种族有人类、阿莎丽（Asari）、赛拉睿（Salarian）和突锐（Turian）。游戏中出现的其他外星种族包括爬虫人克洛根（Krogan）和德雷尔（Drell），身着防护服的奎利（Quarian）以及与其敌对的网络人工智能桀斯（Geth）等。在前作《质量效应》故事中，一支桀斯军队试图为收割者（Reaper）开辟门户，后者是一种由合成有机星舰组成的高度先进的机械种族，据信每过五万年消灭一切有机文明。从那时起，银河社区就生活在对另一种可能的入侵的恐惧之中。与此同时，一个名为塞伯鲁斯（Cerberus）的人类至