。此酵素在合成RNA的过程中，需要DNA模板与镁离子（Mg）作为辅因子。牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）及精胺（spermidine）对此酵素具促进效果。与细菌的RNA聚合酶的差异之一，在于T7RNA聚合酶不受抗生素利福平（rifampicin）抑制。