间关系险恶，传闻深芳野在土岐赖艺赐给道三之前已经怀有身孕，义龙一直怀疑自己是否为土岐氏一脉，正德寺会面后斋藤道三的话更加深了二人的矛盾。道三晚年偏爱次子和三子，厌恶“愚蠢”的义龙。义龙遂决定先下手为强，发动兵变夺取家督。1555年，义龙以病重为由派叔叔长井道利召弟弟孙四郎、喜平次到稻叶山城，趁二人酒醉时派日根野弘就将他们杀害。义龙又集结17,500人的大军，以土岐氏正嫡的名义向道三宣战，而道三则在城下町放火，渡过长良川后在大桑城集结2500人与义龙对峙。双方对峙一年后，1556年，道三写下遗书，将美浓一