剧情.游戏背景与电影剧情併行，蜘蛛人正试图寻找杀害班叔叔（Uncle Ben）的兇手。游戏中将有蜘蛛人系列中各种反派角色登场，并包含多名新旧角色。在游戏中登场的知名反派角色包括猎人克拉文（Kraven the Hunter）、绿恶魔（Green Goblin）、电光人（Electro）、金霸王（Kingpin）、黑猫（Black Cat）、血蜘蛛（Carnage）和成为震动人（Shocker）之前的贺曼·舒兹（Herman Shultz）。
游戏内容.《蜘