DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 肠道微生物组(Gut Microbiome)在癌症研究中的进展 2.1. 肠道微生物组与人类疾病关系进展 肠道微生物组与人体健康密切相关。肠道微生物菌群不仅与免疫系统的形成有关，还与免疫系统之间的相互作用有关 [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ] 。在正常稳态条件下，肠道共生菌被Toll样受体(Toll-like receptor， TLR)识别，在维持肠道上皮细胞内稳态方面发挥至关重要的作用。Rakoff-Nahoum [ 19 ] 在化学诱导小鼠肠上皮细胞损伤的实验中发现，小鼠缺少病原微生物与肠道共生菌所产生的微生物配体或缺乏一种接头蛋白(Toll样受体，Toll-like receptor， TLR)通路中的一个关键接头分子，将会加剧细胞的损伤。可见，机体的健康与疾病状态是病原菌和肠道菌群相互作用的结果。Upadhyay等 [ 20 ] 证明肠道微生物组与免疫应答互作，并通过影响肥胖症形成相关的脂代谢。Russell等人 [ 21 ] 研究发现肠道菌群中的白色念珠菌如果发生突变，其产生的特异性化学物质会影响免疫应答，使免疫系统过分敏感而产生过敏性疾病。总之，微生物菌群与免疫的关系是动态平衡的，微生物菌群一旦失衡或失调将会引起一系列的免疫性疾病、炎症性疾病及癌症的发生。 2.2. 肠道微生物组(Microbiome)与癌症形成机制的研究进展 Wu等 [ 23 ] 通过对19名结直肠癌患者和20名正常人对照组的粪便微生物进行16S rRNA测序，发现拟杆菌的丰度与疾病的发生有一定相关性且与疾病的严重程度呈正相关。健康的结肠上皮细胞覆盖着两层粘液层，即粘液内层和粘液外层，粘液外层附着着大量共生菌群，而内层粘液致密，微生物难以渗入，从而阻止了微生物与宿主结肠上皮细胞的直接接触 [ 24 ] 。一旦有保护性的粘液层遭到破坏，微生物伺机进入与上皮细胞接触形成生物膜，引起炎症性肠病并伴随组织生物学变化 [ 25 ] 。在癌变的细胞中，微生物会影响结直肠癌患者机体的免疫细胞。例如，具核梭杆菌会产生一种特殊的蛋白质参与到T细胞和自然杀伤细胞的免疫受体中从而阻断免疫细胞对肿瘤细胞的毒作用，形成恶性肿瘤 [ 26 ] 。Yongzhi Yang课题组 [ 27 ] 用接种梭杆菌的直结肠癌细胞(CRC)注入BALB/C裸鼠体内，测量移植瘤的增殖情况。通过对比分析发现与没有接种梭杆菌的对照细胞相比，接种梭杆菌Fusobacterium nucleatum)可增加CRC细胞系的增殖和侵袭活性，感染梭杆菌(F. nucleatum)的CRC细胞系在BALB/C裸鼠体内能更迅速地形成更大的肿瘤。Susan [ 22 ] 研究发现肠道微生物组与宿主免疫细胞之间存在一个完整的相互作用网，促进癌细胞的生长并影响癌症的发生发展及发病程度。总体来说，肠道微生物组与癌症的发生机制尚不明晰，有待进一步研究。 2.3. 肠道微生物组在癌症防控方面取得的成果 法国科学家Sophie Viaud [ 28 ] 利用一种环磷酰胺的抗癌药物改变肠道微生物的种群构成，驱使种群中的革兰氏阳性菌进入次级淋巴系统，触发一种特殊的辅助T细胞对肿瘤发动攻击，从而达到杀灭肿瘤的治疗效果。也有些研究人员正在尝试分离微生物制剂或药物来治疗恶性疾病，并取得一些研究成果。例如基于牛分枝杆菌的减毒形式治疗浅表性膀胱癌 [ 29 ] 、利用溶瘤疱菌治疗黑素瘤等新型疗法 [ 30 ] 、利用增生李斯特菌治疗胰腺癌的初步临床试验 [ 31 ] 。Xiaomin Yao [ 32 ] 课题组以携带Nlrp3R258W的突变小鼠进行实验，发现增加调节T细胞诱导加强小鼠反自体炎症能力，使肠道微生物重塑，可维持小鼠肠道内稳态，减少炎症的发生，达到预防疾病的目的。由此可见，很多包括癌症在内的慢性疾病是可预防的 [ 33 ] 。例如Tingting Chen [ 34 ] 等人发现，个体的肠道微生物菌群以利用不同纤维的细菌为主，例如普氏菌与拟杆菌将食物中的纤维发酵成短链脂肪酸(Short Chain Fatty Acids， SCFAs)。其中丁酸作为结肠细胞的首选能量来源，可促进肠道的屏障功能，减少炎症。可见，摄食纤维能优化肠道菌群结构及功能，对疾病的早期防控至关重要。
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user: 3. 肠道微生物组的研究展望 3.1. 肠道微生物组与癌症防控研究展望 肠道菌群在调节炎症性肠病、肥胖、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病和癌症等慢性疾病 [ 35 ] 方面发挥着重要作用，同时在调节焦虑、情绪障碍等神经疾病方面也发挥重要作用 [ 36 ] 。值得注意的是，肠道微生物组一方面可维持人体内稳态(Homeostasis)，另一方面也可能通过细菌产生潜在的致癌毒素和代谢产物对癌症的预防产生负面影响。因此，未来可以通过肠道微生物组及其代谢产物与免疫疗法结合来进行抗肿瘤治疗，也可以和传统的直接靶向恶性细胞方法结合起来进行抗肿瘤治疗 [ 37 ] 。基于肠道微生物组诱导机体的免疫反应及诱癌机制筛选高效抗癌菌株以开发新型高效的抗癌菌剂。 3.2. 肠道等多器官微生物组互作关系研究展望 从现阶段的研究来看，肠道、口腔 [ 38 ] 及呼吸道 [ 39 ] 等微生物组与人体健康均有紧密联系，微生物组结构和功能的改变将会引起机体一系列反应，特别是肠道微生物组与人类健康与疾病关系最为密切。我们可以进行大胆的科学假设：遍布于口腔、眼睛、鼻子、血液、胃肠道等各个器官的微生物组是一个有机联系的动态生态系统，只要其中一些器官的微生物数量、结构或性质发生改变都会引起其他器官微生物组的一系列变化。例如，口腔微生物组的变化是否会引起肠道、血液等微生物的相应变化从而对人体健康产生一定影响，特定的微生物变化将耦合环境因素引起炎症、过敏性反应甚至癌症等疾病发生。因此，同步研究人体不同器官微生物组可能是破解靶器官(病灶)和环境因素互作关系的重要线索。 3.3. 微生物组学相关技术展望 目前，微生物组的技术层面多集中于16S rRNA基因的高通量测序方面。未来我们可利用高通量测序技术进一步挖掘、解读和微生物组中有价值的基因。比如，利用宏基因组学(Metagenomics)与宏转录组学(Metatranscriptomics)、宏蛋白组学(Metaproteomics)、宏代谢组学(Metabolomics)及稳定性同位素示踪(Stable Isotope Probing， SIP)技术高效结合挖掘癌症等疾病相关的重要靶标基因，破解重要靶标基因的表达特征。目前多组学方法及SIP技术虽在微生物组学领域有应用但仍有很大的提升空间。因此，全球范围通力合作及时公开并共享肠道、口腔、肺部、胃部及膀胱等各类癌症相关的微生物大数据信息，实现癌症相关疾病靶向治疗以及个性化医疗，逐一攻克医学界难题以造福人类。
