DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 结论 本文建立模型分析了交通子网进行信号配时的方法。运用运筹学方法，将交通子网络上的信号灯设计问题表达为带有用户均衡约束的网络优化问题(TNO-UEC)，也称为一个领导者–跟随者博弈。领导者是交通信号灯的设计人员，其目标是通过优化信号参数，提高交通网络的储备通行能力；而跟随者是网络用户、即驾驶员，他们根据上层问题的决策选择最节省时间的出行路径。算例分析表明，将子网分开进行信号设计与整体同时设计，得到的解是不一样的。
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user: 摘 要 分别以普通纯水泥混凝土和高强纯水泥混凝土为对照组，在不改变蒸养制度的前提下，通过降低水胶比来提高掺磷渣的蒸养混凝土的拆模强度，并探究其后期抗压强度发展规律及抗氯离子渗透性。研究表明，在不改变水胶比时，掺入磷渣会显著降低蒸养混凝土的拆模强度；适当降低水胶比后，掺磷渣的蒸养混凝土的拆模强度接近甚至超过对照组，且后期具有较高的抗压强度增长速率和抗氯离子渗透性。 关键词 :磷渣，蒸养混凝土，水胶比，抗压强度，氯离子渗透性 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 混凝土预制构件具有生产效率高，成本低，质量稳定，环境污染小等诸多优点，已被广泛应用于现代建筑结构中 [ 1 ] [ 2 ] 。在生产混凝土预制构件的过程中，通常采用高温蒸汽养护工艺 [ 3 ] 。高温蒸养能够加速胶凝材料的早期水化，提高混凝土的早期强度 [ 4 ] [ 5 ] 。但早期高温蒸养会导致硬化浆体后期的孔结构较疏松，使混凝土具有较低的强度增长速率和较差的耐久性 [ 6 ] [ 7 ] 。 磷渣是工业上生产黄磷时的废渣，排放量为黄磷产量的8~10倍 [ 8 ] 。磷渣的矿物组成以玻璃体为主，化学组成主要为CaO，SiO 2 ，Al 2 O 3 ，P 2 O 5 等 [ 9 ] 。研究表明，磷渣是一种具有火山灰活性的物质，作为矿物掺合料应用于混凝土中时，具有提高新拌混凝土工作性，减少水泥早期的水化放热，改善硬化浆体后期的孔结构，提高混凝土后期的强度和耐久性等优点；但磷渣会延缓水泥的水化反应，导致其早期强度发展缓慢 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] 。磷渣应用于蒸养混凝土中时，高温养护可以显著提高水泥和磷渣早期的水化速率，进而改善早期磷渣对水泥水化速率的不利影响 [ 13 ] 。 较高的拆模强度是保障蒸养混凝土高效生产并安全使用的前提。同时，蒸养混凝土后期的抗压强度发展和耐久性对其服役寿命也至关重要。本文的研究中，在不改变蒸养制度的前提下，通过降低水胶比，以提高掺磷渣的混凝土的拆模强度，并探究其后期强度发展规律及抗氯离子渗透性。
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user: 2. 原材料与试验方法
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user: 2.1. 原材料 试验所用水泥为金隅P·O 42.5水泥。磷渣为水淬磷渣。水泥和磷渣的化学成分如表1所示。采用激光粒度分析仪测试水泥和磷渣的粒度分布，结果如图1所示。粗骨料为粒径5~20 mm的石灰石碎石，细骨料为粒径<5 mm的天然河砂。
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user: 2.2. 试验方法 纯水泥混凝土的水胶比为0.4和0.32，分别对应普通混凝土与高强混凝土，并作为对照组。普通混凝土和高强混凝土的配合比分别如表2、表3所示。混凝土成型10 cm × 10 cm × 10 cm的立方体试块后， Table 1 The chemical compositions of the cement and phosphorus slag /
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user: 摘 要 为了研究移动荷载作用下水泥混凝土路面沥青加铺层裂缝中点的应力状态，应用abaqus软件分析加铺层厚度、加铺层模量、水泥板厚度、基础模量对沥青加铺层路面应力状态的影响。结果表明：基础模量对沥青加铺层裂缝中点应力影响最大，加铺层厚度和加铺层模量影响次之，但水泥板厚度对裂缝中点应力几乎没有影响。 关键词 :混凝土路面，沥青加铺层，有限元，应力状态，移动荷载 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 旧水泥混凝土路面的加铺改建，一般采用沥青混凝土材料作为加铺层。但由于旧混凝土面层本身的接缝和裂缝，新建面层在气候和行车荷载作用下，会在加铺层上产生反射裂缝 [ 1 ] 。目前很多文献都是研究静荷载对沥青加铺层路面结构的影响，对模拟路面的真实受力状况存在一定的局限性。为了更加真实可靠地分析旧混凝土路面沥青加铺层的内应力分布状况，本文借鉴国内外现有的研究成果 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] ，采用Fortran软件编写DLOAD以及UTRACLOAD子程序实现移动荷载的施加，利用abaqus软件分析带裂缝的复合式路面结构力学响应，研究了加铺层厚度、加铺层模量、水泥板厚度及基础模量等因素对沥青加铺层路面结构的影响。其中，分析对象由沥青加铺层、带有接缝的旧混凝土路面层和基础组成。
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user: 2. 有限元计算模型和材料参数 2.1. 基本假设和有限元模型 沥青加铺层在力学性质上属于非线性的弹–粘–塑性体，考虑到行驶车轮作用的瞬时性，在路面结构中产生的应力数值很小，而且混凝土板与基础之间的摩阻力一般不大，在力学图式上可以将其看作弹性地基板，因此，分析时可将整个路面加铺层结构作为弹性体，采用线性静力学的分析方法。为了反映弹性半空间体地基的特性，地基采用扩大基础尺寸。应力分析时，对各结构层作如下假设： ① 各结构层均为均匀、连续、各向同性的弹性体； ② 层间接触完全连续； ③ 基础底面各向位移为零，基础侧面水平方向位移为零； ④ 路面被整个裂缝贯穿，假设宽度为1 cm，裂缝处不存在传荷能力； 分析采用黄河JN150标准车型，行车荷载为双轮组单轴轴载100 kN，即标准轴载BZZ-100。轮胎接地压强p = 0.7 MPa，单轮传压面的当量圆径d = 21.30 cm，单轮当量圆的作用范围折算为等效轮压的作用范围，即18.9 cm × 18.9 cm的正方形，接地面积为357.21 cm 2 ，双轮中心距为32 cm，两侧轮隙间距为182 cm。计算车速为30 m/s的标准车型0.1 s内对裂缝处沥青加铺层的力学响应，轮迹带长度取3 m，如图1网格加密区。 本文拟定的相关参数包括：为模拟实际路面选取旧水泥混凝土路面板板长6 m × 6 m、宽4.5 m、裂缝宽度为1 cm、厚度22 cm；沥青加铺层长12.01 m、宽4.5 m、厚度为10 cm。模拟时为了更好地反映出半无限大空间地基的特征，取长18.01 m、宽10.5 m、厚度为9 m的扩大基础为地基。依据有限元的基本理论，要获得更高的计算精度，其划分的网格应该取得越细。当然也不是越细越好，因为计算速度会由于网格划分过细而降低，应该划分合理。适度地于应力较大的部位、荷载作用处和研究关注位置处加密，扩大其它位置的网格。对接缝及其附近等本课题重点关注的部位，细化了其加铺层结构网格，整体网格划分如图1所示，裂缝处局部网格如图2所示。 2.2. 材料参数 针对国内的典型复合式路面结构，引入断裂力学基本原理，设置能较好反映裂缝尖端应力场的奇异性的奇异单元来模拟沥青层。各结构层均视为各向同性的均质材料，主要计算参数 [ 7 ] 如表1所示。 图1. 加铺层路面结构的计算模型 图2. 裂缝处局部网格
