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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验菌株 牛樟芝菌丝体粉末(Antrodia cinnamomea)为购自食品工业发展研究所生物资源与保存中心(新竹市，台湾)之BCRC35398：葡萄王公司自传统发酵干燥获得。 2.2. 牛樟芝菌丝体粉末制备 牛樟芝培养于1L PDB培养基中，经25℃、14天培养后，以500 L发酵槽培养，培养基为2%葡萄糖、2%黄豆粉、0.1% yeast extract、0.05% MgSO 4 、0.05% KH 2 PO 4 、25℃、30 rpm培养10~14天发酵全液冷冻干燥备用。 2.3. 试验动物与饲养 本次试验遵守动物伦理委员会3R规范，由乐斯科生物科技公司(BioLASCO Taiwan Co.， Ltd.， Taiwan) 订购40只6周龄，且体重介于201~225 g之雄性Wistar大白鼠。动物房温度控制在22℃ ± 2℃，湿度控制在60%~80%，光照与黑暗各十二小时(07:00~19:00为光照期；19:00~07:00为黑暗期)。 2.4. 试验设计 40只试验动物喂予正常成鼠饲料和饮用蒸馏水适应环境1周后，将其随机分为三组，试验样品以口服方式进行喂食，其分组如下： 1) 正常饮食组(normal diet， ND) (n = 4/group) 2) 高脂饮食组(high-fat diet， HFD) (饲料配方：以AIN93G为基础加以调整油脂比例，包含饲料固形物68%、大豆油7%和猪油25%) 3) 高脂饮食组给予-Ac樟芝菌丝体粉末[HFD+ Ac] 试验期间，大鼠自由摄食饲料和蒸馏水。每日纪录大鼠之食物摄取量(food intake)、饮水量(water intake)和食物利用率(feed efficiency)。试验开始先纪录大鼠之起始体重(initial body weight)，随后每两日精秤体重并观察其变化。给予试验样品之时间为6周，牺牲前三天收集大鼠粪便，并于试验结束前12小时进行禁食。利用CO 2 进行牺牲，并纪录其最终体重(final body weight)和体重改变量(weight change)。从大鼠静脉进行血液采集，并作为后续血清生化分析。同时，取出脏器组织(心脏、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏)和脂肪组织(肾周脂肪、副睪脂肪、肠系膜脂肪、鼠蹊部脂肪和腹膜外脂肪)利用生理食盐水清洗并擦拭，纪录各个脏器和脂肪组织的重量，秤量后用铝箔纸包覆，并以液态氮冷冻，储存于−80℃冰箱，以供实验研究分析。 1) 食物利用率(%)之计算公式如下： 食 物 利 用 率 ( % ) = [ 体 重 增 加 量 ( g ) ÷ 总 饲 料 摄 取 量 ( g ) ] × 100 % 2) 体重改变量(g)之计算公式如下： 体 重 改 变 量 ( g ) = [ 最 终 体 重 ( g ) − 起 始 体 重 ( g ) ] 3) 总脂肪量(total body fat， mg/g rat)之计算公式如下： 总 脂 肪 量 ( mg / g rat ) = [ 肾 周 围 脂 肪 量 ( mg ) + 副 睪 脂 肪 量 ( mg ) + 肠 系 膜 脂 肪 量 ( mg )                                                                 + 腹 股 沟 脂 肪 ( mg ) + 腹 膜 外 脂 肪 量 ( mg ) ] ÷ 最 终 体 重 (g) 4) 体脂肪率(body fat percentage， %)之计算公式如下： 体 脂 肪 率 ( bodyfatpercentage ) = 总 脂 肪 量 ( g ) ÷ 最 终 体 重 ( g ) × 100 % 5) 内脏脂肪量(visceral adipose tissue， mg/g rat)之计算公式如下： 内 脏 脂 肪 量 ( mg / g rat ) = [ 肾 周 围 脂 肪 量 ( mg ) + 副 睪 脂 肪 量 ( mg ) + 肠 系 膜 脂 肪 量 ( mg ) ] ÷ 最 终 体 重 (g) 6) 皮下脂肪量(subcutaneous adipose tissue， mg/g rat)之计算公式如下： 皮 下 脂 肪 量 ( mg / g rat ) = [ 腹 股 沟 脂 肪 ( mg ) + 腹 膜 外 脂 肪 量 ( mg ) ] ÷ 最 终 体 重 (g) 2.5. 血清生化参数测定 血液收集于血清分离管(BD Vacutainer， Plymouth， UK)中，以4000 g离心10分钟取出血清，分装于微量离心管中并储存于−80℃冰箱，作为分析使用。血清三酸甘油酯、葡萄糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、天门冬胺酸转胺酶、丙胺酸转胺酶、尿酸、肌酸酐、钠离子、钾离子与氯离子浓度以市售分析套组(Diasys Co Ltd.， Holzheim， Germany)进行测定。酮体以市售分析套组(Denka Seiken Co Ltd.， Taipei City， Taiwan)进行测定。 2.6. 肝脏总脂质分析 2.6.1. 总脂肪萃取 称取肝脏组织0.3 g于离心管，加入甲醇(methanol) 1.3 mL与小钢珠后，置于均质机上(Mini-beadbeater- 16， Biospec， OK， USA)，以30秒3次进行肝脏组织破碎，即可获得肝脏均质液。吸取肝脏均质液至玻璃螺旋试管，于均质小管再次加入甲醇1 mL冲洗后，同样吸取至玻璃螺旋试管。玻璃螺旋试管加入氯仿(chloroform) 4.6 mL后，利用超音波震荡器(ultrasonic cleaner) (DC150H， DELTA ® ， New Taipei City， Taiwan)，于室温下震荡90分钟后，置于10℃冷冻离心机(refrigerated benchtop centrifuge)经1250 g离心10分钟后，取上清液至已称量空重(W 0 )之玻璃螺旋试管。最后，将玻璃螺旋试管置于吹氮式试管浓缩装置下，利用吹氮浓缩方式使有机溶剂挥发，直到W n − W (n−1) £ 0.01 g时，即达恒重。于玻璃螺旋试管加入异丙醇(isopropanol)回溶肝脏脂质，利用超音波震荡器使肝脏脂质完全溶于异丙醇，作为后续三酸甘油酯与总胆固醇含量分析测定。 肝 脏 总 脂 质 ( mg / g liver ) = ( W n − W 0 0.3 gliver ) . 2.6.2. 三酸甘油酯测定 以市售之三酸甘油酯测定套组(TG assay kit， Teco Diagnostics， CA， USA)进行测定。于96 well盘加入2 μL标准品或肝脂质均质液与200 μL之TG reagent，置于37℃之热循环烘箱(FD-115， BINDER， Tuttlingen， Germany)反应5分钟后，利用分光亮度计(microplate reader)(UVM340， Biochrom， Cambridge， UK)测量520 nm吸光值，计算肝脏中三酸甘油酯含量(mg/g liver)。 2.6.3. 总胆固醇测定 以市售总胆固醇分析套组(Cholesterol assay kit， Teco Diagnostics， Randox Laboratories Co Ltd.， Antrim， UK)进行测定。于96 well盘加入2 μL标准品或肝脂质均质液与200 μL之TG reagent，置于37℃之热循环烘箱反应5分钟后，利用分光亮度计测量500 nm吸光值，计算肝脏中总胆固醇含量(mg/g liver)。 2.7. 统计分析 实验数据使用SPSS计算机统计软件进行分析。变异数分析则以PROC ANOVA与Duncan’s multiple range test进行分析，p < 0.05为具有显著性差异。