异。引物可以有一个单点突变或在5' 端加入一段新的序列。如果需要删除片段，从删除位点两段设计两对引物，靠近删除片段两个引物的为5' 端，加入删除目标片段后的序列并保持互补性，3' 端不变，进行OE-PCR，即可扩增出目的DNA。扩增后，根据情况可是使用凝胶电泳分离变异片段，并回收进行下一步实验。合成长度大于110的寡核苷酸链是非常困难的，所以重叠延伸PCR提供了很好的解决方法。按照上述DNA分子拼接的方法，最终产物只有无互补序列的DNA双链，从而达到合成长核苷酸链的目的。