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user: 3. 裂缝中点应力响应分析 车辆荷载作用下，路面结构内任一点通常都同时存在应力、应变和应变能，沥青加铺层的破坏与危险点位置与这些因素密切相关。目前常用的强度理论有三种，即最大拉应力理论，最大剪应力理论以及形状改变比能理论。根据这三大强度理论，本文对加铺层进行移动荷载分析时主要考察沥青加铺层裂缝中点的最大主应力 σ 1 、最大剪应力 τ max 以及等效应力 σ e 。 由图3可以看出，车辆从远处驶向裂缝的过程中，裂缝中点处的最大主应力 σ 1 、最大剪应力 τ max 以及等效应力 σ e 整体呈增大趋势，0.022 s以前，车辆对裂缝中点处的力学响应并不明显，应力增加幅度较小，0.022 s到0.046 s，这段时间应力以指数形式增长， σ 1 、 τ max 以及 σ e 分别增加了255%、206%、289%。0.046 s到0.05 s，裂缝中点处应力急剧减小，0.05 s前后荷载应力基本呈对称趋势。表明车轮在裂缝正上方时并不是最不利荷载位置，而是0.046 s处，车轮中心距裂缝中心水平距离1.2 m处。
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user: 4. 加铺层的结构力学分析 4.1. 加铺层厚度对荷载应力影响分析 沥青加铺层的厚度与反射裂缝的扩展速度有很大的关系，一般来说，加铺层越厚，其防止或延缓反射裂缝的效果就越好，裂缝扩展到路表面的时间也就越长，但加铺层也不可能无限度地增厚，一是经济上不可行；二是加铺层过厚易产生车辙，影响路面的使用性能。分析在最不利荷载时刻0.046 s时，沥青 Table 1 Material parameter 结构层 厚度(cm) 模量(MPa) 泊松比 密度(kg/m 3 ) 沥青加铺层 8~22 800~1400 0.3 2500 旧水泥混凝土路面 22 30000 0.15 2500 土基 900 100 0.35 1400 表1. 材料参数 图3. 裂缝中点处应力响应 加铺层厚度按2 cm的增量从8 cm增加到22 cm的变化过程中，接缝处加铺层应力变化情况见图4。 由图4可以看出，最大主应力 σ 1 、最大剪应力 τ max 以及等效应力 σ e 随沥青加铺层厚度增加而减小。当加铺层厚度从8 cm增至22 cm时， σ 1 、 τ max 、 σ e 曲线下降速率均较快，这三个应力分别减少了53.1%，51.7%，62.8%，说明增加加铺层的厚度对减小加铺层的应力起到了很大的作用。 4.2. 加铺层模量对荷载应力的影响 沥青混合料作为一种粘弹性材料，对温度变化比较敏感，随着温度的变化其模量和强度及材料组成也相应产生变化，而模量变化将导致沥青加铺层对荷载响应的变化 [ 8 ] 。本节分析沥青加铺层模量变化对路面结构受力产生的影响。分析沥青混合料模量从800 MPa变化到2000 MPa的过程中荷载应力的变化。 由图5可以看出，最大主应力 σ 1 、最大剪应力 τ max 以及等效应力 σ e 随沥青加铺层厚度增加而减小。当加铺层厚度从8 cm增至22 cm时， σ 1 、 τ max 、 σ e 曲线下降速率均较快，这三个应力分别减少了53.1%，51.7%，62.8%，说明增加加铺层的厚度对减小加铺层的应力起到了很大的作用。 4.3. 水泥板厚度对荷载应力的影响 随着水泥板厚度增大，裂缝中点处的 σ 1 、 τ max 和 σ e 都逐渐增大。当水泥板厚度达到24 cm时， σ 1 、 τ max 和 σ e 达到最大。厚度继续增大时，这三个应力值开始逐渐减小，整个变化过程中 σ 1 、 τ max 和 σ e 变化的幅度都很小，可见水泥板厚度对加铺层底的应力值影响很小(图6)。 4.4. 基础模量对荷载应力的影响 基础是混凝土路面板的基本支撑体，包括原路面基层、垫层与土基。虽然行车荷载通过混凝土路面结构传至基层，但基础的稳定性直接关系到混凝土路面的使用性能，从而影响到沥青加铺层路面的使用性能 [ 9 ] 。基础损坏严重的路段，基础模量较小，可低至50 MPa，需要进行灌浆处理。而基础状况较好的路段，基础模量较大，可达到120 MPa以上。经过灌浆及其他补强处理，模量值可得到相应提高，取基础模量为50~150 MP进行分析 [ 10 ] 。 图4. 裂缝中点应力随沥青加铺层厚度变化 图5. 裂缝中点应力随沥青加铺层模量变化 图6. 裂缝中点应力随沥青加铺层模量变化 由图7可见，随着基础模量的增加，沥青加铺层中的各应力分量不断降低。基础模量初期的增长对改善沥青罩面层中的应力效果十分显著，模量由50 MPa增大到150 MPa时， σ e 由1.12 MPa减少到0.59 MPa，降低了47.3%，其他各应力也都有较大幅度的降低。在基础模量增大的后期，各应力变化并不显著。由上述分析可知，当基层的模量很弱时，适当地提高基础的模量对改善复合路面结构的整体结构强度及降低行车荷载对沥青加铺层的损坏有较大好处。因此，在加铺沥青面层之前，对基础的脱空进行合理处治，对改善加铺层应力、有效防治反射裂缝十分显著，而且对混凝土板的基础脱空现象进行调查和处治也十分必要。 图7. 裂缝中点应力随基础模量变化
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user: 5. 结论 (1) 加铺层内的剪应力随着加铺层厚度的增加而减小，尽管能改善加铺层内的应力状态，但效果远不及基础模量的影响显著。 (2) 随着沥青加铺层厚度和模量的增大，裂缝中点处的应力逐渐减小，并且厚度越厚反射裂缝扩展至道路表面的时间也相应的越久，这样对防止和延缓反射裂缝也更有利。但当加铺层结构总厚度到时再增加吸收层的厚度对应力减小效果不是很明显，并且随着加铺层厚度增大，要投入更多的成本，也容易产生车辙，可见沥青加铺厚度并不是越厚越好。 (3) 基础模量对加铺层应力状态的影响较为显著，在加铺沥青面层之前，处治旧混凝土板下的脱空、提高基础模量对防治反射裂缝十分有效。
