DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 讨论 该研究中主要讨论童年创伤经历中情感忽视、情感虐待和躯体忽视三个维度与积极应对方式的相关性。其中，积极应对方式与情感忽视成显著负相关(r = −0.239)；积极应对方式与躯体虐待成显著负相关(r = −0.191)；积极应对方式与情感虐待成显著负相关(r = −0.193)。已有国外研究证明应对方式在应激和心理健康之间存在中介机制(Vollrath， Alnaes， & Torgersen， 1996; Brian， 1999)，根据Young提出的早期适应不良图式观点，童年和青春期是形成自我认识和社会支持认知的关键期，当个体难以应对学习生活中的各种挫折或情景时，则会将已有形成的自我认识等认知图式泛化取代，以达到心理运行的平衡。一旦这样的图式在认知、情感和行为上出现功能不良，形成恶性的自动化思维会影响到个体对于自我和他人的觉知，产生心理问题；当再次面临困境时，会选择无意识回避，压抑负性情绪，弱化自己社会功能等情况(Young， 1999)。相关研究中也提到社会支持和应对方式在童年创伤与问题行为关系中有部分中介作用(肖家俊，2018)。说明当个体遭受过童年创伤，个体越会在之后的行为中更加不采取积极方式处理问题；如果个体本身就有抑郁等症状，则会加剧个体的消极应对方式。这些都说明了童年创伤会影响应对方式的选择。本研究中主要探讨积极应对方式在于，相较于消极应对，在童年创伤中积极应对方式更容易出现差异性；而社会也应当更多地提倡积极应对压力源和困境的意义。童年创伤的研究经历国外到国内的发展过程，由于文化差异的因素，中国国情之下，童年创伤更多地强调情感忽视和虐待，所以本研究相关性中着重强调积极应对方式和童年创伤中情感忽视、情感虐待和躯体虐待的影响。从国内研究影响童年创伤的四个方面出发，首先建议监护人或者父母，应尽量多给予儿童关注、自信和积极反馈；家庭的教养最好采用民主方式，尊重孩子的个人想法和情感表达；同时，社会给予支持，关注童年创伤孩子的内心修复，社区教育中也可以加入心理疏导的内容，而孩子本身的成长，应给予他成长的空间，更多的包容。 元分析结果证实了报告质量和样本类型影响童年创伤的三个维度与积极应对方式的关系。学位论文由于内容更全面，因此在文献类型中效应值大于其他两种类型；另一方面，也可能是核心论文的样本量较少，导致核心期刊效应值小于学位论文。本研究的样本类型分为大学生、青少年、成人、新兵和服刑人员，由于新兵和服刑人员被试较特殊且均只有一个样本，故而排除在讨论之外。此外，本研究发现随着时间的推移，童年创伤带给应对方式的效应值影响是减小的。应对方式可以看作是个体处理内外部需求负荷所做出的行为和认知努力(Folkman & Lazarus， 1984)，是一种动态的过程。儿童时期由于认知和身体的局限，多是被动接受的情况。一旦创伤经历被唤醒，自我控制和调节的能力不足。随着经验和阅历的增长，思维管理上敢于直面应激源并努力克服它，改变思维方式，花时间和自己相处，重构事件的发生和意义。情绪管理上通过认识的群体，帮助完善和增强社会支持的力量，使得个体的认知方式更为多样和全面，例如有研究表明，个体随着年龄的增长，应对策略越趋于多样化和成熟化，成熟的心态有利于采用积极的应对方式(和亮坤，2012)。也就是说，青少年时期，存在童年创伤的个体更不会采取积极应对方式；大学生阶段其次；而成人阶段，从年龄角度出发虽然有部分与大学生群体重合，但是成人群体更多地接触社会，在社会的磨砺之后，心理韧性变强，即使曾经经历了童年创伤，也会更多地采取积极应对方式对待生活。从人本主义的角度出发，这一结果印证了人是自由的个体，具有发展、成长、发挥其积极潜能的内在需求，具有自我实现的倾向；随着社会经历的增多，会更以积极乐观的态度看待生命，从环境中寻找到问题的解决方案。 本研究由于局限于中国文化背景下的童年创伤和积极应对方式关系分析，因此，收集到的文献较少，同时也注意到，近几年对于该话题的研究较多。之后的研究中，可以更多地关注童年创伤的纵向研究，以及中西方不同文化背景下的童年创伤差异的元分析比较，进一步讨论不同的教育背景是否对童年创伤和应对方式的相关性产生影响。
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user: 摘要 目的：对比观察多光谱眼底成像(Multispectral imaging， MSI)与吲哚菁绿脉络膜血管造影(ICGA)对息肉状脉络膜血管病变(Polypoidal choroidal vasculopathy， PCV)的成像特征和检出率差异比较。方法：回顾性临床病例研究。经临床确诊的PCV患者33例38眼纳入研究，所有患者均行最佳矫正视力(BCVA)，共焦激光眼底照相(SLO)，无赤光照相(red-free)，红外照相(infra-red)，光学相干断层扫描(OCT)，吲哚青绿血管造影(ICGA)与MSI检查。结果：硬性渗出的检出比率在MSI 550，600，620 nm波长段显著高于ICG造影(c 2 =11.5; p = 0.012)。MSI各波长与无赤光照相(red-free)、红外照相、ICGA比较，浆液性视网膜色素上皮脱离(SPED)与浆液血液性色素上皮脱离(SHPED)检出率无显著性差异(c 2 = 4.67， p = 0.603)。视网膜下出血(SRH)采用MSI680 nm、780 nm、810 nm、850 nm波长与ICGA比较，检出率无显著性差异(c 2 = 3.61， p = 0.799)。MSI680 nm、780 nm、810 nm、850 nm四种波长与ICGA对于脉络膜异常血管网(BVN)和脉络膜息肉(Polyps)的检出率差异有显著性意义(c 2 = 10.0; p = 0.040; c 2 =27.96; p = 0.000)。结论：MSI可清晰显示PCV特征性SPED，SHPED，SRH图像特征，MSI可做为PCV诊断有益的影像补充。
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user: 1. 引言 息肉状脉络膜血管病变(PCV)是一种以异常的脉络膜内层血管网(branch vessel net， BVN)末端息肉状改变为特征的黄斑疾病 [ 1 ]。临床表现以黄斑区或黄斑区外桔红色病灶，浆液性或血液性的色素上皮脱离为特征 [ 2 ]。ICG血管造影可较好显示脉络膜息肉状病灶并有助于BVN的成像而成为PCV诊断“金标准” [ 3 ]。但ICG血管造影属于有创检查，存在药物过敏与药物短缺的风险，故非侵入性影像检查越来越受到重视。临床研究发现OCTB扫描成像可检测到PCV特征性的“拇指征”样RPE脱离，RPE与Bruch氏膜之间的双层征(double line sign， DLS)，血管OCT可清晰显示PCV中BVN [ 4 ] [ 5 ]。OCT与OCTA作为非侵入性检查被逐渐广泛地应用于PCV的诊断与随访，但仍需要ICGA作为诊断的主要方法。MSI是利用多个单色LED光源投射到视网膜与脉络膜的不同组织，实现超宽光谱，逐层，正面(EN face)成像的一种新眼底成像技术。可实现对浅层视网膜，深层视网膜，RPE以及脉络膜的非造影直接成像 [ 6 ]。目前有采用MSI580 nm波长观察视网膜分支静脉阻塞与糖尿病黄斑水肿，710 nm以上红外波长观察特发性葡萄膜大脑膜炎(VKH)与中心性浆液性视网膜脉络膜病变的临床研究报告 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]，但尚未见MSI对PCV诊断的临床研究报告。我们利用MSI检查一组PCV患者并与ICGA检查对比分析，现将结果报道如下。
