1842年由吉田松阴的叔父所开设及命名，吉田松阴在少年时也曾在此接受玉木文之进的指导；在玉木文之进被外派担任代官后，松下村塾由吉田松阴的另一位叔父久保五郎左卫门接手负责。当时的不论学生的身分，武士或是平名都可以在此上课。吉田松阴在1854年在下田登上美军军舰企图偷渡前往美国，在遭到美军拒绝并向下田的奉行自首后被送回萩的野山狱，1855年出狱改幽禁于自家内，1857年自叔父继承了位于自家土地内的松下村塾，并开始在塾内上课；此时期曾在松下村塾接受吉田松阴指导的学生包括：久坂玄瑞、高杉晋作、伊藤博文、山县有朋