制酶剪切的时间，直接利用PCR产物与质体彼此有互补两端的特性，可快速黏合起来。
PCR中的Taq聚合酶.二十世纪八十年代初凯利·穆利斯在研究DNA合成在生物科技上的应用。穆利斯熟悉DNA寡核苷酸作为目标DNA探针、作为DNA测序引物、作为cDNA合成引物的技术。穆利斯在1983年开始尝试将两个引物与目标DNA片段杂交后加入DNA聚合酶，此方法可以实现指数级别的DNA复制，放大了两前体中间的DNA片段。但在每轮复制后需要将混合物加热到90°C以上使新合成的DNA熔解；两条DNA链分开