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user: 3. 结果与分析 3.1. 洋葱表皮细胞自发荧光的观察 植物组织中不发光的组织较难寻找，本研究以常用的荧光标记实验材料洋葱表皮细胞为参考植物组织，来对比研究小麦幼苗的自发荧光。从图1~图2可知，将黄皮洋葱的内表皮(图1)和外表皮(图2)分别进行红色、绿色、蓝色荧光的观察，三种颜色的荧光均未在黄皮洋葱内出现，但撕取表皮时粘连的极少量洋葱鳞叶组织细胞会呈现蓝色荧光或绿色荧光，很少见红色荧光，外表皮粘连的非表皮细胞多于内表皮。 紫皮洋葱的内(图3)、外表皮(图4)也不显蓝、绿、红三种自发荧光，而紫皮洋葱自身的紫色色素在荧光显微镜下呈现红色(图4(C))，对红色荧光检测会有一定的干扰。外表皮比内表皮紫色色素更多。 3.2. 不同光照下小麦根、叶鞘和叶片红色的自发荧光 3.2.1. 不同光照下小麦幼苗根组织的红色荧光 在500 nm波长的激发光照射下，光照培养条件下小麦的幼根在第1 d、第4 d、以及6 d~10 d具有较弱的红色荧光(如图5(A)、图5(D)、图5(F)~图5(I))；光照培养下小麦的根在第10 d以后红色荧光不稳定，第19 d~31 d可见较弱的红色荧光。 从图6可知，黑暗培养下小麦的根在第16 d (图6(J))出现红色荧光，荧光一直持续到第31 d观察结束，说明黑暗条件下小麦是可以产生微弱的红色荧光的。且光照和黑暗不同条件培养会引起小麦根内可发光物质含量的区别。黑暗处理下幼苗在发芽期幼苗根内几乎不会有红色荧光。 图1. 黄色洋葱内表皮荧光图像。注：A为紫外激发光照射，用于检测蓝光；B为蓝色激发光照射，用于检测绿光；C为绿色激发光照射，用于检测红光 图2. 黄色洋葱外表皮荧光图像。注：A为紫外激发光照射，用于检测蓝光；B为蓝色激发光照射，用于检测绿光；C为绿色激发光照射，用于检测红光 图3. 紫色洋葱内表皮荧光图像。注：A为紫外激发光照射，用于检测蓝光；B为蓝色激发光照射，用于检测绿光；C为绿色激发光照射，用于检测红光 图4. 紫色洋葱外表皮荧光图像。注：A为紫外激发光照射，用于检测蓝光；B为蓝色激发光照射，用于检测绿光；C为绿色激发光照射，用于检测红光 图5. 光照培养下小麦根的红色荧光观察。注：图(A)~(O)依次是第1、2、3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d的红色荧光观察 图6. 黑暗培养下小麦根的红色荧光观察。注：图(A)~(O)依次是第1、2、3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d的红色荧光观察 3.2.2. 不同光照下小麦幼苗叶片组织的红色荧光 从图7可知，光照培养下小麦的叶片除了第1 d~2 d荧光较弱外，其它时间均表现出了强烈的红色荧光，荧光一直持续到第31 d观察结束，与小麦叶片一直保持绿色趋势相符。从图8可知，黑暗条件下叶片呈黄色，荧光观察可以见到微弱的红色荧光，强度远小于光照下。 图7. 光照培养下小麦叶片的红色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28 d的小麦叶片红色荧光现象 图8. 黑暗培养下小麦叶片的荧光观察。注：图(A)~(H)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16 d的小麦叶片红色荧光现象 3.2.3. 不同光照下小麦幼苗叶鞘组织的红色荧光 从图9可知，光照培养下小麦的叶鞘除了第3 d~6 d荧光较弱外，其它时间均表现出了较强的红色荧光，荧光一直持续到第28 d停止观察，与小麦叶鞘的绿色变化趋势相符。从图10可知，黑暗条件下幼苗黄化，从第3 d~28 d均无红色荧光现象。 图9. 光照培养下小麦的芽鞘的红色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28 d的红色荧光观察 3.3. 不同光照下小麦根、叶片、叶鞘绿色自发荧光的分析 3.3.1. 不同光照下小麦幼苗根组织的绿色荧光 采用450 nm波长的激发光对小麦的根、叶片、叶鞘组织进行照射，从图11、图12可知，光照条件下的小麦根在第1 d以及6~10 d (图11(A)、图11(F)、图11(G)、图11(H))可见绿色荧光；黑暗下，根在16 d起出现绿色荧光(图12(J))，绿色荧光持续天数较多，说明黑暗处理并不能抑制根组织的绿色荧光。 图10. 黑暗培养下小麦芽鞘的红色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28 d的红色荧光观察 图11. 光照培养下小麦幼根的绿色荧光观察。注：图(A)~(O)依次是第1、2、3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d根组织的绿色荧光 图12. 黑暗培养下小麦幼根的绿色荧光观察。