DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 结果与分析 3.1. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片丙二醛含量的影响 MDA是植物在非生物胁迫下膜脂过氧化的最终产物，其含量的高低可以代表膜损伤程度的大小 [ 9 ] 。图1显示，除50和100 mmol/L浓度外，Ca(NO 3 ) 2 胁迫使叶片中丙二醛含量显著增加。150、200、250 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 胁迫下，MDA含量分别比CK提高9.81%、19.81%、20.72%。说明Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜植株造成了过氧化伤害，且Ca(NO 3 ) 2 胁迫浓度越大，过氧化伤害越重。 3.2. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片抗坏血酸含量的影响 抗坏血酸是植物体内清除活性氧自由基的非酶抗氧化剂，可以有效清除非生物胁迫产生的自由基，抵抗膜脂过氧化对细胞的伤害 [ 10 ] 。图2表明，叶片中抗坏血酸含量随Ca(NO 3 ) 2 浓度的提高呈现出“升高–降低”的规律。50、100、150、200、250 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 处理下，抗坏血酸含量分别比CK提高6.00%、9.15%、3.92%、3.53%、2.10%。说明Ca(NO 3 ) 2 胁迫下黄花菜植株的抗氧化能力提高，但超过100 mmol/L浓度，黄花菜体内抗坏血酸的合成就难以清除Ca(NO 3 ) 2 胁迫下大量产生的活性氧自由基。 3.3. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片脯氨酸含量的影响 脯氨酸积累是植物体抵抗渗透胁迫的有效方式之一。植株体内脯氨酸的增加能够降低非生物胁迫下细胞的渗透势，防止细胞脱水，还可以保护细胞膜系统，维持酶的结构和活性，减少蛋白质的降解 [ 10 ] 。图3显示，随Ca(NO 3 ) 2 浓度的提高，叶片脯氨酸含量显著增加。说明随盐胁迫程度的增加，黄花菜体内脯氨酸大量积累以降低细胞渗透势，有利于避免细胞脱水而适应盐胁迫环境。 3.4. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片可溶性糖含量的影响 可溶性糖也是植物体为了适应不良的环境条件，产生的一种重要的有机渗透调节物质。图4显示，黄花菜叶片中可溶性糖含量随Ca(NO 3 ) 2 浓度的提高呈现出“升高–降低”的规律。在100 mmol/L浓度以下可溶性糖含量逐渐增加，150 mmol/L浓度以上可溶性糖含量则低于CK。说明低浓度Ca(NO 3 ) 2 处理促进了黄花菜植株体内可溶性糖的产生，且100 mmol/L浓度下可溶性糖对渗透调节的作用较大，超过此浓度则可溶性糖无法发挥渗透调节作用。 图1. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片丙二醛含量的影响 图2. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片抗坏血酸含量的影响 图3. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片脯氨酸含量的影响 图4. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片可溶性糖含量的影响 图5. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片可溶性蛋白含量的影响 3.5. Ca(NO 3 ) 2 胁迫对黄花菜叶片可溶性蛋白含量的影响 可溶性蛋白是重要的渗透调节物质和营养物质，其增加和积累能提高细胞的保水能力，对细胞的生命物质及生物膜起到保护作用 [ 11 ] 。图5表明，叶片中可溶性蛋白的含量随Ca(NO 3 ) 2 浓度的提高呈现出“升高–降低”的规律。50、100、150 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 处理下，可溶性蛋白含量分别比CK提高9.16%、24.12%、3.16%，200和250 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 浓度下可溶性蛋白含量则低于CK。说明低浓度Ca(NO 3 ) 2 处理下可溶性蛋白对黄花菜细胞的保水作用明显，200 mmol/L浓度以上则可溶性蛋白迅速降解，对细胞的渗透调节不起作用。
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user: 4. 讨论与结论 植物对盐碱胁迫的反应和适应是一个复杂的生理过程，是植物体内一系列生理生化过程综合作用的结果 [ 10 ] 。研究表明，过氧化伤害和渗透胁迫是盐胁迫对植物危害的两个重要方面。盐胁迫造成了植物细胞膜脂过氧化，使丙二醛含量增加，细胞膜透性增大，抗坏血酸、谷光甘肽等可作为非酶抗氧化剂清除细胞内的自由基，减轻膜脂过氧化，提高植物对胁迫环境的适应性 [ 12 ] [ 13 ] 。脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白等都是植物体在胁迫环境下自发产生的有机渗透调节物质，大量积累这些物质有利于降低细胞渗透势，促进细胞对水分的吸收，保证植物在盐胁迫下的正常生长发育 [ 14 ] [ 15 ] 。 本研究中，随Ca(NO 3 ) 2 处理浓度提高，黄花菜植株MDA含量和脯氨酸含量持续增加，抗坏血酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量则表现“增加–降低”的规律，在100 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 处理下达到最大值；150 mmol/L Ca(NO 3 ) 2 胁迫下叶片出现枯黄现象，200和250 mmol/L胁迫下死苗率分别达到33.0%和41.7%，其他处理没有死苗。说明Ca(NO 3 ) 2 胁迫程度越大，对植株的过氧化伤害越大，但较低浓度Ca(NO 3 ) 2 胁迫下细胞可以通过促进抗坏血酸的产生和大量积累脯氨酸以减轻细胞的过氧化伤害和维持细胞的渗透平衡，从而适应盐胁迫环境；150 mmol/L浓度以上Ca(NO 3 ) 2 胁迫下黄花菜自身的抗氧化能力就难以消除胁迫造成的过氧化伤害，可溶性糖和可溶性蛋白也迅速降解，不能抵抗高浓度Ca(NO 3 ) 2 造成的渗透胁迫，黄花菜对Ca(NO 3 ) 2 胁迫的适应性显著降低。研究同时证明，100 mmol/L是黄花菜植株对Ca(NO 3 ) 2 胁迫的适应性阈值。