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user: 4. 小结 肠道微生物组与人体免疫细胞之间存在一个动态平衡的相互作用网，肠道菌群一旦失衡或失调将会引起一系列的免疫性疾病、炎症性疾病及癌症的发生。肠道微生物组是一把双刃剑，既可通过维持人体内稳态(Homeostasis)来发挥正向作用，也可能通过细菌产生潜在的致癌毒素对癌症的防控产生负向作用。未来可以通过肠道微生物组及其代谢产物与免疫疗法结合来进行抗肿瘤治疗，也可以和传统的直接靶向恶性细胞方法结合起来进行抗肿瘤治疗，还可以通过摄食纤维优化肠道菌群结构及功能，还可以通过筛选高效抗癌菌株和研制新型高效抗癌菌剂来达到癌症的早期防控目的。 肠道微生物组与癌症的发生虽有一些学说，但肠道微生物组与癌症的发生机制尚不明晰，有待进一步研究。利用现代的宏基因组学(Metagenomics)与宏转录组学(Meta-transcriptomics)、宏蛋白组学(Metaproteomics)、宏代谢组学(Metabolomics)及稳定性同位素示踪(Stable Isotope Probing， SIP)技术相结合，从肠道、口腔、肺部、胃部及膀胱等多器官水平上对人体微生物相关的大数据进行分析和共享，挖掘癌症等疾病相关的重要靶标基因，破解重要靶标基因的表达特征。力争在肠道微生物组与癌症的发生机制方面取得突破性进展，造福全人类。
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user: 摘 要 本文主要研究了两种灵芝多糖的最佳提取工艺，比较两种灵芝多糖含量的不同。采用热水浸提法对灵芝多糖的提取工艺条件进行研究，以多糖得率为评价指标，选用单因素试验和L 18 (3 5 )正交试验法，考察浸提比、pH值、浸提温度、乙醇浓度、浸提时间等5个因素对灵芝多糖得率的影响。确定了热水浸提法提取灵芝多糖的最佳工艺条件是浸提比1:40、pH 7.5、浸提温度90℃、浸提时间1.5 h、乙醇浓度90%。采用Sevage法除游离蛋白，3.5-二硝基水杨酸(DNS)法测定灵芝多糖含量。 关键词 :灵芝，多糖，提取工艺，热水浸提法 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 灵芝[Ganoderma lucidum(Leyss ex Fr)Karst]又称为赤芝、红芝，俗称瑞草、灵芝草；日本人称之为万年茸，其英文名称为Reishi mushroom。根据卯晓兰主编的《中国大型真菌》描述，灵芝属菌物界、真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褶菌目、灵芝科。灵芝的生活史是由成熟的担孢子离开母体开始，当遇到适宜的温、湿度、营养及空气等条件时，孢子萌发成菌丝体。当灵芝菌丝体达到生理成熟后，遇到适宜的条件，菌丝开始分化，在菌丝体表面开始出现纽结，发育成灵芝子实体原基，最后成为子实体。灵芝的开发经历了简单利用灵芝子实体到以子实体发醇菌丝体为原料提取多糖等活性成分 [ 1 ] 、发展灵芝孢子破壁技术提取孢子内涵物的过程。灵芝为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌。 灵芝主要药效成分为灵芝多糖(Ganoderma lucidium Polysaccharide)，具有多种药理学活性功能及保健养生效果 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] ，目前，对灵芝进行了有效成分、药理和临床等方面的研究，就药理作用而言，灵芝具有多种药理活性成分，其灵芝中包含了多肽、多糖、三萜类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸(主含延胡索酸)等10类药理活性成分，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 。而且各药理活性成分在发挥保健及药理作用时各成分之间还体现有协同效应。已从它的子实体、菌丝体和孢子中分离出数十类。灵芝的菌丝体，是其营养体，它是由菌丝体的气生菌丝及分泌物共同组成的一种营养结构。菌丝呈细管状，管壁即细胞壁由葡聚糖、糖蛋白、蛋白质及几丁质微丝等成分组成。子实体灵芝的子实体，是其繁殖体，常因其粘附大量的孢子粉，而使盖面因灰褐色粉末覆盖而失去了光泽 [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] 。灵芝在成熟时可产生数百分子孢子，这些孢子飘散在子实体周围似一阵烟雾一样围绕着灵芝子实体，因此称为孢子粉。灵芝孢子是灵芝的种子，浓缩了灵芝的精华，具有灵芝全部遗传活性物质，药理活性成分更具多样性。在电镜下孢子大小，只有8~12*6~7 μm [ 11 ] 。由于灵芝孢子细胞壁由具有抗压、耐酸和不易酶解的几丁质、树脂和纤维素等成分组成，孢内药理活性成分难以外释，增加了人体对各有效成分的吸收利用难度 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] ，因此采用热水浸提法对灵芝多糖的提取工艺条件进行研究，为灵芝多糖的开发利用提供理论资料和基础技术，它的深入研究和开发将成为中药现代化的一个典范。
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user: 4. 结论 本实验采用热水浸提法对灵芝多糖进行提取，对影响多糖得率的各种因素分析，得出最佳工艺条件为：pH 7.5，浸取温度90℃，乙醇浓度90%，浸提比1:40，浸提时间为1.5 h。最优条件下多糖提取量为0.775%。 由各因素分析表中看出，不管哪个因素影响，结果表明赤灵芝粉中多糖含量多于平盖灵芝粉中的多糖，不同产地的不同种灵芝由于其生长环境、栽培条件的不同，会导致多糖含量的差异，对于灵芝多糖的提取有待进一步的研究。
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user: 摘 要 目的：探索更为有效，更为经济便捷的DME治疗手段。方法：分析2012年6月至2016年5月就诊于我院的DME患者经激光、玻璃体腔注射雷珠单抗/曲安奈德、玻璃体切割手术治疗的98例104只眼，其中男56例58只眼，女42例46只眼，平均年龄为57岁。结果：各组治疗前后视力和CMT变化情况：1) 玻璃体腔内注射TA，在治疗1月和3月时，患者视力有显著提高，CMT明显降低，差异有显著性(p = 0.000)；治疗6月视力稍有提高，CMT较治疗前变化不明显，差异无显著性。2) 玻璃体腔内注射雷珠单抗，在治疗1月时视力显著提高，CMT明显降低，差异有统计学意义(p = 0.001)；在治疗3月和6月时，视力略提高，CMT无明显变化，差异无显著性。3) 在接受黄斑区激光光凝和(或)全网膜光凝，视力在治疗1个月时，略下降，差异无显著性；视力在治疗3月和6月时，视力无变化，差异无显著性。CMT在治疗1月和3月时稍减轻，与治疗前无显著性差异；治疗6月时CMT明显减轻，差异有显著性(p = 0.001)。4) 在接受玻璃体切割术治疗1月、3月和6月时，视力均有所提高，差异有显著性(p = 0.001)。CMT在治疗1月时减轻，差异无显著性；在术后3月和6月时，CMT减轻，较治疗前差异有显著性(p = 0.001)。结论：玻璃体腔注射雷珠单抗和注射TA、黄斑区光凝与玻璃体切割术在治疗DME上都是有效的。在提高视力方面，注药和玻璃体切割术更为有效。