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user: 2. 材料与方法 2.1. 试验动物与试验设计 本试验选取160羽4周龄体重约为300 g/羽的芦花鸡作试实验鸡种(鸡苗由湖南农业大学向建国教授提供)，随机分成4组，每组40羽，饲养时间为70天。预饲养7天后，对每只鸡进行编号、称重。正式饲养后，对照组饲喂基础饲粮，试验组在此基础上添加1%、3%和5%的杜仲叶粉。基础饲粮参照美国NRC(1994)营养需要配制，组成及营养水平见表1，杜仲叶采自吉首大学张家界校区校园，经吉首大学廖博儒研究员鉴定品种为杜仲，粉碎后过40~60目筛。杜仲叶粉中总黄酮、绿原酸、桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸的含量依次为7.01%、2.13%、4.42%、5.39%。为使各组饲粮营养水平保持一致，试验总营养水平为基础饲粮营养水平加杜仲叶营养水平。每天记录各组饲粮添加量及剩余量，试验结束时记录每只鸡的体重。 2.2. 饲养管理 试验选点在张家界市永定区尹家溪镇高桥村蓉园竹林鸡场，每天喂料两次，鸡只自由采食和饮水。为减少影响因子，全部不喂养青饲粮。试验期间温度保持在20℃~25℃至试验结束。环境湿度采用自然 Table 1 Composition of nutrient levels of basal diet (air-dry basis 项目 Item 含量(%) Content 1~2周 1~2 week 3~8周 1~2 week 9~10周 9~10 week 对照 1% 3% 5% 对照 1% 3% 5% 对照 1% 3% 5% 玉米粉 Corn meal 47.50 47.52 53.84 55.86 46.50 49.15 52.37 57.01 46.55 49.50 53.35 57.48 米糠 Rice bran 8.50 6.93 4.75 1.90 8.90 6.90 4.66 0.95 8.50 6.93 4.27 1.52 麦麸 Wheat bran 8.50 7.52 4.35 2.19 8.10 6.93 4.55 3.33 8.50 7.32 5.34 3.33 次粉 Wheat middling 5.80 7.72 6.21 9.03 7.00 6.93 7.76 7.13 7.40 7.32 7.18 7.03 脱毒菜籽粕 Rapeseed meal 18.50 18.50 17.95 17.58 18.50 18.30 17.95 17.58 18.50 18.32 17.95 17.58 鱼粉 Fish meal 5.50 5.30 6.00 5.80 5.20 5.45 5.65 6.00 5.10 5.20 5.55 5.87 骨粉 Bone meal 0.60 0.59 0.53 0.56 0.65 0.59 0.58 0.52 0.60 0.59 0.58 0.57 贝壳粉 Shell powder 0.50 0.50 0.42 0.48 0.50 0.49 0.38 0.50 0.55 0.54 0.53 0.48 食盐 NaCl 0.10 0.25 0.30 0.05 0.05 0.33 0.30 0.20 0.30 0.10 0.10 0.10 菜籽油 Rapeseed oil 4.50 4.20 2.65 1.55 4.60 3.93 2.80 1.78 4.00 3.18 2.15 1.04 杜仲叶Eucommia ulmoides leaf powder 0.00 1.00 3.00 5.00 0.00 1.00 3.00 5.00 0.00 1.00 3.00 5.00 合计 Total 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 100.00 代谢能 ME/(MJ/kg) 2) 13.38 13.38 13.38 13.38 13.38 13.37 13.38 13.37 13.19 13.18 13.19 13.19 粗蛋白质 CP 18.00 18.03 18.05 17.98 17.98 17.97 17.98 17.87 17.99 17.98 17.98 17.98 钙 Ca 0.80 0.79 0.78 0.81 0.80 0.79 0.77 0.80 0.80 0.80 0.82 0.83 总磷 TP 0.42 0.41 0.41 0.41 0.42 0.41 0.41 0.41 0.41 0.41 0.41 0.41 粗纤维 CF 4.59 4.59 4.59 4.58 4.58 4.58 4.57 4.58 4.58 4.57 4.59 4.59 表1. 