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user: 3. 结果与分析 3.1. 受精卵特征 尖吻鲈鱼受精卵为透明球形，直径为0.765 ± 0.032 mm的非粘性卵。卵表面具有类似鳞片的花纹，中心是一个大的透明的卵黄囊，直径约为0.18 mm的微油滴嵌入其中。雌鱼产卵时快速游动并甩尾，雄鱼追赶雌鱼，排精并甩尾，使其在水中进行充分受精。尖吻鲈受精卵属浮性卵，无充气状态下，受精后漂浮于水面或悬浮于海水水体中。未受精或发育不良的卵则沉于水底。 3.2. 尖吻鲈胚胎发育特征描述 尖吻鲈受精卵自尖吻鲈亲鱼交配动作停止后开始定时采集并记录时间，将受精卵放置于显微镜下进 Table 1 Embryonic development characteristics of Lates calcarife 发育时期 受精卵各发育时期特征描述 受精后时间 1) 受精卵阶段 受精卵一端有一圆形油脂球，细胞质分布均匀 0 min 2) 卵裂阶段 2细胞期 胚盘分裂成为两个卵裂球，大小相等且形状相同 30 min 4细胞期 胎盘分为四个卵裂球，卵裂沟与第一次相垂直，四个卵裂球大小相等且形状相同 40 min 8细胞期 胎盘分裂为8个卵裂球，8个卵裂球形状不同但大小相近 55 min 16细胞期 受精卵第四次卵裂，胎盘分为16个形状不同大小相近的卵裂球，形成4排，卵裂沟不明显 1 h 5 min 32细胞期 受精卵第五次分裂，胎盘细胞变小，胎盘由“矩形”向“圆形”靠近 1 h 25 min 桑葚胚早期 卵裂越分越小，大小不一 1 h 35 min 桑葚胚晚期 细胞变得更小，边缘细胞分裂增多，胚盘接近圆形 1 h 55 min 3) 囊胚阶段 囊胚早期 胚盘细胞变的很小，逐渐形成半圆形囊胚层 2 h 40 min 囊胚中期 胚盘细胞分裂的更小，细胞界限逐渐不清晰，胚盘细胞开始向一边移动 3 h 囊胚晚期 细胞分裂，胚盘边缘增厚，细胞越来越小，细胞界限无法分辨 3 h 30 min 4) 原肠胚阶段 原肠胚早期 胚盘细胞扩展变薄，并逐渐向植物极方向包裹 4 h 30 min 原肠胚中期 胚层细胞覆盖卵黄囊的1/2，形成胚环，胚盾增厚 5 h 原肠胚晚期 胚层细胞覆盖卵黄囊超过2/3，胚盾变窄 5 h 30 min 5) 神经胚阶段 胚孔闭合前期 胚胎形成胚孔，并逐渐接近闭合 6 h 胚孔闭合期 胚胎胚孔逐渐闭合，胚体开始形成 6 h 30 min 头部原基形成期 胚体向一端延伸变长变细，一端膨胀发育为头部原基 7 h 6) 器官形成阶段 眼基形成期 头部原基两侧出现隆起，逐渐形成眼原基 7 h 10 min 尾牙期 柱状胚体一端发育为铲状 7 h 25 min 眼囊形成期 眼囊膨胀形成 7 h 25 min 心脏出现期 心脏发育成长管状结构，出现在头部末端下方 10 h 40 min 晶状体形成期 晶体形成 12 h 30 min 心跳期 心脏开始有节律地跳动 12 h 30 min 7) 孵化出膜阶段 出膜前期 血液循环明显，身体在鱼卵中成“C”形，卵壳与卵黄之间空隙变大 15 h 50 min 出膜期 头部略向腹部弯曲，油球位于头部正前方，身体开始有色素斑点，卵黄囊变为椭圆形 15 h 50 min 8) 孵化后发育阶段 眼球色素出现期 眼球开始着色，变黑，卵黄基本吸收完毕 41 h 开口期 口张开，可以自由张合，卵黄吸收完毕肠管基本建成 58 h 肠管建成期 肠管形成完整通路 59 h 鳔形成期 鳔形成，油球明显减小，对在水体中的位置控制能力增强 82 h 表1. 尖吻鲈胚胎发育特征 行胚胎发育观察并拍照记录。根据已采集的照片和特征描述，将尖吻鲈胚胎发育全过程进行分阶段分期处理。本研究将尖吻鲈受精卵整个发育过程可分为8个阶段。受精卵在平均温度为29℃的水温条件下，16 h内孵化出膜，82 h鳔形成。表1将尖吻鲈胚胎发育的各个阶段进行了特征描述如下： 受精卵阶段处于刚受精阶段的卵，卵表面有类似鳞片状花纹，细胞质分布均匀，即1细胞期，受精卵中间有一球形油脂，该阶段持续25~30 min。 卵裂阶段受精后30 min，尖吻鲈受精卵进行第一次分裂。