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user: 3. 斑石鲷繁育及苗种培育 3.1. 亲鱼的培育及产卵 鉴于国内关于斑石鲷亲鱼繁育研究的报道基本上为空白，对此，以日本东京都小笠原父岛水产实验基地操作为例。2002年1~4月，通过岩礁域垂钓方式获得了9尾斑石鲷亲鱼(尾叉长43.4~59.1 cm，体重1.9~5.0 kg)，于70 m 3 水槽中进行培育，每日换新鲜海水4次。亲鱼主要投喂磷虾类、乌贼类、竹夹鱼等饵料，每周投喂4~5次进行亲鱼培育，培育水温见图2。2003年4月，亲鱼开始自然产卵，在亲鱼水槽表层排水口处安置493 um的收集网(100 cm × 100 cm × 50 cm)，过滤收集表层水中的卵，成功获得了受精卵，此外，研究中发现，在产卵水温23.0℃~23.9℃之间，斑石鲷产卵量及上浮卵率达到最高；21.0℃~21.9℃产卵量及上浮卵率最小(见图3) [ 6 ] 。Park等也通过自然采捕的方法获得繁殖期亲鱼(全长24.5~26.7 cm)，采用干法人工授精成功获得了受精卵 [ 17 ] 。熊井等 [ 18 ] 通过延长日照和升温的协同处理2个月，斑石鲷可在2~3月早期成功产卵，上浮卵率为15.1~97.5，平均82.5。目前，斑石鲷研究较为成熟的日本均采用野生捕捞、亲鱼培育、自然产卵的模式获得受精卵 [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] 。 图2. 2002~2003年斑石鲷亲鱼培育水温变化(川辺勝俊，2007) 图3. 斑石鲷亲鱼不同产卵温度下，斑石鲷产卵量及上浮卵率变化(川辺勝俊，2007) 3.2. 杂交 斑石鲷和条石鲷为同一属鱼类，而且具有类似的栖息习性、产卵期及产卵时间 [ 22 ] [ 23 ] ，这为杂交育种提供了最基本的条件。有研究表明雄性斑石鲷染色体数47，核型为2n = 1m + 2sm + 44t，臂数NF = 50，雌性斑石鲷染色体数48，核型为2n = 2sm + 46t，臂数NF = 50，雄性具有异形性染色体且染色体数目比雌性少一条，性别决定类型符合X 1 X 1 X 2 X 2 /X 1 X 2 Y [ 24 ] 。与同属的近缘物种条石鲷Oplegnathus fasciatus的核型报道相似 [ 25 ] [ 26 ] 。鱼类杂交育种中核型越相近，杂交成功率越高 [ 27 ] 。由此可见，斑石鲷与同属的条石鲷的杂交育种在细胞遗传学上具有可靠的理论基础。此外，末吉，摩耶子等 [ 28 ] 在日本长崎市半岛沿岸捕获到了野生的斑石鲷和条石鲷的杂交后代；Kwun等在韩国南部海域也有同样的发现 [ 29 ] ，其杂交后代体表同时具备了黑色条带及圆斑点(图4)。 2007年，Shimada等 [ 16 ] 开展了相关的杂交试验，在水温21.4℃~24.2℃条件下，通过人工授精获得了O. fasciatus (♀) × O. punctatus (♂) (配对组1)及O. punctatus (♀) × O. fasciatus (♂) (配对组2)的受精卵，结果表明组1卵上浮率91.4%，胚胎发育率70.8%，孵化率46.7%；而组2卵上浮率72.4%，胚胎发育率70.8%，孵化率83.8%，可见，在人工授精的模式下，成功获得了斑石鲷和条石鲷的杂交后代，而且O. punctatus (♀) × O. fasciatus (♂)的配对组合更优。 3.3. 胚胎发育及仔稚鱼形态特征 斑石鲷受精卵为透明，圆形浮性卵，卵径为1.009~1.095 mm，并含有一个油球，直径为0.2519~0.2561 mm，在海水中为自然悬浮状 [ 4 ] [ 6 ] [ 9 ] 。在水温(22 ± 1)℃，pH 8.0~8.2，盐度29‰ ± 0.5‰的条件下进行孵化，历经32 h孵化出膜，初孵仔鱼全长3.49 ± 0.12 mm，卵黄长径0.85 ± 0.12 mm，短径0.37 ± 0.03 mm，油球径0.22 mm左右，胚胎发育时序见表1 [ 9 ] 。胚胎发育及仔稚鱼形态见图5。初孵仔鱼卵黄囊较大，背腹鳍褶清晰可见，仔鱼体侧、背部以及油球部均分布着辐射状星形黑黄色斑点，口和肛门关闭。4日龄仔鱼(3.53 ± 0.52 mm TL)开口、肛门与外界相通，胸鳍延伸至第二体节。12日龄仔鱼(4.62 ± 0.26 mm TL)尾部鳍条开始形成，身体背腹侧的辐射状黑黄星斑消失，在其背部及腹侧形成8~10个点状色斑，肛门位于身体的1/2处。15日龄仔鱼(7.24 ± 0.78 mm TL)脊索开始弯曲，背鳍、臀鳍鳍条出现，鳍褶开始退化。