DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 课程建设历程及改革重点问题 2.1. 课程建设发展历程 自2015年以来，本文笔者一直承担信息与计算科学专业的程序设计与算法语言(C++)的教学工作，期间积累了丰富、完整的教学案例库、习题库和试卷库。其发展历程主要分为三个阶段： 1) 2015年起，承担C++程序设计教学，开始收集课堂教学案例、实验教学案例、C++习题和试题等。经过5年多建设，已经建成了涵盖C++语言所有知识点的教学案例超100个、习题量累计约1000个，可支撑本课程的平时作业、单元小测和期中/期末考试，还为每个单元配备5~8个实验操作案例，学生可以在这些案例中选择3个完成实验任务。 2) 2016年，C++程序设计获得校级网络在线课程立项，开始将教学资料布局在课程网站上。从15信计到18信计，经过四轮的教学改革，已经建立了一套完整的“五在线、一线下”的课程考核评价方案，即在线考勤、在线互动、在线作业、在线测试、在线讨论及线下期末考试。 3) 2020年2月，引入南京航空航天大学的国家级精品在线开放课程《面向对象C++程序设计》建立异步SPOC课程，弥补了课程教学视频的不足。笔者运用课堂派在线教学工具，有效开展课前预习、课件/试题互动、提问、抢答、在线作业、在线测试、分组讨论、直播教学、录播教学等教学活动，使线上线下教学形式更多样化，教学效果数据跟踪更灵活、更及时、更高效。同时，课程考核方式优化为“六在线、一线下”，即新增在线视频学习。 2.2. 教学改革要解决的重点问题 课程的发展历程，就是课程教学不断改革的过程，在此改革过程中，需要我们去重点解决如下三个问题： 1) 如何建设丰富的教学案例库、习题库、试题库及实验操作案例库 本课程是实践性非常强的一门专业必修课，为课程涵盖的所有知识点建立对应的教学案例、习题(试题)和实验操作案例等课程资源是建设好本课程的基础。因此，笔者查阅、学习了非常多的国内外优秀教材、习题集以及上机实验项目手册等，花费了大量时间按照课程知识点整理教学案例、习题以及实验项目，最终形成了能支撑本门课程日常教学的教学案例超100个、习题约1000个、实验操作案例约80个，还有大量的课后编程练习。 2) 如何合理利用在线教学平台和工具，有效开展线上线下混合式教学 有了课程资源，利用好这些课程资源成为了关键。笔者起先使用学校课程中心平台，建立课程网站，搭建课程知识点体系，对应建立教学案例库、习题库和实验操作案例库，在该平台上最终实现“在线作业、在线测试、在线讨论”等教学形式。接着，笔者运用课堂派平台工具，为课程教学补充了“在线考勤、在线互动”的教学环节，同时将“在线作业、在线测试、在线讨论”等也移植到课堂派平台上。最后，引入中国大学MOOC上的国家级精品在线开放课程，将“在线视频学习”也纳入了课程评价体系。 3) 如何有效跟踪学生过程化学习成效，使考核评价机制更合理有效 以前，实施过程化教学评价最困难之处就是如何快速有效地记录过程化教学过程中所产生的教学数据。随着互联网技术的持续发展，利用好优秀的互联网教学平台工具(如课堂派、中国大学MOOC等)，使得过程化教学数据的收集非常容易实现。笔者开拓思维，积极学习这些教学平台工具，有意识地收集本课程考核所需要的过程化教学数据，使得混合式课堂教学更灵活，课程考核依据更充分。 2.3. 课程内容与资源建设及应用情况 经过线下课程建设、校级在线开放课程建设及线上线下混合式课程建设，本课程已建成覆盖所有教学知识点的、丰富的教学资源。 1) 拥有超100个教学案例的教学案例库，这些教学案例将应用到课件预习、教师讲授、师生互动、生讲生评、以练代讲、案例点评、分组讨论等的各个教学环节，促使学生对课程重难点把握得更准确。 2) 拥有约1000个试题的课程习题库，习题涵盖课程的所有知识点，可自由组合习题，随机生成单元测试、期中测试等，也可将习题应用到课堂教学的互动环节，可辅助完成更丰富的师生互动、生生互动的课堂教学形式。 3) 拥有约70个实验操作案例的实验案例库，这些案例可应用到学生上机实验，学生可选择每个单元的3个实验操作案例完成实验报告。其中有10个实验操作案例综合性较强，学生可以分组讨论完成，也可将这10个实验操作案例应用到课程设计环节，给学生更多的挑战机会。 4) 拥有一个成熟的校级网络在线课程平台，通过该平台，笔者积极尝试线上线下互动教学，摸索出“五在线、一线下”的课程考核评价体系，课程教学成效逐步显现。 5) 利用中国大学MOOC平台，引进了南京航空航天大学的国家级精品在线开放课程《面向对象C++程序设计》的所有在线教学视频，建立适应学生水平的异步SPOC课程，提供了丰富的测试、作业及课程讨论等资源，这些资源都将会充分、合理地应用到本课程的线上线下混合式教学环节中。 6) 2020年，利用课堂派平台等教学工具，本课程的线上线下混合式教学开展得更丰富、更高效。课前，学生预习情况跟踪更及时；课中，师生互动、生生互动、分组讨论更多样；课后，作业测试反馈更便捷。
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user: 3. 课程组织形式及考核方式 3.1. 课程目标 程序设计与算法语言(C++)是面向信息与计算科学专业大一学生开设的专业必修课，是奠定本专业学生软件开发技能的基础性课程。为适应学校“建设海西一流、亲产业大学”的办学定位，本课程以大量的C++教学案例为载体，采用“案例驱动式”教学模式和“六在线、一线下”的过程化考核机制，培养学生达成以下目标： 1) 知识目标 通过本课程学习，学生应当全面了解C++语言发展历史，掌握C++语言基础知识，理解面向对象程序设计机制，掌握类、对象、封装、继承和多态等面向对象程序设计概念；了解流类体系和文件读写操作等知识。 2) 能力目标 通过本课程学习，学生能应用面向对象程序设计机制编写具有一定综合性的小型应用程序，具有较强的表达能力和逻辑思维能力，可完成复杂度较高的算法设计，在实践能力、创新应用能力方面得到有效提升。 3) 素质目标 通过本课程学习，学生需养成良好的自学和独立思考的习惯，具有一定的团队协作精神，具备锲而不舍的探究精神和精雕细琢的工匠精神，成为具有较强自信心的综合型人才。 3.2. 课程教学内容 本课程教学内容共分为13章，其中必修12章，选修1章。主要包括：绪论、C++的数据类型、C++语句、函数、类与对象、数组、指针、继承与派生、多态性与虚函数、泛型程序设计与标准模板STL (选修)、流类体系与文件操作、异常处理等。 3.3. 课程组织实施 本课程分为三个阶段进行组织实施(详见图1)： 1) 课前 在中国大学MOOC平台的SPOC《面向对象C++程序设计》布置在线视频学习任务，预习上课知识点。在课堂派平台发布课件预习任务。 2) 课中 采取“案例驱动式”教学模式，以教学案例为主线组织教学活动，具体教学活动包括预习归纳、知识问答、编程训练、分组讨论、总结提升。其中，知识问答、分组讨论环节通过课堂派提供的互动功能实现。 3) 课后 学生除了完成每节课的课后作业外，每单元需要完成一次单元测验。此外，学生在实验课之前，还需完成实验操作项目报告。作业和实验报告通过课堂派作业功能提交，单元测验通过课堂派的测试功能完成。 图1. 课程组织实施过程示意图 3.4. 课程成绩评定方式 本课程考核模块主要分为在线视频学习(20%)、课堂表现(10%)、作业实验报告(10%)、单元测试(10%)和期末考试(50%)。 各个考核模块分别从人文素养、专业知识与技能和综合能力水平对学生的综合表现进行全面评价。详见表1： Table 1 The evaluation focus of each assessment modul 考核知识与能力 考核模块 文化素养 专业知识 自学能力 编程能力 表达能力 协作能力 实践能力 创新能力 在线课程学习(20%) √ √ √ √ √ √ 课堂表现(10%) [在线考勤、在线互动、在线讨论] √ √ √ √ √ √ 作业实验报告(10%) [在线作业] √ √ √ √ √ √ √ 单元测试(10%) [在线测试] √ √ √ √ √ 期末考试(50%) [线下考试] √ √ √ √ √ 表1. 各考核模块评价侧重点 与之前课程评价方式相比，“六在线、一线下”的过程化课程评价体系将在线SPOC课程学习成绩作为总评成绩的一部分，让学生学在平时；降低考勤比重，增加课堂表现评价，让学生练在平时；增加单元测验评价，降低期末考试权重，让学生考在平时。
