DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 操作3D云打印机命令的传输 多个用户通过Internet访问云端平台提供的3D打印服务，向Web服务器发送请求，3D打印机接入Internet平台，主要依靠操作命令在网络上的流转实现。以用户发送打印机驱动命令为例，打印机驱动命令在Internet上的流转如图1所示。 图中实线箭头表示驱动命令在公网上的流转方向，虚线表示打印机返回给用户信息的流转方向。 Step 01用户通过Web浏览器向服务器发送打印机驱动命令，按照HTTP协议传输，将打印机驱动命令封装成易于传输的指令数据； Step 02 Web服务器接收驱动命令，并将指令数据集存储在临时资源池中，利用Web服务器缓存机制，可以存储命令； Step 03经测试知道服务器端的临时资源池并不能持续安全的存储数据，有可能出现打印命令还没有执行的情况下命令丢失，这样会造成用户对模型操作命令丢失情况，为了避免这种情况的发生我们利用异步存储的机制将用户对模型的编辑指令数据集存储在数据库服务器的数据表中，防止临时资源池中的数据丢失； Step 04待工作站上的守护进程，捕获到Web服务器端的驱动命令，Web服务器通过HTTP协议将指令数据集发送给工作站。 图1. 3D云打印机驱动命令在Internet上的流转图 这里不采用服务器向工作站发送请求的方式，而是工作站上的守护进程 [ 2 ] 不断请求服务器，是因为与3D打印机直接相连接的工作站很可能没有可供外网访问的对外IP地址，更可能由于NAT和两端主机所在的防火墙等原因而无法从Web服务器向客户端直接建立TCP连接来传输数据 [ 3 ] ，因此，所设计的协议应当采用由客户端向Web服务器建立连接的方式来进行通信，此时，Web服务器同时充当了TCP服务器，由于HTTP协议也以TCP协议为传输层协议，Web服务所用的80端口在服务器上也必然打开；因而，一种可行的替代方案(也是最终实现时所采用的方案)是，以HTTP请求来代替建立TCP连接，以HTTP为基础协议来传输需要封装的字节流数据； Step 05工作站接收Web服务器发送的指令数据集，按照HTTP协议格式解析指令(HTTP协议格式在第3章详细介绍)，按照控制指令模拟人员操作UP软件，执行相应的操作； Step 06操作命令若为打印命令，则由UP软件调用与打印机的接口，执行打印命令。 按照虚线箭头的方向，工作站端通过获取UP软件底部状态栏信息，将打印信息按照协议封装，经过网络传输发送给Web服务器，服务器将打印信息保存在数据库服务器上的数据表中，待用户查询打印状态时，将任务打印状态信息显示在Web浏览器上，供用户查看。 若用户执行的是编辑命令，则通过将UP软件界面置顶，然后截屏的方式，将执行结果以图片的形式，传输至Web浏览器端呈现给用户。
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user: 3. 3D打印机接入Internet平台的实现 由3D打印机驱动命令在Internet上的流转图可知，打印命令应该以一种安全且高速的方式在网络平台上传输。为了保证客户端与服务器的快速交互，我们采用HTTP协议传输操作指令，同时我们还需要考虑数据的安全性。我们采用虚拟工作站协议(Virtual Workstation Protocol，VWP)传输操作指令，用HTTP协议代替TCP协议作为传输协议，既保证了指令传输的高效性同时保证了数据的安全性。由于服务器端的内存保护机制，操作命令在服务器临时资源池中并不能存储很长时间，为了防止操作命令丢失，采用数据库服务器的备份方式保证用户操作不会丢失。 3.1. 操作3D打印机命令的Web化 为了快速传输3D打印机的驱动命令，我们采用HTTP协议封装的打印命令。同时考虑到3D打印编辑操作的有限性和操作参数的有限性，因此，命令的传输以HTTP协议进行传输的，HTTP消息有客户端到服务器的请求和服务器到客户端的响应组成。对打印机的控制也是由客户端发起，建立连接，等待服务器响应，返回客户端Web页面信息。由于HTTP协议支持客户/服务器模式，客户向服务器请求服务时，只需传送请求方法和路径。命令的传输采用post方法，可以传输任意类型的数据对象，正在传输的类型由Content-Type加以标记。HTTP协议的传输比较灵活，只需要客户端与服务器两端以统一的格式进行封装与解析即可 [ 4 ] 。 对于操作命令的封装需要按照一定的格式，HTTP协议的格式如下： HTTP协议封装之后，传输数据正文格式为：format = X & type = X & parameters = X..。format表示传输数据类型，type表示执行操作类型，parameters表示参数值。Format和type可以用短整型传输参数，不同的数字代表不同的操作类型。以用户发送一次将模型扩大3倍的命令为例，由于缩放存在参数类型为负数的情况，且缩放比例有上限和下限要求，所以参数类型应该为有符号短整型数据，即取format = 3；缩放视图对应的操序号为5，因此type = 5；放大3倍，则parameters = +3。封装之后传输数据格式应该为：format = 3 & type = 5 & parameters = +3。 由于不同的用户会发送不同的命令，服务器会同时接受到很多命令，为了区分用户发送的命令，我们可以再传送一个uid参数，将用户id作为唯一标识符区分不同用户的发送的命令。 3.2. 操作3D云打印机命令的解析 每次工作站客户端向Web服务器进行请求之后，收到的响应内容都是如上格式定义的。3D打印机在执行操作命令之前必须在工作站端对操作指令解析。工作站客户端程序请求Web服务器，有HttpWebResponse的对象GetResponseStream()方法获取Web服务器响应的数据信息流，初始化StreamReader对象，使用StreamReader对象的ReadLine()方法获取服务器端响应命令数据，从而完成命令数据的接收。 工作站端接收到操作命令之后，需要按照协议格式进行解析 [ 5 ] ，Encoding.UTF8.GetBytes()方法获取传输数据正文，解析得到format，type，parameters对应的参数值。此时，获取的数据类型不是string类型，需使用toString()方法将参数转换为string类型，然后用switch语句匹配数值，执行相应的操作命令。首先获取format的值，匹配得到参数值类型，初始化存放参数值的形式参数。其次获取type的值，得到操作类型。最后获取参数值。模拟人员操作UP软件。以传输模型放大三倍的操作命令为例，操作命令在网络间以二进制流的形式传输，工作站端接收以后，按照固定的HTTP协议格式解析，分别得出format值为3，即传输数据类型为有符号短整型数据；type值为5，即操作方式是缩放模型；parameters的值为+3，即缩放倍数为+3，即为将模型放大3倍。 操作命令经过解析之后，获取到用户要执行的操作，然后向3D打印机控制软件(UP软件)发送控制命令，执行模型编辑操作。如何模拟人员操作UP软件，是本平台要解决的另一个难点。工作站上的UP软件并不存在实际的键盘，我们采用最直接的模拟方法就是：直接伪造一个键盘消息发给目标程序 [ 6 ] 。