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user: 3. 实验结果 3.1. 金芪降糖方对KKA y 小鼠肝脏和骨骼肌中糖脂代谢相关蛋白表达水平的影响 由表1和表2可知，肝脏和骨骼肉中的金芪高、低剂量组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量较模型组均升高，其中在骨骼肌中尤为明显(P < 0.05)；各组蛋白Western表达条带如图1所示。 3.2. 金芪降糖方复方及其各组分对诱导后HepG2细胞内TG含量的影响 3.2.1. 金芪降糖方及其组分对诱导后HepG2细胞存活率的影响 如表3所示，不同给药剂量下，金芪降糖方及其组分对HepG2细胞都不具有明显细胞毒作用。 图1. 金芪降糖方对KKAy小鼠糖脂代谢相关蛋白表达水平的影响 Table 1 Grayscale analysis of Jinqi Jiangtang formula on liver protein expression in KKAy mic PI3K/β-actin p-PI3K/β-actin AKT/β-actin p-AKT/β-actin N 0.09 ± 0.01 0.14 ± 0.03 0.07 ± 0.09 0.15 ± 0.04 C 0.13 ± 0.03 0.19 ± 0.04 0.19 ± 0.08 0.41 ± 0.12 R 0.16 ± 0.02 0.22 ± 0.05 0.22 ± 0.07 0.54 ± 0.12 High 0.25 ± 0.06 0.34 ± 0.07 0.39 ± 0.11 0.69 ± 0.15 Low 0.17 ± 0.03 0.29 ± 0.05 0.33 ± 0.08 0.62 ± 0.14 表1. 金芪降糖方对KKA y 小鼠肝脏蛋白表达灰度分析(n = 7， x ¯ ± s ) 注：N为空白组；C：模型对照组；R：罗格列酮治疗组(100 mg/kg/d)；High：金芪降糖方高剂量组(500 mg/kg/d)；Low：金芪降糖方低剂量组(250 mg/kg/d)。 Table 2 Grayscale analysis of Jinqi Jiangtang formula on muscle protein expression in KKAy mic PI3K/β-actin p-PI3K/β-actin AKT/β-actin p-AKT/β-actin N 0.14 ± 0.01 0.13 ± 0.06 0.12 ± 0.03 0.12 ± 0.03 C 0.30 ± 0.11 0.31 ± 0.07 0.16 ± 0.03 0.17 ± 0.03 R 0.57 ± 0.14 0.56 ± 0.13 0.24 ± 0.04 0.30 ± 0.05 High 1.20 ± 0.32 * 1.06 ± 0.22 ** 0.66 ± 0.11 *** 0.89 ± 0.12 *** Low 0.89 ± 0.36 * 0.78 ± 0.21 * 0.48 ± 0.05 ** 0.59 ± 0.07 *** 表2. 金芪降糖方对KKA y 小鼠肌肉蛋白表达灰度分析(n = 7， x ¯ ± s ) 注：与模型组(C)相比 * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001，N为空白组；C：模型对照组；R：罗格列酮治疗组(100 mg/kg/d)；High：金芪降糖方高剂量组(500 mg/kg/d)；Low：金芪降糖方低剂量组(250 mg/kg/d)。 Table 3 Effects of Jinqi Jiangtang formula and its components on the survival rate of HepG2 cell Groups Dose (µg/ml) Survival (%) N — 100 ± 2.80 AS 0.1 105.94 ± 7.10 1 102.98 ± 4.94 10 112.54 ± 7.02 HT 0.1 114.38 ± 9.32 1 102.16 ± 4.31 10 100.63 ± 4.26 CA 0.1 116.18 ± 3.65 1 103.76 ± 4.22 10 106.33 ± 4.70 JQ 0.1 101.89 ± 5.09 1 108.34 ± 3.56 10 102.87 ± 3.01 LA 0.1 106.13 ± 4.06 1 101.16 ± 6.38 10 101.48 ± 4.58 表3. 金芪降糖方及其组分对HepG2细胞存活率的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 注：AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。 3.2.2. 金芪降糖方及各组分对游离脂肪酸诱导HepG2细胞内TG的影响 如表4所示，各给药组均能降低HepG2细胞内TG蓄积的作用，且各组作用趋势均随着给药浓度的降低而减弱，具有明显的量效关系。 Table 4 Effect of each group on TG content in HepG2 cells induced by free fatty aci Groups Dose (μmol/L) TG (mmol/L) N — 0.54 ± 0.11 *** C 200 5.39 ± 0.06 Orli 1 4.09 ± 0.16 ** AS 10 1.88 ± 0.07 *** 1 3.32 ± 0.34 * 0.1 4.54 ± 0.12 * HT 10 1.95 ± 0.07 *** 1 3.14 ± 0.35 * 0.1 4.58 ± 0.13 * CA 10 1.99 ± 0.09 *** 1 3.44 ± 0.28 * 0.1 4.51 ± 0.14 * JQ 10 2.07 ± 0.18 *** 1 3.49 ± 0.30 * 0.1 4.51 ± 0.07 *** LA 10 2.08 ± 0.11 *** 1 3.44 ± 0.16 *** 0.1 4.52 ± 0.12 * 表4. 各组对游离脂肪酸诱导HepG2细胞内TG含量的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 与模型组相比较， * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001。 