过DN3阶段(CD44-CD25+)时，细胞将会和TCRβ一起表达一个未经重排的α-链（pre-Tα），如果重排后的β-链可以和pre-Tα形成二聚体，细胞将产生信号停止β-链的重排。虽然这个信号需要pre-TCR在细胞膜上表达，不过它与pre-TCR和配体的结合无关。如果pre-TCR形成了，细胞会下调CD25并进入DN4阶段(CD25-CD44-)。这些细胞将继续分裂并重排TCRα的基因座。
阳性选择.双阳性(CD4+/CD8+)的T细胞会向胸腺皮层深处迁移，并会接触到胸腺皮层