玻璃体腔注射TA，效果亦较好，但并发白内障、继发青光眼、眼内炎等并发症较多，要权衡治疗效果与风险而慎重选择，对于严重白内障和人工晶体的患者亦不失为一种很好的选择。激光治疗如果作为首选，尽管视网膜水肿可以消退但视力提高不是很明显。玻璃体切割术效果稳定持久，但需要具备特定的手术条件和手术技术，需要掌握好适应症，可以作为治疗黄斑水肿的常见方法。 关键词 :糖尿病黄斑水肿，雷珠单抗，激光，玻璃体切割，曲安奈德 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema， DME)是糖尿病患者视力损害的重要原因 [ 1 ] 。据国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation， IDF)统计，2013年全球有3.82亿例糖尿病患者，糖尿病在全球的患病率很高，且处于快速增长阶段 [ 2 ] 。中国是全球20~79岁糖尿病患者最多的国家，拥有9800万糖尿病患者 [ 3 ] 。据我国各地区糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy， DR)流行病学调查文献资料 [ 2 ] 和我国各地区糖尿病黄斑水肿(DEM)流行学调查文献资料 [ 2 ] 显示，糖尿病黄斑水肿(DME)与临床有意义的黄斑水肿(clinical significant macular edema， CSME)在糖尿病罹患人群中的发病率分别为5.2% (3.1%~7.9%)和3.5% (1.9%~6.0%) [ 4 ] 。从发病病程来看1型糖尿病病程超过5年的糖尿病患者出现DR的发病率为25%，超过10年者为60%，超过15年以上者高达80% [ 5 ] [ 6 ] 。2型糖尿病5年以内病程者，使用胰岛素与不使用胰岛素治疗的患者中发生视网膜病变的比例为40%和24%，该比例在长达19年以上的患者中分别增加到84%和53%。2型糖尿病患者病程5年以下与25年以上发生增生型视网膜病变的比例分别为2%和25% [ 6 ] 。 糖尿病黄斑水肿(DME)的发病率与血糖控制水平和糖尿病视网膜病变(DR)的严重程度均有关 [ 7 ] ，视网膜病变越重，其发生率越高且DME可以发生在DR的任何时期，因此应加强对DR和DME的防治，探索其发病机理，寻找更为有效的治疗方法和更为经济便捷的治疗手段，一直是眼科临床工作的重点之一。目前治疗DME的主要方法是黄斑局限性或格栅样激光光凝或和全视网膜光凝、玻璃体腔注射曲安耐德(TA)以及玻璃体切除术，剥除或不剥除视网膜内界膜等常见方法。随着抗VEGF药物应用，雷珠单抗(Ranibizumab)商品名Lucentis，我国临床主要应用于老年黄斑变性(AMD)的治疗，应用其治疗DME是一种新方法，这种新方法与常见方法的对比尚缺乏临床大样本多中心研究。本研究收集、整理我院自2012年6月至2016年5月DME患者采用上述不同治疗方法行黄斑水肿治疗，通过测量视力和对黄斑OCT的观察，并行统计学分析，观察各自优缺点，加以对比研究，从而找出临床上更为安全、有效的治疗方法，更好地服务于临床，造福患者。
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user: 2. 临床资料 分析2012年6月至2016年5月就诊于我院，明确诊断为DME的患者98例104眼，其中男56例58眼，女42例46眼，平均年龄为57岁。 2.1. 病例纳入标准 1) 糖尿病诊断明确，经眼科检查确诊为糖尿病视网膜病变的患者； 2) 眼底荧光血管造影FFA及OCT示黄斑区水肿； 3) 经国际标准视力表检查，最佳矫正视力 ≤ 0.4； 4) 屈光间质清； 5) 无青光眼及高眼压； 6) 无其它视网膜疾病、无影响疗效观察的其它眼病； 7) 治疗和随访过程中血糖控制稳定、空腹血糖 < 8.0 mmol/L、无高血压及肾功能损害； 8) 黄斑区未行激光治疗、未接受视网膜或其它眼内手术者。 2.2. 检查及方法 2.2.1. 视力 采用国际标准远近视力表检查患者最佳矫正中心视力并记录结果。 2.2.2. 眼科检查 裂隙灯行前节和玻璃体、眼底检查。 2.2.3. 眼压检查 采用喷气式眼压计连续测量三次取平均值。 2.2.4. 光学相关相干断层扫描(OCT)检查仪器和方 散瞳后采用Topcon OCT进行黄斑中心凹视网膜厚度检查并测量其数值。 2.3. 病人资料 分析整理98例104眼DR患者发生DME，根据不同治疗方法分组。第1组行单纯玻璃体内注射TA3 mg (0.075 ml)共28例28眼。第2组行单纯玻璃体内注射雷珠单抗0.5 mg (0.05 ml)共32例34眼。第3组行单纯激光光凝共18例22眼。 第4组行玻璃体切割+激光光凝共20例20眼。 2.4. 治疗方法 所有患者治疗前均被告知，TA或雷珠单抗或激光光凝治疗或玻璃体切除手术可能发生的并发症。手术前常规准备，所有手术均在手术室进行，按诊疗常规进行。 2.5. 随访观察 所有小组注射结束后，术后1天、7天、2周、1月、3月及6月行视力、眼压、眼底检查，注意观察眼压和晶体混浊情况。对随诊过程中眼压高于21 mmHg的患者给予降眼压药物治疗。 2.6. 统计分析 应用spss13.0统计软件进行分析。计量资料用x ± s表示，计算术前和术后各时间段视力、眼压、视网膜中央厚度CMT变化，同时，比较各治疗组视力和视网膜中央厚度CMT的差异，采用成组设计的t检验，对比两组治疗前后CMT变化，P < 0.05作为差异有统计学意义的标准。
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user: 4. 讨论 4.1. 糖尿病黄斑水肿(DME)是影响糖尿病视网膜病变患者视力的主要原因之一 DME的病理学过程相当复杂，是一个多因素作用的结果，目前，研究证实主要有两大因素：一是内环境的改变。高血糖导致血液系统的变化，视网膜缺血、缺氧，眼内炎症因子浓度改变，血管内皮生长因子浓度升高可以导致血管内皮失代偿，白细胞因子粘附；色素上皮衍生因子浓度下降，蛋白激酶C产物增加会引起血视网膜屏障的破坏 [ 8 ] ，血管通透性增加，黄斑区视网膜内层液体的积聚；高血糖引起细胞内葡萄糖浓度升高，自由基形成，蛋白激酶C激活 [ 9 ] ；高血糖可以导致高级糖基化终产物形成(AGEs， Advanced Glycation End products) [ 10 ] ，研究发现，AGEs浓度升高与眼内炎症因子浓度的变化直接相关 [ 11 ] 。从而导致视网膜神经血管的损伤和糖尿病视网膜病变和黄斑水肿的进展。第二是物理学因素。玻璃体视网膜界面的改变在糖尿病黄斑水肿的形成过程中也是有一定的作用 [ 12 ] 。玻璃体后脱离不完全时对于黄斑区视网膜的牵拉是引起黄斑水肿的重要作用之一。 4.2. 目前，对于糖尿病黄斑水肿的治疗主要有以下几种方法 局部视网膜光凝或格子样光凝，激光光凝治疗弥散性黄斑水肿，激光光斑覆盖整个荧光素渗漏区，目的使阻值或减少异常血管渗漏，促进黄斑水肿和渗出的吸收 [ 13 ] 。EDTRS (Early Treatment Diabetic Retinopathy Study)研究指出，在视网膜增厚或者硬性渗出累及或趋向于黄斑中心凹，并且视力大于0.01的患者，联合应用局部光凝和格子样光凝将视力丧失的危险降低了50% [ 14 ] 。