DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 结果分析 (1) 样本特征 本文对被调查者的性别、学历、所在企业工龄、职务等特征进行了频数统计。按照有效数占总数的百分比统计显示：被调查者男性占79.82%，女性占20.18%；被调查对象的学历基础是专科以下占15.35%，专科占40.35%，本科占33.33%，硕士及以上占10.96%；被调查者的职务分布是一般管理人员占40.35%，中层管理人员占36.4%，高层管理人员占23.25%；被调查者所在企业工龄5年以下占20.61%，5~10年占43.42%，10~15年占25%，15年以上占15.96%。被调查企业国企占32.05%，三资企业占16.67%，民营企业占51.28%，企业所属行业制造业占43.59%，非制造业占56.41%。 (2) 因子分析 为验证21个条目能否进一步转化成具有概念化意义的因子，本文采用主成份分析法并以特征值大于1为筛选条件来提取出因子。在进行因子分析之前，需要采用巴特利特球形检验和KMO检验方法进行分析。结果显示：巴特利特球形检验之卡方统计量的观测值为14403.141，其对应的机率p接近0，KMO 值为0.824，依据Kaiser对KMO之衡量标准可知原始变量适合进行因子分析。 经过统计分析软件 spss16. 0 进行分析，为使因子具有命名解释性，本研究采用变异数最大法对因子负荷矩阵实施正交旋转，结果如表1所示。 由表1可知，畅通有效的沟通平台、企业的领导体制、有效的激励机制、合理的人才培养体系、企业领导人的综合素、企业创新能力、危机处理能力、组织记忆能力、风险管理能力与企业的柔性程度在第1个因子上有较高的负荷，也就是说第1个因子主要解释了这几个变量，观察这些变量的原始问项，可发觉这些问项都是企业内部的硬实力的体现，因此第1个因子可命名为“企业制度与能力因子”；而企业内部人人受重视、人人受尊重的文化氛围、员工对企业价值观的认同感、企业员工的归属感、企业员工对企业的忠诚度、员工之间的团队合作精神和企业对员工的宽容程度在第2个因子上有较高的负荷，故第2个因子主要解释了这几个变量，而这些变量的原始题项都反映着企业内部的软性实力的体现，因此第2个因子将命名为“企业文化因子”。最后持续的创业精神、稳健的财务政策、多元化战略、企业的社会关系网络与积极履行社会责任在第3个因子上有较高的负荷，故第3个因子主要解释了这几个有关于企业外部的变量，所以第3个因子将命名为“企业战略与对外活动因子”。与旋转前的因子负荷矩阵相比，转轴后的因子涵义较为清晰、较具可命名性。 (3) 因子分析结果的呈现 一般情况下，因子分析的结果将有两个表来呈现：因子内容及因子负荷量表与因子信度与效度分析表。因子内容及因子负荷量表如表2所示，此表可显示出各因子所包含的题项与其贡献度，清楚的呈现出因子分析之结果。从表2可以看出这三类因子共解释了总方差的84.055%，其中企业制度与能力因子解释了总方差的37.841%，企业文化因子解释了总方差的25.440%，企业战略与对外因子解释了总方差的20.774%。 因子分析后，为了进一步了解问卷的可靠性与有效性，要做信度检验，同时亦可利用共通性(Communality)来检验建构效度分析。信度系数有多种，本文采用的是Cronbach’s α值来检验问卷的内部信度，它适用于项目多重记分的测验数据或问卷数据，可以用该系数测量李克特量表的信度 [ 7 ] [ 8 ] 。为进一步了解因子间的信度，对三个因子再进行信度分析，整理如表3所示，从表3中可知，各因子的信度 Table 1 Factor load matrix after rotatio Component 1 2 3 12.畅通有效的沟通平台 0.853 0.334 0.297 15.企业的领导体制 0.848 0.333 0.299 10.有效的激励机制 0.843 0.317 0.248 9.合理的人才培养体系 0.837 0.285 0.341 17.企业领导人的综合素 0.833 0.259 0.034 18.企业创新能力 0.829 0.226 0.241 11.危机处理能力 0.749 0.404 0.416 13.组织记忆能力 0.719 0.350 0.187 5.风险管理能力 0.691 0.308 0.562 1.企业的柔性程度 0.503 0.243 0.492 8.企业内部人人受重视、人人受尊重的文化氛围 0.254 0.862 0.343 4.员工对企业价值观的认同感 0.253 0.861 0.345 6.企业员工的归属感 0.528 0.786 0.158 2.企业员工对企业的忠诚度 0.528 0.782 0.160 16.员工之间的团队合作精神 0.459 0.780 0.297 21.企业对员工的宽容程度 0.251 0.760 0.416 7.持续的创业精神 0.145 0.268 0.881 14.稳健的财务政策 0.116 0.411 0.807 20.多元化战略 0.584 0.333 0.636 19.企业的社会关系网络 0.587 0.329 0.636 3.积极履行社会责任 0.469 0.147 0.631 表1. 旋转后的因子负荷矩阵 Cronbach’s α值都大于0.9，处于可接受的信度范围内，而本研究中各条目间的总的Cronbach’s α值高达0.9760，其所呈现的信度值高于一般水平，可知问卷之信度相当高。 效度(Validity)，又称有效性，指的是测量工具或手段能够准确测出所需测量的事物的程度。因子分析的最终目的就是要求得量表的构建效度。如果根据理论假设结构编制了一份测试量表，经实际测试后，被试者所得的实际分数，经统计检验能有效解释被试者的心理特质，则表明该量表有良好的构建效度[ 9 ] 。从表3中可知，每个因子的Cronbach’s α值均大于该因子与其他因子的相关系数，每个条目与其所属因素的相关系数均大于与其他因素的相关系数，具体来讲，各条目之共通性方面，则全部都大于0.5，所以 Table 2 Factor content and factor load mete 因子名称 题项内容 因子负荷量 特征值 解释变异量 累积解释变异量 企业制度与能力因子 12.畅通有效的沟通平台 0.853 7.947 37.841 37.841 15.企业的领导体制 0.848 10.有效的激励机制 0.843 9.合理的人才培养体系 0.837 17.企业领导人的综合素 0.833 18.企业创新能力 0.829 11.危机处理能力 0.749 13.组织记忆能力 0.719 5.风险管理能力 0.691 1.企业的柔性程度 0.503 企业文化因子 8.企业内部人人受重视、 人人受尊重的文化氛围 0.862 5.342 25.440 63.281 4.企业员工对企业价值观的认同感 0.861 6.企业员工的归属感 0.786 2.企业员工对企业的忠诚度 0.782 16.员工之间的团队合作精神 0.780 21.企业对员工的宽容程度 0.760 企业战略 与对外活动因子 7.持续的创业精神 0.881 4.363 20.774 84.055 14.稳健的财务政策 0.807 20.多元化战略 0.636 19.企业的社会关系网络 0.636 3.积极履行社会责任 0.631 表2. 因子内容及因子负荷量表 本问卷亦有相当不错的建构效度。
