DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 资料和方法 2.1. 研究对象 选取2019年1月~2019年10月间至青岛市中心医院消化内科就诊的NERD患者53例纳入NERD组，其中男性26例，女性27例，年龄35~64岁，平均(50.83 ± 6.33)岁，平均BMI (23.05 ± 3.34) Kg/m 2 。选取同期在消化内科门诊行健康查体的20例健康人作为对照组，其中男性12例，女性8例，年龄39~66岁，平均(49.65 ± 7.59)岁，平均BMI (23.95 ± 3.35) Kg/m 2 。两组间年龄、BMI等无显著性差异。该研究通过青岛市中心医院伦理委员会审批。 2.2. 诊断及排除标准 NERD组诊断标准：GerdQ评分≥8分，常规白光内镜下食管黏膜无破损 [ 4 ]。 健康组纳入标准：同时期健康查体者。 NERD组排除标准：① 患有严重的心血管疾病、肾脏疾病、肝脏疾病或其他系统疾病；② 哺乳期、妊娠期妇女；③ 有精神病病史或不能耐受胃镜者；④ 普通白光内镜下显示有粘膜破损，即存在反流性食管炎(RE)者；⑤ 既往或目前存在其他食管粘膜病变，如食管癌、Barrett食管等。⑥ 近4周服用过质子泵抑制剂(PPI)。 健康组排除标准：① 有烧心、反酸等胃食管反流的症状；② 普通内镜检查有食管黏膜病变；③ 有消化系统或其他系统疾病。 2.3. 内镜检查 1) 主要仪器设备采用日本富士公司生产的蓝激光放大内镜，内镜型号Fujifilm EG-L590ZW，主机型号EPX 4450HD，光源型号LL-4450。 2) 检查前所有研究对象均完善血常规、心电图、内镜常规等检查排除禁忌症并签署知情同意书，检查当天空腹，检查前口服链霉蛋白酶颗粒及10 ml西甲硅油乳剂，并用利多卡因胶浆1支含服行口咽部局部麻醉，由同一名内镜医师应用蓝激光放大内镜对所有研究对象进行检查。常规内镜检查后退镜至贲门，观察顺序为：首先远距离在白光模式下观察齿状线及其上方黏膜的大体形态，获得组织的整体图像；中远距离切换为BLI-bright模式提供亮视野来进一步观察黏膜血管的颜色和微观结构，最后用BLI + ME模式对观察位置进行放大从而可以进一步观察IPCL形态并分型。 3) ICPL形态分型参考Kumagai提出的分型标准 [ 5 ]。I型：ICPL呈卷发状或小螺旋状，为正常黏膜的表现；II型：IPCL数量增加、扭曲、扩张和(或)延长，但仍规律排列，代表炎症浸润；III型：IPCL直径不规则、表现为迂曲多形；IV型：IPCL存在破坏甚至消失。 2.4. 统计学方法 使用SPSS 19.0处理数据，计数资料以“n”表示，计量资料以均值±标准差(X ± S)表示，两组间定性资料的比较进行χ 2 检验，符合正态的定量资料的比较采用t检验，不符合正态分布的定量资料的比较采用秩和检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 在白光模式下，NERD组和健康对照组的食管黏膜为光滑、粉红色，未见充血、糜烂，未见明显的黏膜破损。可见范围为树枝状血管网，两组齿状线清晰可见，无法识别IPCL (见图1)。BLI-bright模式下可以看到，NERD组和健康对照组的下段黏膜呈淡青色，两组无明显区别(见图2)。用BLI + ME模式将要观察的部位放大后可清楚观察到IPCL (见图3)。健康组中有18例IPCL呈规律排列的卷发状、小螺旋状，为正常I型表现，有2例出现II型改变，表现为IPCL形态扭曲；NERD组中有8例IPCL形态表现为I型，45例表现为IPCL II型，占该组的84.9%，两组的IPCL形态改变有显著性差异(P < 0.05) (见表1)。NERD组中IPCL I型和II型表现的患者在性别、年龄、BMI的差异无统计学意义(见表2)。 图1. 白光模式图像，健康对照组(左边)和NERD组(右边)均未见食管黏膜破损 图2. BLI-bright模式图像，健康对照组(左边)和NERD组(右边)食管下段黏膜均呈淡青色 图3. BLI + ME模式图像：IPCL I型为螺旋状或卷发状规则排列(左边)，IPCL II型表现为扭曲、扩张、延长(右边) Table 1 Comparison of IPCL morphological changes between healthy group and NERD grou 分组 例数 IPCL形态正常/改变 健康组 20 18/2 NERD组 53 8/45 P / <0.05 表1. 健康组和NERD组IPCL形态改变的比较 Table 2 Comparison of general data of patients with different IPCL morphology in NERD grou IPCL形态 例数 男/女 年龄 BMI I型 8 4/4 48.88 ± 7.36 23.25 ± 3.62 II型 15 22/23 51.18 ± 6.16 23.02 ± 3.33 P / >0.05 >0.05 >0.05 表2. NERD组不同IPCL形态患者的一般资料比较
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user: 4. 讨论 非糜烂性反流病存在烧心、反酸等症状，严重者甚至影响睡眠及日常生活，其发病率在我国呈逐年上升的趋势。NERD虽然不是恶性疾病，很少发生癌变，但由于其患病率高、症状严重影响日常生活、停药后易反复、诊治费用高等特点，不仅会明显降低患者生活质量 [ 6 ]，而且增加社会医疗负担，是目前国内外研究的重点。由于NERD在普通白光内镜下看不到黏膜的破损，因此仅能依靠症状学、PPI诊断实验等来间接证明NERD，特异性较低 [ 7 ] [ 8 ]。由于长期酸反流和炎症因素的存在，食管黏膜不可避免地会出现微结构即IPCL的改变 [ 9 ]，这种微结构改变可以帮助内镜下诊断NERD。 IPCL是血管的分支再发出分支形成的结构，不属于白光内镜的分辨率可观察到的范围，因此白光内镜下难以发现。蓝激光放大内镜的工作原理是蓝激光成像技术，可以发射两种波长分别为450 nm、410 nm的激光 [ 10 ]，在此基础上还增加了放大内镜的探头，450 nm的光刺激白光荧光粉产生宽带白光 [ 11 ]，生成的图像明亮，适合于常规筛查较大的病变，相当于普通白光内镜；410 nm的激光光波短、光谱窄 [ 12 ]，激光束被血管中的血红蛋白吸收后，可突出黏膜浅层微血管和黏膜表面微结构，增加的放大内镜将黏膜放大至几十甚至几百倍，因此可以清晰显示IPCL。 根据IPCL的形态、直径、数目等变化可以帮助区分正常黏膜、炎症黏膜或癌症黏膜。国内学者吴建维 [ 13 ] 等对NERD组、RE组以及健康对照组分别利用NBI结合放大内镜进行IPCL的观察并分型，结果发现，所有的健康对照组IPCL呈I型，85%的NERD组及全部EE组IPCL表现为Ⅱ型。本文也发现，84.9%的NERD镜下可观察到IPCL形态的改变，表现为IPCL扩张和(或)延长，但仍规律排列，代表存在炎症的浸润，与上述研究基本一致。其余15.1%的NERD患者IPCL与正常黏膜表现无异，可能与黏膜抵御酸反流的能力强、酸反流的量较少、患者食道高敏反应等各种因素相关。此外，本研究还发现，并非所有的健康对照组IPCL形态都表现为正常，约有10%可出现IPCL扭曲，可能原因为：虽有一定程度的酸反流，但实验对象对酸不敏感，因此未出现烧心反酸症状。 综上所述，非糜烂性反流病在蓝激光放大内镜下可表现为IPCL形态的改变，这种形态的改变可以帮助诊断NERD。