EDTRS研究组推荐EDTRS研究组推荐对于合并黄斑水肿的轻度、对于合并黄斑水肿的轻度、中度非增殖期糖尿病患者采用格栅光凝或直接局部光凝治疗渗漏的微血管瘤，对于严重的非增殖期和所有增殖期糖尿病视网膜病变患者采用全视网膜激光光凝联合局部光凝的办法来治疗。 激光治疗有它的并发症，如中心视力丧失、玻璃体出血、对比敏感度降低、由于激光疤痕引起的视野中心暗点、色觉损害和头痛 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] 。 本研究在激光治疗组中，随访1个月时，视力提高不明显，在随访3个月、6个月时，激光治疗在视力提高方面有改善，但与治疗前相比无统计学意义。在黄斑区视网膜厚度消退方面，6个月组较3个月组和1个月组改善明显，且随着6个月时，黄斑水肿消退与治疗前相比有显著意义。 激光对于局部黄斑水肿疗效较好，但对于弥漫性黄斑水肿，无论从解剖学角度还是从功能角度，治疗效果都不近人意。即使采取多次激光治疗，弥散性黄斑水肿对于激光治疗的反应依然较差。随着随访时间的延长，可以看到并发症相继出现：由于激光导致视网膜外层瘢痕形成，视网膜色素上皮萎缩，这一情况如果发生在黄斑中心凹下就可以导致视力显著下降；同时过度激光引起的视网膜下纤维增殖也导致视力下降。因此，尽管格栅光凝对于弥散性黄斑水肿能取得一定疗效，但在科学飞速发展的今天，这种治疗方法所取得的疗效以不能让医生和患者满意。 玻璃体腔内注药是治疗对于光凝不敏感的DME的有效手段 [ 18 ] 。目前，用于玻璃体腔注射治疗糖尿病黄斑水肿的药物有两类：一类为皮质类固醇类药物，另一类为抗血管内皮生长因子。一直以来玻璃体腔注射的皮质类固醇类药物主要为曲安奈德，这类药物可以减轻炎症反应和血管渗漏，Gillies [ 19 ] Ockrim等 [ 20 ] 报道。本研究在注射曲安耐德组中，视力有改善，视网膜厚度减轻，但有5例患者在治疗后20天出现高眼压，经药物治疗及密切随访2个月后眼压恢复，有1例出现白内障加重，无一例发生眼内炎、球内出血及视网膜脱离等并发症。 血管内皮生长因子(VEGF)当血糖升高，视网膜处于缺血缺氧状态时升高，导致血视网膜屏障破坏，血管通透性增加，视网膜黄斑区水肿。目前雷珠单抗(Ranibizumab)商品名lucentis，能对抗所有VEGF的异构体并已经被美国FDA批准认证。一直以来，还未见大规模随机对照的临床试验用于DME的治疗，仅有一些小的病例报道 [ 21 ] [ 22 ] 。雷珠单抗自2012年引入我国，主要用于湿性老年性黄斑病变的治疗，将雷珠单抗用于治疗DR中DME，尚属新的治疗方法，缺乏我国大样本多中心研究，缺乏与治疗DME常规方法对比。本研究共32例34眼中，在视力方面，注射一针在治疗1个月后视力明显改善，3个月明显回褪，在治疗6个月后视力恢复到治疗前。在黄斑区视网膜厚度方面，治疗1个月时，水肿改善最明显，3个月次之，6个月恢复到治疗前。所有注射雷珠单抗患者无一例严重并发症发生。 在注射组中，我们注意到有的少数患者在注射后黄斑区视网膜厚度恢复而视力没有改善。Gibran等 [ 23 ] 认为对于OCT上内层视网膜具有较高反射的患者，治疗后视力提高的希望较大，反之可能视网膜神经上皮已经萎缩，视力恢复的机会较小。 玻璃体视网膜手术对于部分患者是唯一可行的阻止永久视力损害的选择，没有后脱离的玻璃体后皮质对于黄斑部的牵拉在糖尿病黄斑水肿的形成过程中具有重要作用，因此，对于存在牵拉因素的糖尿病黄斑水肿采取玻璃体切割来治疗，可以取得一定疗效 [ 24 ] [ 25 ] 。然而对于没有牵拉因素的患者采取玻璃体切割的方法也具有一定的疗效 [ 26 ] [ 27 ] ，其原因在于玻璃体切除的同时也降低了眼内导致血管通透性增加的细胞因子以及血管内皮生长因子的浓度。Yamamoto [ 28 ] 和Shimmonagano [ 29 ] 报道的两项回顾性研究表明应用玻璃体切割治疗糖尿病黄斑水肿取得了良好的疗效，黄斑厚度减少，最佳矫正视力提高，且随访两年，保持不变。在我们的研究中，行玻璃体切割术患者20例20眼，在随访1月、3月、半年中，视力均有明显提高，且与治疗前相比有统计学意义。在黄斑区水肿方面，随访1月、3月、半年中，视网膜水肿明显改善，尤其在随访半年时，黄斑水肿和视力改善均很明显。手术过程中无一例发生术后网脱、网膜出血等并发症，仅在2例患者术后治疗发生了白内障加重。 在临床中每种治疗方法和手段都有其优缺点，每位患者都有各自的具体条件和情况，何种治疗手段才能给患者带来最大益处，使患眼视力提高或避免进一步视力损害，这就需要临床医生探索更好的治疗方案或何种组合来使患者受益，是每位临床工作者的追求。
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user: 5. 结论 玻璃体腔注射雷珠单抗和注射TA、黄斑区光凝与玻璃体切割术的治疗都是有效的，但是，在提高视力方面，注药和玻璃体切割术更为有效，玻璃体腔注射雷珠单抗在提高视力方面效果肯定，作用明显，副作用小，但需要反复注射次数多，且价格昂贵。玻璃体腔注射TA，效果亦较好，但并发白内障、继发青光眼、眼内炎等并发症较多，所以，要权衡治疗效果与风险而慎重选择，考虑其价格较低，对于贫困病人及有原发性白内障的病人亦不失为一种很好的选择。激光治疗如果作为首选，尽管视网膜水肿可以消退但视力提高不是很明显，建议在注药消退黄斑水肿后给以适量激光光凝。玻璃体切割术效果稳定持久，但需要具备特定的手术条件和手术技术，需要掌握好适应症，并熟练掌握玻璃体切割技术，可以作为治疗黄斑水肿的常见方法，但该方法技术难度大，费用较高。
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user: 6. 展望(存在问题) 在DME诊断中，目前研究都集中在黄斑中心凹视网膜厚度增加的患者，忽略了水肿尚未累及中心凹的部分患者，这就造成了统计资料上的部分漏诊。 在随访观察中，有部分病例随诊期限较短而未纳入，有部分资料遗漏，要做好健康教育工作，增加患者依从性。 样本量在部分治疗组较少，会因例数较少而产生样本偏倚，需在工作中增大样本量。
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user: 摘 要 对口岸进口大宗资源性商品进行风险评估，依据风险高低优化监管模式，有利于促进“一带一路”贸易便利化。本文用层次分析法建立风险评估数学模型，全面分析进口大宗资源性商品的各种风险源，建立比较矩阵，确定各个风险因素权重，定量分析进口货物风险。 关键词 :资源性商品，风险评估，比较矩阵，层次分析法 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 国内矿产资源不足，而且各地区发展不平衡。在这种情况下，价格相对低廉的可再生资源，必然会存在着较大的市场需求。为减少因矿石、石油等冶炼所产生的污染，同时节约自然资源，降低能耗，进口废物原料作为可再生利用资源，很大程度上弥补了我国工业原材料不足的局面。而中亚地区国家粗炼或烧结物料就是一个很好的选择。但是这却会面临一定的风险，即所谓损失的不确定性。比如在商品中夹杂携带“洋垃圾”等检疫性物质或废物原料，对国内安全造成影响。为保证国内安全的生产生活环境，把危险挡在国门之外，口岸检验检疫部门必须对进口货物进行风险评估 [ 1 ] 。风险评估的方法很多，总体上可分为定性分析与定量分析两大类。对于口岸检验检疫等部门来说，具体的、具有可操纵性风险评估方法却很少。T. L. Satty等人在上世纪70年代提出的层次分析法，是一种定性与定量相结合的、系统化、层次化的分析方法，可有效的用于风险评估 [ 2 ] [ 3 ] 。本文用层次分析法建立口岸进口货物的风险评估模型，尝试定量的对进口货物进行风险识别和评估。
