3α(或20β)-羟基类固醇脱氢酶（，EC 1.1.1.53）是一种以NAD或NADP为受体、作用于供体CH-OH基团上的氧化还原酶。这种酶能催化以下酶促反应：3α(或20β)-羟基类固醇脱氢酶主要参与胆汁酸的生物合成以及C21类固醇激素的代谢过程。孕烷和雄烷类固醇的3α-羟基或20β-羟基可以作为供体。