（1525年）秀纪在镰挂城被谋杀（其他说法是毒杀）。不久后，蒲生氏的居城就在天文年间从音羽城转去中野城。定秀成为定赖的家臣期间，享禄三年（1530年）的京都出战和享禄四年（1531年）的浅井亮政之战的主要合战定秀大多参与。天文十八年（1549年）在摄津国和三好长庆合战。天文二十一年（1552年）定赖病逝，由长子六角义贤继承家督。在义贤统治时期，定秀在伊势攻略方面表现活跃。永禄元年（1558年）定秀出家。永禄二年（1559年）攻击浅井久政的佐和山城。定秀不但在战场的活跃表现，在婚姻政策上也为自己的氏族