他们都需要至少有以下一种血液因子：血红素，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。巧克力琼脂是很好的嗜血杆菌生长培养基，因为它使得这些因子更易获取。另外，嗜血杆菌在“葡萄球菌划线法”培养：葡萄球菌和嗜血杆菌在同一琼脂平板培养基中培养时，嗜血杆菌的菌落经常会在更大的葡萄球菌菌落旁形成“卫星菌落”，因为葡萄球菌的代谢产物中有嗜血杆菌生长所必需的血液因子。