时的标准这一理论的实验依据仍然太少。许多研究者认为，这一规则当时仅仅是一种猜想，直到大约60年后才得到承认在大多数情况下适用。当时人们认为碳原子只能组成六元环，而马尔科夫尼科夫在1879年、1889年分别合成了四元碳环和七元碳环，推翻了这一说法，为有机化学的发展做出了贡献。马尔科夫尼科夫还证明丁酸与异丁酸具有相同的化学式（CHO）和不同的结构与性质，即它们是异构体。