普鲁士宫廷感觉受到了欺骗，反法情绪高涨。1806年7月25日，普鲁士与俄罗斯签订条约，第四次反法同盟形成。在1806年10月的耶拿-奥厄施塔特战役中，普鲁士军队由于武器落后、战术保守、动作迟缓，几乎全军覆没，连普军总司令不伦瑞克-沃尔芬比特尔公爵卡尔·威廉·斐迪南也光荣牺牲。10月27日，拿破仑进驻柏林，普鲁士王室逃亡东普鲁士，受到俄罗斯沙皇亚历山大一世的保护。1807年6月弗里德兰战役后，法军占领了整个普鲁士王国。7月9日普法签订提尔西特和约，普鲁士割让16万平方公里土地，包括普属波兰的绝大部分领土（