注：图(A)~(O)依次是第1、2、3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d根组织的绿色荧光观察 3.3.2. 不同光照下小麦幼苗叶片、叶鞘组织的绿色荧光 由于叶片、叶鞘有大量的叶绿素，因此光照下的小麦叶鞘难观察到绿色荧光，前期红色荧光能掩盖其他荧光(图13)，但到后期叶鞘变浅变硬后可以观察到，表现为光照条件下22 d以后绿色荧光越来越明显。黑暗培养时(图14)，前期叶鞘的绿色荧光几乎观察不到，但都后期可见绿色荧光，荧光强度不及对应的光照条件下的，荧光较弱。 图13. 光照培养下小麦叶鞘的绿色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d的绿色荧光 图14. 黑暗培养下小麦叶鞘的绿色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28、31 d的绿色荧光 叶片组织在光照培养下红色荧光完全盖过绿色荧光(图15)，除第1 d~2 d红色较弱外，其他时间所有叶片均有强烈的红色荧光。黑暗条件下(图16)，整个苗期所取的时间点叶片均能够看到微弱的绿色荧光。 图15. 光照培养下小麦叶片的绿色荧光观察。注：图(A)~(L)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28 d的绿色荧光观察，但所有材料荧光均被红色掩盖 图16. 黑暗培养下小麦叶片的绿色荧光观察。图(A)~(L)依次是第3、4、5、6、7、10、13、16、19、22、25、28 d的绿色荧光观察 3.4. 小麦幼苗不同时期根、叶鞘、叶片蓝色自发荧光的分析 采用400 nm波长激发光对小麦的根、叶片和叶鞘组织进行照射，小麦组织发出的荧光为浅蓝色，荧光越强，蓝色越亮。从图17~图22可见，无论是从培养1 d到培养31 d任何时期、根组织(图17、图18)、叶组织(图19、图20)、叶鞘组织(图21、图22)都显示较强的蓝色荧光，黑暗培养和见光培养，均能检测到明显的蓝色荧光。尤其是叶片表皮毛蓝色更明显，说明小麦是否有蓝色自发荧光不受光照的影响，在幼苗不同的发育时期、不同器官会有荧光强弱的差异。 黑暗条件下2~6 d幼嫩的根荧光略微弱一些，叶鞘(图21、图22)也有相似的趋势，在萌发初期荧光略微弱一点，到后期蓝色荧光较强。从图19、图20可知，叶片组织的蓝色荧光不及叶鞘组织亮，叶片的表皮毛蓝色荧光很鲜明，无论见光还是黑暗培养荧光现象相似。 图17. 光照培养下小麦根组织蓝色荧光。注：图(A)~(G)为培养1~7 d，图(H)、(I)、(J)、(K)、(L)、(M)、(N)、(O)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 图18. 黑暗培养下的小麦根组织蓝色荧光。注：图(A)~(G)为培养1~7 d，图(H)、(I)、(J)、(K)、(L)、(M)、(N)、(O)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 图19. 光照培养下小麦叶组织蓝色荧光。注：图(A)~(G)为培养1~7 d，图(H)、(I)、(J)、(K)、(L)、(M)、(N)、(O)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 变化趋势最鲜明的是叶鞘组织(图9、图10)，随着植株生长天数的增加，蓝色荧光越来越强，这与叶鞘的硬度变化趋势是相似的。无论黑暗还是光照条件下，都有随着生长天数增加蓝色荧光变强的趋势。 图20. 黑暗培养下小麦叶组织蓝色荧光。注：图(A)~(G)为培养1~7 d，图(H)、(I)、(J)、(K)、(L)、(M)、(N)、(O)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 图21. 光照培养下小麦叶鞘组织蓝色荧光。注：图(A)~(D)为培养4~7天，图(E)、(F)、(G)、(H)、(I)、(J)、(K)、(L)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 3.5. 白化幼苗的三种荧光变化 经过卡那霉素处理后，叶片变为白色，称之为白化，从图23可以看出，与正常叶片对比，白化幼苗的红色荧光消失了(图23(B))，绿色荧光也消失了，正常叶片因为红色荧光太强，也观察不到绿色荧光(图23(C))，只有红色荧光，两种叶片只有蓝色荧光是同时显现的(图23(D))，其中正常叶片观察蓝色荧光时还可以看到红色荧光没有散去的底色。 图22. 黑暗培养下小麦叶鞘组织蓝色荧光。注：图(A)~(G)为培养1~7 d，图(H)、(I)、(J)、(K)、(L)、(M)、(N)、(O)依次是第10、13、16、19、22、25、28、31 d取样的组织 图23. 小麦幼苗正常叶片和白化叶片的三种自发荧光的观察。注：(A) 为白光下，(B) 为绿激发光观察红色、(C) 为蓝激发光观察绿色、(D) 为紫外激发光观察蓝色。每张图片分上下两部分，上半部分为绿色叶片，下半部分为白化叶片