DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 荒漠生态系统退化评价模型的建立 4.1. 评价指标数据的标准化 对于被选定做评价指标的指标数据，不能直接用原始数据来计算生态退化指数，且二级指标值(Bi)是退化评价指标体系的基础，应该采用极差法对其进行标准化 [ 6 ] 。根据指标在生态系统退化过程中的表现，本文采用了如下的方法进行分情况标准化。 1) 随着退化程度剧化，指标值减小时： (1) Table 1 Index structure of ecosystem degradation assessment syste 生态退化指数 植物群落 动物群落 草本植物 灌木植物 高 盖 密 生物量 高 盖 密 生物量 生物量 表1. 生态系统退化评价体系指标结构 Table 2 Evaluation index of three kinds of form 过牧 轮牧 开垦 灌木盖度 草本密度 灌木生物量 草木高度 动物生物量 草本盖度 灌木高度 灌木生物量 灌木盖度 草木密度 灌木盖度 表2. 三种形式下的评价指标 2) 随着退化程度剧化，指标值增大时： (2) 其中， 表示二级指标各因子的标准化值， 表示评价指标体系中各二级指标因子的实测样本值， 是第i项评价指标因子在所有退化过程中的最大值， 则表示第i项评价指标因子在所有退化过程中的最小值。经过分析可以知道给定各种指标与退化程度变化关系表3。 由表3和公式(1)、(2)得到三种方式下的评价指标的标准化值。 4.2. 指标权重值的确定 对于这些指标权重的确定，本文采用了层次分析法来确定各二级指标因子在上一级指标中的作用大小，就是相对权重。 第一步，由表1所给相对关系构造成对比较矩阵。 因为过牧与轮牧的评价指标都是4个，且都是按重要顺序排序，所以它们的成对比较矩阵都是相同的，而开垦则不同。 过牧与轮牧： 开垦： 第二步，用MATLAB软件计算出矩阵的最大特征值与权重向量。 根据 可以算出权重向量，其中 是矩阵的最大特征值，权重向量的各个分量即是各二级指标对综合指标的权重值。计算出各矩阵权重向量如表4。 4.3. 综合退化评价模型 在确定了相对权重后，本文构建了如下的荒漠生态系统退化综合评价模型： Table 3 The relationship between the evaluation indexes and the degree of degradatio 退化程度加剧 草木高度 草木盖度 草木密度 草木生物量 灌木高度 灌木盖度 灌木密度 灌木生物量 动物生物量 表3. 各评价指标与退化程度的变化关系 Table 4 Weight value of evaluation index to comprehensive index in different way 权重 过牧 轮牧 开垦 0.60 0.60 0.65 0.20 0.20 0.22 0.12 0.12 0.13 0.09 0.09 表4. 各方式下评价指标对综合指标的权重值 (3) 其中 代表生态退化指数(index of ecological degradation， IED)， 是指第j样本中二级指标的标准值，即表五中的数值。 表示第j个样本中二级指标的权重值。
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user: 5. 退化评价等级与标准的确定 根据上述分析所得到的结果，同时又参照各种综合指数的分组方法，本文最终设计了一个受干扰的荒漠生态系统退化评价的五级分级标准，并给出了相应的分级评价 [ 7 ] ，见表5。
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user: 6. 模型的数据验证与结果 各样本地的指标综合得分结果如表6所示。
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user: 7. 结果讨论 由表5和表6我们可以得到在每一种干扰情况下荒漠生态系统退化程度等级的样地数量分布情况 [ 8 ] ，见表7，可以很好的分析出每一种干扰对生态的总体退化影响程度。 从表6，表7可以看出，对于三种放牧方式荒漠退化程度表现为开垦 > 过牧 > 轮牧，轮牧是根据植被恢复情况而合理的在几个草场中轮流放牧，这样是在保护草原的基础上充分利用草原资源。过牧是过度放牧，会破坏植被导致草场沙化。开垦是把荒地恳植为农田，但是大多数时候在未充分准备的情况下容易适得其反，促进沙化。所以可以得知表6的结果是合理的，并且展示了每一个样本区在三种放牧形式下的退化程度。 由此可见，在过牧与开垦这两种方式下，90%以上的样地都因人为干扰而退化了，轮牧相对这2者来说还比较好，所以应该尽量采用轮牧形式放牧。轮牧相对于过牧与开垦而言对生态退化的影响不是特别大，如果能在这样的放牧形式下加以人工栽种则可以改善荒漠的生态情况，最后对每一种干扰下的退化程度进行了概括，以数值的形式说明了各放牧形式的特点。
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user: 8. 放牧方式改善问题的分析 由上述内容可知，可将过牧区，轮牧区，开垦区三个区的样本按5个退化等级分别归类，对其样本指标分别进行求均值，如表8~表10。然后比较5个等级中正常与其他4种退化程度的指标数量上的区别。若是与灌木指标有关则建议减少干扰让其自然恢复，否则就应该人工种植草木。 Table 5 Grading standar 生态退化指标IED 等级 退化评价 Index of ecological degradation Classification Evaluation >0.75 I 极端退化 0.59~0.75 II 重度退化 0.52~0.59 III 中度退化 0.18~0.52 IV 轻度退化 <0.18 V 正常 表5. 分级标准 Table 6 Degree of ecological degradation of deser 重复项 过牧IED 轮牧IED 开垦IED 1 0.53 0.32 0.82 2 0.51 0.29 0.81 3 0.12 0.13 0.80 4 0.35 0.34 1.00 5 0.57 0.69 0.76 6 0.50 0.50 0.20 7 0.84 0.27 0.74 8 0.66 0.33 0.80 9 0.63 0.22 0.66 10 0.43 0.19 0.74 11 0.49 0.79 0.79 12 0.61 0.22 0.79 13 0.16 0.37 0.70 14 0.75 0.35 0.96 15 0.17 0.24 0.77 16 0.56 0.29 0.72 17 0.32 0.20 0.79 18 0.85 0.32 19 0.38 0.92 20 0.75 0.30 21 0.37 0.30 22 0.61 0.40 表6. 荒漠生态退化程度总况 Table 7 Quantitative distribution of the degree of ecological degradation in deser 过牧 轮牧 开垦 极端退化 3 2 11 重度退化 5 1 5 中度退化 3 0 0 轻度退化 8 18 1 正常 3 1 0 表7. 