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user: 摘 要 目的：比较采用不同剂量分割放疗IIIB期非小细胞肺癌后的疗效及毒性反应。方法：40例IIIB期非小细胞肺癌行三维适形放疗患者，大剂量分割组20例(PTR组)和常规剂量分割组20例(CRT组)，每次治疗前行CBCT扫描验证计划，所有患者均完成处方剂量。计算并比较两组患者放疗后近期疗效及放疗结束3个月内不良反应发生情况。结果：PTR组胸部病灶达CR或PR占40% (8/20)，SD患者占35% (7/20)，PD的患者占25% (5/20)。CRT组胸部病灶达CR或PR占30% (6/20)，SD患者占35% (7/20)，PD的患者占35% (7/20)。所有患者均未出现3~4级不良反应，差异无统计学意义(P > 0.05)。结论：在IIIB期非小细胞肺癌适形放疗中，宜采用大分割放疗，从而提高局控率，缩短疗程，节省时间和资源。 关键词 :非小细胞肺癌，放射治疗，剂量分割
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user: 1. 引言 2014年2月3日，世界卫生组织(WHO)下属的国际癌症研究机构发表的《2014年世界癌症报告》数据显示：2012年新增肺癌患者约180万，并有159万人因肺癌死亡，其中中国病例约占1/3以上 [ 1 ] 。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)发病率为80%左右，1/3左右患者病期晚，失去手术最佳时机。研究表明，约64.3%的NSCLC患者需要接受放射治疗，45.9%的患者在首程治疗中需要接受放射治疗 [ 2 ] 。大多数NSCLC患者在最初诊断时已处于进展期，存在咯血、胸痛、身体状况较差、远处转移等情况 [ 3 ] ，不适宜采用根治性放疗。近年来，国内外多项研究证实，对于胸部原发病灶采用短疗程、大剂量分割放疗(palliative thoracic radiotherapy， PTR)可以取得更高的临床缓解率甚至更好的生活质量 [ 4 ] - [ 7 ] 。回顾性分析本院2011年7月至2015年6月期间，IIIB期NSCLC患者大剂量分割放疗20例和常规剂量分割放疗(conventional radiation therapy， CRT) 20例，其疗效及毒性比较结果如下。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 一般资料 我科2011年7月至2015年6月收治的经组织学或病理学证实为ⅢB期NSCLC患者40例，其中1例为食管癌术后肺第二原发、肺功能较差；4例患者同侧肺内多发转移；4例合并内科基础疾病；31例年龄 > 60岁。 2.2. 治疗方法 利用Philips Pinnacle3 9.0计划系统进行靶区勾画。PTR组：大体靶体积(gross target volume， GTV)包括CT上所显示肺部病灶，计划靶体积(planning target volume， PTV)为GTV前后、左右、上下均匀外扩0.5 cm。不做淋巴引流区预防照射。95%等剂量曲线PTV给量50 Gy/10f，5 Gy/f。危及器官剂量限制：TD5/5脊髓Dmax < 45 Gy；食管Dmax < 45 Gy；肺V20 < 28%、V5 < 55%，Dmean < 18 Gy；心脏V30 < 30%。CRT组：GTV为胸部CT上可见病灶，然后在GTV的基础上勾画临床靶体积(clinical target volume， CTV)，病理为腺癌的外放8 mm，鳞癌外放6 mm，转移的淋巴结则外放5 mm，不做淋巴引流区预防照射。再根据摆位误差、呼吸活动度、内脏活动度等因素适当的在CTV基础上外放1.0~2.0 cm形成PTV(可在模拟机下观察器官的活动度)。95%等剂量曲线PTV给量60 Gy/30f，2 Gy/f。危及器官剂量限制：TD5/5脊髓Dmax < 45 Gy；食管Dmax < 45 Gy；肺V20 < 28%、V5 < 55%，Dmean < 18 Gy；心脏V30 < 30%。所有患者均完成处方剂量。 2.3. 观察指标 放疗后胸部病灶疗效评价根据实体瘤疗效评价新标准(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors， RECIST)：包括完全缓解(complete response， CR)、部分缓解(partial response， PR)、病情稳定(stable disease， SD)及疾病进展(progressive disease， PD)。近期毒副反应评价采用国际常见不良反应标准第3版(CT⁃CAE v3.0)，主要包括放射性食管炎、放射性肺炎、骨髓抑制及食欲下降。 2.4. 统计方法 用SPSS16.0软件，疗效计算采用Kaplan-Meire法，毒副反应计算采用χ 2 检验。以P < 0.05为差异具统计学意义。
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user: 3. 结果 随访率为100%，截止2015年11月底末次随访时，PTR组7例(35%)患者死亡，13例(65%)仍生存。常规分割放疗组12例(60%)患者死亡，8例(40%)仍生存。两组肺癌患者放疗后疗效及不良反应比较结果P > 0.05，差异无统计学意义，详见表1、表2。
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user: 4. 讨论 放射治疗的常规剂量分割模式为：1.8~2.0 Gy/fx，5 fx/w，总疗程6~7 w。大分割放疗是指单次剂量 > 2.5 Gy，通过增加单次照射剂量、缩短治疗周期，以减少肿瘤加速再增殖，从而有效地提高肿瘤的局控率。近年来，随着放疗技术飞速发展，随着呼吸门控技术、三维适形放射治疗、调强放疗和图像引导放疗等技术的应用，大分割放疗在肺癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、肾上腺癌、脊髓肿瘤及前列腺癌等的治疗中取得了快速发展和良好疗效 [ 8 ] - [ 10 ] 。通过大分割放疗，可以将在7周左右的治疗周期缩短至2周甚至几天。每次分割剂量增大可能增加晚期放射反应，因此，大分割放疗仅用于乏氧及对放射高度抗拒的肿瘤细胞。近年来立体定向放射治疗(stereotactic body radiation therapy， SBRT)的研究和应用逐渐增多，有研究 [ 11 ] - [ 14 ] 显示，SBRT增加了肿瘤照射剂量，降低了周围正常组织受照剂量，缩短了疗程，改善了局部控制率和生存率，且患者耐受性好，是治疗早期NSCLC安全、可行的新手段。对于晚期NSCLC，大分割放疗模式报道甚少。 本研究结果显示：PTR后胸部病灶达CR或PR占40% (8/20)，SD患者占35% (7/20)，PD的患者占25% (5/20)。所有患者均未出现3~4级不良反应，6例患者出现2级放射性食管炎，其中3例为同步放化 Table 1 Clinical cases of lesions in patients after thoracic radiotherapy group 分组 n CR或PR SD PD 例数 % 例数 % 例数 % PTR组 20 8 40 7 35 5 25 CRT组 20 6 30 7 35 7 35 表1. 两组患者放疗后胸部病灶疗效情况 Table 2 Two groups of patients after radiotherapy recent adverse reactions [cases (%) 相关因素 PTR组 CRT组 2级放射性食管炎 6 (30.00) 8 (40.00) 1级放射性食管炎 14 (70.00) 12 (60.00) 2级放射性肺炎 6 (30.00) 5 (25.00) 1级放射性肺炎 14 (70.00) 15 (75.00) Ⅱ度骨髓抑制 8 (40.00) 6 (30.00) 食欲下降 8 (40.00) 10 (50.00) 表2. 