DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 褪黑素信号转导研究进展 3.1. 褪黑素-ROS-RNS信号在植物生物与非生物胁迫应答中发挥关键作用 褪黑素作为一种重要的植物激素，其合成和代谢途径已经被阐明 [ 3 ] ，近年来其信号转导途径成为研究热点话题。在多种胁迫环境下褪黑素具有改变植物细胞内Ca 2+ 浓度和调节细胞膜透性的作用 [ 34 ]。目前，学者们认为，褪黑素-ROS-RNS信号作为次级信使在植物低温等逆境应答中发挥关键作用。褪黑素信号调控植物生物与非生物胁迫应答的信号网络见图2。Gong等 [ 35 ] 研究发现，H 2 O 2 信号作为褪黑素的下游信号调控植物的非生物胁迫抗性。褪黑素通过抑制巯基亚硝基化酶活性，刺激NADPH氧化酶(RBOH)活性诱导H 2 O 2 产生，而H 2 O 2 的积累与植物的低温抗性增强正相关。抑制RBOH活性或者化学药剂清除H 2 O 2 阻碍了胁迫相关基因如CDPK1、MAPK1、ERF4、ERD15等表达，减弱了褪黑素诱导的防御作用。LEE和BACK [ 36 ] 研究指出，H 2 O 2 /NO–褪黑素–MAPK信号在植物免疫应答中的重要作用。其中，H 2 O 2 和NO信号在褪黑素调控的防御响应是必需的。褪黑素通过激活MAPKKK3和OXI1 (oxidative signal-inducible1)激酶活性，进一步诱导MAPK信号级联响应。NO作为褪黑素的下游信号调控植物胁迫应答已有许多报道 [ 37 ] [ 38 ]。在Fe缺乏胁迫下外源褪黑素诱导NO的释放，而在多胺缺乏突变体adc2-1中NO的释放量并未发生显著改变，说明褪黑素通过调控多胺诱导的NO产生来调节植物的Fe缺乏胁迫 [ 29 ]。与之相似，Kaur等 [ 39 ] 报道，NO和褪黑素相互作用调控GSH水平和GR活性，维持较低的H 2 O 2 积累，从而调控植物的盐胁迫抗性。 图2. 植物褪黑素信号转导模式图 [ 5 ] 3.2. 褪黑素与多种激素存在对话机制 ABA作为重要的胁迫信号参与调控植物的多种胁迫应答。褪黑素能够通过调控ABA信号途径来调节植物的胁迫响应。低温胁迫下转录组研究发现，外源褪黑素诱导ABA受体PYL5和PP2C的表达 [ 14 ]。Fu等 [ 40 ] 研究发现，低温胁迫下，叶面积喷施褪黑素能够提高垂穗披碱草叶片中内源ABA含量，然而外源ABA和ABA合成抑制剂处理并未改变内源褪黑素水平，这表明褪黑素可能作为ABA的上游信号调控植物的低温胁迫应答 [ 41 ]。细胞分裂素(CKs)在褪黑素调节的热胁迫应答中也发挥重要作用，表现为上调CKs合成基因和其信号转录因子type B ARRs的表达 [ 42 ]。其次，褪黑素也诱导其他激素如生长素(IAA)、赤霉素(GA)、水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、和乙烯(ETH)信号途径中基因的表达，进而调控植物的生长发育与胁迫抗性 [ 5 ]。SA和ETH信号参与褪黑素诱导的生物胁迫免疫，其机制在于诱导防御相关基因PR1、PR5和PDF1.2的表达 [ 43 ]。褪黑素与GA4相互作用调控植物的盐胁迫抗性，主要是通过诱导GA合成基因GA20xox和GA3ox表达 [ 44 ]。ABA和JA处理诱导水稻褪黑素合成基因ASMT表达，这也意味着褪黑素具有调控植物的多种胁迫应答的作用 [ 45 ]。近年来研究发现，褪黑素以浓度依赖的方式与IAA信号互作调控植物的生长发育。低浓度(50 µM)褪黑素增强IAA信号转导基因IAA19和IAA24以及IAA转运基因PIN1、PIN3和PIN7表达，高浓度(600 µM)褪黑素则抑制IAA的合成和转运。进一步研究发现NO作为褪黑素的下游信号参与调控IAA的合成、转运和信号转导 [ 46 ]。以上研究均表明，其他植物激素也参与褪黑素调控植物的生物与生物胁迫应答。然而，褪黑素与其他激素互作调控植物胁迫应答的机制仍需进一步挖掘。 3.3. 褪黑素在转录水平和转录后水平调控植物的生物与非生物胁迫应答 褪黑素与多种转录因子构成互作网络调控植物的胁迫应答。