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user: 3. 结果 3.1. 不同性腺发育时期克氏原螯虾肝胰腺细胞差异 克氏原螯虾虾肝胰腺位于其头胸部中肠前端、胃的两侧，两瓣左右对称似蝴蝶状，分为许多小叶，组织切片观察可见各叶肝胰腺组织由很多肝胰腺小管组成，肝胰腺小管管壁根据形态结构及功能不同分为B细胞(消化细胞)、R细胞(储藏细胞)、F细胞(纤维细胞)和E细胞(胚细胞) 4种。 E细胞位于肝胰腺小管盲端，细胞较小，呈方形或矮柱状，细胞嗜碱性强，染色较深细胞核较大、呈圆形。细胞总体数量较少，多出现在尚未性成熟个体或者性腺发育早期个体，随着性腺发育数量逐渐减少，性腺发育进入三期后消失。 B细胞多分布于肝胰腺小叶外围小管的近端及中端，细胞体积大，形状不规则。细胞内含有一个明显的消化泡，泡内有絮状内含物。细胞质层薄，围绕在大泡周围，细胞核被挤至位于细胞一侧、靠近小管外侧。在性腺发育早期，细胞数量较多，大多分布在肝胰腺小叶外围较细的肝小管中，随着性腺发育B细胞数量减少，分布区域逐渐转移至肝小管外侧及中段近盲端处。性腺发育成熟后细胞数量进一步减少，在较粗的肝胰腺小管上已无有分布，仅仅分布于肝小管尖端部分较细的肝胰腺小管上仍有分布。 R细胞数量最多，分布广，呈高柱状，细胞核圆形位于细胞基部，有些细胞具多个细胞核，细胞形态较为规则，细胞质均匀，内含大小不一的囊泡，囊泡分布不均，有些分布在细胞核一侧，有些围绕细胞核分布。R细胞分布在肝胰腺小管的中段，呈柱状，长度小于细胞，细胞核圆形，细胞质嗜碱性较强，染色较深。R细胞数量随着性腺发育，数量逐渐增多。 3.2. 不同性腺发育时期肝胰腺生化组成变化 克氏原螯虾肝胰腺指数与其性腺发育具有明显的相关性，在性腺发育处于六期时(排卵后)和一期时，肝胰腺指数最高，分别为5.72 ± 1.04和5.62 ± 1.88，4月~8月，随着性腺发育逐步成熟，雌性克氏原螯虾肝胰腺指数持续下降，此时期也是崇明地区克氏原螯虾的繁殖高峰，性腺发育处于四期时，肝胰腺指数达到最低值，为4.10 ± 0.85，10月后生殖群体逐渐减少，肝胰腺指数开始回升，直至下一个生殖周期开启达到最高值，见表2。 Table 2 Monthly average hepatopancreas index of Procambarus clarkii in Chongming are 时期 样本量 体重 体长 肝胰腺指数 月份 一期 22 28.32 ± 5.33 9.54 ± 0.33 5.62 ± 1.88 2/3/4 二期 18 30.22 ± 5.89 9.79 ± 0.27 5.41 ± 0.39 4 三期 24 26.27 ± 4.31 9.36 ± 1.33 4.88 ± 1.38 6/7 四期 22 27.36 ± 6.98 9.97 ± 0.72 4.10 ± 0.85 7/8 五期 15 30.05 ± 8.21 9.71 ± 1.12 4.53 ± 1.17 9/10/11 六期 12 28.81 ± 7.56 8.91 ± 2.43 5.72 ± 1.04 12/1 表2. 崇明地区克氏原螯虾月平均肝胰腺指数 克氏原螯虾肝胰腺中生化成分随性腺发育的变化情况见表3，随着性腺的发育，肝胰腺中干物质含量逐渐下降，处于卵黄物质积累旺期的四期之后尤为明显。肝胰腺的干物质中，蛋白、总糖含量均随着性腺发育显著下降，其中蛋白含量由43.69%下降至38.95%，总糖含量由3.92%下降至1.98%，总脂含量由38.77%下降至34.78%，四期至六期下降趋势更为明显。 