出现的戏码─由游戏主角「玛利欧」与反派角色「库巴」之间的对抗。剧情是在前回作品《超级玛利欧兄弟3》打败邪恶库巴军团后的玛利欧；抽空与他的兄弟路易吉以及碧姬公主一同来到拥有众多恐龙存在的上度假。但在度假过程里玛利欧发现碧姬公主突然失踪，之后透过一名叫做耀西的乌龟得知库巴再次率领他的军团卷土重来；除了绑走碧姬公主外也将牠的乌龟朋友都抓走。为了击败库巴；玛利欧与路易吉及耀西一同在耀西岛上进行了大历险。
游戏方式.在此款作品首次登场的新角色─拟人化乌龟耀西；于游戏里担任着可让玛利欧或路