DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 实验部分 禁用偶氮染料的检测原理，是把纺织面料的禁用偶氮萃取下来，进行还原分解，再用叔丁基甲醚萃取还原得到的芳香胺，用纺织品禁用偶氮染料快速试剂进行显色反应得到阳性或者阴性的测试结果，阴性结果即为不含禁用偶氮染料，然后再将阳性结果进行进一步的检测。 2.1. 主要仪器和试剂 BWS-20恒温水槽(上海一恒科技有限公司) 100 ml玻璃样品瓶(天津市天玻玻璃仪器有限公司) 60 ml梨形分液漏斗(天津市天玻玻璃仪器有限公司) 0.06 mol/L柠檬酸盐缓冲溶液(pH = 6.0，配制方法为用蒸馏水溶解1.253 g柠檬酸以及0.632 g氢氧化钠后定容于100 ml的容量瓶中) 5 g/L的连二亚硫酸钠(Na 2 S 2 O 4 ·2H 2 O，又叫保险粉，天津市化学试剂供销公司) 甲基叔丁基醚(分析纯，天津市化学试剂供销公司) 纺织品禁用偶氮染料快速检测试剂盒(青岛艾博尔商贸有限公司) 蒸馏水或者实验用三级水 2.2. 实验方法 1) 样品前处理称取1.0 g剪碎的纺织面料样品于100 ml锥形玻璃反应瓶中，加入16 ml柠檬酸盐缓冲溶液和3.0 ml Na 2 S 2 O 4 溶液，将反应瓶密闭，用力振摇，使得所有试样浸入液体中，置于(70 ± 2)℃水浴中保温30 min，取出于2 min内冷却到室温。 2) 萃取与脱色将10 ml甲基叔丁基醚加入上述锥形玻璃反应瓶中，用力振摇，静置分层，转移至60 ml梨形分液漏斗后进行萃取，取上层萃取液于20 ml玻璃杯中。 3) 显色将上述萃取液滴1~2滴至滤纸上，同时迅速滴1~2滴纺织染料禁用偶氮染料快速检测试剂，观察滤纸上是否有明显颜色反应。 4) 筛选判定如果没有明显颜色变化，结论即为阴性，表明样品中不含禁用偶氮染料，可直接判定样品合格。如果滤纸呈现明显的颜色变化，结论即为阳性，说明样品中可能含有禁用偶氮染料，但是含量是否超过法规规定值，则需要利用色谱仪器进行准确的定性和定量检测，如果检测结果是没有检测到，说明是假阳性结论，产品也是合格的。如果检测结论是24种禁用偶氮含量超过了法规规定值，则产品不合格。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. 纺织面料的24种芳香胺检测 3.1.1. 纺织面料显色检测 集中对实验室随机选取的36个纺织面料样品(包括直接染料染色的纺织物棉布7种，酸性染料纺织布料尼龙11种，活性染料纺织物棉布7种，硫化染料纺织物棉布2种，靛蓝染料纺织物棉布1种，还原染料纺织物棉布8种)进行检测，显色反应后结论为阴性的27种，直接通过率75%，检测结果为阳性的9种，比率为25%。 3.1.2. 阴性结论纺织面料送检验证 随机抽选了15种检测结论为阴性的纺织面料送检至天祥(天津)质量技术服务有限公司，随后进行了REACH Official Method禁用偶氮染料检测。结果如表1所示，从而证明纺织面料中并没有24种禁用偶氮染料。 Table 1 The inspection results of azo dyes for textile 序号 送检布料 染色品种 仪器方法 本文显色结论 本文判定结果 检测结论一致性 备注 1 棉 还原染料 Not detected 不显色 阴性 一致 2 棉 还原染料 Not detected 不显色 阴性 一致 3 棉 还原染料 Not detected 不显色 阴性 一致 4 棉 直接染料 Not detected 不显色 阴性 一致 5 棉 直接染料 Not detected 不显色 阴性 一致 6 棉 直接染料 Not detected 不显色 阴性 一致 7 尼龙 酸性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 8 尼龙 酸性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 9 尼龙 酸性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 10 棉 活性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 11 棉 活性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 12 棉 活性染料 Not detected 不显色 阴性 一致 13 棉 硫化染料 Not detected 不显色 阴性 一致 14 棉 硫化染料 Not detected 不显色 阴性 一致 15 棉 靛蓝 Not detected 不显色 阴性 一致 表1. 阴性结论的纺织面料送检禁用偶氮染料检测结果 Table 2 The inspection results of azo dyes for textile fabric 序号 送检布料 染色品种 仪器方法 本文显色结论 本文判定结果 检测结论一致性 备注 1 棉 直接染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 2 棉 直接染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 3 棉 直接染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 4 棉 直接染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 5 尼龙 酸性染料 Not detected 显红色 阳性 不一致 6 尼龙 酸性染料 Not detected 显红色 阳性 不一致 7 尼龙 酸性染料 Not detected 橙红色 阳性 不一致 8 尼龙 酸性染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 9 棉 活性染料 Not detected 显黄色 阳性 不一致 表2. 阳性结论的纺织面料送检禁用偶氮染料检测结果 3.1.3. 阳性结论纺织面料送检验证 随后将检测结论为阳性的9种纺织面料送检至天祥(天津)质量技术服务有限公司进行REACh Official method禁用偶氮染料检测。结果如表2所示，此9种纺织面料都是假阳性结论，产品合格，纺织面料中并没有24种禁用偶氮染料。
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user: 4. 结论 此文所用的显色测试后再进行色谱测试的快速筛选纺织品是否含有禁用偶氮染料的方法，可以广泛应用于进出口贸易企业的各种纺织品面料的各类染料的快速检测中，对直接染料、活性染料、硫化染料、酸性染料、还原染料、靛蓝六种染料进行染色后的纺织面料皆适用，纺织面料为纯棉和尼龙材质皆可。在结论为阴性的时候，可以100%判定纺织面料不含有禁用偶氮染料，不依赖于任何色谱机器，仅凭肉眼观测即可，检出限小于15 mg/kg，满足了当前法规的限量要求。当结论为阳性的时候，结合使用色谱仪器分析的方法，进一步鉴别纺织面料是否含有禁用偶氮染料，结论为阳性时，有可能是假阳性，实际不含24种禁用芳香胺，也有可能是真阳性，含有禁用偶氮染料。从而实现了快速筛选的检测目标，并且大大提高检测的效率。此方法在试剂、仪器、实验消耗时间方面，与纯仪器方法相比，两步前处理简单，操作方便；所需试剂为常规化学试剂，试剂用量少，分析速度快，分析成本低。
