Vägspärrarna har orsakat omfattande störningar i alla brasilianska stater.
Senaten ska rösta om åtalet på onsdag. En enkel majoritet till förmån för en fullständig rättegång kommer att avstänga Martine Rousseff i upp till 180 dagar.
Regeringen har bett Högsta domstolen att skjuta upp åtalsförfarandet för påstådda oegentligheter.
Domstolen har dock avvisat liknande försök.
Protestörer blockerade de största tillfartsvägarna till Brasiliens största stad, Sao Paulo, vilket orsakade enorma trafikstockningar under morgonen rusningstid.
Protesterna spred sig till städer och städer över hela landet.
Polisen sa att det fanns barrikader på 14 motorvägar i Brasiliens 26 delstater och i Federal District, hem till huvudstaden Brasilia.
I Rio de Janeiro, som kommer att vara värd för OS i augusti och september, satte demonstranter upp barrikader på en stor väg som förbinder staden med staten Sao Paulo.
I den nordöstra staden Natal körde inte bussar på morgonen och vägen bredvid huvuduniversitetet var blockerad. Lektionerna avbröts.
Protesterna mot lagöverträdelse organiserades av en paraplyorganisation, Popular Brazil Front, som lovade att fortsätta med sin direkta aktionstaktik.
"Vi kommer att kämpa överallt för att försvara demokratin. Brasilien säger nej till kuppen!" Det stod i ett Facebook-meddelande.
President Rousseff har lovat att fortsätta kämpa till slutet mot sitt åtal.
På tisdagen överraskade den tillförordnade talmannen i kongressens lägre hus, Waldir Maranhao, landet när han tillkännagav att han hade avbrutit omröstningen som tillät åtalsprocessen mot henne att fortsätta.
Han sa att omröstningen den 17 april i underhuset hade brutit mot kongressens regler. Ledamöterna hade med överväldigande majoritet röstat för den process för lagföring som pågår.
Men inom mindre än 24 timmar hade han återkallat sitt beslut att upphäva omröstningen. Han gav ingen anledning till sin u-sväng.
Om senaten röstar på onsdag och Rousseff förlorar det, kommer hon att ersättas av vice ordförande Michel Temer medan rättegången varar.
Hon säger att Temer är en förrädare som deltar i en politisk kupp mot sin demokratiskt valda regering.
Presidenten anklagas för att olagligt manipulera ekonomin för att dölja ett växande offentligt underskott inför sitt omval 2014, vilket hon förnekar.
Stödda av Brasiliens president Dilma Rousseff har satt upp brinnande barrikader och blockerade vägar över hela landet i protest mot åtgärder för att åtala henne.