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user: 摘 要 自动增益控制是根据输入信号的强度自适应动态调整信道增益的一种常用方法。对于电平动态变化较大的输入信号，通过自动增益控制可以将其处理为稳定幅度的输出信号。针对宽带多载波信号，本文提出了一种模拟中放控制 + 数字域幅度调整的自动增益控制方法。该方法通过控制中放模拟电压和数字域调整幅度，可以实现对同一接收信道内不同输入电平信号的独立稳副输出控制，已成功运用于工程实践中。 关键词 :自动增益控制，宽带信号，多载波信号 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 在测控信号处理的过程中，为了使接收机能够可靠地接收电平具有一定动态范围的信号，并保证后续信号处理单元的性能，常在信道中加入自动增益控制(Automatic Gain Control，简称AGC)电路。通过自适应地调整信道的增益，使AGC后输出信号能够保持一定的电平强度。宽带多载波信号中含有多个不同频率的信号，不同信号的电平强度相互独立，可以相差几十分贝(dB)以上。AGC通过控制中放模拟电压，可以实现输入信道动态电平信号的稳副输出，但是对于带内各个信号的幅度无法进行分别控制，输入信道经过AGC之后，不同载波信号的电平差值没有发生改变。本文提出了一种模拟电压+数字幅度调整的两级AGC控制方法，在实现输入信道电平控制的同时又能对信道内的不同信号幅度进行分别控制，可有效地适用于宽带多载波信号的接收与信号处理情况。
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user: 2. 信号模型 给定接收的宽带多载波信号模型： r ( t ) = ∑ i = 1 N s i ( t ) = ∑ i = 1 N A i ⋅ exp ( j ω i t + j φ i ) (1) 式(1)中 r ( t ) 为整个接收信道的合成信号， s i ( t ) 为不同频点的载波信号，其中 A i ， ω i ， φ i 分别表示第i个载波信号的幅度、频率和相位。 如图1所示，宽带多载波信号中含有多个频率的载波信号，不同信号的频谱之间相距一定的带宽，功率有较大的差异。后端信号处理终端在对该接收信号进行处理之前需要对不同载波分别进行自动增益控制，确保所有信号都能以接近的幅度进行稳定输出。
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user: 3. 自动增益控制原理 自动增益控制(AGC)是一种使放大电路的增益自适应地随输入信号强度而调整的限幅输出自动控制方法。AGC是一个闭环负反馈系统，主要由增益受控放大电路和控制电压形成电路两部分构成，通过反馈控制放大电路的增益来达到控制输出信号电平的目的 [ 1 ]。 如图2所示，AGC通过增益受控放大电路来控制输出信号的电平，同时实时地根据输出信号的电平产生放大电路的控制电压，自适应地调整放大电路的增益 [ 2 ]。 增益受控放大电路的增益随控制电压而改变，通过可变增益放大器(VGA)中线性放大和压缩放大的有效组合对输出信号进行调整。对于反向AGC系统(AGC电压增大，放大电路增益增加)而言，当输入信号较弱时，AGC控制电压增大，线性放大电路工作，提高输出信号的强度；当输入信号较强时，AGC控制电压减小，压缩放大电路工作，降低输出信号的强度。 控制电压形成电路主要由AGC检波器和低通平滑滤波器组成。放大电路的输出信号经检波并经滤波器滤除低频调制分量和噪声后，产生用以控制增益受控放大电路的电压，从而控制放大电路的增益，达到自动增益控制的目的。 图1. 宽带多载波信号频谱示意图 图2. AGC原理框图
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user: 4. 设计实现 对于输入电平具有一定动态范围的信号，在进行信号处理之前应先进行AGC控制，使输出信号的电平保持适当的水平 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]。宽带多载波信号中不同信号的频谱之间相距一定的带宽，功率有较大的差异，需要对各频点信号分别进行提取处理，这就要求带内各频点信号的AGC独立可控、互不影响，使不同频点信号都能以适当的幅度进行稳定输出。而AGC控制电压只能统一调整整个接收信道的电路增益，无法对信道内各频点信号的增益进行分别控制，这里提出一种新的设计方法，采用模拟AGC电压控制+数字AGC幅度调整的两级AGC控制，在完成输入信道电平控制的同时又能实现信道内不同信号幅度的独立可控，可有效地适用于宽带多载波信号的自动增益控制。 4.1. 模拟AGC电压控制 宽带多载波信号的第一级AGC通过控制中放单元VGA的模拟电压来实现，主要是为了在中频输入信号电平发生波动时使模拟AGC环路输出稳定幅度的信号，其流程如图3所示。 信道接收的中频宽带信号经过中放模块的增益控制后送入高速模数转换器件(A/D)，将模拟信号转化为数字采样信号。数字信号先经过下变频单元进行频谱搬移，将中频输入信号转为后续信号处理所需的零中频正交I、Q两路信号。为降低数据率，减小数字信号处理的运算量，可以根据信号有效带宽对零中频正交信号进行进一步的滤波抽取。 图3. 模拟AGC电压环路控制流程图 将降速后的零中频正交信号送入检波单元，这里采用平方和幅度检波。对正交I、Q信号作平方和处理，得到信号功率，开方后得到信号的幅度信息。将检波幅度与设定的参考门限进行对比，作差得到两者之间的幅度误差，对误差进行积分，适当设置中放控制增益，转换为模拟电压输出给中放的VGA，不断调整中放电路的增益，使输入信号检波幅度与参考幅度的误差趋于零，达到AGC控制平衡。 V ο = k ∫ ( V i − V r e f ) d t (2) 式(2)中 V ο 为幅度误差积分， V i 为信号的检波幅度， V r e f 为参考门限，也就是中放控制输出稳定时的信号幅度值；k为AGC增益系数，控制AGC时常数。 4.2. 数字AGC幅度调整 经过模拟AGC环路后，接收信道有效带宽内的宽带信号(图3中降速后的零中频正交信号)具有相对稳定的幅度，但对于单个载波信号而言，其幅度并未达到理想的AGC控制水平。将模拟AGC环路输出信号送入数字AGC环路，对各载波信号分别进行滤波提取与数字AGC控制，可以同时实现带宽内不同信号的AGC控制平衡，其流程如图4所示。 