设车站27座，全程用时约61分钟，平均旅行速度约38公里每小时。1号线在新街口站与2号线换乘，在南京站与3号线换乘，在安德门站与10号线换乘，在南京南站与3号线、S1号线、S3号线换乘。线路经南京城区的南北轴线中央路、中山路、中山南路一路南下，连接南京站、鼓楼、新街口、南京南站、江宁大学城等重要片区。1号线配车45列，列车采用6辆A型车编组，设计最高速度80公里每小时。全天开行大交路（迈皋桥站↔中国药科大学站）和小交路（迈皋桥站↔河定桥站），大小交路以1:1的比例间隔发车。