Windows提供了可以直接向目标程序发送消息的API函数，SendMessage()函数。 具体实现方式是，先用FindWindowEx这类API函数找到UP程序的句柄，再向它发送键盘消息。将操作命令发送到UP软件对应的控件，UP软件执行相应的操作。例如UP软件接收到将模型放大三倍的命令，则将数值+3赋值给UP软件对应的缩放控件，模拟人员执行操作。UP执行完模型放大操作之后，将执行结果以图片的形式经过HTTP协议封装，发送给Web服务器，服务器再返回给Web浏览器。 3.3. 操作3D打印机命令的存储 3D打印模型会用于工业、医疗等行业，对模型打印的精准性有很高的要求，因此，必须准确安全的保存用户的操作和选择。但是由于服务器端的内存保护机制，操作命令在服务器临时资源池中并不能存储很长时间，为了防止操作命令丢失，采用数据库服务器的备份进行恢复最初的状态。 3.3.1. 请求命令的存储 操作命令交互表： userId存储发送命令用户的Id，userIP存储用户发送该命令的当前IP地址，workIP存储接收操作命令的工作站的IP，dataList存储操作命令，new字段存储当前命令是否执行。 用户向服务器发出操作3D打印机命令请求，服务器接收后会在命令交互表中添加新的数据，包括发送请求用户的Id，发送请求用户的当前IP地址，操作命令，是否执行(初始为1，表示未执行)等信息。服务器检查命令交互表相应条目的new值，判断当前的命令是否已发送至工作站，然后修改new字段的值为0 (已执行)。Web服务器端通过判断workIP值是否为空，确定是否已分配编辑模型的权限。获取权限后，用户发送各种编辑命令，保存到命令交互表中相应userId对应的dataList字段中，同时修改new字段的值为1 (未执行)，并把数据存储到数据库相应表中，以防止数据的丢失。 3.3.2. 打印状态的存储 状态交互表： userId存储发送打印命令的用户id，userIP存储用户发送打印命令时的IP地址，workIP存储执行打印命令的工作站的IP地址，dataList存储打印状态，new表示当前打印状态是否被用户查看过。 工作站端会把打印任务当前的状态，以合理的间隔发送到服务器端，服务器端通过检索状态交互表，修改相应条目的dataList值，同时修改new值为1 (未取)，然后把数据保存到数据库。 当用户通过Web浏览器发送状态查看请求时，服务器根据用户userId字段检索状态交互表，将new字段值为1的dataList数据发送至浏览器端。
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user: 4. 操作3D云打印机命令故障处理 为了保证用户能够正常通过Internet操作3D打印机，我们做了必要的故障预处理工作。操作打印机命令发出后有可能出现异常，客户端与服务器之间网络中断、服务器故障、工作站故障等原因导致控制命令无法被执行。为了保证用户打印命令发出后能够正常被执行，我们做了以下工作： 客户端无法与服务器连接的情况下，用户的编辑命令或者打印命令无法被服务器接收，这种情况下的解决办法只有等待网络恢复之后，再执行编辑操作或者打印操作； 用户打印命令发出后，打印命令会存放在服务器上的临时资源池，同时利用异步存储 [ 7 ] 的方式存放在数据库服务器的上的操作命令交互表中，当服务器故障导致静态数据丢失时，可以通过数据库恢复数据； 由于用户打印过程中，打印进度同时是存储在Web服务器端的打印机状态交互表中，所以在工作站故障的情况下，打印状态保存在数据库服务器上，待工作站恢复工作之后，可以从数据库中找回打印状态，继续执行打印操作。
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user: 5. 结论 3D服务平台的打印命令开始由用户通过Web浏览器发送，将用户操作封装成为一种易于网络传输的格式，经过Web服务器传送至工作站，工作站接收到操作命令之后按照协议格式进行解析，然后模拟人员操作UP软件，执行操作命令。工作站利用UP软件连接打印设备，执行打印命令。Web浏览器与Web服务器之间通过网络进行命令的传送；工作站与打印设备之间命令的流转依靠UP软件作为打印机的驱程；而Web服务器与工作站之间命令的流转，则依靠在工作站的守护进程。工作站的实现保证了整个3D服务平台命令流转的畅通。
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user: 摘 要 目的：探讨晨峰血压与心脏事件发生的关系，对心脏事件的早期诊治提供依据。方法：选取2013年1月~2015年1月于我院心内科住院治疗的心脏事件患者72例作为实验组(心脏事件组)；其他疾病患者74例作为对照组(非心脏事件组)。给予动态血压监测，测定其24 h平均收缩压(24 hSBP)、白昼平均收缩压(dSBP)、24 h平均脉压(24 hPP)、夜间平均收缩压(nSBP)、白昼平均舒张压(dDBP)夜间平均舒张(nDBP)和24 h平均舒张压(24 hDBP)。记录每个受检者是否吸烟、肥胖及A型性格。结果：24 hSBP、dSBP、24 hPP、nSBP差异有统计学意义(P < 0.05)。dDBP、nDBP、24 hDBP差异无统计学意义(P > 0.05)；实验组晨峰血压较对照组明显增高，差异有统计学意义(P < 0.05)。采用多因素logistic回归分析得出晨峰血压增高是心脏事件发生的独立危险因子。结论：晨峰血压对心脏事件的发生有重要影响作用。 关键词 :晨峰血压，心脏事件
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user: 1. 引言 心脏事件是危害我国人民生命的一大疾病，并且患病人数在逐年上升。血压的变异是影响心脏事件的一个重要原因，尤其在清晨，血压会发生较大波动。晨峰血压(morning blood pressure surge)增高已被证实是心血管疾病发生的独立危险因素[ 1 ] [ 2 ] ，本研究旨在讨论晨峰血压增高与心脏事件发生的关系，为心脏事件的的防治提供依据。
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user: 2. 资料与方法 2.1. 一般资料与分组 选取2013年1月~2015年1月于我院心内科住院治疗的心脏事件患者(包括不稳定性心绞痛、急性心肌梗死、恶性心律失常)72例作为实验组(心脏事件组)；于我院心内科住院治疗的其他疾病患者74例作为对照组(非心脏事件组)。平均年龄为62.5 ± 10.5岁，其中男性94例，女性52例。 2.2. 入组筛选 每位患者入组记录其姓名、性别、年龄、身高、体重等一般指标，签署试验知情同意书以及IRB伦理许可和知情同意书。 2.2.1. 入选标准 由我院心内科诊断为不稳定性心绞痛、急性心肌梗死、恶性心律失常或者由这些疾病引起的心力衰竭。 2.2.2. 排除标准 年龄<18岁；患有肺心病、脑卒中、风湿性心脏病、主动脉瓣关闭不全、心肌病、右束支传导阻滞、起搏器安置术后、动脉导管未闭、动静脉瘘、糖尿病、脑梗死、血脂异常、甲状腺功能亢进、重度贫血及严重肝肾功能障碍等疾患者。