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user: 2. 对象与方法 2.1. 一般资料 回顾性病例研究。本研究通过暨南大学深圳眼科医院伦理委员会批准，遵循赫尔辛基宣言，并获得患者书面知情同意。2019年3月至2020年1月经我院眼底病专科门诊确诊的PCV33例38眼纳入研究，其中男性22例，女性11例；年龄41~76岁，平均(63.70 ± 8.14)岁。PCV的诊断标准：1) ICG造影显示脉络膜异常血管网，异常脉络膜血管末端出现单个或多个的高荧光结节样或囊袋状病灶 [ 3 ] [ 4 ]。2) OCT观察到高耸的拇指状PED伴“双层征”。 2.2. 检查项目 所有患者均进行最佳矫正视力(BCVA)、共焦激光眼底成像(SLO)、FFA、ICGA、OCT和OCTA与MSI的检查。视力采用国际标准对数视力表检查，FFA，ICGA，OCT采用Spectralis HRA + OCT (海德堡公司，德国)进行检查，OCTA采用Cirrus HD OCT-5000 (蔡司公司，德国)血管成像模式进行检查。研究纳入标准：ICG造影6分钟内见单个或多个脉络膜高荧光灶，伴有或不伴有脉络膜异常血管网样高荧光，OCT扫描见“拇指状PED”与RPE层双线症 [ 10 ]。排除标准：排除年龄相关黄斑变性，成人卵黄样黄斑变性，特发性脉络膜新生血管。 MSI采用C2000多光谱眼底成像系统(深圳新产业眼科新技术有限公司)检查，通过多个单色LED投射到眼底视网膜和脉络膜组织，一次性闪烁扫描获得550 nm，600 nm，620 nm，680 nm，780 nm，810 nm，850 nm波长的图像。由三名眼底病医师盲法阅片分析PCV患者视网膜下硬性渗出(HEX)，浆液性色素上皮脱离(SPED)，视网膜下出血(SRH)，浆液血液性色素上皮脱离(SHPED)，脉络膜异常血管网(BVN)及脉络膜息肉样病灶(polyps)的MSI图像特征。结果有争议时采用多数的意见，并与SLO，red-free，红外成像(Infra-red) ICG结果比较。 2.3. 统计学分析方法 采用SPSS17.0 (SPSS， Chicago， IL)统计学软件对研究数据进行分析。PCV患者MSI图像的不同典型图像特征HEX，SPED，SRH，SHPED，BVN及polyps的检出比率采用计量资料的Pearson c 2 检验，以p < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 33例38眼PCV患者最具特征的HEX，SPED，SRH，SHPED，BVN及polyps的MSI与ICG造影检出眼数比率比较(表1)。 Table 1 Comparison of characteristic eye number of PCV patients detected by MSI and IC 眼数 550 nm 600 nm 620 nm 680 nm 780 nm 810 nm 850 nm RGB SLO red-free infra-red ICG 特征 HEX(30) 27 25 25 20 18 18 15 18 30 29 25 5 SPED(36) 17 19 27 33 36 36 34 36 35 25 26 36 SRH(26) 19 19 18 24 26 25 26 26 26 18 18 25 SHPED(10) 5 9 7 8 7 9 9 10 9 4 4 10 BVN(37) 2 2 10 26 28 30 28 19 1 2 2 36 POLYPS(36) 2 5 11 15 15 25 25 25 2 2 2 33 PCV(38) 10 12 11 30 33 32 33 30 10 8 8 35 表1. MSI与ICG造影检出PCV患者眼底图像特征眼数比较 其中HEX的检出比率MSI在550 nm，580 nm，620 nm波段显著高于ICGA，两者结果比较差异有显著性意义(c 2 = 11.5; p = 0.012) (图1)。对于SPED，SHPED两种体征的检出率，MSI的各波长与ICGA、red-free、AF比较无显著性差异(c 2 = 4.67， p = 0.603) (图2，图3)。SRH两种体征的检出率，MSI的680 nm红光波长与780 nm，810 nm，850 nm红外光四种波长与ICGA比较，结果无显著性差异(c 2 = 3.61， p = 0.799) (图4，图5)。BVN与Polyps两种检查的检出率通过MSI 680 nm红光波长，780 nm，810 nm，850 nm红外光波长与ICG造影比较，结果差异有显著性意义(c 2 = 10.0; p = 0.040; c 2 = 27.96; p = 0.000)，表明ICG造影对PCV患者BVN的检出率较高，尤其对脉络膜息肉病灶的检查率有独到优势(图5，图6，图7)。但三名眼底病医生综合分析最具特征的SPED，SRH，SHPED，BVN及polyps的MSI图像特征来诊断PCV并与ICG造影进行对照，两种检查的诊断一致性比较，结果没有显著性差异(c 2 = 2.85， p = 0.583) (图8，图9)。 图1. MSI550 nm清晰显示PCV患者黄斑区视网膜下硬性渗出 图2. MSI780 nm清晰显示PCV右眼黄斑区SPED 图3. ICG造影清晰显示PCV黄斑区SPED (绿线)，形态与MSI780 nm图像一致，面积差异与两种设备的图像放大率有关 图4. MSI810 nm显示PCV视网膜下SHPED呈弱反射特征，边界清楚 图5. ICG造影显示PCV视网膜下SHPED边界比较模糊，出血面积与MSI810 nm差异与两种设备的图像放大率有关，但ICG造影清晰显示特征性息肉病灶 图6. MSI780 nm辨认出PCV患者SPED旁BVN (蓝色箭头) 图7. MSI780 nm辨认出PCV患者SPED旁BVN清晰度比较ICG造影低 图8. MSI680至850 nm四种波长与IGC检查BVN、POLYPS、SHPED、SPED检出比率 图9. MSI550至850 nm各波长与IGC检查PCV患者图像特征检出眼数比较