转录组分析表明，褪黑素还能够诱导WRKY、MYB、NAC和HSF等转录因子表达，从而调控植物的生长发育及胁迫应答 [ 14 ]。Bajwa等 [ 47 ] 报道，在低温胁迫下褪黑素诱导低温应答关键转录因子CBF/DREBs和下游低温响应基因COR15a以及其他转录因子相关的基因CAMTA1、ZAT10和ZAT12表达。另外，ZAT6激活的CBF信号转导途径在褪黑素调节的植物低温胁迫应答中也具有关键作用，表现为低温胁迫下外源褪黑素处理上调了AtZAT6和AtCBFs的表达，而过表达AtZAT6增加了褪黑素诱导的抗低温能力，敲除AtZAT6则减弱了褪黑素的作用 [ 48 ]。褪黑素通过抑制miR159-5p、miR858、miR8029-3p和m0048-3p表达正向调控植物的低温抗性，这些miRNAs的靶基因CDPK、BHLH、WRKY、MYB和DREB上调表达 [ 49 ]。MKK4/5/7/9-MPK3/6信号途径在褪黑素激活的植物防御中发挥重要作用 [ 50 ]。蛋白质组学研究发现，褪黑素处理或过表达其合成基因ASMT能够增加HSPs表达和蛋白丰度，降低聚合蛋白积累 [ 51 ]。相似地研究表明，褪黑素处理通过抑制吞噬相关基因ATGs表达，降低蛋白的降解 [ 52 ]。这些研究表明，褪黑素能够在转录水平和转录后水平调控植物的生物与非生物胁迫应答。
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user: 4. 展望 目前，虽然关于褪黑素调控植物生物与非生物胁迫应答的研究已取得很大的进展，然而对于植物是如何感知褪黑素信号，并将其逐级放大传递到下游进一步在生理代谢水平上调控植物的胁迫应答尚未有定论。最近研究发现的褪黑素受体CAND2/PMTR1为学者们进一步探究褪黑素的信号转导奠定了基础 [ 53 ]。因此，在今后的研究中，褪黑素信号是如何与各种生物与非生物胁迫信号感受器作用，通过哪些途径进一步放大褪黑素与胁迫信号的相互作用将会是一个非常重要的研究领域。 1) 运用多种组学如蛋白修饰组学、代谢组学、转录组学结合CRISPR敲除及pull down、免疫共沉淀等蛋白互作方法将有助于我们进一步探究褪黑素受体信号及其合成基因的重要调控元件，这将会加快我们揭示褪黑素调控植物代谢通路的分子机制。 2) 褪黑素作为一种重要的次级信号，有关外援褪黑素是通过怎样的一系列信号转导途径影响其它激素含量及信号发生改变，进而诱导下游的一系列生理生化代谢响应的作用机理还不明确。因此，探索褪黑素受体信号与其它植物激素信号之间相互作用机制将对于我们进一步解析褪黑素信号调控植物的胁迫应答机理提供重要线索。
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user: 摘 要 肝素钠是肝素的钠盐，具有非常大的医学和生物学价值，肝素临床应用范围逐渐扩大，用药患者群体也逐渐增加，进而带动全球肝素类药品市场扩大和粗品肝素钠需求增长。论文基于国内外粗品肝素钠提取技术的发展现状，综合评价了提取粗品肝素钠工艺，并对国内粗品肝素钠的发展趋势进行展望。 关键词 :粗品肝素钠，提取工艺，抗凝机制，纯化，发展趋势 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肝素是临床应用广泛的抗凝剂，平均分子量在10~20 kDa之间，结构复杂，其基本骨架是由1， 4-糖醛酸和葡萄糖胺以糖苷键连接起来的重复二糖组成的线性多糖链 [ 1 ]。肝素钠可预防和治疗动、静脉血栓和肺栓塞，可作为人工心肺、腹膜透析或血液透析治疗时的抗凝血药物，近年来研究证明肝素钠还有降血脂、抗癌、抗病毒、抗炎、抗过敏、抗中膜平滑肌细胞增生、降低血液粘稠度等作用 [ 2 ] [ 3 ]。 自发现肝素钠已经过了一百多年，但迄今还没有一种人工合成的产品能完全替代它，它仍然是最重要的抗凝血和抗血栓药物，只能从动物的组织中提取 [ 4 ]。目前肝素钠的工厂规模化生产大多以猪小肠粘膜为原材料，中国是世界第一养猪大国，生猪存栏量占全球58.5% [ 5 ]，拥有全球最丰富的肝素生产原料，是全球粗品肝素和原料药最大生产国 [ 6 ]。我国从十九世纪八十年代推广盐解工艺，从猪小肠里提取肝素钠，一般需要3000根以上猪小肠才能生产1亿单位；到九十年代，人们采用酶解工艺生产肝素，一般需要2000~2500根猪小肠才能生产1亿单位 [ 7 ]。目前这两种工艺都在使用，一般需要1500~1800根猪小肠生产1亿单位，采用最多的工艺为酶解/盐解–树脂吸附–洗脱–乙醇沉淀–干燥–粉碎 [ 8 ]。本文通过对肝素钠的发展、作用机制、提取方法进展及发展趋势做一综述。