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user: 摘 要 菊科植物欧洲千里光在我国东北和西南地区是一种常见的外来入侵植物。为探究欧洲千里光可培养内生细菌的多样性，我们选择9株温室种植的健康的欧洲千里光植株为研究对象。通过叶片组织表面消毒处理，将内生菌通过涂布平板法和划线分离法，在牛肉膏蛋白胨培养基上进行分离、纯化，对纯化的菌株进行16s rDNA测序。我们一共得到了68株内生菌，并且鉴定出这些菌株属于3门3纲6科8属。其中，厚壁菌门的有芽孢杆菌属(Bacillus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)；放线菌门的有微球菌属(Micrococcus)、节杆菌属(Arthrobacter)、细杆菌属(Microbacterium)；变形菌门的有假单胞菌属(Pseudomonas)、栖水菌属(Enhydrobacter)。从分离出的菌株数量来看，芽孢杆菌属(Bacillus)所占比例较大，高达63.2%；其次为节杆菌属(Arthrobacter)和假单胞菌属(Pseudomonas)，二者数量均占10.3%。本研究结果表明，欧洲千里光可培养内生细菌的多样性较为丰富，潜在的有益菌可能为欧洲千里光的入侵提供一定的帮助。 关键词 :欧洲千里光，可培养内生细菌，16s rDNA基因，多样性 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 生物入侵是指非土著种通过有意或无意引进、自然扩散进入到一个以前未曾分布的区域并且能够存活、生长、繁殖及演化成新的种群并对当地生态系统造成一定危害的现象 [ 1 ] ，是仅次于土地利用变化而造成全球生物多样性丧失的第二大因素 [ 2 ] 。全球已经查明的外来入侵物种已有上万种，虽然人们已经开始采取措施来防治生物入侵，但其依旧是当今全球面临的重大生态环境问题之一 [ 3 ] 。入侵植物是生物入侵中的重要组成，它具备入侵范围广，生命力强且难以根除的特点，容易形成广泛的生物污染，威胁本土生物的生物多样性及农业的发展，对生态环境造成了严重影响。作为当今的研究热点，不少学者致力于研究生物入侵的机制，提出不少假说，企图成功预测生物入侵的形成并针对其特性提出有效的控制和防御措施。目前提出的假说有：“内禀优势假说”、“天敌逃逸假说”、“增强竞争力进化假说”、“新武器假说”等 [ 4 ] [ 5 ] 。 随着研究的发展，也有不少学者认为与植物相关的微生物群落，对植物的生长发育起到了很重要的作用，可能在帮助入侵植物进行生物入侵起到了一定的作用。其中内生菌是植物微生物的重要组成部分，在其生活史的一定阶段或全部阶段，生活于健康植物的各种组织和器官的细胞间隙或细胞内并且宿主植物不表现出感染病状的一类微生物 [ 6 ] [ 7 ] ，它们种类多，数量广，能影响植物的生理代谢，产生多种生物活性物质或分泌拮抗物质，增强植物对病虫害的抵抗能力，对植物的生长起着不可或缺的重要作用 [ 8 ] 。具有固氮作用的内生菌能促进宿主植物对氮素的吸收与利用，产生各种能影响氮代谢的植物激素，从而直接或间接作用于宿主植物的生长。内生菌还能增强宿主抗逆性，主要是增强宿主植物对环境条件的耐受性，如祁娟 [ 9 ] 已经从苜蓿种子中筛选出了抗高低温、抗盐的内生根瘤菌，对改善盐碱化土壤有重要作用。部分内生菌分泌的化学物质一方面能抑制其它植物的生长，另一方面能够促进宿主植物的生长，从而增强该内生菌的宿主植物在生态系统中的生存竞争能力。 通过对植物内生菌的不断研究，发现植物内生菌是一种有巨大利用潜力的新资源，不仅对植物自身的代谢反应以及对外界环境的适应十分重要，植物地上部分的内生菌还能通过种子传递给下一代 [ 10 ] ，与植物建立长期共生关系，从而在一定程度上增强其与土著种的竞争能力，利于其入侵。最近几年，在入侵生态学方面，已有部分科学家关注入侵植物内生菌对入侵植物的影响，将内生菌与植物入侵机制相联系，以探寻内生菌对植物入侵起着的重要作用 [ 11 ] 。 欧洲千里光(Senecio vulgaris)是菊科一年生草本植物，以种子繁殖，种子极易扩散，且繁殖能力强 [ 12 ] 。作为一种入侵植物于19世纪侵入我国东北 [ 13 ] ，随后在河北、湖北、贵州、云南、新疆等地分布 [ 14 ] 。欧洲千里光具有吡咯里西啶类生物碱，这种生物碱对食草动物和致病真菌有化学防御作用 [ 15 ] 。部分欧洲千里光抗除草剂 [ 16 ] ，主要对果园、草坪、作物产生危害。目前有较多关于欧洲千里光生物碱的研究，但是针对其内生细菌资源尚未见系统地进行分离和用现代细菌分类学方法进行研究的报道。因此，对欧洲千里光内生细菌进行分离鉴定、系统发育分析，可以了解欧洲千里光内生细菌的群落结构，为将来对欧洲千里光潜在有益内生细菌的功能研究以及对欧洲千里光成功入侵的作用机理上提供菌种资源和数据。同时，日后可尝试将有益内生菌的目的基因导入一些生长状况不好的、濒危的植物体内，观察是否能改善这些植物的生长情况，增强其抗性，从而提高该物种在生态系统中的竞争力，并一定程度减缓生物入侵的危害速度，达到变害为宝的目的。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 样品采集和处理 欧洲千里光种子于2016年4月采自神农架大九湖、刘家屋场、松柏镇，采集的样本由程丹丹博士鉴定。2016年10月将种子萌发后，将植物栽培于温室中，2016年12月随机选择9株健康欧洲千里光植株(记做1~9号植物)，并采集叶子为实验材料。采样时选择无病害症状的健康叶片。样品从植株分离后立即放入无菌样品袋中，低温保鲜，在24 h之内进行内生细菌的分离。 2.2. 内生细菌的分离培养 将欧洲千里光的叶用无菌水冲洗干净杂质，随机称取1 g。于浓度为70%酒精中振荡浸泡1 min，再用有效氯含量1%的次氯酸钠溶液振荡浸泡1 min，无菌水冲洗4次。将最后一次冲洗的无菌水涂布NA平板，用未经使用的无菌水涂平板作为对照，28℃培养48 h后观察是否有菌落产生，以检测组织表面消毒是否完全。将叶片用无菌剪刀剪碎后，放入无菌研钵中研磨至匀浆，吸取100 μl于牛肉膏蛋白胨平板，每个处理重复三次，倒置于28℃培养2~3天，观察菌落情况。 观察记录并记录培养皿中菌落的颜色、形态、干湿、质地、边缘形状、是否透明、表面是否光滑均一等性状。针对同一培养皿中性状一致的菌落，只选取一株作为代表菌株进行划线分离，通常需分离2~3次，直至平板上出现单个菌落，将其移入试管斜面保存，为后续实验提供材料。 2.3. 内生细菌的16S rDNA序列扩增和测序 用试剂Lysis Buffer for Microorganism to Direct PCR提取纯化的细菌基因组DNA作为PCR模板，方法参见试剂说明书。PCR反应体系(50μL)组成：Premix Taq 25 μL，引物F27(CCTACGGGAGGCACGAG)/R1492 (GTATTACCGCGGCTGCTGG) [ 17 ] 各1 μL，模板DNA3 μL，双蒸水20 μL。PCR扩增流程为94℃预变性3 min、94℃变性30 s、56℃退火30 s、72℃延伸45 s、72℃延伸8 min，循环重复36次。产物经凝胶电泳检测后，送由昆泰锐(武汉)生物技术有限公司测序。使用BIOEDIT软件拼接正向、反向序列。通过BLAST在NCBI上比对序列，寻找与目的序列匹配度最高的已知分类地位菌种的16S rDNA序列进行比较鉴定，确定菌株的系统发育地位，并通过MEGA 5.0构建系统发育树分析进化关系。针对鉴定到种的细菌，每个种根据序列比对结果，选取一株或多株代表菌株进行系统发育树的构建，系统发育树的绘制选用邻接法(Neighbor-joining) [ 18 ] 模型进行分析生成系统发育树，发育树用Bootstrap法(1000次重复)检验。
