De flesta av de smittade var utländska byggnadsarbetare, och alla bodde eller arbetade inom samma region i landet, sade hälsovårdsministeriet.
Inga av dem var kända för att ha rest till Zika-drabbade områden nyligen. 34 personer har återhämtat sig, men sju ligger fortfarande på sjukhus.
Zika har i allmänhet lindriga effekter men har kopplats till allvarliga fosterskador.
Det misstänks orsaka ett tillstånd som kallas mikrocefali, en deformation i vilken barn föds med små huvuden.
Zika, som sprids av myggor men också kan överföras sexuellt, förklarades vara en global folkhälsokris av Världshälsoorganisationen i februari.
Vad du behöver veta
Mygghotet
Epidemiska "kommer att sluta om tre år"
Singapore förklarade sitt första importerade Zika-fall i maj, en 48-årig lokal som hade rest till Brasilien, där utbrottet började.
På lördagen meddelade den att en 37-årig malaysisk kvinna hade ådragit sig viruset lokalt. Hon är det enda bekräftade kvinnliga fallet hittills.
Trettiosex av de 41 ärenden som meddelades på söndagen var utländska arbetstagare som arbetade på samma byggarbetsplats.
Arbetet på platsen har stoppats efter det att hushållning konstaterats vara "otillfredsställande med potentiella häckningsmiljöer som är gynnsamma för myggförädling".
Ministeriet sade i ett uttalande att det inte kunde "utesluta ytterligare gemenskapsöverföring, eftersom fler av dem testade positiva också bor eller arbetar i andra delar av Singapore".
"Vi förväntar oss att identifiera fler positiva fall", tillade den.
Singapore har bekräftat 41 fall av zikaviruset som överfördes lokalt.