在糖解作用中，2-磷酸甘油酸是3-磷酸甘油酸在磷酸甘油酸变位酶（Phosphoglycerate）的催化之下产生，2-磷酸甘油酸第2个碳上所接的磷酸根，是来自变位酶。这个反应需要镁离子或其他2价阳离子的参与。2-磷酸甘油酸也会在接下来的步骤中，受到烯醇化酶（enolase）催化生成一种称为磷酸烯醇式丙酮酸的高能磷酸分子，并释出水分子，这是糖解作用的第9个步骤，也是倒数第2个步骤。