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user: 4. 课程特色、创新及改革成效 4.1. 课程特色 1) 课前预习更便捷，知识点归纳更有效 课前，教师发布预习公告。学生可以在中国大学MOOC平台上的《面向对象C++程序设计》的SPOC课程轻松开展在线视频学习，学生可以全面预习课程的知识点，对知识点有了初步理解。再经过课堂上老师的预习归纳、知识问答、小组讨论、总结提升等环节，学生对知识点掌握更牢固。学生在此过程中，自学新知识的能力有一定提升。 2) 课堂教学更活跃，知识点掌握更牢固 课中，老师首先对预习知识点进行归纳呈现，利用课堂派在线互动功能开展知识问答、编程训练、分组讨论等教学环节，这些环节围绕着学生对课程知识理解、熟悉、应用、工具及提升展开，学生在此过程中参与度更高、获得感更强，课堂学习氛围更活跃。 3) 课后训练更全面，知识点提升更到位 课后，学生需要完成课程内容相关的作业、测试和实验操作项目，还可以参与讨论区的讨论，学生能从各方面训练到课程教学知识点。单元测试难度较大，要求学生查阅文献、积极思考并且动手编程才能取得较好的成绩，这使得课程的挑战性得到较大提升。 4.2. 教学改革创新点 1) 课堂形成“案例驱动式”教学模式，即以知识点的教学案例为课堂资源，以学生知识点掌握及能力提升为目标，以“预习归纳–案例展示–知识问答–编程训练–分组讨论–总结提升”等教学环节合理开展混合式互动教学，引导学生主动获取、有效归纳、创新应用课程知识，使课堂学习趣味性更高，课外学习延拓性更广。 2) 利用中国大学MOOC、课堂派等平台，有效开展“六在线、一线下”的过程化的课程评价体系。教学不再局限于课堂，学生学习自觉性被延拓到课前和课后，教学评价不仅限于期末考试，改变学生学习习惯，让学生形成持续学习的习惯。 4.3. 诊断改进与改革成效 本课程在改革过程中，得到学生、同行和督导多方好评，2018-2019-2学期和2019-2020-2学期的学生评教得分分别为99.12分和96.29分，均为优秀。2019-2020-2学期，课程的同行评教为91分，督导评教为87分，也均为优秀。 1) 编程训练贯穿课前、课中和课后。课前可根据在线教学视频模仿编写程序；课中可通过案例的编程训练巩固编程技能；课后通过作业和实验操作项目中的编程题，持续提升编程技巧。 2) 单元测试的知识点不局限于课堂，要求学生通过查阅资料、编程实践和总结归纳才能获得正确答案。课程难度和挑战度显著提升，有助于激发优秀学生学习热情。 3) 通过“六在线、一线下”的综合评价，让学生学在平时，避免学生出现期末考前突击复习的现象。我们可以看到，改革后，19信计的总评成绩的平均分(为85.76)明显高于18信计(74.04)。
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user: 5. 课程建设计划及改进方向 5.1. 五年建设计划 1) 根据我校应用型人才培养目标和专业定位，将异步SPOC《面向对象C++程序设计》进行本校化改造，适当调整、增加教学视频、测试、作业及考试资源，在讨论区针对课程重难点，形成精华讨论帖，长期提供答疑环境。 2) 整理、汇总、补充教学案例、习题库和实验案例，编写适应应用型本科高校教学需求的课程教学案例教材。 3) 录制习题讲解短视频、实验案例操作讲解短视频，为课程提供更丰富的视频教学资源。 4) 有效改进线上线下混合式课堂教学，形成具有参考价值的教学经验，用数据总结混合式教学成效，完成关于研究混合式教学的教研教改论文并发表。 5.2. 需要进一步解决的问题 1) 如何有效跟踪学生的课前预习，分析和评判学生的课前预习成效； 2) 如何合理优化现有的“案例驱动式”教学模式，收集学生课堂参与数据及客观，评价学生对课堂知识的掌握程度； 3) 如何有效激发学生课后学习动力，准确评价学生课后作业、测试及实验的完成情况，客观评价学生的实践能力和创新能力的。 5.3. 改革方向和改进措施 1) 充分利用课堂派平台、中国大学MOOC平台、腾讯会议等教育教学辅助工具，挖掘这些工具功能上的优势，为优化改进混合式课堂教学各个环节服务，辅助教师自动收集、整理和分析各环节教学状态数据。一方面，帮助教师更有效的开展教学改革来优化“案例驱动式”课堂教学模式；另一方面，帮助教师更客观的评价学生在教学活动中的表现、更有效的评判学生对课程知识掌握情况。 2) 教师需要通过反思整个学期的教学过程，对“六在线、一线下”考核评价体系的各个指标点的知识目标和能力目标进行更规范的细化，权重分配更合理，使评价数据更容易采集，评价标准更客观、合理、规范，切实使“六在线、一线下”的课程评价贯穿学生课前、课中、课后学习的全过程，能准确反映学生本课程的综合学习成效。 3) 查阅混合式教学改革的教学法研究论文，学习本课程的优秀、权威教材，有意识地收集综合性系统设计案例，将好的案例应用到本课程挑战性实验教学和综合性课程设计的教学活动中，可持续性地激发学生创新能力，为后续相关专业教学打下扎实的基础。
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user: 摘要 目的：鉴定对结肠腺癌患者具有潜在预后价值的免疫相关长链非编码RNA。方法：从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas， TCGA)数据库中获得结肠腺癌样本的临床信息和全基因表达数据，根据分子特征数据库，找到免疫相关的差异基因。使用相关性分析，找到免疫相关的差异表达长链非编码RNA (lncRNA)，最后依据病人的生存状态，通过cox回归分析找出7个免疫和生存相关的差异表达lncRNA。依据这7个lncRNA在病人中的表达量，构建Cox风险模型，计算病人的风险值，通过中位数，将病人分为高低风险组。使用临床特征进行单因素和多因素独立预后分析，查看临床特征与预后之间的吻合概率。通过相关性分析检测在不同临床特征中7个lncRNA的表达情况。通过受试者工作特征曲线(receiver operator characteristic curve， ROC)检测预后因素的准确性。依据主成分分析(Principal Component Analysis， PCA)，观察各样品的基因表达模式。最后通过基因富集分析(Gene Set Enrichment Analysis， GSEA)和免疫相关性分析，观察基因分布情况。