周昕年少时曾游京师，师事于太傅陈蕃，博览群书，后来被任命为丹阳太守。曹操起兵讨伐董卓时，他先后派了一万多人相助。而另一个割据诸侯袁术虽在淮南一带，周昕却厌恶他的淫虐，坚决不与他来往。袁绍曾经想乘孙坚进攻董卓时，欲指派周昕接掌他在豫州的势力，但被袁术击退。袁术派遣孙坚的妻弟吴景讨伐周昕但没能攻克，对此吴景宣布百姓有敢跟随周昕的话一律是死罪不赦，周昕听闻后说：“就算是我的不是，百姓们又有什么罪？”于是遣散了自己的兵马，返回了会稽。孙坚死后，其子孙策带兵渡江，进攻吴郡刘繇和会稽太守王朗等江东割据势力