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user: 2. 进口货物风险因素分析 根据进口货物特点及进口相关流程，按照国家相关规定，通过识别风险源，影响范围，事件及其原因和潜在的后果，生成一个全面的风险因素列表，其层次结构如下图1。 图1. 风险评估环节及因素
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user: 3. 风险评估模型的建立与分析 1) 建立比较判断矩阵。 在全面的风险因素层次分析基础上，为成对比较两个不同性质的风险因素对上一层风险因素影响，我们采取1~9比较尺度，其含义如表1。 根据检验检疫部门的专家意见，我们首先建立判断矩阵。 A = [ 1 1 9 1 3 9 1 5 3 1 5 1 ] ，   B 1 = [ 1 2 1 5 1 2 1 2 1 1 7 1 3 5 7 1 3 2 5 1 3 1 ] ，   B 2 = [ 1 1 2 5 7 1 1 2 5 7 1 2 1 2 1 3 5 1 5 1 5 1 3 1 3 1 7 1 7 1 5 1 3 1 ] ，   B 3 = [ 1 3 5 1 3 1 3 1 5 1 3 1 ] 比较矩阵 A = ( a i j ) 3 × 3 表示风险评估中第一层1、产地，2商品，3企业三个因素对货物风险影响的强弱。其元素取值大小的含义如同上表。 矩阵 B 1 ， B 2 ， B 3 分别为风险评估的第三层因素对第二层三个因素的比较矩阵。 B 1 表示产地环节中四个因素1) 商品产地信息，2) 供货商信息，3) 装运前检验，4) 包装方式，在产地环节风险评估中影响的强弱； B 2 表示商品环节中五个因素1) 放射性元素，2) 有害有毒元素，3) 检疫性物质，4) 商品品质，5) 短少重量，在商品环节风险评估中影响的强弱； B 3 表示企业环节中三个因素1) 环保设备及措施，2) 废物加工利用设备，3) 收货商信息，在企业环节风险评估中影响的强弱。 2) 进行一致性检验。 根据层次分析法，根据经验所得比较矩阵可能是有误差的，必须进行一致性检验，只有通过一致性检验，表明误差在可接受的范围之内，根据比较矩阵所计算的权重才是可靠的。对各比较矩阵做一致性检验计算结果见表2： 各矩阵的一致性指标 CR < 0.1 通过一致性检验。 组合一致性检验。 第二层： CR ( 2 ) = CR A = 0.0251. Table 1 Comparison of risk factors 尺度 a i j 含义 1 因素i与因素j影响相同 3 因素i比因素j影响稍强 5 因素i比因素j影响强 7 因素i比因素j影响明显的强 9 因素i比因素j影响绝对的强 2， 4， 6， 8 因素i与因素j影响之比在上述两个相邻等级之间 1 ，   1 2 ， 1 3 ， ⋯ 1 9 因素i与因素j影响之比为因素j与因素i影响之比的相反数 即 a i j = 1 a j i 表1. 风险因素比较尺度含义 Table 2 Consistency test result 矩阵 A B 1 B 2 B 3 最大特征值λ 3.0921 4.0192 5.0742 3.0385 对应单位特征向量ω 0.0908 0.9690 0.2298 0.1912 0.1124 0.9142 0.3392 0.6487 0.6487 0.3613 0.1488 0.0754 0.9161 0.3715 0.1506 CI 0.0145 0.0064 0.0185 0.0193 CR 0.0251 0.0071 0.0166 0.0332 表2. 一致性检验结果 第三层： CI ( 3 ) = ( 0.0064 0.0185 0.0193 ) ( 0.0704 0.7514 0.1782 ) = 0.0178 RI ( 3 ) = ( 0.90 1.12 0.58 ) ( 0.0704 0.7514 0.1782 ) = 1.0083 CR ( 3 ) = 0.0176 CR * = CR ( 2 ) + CR ( 3 ) = 0.0251 + 0.0176 = 0.0427 通过组合一致性检验。 所有判断矩阵均通过一致性检验，从而通过计算得到的指标权重，能够反映各个风险因素对总的风险的相对重要性。 3) 风险因素权重的计算 将各比较判断矩阵最大特征值所对应单位特征向量归一化得到组合权向量分别为 ω A * = ( 0.0704 0.7514 0.1782 ) T ω B1 * = ( 0.1228 0.0722 0.5872 0.2179 ) T ω B2 * = ( 0.3445 0.3445 0.1919 0.0790 0.0400 ) T ω B3 * = ( 0.6370 0.2583 0.1047 ) T ω B = ( 0.1228 0 0 0.0722 0 0 0.5872 0 0 0.2179 0 0 0 0.3445 0 0 0.3445 0 0 0.01919 0 0 0.0790 0 0 0.0400 0 0 0 0.6370 0 0 0.2583 0 0 0.1047 ) 最后可得第三层风险因素对货物风险影响的权向量为： w = ( 0.0086 0.0051 0.0413 0.0153 0.2589 0.2589 0.1442 0.0594 0.0301 0.1135 0.0460 0.0187 ) 4) 示例分析与应用 以评估阿拉山口口岸进口铁矿石的风险为列，通过分析影响风险评估的12个影响因子，根据其发生的可能性和后果的严重程度进行等级打分，可能性从大到小给予1~3分，可控性中可控给予2分、不可控给予1，最后得到：风险评分 = 可能性 × 严重程度。经过检测的本批次进口粗炼或烧结物料的12个影响因子的风险评分如下：[6， 4， 1， 3， 2， 2， 2， 2， 2， 4， 4， 4]。 则依据风险评估计算公式： F = ∑ j = 1 n w j ⋅ c j . 这批货物风险评估值: F = 0.0086 ∗ 6 + 0.0051 ∗ 4 + 0.0413 ∗ 1 + 0.0153 ∗ 3 + 0.2589 ∗ 2     + 0.2589 + 0.2589 ∗ 2 + 0.1442 ∗ 2 + 0.0592 ∗ 2 + 0.0301 ∗ 2     + 0.1135 ∗ 4 + 0.0460 ∗ 4 + 0.0187 ∗ 4 = 2.3746 根据风险评分得出风险等级标准则本批次进口铁矿石为低风险产品，该批货物按照低风险商品监管模式监管。
