称Pol III）是真核细胞中通过转录DNA来合成核糖体5S rRNA、tRNA等小RNA的酶。由RNA Pol III转录的基因属于“管家”基因。因为这些基因需要在所有类型的细胞和大多数环境条件中表达，所以Pol III转录的调控主要与细胞增殖和细胞周期关联，需要的调控蛋白少于RNA聚合酶II。然而，在压力下，蛋白质会 MAF1 抑制Pol III的活性。 雷帕霉素 是另一个Pol III抑制剂。
转录.任何聚合酶的转录过程都会涉及三个主要阶段：
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