Filmen, som tydligen spelades in i december, visar 15 flickor i svarta dräkter som identifierar sig.
Flickorna togs från en skola i staden Chibok av medlemmar i den islamistiska gruppen Boko Haram.
Släktingar till flickorna marscherade i huvudstaden, Abuja, på torsdag, den andra årsdagen av deras bortförande.
Kidnappningen av 276 flickor utlöste den globala sociala media kampanjen #BringBackOurGirls, som involverar den amerikanska första damen Michelle Obama och en mängd kändisar.
Men trots deras ansträngningar, de flesta av flickorna saknas fortfarande.
Filmen av flickorna är den första att ses sedan maj 2014, då omkring 100 av dem visades i en video.
Det sändes efter att ha överlämnats till den nigerianska regeringen.
BBC: s Martin Patience i Abuja säger hundratals föräldrar marscherar på torsdag skyller den tidigare regeringen för att inte göra något när bortförandet ägde rum, liksom den nuvarande administrationen för att inte ägna tillräckligt med resurser till sökandet.
Boko Harams militanter attackerade regeringens internatskola i Borno staten den 14 april 2014, att gripa flickorna som hade gått dit för att ta examen.
Kort därefter släppte de en video av dem och krävde ett fångutbyte.
Videon är för kort för alla meningsfulla kommentarer om flickornas hälsotillstånd, men de 15 som verkade såg väl mätta och verkar inte visa några tecken på oro. Men deras fångvaktare kan ha valt ut dem bland de 219 flickor som fortfarande är i fångenskap särskilt för att ge detta intryck.
Det har alltid varit tydligt att Boko Haram betraktar Chibok-flickorna som ett högt värde och ett potentiellt förhandlingsverktyg. Tidigare har de visat sin önskan att byta ut några av flickorna mot några av deras befälhavare som arresterats av regeringen.
Nyligen har de militära myndigheterna i Nigeria krävt seger över rebellerna och pekat på förstörelsen av olika militanta läger spridda över gruppens fäste i nordöstra Nigeria och dödandet av många medlemmar i gruppen.
Men videon visar att trots dessa framgångar har gruppen kunnat hålla säkra platser där de kan gömma flickorna, även om det bara är i små grupper.
Dessa säkra tillflyktsorter kan ge många av gruppens ledare en miljö där de kan ligga lågt och omgruppera sig vid ett senare tillfälle, som de gjorde efter den för tidiga seger som den nigerianska regeringen förklarade mot Boko Haram 2009.
Videon har dock väckt andra frågor om hur samtalen går över flickornas release - vad är motivet till att släppa videon till ett mediehus mitt i förhandlingar som har förtroende för alla inblandade?
Boko Harams ledare, Abubakar Shekau, sade att flickorna hade konverterat till islam och han hotade att tvinga dem till äktenskap med sina kämpar eller sälja dem till slaveri.
Allteftersom månaderna gick lyckades omkring 57 elever fly, men minst 219 saknas fortfarande.
Den senaste videon, som tydligen spelades in på juldagen 2015, visar flickorna som vädjar till den nigerianska regeringen att samarbeta med militanter när de släpps.
De sa att de behandlades väl men ville vara med sina familjer.
Två andra mammor, Rifkatu Ayuba och Mary Ishaya, sade också att de hade erkänt sina döttrar i videon medan en tredje mor, Yana Galang, identifierade fem av de saknade flickorna, rapporterar Reuters nyhetsbyrå.
De visades videon vid en visning som anordnades av lokala tjänstemän i Maiduguri, huvudstaden i Borno.
"De var definitivt våra döttrar... allt vi vill är att regeringen att ta tillbaka våra flickor", sade Mrs Galang.
Amnesty International säger att cirka 2 000 barn har kidnappats av Boko Haram sedan 2014. Många används som sexslavar, kämpar och till och med självmordsbombare.
Även om militanterna fortfarande anfaller, har den nigerianska armén gjort framsteg i sin kamp mot dem under det senaste året, tillägger vår korrespondent.
Den har återtagit städer och byar som kontrolleras av Boko Haram och har också befriat hundratals kvinnor och barn som hålls fångna.
"Boko Haram tog mina barn"
Stad delad av Boko Haram arv
På patrull mot Boko Haram
Vilka är Boko Haram?
Vänner och familjemedlemmar till nigerianska skolflickor kidnappade för två år sedan säger att de har identifierat några av dem i en ny video som erhållits av CNN.