持。作为报复，查理五世1527年再度派军侵入意大利，包围罗马。因为主帅夏尔三世·德·波旁意外死亡，西班牙军队在暴乱中焚掠罗马并掠走教宗，是为罗马之劫。此后一百年内，教宗常常受到西班牙国王的压力和巨大影响（西班牙正式在义大利称霸），使其无法批准英格兰国王亨利八世离弃查理的姨母阿拉贡的凯瑟琳，逼使亨利八世在1533年发动宗教改革。1529年法国在兰德里亚诺战役被西班牙再次击败，正式放弃米兰予西班牙；教宗更与查理签署巴塞隆那和约，结束并建立更和谐关系。西班牙正式成为天主教的保护者，而查理被教宗加冕为意大利国王