十六年起补广东道御史，巡按直隶及漕运，四十八年提督苏松等处学政。天启二年（1622年）升大理寺右寺丞，三年升本寺右少卿，五年升为右佥都御史巡抚应天。六年升南京兵部右侍郎，七年改南京兵部左侍郎。天启年间，任应天巡抚，依附阉党，为魏忠贤立生祠于苏州虎丘。天启六年（1626年）毛一鹭勾结织造太监李实构陷东林党人周顺昌等，激起苏州民愤。魏忠贤派锦衣卫到苏州逮捕周顺昌时，苏州人民激于义愤，数万人云集衙门，痛打锦衣卫，毛一鹭躲到厕所而侥倖逃脱，事后捕杀了颜佩韦等五抗暴领袖。天启七年（1627年）七月，毛一鹭因病辞官