改变DNA的构造以促进DNA链的分离。复制起点的这一区域，有解旋的自然倾向。接下来DnaA蛋白会从DnaB-DnaC综合体中召集解旋酶，既DnaB，到被解旋的区域来形成预启动综合体。在DnaB移位到每个复制叉顶部后，解旋酶解开两条DNA父链，立刻和引发酶发生反应。为了DNA复制的顺利进行，需要单链的绑定蛋白质来防止DNA单链形成次生结构及二次复性。此外，需要DNA旋转酶来释放由DnaB解旋酶作用造成的拓扑结构上的作用力。
延伸阶段.当复制叉沿着染色体环移动时，形成了一个形似