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user: 4. 研究结论 本文经过文献探索并对企业免疫力影响因素进行实证分析结论如下：经过问卷调查统计分析得知企业管理者认为影响企业免疫力的21个条目可归为三个因子即：企业制度与能力因子、企业文化因子、企业战略与对外活动因子。这三类因子成为了企业提升免疫力的切入点。 第一，企业文化是影响企业免疫力的关键因子。只有构建了人人受重视、人人受尊重、宽容的企业文化，才能强化员工对企业价值观的认同感，员工才有更强的归属感和忠诚度，不管遇到任何问题，员工都会与企业一起共同应对，不离不弃，企业的免疫力才能从根本上得到提高。 第二，企业制度与能力因子是企业免疫力的基础因子。没有健全的、员工广为认可的制度，或者有好的制度得不到有效的执行，相当于企业内部不通畅，好比企业的任督二脉没有打通；而能力过弱，则相当于企业的内功不够深厚，企业的体抗力过于低下，是难以让企业长久的生存下去的。 Table 3 Factor reliability and validity analysi 因子名称 题项内容 信度值 共通性 企业制度与能力因子 12.畅通有效的沟通平台 0.9693 0.927 15.企业的领导体制 0.919 10.有效的激励机制 0.872 9.合理的人才培养体系 0.898 17.企业领导人的综合素质 0.762 18.企业创新能力 0.796 11.危机处理能力 0.898 13.组织记忆能力 0.674 5.风险管理能力 0.888 1.企业的柔性程度 0.554 企业文化因子 8.企业内部人人受重视、人人受尊重的文化氛围 0.9713 0.926 4.企业员工对企业价值观的认同感 0.924 6.企业员工的归属感 0.921 2.企业员工对企业的忠诚度 0.916 16.员工之间的团队合作精神 0.908 21.企业对员工的宽容程度 0.813 企业战略与对位活动因子 7.持续的创业精神 0.9198 0.869 14.稳健的财务政策 0.834 20.多元化战略 0.857 19.企业的社会关系网络 0.858 3.积极履行社会责任 0.639 表3. 因子信度与效度分析表 第三，企业的战略与对外活动因子是保障企业免疫力的支撑因子。好的战略可以让企业避免遇到大的风险和危机，有效的对为表现，相当于赢得了外部支持，缺少外部支持，犹如人感冒了没有了帽子和外套的保护一样，病情会更加恶化。而社会关系网络和社会责任的履行在发展中所起到的作用越来越明显，企业要更加的重视。
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user: 摘 要 在分析网络安全传输技术基础上，针对网络互联安全控制系统应用场景设计了一个网络安全传输系统框架，提出了一套相应的安全认证协议，并对安全认证协议进行了网络攻击的安全性分析。 关键词 :网络安全，认证，网络互联安全控制系统
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user: 1. 引言 随着互联网技术的迅猛发展，网络规模的不断扩大，网络给人们带来不少便利，网络信息安全问题也日益突显。如何抵御来自网络的各种攻击，让信息在互联网中安全传输成为网络应用的关注点，网络信息安全技术也一直成为研究热点。自2013年美国“棱镜”计划曝光以来，网络安全问题更上升到国家战略安全层面。 目前各大企业部门为保证网络信息安全，大多采用防火墙隔离方法。通过这种方法，虽然可以建立一个较为安全的内部局域子网络，网内信息交互安全也可以得到较好的保证，但是对于跨越子网络的信息传输安全此方法则显得无能为力。信息安全传输技术就是为解决这类问题而出现的网络安全技术，其主要负责保护信息在网络传输过程中的安全，防止信息被非法用户获取或窜改。利用该技术所实现的信息安全传输系统(以下简称安全传输系统)目前已被广泛应用到各个领域。 网络互联安全控制系统(以下简称安全控制系统)作为安全传输系统的核心硬件设备，是一台处于外网与子网(安全网络)之间，起着网关兼防火墙作用的安全控制设备。它依据逻辑隔离条件下的数据共享传输需求，面向局域网络的受控接入和互联控制，监控进出子网的报文并进行报文进出控制，达到信息安全控制与传输安全的目的。 安全传输系统为保证信息的安全传输，在进行报文传输之前，必须对整个系统的硬件设备进行安全认证，以确保信息发送者和接收者的身份真实性。安全认证的核心为安全认证协议，安全认证协议以密码学为支撑，是一套在特定的网络拓扑结构下，依赖相关的网络安全设备，检验网络设备之间的身份真实性的网络协议规范。它的最终目标是保证设备之间交换信息的真实性和不可否认性。为了达到以上目标，安全认证协议会涉及到设备之间的信息交换，可信第三方或者会话服务器的参与，根据认证的流程和方式不同，安全认证协议可分为具有可信第三方的对称密钥协议、无可信第三方的对称密钥协议、具有第三方的公开密钥协议、无可信第三方的公开密钥协议、应用密码校验函数的认证协议和对称密钥重复认证协议六类。目前比较主流的认证协议有RADIUS、TACACS、Kerberos等认证协议。 本文以跨网络信息安全传输为应用背景，设计一套信息安全传输系统，提出一套安全认证协议并进行协议的安全评估，以保障信息安全传输。