荒漠生态退化程度等级样地数量分布情况 Table 8 Mean table of degradation in pastoral area 过牧 灌木盖度 草木高度 灌木高度 草木密度 正常 0.56 0.04 0.51 0.08 轻度退化 0.6 0.37 0.75 0.33 中度退化 0.4 0.06 0.77 0.13 重度退化 0.77 0.11 0.65 0.03 极端退化 0.68 0.12 0.79 0.3 表8. 过牧区的退化均值表 Table 9 Mean table of degradation grazing are 轮牧 草木密度 动物生物量 灌木生物量 灌木盖度 正常 0.28 0.01 0.98 0.99 轻度退化 0.25 0.29 0.86 0.83 极端退化 0.10 0.32 0.91 0.85 表9. 轮牧区的退化均值表 Table 1 0 Mean table of degradation in pastoral area 开垦 灌木生物量 草木高度 灌木盖度 轻度退化 0.97 0.10 0.68 重度退化 0.98 0.09 0.88 极端退化 0.89 0.29 0.82 表10. 过牧区的退化均值表 当处于轻度退化程度时，应对草木进行修剪，使其高度密度分别降低0.23和0.25。并对灌木高度调整降低0.24当处于中度退化程度时，应对灌木高度进行调整降低0.26。当处于重度退化程度时，应对灌木盖度及高度分别进行调整降低0.21和0.14，并且还应该进行调整提高草本密度0.05。当处于极端退化程度时，应对灌木盖度和高度分别进行调整降低0.12和0.28。 当处于轻度退化程度时，应对草本密度提高0.03，以种植草本为主；当处于极端退化程度时，应对草本密度提高0.18，也应该种植草木，使其达到一定密度。 开垦区的破坏性最强，其原因是破坏了当地的生物链和生物系统，已经无法通过单一的自然恢复或者人工种植来恢复，应该结合其他两种放牧方式以及种植草木方式尽力挽救。
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user: 9. 结语 对于荒漠生态系统人为的适量干预有益于生态，但是过量的或者不适当的干预则会对生态造成一定程度的破坏。通过一些建立评价指标体系可以判断干预的好坏程度，评价方法除了层次分析法还有主成分分析以及因子分析等方法，其目的都是通过综合评价的手段来分析干扰。
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user: 摘 要 西红柿大约于明万历年间传入中国两广地区，并向若干地区传播，不过种植并不普遍，或作观赏或作药用，叫名也比较统一(六月柿、番柿)。西红柿作为一种蔬菜在中国得到推广种植是很晚的事情，仅有一百年左右的历史。现代汉语方言指称西红柿的优势词形为“番茄”、“西红柿”、“洋柿(子)”。“番茄”是随着五口通商(1842)而新生的叫法，属于学人的知识创造，主要通行于广大的南方地区。“西红柿”则是同时期产生于京畿地区的新词，湘赣闽地区晚近引种西红柿后也接受了这种说法。“洋柿(子)”是晚清时期东北地区从俄罗斯引种西红柿时兴起的叫法，在北方地区颇成势力，亦有种种变异。此外，闽台地区的“柑仔得”、“柑仔蜜”也颇值得注意，它们是菲律宾他加禄语kamatis的音译及流变。 关键词 :西红柿，汉语方言，词汇地理学
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user: 1. 引言 1.1. 本文的宗旨 番茄(英文名tomato，拉丁名Lycopersicon esculentum Miller)，为茄科番茄属一年生草本植物，全体生粘质腺毛，有强烈气味，开黄花，结球形或扁圆形浆果，通常为红色或黄色的，但也有黑色的。番茄果实是一种常见蔬菜。 GB8854-88 [ 1 ] 所列标准名和地方名的对照为：番茄——西红柿、洋柿子、毛椒角、柿子。很显然地方名只是举例性的，其中“西红柿”不应仅仅作为地方名来看待，它也是共同语里的词汇。例如《现代汉语词典》“番茄”、“西红柿”两个说法都收，并没有共同语和方言的不同。两者的差别其实是：“番茄”为中文学名(标准名称)，“西红柿”是通称(俗称)。当然在广大的南方地区，“番茄”也是日常口语。 《汉语方言地图集》(LACD) [ 2 ] 词汇卷022图“西红柿”(下文简称LV022)描写了930个汉语方言点的番茄词形及其地理分布，本文拟在LV022的基础上进一步绘制解释性地图，并讨论若干相关的问题。 1.2. 已有研究 研究番茄的论文和专著很多，这里仅提到与本文的研究关系比较密切的四种，其他有关的文献则随文注明。 1) 朱伟(2005) [ 3 ] 以“西红柿”与“番茄”这两个名称谁先谁后作为切入点，讨论西红柿何时传入中国等问题。它只是《三联生活周刊·有关品质》的一篇不到三千字的专栏文章，属于读书札记的性质。 2) 张平真(2006) [ 4 ] 对西红柿主要叫名的由来、构词手段等进行了初步的研究。 3) 刘玉霞(2007) [ 5 ] 比较系统地考察了番茄在中国的传播及其影响，也常常涉及到叫名的问题。 4) 铃木史己(2012) [ 6 ] 以“西红柿：修饰成份”、“西红柿：词根”、“西红柿：‘西’系成立的过程”为题，对汉语方言西红柿的叫法进行过词形分类，绘制了3幅同名的方言地图，并对地图做了简略的讨论。铃木的研究并非以《汉语方言地图集》为基础，而且本文在词形分类、地图分析的一些做法上也跟铃木的研究有明显的不同，因此除了必要时加以引用外，本文不做更多的介绍和评论，请读者自行参看。 1.3. 本文的约定 引用的古籍都随文交代版本，不列入参考文献。对所引方言语料的标调都进行了统一。有些著述的词汇记音只标本调不标变调，本文悉遵原作。
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user: 3. 现代汉语方言里的西红柿 3.1. LV022的词形 LV022把930个汉语方言点西红柿的说法归为5大类65小类，本文转写为表1，注是原有的。A类有17个小类，371个方言点，用黑色符号表示；B类有17个小类，445个方言点，用红色符号表示；C类有14个小类，46个方言点，用蓝色符号表示；D类有10个小类，27个方言点，用绿色符号表示；E类有7个小类，41个方言点，用土黄色符号表示。 指称西红柿的词形虽然可以分为5大类65小类，可是如果稍微概括一下，表1的主要词形其实只有3个，即：番茄(—) 398 (B1~B3)、西红柿150 (A1)、洋柿(子) 150 (A5~A7)。这3类词形共698个方言点，约占总方言点数的75%。从另一个角度看，指称西红柿的词形以带外来标记的为主。外来标记有“西”、“洋”、“番”、“海”四种，有些词形甚至可以出现两个外来标记，如“西番—”、“西洋—”、“洋海—”等。带外来标记的词形共34个小类800个方言点，约占小类总数的52%，方言点总数的86%。 3.2. 西红柿词形的重分类 根据已知的汉语西红柿称谓历史及词形之间的相互关系，可以把表1的词形重分为7大类58小类，如表2所示。表1“E7其他”类的6个点，东方据海南省东方市史志编纂委员会(2011) [ 34 ] 归为“番茄”，兴国据兴国县县志编纂委员会(2001) [ 35 ] 归为“洋茄/洋茄—”，其余四点(蓬莱、徐闻、昌江、龙州)表2没有计入，因此重分类的总方言点数为926。 