DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 算例与结果分析 研究可动夹杂边界处的动应力集中程度，通常采用动应力集中因子DSCF来表示，定义如下 DSCF = | τ θ z ( t ) ϖ | (37) 其中 ϖ = μ k W 0 为入射应力的最大幅值。 下面给出了动应力集中因子与无量纲入射波波数kR，剪切模量 μ ，掩埋比 h / R ，入射波波幅 W 0 ，入射角 α ，质量体密度比 ρ 和表面参数s关系的数值结果。 图2给出了入射角 α = π / 2 入射时表面效应对可动夹杂边界处动应力集中因子的影响，取入射波数 k R = 1.0 ，掩埋比 h / R = 3 ，入射波波幅 W 0 = 1 ，密度比 ρ = 8 。当s趋近于0时得到的动应力集中因子与宏观条件下的结果吻合，这正好验证了本文的正确性。如图所示，考虑表面效应之后，由于入射波和反射波的相互干涉，曲线出现了凸起，随着表面参数s的增加，在整个区间内动应力集中因子逐渐减小。 图2. α = π/2入射时表面效应对可动夹杂边界处DSCF的影响 图3给出了入射角 α = π / 2 入射时波数kR对动应力集中因子的影响，取密度比 ρ = 8 ，表面参数 s = 1 。然后分别取波数 k R = 0.5 、 k R = 1.0 和 k R = 2.0 观察无量纲波数kR的变化对动应力集中因子的影响。从图中可以得出，随着kR的增大，动应力集中因子在整个区间内都是增大的。 图4考虑了纳米尺度下质量体密度比对动应力集中因子的影响，我们固定入射角 α ，入射波波数kR，入射波波幅 W 0 ，掩埋比 h / R 。从图中可以得出，随着质量体密度比 ρ 的不断增大，动应力集中因子在整个区间内都是增大的。 图5考虑了动应力集中因子随着入射角 α 的变化情况，我们固定入射波波数kR，入射波波幅 W 0 ， 图3. 纳米尺度下α = π/2入射时波数kR的变化对DSCF的影响 图4. 纳米尺度下质量体密度比对DSCF的影响 图5. 入射角α的变化对DSCF的影响 掩埋比 h / R ，质量体密度比 ρ 。从图中可以得出，入射角 α = 0 度时，动应力集中因子最大值为5，入射角 α = π / 2 入射时，半空间内可移动夹杂周围动应力集中因子在整个区间内是关于纵轴对称的。
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user: 4. 结论 本文研究了半空间内浅埋纳米移动夹杂对SH波散射的影响。计算结果主要考虑了入射角以 α = π / 2 入射时可动夹杂边界处动应力集中因子的变化情况，同时也讨论了其他入射角对动应力集中因子的影响。结果表明：当表面参数s趋近于0时得到的动应力集中因子与宏观条件下的结果具有一致性，考虑表面效应之后，随着表面参数s的增加，在整个区间内动应力集中因子逐渐减小，表面效应显著。不管是高频还是低频，随着表面参数s的增加，在整个范围内DSCF都会减小。当表面效应固定不变时，随着无量纲波数kR的增大，应力集中因子DSCF也会随之增大。在入射角以 α = π / 2 入射时，DSCF在整个区间内具有对称性。
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user: 摘 要 热电材料是一种将热能和电能进行转换的功能材料。由于热电材料的本构方程是非线性的，相应的力学分析具有很大的挑战性，因此对热电材料在断裂力学中的研究进展进行梳理具有十分重要的意义。本文介绍了热电材料的发展现状和应用前景，综述了热电材料断裂力学的最新研究进展，包括热电材料断裂力学问题的理论研究、数值研究和热电材料断裂力学中的实验研究。最后对未来热电材料的断裂力学研究进行了展望。 关键词 :热电材料，裂纹，断裂力学，数值计算 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 热电材料作为一种被广泛应用的环境友好型材料，已成为国际材料研究领域的热点课题之一。它是一种利用固体内部载流子的运动实现热能和电能直接相互转换的功能材料，在能源、制冷、微电子、航天、军事等领域有着广泛的应用 [ 1 ] 。它因体积小、重量轻、无传动部件、无噪声运行、精确可靠等优点引起了越来越多学者的重视。由于材料的脆断总是由宏观裂纹引起的 [ 2 ] ，如夹杂，加工，热载荷，电载荷等都会引起裂纹，热电材料是脆性的并且容易因热冲击损坏，因此必须对热电材料的断裂性能进行分析研究。本文主要介绍了运用断裂力学理论来研究热电材料中裂纹尖端附近的应力、应变场和裂纹的扩展规律。
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user: 2.热电材料 2.1. 热电材料的发展与背景 热电材料是一种有着广泛应用前景的材料。在环境污染和能源危机日益严重的今天，进行新型热电材料的研究具有很强的现实意义。热电技术将余热转化为电能可以作为解决能源问题的可行方案 [ 3 ] ，材料的选择可依其运作温度分为三类 [ 4 ] ：第一类为碲化铋及其合金，用于热电致冷器；第二类为碲化铅及其合金，用于热电产生器；第三类为硅锗合金，常应用于热电产生器。热电效应在发电和致冷方面有着巨大的应用价值 [ 5 ] 。1821年发现的塞贝克效应和1834年发现的帕尔帖效应为热电能量转换器和热电制冷的应用提供了理论依据 [ 6 ] 。Seebeck通过加热两个不同电导体之间的连接处来产生电动势发现第一个热电效应。Peltier观察到了当电流从不同材料之间传递时会对材料连接处加热或冷却发现第二个热电效应。塞贝克和珀尔帖现象是相互依存的，这种相互依赖性称为汤姆逊效应，即当有电流和温度梯度时加热或冷却都是可逆的 [ 7 ] 。 2.2. 影响热电材料能量转换的因素 热电材料可以将废热转换成电力，从而提高燃料效率，被认为是最有前途的技术材料。热电材料的能量转换效率用优值Z来衡量 [ 8 ] ，Z值越大热电材料的热电转换能力也越强。也常用无量纲因子ZT来表示这一特性，ZT值是由塞贝克系数，电导率以及热导率这几个参数来表征 Z T = α 2 σ T / λ . (1) 其中 α 是热电材料的塞贝克系数， σ 是热电材料的电导率， λ 是热电材料的热导率。 Hicks等人提出热电材料的低维化有利于提高热电材料的热电优值，而电子和孔洞的存在会降低热电材料的优值 [ 9 ] 。优值Z受材料的种类、组分、掺杂比例和具体结构影响。优值与材料的塞贝克系数以及电导率、热导率有关，同时这三个参数都与温度相关。热电材料是一种非均匀功能梯度材料，现阶段提升热电材料转换能力的措施有以下几种 [ 10 ] ：首先，最直接的措施是提高热电材料的塞贝克系数。通过改变热电材料内部的构造以及化学合成成分来提高热电材料的塞贝克系数，具体方法有参杂、杂质替代等。通过理论分析及大量实验来寻找塞贝克系数较大的热电材料。其次，可以通过提高载流子的密度、提高载流子迁移率等方式来提高电导率 [ 11 ] ，但这些方法同时会使塞贝克系数降低，整体效果不太明显。最后，降低材料的热导率成为提高材料热电性能的主要方法。