长版本，于1967年首飞后交付给东北航空投入服务。波音727投产期间，是美国国内航线的主力机种，以及中短程国际航线机种。波音727亦设有货运型和客货转换型。最后一架727在1984年交付，总产量为1,832架，为当时产量最高的民航机种，此一纪录被波音737于1990年代初打破。至2017年7月，全球仍有2架波音727-100和55架波音727-200营运中。受到民航噪音法规影响，部分波音727需装上减音装置才能继续营运，但此装置会增加耗油量。2019年1月14日，随着伊朗阿塞曼航空的最后一架727-