儿子都夭折，在伊莎贝拉身故以后，其女胡安娜（即“疯女胡安娜”）继承卡斯蒂利亚王位。神圣罗马帝国皇帝马克西米连一世的儿子腓力（即卡斯蒂利亚的腓力一世以胡安娜的王夫的身分，和岳父斐迪南一起监国。1516年，斐迪南病逝后，胡安娜和腓力的儿子，西班牙王子兼奥地利大公卡尔（西班牙文名：卡洛斯，"英译查理"）以特拉斯塔马拉家族的外孙资格继承西班牙（卡斯蒂利亚和阿拉贡）王位，称卡洛斯一世。上任后赞助了麦哲伦的环球旅行。1519年查理当选为神圣罗马帝国皇帝，称查理五世。查理五世在1525年俘虏法王的帕维亚之战、1527