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user: 4. 总结 通过应用层次分析法将评估目标分解成一个多级指标，对于每个层中各因素的相对重要性给出判断。采用逻辑的方法建立通用的固定模式，建立数学模型使操作简单化、流程化、规范化，减少人为对风险评估结果的影响。真实地、客观地、系统地、完整地反映客观工作中存在的各因子及相互逻辑关系，揭示动态进口货物各种存在的情况，确保动态控制“公平、公正、科学、有效”。
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user: 摘 要 自1989年提出光正交码的概念以来，关于光正交码的最大容量及构造方法一度成为组合设计与编码理论领域的研究热点。光正交码是为码分多址光纤信道而设计的专用码。本文运用组合计数和代数方法确定了汉明重为3，自相关值为1、2，互相关值为2的两类二维光正交码的最大容量，并给出相应码字结构。 关键词 :二维，光正交码，轨道，最大容量 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 设 n ， m ， λ a 和 λ c 是正整数，则一个参数为 ( n × m ， k ， λ a ， λ c ) 的二维光正交码，C (简单记作 2 - D ( n × m ， k ， λ a ， λ c ) − O O C )，是满足特定条件的 n × m 阶 ( 0 ， 1 ) -矩阵(码字)的集合，其中k， λ a 和 λ c 分别称为该正交码的权重，自相关值和互相关值。令 Ω ( n × m ， k ) 表示 I n × Z m 中所有k元组的集合，其中 I n = { 0 ， 1 ， ⋯ ， n − 1 } ， 是模m的剩余类加法群。设C是一给定的二维光正交码，对每个 -矩阵 ，令其行标和列标分别取值于集合 和 ，使得 当且仅当矩阵A的元素 。于是，二维 ，C，可以视作集合 的一个子集，其元素满足下列两个条件： 1) 自相关性：对任意 和每个 ，有 ； 2) 互相关性：对任意的 ， 且 和每个 ，有 。 其中 且所有加法模m计算。 当 时，一个 通常称作一维 。二维光正交码中所含码字个数称为其容量。对给定的正整数n和m，用 表示所有 的最大容量。若 ，上述符号可简写为 和 。 光正交码是为码分多址(OCDMA)光纤信道而设计的一种专用码。光正交码的研究始于1989年 [ 1 ] 。关于一维光正交码已有许多研究结果，参见文献 [ 2 ] [ 3 ] 及其中所列参考文献。实际应用，需要大容量相关性能好的光正交码。二维光正交码正是为克服一维光正交码的码字长，稳定性差等不足而提出的。二维光正交码的研究主要集中在 的情况，参见文献 [ 4 ] 中所列的参考文献。当 时，王建民等 [ 5 ] ，冯弢等 [ 2 ] 和王小苗等 [ 6 ] 给出 ， 的最大容量及部分无限类的构造方法。本文确定当 时， 的最大容量，并给出直接构造法。我们主要证明 定理1. 设n和m是正整数，则
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user: 2. 基础知识 下面先介绍在证明结论时所涉及到的基本概念和相关结论。 对任意的 和 ，定义 ，称为X的平移。于是，群 作用于 。集合 称为X所生成的轨道。包含m个元素的轨道称为长轨道，否则称为短轨道。显然，在群 的作用下集合 被划分成若干个轨道。 设 。对任意 ，定义X的 -纯差是一个多重集合 ，其中加法模m计算。再令 表示多重集 中元素的最大重数。于是由文献 [ 4 ] ， (1.1) 例1. 下列四个 -矩阵构成一个 。 ， ， ， 通过标记矩阵中1的位置，四个矩阵可以转换成 上的四个3-元组 ， ， ，
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user: 3. 当 时， 的最大容量 根据二维光正交码的定义和式(1.1)，不难证明一个 ，C，是集合 在群 作用下一些长轨道代表元X的集合。从而 是 在群 作用下满足 的长轨道 的个数。 我们在文献 [ 4 ] 中证明了一个 的最大容量就是集合 在群 作用下所有长轨道个数。 引理2.1：( [ 4 ] )设n，m和k是正整数。 是莫比乌斯函数，则 因此 恰好是 在群 作用下所有长轨道的个数。因此引理2.1中取 得下面的推论。 推论2.2：设n和m是正整数。则 由平移的定义，一个 的轨道代表元的形式总可以写作 ， 其中 ，并且可以分如下三种形式： 形式1： 且 ； 形式2： ； 形式3： ， 互不相同且 。 令 表示码字 的导出组。定义 的差集为多重集合 ，并且 中基础元素的集合又称为 的支集，记作 。则由文献 [ 3 ] 的引理2.2得 由此可得下列结论： 引理2.3：设m是正整数。码字 满足 当且仅当 有下列形式之一： 1) ； 2) ，其中 ， ； 3) ，其中 。 设Q是 在群 作用下的任意轨道。若 ，则 且 。于是，有下列结论： 引理2.4：对 ，若 ，则X只能有下列形式之一： 1) ，其中 ， 且 ； 2) ，其中 ， 且 。
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user: 4. 当 时， 的最大容量 为确定 的值，我们首先要确定满足条件 的所有长轨道的个数。令 表示 在群 作用下所有满足条件 的长轨道 的集合。根据引理2.4， 可以写成两个互不相交的集合的并，不妨设 ， 其中 ； 于是， 。下面分别计算 和 的大小。 根据引理2.3， 又可以写成下列三个互不相交的子集合的并， ，其中 ； ； 。 引理3.1：设n和m是正整数，若 ，则 ，否则为0。 证明：根据集合 的定义，对给定的 ，若 ，则 ， 或 。显然此三个区组属于同一条轨道。于是，结论得证。 引理3.2：设n和m是正整数，则 证：设Q是 中任意轨道，则必有 ， 且 使得 。故 。再令 ， 且 。若X和 属于同一条轨道，则总存在某个 使得 。这等价于 ，即， 且 。由此得 。若 ，则 。由此得 ，否则若 ， 。于是得 ，这与 的定义矛盾。若 ，则 。由此得 ， 或 ， 。经计算仍得 ，矛盾。若 ，则 。由此得 ，即 。否则若 ，则仍得 ，矛盾。综上分析，若X和 属于同一条轨道，则 。反之显然。故， ，其中 表示满足方程 ， 的 的个数。经详细计算引理结论得证。 引理3.3：设n和m是正整数。则 证：证明过程与引理3.1类似。 引理3.4：设n和m是正整数。则 证：由 ，且 互不相交，故 。经详细计算结论得证。 引理3.5：设n和m是正整数。则 证：设Q是 中任意一条轨道。则由引理2.3知，必存在 使得 ，其中 且 。而且 ， 。这里 ，否则 ，这与 矛盾。因此若 ，则 当且仅当 即 。于是，若 ，则集合 可以改写为 为确定 中轨道个数，我们定义映射 使得 。对任意 ，下面先确定 的值。 设 ，其中 。若 ，其中 ， 。则 ，故存在 使得 ，即 ，这等价于 且 。由此得 且 或 。于是 。反之显然。故 这表明，对任意的 ，有 。故， 。 根据前面引理的结果定理1证明如下： 证：根据引理2.1，得 ，其中 再结合推论2.2，引理3.4，和引理3.5，加以详细计算定理的结论得证。
