乌鲁木齐铁路局哈密机务段投入运用。1985年1月，铁道部在哈密机务段随机抽样选取了两台机车。其中，东风4B型1006号机车负责进行牵引热工性能试验，而东风4B型1016号机车则用来做15万公里运行考核。1985年7月和9月，东风4B型1006号机车在北京环形铁道进行部级鉴定性能试验，试验项目包括机车牵引特性、电机温升、冷却性能、机车称重、柴油机起动及空转性能、牵引电动机电流及磁场削弱、制动性能等。由于试验期间北京当地气温未达到要求规定的40°C，因此该机车于1986年7月在新疆吐鲁番地区进行了第二次冷却性能