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user: 摘 要 当前分布式光伏发电系统在建筑设计中的应用日趋成熟，本文对民用建筑分布式光伏发电系统的组成、设计要点、并网方案进行了研究，结合某小区的发电系统设计分析了分布式光伏发电系统的并网优势和效益，提出了光伏发电系统在建筑设计中的可行性的设计方法，进行电气设计和并网设计，旨在为分布式光伏发电系统在建筑设计中的进一步推广和应用提供参考。 关键词 :建筑设计，分布式光伏系统，并网设计 Copyright © 2017 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 光伏发电是利用半导体界面的光生伏特效应而将光能直接转变为电能的一种技术 [ 1 ] [ 2 ] 。无论从世界还是从中国来看，常规能源都是很有限的。中国的一次能源储量远远低于世界的平均水平，大约只有世界总储量的10%。太阳能，取之不尽，且具有的清洁性、绝对的安全性、相对的广泛性、长寿命性和免维护性、资源的充足性及潜在的经济性等优点，在长期的能源战略中具有重要地位 [ 3 ] 。在《可再生能源法》及配套政策的支持下，我国光伏产业快速发展，光伏发电技术和成本均已形成一定的国际竞争力。 2013年国务院发布了《关于促进光伏产业健康发展的若干意见》，明确鼓励了建设各类分布式光伏发电系统，但我国民用建筑光伏系统的推广和应用才刚刚起步 [ 4 ] ，民用建筑光伏系统的电气设计经验尚且不足，阻碍了分布式光伏发电技术的发展，使民用建筑光伏发电系统的设计如何更好的结合我国国情已经成为了研究的重点，随着由国家推动建设绿色环保型建筑的步伐不断加快 [ 5 ] ，分布式光伏系统在建筑设计中的“中国化”指日可待，这必将在减少污染物排放、建设环保节约型社会、实现可持续发展的目标中发挥巨大作用。本文对分布式光伏发电系统结合某住宅小区的电气设计和并网设计，进行在用建筑中的应用研究。
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user: 2. 系统组成 分布式光伏发电系统的基本设备包括光伏电池组件、光伏方阵支架、直流汇流箱、直流配电柜、并网逆变器、交流配电柜等设备。其运行模式是在有太阳辐射的条件下，光伏发电系统的太阳能电池组件阵列将太阳能转换输出的电能，经过直流汇流箱集中送入直流配电柜，由并网逆变器逆变成交流电供给建筑自身负载，多余或不足的电力通过联接电网来调节。如何将其应用在民用建筑上，需从光伏方阵、储能装置和逆变器。
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user: 2.1. 光伏方阵 光伏方阵(PV Array)又称光伏阵列，是由若干个光伏组件或光伏板在机械和电气上按一定方式组装在一起并且具有固定的支撑结构而构成的直流发电单元。其基本发电单元是光伏电池，工程上往往将若干个光伏电池串并联后封装成光伏组件来增大功率，再按照不同的需要进行串并联和线路设计就组成了满足不同设计要求的光伏方阵 [ 6 ] 。 在实际应用中，光伏方阵常出现热板效应，当某个电池出现故障导致输出功率大幅减小时，此时该电池相当于一个电阻，消耗其它光伏电池产生的能量，热功率加大从而温度上升。为了避免这种现象的出现，需要在光伏电池的串联线路上安装旁路二极管作为电流能够绕过障碍电池的备用通路，接入住宅小区需要做继电保护和计量设计。
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user: 2.2. 储能装置 光伏发电的特性具有不稳定性，作为民用建筑使用，从电网安全、稳定、经济运行的角度分析，不加储能的光伏并网发电系统将对线路潮流、系统保护、电网经济运行、电能质量和运行调度等方面产生不利影响，目前解决光伏电站对电网影响的途径是提高电网灵活性或为并网光伏电站配置储能装置。常见的储能装置有蓄电池、超导磁和超级电容等几种方式，其中蓄电池能够为光伏发电系统提供持续稳定的电能供应，故蓄电池成为分布式光伏发电系统中应用最广泛的储能装置 [ 7 ] 。
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user: 2.3. 逆变器 光伏逆变器是光伏发电系统两大主要部件之一，光伏逆变器的核心任务是跟踪光伏阵列的最大输出功率，并将其能量以最小的变换损耗、最佳的电能质量馈入电网。根据功率等级、内部电路结构及应用场合不同，一般可分为集中型逆变器、组串型逆变器和微型逆变器三种类型。其中集中型逆变器具有初始投资小、运维稳定方便、单机功率大等特点，是目前大部分中大型光伏电站的首选，在全球5 MW以上的光伏电站中，其选用比例超过98%。
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user: 3. 住宅小区分布式光伏的电气设计
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user: 3.1. 光伏方阵设计 光伏方阵的设计主要包括了结合住宅小区进行布置，考虑朝向、间距和布局三个方面。光伏方阵的朝向通常指光伏方阵的方位角和光伏组件的倾角。通常情况下，在北半球组件方位角为正南时，光伏组件能够接受的太阳辐射量最大 [ 8 ] 。 最佳倾角的计算需要考虑连续性、均匀性和极大性三个方面，其中连续性是由气象资料查得某个地点的各月水平辐射总量较大的位置，当方位角偏离正南方向时，组件的最佳倾角随方位角的增加而减小 [ 9 ] 。均匀性是指选择倾角时，最好能使方阵面上全年接收到的平均日辐射量比较均匀，比较接近，以免造成夏天较大的浪费。极大性是指选择倾角时，还应尽量使方阵面上在冬季的平均日辐射量达到最大值，同时兼顾到全年平均日辐射不能太小。 考虑本次设计是嘉兴某小区，其方阵的间距主要考虑冬季时太阳高度较低，后排方阵容易被前排遮挡。相关技术规范规定，为了确保在日出后或日落前3小时在冬至日后排方阵不被前排方阵遮挡，即保证全年每天中当地时间的上午9时至下午3时之间光伏组件无阴影遮挡，此次倾角设计为32˚。另外在方阵设计过程中必须要计算方阵的最小间距 [ 10 ] [ 11 ] 。实际情况下，周边环境如建筑的改造、植被生长等往往难以预知，所以在设计时还需要预留出一部分面积作为“缓冲带”。
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user: 3.2. 逆变器设计 逆变器的设计需要在光伏系统生命周期内寻找总发电量和总成本的平衡点，还要考虑电网接入，如故障穿越能力、电能质量、电网适应性等方面的要求。依据各种逆变器的特点，结合所应用的光伏电站实际情况，从电网友好、高投资回报、方便建设维护等方面进行科学合理的选用。逆变器常采用被动与主动相结合的孤岛效应保护措施，当检测到公共电网失压后，将立刻切断与电网的联结，避免电能输送，当逆变器检测到公共电网恢复后，不会马上输送电能，而是对电网进行一定时间(通常为180 s)的监测，确保系统线路稳定后才入网。
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user: 4. 住宅小区并网设计