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user: 2. 基于网络互联安全控制系统的信息安全传输系统框架设计 信息安全传输系统是为解决网络信息传输安全问题而设计的一套完整的安全系统，其结构如图1所示。 硬件层为整个系统提供硬件支撑，主要包括网络架构和硬件设备两部分。网络架构即整个系统的网络拓扑结构，是由实际应用需求所决定；硬件设备主要由信息终端、路由设备和网络互联安全控制系统组成，其中网络互联安全控制系统为硬件层的核心部件。 图1. 安全传输系统体系结构 软件层负责整个系统的运行与管理，并为用户提供友好的交互界面。其内部又可分为系统软件、管理控制软件和安全协议，系统软件直接与硬件交互，为管理控制软件提供运行平台；管理控制软件负责与用户进行交互，并根据用户的指令对整个系统进行管理和控制；安全协议为系统各个设备之间信息交互提供通信规范，它的最终目的是实现网络信息传输的保密性、完整性和真实性，安全协议由安全认证协议和安全通信协议组成，安全认证协议负责验证信息交互的设备真实性并完成对通信密钥的交换，安全通信协议负责信息传输过程中的安全性。 本文针对跨网络信息传输的实际安全需求，基于网络互联安全控制系统为核心，结合互联网相关技术，设计一个安全传输系统框架，其总体结构如图2所示。 安全控制系统B安装在内部安全网1与外部网络之间，负责内部网1的边界安全；安全控制系统C安装在内部安全网2与外部网络之间，负责内部网2的边界安全。如果终端A与终端D需要通信，由于两个终端不在一个内部网络中，所以必须通过外部网络传输实现，A首先与安全控制系统B建立会话并将信息发送至B，然后B与C利用安全隧道技术 ② 建立安全会话通道，通过安全会话通道将信息发送至C，最后信息通过C发送至目标终端D，整个传输流程完成。B与C通信期间虽然跨越了外部网络，但是由于使用了安全会话通道，因此传输信息的安全性得到保证，通过整个传输过程，信息可以安全的在A与D之间交互，就好像两个终端处于同个安全子网中传输一样。 安全传输系统在正常运行前，必须对系统中所有设备的身份真实性进行认证。对通过身份认证的设备，系统对其提供正常服务，如果发现身份无法通过的设备，该系统会拒绝该设备接入，并发出报警，因此安全认证对安全传输系统至关重要。
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user: 3. 安全认证协议设计与安全性分析 针对安全传输系统框架的应用需求，本文设计一套安全认证协议，用以检测系统设备身份的真实性。认证协议利用高效率传输的UDP协议进行通信，并采用签名应答机制防止报文错误和丢包现象出现，如果认证过程中的任何流程环节出现报文错误或丢包现象，认证设备之间将会重启一个新的认证流程并对失败认证进行计数，失败次数超出阈值即判定认证失败。因为内部网络和外部网络安全风险及应用需求的不同，两种网络分别采用两种认证方式：内部网络中，终端和安全控制系统之间的认证采用以用户为认证主体的基于用户口令的双向认证方式；外部网络中，安全控制系统与安全控制系统之间采用以设备为认证主体的基于数字证书的双向认证方式。 3.1. 基于用户口令的双向认证协议 基于用户口令的双向认证，采用无可信第三方的对称密钥认证方法。协议要求参与主体双方都事先共享只有他们两人知道的秘密信息，并且知道秘密信息与协议主体的对应关系。 图2. 网络互联安全传输系统框架结构 3.1.1. 协议流程 (1) ClientHelloA→B: A， B， (N A ♁K AB )， H(A， N A ， K AB ) (2) ServerHelloB→A: B， A， (N B ♁K AB )， H(B， N B ， K AB ， N A ) (3) ClientFinishA→B: A， B， H(N A ， N B ， K AB ) 3.1.2. 符号说明 A， B: 协议主体ID，代表认证双方的身份标识。 N A ， N B : A， B产生的随机数。 H(…): 基于密钥的哈希函数，对括号内的数据求哈希值。 K AB : A、B预先共享的秘密信息，为用户A的口令哈希值，即K AB = H(A_password)。 (a♁b): 操作数a和操作数b的异或值，所得结果与操作数a字节位数相同。 3.1.3. 协议分析 (1) 通过ClientHello，B可利用共享的K AB 获得N A ，计算H(A， N A ， K AB )，并与其收到的哈希值比较，如果匹配，那么B确信NA是有效的。 (2) 通过ServerHello，A可利用共享的K AB 获得N B ，计算H(B， N B ， K AB ， N A )，并与其收到的哈希值比较，如果匹配，那么A确信B生成和发送了这个包含可信任信息新鲜标识符N A 的哈希值，因为只有B和A拥有共享秘密K AB 。因此B的主体活现性得到了认证，消息的新鲜性得到了保证。 (3) 通过ClientFinish，B确认了A的主体活现性，消息的新鲜性得到了保证。 综上所述，协议运行结束后，确认了A， B主体活现性、消息的新鲜性，达到了双向认证的安全目标。 3.2. 基于数字证书的双向认证协议 3.2.1. 协议流程 (1) ClientHello A→B: Cert A ， A， N A ， [A， N A ] (2) ServerHello B→A: Cert B ， {B， N B ， N A ， [B， N B ， N A ] }K A (3) ClientFinish A→B: {A， N A1 ， N B ， [A， N A1 ， N B ] }K B (4) ServerFinish B→A: {N A1 ， [N A1 ] }K A 3.2.2. 符号说明(未提及符号参照基于口令的认证协议) Cert A ， Cert B : A，B的数字证书。 K A ， : A的公钥和私钥。 K B ， : B的公钥和私钥。 N A1 : A产生的不同于N A 的随机数。 {…}K: 使用密钥K对{}中的消息进行加密。 […]K: 使用密钥K对[ ]中的消息进行签名。 3.2.3. 协议分析 (1) 通过ClientHello，B只能确定消息是用证书Cert A 的私钥签名的，但不能进一步确定其他信息。 (2) 通过ServerHello，A确信收到的消息是新鲜的，确认了B的活现性，B的身份验证通过。 (3) 通过ClientFinish，B确认收到的消息是新鲜的，确认是与真实的A进行通信，保障了A的活现性。 (4) 通过ServerFinish，A再次确认收到的消息是新鲜的，是与真实的B进行通信，B是活现的。 综上所述，在协议双方确认A的证书为Cert A ，B的证书为Cert B 的前提下，协议运行结束后，确认了A、B主体活现性、消息的新鲜性，同时协议生成的N A1 ，N B 具有保密性、新鲜性 ③ 、主体关联性，具有双向认证安全、双向密钥协商安全、双向密钥传输安全。另外，通过共享的N A1 ，N B 作为密码材料，可生成用于安全控制设备之间建立安全通道的密钥，用于保护安全通道的参数协商。 3.3. 协议安全性分析 当今互联网络环境变幻莫测，网络攻击处处存在，安全认证协议设计的最终目的也是为了应对来自网络的各种威胁，目前针对认证协议的攻击主要有重放攻击和中间人攻击两种。 