注：N为正常对照组；C为模型组；Orli为奥利司他对照组；AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。 3.3. 金芪降糖方及其组分抑制HepG2细胞脂质蓄积的研究 3.3.1. 各靶点抑制剂/激动剂对诱导后HepG2细胞存活率的影响 如表5所示，各靶点抑制剂/激动剂对HepG2细胞都不具有细胞毒作用。 Table 5 The survival rate of HepG2 cells induced by various target inhibitors/agonist Groups Dose (μmol/L) Survival (%) N — 100 ± 0.01 Compound C 1 105.23 ± 2.65 IGF-1 50 µg/ml 106.56 ± 1.14 STO-609 1 108.03 ± 0.35 Cytochalasin B 10 108.78 ± 0.80 表5. 各靶点抑制剂/激动剂诱导后HepG2细胞的存活率(n = 6， x ¯ ± s ) 3.3.2. 金芪降糖方及其组分对HepG2细胞脂质蓄积作用机制的研究 1) AMPK抑制剂Dorsomorphin (Compound C)对金芪降糖方及其各组分抑制HepG2细胞内TG蓄积的影响。 如表6所示，与未添加抑制剂组比较，添加抑制剂组(JQ和CA)抑制细胞内TG蓄积的作用被减弱或消除。 Table 6 Effect of compound C on inhibiting the level of TG in HepG2 cell 分组 TG (mmol/L) Drug (10 µg/ml) +Compound C (1μmol/L) AS 0.48 ± 0.06 0.58 ± 0.04 HT 0.46 ± 0.03 0.51 ± 0.01 CA 0.39 ± 0.02 0.52 ± 0.02* JQ 0.39 ± 0.01 0.52 ± 0.02** LA 0.42 ± 0.04 0.55 ± 0.02 表6. Compound C对各组抑制HepG2细胞内TG水平的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 注：添加抑制剂组与药物组(Drug)比较， * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001；AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。 2) CaMKK抑制剂STO-609对金芪降糖方及其各组分抑制HepG2细胞内TG蓄积的影响 如表7所示，与未添加抑制剂组比较，添加抑制剂组的(AS、HT和JQ)抑制细胞内TG蓄积的作用被减弱或消除。 Table 7 Effect of STO-609 on inhibiting the level of TG in HepG2 cell 分组 TG (mmol/L) Drug (10 µg/ml) + STO-609 (1 μmol/L) AS 0.20 ± 0.01 0.27 ± 0.00*** HT 0.19 ± 0.01 0.25 ± 0.01* CA 0.17 ± 0.01 0.19 ± 0.01 JQ 0.20 ± 0.00 0.25 ± 0.01* LA 0.18 ± 0.02 0.22 ± 0.01 表7. STO-609对各组抑制HepG2细胞内TG水平的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 注：添加抑制剂组与药物组(Drug)比较， * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001；AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。 3) PI3K激动剂IGF-1对金芪降糖方及其各组分抑制HepG2细胞内TG蓄积的影响 如表8所示，与未添加抑制剂组比较，添加抑制剂的金芪降糖方及各组分抑制细胞内TG蓄积的作用均被减弱或消除。 Table 8 Effect of IGF-1 on inhibiting the level of TG in HepG2 cell 分组 TG (mmol/L) Drug (10 µg/ml) +IGF-1 (50 µg/ml) AS 0.15 ± 0.01 0.22 ± 0.01* HT 0.13 ± 0.01 0.21 ± 0.01* CA 0.17 ± 0.01 0.22 ± 0.00* JQ 0.17 ± 0.01 0.23 ± 0.01* LA 0.14 ± 0.01 0.22 ± 0.01* 表8. IGF-1对各组抑制HepG2细胞内TG水平的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 注：添加抑制剂组内与药物组(Drug)比较， * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001；AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。 4) GLUT4抑制剂Cytochalasin B对金芪降糖方及其各组分抑制HepG2细胞内TG蓄积的影响 与未添加抑制剂组比较，添加抑制剂的金芪降糖方及各组分抑制细胞内TG蓄积的作用均被减弱或消除，如表9。 Table 9 Effect of cytochalasin B on inhibiting the level of TG in HepG2 cell 分组 TG (mmol/L) Drug (10 µg/ml) +Glut4 (10 μmol/L) AS 0.31 ± 0.02 0.51 ± 0.03* HT 0.22 ± 0.03 0.51 ± 0.05* CA 0.39 ± 0.01 0.54 ± 0.01*** JQ 0.39 ± 0.02 0.52 ± 0.02* LA 0.37 ± 0.01 0.47 ± 0.02* 表9. Cytochalasin B对各组抑制HepG2细胞内TG水平的影响(n = 6， x ¯ ± s ) 注：添加抑制剂组内与药物组(Drug)比较， * P < 0.05， ** P < 0.01， *** P < 0.001；AS为黄芪总皂苷组；HT为黄芪总黄酮组；CA为黄连总生物碱组；JQ为金芪降糖方全方组；LA为金银花总有机酸组。