应或甲酰胺衍生物与三氯氧磷作用失水都可生成异腈，甲酰胺衍生物可由甲酸与胺缩合制得。Hofmann异腈合成即：伯胺与氢氧化钾和氯仿反应，生成具腐臭气味的异腈，以鉴定伯胺的存在：异腈也可通过有机锂化合物与恶唑和的反应制取：苯并恶唑的2-位质子被正丁基锂脱去，生成的锂代产物与邻位异氰基取代的醇锂构成平衡，后者再与亲电试剂反应，合成异腈的衍生物。若上例中的亲电试剂为酰氯，则产物是图中的邻氰基苯酯，具有温和的樱桃气味。
反应.异腈对强碱稳定，制备反应也常为强碱性的介质，但对酸敏感