小化的“丁豆蘑菇”以及可以让马里奥穿上去撞击敌人的“蓝色龟壳”。在本作中，马里奥需要穿过八大世界总共80个关卡并打败库巴父子以拯救碧奇公主。尽管此游戏是一个横向卷轴游戏，但是其游戏角色和部份物体均以3D的形式呈现。另外，玩家亦能自由选择使用马里奥或路易吉。类似于以前的“马里奥”游戏，马里奥（或路易吉）在游戏中能够收集金币、踩踏敌人和破坏砖块。玩家在此游戏中亦能控制马里奥二级跳和跳墙。此游戏有8个世界，共80关卡。8个世界会在任天堂DS下屏显示。某些世界需要特定手段才能进入，如以迷你马里奥击败一个世界