上梅毒（鲁克蕾齐亚·波吉亚听闻他染病，立刻结束了外遇关系，而伊莎贝拉仍悉心照料丈夫），于1519年过世。他留下六个子女（共有八名子女，两个早卒）与46岁的伊莎贝拉。1519年儿子（1500-1540年）继承曼图亚侯爵后，伊莎贝拉掌权摄政，成功地瓦解了教宗併吞曼图亚的计划。她是一个「忠实的国家领袖」，摄政寡妇的身分除了需要她诚挚的努力，更要求她去研究如何治理城邦国家的问题。为了提高人民的生活水准，她钻研建筑、农业和工业的技术，并遵循马基维利于《君王论》提出的治国原则。她的努力成果丰硕，曼图亚的人民回报以感