Den ride-hailing app gick till domstol efter Transport för London (TfL) sade att förare bör behöva bevisa sin förmåga att kommunicera på engelska.
Uber hävdade att den läs- och skrivstandard som krävs för testet var för hög.
Den amerikanska firman sade att testet var "orättvist och oproportionerligt" och att det skulle överklaga domstolens beslut.
Domen kommer också att gälla för alla minicab-företag i London.
"TfL har rätt att kräva privatuthyrning förare för att visa att engelska språket uppfyller kraven", sade domare John Mitting som han avvisade Ubers påstående.
Tom de la Mare QC, för Uber och förarna, sade till domaren att språkkravet skulle resultera i 70.000 sökande underlåter att få körkort över tre år.
Förslagen skulle ha en oproportionerlig inverkan på förare från länder där engelska inte var allmänt talat och ge upphov till "indirekt diskriminering på grund av ras och nationalitet".
TfL hävdade att kraven var nödvändiga för att garantera passagerarnas säkerhet och höja standarderna.
Sadiq Khan, Londons borgmästare, sade: " Förarna kan tala engelska och förstå information från passagerare och licenskrav är en viktig del av att se till att passagerarna får den höga service de behöver och förtjänar.
"TfL kommer naturligtvis att titta närmare på Högsta domstolens dom för att se till att all vår politik är helt förenlig."
Sam Dumitriu, projektchef vid Adam Smith Institute, en konservativ tankesmedja, kritiserade domen.
"Dessa tester är inte bara dyra utan alltför stora, och kommer att göra lite för att förbättra allmänhetens säkerhet. Vi har redan sett London taxiförare i 20 år eller mer kämpar med essäfrågor om Aurora Borealis och snowboard, behöver vi dem att ha läst Shakespeare också?" sade han.
"Det finns uppenbarligen inget allmänt intresse här, bara intressena hos den högljudda Black Cab Lobby. Sadiq Khan bör lyssna på förare och skrota dem."
Uber sade att domaren uttalade sig till sin fördel på tre andra punkter, däribland att inte behöva öppna ett brittiskt samtalscentrum.
Uber har förlorat sitt försök att förhindra att dess förare tvingas att göra engelska språktester.