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user: 2. 肝素的发展和作用机制 肝素被发现于20世纪初期，他的发现通常归功于McLean和Howell，至于谁最先发现存在很大的争论 [ 9 ]。20世纪20年代肝素实现商业化，1929年，Charles Best和Arthur Charles进一步纯化肝素；1933年，Arthur Charles和他的同事David Scott发表系列论文，概述了从牛肝脏中分离粗制肝素以及提纯肝素的方法 [ 10 ]。1938年肝素预防血栓试验获得成功，自此肝素成为临床上常用的抗凝血药 [ 11 ]。至今肝素仍然是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，已被很多国家《药典》收入。 1968年，Abildgaard [ 12 ] 命名了抗凝血酶III (AT-III)，现在证实肝素可与AT-III的赖氨酸部位结合，AT-Ⅲ的反应部位(精氨酸残基)更易与对具有丝氨酸蛋白酶活性的凝血因子形成复合物，从而灭活凝血因子(如XIIa、XIa和Xa、IXa、IIIa等)，抑制纤维蛋白原转变为纤维蛋白 [ 13 ] [ 14 ]。与抑制凝血因子不同(如图1)，抗凝血酶诱导的凝血酶失活需要形成三元复合物肝素–抗凝血酶–凝血酶 [ 15 ]。 图1. 肝素钠抗凝血机制
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user: 4. 粗品肝素钠发展趋势 肝素产业在多年的发展过程中，已经形成了一条完整的产业链，全球肝素产业链如图4所示。肝素产品分为上游、中游和下游三个产品等级，在产品的转化过程中，产品的价值大幅提升。首先生产企业从健康生猪的小肠粘膜中提取并制成粗品肝素钠，由于其含有杂蛋白等杂质，需经进一步提纯后成为肝素原料药。肝素原料药通常以钠盐或钙盐的形式存在，称为标准肝素钠(Heparin Sodium)或标准肝素钙(Heparin Calcium)。肝素原料药主要用于生产标准肝素制剂或低分子肝素原料药，后者可进一步用于低分子肝素制剂的生产。 图4. 肝素产业链 2016年7月由国家心血管病中心组织编撰的《中国心血管病报告2015》在上海发布。报告指出：中国现有心血管疾病者已达到2.9亿人，且呈现出快速增长趋势。在可预见的未来，肝素将继续在现代医学所需的抗凝治疗中发挥关键作用，并在很大程度上不受其他抗凝药物竞争的威胁。因此，肝素的未来与其说取决于其性质的改善和竞争，不如说取决于肝素能否以合理的成本持续提供足够数量、高质量的肝素 [ 41 ]。 我国是全球最大的肝素类产品出口国，主要包括肝素粗品、肝素原料药。我国肝素类行业的企业具有上游高度集中、下游资源不足的特点。今后企业竞争力将体现在肝素钠原料、制剂一体化上。我国低分子肝素制剂市场仍处于起步阶段，临床使用的肝素制剂，特别是低分子肝素制剂，大部分从国外进口。未来我国肝素行业将会进一步整合上下游产业，更多的向肝素制剂和低分子肝素原料和制剂发展。
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user: 摘 要 目的：本文查阅文献、统计分析、考证了昭苏地区导致母牛流产的主要病原——布氏杆菌病及新孢子虫病；方法：本试验选择昭苏地区作为调查点，在2017年9月至2018年10月在昭苏范围6个试验点(区)，对11，538头牛进行血清学检测。结果：布鲁氏杆菌血清学检测呈阳性的有396份，阳性率3.43%；其中，C区、F区阳性率最高，可达到6.32% (174/2752)、5.23% (93/1778)；E区相对较低，为1.32% (26/1956)。新孢子虫病呈阳性的有66份，阳性率0.57%，A区阳性率0.59%、F区阳性率1.18%为最高。