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user: 3. 实验和分析 3.1. 标准物质和样品来源 氨氮标准物质采用水利部水环境监测评价研究中心产品，考核样品由水利部水环境监测评价研究中心同时发放两个不同浓度的未知样品供验证，详见表1。标准样品、考核样品按作业指导书要求取一定体积样品经稀释定容为待测样品。 3.2. 实验条件 针对可能影响水中氨氮检测的干扰因素，从以下六项实验条件进行预防性控制。如检测结果实验室内部自我评估不合格，也应从这六项环节分析原因并予以纠正。 图1. 检测结果实验室内部评估流程 Table 1 List of standard material and assessment sample informatio 样品编号 类别 真值(mg/L) 不确定度(mg/L) QX 标准溶液 500 ±10 BZ1 标准样品 0.160 ±0.008 BZ2 标准样品 0.264 ±0.014 A438 考核样品 未知 未知 A338 考核样品 未知 未知 表1. 标准物质和考核样品信息一览表 · 人员：由氨氮项目持证人员具体承担此次能力验证活动，同时由实验室质量监督员1~2人对检测人员全程进行陪视，以免出现不符合规定的误操作。 · 器皿：比色管、容量瓶、移液管等计量器具均选用A级产品，事先经计量检定合格，洗净后以5%稀硫酸浸泡过夜，用前取出洗净晾干。 · 用水：将市售蒸馏水事先以离子交换法制备无氨水，经空白测试合格(空白吸光度值A 0 < 0.030)准予使用。 · 试剂：按HJ535-2009要求选用相应纯度等级化学试剂，试剂溶液以无氨水为基体现用现配，事先按HJ535-2009规定的样品测定步骤，以无氨水为基体配置空白样品并测定空白吸光度值A 0 ，A 0 < 0.030准予使用。 · 环境：确保实验室理化分析室、分光光度计操作室等操作环境无氨气污染并事先进行连续恒温除湿，确保实验场所温度20~25℃、湿度 £ 55%。 · 仪器：吸光度测量所用紫外可见分光光度计事先经计量检定合格，用前预热30 min后于420 nm波长处进行基线稳定度测试，基线吸光度值波动小于 ± 0.003准予使用。 3.3. 实验过程 3.3.1 . 考核样品浓度预判 浓度预判的场合不需要精确量化，故移取2.0 mL样品至50 mL比色管，同步配置一个标准空白(兼样品空白)、任一浓度的标准样品(如1.0 mg/L)作为简易标准曲线，按HJ535-2009规定的标准曲线及样品测定步骤测试得到考核样品浓度预判结果，详见表2。 3.3.2 . 制定考核方案 · 标准曲线设置 根据考核样品浓度预判结果，将500 mg/L的氨氮标准溶液逐级稀释为5.0 mg/L的标准使用液，各取标准使用液0.0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mL定容至50 mL，得到浓度为0.00、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.40、0.50 mg/L的标准系列。 · 精密度控制 根据作业指导书要求，将高、低浓度考核样品分别定值至250 mL，各移取50 mL样品4份至8个50 mL比色管中待测。 · 准确度控制 根据考核样品浓度预判结果，将真值为0.320 mg/L、527 mg/L的标准样品各稀释至与高、低浓度考核样品浓度接近的0.160 mg/L、0.264 mg/L。 3.3.3 . 考核方案实施 按HJ535-2009规定的操作要求实施考核方案，并以“标准曲线–样品空白–低浓度标准样品–低浓度考核样品–高浓度考核样品–高浓度标准样品”的检测顺序上机进行吸光度值测量。 3.4. 实验结果 标准曲线测定结果见表3，标准样品测定结果见表4，考核样品测定结果见表5。 3.5. 实验结果内部评估分析 3.5.1 . 标准曲线评估 HJ535-2009设置的标准曲线范围为0.10~2.00 mg/L较为宽广，直接套用将导致较大的系统误差，故根据预判结果选择与考核样品浓度匹配的标准系列并在考核样品所处浓度附近加密布点，使得高、低浓度考核样品预 Table 2 Initial results of the assessment sample concentratio 样品编号 空白吸光度值(A 0 ) 样品吸光度值(A) 简易标准曲线 浓度预判结果(mg/L) A438 0.020 0.072 2.597(A – A 0 ) 0.135 A338 0.020 0.112 0.239 表2. 