1530年10月26日，大团长Philippe Villiers de L'Isle-Adam率领其手下在马尔他岛登陆，骑士团自此以马尔他骑士团之名闻名于世。查理五世又要求骑士团派兵驻守位于北非海岸的的黎波里，当时这座城市仍处于鄂图曼帝国的盟友，巴巴里海盗的控制范围以内，骑士团勉为其难答应皇帝的要求。马尔他岛在当时只是一个不毛的小岛，但很快地骑士团便将马尔他岛建设成一个海军基地。马尔他岛位于地中海中央，是连接东西地中海的关键战略要道，正值在1540年代和1550年代巴巴里海盗在西地中海的