NA分子解开。此种酵素会依循其中一股核酸长链的方向（3'→5'或5'→3'）而移动。各类型的螺旋酶具有不同的结构与寡聚（oligomerization）性质，例如DnaB与相似的类型，是以环状排列的六聚体（hexamer）产生作用；而其他类型则可能是单体或二聚体。螺旋酶作用时是位于一个交叉位置（fork），最近的研究显示，此交叉位置是在螺旋酶主动促使下产生，也就是说，螺旋酶可以直接作用于完全相连的双股长链，而不只是作用在已经稍微打开的双股长链。