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user: 4.1. 并网设计 民用建筑光伏系统并网设计内容包括系统设计、方案划分、继电保护计量。其中，民用建筑光伏系统并网设计方案通常有以下三种(表1)。 嘉兴某小区供电电源由市政提供，电压等级为10 KV，计划将变电站设在小区地下一层，主电缆经室外引至各楼配电室，即采用方案3的设计方案。光伏系统在小区地下一层进行380 V/220 V配电室处并网，优先向储能设备供电，剩余电接入10 KV中压变电站380 V母线，经变压器升压后接入10 KV公共电网。 并网配电柜采用单母线接线，如图1所示。
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user: 4.2. 继电保护和计量装置设计 对该小区的发电系统选用瑞士ABB的微型断路器，利用断路器的脱扣特性和宽范围的电流等级为小区分布式发电系统提供过载和断路保护，并且配备母线保护装置和孤岛检测装置的逆变器装置。 在并网点设置并网电能表，在产权分界点设置关口计量电能表，电能表采用静止式多功能型，具备电流、电压、电量等信息和三相电流不平衡监测功能，采集的信息分别接入电网管理部门和光伏发电管理部门，为电能计量和电价补贴提供依据。 Table 1 The design scheme of distributed photovoltaic syste
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user: 摘 要 2014年7月19~20日和9月17~18日贵州西部发生了两场由台风倒槽引起的暴雨天气过程，其中9月17~18日的台风倒槽暴雨天气过程引发严重的洪涝灾害。本文利用MICAPS资料、地面加密自动站资料和NCEP再分析资料等对2014年7月19~20日和9月17~18日发生在贵州西部的两次台风倒槽暴雨天气过程进行对比分析。分析发现：两次台风倒槽暴雨天气过程均是在副热带高压588线稳定维持在湖南西部边缘的条件下产生的，台风登陆后减弱为热带低压，热带低压在副热带高压南侧偏东气流影响下西行到达广西西部后，其东北部台风倒槽影响贵州时产生暴雨；台风低压外围的东南急流从南海给暴雨区带来充足的水汽和不稳定能量。“威马逊”台风倒槽暴雨(2014年7月19~20日)由单一的台风倒槽影响造成，热力不稳定层结虽维持时间较长，但上升运动与辐合辐散均不强，对应产生的暴雨强度不大，站点少而分散；“海鸥”台风倒槽暴雨(2014年9月17日~18日)由低涡切变和台风倒槽共同影响产生，强烈的水汽辐合形成于两系统之间的偏南气流里，上升运动与辐合辐散均长时间维持，对应暴雨降雨时间长，站点多而集中。分析贵州西部预报点上空的天气系统的配置及水汽通量和水汽通量散度分布变化特征对贵州西部台风低槽的预报预警有较好地指示作用。 关键词 :台风倒槽，暴雨，贵州西部，对比分析 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 贵州西部暴雨的发生频率虽没有中东部高，量级也没有中东部大，但贵州西部山高谷深，地形切割分明，暴雨，特别是大暴雨由于降雨突发性强、强度大，常常导致贵州西部山洪爆发、河水猛涨，滑坡、泥石流，城镇内涝等自然灾害时常发生，给贵州西部国民经济和人民生命财产造成严重损失。造成贵州西部暴雨发生的主要天气系统有地面冷锋、高原槽、印缅槽、西南涡、切变线、低空急流等，对这类天气系统造成的暴雨研究颇多 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] ，得出的结论对贵州暴雨的预报预警有很好的指示意义。然而对台风倒槽影响贵州西部并造成暴雨的过程分析则是少之又少。台风在广东、广西登陆后其强度快速减弱为热带低压，热带低压常常沿副热带高压南侧偏东气流西移北抬，其形成的台风倒槽外围云系常常影响贵州形成降雨天气，局地降雨量有时还会达到暴雨及以上量级，但造成全省大范围暴雨天气(指贵州境内有5县市以上出现暴雨)的个例并不多见。统计表明：1999~2010年的12年间贵州境内共出现了108次暴雨天气过程，只有3次暴雨天气过程是由台风倒槽引起。周明飞 [ 5 ] 等对这3次由台风倒槽引起的贵州暴雨天气过程进行了诊断分析，分析表明：这三次台风倒槽引起的暴雨天气过程分别是由单一台风倒槽影响造成、台风倒槽与低涡切变共同影响造成和台风倒槽与地面弱冷空气结合影响造成。由单一台风倒槽影响造成的暴雨天气过程热力不稳定层结维持时间较长，上升运动、低层辐合与高层辐散均不强，对应产生的降水虽持续时间长，但小时雨量不大，暴雨站点少而分散；而由低涡切变和台风倒槽共同影响产生暴雨天气过程，两系统之间偏南气流形成强的水汽辐合、上升运动与辐合辐散均较强，上升运动与辐合区发展层次也较高，对应产生的暴雨集中且站点多，降雨时间长；由地面弱冷空气与台风倒槽结合产生的暴雨天气过程，冷暖气流交汇形成的水汽辐合区范围不大，但具有强烈上升运动和动力场发展，致使产生的暴雨虽范围小、但强度大。 2014年7月19~20日和9月17~18日贵州西部发生了两场由台风倒槽引起的暴雨天气过程，其中9月17~18日的台风倒槽暴雨天气过程引发严重的洪涝灾害，本文利用MICAPS资料、地面加密自动站观测资料和NCEP再分析资料等对2014年7月19~20日和9月17~18日发生在贵州西部的两次台风倒槽暴雨天气过程进行对比分析，以揭示贵州西部台风倒槽暴雨过程形成的背景与机理，为今后贵州西部台风倒槽暴雨过程防洪抗灾预测预报服务提供参考依据。
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user: 2. 两次强暴雨过程概况 2014年7月19日早晨7时左右，2014年第9号台风“威马逊”在广西西北部防城港附近登陆，受其减弱西移北抬台风倒槽影响，2014年7月19日夜间~21日白天贵州西南部的黔西南、六盘水南部等地普中到大雨，个别乡镇出现暴雨(以下简称“威马逊”台风倒槽暴雨)。从20时贵州区域自动气象站24 h降雨量分布图看(图1(a)，图1(b))：20日降雨量超过25 mm的县市有11个，强降雨落区主要出现在贵州的黔西南、六盘水南部，最大值为黔西南普安站的49 mm，该站1 h最大降雨量为7.8 mm，出现在19日22时(北京时，下同)。21日降雨量超过50 mm的县市有4个，超过25 mm的县市有3个，强降雨落区出现在贵州在黔西南、六盘水南部，最大值出现在六盘水的盘县站，降雨量为89.3 mm，该站1 h最大降雨量为22.6 mm，出现在21日13时。19日20时至21日20时48 h降雨量超过100 mm的县市有2个，超过50 mm的县市有5个，超过25 mm的县市有8个，最大值出现在六盘水的盘县站，降雨量为133.1 mm。 2014年9月16日夜间23时左右，2014年第15号台风“海鸥”在越南的北部登陆，受其减弱西移热带低压东北侧台风倒槽和高原东移低涡切变影响，2014年9月16日夜间~18日白天贵州省西部出现了 图1. 贵州省降雨量分布图(单位：mm，(a) 2014年7月19日20时至20日20时；(b) 2014年7月20日20时至21日20时；(c) 2014年9月16日20时至17日20时；(d) 2014年9月17日20时至18日20时) 一次大范围的暴雨到大暴雨天气过程，从20时区域自动气象站24 h降雨量分布图可见(图1(c)，图1(d))：17日降雨量超过100 mm的县市有3个，超过50 mm的县市有23个，强降雨中心出现在黔西南、六盘水、安顺，最大值出现在黔西南的普安站，降雨量为130.1 mm。该站1 h最大降雨量为17.2 mm，出现在17日20时。18日降雨量超过100 mm的有1个县市，超过50 mm的有9个县市，强降雨中心出现在毕节西南部、六盘水，黔西南西北部，最大值出现在六盘水的盘县站，降雨量为112.9 mm，该站1 h最大降雨量为10.9 mm，出现在18日00时。从16日20时到18日20时48 h降雨量看，降雨量超过200 mm的县市有2个，超过100 mm的县市有16个，超过50 mm的县市有36个，最大值出现在六盘水的盘县站，降雨量为228.7 mm。此次暴雨洪涝灾害共造成六盘水53，533人受灾，紧急转移安置2006人，造成直接经济损失1539.91万元。