在与油球相对的另一端(动物极)发生第一次分裂，胚盘逐渐由外向内缢裂，形成明显卵裂沟，将胚盘分裂成两个大小相等，形状对称的近半球形的卵裂球，两个卵裂球总体构成一个椭圆，进入2细胞期(图1(b))；受精后40 min，开始第二次卵裂，卵 图1. 尖吻鲈受精卵至胚孔闭合期阶段图谱(比例尺：100 μm) 裂沟与第一次卵裂沟相垂直(如不垂直则为畸形卵，不能孵化)，逐渐形成4个大小形态均相同的卵裂球，总体呈四角圆润的“㗊”形，进入4细胞期(图1(c))；受精后55 min，尖吻鲈受精卵第三次卵裂开始，四个卵裂球上均出现卵裂沟，且均与第一次卵裂沟平行，将胚胎平均分成八个大小相近形状略有差异的卵裂球，整齐的排成两行，呈四角圆润的长方形，中间四个卵裂球形状相近，两端四个卵裂球形状相近，进入8细胞期(图1(d))；受精后1 h 5 min开始第四次分裂，形成4行排列，每排4个，中间4个形状相近但与油球重叠度较高不易观察，进入16细胞期(图1(e))；1 h 25 min开始第五次卵裂，胎盘由“方形”向“圆形”靠近，卵裂球变的更小，进入32细胞期(图1(f))。受精后1 h 35 min进入细胞期，尖吻鲈受精卵桑葚胚早期卵裂球变小，大小不一，边缘大中间小，且边缘胚胎细胞较清晰(图1(g))；受精后1 h 55 min进入桑葚胚晚期，细胞变得更小，边缘细胞分裂增多，胚盘接近圆形(图1(h))。 受精后2 h 40 min，进入囊胚阶段，囊胚早期胚盘细胞很小，半圆形囊胚层形成，胚盘开始向一侧开始移动(图1(i))；受精后3 h，进入囊胚中期，细胞界限逐渐不清晰，细胞更小胚盘细胞向一边移动更明显(图1(j))；受精后3 h 30 min，进入囊胚晚期，胚盘在卵黄囊表面扩展，外包开始(图1(k))；4 h 30 min 进入原肠胚阶段，囊胚层细胞逐渐增多，细胞层扩展并逐渐向植物极方向包裹， 原肠胚开始(图1(l))；5 h，进入原肠胚中期，胚层细胞继续扩展，向右上包裹，覆盖卵黄囊的1/2，形成胚环，胚盾增厚(图1(m))；5 h 30 min，原肠胚晚期，胚层细胞覆盖卵黄囊2/3，胚盾变窄(图1(n))；6 h，囊胚层细胞扩展至卵黄囊右上，神经胚阶段开始，胚孔接近闭合，进入胚孔闭合前期(图1(o))；6 h 30 min，胚孔闭合期，胚孔闭合(图1(p))。 7 h，原基出现，胚体形成，柱状胚体一端膨大发育为头部原基(图2(a))；7 h 15 min，器官形成阶段开始，头部两侧隆起眼原基，进入眼基形成期(图2(b))；7 h 15 min，尾牙期，柱状胚体一端发育为铲状(图2(b))；7 h 30 min，眼囊形成期，眼囊膨胀形成(图2(c))；10 h 40 min，心脏出现期，心脏发育成长管状结构，出现在头部末端下方(图2(d))；12 h 30 min，晶状体形成期，晶体形成(图2(e))；12 h 30 min，心跳期，心脏开始有节律地跳动(图2(f))；15 h 50 min，出膜前期，血液循环明显，身体在鱼卵中成“C” 图2. 头部原基形成期至心跳期图片(比例尺：100 μm) 形，卵壳与卵黄之间空隙较大(图3(a)，图3(b))；15 h 50 min，出膜期，头部略弯曲，油球位于头部前方，身体有色素斑点，卵黄囊为椭圆形(图4)，自孵化后至尾部骨骼开始发育为仔鱼期0~20 DPH，其中0~3 DPH为前仔鱼期(图5、图6)期特征为：1. 卵黄尚未吸收完毕；2. 主要依靠卵黄营养；3. 前期口未开，肠道不同，后期口张开，肠道开通；4. 眼睛逐渐着色，视力提升；5. 后期鳔开始充气。4~20 DPH为后仔鱼期(图7)，此阶段特点为卵黄囊吸收完毕，肠道开通，可以开口摄食，此阶段鳍条快读发育，增加运动能力。此阶段是主动摄食的开始阶段。 图3. 出膜前期(比例尺：100 μm) 图4. 出膜期(比例尺：100 μm) 图5. 出膜后仔鱼(受精后16 h，比例尺：100 μm) 图6. 尖吻鲈仔鱼–前仔鱼期(孵化后3天，比例尺：200 μm) 图7. 尖吻鲈仔鱼–后仔鱼期(孵化后12天，比例尺：500 μm) 稚鱼期尖吻鲈的身体结构快速发育(图8)。自鳍条发育基本完成，至鳞片发育完成，为尖吻鲈提供足够的保护为止，通常是指孵化后一个月以内的鱼体(存在特例)。此阶段尖吻鲈体表有色素沉积构成花纹，但无色素沉积的部位仍然透明，此阶段生长速度加快可以尝试进行饲料的驯化。 图8. 尖吻鲈稚鱼(孵化后22天，比例尺：1000 μm)