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user: 3. 结果与讨论 3.1. 特征离子的选择 选择IAA和ABA的特征离子，选择m/z为176、263的两个离子为IAA和ABA的定量离子，选择m/z为130、215的两个碎片离子为IAA和ABA的定性离子，如表2所示。 3.2. 标样与样品的全谱图 在设定的色谱条件下，IAA和ABA能与其他成分很好地分离。从图2中可以看出，标样IAA、D 5 -IAA、ABA和D 6 -ABA保留时间分别为：9.089 min，9.123 min，9.514 min，9.539 min。样品中IAA、D 5 -IAA、ABA和D 6 -ABA的保留时间与标样一致。 3.3. 提取纯化条件筛选 以板栗果实为实验试材，通过L 9 (3 4 )3水平4因素正交试验设计，在不同处理条件下得到板栗果实中IAA、ABA的含量(表3)。对表3中数据进行极差分析，各因素对IAA提取纯化的影响程度依次为：固相萃取柱 > 浓缩温度 > 取样量 > 溶剂浓度，即固相萃取柱对IAA提取纯化的影响程度最大，选择三种固相萃取柱，分别是纤维素柱、阴离子交换柱和C18柱，这三种柱子适合吸附pH为2~3的物质，纯化效果依次为C18 > 阴离子交换柱 > 纤维素柱，使用纤维素柱未能检测到IAA。考察各因子水平值发现，IAA最适的提取纯化条件为：固相萃取柱以第一水平C18为最优、浓缩温度以第三水平35℃为最优、取样量以第三水平0.50g为最优、甲醇浓度以第二水平80%为最优。各因素对ABA提取纯化的影响程度依次为：取样量 > 固相萃取柱 > 浓缩温度 > 溶剂浓度，即取样量对ABA提取纯化的影响程度最大。考察各因子水平值，ABA最适的提取纯化条件为：取样量以第三水平0.50 g为最优、固相萃取柱以第一水平C18为最优、浓缩温度以第三水平35℃为最优、甲醇浓度以第二水平80%最优。由此得出，IAA和 Table 2 The choice of ABA， IAA and corresponding internal standard product characteristics of the ion 激素种类 Hormone kind 质荷比 m/z 质荷比 m/z IAA 130 176 D3-IAA 134 181 ABA 215 263 D6-ABA 225 269 表2. ABA、IAA及相应内标产物的选择特征离子 Table 3 IAA and ABA content in different processing conditions of chestnut frui 处理 Treatment IAA含量(ng/g) IAA of content (ng/g) ABA含量(ng/g) ABA of content (ng/g) 1 11.82 ± 1.18bB 348.80 ± 27.73cC 2 3.95 ± 0.77dD 137.84 ± 23.10eE 3 — 47.52 ± 1.65fF 4 7.06 ± 1.02cC 157.67 ± 11.5eE 5 — 254.67 ± 5.30dD 6 8.76 ± 0.86cC 135.04 ± 19.63eE 7 — 234.16 ± 27.81dD 8 20.34 ± 0.38aA 789.93 ± 17.88aA 9 8.58 ± 0.30cC 542.60 ± 17.27bB 表3. 不同处理条件板栗果实中IAA、ABA含量 注：表中数值为3次重复测定的平均数±标准误。大写字母表示在0.01水平下差异显著，小写字母表示在0.05水平下差异显著。“—”为未检出。 图2. 板栗果实样品及激素标准样的色谱图 ABA最适的提取纯化条件相同，即表3、表4中处理8，取样量为0.50 g、甲醇浓度为80%、固相萃取柱为C18、浓缩温度为35℃。 3.4. 精密度与回收率 采用同位素内标法定量计算回收率，用样品中内标的峰面积与标样的峰面积之比(百分比)为回收率，重复3次，其结果如表4所示，处理8的提取纯化方法有较高的回收率，IAA和ABA的回收率分别为70.43%和80.17%；同时处理8的变异系数较低。此测定方法回收率、符合微量分析要求，说明本方法稳定性较好。 3.5. 方法的应用 3.5.1. 检出限 在处理8的基础上，逐渐降低样品量，分别取0.10 g、0.20 g、0.30 g、0.40 g、0.50 g板栗果实进行IAA和ABA含量的测定。经计算IAA和ABA的最低检出限分别是2.36 ng/g和31.95 ng/g。结果如表5所示，测定结果表明如果单独检测IAA，样品量不低于0.30 g；单独检测ABA，样品量可用0.10 g；两种激素同时测定，最适样品量是0.50 g。 3.5.2. 其它植物器官验证 采用已建立的前处理方法和测定方法，对不同植物器官进行研究。叶选取草莓叶片、花选取板栗雄花序、果实选取聚复果的草莓和仁果的海棠，以优化出的方法(处理8)，分别对其进行IAA和ABA含量的测定(表6)，从表6可见，可以从这些植物材料中检测出IAA和ABA的含量。 Table 4 Several parameters of endogenous hormone in plant tissue analysi 处理Treatment 回收率(%) Average recovery (%) 变异系数(%) Coefficient of variation (%) (n = 3) IAA ABA IAA ABA 1 8.29 35.75 9.98 7.95 2 12.23 3.124 19.49 16.76 3 — 18.08 — 2.08 4 25.23 4.47 14.45 7.29 5 — 2.85 — 3.47 6 10.62 56.13 9.82 14.54 7 — 30.78 — 11.88 8 70.43 80.17 1.87 2.26 9 39.44 2.13 3.50 3.18 表4. 植物组织中内源激素分析的若干参数 注：“—”为未检出。 Table 5 Different sample weight chestnut fruit of IAA and ABA conten 实验编号 The serial number 取样量g Amount of sampling (g) IAA含量 IAA of content (ng/g) ABA含量 ABA of content (ng/g) 1 0.10 — 517.08 ± 22.13 2 0.20 — 578.22 ± 21.79 3 0.30 12.9 ± 1.09 540.78 ± 14.13 4 0.40 13.34 ± 0.05 627.85 ± 26.59 5 0.50 20.34 ± 0.38 789.93 ± 17.88 表5. 不同样品量板栗果实的IAA和ABA含量 注：表中数值为3次重复测定的平均数 ± 标准误。“—”为未检出。 Table 6 Different plant tissues of IAA and ABA conten 植物 Plant tissue IAA含量(ng/g) IAA of content (ng/g) ABA含量(ng/g) ABA of content (ng/g) 草莓叶片 114.44 ± 14.49 319.18 ± 4.92 板栗雄花序 102.84 ± 3.99 284.96 ± 12.83 草莓果实 45.78 ± 5.10 428.95 ± 18.17 海棠果实 16.45 ± 1.53 102.25 ± 15.27 表6. 不同植物组织的IAA和ABA的含量 注：表中数值为3次重复测定的平均数 ± 标准误。