Table 3 Biochemical composition changes of hepatopancreas in Procambarus clarkii during gonadal developmen 一期 二期 三期 四期 五期 六期 水分(%) 42.37 ± 3.42 a 42.54 ± 5.89 a 41.85 ± 6.52 a 44.73 ± 2.78 ab 45.51 ± 5.18 b 46.67 ± 7.98 b 蛋白(%干重) 43.69 ± 6.27 a 43.42 ± 2.88 a 40.07 ± 5.29 b 39.14 ± 2.34 bc 39.24 ± 8.12 bc 38.95 ± 7.36 c 总脂(%干重) 38.77 ± 6.86 a 38.15 ± 4.14 a 37.62 ± 5.24 b 35.37 ± 5.31 bc 34.25 ± 8.07 c 34.78 ± 7.62 c 总糖(%干重) 3.92 ± 1.25 a 3.74 ± 0.88 a 2.94 ± 1.43 b 2.34 ± 1.67 b 1.94 ± 1.55 c 1.98 ± 2.17 c 表3. 克氏原螯虾性腺发育各阶段肝胰腺生化组成变化 注：同一列数据上标不同英文字母表示有显著差异(P < 0.05)。 Table 4 Changes of fatty acid composition in hepatopancreas of Procambarus clarkii during gonadal developmen 脂肪酸 一期 二期 三期 四期 五期 六期 C14:0 0.97 ± 0.34 a 1.32 ± 0.72 b 1.08 ± 0.54 bc 0.94 ± 0.25 ac 0.76 ± 0.31 c 0.48 ± 0.23 d C14:1n7 0.56 ± 0.17 ab 0.72 ± 0.18 a 0.36 ± 0.08 b 0.42 ± 0.12 ab 0.43 ± 0.18 ab 0.41 ± 0.26 ab C15:0 0.63 ± 0.31 a 0.75 ± 0.14 b 0.48 ± 0.12 c 0.67 ± 0.28 a 0.54 ± 0.15 ac 0.58 ± 0.27 d C16:0 21.22 ± 3.87 a 18.43 ± 5.17 ab 17.77 ± 3.72 b 17.52 ± 4.71 ab 16.04 ± 5.91 b 15.07 ± 3.65 c C16:1n7 8.54 ± 3.11 a 9.63 ± 3.72 b 9.77 ± 2.85 b 9.54 ± 3.93 b 8.53 ± 1.04 a 4.51 ± 1.45 c C16:1n5 0.21 ± 0.04 a 0.18 ± 0.02 a 0.23 ± 0.02 a 0.26 ± 0.08 b 0.15 ± 0.06 c 0.15 ± 0.04 c C16:2n4 0.27 ± 0.16 0.25 ± 0.11 0.27 ± 0.09 0.24 ± 0.08 0.21 ± 0.17 0.19 ± 0.07 C17:0 0.82 ± 0.09 ab 0.77 ± 0.17 b 1.06 ± 2.64 a 0.82 ± 0.05 ab 1.21 ± 0.32 a 0.98 ± 0.31 ab C18:0 4.39 ± 0.93 4.42 ± 1.03 4.87 ± 1.15 3.92 ± 1.24 4.57 ± 0.85 4.83 ± 0.95 C18:1n9 29.57 ± 4.33 a 31.70 ± 2.83 a 33.42 ± 10.52 b 31.86 ± 6.46 ab 30.06 ± 5.56 a 34.82 ± 7.38 b C18:1n7 2.58 ± 1.07 a 2.06 ± 0.88 bc 1.88 ± 1.26 c 2.14 ± 0.54 b 1.97 ± 0.44 bc 2.64 ± 0.83 a C18:2n6 15.77 ± 4.18 a 16.66 ± 2.71 ab 18.04 ± 5.44 b 19.82 ± 3.83 b 22.68 ± 7.37 c 24.07 ± 6.93 c C18:3n6 0.12 ± 0.032 0.11 ± 0.05 0.18 ± 0.08 0.15 ± 0.04 0.17 ± 0.03 0.18 ± 0.014 C18:3n3 3.43 ± 1.15 a 3.27 ± 0.75 a 3.07 ± 0.32 b 2.46 ± 1.33 c 2.42 ± 0.91 c 2.27 ± 0.88 c C18:3n4 0.71 ± 0.12 a 0.48 ± 0.20 b 0.29 ± 0.12 