嘉靖二年（1523年）癸未科进士。授潜山县知县，改婺源县。因政绩卓着，擢山西道监察御史，兼巡两淮盐政。巡按苏松，擢荆州府知府，改承天府知府。迁右副都御史，巡抚宁夏，保边境无虞。嘉靖二十八年（1549年），入京任工部尚书，历刑部、户部尚书。不久因忤权相严嵩，罢官家居十余载。穆宗登基后，恢复原官致仕。卒于家。着有《长白集》。李士翱任荆州府知府期间，对年轻的张居正有知遇之恩。后来张居正成为首辅。