生物合成抑制剂类抗生素可以作用在不同阶段。
抑制氨基酰-tRNA合成.部分蛋白质生物合成抑制剂类抗生素能与氨基酰-tRNA合成酶特异性结合从而使该类酶失去催化氨基酸与tRNA结合的能力。例如，tRNA活化反应中吲哚霉素能与色氨酸竞争与色氨酸激活酶（色氨酸-tRNA合成酶）结合，抑制色氨酸-tRNA的形成。　
抑制肽链延伸.部分蛋白质生物合成抑制剂类抗生素这部分抗生素可主要分为四环素类抗生素、酰胺醇类抗生素、大环内酯类抗生素等。