上，这点是相当重要的，因为这意味着只有当反密码子配对（可以形成临时的碱基对）正在翻译为蛋白质的信使RNA的下一个密码子时，特定的胺基酸才会被结合到它上面。在正确的胺基酸与与之对应的tRNA之间形成特定共价键的任务是由胺酰-tRNA合成酶完成的。由于遗传密码存在简并性，一些不同的tRNA可以有相同的胺基酸连接到它们上面。
合成.胺酰-tRNA（也被称为载有胺基酰的tRNA）经两步被生成出来：胺基酸的激活与胺基酸的转移。第一步是胺基酸的腺苷酰化作用，会形成胺酰-腺苷一磷酸：胺基