图4. 多载波信号数字AGC环路控制流程图 根据载波频率将模拟AGC环路输出信号分别送入不同的数字变频器完成频谱搬移至零中频。变频后的信号进行低通滤波抽取，滤除带外其它信号的干扰。滤波降速后的信号经过幅度调整模块，对幅度进行补偿修正后送入幅度检波模块。检波后幅度与参考幅值比较作差，得到两者之间的幅度误差，对误差进行积分平滑，产生数字幅度调整的比例系数，反馈输入至幅度调整模块，不断修正数字域信号的放大压缩比，直到输出信号检波幅度与参考幅度的误差趋于零，达到最终的AGC控制平衡。 通过数字AGC环路，接收信道内各载波信号可以独立地进行AGC控制，同时达到输出幅度稳定的目的。 4.3. AGC增益输出标校 实现AGC控制的同时需要对信道的实际增益进行标校和量化输出。采用模拟AGC电压控制 + 数字AGC幅度调整的设计方法时，最终的AGC增益标校需要考虑模拟和数字两级AGC环路的增益系数，是两级AGC环路增益累加的结果。 模拟AGC环路的增益系数可以用AGC控制电压来指示。设置固定电平的中放输入信号，通过调整AGC电压的大小，可以标校出一组AGC电压值与中放控制增益的对应关系。实际应用中通过查询对应关系表可以得到模拟AGC环路的增益。 数字AGC环路的增益系数可以用幅度调整系数来指示。根据幅度调整系数与定标输出幅度的比值关系，可以计算出数字域幅度的放大/缩小比例，得到数字AGC环路的实际增益。
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user: 5. 计算分析 对于式(1)的宽带多载波信号模型，这里只考虑两个载波信号的接收： r ( t ) = s 1 ( t ) + s 2 ( t ) = A 1 ⋅ exp ( j 2 π f 1 t + j φ 1 ) + A 2 ⋅ exp ( j 2 π f 2 t + j φ 2 ) (3) 设定模拟AGC环路输出电平−20 dBm，数字AGC环路输出电平−20 dBm，接收单载波信号电平动态范围−10~−70 dBm。不同输入电平下AGC环路增益控制如表1所示。 Table 1 Gain control results of two-stage AGC loop with different input signal 输入信号电平(dBm) 模拟AGC 增益(dB) 模拟AGC 输出功率(dBm) 数字AGC 增益(dB) 数字AGC 输出功率(dBm) f 1 f 2 f 1 + f 2 f 1 + f 2 f 1 f 2 f 1 + f 2 f 1 f 2 f 1 f 2 −10 −10 −7 −13 −23 −23 −20 3 3 −20 −20 −10 −70 −10 −10 −20 −80 −20 0 60 −20 −20 −30 −60 −30 10 −20 −50 −20 0 30 −20 −20 −66 −63 −61.2 41.2 −24.8 −21.8 −20 4.8 1.8 −20 −20 表1. 不同输入信号下两级AGC环路增益控制结果 当输入载波f 1 、f 2 的电平发生变化时，模拟AGC环路使整个信道的输出幅度保持稳定，数字AGC环路使各载波信号的输出幅度均保持稳定。
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user: 6. 结束语 文中提出了一种针对宽带多载波接收信号的自动增益控制方法，采用模拟AGC电压 + 数字AGC幅度的两级环路控制设计，可以完成同一接收信道中不同载波信号的独立AGC控制。该方法实现简单、硬件复杂度低，已成功应用于工程实践中，对宽带多载波信号的接收与信号处理有非常好的效果。
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user: 摘 要 目的：探讨HIPK2对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠的影响。方法：成功构建博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型，构建稳定过表达HIPK2腺病毒载体，设为对照组、模型组和过表达HIPK2组，每组各5只，对肺组织进行HE和Masson染色，并用RT-PCR、Western Blot法测定肺组织中HIPK2和α-SMA含量。结果：博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型中HIPK2表达下调(P < 0.05)，α-SMA表达上调(P < 0.05)，且纤维化程度加重；过表达HIPK2可抑制成纤维细胞的激活，使α-SMA表达下调(P < 0.05)，且肺纤维化程度减轻。结论：HIPK2缺乏在肺纤维化机制中具有重要作用，HIPK2可抑制成纤维细胞的激活，减轻肺纤维化。 关键词 :同源结构域相互作用蛋白激酶2，肺纤维化，博来霉素，小鼠 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肺纤维化是一种慢性、进行性、致死性的肺间质疾病，其病因不明，且发病率逐年增加 [ 1 ]，该病更常见于男性及吸烟患者，中位生存期平均3~5年，IPF患者的治疗选择有限，肺移植是唯一可以明显改善患者生存率的治疗方法 [ 2 ]。因此，探讨IPF的发病机制，寻找新的治疗靶点及针对新的靶点的治疗药物，是今后IPF研究的关键。同源结构域相互作用蛋白激酶-2 (HIPK2)是一种通过调节各种基因和信号分子，HIPK2的缺乏在成纤维细胞行为和IPF发病机理中具有重要作用 [ 3 ]。本实验建立博来霉素诱导肺纤维化小鼠模型，观察上调HIPK2对小鼠肺纤维化程度及间质标志物α-SMA的影响。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 材料 8周龄的SPF级雄性C57BL/6小鼠，体重每只约20 g (北京中国医学科学院实验动物研究所提供)；anti-HIPK2、anti-α-SMA、anti-GAPDH (Abcam，美国)，本次动物实验获得青岛大学动物实验伦理委员会许可。 2.2. 方法 2.2.1. 构建腺病毒载体 合成和测序目的基因，对目的基因和载体进行连接，热休克法转化感受态大肠杆菌，取其中的单克隆菌落培养并提取质粒，在酶切后对其进行测序，成功构建pAdTrack-CMV/HIPK2、pAdTrack-U6/sh-HIPK2。纯化质粒并将重组腺病毒载体转染293A细胞并且大量扩增，建带有GFP示踪基因的Ad-HIPK2腺病毒载体，鉴定正确后进行扩增、浓缩纯化，并测定腺病毒的滴度，用于实验。 2.2.2. 构建动物模型 将15只C57小鼠，随机分3组，每组5只，具体分组情况如下：A：对照组(Mock组) B：模型组(Ad-control组) C：模型组+HIPK2过表达组(Ad-HIPK2组)。