定将于2009年1月欧盟选举前生效。原定之时间表然而，2008年爱尔兰选民否决了《里斯本条约》。因此爱尔兰再度举行第二次投票。2009年10月2日，欧盟27个成员国之中唯一就《条约》举行全民公决的爱尔兰以超过89%的赞成票，通过了《里斯本条约》。捷克是最后一个签署该《条约》的欧盟国家。欧盟轮值主席弗雷德里克·赖因费尔特表示《里斯本条约》于2009年12月1日生效。比利时首相赫尔曼·范龙佩当选为第一任欧盟总统。来自英国的凯瑟琳·阿什顿于2009年11月19日，委任为首位「欧盟外交和安全政策高级代表