其本身并不具有GTP酶的活性。在真核翻译起始过程中，当48S前起始复合物结合mRNA，并且使起始Met-tRNA与起始密码子AUG正确配对后，eIF5激活eIF2的GTP酶活性，使得eIF2上结合的GTP被水解为GDP；之后GDP结合的eIF2从40S核糖体亚基上解离。由于eIF2以及其他真核起始因子的解离之后60S核糖体亚基才能与40S亚基结合，因此eIF5对于形成具有肽基转移活性的80S核糖体十分关键。eIF5还参与与其他多个真核起始因子的相互作用。
结构.eIF5含有N端