将70 uL博莱霉素溶液(浓度为1 mg/mL，剂量约为3.5 mg/kg)滴入小鼠气管进行肺纤维化造模，对照组使用等体积无菌生理盐水，常规SPF级动物房喂养。造模次日于小鼠尾静脉注射相应的腺病毒(5 × 10 9 PFU/只)。实验过程中观察小鼠饮食情况，于第7天处死实验小鼠，收集肺组织。 2.2.3. 模型纤维化评估 将固定24 h的肺组织常规脱水、透明、浸蜡、包埋，制作5 μm厚的连续切片，每片相距30 μm，用苏木精–伊红(HE)染色进行结构观察，用Masson染色检测胶原沉积，高倍镜下拍照，200×。于显微镜下观察肺组织纤维化程度。 2.2.4. RT-PCR测定肺组织HIPK2、α-SMA的含量 研磨肺组织、裂解、过滤并离心提取总RNA，并逆转录获得cDNA。荧光定量PCR扩增待检测基因和内参β-actin，使用表1所示的引物进行PCR反应。循环温度为：94℃ 4 min， 94℃ 30 s、56℃ 30 s、72℃ 30 s 40个循环。 Table 1 Primer sequences used for PCR analysi 引物名称 正向引物 反向引物 产物长度(bp) HIPK2 5’CAGCAACACCAGCCCCTA3’ 5’GGACTTGAAGGAGGACGAA3’ 214 α-SMA 5’GTACCCAGGCATTGCTGACA3’ 5’GAGGCGCTGATCCACAAAAC3’ 271 表1. 用于PCR分析的引物序列 2.2.5. Western Blot检测肺组织中HIPK2、α-SMA的表达变化 RIPA裂解液裂解肺组织，收集总蛋白，BAC法测定各样品蛋白质浓度，SDS-PAGE凝胶电泳，PVDF膜转膜，2%的BSA中封闭，分别用anti-HIPK2、anti-α-SMA、anti-GAPDH孵育膜，辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(天津赛尔，中国)进行孵育，洗涤后用化学发光法显色，在暗室曝光并进行显影、定影处理，用Lab Works TM 凝胶成像及分析系统扫描所有胶片，分析各蛋白条带的亮度值，计算校正后的目的蛋白相对表达量。 图1. HIPK2在各组小鼠中的表达情况。A：通过qPCR检测HIPK2 mRNA表达。B Western blot 检测HIPK2蛋白表达。 * ：与Ad-control组相比，p < 0.05，n = 5 2.2.6. 统计学分析 采用SPSS 22.0统计软件，两组间均数的比较采用单因素方差分析的Dunnet事后比较，实验数据以 x ¯ ± s 表示，P < 0.05时差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. HIPK2在肺纤维化小鼠体内低表达 RT-PCR和Western Blot检测显示(图1)，与Mock组相比，HIPK2的mRNA和蛋白表达在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型组中是低表达的；Ad-HIPK2组可稳定过表达HIPK2，p < 0.05，n = 5。 3.2. HIPK2能减轻博来霉素诱导小鼠肺纤维化程度 HE和Masson染色可见(图2)，与Mock组相比，模型组肺纤维化程度加重；与模型组相比，HIPK2过表达组纤维化程度减轻。 图2. 各组小鼠肺组织HE和Masson染色，200× 图3. α-SMA在各组小鼠中的表达情况。A：RT-PCR检测α-SMA mRNA表达，B：Western blot检测α-SMA蛋白表达。 * ：与Ad-control组相比，p < 0.05，n = 5 3.3. HIPK2能抑制成纤维细胞的活化 RT-PCR和Western Blot检测显示(图3)，与Mock组相比，模型组中α-SMA的mRNA和蛋白表达增加；Ad-HIPK2组较模型组减少，p < 0.05，n = 5。
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user: 4. 讨论 目前认为肺纤维化的病理学过程表现为在各种致纤维化因素作用下，肺泡上皮细胞弥漫性损伤，激活成纤维细胞，大量分泌胶原纤维，胶原纤维等细胞外基质的异常沉积引起组织收缩，最终发展成为广泛的纤维化变化 [ 4 ] [ 5 ]。 同源结构域相互作用蛋白激酶2 (HIPK 2)是保守的丝氨酸/苏氨酸同源结构域相互作用激酶家族的一部分，是一种重要的转录辅助调节蛋白 [ 6 ] [ 7 ]。研究发现HIPK 2有多种功能，包括转录因子的共同调节、生长、发育、形态发生和细胞死亡的调控、肿瘤抑制和DNA损伤反应的调节 [ 8 ] [ 9 ]。HIPK在癌症和慢性纤维化中已成为有希望的药物靶点 [ 10 ]。研究发现，HIPK2通过调节促凋亡、促纤维化和促炎症通路，被认为是肾纤维化的重要驱动因素，可能是抗纤维药物的潜在靶点 [ 11 ]。尚有研究发现，HIPK2参与Sigma-1受体在二氧化硅致纤维化中的调控作用 [ 12 ]。对于HIPK2在博来霉素诱导的肺纤维化模型小鼠中研究较少。 我们构建了博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型，证明HIPK2在纤维化肺组织中是低表达的；同时构建稳定过表达HIPK2的腺病毒载体，通过染色发现转染该载体的小鼠肺组织肺纤维化程度较模型组减轻，且其间质标志物α-SMA表达下降，说明过表达HIPK2能抑制成纤维细胞的活化。我们的研究与Ricci等人相符，其证实IPF人成纤维细胞HIPK2表达降低，认为肺成纤维细胞中HIPK2基因的缺失可能会抑制P53的活化，从而促进了肺成纤维细胞的凋亡，促进肺纤维化的发生 [ 3 ]。我们从体内实验明确了HIPK2在纤维化肺组织内的表达情况，并证实过表达HIPK2可减轻肺纤维化。下一步，我们将设立体外实验进一步探究HIPK2减轻肺纤维化的具体机制，为治疗提供更新的靶点。
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user: 摘 要 高迁移率族蛋白1 (HMGB1)是一种高度通用，且无处不在的非组蛋白，属于HMGB蛋白家族。HMGB1在细胞核内参与许多DNA事件，例如DNA转录，复制，修复和重组；除其细胞内功能外，HMGB1还可在细胞外空间释放，通过损伤相关分子模式，促进炎症微环境的发生。高迁移率族蛋白1 (HMGB1)是协调药物性肝损伤(DILI)中炎症反应的关键蛋白，在DILI的早期预测，治疗和预后方面都有重要意义。该文就HMGB1与药物性肝损伤的相关研究做一综述。 关键词 :高迁移率族蛋白1，药物性肝损伤，炎症反应，生物标志物，综述 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 药物性肝损伤(DILI)是一种严重的药物不良反应(DILI is a serious adverse drug reaction)，严重可导致肝功能衰竭甚至死亡，给人类健康带来了严重危害。据统计，世界范围内药物性肝损伤死亡病例数量已位居世界第五位。DILI的发病机制目前尚不清楚，且无特异性临床症状表现，因此准确、快速地检测DILI对临床患者分层和治疗具有重要意义，有利于临床前药物设计和风险评估。在临床环境中，高迁移率族蛋白1 (HMGB1)作为DILI的另一个有前途的生物标志物，优于丙氨酸转氨酶(ALT)作为进展和结果的指标，被看作为是一种预警素，有助于早期预测DILI，提供治疗和预后信息，在不久的将来改变DILI的管理并提高患者安全性。