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user: 3. 结果与分析 在不同株的植物中，分离到的内生菌数量基本一致(6~10株)，而且都以芽孢杆菌属(Bacillus)为优势菌群，占所分离菌株总数的42.9%~81.8%。但是分离培养的内生菌的多样性上有差别：从植株2-1中分离到的内生多样性最低，只分离出2个不同属的内生菌；而从植株2-5中分离出的多样性最高，共分离出5个不同属的菌株。芽孢杆菌属在9株植物中均分离得到，其次是假单胞菌属和节杆菌属，分别在6株和5株植物中分离出来(表1)。 分离得到的68株内生菌，共覆盖3门3纲6科8属(表2)。欧洲千里光叶片内生细菌种类比较丰富且主要来自于厚壁菌门(Firmicutes)，所占比例较高，为64.7%。其次为放线菌门(Actinobacteria)所占比例达22.1%，变形菌门(Proteobacteria)最少，占11.8%。在属的水平上，发现芽孢杆菌属(Bacillus)细菌是欧洲千里光可培养内生细菌的优势内生菌种群，占总菌株数目的64.7%，其次为节杆菌属(Arthrobacter)和假单胞菌属(Pseudomonas)均占10.3%。 68株内生细菌所有比对序列在GenBank数据库中覆盖度和一致性均大于99% (表2)，可确定其分类单元。通过系统发育树可确定菌株的系统发育地位，并分析进化关系。系统发育树显示，代表内生细菌菌株与其在NCBI上blast鉴定至种的细菌序列均位于同一分支，且聚类支持强度均高于50%，且甚至达到100%。同时，对于部分未准确鉴定到种的内生细菌通过系统发育树的构建，也能对其的进化关系有准确的把握(图1)。
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user: 4. 讨论 在开花植物中应用非培养法分析叶和根微生物群落结构的研究中，以放线菌门、拟杆菌门、厚壁菌门和变形菌门为四个主要门类 [ 19 ] ，如Ruizpérez等 [ 20 ] 针对菊科高寒带标志性植物Espeletia hartwegiana叶、 Table 1 The isolates of bacteria from leaf endosphere of different individual Senecio vulgaris plant 分类 Classification of the isolated strains 各植株分离株数 Number of isolates from different individual plants 总数 Total 门 Phylum 属 Genus 植株1 植株2 植株3 植株4 植株5 植株6 植株7 植株8 植株9 Proteobacteria Pseudomonas 0 1 0 2 1 0 1 1 1 7 Enhydrobacter 0 0 0 0 0 0 0 1 0 1 Firmicutes Bacillus 9 5 4 4 4 5 3 5 5 44 Staphylococcus 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 Actinobacteria unidentified 0 0 1 2 0 0 0 1 0 4 Arthrobacter 1 1 2 0 1 0 2 0 0 7 Micrococcus 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 Microbacterium 0 0 0 0 0 1 1 0 1 3 总数Total 10 7 9 8 6 6 7 8 7 68 表1. 从欧洲千里光植株中分离培养得到内生菌的统计 Table 2 The species and identification of bacteria from leaf endosphere of Senecio vulgaris plant 种类 Species 序列相似性 Sequence similarity 菌株数目 Number of isolates strains 门、纲 Phylum and Class 属、种 Genus and Species Proteobacteria γ-proteobacteria Pseudomonas sp. 100% 5 Pseudomonas putida 99.9% 1 Pseudomonas poae 99.5% 1 Enhydrobacte sp. 100% 1 Firmicutes Bacilli Bacillus sp. 99.9%~100% 40 Bacillus acidiceler 99.9% 1 Bacillus thuringiensis 100% 1 Bacillus flexus 100% 1 Bacillus cereus 100% 1 Staphylococcus sp. 100% 1 Actinobacteria Actinobacteria Arthrobacter sp. 99.9%~100% 4 Arthrobacter arilaitensis 99.8%~100% 4 Arthrobacter nicotianae 99.9%~100% 3 Micrococcus flavus 100% 1 Microbacterium sp. 99.3%~99.7% 2 Microbacterium esteraromaticum 100% 1 表2. 欧洲千里光叶内生菌种类及鉴定 根微生物群落结构和Samad等 [ 21 ] 针对葡萄树及其伴生植物的微生物群落结构的研究中，均以这四个门类为主要门类，这个结论与本文实验结果一致。其中芽孢杆菌属中的绝大多数种群在其他多种植物中也均有发现，芦云等从哈密瓜 [ 22 ] 、孔庆军等从棉花 [ 23 ] 、高增贵玉米 [ 24 ] ，陈泽斌 [ 25 ] 从烟草中以培养方法分离的内生细菌也均以芽孢杆菌属为主。这可能因为芽孢杆菌属细菌具有很强的抗逆性 [ 26 ] ，同时芽孢杆菌的体积比一般的病原菌体积大几倍，且繁殖能力强，在植物内和病原菌的空间竞争上占据较大优势 [ 27 ] ，容易通过偶然途径进入各种植物内部并定殖成为内生细菌。还能够有效抵御病原菌以及一些毒素的积累，从而有利于宿主植物的生长。 其中假单胞菌属在本次实验中也占有比较大的比例。