system: [SYSTEM]

user: 3. 药理、毒理基础研究 与治疗作用有关的主要药效学试验：钐制剂药物的耙向系统即临床适应症和选择性生物分布点是骨骼系统。EDTMP除了通过对骨中钙的鳌合而结合于骨基质外，还可能通过调节血清钙和镁的浓度对骨组织产生作用。皮下连续注射高剂量EDTMP导致动物的净体重增加、钙的肠吸收和骨的纵向生长随剂量下降，血浆的总体钙浓度和骨中过量类骨质的积累随剂量增长。试验中观察到的骨碱性磷酸酶和酸性磷酸酶的变化以及组织形态学上的变化显示出EDTMP 能导致试验动物骨吸收的下降，类骨质的增加，骨矿化作用的下降。从而表明EDTMP对动物的骨生长或骨吸收有抑制作用。 在EDTMP和二膦酸(HEBP)的对比药效学试验中，皮下注射相同剂量的EDTMP与HEBP对大鼠的骨生长和代谢的影响基本相同。而同等剂量组的二膦酸口服给药28天幼鼠在肠钙吸收、骨代谢等方面有较大影响。EDTMP和HEBP两个化合物在口服给药上的明显差异的原因可能与它们在动物体内的肠道吸收有关。EDTMP分子量远大于二膦酸，其肠道吸收效率可能较低，因而对动物各项骨指标影响也低。 3.1. 药理基础研究 Sm-EDTMP (钠盐、不含钙配方)剂量为30 mg/kg时，以6.6 ± 1.3 mg/kg/分的速率静脉输入清醒狗体内，仅对心跳速度有短暂影响，但用20 mg/kg的较小剂量以同样速率静脉输入麻醉狗体内时，却引起了短暂而明显的血压下降(−62 ± 33 mmHg)。下降的血压在10分钟内回复到对照水平。快速(45秒之内)集合药团注射使麻醉狗出现因剂量相关的血压下降，3 mg/kg剂量时下降9 mmHg，10 mg/kg时下降44 mmHg，20 mg/kg时下降70 mmHg，并使麻醉狗的死亡率达2/3。用于麻醉狗的剂量为10和20 mg/kg时，其心电图的变化包括QTc间隔延长，T波倒置并伴随血压下降，快速集合药团注射的作用远远大于慢速输液，血压回升至对照水平后，这些症状就会消失。 维持正常的血管紧张程度和心脏收缩需要血液中钙离子达到一定的水平，而快速、大量地在动物体内注入Sm-EDTMP使得血液中较大一部分钙离子被螯合。在被麻醉的动物体内，细胞膜功能受影响，无法从其它组织将钙离子输送进来以维持平衡，保证心脏正常的起搏功能。因而Sm-EDTMP给药对麻醉动物的影响较大。用不含钙的Sm-Na-EDTMP和含钙的Sm-Ca/Na-EDTMP两种配方对雄性Beagle狗静脉内注射，剂量为10、30、50 mg/kg。在剂量达到50 mg/kg时Sm-Na-EDTMP引起了动物近2分钟的四肢抽搐和舔舌，心跳速率加快20分钟，血压下降持续2分钟，血清离子钙也发生明显下降，2分钟时达到最低点<2 mg/dL。剂量同样为50 mg/kg 的Sm-Ca/Na-EDTMP只引起试验动物心跳速率和血压轻微改变，血清离子钙降至3.9 mg/dL，下降程度远低于用钠盐配方的动物。剂量相同时，Ca/Na盐对动物的毒性作用总是小些。这种现象是因为含钙配方的Sm-EDTMP 中钙平衡了EDTMP对血清中钙、镁的螯合力，表1为实验研究所得的Sm-EDTMP快速集合药团注射对麻醉狗血压和心率的影响数据。 剂量超过3 mg/kg时静脉输注和快速注射均能对麻醉狗引起心电图的变化，但快速注射影响较大。用于麻醉狗的剂量为10和20 mg/kg时，其心电图的变化包括QTc间隔延长，T波倒置并伴随血压下降，快速集合药团注射的作用远远大于慢速输液，血压回升至对照水平后，这些症状就会消失。