鼠为主，还包括小麝鼩、小家鼠、褐家鼠等啮齿类，蝙蝠、棕头鸦雀、麻雀、燕雀等小型鸟兽。栖息于北京天坛公园内长耳鸮的唾余时甚至发现了灰喜鹊的残肢，说明长耳鸮有可能捕猎体形较大的鸟类，或有食腐行为。
繁殖与保护.繁殖细节不详，多占用乌鸦或喜鹊的弃巢产卵繁殖，每巢产卵4－5枚，孵化期约26－28天。