假单胞菌属有着简单的营养需求，且适应性强，在自然界中普遍存在 [ 28 ] 。现已证实假单胞菌能产生有效铁载体、抗生素、胞外水解酶和HCN 等抑菌代谢产物和诱导植物组织产生抗生 [ 28 ] [ 29 ] ，有效地保护植物免受病原微生物侵害。 一般认为通过传统的分离方法鉴定的微生物只占环境微生物总数的0.1%~10% [ 30 ] ，不能充分展示微生物的多样性状况。而通过高通量培养方法，可以从植物根际和叶际丰度最高的前一百种OTU中分离培养到64%的细菌 [ 19 ] 。用非培养方法对欧洲千里光叶内生菌的研究表明欧洲千里光叶内生菌菌落的核心组成超过24个属，覆盖4门6纲19科 [ 31 ] 。而我们从欧洲千里光叶片中分离到3门3纲6科8属，共68株内生菌。另外我们也注意到，我们研究的结果表明不同植株内所含有的内生细菌种类和比例是不同的，造成这种差异的原因可能有植株本身的差异，也有可能是我们的取样或者在分离培养过程的 图1. 欧洲千里光部分叶内生细菌16S rDNA 序列构建的系统发育树 偏差。可以认为，我们用传统方法来研究植物内生菌的种群结构及多样性受到了极大的限制，在后续实验中应该改进植物内生菌分离和培养的方法，尝试多种分离、培养的技术，从而获得更多菌株的纯培养。
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user: 摘 要 本文在对我国农产品追溯系统中不同参与主体的需求差异分析的基础上，引用编码技术和HTML5移动端自适应技术等技术完善信息录入过程，提供APP，网站等多种查询方式可供用户灵活选择，同时指出了数据管理和风险控制的方法及监管部门等。 关键词 :质量追溯，信息录入，数据维护，用户查询 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 前言 近年来，随着社会经济的发展和物质条件的改善，人们对食品安全关注越来越多，尤其是对日常必需的农产品的质量要求。建立农产品质量可追溯系统，科学地监管农产品种植、生产、加工、流通和销售过程，对于防止突发或群发性食品安全事故的出现具有关键性的监督作用。 近几年，我国一些地区、部门和行业开展并实现了农产品质量追溯工作，如河北省建立了农产品质量追溯系统，甘肃省建立了农产品质量安全追溯体系，均取得了一些成效，在一定区域实现了农产品的追溯管理。但依然存在着各系统之间互不兼容、不利于消费者查询、不利于政府部门的实时监管等问题，造成了资源的严重浪费 [ 1 ] 。因此，改善现有系统的碎片化状态，链接各个信息孤岛，建立一个能够整合追溯信息，满足不同使用者不同使用需求的农产品质量追溯系统十分必要。
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user: 2. 参与主体的需求分析 基于对农产品流通方式的总结和分析，可以发现在整个农产品流通环节中基本包括生产商(企业或菜农)、中间商、消费者，这些参与主体也是农产品质量追溯系统的主要使用者。除此之外，政府相关监管部门也是质量追溯的主要参与主体。由于不同参与主体的参与程度、使用方式、使用目的等的不同，对农产品质量追溯系统的需求也会有所区别 [ 2 ] 。 生产商——质量追溯系统可以提高品牌影响力，符合顾客的认可。但是问题是会增加生产作业的成本，因此生产者需要操作便捷，成本低的输入系统。 中间商——质量追溯系统可促进其标准化和效率化，将销售中承担的质量风险进行转移，也会提升中间商的服务形象。为此中间商要求可追溯系统的标准化和规范化。 消费者——质量追溯系统的直接受益者，对追溯系统的基本需求为真实性、便捷性。追溯方式的便捷程度会直接影响消费者的参与度。消费者如果不积极参与进来，整个系统将失去主要意义。 政府监管——政府监管部门的力度是影响追溯系统成败的主要因素。政府监管部门要求对整体追溯流程有绝对的监管权限，在面对突发事件时，要求系统信息追溯的便捷性和准确性，同时也要确保数据在一定时间内留存，便于调查回访。
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user: 3. 农产品质量追溯系统构建 农产品生产商将对应批次产品建立单独数据库，并在标准化包装的基础下安装信息识别码，将农产品的第一信息录入数据库。中间商在收货和转手的情况下分别录入应有的信息，对产品信息进行确认，并保持产品信息的更新，直到卖给消费者。消费者可以通过商品上信息识别码进行查询确认，如有问题可以直接反馈。系统进行分析后报给政府有关部门进行依法处理。 系统功能以数据库为中心，主要分为四个部分：录入系统，数据维护系统、查询系统和监管系统。具体框架如图1所示。 3.1. 录入系统 1) 技术支持 a) 编码技术 现今使用最广泛的编码技术为条码技术，条码分为条形码和二维码。相比于条形码，二维码存储信息量更大，但不如条形码可靠。两者在不同情景下有不同的应用。近年来二维码的应用领域在不断扩大，使用二维码作为农产品追溯系统的标志将是大势所趋 [ 3 ] 。除此之外，信息识别技术还有RFID技术，RFID技术储存量更大，更便捷安全，还具有写入功能，但这种技术目前成本还比较高，只适用于部分高附加值的农产品。 根据确定的编码对象，采用《GB/T 16986-2003，EAN·UCC系统应用标识符》标准中规定的相应标识符，对农产品进行编码。涉及生产者，产地，采摘时间，包装信息；中转者，中转地，中转时间，包装时间等元素作为编码对象。用贸易项目标识符 AI(01)来标识农产品GTIN代码(14位)。用生产日期标识符AI(11)来标识采摘(中转)日期(6位)。用包装日期标识符AI(13)来标识批次代码(6位) [ 4 ] 。用源实体参考代码标识符AI(251)来标识产地(中转地)代码。 农产品每经过一个节点，都要求将相应的信息转化为相应代码，进行添加。 b) HTML5移动端自适应技术 这种技术主要运用在信息录入和信息查询的移动端场景下。本着便捷性的原则，信息应当能在第一时间迅捷的录入数据库，消费者也希望在第一时间进行查询，因此把录入和查询功能移植到移动端就尤为重要。为此要做到系统与移动端的兼容，移动端自适应就成了要克服的主要难题。采用HTML5进行反应式页面编码，使用Mobile Jquery类库配合响应式布局相对代价小的实现跨终端兼容。不仅可以实现台式计算机和移动式设备的无缝式衔接，对不同型号，不同尺寸的手机做到了同样的兼容 c) 数据库技术 图1. 农产品质量追溯系统结构图 系统采用MySQL数据库。Mysql是最流行的关系型数据库管理系统。由瑞典MySQL AB公司开发，目前属于Oracle公司。MySQL是一种关联数据库管理系统，关联数据库将数据保存在不同的表中，而不是将所有数据放在一个大仓库内，这样就增加了速度并提高了灵活性。 系统以农产品流通方式分类形成数据库，每一参与方作为一个节点形成数据表，表中数据元素包括生产时间，生产地点，中转时间，中转地点，商品指定信息描述等内容。每一最小单位包装的农产品作为一条数据元组。 2) 信息输入方式 a) 生产商：生产商往往起到对农产品初加工的作用，为此要求生产商进行农产品包装标准化 [ 5 ] 。只有在标准化的基础上，才更容易进行编码和信息跟踪。每一个编码对应标准化包装的最小包装单位，以条码的形式，或RFID技术贴附在单位包装外部 [ 6 ] 。