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user: 4. 讨论 EVERST研究提出ICG造影是PCV的诊断“金标准”，原因是ICG可显示大多数PCV患者的Polyps与BVN病变 [ 11 ]，而眼底彩色照相，FFA不能明确显示Polyps与BVN。FFA与ICG造影属于有创检查，存在注射造影剂过敏风险，有报道FFA过敏性休克占到FFA检查患者的0.83% [ 12 ]。随着技术的发展进步，无论是视网膜疾病或是脉络膜疾病，多模式，分层次的影像检查替代传统血管造影已经成为趋势，OCTA可实现对PCV患者BVN的清晰成像，但对Polyps的确诊率只有42%左右，而且脉络膜血管的结构分辨率仍有待提高 [ 13 ]，临床中PCV诊断还是要根据ICG的检查结果进行分析。 MSI技术利用多种波长的单色LED光源分别投射入眼底组织，采集因各组织吸收光谱的差异而反射的信号，以冠状面(EN face)图像形式呈现 [ 14 ]。MSI光谱(550~850 nm)可以对视网膜进行逐层、正面成像，实现对视网膜、脉络膜的非侵入直接成像。绿光(550~600 nm)主要显示浅层视网膜病变，黄光(680 nm)主要显示中层和深层视网膜结构及视网膜色素上皮层变病变。由于PCV主要是累及RPE，Bruch膜及脉络膜的病症，故MSI 550 nm，580 nm，620 nm的绿光与黄光波长作用不大，而710 nm以上长波长的的红光，红外光可穿透RPE层显示RPE与脉络膜病变，故我们采用780 nm，810 nm，850 nm红外光三种波长检查PCV患者浆液性PED与浆液血液性PED。由于视网膜下出血病灶含有更多的血红蛋白对550 nm，600 nm有吸收峰值，而810 nm，850 nm波长吸收较少，在MSI图像中SRH与浆液血液性PED出血病灶显示强反射，浆液性PED呈弱反射。本研究结果证实红光与红外光谱成像对浆液与浆液血液性PED检出率与ICGA比较，结果没有显著性差异(c 2 = 4.67， p = 0.603)。这与ZHOU等报告用810 nm波长对中心性浆液性视网膜脉络膜病变的浆液性视网膜色素上皮脱离检出率相似 [ 15 ]。本组PCV患者BVN和Polyps通过680 nm红光与780 nm，810 nm，850 nm红外光四种波长检查的检出率与ICGA比较，结果差异有显著性意义(c 2 = 10.0; p = 0.040， c 2 = 27.96; p = 0.000)，表明ICG造影对PCV患者BVN的检出率较高，(图5，图6，图7)，ICG造影对BVN及polyps检查仍有不可替代的优势。但三名眼底病医生综合分析PCV的SPED，SRH，SHPED，BVN及polyps的MSI图像特征来诊断PCV并与ICG造影进行对照，两种检查的诊断一致性比较，结果没有显著性差异。 本研究表明，PCV在MSI上的主要特征为浆液性浆液与浆液血液性PED，SRH等RPE与脉络膜层的异常改变。虽然绿光(550~600 nm)可清晰视网膜渗出，前膜、玻璃体黄斑牵拉、视网膜神经纤维层等 [ 16 ]，而PCV主要为RPE和脉络膜层病变，故应用价值不大。本研究发现MSI 680~850 nm红光与红外光对SPED平均检出率为96.5%，SRH92.30%，SHPED87.50%，根据这三项图像特征，通过MSI诊断PCV与ICG比较有较好的一致性，表明MSI对PCV的诊断有一定应用价值。 在使用MSI对PCV诊断及鉴别时需要注意以下两点。1) 当RPE脱离不明显时可造成MSI诊断PCV的漏诊，本研究800 nm波长检查3只眼漏诊均因为少量浆液，色素上皮层隆起度很低，故MSI在诊断PCV时应结合OCT检查能减少因显示不佳而导致的漏诊。2) 分析图像时应从浅至深逐层分析，以便了解病变所在层次，红光和红外光图像显示RPE与脉络膜改变更好更清晰。但由于MSI无法像ICG一样动态观察BVN与Polyps的吲哚青绿染料充盈，染料渗漏与积存，则导致MSI对这两种图像特征的分辨率不高。因此目前对于PCV诊断ICG仍具有不可取代的价值。但ICG为有创检查且耗时较长，为减少造影过程中可能出现的并发症，缩短检查时间，降低医疗费用，对于具有典型PCV特征的患者，或造影禁忌者可行MSI检查。该检查快速、无创，且与ICG有较好的一致性，同时也可以作为PCV的筛查手段。 由于本研究样本量小，对BVN与Polyps图像分辨率有限，尚有待进行前瞻性、更大样本量、长期随访的PCV病例研究探索MSI的应用价值。其次，MSI的解读不同于以往的眼底图像，还需进一步累积经验，同时还需结合其他无创影像检查如OCT，OCTA，炫彩眼底成像等多模式检查来综合诊断PCV。
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user: 利益冲突 本研究所有作者均声明不存在任何利益冲突。
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user: 摘要 “他山之石，可以攻玉”。学习和借鉴外军院校实战化教学的成功经验，全面推进我军院校教学改革是保证军事教育质量不断提升的有效途径。本文从顶层设计、课程设置、实践环节、模拟训练和教员队伍五个方面对外军院校实战化教学基本特点进行了分析。
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user: 1. 引言 经历了几场局部战争之后，美、俄等军事强国进一步认识到高素质的复合型军事人才在夺取战争胜利过程中所起到的决定性作用。在这种思想的指导下，外军广泛的推进了新形势下的军事教育改革，并且逐步建立起了一套完善的军队院校实战化教学训练体系。对比并分析我军院校与外军院校在实战化教学方面的异同，可以取长补短、认清不足。本文结合我军的实际情况，探索实践化教学改革的正确方向，为实现强军目标提供有力的人才支撑。
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user: 2. 顶层设计完善 军队院校教育体系的构建是一个复杂的系统工程，必须着眼于部队的实际需求，注重教育的整体效能。目前，世界各国都在广泛的开展军事院校教育体系改革，力求通过不断完善顶层设计的方法，改善整体效能，提高办学质量。 2.1. 管理机构统一，助推实战化教学体系形成 我军院校与俄罗斯军事院校类似，都是隶属于各总部和军兵种。这种隶属关系造成自成体系、硬性分割、教育和训练资源得不到充分利用的问题。例如，潜艇部队院校需要战略导弹相关教育资源，而火箭军部队院校在这方面的资源优势明显，但是双方院校之间很难进行有效的资源共享。在这方面可以借鉴俄罗斯军队的相关举措。俄罗斯在国防部设立了院校行政管理机构，对全军院校统一进行规划和协调，改善了整体结构，提高了办学效率。 2.2. 人才培养计划科学，确保实战化教学方向正确 外军普遍强调人才培养计划的确定应建立在大量的数据和科学的评估之上，充分反应每一名学员的发展需要。美军院校会对每一名学员进行课程学习能力、领导能力和训练潜力等方面的分析和评估，根据所得结果制定培养计划，确保学员素质和未来发展空间的提升最大化。如西点军校4000多名学员就有4000多个培养计划，几乎人均一个“蓝图” [ 1 ]，而我军院校一个专业一个计划很正常，每个学员的优势很难得到最大程度的发展。
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user: 3. 课程设置合理 课程设置合理与否将直接影响教学效果。外军院校在课程设置上兼顾理论与实践，强调提高学员的实战能力，重在对实际问题的研究，贴近学员实际任职需要。 3.1. 实践性或技能性课程比重高，突出实战化教学重要地位 课程内容设置大体分为两个部分：一部分是理论性课程，另一部分是实践性或技能性课程。在课时分配上，外军院校实践性或技能性课程所占的比重较大，美国、法国、德国、英国及俄罗斯等国军队院校，不论学制长短，理论教学和实习各占50%。美军院校有些专业课实践时间更长，要占到80% [ 2 ]。例如，美国西点军校每个学年会安排至少7周时间用于学员的实践训练(包括射击基础、6昼夜野外露营、陆地导航、常用军事指挥、17昼夜野外行动、以及有针对性的个人高级发展培养计划等科目)。再比如，俄罗斯总参军事学院在设置课程比例时将理论课程和实践训练的比例调整为3:7 [ 3 ]，并针对课堂内学习和课堂外实践训练分别制定了完善的规章制度。学员在下部队实习期间，必须同步参加常备兵团的演习活动，从而大大提高了学员在真实战场条件下的实战能力。我军院校理论课和实践课比例大约为7:3，实践及技能课程时间远远低于上述国家的数值。众所周知，理论与实践是相辅相成的，两者比例失衡将导致学员的发展受限。 3.2. 课程体系着眼岗位需求，注重实战化教学针对性 对外军院校来说，其学员在毕业后可选择的职业范围甚广，一般包括基层作战指挥职务、军级以上高级司令部机关的参谋、科研院所的研究人员或者情报机构雇员等。为了最大限度地实现训用一致，确保学员素质与部队需求保持同步，美、俄等国军校大都具有鲜明的“岗位培训”特点，按照岗位要求进行专业教育训练，教学内容的针对性很强。例如俄军马林诺夫斯基装甲兵学院为指挥类学员开设的课程中有战术学、班排级战术、沙盘推演和野外旅行作业等科目，而装备维修专业学员则不需要学习这些课程 [ 4 ]。