Bi 2 Te 3 基热电材料是最常见具有低的热导率和较高的热导率的热电材料，因而广泛应用于热电制冷和利用温差发电技术等领域。常见的热电材料还有硫属化铅基热电材料，用高能球磨法制备的BiSbTe纳米晶块体材料和p型MgAgSb基热电材料，三种热电材料的晶体结构图见图1 [ 12 ] 。因其晶体结构的不同而被应用于热电能量转换器和热电制冷等不同领域。例如市面上的一种移动型冰箱，具有无噪音体积小便于携带等优点，天气冷时还可变为保温器，这种冰箱应用的就是热电材料。还有利用温差产生电力来驱动手表等技术都是热电材料的发展及应用。 Zhang和Wang用解析法研究了对矩形热电板施加电和温度载荷，计算了裂纹尖端的电流密度和能量通量强度因子，结果显示可以通过增加裂纹尺寸来降低热导率 [ 13 ] 。化学家们将钠原子添加到一种具有有序晶格结构的热电材料中以增加材料的导电性，允许电子穿过材料的裂缝以减缓热量的传播 [ 14 ] 。在用保角映射函数和Mori-Tanaka方法研究椭圆体热电复合材料的性能时，发现通过增加填充率可以降低电导率和热导率 [ 15 ] 。其次高温高压也可以降低材料的电阻率得到极低的热导率，通过电学测试发现高压对材料的热电性能影响不大 [ 16 ] 。
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user: 4. 热电材料断裂的数值研究 对于较为复杂的热电材料裂纹问题的研究，数值计算方法是非常有效的分析工具。例如有限差分法、有限元法、边界元法、非连续变形分析等。基于有限元方法，Pérez-Aparicio等人研究了热电偶的二维珀尔 图2. 不同厚度板的热冲击函数 图3. 裂纹面上的温度场和裂纹延伸线为a的层状热电材料 图4. 裂纹面上的电势场和裂纹延伸线为a的层状热电材料 帖效应。证明了由于电子和热通量的耦合，离散化材料中可变温度的参数和表示电子所带热能的对流型为非线性 [ 40 ] 。Clin等人通过数值模拟讨论了在不同温度下沿着器件同一方向上各热电偶的应力分布现象，发现热、冷端的温差越大相应的应力也就越大 [ 41 ] 。Turenne等人通过数值模拟探讨了热电器件的边界条件、热电偶长度对器件应力分布的影响，利用有限元分析法指出了用两个刚性板将模型固定将会增加热电偶上的冯米赛斯应力，同时发现若热电偶越短，则热梯度也就越高，从而在热电偶连接处产生的应力也就越大 [ 42 ] ，在这之后用同样的方法评估了TE材料性能对模块中的热梯度产生的机械应力水平的影响 [ 43 ] 。 杨利娜用有限元分析软件ANSYS数值模拟了单边裂纹的脉冲放电过程，得出了脉冲放电后裂纹尖端的温度场及应力场，并计算出了放电前后不同长度裂纹的尖端应力强度因子，证明了脉冲放电可以减小裂纹尖端的应力强度因子，通过减小裂纹的扩展速率，可以抑制裂纹的继续扩展 [ 44 ] 。Chen和Lee提出了一种瞬态模拟模型，研究了脉冲热功率对发电机热性能和电性能的影响 [ 45 ] 。Wang利用有限元模型研究非线性热电耦合场在热电材料中的应用。采用有限差分法解决时间依赖的响应，根据温度场就可以进行热应力分析、标准热弹性分析和有限元分析 [ 46 ] 。 求解热应力对于预测微电子器件可靠性和防止一般的故障也至关重要 [ 47 ] 。只有知道设备中的热应力才能对薄膜热电装置的热机械可靠性进行评估。因为在工作条件下薄膜结构严格受到热梯度的影响 [ 48 ] 。与有限元法和其他数值方法相比，材料模型具有其显著优点并且仍然可以为设计提供合理的结果 [ 49 ] 。使用已有的热电装置去预防热应力的破坏 [ 50 ] 。热电材料是一种具有大的热功率，低电阻率和低导热率的材料 [ 51 ] 。热冲击可导致脆性热电材料中的微裂纹损伤累积，微裂纹可以影响热电性能和机械完整性 [ 52 ] 。张等人在建立热裂缝热电材料板的热冲击模型后，通过数值方法研究耐热冲击性。发现应力强度因子和耐热冲击性对材料的尺寸敏感，应力强度因子随着板厚度的增加而变大 [ 30 ] 。
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user: 5. 热电材料断裂力学的实验研究 在生产和制造热电材料和复合材料时，其内部产生缺陷，若电势和温度不连续以及热电场和应力集中很容易导致机械故障或电击穿。所以对这些缺陷的评估在热电部件的能量转换效率，强度和可靠性方面起着重要作用。在研究热电材料的缺陷问题方面，许多进行的主要是实验研究。Wang等人通过实验模拟在珀尔帖冷却与热传导和热耦合中验证掺杂的单晶硅微冷却器，图5为微冷却器表面的峰值冷却和最大冷却热量 [ 53 ] 。 若进行高压烧结热电材料的实验探究，则应考虑材料中残余应力的存在，否则会有裂纹甚至破碎 [ 54 ] 。戚德奎等人研究了锌铅热电材料的力学特性受快速急冷法的影响规律，采用熔体旋甩法结合放电等离子烧结技术快速制备了一系列具有高热电性能和高力学强度的锌铅块体材料，并且得到的样品具有极高的抗压强度 [ 55 ] 。对热电材料强度的研究是测量断裂韧性的重要指标 [ 56 ] 。例如用三点弯曲的方法去测量断裂强度 [ 57 ] ，采用脉冲电烧结技术研究热电材料的硬度和断裂韧性，其中高优值归因于高电导率 [ 58 ] 。热梯度和热瞬变产生的应力随热电材料的热膨胀系数而变化。通过脉冲电流烧结可以抑制材料膨胀的可能机制 [ 59 ] ，减缓裂纹生长的敏感性，使用共振超声波检查材料的硬度和断裂韧性等 [ 60 ] 。国内武汉理工大学研究员刘刚对P型Bi 2 Te 3 ，CoSb 10 宽温域热电材料结构力学性能进行了研究，对该热电材料的抗折断能力进行了测定，达到了提高材料的抗折强度的目的 [ 61 ] 。James同样对热电材料方钴矿CoSb 10 和In 0.1 CoSb 10 的断裂韧性进行了研究分析 [ 62 ] 。如图6给出了两种热电材料裂纹尖端韧性数据，结果表明方 图5. 单晶硅冷却性能的实验数据 图6. 两种材料的固有裂纹尖端韧性数据 钴矿的断裂韧性可以明显低于以前所知的。之后采用维氏显微压痕硬度测试方法分析热电材料的力学性能 [ 63 ] 。 威布尔模量是衡量断裂强度的量度，是机械可靠性的指标 [ 64 ] 。Kritietal通过实验研究了Cu 2 Se的机械性能，考虑了裂纹韧性和耐热冲击性 [ 65 ] 。结果表明，Cu 2 Se的断裂韧性值明显高于其他现有热电材料在相同工作温度下的断裂韧性值。
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user: 6. 结束语 热电材料断裂力学问题研究具有重要的学术价值和应用前景，属于前沿学科。它涉及到多学科的相互渗透，包括传热学、力学、电学、材料科学等学科。但是由于热电材料的本构方程是非线性的，该领域仍然存在着许多尚未解决的关键问题。作者认为需要进一步研究和发展的方向包括热电材料断裂力学基础理论方面的研究和热电材料结构分析方面的研究。在进行热电材料多场耦合分析和结构设计时，还应该考虑材料的制备以及材料结构成型过程中的工艺力学问题，同时还应该考虑热电材料的损伤检测与性能表征的理论及实验技术，研究解决系统分析软件的开发问题等。在由裂纹引起的热电材料断裂研究中，重点求解应力强度因子。现阶段对热电材料的裂纹问题研究才刚刚开始，例如分析周期裂纹，斜裂纹和多裂纹孔口等问题。在求解热电材料裂纹问题中，建立正交同性或者异性复合材料板的力学模型，求解不同边界条件下的裂纹温度场和电场及应力强度因子。
