每年准许4000到5000位学者入馆研究（需有大学或研究机构证明，且研究内容水平不得低于研究生论文水平），但只有教宗可以把藏书带出图书馆，而且阅览室严禁携带食物和笔，连矿泉水也不得携入。目前图书馆藏书160万册，其中7.5万册是手抄本。珍贵馆藏包括《梵蒂冈抄本》（公元350年的圣经，已知年代最久的圣经），还有一部用1.5公斤黄金装饰书页的《圣经》。梵蒂冈图书馆藏书包括一些中国古代图书。中华书局出版过《梵蒂冈图书馆所藏汉籍目录》（ISBN 978-7-101-05039-4）。
历史.