证券代码：002424 证券简称：贵州百灵 公告编号：2014-083贵州百灵企业集团制药股份有限公司
化药一类新药替芬泰项目进展公告
本公司董事会及全体董事保证本公告内容不存在任何虚假记载、误导性陈述或者重大遗漏，并对其内容的真实性、准确性和完整性承担个别及连带责任。
风险提示：鉴于新药研制的复杂性、风险性和不确定性，替芬泰（原Y101）项目研制具有周期长、投入较大的情况，各阶段研究均具有风险性，公司将及时履行信息披露义务，请投资者注意投资风险。
1、公司的替芬泰项目存在新药审批的过程中临床试验不能通过及临床实验周期较长的可能性风险，该项目的临床研究将根据批准后的临床实验方案进行，该研究将分为多个阶段，公司将及时对周期时间进行信息披露，每个阶段均存在风险性和重大的不确定性；
2、公司的替芬泰项目存在不能获得《新药证书》和《药品生产批件》的可能性风险。
贵州百灵企业集团制药股份有限公司（以下简称“公司”或“贵州百灵”）与贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室、天津药物研究院，中国人民解放军 302医院合作研发的化药 1.1类新药“替芬泰”项目（原Y101）于 2013年 12月 20日和 2014年 1月 21日分别收到国家食品药品监督管理总局下发的原料药及制剂的《药物临床试验批件》。2014年 3月 17日公司与北京博诺威医药科技发展有限公司（以下简称：“博诺威医药”）签订了《技术开发（委托）合同》。
公司将委托博诺威医药代理进行替芬泰片Ⅰ期临床试验。
2014年 8月 15日公司、贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室、天津药物研究院、中国人民解放军 302医院、苏州大学附属第一医院、北京博诺威医药科技发展有限公司六方在贵阳召开了“1.1类化药新药替芬泰临床前研究总结及临床研究启动会”，苏州大学附属第一医院为“替芬泰”项目Ⅰ期临床试验单位。与会人员对国家食品药品监督管理总局下发的《药物临床批件》审批意见进行了实验总结，总结如下：
一：作用机制
通过作用机制研究，替芬泰抗HBV（乙型肝炎病毒）的作用部位不是pgRNA（前基因组RNA）的表达或抑制 DNA聚合酶等的活性，初步认为是通过抑制细胞内 cccDNA的表达产生抗 HBV的作用。
cccDNA是 HBV复制的源泉，在病毒复制的 7个主要靶点占有重要地位，目前世界上尚未发现能够抑制细胞内 cccDNA表达的药物，现有核苷类药物和干扰素类均为抑制DNA多聚酶的药物无抑制cccDNA的作用。因此我们的研究证明其具有独特的作用机制。
（1）根据大量文献报导，HepG2.2.15细胞模型可以检测 HBVcccDNA的水平。通过试验研究发现，替芬泰在 HepG2.2.15细胞模型的试验中能够显著降低 HBVcccDNA含量。
（2）请教中国人民解放军 302医院专家，从基因工程方面设计抗病毒机制研究设想，实验方案如下：
2）microRNA芯片的检测，验证确切的基因或蛋白。
3）蛋白芯片的检测，对相关基因进行干预（增加蛋白表达、抑制表达），检测在用药或无药状态下 HBV复制的变化。
现已联系到上海欧易生物科技有限公司，明确基因芯片具体实验方案，正在开展第一项基因芯片检测的工作。
二：药效学问题
1）在此基础上补充检测 2.2.15细胞培养上清液中的 HBV DNA的水平。
2）连续给替芬泰 30天，斑点杂交法检测鸭血清 DHBV-DNA水平值。替芬泰高、低剂量组在给药第10d、第20d、第30d，无论与给药前还是与生理盐水对照组相比，都能显著的降低 DHBVDNA，给药 20天时的抑制效果最明显，其高、低剂量组分别为46.99%、24.43%。
