此后，他又在三个俄国同事和其他志愿者身上进行了人体试验，获得了相似结果，进而确信他所研发的疫苗是可行的、可以进行更大规模的测试。1893年，全球第五次霍乱大流行期间，在获得“微生物学之父”路易·巴斯德的肯定后，哈夫金前往印度加尔各答地区开展大规模霍乱疫苗接种，并成功降低了霍乱发病率。直至1895年秋，他记录接种了约42,000人，但因为自己患上了疟疾而不得不返回英国修整。1896年3月，哈夫金重新回到加尔各答，再次接种了超过3万人。 与此同时，第三次鼠疫大流行爆发，哈夫金受到印度孟买省省长邀请，前往协助