定相溶剂种类和配比。通常，保留因子在0.2至0.3之间较为合适，平衡了分离效率和溶剂消耗量。流动相的流出速率影响分离的效果。较快的速率能缩短实验时间，并且减少扩散，因而使得分离效果更好。然而流速也不是越快越好，因为固定相和流动相之间平衡需要时间。范第姆特方程对影响分离效果几种主要因素进行了总结，根据此方程，流速当有一最优值。简单的柱色谱利用重力驱动洗脱，调节旋钮减慢流速，或者在柱顶加上溶剂球增加压力加快流速。需要更快的流速时，可使柱顶与泵或压缩气体（例如空气、氮、氩）相通，在液面以上加压，这种方法称为快