结论：为今后昭苏县开展布鲁氏杆菌病、新孢子虫病的综合防控及研究工作提供相关流行病学数据支撑。 关键词 :布鲁氏杆菌病，新孢子虫病，血清学 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 布鲁氏杆菌病(Brucellosis)又称马耳他热，地中海热 [ 1 ] ，是由布鲁氏杆菌(Brucella)引起的一种人畜共患病，以母畜流产、不孕和公畜睾丸炎为特征。新孢子虫病(Neosporasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生在犬、牛等动物体细胞内的寄生性原生寄生虫病，其对牛造成的危害最为严重 [ 2 ] [ 3 ] 。迄今为止，已发现犬新孢子虫可进行垂直、水平传播，母牛会持续性垂直传染几代 [ 4 ] 。昭苏县位于伊犁地区西南角，土地肥沃、水源先足、高山草原，是良好的天然牧场，现计有牛羊牲畜40万余只(头) [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 。畜牧业经济是该地区的支柱型产业之一，也是农牧民经济收入的主要来源。近几十年来，昭苏地区流产呈不断上升趋势，其流产率可达3.5% [ 8 ] ，昭苏县除了马产业之外，主要以养牛业为主，是以畜牧业为经济支柱的农业大县，布氏杆菌、新孢子虫病的流行蔓延，不仅给养殖业造成重大经济损失，还会威胁人们身体健康 [ 9 ] 。因此，进行该地区的流产病因分析，做好病原诊断与防控工作就尤为重要。
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user: 2. 试验材料 2.1. 血液采集 采集血清以颈静脉采血的方式。首先将牛赶至保定栏内保定好后，借助3米长的保定绳，将牛头双角根部同保定栏以稍高于牛体的方位紧紧固定，以避免牛头晃动而影响采血操作。采血人在牛体左侧，先用75%的酒精棉球对牛颈静脉沟进行螺旋擦拭，进行消毒并刺激血管扩张。擦拭后，左手压迫近心端颈静脉沟，使颈静脉因血液回流受阻而充分怒张。右手持一次性采血针，在颈静脉怒张最高处，倾斜45˚角平稳进针，针头刺入血管出现血液回流时快速将5 mL采血管同采血针链接。 采血完毕后，将采血后的采血管放在采血架上，以避免阳光直射和来回晃动，造成溶血或影响血清质量。将用过的一次性橡胶手套、口罩、医疗防护服、酒精棉球、一次性采血针等统一处理至生物垃圾箱内进行无害化处理，以避免扎伤牲畜、传播疾病。 2.2. 血清制备 无菌颈静脉采取昭苏县6个试验点(A区，萨尔阔步乡；B区，夏特乡；C区，阿克达拉镇；D区，昭苏镇；E区，洪纳海乡；F区，天山乡；以下统一以字母表示)的牛血液样本3 mL，将其置于20℃的生化培养箱中3~5 h，待血清自然析出；或将血清置于医用离心机中2000 r/min离心2分钟取血清，合格的牛血清应呈现微黄透明状。将血清分装于2 mL离心管中，同时记录检测牛的编号、年龄、胎龄，是否有流产史，放入−20℃保存备检。 2.3. 检测材料 布氏菌病试管凝集试验诊断用抗原、布氏菌病虎红平板凝集试验诊断用抗原、虎红平板凝集试验标准血清均购自哈尔滨生物制品有限责任公司；新孢子虫标准阳性、阴性血清由日本国际原虫病研究中心馈赠，辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG购自北京中杉金桥试剂公司，新孢子虫病ELISA检测试剂盒、PBS等由新疆农业大学寄生虫实验室组装，显色液购自北京鼎国生物公司。 2.4. 试验仪器 DIGICEN20-R高速离心机购自西班牙ORTOALRESA公司，YXQ-LS-50A立式压力蒸汽灭菌器购自上海博迅实业有限公司，微量移液器、可调连续加样器、全自动酶标仪购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，试验用超纯水系统购自美国Millipore原厂。
