将奥地利大公之位让与其弟匈牙利及波希米亚国王斐迪南一世，并立斐迪南为神圣罗马帝国帝位的继承人。但根据查理的遗嘱，斐迪南及其子裔丧失了继承为西班牙国王的权利。此举使斐迪南成为了奥地利哈布斯堡家族的首位君主。自此，奥地利哈布斯堡皇朝统治奥地利、匈牙利及波希米亚直至1740年，历10代君主，这二百多年亦是欧洲历史上战争最多的时期。
西班牙哈布斯堡王朝.1516年，查理五世继承西班牙（卡斯蒂利亚和阿拉贡）王位，是为卡洛斯一世，在1556年卡洛斯一世退位，将西班牙王位让与其子菲利浦二世，