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user: 3. 结果与分析 3.1. 福林酚测定没食子酸浓度标准曲线 据步骤2.2.2.得回归方程y = 10.028x − 0.0355，R 2 = 0.99862，表明在0.02~0.12 mg∙mL − 1 的浓度范围内，没食子酸浓度x与吸光度y之间有很好的相关性，如图1所示： 图1. 没食子酸标准曲线 3.2. 单因素实验结果 3.2.1. 超声时间对橄榄多酚提取率的影响 由图2可知，在40 min内，随着超声提取时间的增长，多酚得率逐渐增大，当超声时间延长到40 min以后，多酚得率稍微下降，随着时间增长，得率只有不显著的增长，在实际生产中，40 min的生产效率更高，故选择超声提取时间为40 min。 3.2.2. 温度对橄榄多酚提取率的影响 由图3可知，在40℃到70℃的范围内，水浴温度对多酚得率有一定的影响，且在70℃左右到达最 图2. 超声提取时间对橄榄多酚得率的影响 图3. 水浴温度对橄榄多酚提取率的影响 高点，故使用70℃水浴温度为最佳实验条件。 3.2.3. 乙醇浓度对橄榄多酚提取率的影响 由图4可知，在35%到65%的范围内，多酚得率随着浓度增加，呈先增加而降低的趋势。乙醇浓度对在55%范围内，随着百分数的增加，多酚得率增加，在55%的时候达到最高点，之后缓慢下降，故选择乙醇浓度55%为实验最佳条件。 3.2.4. 料液比对橄榄多酚提取率的影响 由图5可知，在1:20到1:30的范围内，随着乙醇用量的增加，多酚得率增加，到1:30时，多酚得 图4. 乙醇浓度对橄榄多酚得率的影响 图5. 料液比对橄榄多酚得率的影响 率达到最高点，之后有明显下降，故选择1:30为最佳条件 [ 14 ] 。 3.3. 二次回归正交旋转实验优化提取条件 由表2的实验结果，运用spss软件进行方差分析和显著性检测。由表3方差分析可知，模型整体sig值为0.012远小于0.05但接近于0.01，可见模型的显著性一般，其决定系数R 2 = 0.790，说明模型拟合效果一般，实验存在一定的误差率。 由表3可见sig值小于0.05的项，x 1 远小于0.01，为主要影响显著的因素，x 2 和x 3 小于0.05，为显著性一般的因素，故影响因素主效应的顺序为x 1 (超声时间) > x 3 (乙醇浓度) > x 2 (温度) > x 4 (固液比)。从交互项来看，温度和乙醇浓度的交互作用、温度和固液比的交互作用均接近0.2，为交互项中最为显著的两项，可以想到因为温度的提高使乙醇溶液蒸发导致提取液的体积变小，影响到乙醇浓度和固液比两个因素对提取率的作用，所以乙醇浓度和固液比两个因素与其他因素的交互性的显著性较低。特别是体积减小影响最大的固液比显著性最低，导致了整体误差的增大。 显著性低的交互项去掉，使用sas软件拟合方程： y = − 19.75 − 36.99 x 1 + 43.02 x 2 + 32.33 x 3 + 24.24 x 4 + 19.25 x 1 2 − 6.76 x 2 2     − 5.31 x 3 2 − 6.77 x 4 2 − 4.3 x 1 ∗ x 2 − 18.86 x 2 ∗ x 3 − 9.58 x 2 ∗ x 4 (2) 使用matlab软件对乙醇浓度、温度和固液比制作交互图。 Table 2 Design of quadratic regression orthogonal rotation combination experimen 编号 因素 提取率/% 超声时间 温度 乙醇浓度 料液比 1 1 1 1 1 9.864 2 1 1 1 −1 9.941 3 1 1 −1 1 9.345 4 1 1 −1 −1 9.455 5 1 −1 1 1 11.011 6 1 −1 1 −1 10.789 7 1 −1 −1 1 10.741 8 1 −1 −1 −1 9.841 9 −1 1 1 1 10.113 10 −1 1 1 −1 9.791 11 −1 1 −1 1 10.218 12 −1 1 −1 −1 9.879 13 −1 −1 1 1 11.676 14 −1 −1 1 −1 10.938 15 −1 −1 −1 1 10.762 16 −1 −1 −1 −1 