饲粮组成及营养水平(风干基础) 湿度(相对湿度约为50%~60%)，鸡舍采用自然通风和自然光照。各组饲养环境完全一致，对鸡舍及周边进行定期消毒，并按正常免疫程序进行免疫接种。 2.3. 检测指标与方法 2.3.1. 生长性能的测定 屠宰前让芦花鸡自由饮水，12 h后将全部试验鸡(采样样本为全部鸡样本，下同)空腹称重，放血去羽，待血液全部沥干后对其称重，得到屠体重。计算屠宰率。 取上述屠宰试鸡，分别剥离左侧胸肌、腿肌和腹脂，称重，并计算屠宰率、腿肌率和腹脂率。 屠体重去气管、食道、嗉囊、肠、脾、胰、胆和生殖器官。保留心、肝、肾、腺胃、肌胃(去角质膜和内容物)、腹部板油、肌胃周围的脂肪和肺、肾的重量，计算半净膛率。 半净膛重去心、肝、腺胃、肌胃、脂肪及头、脚的重量。计算全净膛率。 屠 宰 率 % = 屠 宰 重 活 重 × 100 (1) 半 净 膛 率 % = 半 净 膛 重 活 重 × 100 (2) 全 净 膛 率 % = 全 净 膛 重 活 重 × 100 (3) 腿 肌 率 % = 腿 肌 重 × 2 活 重 × 100 (4) 腹 脂 率 % = 腹 脂 肪 重 活 重 × 100 (5) 2.3.2. 芦花鸡的血液检测指标 血液样品处理：取样前停饲12 h，称重后心脏采血至离心管中，4℃静置，直至血清自然析出，于高速冷冻离心10，000 r/min离心15 min，取上清液分装于离心管中，并转至−80℃超低温冰箱中保存备用。采用自动生化分析仪测定血液中总胆固醇(Total cholesterol， T-CHO)、甘油三脂(Triglycerides， TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low-density lipoprotein cholesterol， LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol， HDL-C)、总胆固醇/高密度脂蛋白胆固醇(Total cholesterol/High density lipoprotein cholesterol， T-CHO/HDL-C)等指标。 2.3.3. 肌肉组织相关指标分析 肌肉样品处理：取同一部位的胸肌约150 g，装入聚乙烯塑料袋内，于−75℃保存备用。 滴水损失：屠宰2 h后取2 g左右胸肌肉块称重记为W 1 ，然后将肉块悬挂于密闭容器中，4℃放置24 h后，用滤纸吸去表面多面的水分，称重，记为W 2 ，计算滴水损失率。 滴 水 损 失 % = W 1 − W 2 W 1 × 100 (6) W 1 ——胸大肌原重g；W 2 ——胸大肌悬挂后原重g，下同。 蒸煮损失：取测定滴水损失后的肉样，称重，将肉样置于聚乙烯塑料袋内后抽取袋内空气封住袋子，将封口后的肉样袋置于75℃水浴中保持30 min后称重(W 3 )，计算蒸煮损失。 蒸 煮 损 失 % = W 1 − W 3 W 1 × 100 (7) 水分按GB/T 969.15-88直接干燥测定，蛋白质采用GB 5009. 5-2016方法检测，灰分按照GB 5009.4-2010测定，硒含量采用GB/T 5009.93-2003方法检测，并对其中黄酮与绿原酸的含量进行测定。 游离氨基酸含量分析：将肌肉或血浆样品与4%的磺基水杨酸按3:1的比例混合，在室温(25℃)条件下，以超声功率为300 W和超声频率为40 kHz处理20 min，然后13，000 r/min下离心沉淀蛋白质。取上清液经0.45 µm滤膜过滤，滤液用氨基酸分析仪检测计算。 2.4. 实验数据统计与分析 实验用IBM SPSS 20.0软件进行统计分析，实验数据用平均值±标准误来表示，差异显著时采用Duncan氏法进行多重比较，P < 0.05为差异显著，P < 0.01为差异极显著，P > 0.05为无显著差异。