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user: 3. 两次台风倒槽暴雨影响系统分析 3.1. “威马逊”台风倒槽暴雨过程的影响系统分析 2014年7月19日20时500 hPa图上(图略)，588线位于湖南西部边缘，584高压位于川西北，脊线位于30˚N~35˚N之间，“威马逊”台风中心位于海南西部洋面上，19日7时左右在广西防城港市光坡镇沿海第三次登陆，登陆时中心附近最大风力达15级，最低气压988 hPa。“威马逊”台风以强台风和台风级别在广西境内维持了9 h (7月19日7~16时)，为有气象记录以来的最长持续时间。19日下午减弱为热带低压，台风低压在副热带高压南侧偏东气流引导下西行，19日20时台风低压中心到达广西西部，台风倒槽位于广西西北部和贵州西南边缘；20日08时，台风低压中心北抬至广西西北部边缘，台风倒槽移至云南东部边缘，强降雨区位于倒槽东侧，贵州西南部出现暴雨；20日20时，台风低压中心西移北抬至云南东南部，倒槽西移至云南境内，贵州西南部降雨减弱，21日白天，台风低压中心西移至云南南部，台风倒槽影响贵州西南部，贵州西南部降水再次增强，直至21日午后，台风低压在云南境内减弱消失，贵州降雨天气结束。700 hPa图上，19日20时台风倒槽位于云南东南部边缘到贵州西南部，从东南沿海到、广西、湖南、贵州中东部为一致的偏南气流，最大风速为河池的32 m/s。20日08时台风倒槽稍南退，东南气流有所减弱，最大风速为贵阳站的20 m/s。20日20时台风倒槽位置少变，东南气流减弱为8~14 m/s，最大风速为贵阳站的14 m/s，21日08时东南气流扩散至云南中东部，最大风速为贵州威宁、贵阳的12 m/s，台风倒槽位于云南东北部。850 hPa图上，19日20时台风倒槽位于广西中部，从东南沿海到广西南部为偏南气流，最大风速为南宁站的24 m/s。20日08时台风西移北抬至云南东南部边缘到贵州西南部，广东、广西、湖南、贵州、四川中东部均转为4~12 m/s的东南气流，最大风速为广西境内的12 m/s。东南气流从南海给贵州西南部带来充足的水汽和不稳定能量。 3.2. “海鸥”台风倒槽暴雨过程的影响系统 2014年9月16日20时500 hPa图上(图略)，588线位于湖南西部边缘，584高压脊控制贵州中东部，脊线在25˚N附近，甘南至川西北有槽，我省为暖脊控制。“海鸥”台风中心位于海南西部洋面上。16日23时左右在越南的北部登陆，登陆时台风中心最低气压为975 hPa，台风中心附近最大风力达12级。登陆后强度快速减弱，17日下午减弱为热带低压，17日夜间，台风倒槽与低涡切变槽在贵州西部靠近并结合，台风倒槽与切变槽的结合使倒槽东侧偏南风加大，此过程区域性暴雨区出现在两系统之间东南侧的偏南气流中。台风倒槽西移出贵州后，从地面至500 hPa，贵州均转为偏南气流影响，贵州强降雨天气结束。700 hPa图上，16日20时陕南–川东–盆地南部有低涡切变，台风倒槽位于云南东南部边缘到贵州西南部，从东南沿海到广西、湖南、贵州中东部为一致的强劲东偏南气流，最大风速为北海站的42 m/s。17日08时低涡切变东南移南压至川东–盆地南部，台风倒槽北抬东移至贵州西部，东南气流有所减弱，最大风速为南宁站的28 m/s。17日20时低涡切变与台风倒槽结合，东南气流继续减弱，最大风速为白色站的20 m/s，18日08时东南气流继续减弱，最大风速为贵阳站的14 m/s。850 hPa图上，16日20时台风倒槽位于广西南部边缘，从我省中东部到广西、湖南为一致的强劲东偏北气流，最大风速为南宁站的36 m/s。17日08时低涡切变位于川东–盆地南部，台风倒槽北抬贵州南部边缘，东南气流有所减弱，广东、广西、湖南为一致的14~30 m/s东南气流，最大风速为南宁站的30 m/s。17日20时台风倒槽北抬至贵州西北部与低涡切变结合，东南气流继续减弱，最大风速为白色站的18 m/s，18日08时东南气流继续减弱北扩，最大风速为白色站的16 m/s。中低层强劲东偏南气流给我省西南部、西部带来充足的水汽和不稳定能量。
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user: 4. 物理量场特征
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user: 4.1. 水汽条件对比 从强降雨中心上空的水汽通量分布看，两次暴雨开始前在850 hPa与700 hPa之间均出现水汽通量大值中心(图2(a)、图2(b))，“威马逊”暴雨水汽分布主要在500 hPa以下，水汽通量最大值中心出现在19日20时前后700 hPa左右，为1.7 g/(cm∙hpa∙s)，“海鸥”暴雨的水汽分布达到400 hPa，水汽通量最大值为25 g/(cm∙hpa∙s)，出现在17日02时前后，说明”海鸥”暴雨比”威马逊”暴雨的水汽条件更好，两次暴雨均出现了2~3个个水汽通量散度强中心区(图略)，呈现为增强–减弱–增强的趋势，这与低空西南急流及风速风向辐合强度的变化基本一致。
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user: 4.2. 不稳定能量对比 不稳定层结为强对流天气发生发展提供了从位能转化为动能的基本条件 [ 6 ] 。从表1的威宁、贵阳、兴仁站点探空的K指数、Si指数等稳定度参数对比分析看，两次暴雨过程贵阳、兴仁两站K指数在38℃~43℃之间，Si指数在−0.13℃~−3.71℃之间，表示暴雨期间大气暖湿，水汽充分；从Δθ se (500~700) 看，暴雨期间威 图2. 沿暴雨中心(25.7˚N， 104.5˚E)风矢量场及水汽通量的高度–时间剖面图(单位：g/(cm∙hpa∙s，(a) 2014年7月19日20:00~21日20:00，(b) 2014年9月16日20:00~18日20:00) Table 1 Comparison and analysis of stability parameters of Weining， Guiyang and Xingren (Xingren for 14 h
