九巴接办当时中华汽车及启德巴士公司经营的共18条九龙及新界路线。公司成立初期，以106辆小型单层巴士行走。当时的单层巴士设有头等软座及二等硬座两级。乘客如要下车，拉动车顶的粗绳子，敲响在车头司机旁的铜铃，司机便会在下一个巴士站停车。当时九巴车厂设于旺角水渠道（今始创中心之处）。
40年代.1941年12月25日，日军佔领香港。当时九巴共营运17条路线，车队数字更增至140辆。但后来因为被香港自动车运送会社征用所有车辆，所以巴士服务几乎被迫暂停，1942年10月1日，日军重整陆上交通