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user: 摘 要 本文利用复变函数法、多极坐标法、虚源法和Graf加法公式研究了在纳米尺度下含有圆形夹杂的弹性半空间对SH波的散射问题。首先根据边界条件求出了介质内的入射、反射、散射、折射波函数，然后利用波函数求出在复数坐标系下相对应的应力场，最后，给出了界面圆形夹杂的动应力集中的算例和结果。具体讨论了圆孔夹杂边界处的环向动应力随无量纲波数、入射角变化时的变化情况，以及分析了表面参数S对动应力集中的影响，比较了在宏观和微观下的动应力集中。结果表明：在纳米尺度下，表面参数越小，引起的圆形夹杂边界处的应力集中程度越强；无量纲波数越大，引起的圆形夹杂边界处的应力集中程度越强。 关键词 :圆形夹杂，复变函数法，动应力集中 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 弹性波在固体中传播时，固体中嵌有的夹杂(孔洞)会引发弹性波的散射，进而产生动应力集中。对此Mow和Pao [ 1 ] [ 2 ] 研究了无限大平面内一个夹杂(孔洞)对平面弹性波的散射问题。史守峡和刘殿魁 [ 3 ] 探讨了多圆孔对SH波的散射及动应力集中，分析了多圆孔干涉现象。由于受到平界面的影响，林宏和刘殿魁 [ 4 ] 继续研究了半无限空间中圆孔周围SH波的散射。史文谱等人 [ 5 ] 则为了探究平表面和弹性夹杂对弹性波的干涉，研究了弹性约束半空间内浅埋圆孔对SH波的散射。齐辉，杨在林 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] 等研究了夹杂(孔洞)对SH波散射的应用。 随着夹杂尺寸的减少，尤其是在纳米尺度下，由于比表面积显著增加，以及表面原子和内部原子巨大的势能差，表面效应显著，使得纳米材料和纳米元器件的动力学性能同宏观性能明显不同。近年来，汝艳 [ 10 ] [ 11 ] 等研究了SH波诱发的阵列纳米孔洞周围的弹性波散射和动应力集中以及Wang [ 12 ] 探讨了多个圆形纳米夹杂(孔洞)对P波的散射问题。本文利用复变函数法、多极坐标法、虚源法和Graf加法公式，研究了在纳米尺度下半空间内浅埋圆形夹杂对稳态入射平面SH波的散射，以及由此引起的动应力集中。
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user: 3. 算例及分析 本文算例假设半空间介质中入射SH波的无量纲波数(波数k与圆形夹杂半径R的乘积) k R = 0.2 ， 1 ， 2 (表示低、中、高频)入射平面波的入射角分别为：0， π 6 ， π 3 ， H / R = 150 以及表面参数 S = 10 − 10 ， 0.1 ， 1 。 如图2所示，当 S = 0 时为宏观条件下半空间内圆形夹杂对SH波的散射，由图像可知该结论与现有的结论一致。当 S = 0 ， μ 1 = 0 时为半空间内圆形孔洞对SH波的散射，该图像和 S = 10 − 10 ， μ 1 = 0 时的图像 图2. 当kR = 2时入射波水平入射时圆形夹杂(孔洞)边界处的环向动应力集中系数环向角分布 重合，该结论也与现有的结论相一致，从而验证了本文结论的准确性。 如图3所示，当 S = 1 ， μ 1 = 1 ， H / R = 150 ， k R = 0.2 ， 1 ， 2 时，入射波水平入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布。由图像可知无量纲波数越大，则SH波引起的圆形夹杂动应力集中越明显。当 k R = 2 时最大值为7.5。并且圆形夹杂边界处的应力集中系数的角度分布是对称的，这与实际情况是相吻合的。 如图4，当 S = 1 ， μ 1 = 1 ， H / R = 150 ， k R = 0.2 ， 1 ， 2 时，入射波以 π 3 入射时圆孔夹杂边界处的环向动 图3. 入射波水平入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布 图4. 入射波 π 3 入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布 力应力集中系数环向角分布。从图像可知无量纲波数越大，则SH波引起的圆形夹杂动应力集中因子越大。这与水平入射时所得的结论一致，并且最大值是9。 如图5，当 S = 1 ， μ 1 = 1 ， H / R = 150 ， k R = 0.2 ， 1 ， 2 时，入射波垂直入射时圆孔边界处的环向动应力集中系数环向角分布。由图可知当入射角垂直时动应力集中因子的变化趋势与以上两种情况相反是先减小后增大。其他与以上两种情况一致，动应力集中因子最大为10.2。 如图6，当 k R = 0.2 ， S = 10 − 10 ， 0.1 ， 1 时，入射波以水平入射时圆孔夹杂边界处的环向动力应力集中系 图5. 入射波垂直入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布 图6. 当kR = 0.2，S = 10 −10 ，0.1，1时，入射波水平入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布 数环向角分布情况。由图像可知当 S = 10 − 10 ，也就是S趋近于零时动应力集中因子最大为14，当 S = 1 时，动应力集中因子为4.2，从而可得表面参数S越小，SH波引起的圆孔夹杂处的动应力集中因子越强。 如图7，当 k R = 2 ， S = 10 − 10 ， 0.1 ， 1 时，入射波以水平入射时圆孔夹杂边界处的环向动力应力集中系数环向角分布情况。由图像可知在高频下与在低频下结论是一致的，由此可得不论是在微观还是在宏观条件下当表面参数S越大，SH波引起的圆孔夹杂处的动应力集中因子越小。 图7. 当kR = 0.2，S = 10 −10 ，0.1，1时，入射波水平入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向角分布 图8. 当kR = 0.2，S = 10 −10 ，0.1，1时，入射波 π 3 入射时圆形夹杂边界处的环向动应力集中系数环向分布 如图8，当 k R = 0.2 ， S = 10 − 10 ， 0.1 ， 1 入射波以 π 3 入射时圆孔夹杂边界处的环向动力应力集中系数环向角分布，与图6，图7得出的结论一致。
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user: 4. 结论 本文利用复变函数法、多极坐标法、虚源法和Graf加法公式研究了在纳米尺度下半空间内浅埋圆形夹杂对稳态入射SH波的散射问题，并给出不同介质的位移场，应力场。通过数值算例分析得到： 1) 在纳米尺度下圆形夹杂边界处的应力集中程度显著，表面参数 S 越小，引起的圆形夹杂边界处的应力集中程度越强。 2) 在纳米尺度下，无量纲波数 k R 越大，引起的圆形夹杂边界处的应力集中程度越强，和宏观条件下一致。