结果：本研究共收录437个队列研究，其中癌组织为398个，正常组织为39个。通过相关性分析找到20个免疫相关的差异表达lncRNA。确定了7个最具预后价值的免疫相关lncRNA (AC245100.7， AP001189.3， LINC01503， ZEB1-AS1， AC004585.1， SNHG16， AP006621.3)。构建Cox风险模型，发现高风险组的病人的死亡率显著增高，五年生存率显著降低。通过单因素和多因素独立预后分析，发现年龄，临床分期以及风险值可以作为独立预后因子。相关性分析表明ZEB1-AS1在N分期中表达与疾病分期高度一致。ROC曲线显示临床分期，N分期和风险值均有较好的临床预后。PCA分析发现基7个预后相关的lncRNA可以很好的将高低风险组区分开。通过GSEA富集分析，发现免疫反应和免疫进程的相关基因在高风险的病人体内明显富集。通过免疫相关性分析发现高风险组患者中B细胞、T细胞和巨噬细胞相关基因表达升高以及副炎症、I型干扰素和II型干扰素相关基因表达显著升高。结论：7个免疫相关的预后lncRNA对结肠腺癌具有预后价值。
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user: 1. 引言 结肠腺癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。其发病率随着生活水平的提高呈增长的趋势。其在中国癌症发病率居第三位，死亡率居第五位 [ 1 ]。控制发病率及降低死亡率是结肠腺癌防治工作的重点，而根据预后预测指导结肠腺癌的治疗是降低死亡率的一种有效手段。因此，迫切需要寻找一种敏感性及特异性高的指标，预测结肠腺癌的发生、发展，制定个体化治疗方案。 长链非编码RNA是一类细胞内源性的RNA，一般长度大于200个核苷酸，缺乏蛋白质编码能力 [ 2 ]。研究表明，长链非编码RNA参与结肠腺癌的发生发展，起到重要的调控作用，包括癌症的发生、发展和预后 [ 3 ]。如SNHG6 and CTD-2354A18.1可以作为独立预后因子可以预测结肠腺癌的预后 [ 4 ]。 免疫系统可以影响癌症进展的观点一直是研究热点。研究表明肿瘤免疫微环境在预测预后和评估治疗功效因子方面具有重要价值 [ 5 ]。肿瘤微环境由免疫细胞，免疫相关途径和免疫细胞分泌的细胞因子组成。在结肠癌中，已有研究表明，适应性免疫反应与生存结果和复发密切相关 [ 6 ]。 生物信息学的发展极大促进结肠腺癌的机制以及预后标志物的研究，发现HOTAIR，LINC00355，KCNQ1OT1和TSSC1-IT1与总生存率呈负相关 [ 7 ]。但是在结肠腺癌中免疫相关的lncRNA还缺乏深入的研究。我们通过整合挖掘基因表达数据库数据，并进行全面的生物信息学分析，筛选出了具有预后作用的免疫相关lncRNA。为结肠腺癌的治疗提供了新的标志物，也为结肠腺癌发生发展机制提供了新思路。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 样本数据的收集 通过TCGA数据库，提取结肠腺癌的表达数据和临床性状数据，本研究共收录437份结肠腺癌样本。在进行Cox生存分析是生存期 ≤ 10天以及资料不全的样本剔除。 2.2. 免疫及预后相关的差异表达lncRNA 免疫信号通路以及免疫反应分子数据集是从分子特征数据库v4.0中获得的(免疫系统过程M13664，免疫反应M19817，(https://www.gsea-msigdb.org/gsea/msigdb/index.jsp)。lncRNA基因集来自于GENCODE (http://www.gencodegenes.org)。通过统计免疫相关的差异基因以及lncRNA，进行相关性分析，找到免疫相关的差异lncRNA。再将得到的免疫相关的差异表达基因与临床预后进行Cox回归分析，得到免疫及预后相关的差异表达lncRNA。 2.3. 预后相关lncRNA风险评估以及风险模型的建立 通过Cox风险回归模型，计算预后相关lncRNA的风险系数，再使用预后相关lncRNA在每个病人的表达量乘以风险系数，所有的预后相关lncRNA的累计值为每个病人的风险值。具体公式为：风险评分 = lncRNA1表达量 × 风险回归系数1 + lncRNA2表达量 × 风险回归系数2 + … + lncRNA7表达量 × 风险回归系数7。 2.4. 生物信息学分析 通过Cox风险回归模型，计算病人的风险值，以中位值为界将病人分为高低风险组，观察高低风险组的生存状态并绘制生存曲线。通过单因素和多因素独立预后分析检测临床性状以及风险值作为预后因子的可能性。通过ROC曲线检测预后因子的准确性。通过相关性分析，检测预后lncRNA在不同临床性状中的表达情况。通过主成分分析检测基因在高低风险组中的表达情况。通过GSEA富集分析，检测高低风险组基因富集情况。通过免疫相关性分析，评估免疫细胞和免疫功能相关基因富集情况。 2.5. 统计分析 应用Cox回归分析，构建风险模型。通过单因素和多因素独立预后分析，统计病人临床性状与预后之间的关系，ROC曲线分析预后因子的准确性，相关性分析预后lncRNA在不同临床分期中的表达情况，使用PCA和GSEA分析基因富集情况。所有统计分析均使用R语言4.0.2版本。P值 < 0.05被认为是有显著意义。
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user: 3. 结果 3.1. 获得预后及免疫相关的lncRNA及对模型的评估 从TCGA平台上下载了437个食管鳞状细胞癌基因组样本。同时从分子特征数据库中收集了332个免疫相关基因。通过筛选得到免疫相关的差异lncRNA，再依据临床性状通过Cox 比例风险回归模型，得到20条预后及免疫相关的差异lncRNA (图1(A))。根据病人的风险值，区分高低风险组(图1(B))，观察高低风险组病人的生存状态，发现高风险组的病人死亡人数和死亡率均有明显的升高(图1(C))。通过绘制风险热图，发现AC245100.7，AP001189.3，LINC01503，ZEB1-AS1，AC004585.1和AP006621.3随着风险值的升高而升高，为高风险的基因，而SNHG16随着风险值的升高而降低，为低风险基因(图1(D))。通过模型将计算病人的风险值，以中位数为临界点将病人区分为高风险和低风险两组，通过R语言绘制生存分析曲线，发现两组有显著差异(图1(E))，说明我们的模型可以很好的预测病人的预后。 图1. 构建风险评估模型 3.2. 临床病理特征分析以及风险模型评估 通过单因素独立预后分析，发现分期(stage)、肿瘤浸润深度(T)、是否区域淋巴结转移(N)以及风险值有显著性，而年龄和性别没有差异(图2(A))，进一步通过多因素独立预后分析，发现年龄、分期(stage)以及风险值均有显著差异(图2(B))，说明以上临床性状可以有效的预测病人预后。为了进一步验证预后及免疫相关的lncRNA与临床分期相关性，以性别、分期(stage)、是否区域淋巴结转移(N)、肿瘤浸润深度(T)、是否远处转移(M)以及风险值分组，计算风险lncRNA的表达情况，发现在临床分期、T分期、N分期中ZEB1-AS1随着病情的发展表达逐渐升高，说明ZEB1-AS1是一个与多个临床分期高度相关的lncRNA (图2(C)~(E))。