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user: 3. 研究与统计学方法 3.1. 研究方法 动态血压监测 采用我国谷山丰公司的动态血压ABPM6100监测仪给予所有入选者进行24小时动态血压监测。监测时间为清晨8:00~8:30到次日清晨8:00~8:30，认真填写监测日志，次日清晨摘取血压仪后再服用降压药，并标注服用降压药时间。以清晨与睡眠血压差值为晨峰血压值(MBPS值)。MBPS值 = 测量的患者清晨清醒后的收缩压数值的平均值-测量到的睡眠状态下最低的收缩压数值的平均值。此值大于25 mm Hg即被视为晨峰血压增高。 3.2. 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计分析，呈正态分布的资料均以均数±标准差的形式表示，结果采用两样本的t检验，采用多因素logistic回归分析来研究晨峰血压与心脏事件之间的关系。若资料不呈正态分布，数据用中位数、25%位数、75%位数来表示，结果采用非参数秩和检验，变量间用Spearman相关分析来表示其相关性，相关系数用r表示。
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user: 4. 结果 由表1得出：动态血压监测结果实验组(心脏事件组)与对照组(非心脏事件组)有明显差异，其中24hSBP、24hPP、dSBP、nSBP差异更明显。P < 0.05，差异有统计学意义。由表2得出实验组(心脏事件组)较对照组(非心脏事件组)患者晨峰血压升高。P < 0.05，差异有统计学意义。由表3得出晨峰血压增高是心脏事件发生的独立危险因素。 Table 1 Comparison in 24-hour ambulatory blood pressure for two groups (x ± s 动态血压指标 实验组 对照组 心脏事件组(mm Hg) 非心脏事件组(mm Hg) t值 P值 24 h SBP 148.8 ± 11.3 143.2 ± 14.9 8.501 0.001 24 h DBP 83.3 ± 8.9 80.4 ± 5.8 1.897 0.085 24 h PP 70.9 ± 6.1 54.9 ± 8. 1 6.898 dSBP 160.5 ± 12.9 149.6 ± 10.1 5.582 0.028 nSBP 139.4 ± 9.6 131.2 ± 11.4 6.963 0.039 dD BP 87.6 ± 6.9 85.9 ± 6.8 2.015 0.127 nD BP 76.9 ± 6.8 77.8 ± 8.19 0.952 0.391 表1. 两组患者动态血压24时比较(x ± s) Table 2 Comparison in MBPS for two group 参数 实验组 对照组 心脏事件组(例、百分比) 非心脏事件组(例、百分比) t值 P值 晨峰血压增高 56 78 15 20 5.253 0.005 晨峰血压正常 16 22 59 80 6.775 0.001 表2. 两组患者是否晨峰血压增高者比较 Table 3 Multiple factor logistic regressive analysis on risk factors for patients with cardiac event 自变量 β SE Wald χ 2 值 P值 OR值 95%CI 吸烟 0.764 0.398 0.801 0.135 0.520 (0.480， 1.271) A型性格 1.615 0.726 0.025 0.080 0.659 (0.706， 1.721) 肥胖 1.705 0.823 4.377 0.141 0.484 (0.283， 1.115) 晨峰血压增高 0.103 0.052 5.935 0.023 1.235 (1.023， 1.513) 表3. 多元逐步logistic回归探讨心脏事件发生的独立危险因子(以几种常见危险因素为自变量，以是否发生心脏事件为因变量)
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user: 5. 讨论 人的血压有昼夜差异现象[ 3 ] 。夜间处于休息状态的机体由较低的血压即可维持。然而当机体从休息转为活动的时候，血压会突然上升，可能与交感神经系统[ 4 ] 、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统[ 5 ] 的激活有关。机体从休息到清醒状态可能会瞬间激活交感神经系统，使机体出现心肌收缩力增强、心率加快、心排血量增加，继而血压上升。清晨肾素、血管紧张素、醛固酮等物质也分泌增加，这些物质可以通过水钠潴留、血容量扩增以及促使机体释放儿茶酚胺等物质等途径使血压急剧上升。心脏事件好发于清晨可能与晨峰血压关系密切。 国内外大量实验研究证实血压晨峰是增加心血管事件发生的重要因素，Li [ 6 ] 等用大量数据研究结果显示明显的晨峰血压现象是心血管事件(如心肌梗死)发生的重要危险因素。目前血压的测量非常方便、迅速，患者也可自行操作。及早发现晨峰血压增高对防治心脏事件有重大作用，可以阻止一些心脏事件的发生以及带来的靶器官损害[ 7 ] ，如肾脏方面，晨峰血压与微量蛋白尿关系密切[ 8 ] 、晨峰血压增高可能导致左心室肥大以及心室重塑[ 9 ] 。其发生心脏事件的原理可能是晨峰血压可以导致动脉粥样硬化[ 10 ] 从而引起各类心脏事件的发生以及发展。本研究立足探讨晨峰血压与心脏事件的关系，使人们更加关注晨峰血压，从而达到对心脏事件防治的目的。 然而，在研究晨峰血压中也有一些不足。目前只知道晨峰血压增高与心脏事件的关系，而没有一个量化的指标，到底增高多少应该怎么采取干预措施，这还是接下来的研究要点。且计算晨峰血压的方法众多，哪一个方法最优也是未知。有研究显示，在正常的非高血压人群中晨峰血压对于预测心脏事件的发生也是一个很关键的因素[ 11 ] ，故今后的研究依然任重而道远。
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user: 摘 要 目的：研究多西紫杉醇和卡铂联用对骨肉瘤细胞MG-63的增殖抑制作用，寻找新的骨肉瘤临床治疗方案。方法：采用MTT法细胞毒性试验，测定多西紫杉醇及卡铂对MG-63细胞株的抑制率并计算其IC50值，根据所测得的IC50值，分别用IC50多西紫杉醇、IC50卡铂、1/2 IC50多西紫杉醇 + 1/2 IC50卡铂作用于MG-63细胞株24 h、48 h、72 h，比较三组药物处理方法对MG-63细胞株的抑制率。结果：根据相应实验结果制作生长曲线通过公式IC50 = lg − 1[Xm − i(ΣP − 0.5)]求得两药的IC50值分别为0.25 mg/ml和4.00 mg/ml。分别用0.25 mg/ml多西紫杉醇、4 mg/ml卡铂、0.125 mg/ml多西紫杉醇+2 mg/ml卡铂与骨肉瘤细胞株MG-63作用24 h时，其细胞毒性指数(CI)分别为：38.6%、48.7%和60.0%，3组比较差异有统计学意义(P < 0.05)；作用48 h时，其细胞毒性指数(CI)分别为：44.3%、49.2%、73.0%，3组比较差异有统计学意义(P < 0.05)；作用72 h时，其细胞毒性指数(CI)分别为59.3%、58.6%、79.9%，多西紫杉醇组于卡铂组比较差异无统计学意义(P > 0.05)，联用组与另外两组比较差异均由统计学意义(P < 0.05)。结论：半量多西紫杉醇、卡铂联合应用比单独应用多西紫杉醇或卡铂对骨肉瘤细胞株的细胞毒性作用更强。 关键词 :骨肉瘤细胞，多西紫杉醇，卡铂，细胞毒性作用
