「（台湾是台湾人的台湾）」的主张，成为台湾民族运动中最重要的中心思想。1921年（大正10年）加入台湾文化协会，协助推动「台湾议会设置请愿运动」。之后曾因违反《治安警察法》遭逮捕，与蒋渭水一同被判刑四个月，此事是便是治警事件。在狱中服刑时，他创作了《台湾自治歌》。1927年（昭和2年）文化协会分裂，蔡培火因不满协会有同志搞阶级斗争，加之与连温卿主张不合，因而脱离文化协会并与蒋渭水共组台湾民众党，但之后因蒋渭水大力支持工农运动，蔡即对蒋产生不满。1929年，他在台南举办「台湾白话字第一回研究会」，共举办三