这两种剂量的Sm-EDTMP都没有改变四种激动剂(苯福林、乙酰胆碱、异丙肾上腺素、酪胺)或两侧颈动脉的闭合对动物心血管的作用。当用Sm-EDTMP剂量为30 mg/kg时，以6.6 ± 1.3 mg/kg/分的速率慢慢输入，它对清醒狗的心血管系统没有产生什么副反应。所以慢速输液时，计划用于人体的剂量约为70 mg或者1 mg/kg时应是安全可靠的。但应避免在麻醉状态下快速静脉推注。维持正常的血管紧张程度和心脏收缩需要血液中钙离子达到一定的水平，而快速、大量地在动物体内注入Sm-EDTMP使得血液中较大一部分钙离子被螯合。在被麻醉的动物体内，细胞膜功能受影响，无法从其它组织将钙离子输送进来以维持平衡，保证心脏正常的起搏功能。因而Sm-EDTMP 给药对麻醉动物的影响较大。 3.2. 急性毒性试验研究 钐制剂对小鼠静脉注射给药的LD50为536.69 mg/kg (95%可信限为485.80~592.91 mg/kg)，小鼠静脉注射给药后，高剂量组均立刻出现全身肌肉颤抖、痉挛、抽搐、翻滚、同时伴有呼吸抑制和角弓反张，终至小便失禁而死亡。即解剖，肉眼观察未见各脏器有明显的病理改变，死亡动物雌雄无差别。低剂量组立刻出现轻度肌肉痉挛，小鼠张嘴深呼吸，5分钟后活动减少呈安静状态。存活动物继续观察7天，动物摄食、饮水、大小便及一般体征均正常。7天后存活动物解剖，肉眼观察未见脏器异常病变。小鼠皮下注射给药钐制剂的LD50为2369 mg/kg (95%可信限为2095.70~2702.50 mg/kg)。高剂量组皮下注射 Table 1 Sm-EDTMP rapid collection medicine group injection of anesthetic dogs the influence of blood pressure and heart rat 剂量 (mg/kg) 0.3 3 10 20 累计 (mg/kg) 0.3 3.3 13.3 33.3 No. 1 血压BP 122 124 119 110 血压变化BP 0 −9 −18 * T1/2 0 243 162 心跳HR 110 96 84 86 心跳变化HR 0 6 8 * No. 2 血压BP 105 100 100 92 血压变化BP 0 −10 −42 −69 T1/2 0 93 152 330 心跳HR 117 107 89 78 心跳变化HR 0 0 −2 −10 No. 3 血压BP 133 130 121 131 血压变化BP 0 −7 −72 * T1/2 0 14 135 心跳HR 122 114 107 110 心跳变化HR 0 2 −12 * 平均 血压BP 120 ± 14 118 ± 16 113 ± 12 111 ± 20 血压变化BP 0 ± 0 −9 ± 2 −44 ± 27 T1/2 0 ± 0 117 ± 116 150 ± 14 心跳HR 116 ± 6 106 ± 9 93 ± 12 91 ± 17 心跳变化HR 0 ± 0 3 ± 3 −2 ± 10 表1. Sm-EDTMP快速集合药团注射对麻醉狗血压和心率的影响 BP：给药前测得的平均动脉血压(mmHg)；BP：给药后测得的最大血压差(mmHg)；T1/2：给药后血压恢复至最大压差的一半时所需时间(秒)； HR：给药前测得的心率(次/分)；HR：给药后测得的最大心率差； * 动物死亡。 给药后5分钟，小鼠出现躁动、身体摇晃、张嘴深呼吸、全身肌肉痉挛、阵发性抽搐、呼吸变慢和体毛竖立。