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user: 4. 实践环节丰富 打赢未来局部高技术战争，关键是拥有一大批适应部队发展需要的“打得赢”人才，而传统的院校课堂教学模式已经不能满足这种要求。外军院校强调教训一体化，通过大量的实践性环节，促进学员个人能力的生成，使院校成为复合型军事人才的训练基地。 4.1. 学员角色主体化，加速实战化训练中能力的形成 外军院校在课程的教学组织中，十分强调学员的主体地位，注重其在课程中的参与度。例如俄军马林诺夫斯基装甲兵学院在指挥类学员的培养中大量采用图上作业、沙盘作业和模拟实战条件下指挥等以学员为主体的教学形式 [ 4 ]。美海军航空兵军械学校故障诊断课程中，教员一方面结合装备实际讲授理论知识，另一方面在装备上设置许多故障，由学员进行测试、查找和定位故障，锻炼他们实际故障排查能力。德国的蒙斯特装甲部队学校专业课程中，实践课占50%以上，且大量采用实物和模型授课，由学员亲自动手操作 [ 5 ]。伏龙芝军事学院会定期安排学员进行首长–参谋部演习，在训练科目中，学员担任各种训练中的角色，有效的提高了学员的军事理论水平和实际指挥技能，并使之熟悉各职级的指挥职责，掌握合同战役和战斗的作战原则，对学员的组织能力、表达能力，都是非常好的锻炼。 4.2. 实弹演练制度化，强调真实战场环境在实战化训练中的作用 俄罗斯武装力量总参军事学院副院长巴佐金上将曾经说过“让学员像背台词那样看书本在未来战争中是不能制胜的”。由此可见，外军重视在真实战场环境下锻造学员的血性和战斗能力。俄罗斯总参军事学院针对生长指挥军官，每期学员在校期间至少进行2~3次的实弹演习；德国空军军官学校的学员每学年要消耗不少于4000发子弹，甚至会有火箭弹发射训练 [ 6 ]；美国西点军校要求学员以团队形式完成为期18天的实弹演练作业。实弹演练制度化使外军院校真正做到了“从课堂直接走向战场”。我军院校只在每年秋季开学时，组织新学员进行一次实弹射击演练，在校其他时间不会举行实弹射击。每次射击每人大约配20发子弹。在射击频次和配发子弹数量上，我军院校都远远落后于外军院校。
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user: 5. 模拟训练高效 模拟训练作为新型非实战手段应用于实战演习模拟，部队日常训练，能够在降低成本的同时，加快部队战斗力生成。目前，外军普遍加大模拟训练方面的投入，很多模拟训练设备已经拥有了与实装训练相近甚至相同的训练效果。 5.1. 以作战模拟训练作为实战化教学的重要依托 在作战模拟训练系统的应用方面，美军一直处于领先水平。在上世纪90年代，美军成立世界上第一个成熟的作战模拟训练系统，命名为“国家模拟中心”。基于该系统美军实施了“美军综合战区演习”和“欧洲大型军事模拟演习”等一系类重大模拟军事活动。进入本世纪以来，作战模拟系统在美国军事院校得到了大范围推广。美国陆军与英特尔公司合作研制的作战模拟系统，将大量日常作战训练方式带入到虚拟演习环境中，使美军日常军事训练伤亡率大大减少。俄军院校在作战模拟训练方面也取得了瞩目的成绩，如俄军库兹涅佐夫海军学院的数据库系统涵盖了世界各地区的海洋信息，学员可以利用该系统进行海上战役的推演，这是传统作战训练很难实现的 [ 7 ]。 5.2. 以装备模拟训练作为实战化教学的重要补充 军用武器系统结构复杂、造价高昂、保障难度大，很难大规模实际应用于一般装备教学训练。因此西方军事强国普遍大力发展装备模拟系统，并在教学中广泛应用。例如美军研制的F-22战斗机模拟维修系统几乎可以实现现有任何模块故障的仿真，学员在模拟器上的操作与在真实战斗机上的维修过程完全一致；美军“毒刺”便携式防空导弹模拟训练系统通过虚拟现实头盔技术高度还原了现实中的操作流程，同时学员的命中/脱靶比值与在执行应有的射击顺序中的任何错误都被系统自动存储起来并向教官作汇报 [ 8 ]；俄罗斯“音色-M”通用模拟训练系统是主要用于C-300系列作战班组人员及地空导弹系统指挥所的通用模拟训练装备，它的投入使用让学员对尖端武器装备的训练日常化，大大提高了训练效果。模拟训练的广泛应用为外军院校装备训练提供了重要补充。我军院校的模拟训练装备大部分为到达服役年限退役下来的落后装备，模拟系统开发滞后。学员只能学习一些基本的仿真模拟，任职之后基本上要重新学习，浪费了大量的时间。
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user: 6. 成绩考核科学 与我军重视笔试不同，外军对学员成绩的考核更为全面，程序更为严格和周密。 6.1. 紧贴实战化教学要求，重视能力考察 外军强调对学员能力的考核，评价贯穿于整个教学过程中的，并不单单由某一次考试所决定。例如美军的学员考核就包括三个方面：一是课程学习情况。针对学员相对于课程标准的完成情况，将成绩分为超出、达到、勉强达到和没有达到四个等级；二是能力展示情况。包括写作、口语表达、分组活动时的领导能力、日常完成团队训练时对集体的贡献等方面；三是发展潜力情况。主要根据学员是否具有明显优于其他人的专长来判断。俄军对学员的考核则采用现场抽签，口试辩答的方式。学员在作答过程中可以使用一切手段来展示自己的能力，包括板书、作图、甚至现场示范等方法 [ 9 ]。我军院校在考核学员时，仅仅重视学员的笔试和实操成绩，无法对学员的能力进行评估，导致有潜力的优秀人才无法在短时间内为我军所用。 6.2. 落实实战化教改标准，坚持分类指导 外军会将学员考核成绩进行量化评估，但并不是一概而论，而是根据学员类型的不同分别进行评价。例如美军将学员分为四类：陆军兵种院校、陆军院校和其他兵种主办院校的学员采用“兵种学校学习评估系统”；国民教育的学员采用“国民教育学校学习评估系统”；参加高级培训课程的学员采用“高级兵种学校学习评估系统”。这种分类指导原则的优点非常突出，可以降低与所从事专业无关课程对学员整体评价带来的影响。我军院校目前学员接受的教育课程数量繁多，院校不加区分地把课程压到学员身上。而学员为了应付考试盲目地学习，不分轻重缓急，无形中为学员将来的任职增加了难度。