22日龄仔鱼(12.40 ± 0.28 mm TL)鳍褶消失，各个鳍分离，背鳍硬棘5个，软鳍条16个，腹鳍硬棘1个，软鳍条4个，臀鳍硬棘3个，软鳍条7个，此时在鱼体表色素开始沉积，在身体两侧的皮肤中，已经出现离散分布的黑色圆斑点。30日龄稚鱼(17.30 ± 1.06 TL)各个鳍开始黑色素附着，体圆形斑点进一步增多，牙齿、鳞片出现。35日龄幼鱼(23.30 ± 2.33 TL)各鳍发育完善，体表及鳍均匀分布着许多圆形斑点，斑石鲷特有的体色及花纹形成 [ 17 ] 。 图4. 条石鲷和斑石鲷的天然杂交种(末吉，摩耶子，2009) 图5. 斑石鲷胚胎及仔稚鱼形态 Table 1 Development time of embryos O. punctatu 发育时间 Time after fertilization 发育阶段 Developmental stage 30 min 2细胞期 2-cell stage 50 min 4细胞期 4-cell stage 1 h 10 min 8细胞期 8-cell stage 1 h 25 min 16细胞期 16-cell stage 1 h 45 min 32细胞期 32-cell stage 2 h 64细胞期 64-cell stage 2 h 30 min 桑葚胚期 Morula stage 3~4 h 高囊胚期 High blastula stage 4~5 h 30 min 低囊胚期 Low blastula stage 5 h 30 min 原肠早期 Early gastrulae stage 9 h 原肠中期 Middle gastrulae stage 11 h 40 min 原肠晚期 Telophase gastrulae stage 15 h 30 min 胚孔关闭 Blastopore closed 25 h 心跳期 Heartbeat period 27~32 h 孵化期 Hatching period 32 h 初孵仔鱼 Newly hatched larvae 表1. 斑石鲷胚胎发育时序 3.4. 仔稚鱼培育管理 日本培育斑石鲷苗种的技术工艺已经较为成熟，以2006年小笠原父岛水产实验基地单次苗种培育过程为例进行简要说明(初孵仔鱼全长3.5 mm至40日龄全长20.83 mm幼鱼，成活率41.5%，畸形率4.3%)：培育池为10 m 3 的角型恒温水槽，培育水温21.1℃~25.9℃；培育用水经过沙虑、紫外线杀菌处理。日换水量在0~2日龄为430%，3~13日龄为250%，14~23日龄为290%，24~30日龄为480%，自31日龄到苗种培育结束时，换水量达到500%。培育期间添加海水眼点拟微球藻Nannochloropsis oculata，一日三次，每次40 L (7:00，12:00，17:00，1500万细胞/ml)。应用37 W荧光灯对养殖期间光照进行控制，0~2日龄时，光照时间为8:00~17:00，强度为200~500 lx，随着仔鱼生长发育，光照时间延长为8:00~21:00，强度为1000~3500 lx。仔鱼开口及开鰾期间，及时去除水面油膜，保证仔鱼生长存活。为防止养殖水体水质及底质恶化，定期清理残饵及粪便。饵料系列：3~34日龄，投喂浓缩淡水小球藻及海洋酵母强化的S型褶皱臂尾轮虫Brachionus rotundiformis，一天2次(8:00，14:00，15~20个/ml)，13日龄(平均全长5.7 mm)开始投喂卤虫无节幼体Artemia sp，每天2次(10:00，15:00)，自30日龄起，每天投喂4次(8:00， 11:00， 14:00， 17:00)，配合饲料自24日龄(平均全长11.2 mm)开始添加，1小时一次，少量多次投喂，从31日龄开始，配合饲料投喂变为1天6次，32日龄(平均全长15.3 mm)增加投喂冷冻桡足类 [ 19 ] 。 仔稚鱼生长特性：王雨福等 [ 9 ] 对斑石鲷早期发育阶段的生长规律及重要器官的异速生长模式进行了研究，结果表明斑石鲷全长、体质量与日龄的关系均符合Cubic函数，随日龄的生长曲线表现为S型。斑石鲷全长和体质量的生长可分为3个阶段：0~21日龄，缓慢生长阶段，生长速度为0.155 mm/d，21~35日龄生长速度大幅度提高为0.794 mm/d，35日龄之后，进入幼鱼快速生长阶段，生长速度为1.455 mm/d，而且斑石鲷仔稚鱼的头长、眼径、吻长、口裂、体高、尾鳍长等形态指标均存在异速生长现象。 3.5. 苗种养成 目前，国内斑石鲷苗种养成主要是工厂化养殖模式，而且取得了较大的进展。以钟鸿干等 [ 11 ] 流水养殖研究为列。