3.3.1. 重放攻击 重放攻击[ 1 ] 又称重播攻击、回访攻击或新鲜性攻击，是指攻击者发送一个目标主机已接收过的数据报文，来达到欺骗系统的目的。攻击者还可利用重放方式大规模地发送数据报文，侵占目标主机的正常带宽和系统资源，导致正常的服务响应延迟或者中断，最终达到拒绝服务的目的。 针对重放攻击行为，本文中的两种认证协议均采用随机数验证的方式进行防御，即两种协议中的N A ， N B ， N A1 三个随机数既有作为密码材料的功能，又起着抵御重放攻击的作用。目标主机可以针对收到的随机数建立一个随机数缓存表，在一定时间内，收到相同随机数的同类报文，目标主机可直接予以丢弃，不予理睬，已达到防御重放攻击的目的。 3.3.2. 中间人攻击 中间人攻击[ 2 ] 是一种“间接”的入侵攻击，这种攻击模型是通过各种技术手段将攻击计算机虚拟地放置在两台通信计算机之间，通过伪造数据报文的方式与两台通信计算机通信，使得两台通信计算机误认为通信正常，而攻击者从中获取有用信息。 抵御中间人攻击的最有效方式是让攻击者无法伪造通信双方的数据报文，在基于口令的认证协议中，由于中间人不知道用户口令，即无法获取K AB 值，因此，(N A ♁K AB )，H(A， N A ， K AB )， (N B ♁K AB )， H(B， N B ， K AB ， N A )， H(N A ， N B ， K AB )字段也无法伪造，从而达到防御的目的；在基于数字证书的认证协议中，由于 ， 只有A和B两个设备知道，那么攻击者也无法伪造[A， N A ] ， [B， N B ， N A ] ， [A， N A1 ， N B ] ，[N A1 ] 字段，至使中间人攻击失败，最终保证信息的真实性。
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user: 4. 结语 近些年互联网的高速发展，网民人数越来越多，特别是移动终端的普及，对网络的安全性提出了更高更特殊的要求，在这种背景下，改进和设计新的认证协议以适应新的网络环境成为网络技术中研究的重要问题，目前许多安全认证协议都具有各自的特点，能够在特殊的环境中起着良好的保护效果，但是一些比较通用的认证协议在某些特殊领域安全防护性相对较差。由此可见，未来安全认证协议的发展必然会根据不同领域的实际需求量身定做，设计出适用于该领域的真正有效的安全认证协议。
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user: 摘 要 糖原合成酶激酶-3 (Glycogen Synthase Kinase-3， GSK3)主要有GSK-3α和GSK-3β两种亚型，二者在催化活性区域具有高度的同源性。GSK3β可以参与包括Wnt信号在内的多个信号通路的调控，影响正常细胞的生存并参与肿瘤的发生与发展。本文以牙鲆为材料，通过基因克隆得到GSK-3α，GSK-3β和GSK3β-like 3个亚型，NCBI序列比对并经NJ法构建系统进化树，结果显示GSK3β-like亚型是海洋鱼类所特有的。同时，Megalign蛋白序列比对及SMART结构预测显示3个不同亚型的功能结构域高度同源；但qRT-PCR结果显示，GSK3β在胚胎发育时期的表达量明显高于另外两个亚型，这可能与GSK3β在多种生物学过程中发挥主要作用相关。 关键词 :牙鲆，糖原合成酶激酶-3，Wnt信号，胚胎发育
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user: 1. 引言 糖原合成酶激酶-3 (GSK-3)是一种在进化上非常保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，普遍存在于哺乳动物真核细胞中[ 1 ] 。它最早是在兔骨骼肌的分次提取物中被分离出来，在哺乳动物中主要有两种亚型，即GSK-3α和GSK-3β，二者在催化区域具有高达98%的同源性 [ 2 ] ，在N端和C端的非催化功能区同源性较差，是参与肝糖代谢的关键酶。 GSK3β功能多样，研究也最多。不但可以通过对底物的磷酸化实现对Wnt信号通路的调控 [ 3 ] ，还可以在PI3K/Akt信号通路中作为下游蛋白，与AKT发生直接作用 [ 4 ] 。同时，它还是胰岛素信号通路的关键调节因子。GSK3β可以根据底物不同参与多个信号通路的调控，如底物磷酸化，亚细胞定位等 [ 5 ] 。通过与多种蛋白及转录因子相互作用，参与细胞的增值、分化及凋亡等一系列生理过程 [ 6 ] 。近年来研究发现，它还在癌症、神经精神类疾病的发病机制中具有重要作用，能够在癌细胞转录、细胞周期加速、肿瘤细胞的侵袭与转移等多个过程中起调控作用，GSK3β是众多恶性肿瘤中的关键激酶，虽然在肿瘤发生中的具体效应还不确定，在肿瘤发生中的作用已经被充分证实 [ 7 ] 。众多研究发现，肿瘤中无论Wnt/β-catenin通路还是PI3K/Akt信号通路通常都会处于异常活跃状态，在许多肿瘤如胃癌，结直肠癌、胰腺癌中都可检测到活化的GSK3β的高表达情况 [ 8 ] [ 9 ] 。因此GSK-3β在近年来成为多种疾病治疗中备受关注的可能靶点，受到越来越多研究者的重视 [ 10 ] 。 本篇文章通过分子克隆得到牙鲆GSK-3基因的GSK-3α，GSK-3β和GSK-3β-like3种亚型，并通过序列比对，蛋白结构预测及系统进化等对牙鲆GSK-3的3个不同亚型进行初步分析，并通过qRT-PCR研究了牙鲆GSK-3基因在早期胚胎发育过程中的时空表达变化。
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user: 2. 材料及方法 2.1. 胚胎样品的获取及处理 体外自然受精的牙鲆卵至于23℃ (上下浮动1℃)的新鲜海水中孵育，期间保持充气，并隔日更换新鲜海水。分别取受精卵、2细胞、16细胞、桑椹胚、高囊胚、原肠期(原肠早期、原肠晚期)、神经胚、尾芽、出膜期、出膜后、出膜12 h、出膜1 d和出膜36 h共14个胚胎发育早期典型时期的胚胎和仔鱼置于1.5 ml RNA-free的离心管中，每管固定30枚胚胎。经PBS两次清洗后置于液氮中速冻，最后转移至−80℃中保存备用(注：因为没有关于胚胎发育时期该基因表达量的相关报道，我们只是随机挑取了14个胚胎发育时期进行检测)。 2.2. 总RNA的提取及定量模板的体外合成 利用Trizol试剂法提取牙鲆各胚胎组织总RNA，经苯酚/氯仿初步纯化后利用异丙醇沉淀RNA。初步纯化的RNA加入DNaseI去除DNA杂质后利用RNA clean纯化试剂盒(博迈德)除去残留的蛋白质，最后利用M-MLV反转录体系(Takara)体外反转录得到定量模板cDNA。 