原支援德川军，但是信盛率先撤退使平手汎秀阵亡，战后遭信长斥责；后来镇压伊势长岛的农民起义也失利。同僚水野信元因三方原作战不力被免职，信长思及信盛过往功劳非但未处罚反而给他增加封地，表示对信盛的器重，但是在后来的石山本愿寺包围战中，佐久间信盛担任总指挥率领尾张、三河、大和、河内、和泉、纪伊六国的兵力，用了四年仍无法攻克，最后还需劳烦信长亲自出马游说方才投降。这一连串的事蹟让信长认为信盛不复当年勇，不断辜负自己的期望已无利用价值，埋下丢弃信盛的想法。1580年8月，信长以十九条罪状，把信盛及信荣父子两人流放