E1中的TPP结合形成羟乙基TPP（Hydroxyethyl TPP），对丙酮酸来说是个氧化反应。这个步骤是所有步骤中最慢的一个，因此决定了整个反应的速率。B.接下来TPP会将羟乙基带入第二个步骤，TPP本身则留在E1中继续作用。羟乙基氧化之后变成乙酰基，并进入E2，与硫辛醯基上的其中一个硫原子结合，已经氧化过的硫辛醯基离胺酸与乙酰基结合，成为醯基硫辛醯基离胺酸（Acyl lipoyllysine）。C.第三个步骤在E2进行，醯基硫辛醯基离胺酸会与辅酶A进行反应，此反应会使硫辛醯基离胺酸还原，并释出