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user: 摘 要 为了构建表达兔瘟病毒VP60基因的牛疱疹病毒I型，首先构建含有兔瘟病毒VP60基因和CMV启动子的转移载体，然后将构建移载体与gE基因缺失的牛疱疹病毒I型基因组共转染牛肺细胞后收获增殖的病毒。通过蓝白斑筛选不含有LacZ基因的白色病毒蚀斑，反复纯化获得重组病毒BHV-1-VP60。PCR方法验证VP60基因的成功插入，间接免疫荧光试验和Western blot，结果证明了BHV-1-VP60中的VP60基因在易感细胞中获得了表达。本研究成功地构建了兔瘟病毒VP60基因的重组病毒BHV-1-VP60，为研制新型兔瘟活载体疫苗奠定了基础。 关键词 :兔瘟病毒，VP60基因，牛疱疹病毒1型，蓝白斑筛选 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 兔瘟是由兔瘟病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus， RHDV)引起兔的一种急性、接触性传染病，以呼吸系统出血，实质器官水肿，淤血及出血变化为特征，该病传播快，发病急，发病率和死亡率极高，是影响兔养殖业发展的重要传染病 [ 1 ] 。目前该病广泛使用RHDV组织灭活苗来进行预防。随着分子生物学技术的发展，研究者逐渐将目光转向安全高效的基因工程疫苗的研制。已有报道兔瘟基因工程杆状病毒源亚单位疫苗已进入复合检验中，在新型疫苗的研制中取得突破性进展 [ 2 ] 。活载体疫苗是一种新型疫苗，利用基因工程方法改造病毒作为载体，能够表达特定保护性抗原或免疫调节因子等，特别是可以构建多价疫苗以达到一针防多病的目的 [ 3 ] 。疱疹病毒是一群较大的有囊膜的双链DNA病毒。I型牛疱疹病毒(Bovine hepervirus-1，BHV-1)为α疱疹病毒，具有疱疹病毒科成员所共有的形态特征。BHV-1宿主范围窄，不易传播于其他生物，尤其不会感染人类，因而将减少公共健康方面的忧虑。BHV-1基因组庞大，结构中有许多非必需基因，可以插入多个外源基因，并能使免疫动物产生外源表达产物的抗体，是成为构建多价疫苗的理想载体，现已有很多外源病毒DNA成功地插入到了BHV-1基因组中 [ 4 ] 。本研究以gE基因缺失BHV-1为活病毒载体，将兔瘟病毒唯一免疫原性基因VP60插入以获取重组病毒，能够在易感细胞稳定增殖和表达，为BHV-1作为病毒活载体研制兔瘟疫苗以及其他传染性疾病疫苗奠定了基础。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 材料 牛肾细胞(MDBK)，牛肺细胞(BL)，gE基因缺失、并引入大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的重组病毒、含有BHV-1/gE 基因的上游同源重组序列及CMV控制下的LacZ基因的pGEMTgILdgELacZ质粒及含有BHV-1gE基因下游同源重组序列的质粒pGEM-TgESN均由哈尔滨兽医研究所大动物研究室构建并保存；含有RHDV VP60基因的重组质粒pMD-VP60由本哈尔滨兽医研究所自然疫源性人兽共患病研究室构建并保存。 2.2. 试剂 豚鼠抗RHDV VP60 单克隆抗体(MAb)由本实验室制备保存；辣根过氧化物酶标记和异硫氰酸荧光素标记的山羊抗鼠IgG、DMSO、X-gal购自Sigma公司；新生胎牛血清、MEM培养基、含0.25%胰蛋白酶和0.1%EDTA的细胞消化液为GIBCO产品；质粒提试剂盒、连接酶及内切酶均购自Promega公司；病毒DNA/RNA提取试剂盒购自天根生物科技有限公司；甲基纤维素(MC)、低熔点琼脂糖购自BBI公司；其他试剂为国产分析纯。 2.3. 细胞培养、病毒增殖和基因组提取 含10%新生胎牛血清的MEM用于培养MDBK和BT，用细胞消化液消化分散细胞并传代培养。待细胞长成单层后，接种无血清的病毒稀释液，37℃孵育1 h后，弃上层液体，补加含2%新生胎牛血清的MEM继续培养，当细胞病变达80%左右时回收细胞。4℃超声破碎细胞，2000 rpm低速离心5 min，回收上清。4℃ 10，000 rct高速离心30 min，弃上清留底部约200 μl，重复高速离心一次，最终留离心管底部100 μl液体用于病毒DNA提取。按病毒DNA/RNA提取试剂盒步骤提取病毒基因组用于PCR鉴定及转染试验。 2.4. 转移载体的构建 采用常规的分子生物学方法构建转移载体(如图1)，将含有上游同源重组臂pGEM-TgILdgELacZ质粒与pMD-VP60质粒同时进行Hin d III和Xba I的双酶切，回收目的片段，纯化后连接构建重组质粒pGEMTgILdgEVP60；将其与含有下游同源重组臂pGEMTgESN质粒分别进行Sma I和Nsi I双酶切，回收目的片段纯化后进行连接构建含有目的基因表达盒的转移载体pGEM-TgILdgEVP60gESN重组质粒。该转移载体含有巨细胞病毒(cytomegalovirus immediate-early， CMV)早期启动子控制下的VP60基因以及用于同源重组的BoHV-1/gE基因上、下游同源重组序列。 图1. 转移载体的构建及同源重组 2.5. 转移载体与亲本病毒基因组的共转染 采用磷酸钙介导法进行转染，将2.5 μg经Ecot 22 I酶切的转移载体与亲本病毒基因组共转染BL细胞，以25%的DMSO休克3 min后，用无血清MEM洗涤两次，加入含10%胎牛血清MEM培养基，于37℃培养，待出现80%细胞病变(CPE)后收获培养物。 2.6. 重组病毒的筛选 将转染后收取的病毒液反复冻融后用0.22 μm的滤器过滤，10倍稀释后接种于MDBK细胞，37℃孵育1 h，弃去上清，然后覆盖以含2%血清和1%甲基纤维素的MEM，37℃培养，待出现明显CPE时弃去培养液并充分洗涤。然后无菌覆盖含3%血清和1%低熔点琼脂糖的MEM，并添加X-gal (150 μg/mL)进行染色。37℃培养24 h后观察蓝白斑情况，挑取白色病毒蚀斑继续进行蚀斑克隆纯化，直到所有病毒蚀斑均为白色。 2.7. VP60基因PCR鉴定 将筛选纯化病毒嗜斑接种MDBK细胞，待产生明显病变后收取病毒，提取病毒基因组。参照基因序列设计上游引物P1:5'-TGGATATCATGGAGGGCAAAGCCCG-3'和下游P2： 5'-CGGGATCCTCAGACATAAGAAAAGCCATTG-3'，对VP60基因进行PCR鉴定。 2.8. Western Blot检测 重组病毒BHV-1-VP60及亲本病毒接种MDBK细胞，待出现明显细胞病变时收取细胞，超声破碎后用Millipore蛋白浓缩管浓缩后进行SDS-PAGE电泳，然后电转移至硝酸纤维素膜，以豚鼠抗RHDV VP60蛋白的MAb (1:100)为一抗，山羊抗鼠IgG-HRP (1:2000)为二抗，DAB显色检测蛋白表达情况。 2.9. 间接免疫荧光(IFA)检测 分别以100 TCID50的重组病毒及亲本病毒感染MDBK细胞，待CPE达80%时弃去培养液，以甲醇与丙酮按1:1混合固定细胞30 min，以豚鼠抗 RHDV VP60蛋白的MAb (1:50)为一抗，山羊抗鼠IgG-FITC (1:100)为二抗，荧光显微镜(Axiovert200)下观察，检测VP60蛋白表达情况。
