海上舰队悉数派出，去搜寻新的殖民地与海外贸易路线。1492年，伊莎贝拉女王资助了克里斯托弗·哥伦布的探险活动，希望他找到向西航往印度洋的路线，以替代在《阿尔卡苏瓦什条约》中规定由葡萄牙人保有的南非航线。哥伦布终究没有抵达亚洲，但他却意外地发现了一片新大陆——即美洲大陆。通往“亚洲大陆”（欧洲人称之为“印第安”）新航路的发现，让西班牙帝国与葡萄牙帝国在势力范围的划分上再起纠葛，最后在教宗亚历山大六世的介入调停下，两国于1494年签订了《托德西利亚斯条约》，这一条约为两国划定了欧洲之外的已知世界上的势力