2~4小时呈现死亡高峰，动物死亡后立即解剖，肉眼观察未见脏器有明显的病理学改变。24小时存活动物恢复正常，继续观察7天，动物体征良好，摄食、饮水和排便均正常。7天后存活动物解剖，肉眼观察未见各脏器异常病变。 3.3. 长期毒性研究 连续静脉注射EDTMP对于试验动物(大鼠、狗和猕猴)产生一系列毒理变化。大鼠在Sm−Ca/Na- EDTMP给药剂量达到50 mg/kg/d以上时导致运动失调、抽搐、以及进食和体重的下降。在狗的毒理试验中给药剂量达到30 mg/kg/d时也观察到动物进食和体重的下降。在较低剂量组狗(25 mg/kg/d)和大鼠(40 mg/kg/d)以及猴子(15 mg/kg/d)出现血清钙和血尿素氮水平上升，镁和碱性磷酸酶水平下降。高剂量组的狗出现心率升高，高剂量组狗和大鼠的肾脏解剖分析发现有多病灶型肾小管坏死。而对给药结束后有一段恢复期的试验狗作肾脏解剖分析发现有上皮组织再生区域，说明这样的肾组织坏死有可能是可逆转的。这些包括肾脏以及其它生化指标的变化原因尚不清楚。EDTMP对于大鼠、狗和猕猴的血清钙和镁的水平均有不同程度的影响。对猕猴静脉注射10~15 mg/kg EDTMP，给药前后测定受试动物的血清钙和镁总量，两个指标在给药第1、2日内均急剧下降，总钙量下降39%~62%，镁下降47%~53%。这说明EDTMP对动物其他组织如心脏的影响可能是首先通过对血液中的钙、镁离子的螯合作用开始的。两年的EDTMP慢性毒性试验中，大鼠给药剂量分别为0、4、20、和100 mg/kg/d时，对比给药组和对照组，动物在摄食量、体重、血红蛋白水平、肝脏碱性磷酸酶水平，以及血液中钙、镁、无机磷酸盐、铁及总铁结合力水平或解剖时器官重量等方面均无差异。而且在骨中钙镁磷元素含量及骨重、骨长等方面实验组与对照组也无差异。这说明EDTMP 长期毒性不明显。采用Sm-Ca/Na-EDTMP (含20%射线和高温造成的降解产物)对大鼠分别进行一个为期7天和4周的毒性试验。在7天试验中所用大鼠为雄性和雌性Crl:CD(SD)BR大鼠，重量为99~122 g，随机分成一个对照组和五个治疗组(5只/性别/组)，给药组剂量分别为20、40、80、120和160 mg/kg/d。每天由鼠尾静脉注射1次，时间为7天。对照组用0.9%氯化钠溶液。4周试验中所用大鼠为雄性和雌性Crl:CD(SD)BR大鼠，重量为122~172 g，随机分成一个对照组和三个治疗组(15只/性别/组)，给药组剂量分别为25、50或100 mg/kg/d，每天由鼠尾静脉注射1次，时间为4周。对照组用0.9%氯化钠溶液。每天做各种临床观察记录，每周记下食物消耗和体重情况。4周后，10只大鼠/性别/组被解剖，其余动物留下再观察四周后解剖。解剖时，对采集的血样进行血常规和生化参数分析，并采尿样进行分析。 3.3.1. 七天毒性试验研究 7天的毒理试验中除了两只大鼠外其余动物均在剂量达到80 mg/kg/d时出现运动失调。剂量达到120 mg/kg/d时出现抽搐，达到160 mg/kg/d时全部动物抽搐。运动失调和抽搐现象通常在给药后出现，持续不到5分钟。雄性大鼠的血清钙上升(160 mg/kg/d时)，血尿素氮上升(120和160 mg/kg/d时)，肌酐上升(160 mg/kg/d时)，血清镁水平下降(所有剂量组)，碱性磷酸酶下降(80 mg/kg/d以上时)；雌性大鼠血清钙和血尿素氮上升(120和160 mg/kg/d时)，碱性磷酸酶下降(120和160 mg/kg/d时)，血清镁水平下降(所有剂量组)，血清磷下降(80 mg/kg/d以上时)；其它血和尿指标无明显变化。