通过ROC曲线比较病人五年生存率，计算曲线下面积评估评价指标对疾病预后的准确性，发现风险模型预测结果较好，曲线下面积(Area Under Curve， AUC)为0.694 (图2(F))。说明构建的风险评估模型可以较好预测病人的预后情况。 图2. 临床病理特征分析及风险模型评估 3.3. 高低风险组在不同基因分组中的主成分差异 为了进一步明确在不同基因分组中，基因分布情况，通过主成分分析的方法将基因的分布进行可视化，发现在风险模型中，高低风险组可以很好的区别开来，而在全基因组、免疫基因和免疫lncRNA中基因无法完全区别开来(图3(A)~(D))。 图3. 高低风险人群各类基因数据的主成分分析 3.4. 免疫相关基因分析 通过GSEA富集分析，发现在高低风险组的病人中，免疫反应相关基因以及免疫系统进程相关基因均在高风险病人中富集，说明与免疫相关的分子以及信号通路在风险模型中存在显著差异(图4(A)，图4(B))。通过免疫相关性分析，在免疫相关的细胞基因分析中发现在高风险组患者中B细胞、T细胞和巨噬细胞相关基因表达升高(图4(C))，而在免疫相关功能分析中发现高风险组患者中副炎症、I型干扰素和II型干扰素相关基因表达显著升高(图4(D))。 图4. GSEA富集分析和免疫相关性分析
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user: 4. 讨论 随着高通量测序技术的快速发展和相关技术的广泛应用，生物医学研究已进入后基因组时代，大规模组学数据呈指数级增长。目前，生物计算和生物信息学可以帮助从复杂数据中挖掘出有意义且规则的基因。为了找出相关的生物过程的重要分子机制，研究者通常在各种统计和计算模式的基础上寻找差异表达的基因，然后对差异表达的基因进行功能富集分析，以揭示和理解基本的分子机制 [ 8 ]。 结肠癌是一种多因素疾病，其病因包括遗传因素，环境暴露和消化道的炎症。尽管传统的大肠癌预后和预测因素，例如年龄，肿瘤分期，手术切缘，受影响的局部淋巴结数目和肿瘤等级，已在患者临床预后方面取得了显著效果，但它们在区分相关癌症风险亚组时显示出明显的局限性。由于分子异质性而具有不同的临床结果 [ 9 ]。因此，在过去的十年中，已经在广泛的临床转录组研究中系统地研究了分子标志物的预后潜力 [ 10 ]。 在我们的研究中，我们最终筛选了20个差异的免疫相关lncRNA，进一步通过将lncRNA与风险值进行Cox分析，得出7个免疫相关风险lncRNA，通过五年生存率的比较，发现高低风险组的生存率有显著差异，说明风险模型可以很好的区分病人生存率。通过单因素独立预后分析和多因素独立预后分析比较其年龄、性别、临床分期以及T、N分期和风险值，发现年龄、临床分期以及风险值可以作为结肠腺癌的独立预后因子。进一步分析各临床特征中不同的风险lncRNA的表达情况，发现ZEB1-AS1的表达在N分期、T分期和临床分期中表达随着病情恶化表达也增高，说明ZEB1-AS1可能在结肠腺癌的发生、发展中起重要作用。最后通过ROC曲线验证预后模型的准确性，发现风险值、临床分期以及N分期均能较好的预测病人预后。进一步通过PCA主成分分析，发现在高低风险组中风险lncRNA的表达区分最为明显。最后，统计高低风险组中免疫相关基因的GSEA富集分析，发现不管在免疫进程还是免疫反应相关基因均有差异，说明免疫基因在高低风险组中有显著差异，在疾病发生发展过程中起重要作用。 总而言之，我们的研究确认了7个免疫相关风险lncRNA作为结肠腺癌患者独立预后因子，同时为结肠腺癌免疫学机制提出了新的分子基础。这些结果为我们进一步研究免疫相关lncRNA在结肠腺癌中的发病机制以及临床预后的预测提供了思路。
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user: 摘要 幽门螺旋杆菌是一种与胃癌密切相关的细菌，它利用独特的适应机制，包括脲酶的催化活性，在大部分人的胃的酸性环境中生长。靶向脲酶是药物设计和根除幽门螺旋杆菌的关键策略。本文整理了脲酶与幽门螺旋杆菌危害之间的关联性，并对幽门螺旋杆菌脲酶的性质及其在幽门螺旋杆菌感染检测及治疗中的应用的最新进展进行综述。
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user: 1. 引言 幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)是一种主要定殖于胃上皮粘膜的革兰氏阴性菌，病理条件下也可在十二指肠中检测到。幽门螺旋杆菌最早于二十世纪80年代被发现，但直到澳大利亚内科医生Barry Marshall服用菌体感染胃溃疡后人们才开始重视起这种细菌的危害性，Marshall也因此发现获得了诺贝尔医学奖。现有研究表明，胃幽门螺旋杆菌是胃癌、胃溃疡和十二指肠溃疡的主要致病因子，全球每年可导致100多万人死亡 [ 1 ]。幽门螺旋杆菌主要通过空泡毒素A (vacuolating cytotoxin A， vacA)和细胞毒素相关蛋白A (cytotoxin-associated gene A， cagA)发挥致病作用。VacA经菌体分泌排出后穿透胃上皮细胞，可在胞内产生大的酸性空泡，并通过刺激细胞的凋亡和坏死来促进细胞死亡 [ 2 ]。CagA则是被细菌主动运输到人体细胞中，干扰肌动蛋白和细胞骨架的连接，并扰乱细胞周期调节的途径 [ 3 ]。 脲酶是幽门螺旋杆菌能够在胃酸环境下生存的重要因子。脲酶对于幽门螺旋杆菌在胃部具有定殖作用，脲酶基因缺陷型的幽门螺旋杆菌不能够定殖在豚鼠胃粘膜上 [ 4 ]。同时，脲酶能够分解消化道中的尿素，从而产生氨中和胃部的胃酸，改善幽门螺旋杆菌的生存环境。大量繁殖的幽门螺旋杆菌会在局部剧烈升高pH，损害人体内正常细胞质子泵、细胞表面受体的机能 [ 5 ]。尿素分解产生的氨与水产生氢氧化物，直接对组织造成损伤。脲酶还能和致病因子VagA产生协同作用，诱发空泡产生的频率和大小，加重细胞的损伤程度 [ 6 ]。
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user: 2. 幽门螺旋杆菌脲酶的性质 幽门螺旋杆菌的脲酶由基因组中的脲酶基因簇编码，脲酶基因簇包含7个基因，分别为ureA、ureB、ureI、ureE、ureF、ureG和ureD [ 7 ]。其中ureA和ureB是结构基因，分别编码脲酶的α亚基和β亚基。ureI编码特异性的尿素通道蛋白，协助脲酶通过胞质膜转运。而ureE、ureF、ureG和ureD则为辅助基因，与脲酶结合金属离子，发挥分解尿素能力有关。 幽门螺旋杆菌脲酶是由α (约26.7 kDa)和β (约60.1 kDa)两种亚基形成的六聚体蛋白，其结构为([αβ]3) 2 [ 8 ]。其Km值约为0.2~0.8 mM，等点电在pH 6.0左右，最佳反应pH为8.0 [ 9 ]。 从上个世纪90年代开始就有学者开始研究幽门螺旋杆菌脲酶的重组构建。LI TAIHU等在不含氨基酸的培养基中培养含有重组幽门螺旋杆菌脲酶基因的SE5000大肠杆菌，添加0.75 Μm NiCl 2 ，脲酶结构基因过表达为完整的脲酶(pHP808)，在此条件下，表达的脲酶活性可达87 U/mg [ 10 ]。VALERIE CUSSAC等在限制氮源供给的条件下培养重组幽门螺旋杆菌脲酶基因的大肠杆菌，表达的脲酶每毫克每分钟能水解0.83 ± 0.39 μmol尿素 [ 11 ]。
