秀赖，终究是德川政权的不安定因素，于是家康费尽苦心方硬借方广寺钟铭事件挑起大坂之战。在庆长19年（1614年）大坂冬之阵中，佐伯惟定在高虎麾下率领士队十骑、卒队四十人出阵，11月26日与藤堂高刑合作担任右先锋。大坂夏之阵时担任游击军的指挥，在右先锋被长宗我部盛亲部队击溃后，与藤堂高吉共同担任左先锋，战后因功增加五百石，总共领有四千五百石的知行领位列藤堂藩的重臣之一。元和四年(1618年)，佐伯惟定逝世，享年五十岁，法名宗忠功月大禅定门。家禄由其子惟重继承，此后佐伯家世代担任藤堂家臣直到明治时代。