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user: 摘 要 《三四五区间的联姻》是多丽丝·莱辛太空五部曲《南船星座的老人星：档案记载》中的第二部。在这部小说中，作者灵活巧妙地使用倒叙的叙事方式和张弛有度的叙事节奏等叙事手段，使小说情节主次分明，引导读者探索危机根源和谕令的目的，见证各区间从意识封闭停滞到开放流动的意识进化之旅，并以此揭示莱辛对人类文明的思考：世界各国文明都是相互影响、相互联系的“命运共同体”，人类文明的进步需要各国家、各地区间采取思想自由、兼容并包的态度，相互促进，互动发展，共同推进世界文明的进步。 关键词 :叙事方式，叙事节奏，“命运共同体”，世界文明 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 当代英国女作家多丽丝·莱辛因其广泛丰富的主题和灵活多变的叙事方式荣获2007年诺贝尔文学奖。从种族主义、殖民主义、女性主义、苏菲主义到神秘主义，贯穿其作品始终的根本主题是“个体与集体、身份与角色、文明与自然的关系” [ 1 ] (P11)。《三四五区间的联姻》(以下简称《联姻》)作为其太空系列小说《南船星座的老人星》中的第二部作品，主要讲述宇宙中第三区间的女王爱丽·伊斯，受供养者之命，下嫁四区国王本恩·阿塔的故事。很显然，每个区间都代表一个国家，有着各自的话语体系、意识形态和文明程度。三区是没有阶级、万物通灵、一派祥和的乌托邦国家，而四区则是贫困落后、等级分明、一切以战争为核心的人间地狱。经过一系列碰撞、融合，两人从相互憎恶、鄙视到相互了解、学习、爱慕，进而促进两区从封闭僵化走向动态和谐，甚至推动其他区间文明的共同进步。Jayne Glover认为《联姻》更像一则寓言故事，而不是太空小说，他指出莱辛试图通过这部小说来探寻促进各区之间的平衡与和谐的方式 [ 2 ] (PP119-130)。 国内外对这部小说的研究并不多，主要集中在对殖民主题、女性主义、苏菲主义和生态女性主义的探讨。虽有涉及叙事视角和叙事策略的分析，但并不全面，本文将运用叙事时间的相关理论对其进行进一步解读，试图分析莱辛如何行针步线，运用独特的叙事方式和疏密相间、强弱分明的叙事节奏，来揭示其对现代文明发展道路以及未来文明走向的思考。
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user: 2. 叙事方式 在叙事文本中，时间分为故事时间和叙述时间(话语时间或文本时间)。故事时间是指“所述事件发生所需的实际时间”，叙述时间指“用于叙述事件的时间” [ 3 ] (P112)。在叙述过程中，故事时间与叙述时间顺序不平行时，就会出现时序的错置现象，例如倒叙和预叙。倒叙，即“回头叙述先前发生的事情” [ 4 ] (P65)，一般涉及回忆和追叙，现时叙述遗漏或无法顾及但又不得不说明的事情。倒叙打乱了线性的叙事时间，充分调动读者的能动性，使读者猜测隐藏在这些叙事技巧下的作者意图。 小说“叙述不仅仅是故事，而且也是行动。某人在某个场合出于某种目的对某人讲的一个故事” [ 5 ] (P14)。在《联姻》中，莱辛一反传统的单一的第三人称全知视角，采用作为三区历史编撰者的“我”——勒西克的第一人称叙述中的旁观视角，由于科幻小说的特殊设定，并赋予了他全知全能的感知能力，回顾性地倒叙爱丽·伊斯作为三四区女王时的事迹。 小说一开篇就告知供养者颁布了一条新的谕令——三区女王与四区国王联姻，导致各区间谣言四起，并交代各区间动物王国和植物王国出现了同样的亡国危机：人类和牲畜情绪低落，失去交配和生存欲望，“失去了原先的繁殖能力” [ 6 ] (P117) 1 ，出生率下降；植物王国也开始萎靡不振，“边疆地区已经荒无人烟”(P56)。但谁也不知道危机的根源，供养者的一旨谕令更是设足了悬念，引发读者兴趣和思考。随着联姻的进行，沟通的深入，爱丽·伊斯了解四区人民生活在水深火热之中而不自知，且“这两个地区无法联合起来，他们生性充满敌意”(P3)。最后，在与本恩·阿塔及四区妇女——一群受极度男权社会压迫，但始终向往三区自由、平等、富足生活的“反叛者”的深入沟通中，爱丽·伊斯领悟到供养者联姻谕令的目的，即与四区一起找到危机的根源并解决危机。本恩·阿塔在与爱丽·伊斯的不断交流中，渐渐学会了思考，认识到四区的贫穷，开始追根溯源分析导致国家现状的原因，反思自己，思考为何而战和没有战争的军队存在的理由，并在联姻结束后解散了四区大部分的军队，解除了禁止抬头看三区的禁令，带领国家逐渐走向自由和繁荣。三四区的联姻打通了两区沟通交往的桥梁，同样，四区国王和五区女王的联姻亦会起到同样的积极影响。“毕竟，爱丽·伊斯的经历教育了我们所有人，即在一个区发生的事情会影响其他区，尽管我们认为自己是不怀好意的，或是无视所有发生在我们境外的事情”(P200)。爱丽·伊斯不仅教育了三四区的民众，各区间是一个相互联系、相互影响的整体，更教育了读者，当今世界的各个国家是一个紧密联系的“命运共同体”，任何国家都不能一意孤行，只有接受文化多样性，兼容并包，一起面对危机，各个国家之间才能和谐共存，和平发展，共同进步。 在联姻过程中，爱丽·伊斯不仅受着身体和精神上的痛苦，还遭到三区民众的谴责和厌恶，最后几乎被三区民众所遗忘，落得被三区驱逐的境地。“记录下这个片段的动机之一，是我想在人们心中，重新唤起对爱丽·伊斯的记忆，让她在我们的历史中重新回到她应该享有的位置”(P201)，而且当爱丽·伊斯尝试进入二区时，为避悠悠之口，“我”为其正名“她没有背弃她的国家”(P314)。此时，叙述者的目的不言而喻，“我”在反思着这一切，认识到三区民众的褊狭、自满和停滞不前，爱丽·伊斯的痛苦、牺牲和她对各区经济的发展、文明的进步做出的偌大的贡献，“我”不愿爱丽·伊斯带着冤屈被民众遗忘，叙述这个故事是为了给爱丽·伊斯正名，给予她应享的历史地位。正是爱丽·伊斯包容的态度和博爱的胸襟，影响了本恩·阿塔思维的转变，最后互动促进各区间从封闭、敌对和思想僵化的状态，到互相学习、频繁走动、自由交往、思想开放的文明世界。 在小说中，“有讲述者、故事、情节、读者、目的组成的这样一个基本结构在大多数叙事中至少是双重的：首先是叙述者向他的读者讲述故事，然后是作者向作者的读者讲述的叙述者的讲述” [ 5 ] (P14)。在第二重的结构中，作者向我们讲述了关于了三区历史记录者勒西克的故事。在这重故事里，勒西克也经过了一系列的蜕变，从开始叙述者放弃外视角，采用当初正在体验事件时的眼光来聚焦，与三区民众一起谈论谕令的目的和联姻的方式，并谴责爱丽·伊斯的消极情绪和她以哀悼者的姿态傲慢地迎接来自四区的士兵的态度；到以旁观者的视角观察她，并表示不理解爱丽·伊斯的忧虑和变化；到最后同情怜悯她，并站出来为她正名，给予她应当享有的历史地位。读者看到了叙事者勒西克自身的反思以及其思维的转变，更加直接实质地引发读者对自身以及当今世界文明的启迪：世界各国民族需要不断反思自身，采取思想开放、兼容并包的态度来对待其它民族的文化，接受文化多样性，共同促进社会的和谐和文明的进步。
