d DNA amplifier,bDNA)，bDNA再结合数个硷性磷酸酶探针(alkaline phosphatase probe)，而在二代及三代LEs则是先结合了前置讯号放大分子(preamplifier)，再结合bDNA，能得到更强的讯号放大，使灵敏度再提升，能侦测到更微量的目标物(从一代的10000提升至500)，但也因此可能有非专一性杂交反应产生(如bDNA、preamplifier、硷性磷酸酶探针和非靶序列杂交)，会提升背景值。可在设计前述三者时加入30%的异硷基:异胞嘧啶(isocytidin