两组患者放疗后近期毒副反应情况[例(%)] 疗患者；14例患者出现1级放射性食管炎；6例患者出现2级放射性肺炎；14例患者出现1级放射性肺炎；8例同步放化疗患者出现Ⅱ度骨髓抑制；8例同步放化疗患者出现2级厌食。常规分割放疗后胸部病灶达CR或PR占30% (6/20)，SD患者占35% (7/20)，PD的患者占35% (7/20)。所有患者均未出现3~4级不良反应，8例患者出现2级放射性食管炎，其中4例为同步放化疗患者；12例患者出现1级放射性食管炎；5例患者出现2级放射性肺炎；15例患者出现1级放射性肺炎；6例同步放化疗患者出现Ⅱ度骨髓抑制；10例同步放化疗患者出现2级厌食。显而易见，与常规分割放疗组相比，大分割放疗局部晚期NSCLC有更高的临床缓解率，且不增加近期不良反应。我们有理由相信，对于接受相同生物效应剂量(biological effective dose， BED)照射的NSCLC患者，大分割放疗除了能增加局部控制率，还可减少治疗次数，节省治疗时间和医疗资源，节省患者费用、减轻患者经济负担 [ 15 ] 。 该研究的所有患者我们已行血清EGFR、TGF-α检测，两组患者的放疗敏感性与基因表达变化之间的关系有待进一步研究。
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user: 摘 要 重金属污染已为当前环境污染处理的重要问题之一。本文研究了两种活性污泥对重金属铜的吸附特性，测定活性污泥对铜离子的吸附率；探讨了污泥添加量、初始pH值对铜吸附率的影响。结果表明：活性污泥对重金属铜具有一定的吸附性能，絮状活性污泥的吸附性能优于颗粒状活性污泥；随着活性污泥添加量的增加，铜的去除率逐渐增大并趋于稳定；活性污泥吸附率受pH影响较大，且存在一最佳值。 关键词 :Cu 2+ ，活性污泥，吸收率，pH值
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user: 1. 引言 近十几年来，随着工业的迅速发展，我国重金属废水的排放量迅猛增长，水体重金属污染已经成为当前我国重点环境问题之一。 铜是环境水质污染物的重要重金属监测指标之一，其对水生生物毒性很大，直接危害人类的生活 [ 1 ] ，重金属的污染治理已经受到世界各国的高度重视。传统的重金属废水处理方法有化学沉淀法、电解法、离子交换法、吸附法、氧化还原法、铁氧化法、电渗析法和膜分离法等，国内外学者在这方面开展了大量的研究。张兰河 [ 2 ] 等研究了Cu 2+ 对活性污泥沉降性能、zeta电位和COD去除率等性质的影响，为污水厂的运行提供了理论基础，但没有探讨活性污泥对铜吸附及去除的影响。张莹 [ 3 ] 仅仅分析了电镀废水中铜的回收意义、处理措施及手段，未涉及活性污泥处理废水的方法。蒋成爱等 [ 4 ] [ 5 ] 研究了剩余活性污泥对重金属的吸附情况，发现污泥对重金属Cu和Zn都有较好的吸附，且pH值对吸附率的影响较大。张启亮 [ 6 ] 等研究了活性污泥对不同重金属离子的吸附特性，结果表明活性污泥对Pb 2+ 、Cd 2+ 、Cu 2+ 三种金属离子的吸附能力较强，而对Ni 2+ 和Cr 2+ 的吸附能力较弱。许丹 [ 7 ] 开展了活性污泥对重金属铅、镉的吸附特性研究，为污泥的资源化利用提供了技术支持。聶鑫蕊 [ 8 ] 对电镀废水的处理方法进行了综述。李军强 [ 9 ] 等探讨了活性污泥添加量、pH值等因素对重金属镉、铜的吸附性能影响，确定了最佳的污泥添加量及pH值。综上，活性污泥在处理重金属废水方面的研究大多是处在实验室内，而研究结果都是针对某一种活性污泥，实际的工业应用较少。其原因是活性污泥的结构、组成复杂，其对重金属的吸附机理未认识清楚，且不同污泥对不同的金属离子的处理效果区别很大。因此，活性污泥法处理工业废水，尤其是含重金属的废水处理仍需要开展大量的研究工作。 本实验采用活性污泥处理金属铜离子，探讨不同种类污泥、污泥添加量以及pH值对重金属铜的吸附率效果，以期为活性污泥处理工业废水提供参考。
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user: 2. 实验仪器与试剂 2.1. 实验仪器 分析天平，上海精密科学仪器有限公司 722S分光光度计，上海精密科学仪器有限公司 PHS-3C数字酸度计，杭州东星仪器设备公司 振荡器，江苏金坛仪器公司 玻璃仪器：容量瓶、烧杯、移液管、锥形瓶、试剂瓶、分液漏斗 2.2. 实验试剂 CuSO 4 ∙5H 2 O AR 南京化学试剂公司 HON 3 AR 南京化学试剂公司 NaOH AR 南京化学试剂公司
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user: 3. 实验方法 3.1. 溶液配制 在室温下，用分析天平准确称取CuSO 4 ∙5H 2 O晶体，用烧杯溶解后转移到1 L容量瓶中，用蒸馏水定容至刻线，配制Cu 2+ 的浓度为5 g/L的溶液，转移到试剂瓶中备用。 用移液管取一定量的CuSO 4 备用液，用蒸馏水分别配制30 mg/L、60 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、120 mg/L浓度的CuSO 4 待测液，用0.1 mol/L的NaOH和HNO 3 溶液调pH值至6。 3.2. 绘制硫酸铜标准曲线 用移液管移取硫酸铜原液于100 mL容量瓶中，配制不同浓度的硫酸铜溶液，以蒸馏水为参比，在810 nm的波长下测定各溶液的吸光度，绘制硫酸铜–吸光度标准曲线。 3.3. 实验测定及数据处理 用分析天平称取一定量的污泥，与已配制好的待吸附液充分振荡、混合、密封。4小时以后用漏斗进行过滤，用分光光度计在810 nm的波长下测定滤液的吸光度，根据标准曲线算出吸附后溶液的浓度，从而计算出活性污泥的吸附率。 活性污泥对Cu 2+ 的吸附率的计算方法为： (1) 式(1)中：η为污泥的吸附率，%；C 0 为初始Cu 2+ 的浓度，mg/L；C为吸附后Cu 2+ 的浓度，mg/L。
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user: 4. 实验结果与分析 4.1. 不同污泥对铜的吸附性能影响 本文采用两种活性污泥，污泥I为颗粒状，污泥II为絮状。用移液管各取5种浓度的CuSO 4 待测液200 mL于锥形瓶中，然后分别加入5 g/L污泥量，密封、振荡，4小时后过滤，用分光光度计测定滤液的吸光度，根据标准曲线求出溶液的浓度，进而计算出活性污泥的吸附率。结果如图1所示。 由图1可以看出，两种污泥对铜离子都有一定的吸附作用，随着溶液中离子浓度的增大，两种污泥对铜的吸附率都呈现出下降的趋势；相同浓度下，污泥II的吸附率远大于污泥I的吸附率，这说明污泥II对含铜废水的去除效果优于污泥I。 4.2. 污泥添加量对铜吸收率的影响 分别取3~10 g/L污泥II置于200 mL含有5种铜浓度吸附液的500 mL锥型瓶中，搅拌均匀成悬浊液，并用HNO 3 和NaOH调节吸附液pH值6.0 ± 0.1，在20℃下密封振荡，4小时后过滤，取滤液用原子吸收分光光度计测离子浓度。结果如图2所示。 由图2可以看出，随着污泥投加量的增加，铜离子的吸附率在增长，且增长趋势逐渐变缓，而单位质量污泥上的吸附量下降。所以增加污泥投加量可以提高吸附率，但其吸附效率却越来越低。综合考虑，污泥添加量存在一个最佳值。 4.3. 初始pH值对铜吸收率的影响 pH值是影响活性污泥性能的重要因素之一。只有在适宜的pH值范围内，活性污泥的吸附才是行之有效的。在Cu 2+ 浓度为30 mg/L，污泥II添加量为8 g/L时，调节初始pH值分别为1，3，5，7，9，11，研究活性污泥对他们的吸附效果，其结果如图3所示。 由图3可知，在溶液中Cu 2+ 浓度不变、污泥添加量相同的情况下，随着初始pH值得升高，铜的吸附率呈现出先增大而后减小的趋势，在pH大约为6时，吸附率达到了最大值。这说明pH过高或过低都不利于活性污泥的吸附。 图1. 不同污泥对铜离子吸附率的影响 图2. 污泥II添加量对铜吸附率的影响 图3. 初始pH值对铜吸附率的影响