9.542 17 −2 0 0 0 13.859 18 2 0 0 0 10.643 19 0 −2 0 0 11.047 20 0 2 0 0 10.508 21 0 0 −2 0 10.059 22 0 0 2 0 9.311 23 0 0 0 −2 10.107 24 0 0 0 2 10.580 25 0 0 0 0 9.252 26 0 0 0 0 9.296 27 0 0 0 0 10.912 28 0 0 0 0 10.568 29 0 0 0 0 11.421 30 0 0 0 0 11.076 31 0 0 0 0 10.553 32 0 0 0 0 10.628 33 0 0 0 0 11.241 34 0 0 0 0 10.688 35 0 0 0 0 10.897 36 0 0 0 0 10.344 表2. 二次回归正交旋转组合实验设计表 Table 3 Analysis of variance and significance tes 源 平方和 df 均方 F Sig. 校正模型 20.641a 19 1.086 3.159 0.012 截距 768.641 1 768.641 2235.056 0.000 超声时间 10.232 3 3.411 9.917 0.001 温度 3.018 3 1.006 2.925 0.046 乙醇浓度 2.809 3 0.936 2.722 0.049 固液比 0.992 3 0.331 0.961 0.435 超声时间 * 温度 0.046 1 0.046 0.134 0.719 超声时间 * 乙醇浓度 0.001 1 0.001 0.002 0.965 超声时间 * 固液比 0.177 1 0.177 0.515 0.483 温度 * 乙醇浓度 0.461 1 0.461 1.341 0.264 温度 * 固液比 0.424 1 0.424 1.234 0.283 乙醇浓度 * 固液比 0.082 1 0.082 0.238 0.632 误差 5.502 16 0.344 R 2 = 0.790 表3. 方差分析与显著性检测 图6. 提取温度和乙醇浓度交互图 图7. 提取温度和固液比交互图 由图6~图8可知，当响应面的坡度趋向平滑时，说明响应值受各个变量的影响较小；当响应面趋向倾斜时，则说明响应面受变量交互作用较为明显。通过比较图6~图8比较可知，温度、乙醇浓度和固液比这三个因素之间交互关系一般 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] 。 通过回归拟合方程分析出橄榄多酚最佳工艺参数为：超声时间37.3 min、水浴温度46.36℃、乙醇浓度为43.24%，固液比为1:32.5。考虑操作方便，修正最佳工艺为：超声时间37 min、水浴温度46℃、乙醇浓度为43%，固液比为1:32，在此条件下平行验证三次，实验结果为13.87%、13.92%、13.97%，平均值接近13.92%。 3.4. 红外吸收光谱 从图9的光谱图中可以看到，在3409.19 cm −1 波长处，有一个较强的吸收峰，可能是由于-OH的伸缩振动造成；而在2975~2850 cm −1 处弱的吸收峰为C-H的伸缩振动。在1034.14 cm −1 处为C-H 3 的弯曲振 图8. 乙醇浓度和固液比交互图 图9. 橄榄多酚的傅里叶红外光谱图 图10. 橄榄多酚、Vc、BHA对DPPH自由基的消除率对比图 动。在1450.77 cm −1 处为C-H的弯曲振动。在1332.3 cm −1 处为O-H的弯曲振动。可以得知，提取物成分存在酚类物质 [ 19 ] 。 3.5. 橄榄多酚抗氧化测定结果与分析 由图10中可知，在实验范围内，橄榄多酚的对DPPH清除能力处于Vc和BHA之间，不同浓度的橄榄多酚溶液对DPPH的清除率随浓度升高而增加。在低浓度范围内，清除率和质量浓度有明显的正相关性，随着浓度升高，消除率趋于平缓，逐渐趋近于96%。虽然橄榄多酚对DPPH自由基的消除率相对于Vc略低，但是它在高浓度时仍有效果，当质量浓度为0.1 mg∙m −1 L时，VC的消除率为98%，橄榄多酚的消除率大约为96.7%，BHA的消除率为94.7%，橄榄多酚的消除率介于这两种食品添加剂之间，可见橄榄多酚对DPPH消除效果显著 [ 20 ] 。