TT也常常被用于蛋白质中双硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间双硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的双硫键，这类双硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，双硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
特点.由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。由于质子化的硫的亲核性较低，随着