简单，而且耗时也较短。TA克隆的关键在于载体和目的基因末端的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）的互补配对。载体和目的基因进行上述配对之后，用DNA连接酶即可实现它们之间的共价连接。
过程.
制造目的基因.一般用PCR来制造目的基因。PCR中所用的Taq酶无3'-5'端外切活性，容易在3'端额外加上一个腺嘌呤（A）。因而PCR产物两条链3'端一般都多出一个腺嘌呤。如果PCR引物的5'端含有鸟嘌呤（G）的话，能使得3'端加上腺嘌呤的机率最大化。值得注意的是，制造用于TA