于非闇自幼受到家庭和周边环境影响，喜爱书画、诗文，种植花草，钓鱼养鸟，直到40余岁时才将精力集中到工笔花鸟画上。从白描入手，先学的是赵子固、陈老莲的双勾花卉，随后上溯宋朝、五代，从赵佶瘦金体书法中悟笔致。1936年在中山公园第一次举办个人画展。他为院体画注入了新活力，通过对花鸟的观察写生，对民间绘画、缂丝、刺绣的借鉴，使其艺术不断获得新生命。1940年代后，风格更加成熟，有“南陈北于”（陈指陈之佛）之称。他对当代工笔花鸟画产生了重要影响。