在水中，作为示踪染料来确定水流动的速率和方向。罗丹明染料能发出荧光，因此可以被荧光计轻易且便宜地侦测到。罗丹明染料也被广泛用于荧光显微镜，流式细胞仪，荧光相关光谱学及酶联免疫吸附试验等生物技术中。在生物学中，罗丹明B被用作染色用荧光染料，有时还会与金胺O一起使用，即金胺-罗丹明染色，来显示抗酸性生物，尤其是结核杆菌。当被作为激光器染料时，罗丹明B在大约610 nm处是可调的。它发出的荧光的量子产额在碱性乙醇中为0.65，在乙醇中为0.49， 1.0,而在94%乙醇中为0.68。荧光产额是被温度所决定