表2在“类别”的第一列用A~G表示大类，第二列用阿拉伯数字表示小类。词形都以表1的类打头。大类和各具体词形都在右上角标明方言点数。表2跟表1主要有以下几点不同：1) 将原A9 (“番柿”)、A3 (“西番柿”)独立为A类，原E5 (“甘囝嘚等”)独立为B类；2) 原A类的主体拆分为C、E两个新 Table 1 The classification of tomato’s word forms on Map 022 of LACD vocabulary volum A 类(黑色) 371 B 类(红色) 445 C 类(蓝色) 46 D 类(绿色) 27 E 类(土黄) 41 1 西红柿 150 番茄 363 洋辣椒 7 金桔 7 毛秀才等 13 2 西洋柿 1 番茄~西红柿 22 洋辣姜~野辣姜 1 金桔子 6 秀才果 1 3 西番柿 4 番茄— 13 洋辣子 18 金桔果 2 状元红 1 4 西薐柿 1 番鬼茄 1 洋辣崽 2 酸汤果 1 五子登科 1 5 洋柿子 133 番薯茄 1 洋椒 1 番瓜 4 甘囝嘚等 8 6 样柿嘚 10 洋茄/洋茄— 22 洋梗椒 1 酱瓜/酱瓜儿 2 □□□[  ]等 ① 11 7 洋柿/洋柿柿 7 洋落苏 3 洋海椒 3 酱果儿 2 其他 6 8 洋红柿 1 洋海茄 1 洋番椒 2 西红薯 1 9 番柿 14 海茄/海茄— 6 番椒 1 洋球儿 1 10 海柿/海柿子 2 海茄瓜 1 番姑辣椒 1 海笋儿 1 11 柿子 26 天茄瓜 1 柿饼辣子 1 12 柿哩 1 茄/茄子 2 酱辣子 5 13 红柿— 2 红茄 2 毛辣角 2 14 山红柿 1 斑茄 1 辣椒果 1 15 火柿子 2 柿饼茄 1 16 臭柿/臭柿— 15 酸茄/酸茄— 4 17 棋盘柿子 1 酸茄果 1 表1. LV022的词形分类 ① 借自英语tomato。 大类，原B类的主体构成新D类，C类的主体构成新F类；3) 原D类、E类的主体合并为杂类G，其中原E6 (“□□□[  ]等”)改为“トマト/tomato”，主要是考虑到台湾和海南的同类说法或许有不同的来源。
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user: 摘 要 以银杏为主要原料，黑米、大豆蛋白粉、红枣、低聚果糖及木糖醇为辅料，开发一种适合中老年人食用，具有益生元功效的银杏复合早餐粉。首先，将银杏及黑米分别通过双螺杆挤压膨化，优化挤压膨化的加热温度；进一步以感官质量为评价指标，通过单因素试验确定各原料的添加量。在其基础上，采用四因素三水平L 9 (3 4 )正交试验优化该早餐粉的配方，得到口感细腻、香味浓郁及颜色均匀的复合早餐粉。其结果为：银杏26.9%，黑米22.4%，大豆蛋白粉13.4%，红枣13.4%，低聚果糖5.4%，木糖醇17.9%，柠檬酸0.6%。 关键词 :中老年，复合，银杏，黑米，早餐粉，膨化
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user: 1. 引言 银杏树系裸子植物，是当今世界上存在的最古老的树种，被称为植物界的“活化石”。在我国大部分地区均有种植，且主要分布在长江流域。银杏树并无果实，通常人们所说的银杏果，实际上是银杏的种子，银杏果又称白果，是我国著名的干果之一。银杏果的种仁营养丰富，含有维生素C、胡萝卜素、淀粉、蛋白质、钙、铁等营养成分。值得一提的是银杏还含有黄酮、白果酚及白果醇等活性成分。其中，黄酮具有降血压、降低血粘度、清除过氧自由基及改善记忆力等功能；白果黄素对致癌因子具有很强的抑制作用，对白血病、肿瘤等均有一定的疗效；酚类物质则具有抗菌消炎的功效 [ 1 ] 。 黑米为黑稻加工产品，是禾本植物黑稻谷的种仁，黑米一般不像白米那样精加工，而是以糙米的形式直接食用。黑米含有丰富的蛋白质、氨基酸、维生素、膳食纤维及不饱和脂肪酸等营养成分。并且，还含有花青素等生理活性成分，具有清除自由基，延缓衰老等功能，是制作保健食品的理想原料 [ 2 ] 。利用脱脂大豆粕生产的大豆蛋白粉，不仅脂肪含量低，而且蛋白质含量非常高，可以为产品提供更佳的蛋白质营养，能够有效保障人体的正常生理需求。研究表明，长期食用大豆蛋白粉能够降低冠心病的发生率 [ 3 ] 。红枣味甘香甜，风味独特，其不仅含有维生素、粗纤维、钙等营养成分，还含有黄酮、红枣多糖等生理活性成分。黄酮类物质能够降低毛细血管的通透性，因而是预防和治疗高血压的有效成分。红枣多糖则具有促进白细胞的生成，提高机体免疫力等功能 [ 4 ] 。低聚果糖是人体无法消化的一种碳水化合物，食后到达大肠后可促进双歧杆菌和乳酸菌等益生菌的增殖，被肠道细菌发酵后可产生醋酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸和乳酸，能够降低肠环境pH值，抑制肠道腐败和减少毒素的生成，还可以降低血液胆固醇及血脂浓度，有利于心血管疾病的防治 [ 5 ] 。 本研究拟采用银杏为主要原料，黑米、红枣、大豆蛋白粉、木糖醇及低聚果糖等为辅料，开发出一种适合中老年人食用，具有益生元功效的银杏复合早餐粉。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 试验原料 银杏果(产自江苏)；黑米(产自贵州)；小麦粉(产自安徽)；大豆蛋白粉(郑州博研生物科技有限公司产)；红枣(产自新疆)；低聚果糖、木糖醇及柠檬酸均为食品级。 2.2. 仪器与设备 HX-200高速中药磨碎机(浙江省永康市溪岸五金药具厂)；XMTD-8222电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；BL-220H电子天平(上海友声衡器有限公司)；XDW-6J振动式细胞级超微粉碎机(济南达微机械有限公司)；SLG-30双螺杆实验机(济南赛百诺科技有限公司)。 2.3. 工艺流程 银杏→去壳、脱皮→干燥→粗粉碎→挤压膨化→干燥→超微粉碎←粗粉碎←干燥←红枣 ↓ 黑米→筛选→粗粉碎→挤压膨化→干燥→超微粉碎→调配→混合→检验→包装→成品 ↑ 大豆蛋白粉、低聚果糖、木糖醇、柠檬酸 2.4. 工艺要点 2.4.1. 银杏预处理 将银杏去壳后放入锅中，在90℃~100℃下煮制10 min以去皮，边煮边搅拌，水与银杏的质量比为5:2。将去皮后的银杏，在90℃下干燥至水分含量≤20%后，然后用中药粉碎机粉碎，至物料平均颗粒约为20目。 2.4.2. 黑米预处理 黑米选择饱满的颗粒，去除灰尘等杂质后，用中药粉碎机粉碎至物料平均颗粒约为20目。 2.4.3. 红枣预处理 将红枣在65℃下干燥至水分含量≤5%后，然后用中药粉碎机粗粉碎至物料的平均颗粒约为20目，最后用超微粉碎机粉碎，至物料平均颗粒≤10 µm。 2.4.4. 挤压膨化 从进料端到出料端，把SLG-30型双螺杆挤压膨化机一共分为四个区，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ区。取出预处理好的银杏，进行双螺杆挤压膨化，控制螺杆转速在16 Hz，物料含水量在16%，分别选定了五种挤压膨化温度，银杏的挤压膨化温度如表1 [ 6 ] 。 将预处理好的黑米水分含量调至16%，控制螺杆转速16 Hz，研究不同膨化温度对黑米挤压膨化效果的影响，黑米的挤压膨化温度如表2。 2.4.5. 银杏和黑米超微粉的制备 膨化好的银杏和黑米在85℃下干燥至水分含量≤5%后，先用中药粉碎机粉碎，至物料的平均颗粒约为30目，然后用超微粉碎机将其超微粉碎，至物料平均颗粒大小≤10 µm。 