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user: 3. 结果与分析 3.1. 10%次氯酸钠溶液消毒叶片效果 由表3可知，消毒时长0~5 min范围内，叶片外植体污染率逐渐下降，消毒时长达5 min时，污染率达到最小值90.66%，存活率达到最高值7.44%；消毒时长5~7.5 min范围内，污染率则显著升高，达到96.51%，存活率下降至3.49%。分析结果可知，10%次氯酸钠作为山竹叶片消毒剂，其污染率达90%以上，存活率最高为7.44%左右，以10%次氯酸钠溶液作为外植体消毒剂效果不理想。 3.2. 75%酒精消毒叶片效果 由表4可知，酒精消毒时间在30~90 s内，叶片污染率呈逐渐下降的趋势，存活率呈逐渐上升的趋势。消毒时间在30~90 s内，三个处理间的污染率和存活率变化不显著。不同处理间污染率仍高达近90%，与10%次氯酸钠处理效果相近，所以采用单一的酒精消毒效果也不是十分理想。 3.3. 0.1%升汞消毒叶片效果 试验结果表明(见表5)，对于叶片外植体采用0.1%升汞消毒可以达到很好的效果。随着消毒时间的延长，外植体污染率呈逐渐下降的趋势，存活率呈逐渐上升趋势，消毒时长达10 min后，污染率和存活率即达到了稳定状态(10 min和15 min两个处理的污染率、存活率无显著差异)。所以，消毒时长达到10~15 min时，污染率和存活率两指标达到最佳值，污染率29.28%~34.47%，存活率为65.53%~70.72%。采用0.1%升汞对叶片进行消毒，适宜的消毒时长可维持在10~15 min左右。 3.4. 75%酒精消毒茎段效果 由表6可见，当用茎段作为外植体，增大了表面消毒难度。采用75%酒精消毒时长在1 min以内，并不能显著改善外植体污染状况，当消毒时长达90 s污染率才显著降低，但污染率仍高达87.47%；而各个处理间的存活率差异不明显。结果表明，采用单一的酒精作为茎段消毒剂，并不能达到较佳效果。 Table 3 Disinfection effects of 10% sodium hypochlorite of leave 10% NaClO消毒时长/min 外植体总数/个 污染率% 存活率% 0 95 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00b 2.5 101 94.13 ± 1.54a 5.87 ± 1.54a 5 96 90.66 ± 1.58b 7.44 ± 1.46a 7.5 89 96.51 ± 2.06a 3.49 ± 2.06ab 表3. 10%次氯酸钠溶液消毒叶片效果 注：表中显著性水准为0.05。 Table 4 Disinfection effects of 75% ethyl alcohol of leave 75%酒精消毒时长/s 外植体总数/个 污染率% 存活率% 0 97 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00b 30 100 95.19 ± 3.29ab 4.81 ± 3.29ab 60 89 92.21 ± 2.90ab 7.79 ± 1.74ab 90 99 89.71 ± 2.32b 10.29 ± 2.32a 表4. 75%酒精消毒叶片效果 注：表中显著性水准为0.05。 3.5. 0.1%升汞消毒茎段效果 由表7可见，相对叶片来说，采用升汞消毒效果不理想。消毒时间小于10 min，外植体全部污染，当消毒时间达到15 min，污染率下降至86.51%，外植体存活率仅为8.19%，污染率得到了一定程度的控制，但存活率仅为8.19%。所以采用单一的升汞对茎段进行消毒，并不能达到良好效果。 3.6. 消毒效果影响因素的正交试验 16个不同处理间在污染率和存活率指标上均存在显著差异(见表8)。尽管A 1 B 1 C 1 D 1 、A 2 B 2 C 1 D 2 、A 2 B 4 C 3 D 1 、A 1 B 4 C 4 D 3 、A 1 B 3 C 3 D 2 、A 2 B 1 C 2 D 3 、A 1 B 2 C 2 D 4 几个处理存在污染率极低的处理，但由于这7个处理的外植体存活率为0，失去了培养的意义。剩余的处理中，A 4 B 4 C 1 D 4 及A 4 B 1 C 4 D 2 处理存活率没有显著差异，但显著高于其它处理，其对应的污染率指标除高于A 2 B 3 C 4 D 4 号处理外，均显著低于剩余的其它处理。尽管A 2 B 3 C 4 D 4 号处理污染率为0，但其外植体存活率仅为5.08%。