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user: 5. 结论 本文研究了絮状活性污泥和颗粒活性污泥对重金属铜的吸附特性，并探讨了污泥添加量对铜吸附率的影响。获得如下结论： 1) 活性污泥对重金属铜具有一定的吸附性能，絮状活性污泥的吸附性能优于颗粒状活性污泥。 2) 随着活性污泥添加量的增加，重金属铜的去除率逐渐增大。 3) 活性污泥吸附率受pH值的影响较大，且存在一最佳值，pH值过高或过低都不利于吸附。
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user: 摘 要 熊果酸是一种具有多种药理活性的五环三萜类化合物，其抗肿瘤活性尤为显著。熊果酸的抗肿瘤机制是多方面的。本文对熊果酸的抗肿瘤作用机制的研究进展进行综述并进行展望。 关键词 :熊果酸，抗肿瘤，作用机制
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user: 1. 前言 熊果酸(Ursolic Acid，简称UA)，又名乌索酸，属五环三萜类化合物，广泛分布在山楂、熊果、乌梅、陆英、芦笋、野蔷薇果、车前草、女贞子等自然界药用植物中。熊果酸结构式如图1所示，其化学名为3β-羟基-乌苏烷型-12-烯-28-羧酸。高含量的熊果酸为有光泽的棱柱状(无水乙醇)或为细毛样针状结晶(稀乙醇)，低含量时为棕黄色或黄绿色粉末，具特殊的气味。熊果酸的熔点为283℃~288℃，易溶于N，N-二甲基甲酰胺、甲醇、四氢呋喃、吡啶、丙酮，不溶于水和石油醚等。由于熊果酸结构复杂，目前国内外尚未实现人工合成，只能从植物中提取，常用的提取方法有超临界CO 2 萃取法、醇提凝析法、微波萃取法、超声提取法，其中超临界CO 2 萃取技术是近年来国际上迅速发展的新兴技术，采用该技术进行萃取，提取物杂质少，有效成分的提取率高，具有提取快速，完全，节省大量溶剂，萃取的选择性较高等优点 [ 1 ] 。 熊果酸具有多种生物学活性，包括抗肿瘤、抗氧化、抗炎、保肝、抗艾滋病病毒、抗溃疡、降血脂等，其中以抗肿瘤作用最为突出。其抗肿瘤机制并不单一，对多种癌细胞具有抑制作用，主要有作用于细胞凋亡相关蛋白和基因，如含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族基因、凋亡抑制基因Survivin基因、B淋巴细胞瘤-2 (Bcl-2)基因；阻碍细胞信号转导途径，如抑制核因子кB(NF-кB)途径、STAT3信号通路；细胞毒作用；阻碍细胞周期等。由于近年来细胞分子水平研究的不断进步，熊果酸的抗癌作用机制不断被发现，这也更有利于将熊果酸应用于多种癌症的治疗之中。 本文基于前人对熊果酸的各项研究，现对近年来熊果酸抗肿瘤作用机制的研究进展做如下综述，以期对日后更好的开发利用熊果酸有一定借鉴意义。
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user: 3. 展望 熊果酸广泛存在于自然界中，其药理活性十分广泛，抗肿瘤作用尤为突出，几乎对各个系统的肿瘤均有抑制作用。除了上述抗肿瘤机制外可能还存在其他机制，由熊果酸广泛的药理作用及不断发现的作用机制可以预见，熊果酸很有希望成为有前途的高效低毒的抗肿瘤、抗病毒性肝炎药物，亦可广泛应用于保健和美容护肤产品等多领域，开发利用前景十分广阔。
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user: 摘 要 从沙田柚自交和异交花柱转录组测序中鉴定了β-D-木糖苷酶基因序列。该基因全长为2647 bp (GenBank登录号为KU925841)，开放阅读框(ORF)为2385 bp，共编码794个氨基酸，编码的蛋白质的分子量为87.30 kDa，理论等电点为5.87。β-D-木糖苷酶基因编码蛋白为亲水性蛋白，含有1个与糖基水解酶家族蛋白相同的保守CAS结构域。β-D-木糖苷酶基因在沙田柚在未授粉花柱中的表达量(RPKM)为0.07，自花授粉1、2、3 d花柱中的表达量(RPKM)分别为43.13、27.84、1.95，在异花授粉1、2、3 d花柱中基因的表达量(RPKM)则分别为33.90、76.14和49.63。系统进化树显示沙田柚β-D-木糖苷酶与甜橙(Citrus sinensis， XM_006468131)和克莱门柚(Citrus clementina， XM_006449591)亲缘关系很近，属于同一进化分支。 关键词 :沙田柚，β-D-木糖苷酶基因，序列分析
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user: 1. 引言 β-D-木糖苷酶(EC 3.2.1.37)是木聚糖酶系的重要组成成分，是降解细胞壁半纤维素中阿拉伯木聚糖和木聚糖残基的主要酶。它主要是从非还原末端把木二糖和低聚木糖催化切割为木糖单体 [ 1 ] ，解除产物对内切木聚糖酶的抑制和对木聚糖水解的限制，是半纤维素降解过程中的限速酶 [ 2 ] 。1991年Herissat等 [ 3 ] 根据氨基酸序列的相似性将糖基水解酶编为不同的家族，不同来源的β-木糖苷酶分别归属于第3、39、43、52和54家族，由真菌和高等植物产生的β-木糖苷酶大都属于第3家族。目前，β-木糖苷酶可以从多种微生物和一些植物中分离，并且在能源、工农业废物处理、造纸、医药等领域到广泛应用 [ 4 ] [ 5 ] 。 自交不亲和性(self-incompatibility， SI)是植物界的一种普遍现象，广泛存在于被子植物中。所谓自交不亲和性是指能产生具有正常功能且同期成熟的雌雄配子的雌雄同体植物，虽然雌蕊的柱头或花柱可以识别自体或异体花粉，却抑制自体花粉萌发或生长的一种特性，在被子植物的有性生殖过程中自交不亲和性对于避免近亲繁殖有很重要的作用 [ 6 ] 。沙田柚为无患子目(Sapindales)、芸香科(Rutaceae)、柑橘属(Citrus)植物。目前，关于芸香科植物的自交不亲和性机理尚不明确，但沙田柚在自交不亲和的形态学、细胞学和蛋白质化学等方面的研究取得了一定进展：确定了沙田柚属于配子体自交不亲和，花粉管在花柱中生长受抑制的部位是在花柱的1/2左右 [ 7 ] ，已鉴定出了沙田柚自交花柱特异蛋白，并测定了该蛋白的分子量、等电点和N-末端氨基酸序列 [ 8 ] [ 9 ] 。秦新民等 [ 10 ] 对沙田柚花粉管特异蛋白进行了分离和鉴定，确定了花粉管中的特异蛋白的产生部位及分布 [ 11 ] [ 12 ] 。同时，花柱通道细胞中的特异蛋白的产生部位及分布也得到确定 [ 13 ] 。 β-D-木糖苷酶在植物体内的生理功能的研究报道不多，而该酶与植物授粉和自交不亲和性的研究尚未见报道。我们从沙田柚花柱转录组测序结果中鉴定了1个β-D-木糖苷酶基因序列，对该基因编码的蛋白质进行了生物化学特征分析。