西洋奴隶贸易——由约翰·霍金斯爵士于1562年发起——获得伊莉莎白的支持，无视于西班牙政府的控诉，指霍金斯在加勒比地区西属殖民地的贸易实已构成走私。1568年9月，一支由霍金斯与法兰西斯·德瑞克爵士领导的奴隶买卖远征队遭到西班牙突击，造成数艘船舰于墨西哥韦拉克鲁斯沉船，即圣胡安战役。这场交战使英西二国关系迅速恶化，翌年英国便扣押了数艘西班牙派遣至荷兰支援军队的珍宝