80 mg/kg/d以上时出现肾小管损伤，但较轻微，甲状旁腺无损伤。血尿素氮和肌酐的变化可能与肾脏的组织病理学变化有关。如以肾小管损伤为标志，雄性大鼠和雌性大鼠的无损伤(安全)剂量分别为20 mg/kg/d和40 mg/kg/d。 3.3.2. 四周毒性试验研究 观察到的症状有抽搐和运动失调现象。当给药剂量为100 mg/kg/d时，雄性组动物在给药第一天出现抽搐现象，在给药期为30天的试验中，有28天每天每组有2~7只动物发生抽搐现象。当给药剂量为50 mg/kg/d时，到第十天时雄性组动物中有一只出现运动失调现象，在剩余的20天试验中，有11天每天每组有1~4只动物发生运动失调现象。当给药剂量为100 mg/kg/d时，雄性组动物每天每组有8~15只出现运动失调现象。雌性组动物也出现类似现象，当给药剂量为100 mg/kg/d时，在给药期为30天的实验中，有29天每天每组有1~10只动物发生抽搐现象。当给药剂量为50 mg/kg/d时，到第九天时雌性组动物中有一只出现运动失调现象，在剩余的21天试验中，有14天每天每组有1~3只动物发生运动失调现象。当给药剂量为100 mg/kg/d时，雌性组动物每天每组有8~14只出现运动失调现象。所有症状都在给药后随即出现，五分钟内即消除，之后所有动物恢复正常。 所有给药组动物平均每天的食物消耗量都减少，而且跟对照组相比，体重增长速度减慢，最高剂量组动物表现更明显。经过四周的恢复期后，跟对照组相比，所有给药动物体重增长速度还是减慢。雄性组给药剂量为100 mg/kg/d，雌性组给药剂量大于或等于50 mg/kg/d时，血细胞数和血红蛋白浓度都降低。当给药剂量为100 mg/kg/d时，给药动物的血细胞数和血红蛋白浓度在4周恢复期间持续下降。给药剂量为100 mg/kg/d时，所有动物的血尿素氮浓度都上升，碱性磷酸酶浓度下降。另外，雄性组给药剂量大于或等于25 mg/kg/d时，血液中无机磷化合物浓度下降。雌性组给药剂量为100 mg/kg/d时，血液中镁浓度下降。给药剂量为100 mg/kg/d时，给药动物在恢复期内血尿素氮浓度仍然上升，而血清肌酐水平未上升，血尿素氮浓度的上升被认为是与食物消耗减少及失重有关的继发性分解代谢引起的。用肉眼观察：当给药剂量为100 mg/kg/d时，雄性组10只动物中有9只并且雌性组10只动物中有10只的肾变灰白，经过4周恢复期后，给药剂量为50 mg/kg/d和100 mg/kg/d的所有动物的肾都变灰白，给药剂量为100 mg/kg/d的所有动物经过四周的恢复期后肾重量增加。解剖时，检查动物的眼睛，未发现与用药有关的异常。组织学检查：用药四周后解剖，发现所有用药组动物的肾都出现慢性多病灶肾小管变性肾疾病、多病灶肾小管扩张和空泡变性。四周恢复期后解剖的许多动物也有类似变化，甲状腺组织检查未出现异常。这个试验未阐明肾损伤的发病机制。这些现象可能是由于Sm-Ca/Na-EDTMP或其降解产物对肾的直接影响，或是由于EDTMP的鳌合而引起的钙钠代谢所产生的间接影响。尽管有这些组织变化，但试验仍表明代表肾功能变化的血清肌酸酐水平和尿样参数经过四周治疗期都未发生改变。结论为当大鼠每天静脉注射含过量降解产物的Sm-EDTMP一次，时间为一个月，给药剂量分别为25、50或100 mg/kg/d时，引起了肾脏毒性。当给药剂量大于或等于50 mg/kg时，大鼠出现了抽搐和运动失调现象。