2.4.6. 调配 将银杏超微粉与其他辅料按比例配比，混合均匀。 Table 1 Optimization of temperature of ginkgo extrusio 温度(℃) 序号 1 2 3 4 5 Ⅰ区 40 50 50 60 60 Ⅱ区 80 100 110 120 130 Ⅲ区 110 120 130 140 150 Ⅳ区 130 140 150 160 170 表1. 银杏挤压膨化温度的优化 Table 2 Optimization of temperature of black rice extrusio 温度(℃) 序号 1 2 3 4 5 Ⅰ区 50 50 60 60 60 Ⅱ区 100 110 120 130 140 Ⅲ区 120 130 140 150 160 Ⅳ区 140 150 160 170 180 表2. 黑米挤压膨化温度的优化 2.5. 试验方法 2.5.1. 挤压膨化条件的确定方法 收集不同条件下挤压膨化的产品，测量它们的直径，对每个样品均进行3次测量，取其平均值，根据径向膨化度，即膨化产品径向直径与模口直径之比，以及膨化产品的口感、色泽及气味，来确定原料最佳的挤压膨化条件 [ 7 ] 。 式中：d 0 ——膨化机模口直径(0.85 cm)； d 1 ——膨化物的平均直径(cm)。 2.5.2. 产品感官评价 由10位专业人员组成感官评定小组，在感官实验室内进行评定，根据产品的香味、色泽光泽、滋味及口感，进行感官评价 [ 8 ] 。银杏早餐粉的感官评分标准如表3。 2.5.3. 原料最佳比例单因素试验设计 将银杏粉、黑米、大豆蛋白粉、红枣、木糖醇及柠檬酸混合，通过单因素试验，得出各原料最优的用量。 1) 早餐粉中银杏添加量的单因素试验 固定黑米、大豆蛋白粉、红枣及木糖醇的添加量均为2.0 g，柠檬酸添加量为0.08 g，银杏粉添加量分别为2.0、3.0、4.0、5.0及6.0 g，将各原料充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究银杏的添加量对早餐粉感官品质的影响。 2) 早餐粉中黑米添加量的单因素试验 固定银杏粉、大豆蛋白粉、红枣、木糖醇及柠檬酸添加量分别为4.0、2.0、2.0、2.0及0.08 g，黑米 Table 3 Sensory score standards of ginkgo composite breakfast powde 项目 评分细则 感官评分 香味 (满分30分) 具有银杏、黑米、红枣等复合香味，且没有特别突出的某一配料的味道或者气味或者异味 有一定的复合的香味，无其它异味 某个味道突出，无复合味道，有少量其它异味 20~30 10~20 1~10 色泽光泽 (满分30分) 紫红色，光泽度好，颜色均匀 淡紫红色，光泽度差，稍不均匀 灰褐色，光泽度差，色泽不均匀 20~30 10~20 1~10 滋味口感 (满分40分) 入口细腻，无颗粒，无苦味和其它异味 入口细腻，有细微的颗粒，有轻微的苦味 入口粗糙，颗粒较多，苦味或异味较重 30~40 10~30 1~10 表3. 银杏复合早餐粉感官评分标准 的添加量分别为0、1.0、2.0、3.0及4.0 g，将各原料充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究黑米的添加量对早餐粉感官品质的影响。 3) 早餐粉中大豆蛋白粉添加量的单因素试验 固定银杏粉、黑米、红枣、木糖醇及柠檬酸的添加量分别为4.0、2.0、2.0、2.0及0.08 g，大豆蛋白粉添加量分别为0、1.0、2.0、3.0及4.0 g，充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究大豆蛋白粉添加量对早餐粉感官品质的影响。 4) 早餐粉中红枣添加量的单因素试验 固定银杏粉、黑米、大豆蛋白粉、木糖醇及柠檬酸添加量为4.0、2.0、1.0、2.0及0.08 g，红枣添加量为0、1.0、2.0、3.0及4.0 g，充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究红枣添加量对早餐粉感官品质的影响。 5) 低聚果糖与木糖醇添加量的确定 早餐粉中低聚果糖是作为益生元添加的，很少的量即可产生很好的益生元效果。因此，可以根据相关的文献报道来确定低聚果糖的添加量 [ 9 ] 。固定银杏粉、黑米、大豆蛋白粉、红枣及柠檬酸添加量分别为4.0、2.0、1.0、1.0及0.08 g，充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究木糖醇添加量对早餐粉感官品质的影响。 6) 早餐粉中柠檬酸添加量的单因素试验 固定银杏粉、黑米、大豆蛋白粉、红枣及木糖醇添加量分别为4.0、2.0、1.0、1.0及2.0 g，柠檬酸添加量分别为0.05、0.06、0.07、0.08及0.09 g，充分混合后，补加开水定容至100 ml，均匀冲调，通过感官评价，研究柠檬酸添加量对早餐粉感官品质的影响。 2.5.4. 配方优化的正交试验设计 在单因素试验结果的基础上，进行四因素三水平L 9 (3 4 )正交试验，对试验数据进行数据分析 [ 10 ] ，比较分析结果，优化最佳原料配比。正交试验因素与水平设计见表4。
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user: 4. 结论 通过试验确定了银杏的挤压膨化参数为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ区温度分别为150℃、130℃、110℃及50℃， Table 7 Orthogonal experiment results and analysi 试验 序号 银杏 A (%) 黑米 B (%) 大豆蛋白粉 C (%) 红枣 D (%) 感官分数 (满分100分) 1 1 (3.0) 1 (1.5) 1 (0.5) 1 (0.5) 85.6 2 1 2 (2.0) 2 (1.0) 2 (1.0) 80.3 3 1 3 (2.5) 3 (1.5) 3 (1.5) 89.7 4 2 (4.0) 1 2 3 81.1 5 2 2 3 1 75.5 6 2 3 1 2 83.8 7 3 (5.0) 1 3 2 69.4 8 3 2 1 3 70.2 9 3 3 2 1 72.8 K 1 255.6 236.1 239.6 233.9 K 2 240.4 226.0 234.2 233.5 K 3 212.4 246.3 234.6 241.0 k 1 85.2 78.7 79.9 78.0 T = 708.4 k 2 80.1 75.3 78.1 77.8 k 3 70.8 82.1 78.2 80.3 R 14.4 6.8 1.8 2.5 因素主次 A > B > D > C 最优组合 A 1 B 3 C 3 D 3 表7. 正交试验结果与分析 Table 8 Results of verification tes 组合 感官分数(满分100分) A 1 B 3 C 1 D 3 88.4 A 1 B 3 C 3 D 3 89.7 表8. 验证试验结果 图5. 木糖醇添加量对早餐粉感官品质的影响 图6. 柠檬酸添加量对早餐粉感官品质的影响 螺杆转速16 Hz，物料含水量16%；黑米的挤压膨化参数为：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ区温度分别为160℃、140℃、120℃及60℃，螺杆转速16 Hz，物料含水量16%。最后，本试验确定了银杏复合早餐粉的最佳工艺配方为：银杏26.9%，黑米22.4%，大豆蛋白粉13.4%，红枣13.4%，低聚果糖5.4%，木糖醇17.9%，柠檬酸0.6%。该产品以膨化的银杏及黑米等搭配而成，含有丰富的熟淀粉，容易消化吸收；大豆蛋白粉提供了优质的蛋白质来源；红枣中维生素含量非常高；用木糖醇代替传统的蔗糖；添加了适量的低聚果糖，有利于肠道健康。该银杏复合早餐粉是一种非常适合中老年人食用的方便食品。
