五郎的女儿松井つね结婚。隔年8月于府中六所宫（今东京赛马场附近），为继承天然理心流第四代掌门人一事进行比试，最后通过比试成为天然理心流宗师。文久二年（1862年），近藤勇长女・たま(琼子)诞生。文久三年（1863年）、清河八郎向江户幕府第14代将军德川家茂提议组织守护京都治安的浪人组织「浪士组」，并开始募集。包括土方岁三、沖田总司等试卫馆道场的8名成员和沖田林太郎等人决定一同加入浪士组上京。2月8日，浪士组开始出发前往京都。行经中山道，并于2月23日抵达京都，并在当地壬生郷士八木源之丞之宅第休息定居。