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user: 2. HMGB1的组成结构特性 高迁移率族蛋白1 (high mobility group proteinB1， HMGB1)于1973年由Goodwin等 [ 1 ] 首次在小牛胸腺中被提取和鉴定，是含量最丰富且目前研究最深入的HMG蛋白。在结构上，HMGB1在啮齿动物和人类之间共享99%的氨基酸序列同一性 [ 2 ] [ 3 ]。HMGB1由3个区域组成：两个DNA结合结构域(A、B)和一个负电荷羧基末端(酸性末端) [ 4 ]。研究证实，B盒概括了全长蛋白的炎性活性，而A盒与HMGB1所有区域结合，拮抗了该蛋白，可以减轻炎症级联反应，羧基末端可以对A盒和B盒从细胞核内转移到细胞核外起保护作用 [ 5 ]。
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user: 3. HMGB1的分泌与释放 HMGB1普遍存在于细胞核中，当巨噬细胞、组织细胞、中性粒细胞等受到刺激活化后能主动将HMGB1分泌到细胞外 [ 6 ]。与大多数典型的全身性炎症反应早期释放的经典细胞因子不同，HMGB1以延迟的方式分泌，并在脓毒症发作后维持高水平的循环。胞外HMGB1最初被确定为内毒素血症和败血症的晚期介体 [ 7 ]。 目前HMGB1可被认为是一种“无引线蛋白”，它和别的蛋白不同，它缺乏常规的N端疏水性分泌信号肽 [ 8 ]。因此，HMGB1不会按照常规蛋白的分泌途径分泌；另一种是HMGB1从活化免疫细胞中释放的调控需要借助一个物质，称为“前导肽”，缺乏前导肽的HMGB1也不会以常规途径直接从高尔基体转运到细胞外空间 [ 9 ] [ 10 ]。从活化的免疫细胞释放HMGB1有两个步骤：在第一步中，DAMPs (分子损伤相关模式)或PAMPs (病原损伤相关模式)在免疫细胞的核定位序列点刺激HMGB1的翻译后修饰。这促使HMGB1向细胞质转移。在第二步中，DAMPs或PAMPs通过分泌性溶酶体的形成或激活细胞死亡程序来诱导HMGB1释放到细胞外空间 [ 10 ]。HMGB1到底如何分泌尚不清楚。当前提出的模型表明，在细胞应激原组织损伤后，HMGB1可以通过乙酰化，磷酸化，甲基化或氧化进行翻译后修饰 [ 11 ]，这些修饰不仅调节HMGB1的结构，定位和生物学功能，而且还调节其从细胞中的释放。HGMB1被认为是原型DAMP，Tracey和合作者展示了HMGB1作为原型DAMP的第一个证据 [ 12 ]。
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user: 4. HMGB1与药物性肝损伤中的相关研究 HMGB1作为一种重要的促炎及趋化因子，介导免疫损伤。当过量摄入APAP时被肝细胞色素Cyp2e1转化成其反应性有毒代谢产物，这些有毒的代谢产物可共价结合HMGB1，在APAP引起的肝损伤过程中，坏死性和凋亡性肝细胞释放出许多内源性DAMP [ 13 ]，例如HMGB1，可以诱导免疫细胞(如中性粒细胞)的浸润，介导免疫损伤，同时过量服用APAP会显着增加HMGB1的循环水平 [ 14 ]；细胞外HMGB1与结合配偶体相互作用，例如晚期糖基化终产物(RAGE)的受体，Toll样受体(TLR) [ 15 ]，此两种受体是最流行和研究最广的HMGB1细胞外受体中的两种 [ 16 ]。有实验通过对TLR4缺乏和RAGE缺乏的小鼠进行了致死剂量的APAP治疗，发现RAGE缺陷肝细胞对其显示出正常代谢并保留了对其诱导的细胞死亡的敏感性，在受体APAP毒性期间，HMGB1/RAGE轴提供了坏死细胞和嗜中性粒细胞之间的直接联系，诱导中性粒细胞募集到坏死组织中进一步加剧了肝损伤 [ 13 ]。 HMGB1在DILI的早期预测和预后的判断方面都具有重要的意义。近来有研究将CK-18、HMGB1和microRNA-122作为DILI的生物学标志物，发现这些生物学标志物在临床前和临床数据上都对其表现出敏感状态 [ 17 ]。同时也有研究发现在DILI患者中，尽管不同人群之间存在差异，但HMGB1值的总体表现与miR-122相似，可预测过早出现的APAP过量患者的毒性，但总HMGB1值无法用来确定可能性APAP过量后的死亡率，到目前为止，还没有研究进行了HMGB1在非APAP DILI中的预后价值测试 [ 18 ]；有实验通过对过量服用APAP的患者和健康志愿者进行对照研究，发现过量服用APAP的患者血清中存在乙酰化的HMGB1，在入选研究的第1天，这些患者的血清中总HMGB1显著升高，高于健康志愿者和LAP正常的APAP过量患者观察到的值。而在APAP正常的LFT组中，总HMGB1未升高，乙酰化HMGB1仅在死亡需要肝移植或预后较差的患者中升高。因此，乙酰化的HMGB1具有作为DILI早期预测及预后指标的潜力 [ 19 ]。 HMGB1的中和作用及其对损伤后炎症的减轻介导了治疗效果。Lundback等 [ 20 ] 研究了部分人源化抗HMGB1单克隆抗体的治疗功效，发现使用抗HMGB1抗体治疗后血清ALT、microRNA-122水平均较前有所降低，并完全消除了APAP诱导的炎症标志物 [ 21 ]；甘草甜素是一种直接抑制HMGB1的植物化学物质，作为HMGB1的抑制剂已被广泛用于治疗肝病在亚洲和欧洲 [ 22 ]，甘草甜素能消融肝细胞特异的HMGB1或在药理学上治疗HMGB1，从而挽救了APAP诱导的肝炎症和损伤 [ 23 ]。使用中和抗体阻断HMGB1也已被证明可以改善APAP毒性中的肝细胞再生和肝脏结构恢复 [ 24 ]，推测了药理预防HMGB1介导的损伤放大的可能性。
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user: 5. 小结与展望 DILI的临床表现和病理变化较为复杂，因此准确而可靠的生物标志物将对DILI的预防、诊断和治疗提供很大的帮助，现有的DILI生物标志物如丙氨酸转氨酶(ALT)在早期预测、诊断及预后方面具有一定的局限性，HMGB1亚型已被证明比ALT更敏感的生物标志物，介于HMGB1及其受体在肝脏中的广泛表达，已牵涉到许多常见肝脏疾病的发病机理中，HMGB1作为DILI的一种新生生物标记物在疾病的早期预测，治疗及预后的判断方面都显现出较大的潜力。
