片段的结果在非活性二聚体的形成提供一个合理的解释。
催化反应.β-半乳糖苷酶的活性端通过“浅层”与“深层”结合基质来催化水解双糖。一价的钾离子（K +），以及二价的镁离子（镁2 +）需要酶的最佳活性。以β-核苷间键为基质经由谷氨酸侧链上的羧基终端裂解而成。在大肠桿菌中，谷氨酸-461被认为是取代反应的亲核试剂。然而，现在已经知道谷氨酸-461是一种酸[催化剂]。相反的，谷氨酸-537为实际的亲核试剂，他是结合到半乳糖的中间体。在人类中，是由Glu-268扮演水解反应的亲合试剂。