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user: 5. 码字结构 根据前面分析，我们给出最大二维 的直接构造法。 一个最大二维 的任意码字X满足 ，所以 的码字中舍掉 的码字，剩余的码字既是最大二维 的所有码字。既有 定理2：设n是任意正整数，一个最大二维 的码字结构如下： 时， 1) 且 ； 2) ； 3) ，互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) 且 ； 3) ，互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) ； 3) ，互不相同且 。 定理3 设n是任意正整数，一个最大二维 的码字结构如下： 时， 1) 且 ； 2) 且 ； 3) 互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) ； 3) 互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) 且 ； 3) 互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) ； 3) 互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) 且 ； 3) 互不相同且 。 时， 1) 且 ； 2) 且 ； 3) 互不相同且 。 本文用组合计数和代数方法，对任意正整数n，m和 ，确定了二维光正交码 的最大容量，并给出相应码字结构。希望我们的结果对权重为3的二维光正交码最大容量和码字构造问题的研究的完善有一定的参考价值。
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user: 摘 要 目的：探讨黄连素(berberine， BBR)作用于肝癌Hep-G2细胞增殖和凋亡的机制。方法：CCK-8法检测BBR对Hep-G2细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测BBR对细胞凋亡的影响；蛋白印迹法(Western blotting)及实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测抗增殖基因BTG2及细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1的蛋白及mRNA表达的情况。结果：与对照组相比，BBR可以抑制肝癌Hep-G2细胞的增殖，且抑制率与BBR浓度成正比，差异具有统计学意义(p < 0.01)；与对照组相比，BBR可诱导细胞凋亡(p < 0.01)，且凋亡率随着黄连素的作用时间的延长而增加(p < 0.01)；BTG2 mRNA的表达随着BBR作用时间的延长逐渐增强(p < 0.01)，且与对照组相比，差异具有显著性(p < 0.01)，而CyclinB1、CyclinD1mRNA的表达则随着BBR作用时间的延长逐渐减弱(p < 0.01或p < 0.05)，与对照组相比，差异具有显著性(P < 0.01)；与对照组相比，BTG2和CyclinB1、CyclinD1蛋白表达的差异具有显著性(p < 0.05)。结论：BBR可抑制肝癌细胞Hep-G2的增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能与其上调抗增殖基因BTG2和下调细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1的表达有关。 关键词 :黄连素，肝癌，细胞增殖，细胞凋亡，BTG2，细胞周期蛋白B1，细胞周期蛋白D1 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma， HCC)占90%以上，最新资料显示HCC高居中国肿瘤发病的第3、4位和肿瘤死因的第2、3位 [ 1 ] [ 2 ] 。对于原发性肝癌的治疗，最根本的方法是手术切除，但由于起病隐袭、侵袭性高、进展迅速和早期诊断困难，我国HCC患者确诊时多己为局部晚期或者发生远处转移，往往不适合或不能够单独采取外科手术、肝动脉栓塞化疗(transcatheter arterial chemoembolization， TACE)或理化消融等局部治疗 [ 3 ] 。这类患者预后很差。 黄连素又称小檗碱，1959年Hano [ 4 ] 报道了其具有抗肿瘤活性。近年研究发现黄连素及其衍生物可选择性诱导人肝癌细胞死亡，但对人的正常肝细胞无细胞毒性，表明黄连素及其衍生物具有肝癌靶向细胞毒性，有可能成为有前途的多功能抗肝癌药物 [ 5 ] 。本文以体外细胞实验研究黄连素调节抑癌基因BTG2和细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1的表达来探讨其抗肝癌细胞株Hep-G2作用机制及可能影响的信号通路的研究，且该方面的研究及报道较少见，为其临床应用于肝癌的治疗提供理论基础，也为后期更为精确的用药提供理论支持。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 药品和试剂 黄连素(盐酸小檗碱)购自成都艾特姆生物科技有限公司；CCK-8试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；PI染色试剂盒及AnnexinV-FITC/PI 凋亡检测试剂盒均购自Bio-Swamp公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司，鼠抗BTG2和兔抗CyclinB1、CyclinD1抗体均购自Abcam公司；引物由上海Invitrogen生物制品公司合成；Trizol购自北京康为世纪生物科技有限公司，SYBR Green PCR试剂盒购自KAPA Biosystems公司，逆转录试剂盒购自TAKARA公司。 2.2. 细胞系与细胞培养 人肝癌细胞株Hep-G2由中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)提供，用MEM Hyclone培养基、10%胎牛血清、青霉素-链霉素溶液配制成的完全培养基，于37℃、5% CO 2 饱和湿度的细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期时备用。 2.3. CCK-8检测BBR对Hep-G2细胞增殖的抑制作用 取对数生长期的Hep-G2细胞，接种于三个96孔板中，100 ul/孔，于37℃、5% CO 2 饱和湿度的细胞培养箱中培养24 h，待细胞贴壁后，给予不同浓度的BBR (12.5，25，50，100，200 µmol/L)干预细胞，另设阴性对照组(只有细胞和培养基)和空白组(没有细胞只有培养基)，每个浓度设五个复孔，每个96孔板边缘孔均加入PBS 100 ul，分别培养24 h、48 h、72 h后，吸出原液，用遇冷的PBS洗涤一遍，每孔加入用MEM培养基稀释的CCK-8 100 ul，置于细胞培养箱中孵育三小时。用酶联免疫检测仪测定每孔在450 nm处的吸光度值，然后根据公式计算细胞增殖抑制率。实验重复三次。细胞增殖抑制率(%) = [1 − (实验组OD值 − 空白组OD值)/(阴性对照组OD值 − 空白组OD值)] × 100%。经加权直线回归方程计算出黄连素抑制细胞增殖率为25%时的对应浓度值。 