Presidenten bör inte vara "rädd" att välja sin arvinge och hans ord skulle vara "final", sade Grace Mugabe.
Mugabe är världens äldsta härskare, och hans Zanu-PF-parti har nominerat honom till omval nästa år.
Men rivaliserande fraktioner har kämpat för att stärka sin ställning som oro för hans hälsa berg.
Robert Mugabe ser alltmer bräcklig ut och har varit på tre medicinska resor till Singapore i år.
Men hans medhjälpare har dämpat oron för hans hälsa och sagt att han bara åker till Singapore för att få specialbehandling med ögonen.
"President, var inte rädd. Berätta vem som är ditt val, vilken häst vi ska backa," Mugabe berättade ett möte av Zanu-PF: s kvinnoflygel, AFP nyhetsbyrå rapporterar.
"Om du berättar hästen tillbaka, kommer vi att stiga i vårt antal och öppet stödja den hästen. Varför skulle vår häst döljas?" hon tillade, i ett tal som växlade mellan engelska och lokala språket Shona.
Robert Mugabe var närvarande när hans 52-åriga hustru yttrade sig, men svarade inte.
Hon har blivit ryktad som en potentiell efterträdare, liksom vice ordförande Emmerson Mnangagwa.
Mugabe har regerat över Zimbabwe sedan självständigheten 1980 och förväntas besegra sin största rival, Morgan Tsvangirai, i nästa års opinionsundersökning.
Oppositionen säger att valkommissionen är partisk och kommer att rigga omröstningen till Mugabes fördel.
Förra året sade Zanu-PF ungdomsledare Kudzai Chipanga att "det var skrivet i Bibeln att han [Mr Mugabe] inte bara kommer att styra landet utan skulle dö i ämbetet".
I februari sade Mugabe att hennes man var så populär att om han dog kunde han springa som ett lik och ändå vinna i ett val.
Zimbabwes president Robert Mugabe, 93, har uppmanats av sin hustru att utse sin efterträdare för att få slut på splittringar om vem nästa ledare kommer att bli.