苷酸被添加到这段引物上。之后连续地进行前导链的合成，此时在复制叉处的DNA处于解旋状态。与此不同的是，后随链的合成通过一个个的冈崎片段完成。首先，引发酶合成一段RNA引物；随后，与前导链的合成类似，由DNA聚合酶III与RNA引物结合并向后随链添加脱氧核糖核苷酸。当一个冈崎片段合成完毕时，复制停止。DNA聚合酶III的核心亚单元与β滑动夹分离[β滑动夹是DNA聚合酶III的具有持续合成能力的亚单元]。在DNA聚合酶I[它还对外切酶的活动进行校对]的作用下，RNA引物被移除，由DNA片段取而代之。随后，D