2.3. 蛋白功能结构域预测分析 利用SMART在线网站初步预测牙鲆GSK蛋白的保守功能结构域，然后绘制牙鲆GSK蛋白家族的一级结构示意图。 2.4. 系统进化分析 通过NCBI网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term=GSK)获得哺乳动物(人及家鼠)，两栖类(非洲蟾蜍)，淡水鱼类(斑马鱼)及部分海水鱼(半滑舌鳎，大黄鱼，眶锯雀鲷)的GSK3基因氨基酸序列，利用MEGA6软件，将上述7个物种的氨基酸序列与我们经分子克隆得到的牙鲆GSK3基因各亚型的氨基酸序列以邻位相连法(NJ)进行系统进化分析，并构建系统进化树。 2.5. qRT-PCR 体外反转录得到的牙鲆胚胎各时期的cDNA，稀释到20 ng/μl作为荧光定量PCR的模板。通过IDT在线网站设计各基因的荧光定量引物，GSK3α-Fw：GGTAGGATGTTTGGGAGATGAG；GSK3α-Rv：ACCA CGGCCACACATAAA。GSK3β-Fw：CTCTGCCCTGGTTCATCTTT；GSK3β-Rv：CTCTGCCCTGGTTCATC TTT。GSK3β-like-Fw：CAGCTAAACTCGACCCTCATC；GSK3β-like-Rv：TGGTACTGAACT。内参基因选取的是18S rRNA，其中18S rRNA-Fw：GGTAACGGGGAATCAGGGT；18S rRNA-Rv：TGCCTTCCTTG GATGTGGT。但因为18S rRNA在组织中表达量极高，我们首先通过等比稀释将其模板稀释1000倍。运用Light Cycler 480 (Roche Applied Science)进行qRT-PCR扩增，反应条件是95℃预变性 (5 min)，然后(95℃ 15 s， 60℃ 45 s)共45个循环。每个样品重复3次，取其平均值。 2.6. 数据分析 通过2 − △△ CT 法对3个基因qRT-PCR所得到的结果进行数据处理，根据分析得到的GSK3基因和18S rRNA内参基因的拷贝数，计算出目的基因的相对表达量。最后用Prism6软件分析作图并利用SPSS 20.0软件进行方差显著性分析。
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user: 3. 结果 3.1. 牙鲆GSK3三种亚型基因的克隆及蛋白功能结构域 通过PCR扩增发现牙鲆GSK3基因包含3个亚型，GSK3α基因全长1323 bp，编码440个氨基酸；GSK3β基因全长1278 bp，编码425个氨基酸；GSK3β-like基因全长1320 bp，编码439个氨基酸(图1)。 图1. 牙鲆GSK3基因序列 然后通过SMART在线网站预测牙鲆GSK3基因的蛋白功能结构域，绘制出蛋白的一级结构示意图(图2)，发现3个基因均含有位于中间的大小约为285个(GSK3β为289个)氨基酸的S — TKc蛋白激酶催化活性功能域，并表现出高度的保守性。在S — TKc功能结构域处具有高达90%的序列同源性，其中催化活性位点、ATP结合位点，底物结合位点以及下游Axin蛋白结合区域氨基酸序列完全相同，这也验证了GSK3不同亚型在蛋白功能结构域上的高度保守性(图3)。然而3个基因在N端及C端序列差异较大。GSK3β基因与另外两个基因相比，在N端有一段20多个氨基酸的缺失，并在C端区多了10个氨基酸左右的片段。GSK3β与另外两个基因在N端及C端序列及结构上的差异对其功能上可能存在的影响仍不清楚。 3.2. GSK3系统进化分析结果 从NCBI上下载得到已公布的部分物种的GSK3基因序列，鱼类中包括淡水鱼斑马鱼，海水鱼中的大黄鱼，眶锯雀鲷以及半滑舌鳎，两栖类中选取的是是非洲蟾蜍，哺乳类动物选取小鼠和人。将上述物种的氨基酸序列，与克隆得到的牙鲆GSK3基因氨基酸序列一起进行分析，利用MEGA 6.0软件，通过NJ法构建GSK3基因系统进化树(图4)。 结果显示：1) GSK3β-like这个亚型只在海水鱼类中存在，且与鱼类的GSK3α首先聚为一支，然后再与两栖类及哺乳类的GSK3α聚在一起，说明GSK3β-like是进化过程中产生的海水鱼类所特有的一个新的GSK3亚型。2) 牙鲆GSK3在进化关系上与大黄鱼和眶锯雀鲷亲缘性最高，且GSK3α与GSK3β两个亚型在系统发生上完全一致，这也表明了GSK3基因在进化上的保守性。 3.3. GSK3基因在牙鲆胚胎发育早期的的qRT-PCR表达分析 牙鲆胚胎发育各时期中GSK3基因定量结果显示：在受精卵中就能检测到GSK3三种亚型的表达，表现为母源性表达(图5)。由图可知，GSK3各基因在牙鲆胚胎发育各时期中表达量并不高，且表现出基本一致的表达变化趋势：合子开始发育到2 cell，GSK3三种亚型表达量先是明显下调，然后表达量上升，16 cell后表达量开始逐渐下降，原肠胚开始后表现为显著下调，可能是由于原肠作用影响。发育到神经胚后表达量表现出一次显著升高并维持在较高的表达水平直到出膜期，GSK3三种亚型从出膜期开始表达量再次显著下降，直至出膜后1天才表达量开始上升。GSK3β与GSK3β-like的表达量都在出膜期达到最高，而GSK3α的表达量在受精卵时期表现最高。 图2. 牙鲆GSK3蛋白一级结构示意图 图3. 牙鲆GSK3基因氨基酸序列比对 图4. 牙鲆GSK3基因蛋白系统进化分析 图5. 牙鲆GSK3基因胚胎发育时期qRT-PCR分析 但值得注意的是，GSK3β基因在牙鲆胚胎发育时期的时空表达表现出与另外两个基因略有不同的变化趋势。1) 从受精卵时期到囊胚期，与另外两个基因相比，GSK3β基因的表达量一直较低，但发育到体节期后，其表达量突然显著升高，远远高于另外两个基因。这种高表达可能与GSK3β在Wnt信号通路及其它生物学过程中发挥主要作用相关。2) 从高囊胚期到体节期，GSK3α与GSK3β-like都表现出逐渐下降的表达趋势，而GSK3β的表达量先升高，在原肠晚期才出现显著下调。囊胚期及原肠期的表达差异可能与各基因在胚层形成及运动过程中发挥不同作用有关。 综上可得：除GSK3α外，GSK3β与GSK3β-like的表达量都在出膜期达到最高。且GSK3β在胚胎发育时期的表达量明显高于另外两个基因，可能与GSK3β在多种生物学过程中发挥主要作用相关。