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user: 摘 要 NLRP3炎症小体是一种与炎症反应息息相关的大分子多蛋白复合物。NLRP3炎症小体的组装和激活与高血压、动脉粥样硬化、心肌梗死等多种心血管疾病病理过程相关。研究NLRP3炎症小体在心血管相关疾病中的作用，可以为心血管疾病提供新的治疗方案。本文主要对NLRP3炎症小体在心血管疾病上的研究进展做一简要概述。 关键词 :NLRP3，炎症小体，IL-1β，Caspase-1，心血管疾病 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 炎症小体是一种多蛋白复合物，通过激活Caspase-1和释放促炎性因子IL-1，对病原相关分子模式(PAMPs)和危险/损伤分子相关模式(DAMPs)，氧化应激(ROS)，胆固醇结晶和环境刺激做出响应。到目前为止，已经发现了多种类型的炎症小体。但NLRP3炎症小体的研究最为广泛。NLRP3能够识别非微生物引起的危险信号，也可在各种疾病条件下导致无菌的炎症反应发生。最近的研究表明，NLRP3炎症小体的激活与心血管疾病的病理过程有紧密联系 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]。
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user: 2. NLRP3的结构与激活 NLRP3炎症小体是一种先天性免疫受体，通常由三部分组成：1) C端亮氨酸重复序列(LRRs)，N端的热蛋白样结构域(PYD)和中间的NACHT结构域；2) 包含PYD和C端的Caspase募集结构域(CARD)的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)；3) 由CARD和Caspase域组成的半胱氨酸蛋白酶前体 [ 4 ]，具体结构见图1。NLRP3 图1. NLRP3炎性小体的结构 [ 9 ]。(A) NLRP3炎性小体组成成分；(B) 低聚体NLRP3炎症小体的激活促进Caspase-1的活化和IL-1β的成熟的过程 与ASC相互作用启动炎症小体的形成；ASC通过招募和激活Caspase前体来生成具有活性的Caspase-1。Caspase-1是IL-1β的转化酶，将IL-1β前体剪切成具有活性的IL-1β [ 5 ]。NLRP3炎症小体的激活需要两个过程：激活过程和触发过程 [ 6 ]。NLRP3的激活过程是指TLRs或细胞因子(肿瘤坏死因子TNF-α)识别PAMPs和DAMPs或环境刺激引起核因子κB (NF-κB)的激活，进一步引起NLRP3、IL-1β前体、IL-18前体以及转录蛋白修饰(如NLRP3去泛素化和ASC磷酸化)的表达和激活 [ 7 ]。NLRP3的触发过程主要以NLRP3、ASC和Caspase-1前体的寡聚化为特征，诱导Caspase-1的活化和IL-1β的成熟，最终导致炎症小体的形成 [ 8 ]。
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user: 3. NLRP3炎症小体与疾病 3.1. NLRP3炎症小体与高血压 高血压是一种由多基因遗传和环境因素引起的复杂疾病。炎症小体的活性在高血压的病理发生和发展中起着至关重要的作用。NF-κB是NLRP3的一种有效激活剂，它可以诱发高血压的炎症反应 [ 10 ]；抑制NF-κB的活性后，NLRP3和Caspase-1的活性下降，促炎因子和氧化应激的表达降低，从而抑制高血压的发生 [ 11 ]。Krishnan等人 [ 12 ] 观察到高血压患者的血清中IL-1β的含量升高，说明高血压的病理过程与炎症发生存在一定的联系。IL-1β是一种由NLRP3炎症小体激活后调控的多效促炎因子。IL-1β抑制肾素–血管紧张素系统的激活，降低室旁核中ROS的产生，从而减弱高血压诱导的心血管损害 [ 13 ]。血管紧张素II (Angiotensin II， Ang II)在调节高血压相关的炎症过程中起着关键作用 [ 14 ]。Ang II是肾素–血管紧张素系统激活后产生的一种血管收缩肽，通过激活1型和2型受体发挥生理效应 [ 15 ]。小鼠体内注射Ang II 7天后，NLRP3激活型炎症小体增多、IL-1β以及其它促炎细胞因子的表达增加 [ 16 ]。在不影响血压的情况下，阻断NLRP3炎症小体的激活可以显著性减弱Ang II诱导的心肌纤维化，这说明NLRP3炎症小体可以引起心脏重构 [ 16 ]。因此，NLRP3炎症小体/IL-1β可能成为高血压性心脏病的一种新型的治疗靶点。未来进一步的研究应该着重于对NLRP3蛋白家族的组装和激活，以更具体地阐明其在高血压进展过程中的功能作用。 3.2. NLRP3炎症小体与动脉粥样硬化 动脉粥样硬化的特征是动脉壁脂质沉积和炎性细胞膨胀。这种慢性病理状态是许多心血管疾病发生的根本原因 [ 17 ]。动脉粥样硬化斑块被认为是一种与先天免疫系统有关的炎症性病变，慢性炎症在其发生进展中起着重要作用 [ 18 ]。研究报道，调节IL-1β前体释放的途径与动脉粥样硬化病变的进展密切相关 [ 19 ]。Zheng等人 [ 20 ] 报道NLRP3沉默后，动脉粥样硬化斑块将更稳定，说明NLRP3炎症小体参与动脉粥样硬化的发生。Duewell等人 [ 21 ] 对低密度脂蛋白受体(LDLR-)或骨髓中NLRP3 −/− ，ASC −/− ，IL-1α/β −/− 缺乏的野生型小鼠进行8周的高脂肪饮食后，发现NLRP3 −/− ，ASC −/− 和IL-1α/β −/− 的骨髓组织中IL-18表达下降，动脉粥样硬化病变进程减慢。高脂饮食喂养LDLR缺乏和骨髓组织中Caspase-1/11缺乏的小鼠，动脉粥样硬化斑块明显减少 [ 22 ]，证实了胆固醇结晶可以激活NLRP3炎症小体，说明NLRP3炎性小体在动脉粥样硬化中发挥重要作用。Abderrazak等人 [ 23 ] 发现在高脂肪喂养的载脂蛋白E 2 Ki小鼠上，NLRP3炎症小体抑制剂能够抑制胆固醇结晶诱导的NLRP3炎症小体的激活，动脉粥样硬化病变明显减少。以上均说明NLRP3炎症小体调节的信号通路可以调控动脉粥样硬化中胆固醇结晶诱导的炎症反应。然而，随着研究的不断深入，Menu等人报道了相反的结果 [ 24 ]。他们对Apoe −/− 小鼠进行高脂饮食喂养11周后，发现NLRP3 −/− 、ASC −/− 或Caspase-1 −/− 小鼠，细胞浸润、斑块稳定性以及动脉粥样硬化均无显著变化，造成这种差异的机制尚未确定。Baldrighi等人 [ 24 ] 认为这可能与Apoe −/− 小鼠高脂饮食持续时间有关。也有研究报道，这些差异可能是由于使用了不同的小鼠模型。因此，在Apoe −/− 小鼠模型中，IL-1在动脉粥样硬化发展中的作用尚未完全确定。 ROS在动脉粥样硬化斑块进展的关系中发挥着重要作用，ROS的过度生成会诱导凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1 (LOX-1)的表达。