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user: 3. 幽门螺旋杆菌脲酶的应用 3.1. 幽门螺旋杆菌的检测 根据脲酶分解尿素产生氨的特点，在临床实践中，医务人员采用胃镜取样的侵入性方法检测患者的幽门螺旋杆菌感染状况。根据幽门螺旋杆菌常分布于胃部浅表和凹型上皮的特点，在治疗前的诊断中，取幽门2 cm处的远端窦部组织进行活检。活检组织使用相应的试剂盒进行体外检测，结果分析快速且成本低廉 [ 12 ]。在一项关于快速尿素酶检测试剂盒检测准确性的研究当中，研究人员招募了150名志愿者，使用了组织学检验和PCR的方法对结果进行校正 [ 13 ]。结果表明，不同品牌的检测试剂盒之间差异性小，反应结果稳定，并且对于使用质子泵抑制剂和抗生素的患者，快速尿素酶试剂盒对幽门螺旋杆菌感染的检测似乎比组织学检测更加敏感。因此相对于昂贵费时的组织学检验来说，如果没有其他组织学问题，试剂盒是一个十分可靠的选择。 幽门螺旋杆菌的检测除了侵入性的方法外，还有许多非侵入性的方法，其中的尿素呼气试验，因其操作简便，依从性好的特点而适用于儿童和妇女的感染检测 [ 14 ]。检测原理同样也是利用了脲酶分解尿素的性质，以尿素为底物，标记碳同位素，制成胶囊，病人服下后，通过测定和定量呼出二氧化碳中标记的同位素碳来诊断幽门螺旋杆菌感染 [ 15 ]。该试验通常使用两种碳同位素非放射性的 13 C和微量放射性的 14 C，它们的性能相差不大，敏感性和特异性均在90%以上。 3.2. 幽门螺旋杆菌疫苗 目前临床上治疗幽门螺旋杆菌感染的主流方法是使用“铋剂 + 抗生素”的联合疗法，但铋剂的使用具有一定的副作用，因此必须得到有效监管 [ 16 ]。随着幽门螺旋杆菌对各类抗生素耐药性不断增加，幽门螺旋杆菌疫苗的研发迫在眉睫，其中最受关注的当属幽门螺旋杆菌亚单位疫苗，针对幽门螺旋杆菌生长繁殖重要的相关蛋白设计重组蛋白抗原表达，诱导人体产生相应抗体，从而有效预防幽门螺旋杆菌感染。 在最新的一项研究中，研究人员通过将嗜中性粒细胞激活蛋白、脲酶亚单位α和亚单位β三种常用的幽门螺旋杆菌抗原搭配大肠杆菌的粘膜佐剂，在幽门螺旋杆菌感染小鼠模型上评价其免疫原性和治疗效果。结果显示口服幽门螺旋杆菌感染小鼠的胃细菌定殖显著减少。细菌负荷的减少伴随着血清抗原特异性IgG反应和粘膜IgA反应的显著增加(p < 0.05) [ 17 ]。同时各种抗原表位也可联合发挥作用，一种新型的多价疫苗LHUC即由幽门螺旋杆菌粘附素(HpaA)、脲酶β亚基和过氧化氢酶抗原表位组成，在应用于治疗C57BL/6小鼠胃幽门螺旋杆菌感染模型时发现，LHUC诱导小鼠产生特异性IgG和IgA抗体，IgG抗体在体外显著抑制幽门螺旋杆菌脲酶和过氧化氢酶活性。此外，LHUC可以激活体内Th1、Th2和Th17混合T细胞免疫应答 [ 18 ]。大量的动物实验已经为幽门螺旋杆菌疫苗的有效性提供了证据。同样在人体临床实验中，疫苗也显示出了不俗的效果。中国在2004年至2005年间，针对一种由幽门螺旋杆菌脲酶β亚单位与大肠杆菌耐热毒素融合而成的口服疫苗，对超过4000名儿童进行了疫苗的随机、双盲、安慰剂对照的3期临床实验，并在之后的三年间保持观察，结果显示疫苗的保护有效率达到了71.8% [ 19 ]。疫苗接种现在可能成为一种有效的策略，显著减少全世界儿童的幽门螺旋杆菌相关疾病 [ 20 ]。
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user: 4. 总结与展望 存在于幽门螺旋杆菌表面的脲酶对于抵抗人体胃酸环境十分必要，脲酶可以分解尿素产生氨，从而给幽门螺旋杆菌营造合适的生长pH。因此可以针对幽门螺旋杆菌的这一特点，合理的设计并寻找方案对幽门螺旋杆菌进行检测和治疗。抗生素在初期对于幽门螺旋杆菌的感染治疗取得了不错的效果，但随着使用频率的增加，抗生素治疗效果明显下降。疫苗作为新兴的幽门螺旋杆菌感染治疗手段已在临床上显现优势，但仍然需要在疫苗的安全性和长期有效性等问题上进行新的探索。
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user: 摘要 自闭症谱系障碍(Autism spectrum disorder， ASD)是一种由遗传、免疫、环境等多因素共同作用导致的神经发育障碍疾病，其病因和神经病理机制尚不完全清楚。本文主要回顾了近年来ASD幼年患者或高风险幼儿特定脑区的形态结构、神经代谢以及不同尺度脑功能的神经影像学病理表现，以期促进神经影像学应用于ASD早期风险筛查和病理机制研究。
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user: 1. 引言 自闭症谱系障碍(Autism spectrum disorder， ASD)又称孤独症，是一种可遗传的神经发育障碍疾病，主要表现为社会交往障碍、言语和非言语交流缺陷、兴趣狭隘和重复刻板行为等临床症状。孤独症患者对周围环境变化的适应能力较差，智力发展滞后且不均衡，在融入社会的过程中面临诸多挑战与困难。目前，在临床上多采用行为干预为主、药物治疗为辅(如利培酮Risperidone)的系统化、个体化治疗措施 [ 1 ] [ 2 ]。然而，由于ASD病因复杂，涉及神经、免疫、内分泌各个层面以及遗传、环境(如孕期重金属污染、药物误用、酒精暴露)等多个因素 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]，单一的药物治疗难以对ASD的核心症状起到决定性的康复作用。 据近期筛查，我国ASD患病儿童的发病率约为1%，与西方国家相当 [ 7 ]。随着人们对ASD诊断标准的完善以及诊断工具的进步，预计ASD的诊断发病率将呈上升趋势。ASD的诊断主要依据世界卫生组织出版的《精神与行为分类》(ICD-11) [ 8 ]、美国精神医学学会出版的《精神障碍诊断和统计手册》(DSM-5) [ 9 ]、以及中华医学会精神科分会出版的《中国精神障碍分类与诊断标准》(CCMD) [ 10 ]，对病患对象进行外在行为、内隐心理等多维度特征的综合评估。此外，由于ASD表型与Fmr1、MECP2、NLGN3/4、TSC1/2、DLX、PTEN等多个基因的突变有关 [ 3 ]，基因检测技术可以用于ASD早期筛查及辅助诊断 [ 11 ]。研究表明，早期诊断和早期干预对于减轻ASD患儿症状、尽量提高其脑功能水平、以及争取良好的预后非常重要 [ 12 ] [ 13 ]。 随着医学影像技术的不断发展，关于ASD的神经影像学研究内容越来越丰富。神经影像学可以通过无创的方式，对ASD幼年患者或高风险儿童进行特定脑区的形态结构、生化代谢以及脑功能异常情况的长期监测，其监测结果将有助于揭示ASD的多维度病理机制，对早期诊断并及时缓解ASD的病情发展也将发挥重要的作用。本文回顾了近年来有关ASD早期诊断的神经影像学多维度病理研究，以期为ASD幼年患者得到及时、有效诊疗提供参考。