并通过该基因在授粉前后，以及自交和异交花柱中表达差异情况，初步探讨了β-D-木糖苷酶基因在沙田柚授粉以及自交不亲和过程中的生理功能。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 沙田柚实验材料采自广西灵川县潮田乡大山口村果园十年生结果树。在盛花期对沙田柚样树进行人工自交(沙田柚X沙田柚)授粉和异交授粉(酸柚X沙田柚)，3 d后分别收集自交和异交1~3 d的授粉花柱，以及当天开花的未授粉花柱，立即放入液氮中速冻，并保存于−80℃超低温冰箱备用。 2.2. 方法 2.2.1. RNA的提取，建库和测序 总RNA的提取按改良Trizol法进行 [ 14 ] ，建库和测序参考文献 [ 15 ] 。 2.2.2. 序列分析和系统树构建 使用DNAman、Finder、TMPRED、SWISS-MODEL、NetPhos2.0、SignaIP4.1等软件进行序列的开放阅读框(ORF)、编码氨基酸、编码蛋白的理化分析。将测定的基因序列与GenBank中的12种植物的同源序列进行比对，基于氨基酸序列β-D-木糖苷酶基因的系统进化树用DNAman软件进行构树。系统发育树的构建方法参考文献 [ 16 ] 。 2.2.3. 基因表达量及差异统计 使用RPKM法(Reads per kb per million reads)，即每百万resd中来自某一基因每千碱基长度的resd数目)计算基因表达量。如果一个基因存在多个转录本，则用该基因的最长转录本计算其测序覆盖度和表达量。根据基因的表达量(RPKM值)计算该基因在不同样本间差异表达倍数。FDR (False Discovery Rate)值越小，异倍数越大，表明表达差异越显著。本文确定FDR ≤ 0.001且差异表达倍数不低于2倍(log2Ratio ≥ 1)的条件对基因进行差异表达统计。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 基因的生物信息学分析 β-D-木糖苷酶基因(CL5107.Contig3_All)的全长序列2647 bp (GenBank登录号为KU925841)，使用NCBI网站上的NCBI ORF Finder和生物信息学软DNAman进行分析，该序列包含一个2385 bp的开放阅读框(ORF)，编码794个氨基酸(图1)。 3.2. 编码蛋白质的分析和疏水性预测 通过DNAman软件分析，该基因编码的蛋白质分子量(MW)为87.30 kDa，等电点pI为5.87。蛋白质序列的疏水性分析见图2，从图中可以看出所编码的肽链中疏水性最大值约为3.73，最小值约为−3.09，属于亲水性蛋白。 运用在线分析软件(http://www.expasy.org/tools/protparam.html)分析可知，该蛋白质带负电荷的氨基酸(Asp + Glu)总数为83，带正电荷的氨基酸(Arg + Lys)总数为75；分子是为C 3914 H 6076 N 1160 O 561 S 34 ；不稳定系数为26.77，属于稳定性的蛋白质。 3.3. 功能结构域分析 将编码的氨基酸序列用NCBI的Conserved Domain Architecture Retrieval Tool分析，发现该蛋白质具有1个与糖基水解酶家族(Glycosyl hydrolase family)蛋白相同的保守CAS结构域(图3)。 图1. β-D-木糖苷酶基因序列和推测的氨基酸序列 图2. 沙田柚β-D-木糖苷酶疏水性分析 图3. β-D-木糖苷酶保守结构域 3.4. 跨膜预测 运用跨膜蛋白数据库TMbase (http://ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html)预测β-D-木糖苷酶蛋白的跨膜区域。从图4可以看出该蛋白有4个跨膜区，跨膜区的氨基酸位置分别为：19~37、555~575、645~663和780~798。由此可以推测该蛋白为跨膜蛋白。 3.5. 蛋白质磷酸化预测 通过在线蛋白磷酸化位点分析软件NetPhos 2.0 Server，对β-D-木糖苷酶基因所编码的蛋白进行预测，结果表明该多肽链中分值在0.5以上的可能的磷酸化位点共有28个。其中，丝氨酸(Ser)可能的磷酸化位点共有10个，分别位于肽链的152、219、276、372、394、463、469、489、513和655位；苏氨酸(Thr)可能的磷酸化位点共有10个，分别位于肽链的71、113、117、127、187、299、319、330、504和688位；酪氨酸(Tyr)可能的磷酸化位点共有8个，分别位于肽链的33、202、350、351、392、606、674和697位。 3.6. 信号肽分析 利用SignaIP4.1软件对沙田柚β-D-木糖苷酶基因编码的氨基酸序列进行分析，其N端1-24个氨基酸(MARISNFILCFSICVSFLVISTNA)为信号肽序列(图5)。 3.7. 蛋白质二级结构及三级结构预测 通过在线分析软件Predict Protein (http://www.predictprotein.org/)对β-D-木糖苷酶蛋白二级结构进行预测，结果显示该蛋白含有α-螺旋为23.05%，β-折叠为13.35%，其他结构所占比例为63.60%。 利用SWISS-Model对沙田柚β-D-木糖苷酶蛋白三级结构进行预测，结果表明：β-D-木糖苷酶蛋白三级结构含有6个α-螺旋，4个β-折叠，其间由无规则卷曲连接(图6)。 图4. 沙田柚β-D-木糖苷酶基因编码蛋白的跨膜区预测 图5. 沙田柚β-D-木糖苷酶蛋白信号肽分析 图6. SWISS-Model模拟的沙田柚β-D-木糖苷酶蛋白的三级结构 3.8. 同源性分析 从GenBank数据库中下载其他植物β-D-木糖苷酶基因编码的氨基酸序列，通过序列同源性分析，沙田柚β-D-木糖苷酶基因编码的氨基酸与甜橙(C. sinensis， XM_006468131)和克莱门柚(C. clementina， XM_006449591) β-D-木糖苷酶的同源性分别为100%和99%。利用DNAman软件构建的系统树显示沙田柚β-D-木糖苷酶基因编码蛋白与芸香科的甜橙(C. sinensis， XM_006468131)和克莱门柚(C. clementina， XM_006449591)亲缘关系很近，属于同一个进化分支(图7)。 3.9. β-D-木糖苷酶基因在沙田柚自交和异交花柱中的表达 转录组测序结果分析表明该基因在自交花柱和异交花柱中的转录水平存在明显差异(图8)。在当天开花未授粉花柱中其表达量为0.07，在自交1 d花柱中迅速上升(43.13)，第2 d下降(27.84)，第3 d则迅速下降至1.95。而在异交1 d的花柱中，该基因的表达迅速上升(33.90)，第2 d达到76.14，第3 d仍保持很高水平(49.63)。 利用RPKM (Reads Per Kb per Million reads) [ 17 ] 对该基因在自交和异交花柱中的表达水平估算，设定FDRS ≤ 0.001且差异倍数 ≥ 2倍的基因视作显著差异表达基因，对以RPKM值取2的对数值(Log2(RPKM))对异交1 d/自交1 d、异交2 d/自交2 d和异交3 d/自交3 d花柱中β-D-木糖苷酶基因的表达水平进行统计分析，其log2(RPKM ratio)分别为−0.35、1.45和4.67。