LOX-1的活化反过来诱导ROS的释放，形成正反馈回路，在动脉粥样硬化的发生发展中发挥重要作用 [ 25 ] [ 26 ]。研究报道，用脂多糖刺激人THP-1巨噬细胞，可显著诱导LOX-1和ROS的表达，并启动线粒体DNA (mtDNA)损伤，进而造成受损的mtDNA积累，然后引起NLRP3炎症小体激活，造成细胞自噬发生。ROS抑制剂和自噬诱导因子均能降低NLRP3蛋白的蛋白表达；相反，自噬抑制剂增强了NLRP3蛋白的表达。这些发现为NLRP3在加速动脉粥样硬化中的重要作用提供了新的见解，也为动脉粥样硬化的治疗指明了新的潜在分子靶点。 3.3. NLRP3炎症小体与心肌梗死 心血管疾病，尤其是急性心肌梗死(MI)和中风，是全世界死亡和残疾的主要原因 [ 27 ]。心肌梗死会引发强烈而复杂的炎症反应以对心脏进行修复和重建 [ 8 ]。目前已证明，对炎症信号的干预可以减少心肌梗死面积 [ 28 ] [ 29 ] [ 30 ]。抑制IL-1β的表达可明显减少小鼠急性心肌梗死后的心脏肥大和心肌功能障碍的发生 [ 31 ]。IL-10是一种抗炎细胞因子，通过激活M2巨噬细胞极化，可抑制心肌纤维化，改善心肌重构，促进心肌梗死后小鼠心肌伤口愈合 [ 28 ]。目前NLRP3被认为是心肌缺血中模式识别受体中的一个高度可信的候选受体，可识别多种危险信号并诱导炎症反应发生 [ 32 ]。VanHout等人 [ 33 ] 报道，在猪心肌梗死模型中，NLRP3炎症小体抑制剂MCC950可显著降低梗死灶的大小，并保留了心肌功能，这说明抑制NLRP3炎症小体的活化可能对急性心肌梗死患者具有潜在的治疗作用。虽然心肌缺血再灌注可以改善心肌损伤的程度，但同时也有加重心肌损伤的可能。Marchetti等 [ 34 ] 报道，在大鼠心肌缺血再灌注模型中，抑制NLRP3炎症小体的活性可以减少心肌的梗死。Liu等人 [ 35 ] 发现，对C57BL/6J小鼠进行心肌缺血再灌注发现，NLRP3的表达增加、Casepase-1的活性提高、IL-1β和IL-18的表达也都显著上升。随后，在C57BL/6J小鼠心肌内注射NLRP3抑制剂BAY-11-7028或NLRP3 siRNA，可以显著减轻心肌缺血再灌注引起的心肌损伤。Kawaguchi等人 [ 36 ] 通过使用短暂性阻断心脏左前降支的方法来构建心肌缺血再灌注损伤模型。在这个模型中，与野生型小鼠相比，ASC −/− 或Caspase-1 −/− 小鼠的炎性细胞因子和趋化因子的表达都显著降低。这些小鼠在心肌梗死后，梗死灶大小、心肌梗死后纤维化、左室功能障碍均有显著降低。这些发现提示了NLRP3炎症小体可能在心肌缺血再灌注损伤的病理生理学中发挥重要作用。随着对不同心肌损伤模型中NLRP3炎症小体研究的深入，Sandanger等人 [ 7 ] 发现，在冠状动脉结扎后的缺血性心肌中，NLRP3炎症小体在心肌成纤维细胞中可以显著升高(p < 0.05)。在NLRP3 −/− 小鼠中，缺血再灌注引起的心肌功能障碍和损伤均得到相应的改善，而在ASC −/− 小鼠中没有得到体现，说明NLRP3和ASC在缺血再灌注心肌损伤中可能发挥不同的作用。Inoue等人 [ 37 ] 也发现，在NLRP3 −/− 小鼠中，肝缺血再灌注引起的肝损伤得到相应的改善，而在ASC −/− 小鼠中没有得到体现。这些结果都说明，炎症小体的组成成分如NLRP3和ASC都可以发挥独立的作用。因此，进一步确定NLRP3和ASC的生理功能，可更好地了解疾病的进展，为治疗心肌梗死提供新的策略。
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user: 4. 未来展望 NLRP3炎症小体在高血压、动脉粥样硬化和心肌梗死等心血管疾病的发生发展中发挥着重要作用。NLRP3是炎性小体形成和免疫应答启动的关键参与者。在感染、受伤等期间，NLRP3和IL-1β的活化可以调节DAMPs和PAMPs。了解NLRP3蛋白蛋白体组装和活化的分子机制，可为心血管疾病的安全治疗提供新的靶点。综上所述，NLRP3炎性小体在心血管疾病中靶向治疗具有良好的前景，进一步阐明NLRP在心血管疾病中的确切作用可以使治疗方法得到优化。
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user: 摘 要 目的：研究不同的应激形式对小鼠新颖物体识别记忆的影响。方法：将小鼠随机分成对照组，束缚应激组以及强迫游泳应激组，应激结束后30 min，3组小鼠进行新颖物体识别测试。结果：束缚应激组辨别指数显著低于对照组(p < 0.05)，强迫游泳应激组辨别指数与对照组无显著性差异，各组小鼠总探索时间、活动度均无显著性差异。结论：急性束缚应激损伤小鼠新颖物体识别记忆，而强迫游泳应激对新颖物体识别记忆没有影响。 关键词 :应激，记忆障碍，新颖物体识别 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 应激广泛参与机体多种生理功能 [ 1 ]。其中适度的应激对多种生理功能具有促进作用，然而慢性应激和急性应激可损害机体功能，其中包括学习记忆 [ 2 ] [ 3 ]。随着社会压力越来越大，应激性记忆障碍发病率逐年升高 [ 4 ]。然而不同的应激形式对记忆的不同阶段影响不尽相同。 新颖物体识别记忆是一种广泛应用的啮齿类记忆范式，它利用啮齿类对新物体的偏好性测试其学习记忆 [ 5 ]，并且对动物几乎不产生应激作用。当前研究基于新颖物体识别范式，旨在探索强迫游泳应激和急性束缚应激对记忆提取的影响。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验动物及分组 健康ICR雄性小鼠(由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，体重30~35 g)先进行一周的适应性饲养，控制室温在(23 ± 1)℃，湿度(50 ± 5)%，12小时光照昼夜循环(上午8:00开灯)，实验在10:00~17:00进行，小鼠可自由摄食饮水，实验前3天实验者每天抚摸小鼠5分钟。所有实验程序均遵循美国国立卫生研究院的《实验室动物的护理和使用指南》。 实验将小鼠随机分为对照组，急性束缚应激组和强迫游泳应激组，每组10只，在NOR采样阶段结束后24 h进行测试阶段，在测试阶段前30 min，急性束缚应激组小鼠束缚60 min，强迫游泳应激组自由游泳10 min。在采样阶段，观察并记录小鼠对两物体的总探索时间；在测试阶段，观察并记录小鼠分别对新旧物体的探索时间，并计算出总探索时间和辨别指数；观察并记录小鼠在两阶段的活动度(见图1)。 图1. 实验流程图 2.2. 新颖物体识别实验(Novel Object Recognition NOR) 实验在黑色木方盒子(30 cm × 30 cm × 50 cm)中进行。实验由三个阶段组成：习惯化阶段、熟悉阶段和测试阶段 [ 6 ]。