共有六位喜剧演员担任主持：史蒂夫·艾伦、杰克·帕尔、约翰尼·卡森、杰伊·莱诺、柯南·奥布莱恩和吉米·法伦。该节目也曾有过数位嘉宾客串主持，包括史蒂夫·艾伦时期的厄尼·科瓦奇，以及约翰尼·卡森时期的乔伊·毕晓普、大卫·莱特曼、琼·里弗斯、乔治·卢卡斯、大卫·布伦纳和杰·雷诺，但自卡森离开以后，主持人已经不再使用潜在竞争对手担任客串主持，而是选择重播之前节目。《今夜秀》是世界上播出时间最久的谈话节目，也是美国播出时间最久、播出档期频繁的娱乐节目。它是全美广播公司播出时间第三长的节目，仅次于新闻和谈话节目《今日》