法涉及叔丁醇与一氧化碳和Fenton试剂（过氧化氢和亚铁）的羧化。或者，可以通过真菌Galactomyces reessii微生物氧化β-甲基丁酸来制备HMB。
体液中的检测.已经使用核磁共振波谱学，液相色谱 - 质谱和气相色谱 - 质谱法在几种体液体中测量了天然产生的HMB的浓度。在健康成人的血浆和脑嵴液（CSF）中，HMB的平均摩尔浓度已经测定为4.0微摩尔（μM）。已经测量了健康男性21-23岁的肌肉液中HMB的平均浓度为7.0μM。在任何年龄的健康个体尿液中，排泄的HMB尿