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user: 3. 叙事节奏 时距涉及“读出叙事所花费时间与故事事件本身持续时间之间的关系” [ 7 ] (P52)。当故事时间与叙述时间时距不一致时，就会出现概述、场景、省略、延缓(拉伸)和停顿五种现象。在小说叙事中，场景与概述经常交替出现，使行文详略得当、主次分明，增强叙事节奏感和运动感，推动情节向前发展。《联姻》的故事时间跨度为八年左右，主要分为两部分，联姻期间和联姻结束后。前半部分的故事时间持续一年半左右，但占全文的篇幅多达3/4，叙事节奏较慢；后半部分的六年半左右时间却仅占总篇幅的1/4，叙事节奏明显加快，借此叙事者的叙事重点便得以彰显。 场景广泛运用于人物动作、对话和人物意识活动。《联姻》中人物对话和人物意识活动尤为突出，通过这些细致的场景描写，读者可以深入人物内心，感受本恩·阿塔和爱丽·伊斯意识的交流和思维的转变。女王下嫁的那天，“爱丽·伊斯穿上了藏青色丧服”(P6)，优雅地独自走下白色台阶，摇散发辫，围上黑色面纱，以哀悼者的姿态赴婚。在缓慢流动的叙事时间里，读者对爱丽·伊斯的言行及心理有了更为直观的感受。她对联姻的反叛、愤恨和悲痛不言自明。随后当爱丽·伊斯和本恩·阿塔初次见面，叙述者运用言行和意识活动不遗余力地展现二者世界观、人生观和价值观上的天壤之别，甚至着意描写本恩·阿塔强暴爱丽·伊斯的场景，来表现两者关系极度紧张的状态，他“大步流星地走到她面前，一把拎起她，把她扔到榻上。他以一种霸道的方式用手捂住她的嘴巴，掀起她的长袍”(P45)。而就在他俩首次相拥而眠后的凌晨，“他醒了，立刻警觉起来”(P47)。随后叙述者花了三页多的篇幅来细描他警觉的一两分钟，用大量的文字来记录瞬间流逝的意识，使读者不自觉地加快阅读速度，紧跟本恩·阿塔快速运转的思想，并随其一起产生紧张情绪。骄傲的他觉得爱丽在某个暗处嘲笑他，敌视他。如此细致的意识活动刻画出了本恩·阿塔对爱丽·伊斯与生俱来的敌意，引发读者对如此水火不容的二人如何继续联姻、能否理解供养者的深意和发现危机的根源的兴趣，为后续情节的展开设置悬念。 然而，即使爱丽·伊斯、本恩·阿塔和三四五区是处于如此敌对和紧张的状态，最后他们变得“亲密无间”，“他们之间的隔阂已经消失殆尽，他们和解了”(P258)；同时，各区之间打破了敌对状态，“各区之间的走动很频繁了，从五区到四区，四区到三区，还有三区到二区。本来停滞闭塞的地方现在变得气氛轻松，充满了生机”，“边境也关闭了”(P340)。如此翻天覆地的变化不禁让读者感叹作者高明的叙事技巧，前期运用大量的场景描写来展现三区与四区差异和敌对的紧张关系，而即便如此，通过转变思维，双方采取兼收并蓄、取长补短的包容态度，就有可能扭转局势，互利共赢，共同推进各区文明的进步，体现了莱辛“接受差异追求和谐共存”，“追求有差异的和多元文化的社会” [ 8 ] (P3)。同时，作者无形之中也引发了读者对当今世界局势的深思，当今世界各国之间文化迥异，若互相排挤、敌视，只会陷入如三四五区一样的封闭僵化状态，只有转变态度，包容各国文化之间的差异性和多样性，开放思想，互相学习，才能共同促进国家甚至世界文明的进步。 场景拉长故事时间，停顿指故事时间暂停，叙述充分展开，换句话说，叙述不与任何故事时间对应，可表现为叙述者的干预性叙述，即叙述者丢下故事进程，自己站出来，或侈谈写作过程，或抽象议论，来引导读者的意识走向甚至是价值走向。在《联姻》中，叙述者“我”经常暂时放弃第一人称叙述中见证人的旁观视角，而采用从自己目前的角度来观察或评判往事的回顾性视角，或评论人物事件，或改变叙事走向。《联姻》虽然是通过第一人称见证人的旁观外视角讲述，但作者赋予叙述者全知全能的感知能力，通过全知视角模式透视故事中任何人物的内心活动。而全知叙述者与隐含作者之间的距离相对较小，其价值判断与隐含作者最为接近，被韦恩·布斯直接称为“小说中作者的声音” [ 9 ] (P188)。《联姻》中不乏一些精彩的叙述独白，叙述者突然打断故事时间，站在现在的思维立场，评论当时的事件、人物或状况，引导读者的价值观念，进而表明文本叙述的目的和小说的主题。比如： 有件事很神秘，让我无法理解：如果没有“他物”——甚至包括邪恶——的刺激，没有健康、卫生、理智的阴暗面的可怕力量，一切都是空的。告诉你，关于善良——那些常规的、得体的被我们称之为善良的东西——如果没有这些从阴暗面源源不断倾泻而出的隐秘能量，那也就无所谓善良了。这些隐匿的阴暗面蕴含其中，起着调和作用(P276)。 这段关于三区所谓的善良和四区的黑暗的评论，直接道出了叙述者甚至是隐含作者的价值判断：三区以自我为中心自诩的善良、高尚是相对于四区而言的，是在与四区的邪恶和野蛮的对比和衬托下，才有了三区所谓的善良纯洁。但通过二元对立建构起来的世界是不稳定、不和谐的，随之，叙述者又通过一段叙述评论解构二元对立，消解以自我为中心的世界观： 然而有一点我们确信，那就是在那些高处也有黑暗面，其黑暗与可怕可能超出我们这些生活在低区、经历有限的人的想象。有高就有低，这样才相配，甚至高要靠低来烘托(P276)。 相比于二区甚至更高的区域而言，三区或许是卑鄙、堕落和邪恶的，而二区也有黑暗面，所有的善与恶、高与低均是相对而言。简而言之，世界本无中心可言。David Waterman在他的论文中也提到，他认为莱辛通过空间批判，试图改变我们当下的思维模式，打破固化的二元对立的思维框架 [ 10 ] (P1-19)。众所周知，当今世界一直处于动荡不安、战火不断的状态之中，从一战、二战、美苏冷战到如今的全球霸权主义政策，究其本质，均与固化的二元对立思维相关。如二战中希特勒秉持的种族优越论而对犹太人实施种族灭绝政策；美苏冷战中社会主义阵营和资本主义阵营的对峙；苏联瓦解后美国成为全球独霸，实行全球霸权政策，导致局部地区战火不断。通过这段叙述干预，叙述者高明地将其价值导向传递给读者：二元对立的思维方式只会造成各国家、地区间彼此的敌意和歧视，导致思维的封闭和意识的禁锢，阻碍国家的发展和文明的进步，只有消解中心，放下偏见，转变思维，才能共同发展，互利共赢，共同推动世界文明的进步。 通过对叙事节奏的控制，看似平澹无奇、淡而无味的文字下，实则隐藏着作者精雕细刻、匠心独运的叙事技巧和叙事目的。作者时而工笔细描，将场景一览无余地展现在读者面前，延长叙事时间，让读者细细体会其背后地深意，见微知著；时而中断叙述，大发议论，传递隐含作者价值取向，同时引导读者价值走向，揭示小说主题；又时而省略，加快叙事节奏，避免乏味冗长，同时留以想象的空间，达到推动情节发展的效果。在《联姻》中，莱辛通过灵活控制强弱分明的叙事节奏，揭示其对当代世界文明的思考。
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user: 4. 结语 对人类文明的思索一直是莱辛创作的关注点，即使是把背景架空在遥远的外太空的《联姻》也不例外。在《联姻》中，莱辛通过她的代言人，勒西克，利用灵活的叙事方式和张弛有度的叙事节奏，通过三四五区的文明发展轨迹告诫读者：像蝴蝶效应一样，世界各个文明之间是一个紧密联系的“命运共同体”，非此即彼的固化思维只会阻碍世界的和平、稳定与发展。并希冀转变人们的思维模式，为现代文明甚至是未来文明指明道路：只有放下偏见，尊重各国民族文化的差异性和多样性，采取思想自由、兼容并包的态度，协同发展，互利共赢，才能维持世界的长久和平，共同推动世界文明的进程。