2.4. 流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡率 取对数生长期的细胞，制成3 × 10 5 /ml的单细胞悬液，接种于三个6孔板中，于37℃、5% CO 2 饱和湿度的细胞培养箱中培养24 h，待细胞贴壁后，给予抑制率为25%的BBR用药浓度对细胞进行处理，另设空白对照组，继续孵育24、48、72小时。孵育时间到后用遇冷的PBS洗涤两遍，胰酶消化，离心收集细胞，并重悬于200 ul的Binging Buffer中，再根据PI染色试剂盒和AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒的说明书进行细胞染色，最后用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡细胞分布情况。实验重复三次。 2.5. Western Blot检测BTG2和CyclinB1、CyclinD1的蛋白表达情况 取对数生长期的细胞，制成3 × 10 5 /ml的单细胞悬液，接种于三个6孔板中，于37℃、5% CO 2 饱和湿度的细胞培养箱中培养24 h，待细胞贴壁后，给予抑制率为25%的BBR用药浓度对细胞进行处理，另设空白对照组，继续孵育24、48、72小时。收集细胞后提取蛋白并根据BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书测定各组蛋白的含量，每组样品各取40 µg蛋白进行上样。根据10% SDS-PAGE凝胶试剂盒制成分离胶和5%的浓缩胶，进一步电泳、转膜，将凝胶上的蛋白转移至NC膜上。用5%的BSA室温下于摇床上封闭1小时，加入一抗(鼠抗BTG2和兔抗CyclinB1、CyclinD1，工作液的浓度分别为1:500、1:1000和1:1000)，于4℃冰箱里孵育过夜，1 × TBST洗涤液洗膜后再加入相应的二抗((1:5000 HRP 标记的羊抗兔IgG和羊抗鼠IgG)，室温下于摇床上孵育30 min，以β-actin作为内参。仍然用1 × TBST洗涤液洗膜后，用ECL化学发光法进行观察。实验重复三次。 2.6. RT-PCR检测BTG2和CyclinB1、CyclinD1 mRNA的表达 取对数生长期的细胞，制成3 × 10 5 /ml的单细胞悬液，接种于三个6孔板中，于37℃、5% CO 2 饱和湿度的细胞培养箱中培养24 h，待细胞贴壁后，给予抑制率为25%的BBR用药浓度对细胞进行处理，另设空白对照组，继续孵育24、48、72小时。孵育时间到后收集各组细胞，提取蛋白后用Trizol提取总RNA，并测定RNA的质量，根据逆转录试剂盒说明书将总RNA逆转录成cDNA，根据该试剂盒的说明书，反转录的条件是：20 uL反应体系，其反应程序是42℃，60 min；70℃，10 min；−20℃，hold。根据PCR试剂盒说明书及荧光定量PCR仪对cDNA进行扩增，反应体系20 uL：PreMix 10 μL、上游引物0.5 μL、下游引物0.5 μL、cDNA 模板1 μL及ddH 2 O 8 μL，PCR扩增反应程序设置：94℃预变性1 min；94℃变性15 s，58℃退火20 s，72℃延伸20 s，循环40次；72终末延伸5 min；4℃保温。最后运用c-omparative2 − △△ CT 法分析各基因的相对表达。实验重复三次。所用引物序列见表1。 2.7. 统计学处理 应用SPSS 20.0软件进行实验数据的统计学分析，实验数据均以 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验，若方差不齐则采用Tamhane检验，以p < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. BBR对肝癌Hep-G2细胞增殖的影响：见表2 各组BBR作用于HepG-2细胞12 h、24 h、48 h、72 h后，细胞生长出现明显抑制，且细胞生长抑制率随药物浓度的增加而升高。经加权直线回归方程计算出BBR作用于HepG-2细胞24 h的抑制率为25%的BBR用药浓度为30 µmol/L。 3.2. BBR对Hep-G2细胞凋亡的影响：见图1，表3 将浓度为30 µmol/L的BBR干预Hep-G2细胞24 h、48 h、72 h小时后，与对照组相比，实验组细胞凋亡率增加，具有明显的时间依耐性，差异具有显著性(P < 0.01)。 3.3. BBR对Hep-G2细胞BTG2 mRNA和CyclinB1、CyclinD1mRNA表达的影响：见图2 将浓度为30 µmol/L的BBR分别干预细胞24 h、48 h、72 h后，与对照组相比，BTG2 mRNA的相对表达量逐渐增加(P < 0.01)，随着作用时间的延长增加更显著(P < 0.01)。而CyclinB1、CyclinD1mRNA的表达，与对照组相比，逐渐减低(P < 0.01)。 3.4. BBR对Hep-G2细胞BTG2和CyclinB1、CyclinD1蛋白表达的影响：见图3 与对照组相比，将浓度为30 µmol/L的BBR分别干预细胞24 h、48 h、72 h后，BTG2蛋白的表达逐渐增高(P < 0.01)。同时CyclinB1、CyclinD1蛋白的表达逐渐减弱(P < 0.01或P < 0.05)。
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user: 摘 要 目的：总结近年来中医对癌因性疲乏病因病机的认识及中医药在干预治疗癌因性疲乏方面的措施、手段。方法：对近年来国内外学者对癌因性疲乏的中医病因病机的研究结果及运用中医药方法对癌因性疲乏进行干预治疗的研究结果进行汇总分析。结果：随着现代医学对癌因性疲乏的病因及发病机制的研究进展，中医对癌因性疲乏病因病机的认识也在逐步完善。中药、中医适宜技术、情志疗法、运动疗法等中医药的技术方法对癌因性疲乏的干预均有一定的疗效。结论：中医药及中医的技术方法在癌因性疲乏的改善方面有独特的优势，从癌因性疲乏的中医病因病机出发，综合运用中医药的各种方法手段，将使癌因性疲乏的改善取得更显著的疗效。 关键词 :癌因性疲乏，中医药，病因病机，适宜技术 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 癌因性疲乏的概念 在中医学中尚未有对“癌因性疲乏”的概念的阐述。西医学的“癌因性疲乏”(cancer related fatigue，CRF)的概念最早是在19世纪80年代由Hay lock Hart [ 1 ] 提出并进行相关的研究。1987年Piper [ 2 ] 等人对CRF定义为一种主观感受到的、不寻常的全身性的过度疲劳，与癌症有关且受到生理周期的影响，持续时间和强度不定，其缓解与个人的行为和努力不成比例或不相关。2014年美国国家癌症综合网络(The National Comprehensive Cancer Network，NCCN) [ 2 ] 提出CRF的定义：癌因性疲乏是一种主观的、持续性的疲劳感觉，它与肿瘤疾病本身或是肿瘤的治疗相关，但是与患者近期的体力活动不相关，引起令人不安的、持续的身体、情感和(或)认知方面的疲乏感觉及精力衰竭感，影响病人正常生活，降低病人生活质量。