蒲生定秀（永正五年1508年—天正七年1579年4月22日）日本战国时代武将，近江国日野城城主。通称藤十郎，官职下野守、左兵卫大夫。父亲是蒲生高乡，妻子是马渊山城守的女儿。
生平.永正五年（1508年）蒲生定秀出生。之后和父亲蒲生高乡一同仕任南近江的六角氏，而蒲生高乡则把蒲生氏分为两家，本家家督由定秀的兄弟蒲生秀纪继承。高乡和定秀两父子得到六角定赖的信任，后来定秀和六角氏重臣马渊氏的女儿结婚，蒲生氏在六角氏得到稳固的地位。大永二年（1522年）音羽城的蒲生秀纪遭遇攻击，大永三年