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user: 摘 要 大鲵虹彩病毒病是目前唯一的大鲵病毒病，具有高传染性和致死率高的特点。研究人员利用现代科学研究方法和先进仪器设备对大鲵虹彩病毒进行了多层次的研究。从大鲵虹彩病毒的生物学特性、大鲵虹彩病毒病的诊断方法及鉴定方法的发展、大鲵虹彩病毒病的防控与治疗等方面总结了近十年来研究人员在大鲵虹彩病毒研究上得出的研究成果，并在现有的研究成果的基础上进行简要的分析。最后，分析了未来大鲵虹彩病毒病的研究前景。 关键词 :大鲵，虹彩病毒，研究，进展 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 大鲵(Andriasdavidianus)，又称娃娃鱼，有尾目(Caudata)隐鳃鲵科(Cryptobranchidae)大鲵属(Andrias)，是我国所特有的两栖动物。20世纪90年代以来，随着大鲵人工养殖规模和地域范围的不断扩大，大鲵病害已经给国内的大鲵养殖户造成了不少的损失，严重制约了中国大鲵养殖业的发展。针对大鲵的病害，科研人员开展了一系列的大鲵疾病研究，特别是在细菌性疾病上取得了一定的成果，然而，在大鲵病毒性出血病的研究方面没有显著进展。 1.1. 中国大鲵虹彩病毒(Chinese Giant Salamander Iridovirus， GSIV) 目前有关大鲵的病毒性疾病仅有中国大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus， GSIV)一种，中国大鲵虹彩病毒又被称为中国大鲵病毒(Chinese giant salamander virus， CGSV)、中国大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus， GSIV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus， ADRV)，虽然称呼尚未统一，但都是指导致中国大鲵患病的蛙病毒科的虹彩病毒 [ 1 ] [ 2 ] 。大鲵虹彩病毒对幼年大鲵和成年大鲵都具有感染性，极易爆发养殖大鲵大规模死亡，因此，研究人员从大鲵虹彩病毒的病原学入手，在其检测方法、病症诊断以及免疫防控等方面展开了全方位的研究。 1.2. 研究中国大鲵虹彩病毒的基础 2009年以来，包括Dong [ 3 ] 、江育林等在内的研究员在河南、甘肃、四川等地都分离到了感染中国大鲵的病毒 [ 4 ] ，但未确定感染中国大鲵的是何种病毒。在能准确分离导致大鲵患病病毒的基础上，曾令兵团队与的肖汉兵团队合作，利用实验室先进的仪器设备与鱼类细胞系资源对患病鱼体内分离的病毒感染细胞培养物进行培养，在患病的幼年大鲵与成年大鲵体内分离得到了病毒。经过测序与比对分析，初步将此病毒认定为大鲵虹彩病毒 [ 5 ] 。这是世界上第一次从患有典型非细菌性出血病的幼年大鲵与成年大鲵体内分离得到大鲵虹彩病毒，这为今后研究大鲵虹彩病毒奠定了重要基础，关于大鲵虹彩病毒各个方面的研究也由此展开。
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user: 2. 大鲵虹彩病毒的生物学特性 综合研究大鲵虹彩病毒的生物学特性可为研究大鲵虹彩病毒病的防控技术提供较为充分的科学理论依据。 高正勇等 [ 6 ] 用56℃和65℃处理大鲵虹彩病毒30 min均可使得病毒失去感染活性，表明大鲵虹彩病毒对热处理较为敏感，用酸(pH 3)、碱(pH 10)、有机溶剂乙醚和氯仿处理大鲵虹彩病毒导致病毒滴度呈现极显著的差异(p < 0.01)，表明大鲵虹彩病毒对pH 3、pH 10和有机溶剂敏感。江育林等 [ 7 ] 在电镜下测得病毒直径为130~150 nm，通过对大鲵虹彩病毒的理化特性测定，也证实了该病毒对热、酸、碱和氯仿敏感，并且得出结论大鲵虹彩病毒有囊膜包裹的DNA病毒。孟彦 [ 8 ] 观察了患病大鲵的肝脏、脾脏和肾脏的超微结构，发现在这些器官内的病毒粒子大多呈现六边形，直径约140 nm，对角线约180 nm，呈现出典型的虹彩病毒粒子形状(图1)。 J. Ma等 [ 9 ] 研究了大鲵虹彩病毒在鲤鱼上皮瘤细胞感染1~96 h的超微结构变化并观察到病毒为二十面体。江育林等 [ 7 ] 通过在不同温度下将大鲵虹彩病毒置于BF-2 (蓝鳃太阳鱼细胞)、CO (草鱼卵巢细胞)、CHSE (鲑囊胚细胞)、CLC (鲤白血球细胞)、FHM (胖头鱥肌肉细胞)等11个细胞系培养，实验结果表明，病毒在10℃~30℃能够在BF-2、CO、CHSE、FHM等细胞中较好地生长且当温度维持在25℃~30℃病毒生长最快。孙建滨、曾令兵等 [ 10 ] 用多种终浓度的β-丙内酯(β-propiolactone， BPL)灭活细胞用以培养大鲵虹彩病毒，试验结果显示，在4℃下当大鲵虹彩病毒在终浓度为0.1%的BPL中灭活72 h，该病毒能被完全灭活，这是大鲵虹彩病毒疫苗能够用研制的重要的生物学基础。刘丹 [ 11 ] 研究发现，大鲵虹彩病毒在感染大鲵后能使得主要组织相容性复合体基因的表达显著变化，主要组织相容性复合体在抗大鲵虹彩病毒的感染中可发挥重要的作用。袁江迪等 [ 12 ] 通过凝胶电泳分析，比较正常大鲵和感染病毒大鲵的血清和黏液蛋白，证实了大鲵虹彩病毒感染后大鲵血清和黏液蛋白组分会出现变化。张锐等 [ 13 ] 对大鲵虹彩病毒的核心基因所编码的蛋白ADRV-96L展开研究，发现ADRV-96L具有促细胞增殖和生长的腺苷三磷酸酶活性，这为今后研究虹彩病毒在低等脊椎动物之间的跨种传播提供了新的方向。
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user: 3. 大鲵虹彩病毒病的诊断及鉴定方法 3.1. 大鲵虹彩病毒病的诊断 耿毅等 [ 14 ] 对患病大鲵进行解剖观察，可见患病大鲵脾、肾肿大伴有淤血以及斑点状出血，肝肿胀且呈灰白色或有点状出血，肠壁变薄，肠腔内可见淡黄色积液，利用光镜观察，患病大鲵的组织器官有多种炎症反应，利用电镜观察，患病大鲵的肝、脾、肾组织细胞发生明显病变，病变的组织细胞质中可看到有虹彩病毒样颗粒。周洲等 [ 15 ] 对大鲵感染虹彩病毒的病理特征进行了总结，其主要特征表现为大鲵食欲降低且体表分泌大量粘液，活动量减少，待在池底时间增长；腹部膨大且伴有出血或充血现象，随着感染时间的加长，皮肤、肌肉会出现溃烂，四肢与头部出现肿大并伴有血斑，感染5~10天内大鲵死亡。 图1. 电镜下大鲵虹彩病毒观察 贾秋红 [ 16 ] 在陕西省商洛某大鲵养殖场对患病大鲵治疗期间也对大鲵虹彩病毒病的症状进行了总结，其主要症状有：大鲵头部、四肢及尾部有严重的肿胀及溃烂现象；腹部、下颌有大量出血点；对患病大鲵解剖发现其腹腔内有积水，肝脏、脾脏、肾脏肿大现象且脾肾可见白点。