至大约30℃，并被加入葡萄糖淀粉酶以将淀粉水解为葡萄糖。这一步被称为“糖化”。糖化发生于浆液倒入发酵罐后并贯穿接下来的“发酵”这一步。
发酵.通过微生物发酵的糖产生乙醇。微生物发酵将目前仅仅直接作用于糖。植物的两个主要组成部分，淀粉和纤维素，是由糖类组成，并且在原则上还可以发酵转换成糖。目前，只有糖（如蔗糖）和淀粉（如玉米）的部分可以符合经济效益的转换。在纤维素乙醇领域有很多研究活动，把植物的一个组成部分纤维素分解为糖，并随后转化为乙醇。