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user: 1. 引言 骨肉瘤属于常见的恶性骨肿瘤之一，好发于青少年的长骨干骺端，尤以股骨下段和胫骨上段多见。在上世纪70年代以前，骨肉瘤的治疗仍是以外科治疗为主，其术后5年存活率不足20% [ 1 ] 。Rossen教授于1976年提出新辅助化疗概念是骨肉瘤治疗史上的重要突破，而其在1982年将新辅助化疗的概念进一步完善，提出“术前化疗-手术-术后化疗”的新思路，使得骨肉瘤5年生存率由原来的不足20%上升至60%~70% [ 2 ] 。多西紫杉醇是一种新型广谱抗肿瘤药物，它属于紫杉类化合物，其在细胞内浓度要比紫杉醇高3倍且在细胞内滞留时间较紫杉醇更长[ 3 ] 。卡铂是骨肉瘤化疗的经典药物之一，其可作为顺铂的替代用药。二者单独应用于恶性肿瘤的疗效以得到肯定，但是由于卡铂作为二代铂类抗肿瘤药，其骨髓抑制的毒副作用抑制是限制其应用于临床的一大障碍，而对于两者联用是否能通过减少剂量而减轻二者的毒副作用，增加其对骨肉瘤细胞毒性作用的研究较少，本实验旨在探索多西紫杉醇于卡铂联用，其对骨肉瘤细胞的毒性作用，以期为以后的临床应用提供理论基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料于设备 人成骨肉瘤细胞系MG-63，购自协和医科大学细胞中心；多西紫杉醇，购自江苏恒瑞医药；卡铂，购自齐鲁制药。DMEM培养基及胎牛血清均购自GIBCO公司。DMSO及胰蛋白酶均由包头医学院第一附属医院中心实验室提供；其他材料：MTT、DMSO、96孔板及其他耗材均由包头医学院第一附属医院中心实验室提供。 2.2. 方法 1) 细胞培养：将细胞培养与含10%胎牛血清的DMEM培养基中(含青霉素80 U/ml、链霉素100 μg/ml)，在温度为37℃、CO 2 体积分数为5%的细胞培养箱内闭式传代培养。取传代后第2天的处于对数生长期的骨肉瘤细胞备用。2) 细胞处理一：将密度为1 × 10 5 U/ml的细胞悬液接种在96孔板上，每孔加100 μl细胞悬液，并在每孔加入浓度梯度为0，0.01 mg/ml，0.1 mg/ml，1 mg/ml的多西紫杉醇及卡铂，每孔设5个复孔。再将96孔板置入细胞培养箱继续培养48 H。3) MTT法：培养48 H后，向每孔加入MTT液20 μl，继续培养4 H，弃上清，再加入DMSO 150 μl，震荡摇匀，使结晶完全溶解，用全自动酶标仪(波长540 nm)测定其每孔的吸光度值(A值)，并通过测得的A值计算其细胞毒性指数(CI)。CI = (对照组A值 − 实验组A值)/对照组A值 × 100%。根据上述结果制作不同浓度的多西紫杉醇及卡铂作用于骨肉瘤细胞MG-63 48H的细胞毒性指数对药物浓度的生长曲线图。并根据曲线图求出多西紫杉醇及卡铂对骨肉瘤细胞MG-63的半数抑制浓度(IC50)。4) 细胞处理二：根据所得两药对MG-63的IC50，分设单多西紫杉醇组，即IC50浓度的多西紫杉醇，单卡铂组，即IC50浓度的卡铂，联用组，即1/2 IC50浓度的多西紫杉醇+1/2 IC50浓度的卡铂，分别加入铺满MG-63细胞悬液的96孔板里，每孔设5个复孔。分别培养24 H、48 H和72 H后，用MTT法测其A值，并计算其CI值，重复3次。 2.3. 统计学处理 应用SPSS 13.0软件，将所得数据以均数±标准差表示，组间比较采用One Way Anova的方法。
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user: 3. 结果 1) 不同浓度的多西紫杉醇与骨肉瘤细胞株MG-63作用48H后，其A值、CI值和生长曲线，见表1、图1。 根据图1的生长曲线所示，并用公式IC50 = lg − 1[Xm − i(ΣP − 0.5)]可求得多西紫杉醇对骨肉瘤细胞MG-63的IC50为：0.25 mg/ml。 Table 1 The A value and CI of different concentration docetaxel for osteosarcoma cell line for 48 多西紫杉醇(mg/ml) A值 CI值(%) 对照组 0.792 ± 0.025 - 0.01 0.519 ± 0.013 34.4% 0.1 0.456 ± 0.023 42.4% 1 0.326 ± 0.091 58.8% 表1. 不同浓度多西紫杉醇与骨肉瘤细胞株作用48 h后的A值及CI 注：各组间比较P < 0.05，差异有统计学意义。 2) 不同浓度的卡铂与骨肉瘤细胞株MG-63作用48 h后，其A值、CI值和生长曲线，见表2、图2。 Table 2 The A value and CI of different concentration carboplatin for osteosarcoma cell line for 48 卡铂(mg/ml) A值 CI值(%) 对照组 0.792 ± 0.025 - 0.01 0.591 ± 0.016 25.3% 0.1 0.510 ± 0.023 35.6% 1 0.451 ± 0.091 43.1% 表2. 不同浓度卡铂与骨肉瘤细胞株作用48 h后的A值及CI 注：各组间比较P < 0.05，差异有统计学意义。 图1. 骨肉瘤细胞MG-63与不同浓度多西紫杉醇作用48 h后的生长曲线(IC50为0.25 mg/ml) 图2. 骨肉瘤细胞MG-63与不同浓度多西紫杉醇作用48 h后的生长曲线(IC50为4.0 mg/ml) 根据图2的生长曲线所示，并用公式IC50 = lg − 1[Xm − i(ΣP − 0.5)]可求得卡铂对骨肉瘤细胞MG-63的IC50为：4.14 mg/ml。 3) IC50多西紫杉醇、IC50卡铂、1/2 IC50多西紫杉醇 + 1/2 IC50卡铂分别于骨肉瘤细胞株MG-63作用24 H、48 H、72 H后的A值及CI值见表3~5。 将表3~5中各项对应数据进行统计分析得出：0.25 mg/ml多西紫杉醇组各数据之间比较，P < 0.05差异有统计学意义；4 mg/ml卡铂组各数据之间比较，24 H组合48 H组P > 0.05差异无统计学意义，其余各组P < 0.05差异有统计学意义；联用组各组数据之间比较，P < 0.05，差异有统计学意义。 Table 3 The A value and CI of IC50 docetaxel IC50 carboplatin and 1/2 IC50 docetaxel + 1/2 IC50 carboplatin for osteosarcoma cell line for 24 多西紫杉醇(mg/ml) 卡铂(mg/ml) A值 CI 0 0 0.815 ± 0.010 0.25 0 0.500 ± 0.024 38.6% 0 4.0 0.418 ± 0.052 48.7% 0.125 2.0 0.326 ± 0.012 60.0% 表3. IC50多西紫杉醇、IC50卡铂、1/2 IC50多西紫杉醇 + 1/2 IC50卡铂与骨肉瘤细胞株MG-63作用24 H后的A值及CI值 注：各组比较P < 0.05，差异有统计学意义。 