取代反应的亲核试剂。然而，现在已经知道谷氨酸-461是一种酸[催化剂]。相反的，谷氨酸-537为实际的亲核试剂，他是结合到半乳糖的中间体。在人类中，是由Glu-268扮演水解反应的亲合试剂。
应用.β-半乳糖苷酶检测常用于遗传学、分子生物学，以及其他生命科学。可用于蓝/白筛检测中，有活性的酶可以用X-gal来进行检测，会在裂解β-半乳糖苷后形成一个深蓝色的产物5-溴-4-淀蓝，并且容易辨识和量化。 它的生产可以透过非水解性诱导结构异构物中的异乳糖─IPTG，从lac操作者中结合