在习惯化阶段，让小鼠在空旷的实验箱中自由探索10分钟，以适应环境；24小时后进行熟悉阶段的实验，两个相同的物体(A+A)被放置在实验箱内对称的位置，距离墙壁8厘米，将小鼠在距两物体等距离处放入盒子中，任其自由探索5分钟；24小时后进行测试实验，一个物体不变，另一个熟悉的物体被替换成一个新颖的(A+B)，将小鼠再次在距两物体等距离处放入盒子中，自由探索5分钟 [ 7 ]。每只小鼠测试结束后，箱内四壁、底面和物体均用75%的酒精擦拭，避免留下气味影响下一只小鼠。记录小鼠对熟悉物体的探索时间(F)和对新物体的探索时间(N)，计算辨别指数(discrimination index， DI) [ D I = ( N − F ) / ( N + F ) × 100 % ] [ 8 ]。探索定义为小鼠鼻子近距离指向物体，鼻子与该物体距离≤1厘米。 2.3. 急性应激程序 1) 急性束缚应激(acute restraint stress ARS)装置为50 ml的塑料管，管身分散小孔，用于通气，小鼠在塑料管内被限制自由活动，但不会造成躯体伤害。于实验前束缚1小时，束缚期间禁食禁水直至应激完成。 2) 强迫游泳应激(forced swimming stress FSS)装置是一个高25 cm，直径20 cm的透明玻璃圆桶，水深22 cm，水温维持在(22 ± 1℃)，将桶放置于隔音箱内。实验前将小鼠放入桶内，自由游泳10分钟。 2.4. 统计学分析 数据采用单因素方差分析(one-way ANOVA)方法和T检验进行统计分析(sigma stat 3.5)，所有结果均以均数 ± 标准误(mean ± SEM)表示，P ≤ 0.05时有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 三组小鼠具有相同的探索水平 在新颖物体识别采样阶段(图2(A))，One-way ANOVA分析表明，三组小鼠对两物体总探索时间没有显著性差异(F = 0.453， P > 0.05)。同时，One-way ANOVA分析表明，三组小鼠的活动度没有显著性差异(F = 0.128， P > 0.05) (图2(B))。上述结果表明三组小鼠具有相同的探索水平。 图2. 各组小鼠采样阶段探索水平相同 3.2. 急性束缚应激损害小鼠的新颖物体识别记忆 在新颖物体测试阶段(图3(C))，One-way ANOVA分析表明，急性束缚应激组小鼠的辨别指数显著低于对照组(F = 3.548， P < 0.05)，强迫游泳组小鼠的辨别指数与对照组无显著性差异(P > 0.05)。同时，One-way ANOVA分析表明，，三组小鼠对两物体总探索时间没有显著性差异(F = 0.621， P > 0.05) (图3(A))，三组小鼠的活动度没有显著性差异(F = 0.121， P > 0.05) (图3(B))。上述结果表明，强迫游泳应激对小鼠新颖物体识别记忆没有影响，急性束缚应激损伤小鼠新颖物体识别记忆而对活动度没有影响。 图3. 各组小鼠在新颖物体识别测试阶段的影响
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user: 4. 讨论 当前研究表明，急性束缚应激可导致小鼠的新颖物体识别记忆障碍，为了排除非特异性因素的影响，测试了小鼠的活动度和总探索时间，与之前的研究一致，应激不影响小鼠的活动水平和探索水平。 应激对学习记忆具有复杂的作用，这种作用呈一种倒U型关系。之前结果表明应激提高小鼠的记忆，如短暂低压低氧性应激可导致幼年大鼠Morris水迷宫测试中的记忆增加 [ 9 ]，此外，慢性复合应激处理也导致大鼠Morris水迷宫和Y迷宫测试中记忆提高 [ 10 ]。相反的是，部分研究结果表明慢性不可预测的间歇性束缚应激可导致雄性小鼠的空间记忆降低 [ 11 ]，此外，足底电击应激处理也导致大鼠新颖物体测试中记忆降低 [ 12 ]。与此一致的，当前研究表明，1 h急性束缚应激显著损害小鼠新颖物体识别测试中记忆提取。进一步支持了急性应激对小鼠记忆的损害作用。应激对记忆影响的双向性可能与应激的形式、时间、小鼠的品系、实验的范式有关。 考虑到活动度可能对小鼠学习记忆的影响，我们检测了采样和测试阶段小鼠的活动水平。结果显示，小鼠在采样阶段具有相同的活动水平，这排除了活动水平对小鼠的采样阶段小鼠“获得”的影响。此外，实验检测了应激后小鼠测试阶段的活动度。结果显示，1 h急性束缚应激不影响小鼠的活动水平。与此一致的是慢性束缚应激也不影响小鼠的活动度。然而，之前研究表明应激可降低小鼠的活动水平，如慢性轻度不可预知性应激可导致小鼠的活动度降低 [ 13 ]，此外，急性创伤应激处理也导致小鼠旷场测试中活动度降低 [ 14 ]。应激对活动度的影响是复杂的。当前造成这种不同的原因可能是应激的形式、时间、小鼠的品系、实验的范式等。考虑到总探索时间可能对小鼠学习记忆的影响，我们检测了采样和测试阶段小鼠的总探索时间。结果显示，小鼠在采样阶段的总探索时间没有显著性差异，这排除了探索水平对小鼠的采样阶段小鼠“获得”的影响。此外，实验检测了应激后小鼠测试阶段的总探索时间。结果显示，1 h急性束缚应激不影响小鼠的探索水平。 急性束缚应激导致的学习记忆障碍不是通过影响小鼠的活动水平和探索水平，其机制可能与降低PKA信号活性有关，可通过激活PKA受体 [ 15 ] 来治疗应激诱导的学习记忆障碍。在中枢系统中，AMPA受体是离子型的谷氨酸受体 [ 16 ]，而调控AMPA受体的跨膜转运可能诱导LTP [ 17 ]。AMPA受体跨膜运转与其磷酸化位点有关，谷氨酸的亚基GluA1第845位丝氨酸(Ser-845)磷酸化是AMPA受体胞吐到突触外膜的关键。GluA1亚基Ser-845的磷酸化是靠蛋白激酶A (proteinkinase A， PKA)催化的 [ 18 ]，而应激可能导致PKA信号活性降低，从而导致AMPA受体的磷酸化降低，膜表达降低，并导致学习记忆障碍。 然而，本研究尚缺乏生化指标的证据，在将来的研究中，我们将检测记忆相关蛋白以明确应激诱导记忆提取障碍的机制。
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user: 摘 要 以江西省赣州市为主要研究对象，本文主要根据2012~2016年江西省统计年鉴数据、运用生态足迹模型对当地生态安全进行定量研究，评价赣州市的生态安全情况，以分析该市可持续发展潜力。结果表明：赣州市2012~2016年间人均生态足迹和人均生态承载力变化整体呈现上升趋势，人均生态足迹从2012年的0.997 hm 2 增加到2016年的1.188 hm 2 。2012~2016年间赣州市一直处于生态赤字状态，生态压力指数均大于0.8，处于不安全状态，该市2012年生态情况表现为较不安全，2013~2016年期间更是处于极不安全状态。表明该市生态压力较大，经济发展处于不可持续状态，自然生态与社会经济发展的协调性有所下降，结合赣州市的实际情况，提出了相应的建议与措施。 关键词 :赣州市，生态安全，生态足迹，生态承载力，生态赤字 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/