Table 4 The A value and CI of IC50 docetaxel IC50 carboplatin and 1/2 IC50 docetaxel + 1/2 IC50 carboplatin for osteosarcoma cell line for 48 多西紫杉醇(mg/ml) 卡铂(mg/ml) A值 CI 0 0 0.792 ± 0.025 0.25 0 0.441 ± 0.014 44.3% 0 4.0 0.402 ± 0.005 49.2% 0.125 2 0.210 ± 0.011 73% 表4. IC50多西紫杉醇、IC50卡铂、1/2 IC50多西紫杉醇 + 1/2 IC50卡铂与骨肉瘤细胞株MG-63作用48 h后的A值及CI值 注：各组比较P < 0.05，差异有统计学意义。 Table 5 The A value and CI of IC50 docetaxel IC50 carboplatin and 1/2 IC50 docetaxel + 1/2 IC50 carboplatin for osteosarcoma cell line for 72 多西紫杉醇(mg/ml) 卡铂(mg/ml) A值 CI 0 0 0.802 ± 0.017 0.25 0 0.326 ± 0.009 59.3% 0 4.0 0.332 ± 0.018 58.6% 0.125 2.0 0.161 ± 0.050 79.9% 表5. IC50多西紫杉醇、IC50卡铂、1/2 IC50多西紫杉醇 + 1/2 IC50卡铂与骨肉瘤细胞株MG-63作用72 h后的A值及CI值 注：0.25 mg/ml多西组与4.0 mg/ml卡铂组比较P > 0.05差异无统计学意义，其余各组比较P < 0.05，差异有统计学意义。
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user: 4. 讨论 近年来由于各种因素的影响，骨肉瘤的发病率呈逐年上升态势，而针对骨肉瘤又没有一个具有明确疗效且对人体伤害较小的治疗方案，所以目前针对骨肉瘤的治疗逐渐受到广大医务工作者的高度关注和重视。目前以铂族化合物为主导的恶性肿瘤化疗方案，被广泛的应用于骨肉瘤的新辅助化疗方案中。而铂类药物的毒副作用较为严重，使其在临床的应用受到限制。卡铂作为第二代铂类抗肿瘤药物，因其消化系统副反应及肾毒性较轻，目前是被临床广泛接受的铂类制剂，其疗效也在近年来得到了肯定。但同时也有大量的文献报道卡铂容易引起骨髓抑制，所以如何控制卡铂的用量及尽量减轻其毒副作用，同时保证其对骨肉瘤细胞的有效的细胞毒性一直是临床和实验研究的热点。 多西紫杉醇是一种新型抗肿瘤药物，是以紫杉树中化学物质为基础而合成出来的一种药物，药物作用机制与紫杉醇类似，即抑制微管(microtubules)的解聚，从而使游离的微管数量显著减少，抑制纺锤体向两极分离，阻滞细胞G2和M期，从而抑制肿瘤细胞的有丝分裂和增殖[ 4 ] 以达到抑制肿瘤细胞增殖的。其在细胞内浓度比紫杉醇高3倍，并且多西紫杉醇在细胞内的滞留时间更长。因其抗癌谱较广，且临床疗效较好，目前多西紫杉醇已用于多种恶性肿瘤的临床治疗。而目前将多西紫杉醇单独应用于骨肉瘤的研究已有报道，其抗肿瘤活性也已得到充分的肯定。 尽管目前两种药物单独应用于骨肉瘤治疗的研究较多，且二者的联用，现已用于多种恶性肿瘤的联合治疗中[ 5 ] [ 6 ] 。但是，单独大剂量应用单一药物较容易引起骨肉瘤的多药耐药，关于二者联合应用于骨肉瘤的临床和基础研究目前较少。 本实验细胞处理一采用MTT法，对多西紫杉醇和卡铂对骨肉瘤细胞的细胞毒性进行研究，其结果表明，两药物单用组均较对照组细胞凋亡率高，这说明了两药物单用于骨肉瘤细胞MG-63时，其疗效是肯定的；而多西紫杉醇及卡铂在单独应用于骨肉瘤细胞时，随着浓度的增加，其抗肿瘤活性也逐渐增加，说明两药物单用于骨肉瘤细胞MG-63时其具有浓度依赖性。根据生长曲线，多西紫杉醇及卡铂的IC50分别是：0.25 mg/ml和4.14 mg/ml。这个数据说明多西紫杉醇的抗肿瘤活性药远高于卡铂，约需17倍左右浓度的卡铂才与多西紫杉醇的抗肿瘤活性相当。 而细胞处理二，其根据处理一所得的多西紫杉醇及卡铂的IC50值，构建新的单用及联合应用组，并同样用MTT法检测各组的A值，进而对各组之间对骨肉瘤细胞的细胞毒性进行研究。其结果表明，当处理时间一致时联用组均较各单用组的细胞毒性更强(P < 0.05)，而随着处理时间增加，联用组对骨肉瘤细胞的细胞毒性也相应增加(P < 0.05)。本结果说明，两药联用组对骨肉瘤细胞的细胞毒性均较两药单用组更强，且其细胞毒性随时间增加而更强，说明两药物联用存在时间依赖性。 综上所述，本实验通过对体外人成骨肉瘤细胞MG-63进行研究，说明了多西紫杉醇联合卡铂应用于骨肉瘤细胞MG-63时，其细胞毒性较两药单用更强。但由于本实验为体外细胞实验，无法很好的模拟体内环境，不能准确的反应药物–人体–肿瘤的复杂关系。只是从体外实验的角度证明了联用的可行性，为今后的临床应用或实验研究提供实验依据，但进一步的结果上需要更加深入的研究。
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user: 摘 要 扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy， DCM)是一种严重危害人们身体健康和生活质量的疾病，其发病隐匿，进展缓慢，初期临床症状不明显，早期诊断较为困难!患者一旦出现明显的临床症状，病情往往已进入不可逆阶段。因此，寻找出一种有效的早期诊断方法，以及尽早建立起一级预防机制显得极其重要!通过研究和探讨与扩张型心肌病相关的肌联蛋白(titin)及RNA结合蛋白20 (RBM20)，探讨其突变序列位点，早期干预，能够为扩张型心肌病患者的早期诊断提供重要的依据，具有广阔的应用前景。 关键词 :扩张型心肌病，肌联蛋白，RNA结合蛋白20，基因突变
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user: 1. 引言 心肌疾病是指除心脏瓣膜病、高血压性心脏病、冠状动脉性心脏病、先天性心脏病、肺源性心脏病、甲亢性心脏病外的以心肌病变为主要表现的一组疾病。分为原发性心肌病和继发性心肌病。扩张型心肌病(Dilated cardiomyopathy， DCM)属于原发性心肌病，指单侧或者双侧心腔扩大和心肌收缩期功能受损的特发性心肌疾病(Idiopathic cardiomyopathy， IDC)，常伴有心力衰竭、恶性心律失常和猝死，占所有心肌病的60% [ 1 ] ，其病因多种多样，可以是特发性的、免疫性、病毒感染、家族或遗传性、酒精性或中毒性、围生期等。根据2006年3月美国心脏病协会(American Heart Association， AHA)提出的心肌病的新的定义和分类[ 2 ] ，将DCM归类为混合型心肌病，也就是说DCM致病基因的表型表达会受到遗传因素、环境因素的影响。家族性扩张心肌病(Familial Dilated Cardiomyopathy， FDCM)约占DCM的35%~48%。根据2007年中华医学会心血管病学分会及中国心肌病诊断与治疗建议工作组发布的《中国心肌病诊断与治疗建议》提供的诊断标准：1) 临床常用左心室舒张，期末内径(LVEDd) > 5.0 cm(女性)或 > 5.5 cm (男性)；2) 左室射血分数(LVEF) < 45%或心室缩短速率(FS)<25%；3)更为科学的是左室舒张末径(LVEDd) > 2.7 cm/m 2 ，体表面积 = 0.0061 × 身高(cm) + 0.0128 × 体重(kg) − 0.1529，更为保守的评价LVEDd大于年龄和体表面积预测值的117%，即预测值的2倍SD + 5% [ 3 ] 。在所有心肌疾病中，扩张型心肌病对心功能的影响最大，且患者预后差，5~10年年生存率仅为30%~40% [ 4 ] 。因此，进行扩张型心肌病发病机制的研究显得尤其的重要和必要。