在编码形成的同时，数据库会生成对应的表，用来存储此批产品的全程信息。生产商根据实际情况通过移动端将指定数据存入系统。 b) 中间商：中间商在购入产品和卖出产品两个节点，分别要对农产品进行检查，采取数据。包括节点的时间、地点、产品状态，支持图片形式上传。中间商通过包装上的编码，对应找到数据库中的信息，根据中间商的账户有权限进行数据的查看和录入。在经过多层中间商时，需要对数据进行持续更新，直至产品卖到消费者手中。 3.2. 数据维护系统 1) 数据管理 在平台数据中心设置专门部门负责数据的管理，数据库系统的维护和更新。系统维护人员应对主机设备进行定期检查，确保各设备都能正常工作。同时用户权限的设置应遵循最小授权和权限分割的原理，政府相关部门有权对整个系统数据进行监督。数据应确保安全稳定，保留时间为产品销售后六个月。数据管理人员应做好数据的及时备份，并对过期数据也要做到及时的清除。 2) 风险控制 为了防止网络安全扫描以及病毒查杀时对网络性能造成影响，系统维护人员应定期进行安全漏洞扫描和病毒查杀工作，并根据业务的实际情况对扫描时间做出规定，一般安排在非业务繁忙时段；当发现主机设备上存在病毒异常的服务或者开放的服务存在安全漏洞时应及时上报分管领导，并采取相应措施。 其中网站主机的备份分两种：系统配置的备份和数据的备份。网站主机至少保持最近三个月的系统和数据备份，以保证意外发生系统及时恢复。 3.3. 查询系统 1) 查询方式 查询渠道包括网站登陆，短信问询，电话人工服务及手机软件自助查询四种方式，满足有不同生活方式和习惯消费者的要求。为了适应发展需求，本系统的手机软件自助查询支持移动端数据查询，消费者可以关注平台公众号或下载平台APP，通过内置扫码功能对产品实时跟踪 [ 7 ] 。消费者可随时查询农产品的身份档案，包括生产地，生产日期，质量标准，国家统一要求标准等，产品状况信息将以时间轴顺序展示。 2) 反馈方式 系统采用便捷的反馈方式，将反馈通道与查询通道进行整合。消费者在查询过程中发现问题可以直接进行问题反馈，填写有关信息，并支持图片上传。系统收到反馈进行辨别处理，发送到平台相关部门进行处理。消费者也可以采取电话投诉方式进行反馈，平台将第一时间对问题产品进行处理。 3.4. 监管系统 在平台上开放监管系统，允许第三方机构或政府机构进行协助监管 [ 8 ] 。力求政府有关部门的配合，对信息问题和农产品安全事故进行及时追溯，问责。此监管系统有权限对数据进行访问查看，但同时兼顾到数据的安全保障问题，监管系统无权对数据进行修改。
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user: 4. 总结 农产品可追溯体系在未来很长一段时间内都将不断发展并在发展中依照实际情况持续完善。本文在分析各参与方的不同需求后，给出了一系列具体的可行方案，并提出了相应的技术与要求，为我国可追溯系统标准化建设提供了科学的参考。相信在未来几年，我国农产品质量追溯体系将会健康有序地发展，迈上新台阶。
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user: 摘 要 反硝化作用是土壤氮逸失的重要途径，也是引起温室气体N 2 O释放的重要过程，由反硝化微生物驱动完成。nirK和nirS基因是反硝化微生物的重要生物标志(biomarker)。本文简述了反硝化微生物功能基因的作用，重点阐述了农田土壤nirK和nirS型反硝化微生物的重要性及其对施氮肥的响应和研究技术等，指出了农田土壤施氮肥可显著提高nirK和nirS基因的丰度，并且明显改变nirK型反硝化微生物群落结构组成；在水田中施氮肥促进了土壤中nirS型反硝化微生物多样性的增加，而在旱田中氮肥却可以显著影响其群落结构。今后关于nir型反硝化微生物的研究应更加注重分子生态技术与多种技术相结合，以便对 nirK和nirS型反硝化微生物进行更深入的研究。 关键词 :农田土壤，氮肥，反硝化微生物，nirK和nirS基因，主流技术 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 1.1. 反硝化作用与反硝化微生物功能基因简介 反硝化作用是微生物在无氧或微氧条件下以 NO 3 − 或 NO 2 − 作为电子受体进行呼吸代谢获得能量，同时将 NO 3 − 或 NO 2 − 还原为N 2 O或N 2 的过程。反硝化作用既是土壤氮肥损失的途径之一，也是产生温室气体N 2 O的主要途径。土壤的反硝化作用主要是由土壤微生物引起的，包括异化反硝化细菌、非反硝化发酵性细菌和真菌、自养型硝化细菌等。反硝化作用是一个由四步反应构成的生物地球化学过程，包括硝酸盐还原，亚硝酸盐还原，一氧化氮NO还原和氧化亚氮还原N 2 O。其中，每一步都由相应的酶来催化，分别为硝酸还原酶(Nitrate reductase， Nar)、亚硝酸还原酶(Nitrite reductase， Nir)、一氧化氮还原酶(Nitric oxide reductase， Nor)和一氧化二氮还原酶(Nitrous oxide reductase， Nos) [ 1 ] [ 2 ]，如图1所示。 由亚硝酸盐还原为NO的过程是反硝化作用区别于其他硝酸盐代谢的标志性反应，也是反硝化过程中最重要的限速步骤，亚硝酸盐还原酶(Nir)是执行该步骤的限速酶。因此，nir基因也成为反硝化细菌研究最多的功能基因。Nir酶包括进化关系不相关结构不同的两种酶：Cu型亚硝酸盐还原酶(nirK)和细胞色素cd1型亚硝酸盐还原酶(nirS) [ 3 ]。nirK型亚硝酸盐还原酶是由三个相同亚基组成的三聚体蛋白，每个亚基都含有两种类型的铜原子活性中心，即类型I (T1Cu)和类型II (T2Cu)；nirS型亚硝酸盐还原酶是可溶的同株异核生殖蛋白，是一个包含两个相同亚基的二聚体，每个亚基都包含一个细胞色素c和一个细胞色素d1 [ 4 ]。这两种亚硝酸盐还原酶在功能上没有显著差异，但二者催化位点不同，且不能共存于同种 图1. 反硝化功能酶和功能基因 [ 1 ] 细胞中 [ 5 ]。很多研究将nirK和nirS基因作为环境样品中反硝化微生物的分子标识物，为研究同一生理类群微生物的群落结构提供了方法和模式，极大地促进了现代分子生态学的发展。 1.2. 研究氮肥对nirK和nirS基因影响的重要性 施肥是影响土壤质量及其可持续利用的重要农业措施之一，对土壤结构、生物肥力和生产力产生了重要的影响。近年来投入到农田的化肥量有明显的递增趋势，其中氮肥的过量投入使硝酸盐在蔬菜等植物体内超标积累，污染了地下水，造成了湖泊水体富营养化，以及产生了各种含氮气体(包括N 2 O)加剧了温室效应，既对人体健康造成了一定损害，又带来了严重的环境污染。亚硝酸盐还原酶在氮素循环中起着重要的作用，因此研究施氮肥对亚硝酸还原酶nir基因的影响，可为探讨施氮肥对土壤氮素循环利用机制及反硝化作用提供有利的依据，具有提高氮肥利用率以及开展温室气体减排研究的双重意义。
