马其顿帝国的亚历山大三世打败波斯王大流士三世，后远征印度河流域7年后返回巴比伦，他意图将巴比伦作为他帝国的都城，巴比伦一度拥有重新兴旺的希望。然而亚历山大英年早逝，巴比伦的希望随之而去。他的将领塞琉古在继业者战争后得到美索不达米亚，并以此为基础建立的塞琉古帝国，统治这个地区。塞琉古和其后继者致力于希腊化，其中于前305年建立希腊化城市塞琉西亚，并在前275年把巴比伦城的全部居民迁徙到塞琉西亚来取代巴比伦的政治、文化、经济地位，导致巴比伦逐渐荒芜。塞琉古帝国的殖民政策并没有使希腊化文明深耕，美索不达米亚文化仍