迈尔斯（Desmond Miles）与同伴露西·斯蒂尔曼（Lucy Stillman）、肖恩‧海斯汀（Shuan Hastings）及丽贝卡‧克琳（Rebecca Crane）在逃离跨国制药公司Abstergo（现代圣殿骑士团）的追击后到达义大利城市蒙特里久尼。以已荒废的奥迪托雷庄园地下室作为新的藏身之所，戴斯蒙再次使用基因记忆追溯机器「Animus 2.0」，再度进入其刺客祖先伊吉欧·奥迪托雷（Ezio Auditore de Firenze）的记忆。1499年12月文艺复兴时期，40岁的伊吉欧于放弃