年10月31日路德公布了九十五条论纲，这吸引了许多学者和学生，维滕贝格的大学成为16世纪最重要的大学之一。它是一座现代的、人文主义为宗旨的大学。1518年菲利普·梅兰希通在这里教课。路德在维滕贝格的鹊门前焚烧教会法和教宗利奥十世解除他教籍的法令，与天主教教会决裂后维滕贝格成为宗教改革的起源地。维滕贝格成为当时欧洲最重要的新思想中心。腓特烈死后萨克森的首府被迁往托尔高，但是它依然是宗教改革的中心。在这里路德圣经出版。在这段时间里市内也建造了许多新建筑，来满足数量不断增长的居民的要求。1526年城墙又一