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user: 摘 要 本文理论研究了自散焦LiNbO 3 晶体中非相干亮光伏孤子的形成机理及其动态演化特性。研究发现，通过加载背景光的方法能够实现LiNbO 3 晶体由自散焦向自聚焦的转换并形成亮空间孤子。以LiNbO 3 晶体为例，给出了折射率空间分布与光伏常数比 之间的关系，给出了亮光伏孤子的存在曲线。进一步采用相干密度法理论分析了非相干亮光伏孤子在LiNbO 3 晶体中的传输特性，并利用分步傅里叶算法数值模拟了 值对孤子形成的影响。此外，非相干亮光伏孤子的形成还受强度比值 和光源角功率谱宽度 的影响。通过加载背景光的方法可以实现无偏压条件下亮暗孤子的切换，这对基于孤子的全光器件研究提供可靠性参考。 关键词 :空间孤子，自散焦向自聚焦转换，空间演化，相干密度法
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user: 1. 引言 光折变空间孤子在光开关、光互联等非线性光器件方面具有巨大的潜在应用价值，近二十年来受到人们的广泛关注。通常情况下，光折变空间孤子分为准稳态孤子 [ 1 ] ，屏蔽孤子 [ 2 ] 和光伏孤子 [ 3 ] 三种类型，而后两者尤其引人注目。屏蔽孤子和光伏孤子形成的物理机制不同。屏蔽孤子在外加偏压作用下通过非线性效应改变材料折射率，从而形成空间孤子；光伏孤子的形成不需要外加电场，光照区激发载流子，在光伏效应下形成孤子，具有很强的光伏电流。铁电晶体中，空间电场的形成是载流子沿轴向迁移累积的结果。在开路条件下( )，光伏晶体的折射率变化为 ，其中 ， ， ， 和 分别为光束强度，暗辐射，无微扰折射率，有效电光系数和最大光伏场。在自聚焦光伏材料中，折射率变化是正值，可以形成亮光伏孤子 [ 4 ] ；在自散焦材料中，折射率变化为负值，能够产生暗光伏孤子 [ 5 ] 。该类型亮、暗光伏孤子在理论和实验上已经得到证明，其诱导的波导和方向耦合器也被实验研究 [ 6 ] - [ 8 ] 。与传统光伏空间孤子不同，通过加载背景光的方法可以实现光伏晶体自散焦与自聚焦的相互转换，这一现象由Anastassiou等人于1998年首次报道 [ 9 ] 。随后，刘思敏课题组研究了背景光照对材料自散焦和自聚焦转换的影响 [ 10 ] [ 11 ] 。2006年，佘卫龙等人在LiNbO 3 晶体中实验观察到二维亮光伏孤子 [ 12 ] 。随后几年，卢克清课题组在LiNbO 3 晶体中实验观察到一维亮光伏孤子，并分析了该孤子的调制不稳定性 [ 13 ] [ 14 ] 。然而，关于LiNbO 3 晶体中亮光伏孤子空间传输的动态演化特性却研究很少。非相干空间孤子的发现为孤子科学和非线性光学科学开辟了新的研究领域，在过去的十几年间一直是国际科研工作者研究的热点问题。目前，关于非相干孤子在理论上和实验上虽然都有较为完备的论述 [ 15 ] [ 16 ] ，但在自散焦光折变晶体中形成的非相干亮光伏孤子，其非线性传输特性还未曾报道。研究该新型亮光伏孤子的动态演化特性对基于孤子全光器件的设计具有重要意义。 本文以Vinetskii-Kukhtarev带输运模型为基础，理论研究了自散焦介质中亮光伏孤子的形成机理及其动态演化特性，分析背景光对晶体折射率变化和孤子传输特性的影响。选用LiNbO 3 晶体为例，首先计算了折射率空间分布随背景光与孤子光的光伏常数比值 之间的关系，给出了亮光伏孤子的存在曲线。然后，进一步采用相干密度法理论描述了非相干光伏孤子的传输特性，并利用分步傅里叶算法数值模拟了非相干高斯光束在不同 值下的传输特性，分析背景光对非相干孤子空间演化特性的影响。此外，理论研究了强度比值 和光源角功率谱宽度 对非相干亮光伏孤子形成的影响。
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user: 2. 自散焦介质中的带输运模型 在光折变晶体中，光折变效应由标准速率方程，连续性方程和高斯定律描述，其理论基础为单电子载流子模型。假设光强为 的孤子光束沿 轴传播，只在 方向发生衍射，其偏振方向与晶轴平行，并且晶轴与 轴平行。另外，假设有一束均匀背景光照射晶体，强度为 ，其偏振方向与晶轴垂直。在一维稳态条件下，上述方程可表述为 [ 9 ] [ 12 ] [ 13 ] ( 1a ) (1b) ( 1c ) (1d) (1e) 上式中 为电离施主浓度， 为自由电子密度， 为电流密度， 为晶体内的空间电场， 为晶体的暗辐射率。相关的晶体参数为总的施主密度 ，负电子受主密度 ，复合系数 ，低频介电常数 ，电子速率 ，波尔兹曼常数 和绝对温度 。 ， 分别为孤子光束和背景光束的光致电离交叉系数。 是背景光和孤子光的光伏常数之比，与材料和入射波长有关。在方程( 1a )-(1d)中，根据欧姆定 律我们得到 ，其中 是晶体电极之间的电压， 是两个电极之间的宽度， 是电极的表面面积， 是外加电阻。 在方程( 1a )-(1e)中， 忽略材料的扩散效应， 和电子密度 ，由于 ， ，可以得到空间电场 [ 9 ] (2) 在开路条件下( )，忽略晶体的暗辐射，方程(2)可化为 (3) 其中 。将方程(3)代入折射率变化公式 ，得 (4) 其中 ， 。 为归一化光强。 的符号由参数 和 共同决定。在LiNbO 3 晶体中， ，背景光强度是均匀的， 的空间分布由 决定。图1是 分别取0，0.5，1，1.5，2时，LiNbO 3 晶体折射率变化随孤子光强度变化的曲线。图中显示，当 包含 时，折射率的变化随着 的增加而减少，晶体表现出自散焦现象，可以形成暗孤子；当 时，折射率的变化随着 的增加而增加，表现出自聚焦现象，满足亮孤子形成条件；当 时， 是常数，孤子光束既没有自散焦现象也没有自聚焦现象，犹如透过线性介质，不能形成孤子。因而，在自散焦晶体中 随 的变化规律取决于光伏常数之比 ，而 的大小与晶体和入射波长有关。对于LiNbO 3 晶体来说，短波长的光具有较大的光伏常数，为了得到 的亮孤子条件，入射的背景光必须比孤子光波长短。但无论 取何值，折射率变化 始终为负数，不能改变晶体类型。 以高斯分布的信号光为例，其光强可表示为 ，如图2(a)所示在。将该 高斯光束入射到LiNbO 3 晶体，并加一束强度均匀的背景光束。晶体折射率变化的空间分布除了与入射光束的强度分布有关，同样与两束光的光伏常数之比 有关。图2(b)和图2(c)分别为高斯信号光照射下 和 时晶体折射率的空间分布图。从图2看到，在自散焦LiNbO 3 晶体中，当 时，折射 图1. 折射变化在不同 值下随强度变化 图2. (a) 高斯入射光强度包络；折射率的空间分布; (b) ; (c) 率中间小边缘大，类似于凹透镜，具有自散焦效应，如图2(b)所示；当 时，晶体折射率中间大边缘小，类似于凸透镜，具有自聚焦效应。虽然 取不同数值会改变折射率的空间分布，表现出自散焦或者自聚焦现象，但折射率变化始终是负值。