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user: 7. 教员队伍优秀 教员队伍素质的高低直接影响学员的培养质量。想要在实战化教学改革中取得实质性的成效，就必须打造一支了解部队、懂得实战的优秀教员队伍。外军院校在教员队伍建设上秉承多种渠道，不拘一格，优中选优的原则，经过长期的摸索和实践，构建起了一批优秀的教员队伍。 7.1. 师资来源广泛，确保教员队伍知识结构全面 外军的师资力量来源比较广泛，从部队将领到商人政要，从高中文凭到硕士、博士不一而同。例如美国西点军校的军事教员选拔于部队中最优秀的指挥军官；文职人员招聘自地方知名大学、科研院所和政商界知名学者 [ 10 ]。英国皇家海军学院的教员从军级将领到战士选调，从初中毕业到博士文凭的皆有。学员与来自不同领域，有着不同经历的教员接触，可以多层次、多角度的了解军队和社会，开拓视野。我军院校长期以来一直自产自销，绝大部分教员来自军校毕业生，只有少量社会人才入伍提干。随着军队文职人员政策的深入展开，越来越多的地方高校以及科研院所毕业生加入到部队院校序列中，为我军院校增添了新的活力，开拓了广阔的视野。 7.2. 选拔标准严格，确保教员队伍综合素质过硬 外军院校一直致力于吸纳各个领域最优秀的人才投入到教员队伍当中，选拔教员的标准因此十分严格。依照院校的级别和所担任的课程的不同，选拔标准也有所不同：担任文化课程教学的教员的标准中比较注重学历、实际任教能力；担任军事课程的教员对部队工作经历有着严格的规定。例如俄罗斯军事院校毕业学员必须分配到部队、机关或科研部门任职数年，再经过至少2年的院校深造，并获得副博士学位以及具有团以上机关工作经历后，才能成为教员的预选对象。包括俄罗斯总参军事学院，加加林空军指挥学院和伏龙芝军事学院在内的8所军校中，有师长以上任职经历的高级教员比例超过30% [ 11 ]。严格的选用制度使得教员队伍的质量得到了保证，有利于院校与部队之间的无缝对接，提升了学员的实战素质。我军院校教员队伍普遍存在任职经历单一、学历高能力低、理论强而实践差的问题。想要在实战化教学改革中取得实质性的成效，就必须打造一支了解部队、懂得实战的优秀教员队伍。一方面要从提高教员聘用标准上下功夫，合理设置部队人才选调方案，坚持“学历、经历、能力”三位一体，把部队最优秀的人才吸收到教学一线。另一方面，要注重提高现有教员队伍的整体素质，增加代职的比例，提高代职的质量，着力丰富教员的部队基层经验，改善任职经历单一问题。 7.3. 流动更新频繁，确保教员队伍紧跟部队发展 外军院校教员流动性非常强，尤其是军事课程教员，任期一般不超过三年。例如美国西点军校军事课程教员的任期一般为2~3年。任期一到，大多数教员都离开教职，赴各级部队或司令部任职。只有不到15%的精英可以成为常任教授。频繁的流动可以防止队伍僵化，同时也使得学员可以了解到部队最新的发展和需求。我军院校教员流动性不强，尤其是基础课教学的教员过度依赖本职岗位，绝大多数教员终身在一所院校任职。教学内容与部队装备发展严重脱节，教员和学员的视野同时受限，制约了人才的发展。
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user: 摘要 本文利用一株桑叶内生菌——多粘类芽孢杆菌381的无细胞发酵液进行纳米银的胞外合成。微生物合成的纳米银溶液呈现红棕色，紫外全波长扫描结果显示在418 nm处有典型吸收峰。对纳米银合成的条件进行优选，结果表明，以内生菌株的LB培养液为还原剂和稳定剂，在与0.01 M硝酸银溶液以1:1体积比条件下37℃避光反应72 h，可以获得分散性良好的纳米银颗粒溶液。偏碱性条件有利于菌株发酵液还原制备纳米银，以pH 9时效果最好。平板打孔法实验表明，纳米银溶液随剂量增加，对桑青枯菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用均可增强，但对桑疫病菌的抑制效果不明显。液体培养法表明，合成的纳米银溶液对两株病原菌的最小抑菌浓度分别为50和30 ug/mL。
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user: 1. 引言 细菌耐药性是疾病预防与治疗中面临的重大问题之一。经典抗生素作用范围和效果的持续缩小与减弱促使科学家不断探究新的抗菌药物，因此以纳米银为代表的无机抗菌制剂又一次引起学者们的广泛关注 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]。纳米颗粒(silver nanoparticles， AgNPs)是指单维尺度在1~100 nm范围内的颗粒 [ 4 ] [ 5 ]，具有很高的表面积与体积比，有良好的小尺寸效应与隧道效应 [ 6 ] [ 7 ]，被广泛应用于生物抗菌领域 [ 8 ] [ 9 ]、生物传感器 [ 10 ]、环保材料制备及水污染物处理 [ 7 ] [ 11 ] [ 12 ] 等领域，是当前纳米技术的重要发展方向之一。纳米颗粒的制备有物理、化学及生物还原法，前两种方法需要高温、高压条件或使用有毒性的还原剂、稳定剂，具有生产能耗高及毒性试剂残留等缺点，生产的纳米颗粒易产生团聚导致分散性不好 [ 13 ] [ 14 ]。采用生物方法，尤其是微生物进行金属离子的还原而制备纳米金属颗粒，其合成过程以生物体自身的代谢产物为还原剂，在常温下即可完成，合成的纳米颗粒可与某些生物分子结合从而具有良好的稳定性和分散性，因此逐渐受到学者们的重视 [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ]。研究发现，采用生物学方法制备的纳米银颗粒具有良好的分散均一性，具有抗菌、抗肿瘤及抗氧化等多种生物活性，其对病原菌的抑制效果优于银块状金属，且不易产生抗药性，并且可增幅抗生素的活性作用，在医药领域具有广泛的应用前景 [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ]。细菌是最早被用于纳米银合成的微生物 [ 15 ]。细菌广泛分布于不同环境，种类多，生长速度快，人工培养条件简单可控，已经成为纳米银合成的重要菌株来源，目前已报道利用土壤、水体及植物内生菌中的大肠杆菌 [ 17 ]、希瓦氏菌 [ 7 ]、北极副球菌 [ 18 ] 及乳酪短杆菌、假单胞杆菌等菌株成功合成纳米银 [ 11 ] - [ 16 ]。并对纳米银的安全性进行了比较分析 [ 19 ]。 类芽孢杆菌广泛分布于自然界多种环境中，是植物微生态的优势种群之一。类芽孢杆菌在生长过程中可产生脂肽、多烯等抗生素物质，还具有很强的蛋白酶、淀粉酶及脂肪酶等活性，在医疗、植物病原菌防治及环境等方面具有很大的应用价值 [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ]。本实验室从健康桑叶中分离得到一株内生类芽孢杆菌，经生理生化及分子生物学方法鉴定为多粘类芽孢杆菌，其对桑叶病原菌青枯菌和疫病病原菌M4-13均有一定的抑制作用，植化分析表明其中含有生物碱、黄酮及萜类产物 [ 23 ]。初期的筛选结果表明菌株381可以进行纳米银的绿色合成。本文对纳米银生物制备的条件进行研究，并进一步检验合成纳米银的抑菌活性，一方面可丰富内生细菌的生物功能及作用，另一方面也为纳米银的生物合成研究提供参考数据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验材料 2.1.1. 实验菌株 桑叶内生细菌381由本实验室分离并保存，经分子生物学方法鉴定为多粘类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa 381 [ 23 ]。