广告为主，亦曾与中学同学于电影《自从他来了》中担任特约演员，饰演学生之一。2000年，蔡卓妍拍摄香港电台电视部制作的青春剧《青春@Y2K》崭露头角，开始为年轻人认识，并多次参与广告及杂志拍摄。后经《Yes!》杂志负责人引荐下得经理人霍汶希赏识，签约英皇娱乐成为旗下艺人。2001年，她参与电影《恋爱起义》拍摄，片中清新自然的演出令她获得演出《常在我心》的机会，首次担任电影女主角，饰演患癌少女，翌年更凭此片获「第二十一届香港电影金像奖」「最佳新演员」提名。同年5月18日，与钟欣桐组成女子歌唱组合Twin