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user: 3. nirK和nirS型反硝化微生物研究展望 3.1. 当前技术的局限性及其发展趋势 3.1.1. 功能基因引物的选择 目前对土壤反硝化微生物丰度、群落结构的研究多以催化反硝化过程关键酶的基因作为分子标识物 图3. 分子生态技术在土壤微生物多样性研究中的应用图解 [ 6 ] Table 1 Research Progress on soil denitrifying microorganism 序号 NO. 研究结果 Research results 技术方法 Technology/methods 功能基因Functional genes 文献来源 Literatures 1 施氮肥显著改变了nirK型反硝化细菌群落结构组成， 土层深度对 nirK型反硝化细菌丰度的影响大于施肥 T-RFLP分析和实时荧光定量PCR技术 nirK [ 3 ] 2 氮肥的施用对nirK型土壤反硝化微生物多样性 影响不显著，但明显改变其群落结构组成 PCR扩增、克隆测序 nirK [ 24 ] 3 不同类型氮肥nirK型土壤反硝化微生物多样性 指数上没有差异，并未引起其群落多样性改变 T-RFLP分析、 构建基因克隆文库 nirK [ 25 ] 4 水稻土中nirS型反硝微生物对环境变化不敏感 PCR扩增、构建基因克隆文库 nirS [ 26 ] 5 水稻土中nirS型反硝化微生物的群落结构 对施加无机肥和有机肥处理均没有显著的响应 PCR扩增、T-RFLP分析 nirS [ 27 ] 6 施用氮肥能够显著提高稻田土壤 nirS型反硝化微生物的丰度 PCR-DGGE、 荧光定量PCR技术 nirS [ 28 ] 7 水稻土nirS型反硝化细菌群落结构对氮肥施加不敏感 PCR扩增、克隆测序 nirS [ 29 ] 8 不同类型的反硝化细菌对无机氮肥的反应不同 而导致nirS型反硝化细菌群落结构改变， 但未改变nirS型反硝化细菌的多样性 RFLP分析、 构建基因克隆文库 nirS [ 30 ] 9 黑土中nirS型反硝化菌种群的群落结构 和丰度对长期施用有机肥有显著的响应 T-RFLP分析、 实时荧光定量PCR技术 nirS [ 31 ] 表1. 土壤反硝化微生物的研究进展 (例如nir基因)。虽然基于这些功能基因有效地克服了16S rRNA基因研究反硝化微生物群落组成中的不足 [ 34 ]，但基因数据库中的反硝化基因序列尚不是很多，例如研究最多的nirK、nirS基因，其引物的设计主要针对变形杆菌门的几个属。对于其他反硝化微生物来说，nir基因可以被扩增到什么程度还是未知，且不同的nir基因可能只对特定生境的反硝化菌nir基因扩增有效。因此，研究有关反硝化功能微生物的当务之急是设计出更具有针对性的引物，如专门针对反硝化微生物功能基因的引物。 3.1.2. 分子生物学技术的缺陷性及展望 现代分子生物学很大程度上加快了反硝化微生物的研究，但DGGE、RELP的技术都是建立在DNA提取以及PCR的基础上，不同的DNA技术会提取出不同长度、质量、纯度的DNA，直接影响其他分子生物学技术的准确性 [ 35 ]。PCR也会不可避免的造成DNA的差异性扩增，以及目标DNA在菌种间拷贝的差异，导致分析结果难以准确反映自然微生物群落的多样性以及物种间的相对丰度信息 [ 36 ]。 总而言之，研究nirK、nirS型反硝化微生物的每种技术和方法都有其优势以及局限性，多种技术结合势必会成为主流，也更有利于环境样品微生物群落结构多样性的分析。而且若以多种功能基因同时作为标记物也一定能提高实验的准确性。在今后的发展中应该更注重反硝化功能基因的研究，为研发新技术、提供新方法打下基础。采用各种技术相结合的手段，提高检测的灵敏度，尽可能避免环境因素对反硝化功能基因的影响，才能对nirK、nirS型反硝化微生物有更深入的了解 [ 5 ]。 3.2. 施氮肥造成的环境问题及其研究方向 长期施肥尤其是氮肥的大量投入会促进反硝化作用，提高了N 2 O的排放量。研究农田土壤施氮肥对反硝化微生物群落结构和多样性的影响，有利于为农田可持续性发展提供重要的理论依据。要深入探讨农田反硝化功能基因丰度及多样性与含氮气体排放的关系，还需要明确上述反硝化基因的丰度和表达特征。分离和鉴定土壤中的优势反硝化功能菌为进一步开展节氮减排研究打下坚实的基础。目前的研究多局限于研究细菌的反硝化作用，而古细菌和真菌也具有反硝化能力。因此，将来也可对古细菌和真菌开展研究。由于土壤细菌体内的反硝化功能基因不一定都表达。因此，可提取和纯化细菌的RNA，通过反转录将RNA转化成cDNA，利用相关分子生态技术研究土壤中能表达反硝化基因的微生物种类和数量，探讨反硝化基因的表达与施肥的内在联系及耦合机制，这样才能更深入地了解施氮肥造成的环境问题，从而进行有效的治理。
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user: 摘 要 本文报道了布朗斯特酸性离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐作为一种绿色、环境友好的催化剂，成功地催化Biginelli三组分反应合成了一系列3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮或硫酮化合物。该方法具有条件温和、产率高、反应时间短的优点。此外，催化剂离子液体可循环使用五次且催化活性没有明显降低。 关键词 :离子液体，催化，Biginelli反应，3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮/硫酮 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮及衍生物具有十分重要的生物和药理活性，在抗病毒、降血压、杀菌、抗癌等 [ 1 ] - [ 6 ] 领域具有广阔的应用前景，其合成受到化学家们的广泛关注。众所周知，Biginelli反应是合成3，4-二氢嘧啶-2-酮衍生物(DHPMs)的重要方法，酸 [ 7 ] [ 8 ] 、碱 [ 9 ] 、有机小分子 [ 10 ] 等作为催化剂已被应用于该反应。 离子液体(ILs)因具有蒸汽压低、毒性低、可循环利用、热稳定性好和溶解性好等优点被应用于Biginelli反应 [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] 。基于本课题组在离子液体合成和催化应用领域所积累的经验 [ 16 ] [ 17 ] ，我们发展了一种布朗斯特酸性离子液体[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]催化Biginelli反应合成3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮/硫酮的方法。分别考察了催化剂的种类和用量、反应溶剂、反应时间和温度等因素对反应产率的影响，同时对反应底物的普适性进行了研究。催化剂离子液体至少可以循环使用5次催化活性无明显下降。