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user: 2. DCM的临床，病理与治疗 2.1. DCM的临床表现及辅助检查 心力衰竭，心律失常，栓塞，猝死为主要表现，一般发病缓慢，早期无任何症状，随病情发展，可分为三个阶段：第一阶段为无症状期，体检心脏可正常或稍大或饱满，心电图正常或非特异性ST-T改变，表现为ST段水平降低，T波倒置、低平或向下；异位搏动和异位心律，有频繁、多型、多源的室性期前收缩，并可发展成室性动过速；传导障碍，表现为房室传导阻滞(第I~III度)，室内束支及分支阻滞；心室肥厚。DCM出现心律失常以房性为超声心动图可无明显异常，心造影也可显示心脏扩大与室壁运动异常，左室射血分数(LVEF)减少。第二阶段为心功能失代偿期，表现为劳力性心悸气短，疲乏无力，胸闷憋气，休息后好转，LVEF为30%~40%，左室舒张末经为6.0 cm以上，第三阶段为本病严重期，表现为右心功能不全，LVEF为20%左右，心包积液，由于心脏扩大室腔内淤血，心脏内附壁血栓极易形成，尤其合并房颤，意发生血栓脱落，造成新，肾，脑，肺，腹腔及肢体血管的栓塞。 2.2. 病理生理 其主要病理改变是心脏扩大，两侧心室均有明显扩大，心尖部变薄，根据疾病特点，左心室和右心室损害程度不等。以左心室首先受累居多。光镜下，病变心肌以灶性纤维化为主，偶有小块坏死。心肌细胞有不同程度的肥大，萎缩，空泡变性及嗜碱变性，肌细胞间纤维组织增厚，血管及心肌细胞周围有广泛的，大小不等的纤维化病灶和淋巴细胞浸润。电镜下可见肌原纤维含量减少，线粒体增大增多，肌浆网扩张，糖原增多，核增大，核膜折叠、变形。间质增厚有水肿，胶原纤维增多。有学者[ 5 ] 认为扩张性心肌病的发病初始因素是心肌细胞真核基因表达的改变，病毒感染和免疫系统缺陷及功能紊乱首先导致心室壁纤维构架基质细胞的损害，然后逐渐发生心肌细胞的变性，坏死和细胞外间质水肿，最后出现全心扩大。 2.3. 治疗 治疗诱发因素，患者注意休息、戒烟忌酒、限制钠盐的摄入。 2.3.1. 药物治疗 目前尚无特效药物及方法，因而临床上对其治疗的主要目标即在于改善症状、预防并发症和阻止或延缓病情进展、提高生存率，包括抗心力衰竭、抗心律失常及预防血栓栓塞的抗凝治疗等并发症的治疗。心衰是DCM的主要症状，是所有心脏疾患的终末阶段，是并发其他疾病或导致死亡的一个重要原因，基本治疗主要使用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类，利尿剂和地高辛等药物。室性心律失常和猝死是DCM的常见症状，可用β受体阻滞剂，胺碘酮治疗，栓塞是本病的常见并发症，应用阿司匹林，华法林口服可预防。ACEI类及β受体阻滞剂等药物，原则是达到“目标剂量”。“目标剂量”就是患者所能耐受的最大剂量[ 6 ] ，另注重心肌能量代谢药物如曲美他嗪的使用，在临床上的广泛应用，显著的提高了心力衰竭患者的临床预后效果。 2.3.2. 心脏再同步化治疗(Cardiac Resynchronization Therapy， CRT) 2001年Cazeau等[ 7 ] 报道用多位点双腔起搏器治疗严重心衰和心室内传导延缓，CRT有效改善心功能。2004年Komura等[ 8 ] 报道日本DCM多中心研究，认为CRT是治疗IDCM严重心衰的首选途径。综上所述，尽管目前DCM患者的药物治疗已有很大进展，但DCM晚期慢性心力衰竭患者的发病率和病死率仍较高，生活质量和预后均较差，众多研究表明，CRT治疗可改善心力衰竭患者的运动耐量和生活质量，尤其是出现难治性心力衰竭的患者更需要在早期积极选择CRT治疗。我们推荐CRT作为严重心衰患者的常规治疗。 2.3.3. 免疫干预与免疫吸附 自身免疫已被认为是DCM发病学的主要机制之一，DCM患者体内能检测出许多自身抗体，所以针对自身抗体的免疫干预及免疫吸附已经成为治疗DCM的一种新疗法。 2.3.4. 心脏移植及干细胞移植 心脏移植是晚期DCM患者的有效治疗方法之一。据国外资料显示，心脏移植5年存活率约65%，半数死亡时间为9.4年[ 9 ] ，是治疗DCM晚期患者最有效的手段，但在临床实际操作中会遇到很多问题，包括供体来源、经济费用等，不能普遍推广。干细胞移植结合外科减容手术可限制左室扩张，增加室壁厚度，延缓心衰的进程，是一种新的治疗策略[ 10 ] 。 2.3.5. 基因治疗 随着在细胞分子水平上对DCM发病机制认识的深入，基因治疗已成为治疗DCM的一个新的领域。基因治疗是指用正常或野生型基因补充或置换致病基因以产生新的表型的一种治疗和预防疾病的方法，即通过基因转移技术等，使目的基因得到表达，或封闭，剪切致病基因的mRNA，从而达到治疗疾病的目的。近十余年来的分子遗传学研究发现，在DCM家系中采用候选基因筛查和连锁分析策略已定位了26个染色体位点与该病相关[ 11 ] ，并成功鉴定出有20种基因的数十种突变可导致FDCM [ 12 ] ，许多基因编码细胞骨架蛋白(Cytoskeletal protein)和肌小节蛋白(sareomerie protein)。心肌型actin(ACTc)亦是一种肌小节蛋白，依据其编码基因的突变位置不同，收缩力量不同导致运动障碍即可引发DCM [ 13 ] titin (TTN)，metavineulin (VCL)，phospholamban (PLN)，lamina-A/C (LMNA)等也在维持肌小节正常结构和功能，调节肌浆网Ca 2+ ，保持核膜稳定性等方面起重要作用，其发生突变也可导致FDCM [ 14 ] [ 15 ] 。Staudt等[ 16 ] 用电穿孔法将人肝细胞生因子基因导入12只TO-2品系仓鼠DCM模型)的骨骼肌细胞，并设立12只TO-2品系仓鼠作对照，结果发现肝细胞生长因子组血浆肝细胞生长因子水平、左室射血分数、室壁厚度较对照组显著增加，同时具有更小的纤维化比例和更高的毛细血管密度。由此可见，用电穿孔法转移肝细胞生长因子基因改善了心肌功能，减弱了心肌重塑，是一种好的治疗方法。基因治疗DCM主要针对其发病机制中的某些基因缺陷或补充一些有益的基因，是一种新颖、很有前途的治疗方法。
