行政区划重划，日本政府认为五间厝庄发展已经较土库庄迅速，将改名为虎尾庄的五间厝庄和土库庄合同周边各庄建置台南州虎尾郡，虎尾自次取代土库成为周边政经、文化中心。虎尾郡役所设于今日虎尾镇林森路与中山路的路口。1928年，政府成立技职学校虎尾农业补习学校（今虎尾农工）。1933年，虎尾庄升格为虎尾街，人口已有2万余人。1936年，日本在虎尾设置虎尾飞行基地，曾为神风特攻队基地。同年虎尾首间戏院「虎尾座」开设。1939年成立虎尾家政女学校，次年更成立台南州立虎尾高等女学校（后来的省立虎尾女中，1981年併入虎尾高中