刘丹、耿毅等 [ 17 ] 对感染大鲵虹彩病毒的大鲵进行组织动态监测，利用实时荧光定量核酸扩增检测系统检测得到，在感染的过程中大鲵虹彩病毒在大鲵体内的各个组织广泛分布且含量呈上升趋势。目前诊断大鲵是否患有大鲵虹彩病毒主要是通过现场或者临床症状观察、对大鲵进行病理解剖、显微镜观察以及PCR技术检测。 3.2. 大鲵虹彩病毒病的鉴定 近年来，各研究员与实验室针对大鲵虹彩病毒建立了多种能有效地检测大鲵虹彩病毒的检测方法，并在这些方法上提出了相应的优化方案。耿毅等 [ 18 ] 将患病大鲵的肝、肾、脾等部位做成超薄切片，进行了电子显微镜的观察，电镜下可见不同时期的病毒颗粒。沈红保等 [ 19 ] 利用普通PCR的扩增技术和电泳分析的方法对大鲵虹彩病毒进行简单的检测。实验表明，普通PCR可以检测出大鲵虹彩病毒，但耗费时间长、检测效果不佳，不能够精确检测大鲵虹彩病毒。为了改进普通PCR检测的不足，周勇等 [ 20 ] 以PCR扩增技术为基础，运用载体构建重组质粒，以其10倍梯度稀释为标准模板进行Taq Man实时荧光定量PCR扩增，通过制作曲线实现定性检测的目的。Taq Man实时荧光定量PCR检测方法可准确快速地检测到大鲵虹彩病毒，具有较高的特异性，但在技术操作与仪器设备上有比较高的要求。徐敬钧等 [ 21 ] 在实时荧光定量PCR检测方法上做出进一步完善，设计了大鲵虹彩病毒的49L名为US22家族基因的ORF区的引物，然后通过PCR扩增，此方法在检测上有可重复、可通过血液检测的方式实现活体监测等优点。刘星星等 [ 22 ] 参照GenBank (DNA序列数据库)对大鲵虹彩病毒的MCP基因序列设计特异性引物，建立巢式PCR检测方法。与Taq Man实时荧光定量PCR测定相比，巢式PCR检测法不需要昂贵的仪器设备，如荧光定量PCR等，只需普通PCR即可完成检测，降低费用的同时也更适用于大批量样品检测，更适用于大鲵虹彩病毒的防控阶段。2014年，曾令兵、孟彦等人建立了大鲵虹彩病毒LAMP检测方法，利用此方法制作出能在一个小时内能准确检测样品中是否存在大鲵虹彩病毒的检测试剂盒 [ 23 ] 。LAMP检测法的出现使得不具备专业技能的养殖户也能在养殖现场进行快速诊断患病大鲵。王芳等 [ 24 ] 建立了套式PCR法用以检测大鲵虹彩病毒并在此基础上进行优化，在临床试验中达到了较好的效果，可以用于大范围的大鲵虹彩病毒检测和隐形感染检测。2016年，周小愿等人将大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白在大肠杆菌BL21中进行融合表达，纯化后制作了多克隆抗体，实验结果表明该多克隆抗体可以用于大鲵虹彩病毒的免疫检测，这使得大鲵虹彩病毒的免疫检测试剂盒的开发成为可能 [ 25 ] 。黄谧等 [ 26 ] 同样成功制成了大鲵虹彩病毒的多克隆抗体，为免疫检测试剂盒的研制进一步打下基础。
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user: 4. 大鲵虹彩病毒病的防控与治疗 凌空等 [ 27 ] 认为引起大鲵发病的原因主要有水质变差、大鲵机体遭受机械性损伤、大鲵种质资源不好等。而对于大鲵虹彩病毒病来说，其传播速度及致死速度都很快，致死率能高达90%以上，并且很难在疾病爆发时用药物控制住，因此预防是避免大鲵感染虹彩病毒的关键。周洲 [ 15 ] 等认为预防要注重大鲵苗种健康、选择正规饲料、控制养殖温度与密度、保证水质等。令狐克剑等 [ 28 ] 认为控制该病大面积扩散最佳方法是及时将患病大鲵隔离，并对养殖场、水体及器具进行高锰酸钾消毒。尹文林等 [ 29 ] 研究发现，对患病的大鲵使用板蓝根、吗啉胍等药物可以起到缓解病情的效果，但以上药物均无法治愈大鲵虹彩病毒病。 目前来说治疗病毒病最有效的手段是注射疫苗。贾秋红等 [ 14 ] 在确认大鲵被虹彩病毒感染后，将患病大鲵与健康大鲵进行隔离，使用聚维酮碘和高锰酸钾对水体及相关器具消毒，并对患病大鲵注射大鲵虹彩病毒灭活疫苗和自制的中西药结合抗病毒药物，双管齐下，患病大鲵有所好转，使得疫情得到有效控制。孙建滨等制成的β-丙内酯灭活大鲵虹彩病毒疫苗的免疫保护率可达到83.3% [ 10 ] 。邓绿洲 [ 30 ] 发现以黄芪多糖为佐剂，可以从一定程度上提升疫苗保护率。牟维豪等 [ 31 ] 利用实时荧光定量核酸扩增检测和病毒滴度测定，用RNA干扰大鲵虹彩病毒的主要衣壳蛋白及相关酶，发现RNA干扰可抑制病毒主要功能基因的表达并影响病毒复制。
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user: 5. 大鲵虹彩病毒病研究展望 在大鲵虹彩病毒出现的十年间，研究员们剥茧抽丝般的研究对使得人们对大鲵虹彩病毒病的了解日渐明朗，但未来研究员们仍要就如何准确高效治疗大鲵虹彩病毒病做出努力。首先要加紧研制可以广泛使用的大鲵虹彩病毒的检测试剂盒。其次大鲵虹彩病毒的疫苗研制仍在临床试验阶段，如何降低疫苗成本、提高疫苗的免疫保护率也需要各大研究机构继续探索。此外，中药材的研究开发也应该成为未来研究大鲵虹彩病毒病的重点突破方向，筛选出疗效好的无公害中药材用于大鲵虹彩病毒初期的治疗。今后大鲵虹彩病毒的研究还应整合多方资源，从根源上减少大鲵的感染问题，为大鲵养殖业的健康发展创造良好的条件。
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user: 摘 要 目的：研究大蒜素在体外对金黄色葡萄球菌的增殖以及毒力因子的分泌是否存在抑制作用。方法：将大蒜素稀释至不同浓度后，分别作用于处于生长对数前期的金黄色葡萄球菌，采用试管法测定大蒜素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)；采用生长曲线测定法分析大蒜素对金黄色葡萄球菌的生长抑制作用；采用凝固酶，a-溶血素实验测定大蒜素对金黄色葡萄球菌毒力因子分泌的影响，采用测序技术以及Blast比对的方法测定大蒜素作用下a-溶血素基因的变化。结果：大蒜素对金黄色葡萄球的MIC为15.625 μg/mL，MBC为62.5 μg/mL；大蒜素可以抑制金黄色葡萄球菌的生长，并呈浓度依赖性；凝固酶的效价和a-溶血素的活性明显降低(P < 0.01)；a-溶血素的DNA序列无明显改变。结论：大蒜素对金黄色葡萄球菌的增殖和毒力因子分泌具有明显的抑制作用。 关键词 :大蒜素，金黄色葡萄球菌，生长曲线，凝固酶，a-溶血素 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为革兰阳性的球菌，呈葡萄串状排列，是人类化脓性感染最常见的病菌，通过毒力因子引起食物中毒，烫伤样皮肤综合症，中毒性休克综合症等毒素性疾病 [ 1 ] 。由于耐药菌株的出现，给金黄色葡萄球菌感染性疾病的治疗带来挑战。因此寻找治疗金黄色葡萄球菌感染性疾病中草药尤为重要。 大蒜素(Allicin)为三硫代烯丙醚类化合物，是从大蒜的球形鳞茎中提取出来的挥发性油状物，具有强烈的辛辣刺激味。大蒜素是大蒜中主要生物活性物质的总称，具有抗菌，抗肿瘤，降低胆固醇，抗血小板聚集等多种生理学作用，并且在人和动物体内无残留，不产生耐药性，不造成污染，价格低廉等优点，备受国内外研究者关注 [ 2 ] 。 