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user: 3.肌联蛋白 3.1. 肌联蛋白的生理结构及特性 3.1.1. 生理结构 肌联蛋白是迄今为止所发现的最大蛋白质，分子量为3000~3700 kDa，肌联蛋白基因在人类定位于染色体2q31，由单基因编码[ 17 ] 。共有363个外显子。38，138个氨基酸残基端。外显子以不同的拼接方式形成不同的亚型[ 18 ] 。肌联蛋白横跨半个肌小节，自Z盘至M线，依次为Z盘连接部、I带区域、A带区域以及M线连接部等节段。与Z盘的连接部分为肌联蛋白的N末端片断，它与Z盘上的Teap蛋白结合[ 19 ] [ 20 ] ，而与M线的连接部分为肌联蛋白的C末端，它与肌球蛋白结合蛋白C相互作用。固定于粗肌丝。 3.1.2. 力学特性 在没有外力的情况下，肌联蛋白处于松弛状态，I带区域内的肌联蛋白分子处于高度折叠状态。随着肌肉受到拉伸，I带区域内的肌联蛋白逐渐伸长，像一个弹簧。产生被动张力。这种延伸变化较为复杂，Ig样结构域先于PVEK区和N2A，N2B序列出现拉伸。然后才是PVEK区和N2A/N2B序列的展开而I带Z盘结合部与A带均不具有延伸性。而当肌节受到压缩，短于松弛状态长度时，粗肌丝会向Z盘方向延伸，肌联蛋白则会产生相反的力量。推动Z盘相互远离。可见肌联蛋白像一个可双向调节的弹簧，使肌小节维持在松弛状态长度。① 在生理情况下，介导被动张力的产生主要是肌联蛋白[ 21 ] 。特别是肌联蛋白I带的3个部分，即Ig样串联重复区域，PEVK区，N2B区均可在牵张时伸展或解折叠，产生被动张力。② 心肌细胞在收缩后的舒张过程中，其长度的恢复不仅仅是由于钙的解离、粗细肌丝的回位，还包括恢复力的作用。心肌细胞收缩时，伴随肌小节的缩短，肌丝重叠的加剧，两端分别连接细肌丝和粗肌丝的肌联蛋白纤维的I带部分反向牵张，产生张力，从而在舒张过程中，协助心脏形状的迅速恢复，有利于心脏的充盈，即心脏收缩过程中可储存一部分能量用于舒张过程[ 22 ] 。Cazofla等[ 23 ] 在对小鼠去膜心肌细胞的研究中发现，在同一肌小节长度下，被动张力增高，肌丝问栅格空间减少，刺激后产生的主动张力增加，力一pCa曲线左移，这就是依赖被动张力的Ca 2+ 敏感性，而肌丝生理长度下被动张力的主要来源为胍联蛋白纤维，因此这种依赖性也即为肌联蛋白产生的被动张力的依赖性。 3.2. 肌联蛋白与心脏舒张功能的关系 肌联蛋白作为心肌的结构蛋白，现已对其在心肌细胞病理状态下的改变，以及此改变对心脏的影响，有一些初步的研究。心肌细胞弹性的恢复力与肌联蛋白密切相关，心室收缩末期，心肌处于受压状态，伴随肌小节的缩短，肌联蛋白的两端分别收到内向的压力，此时I带部分反向强张，产生张力，今儿储存部分势能用于舒张过程，从而协助心室在舒张期迅速恢复形状，有利于心脏的充盈。有实验证实，经胰蛋白酶处理破坏肌联蛋白后的肌小节之后弹性恢复力几乎减少40% [ 24 ] 。研究同时表明，生理状况下，介导被动张力的产生主要是肌联蛋白。早期的电镜和免疫组织学检查发现终晚期扩张性心肌病的心脏中。显示肌联蛋白N2BA亚型的比例增高。且该亚型的分子量还增大[ 25 ] ，这个结果提示扩张性心肌病心脏的被动张力减少，心脏更易发生扩大。Gerull [ 26 ] 等研究发现titin外显子326处有一2bp的插入突变，该突变可能切断TTNA带，导致其结构改变。在另一家系中。发现下TTN的错义突变(TrP930Arg)，该突变可能破坏了位于Z带和I带过渡区的免疫球蛋白高度保守疏水核心序列。在慢性压力过度负荷的豚鼠模型中，心肌肥大代偿阶段，肌联蛋白含量轻度升高，mRNA水平增加；而在后期失代偿阶段，肌联蛋白含量降低18% [ 16 ] 。总之，肌联蛋白的合成减少，破坏增加，加剧了心肌细胞力学性能、超微结构的紊乱，并且使心肌细胞的重建过程失去支架，肌小节无法正常组装。出于肌联蛋白的改变造成的心脏疾病主要体现在一些与遗传有关的心肌病中。肌联蛋白基因已成为家族性心肌病的候选基因之一。
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user: 4. Rbm20 4.1. Rbm20的生理结构及特性 RNA结合结构域主要包括：RNA识别模体(RNA Recognition Motif， RRM)、KH结构域、锌指结构(Zinc finger)、RGG盒、DEAD/DEAH盒、Pumilio/FBF (PUF)、双链RNA结合结构域(double-stranded RNA binding domain)、富含精氨酸模体(Arginine-rich motif)、Piwi/Argonaute/Zwille (PAZ) domain、Smprotein模体等。RNA结合蛋白在转录后的基因调控中有着关键的作用，其功能最近受到越来越多的关注。它主要通过与其IE标RNA相互结合，参与RNA剪接、多聚腺苷化作用、序列编辑、RNA转运、维持RNA的稳定和降解、细胞内定位和翻译控制等RNA代谢的各个方面，从而广泛调控基因表达。 4.2. Rbm20的作用机制 在正常发育或心脏病的不同时期，机体通过翻译后修饰或形成肌联蛋白不同的剪切体，以适应不同的需要。已经发现在心脏发育的不同阶段，RNA结合基元蛋白20 (RBM20)可直接作用于肌联蛋白的基因，形成不同的剪切体。Rbm20能够调节编码titin的转录子的剪切，titin是一个大的肌节蛋白[ 27 ] [ 28 ] ，Rbm20突变和人类扩张性心肌病有关，因为Rbm20在调节肌原纤维结构和功能中有重要作用[ 29 ] [ 30 ] 。肌联蛋白的不同剪切体及译后修饰能直接影响依赖于肌联蛋白的心脏的被动舒张，进而影响回心血量，它通过RNA的调节，影响心脏肌联蛋白不同同工酶的表达。通过对人RBM20的靶基因研究，找出受RBM20调控的基因从而有利于DCM的诊断及治疗。
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user: 5. 诊断价值及治疗，进展 5.1. 诊断价值 DCM是一种慢性疾病，患者通常在出现一定临床症状后才去就医，而通常其病程已经发展到中晚期，治疗效果和预后均较差，随着DCM基因筛查和芯片技术的发展，通过采用突变检测的手段及早发现致病基因携带者并判断其可能的恶性程度，为有效的治疗手段以及风险规避提供重要依据。另外，基因缺陷所致的扩张性心肌病通常会有一定的概率遗传给后代，对于有家族史的患者，可以通过基因筛查的方法来寻找致病基因，这为DCM的早期诊断和有效治疗提供新的理论，方法和研究方向[ 31 ] -[ 33 ] 。应用到临床实践工作中，做到早预防，早诊断，早治疗，早期干预，尤其应用于家族性扩张型心肌病患者群中，可以指导其生活方式方法以降低其发病风险，患病及病后康复，进一步提高其生活治疗，降低死亡率，并可以降低患病儿童出生率，进行遗传咨询，减轻社会家庭经济精神负担压力。 5.2. 治疗 近年来随着心脏病治疗技术的发展，DCM的治疗效果取得了较的进步。治疗手段包括药物治疗、心脏起搏再同步化治疗、左室减容成形术、左心室机械辅助循环及心脏移植治疗等。但DCM总体治疗效果还不够理想，近年有学者在DCM治疗的实验室研究中进行了积极的探索，采用基因治疗的手段治疗DCM大鼠，治疗针对缺陷基因的补充及针对DCM的发病机制和病理生理的改善，在实验中取得了一定效果，评估病情，分析预后，改善生活质量，降低死亡率。 5.2.1. 