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user: 2. 实验部分 2.1. 仪器与试剂 瑞士Büchi B-560型熔点仪；德国Bruker Equinox 55红外光谱仪(KBr压片)；Varian inova-400型核磁共振仪(400 MHz)，美国HP1100液相色谱质谱仪。所用药品及试剂均为市售分析纯，用前未经处理。1，3-二丁基咪唑氯盐的合成参照文献 [ 18 ] 、1-乙基-3-羧甲基咪唑氯盐和1，3-二羧甲基咪唑氯盐的合成参照文献 [ 19 ] 。 2.2. 离子液体IL1-IL3的合成 离子液体1，3-二丁基咪唑对甲苯磺酸盐[DBIM][p-CH 3 PhSO 3 ] (IL1)、1-乙基-3-羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[C 2 O 2 EIM][p-CH 3 PhSO 3 ] (IL2)和1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ] (IL3)的合成如式1所示。分别将0.05 mol1，3-二丁基咪唑氯盐、1-乙基-3-羧甲基咪唑氯盐、1，3-二羧甲基咪唑氯盐和0.05 mol对甲苯磺酸在90℃下回流72 h，反应结束后用乙醚洗涤产物，随后减压除去乙醚，然后将产物置于90℃真空干燥至恒重即得离子液体IL1-IL3。 离子液体IL1-IL3的表征如下： 离子液体1，3-二丁基咪唑对甲苯磺酸盐[DBIM][p-CH 3 PhSO 3 ]：棕黄色液体： 1 H NMR (400 MHz， D 2 O)，δ：0.84 (t， J = 7.2 Hz， 6 H， 2 × CH 3 )，1.19~1.24 (m， 4 H， 2 × CH 2 )，1.71~1.79 (m， 4 H， 2 × CH 2 )，2.31 (s， 3 H， CH 3 )，4.09 (t， J = 7.2 Hz， 4 H， 2 × CH 2 )，7.28 (d， J = 8.4 Hz， 2 H， ArH)，7.38 (d， J = 4.0 Hz， 2 H， ArH)，7.60 (d， J = 6.4 Hz， 2 H， ArH)，8.68 (s， 1 H， ArH)； 13 C NMR (100 MHz， D 2 O)，δ：142.98，140.31，135.65，130.08，126.03，122.97，49.96，31.91，21.18，19.44，13.32；IR (KBr， v/cm −1 )：3400，3140，3088，2962，2935，2874，1711，1601，1564，463，1301，1239，1165，1122，1031，1006，818，754，681，565；ESI-MS：m/z (%) = 181.2 (100) [M + ]，171.0 (100) [M − ]。 离子液体1-乙基-3-羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[C 2 O 2 EIM][p-CH 3 PhSO 3 ]：棕黄色固体：m.p. 123℃~127℃； 1 H NMR (400 MHz， D 2 O)，δ：1.44 (t， J = 11.2 Hz， 3 H， CH 3 )，2.33 (s， 3 H， CH 3 )，4.16~4.22 (m， 2 H， CH 2 )，5.00 (s， 2 H， CH 2 )，7.29~7.30 (m， 2 H， ArH)，7.41 (s， 1 H， ArH)，7.47 (s， 1 H， ArH)，7.62~7.64 (m， 2 H， ArH)，8.76 (s， 1 H， ArH)； 13 C NMR (100 MHz， D 2 O)，δ：170.76，143.09，140.24，136.91，130.12，126.03，124.23，122.61，50.64，45.77，21.17，14.99；IR (KBr， v/cm −1 )：3144，3109，3059，2985，2953，2863，2797，2712，2617，2524，2134，1891，1735，1570，1494，1454，1415，1332，1229，1162，1119，1034，1007，972，895，811，779，683，652，568，433；ESI-MS：m/z (%) = 155.1 (100) [M + ]，171.0 (100) [M − ]。 离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]：棕黄色固体：m.p. 158℃~162℃； 1 H NMR (400 MHz， D 2 O)，δ：2.32 (s， 3 H， CH 3 )，5.08 (s， 4 H， 2 × CH 2 )，7.28 (d， J = 8 Hz， 2 H， ArH)，7.49~7.50 (m， 2 H， ArH)，7.62 (d， J = 8.4 Hz， 2 H， ArH)，8.86 (s， 1 H， ArH)； 13 C NMR (100 MHz， D 2 O)，δ：170.32，143.10，140.20，138.84，130.11，126.01，124.15，50.77，21.15；IR (KBr， v/cm −1 )：3164，3137，2965，2625，1734，1591，1565，1500，1449，1414，1347，1244，1220，1177，1142，1032，1006，974，899，821，768，737，680，644，566，496，443；ESI-MS：m/z (%) = 185.1 (100) [M + ]，171.0 (100) [M − ]。 2.3. 目标化合物4a-4n的合成 化合物4a-4n的合成反应如式2所示。将0.2 mmol芳香醛、0.2 mmol 1，3-二羰基化合物、0.3 mmol脲或硫脲和20 mol%的离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]在乙醇中回流反应1 h。反应结束后，向反应体系中加入大量碎冰，室温下充分搅拌，过滤，产物经大量冰水洗涤，即得纯净的产物4a-4n。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. 反应条件优化 以苯甲醛、乙酰乙酸乙酯和脲三组分为模型反应，考察了离子液体的种类及其用量、溶剂、反应时间、反应温度等对反应的影响。首先，考察了不同咪唑离子液体对反应的影响，发现当IL3作为催化剂时产物产率可以达到93%，即为最优催化剂(表1，entries 1-3)。其次，考察了不同催化剂用量对反应的 Scheme 1. The synthesis of ionic liquid 式1. 离子液体的合成 Scheme 2. Synthesis of 3，4-dihydropyrimidin-2(1H)-ones/thiones(4a-4n) 式2. 3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮/硫酮(4a-4n)的合成 Table 1 Optimization of reaction conditions Entry Cat. (mol%) Solvent Time (h) Yield b 1 IL1 (20) EtOH 1 80 2 IL2 (20) EtOH 1 88 3 IL3 (20) EtOH 1 93 4 IL3 (10) EtOH 1 87 5 IL3 (30) EtOH 1 94 6 IL3 (20) EtOH 0.5 89 7 IL3 (20) EtOH 1.5 94 8 IL3 (20) EtOH 2 94 9 c IL3 (20) EtOH 1 45 10 IL3 (20) CH 3 CN 1 70 11 IL3 (20) CH 2 Cl 2 1 40 12 IL3 (20) EtOAc 1 75 13 IL3 (20) H 2 O 1 58 表1. 