链补全碱基，从而形成完整的拼接后DNA双链。一旦一个拼接好的DNA分子形成后，只有拼接DNA末端引物能够继续进行PCR反应，而单独扩增出的DNA小片段会作为引物扩增出拼接DNA。这样，两段DNA序列就会拼接到一起并扩增。这个DNA拼接方法的好处是不需要限制酶位点即可连接DNA分子。如果使用过量引物可能提高DNA扩增产量。这种DNA的拼接方法的应用之一是在载体中插入DNA片段。具体方法为，首先，使用合适的正反向引物对DNA插入片段进行PCR克隆得到最终的PCR产物，产物两端的序列与载体重叠。然后将载体