4Pi显微镜是改进轴向解析度的雷射扫描萤光显微镜。解析度由原本的500至700 奈米提高到100-150 奈米，几乎相当于降低5至7倍焦显微镜的球状焦点体积。
工作原理.透过同时将两个反向的物镜聚焦在同一个位置上可以提轴向的解析度。且调整通过物镜的两道光的光程差，使其最小。透过这个方法，在两物镜共同聚焦处的分子可以被相干地照亮，且可以收到相干地反射光或是穿透光，例如：侦测器可以接收到发射光地相干叠加。用于照明与侦测的体角 formula_1也增加并接近理想状态(样品同时照射和检测