。1567年，玛丽因贵族叛变而遭到囚禁，并被迫将苏格兰王位让给她的幼子詹姆斯。惊险逃脱后，她迅速逃往英格兰，却又被伊莉莎白囚禁。此后直至玛丽过世的二十年间，伊莉莎白与詹姆斯的敌对者仍然不停地筹计将玛丽推上英苏二国的宝座。英国在西班牙大陆美洲及大西洋的私掠行为（西班牙视其为海盗）严重影响西班牙的王室收入。英国的跨大西洋奴隶贸易——由约翰·霍金斯爵士于1562年发起——获得伊莉莎白的支持，无视于西班牙政府的控诉，指霍金斯在加勒比地区西属殖民地的贸易实已构成走私。1568年9月，一支由霍金斯与法兰西斯·德