RNA-CV-I）复合体，不易脱去，染剂也就固定下来了。使用酒精（95%）脱色，试剂具脂溶剂（Lipid Solvent）和蛋白脱水剂（Protein Dehydrating Agent）之双重功能。此步骤对革兰氏阳性细菌无效，因为其细胞壁上厚厚的细胞壁（成分为肽聚醣）层次多，交联致密，故遇脱水时网孔缩小，再加上不含类脂，使得乙醇不会溶出缝隙，因此阻隔了结晶紫-碘复合体的外渗，仍然呈紫色只能留在细菌体内。革兰氏阴性菌细胞壁层薄，外膜类脂含量高、肽聚糖层薄和交联度差，在遇脱色剂时，以类脂爲主的外膜迅速溶解