鼠麻醉后断颈处死后，在生物安全柜中使用无菌操作剖开其腹部，将小鼠胚胎取出，并将之与胎盘剥离。小鼠胚胎去掉头、肝后消毒，然后使用酶进行消化，得悬浮的单个细胞。将这些细胞种入组织培养皿中进行培养，即得原代培养的MEF细胞。体外培养的MEF细胞使用加有10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基培养即可。可以根据需要，加入1%青霉素-链霉素以减少细菌污染风险。MEF传代时，使用胰酶消化细胞，再以1:5的比例将细胞转入新的培养皿中。
应用.1963年，两名纽约大学医学部的研究人员，即乔治·托达