病原细菌：桑青枯菌Ralstonia solanacearum、桑疫病病原菌Pseudomonas syringae pv. Mori M4-13和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus均为本实验室保存菌株。 2.1.2. 实验仪器与试剂 主要实验仪器：UV9600紫外可见分光光度计(北京瑞丽)，(ALLEGRA 64R)高速冷冻离心机(美国贝克曼)，DHZ-052D型双层恒温摇床(常州朗越仪器制造有限公司)，CXZ智能型光照培养箱(宁波江南仪器厂)，UV-2450紫外可见分光光度计(日本岛津)，SW-CJ-1F单人双面净化工作台(上海苏达实验仪器有限公司)。 主要试剂：葡萄糖、硝酸银、氢氧化钠、硝酸等为分析纯试剂，琼脂粉、酵母浸膏、胰蛋白胨等为CP级。以上试剂购自国药化学试剂公司。 2.2. 实验方法 2.2.1. 内生细菌的发酵和无菌滤液制备 将多粘类芽孢杆菌381菌株划线接种到马铃薯葡萄糖琼脂固体(PDA)培养基中，35℃培养24 h，无菌水冲洗菌苔，调整菌液OD 600 为1.0，取0.5 mL菌液接种到无菌的LB液体培养基(不含氯化钠)中，150 rpm，37℃，震荡培养3 d。 无菌体发酵液的制备：取培养3 d的细菌发酵液，在8000 rpm，4℃条件下离心20 min，收集上清液即为无细胞发酵液，保存于4℃冰箱中备用。 2.2.2. 纳米银的生物合成 配置0.01 M的硝酸银水溶液，按一定体积比与制备的无细胞发酵液混合，置于摇床中，在150 rpm，37℃避光条件下震荡反应进行纳米银的生物合成。 2.2.3. 生物合成纳米银的检测 颜色变化：混合溶液反应后，间隔不同时间观测反应溶液的颜色变化，分别以纯无细胞发酵液和硝酸银溶液为对照。 紫外全波长波谱扫描：间隔不同时间取0.5 mL上述混合溶液，加2.0 mL去离子水稀释5倍，用紫外可见光分光光度计在300~800 nm范围内进行波谱扫描，波长间隔1 nm。 2.2.4. 生物合成纳米银的条件选择 菌液与硝酸银溶液的体积比将内生细菌的无细胞上清液，分别与10 mM AgNO 3 溶液按照1:9、3:7、1:1、7:3和9:1的体积比混合，按照2.2.2中的方法进行纳米银颗粒的合成。反应开始后，每间隔1 h取样进行波谱扫描，取样6次后间隔12 h再取样测定，连续检测72 h，观察反应溶液的特征吸收峰变化。 AgNO 3 溶液的浓度分别配制2，4，6，8和10 mM的AgNO 3 溶液，以优选体积比例与无细胞发酵液混合进行纳米银颗粒的合成，反应起始后每间隔12 h进行一次吸收光谱扫描，选择合成纳米银所需的硝酸银浓度。 无细胞发酵液的pH值分别采用2 M的硝酸溶液和氢氧化钠溶液将内生菌株的无细胞上清液的pH值分别调至5，6，7，8，9，再与适当浓度的AgNO 3 溶液按适合比例混合，从反应起始至结束，每间隔12 h进行一次全波长吸收峰扫描，以确定纳米银生成的适当pH。 2.3. 生物合成纳米银的抑菌活性 平板打孔抑制试验：将青枯菌、桑疫病菌M4-13和金黄色葡萄球菌分别划线接种到PDA平板上，35℃活化培养24 h。以无菌水冲洗培养平板上的菌苔，调整菌液OD 600 = 0.6，取0.1 mL菌液，均匀涂布到新的LB (金黄色葡萄球菌和青枯菌)和PDA平板(M4-13)。用直径5.96 mm的打孔器于涂菌平板上均匀打出6个孔，分别吸取10 mM AgNO 3 溶液20 μL、内生菌无细胞发酵液20 μL，合成的纳米银液20、40、60 μL，以1 mg/mL的氨苄青霉素溶液为阳性对照，在35℃下恒温培养24 h后，测量各孔周围的抑菌圈大小，重复3次，计算抑菌圈的平均值。 最小抑菌浓度测定：离心分离合成的纳米银溶液，低温烘干后得到纳米银粉末，以无菌去离子水分别配置10~100 μg/mL的纳米银溶液，分别接0.5 mL到装有5 mL病原菌LB培养液的试管中，37℃ 150 rpm培养24 h后，观察菌液的浑浊度和生长情况，澄清且无菌生长的试管所对应的最小纳米银添加浓度作为最小抑菌浓度。实验重复3次。 实验结果以Excel进行绘图，数据分析采用SPSS 22.0软件进行。
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user: 摘要 产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli， STEC)是重要的食源性致病菌，能引起人和动物发生腹泻、出血性肠炎和溶血性尿毒综合症等疾病。为了更好的开展STEC检测、表征、分子进化分析及溯源调查，本文对国内外STEC基因分型技术包括基于酶切扩增分型方法、基于全基因组测序(Whole genome sequencing， WGS)分型方法以及多位点串联重复序列分析(MLVA)、DNA微阵列(DNA microarray)和成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)分型技术研究进展进行综述，并对基因分型研究方法存在的问题进行探讨，为STEC的溯源追踪和流行病学调查提供参考。
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user: 1. 引言 产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli， STEC)是一种能产生志贺毒素，并能引起人畜共患病的重要食源性致病菌，可以引起人体水样腹泻、出血性结肠炎等胃肠道疾病，严重时能导致溶血性尿毒综合症、血小板减少性紫癜等并发症甚至死亡 [ 1 ] [ 2 ]。人体感染STEC的途径非常多，主要包括两种：人体直接接触反刍动物的蓄水池直接感染，或者通过摄入受粪便污染的食物或水间接感染 [ 3 ]。自1982年首次发现STEC以来，已经发现400多种不同血清型的STEC，O157:H7是研究最多的血清型 [ 4 ]。除此之外，其它STEC血清型：O26:H2、O45:H2、O103:H11、O111:H8、O121:H19、O145:H28也能导致人体患病 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]。由此可见，STEC血清型种类繁多，依靠传统检测分型手段难以快速识别感染源，导致人体感染STEC风险提高，因此掌握高效、高分辨率的STEC分型方法对保证食品安全尤为重要。 传统的表型分型技术通过菌体培养、结合生化检测和免疫反应等开展检测鉴定，其中应用较多的表型分型技术是免疫血清分型技术。该技术结合174种体细胞表面抗原(O-抗原)和53种鞭毛抗原(H-抗原)，用抗体检测抗原的方法 [ 6 ] [ 7 ]。目前，采用该方法已经鉴定出400多种不同血清型的STEC，并且根据报告的发病率和严重程度将其中几种血清型进一步分类为血清病理类型。命名范围从高发病率、致死的A类血清病理类型到症状轻微E类血清病理类型 [ 4 ]。尽管表型分型技术具有操作简单的特点，但是该技术却有很多局限性，如表型特征数量有限、成本高、劳动强度大、抗体可能发生逐批变异等缺点 [ 8 ]。目前研究报道最多的是基于DNA序列差异为基础的分型方法，这种方法不仅灵敏度、分辨率高、并且可将患者携带的STEC与污染源联系起来有利于开展流行病学调查，进而减少疫情的规模和地理范围。除此之外，基因分型技术分型能力更强，能区分传统表型分型方法不能分型的STEC血清型，如O182:H25型STEC采用传统血清凝集方法并不能鉴定、分型，而基因分型方法可基于DNA序列之间差异，通过与数据库序列比对，可快速、准确获得该型STEC血清型。因此，基因分型方法在STEC分型研究中越来越受到科研工作者亲睐。 本文根据分型方法不同，将基因分型方法归为以下几类：基于酶切扩增分型技术、基于高通量全基因组测序分型技术、多位点串联重复序列分析(Multiple locus variable number of tandem repeat Analysis， MLVA)分型技术、基于DNA微阵列(DNA microarray)分型技术、基于成簇规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats， CRISPR)分型技术，综述了STEC基因分型的研究进展，同时探讨了基因分型技术的优缺点，为STEC溯源追踪和流行病学调查选择基因分型技术方法提供理论依据。