考核样品浓度预判结果表 Table 3 Standard curve determination result 样品编号 标准浓度(mg/L) 吸光度值(A) 斜率(b) 截距(a) 相关系数(r) QX1 0.000 0.023 2.635 +0.009550 0.9994 QX2 0.100 0.055 QX3 0.150 0.075 QX4 0.200 0.093 QX5 0.250 0.115 QX6 0.300 0.133 QX7 0.400 0.173 QX8 0.500 0.209 表3. 标准曲线测定结果表 Table 4 Standard sample determination result 样品编号 空白吸光度值(A 0 ) 样品吸光度值(A) 浓度值(mg/L) 真值(mg/L) 不确定度(mg/L) BZ1 0.023 0.081 0.162 0.160 0.008 BZ2 0.023 0.122 0.270 0.264 0.014 表4. 标准样品测定结果表 Table 5 Assessment sample determination result 样品编号 空白吸光度值(A 0 ) 样品吸光度值(A) 浓度值(mg/L) 浓度均值(mg/L) A438-1 0.023 0.068 0.128 0.130 A438-2 0.023 0.071 0.136 A438-3 0.023 0.069 0.131 A438-4 0.023 0.067 0.125 A338-1 0.023 0.105 0.226 0.230 A338-2 0.023 0.107 0.231 A338-3 0.023 0.108 0.234 A338-4 0.023 0.107 0.231 表5. 考核样品测定结果表 判值均位于标准曲线浓度范围1/3~2/3的最佳校准区间。 评估结果：标准曲线截距a = 0.009550 mg/L低于HJ535-2009规定的方法检出限0.025 mg/L且相关系数r = 0.9994 > 0.999。标准曲线系列设置合理，线性关系良好(图2)，系统误差可接受。如标准曲线截距接近甚至大于方法检出限，则表明系统误差不可接受；如相关系数小于0.999，则表明随机误差不可接受。 图2. 标准曲线一元线性拟合示意图 Table 6 Evaluation of assessment result 实验室代码 样品编号 浓度值(mg/L) ZB ZW 验证结果 113 A438 0.130 0.000 0.450 满意 A338 0.230 表6. 考核结果能力评价表 3.5.2. 异常值取舍 精密度是准确度评估的先决条件，同步测定多个平行样品进行精密度控制。预判结果显示高、低浓度考核品值均较低，故适当增加平行数量以减少随机误差，考虑到定值后样品体积量的限制故各配置4个平行样品。 采用格鲁布斯法(Grubbs)对考核样品平行测定值进行可疑值检验，统计量T值按如下方法计算： ， 式中：X max 和X min 分别为样本最大值和最小值； 和s分别为样本算术平均值和标准偏差。 评估结果：A438样品T max = 1.327、T min = 1.025，A338样品样T max = 0.993、T min = 1.391；当样本数n = 4，给定显著性水平α = 0.05时，查表得临界值T 0.05 = 1.463；高、低浓度考核样品T值均小于临界值，无离群值，随机误差可接受。如高、低浓度考核样品任一T值大于临界值，则表明该样品平行测定值存在离群现象，随机误差不可接受。 3.5.3 . 准确度评估 同步测定已知浓度标准样品进行准确度控制。选择真值浓度与考核样品预判结果接近的标准样品以提高测定结果的可比性。并以“标准曲线–样品空白–低浓度标准样品–低浓度考核样品–高浓度考核样品–高浓度标准样品”的检测顺序上机进行吸光度值测量，可保证测定时间段内考核样品的准确度始终得到有效控制。 评估结果：高、低浓度标准样品测定值均在不确定度范围内，准确度良好，系统误差可接受。如高、低浓度标准样品任一测定值超出不确定度范围，则表明准确度欠佳，系统误差不可接受。 3.6. 能力验证结果 此次水中氨氮检测能力验证考核结果经实验室内部自我评估为可信，数据上报水利部水文局并参与全国水利系统水质监测实验室外部评估。能力验证最终评估结果见表6，ZB和ZW均小于2为满意结果，ZB和ZW在2~3之间为有问题结果，ZB和ZW大于3为不满意结果(离群值)。验证结果表明，表明南通分中心实验室各项检测条件均得到良好控制，系统误差、随机误差均可接受且处于较低水平，检测数据准确度、精密度均有相应的质量控制保障，具备采用纳氏试剂分光光度法进行水中氨氮检测的能力。