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user: 3. 结果 3.1. 转移载体的构建及共转染 成功构建了含有VP60表达盒的转移载体pGEMTgILdgEVP1gESN，该转移载体含有用于同源重组的基因序列，经酶切及PCR鉴定，插入片段和扩增片断与理论大小一致(图2)，测序结果正确；用该转移载体与亲本病毒的基因组共转染BL细胞后，可发生同源重组，经筛选后可获得重组病毒。 3.2. 重组病毒 BHV-1-VP60的筛选 依据LacZ在含有X-gal指示培养基上的显色反应，逆向筛选白色病毒嗜斑。经10轮的病毒蚀斑筛选后不再有蓝色病毒蚀斑出现(图3)。将白色病毒嗜斑连续纯化10轮后用于PCR及Western blot和间接免疫荧光试验检测。 3.3. 重组病毒BHV-1-VP60的PCR鉴定 将筛选的白色病毒蚀斑经MDBK细胞增殖后，提取病毒基因DNA，经VP60特异性引物扩增，琼脂糖凝胶电泳显示扩增出约1617 bp的特异性片段，与预期大小相同，而亲本病毒制备的DNA样品则 图2. 转移载体的酶切和PCR鉴定 图3. 眼观及镜下观测所获重组病毒嗜斑 无特异性片段(图4)。所示结果表明RHDV VP60基因已经成功插入到重组病毒BHV-1-VP60基因组中，即已获得了在gE基因缺失位置插入外源基因的重组病毒。以噬斑纯化的重组病毒在MDBK细胞中连续传20代，取不同代次病毒 提取基因组DNA，经特异性引物扩增，结果显示均扩增出VP60基因，表明该重组病毒具有良好的遗传稳定性。 3.4. VP60基因表达的Western Blot检测 以重组病毒及亲本病毒感染MDBK细胞的裂解物进行SDS-PAGE，转移至硝酸纤维素膜后以抗VP60的单克隆抗体为一抗、HRP标记的山羊抗鼠IgG为二抗分别作用后于DAB中显色。Western blot结果显示在接种重组病毒BHV-1-VP60的样品中可见约60 kDa的免疫印迹条带，与预期VP60蛋白分子量值相符，VP60蛋白在MDBK细胞中获得了表达，而接种亲本病毒的样品则无免疫印迹条带(图5)。 3.5. VP60基因表达的IFA检测 IFA检测结果显示感染重组病毒BHV-1-VP60的BL细胞产生了红色的特异性荧光，VP60蛋白在MDBK细胞中获得了表达，而感染亲本病毒的BL细胞则无可见荧光(图6)。 图4. 重组病毒BHV-1-VP60的PCR鉴定 图5. 重组病毒的Western blot检测结果 图6. 重组病毒BHV-1-VP60的IFA鉴定。(a) 感染亲本病毒MDBK细胞；(b) 感染重组病毒MDBK细胞
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user: 4. 讨论 RHD为上世纪末期暴发的一种危害养兔业的烈性传染病，针对RHD的预防只能通过注射疫苗来完成。目前国内研究学者已研制出多种常规疫苗，如RHD组织灭活苗，RHD油乳剂灭活苗，RHD氢氧化铝佐剂苗，RHD蜂胶佐剂灭活苗，热灭活苗等 [ 5 ] 。由于RHDV没有合适的体外繁殖系统，只能依赖传统方法从自然或人工感染致死的兔肝、肺组织中分离病毒抗原，不仅增加了实验的成本和周期，还给实验的准确性带来了很大的干扰。因此从基因工程学角度出发研制RHD新型疫苗势在必行。针对RHDV的唯一结构蛋白基因VP60能够在不同系统中表达的基因工程苗正在被研究开发，并已取得了较好的效果，如大肠杆菌表达亚单位疫苗，昆虫细胞表达亚单位疫苗，酵母细胞表达亚单位疫苗，马铃薯表达的亚单位疫苗等，以及重组牛痘病毒，金丝雀痘病毒，黏液病毒等活载体苗。活载体疫苗向宿主免疫系统提交免疫原性蛋白，可诱导产生体液免疫和细胞免疫，甚至黏膜免疫，同时兼有免疫效力高、成本低及安全性好等优点；若病毒载体中同时插入多个外源基因，就可以达到预防多种疾病的目的，因此活载体疫苗是当今与未来疫苗研制与开发的主要方向之一 [ 6 ] [ 7 ] 。随着疱疹病毒弱毒苗的问世及质量不断提高，以此为基础的活载体也逐渐成为研究目标。目前，疱疹病毒作为活载体表达外源基因的研究主要有：单纯疱疹病毒、伪狂犬病毒、火鸡疱疹病毒、牛疱疹病毒I型(BHV-1)、马疱疹病毒I型和传染性喉气管炎病毒等 [ 8 ] [ 9 ] 。本研究所采用BHV-1是目前从自然感染牛体内分离到的8种疱疹病毒之一，与其他疱疹病毒科的成员具有相同的形态，病毒核酸为线性双股DNA。牛是该病毒的主要宿主，而且BHV-1除了反刍动物之外，不存在其他保毒宿主，家兔可以通过鼻注或静注等途径感染而无发病症状 [ 10 ] ，而且在以BHV-1为活病毒载体的RHD基因工程疫苗的研究尚无相关报道。本研究是将中国兽医药品监察所于20世纪80年代从匈牙利引进的一株经过多年使用、证实安全性良好的BHV-1弱毒疫苗株BarthaNu/67人为缺失gE基因、并引入大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因的重组病毒作为活载体，利用同源重组技术在病毒复制非必需区将VP60基因置于目前已知真核细胞中最强的启动子CMV之下，使得VP60基因能够更有效地表达；之后利用β-半乳糖苷酶基因在含X-gal培养基中特殊显色作用，逆向筛选表达VP60基因的白色病毒嗜斑进行纯化。Western blot和IFA检测结果表明VP60基因在MDBK细胞中得到了表达。重组病毒及亲本病毒在同一易感细胞中均能够产生CPE，这也表明VP60基因的插入并未影响重组病毒的感染性。
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user: 5. 结论 本实验成功构建表达RHDV-VP60基因的重组病毒BHV-1-VP60，且载体病毒背景明确。重组病毒BHV-1-VP60的构建将改变以往使用组织灭活苗和亚单位疫苗在免疫过程中的缺陷，具有安全、高效、操作简单、价格便宜等优点，有着良好的应用前景，为以后RHD活载体疫苗及多价疫苗的研制开发奠定了理论和实践基础。
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user: 摘 要 通过对国内外以往关于互动式教学法文献的梳理，对其理论基础、内涵、主要类型、特点、意义及目前应用中所存在的问题进行总结，以求对互动式教学法形成一个完整的认知。并对目前研究的整体情况进行分析，尝试提出互动式教学法未来的研究方向。 关键词 :教学方法，互动式教学法，建构主义 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 教学方法是影响教育质量的根本因素 [ 1 ] 。教学方法不能适应培养目标的变化，是影响大学教育质量提高的重要因素。 清华大学教育研究院开展的“清华大学本科教育学情调查报告”显示，在与美国顶尖研究型大学5大可比指标上的比较中，师生互动指标与美国同类大学的水平差距较大，具体表现为清华学生较少的提问、被提问和口头报告，较少参与讨论。从某种程度上可以表明，教师在课堂上更多讲解的是成熟的体系知识，注重知识的传递和灌输，师生之间缺乏有效的互动；学生只是简单的接受，缺乏积极主动的思考；教师缺少对学生高级思维模式，如分析、综合、判断和运用能力的培养 [ 2 ] 。