性成爲单链，随后用放射性同位素（通常用P）、荧光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成爲探针。P通常被掺入组成DNA的四种核苷酸之一的磷酸基团中，而萤光染料和酶与核酸序列以共价键相连。当将探针与样品杂交时，探针和与其互补的核酸（DNA或RNA）序列通过氢键紧密相连，随后，未被杂交的多余探针被洗去。最后，根据探针的种类，可进行放射自显影、荧光显微镜、酶联放大等方法来判断样品中是否含有，或者何位置含有被测序列（即与探针互补的序列）。