合成蛋白质包括氨基酰-tRNA合成、肽链合成的起始、延伸及终止等阶段，不同蛋白质生物合成抑制剂类抗生素可以作用在不同阶段。
抑制氨基酰-tRNA合成.部分蛋白质生物合成抑制剂类抗生素能与氨基酰-tRNA合成酶特异性结合从而使该类酶失去催化氨基酸与tRNA结合的能力。例如，tRNA活化反应中吲哚霉素能与色氨酸竞争与色氨酸激活酶（色氨酸-tRNA合成酶）结合，抑制色氨酸-tRNA的形成。　
抑制肽链延伸.部分蛋白质生物合成抑制剂类抗生素这部分抗生素可主要分