一般采用圆形(直径6.74 m，池深80 cm)或切去四角的长方形(池深1.2 m~1.5 m，规格12 m 2 ~36 m 2 )水泥池，具有独立的进排水及排污系统。应用鼓风机和散气石供气，散气石密度为1.5个/m 2 。养殖用水为地下深水井和海水二级砂滤水，经过过滤、消毒及灭菌等处理。养殖水温22℃~30℃，盐度在15‰~33‰，pH 7.3~8.6，氨氮0.3 mg/L以下，溶解氧保证4.0 mg/L以上。养殖密度：根据斑石鲷的生长情况进行调节，放养密度见表2。 投喂策略：采用进口海水鱼专用配合饲料(粗蛋白 ≥ 48.0%，粗脂肪 ≥ 10.0%)，每日投喂1~2次，投喂量根据养殖气温、水温、鱼状态、水质条件等实际情况进行调节，日投喂量占鱼体重的1%~4%。养成过程中定期添加复合维生素免疫多糖、EM菌等添加剂或免疫增强剂，以提高鱼体的免疫力。 养殖效果：体长7 cm~8 cm的斑石鲷苗种2000尾，经过近178天的养殖，成活率达到85.1%，日增重2.69 g，期间共投喂饲料789.3 kg，增重813.7 kg，饵料系数为0.97。 2003年，日本小笠原父岛水产实验基地开展了斑石鲷高密度苗种养成研究 [ 30 ] ，其中苗种为养殖68日龄的幼鱼，规格为全长5.3 ± 0.3 cm，体重3.6 ± 0.7 g，肥满度24.2 ± 1.6。养殖期间水温20.3℃~29.6℃，68~120日龄投喂日本鲷鱼稚鱼用配合饲料(粗蛋白 ≥ 54.0%，粗脂肪 ≥ 4.0%)，121日龄至养成321日龄投喂日本鲷鱼育成配合饲料5P-7P (粗蛋白 ≥ 48.0%，粗脂肪 ≥ 3.0%)，68~222日龄每日投喂2次，223~321日龄每天投喂1次，按鱼体重的1%~3%进行饱食投喂。根据斑石鲷生长情况进行养殖池及密度调整(表3、表4)，密度调整时斑石鲷规格参数见图6。 Table 2 The stocking density of O . punctatu 体重(g) (weight) 放养密度(尾/m 2 ) (stocking density) 30以下 100 50 80 100 60 200 40 300 30 400以上 20 表2. 斑石鲷放养密度 Table 3 The aquaculture pond specification during the different developmental stage of O . punctatu 日龄(day after hatching) 养殖池(aquaculture pond) 68~119 10 m 3 水槽，水体积9 m 3 ，换水量9 m 3 /h 120~162 25 m 3 水槽，水体积19.5 m 3 ，换水量10 m 3 /h 163~321 圆形网箱，直径2 m，深度2 m 表3. 不同养殖阶段斑石鲷养殖池规格 Table 4 The stocking density of O . punctatu 日龄(day after hatching) 放养密度(kg/m 3 ) (stocking density) 92 2.1-3.8 119 4.1-8.5 127 2.6-5.4 139 3.4-3.7 231 16.4-17.6 267 19.9-21.7 294 21.0-23.1 321 23.5 表4. 斑石鲷放养密度 图6. 斑石鲷养殖过程中规格参数变化 养成效果：经过321天的养殖，斑石鲷全长26.8 ± 1.5 cm，体重659 ± 106 g，成活率94.0%，饵料转化率为1.67。综上可知，斑石鲷在人工养殖条件下，生长速度快，成活率高，饵料利用效率高，当年即可达到上市规格，是一种养殖效果非常出色的新品种。 3.6. 病害及防治 斑石鲷常见疾病有烂身病、肠炎病和小瓜虫病等。烂身病主要表现为背鳍、腹鳍靠近头部处溃烂，通常可使用2 ppm诺氟沙星和0.5 ppm~1 ppm利福平可有效治疗；肠炎病主要表现为白便，此时应较少投喂，加大换水量，保证饵料的新鲜度，外加0.5 ppm~1 ppm土霉素和0.5 ppm~1 ppm利福平可治愈；小瓜虫病爆发可引起斑石鲷大量死亡，主要表现为翻转、蹭壁，运动缓慢，食欲下降等，严重时鳃丝失血、肿大粘液增多，体色发白。晚间10点用药，可用150 ppm甲醛和1 ppm碘合用药浴2~3小时，药浴时注意观察鱼体反应，同时配合倒池、减少投喂、加大换水量等措施 [ 11 ] 。另外，范超等在斑石鲷苗种培育过程中，幼鱼爆发大规模死亡，发现病鱼呼吸急促，活力差，体表和鳃丝上附着有大量的卵圆形寄生虫。提取 DNA，经序列测定和比对，鉴定为眼点淀粉卵涡鞭虫，其可以感染斑石鲷并导致鱼苗的大量死亡，应引起高度重视 [ 31 ] 。