利用来自腺苷三磷酸或烟醯胺腺嘌呤二核苷酸的能量，将断裂的脱氧核醣核酸长链重新接合。连接酶对于脱氧核醣核酸复制过程中产生的延迟股而言尤其重要，这些位于复制叉上的短小片段，可在此酵素作用下黏合成为脱氧核醣核酸模板的完整复制品。此外连接酶也参与了DNA修复与遗传重组作用。
拓扑异构酶与螺旋酶.拓扑异构酶是一种同时具有核酸酶与连接酶效用的酵素，可改变脱氧核醣核酸的超螺旋程度。其中有些是先使脱氧核醣核酸双螺旋的其中一股切开以形成缺口，让另一股能穿过此缺口，进而减低超螺旋程度，最后再将切开的部