反应条件的优化 a a 反应条件：苯甲醛(0.2 mmol)，乙酰乙酸乙酯(0.2 mmol)，脲(0.3 mmol)，离子液体，80℃； b 分离产率； c 反应温度50℃。 影响，当催化剂用量为10 mol%时，反应产率明显降低，当催化剂用量为30 mol%时，反应产率没有明显增加，因此催化剂的最佳用量为20 mol% (表1，entries 3-5)。然后考察了反应时间对反应的影响，当反应时间为0.5 h时，反应产率降低至89%，当反应为1.5 h和2 h时，反应产率没有明显提高，因此最佳反应时间为1 h (表1，entries 3， 6-8)。反应温度对反应的影响研究发现，当反应温度降到50℃时只能以45%的产率得到相应的目标化合物(表1，entries 3， 9)。最后，分别考察了反应溶剂为乙醇、乙腈、1，2-二氯乙烷、乙酸乙酯和水对反应的影响，结果表明当反应溶剂为乙醇时反应效果最好(表1，entries 3， 10-13)。综上，该反应的最佳条件为：离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]的用量为20 mol%，反应溶剂为乙醇，回流反应1 h。 3.2. 底物普适性研究 在确定最佳反应条件后，对底物的普适性进行了研究，即选用不同的芳香醛，不同的1，3-二羰基化合物与脲或硫脲参与反应，得到了一系列相应的3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮或硫酮，结果见表2。从中可以看出所有反应都以良好到优秀的产率得到相应的目标化合物。取代苯甲醛的取代基无论是吸电子基团如2-氟、3-氟、4-氟、2-氯、2-溴还是给电子基团如4-甲基、3-甲氧基都能以优秀的产率得到相应产物，取代 Table 2 Research of substratescope Entry R 1 R 2 X Yields b (%) m.p. (℃) Found Reported [lit.] 4 a C 6 H 5 Et O 93 201~202 200~202 [ 20 ] 4 b 2-F-C 6 H 4 Et O 95 234~235 236~237 [ 13 ] 4 c 3-F-C 6 H 4 Et O 94 209~211 209~211 [ 21 ] 4 d 4-F-C 6 H 4 Et O 95 175~177 175~177 [ 22 ] 4 e 2-Cl-C 6 H 4 Et O 92 211~213 211~213 [ 23 ] 4 f 2-Br-C 6 H 4 Et O 93 202~204 205~207 [ 13 ] 4 g 4-Me-C 6 H 4 Et O 94 210~211 209~212 [ 24 ] 4 h 3-MeO-C 6 H 4 Et O 92 219~221 219~220 [ 25 ] 4 i C 6 H 5 Et S 86 201~204 202~204 [ 26 ] 4 j 4-F-C 6 H 4 Et S 87 192~193 191~192 [ 27 ] 4 k 4-Me-C 6 H 4 Et S 89 184~186 185~186 [ 28 ] 4 l 4-F-C 6 H 4 Me O 96 188~189 188~190 [ 29 ] 4 m 4-Me-C 6 H 4 Me O 93 202~204 202~204 [ 30 ] 4 n 3-MeO-C 6 H 4 Me O 92 206~207 204~206 [ 20 ] 表2. 底物的普适性研究 a a 反应条件：芳香醛(0.2 mmol)，1，3-二羰基化合物(0.2 mmol)，脲/硫脲(0.3 mmol)，催化剂[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ] 20 mol%，乙醇，回流反应1 h； b 分离产率。 基团的位置对产物的产率影响也不大(表2，entries 4b-4h)。基于3，4-二氢嘧啶-2(1H)-硫酮的生物活性，硫脲代替脲被用于Biginelli三组分反应，成功地以86%~89%的产率合成了产物4i-4k，显示硫脲与脲的反应特性相似。乙酰乙酸甲酯作为代替乙酰乙酸乙酯的一种1，3-二羰基化合物也顺利地参与了反应(表2，entries 4l-4n)。因此，离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐催化合成二氢嘧啶-2(1H)-酮/硫酮化合物具有很好的底物普适性。 3.3. 离子液体循环使用性 将离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]用于催化苯甲醛、乙酰乙酸乙酯和脲三组分反应之后进行再生循环使用的研究。具体方法为：两相分离后，将水相用乙酸乙酯萃取除去有机物残留物，再经旋转蒸发除水，残余物在90℃真空干燥至恒重后即得回收的离子液体，直接加入原料应用于三组分循环反应的研究，结果如图1所示。可以看出，离子液体循环五次后，目标化合物3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮的产率仍然高达88%。
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user: 4. 总结 我们发展了一种布朗斯特酸性新型离子液体1，3-二羧甲基咪唑对甲苯磺酸盐作为催化剂成功催化 图1. 离子液体[DC 2 O 2 IM][p-CH 3 PhSO 3 ]的循环性研究 Biginelli反应合成一系列3，4-二氢嘧啶-2(1H)-酮和硫酮的方法。该方法具有条件绿色、温和、产率较高、反应时间较短等优点。催化剂离子液体至少可循环使用五次并且活性没有明显降低。因此，该方法是离子液体催化Biginelli三组分缩合反应的一个重要补充。
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user: 摘 要 全球范围地表浅层质量分布的重力正演，在计算评估布格异常、地壳均衡补偿、超高精度地球重力场构建及地球内部结构反演时具有重要意义。本文在考虑质量分布的三维各向异性的重力正演方法的基础上，考察GEMMA地壳结构模型下各个大地构造分区的重力正演各阶结果对总体重力正演结果的贡献率。以仅考虑重力正演算法的误差因素的影响量级为0.1 mGal精度为判断准则，通过考察在空域下各个大地构造分区按照级数展开阶数的结果与总体重力正演的结果的差值，结果表明，其中地壳厚度较浅的大地构造分区(洋壳、大洋中脊)所需截断阶次为6阶，而地壳厚度较厚的大地构造分区(造山带、盆地、火成岩省、地盾、地台)所需截断阶次为12阶。 关键词 :重力正演，球谐分析，地壳结构模型，级数展开 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/