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user: 2. 基于酶切扩增分型技术 2.1. PCR-限制性片段长度多态性 PCR-限制性片段长度多态性技术是传统RFLP (Restriction fragment length polymorphism， RFLP)技术的演变。传统RFLP技术是利用限制性核酸内切酶酶切菌体染色体DNA形成特定DNA片段，然后利用电泳技术对限制性片段进行常规分型 [ 9 ]。而PCR-RFLP技术是先通过PCR扩增相应的目的片段(片段位于DNA保守区)，再对PCR产物进行酶切、电泳，最后通过观察比较限制性图谱分析序列之间的差异进行分型。 Shima等 [ 10 ] 利用PCR-RFLP方法对202株STEC O157片段V的多样性进行流行病学调查分析，结果显示202株菌可以分型为24组且这些菌株具有时间和空间上的相关多态性，并将分型结果与PFGE相比较，结果表明PCR-RFLP是一种更实用、更可靠的STEC分型方法。类似的研究也可见于Shridhar等 [ 11 ] 采用同样分型方法对192株非O157型STEC志贺毒素基因进行分型研究。除此之外，PCR-RFLP还应用与沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等分型研究 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ]。虽然PCR-RFLP技术应用广泛，但其实验操作复杂，实验周期长，已不能完全满足当今对食源性致病菌快速、准确分型的要求。 2.2. 扩增性片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism， AFLP) 1995年，Collegue和Vos首次提出了AFLP技术 [ 15 ]，原理是基于选择性基因组的一部分限制性片段实现分型，即用限制性核酸内切酶酶切菌体DNA，获得分子量不同的限制性片段，使用特定互补双链接头与限制性片段连接作为扩增的模板，接头序列含有核心序列和酶特异性序列，为PCR引物结合和限制性片段扩增的靶点，接头和与接头相邻的酶切片段的碱基序列是引物结合位点，3个选择性核酸加在接头3’端为粘性末端。 AFLP结合了RFLP和RAPD (随机扩增多态性DNA标记)技术特点，是一种非常快速和相对简单的实验室工作 [ 16 ]。Hahm BK等 [ 17 ] 采用AFLP、rep-PCR和PFGE对54株STEC分型，结果显示AFLP要比PFGE更快速、简便区分STEC分离株。除此之外，该方法另外一个优点是不需要提前了解菌株的序列信息，可以鉴别任何种类菌株，因此，AFLP技术应用非常广泛 [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ]。然而，该方法在检测菌株方面存在局限性，如显性标记不易转化成位点特异标记，DNA纯度及内切酶质量要求高等。随着AFLP技术的发展和完善，目前，已经出现了一些新的AFLP技术如三限制性酶切AFLP (TE-AFLP)、二次消化AFLP (SD-AFLP)、单限制性酶切AFLP (SADF-AFLP)等 [ 21 ] 技术。张平平等 [ 22 ] 利用SADF-AFLP技术对113株O157:H7血清型STEC基因分型，通过此分型技术发现STEC在不同地区和不同物种之间存在相互传播。 2.3. 脉冲凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis， PFGE) PFGE是将染色体DNA用限制性核酸内切酶消化，产生DNA大片段，通过改变外加正交变脉冲电场的方向、时间及电流大小，将大小不同的DNA分子分开，产生不同的电泳图谱，再利用BioNumerics软件生成直观的条带和聚类树状图，从而确定菌株间的亲缘关系。在流行病学调查、疾病爆发监测和菌群溯源等方面，PFGE被认为是最经典的方法。通过计算机处理PFGE数据，能够准确解释菌株亚型的数据信息 [ 23 ]，具有分辨率高的优点。美国PulseNet通过标准菌株的应用实现PFGE实验方法的标准化，被誉为细菌分子学分型技术的“金标准”。 王丽丽等 [ 24 ] 利用Swal、Smal和Apal三种内切酶酶切STEC基因组，采用PFGE方法将300株STEC分型，共获得161种表型，初步建立了我国STEC菌株的PulseNet数据库，且该数据库具有与其它国家数据库共享的潜力。类似的，Cotruta等 [ 25 ] 采用PFGE方法将15株STEC菌株O26血清型分成14种脉冲型，Mariana等 [ 26 ] 采用PFGE方法证明O157和非O157血清型分离株在同一批动物中间存在交叉污染。尽管PFGE分辨率高，有标准的实验操作流程，然而PFGE实验流程长，对暴发菌株不能快速、准确的分型。目前PFGE技术常与WGS技术联合应用于基因分型。
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user: 3. 基于高通量WGS分型技术 高通量测序技术近几年发展迅猛，它不仅能对单一物种进行深入的全基因组测序以及重测序，也可以对多种物种基因信息进行高效、准确的遗传差异分析，为微生物分型提供了更为有利的分析工具。在STEC分离株基因分型上，WGS技术应用主要体现在单核苷酸多态性分型(SNPs)、基于核心基因组多位点序列分型(cgMLST)。 3.1. 基于SNPs分型 SNPs分型主要根据菌株基因组特定位点碱基突变分型菌株，突变位点可以通过参考序列与组装的contigs比对来完成 [ 27 ]。SNPs分型方法选择的参考基因组序列必须与测序样本具有高度的亲缘性，否则在比对时会增加错配的机率。 Baha Abdalhamid等 [ 28 ] 对7株非O157血清型的STEC采用SNPs血清分型，结果显示7株菌株中6株菌株血清型为O26:H11，一株菌为O182:H25。除此之外，由于STEC菌株在分离过程中很容易受背景菌干扰，导致STEC很难从样品中分离鉴定。为了消除背景菌的干扰，Singh Novjot等 [ 29 ] 基于WGS技术创建RNA诱饵富集方法直接分析样品中的STEC，通过分析测序获得高质量SNPs，对样品中STEC直接血清型分析，这种方法无需获得STEC分离株，从而减少疫情溯源的成本和时间。同样的研究也见于Claire Jenkins等 [ 30 ] 通过分析两个暴发群STEC分离株SNPs，获得两个暴发群部分STEC分离株的共祖。