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user: 3. 亮光伏孤子形成 假设信号光场 ( )， 是自由空间中的波长，在慢变幅近似和傍轴近似条件下，满足标量波方程 (5) 这里 由方程(4)表示。假设满足方程(5)的孤子解具有形式 (6) 是孤子的传输常数， 是归一化振幅。将方程(2)和(6)带入方程(5)，可得方程 [ 8 ] (7) 方程中 ，无量纲参数 ，而 。方程中的正负号与 符号一致。 在开路条件下( )，选用LiNbO 3 晶体，方程(7)化为 (8) 当 ，且满足边界条件 ，及初始条件 ， ，方程(8)可以得到亮孤子。 利用LiNbO 3 晶体的参数， ， ， ， ，数值求解方程(8)可以得到亮光伏孤子解。图3描述了 分别为1.1，1.5，2三种情况下亮孤子的归一化强度。从图中看到，随着 值的增大，亮光伏孤子的宽度逐渐变窄，晶体内光学非线性效应增加。 调节信号光和背景光的强度，假设 是 处孤子峰值强度与 处光强之比，若将 代入方程(8)，通过数值求解方法可以得到亮光伏孤子宽度随光强比值 的变化曲线，如图4所示。从图中看到，当光强比值在1附近，孤子具有最小宽度；当光强比值逐渐变大时孤子宽度也增大；而在光强比值小于1时，随着强度比值的减小，孤子宽度急剧增大，形成的孤子具有不稳定性。LiNbO 3 晶体中所形成的亮光伏孤子与传统光伏孤子具有类似的存在曲线。 所以，光伏孤子和屏蔽孤子在折射率变化方面主要有两点不同。首先，屏蔽孤子的折射率变化可以通过改变外加电场得到控制，电场的极性决定着 的符号。对于光伏孤子来说，折射率变化 的符号取决于电光系数 和光伏常数 。对于给定的波长和偏振，该系数是不变的(比如，LiNbO 3 的 ，BaTiO 3 的 )。另外，对于屏蔽孤子和传统光伏孤子来说，加一束背景光不会增加新的物理现象，只能增加背景光在晶体导带中载流子浓度，相当于增加了晶体的暗辐射系数 。而对于LiNbO 3 晶体中的亮光伏孤子来说，背景光束增加了一项额外的光伏电流，实现了自散焦向自聚焦转换的新物理现象。 图3. 亮光伏孤子在不同 值下的归一化强度包络 图4. 时亮光伏孤子的半高全宽随孤子峰值与背景光比值的变化
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user: 4. 相干亮光伏孤子的演化特性 LiNbO 3 晶体为非瞬时非线性介质，对光强分布具有慢时间响应。若入射一束空间非相干信号光，可以看作由一组相干成分组成，各个相干成分相互作用并受非线性效应影响。晶体在信号光和均匀背景光共同作用下，折射率变化可用公式(4)表示。在稳态条件下，非相干光束的演化过程可由下列一组类似耦合非线性薛定谔方程描述 [ 15 ] [ 16 ] ， (9) (10) 方程(9)-(10)中， 为离散的指数( )， 为第 个“相干分量”与传输方向的夹角， 为非相干光束中的分量，即相干密度函数， 为非相干光束的归一化光强。方程(9)和(10)描述了在 情况下，光伏晶体中非相干光由自散焦向自聚焦转换的物理过程。 假定相干密度函数在初始位置 处的表达式为 (11) 其中， ， 为亮非相干光束的最大光强(即： ) 为归一化的非相干光源的角功率谱， 为空间调制函数。 假定非相干光源的归一化角功率谱具有高斯分布形式，即 ，其中 为角功率谱的宽度。在考虑亮非相干空间孤子时，空间调制函数在输入位置取为高斯函数，即 ， 与光束半高宽度(FWHM)之间的关系为 。选择 LiNbO 3 晶体，参数与图3相同，取 ，光源的角功率谱 ， ，即非相干高斯光束的半高全宽为 。利用分步傅里叶算法数值模拟方程(10)，得到归一化的非相干高斯光在不同 值下的演化曲线，如图5所示。图5(a)为 时光束的演化过程，信号光传输6 mm后半高宽度在自散焦作用下展宽。若晶体采用一束更短波长的背景光照射晶体，使得 ，则光束自陷效应开始产生。图5(b)和图5(c)分别为 和 时光束的演化过程。此时，晶体表现出自聚焦效应，非相干光束中的各相干分量融合在一起，无弯曲向前传输形成稳态的孤子，如图5(c)所示。若 值继续变大，晶体的自聚焦效应更强，光束进一步塌陷。图5(d)为 时光束传输的演化图，在此过程中，光束压缩或展宽均有可能。上述现象也与之前非相干孤子的实验观察相吻合。 现在考虑较高强度比值 和较大角功率谱宽度 对非相干光传输的影响。图6(a)是非相干高斯光束在 ， ， 条件下的传输曲线。随着传输距离的增加，高斯光束出现展宽，且具有 图5. 初始半高宽度为 ， ， 的非相干高斯光束归一化包络演化图；(a) ; (b) ; (c) ; and (d) 图6. LiNbO 3 晶体中非相干高斯光束的传输，光束参数为 ， ， (a) ， ; (b) ， 不规则性。在相干极限情况下，这一展宽归结为 时饱和光折变非线性效应。在数值模拟过程中发现，角功率谱宽度 对光束传输也具有重要作用。图6(b)描述了 ， ， ，和 时非相干高斯光束的传输过程。从图中看到，光束传输6 mm后展宽为类似于矩形形状。总之，在满足图5(c)所形成的亮光伏孤子条件时，若提高强度比值 和角功率谱宽度 ，均会破坏孤子的形成。如果要克服衍射效应形成孤子，需要背景光提供更大的光伏效应。
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user: 5. 结论 总之，本文理论研究了LiNbO 3 晶体中一维亮光伏孤子的形成机理以及动态演化特性。通过加载背景光的方法使得自散焦晶体实现自聚焦的转换并形成亮光伏孤子。文章以自散焦LiNbO 3 晶体为例，计算了折射率空间分布与光伏常数比值 之间的关系，并给出了亮光伏孤子的存在曲线。研究发现，在 时，折射率分布类似于凹透镜，可形成暗光伏孤子；在 时，折射率分布类似于凸透镜，可形成亮光伏孤子。该研究结果对无偏压的全光孤子器件设计提供可靠性参考。另外，文章进一步采用相干密度法理论研究了非相干亮光伏孤子在自散焦晶体中的演化特性，并利用分步傅里叶算法数值模拟了不同 ，强度比值 和角功率谱宽度 对非相干亮光伏孤子形成的影响。这里 值越大，非线性效应越强，自聚焦效应越明显。在 较大时或角功率谱宽度 较小时存在调制不稳定。上述研究结果对基于孤子的光器件研究具有一定的理论指导。
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user: 摘 要 目的：构建过表达西藏小型猪GHR基因显负性突变体的慢病毒载体，并对其进行功能验证。方法：首先以pRLG3A为模板，PCR扩增CAG启动子，In-Fusion克隆至Cla I/BamH I双酶切的pCD550A-1载体中，替换其EF1α启动子，获得pCAGGP；然后从西藏小型猪肝脏组织cDNA中PCR扩增GHR基因的显负性突变体片段(dnGHR)；最后将dnGHR片段插入pCAGGP多克隆位点，最终得到过表达猪GHR显负性突变体的慢病毒载体pCdnGGP。对所构建的质粒进行测序和酶切鉴定。将所构建的pCdnGGP载体转染293T细胞，并将包装好的慢病毒感染猪的胚胎成纤维细胞(PEFs)，倒置荧光显微镜检测GFP表达，收集细胞并提取总RNA检测dnGHR基因在293T细胞和PEFs中的表达，以对pCdnGGP进行体外功能验证。结果：测序和酶切证实成功构建了pCdnGGP。pCdnGGP转染293T细胞以及病毒感染PEFs之后，倒置荧光显微镜下可见绿色荧光，RT-PCR检测证实dnGHR在293T细胞和PEFs中均能正常表达。结论：成功构建过表达猪GHR基因显负性突变体的慢病毒载体，为相关后续研究打下了良好基础。 关键词 :西藏小型猪，GHR，显负性突变体，EGFP，慢病毒载体
