列斯威及霍尔斯坦两省的管辖权的区分问题很快就引发了冲突。1866年，普奥战争（亦可称为七周战争）爆发，普鲁士联合了皮德蒙-萨丁尼亚王国和不少德国北方的各邦，向奥地利帝国宣战。奥地利领导的联盟在战败后迅速崩溃，而其中有几个邦（汉诺威王国、黑森大公国、拿骚公国和法兰克福自由市）则为普鲁士所占。本来是争议地区的什列斯威及霍尔斯坦两省，现在全都落入普鲁士的控制当中。在获得这些土地之后，普鲁士王国便成功将本土及莱因兰和威斯特伐利亚等地连成一气。也正因如此，普鲁士的领土扩张到有史以来最大的区域，并拥有三分之二左右的