候，结合抗原与非结合抗原之间的分离至关重要。最初，为了沉淀和离心抗原－抗体反应所形成的免疫复合物，分离方法采用的是针对第一抗体的第二抗体。后来，在对T3和T4进行RIA测定时，哥伦比亚大学的Werner和Acebedo对RIA方法进行了扩展，采用活性炭悬浊液进行沉淀。1975年，Acebedo和Hayek等人在BBRC之上发表了人TSH的超微量RIA法。
优缺点.RIA技术极其敏感而又极其特异，但自动化机台的取得却较受限，且成本也不低。同时，RIA还需要特殊的预防措施，因为其要用到