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user: 2. ASD幼年患者大脑形态结构异常 对出生于ASD高风险家庭的幼儿采用结构磁共振成像(Structural Magnetic Resonance Imaging，sMRI)进行追踪研究，可发现其中一些ASD高风险幼儿的大脑存在早期过度发育的现象，表现为与正常对照组相比，高风险幼儿的皮层表面积增长较快，到12月龄时其大脑体积出现明显增大 [ 14 ] [ 15 ]，其幼年期的额叶、顶叶、颞叶、右侧中央前回、两侧中央后回等皮质的体积都有明显增加 [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ]。ASD幼年患者皮层下的杏仁核、苍白球、壳核及伏隔核等脑区体积较小，额叶皮质厚度增加，颞叶皮质厚度减小 [ 20 ]。这些幼年患者大脑皮质表面积和体积的增加可能与神经系统发育过程中的脑室周围祖细胞的分化异常有关，而皮质厚度的变化可能反映了神经细胞树突生长发育以及轴突髓鞘形成的异常。基于形态结构的表面形态测量学(Surface-based morphometry， SBM)对ASD的诊断准确性高于80% [ 21 ]，可以为ASD的临床早期诊断提供一定的参考依据。 各脑区之间的通讯连接情况也是大脑形态结构检测的一个侧重点。采用弥散张量成像(Diffusion tensor imaging， DTI)可以非侵入性地观察和追踪脑白质纤维束的走向。DTI研究发现，幼儿期ASD患者的胼胝体、弓状束、上纵状束、钩状束等多个脑区的神经纤维束各向异性分数(Fractional anisotropy， FA)降低 [ 22 ]，表明ASD患者脑白质的组织化程度降低。这些研究结果提示，幼年ASD患者各脑区之间以及各脑区内部的神经信息通讯存在异常。
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user: 3. ASD幼年患者脑内神经代谢紊乱 已有大量磁共振波谱(Magnetic resonance spectroscopy，MRS)研究表明，ASD幼年患者特定脑区的神经递质系统代谢紊乱，导致神经元功能失调、数量减少、髓鞘丢失和轴突连接受损等不良后果，说明代谢紊乱可能是ASD病理发展过程中的一个重要机制 [ 23 ]。由于谷氨酸能和GABA能神经递质系统对轴突发生、突触修饰以及神经元分化等神经发育过程具有重要调控作用，二者的代谢紊乱将使兴奋性和抑制性神经递质系统失去平衡，从而影响神经元活性和脑认知功能的正常发挥。MRS检测发现，ASD患者幼年时大脑皮层(如额叶)的谷氨酸 [ 24 ] 和GABA [ 25 ] [ 26 ] 神经递质含量明显减少；而到成年时，ASD患者杏仁体-海马复合体的谷氨酸和肌酸含量明显增加 [ 27 ]，初级视觉皮层、初级听觉皮层、运动皮层以及顶叶中的谷氨酸和GABA含量与正常对照相比无明显差异 [ 28 ]。这些报道中，ASD患者脑内谷氨酸和GABA含量的检测结果存在差异，推测与所检测的特定脑区以及患者的年龄不同有关。 在MRS对大脑代谢功能的研究中，N-乙酰天冬氨酸(NAA)、磷酸肌苷、胆碱和肌醇都是参与调控神经细胞代谢功能的重要化合物。MRS检测发现，ASD幼年患者额叶、丘脑、扣带回、小脑等脑区的NAA含量明显减少 [ 24 ] [ 29 ] [ 30 ]。由于NAA与神经元数量及其代谢功能密切相关 [ 31 ]，这些研究支持ASD幼年患者神经代谢功能异常的观点。此外，MRS检测还发现磷酸肌苷、胆碱和肌醇在ASD幼年患者脑中呈广泛性减少 [ 24 ] [ 29 ]，也同样提示ASD患者神经细胞的代谢功能受到损伤。随着现代物理化学技术的发展，有望进一步提升MRS对特定脑区目标化合物定量检测的灵敏度和准确度，这将有助于加深人们对ASD以及其它脑功能障碍病理机制的理解。
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user: 4. ASD患者静息态和任务状脑功能异常 采用脑磁图(Magnetoencephalography， MEG)、功能磁共振成像(Functional magnetic resonance imaging，fMRI)和近红外光谱脑功能成像(Functional near-infrared spectroscopy， fNIRS)等神经影像学方法可以检测和评估在静息态或任务态的情况下，ASD患者特定脑区的信息处理方式有何异常，从而根据患者具体病情有针对性的采取临床治疗措施。据报道，经fMRI检测进行ASD筛查的准确率为80%，特异性为66.7% [ 32 ] [ 33 ]，而fNIRS成功筛选ASD的灵敏度为81.6%，特异性为94.6% [ 18 ]。 应用MEG技术检测可揭示ASD幼年患者大脑具有特殊的信息处理方式，例如，ASD儿童静息态的多个脑区对噪音输入的反应值(即相对熵)明显高于正常儿童，表明ASD儿童的静息态大脑具有较高的背景噪音，可能是ASD儿童认知功能损伤的机制之一 [ 34 ] [ 35 ]。在处理认知灵活性相关的任务信息时，ASD儿童的功率谱密度及多尺度熵等指标明显低于正常对照，反映出ASD儿童涉及大尺度神经网络的时间信息组织能力低于正常对照，从而造成大脑执行功能的损伤 [ 36 ]。青少年ASD患者在执行NO-GO任务时，主要招募额叶脑区，而正常对照组主要招募顶叶及颞叶脑区，提示青少年ASD患者具有非典型的有限抑制网络 [ 37 ]。MEG应用于研究ASD成年患者的报道较多，例如，ASD成年患者的初级视觉皮层对具有社交信号属性的直接凝视缺乏足够的反应性 [ 38 ]，颞叶、顶叶及额叶等脑区的源振幅与正常对照组相比存在明显差异 [ 39 ]，海马脑区的动态信息存储效应值降低 [ 40 ]，这些研究证明了ASD患者成年后存在弥散性的脑功能失调，其感知觉以及认知决策功能存在缺陷与神经信号异常编码有关。 功能磁共振成像(fMRI)主要应用于检测患者在任务态条件下的脑功能。fMRI检测发现，ASD幼儿在执行社交任务时，左侧中央后回激活增强，而右侧颞上回和右侧海马的激活程度相对较弱；在非社交任务中，ASD幼儿右侧岛叶和左侧扣带回激活较多，右侧额中回激活较少 [ 41 ]。对1~8岁幼年ASD患者与正常儿童的fMRI图像研究发现，ASD患儿双侧顶叶下部、后扣带皮层、角回等不同功能区的连接较正常儿童弱 [ 42 ]。青少年ASD患者在执行言语理解、听觉刺激、执行功能、视空间处理、情绪线索等任务时全脑或大尺度网络功能连接减低，相反某些特殊网络功能连接增强，不同尺度神经网络之间的功能活动水平高度不一致 [ 43 ]。上述这些研究结果说明，ASD对涉及视觉、听觉、语言、情绪、执行等多层次、多类型的脑功能都有影响。 采用近红外光谱脑功能成像(fNIRS)检测4~6月龄婴儿对人类社交活动影像、非社交性图像、人类语音及非人类声音的反应发现，与ASD低危儿童相比，后期确诊的ASD高危儿童大脑额下回和颞后区对社交性视觉刺激的反应降低，左侧颞叶对人类语音反应降低，对非人类声音反应增强 [ 44 ]。另外，fNIRS检测发现ASD患儿大脑半球间静息态功能连接减弱，双侧皮质局部功能连接减弱，氧合血红蛋白、还原血红蛋白波动幅度增强，可用于准确预测ASD的发病率 [ 18 ]，说明该技术对ASD早期诊断具有良好的应用前景。