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user: 4. 讨论 木聚糖广泛分布于高等植物的细胞壁中，它与其他碳水化合物在花药和花粉发育过程中起着非常关键性的作用，它不仅为花药的发育提供营养，而且还作为信号物质影响花药和花粉的发育 [ 18 ] [ 19 ] 。Hruba等 [ 20 ] 对拟南芥不同发育阶段花粉中β-木糖苷酶基因的表达进行了分析，结果显示β-木糖苷酶与花粉萌发过程中花粉细胞壁的膨胀相关 [ 19 ] 。本文克隆的β-D-木糖苷酶基因沙田柚授粉，以及自交花柱和异交 图7. 基于氨基酸序列的β-D-木糖苷酶系统发育树 图8. β-D-木糖苷酶基因的表达 花柱中的表达存在较为显著的差异：未授粉花柱中该基因的表达量为(RPKM) 0.07，自花授粉1，2，3 d花柱中的表达量(RPKM)分别为43.13、27.84、1.95，在异花授粉1，2，3 d花柱中基因的表达量(RPKM)则分别为33.90、76.14和49.63。从上述结果可以看出无论自交授粉还是异交授粉，第1 d花柱中β-D-木糖苷酶基因的表达都表现为迅速升高，在自交授粉状态下，基因的表达第2 d开始下降，第3 d则下降到很低水平。而异交授粉过程中，该基因的表达则一直保持很高水平。 沙田柚β-D-木糖苷酶基因的这种表达模式与其参与分解细胞壁的功能相符。薛妙男等 [ 7 ] 观察到沙田柚自、异花授粉的第1 d，其花粉的萌发和花粉管的生长行为相同。花粉在柱头上经水合作用开始萌发，4~8 h花粉管通过柱头乳突细胞间隙进入柱头，16~24 h即可进入花柱道。随后，自交与异交授粉花粉管的生长出现明显差异，自花授粉的花粉管2~3 d时在花柱的1/2处生长受阻，而异交授粉花粉管则能正常生长，进入子房完成受精。β-D-木糖苷酶基因在授粉的第1 d高表达，参与花柱细胞壁的降解，有利于使花粉管进入花柱和生长。随后该基因的表达与花粉管在花柱中的生长密切相关，自花授粉2~3 d内β-D-木糖苷酶基因表达活性也急剧下降，与之对应的是花粉管生长受阻，不能完成受精。因此可以推断β-D-木糖苷酶基因可能参与了沙田柚授粉和自交不亲和性过程。但其机理有待进一步收入研究。
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user: 摘 要 曼努埃尔一世在位时，拜占庭帝国的东方一直是他对外经略的重点。曼努埃尔的东方战略成功化解了拜占庭帝国在12世纪所面临的外部危机：拉丁人的势力在东方扩张和东方穆斯林势力兴起。在曼努埃尔的统治下，拜占庭帝国立稳根基，科穆宁王朝的领土扩张到最大。但是其东方战略也有一定的局限性，战争与外交消耗了拜占庭帝国的国力，导致国内矛盾不断激化，甚至使拜占庭失去了对东方的控制。 关键词 :拜占庭帝国，曼努埃尔一世，十字军东征，耶路撒冷王国
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user: 1. 引言 曼努埃尔一世(Manuel I Comnenus)被称为“最后的大帝”，在他的统治时期，科穆宁(Comnenian)王朝的繁荣达到了顶峰，而在他去世后不久科穆宁王朝也被其他家族取代。曼努埃尔登基后，帝国外部环境复杂多变，东方的塞尔柱突厥人、西方的诺曼人，还有北方的塞尔维亚、匈牙利等民族不断地侵扰帝国的领土，东西方的拉丁人也对拜占庭普遍敌视，第二次十字军东征后拜占庭与神圣罗马帝国的联盟终结，法王路易七世(Louis VII)也曾策划攻占君士坦丁堡，面对西欧普遍敌视的态度和帝国边境敌人的侵扰，曼努埃尔在帝国东方战略措施的成功，使拜占庭在各势力林立的地中海成为一方霸主。
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user: 2. 曼努埃尔在东方的对外政策 曼努埃尔在位时，他对与帝国的东部、西部和北部的敌人都有应对措施，但东方一直是他对外经略的重点。曼努埃尔于1143年登基后，拜占庭帝国面临罗姆苏丹国在东方的威胁，马苏德一世(Masud I)经常进犯拜占庭帝国在小亚细亚西部的防线。曼努埃尔在统治的第一年便与卡帕多西亚(Cappadocia)的穆斯林统治者结盟，并随后发动对占据小亚细亚的罗姆苏丹国的战争( [ 1 ] ， p. 417)。1144年曼努埃尔派遣了海陆两支远征军进攻西里西亚(Cilicia)和叙利亚(Syria)，并获得胜利。1146年曼努埃尔包围了罗姆苏丹国的首都科尼亚(Konya)，虽然他并没有攻陷科尼亚，但他也获得了一定的军事胜利( [ 2 ] ， p. 305)。可见曼努埃尔上任之初就很重视拜占庭东部边境的稳定。 曼努埃尔统治初期也非常关注西方，他的生活就非常的西化，他热衷于举行西方的骑士比武，甚至他本人也亲自参加，他两次迎娶了西方的公主( [ 3 ] ， p. 317)。拉丁人的元素充斥着他的宫廷，为他的生活打上深深的烙印。并且他登基之初怀有光复罗马帝国的理想，他认为应该恢复基督教会的统一。曼努埃尔为实现光复罗马的理想，他继续约翰二世与神圣罗马帝国皇帝康拉德三世(Konrad III)的联盟，攻击意大利的诺曼人。1149年~1156年曼努埃尔发动对诺曼人的战争，但没有成功。收复意大利未果后，曼努埃尔立刻将目标转向东方。 曼努埃尔于1155年大举进攻安条克(Antioch)公国，并轻易获得胜利；1158年安条克的统治者沙蒂隆的雷纳尔德(Renauld de Chatillon)承认拜占庭在安条克的主权，同年耶路撒冷的国王鲍德温三世(Baldwin III)宣布耶路撒冷成为拜占庭帝国的属国。曼努埃尔在东方的拉丁人中建立起极高的权威，在征服安条克的时候，安条克公爵雷纳尔德赤脚拜倒在皇帝面前，交出他的宝剑并祈求皇帝的宽恕。而鲍德温三世则亲自前往曼努埃尔在摩普绥提亚(Mopsuestia)的营地，他与皇帝签订条约保证为曼努埃尔提供军队。1159年曼努埃尔在安条克举行盛大的入城仪式，安条克城的街道被精美的地毯、幔帐和鲜花装饰起来，喇叭、军鼓和赞美诗一同奏响。曼努埃尔骑在骏马上，在安条克的公爵雷纳尔德和其他步行的拉丁贵族的陪同下进城，耶路撒冷国王鲍德温则远远地走在后面( [ 1 ] ， pp. 426-427)。曼努埃尔以东方皇帝的威严震慑着来自西方拉丁贵族们，拜占庭皇帝在拉丁东方的辉煌统治就此拉开序幕。 曼努埃尔与东方拉丁属国交往密切，拜占庭帝国的威望也得以巩固。1158年耶路撒冷国王鲍德温三世迎娶了一位希腊公主，九年后他的继任者阿马尔里克(Amalric)也娶了一位希腊妻子，在此期间曼努埃尔迎娶了安条克的玛丽亚(Maria of Antioch)作为妻子，这些联姻增强了拜占庭与拉丁人军事合作的背景( [ 4 ] ， p. 123)；1159年，曼努埃尔迫使努尔丁·马哈茂德(Nur al-Din Mahmud)释放大量拉丁人俘虏；1164年曼努埃尔出兵去西里西亚(Cilicia)，击败对安条克图谋的努尔·丁，并解救了安条克公爵波赫蒙德三世(Bohemond III)和许多拉丁贵族 [ 5 ] ；1169年曼努埃尔耶路撒冷国王阿马尔里克协调作战攻打埃及，同年曼努埃尔与阿马尔里克在伯利恒(Bethlehem)的圣诞(Nativity)教堂会晤，曼努埃尔在耶路撒冷王国建立起宗主权；1171年曼努埃尔在君士坦丁堡隆重接待了阿马尔里克并再次与其联手进攻埃及( [ 1 ] ， pp. 427-428)；1175年他帮助拉丁人收复了多里莱乌姆城(Dorylaion)，并写信给教皇声称他保证了基督教徒到圣地的安全 [ 5 ] 。 同时，曼努埃尔对栖居在小亚细亚的突厥人交往也非常频繁。1158年~1161年，曼努埃尔发动了针对罗姆苏丹国的军事行动，双方签订条约规定拜占庭可以用金钱换取锡瓦斯(Sivas)等边境城市。1162年~1163年，他视察并整顿了安纳托利亚西部的弗里吉亚行省，以防范突厥人的进犯。