生化危机5》最初由小林裕幸负责初期策划及开发工作，其后便将《生化危机5》交由曾经担任《鬼武者》监督及《失落的星球：极限状态》制作人的竹内润负责担任执行制作人。而曾经担任《生化危机2》宣传监督及《生化危机4》(PlayStation 2版本)执行制作人的稻船敬二亦负责监视整个游戏的开发进度。其后卡普空公司全资拥有的Clover Studio亦加入并且协助继续开发。游戏开发初期，由于大量开发人员借调到开发Wii专用游戏《生化危机：安布雷拉编年史》（Biohazard Umbrella Chronicles）