葡萄糖6-磷酸在磷酸葡萄糖异构酶（英语：Phosphoglucose isomerase）的催化之下所形成；之后又会经由磷酸果糖激酶（英语：Phosphofructokinase）的催化，以及消耗一个ATP，生成果糖1,6-双磷酸，是糖解作用中的第二次磷酸化作用。