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user: 5. 小结及展望 ASD是一种综合性的神经发育障碍疾病，临床症状表现复杂多样，且神经系统病变的个体差异较大，其病理机制还有待更深入的研究和探讨。目前得到较多认可的“脑连接失调假说”认为，ASD高风险幼儿在早期发育阶段，其大脑的过度发育导致大脑神经纤维束的分支与修剪发生异常，从而引起中枢神经系统对网络信息处理加工的效能下降，最终表现出不良的症状 [ 45 ]。本文分别阐述了幼年期ASD患者的神经影像学病理表现，主要包括脑内异常形态结构、神经代谢紊乱和异常脑功能三个方面的研究进展。由于发育关键期幼儿的中枢神经系统具有较强可塑性，在深入理解ASD病理机制的基础上，尽早采用无创、可重复和可连续监测的神经影像学技术进行ASD风险筛查，将有助于临床医生对ASD高风险幼儿及时采取干预措施，最终达到改善高风险幼儿预后的目的。 目前，有关幼年期ASD的神经影像学研究已有一定的成果，然而，无论是关于ASD幼年患者的脑结构还是脑功能研究，高敏感度和特异性强的ASD相关影像学技术指标仍有待进一步研发。从当前发展趋势来看，对ASD的研究需要整合不同学科的优势，从基因、细胞、神经环路及神经影像表型等多个不同层面开展多学科交叉研究，对研究结果进行多学科的交叉融合和相互验证，进一步研发多学科医学检测途径和诊疗手段。在神经影像学层面，也需要将多种先进技术交叉融合，如将精细的弥散成像技术(DSI)、功能磁共振与结构磁共振融合应用，将磁共振与基因技术相结合，以便更准确地解释疾病相关病理机制，提高特异性影像学技术指标在ASD临床诊断中的应用。
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user: 摘要 目的：探讨急性缺血性卒中(Ischemic Stroke， IS)患者CYP2C19*2基因多态性与早期神经功能恶化(Early neurological deterioration， END)及抗血小板治疗预防END的相关性。方法：连续纳入570例急性IS患者随机分配到阿司匹林加氯吡格雷组(双抗组，284例)或阿司匹林组(单抗组，286例)。检测治疗前和治疗后7~10天血小板聚集率和血小板–白细胞聚集率，采用质谱法检测CYP2C19*2 (rs4244285)基因型。原发终点为入院10天内END。结果：121例(21.2%)发生END。CYP2C19*2功能降低等位基因与END高发生率相关(携带者为26.8%，非携带者为16.6%，P = 0.004)。双抗组END发生率低于单抗组(17.6%:24.8%，P = 0.032)。分层分析显示，对于CYP2C19*2功能降低等位基因携带者，双抗治疗比单抗治疗更有效降低END(18.8%:34.9%，P = 0.006)。对于非携带者，双抗治疗组和单抗治疗组之间END发生率无显著差异(16.7%:16.6%，P = 0.998)。结论：阿司匹林加氯吡格雷治疗可降低携带CYP2C19*2功能降低等位基因IS患者END发生率。
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user: 1. 引言 早期神经功能恶化(Early neurological deterioration， END)在急性缺血性卒中(ischemic stroke， IS)患者中发生率高，并与死亡率和功能预后密切相关 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]。因此，预防急性IS患者END的发生十分重要。血小板活化在IS的发病中起着关键作用 [ 4 ]。因此，目前指南推荐IS患者使用抗血小板治疗，如氯吡格雷和阿司匹林 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ]。我们既往的研究表明，在卒中后的前30天，阿司匹林联合氯吡格雷治疗在减少缺血性卒中复发方面更有效 [ 8 ] [ 9 ]。有研究表明，接受氯吡格雷治疗的IS患者中，CYP2C19*2功能降低等位基因携带者与非携带者相比，对氯吡格雷的反应性差，脑梗死复发风险较高 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]。但CYP2C19*2基因型、双联抗血小板治疗和END之间的关系尚不清楚。本研究旨在探讨CYP2C19*2基因多态性与END之间的关系，并分层分析评估对携带CYP2C19*2功能降低等位基因的急性IS患者阿司匹林联合氯吡格雷是否比单独使用阿司匹林更有效地降低END风险 [ 8 ]，以指导临床更好预防END的发生。
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user: 2. 对象和方法 2.1. 研究对象 为2009年8月至2011年12月首次发病、NIHSS评分 < 15分、发病48小时内入住温州医科大学第三附属医院和德阳市人民医院、新TOAST分型为动脉粥样硬化型脑梗死患者。具体纳入标准和排除标准参见我们之前的文献描述 [ 8 ]。共纳入符合标准患者570例。 2.2. 方法 1) 资料收集：对于每个患者，入院时及入院后10天内每天由经过标准化培训的临床医师使用美国国立卫生研究院的卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS)对患者进行评分 [ 13 ] [ 14 ]。病情恶化时进行额外的NIHSS评分。将入组患者采用随机数码表的单纯随机方法随机分为阿司匹林联合氯吡格雷治疗组(双抗治疗组；n = 284)或阿司匹林治疗组(单抗治疗组；n = 286)。单抗治疗组的患者入院当天至第30天服用阿司匹林每天200毫克，之后每天100毫克。双抗治疗组患者入院当天至第30天每天服用200毫克阿司匹林和75毫克氯吡格雷，此后每天服用75毫克氯吡格雷。两组之间的基线特征和其他治疗方法没有显著差异。此外，两组症状性颈动脉狭窄(狭窄 ≥ 50%)的发生率也没有显著差异[单抗治疗组为17.8% (51/286)，双抗治疗组为18.7% (53/284)，P = 0.82]。对入组患者各种危险因素的数据进行记录。 2) CYP2C19*2单核苷酸多态性(SNPs)检测：用质谱法检测CYP2C19*2基因型 [ 11 ]。 3) 血小板活化指标检测：入院时和治疗7~10天后，使用FC 500 MPC流式细胞仪直接荧光标记测量血小板–白细胞聚集率(Beckman Coulter Ltd.， Krefeld， Germany)。用光学比浊法测定血小板聚集率。具体检测程序和方法参见我们以前文献描述 [ 3 ] [ 8 ]。 2.3. 终点指标 1) 原发终点：END，END定义为入院后10天内NIHSS评分增加 ≥ 2分，排除出血转化、另一血管区域的新梗塞、颅内出血(ICH)、低血压、低血糖、心脏并发症、发热或感染所致的加重 [ 1 ] [ 3 ]。 2) 次要终点：入院后10天内新发心肌梗塞、新发脑梗死和因心血管事件死亡等。 3) 安全终点：入院后10天内发生的颅内外出血事件。 终点事件采用盲法评估，即评估者对分组和CYP2C19*2 SNPs的结果不知情。 2.4. 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析，单抗和双抗治疗组之间、有无END患者之间基线特征的差异采用单变量方法分析，计数资料用百分比表示，组间比较采用χ 2 检验；连续变量用 x ¯ ± s 表示，组间比较的正态分布资料用t检验，否则使用秩和检验。 根据单抗和双抗治疗组患者的基因型对END的生存分析用Kaplan-Meier曲线表述。采用Cox比例风险模型评价单抗和双抗治疗组CYP2C19*2基因型对END的影响。进入Cox模型以调整的协变量有：1) 单因素分析中，两组比较P < 0.2的变量；2) 传统卒中危险因素。Cox比例风险模型的结果用风险比(hazard ratio， HR)和95%CI (置信区间)表示。所有检验均为双侧分析，P值 < 0.05具有统计学意义。