本研究主要采用检测凝固酶和a-溶血素的分泌探讨了大蒜素对金黄色球菌的增殖及毒力因子分泌的抑制作用。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 材料 金黄色葡萄球菌(ATCC25923)由本江苏大学医学院保存；大蒜素(汇林生物有限公司)；血浆(江苏省溧阳市中医院)；M-H固体培养基(河南美凯生物有限公司)；去纤维兔血红细胞(南京茂捷微生物科技有限公司)。 37℃恒温培养箱、超净工作台(苏州安泰空气有限公司)；紫外可见分光光度计(Biochrom公司)；摇床(德国Thermo Forma公司)；Biosceen全自动生长曲线分析仪(上海谓载商贸发展有限公司) 2.2. 大蒜素对金黄色葡萄球菌的MIC，MBC的测定 将待测菌种接种于LB平板上置于37℃孵箱培养24 h，挑取新鲜单个菌落至无菌生理盐水中研磨制成菌悬液，利用分光光度计调整至OD 600 = 0.1，即0.5麦氏比浊度。取12支无菌试管，第一管加入2 mL的LB培养液，其余试管加入1 mL。在第一支试管中加入大蒜素4 μL，即药物浓度为1 mg/mL，然后倍比稀释至第十管。在含药的试管中加入5 μL调整后的菌液使得菌液浓度为5 × 10 5 CFU/mL。剩下的两支试管分别做阴阳性对照，其中阴性对照不加菌，阳性对照不加药 [ 3 ] 。分装完毕后，将试管放入37℃温箱中培养16~18 h后观察。使试管澄清透明的最小大蒜素浓度即为MIC。从所有澄清透明的试管中吸取100 μL液体，接种至M-H平板上，37℃培养16~18 h，菌落数 < 5的最低浓度为MBC [ 4 ] 。 2.3. 大蒜素对金黄色葡萄球菌增殖的影响 取单个菌落至3 mL培养液中，放至摇床37℃ 200 r/min过夜，次日取菌液50 μL加入5 mL的LB中扩大培养至OD 600 nm = 0.3。通过倍比稀释使药的终浓度分别为125，62.5，31.25，15.625，7.8125，3.9025，0 μg/mL，在96孔板中加入含有不同浓度大蒜素的菌液400 μL，放入生长曲线仪，每1 h测量一次，共检测24 h。 2.4. 大蒜素对金黄色葡萄球菌凝固酶分泌的影响 金黄色葡萄球菌扩大培养至OD 600 nm = 0.3后，加入不同含量的药物，使药的浓度分别为500，125，62.5，31.25，15.625，7.8125，0 μg/mL，继续扩大培养至OD 600 nm = 2.5，10，000 g离心10 min，分离上清和菌体。用无菌的LB将收集的上清进行倍比稀释，每个Ep管中100 μL，用PBS将血浆做4倍稀释，每个Ep管中加入稀释后的血浆0.5 mL，混匀后置于温箱中6 h，以产生凝集的最高稀释倍数作为凝固酶的效价。 2.5. 大蒜素对金黄色葡萄球菌分泌溶血素的影响 在Ep管中加入875 μL的PBS，100 μL菌上清，25 μL兔红细胞，将Ep管放入37℃水浴箱中30 min，5500 g离心1 min，取上清，在波长543 nm处测量OD值 [ 5 ] 。 2.6. 大蒜素对金黄色葡萄球菌hla基因序列的影响 合成16s rRNA、溶血素的引物(具体引物见表1)，对分泌出的菌体进行总DNA的提取，再利用普通PCR得到相应的条带，胶回收后，进行基因测序 [ 6 ] 。 2.7. 统计学分析 采用SPSS22.0软件处理实验数据，金黄色葡萄球菌的生长曲线组间比较采用重复测量方差分析，经过对数转换后的凝固酶效价和溶血素活性实验数据组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Dunnet-t和S-N-K检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 大蒜素对金黄色葡萄球菌的MIC，MBC的测定 大蒜素对金黄色葡萄球菌的MIC为15.625 μg/mL，MBC为62.5 μg/mL。 3.2. 大蒜素对金黄色葡萄球菌增殖的影响 根据生长曲线可知(见图1)，加入大蒜素后金黄色葡萄球菌的生长受到明显的抑制。当药物浓度达到MIC时，加入药物后金黄色葡萄球菌的生长相对于对照组明显缓慢，在4~8 h后恢复生长但总体生长比对照组慢很多。同时间点不同浓度组之间的增殖抑制作用的差异存在统计学意义(P < 0.01)，处理组与对照组分别进行两两比较，增殖抑制作用的差异均有统计学意义(P < 0.05)，处理组之间进行两两比较，增殖抑制作用的差异仍有统计学意义(P < 0.05)。并且，根据生长曲线可知，大蒜素浓度越高，抑制作用越强，这表明大蒜素在体外以浓度依赖性的形式抑制金黄色葡萄球菌的生长。 3.3. 大蒜素对金黄色葡萄球菌凝固酶分泌的影响 不同浓度的大蒜素处理金黄色葡萄球菌，金黄色葡萄球菌分泌蛋白的浓度无明显改变，差别无统计学意义。 在组间比较时，效价差异存在统计学意义，而在处理组与对照组两两比较时，除了7.8125组以外，其余各组与对照组的差异存在统计学意义(P < 0.01，见表2)。 3.4. 大蒜素对金黄色葡萄球菌溶血素分泌的影响 金黄色葡萄球菌在血平板中生长时，出现了明显的溶血环，故有a-溶血素产生。加入大蒜素作用后，金黄色葡萄球菌的溶血活性受到抑制，且呈浓度依赖性(见图2)。群组之间差异具有统计学意义(P < 0.01)在与对照组两两比较的结果中，除7.8125组外，差异均有统计学意义(P < 0.01)。 3.5. 大蒜素对金黄色葡萄球菌hla基因序列的影响及比对分析 测序结果经过Blast比对，加药前后的金黄色葡萄球菌16s rRNA与基因库中覆盖度均为99%，加药前金黄色葡萄球菌hla基因序列覆盖率为99%，加药后hla基因序列覆盖率为98%。说明大蒜素不能引起hla基因的变化，不易产生基因突变从而产生耐药性 [ 7 ] 。 Table 1 Common PCR primer 基因 引物序列(5’-3’) 产物长度(bp) 16s rDNA-F GGCGTTGCTCCGTCAGGCTT 420 16s rDNA-R CGCTGGCGGCGTGCCTAAT hla-F GAAGTCTGGTGAAAACCCTGA 704 hla-R TGAATCCTGTCGCTAATGCC 表1. 普通PCR引物 图1. 不同浓度大蒜素作用下金葡菌的生长曲线 Table 2 Changes of secretory protein concentrations and coagulase titers of Staphylococcus aureus after allicin treatmen 大蒜素浓度(μg/mL) 分泌蛋白浓度(mg/mL) 效价 500 12.40 1:16 * 250 12.52 1:32 * 125 12.14 1:32 * 62.5 11.84 1:64 * 31.25 11.81 1:256 * 15.625 12.00 1:256 * 7.8125 12.11 1:512 对照组 12.17 1:512 表2. 大蒜素作用后金葡菌分泌蛋白浓度以及凝固酶效价的变化 * 与对照组比较，P < 0.01。 图2. 不同浓度大蒜素作用下溶血活力的变化