综上所述A 4 B 4 C 1 D 4 、A 4 B 1 C 4 D 2 两个处理为外植体消毒的最佳处理，即以茎尖为外植体75%酒精消毒90 s，再用0.1%升汞消毒15 min或10%次氯酸钠消毒18 min，0.1%升汞消毒10 min。 Table 5 Disinfection effects of 0.1% mercuric chloride of leave 0.1%升汞消毒时长/min 外植体总数/个 污染率% 存活率% 0 121 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00c 5 117 84.83 ± 2.11b 15.17 ± 2.11b 10 124 34.47 ± 3.30c 65.53 ± 3.30a 15 106 29.28 ± 2.14c 70.72 ± 2.14a 表5. 0.1%升汞消毒叶片效果 注：表中显著性水准为0.05。 Table 6 Disinfection effects of 75% alcohol of stem cuttin 75%酒精消毒时长/s 外植体总数/个 污染率% 存活率% 0 97 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00a 30 88 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00a 60 88 96.63 ± 1.93a 0.00 ± 0.00a 90 88 87.47 ± 2.36b 0.00 ± 0.00a 表6. 75%酒精消毒茎段效果 注：表中显著性水准为0.05。 Table 7 Disinfection effects of 0.1% mercuric chloride of stem cuttin 0.1%升汞消毒时长/min 外植体总数/个 污染率% 存活率% 0 88 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00b 5 89 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00b 10 87 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00b 15 89 86.51 ± 1.93b 8.19 ± 1.61a 表7. 0.1%升汞消毒茎段效果 注：表中显著性水准为0.05。 Table 8 Duncan’s multiple range test of 16 treatments in an orthogonal tes 试验编号 组合 污染率% 存活率% 1 A 1 B 1 C 1 D 1 100.00 ± 0.00a 0.00 ± 0.00e 2 A 3 B 3 C 1 D 3 60.61 ± 8.13b 9.09 ± 0.55b 3 A 4 B 4 C 1 D 4 20.69 ± 2.17d 41.38 ± 2.18a 4 A 2 B 2 C 1 D 2 2.27 ± 0.28e 0.00 ± 0.00e 5 A 2 B 4 C 3 D 1 0.00 ± 0.00f 0.00 ± 0.00e 6 A 4 B 3 C 2 D 1 15.25 ± 2.68b 25.43 ± 1.72b 7 A 3 B 2 C 4 D 1 88.00 ± 4.12a 4.00 ± 1.02cd 8 A 1 B 4 C 4 D 3 36.84 ± 2.31c 0.00 ± 0.00e 9 A 4 B 1 C 4 D 2 11.11 ± 1.30d 38.89 ± 2.52a 10 A 1 B 3 C 3 D 2 18.92 ± 1.08cd 0.00 ± 0.00e 11 A 2 B 3 C 4 D 4 0.00 ± 0.00f 5.08 ± 0.61cd 12 A 2 B 1 C 2 D 3 11.63 ± 1.61d 0.00 ± 0.00e 13 A 3 B 1 C 3 D 4 80.65 ± 1.93a 3.23 ± 0.74d 14 A 3 B 4 C 2 D 2 53.57 ± 2.36b 32.14 ± 3.30b 15 A 4 B 2 C 3 D 3 30.19 ± 2.83c 9.43 ± 1.68b 16 A 1 B 2 C 2 D 4 0.00 ± 0.00f 0.00 ± 0.00e 表8. 正交试验16个处理消毒效果的多重比较 注：表中显著性水准为0.05。