制。这是由于活性位点内含有不同的结合位点产生的，每个底物对应一个。例如，某抑制剂可能与底物A竞争第一个结合位点，但在第二个结合位点是底物B的非竞争性抑制剂。
解离常数测量.如上所述，酶抑制剂的特征在于对酶和酶－底物复合物的两个解离常数"K"和"K′"。酶抑制剂常数"K"可以通过各种方法直接测量：一种极其准确的方法是等温滴定量热法，这种方法将抑制剂滴定到酶溶液中并测量释放或吸收的热量以测定解离常数。然而，解离常数"K′"难以直接测量，因为酶－底物复合物的存在时间较短，并且易发生生成酶