恶的乌龟王酷霸王抢走了桃花公主，并关在他的城堡中。马力欧及他的弟弟路易吉必须穿梭在蘑菇王国中，战胜库巴的手下并救出公主。游戏使用和前作相同的游戏引擎，视觉风格相若。与初代不同的是，《超级玛利欧兄弟2》没有双人模式，取而代之的是可以分别用玛利欧或他的弟弟路易吉游玩游戏。游戏也新增了许多道具如毒蘑菇（宫本茂认为初代太简单而新增的陷阱）等，甚至出现会让玩家从3-1回到1-1、从8-1回到5-1的逆跳关画面。除此之外，玛利欧与路易吉的能力也不同，与玛利欧相比，路易吉能跳得比较高，但是急煞的时间比较长。Sect