理的米兰公爵弗朗西斯科二世；查理派的义大利城邦则有费拉拉、曼托瓦和查理继承的那不勒斯王国。结果西班牙出兵一一击败义大利的对手，查理五世不但把永远控制了米兰（1535年更让儿子腓力二世兼任米兰公爵），甚至在1527年派两万大军包围罗马。因为西军主帅夏尔三世·德·波旁意外死亡，西班牙军队在暴乱中焚掠罗马并掠走教宗，是为罗马之劫（一万多义大利人被杀，近半数是被拷打而死的富室、贵族，其他多是因瘟疫而死），总计4.5万人或死或伤或流亡，给文艺复兴运动带来巨大打击。听闻美第奇在教宗国的彻底失败后，佛罗伦斯共和国起兵推翻