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user: 4. 讨论 本研究中，21.2%的急性IS患者发生END，CYP2C19*2功能降低等位基因携带者与血小板活化和END的发生相关，阿司匹林联合氯吡格雷可以降低CYP2C19*2功能降低等位基因携带者END的发生率，但双抗治疗不影响非携带者END发生率。 氯吡格雷是一种无活性前体，需要通过细胞色素P450 (CYP)转化为活性代谢物才能发挥抗血小板作用。CYP2C19*2编码CYP酶，可能影响氯吡格雷转化为其活性代谢物 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ]。我们既往研究表明，CYP基因的变异与氯吡格雷的反应及预后密切相关。因此，对这些患者应该调整抗血小板治疗方案。本研究分层分析显示，对于CYP2C19*2功能降低等位基因的携带者，阿司匹林加氯吡格雷在降低END风险和抑制血小板活化方面优于单独使用阿司匹林者。然而，双重抗血小板治疗并不影响非CYP2C19*2功能降低等位基因的携带者END发生率和血小板活化。这表明抗血小板治疗预防END的有效性可能与CYP2C19*2单核苷酸多态性有关。 阿司匹林和氯吡格雷有不同的药理机制，可以协同抑制血小板活化 [ 18 ]。CYP2C19*2不参与阿司匹林的药理学机制，不影响阿司匹林反应性和临床结局。因此，阿司匹林联合氯吡格雷可能预防携带CYP2C19功能降低等位基因的IS患者END发生。 本研究局限：1) 样本量偏小、随访时间短、两中心研究，因此，我们的发现有待于将来大样本和多中心研究证实。2) CYP2C19*2 SNPs对血浆氯吡格雷及其活性代谢物水平有影响 [ 16 ]，但本研究没有检测血浆氯吡格雷及其活性代谢物水平；3) 阿司匹林相关的基因多态性和氯吡格雷其他相关的基因多态性在本研究中未进行检测，不能排除这些基因多态性对END发生率的影响。
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user: 5. 结论 综上所述，急性动脉粥样硬化型脑梗死END发生率高。CYP2C19*2功能降低等位基因的携带者与END的风险增高有关。阿司匹林联合氯吡格雷能更有效地降低CYP2C19功能降低等位基因携带者的END风险。我们的发现可能有助于指导精确和个性化的抗血小板治疗，降低END的风险。
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user: 6. 道德标准 研究方案由参与医院的伦理委员会根据赫尔辛基宣言规定的原则批准。获得了所有参与者的书面知情同意。
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user: 摘要 基于菏泽市八县一区9个气象站点(鄄城、郓城、菏泽、东明、定陶、巨野、曹县、成武、单县) 1991~2020年的逐月平均气温、平均日最低气温、平均日最高气温观测资料，采用线性回归模型、气候倾向率等方法，利用ArcGIS10.6空间分析工具，分析了近30年菏泽市月平均气温、月平均日最低气温、月平均日最高气温的时空变化趋势。研究结果表明：(1) 菏泽市年平均气温、年平均日最低气温、年平均日最高气温均呈上升趋势，年平均日最低气温增长趋势最明显；(2) 菏泽市月平均气温、月平均日最低气温、月平均日最高气温增长趋势具有明显的空间差异；(3) 月平均气温和月平均日最低气温增长率成武最高，鄄城、郓城、东明次之；月平均日最高气温增长率菏泽最高，郓城、单县、成武次之；月平均气温、月平均日最低气温、月平均日最高气温增长率最低均为曹县。
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user: 1. 引言 全球变暖背景下，温室效应使我国气候发生了明显的变化。近年来，区域气温变化规律已成为气候变化研究的热点 [ 1 ]。2020年全球气温比工业化前上升了1.2℃，2016年出现历史最强的厄尔尼诺气候转暖事件，研究表明人类活动是导致气温升高的关键因素。近年来，有关学者对不同自然区域尺度和社会区域尺度的气温变化进行了深入的研究分析 [ 2 ]。肖晗 [ 3 ] 等对近50年中国温带地区不同景观带气温变化对比研究得出中国温带地区森林、草原、荒漠三个景观带的年平均气温、四季气温、年平均最高、最低气温都呈现显著增加趋势的结果。宋彦华 [ 4 ] 等对近40年山东半岛滨海与内陆地区气温变化比较分析得出1973~2012年以来滨海和内陆区的年平均气温变化总体呈增加的趋势，但低于同期全球增温幅度的结果。司奉泰 [ 5 ] 等分析了1981~2010年近30年菏泽市气温时空特征，结果表明菏泽市年平均气温整体呈增长趋势，春、秋和冬季的增长贡献大于夏季的增长贡献。陈楠 [ 6 ] 对菏泽多时间尺度气温变化特征及其突变性进行分析，结果表明近40年来菏泽的年、季平均气温、年最高最低气温具有明显的增温趋势。 然而，近几年关于菏泽市气温变化规律的研究较少，对研究气候预测及灾害防御至关重要 [ 5 ]。因此，本文基于1991~2020年菏泽市鄄城、郓城、菏泽、东明、定陶、巨野、曹县、成武、单县八县一区9个气象站点逐月平均气温、逐月平均日最低气温、逐月平均日最高气温观测资料，采用线性回归模型、气候倾向率等方法，利用ArcGIS10.6空间分析工具，分析近30年菏泽市气温变化特征，研究结果可为菏泽市农业生产和科学布局提供参考，对菏泽市气候预测预报具有重要意义。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 研究区数据资料 菏泽市位于34˚39'N~35˚52'N，114˚45'E~116˚25'E之间，地处山东、江苏、河南、安徽四省交界处，总面积12238.62 km 2 ，属暖温带季风大陆性气候，四季分明、雨热同季、光热资源丰富，降水集中在夏季，年平均气温14.49℃，适宜的气候条件有利于大多数作物的生长。选取菏泽市9个气象台站1991~2020年近30年的逐月平均气温、逐月平均日最低气温和逐月平均日最高气温实测数据资料，9台站均匀分布在菏泽市各地区(图1)。台站资料数据集经过了严格的质量控制，具有较好的可靠性和连续性，能够满足研究需求。 图1. 菏泽市气象站点分布 2.2. 时空分析方法 近年来地理信息系统取得了惊人的发展，ArcGIS是一套完整的地理信息分析应用软件组合，广泛应用于灾害预测、环境评估、城市规划、土地管理等领域 [ 7 ]。本文采用ArcGIS10.6空间分析工具，对菏泽市八县一区的逐月平均气温、逐月平均日最低气温、逐月平均日最高气温数据计算整理，利用Kriging空间插值方法，讨论分析菏泽市气温的增长趋势及其空间分布特征。Kriging插值是通过一组具有Z值的分散点生成估计表面的高级地统计过程，该方法基于变异函数理论和结构分析的线性、无偏差插值，可以反映可用于说明表面变化的空间相关性，在地理信息、气象、土壤科学和地质方面应用广泛。本文采用Kriging方法实现气温的空间插值，有关Kriging空间插值的理论方法请参照文献 [ 8 ]。