Ruth Davidson sa att folk var arga på SNP för att ha satt "sin egen smala politiska intressen framför dem i det större landet".
Men SNP sa att ms Davidson borde be om ursäkt för det "mess" hennes parti har skapat med Brexit.
På fredag inledde Nicola Sturgeon ett "nytt samtal" om självständighet.
I ett tal i Stirling uppmanade den förste ministern Skottland att "kontrollera sitt eget öde".
Hon sade att hennes partis nya "lyssnande övning" i frågan skulle söka åsikter från väljarna i Skottland med hjälp av en enkät och möten över hela landet.
Anna Davidson sade i ett tal på lördag till det skotska konservativa partiets konvent i Perth: "Nicola Sturgeon sade i går att hon vill lyssna på människor som röstade nej i hopp om att möta deras oro. Låt mig berätta för henne hur många av oss känner.
"Vi ser inte tillbaka på folkomröstningen om självständighet med mycket nostalgi. Det var inte "civic" eller "joyous" som SNP har hävdat.
"I stället minns vi den splittring den orsakade, vi minns den smärta som många kände, och vi minns rädslan för att vårt land var på väg att splittras.
Hon fortsatte: " Så om den förste ministern vill veta hur tusentals skottar i hela landet känner det - kan jag ge det till henne just nu.
"Det är ilska mot en SNP-regering som både har brutit sitt ord och beslutat att sätta sina egna snäva politiska intressen framför det större landets.
"Och det är frustration att vi har en nationalistisk förvaltning som agerar som ett hinder för Skottlands framsteg.
"I stället för en riktig regering som använder nya och befintliga befogenheter för att driva landet framåt har vi i stället en nationalistisk administration som släpar Skottland bakåt - så att separatismens ledande tyngd kan hota våra ambitioner och förhoppningar."
SNP beskrev Anna Davidsons tal som "arrogant hyckleri".
En talesman sade: "Det var Ruth Davidson som lovade att "Nej betyder att vi stannar" i EU och hon borde be om ursäkt för den röra som hennes parti nu har skapat med Brexit.
"Människor i Skottland minns mycket väl de löften som den Tory-ledda kampanjen No gjorde i upptakten till 2014 års folkomröstning - om varvsindustrin, om EU, om decentralisering och mer - och de har sett hur dessa löften och löften har brutits som en efter en.
"Skottlandets ansikten släpas ut ur EU mot vår vilja av ett alltmer högervänligt, reaktionärt Tory-parti."
Han tillade: "Det är bara rätt att den skotska regeringen undersöker alla alternativ för att skydda Skottlands intressen och upprätthålla vår plats i EU - inklusive möjligheten till en andra folkomröstning om oberoende."
Som svar på Anna Davidsons kommentarer sade Scottish Labour att Tories var "mer besatt av självständighet än SNP".
En talesman tillade: " Inför det skotska parlamentets återkomst denna vecka skisserade Kezia Dugdale planer på att använda det skotska parlamentets nya befogenheter för att investera i utbildning, stoppa nedskärningarna i vår NHS, skapa fler arbetstillfällen och förbjuda fracking medan de andra partiledarna fortfarande tjatar om självständighet.
"Arbetet är det enda partiet som talar om Skottlands framtid, snarare än om det förflutnas argument."
Under lördagen hölls Europavänliga möten i städer över hela Storbritannien.
Mer än 100 demonstranter samlades i det skotska parlamentet i Edinburgh för att uppmana till starkare band med Europeiska unionen efter Brexit-omröstningen.
Organisatörerna sa att alla de viktigaste politiska partierna utom de konservativa skickade representanter.
Den skotska konservativa ledaren har anklagat den skotska regeringen för att låta "separatismens ledarvikt" dra Skottland bakåt.