因此，作为第三代分子标记技术，SNPs分型能力强、效率高、分辨率高，但是实验标准不统一，重复性差，且该技术需要一定的计算机操作技能。 3.2. 基于cgMLST分型 1998年，Maiden等 [ 31 ] 提出MLST方法，该方法是建立在MLEE (multilocus enzyme electrophoresis， MLEE)的基础上，根据ECMLST (https://www.shigatox.net/stec/cgi-bin/index)数据库提供的分型方案，一般测定6~10管家基因内部400~600 bp片段的DNA序列，根据每个位点发现时间的先后顺序赋予其一个等位基因编号，通过分析菌株的等位基因编号排列组成等位基因谱，该等位基因谱对应唯一的编号，即为此菌的序列型(sequence type， ST) [ 31 ]。该分型方法能够提供精确便携的数据，能较好地反应出进化和菌群生物学变异。在MLST的基础上扩展的cgMLST以WGS数据为基础，在构建核心基因组和分型的过程中，确保MLST管家基因存在于核心基因集合中，然后再将构建获得的最小生成树同已有的数据进行比对，保证分型结果的一致性。 Magdalena等 [ 32 ] 采用cgMLST对18株EHEC O80:H2血清型分型，结果显示18株EHEC均属于ST301，且cgMLST趋向于根据不同的毒力基因将菌株分为不同的簇，通过构建最小生成树追溯毒力基因的进化。类似研究也见于邵纯纯等 [ 33 ] 采用cgMLST对35株STEC分型，共获得14个序列型。其中O157:H7有8株，将这8株菌通过与数据库中进行比较，8株O157:H7产生了变异。 综上所述，cgMLST分型方法分辨率高，对菌株之间的细微变异扫描灵敏，为菌种鉴定及流行病学研究贡献了大量重要的数据基础。然而该方法操作较为复杂，且不同的实验方案获得不同结果影响实验室数据的比较、共享。
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user: 4. 其他基因分型方法 4.1. 基于MLVA分型 MLVA是选用多个数目可变串联重复序列(Variable number of tandem repeat， VNTR)位点分型的方法，具有简单、通量高、分辨率高等特点。通过对菌株测序，可获得大量高度保守的重复序列片段，利用重复序列片段的长度、拷贝数、位点不同等特征可进行菌株分型。MLVA分型方法要求采用的VNTR位点具备稳定性，否则分型结果容易出现误差。所采用的稳定位点由中间的核心区和外围的侧翼区组成，核心区含有两个或者两个以上头尾串联重复的短片段序列，每个片段长度6~40 bp不等，重复次数从几次到几百次不等 [ 34 ]。 Bai等 [ 35 ] 采用MLVA对30株来自中国不同地区O157血清型STEC分型研究，共获得23个表型，通过与PFGE及MLST分型结果比较，表明O157血清型STEC在食品加工过程中存在交叉污染。相似的研究也见于Chris等 [ 36 ] 采用MLVA、PFGE对84株临床非O157血清型STEC分型，结果表明MLVA在O26、O111、O103以及O121STEC具有更准确的分型。除此之外，MLVA技术也逐渐扩展到其它常见食源性致病菌的分型和流行病学溯源，如沙门氏菌、单增李斯特菌及金黄色葡萄球菌等 [ 37 ] [ 38 ]。MLVA技术在食源性致病菌的分型研究中应用广泛，但该技术仍有一些缺点限制了MLVA的应用，如需要高质量特异性引物、不同实验室获得的结果不能共享和比较，在国际上并没有统一的标准物质等。随着STEC全基因组序列的公布，越来越多的MLVA数据库在逐步建立和完善。为了便于不同实验室研究结果的比较和分析，需建立统一操作规程、试验标准等，进而构建全球或者地区统一MLVA数据库，使MLVA分型技术在STEC分型发挥更大作用。 4.2. 基于DNA微阵列分型 DNA微阵列又称DNA芯片技术，是一种程序化、规模化的基因分型技术，原理是先将基因片段有序的排列在处理过的载体上制成芯片，待测样品用荧光标记后与芯片杂交，最后通过荧光扫描及计算机的分析，获取样品核酸信息 [ 39 ] [ 40 ]。 目前，一些DNA microarray方法已经被用来鉴定分型STEC。Quinones B等 [ 41 ] 以stx1、stx2以及eae为靶点，设计低密度30-聚体寡核苷酸DNA microarray方法并结合光聚合比色方法对6株不同来源O157血清型STEC1株非STEC进行快速、准确基因分型。类似地，Quinones B等 [ 42 ] 设计的以O抗原基因簇为靶点，采用低密度30-聚体寡核苷酸DNA microarray方法对11株不同来源、血清型STEC也可以快速、准确基因分型。但是也有报道DNA microarray方法使用荧光分析会出现空间阻隔作用导致实验灵敏度降低 [ 43 ]。 DNA microarray能同时筛选多组特定基因标记，可用于在大量样本中对STEC进行快速准确的基因分型。除此之外，相比于WGS技术，DNA microarray不需要分析大量的序列，是一种值得推广的方法。 4.3. 基于CRISPR分型 CRISPR广泛分布在细菌和古细菌中，具有高度多样化的遗传结构。CRISPR由一段不连续的正向重复序列和插入其中的间隔序列组成。对于同一物种而言，大多数CRISPR位点的重复序列具有高度的保守性，而间区序列则具有高度多态性，因此基于间隔序列，CRISPR分型分析可用于病原菌的分型、鉴定及检测等 [ 44 ]，如已应用于结核分枝杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、空肠弯曲杆菌等菌株的分型和进化研究中 [ 45 ] [ 46 ] [ 47 ] [ 48 ]。 作为一种新兴的分型技术，采用CRISPR技术探究STEC的分型研究很少，Delannoy等 [ 49 ] 采用CRISPR技术对7种重要的STEC进行实时荧光PCR检测分析，结果显示毒力基因与O:H血清型存在特定的相关性。梁文娟等 [ 50 ] 采用CRISPR分型技术对705株STEC分型，结果显示CRISPR分型效果要比PFGE具有更高的分辨率。CRISPRs作为一种新颖基因分型研究方法，为STEC快速准确鉴定和预防提供新的思路。
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user: 5. 结语 由于STEC对公共卫生构成重大威胁，且存在大规模暴发的可能性，有必要采用效率高、分辨率高的分型方法进行有效监测。本文主要综述了STEC基因分型方法的研究进展，比较了基因分型方法与传统血清分型方法的异同点，分析了基因分型技术在STEC分型应用中的优点及局限性。鉴于STEC血清型复杂繁多，不同血清型菌株毒力、耐药等表型不同，需多种基因分型技术相结合开展回溯性分析，使STEC分型更加快速、准确。
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user: 摘要 在构建等离子体与电磁波相互作用的几何模型基础上，利用WKB近似方法得出了吸收衰减公式。结合Matlab数值模拟，讨论了不同入射角超高频微波与等离子体碰撞频率、等离子体峰值密度之间的相互影响和作用机理。通过计算结果发现，当等离子体分布呈抛物线分布时，对入射超高频微波的吸收效果最好。