1162年曼努埃尔邀请罗姆苏丹国的苏丹基利吉·阿尔斯兰(Qilij Arslan)来到君士坦丁堡，用金钱换取塞巴斯提亚城(Sebasteia)，并与苏丹签订议和的条约 [ 6 ] 。1176年曼努埃尔出兵安纳托利亚，企图将突厥人赶出安纳托利亚，并加强拜占庭对拉丁国家的协助和对东方的控制，但不幸在密列奥塞法隆(Myriokephalon)惨遭失败。1176年~1180年间，曼努埃尔统治的后期，帝国也曾出兵小亚细亚，但再也无法挽回帝国在安纳托利亚半岛上的领土。从1155年拜占庭攻陷安条克，到1176年拜占庭败于突厥人，21年间曼努埃尔对东方的控制极为成功，他不控制了整个东方的基督教世界，还抑制住了东方伊斯兰势力对帝国的进攻。 正是因为曼努埃尔对东方的成功控制，他才能以东方为根基，成功击退帝国北方的敌人，使拜占庭远离两面受敌的局面。在1159年成功控制安条克后，曼努埃尔向北方发展。他利用权力干涉匈牙利内部的王位争夺，并成功达到控制匈牙利的目的，他甚至考虑将女儿嫁给匈牙利的王储贝拉(Bela)；1164年曼努埃尔与波西米亚(Bohemia)国王签订条约企图影响塞尔维亚(Serbia)、克罗地亚(Croatia)和波斯尼亚(Bosnia)地区，1167年这些地区已经被曼努埃尔控制；1167年塞尔维亚人斯蒂芬·奈曼加(Stephen Nemanja)领导起义军反对曼努埃尔的统治，1172年曼努埃尔击败了的起义军，并使斯蒂芬向拜占庭臣服( [ 2 ] ， p. 307)。 曼努埃尔1143年~1182年在位时，他对帝国东部、西部和北部的敌人都发动了战争。其中东部的战略是他最关注的，也是他实行的最成功的。在他统治的39年里，登基后的头两年就在东部出兵防范罗姆苏丹国的侵扰。自1155年出兵安条克，到1180年他停止攻击安纳托利亚的突厥人，曼努埃尔统治时有25年时间都在对东方发动战事，相比之下他对西方的战争就少的多了，他只用了9年时间(1149~1158)出兵意大利，虽然此后他也曾联系教皇，或抵抗德国人在意大利的军事行动，但都未取得很明显的效果。曼努埃尔在北方的功绩也很快就建立起来，1161年~1172年他与匈牙利人的战事占上风，并获得了塞尔维亚人的效忠。但与此同时他也没有放弃联合东方拉丁国家出兵伊斯兰地区。可见曼努埃尔对东方地区的重视非同凡响，也正是因为他重视东方的经略，拜占庭帝国才有机会立稳根基，并使科穆宁王朝的领土扩张到最大。
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user: 4. 曼努埃尔东方战略的消极影响 曼努埃尔通过其东方战略解决了科穆宁王朝面临的四大危机：拉丁势力在东方兴起，西方对拜占庭普遍敌视，拜占庭失去意大利和突厥人和萨拉森人的势力的崛起。但是，曼努埃尔的东方战略也有一定的局限性，也正是这样的局限性终结了拜占庭对东方的控制，结束了科穆宁王朝的中兴，将拜占庭帝国拖入衰落的深渊。 首先，曼努埃尔对外扩张削弱了拜占庭帝国的实力，使拜占庭在东方的势力遭到打击。曼努埃尔在帝国东方的战争给拜占庭带来极大的损失。经济上，战争不仅消耗了先前科穆宁王朝囤积的大量财产，战败还使拜占庭失去了意大利和小亚细亚两个重要的纳税区。另一方面，由于战争不断，纳税农户纷纷破产而转入大地主名下。面临财政困境，拜占庭政府为维持税收总量，采取增加税额、开辟新税种等手段，加重对农民的剥削。拜占庭政府的年收入最终在安德罗尼库斯统治时期提升到100万金币 [ 14 ] 。军事上，1969年在埃及拜占庭与耶路撒冷王国的联军迎战萨拉丁，拜占庭帝国的陆军和海军皆遭惨败。1176年的密列奥塞法隆战役时，帝国陆军也遭受重大的损失，甚至军中的士兵也指责曼努埃尔“饮着基督教臣民的鲜血”( [ 15 ] ， p. 52)。这次失败对于曼努埃尔本人精神上的打击是致命的，曼努埃尔在战场上仓惶逃命才勉强活下来，从那之后皇帝的内心无时不刻不陷入沉重的悲痛之中，他再也没有在他的臣民面前展示出他快乐的个性( [ 1 ] ， pp. 428-429)。曼努埃尔是拜占庭官僚政治的核心和罗马精神的象征，他的崩溃对帝国的内政产生极大的影响。而帝国的军队也随之土崩瓦解，拜占庭失去了小亚细亚“这片军区制体系比较完善、一直在为拜占庭提供优秀兵源的地区” [ 16 ] 。从此，军区制无法再为拜占庭提供充足的兵源，拜占庭军队中的雇佣兵人数愈来愈多，造成极大的混乱。 而对于东方十字军国家而言，拜占庭的失败使其丧失了联盟的价值，曼努埃尔与拉丁人建立起的友好关系也日渐破裂。因为曼努埃尔在安纳托利亚增兵向叙利亚境内的穆斯林施加压力，并且经常施予十字军必要的援助，所以十字军才能守住巴勒斯坦的领土。自密列奥塞法隆战役之后，拜占庭帝国不再视安纳托利亚为其重要领土，拜占庭收复小亚细亚的最后希望在这场战役中被打破。曼努埃尔从此“打消了将塞尔柱人驱逐出安纳托利亚的念头，完全接受了塞尔柱人统治安纳托利亚的现实。在12世纪末期拜占庭与西欧来往的信函中，已将安纳托利亚称为塞尔柱突厥地区” [ 17 ] 。可见拜占庭已经彻底放弃了安纳托利亚的领土，这也意味着拜占庭无法再向东方的十字军国家提供军事援助，曼努埃尔的东方政策也无法继续实行。所以十字军与拜占庭帝国结盟已经没有必要了，但是没有拜占庭军队的帮助，十字军根本没有那么多人力守卫巴勒斯坦的领土 [ 18 ] 。拜占庭战败后无法再支援十字军，在某种程度上也促使了耶路撒冷王国的覆灭。 其次，曼努埃尔的做法激发了拜占庭的国内矛盾，并促使东方拉丁人与拜占庭决裂。由于战争的需求，曼努埃尔不得不使用雇佣兵来扩充他的军队。而雇佣兵则造成了帝国的动荡与衰弱。首先，他们给帝国的安全带来极大的危害，雇佣兵军队内鱼龙混杂，有瓦拉几亚人(Wallachia)、诺曼人、西班牙人(Spaniard)、罗斯人(Rus)甚至有阿拉伯人(Arab) [ 19 ] 。这些雇佣兵“冲进各城镇，夺走城中百姓的劳动所得，乃至他们全部财产。居民们几乎成为军人的奴隶，有的干脆也加入军队” [ 14 ] 。并且，雇佣兵对拜占庭帝国的经济造成严重的影响。雇佣兵的军饷极其高昂，为支付其昂贵的军费，朝廷不得不加重税收，加重农民负担，没收贵族钱财，剥夺教会浮财，激化地方与中央的矛盾。雇佣兵制度还诱使拜占庭的士兵为金钱而战，所有拜占庭人“都希望成为士兵，他们有的将辛勤劳动赖以为生的缝纫针弃之一旁，有的离开马厩，有的掸去身上的砖灰或烘炉飘出的烟尘，都奔向招兵的军官” [ 14 ] 。但即使拜占庭人从军的热潮，依然改变不了雇佣兵的主导地位，和士兵们为金钱而战的本质。 在内政上，曼努埃尔喜欢西方的风俗并与拉丁人公主有过两次婚姻。通过与东方的拉丁国家建立友好的关系，拜占庭国内的拉丁人越来越多，他们还在国家政府中担任高官，这引起了希腊人的长期不满。曼努埃尔死后，他的遗孀西方公主玛丽当政，拉丁人在宫廷中养尊处优，而拜占庭的民众的生活则日益艰难( [ 3 ] ， pp. 317， 326-327)。在1182年安德罗尼库斯(Andronicus I Comnenus)推翻玛丽的政府后，对于拉丁人的怒火最终宣泄出来，在安德罗尼库斯的煽动下，君士坦丁堡爆发了对拉丁人的大屠杀，“拉丁人被杀死在家中或街头，他们的居住区化为一片灰烬，教士烧死在教堂里面，病人死在医院”( [ 15 ] ， p. 94)。 安德罗尼库斯登基时对拉丁人的屠杀使拜占庭人与拉丁人彻底的决裂，拜占庭与西欧的拉丁人从此再无任何联盟。而在东方拉丁人的眼中，拜占庭皇帝也不再是他们的保护人了。萨拉丁(Saladin)统治的阿尤布(Ayyubiyyah)王朝在埃及和叙利亚的羽翼逐渐丰满，对耶路撒冷王国虎视眈眈。拜占庭与萨拉丁的结盟并将耶路撒冷拱手相让令东方的十字军王国极为失望，拜占庭失去了东方十字军国家的效忠，这也意味着拜占庭失去了东方稳固的基础。