同时根据别敦荣教授的研究，教师的教学水平是决定教学质量的关键因素，而目前大学中的教师大都没有接受专门的教学方法训练，很多教师都是拿了硕士学位、博士学位后直接走上讲台的，因而导致了教师在讲台上自我表演，学生充当看客或听众的教学现状，而教学信息完全是从教师到学生的单向流动 [ 1 ] 。周远清会长在2011年高等教育国际论坛上所做的报告也指出，目前我国大学教学中依然普遍存在填鸭式教学方法盛行、“重教轻学”严重和缺乏师生互动等问题 [ 3 ] 。 面对乏陈无味的“灌输式”教学，学生表现的更多是兴趣寥寥。根据麦可斯的研究，目前一些高校的课堂普遍存在“沉默”加低头玩手机状态，甚至在京“985”、“211”院校也存在着“有偿代课”这种“不能说的秘密” [ 4 ] 。当前的教学面临着“教师讲课，学生睡课”的困境。在社会越来越迫切的要求学校培养应用型、创新型人才的境况下，在学生自身越来越信息化、活跃化的现状下，如何打造比学生手中的“流量”更具吸引力的课堂，成为教育者应该思考的问题。哈佛大学在一项关于学生学习成效的评估调查中发现，学生们被动式学习，导致学习效果很差，在学生的学习过程中，教师的角色必须调整，不能仅是单向的传授知识，而是要成为与学生一同探索的伙伴或协作者 [ 4 ] ；茨达齐尔也提出学习应当是一个以学习者积极主动为基础的相互作用的过程；而齐科瑞等(Chichering et al.， 1987)早在影响深远的“优秀本科教育的七项实践原则”中就明确提出：“课堂内外的生师互动是发展学生学习动力和促进学生卷入度的最重要因素 [ 5 ] 。针对以上关于教学互动的论述，马志远对教学互动和教学质量之间的关系进行了实证研究，结果证实，教学互动对提高教学质量具有积极影响 [ 6 ] 。 当前我国正处于全面实现高等教育现代化的大迈步阶段，为提高高等教育的整体水平和质量，为改革传统教学方法所带来的弊端，为迎合信息化的时代潮流，教学的主战场已从教师、教材转向学生。互动式教学法强调师生间的平等互动，为有意义学习的发生创造完满条件。综上，对互动式教学法进行研究将对有效教学活动的探索有着重要意义。本文试着对已有相关研究进行系统的梳理。
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user: 2. 互动式教学法的理论基础 从字面上看，“互动”无疑是互动式教学法的核心所在，互动式教学法的灵魂在于在课程中营造的一种新的师生关系，探索一种有别于传统以“教”为重的新的教学范式。依此溯源，这种新的教学范式起源于建构主义的后现代课程观。 建构主义学习理论是互动式教学法的重要理论基础。自皮亚杰在其“儿童认知发展理论”的基础上提出建构主义后，得到了普利高津、杜威和布鲁纳等人建设性的发展。建构主义强调“以学生为中心”，认为学习不是由教师把知识简单地传递给学生，而是由学生自己建构知识的过程。学生也不是简单被动地接收信息，而是根据自己的经验背景，对外部信息进行主动地选择、加工和处理，从而获得自己的意义。真正的理解只能是由学习者自身基于自己的经验背景而建构起来的，取决于特定情况下的学习活动过程。否则，就不叫理解，而是叫死记硬背或生吞活剥，是被动的复制式的学习。课程是通过参与者的行为和相互作用而形成的 [ 7 ] 。互动式教学法主张通过各种形式的互动培养学生的学习主动性和创造性，教师在其中的角色被重新构建，多尔在其后现代课程观中称其为“平等中的首席者” [ 7 ] ，强调学生对知识的自我吸收和内化。这与建构主义的理念是一脉相承的。互动式教学模式是对多种理论的继承和发展。互动式教学模式不仅包含建构主义理论、认知理论、人本主义理论等学习理论，还包括交往行为理论等。认知发展理论强调认知发展不是一种数量上简单累积的过程，而是认知图式在不同的情境中不断重建的过程，互动式教学同样强调学生在情境中的自主建构。人本主义思想强调教学不仅是关注认知的发展，更关注学生情感、兴趣、动机的发展，注重对学生个体的培养，这与互动式教学法所强调的“以学生为中心”不谋而合；哈贝马斯交往行为的基本理论认为生活世界是由社会、文化、个性在日常实践过程中编织成的一个互相作用的网络，运用到教育领域表现为倡导主体之间进行平等的协商、对话、尊重和理解，在互动式教学法中体现为师生之间的平等互动。互动式教学法基于对多种理论的融合创新，结合当前互联网技术，实现多维多元的互动路径，在建构的基础上对相关理论进行发展。
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user: 3. 互动式教学法的内涵 互动式教学法最早起源于被誉为哈佛大学法宝的“案例教学法”，后经发展将一系列强调师生间互动的教学方法共同归纳为互动式教学法。 目前对于互动式教学法内涵的讨论还未见定论。国内学者从不同角度对其进行解读。金一认为互动式教学法是从现代教育理念出发，以满足同学求学有效需求和市场经济条件下社会人才的需要，促进教师自身水平与教学效果的提高为目的，通过教与学全方位的相互促进和沟通达到上述目的的过程 [ 8 ] ；任红杰认为互动式教学是通过师生互动促进学生的知识、能力和素质协调发展的教学模式 [ 9 ] ；张西茜认为互动式教学法是指在课堂教学中，由教师引导从师生对话逐步过渡为生生对话的教学过程，是师生、生生之间通过交互影响而建立起来的一种互助合作的教学方式 [ 10 ] 。 国外互动式教学法的发展已经进入到利用互联网、Clicker等工具进行在线互动的时代，对互动式教学法的研究也逐步偏向于对各种互动工具的应用。Biddulph认为互动式教学也被称为聚焦式教学(focused teaching)，包括案例分析、情景模拟、小组讨论等基本形式 [ 11 ] ；SAVA Raluca认为互动式教学法是一种现代的教学方式，是一种学生和教师之间交换思想、知识和经验的工具，特点是积极合作和主动参与 [ 12 ] ；同时，在互联网技术的基础上，K. J. Bai提出多维互动教学，在教学中确立学生主体地位，致力于构建新型师生关系，他提出教师与学生、学生与学生、学生与CAI软件(计算机)的交互作用有助于提高教学效果 [ 13 ] ；S. T. Huseynov提出计算机可视化理论下的互动式教学的应用 [ 14 ] ，Maria提出互动式教学工具——clicker的使用 [ 15 ] ，clicker作为一种Classroom Response System，是一套用于在课堂中进行实时反馈并支持师生互动的教学系统。它由手持键盘、无线主控基站和数据处理软件三部分组成。在教学中使用该系统，学生可以通过手持键盘对教师的问题进行即时反馈。目前像国内清华大学团队开发的雨课程、南京大学桑新民教授团队等开发的基于手机的师生实时互动教学系统；北京工业大学沈震团队开发出了基于手机端的智慧教学软件平台，都是利用手机实现师生在线实时互动交流，大大提高了思想政治理论课的教学效果。 尽管国内外学者在对互动式教学法进行定义时所运用的措辞不同，侧重的角度也不同，但其核心观点却是一致的，即新型师生关系的建构。从这个角度尝试对互动式教学法的内涵进行归纳总结：互动式教学法，即在教学过程中，教学主体双方站在平等的地位上，课上老师通过各种形式抛出问题引导小组讨论、组织辩论赛、学生演讲、实验操作、眼神示意等；课下师生交流，共同备课，组织实践活动等各种形式的互动，从而达到不同观点的碰撞，以使教学双方都感受到自己的主体地位，从而激发教学主体的主动性和创造力，达到提高教学效果的一种教学方式。