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user: 4. 讨论 糖原合成酶激酶-3 (GSK-3)在哺乳动物中主要有两种亚型，即GSK-3α和GSK-3β，本次实验通过分子克隆得到牙鲆GSK-3基因的3种亚型：GSK-3α，GSK-3β和GSK-3β-like，通过NCBI序列比对及系统进化分析可得，GSK-3β-like亚型为海洋鱼类所特有。但有意思的是：GSK-3β-like与GSK-3α氨基酸序列一致性(95%)显著高于GSK-3β (88%)。而系统进化分析也显示，海洋鱼类GSK-3α首先与GSK-3β-like聚为一支，然后再与哺乳类及两栖类的GSK-3α聚在一起，也说明GSK-3α与GSK-3β-like在进化关系上更为接近。 X射线晶体衍射显示：GSK-3β蛋白结构包括三个部分：由7个β片层形成一个β-桶结构的氮端区域，中间铰链区域以及C端α螺旋区域(PDB ID: 1PYX)。通过SMART在线网站预测并绘制出的牙鲆GSK蛋白的一级结构示意图显示：GSK-3β的S — TKc蛋白激酶催化活性功能域位于中间56-344氨基酸区域，且该功能域在三个亚型中高度保守，序列同源性高达96%。但它们在两端的同源性仅36%，且GSK-3α和GSK-3β-like与GSK-3β相比，在N端有一个20个氨基酸左右的延伸。GSK-3β与其它亚型在催化功能区的高度保守以及在N端结构上的差异导致它们虽然功能上代偿但又存在某些差异。GSK-3α和GSK-3β有着相似的功能，都可以参与软骨细胞分化，调控Wnt信号通路 [ 11 ] [ 12 ] ，但两者的功能并不能相互替代。小鼠GSK-3β基因敲除实验发现，敲除GSK-3β基因后，早期胚胎发育正常，但敲除GSK-3β基因的小鼠出生13.5~14.5天后会死于肝退化，说明GSK-3a可以一定程度上功能性地弥补GSK-3β的缺失，在发育中也具有非常重要的作用，但这两种亚型在功能上仍存在某些差异 [ 13 ] 。 另外，二者在心脏发育过程中也发挥不同的作用，心肌细胞的存活离不开GSK3α，而GSK3β负责调控心脏的定位及左右分布 [ 7 ] 。 GSK3最初是从骨骼肌中分离出来的，但在哺乳动物各组织中普遍表达，其中GSK3β在脑组织中具有显著高表达，尤其是神经元细胞中。这是由于GSK3β在神经信号通路中发挥重要作用，参与轴突的生成。在牙鲆胚胎发育时期，GSK3三种亚型均表现为母源性表达，其中GSK-3α和GSK-3β-like表达量较低，且呈现基本一致的表达变化趋势，而GSK3β基因在发育早期表达量较低，但发育到体节期后，其表达量突然显著升高，远远高于另外两个基因，这种高表达可能与GSK3β在多个信号通路及生物学过程中发挥主要作用相关。 GSK3β是Wnt/β-catenin信号通路中的成员，能够通过对β-catenin激酶磷酸化作用调控Wnt信号通路的活化或失活，在通路中与Wnt一起充当正调节因子。GSK3β在调节细胞增殖与凋亡，微管动力学及细胞运动和血管生成中均具有重要作用 [ 14 ] 。越来越多的研究发现，GSK3β还能在癌细胞转录、肿瘤细胞的侵袭与转移等多个过程中起调控作用，是众多恶性肿瘤中的关键激酶。鉴于GSK3β的多元化作用及其在不同肿瘤中发挥不同的调控作用，学者们猜测其可能成为新的肿瘤的治疗靶点 [ 4 ] 。 在斑马鱼中的研究表明：GSK3β抑制剂化合物处理会引起芽基细胞核内β-catenin的积累、Wnt/β-catenin信号通路下游基因lef1和shh表达上调，促进再生组织中细胞的增殖并最终促进斑马鱼再生过程中的骨生长 [ 15 ] 。另有报导：抑制GSK3β能够激活BMP信号并较少SOST的表达从而引起成骨细胞的分化增强。这些研究都证实了GSK3β在Wnt/β-catenin信号通路中发挥着重要作用。而大黄鱼肝脂质沉积实验表明：GSK3β/β-catenin可能通过peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ)来参与调控大黄鱼肝脏中fatty acid synthetase (FAS) and lipoprotein lipase (LPL)的形成，并最终抑制肝脂质沉积 [ 16 ] 。 因此开展对于牙鲆GSK3基因结构、系统发生及其在牙鲆胚胎发育早期的表达变化的基础研究，对于我们更好地理解其在Wnt信号通路中的分子作用机制以及后续开展GSK3基因的功能验证具有重要意义，也为我们更深入了解其对于牙鲆早期生长发育的可能调控作用打下基础。
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user: 5. 结论 1) 本文通过基因克隆得到了牙鲆GSK3基因的三个不同亚型：GSK-3α，GSK-3β和GSK3β-like，其中NCBI比对及系统进化分析显示GSK3β-like亚型是海洋鱼类所特有的，且在进化关系上与GSK-3α更为接近。 2) 氨基酸序列比对结果显示：三个亚型的S — TKc蛋白激酶催化活性功能域高度保守，但在N端和C端的非催化功能区同源性较差。 3) 牙鲆胚胎发育各时期GSK3基因定量结果显示：GSK3α的表达量在受精卵时期表现最高，而GSK3β与GSK3β-like的表达量都在出膜期达到最高，且GSK3β在胚胎发育时期的表达量明显高于另外两个基因，这可能与GSK3β在多种生物学过程中发挥主要作用相关。
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user: 摘 要 在城市交通系统中，城市居民的出行分布研究很重要。本文在一定假设条件下， 运用概率统计理论推导居民出行距离的概率分布函数形式。在国内外相关研究的基础上，通过国内26个城市居民出行样本数据的计量分析，验证该假设条件的合理性，分析了函数参数的相关影响因素，如城市规模、城市人口和交通结构等，对其进行量化与非线性回归，得出居民出行距离的概率分布函数的一般形式，并最终推导出城市居民出行距离的一般公式。本文研究成果可以为城市发展和城市交通规划提供实用的参考借鉴价值。 关键词 :城市交通，出行距离分布，参数分析，非线性回归
