Barrow Borough Councils tillståndskommitté ägnade tre dagar åt David Gills begäran.
Men rådet vägrade att godkänna förlängningen efter det att inspektörerna hade uttryckt oro över "omoderna metoder".
Karen Brewer, zoons verkställande direktör, sade att stora framsteg hade gjorts för att förbättra djurparken och behålla den "unik dragningskraft" som den är.
Den som tar över driften av djurparken måste ansöka om ett nytt körkort inom de närmaste sex månaderna.
Gill fick först tillstånd att driva djurparken i maj 1994, då attraktionen bestod av 290 djur på 12 hektar med cirka 200 besökare per dag.
Nu är djurparken hem för mer än 1.000 djur över 50 hektar, locka mer än 250.000 besökare och generera 3m per år.
Rådet har följt en inspektörs rekommendation om att licensen, som måste förnyas vart sjätte år, inte ska utfärdas på nytt förrän en ny ledning finns på plats i djurparken.
I ett betänkande till utskottet sades det: "Särskilt viktigt för inspektörerna är det faktum att när djurparken växer är den starkt beroende av (Gert Gills) erfarenhet av att genomföra föråldrade metoder och vägra att genomföra moderna zoometoder.
"Detta har resulterat i djurskyddsfrågor, en högre dödlighet än väntat bland djuren, högre än förväntat (t.ex. skador på allmänheten från djur), och placerar både personal och allmänhet i fara."
Rådet sade att Mr Gill hade installerat ny ledning men det fanns farhågor om honom, som licensinnehavare, att upphäva andra ledningsbeslut.
Brewer sade: "Jag är säker på min egen position att sköta djurparken utan David här regelbundet, men vi behöver hans idéer och hans bidrag i denna djurpark eftersom det är viktigt att hålla sitt hjärta vid liv."
Rådsledamöterna har vägrat att förnya licensen för ägaren och grundaren av Safari Zoo i södra sjöarna.