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user: 3. 结果与分析 3.1. 愈伤组织的诱导 3.1.1. 植物生长素对愈伤组织的诱导 将叶片接种到愈伤组织诱导培养基后，7 d内就会产生愈伤组织。表1显示，6-BA是诱导红景天叶片产生愈伤组织的关键植物生长调节剂，培养基中添加6-BA，可顺利诱导叶片出愈。随着6-BA浓度的升高，叶片出愈率随之升高，但愈伤组织的质地变得松散。浓度2.0 mg/L的6-BA能诱导85.59% ± 3.1%的叶片产生瘤状愈伤组织，3.0 mg/L的6-BA虽然也能诱导愈伤组织大量产生，但愈伤组织质地疏松，瘤状结构稀少，再生能力差。添加NAA、2，4-D后发现，浓度0.2 mg/L的NAA和0.1 mg/L的2，4-D对红景天叶片形成愈伤有促进作用。2.0 mg/L 6-BA与0.2 mg/L的NAA及0.1 mg/L 2，4-D的组合对诱导红景天叶片产生瘤状愈伤组织的效果最佳，诱导率高达95.96% ± 2.3%。 Table 1 Effect of plant growth regulators (PGRs) on callus induction from leaf of Rhodiola; The different letters in the same column mean the significant difference (P ≤ 0.05) by Duncan’s LSD Test. The same belo 激素浓度/mg∙L −1 Concentration of PGRs (mg∙L −1 ) 出愈率/% Callus induction rate(r/%) 愈伤组织形态 Morphology of callus 6-BA NAA 2，4-D 1.0 0 0 60.05 ± 4.0 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0 0 85.59 ± 3.1 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0 0 90.35 ± 4.2 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.1 0 61.42 ± 3.8 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0.2 0 88.22 ± 2.9 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0.4 0 92.63 ± 4.1 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0 0.1 65.86 ± 1.5 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0 0.05 86.11 ± 2.2 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0 0.2 94.33 ± 1.8 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.1 0.05 68.75 ± 1.4 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0.2 0.1 95.96 ± 2.3 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0.4 0.2 95.14 ± 2.8 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.4 0.1 69.58 ± 1.5 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0.2 0.2 93.56 ± 2.1 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0.1 0.05 95.09 ± 2.0 a 疏松，瘤状结构少 表1. 植物生长调节剂对红景天叶片愈伤组织诱导的影响；表中不同字母表示邓肯氏最小显著差数测验差异显著(P ≤ 0.05)。其它表同 3.1.2. 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 用叶片、茎、根3种外植体分别在筛选后的培养基上进行愈伤组织诱导，发现在最佳愈伤组织诱导培养基上，3种材料的出愈率差异不显著(表2)。因此，多组合的愈伤组织诱导培养基可以很好缓冲不同外植体差异的影响，稳定诱导愈伤组织。 