Personalen vid Scottish Sea Life Fristaden i Oban sade att paret var "officiellt gifta" vid en ceremoni 2011 efter att ha blivit oskiljaktiga.
De sa att Isla, som först kom till centret 2008, dog i veckan 14 år efter att ha haft magproblem.
Lewis, 11 år, övervakas nu för att se till att han klarar förlusten.
Aquarist Farrah Minchin, som arbetar med djur bil laget, sade Isla förlust var en "massiv slag" för laget.
Hon sade: "Lewis och Isla kom hit tillsammans till centret. Vanligtvis är uttrar ganska ensamma, de skulle normalt inte par-up för livet, men när de kom blev de mycket snabbt oskiljaktiga.
"De putsade varandra, letade efter varandra och låg med varandra."
Isla togs till veterinären tidigare i veckan efter att djurvårdsteamet märkte att hon inte åt ordentligt och trodde att något kunde vara fel med hennes tänder eller mun.
Men vid närmare inspektion upptäcktes att hon hade många hälsoproblem, däribland peritonit och en skugga på lungan.
Vets bestämde sig för att inte operera på grund av sin ålder och beslutet fattades att avsluta hennes liv.
Ms Minchin sa att efter Islas död på onsdag hade Lewis letat efter sin partner.
Hon sade: " Han var med förlust. Han väntade sig att hon skulle komma tillbaka och fortsätta leta efter henne.
"Han simmar fortfarande på sin egen sida av poolen och inte på Isla's, men han verkar vänja sig vid saker."
På grund av hans ålder och en utters rykte för att vara aggressiv, djurhantering laget tror att det är osannolikt att Lewis kommer att paras med en annan utter.
Ms Minchin sa dock att om rätt "doktorlig kvinna" dök upp kunde Lewis få en ny vän.
Uttrar kan leva upp till 21 år i fångenskap, men mer allmänt överleva i omkring nio år i vilt tillstånd.
En North American River Otter vid namn Lewis sägs sörja sin fru Islas död.