载体选择 合适的载体使目的基因转移入靶细胞并高效表达是基因治疗的关键之一。 腺病毒(adenovirus， Ad)载体适于心肌细胞的基因转移，它可以感染分裂期和非分裂期细胞，且制备滴度高；可插入大片段的外源性DNA片段；通过基因重组，使改造后的腺病毒只能在特定的包装细胞中才具备复制和扩增能力；不与宿主基因组发生整合，避免了非计划性的基因突变，应用比较安全。缺点是能引起宿主细胞免疫和体液免疫，使腺病毒和外源基因和外源表达产物易被清除。 5.2.2. 基因转移方法 是指将重组的DNA片段导入目的组织的方法，包括冠状动脉腔内转移(如应用导管注入冠状动脉或冠状静脉逆灌注进行转移)和心脏直接注(注射基因载体到心肌、心室腔或心包)使目的基因在心肌表达；注射基因载体到体内其他特定靶细胞和靶器官，在体内表达出所需要的功能蛋白，从而发挥作用。 5.2.3. 靶基因选择 是基因治疗的关键环节。目前认为DCM存在心肌细胞基因异常表达，造成心肌细胞骨架蛋白异常、心肌细胞肥大纤维化及细胞内信号转导系统、Ca 2+ 调节、细胞生长和凋亡调控机制等发生一系列列改变，导致进行性左室、右室或双心腔扩大、左室收缩功能降低。治疗方案可针对一个或多个环节。 5.2.4. 基因治疗在DCM中的具体应用 sarcoglycan基因包括α，β，γ及δ。δ-sarcoglycan是dystrophin相关糖蛋白复合物(DGC)中sarcoglycan亚复合物的组成部分。多项研究表明，δ-sarcoglycan基因与DCM有关。 5.3. 进展 遗传因素在扩张型心肌病发生发展过程中起着重要作用。许多基因的突变通过多个不同的病理生理机制可以引起DCM，预后较差生存率低。虽然通过对有缺陷的基因进行修复或用正常有功能的基因置换或增补缺陷基因，对FDCM患者的基因治疗，取得了一定的成果，但基因转染细胞的效率、基因在细胞中表达的稳定性、在人类体内安全性以及基因转染细胞的增殖分化仍是研究中需重点克服的问题。从基因水平探索扩张型心肌病病因及发病机制，确定一套全面的诊断标准，对患者进行早期的诊断和临床干预，减少基因缺陷或突变带来的不良后果，同时指导特定基因的个体化治疗将成为DCM基因突变研究的重点。随着分子遗传学方法和技术的发展，相信将有更多与DCM有关的基因被发现，具有重要的意义。许多遗传学位点与扩张型心肌病有关，心肌产生力、传递力、细胞核的缺陷均可促发扩张重塑通路，并最终导致心衰。突变基因的检测为扩张型心肌病的诊断与防治开辟了新的途径，这将有利于我们对DCM早期、准确的诊断，并对DCM的基因治疗提供充足的理论依据和更多治疗靶点及方式的选择。随着DCM基因筛查和芯片技术的发展，通过采用突变检测的手段及早发现致病基因携带者并判断其可能的恶性程度，为有效的治疗手段以及风险规避提供重要依据。另外，基因缺陷所致的扩张性心肌病通常会有一定的概率遗传给后代，对于有家族史的患者，可以通过基因筛查的方法来寻找致病基因，并通过选择性生育的方法来降低患儿的出生率，这为DCM的早期诊断和有效治疗提供新的理论方法和研究方向[ 34 ] 。目前的研究已经证实了基因治疗的效果和可行性，随着上述问题的不断解决，从动物实验走向临床试验指日可待，相信在不久的将来DCM的基因治疗将能成功地应用于临床，使DCM患者终生受益。 已经发现在心脏发育的不同阶段，RBM20的异位调节作用，可直接作用于肌联蛋白而影响肌联蛋白的剪切。在国内，有关RBM20突变可能引起心脏肌联蛋白产生不同的剪切体的研究报道较少。通过对DCM及肌联蛋白突变的研究，可能有助于DCM的早期诊断及治疗，尤其可能有助于FDCM的筛查，预防，诊治等临床工作的开展。
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user: 摘 要 本文以基于关键词识别的语音检索技术为基础，结合自适应的相关性过滤模块，构建了优化的侦听系统。对基于语音检索的侦听系统从两方面进行了改进和优化：一是以上下文相关的声韵母作为关键词识别的声学建模基元，二是添加相关性判决模块对与主题无关的语音进行再过滤。实验数据证实，相关性判决模块能以召回率的小部分牺牲换取系统查准率的大幅度提升。 关键词 :聚类分析，相关性判决，关键词识别，语音检索，侦听
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user: 1. 引言 作为一种难于浏览和搜索的媒体类型，语音信息的有效提取工具尚比较少，资源再利用率很低。面对离线语音库存储的海量语音文档，亟需一种方法能快速有效地检索出其中符合需求的语音资源。 语音检索技术的研究可追溯至上世纪60年代，贝尔实验室开发了一个10个数字的英文语音检索系统。随着大词汇量连续语音识别技术的发展，语音检索技术有了长足的进展，不再局限于对离散语音的检索。目前已有的语音检索系统有剑桥大学的Video Mail Retrieval Using Voice，Google公司的Google Voice Local Search等。但相比于成熟的文本文档检索技术，语音检索技术的鲁棒性较差、准确率较低等问题还有待进一步深入研究。
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user: 2. 系统原理和结构 关键词识别技术作为语音识别的一个重要研究方向，其不同于连续语音识别之处在于，它并不试图将输入语流中的每个字词还原出来，而是在语音内容不受限的输入语流中只将使用者感兴趣的词辨认标记出来。由于用户对关键部分的发音通常都是清楚完整的，因此识别语音流中的关键词比识别语音流中的整个句子要容易得多。该项技术适用于只需要了解语音文档的部分关键信息就可解决问题的情景，与语音检索的需求正不谋而合。基于关键词识别的语音检索还可应用于军事安全和公共安全领域，作为情报获取、追踪的重要方法。 对于特殊的语音检索系统，如侦听系统，直接将仅经关键词识别过滤得到的语音文档作为检索结果输出，其中仍包含大量实际上与侦听主题无关的音频。本文针对此设计了优化策略，提出计分公式并结合文本聚类技术应用于关键词识别后的处理，以进一步过滤无关的语音文档，减少人工审听的工作量。 基于语音检索的侦听系统如图1所示。该系统分为关键词识别模块和相关性判决模块，其中关键词识别模块又分为离线训练部分和在线识别部分。 语音识别模块的各项技术相对较成熟。离线训练部分用于获取声学模型和语言模型，包含前端处理、特征计算等模块。前端处理模块用于连续语音做预加重、加窗、分段。特征计算模块用于提取语音帧的时域特征或频域特征。语音识别系统的识别率，很大一部分取决于提取出的特征对语音信号描述的准确性。在线识别部分首先由离线训练部分得到的声学模型、语言模型和即时定义的关键词表共同生成用作解码的搜索空间，再将待识别语音提取的特征输入关键词识别模块，采用Viterbi帧同步解码算法产生关键词的假想命中。后面的置信度计算模块将根据关键词候选结果和其它知识源计算这些假想命中的关键词的置信度，最终由置信度判决模块决策，给出识别结果。 图1. 系统原理结构图 相关性判决模块为本文根据侦听系统特性而设计。在获取关键词识别结果后，将识别结果(包括关键词流及关键词的时间位置信息)进行打分，这个分数一方面用作提供给监控人员直观了解语音文档的相关性，另一方面用作文本聚类选择簇中心的依据。文档聚类后，将相关簇和无关簇分别输出至判决结果。