3）采用 Southern Blot地高辛检测法（化学显色法）检测 DHBV感染鸭肝组织 DHBV-DNA含量。结果表明，给药 20天时，替芬泰高剂量组对 DHBV-DNA与病毒对照组比较有明显的抑制作用，而阳性对照药恩替卡韦（ETV）组也有非常明显的抑制作用。
三：耐药性问题
1）对多种核苷类药物耐药株有效
选取核苷类药物拉米夫定和恩替卡韦同时耐（L180M+M204V）基因型为研究对象，分别做瞬转试验，分别观察替芬泰对核苷类抗 HBV耐药基因型的耐药程度。结果发现替芬泰对 A64细胞内 HBV-DNA
抑制率能达到76.06%，而 ETV的抑制率仅为34.06%。
采用 HepG2细胞为研究模型，选取阿德福韦酯（N236T）耐药基因型为研究对象，做瞬转试验，观察替芬泰阿德福韦酯（N236T）抗 HBV耐药基因型的耐药程度。结果发现替芬泰对 HBV-DNA的抑制率已达68.47%，而阿德福韦酯（ADV）对 HBV-DNA的抑制率仅为0.73%。
2）联合恩替卡韦协同增效
替芬泰联合恩替卡韦用药后，可以将抗 A64细胞内 HBV-DNA抑制率提高到91.9%，显著高于单药替芬泰或恩替卡韦，具有显著的协同增效的作用。
上述实验说明替芬泰对不同模型的核苷类抗 HBV耐药基因型的耐药程度均有非常明显抗耐药作用，联合用药的效果更加明显。替芬泰新的作用位点和作用机制可能是其对核苷类单耐药和交叉耐药毒株有效的内在原因。
四：保肝降酶作用方面
选取ConA（刀豆蛋白）对小鼠免疫性肝损伤模型为研究对象，给予替芬泰各浓度组治疗 7天，分取小鼠肝脏做免疫组化，检测免疫因子及细胞凋亡等因子，从免疫学方面观察替芬泰保肝降酶的机制。
正在建立 ConA肝损伤模型，待模型稳定即开始正式试验。
五：物质平衡研究
根据临床的初步试验结果，讨论进一步的物质平衡研究方案。
此外，替芬泰还具有以下明显优势与特点：
（1）无明显“反跳”
替芬泰体内以 DHBV感染雏鸭为模型，病毒对照组 DHBV-DNA水平升高无明显波动，阳性对照药拉米夫定组与病毒对照组比较有极显著差异（P<0.01），但停药 3天后 DHBV-DNA水平明显回升，有明显“反跳”现象。替芬泰高（50mg/kg）、中（25mg/kg）、低（12.5mg/kg）剂量组，在给药第 5天、第 10天分别与病毒对照组比较，高、中剂量组能显著降低 HBV感染雏鸭血清中DHBV-DNA（P<0.01），替芬泰三个剂量的效果呈现良好的量效和时效关系，且停药 3天后感染雏鸭血清中 DHBV-DNA水平均未见明显回升，无明显“反跳”现象。可能与核苷类药物不同的作用机制有关。
（2）无肾毒性或骨髓抑制
替芬泰在现已完成的实验动物体内没有发现对心、肝、肾等大器官的毒副作用。无致畸、致突变作用。
会议小结：
1.针对审批意见的相关问题，替芬泰在药效学方面的补充研究取得了一定的进展，通过不同的检测方法证实替芬泰抗病毒效果良好，且对耐药病毒株有一定的效果；明确了机制研究的研究方案，需进一步试验论证；
2.样品杂质控制在1.5‰以内；
3.临床方案成稿后发送给各临床前研究单位；
5.定量药理学研究需要与临床前研究方协商提供相关研究资料；
6.增补的药理学研究表明该药对北京雏鸭肝中 HBV有着很好的抑制率，单用或者联合 ETV用于对 ETV和 ADV耐药病毒株时也显示出不错的效果。
后期计划：
1、贵州省中科院天然产物化学重点实验室
继续进行杂质研究。
2、天津药物研究院、中国人民解放军 302医院：
①根据会议结论提供更多的临床前的原始资料和基础数据，用于定量药理研究；
②进一步探索药理作用机制的研究和抗病毒药效、耐药性方面、保肝降酶作用方面的研究；
③Ⅰ期临床期间开展支持Ⅱ、Ⅲ期临床的长期毒性实验。
3、贵州百灵
将依据临床药代预试验的结果，决定是否开展动物体内同位素标记的物质平衡研究；
4、苏州大学附属第一医院
根据讨论结果，确定临床研究方案；
5、博诺威医药
根据前期数据，联合临床前及临床研究单位进行定量药理学研究，推荐Ⅰ期临床剂量。
特此公告。
贵州百灵企业集团制药股份有限公司
董事会