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user: 1. 前言 小型猪在解剖、生理生化、心血管系统、消化系统、皮肤系统、骨骼发育、营养代谢等方面与人有较大的相似性，用小型猪作为医学实验动物模型近年来呈越来越普遍的趋势，目前小型猪已广泛应用于心血管疾病、糖尿病、皮肤烧伤、外科、牙科、肿瘤、血液病、遗传病、营养代谢病、新药安全性评价等生物医学研究的多个方面 [ 1 ] - [ 4 ] 。 西藏小型猪是由南方医科大学实验动物中心顾为望教授等人于2004年由西藏自治区引种至广州培育而成的小型猪品系，在近几年，已基于其建立了几种转基因动物模型 [ 5 ] - [ 7 ] 。其具有抗感染能力强、抗逆性好、耐粗饲、体型小、被毛黑而粗的特点。其成年体重在40 kg左右，若能培育出体型更小的微型化西藏小型猪，将大大增加其在生物医学研究中的应用。 生长激素受体(Growth hormone receptor， GHR)是一种由单一基因编码的跨膜蛋白，是细胞因子受体超家族成员之一。GHR在动物生长发育及新陈代谢中发挥重要作用，GHR功能缺失会导致动物生长发育迟缓 [ 8 ] - [ 10 ] 。显负性突变体技术是一种过表达某种蛋白的显负性突变体，使其与正常的蛋白发生竞争性抑制，从而实现某种蛋白功能缺失的技术。目前已有研究者通过在五指山小型猪过表达GHR基因的显负性突变体制备了GHR功能缺失的转基因猪，并发现过表达GHR显负性突变体的转基因五指山小型的体型较野生型猪要小 [ 11 ] 。 本研究拟构建过表达西藏小型猪GHR显负性突变体的慢病毒载体，并对其进行功能验证，以为制备微型化的西藏小型猪奠定基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料与试剂 2.1.1. 载体 载体pRLG3A由美国科学家Manuela Martins-Green教授惠赠 [ 12 ] ，慢病毒载体pCDH-EF1-MCS-BGH- PGK-GFP-T2A-Puro (pCD550A-1)购自System Biosciences (SBI)公司。慢病毒包装质粒psPAX2和pMD2.G由瑞士Didier Trono博士惠赠。 2.1.2. 主要试剂 Trizol裂解液RNAiso Plus (Code No. D9108)、逆转录试剂盒PrimeScript ® RT reagent Kit (Code No. DRR037A)、PCR扩增试剂PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase (Code No. DR010S)、胶回收试剂盒Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0 (Code No. DV805)、DNA克隆试剂In-Fusion ® HD Cloning Kit (Clontech Code No. 639633)、dNTP和Taq酶等购自大连TaKaRa公司，质粒小提试剂盒购自天根公司，质粒大提试剂盒购自QIAGEN公司，限制性内切酶购自大连TaKaRa公司；脂质体转染剂Lipofectamine 2000、高糖DMEM、Opti-MEM Medium和DMSO等购自Invitrogen公司；培养瓶及培养板等购自Corning公司；其余试剂为国产或进口化学纯或分析纯。 2.1.3. 细胞 293T细胞来源和培养方法等参见文献 [ 13 ] ，西藏小型猪胚胎成纤维细胞(PEFs)的分离和培养参见文献 [ 14 ] 。以上细胞所用培养基为含10%胎牛血清的DMEM。 2.2. 方法 2.2.1. 构建过表达猪GHR显负性突变体的慢病毒载体pCdnGGP 首先以质粒pRLG3A为模板，PCR扩增CAG启动子(1740 bp)，In-Fusion克隆至Cla I/BamH I双酶切的pCDH-EF1-MCS-BGH-PGK-GFP-T2A-Puro载体(回收其中的7980 bp片段)中，替换其EF1α启动子，获得pCAG-MCS-BGH-PGK-GFP-T2A-Puro (pCAGGP) (9720 bp)；然后从西藏小型猪肝脏组织cDNA中PCR扩增GHR基因的显负性突变体片段(dnGHR) (GHR基因第1~7号外显子，在7号外显子后引入3’-aaggaaaattag-5’终止序列，共888 bp) [ 11 ] ，克隆进pMD18-T-simple，获得pMD18-dnGHR-C1；最后，从pMD18-dnGHR-C1载体中PCR扩增dnGHR片段，插入pCAGGP多克隆位点，最终得到过表达猪GHR显负性突变体的慢病毒载体pCAG-dnGHR-BGH-PGK-GFP-T2A-Puro (pCdnGGP) (10，608 bp)。对每一步所构建的质粒进行测序和酶切鉴定。 2.2.2. pCdnGGP体外功能验证 借助Lipofectamine TM 2000将pCdnGGP和对照载体pCD550A-1转染入293T细胞，进行慢病毒LV-CdnGGP和LV-con包装，用包装好的慢病毒LV-CdnGGP和LV-con感染PEFs，慢病毒包装和感染的方法参见文献 [ 13 ] ，使用嘌呤霉素对感染后的细胞进行筛选，直到筛选到GFP全阳性的PEFs。在转染48小时和病毒感染后96小时以及嘌呤霉素筛选7天后，倒置荧光显微镜检测GFP表达，从生产慢病毒时转染了pCdnGGP、pCD550A-1的293T细胞以及嘌呤霉素筛选完成后的LV-CdnGGP和LV-con感染的PEFs中提取总RNA，进行逆转录，RT-PCR检测细胞中dnGHR基因表达，以对载体pCdnGGP进行体外功能验证。RT-PCR所用的引物为pdnGHR-F:GATCCACCCATTGGCCTCAA，pdnGHR-R:CATCTGCAT TGGGAGGTGGT，dnGHR的PCR产物为100 bp；猪GAPDH引物为：pGAPDH-F：TTGGCTACAGCAACA GGG，pGAPDH-R：CTGGGATGGAAACTGGAAGT，产物大小为186 bp；人GHPDH引物为：hGAPDH-F：ACCCAGAAGACTGTGGATGG，hGAPDH-R：TCTAGACGGCAGGTCAGGTC，产物大小为200 bp。PCR反应中以上三对引物均设置60℃退火温度，30个循环。
