NA聚合酶，分子量约99kDa。专门催化5'→3'方向的RNA形成过程。T7RNA聚合酶具有高度启动子专一性，且只会转录T7噬菌体中位于T7启动子下游的的DNA或DNA复制品。此酵素在合成RNA的过程中，需要DNA模板与镁离子（Mg）作为辅因子。牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）及精胺（spermidine）对此酵素具促进效果。与细菌的RNA聚合酶的差异之一，在于T7RNA聚合酶不受抗生素利福平（rifampicin）抑制。