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user: 5. 结论 总体来看曼努埃尔一世的东方战略，东方是拜占庭在科穆宁王朝复兴的关键，科穆宁王朝建立初期，十字军便在东方建立了许多拉丁国家，并且，经过宗教分裂和前两次十字军东征，西欧攻占拜占庭的想法层出不穷。曼努埃尔面对来自西欧的威胁，对意大利征服的失败和东方穆斯林势力的兴起，巩固东方是复兴帝国的唯一选择。而曼努埃尔在东方上的政策总体来看还是成功的，曼努埃尔巩固了拜占庭在东方的势力，收复了安条克并得到了许多拉丁贵族的效忠。他巩固了帝国在小亚细亚的防线，并于罗姆苏丹国的君主签订的许多有利于拜占庭帝国的条约。并且，在东方稳固的基础上，曼努埃尔北伐也取得了不小的成效，成功控制了匈牙利和保加利亚人。 但是，在曼努埃尔统治后期，其东方战略的弊端就开始显现出来，甚至使拜占庭失去了对东方的控制。战争与外交消耗了拜占庭帝国的国力，密列奥塞法隆战役的失败使拜占庭彻底失去了对小亚细亚的控制，并且使东方拉丁国家失去了拜占庭的庇护。同时，大量战争开销、雇佣军势力的兴起以及拜占庭境内的拉丁人参政导致拜占庭国内矛盾不断激化，最终爆发了1182年君士坦丁堡对拉丁人的大屠杀，拜占庭与萨拉丁结盟，使得拜占庭与拉丁人的关系破裂。萨拉丁吞并叙利亚和埃及后，占领耶路撒冷及其周边地区，突厥人从1176年开始便雄踞小亚细亚，12世纪末期拜占庭在东方无处立足，而第三次十字军东征来自西方的攻势使拜占庭无从应对，巴巴罗萨与其子亨利六世(Hurry VI)围攻君士坦丁堡，拜占庭的国力根本无法再与神圣罗马帝国抗衡，不得不支付巨款与之求和。此时的拜占庭帝国国力极度衰弱，只能作为一个地中海小国偏安一隅。科穆宁王朝末期的拜占庭帝国早已失去了地中海霸主的地位，更没有实力与东西两侧的异教徒抗衡了。
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user: 摘 要 目的：探讨某市急性脑卒中就诊时间及其影响因素。方法：收集2015年1月~2015年12月在急诊科就诊的首次发作的脑卒中患者646例，记录就诊时间、到达急诊科的方式，分析脑卒中类型、职业、文化程度及首发症状对就诊时间是否有影响。结果：646例患者中，仅17.8%的患者在发病 <2小时到达医院就诊，22.5%的患者在发病2~6小时到医院就诊，到达急诊室最常见的转运方式是公交车。脑出血、高中及以上文化程度、干部就诊时间 ≤6小时比例高。首发症状以癫痫发作、意识障碍、头痛以及 ≥3个症状的患者就诊时间短。结论：公众对脑卒中的识别能力低、急救意识差，院前急救模式不完善，应完善急救模式并加强对救护人员的脑卒中救治的规范化培训。 关键词 :卒中，就诊时间，影响因素
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user: 1. 引言 脑卒中仅次于恶性肿瘤和心血管病，是西方工业化国家的第三大致死性疾病。自20世纪后期，西方国家脑卒中的发病率、致死率逐年降低。而占世界人口五分之一的中国，脑卒中已成为第二位致死性疾病，发病率、患病率逐年升高 [ 1 ] 。及时有效的治疗和干预能提高患者的治疗效果，能够减少致残率和病死率，从而改善预后，提高患者的生命质量，减轻家庭和社会的负担。而患者就诊时间的早晚是影响治疗效果的主要因素之一。为了解我市脑卒中就诊时间及其影响因素，本研究对我院急诊科就诊的首次发作的脑卒中患者作了调查，报道如下。
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user: 2. 资料与方法 1) 研究对象收集2015年1月~2015年12月在某市人民医院急诊科就诊的首次发作的脑卒中患者646例，男性342例，占52.94%，女性304例，占47.06%；平均年龄(69.05 ± 10.37)岁，脑梗死526例，短暂性脑缺血发作35例、脑出血85例。 2) 方法回顾性收集患者的基本资料，包括患者姓名、性别、年龄、家庭住址、职业、文化程度、首发症状、入院方式、发病时间、就诊时间。脑卒中的诊断均符合全国第四届脑血管病学术会议通过的诊断标准 [ 2 ] 。均经头颅CT检查证实。以患者发病至到达急诊室的时间为就诊时间，记录所有患者的就诊时间、到达急诊室的方式，分析脑卒中类型(包括脑梗死、TIA、脑出血)、职业(包括干部、工人农民、其他、三无人员)、文化程度(分为高中及以上、高中以下)及首发症状对入院时间是否有影响，记录院前急救信息获得的情况。 3) 统计学方法应用SPSS11.5统计软件进行处理，计量资料以(x ± s)表示，采用t检验，计数资料采用x 2 检验或者非参数检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 患者就诊时间分布 患者就诊时间分布到医院的646例患者中，患者在发病 <2 h到达医院就诊的115例，占17.8%；发病2~6 h到达医院就诊的145例，占22.45%；6~12 h到达医院就诊的43例，占6.66%；13~24 h到达医院就诊的120例，占18.58%；>24 h到达医院就诊的223例，占34.52%；就诊时间 ≤6 h到达医院就诊的260例，占40.25%；发病到医院就诊时间 >6 h到达医院的386例，占59.75%。 3.2. 院前转运方式的影响 646例患者中，公交车转运233例，占36.07%，急救车和私家车转运分别198例和215例，占30.65%和33.28%。不同转运方式患者院前急救信息获得情况比较，急救车到医院的198例患者中，占所有车辆到院前信息可得的比例较其他转运方式高，差异有统计学意义(P < 0.05)。急救车到医院的患者中，急救人员对患者进行了脑卒中初步诊断，但未对患者进行脑卒中量表评定，部分转运人员未到达急诊科前提前通知急诊科医护人员做好相关准备。通过120急救车到医院的患者中，就诊时间 ≤2 h的比例为39.27%。120急救车到医院患者的就诊时间 ≤2 h的比例高于其他转运方式，不同转运方式患者就诊时间比较，差异有统计学意义(P < 0.05)，见表1。 3.3. 就诊时间与影响因素关系 646例患者中，就诊时间 ≤6 h患者的平均年龄(67.89 ± 10.21)岁，明显高于就诊时间 >6 h的平均年龄(63.56 ± 11.32)岁，P < 0.01，表2。干部较其他职业者就诊时间 ≤6 h的比例高，高中及以上文化程度者较高中以下文化程度者就诊时间 ≤6 h的比例高，差异均有统计学意义P < 0.01，性别对就诊时间无影响P > 0.05。 3.4. 就诊时间与首发症状的关系 就诊时间与首发症状的关系首发症状为癫痫发作、意识障碍、头痛以及 ≥3个症状的患者，就诊时间 ≤6 h的比例明显高于就诊时间 >6 h的比例，差异有统计学意义P < 0.01，表3和表4。 3.5. 院前急救出诊区域分布 120院前急救反应半径按行政区把该市划分为市区(<5 km)、城郊(5~10 km)、农村(>10 km)三个区域，出诊平均半径10.27 ± 3.28 km，院前急救出诊区域分布依次为市区(28.78%， 57/198)、城郊(21.71%， 43/198)、农村(49.49%， 98/198)。
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user: 摘 要 积雪草酸是一种乌苏烷型五环三萜酸，主要来源于伞形科植物积雪草，具有广泛的药理活性，其抗肿瘤活性尤为显著。本文对积雪草酸及其衍生物的抗肿瘤活性的研究进展进行综述并进行展望。 关键词 :积雪草酸，衍生物，抗肿瘤