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user: 3. 结果 3.1. 微卫星标记的筛选 从25对微卫星引物中筛选出13对，在3种石斑鱼群体中均可得到稳定清晰的产物。13对引物信息见表1。 3.2. 微卫星引物扩增结果 使用13对微卫星引物对云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼和杂交F 1 的基因组DNA进行检测。结果显示，引物Ese26扩增的片段大小在云纹石斑鱼群体中为190 bp，在鞍带石斑鱼群体中为200~202 bp；引物RH_CA_001扩增的片段大小范围在云纹石斑鱼群体中为386~422 bp，在鞍带石斑鱼群体为372~384 bp；引物RH_CA_004扩增的片段大小范围在云纹石斑鱼群体中为199~213 bp，在鞍带石斑鱼群体为183~197 bp；引物RH_CA_007扩增的片段大小在云纹石斑鱼群体中为306 bp，在鞍带石斑鱼群体为318~320 bp；引物RH_CA_008扩增的片段大小范围在云纹石斑鱼群体中为198~200 bp，在鞍带石斑鱼群体为206~214 bp。结果表明，引物Ese26、RH_CA_001、RH_CA_004、RH_CA_007和RH_CA_008均能区分云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼两个群体。 引物Ese26中，母本云纹石斑鱼群体均为纯合型，只有一条带190 bp，父本鞍带石斑鱼群体有杂合型，而杂交F 1 均为杂合型，均有一条190 bp的条带，父、母本条带同时出现(图1)，是鉴别杂交F 1 的最佳分子标记。引物RH_CA_007中，母本云纹石斑鱼群体均为纯合型，只有一条带306 bp，父本鞍带石斑鱼群体有杂合型，而杂交F 1 均为杂合型，均有一条306 bp的条带，父、母本条带同时出现(图2)，也是鉴别杂交F 1 的最佳分子标记。 3.3. 遗传变异参数 3种石斑鱼13对微卫星位点的平均等位基因数、平均观测杂合度、平均期望杂合度、平均多态信息含量见表2。结果显示，云纹石斑鱼的平均等位基因数(A o )最大(5.2900)，其次为杂交F 1 (4.2100)，鞍带石斑鱼最小(2.6200)；在平均观测杂合度(H o )中，杂交F 1 最高(0.7108)，其次为云纹石斑鱼(0.4510)，鞍带石斑鱼最低(0.4167)；平均期望杂合度(H e )中，杂交F 1 最高(0.5461)，其次为云纹石斑鱼(0.5105)，鞍带石斑鱼最低(0.4012)。从位点来看，多态信息含量(PIC)最高的为云纹石斑鱼的RH_CA_001位点(0.8975)；从 Table 1 The characteristics of 13 microsatellite primer 位点Loci 引物序列(5’-3’) Primer sequence 退火温度(℃) Annealing temperature 登录号Accession no. Ese06 CATGTAAGCTCCACCACGACTG TTGATGAAAGGGAACAATAGCTG 57 EU374，814.1 Ese26 CACTCATTCTCTTCGTCGTTTTCA CCAGTTCTGTTCCGCTTGTTCA 57 EU374，834.1 ELMS013 TCATGTCAGGAGGGAGAAGAG CATACTGTTAGCTGGGGGTGA 56 EF607，134.1 ELMS015 AAGCTGAGCCGAATTTTTCA GCTCCTCGTGTTTCCGATTA 56 EF607，136.1 RH_GATA_003 GGGCAATTTGGTTCTTCACA TGTCAATGCCACAGGATACA 57 DQ223，790.1 RH_CA_001 CGAGATAAGCCCTGGTGAAA AGTCCCGATGTGGTAACGAG 60 DQ223，785.1 RH_CA_002 CTCGTTACCACATCGGGACT AACACTGGCTGGTTTGCACT 60 DQ223，785 RH_CA_004 GAGAACGACATTCCAGCACA TGTGTGACCAGAAACCAGGA 57 DQ223，784 RH_CA_007 CAGAAACATCTCCCCCAAAA CTGGCAGAGCAATTAGAGGC 60 DQ223，786 RH_CA_008 AGTTGCCCAGGTTACACGAG TTGGGTCCTGGCATTTAGAG 57 DQ223，787 D161 TAGTTCCAGAAAGCAA CCAGGGGATAATGTCA 51 DQ914，895 D493 TAATTGGGGATATGTGAC CATTTCTTCTTGCTTCG 48 DQ914，901 D548 ACCAGATAACAAGATGCC GTAAAATGAAATACAGCTCA 53 DQ914，910 表1. 13对微卫星引物的特征 图1. 引物Ese26的毛细管电泳峰值图；(a) 云纹石斑鱼个体，条带大小为190 bp；(b) 杂交F 1 个体，条带大小为190和202 bp；(c) 鞍带石斑鱼个体，条带大小为202 bp 图2. 引物RH_CA_007的毛细管电泳峰值图；(a) 云纹石斑鱼个体，条带大小为306 bp；(b) 杂交F 1 个体，条带大小为306和320 bp；(c) 鞍带石斑鱼个体，条带大小为320 bp 群体来看，3个群体的平均PIC为0.4290，杂交F 1 的平均PIC最高为0.4818，云纹石斑鱼为0.4661，鞍带石斑鱼最低为0.3392。 