c 0.22 ± 0.16 c 0.13 ± 0.17 d 0.15 ± 0.09 cd C18:4n3 0.37 ± 0.04 a 0.26 ± 0.032 b 0.27 ± 0.024 b 0.22 ± 0.028 c 0.23 ± 0.16 bc 0.24 ± 0.061 bc C20:1n9 0.84 ± 0.33 a 0.86 ± 0.41 a 0.78 ± 0.37 a 0.96 ± 0.42 c 0.97 ± 0.11 c 1.09 ± 0.46 c C20:1n7 0.54 ± 0.07 a 0.42 ± 0.03 a 0.39 ± 0.02 a 0.72 ± 0.13 b 0.67 ± 0.22 b 0.76 ± 0.09 b C20:2n6 0.23 ± 0.05 0.34 ± 0.06 0.44 ± 0.052 0.41 ± 0.13 0.39 ± 0.17 0.48 ± 0.20 C20:4n6 1.33 ± 0.72 a 0.95 ± 0.37 b 0.82 ± 0.07 c 0.79 ± 0.13 c 0.84 ± 0.22 c 0.85 ± 0.36 c C20:3n3 0.21 ± 0.01 0.19 ± 0.02 0.26 ± 0.09 0.19 ± 0.01 0.21 ± 0.02 0.24 ± 0.02 C20:4n3 0.36 ± 0.04 a 0.28 ± 0.02 b 0.27 ± 0.09 b 0.25 ± 0.02 b 0.38 ± 0.09 a 0.25 ± 0.02 b C20:5n3 1.86 ± 0.64 a 1.75 ± 0.36 a 1.14 ± 0.54 b 1.06 ± 0.07 bc 0.92 ± 0.34 c 0.87 ± 0.55 c C22:0 0.36 ± 0.11 0.34 ± 0.07 0.31 ± 0.08 0.28 ± 0.03 0.26 ± 0.11 0.34 ± 0.07 C22:2n6 0.36 ± 0.02 a 0.45 ± 0.04 b 0.31 ± 0.01 a 0.42 ± 0.06 b 0.61 ± 0.11 c 0.44 ± 0.12 b C22:5n3 0.82 ± 0.19 0.81 ± 0.27a 0.93 ± 0.16 0.92 ± 0.13 0.85 ± 0.14 0.87 ± 0.15 C22:6n3 0.86 ± 0.17 a 0.77 ± 0.12 b 0.43 ± 0.05 c 0.46 ± 0.07 c 0.31 ± 0.02 d 0.25 ± 0.01 d Sum 97.81 97.88 98.76 97.46 96.31 98.61 SFA 28.39 26.03 25.57 24.15 23.38 22.28 MUFA 42.84 45.38 46.83 45.9 42.78 44.38 ∑PUFA 26.31 26.22 26.29 27.17 29.94 30.76 ∑HUFA 5.44 4.75 3.85 3.67 3.51 3.33 DHA/EPA 0.46 0.44 0.37 0.43 0.34 0.28 表4. 克氏原螯虾性腺发育各阶段肝胰腺脂肪酸组成变化 注：同一列数据上标不同英文字母表示有显著差异(P < 0.05)。 克氏原螯虾性腺发育各时期肝胰腺中，共检测到27种脂肪酸(见表4)，其中饱和脂肪酸6种，单不饱和脂肪脂肪酸7种，多不饱和脂肪酸12种。主要脂肪酸有C16:0、C16:1n7、C18:0、C18:1n9、C18:2n6和C18:3n3，而又以C16:0、C18:1n9和C18:2n6所占比例较大。肝胰腺中有多种脂肪酸在性腺发育过程变化显著，其中C16:0随着性腺发育逐渐减少，C16:1n7和C18:3n3随着性腺发育先增加后减少，产卵后达到最低，而C18:2n6随着性腺发育逐渐增加。三种高不饱和脂肪酸C20:4n6 (花生四烯酸ARA)，C20:5n3 (EPA)，C22:6n3 (DHA)呈显著减少趋势。就总和来说，饱和脂肪酸在整个性腺发育过程中是逐渐减少的，而单不饱和脂肪酸呈现出先上升后下降趋势，在卵黄发旺期，及性腺发育四期达到峰值随后再次下降。