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user: 1. 引言 随着我国城市规模的不断扩大，人口数量的增加，城市居民的出行越来越频繁，日益严重的交通问题极大地影响了城市的发展进程，对城市居民出行特征的研究是解决交通问题中非常重要的工作。城市规模的效益随着城市人口的扩大而递增。城市的经济水平并不直接影响居民的出行特征，但它与居民的家庭收入和城市的交通设施和服务的水平密切相关。城市经济水平越高，城市用于交通设施的建设投入越多，交通系统的服务水平、类型、数量、质量才越高。城市经济水平越高，居民的就业机会和收入越高，家庭的收入水平越高，购买交通工具的能力越高，选择合适的交通方式的机会越高，其日常活动的范围较大，每次出行的平均距离也相对较远。本文从我国城市交通实践出发，通过计量实证分析，探寻影响我国城市居民出行距离的因素，为交通政策的制定提供基础性依据。 国外学者对城市居民出行影响因素做了大量的实证研究，史密斯(Schmitz)对前西德通勤区域的调查发现，出行距离随着城市人口规模的扩大相应增加[ 1 ] 。塞维罗(Cervero)通过对1985年全美住户调查数据的分析发现，提高开发密度并结合土地的混合利用，可以降低机动车的出行距离[ 2 ] 。国外的交通工程经典书籍在描述重力分布模型的阻抗函数时提供了幂函数与指数函数，讨论了二者在应用中的局限性，并创新性的提出Gamma函数，此函数的最大特征是出行率随距离先增大后减小，但该书并未就这个问题作深入探讨，只给出Gamma函数的简单形式[ 3 ] [ 4 ] 。 国内学者对于城市交通出行影响因素的研究相对较少，且大多局限于定性描述或经验总结上，认为随着城市规模的扩大，一般会带来平均出行距离的增加，而出行次数则相对减少。主要有颜敏提出的居民出行距离影响因素，从出行主体心理和个性特征分析我国城市居民的出行距离特征，提出了出行距离影响度概念[ 5 ] 。刘伟平提出的负指数分布，证明了出行距离服从负指数分布。文献用实例证明了这一分布函数的可靠性，但实例中的数据均为区域交通出行距离[ 6 ] 。陈尚云等通过建立数学模型，模拟城市土地利用形态的不同种类，计算城市出行总量的距离分布和空间分布，总结出反映城市出行总量距离分布的二阶爱尔兰分布模型[ 7 ] 。石飞在研究刘伟平和陈尚云的研究结论局限性的基础上，运用概率统计理论证明出行距离符合瑞利分布，并界定了特大城市、大中城市分布函数的取值范围[ 8 ] 。 纵观近年来的国内外研究成果，多因素定量化分析成为趋势，国内学者在定性分析的基础上也开始进行定量研究，但大样本量的计量检验还不多。本文在回顾国内外研究成果及利弊分析后，从理论推导和试验的双重角度研究显得更为科学和实用。在一定假设条件下，运用概率统计理论推导居民出行距离的概率分布函数形式，并对函数参数影响因素分析，得出城市居民出行距离的一般公式。
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user: 2. 出行距离概率分布函数形式的确定 我们先通过概率论推导出行距离分布的一般函数形式。由随机理论的观点可知，车辆或居民从出发地到目的地的出行距离，是一随机变量 。对于已出行了 距离的车辆，本文假设在以后的 距离内终止的概率应与已出行的距离 成正比[ 9 ] ，这一概率为： (1) 式中： 为不依赖于 和 的常数 ； 为 的高阶多项式。 等式左边为条件概率，进一步换算得： (2) 所以： (3) 求解线性微分方程，联系初始条件 为0，可得出行距离分布函数和密度函数分别为： (4) (5)
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user: 3. 城市出行距离分布的拟合 在推导得出距离分布属于瑞利分布函数后(见图1)，我们用已有城市的出行距离资料来进行拟合。Origin软件对收集的26个城市的出行数据进行拟合，拟合参数只有 。由于部分出行距离较大，考虑到调查和统计误差，我们进行分段统计，具体数据见表1。 我们采用瑞利分布函数作为基本函数形式进行拟合，用Origin软件进行拟合瑞利分布函数，得出 和 ，绝大部分城市拟合的相关系数 大于97%。因此，用瑞利分布来描述城市出行距离分布具有很高 图1. 瑞利密度函数基本形态 Table 1 Trip distance distributio 城市 出行距离 ≤ 5 km 5~10 km 10~15 km 15~20 km 20~30 km 30~40 km >40 km 北京 0.555 0.170 0.112 0.066 0.063 0.022 0.012 天津 0.568 0.180 0.103 0.062 0.057 0.021 0.009 石家庄 0.801 0.117 0.035 0.021 0.015 0.009 0.002 太原 0.876 0.056 0.026 0.018 0.015 0.008 0.001 沈阳 0.834 0.071 0.042 0.028 0.016 0.008 0.001 长春 0.852 0.059 0.038 0.028 0.015 0.007 0.001 上海 0.566 0.176 0.102 0.065 0.059 0.022 0.010 南京 0.696 0.138 0.056 0.046 0.038 0.019 0.007 无锡 0.842 0.069 0.038 0.028 0.015 0.007 0.001 常州 0.889 0.043 0.027 0.018 0.014 0.008 0.001 苏州 0.689 0.144 0.088 0.041 0.023 0.014 0.001 杭州 0.825 0.073 0.047 0.029 0.016 0.008 0.002 宁波 0.871 0.057 0.028 0.019 0.017 0.007 0.001 温州 0.889 0.051 0.021 0.017 0.016 0.006 0.000 福州 0.884 0.052 0.025 0.017 0.016 0.006 0.000 厦门 0.865 0.065 0.031 0.017 0.016 0.006 0.000 泉州 0.892 0.048 0.021 0.017 0.016 0.006 0.000 青岛 0.877 0.056 0.023 0.019 0.017 0.008 0.000 武汉 0.678 0.143 0.068 0.046 0.038 0.019 0.008 长沙 0.798 0.128 0.037 0.021 0.015 0.009 0.002 广州 0.587 0.164 0.109 0.057 0.051 0.022 0.010 深圳 0.591 0.161 0.102 0.061 0.056 0.021 0.008 珠海 0.956 0.021 0.011 0.005 0.004 0.003 0.000 东莞 0.968 0.012 0.008 0.005 0.004 0.003 0.000 中山 0.975 0.007 0.006 0.005 0.004 0.003 0.000 成都 0.681 0.141 0.068 0.046 0.038 0.019 0.007 表1. 出行距离分布 的可信度。