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user: 3. 结果 3.1. 慢病毒表达载体pCdnGGP构建和鉴定 所需构建的载体pCdnGGP的结构示意图如图1(a)所示，pCdnGGP载体构建分三步进行。 3.1.1. 西藏小型猪GHR基因显负性突变体的扩增 从两份西藏小型猪肝脏组织cDNA样品中成功扩增GHR基因编码区(1718 bp)，并进行测序，两个样品的测序结果一致。设计PCR引物将GHR基因编码区前876 bp片段(第1~7号外显子)扩增出来，其中下游引物5’端添加带有终止密码的3’-aaggaaaattag-5’序列，PCR产物共888 bp，命名为dnGHR片段。将dnGHR片段克隆进pMD18-T-Simple，挑取单克隆测序，获取序列完全正确的pMD18-dnGHR质粒。 3.1.2. 载体pCAGGP构建 以质粒pRLG3A为模板，PCR扩增CAG启动子，取产物5 μl进行1%琼脂糖凝胶电泳，出现一条带与预测值1740 bp相符(图1(b)；Lane 2：Insert DNA)。将此产物In-Fusion克隆至利用Cla I和BamH I双酶切的CD550A-1 (图1(b)；Lane 1：Vector DNA) (回收7980 bp片段作为Vector DNA)中，获得所构建的载体pCAGGP。pCAGGP经Bam HI酶切并电泳可见一条带，其长度与理论预测值相符(图1(b)；Lane 3)； 图1. pCdnGGP结构示意图及载体酶切鉴定 pCAGGP经Nde I酶切产生两条片段，其大小与理论预测值相符(图1(b)；Lane 4)；pCAGGP经Sal I和BamH I酶切产生的两条带亦与预测值一致(图1(b)；Lane 5)。同时，对pCAGGP质粒进行测序，结果与预期相符(结果未显示)。 3.1.3. 载体pCdnGGP构建 以pMD18-dnGHR为模板，PCR扩增dnGHR片段，取产物1 μl电泳可见一条带，与预测值888 bp相符(图1(c)；Lane 2：Insert DNA)。将此产物In-Fusion克隆至利用Xho I酶切的pCAGGP (图1(c)；Lane 1：Vector DNA)中，获得所构建的载体pCdnGGP。对pCdnGGP质粒进行测序，结果与预期相符(结果未显示)。pCdnGGP经Xho I单酶切电泳可见一条带，其长度与理论预测值10，608 bp相符(图1(c)；Lane 3)；经Nde I单酶切电泳可见两条带，其长度与理论预测值2322 bp和8286 bp相符(图1(c)；Lane 4)；pCdnGGP经EcoR I和Kpn I双酶切则可产生两条带，其大小与预测值3636 bp和6972 bp一致(图1(c)；Lane 5)；以上结果表明pCdnGGP构建成功。 3.2. 慢病毒包装 借助Lipofectamine TM 2000将pCdnGGP和对照载体pCD550A-1转染入293T细胞后48小时，倒置荧光显微镜下观察到被转染的293T细胞中可见绿色荧光，证明转染成功(图2)。 3.3. 慢病毒LV-CdnGGP感染PEFs 将包装好的慢病毒LV-CdnGGP感染PEFs之后，96小时可见部分细胞有绿色荧光表达(图3(a)、图3(b))，证明慢病毒包装成功，之后细胞培养液中加入2 μg/ml嘌呤霉素对转基因阳性的PEFs进行筛选，每两天换液一次，在筛选7天后可见大部分PEFs均带有绿色荧光(图3(c)、图3(d))，筛选完成后的PEFs使用加入1 μg/ml维持浓度嘌呤霉素的培养基进行培养。 3.4. RT-PCR检测在pCdnGGP转染的293T细胞和LV-CdnGGP感染PEFs中dnGHR的表达 RT-PCR结果显示，在转染pCdnGGP的293T细胞和感染LV-CdnGGP的PEFs中，均实现了dnGHR转基因的表达(图4)。以上这些证明所构建的慢病毒载体pCdnGGP能在细胞中实现dnGHR的正常表达，为接下来的相关研究奠定了坚实的基础。
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user: 4. 讨论 猪的GHR基因位于第16号染色体，包含10个外显子，其中1~7号外显子编码GHR胞外结构域(生长激素结合域)和跨膜结构域，8~10号外显子编码GHR胞内结构域。已有文献表明，GHR基因敲除的小鼠和猪均会出现生长受抑制的现象，体型较野生型小鼠和猪要小 [ 10 ] [ 15 ] 。同时，也有研究者通过过表达仅含有GHR基因胞外结构域和跨膜结构域的突变体，使GHR突变体与动物体内的生长激素结合，从而造成野生型GHR功能被竞争性地抑制，造成显性负效应，通过此方法制备了过表达GHR显负性突变体的五指山小型猪，这些转基因猪也出现生长受抑制的现象 [ 11 ] 。 本研究成功构建了过表达西藏小型猪GHR显负性突变体的慢病毒载体，从基因层面上检测到其能实现目的转基因在PEFs中的过表达。接下来可以利用此慢病毒载体，制备GHR功能缺失的转基因西藏小型猪，从而创制体型更小的微型猪品系。 本研究构建的慢病毒载体包含CAG启动子调控dnGHR表达的元件，同时，在同一载体上还包含了PGK启动子调控报告基因GFP和嘌呤霉素抗性筛选基因的元件。GFP的引入有利于通过绿色荧光来监测目的基因在转基因细胞以及在转基因动物体内的表达，也有助于转基因猪可视化筛选和鉴定，嘌呤霉素抗性筛选基因的设置有助于转基因阳性细胞的筛选。 图2. pCD550A-1和pCdnGGP分别瞬时转染293T细胞(病毒包装) 图3. 慢病毒LV-CdnGGP感染PEFs 图4. RT-PCR检测pCdnGGP转染的293T细胞和LV-CdnGGP感染的PEFs中dnGHR表达
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user: 摘 要 本文以《中国统计年鉴》中1980~2014的时间序列数据为基础对我国出口与进口关系进行分析，通过对进出口序列平稳性和协整研究，建立了进出口贸易误差修正模型。结果表明：中国的进口与出口交易数量之间存在着长期均衡的关系。建立误差修正模型进而深入研究序列短期波动关系，误差修正模型系数反映了长期均衡关系对短期波动具有较强的调整力度。 关键词 :进出口，协整，误差修正模型
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user: 1. 引言 改革开放以来，我国经济高速发展，国民经济实力大幅上升。人民收入水平普遍提高，生活质量得到改善。经济的快速发展离不开进出口贸易的贡献率，我国进出口贸易不断发展，对外开放水平不断提升。从经济角度出发，进出口在我国GDP中所占地位举足轻重，进口和出口相互作用共同促进着我国经济的快速增长。伴随着世界市场的不断发展，国际分工的深化，各国在经济上相互依赖的加强，对外贸易日益成为一个国家对外经济关系的基础。各个国家越来越重视发展对外贸易关系，对外贸易在各个国家经济发展中也越来越显示出举足轻重的作用。 本文研究的样本数据是1980~2014年中国出口与进口的交易量，从动态数据1980~2014年中国进出口贸易额看，总体上进出口数量不断增加，到2014年，我国进出口总值26.43万亿元人民币，比2013年增长2.3%，我国的对外贸易继续保持了平稳增长，运行保持在合理区间。进出口在经济上起到平衡发展的作用，此外也保证了生产的持续性。在我国社会社会主义经济市场中，不仅商品之间存在供求不平衡，进口和出口数量也存在贸易顺差或出超带来的不均衡问题，研究进出口之间关系从而解决贸易不平衡意义重大。本文主要应用协整理论研究进口、出口两动态序列数据，首先根据协整理论分析进口和出口数量变动存在长期的内在关系，继而利用误差修正模型探索两者之间变化的趋势关联度 [ 1 ] 。