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user: 3. 结果 3.1. 对照组与雪茄烟气暴露组小鼠口腔菌群的数目与丰度差异 Figure 1 Figure 1. Composition and abundance of mouse oral microbiome in each group. (A) Venn diagram of ASV set com-position; (B) Venn diagram of Species composition; (C) Relative abundance histogram at the phylum level; (D) Relative abundance histogram at the Genus level; (E) Heat map of genus-level abundance.--图1. 各组小鼠口腔菌群的物种组成及物种丰度。(A) 属水平物种组成Venn图；(B) 种水平物种组成Venn图；(C) 门水平相对丰度柱状图；(D) 属水平相对丰度柱状图；(E) 属水平丰度热图。-- 对照组和不同剂量雪茄烟气暴露组中共检测到562个菌属以及333个菌种，对口腔菌群物种组成进行Venn图绘制，结果如 图1A 和 图1B 所示，共有134个菌属(23.84%)以及29个菌种(8.71%)为各组别小鼠共有，即各组小鼠的核心微生物组。246个菌属(43.77%)以及173个菌种(51.95%)仅存在于某一研究组中，并且有80个菌属(14.23%)以及67个菌种(20.12%)仅存在于进行了雪茄烟气吸入干预的组别中，但这些物种在对照组中并未发现。 经物种组成分析后可知，各组别小鼠口腔菌群在门水平上均以Proteobacteria、Fiemicutes、Bacteroidota这三种菌门最为富集( 图1C )。 图1D 显示了各组包括Rodentibacter、Muribacter、Lactobacillus、Streptococcus等多种菌属在内的相对丰度排名前20的菌属，其中Rodentibacter、Staphylococcus、Megamonas等多种菌属在各雪茄烟气暴露组中丰度均上升，而Lactobacillus、Streptococcus等菌属的丰度则明显减少。根据各样本菌属丰度热图所示( 图1E )，将重要菌属分为三个大类，相较于雪茄烟气暴露组，对照组中自Streptococcus到Pseudoalteromonas的丰度更高，而另外两个大类的菌属则在雪茄吸入的组别中更为富集。 3.2. 对照组与雪茄烟气暴露组小鼠口腔菌群的丰富度和多样性 Figure 2 Figure 2. Abundance and diversity of oral microbiome in each group of mice. (A) Dilution curve based on Sobs index; (B) Dilution curve based on Shannon index; (C) Box plots for intergroup comparison of the Ace index; (D) Box plots for intergroup comparison of the Shannon index.--图2. 各组小鼠口腔菌群的丰富度及多样性比较。(A) 基于Sobs指数的稀释曲线；(B) 基于Shannon指数的稀释曲线；(C) Ace指数组间比较箱式图；(D) Shannon指数组间比较箱式图。-- 基于Sobs指数和Shannon指数进行稀释曲线分析，由 图2A 和 图2B 可知，各样本曲线逐渐趋于平缓，表明测序的深度足够。对各组的Ace指数以及Shannon指数进行组间差异检验，结果显示与对照组相比，中剂量组(p = 0.00013)以及高剂量组(p = 0.0068)的物种丰富度Ace指数显著升高( 图2C )。同时，结果显示，与对照组相比，高剂量组小鼠口腔菌群多样性Shannon指数显著升高(p = 0.00073)，而中剂量(p = 0.28)和低剂量组(p = 0.53)与对照组相比，Shannon指数差别无统计学意义( 图2D )。 3.3. 对照组与雪茄烟气暴露组小鼠口腔菌群的群落组成差异 采用PCA分析对各组小鼠口腔菌群的群落组成进行分析后发现，对照组口腔菌群分布与另外三组雪茄烟气吸入组别的距离较远并且口腔菌群的群落组成存在差异(p < 0.01) ( 图3A )。再次采用基于Bray-Curtis距离算法的PCoA分析对各组的群落组成进行观察，其结果同样显示对照组与雪茄三种剂量干预组之间的距离较远，并且椭圆范围与其余三组之间并无交叉( 图3B )。在进行Anosim分析后可知组间差异大于组内差异(p = 0.001)，即雪茄干预组与对照组之间口腔菌群差异显著( 图3C )。 Figure 3 Figure 3. Community composition of the oral microbiome in each group of mice. (A) Results of PCA analysis of the oral microbiome of four groups of mice; (B) Results of PCoA analysis of oral microbiome in four groups of mice; (C) Results of Anosim analysis.--图3. 各组小鼠口腔菌群的群落组成比较。(A) 各组小鼠口腔菌群的PCA分析结果；(B) 各组小鼠口腔菌群的PCoA分析结果；(C) Anosim分析结果。-- 3.4. 对照组与雪茄烟气暴露组小鼠口腔菌群的物种差异 为寻找不同组间小鼠口腔菌群丰度上具有差异的菌属，先进行多组差异检验并根据相对丰度大小选出排名前10的组间差异菌属(p < 0.05)，这10种菌属分别为Bacteroides、Bergeyella、Blautia、Faecalibacterium、Lactobacillus、Megamonas、Muribacter、Prevotella、Rodentibacter、Staphylococcus ( 图4A )。此外，在进行两组间比较后发现，各雪茄烟气吸入组别的5种共同菌属与对照组之间均存在差异，即Lactobacillus、Megamonas、Prevotella、Rodentibacter、Staphylococcus。Lactobacillus表现为丰度降低，而其余4种表现为丰度上升。与对照组相比，中剂量组Acinetobacter丰度上升，而高剂量组中Blautia、Faecalibacterium丰度上升(p < 0.05) ( 图4B 、 图4C 和 图4D )。 采用线性判别分析效应量(Linear discriminant analysis Effect Size， LEfSe)分析口腔菌群在菌种水平上的差异，LEfSe分析结果显示有44个菌种在各组间差异达到显著水平，其中uncultured_Kroppenstedtia等15种菌种在对照组中富集，Muribacter_muris等9种菌种在低剂量组中富集，Staphylococcus_lentus等6种菌种在中剂量组中富集，Megamonas_funiformis等14种菌种在高剂量组中富集( 图4E )。 Figure 4 Figure 4. Species differences in the oral microbiome of mice across groups. (A) Comparison of intergroup differences between multiple groups at the species level; (B) Comparison of intergroup differences between control and low-dose groups at the species level; (C) Comparison of intergroup differences between control and medium-dose groups at the species level; (D) Comparison of intergroup differences between control and high-dose groups at the species level; (E) LEfSe analysis at the phylum level; (E) LEfSe analysis at the species level.--图4. 各组小鼠口腔菌群的物种差异。(A) 属水平上多组间差异比较；(B) 属水平上对照组与低剂量组之间的组间差异比较；(C) 属水平上对照组与中剂量组之间的组间差异比较；(D) 属水平上对照组与高剂量组之间的组间差异比较；(E) 种水平LEfSe分析。--