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user: 5. 结语 本文在理论推导的基础上，以已知26座城市居民出行数据为拟合资料，通过探讨分布函数参数的相关影响因素并建立非线性回归方程，得到能够反映某一城市的出行分布特征的一般模型，为城市规划和城市交通规划提供了重要的决策依据。本文的假设条件是为了对问题的假设，针对这一细节问题仍需作进一步的讨论。 对于一个单中心城市而言，城市规模是影响平均出行距离与时耗的决定性因素。随着城市规模持续扩大，交通拥堵加剧，机动车车速下降，平均出行距离与时耗延长。当城市增长到一定规模后，平均出行距离与时耗超出人们可以接受的范围，维持单中心城市空间结构从交通出行来看已经不合理了。在这种情况下，仅靠调节供需难以解决交通问题，应该从空间结构角度逐渐变单中心城市为多中心的组合城市。城市常住人口和居民平均出行距离具有较高的相关程度，随着城市常住人口的增长，居民平均出行距离逐渐增大。而且，随着城市常住人口的增长，居民总出行距离的增长速率也逐渐增大，城市常住人口和居民出行距离之间关系是非线性的。因此，合理的规划城市人口是必要的。
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user: 摘 要 研制新型非铂催化剂已成为可再生能源研究领域的当务之急。由于稳定的化学与电化学性能，氧化锆在新型铂催化剂研究中受到了广泛关注。因此，本文首先回顾了常用氧化锆薄膜的磁控溅射法和浸涂法合成工艺与研究进展，再综述了非化学计量氧化锆、过渡金属/非过渡金属掺杂氧化锆、部分氧化碳氮化锆和热解锆基螯合物等非铂催化剂的氧还原催化研究现状，最后还展望了氧化锆基非铂催化剂发展的趋势与方向。 关键词 :非铂催化剂，氧化锆，制备方法，氧还原反应
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user: 1. 引言 随着生活水平的不断提高，人们面临的“环境污染”与“能源危机”等全球性问题日益严峻，可再生能源资源研究迫在眉睫。由于具备高能量效率，高比功率密度，污染物零排放和室温快速启动等优点，质子交换膜燃料电池在可再生能源领域受到了广泛关注[ 1 ] [ 2 ] 。铂是目前已知催化活性最高的质子交换膜燃料电池氧还原催化剂[ 3 ] ，但其资源稀缺、成本昂贵等缺点严重阻碍了质子交换膜燃料电池的商业化发展。为降低质子交换膜燃料电池的铂用量，研究者从铂合金化和非铂催化剂设计合成着手，进行了一系列研究[ 4 ] [ 5 ] 。在非铂催化剂设计合成方面，人们已设计合成了热解/非热解大环金属化合物、含氮碳基化合物、过渡金属硫化物、氧化物碳氮化物和氮氧化物等非铂催化剂，并对其氧还原催化性能进行了深入研究[ 6 ] 。氧化锆基化合物是一种具有高化学与电化学稳定性的高效过渡金属氧化物氧还原催化剂[ 7 ] -[ 9 ] 。研究表明，70℃ 1 mol∙L −1 H 2 SO 4 溶液中氧化锆的饱和溶解度为3.2 × 10 −4 g∙L −1 [ 8 ] ，30℃ 0.1 mol∙L −1 H 2 SO 4 溶液中氮氧化锆的饱和溶解度仅为5 × 10 −8 g∙L −1 [ 9 ] ，两种氧化锆基化合物在H 2 SO 4 溶液中的溶解度均低于室温1 mol∙L −1 H 2 SO 4 溶液中铂的溶解度。从电化学稳定性的角度考虑，氧化锆基化合物的氧还原催化性能研究对非铂催化剂研制具有重要意义。因此，本文详细回顾了最常用氧化锆薄膜催化剂的磁控溅射法和浸涂法等制备技术的合成工艺与研究进展，并综述了非化学计量氧化锆、过渡金属/非过渡金属掺杂氧化锆、部分氧化碳氮化锆和热解锆基螯合物等非铂催化剂的氧还原催化研究现状，最后对氧化锆基非铂催化剂发展的趋势与方向进行了展望。
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user: 2. 氧化锆薄膜的制备 常用的氧化锆质子交换膜燃料电池氧还原催化剂是一种薄膜状催化材料。在氧化锆薄膜催化剂制备中，磁控溅射法和浸涂法得到了广泛的应用，这两种方法还是赤铁矿、氮化铝和氧化锡等薄膜类材料的主要制备方法[ 10 ] -[ 12 ] 。这里我们将回顾氧化锆薄膜催化剂的磁控溅射法和浸涂法的合成工艺及研究进展。 磁控溅射法制备氧化锆薄膜的原理是[ 13 ] 电场作用下电子会飞向基底材料，在此过程中与氩气原子发生碰撞，产生电荷分离形成新电子和氩气原子，新电子继续飞向基底材料，而新氩气原子在电场作用下加速飞向阴极靶，最终高速撞击靶材，在靶材上发生溅射，溅射过程中产生的中性靶原子与分子在基底材料上沉积形成薄膜，撞击过程中产生的二次电子会继续轰击靶材，直至能量消耗殆尽，最后远离靶材并在基底材料上沉积。二次电子的能量非常低，在基底材料上沉积时传递给基底材料的能量非常小，不会造成基底材料温度明显增加。基于氧化锆薄膜催化剂的电化学性能研究，采用磁控溅射法合成氧化锆薄膜催化剂过程多以玻璃碳电极为基底材料[ 8 ] [ 14 ] -[ 17 ] 。磁控溅射法合成氧化锆薄膜催化剂的主要技术参数包括以下几方面，磁控溅射室腔体背景压力~10 −4 Pa，腔体工作压力分布介于4.8 × 10 −1 ~3.0 × 10 −1 Pa之间，溅射靶材与沉积基底之间间距约为~24 cm，溅射源输出能量分布于75~175 W [ 8 ] [ 14 ] -[ 17 ] 。在磁控溅射法合成氧化锆薄膜催化剂过程中，调节溅射源输出能量能有效控制非计量氧化锆催化剂的物相组成、结晶度和电导率等重要的物理化学参数[ 15 ] ，优化溅射气源各组分气体分压能有效调节非计量氮氧化锆催化剂的氧还原催化活性成分[ 17 ] 。 在氧化锆薄膜催化剂的设计合成中，Takasu等还采用浸涂法[ 18 ] 以四丁氧基锆为原料，在金属钛基底上多次浸渍–烧结设计合成了非计量氧化锆催化剂。研究结果表明，合理有效地控制浆料黏度将有利于实现氧化锆薄膜催化剂厚度等关键技术参数的可控操作。除磁控溅射法和浸涂法外，高温固相反应法[ 19 ] 、电化学沉积法[ 20 ] 、氨气热解法[ 21 ] 、碳氮化物的部分氧化法[ 22 ] 和热解锆基螯合物[ 23 ] 等制备技术在氧化锆基催化剂设计合成中也得到了广泛应用。 综上所述，磁控溅射法能实现氧化锆薄膜催化剂物相组成、结晶度和导电率等重要物理化学参数和催化活性成分组成的优化。与磁控溅射法相比，浸涂法更具备操作简单、合成效率高等优点。这两种方法都是以氧化锆薄膜催化剂为最终产物，但基底材料上薄膜催化剂的转印技术和燃料电池的气液传输等基础性研究还不够深入。因此，从实际应用的角度考虑，将氧化锆薄膜催化剂应用到质子交换膜燃料电池中的研究还需进一步深入。