Table 2 Effect of different explant tissues on callus induction from Rhodiol 外植体 Explants 激素浓度/mg∙L −1 Concentration of PGRs (mg∙L −1 ) 出愈率/% Callus induction rate (r/%) 6-BA NAA 2，4-D 叶片 2.0 0.2 0 88.22 ± 2.9 a 2.0 0.2 0.1 95.96 ± 2.3 a 2.0 0.2 0.2 93.56 ± 2.1 a 茎 2.0 0.2 0 89.47 ± 2.6 a 2.0 0.2 0.1 96.71 ± 2.2 a 2.0 0.2 0.2 91.85 ± 2.8 a 根 2.0 0.2 0 86.77 ± 3.0 a 2.0 0.2 0.1 93.44 ± 2.7 a 2.0 0.2 0.2 91.03 ± 2.4 a 表2. 外植体对红景天愈伤组织诱导的影响 3.1.3. 光周期对愈伤组织诱导的影响 外植体分别进行光培养与暗培养15 d，观察发现光培养与暗培养均能诱导愈伤组织形成。暗培养产生的愈伤组织出现早，平均4 d就能观察到愈伤产生，且体积大、质地松散、无法分化，须在光下培养10 d，并转绿后才能恢复分化能力。光培养条件下，至少5 d后才有愈伤组织生成，但愈伤组织颜色墨绿，质地紧密，瘤状结构明显；30 d后愈伤组织则需要继代培养。 3.1.4. 继代次数对愈伤组织及红景天苷含量的影响 多次继代培养会使愈伤组织的结构和颜色发生明显变化。随着继代次数的增加，愈伤组织逐渐失绿褐化，增殖能力下降，质地变得松散，瘤状结构消失；同时红景天苷含量在前3代基本稳定，且随继代数的增加有上升趋势，但到第4代开始，红景天苷含量明显下降(表3)。结果表明，继代次数过多不仅影响愈伤组织生长，使其增殖能力下降，同时也影响红景天苷的积累。 Table 3 Effect of subculture times on callus growth and salidroside contents of Rhodiol 继代次数 Subculture times 愈伤组织形态 Morphology of callus 红景天苷含量 Salidroside contents 1 绿白色，瘤状结构丰富 0.667% ± 2.9 a 2 绿白色，瘤状结构丰富 0.685% ± 2.5 a 3 绿白色，较少瘤状结构 0.697% ± 2.8 b 4 黄绿色，较少瘤状结构 0.503% ± 2.6 b 5 黄褐色，松散 0.331% ± 2.2 a 表3. 继代次数对愈伤组织生长和红景天苷含量的影响 3.2. 甲基茉莉酸处理天数对愈伤组织生长及红景天苷积累的影响 愈伤组织在培养10 d后，加入25 mg/L的MeJA，分别处理0，4，8，12 d后发现，加入MeJA 0~4 d 时，愈伤组织的干物重基本稳定。在培养的第4 d，愈伤组织中红景天苷含量达最大值(表4)。同时随着培养时间继续增加，干物重及红景天苷的含量和产量也开始大幅度下降。因此，在愈伤组织培养第10 d加入Me-JA处理4 d为最佳处理天数。 Table 4 Effect of MeJA treatment days on callus biomass and accumulation of salidroside in Rhodiola (n =10 处理天数(d) Treatment days 干物重(g) DryWeight 红景天苷产量(mg) Salidroside yield 红景天苷含量(mg/g) Salidroside contents 0 1.40 9.59 6.85 ± 2.5 a 4 1.42 40.82 28.75 ± 3.2 b 8 1.26 11.55 9.17 ± 3.5 b 12 1.00 6.59 6.59 ± 2.8 a 表4. 甲基茉莉酸处理天数对红景天愈伤组织生长和红景天苷积累的影响(n = 10) 3.3. 甲基茉莉酸浓度对愈伤组织生长和红景天苷积累的影响 在培养10 d后添加不同浓度的MeJA 发现，随着MeJA浓度升高，愈伤组织干物重不断下降。相反在0~100 mg/L时，红景天苷的含量和生产量在逐渐增加，当MeJA的浓度为100 mg/L时，达到最大值(表5)。因此，本试验选择MeJA浓度为25 mg/L作为愈伤组织生长生产和红景天苷含量的最适浓度。 Table 5 Effect of the concentration of MeJA on callus biomass and accumulation of salidroside in Rhodiola (n = 10 甲基茉莉酸浓度(mg/L) Concentration of MeJA 干物重(g) DryWeight 红景天苷产量(mg) Salidroside yield 红景天苷含量(mg/g) Salidroside contents 0 1.40 9.59 6.85 ± 2.5 a 5 1.35 13.09 9.69 ± 3.0 b 25 1.33 30.41 22.86 ± 2.8 b 50 1.19 32.57 27.37 ± 3.1 b 100 1.03 33.15 32.18 ± 2.9 a 表5. 甲基茉莉酸浓度对红景天愈伤组织生长和红景天苷积累的影响(n = 10)