1503年大学的第一座建筑建成，1504年建造了一座奥斯定会的修道院，今天这座建筑被称为路德楼。1505年老卢卡斯·克拉纳赫与1508年马丁·路德相继来到维滕贝格。市内开始发展印书业，同时在经济上和思想上发展迅速。1517年10月31日路德公布了九十五条论纲，这吸引了许多学者和学生，维滕贝格的大学成为16世纪最重要的大学之一。它是一座现代的、人文主义为宗旨的大学。1518年菲利普·梅兰希通在这里教课。路德在维滕贝格的鹊门前焚烧教会法和教宗利奥十世解除他教籍的法令，与天主教教会决裂后维滕贝格成为宗教改