与寥寥数种底物结合，催化一种或几种反应。专一性通过结合区的形状、电荷、疏水/亲水性与底物互补实现。因此，酶可以用来区分上、区域选择性上、立体专一性上有所不同的结构相似的分子。一些与基因组复制与表达相关的酶具有很高的专一性和准确性，表现在一些酶所具有的校对机制。以DNA聚合酶爲例，这类酶先催化DNA链的合成，再检查新加上的硷基是否正确。校对机制确保了酶的极高准确性，哺乳动物的高保真DNA聚合酶在每一亿次反应中才会出一次错误。RNA聚合酶、氨酰-tRNA合成酶、核糖体也有与DNA聚合酶类似的校对机制。相