属于夜行性动物，一般会在黄昏和夜间活动。日本树蛙有一种奇特的行为，就是利用温泉作繁殖栖地。雌性的日本树蛙在物色到适合的雄性后，牠们就会双双跳进温泉较浅水的地方，并开始进行交配。这以后，雌性就会把其卵直接产进温泉中，然后离开。在台湾北部的泰安温泉、东部的知本温泉均可找到牠们的足迹。
繁殖.日本树蛙的繁殖期大约是在每年的春夏两季，一般约为2月到10月，而繁殖期的长短则视乎其所在之地区。其卵直径约为1.2至1.4毫米，成体把卵产到水中后，这些卵会自己黏在水底的植物上，直到蝌蚪破卵而出。