3.4. 遗传相似指数、遗传距离及聚类分析 3种石斑鱼群体的遗传相似指数和遗传距离结果显示(表3)，鞍带石斑鱼与杂交F 1 遗传相似率最高(0.7616)，其次为云纹石斑鱼和杂交F 1 (0.7247)，云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼相似率最低(0.4296)；云纹石斑鱼和鞍带石斑鱼遗传距离最大(0.8449)，其次为云纹石斑鱼和杂交F 1 (0.3220)，鞍带石斑鱼与杂交F 1 遗传距离最小(0.2724)。结果表明，杂交F 1 偏向父本鞍带石斑鱼。 根据遗传距离采用UPGMA法构建聚类分析图(图3)，结果显示，鞍带石斑鱼和杂交F 1 先聚为一支， Table 2 Parameters of genetic variation of E. moara， E. lanceolatus and hybrid F 位点 Loci 参数 Parameter 云纹石斑鱼 E. moara 鞍带石斑鱼 E. lanceolatus 杂交F 1 hybrid F 1 Ese06 A o 5.0000 1.0000 3.0000 H o 0.4706 0.0000 0.6471 H e 0.5098 0.0000 0.6078 PIC 0.4508 0.0000 0.5242 Ese26 A o 1.0000 2.0000 2.0000 H o 0.0000 0.0000 1.0000 H e 0.0000 0.1141 0.5152 PIC 0.0000 0.1046 0.3750 ELMS013 A o 6.0000 2.0000 7.0000 H o 0.5294 0.2941 0.7059 H e 0.7469 0.4866 0.7326 PIC 0.6829 0.3608 0.6787 ELMS015 A o 12.0000 4.0000 7.0000 H o 0.7059 0.2353 0.5882 H e 0.9127 0.4421 0.8271 PIC 0.8755 0.3959 0.7749 RH_GATA_003 A o 12.0000 4.0000 10.0000 H o 0.7647 0.8824 0.8824 H e 0.8770 0.7576 0.8431 PIC 0.8361 0.6874 0.7980 RH_CA_001 A o 16.0000 2.0000 4.0000 H o 0.6471 0.5294 0.2941 H e 0.9323 0.5152 0.2727 PIC 0.8975 0.3750 0.2533 RH_CA_002 A o 5.0000 5.0000 5.0000 H o 0.7647 0.9412 0.6471 H e 0.7005 0.7772 0.7469 PIC 0.6265 0.7116 0.6754 RH_CA_004 A o 6.0000 3.0000 9.0000 H o 0.5294 0.6471 0.9412 H e 0.7861 0.6132 0.7932 PIC 0.7305 0.5092 0.7469 RH_CA_007 A o 1.0000 2.0000 3.0000 H o 0.0000 0.4118 1.0000 H e 0.0000 0.451 0.5900 PIC 0.0000 0.3419 0.4814 RH_CA_008 A o 2.0000 4.0000 4.0000 H o 0.5882 1.0000 1.0000 H e 0.5134 0.7005 0.6720 PIC 0.3741 0.6190 0.5883 D161 A o 2.0000 2.0000 2.0000 H o 0.1176 0.0588 0.8235 H e 0.1141 0.0588 0.4991 PIC 0.1046 0.0555 0.3671 D493 A o 4.0000 1.0000 1.0000 H o 0.2941 0.0000 0.0000 H e 0.5437 0.0000 0.0000 PIC 0.4813 0.0000 0.0000 D548 A o 1.0000 2.0000 1.0000 H o 0.0000 0.0000 0.0000 H e 0.0000 0.2995 0.0000 PIC 0.0000 0.2484 0.0000 平均值 Mean value A o 5.2900 2.6200 4.2100 H o 0.4510 0.4167 0.7108 H e 0.5105 0.4012 0.5461 PIC 0.4661 0.3392 0.4818 表2. 3种石斑鱼群体的遗传变异参数 Table 3 Nei’s genetic identity (above diagonal) and genetic distance (below diagonal) among E. moara，E. lanceolatus and hybrid F 云纹石斑鱼 E. moara 鞍带石斑鱼 E. lanceolatus 杂交F 1 Hybrid F 1 云纹石斑鱼 0.4296 0.7247 鞍带石斑鱼 0.8449 0.7616 杂交F 1 0.3220 0.2724 表3. 云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼和杂交F 1 间的遗传相似指数(上三角)和Nei氏遗传距离(下三角) 图3. 云纹石斑鱼、鞍带石斑鱼和杂交F 1 的UPGMA聚类分析图 云纹石斑鱼位于最外支。结果表明，杂交F 1 与父本鞍带石斑鱼的亲缘关系较近。