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user: 3. 试验方法 3.1. 虎红平板试验 依据中华人民共和国卫生行业标准(WS269-2007)进行试验，在阴阳性对照成立的前提下进行结果判定 [ 10 ] 。 结果判定：受检血清在4 min内出现肉眼可见凝集现象者定为阳性(+)，呈均匀粉红色并无凝集反应者定为阴性(−)。 3.2. 试管凝集试验 试管凝集试验的操作步骤及其比浊管的配制，依照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1090-2002规定的检测方法进行 [ 10 ] 。 结果判定，确定每份被检血清的效价，结合比浊管进行判读。当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(−)，阳性血清的凝集价达到其标准效价至少1个滴度时，则证明试验成立，可以进行判定。否则，试验应重做；于1:100血清稀释度，出现(++)以上的凝集现象时，被检血清判定为阳性反应。 3.3. 新孢子虫ELISA检测 犬新孢子虫病血清抗体的检测借助新疆农业大学寄生虫实验室建立的牛新孢子虫血清抗体ELISA试剂盒，具体检测步骤依照杨帆所建立的新孢子虫病rELISA检测方法进行 [ 11 ] 。 1) 包被抗原：用包被液将犬新孢子虫标准抗原稀释到6 μg/mL的剂量后，以每孔50 μL的量加入到酶标板内，4℃包被过夜。 2) 洗涤：将酶标板内包被液弃去，以每孔300 μL的洗涤缓冲液静置3 min进行洗涤，后迅速弃去(减少板子干燥时间)，如此反复3次。 3) 封闭：以含3%脱脂乳的PBS作为封闭液，37℃孵育1 h，后同步骤2)进行洗涤。 4) 加被检血清：以1:100的滴度用稀释液将待检血清稀释后，每孔50 μL的量加入酶标板内，同时做空白、阴性、阳性对照，37℃孵育1 h后，同步骤2)进行洗涤。 5) 加酶标二抗：以1:2000的稀释滴度用封闭液稀释辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG抗体，每孔50 μL的量加入酶标板内，37℃孵育1 h后，同步骤2)进行洗涤。 6) 加底物缓冲液：每孔100 μL的量将底物缓冲液加入酶标板内，37℃孵育10~15 min后，以每孔50 μL的量加终止液终止反应，在OD值为430/450的波长下读数。 判定标准严格依据试剂盒所携带的说明书判定，对疑似阳性牛进行复检，复检仍为疑似阳性者判为阳性。
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user: 4. 结果 4.1. 统计学分析方法 将检测数据输入计算机，借助SPSS Statistics应用软件进行数据的分析处理，以P < 0.05判定为差异较大，P > 0.05判定差异不大。 4.2. 昭苏县布鲁氏杆菌病及新孢子虫病血清学检测结果 在昭苏县六个试验区进行的大范围母牛流产流行病学普查中，于2017年9月至2018年10月期间，共检测牛11，538头。布病阳性数396，阳性率3.43%，其中C区、F区阳性率最高，可达到6.32% (174/2752)、5.23% (93/1778)，E区相对较低1.32% (26/1959)；新孢子虫阳性数66，阳性率0.57%，A区阳性率0.59%、F区阳性率1.18%最高。该地区不同试验点牛布病及新孢子虫病阳性率差异显著(P < 0.05)。详见表1： Table 1 Serological detection results of Brucellosis and Neosporiasi 检测区 布鲁氏杆菌病 新孢子虫病 检测数 阳性数 阳性率 检测数 阳性数 阳性率 A区 1850 36 1.94% 1850 11 0.59% B区 915 19 2.07% 915 3 0.32% C区 2752 174 6.32% 2752 16 0.58% D区 2284 48 2.10% 2284 9 0.39% E区 1959 26 1.32% 1959 6 0.30% F区 1778 93 5.23% 1778 21 1.18% 合计 11，538 396 3.43% 11，538 66 0.57% 表1. 布病及新孢子虫病血清学检测结果 4.3. 昭苏县农牧区牛血清样本布病检测结果 本次试验布病检测以虎红平板凝集试验初检，试管凝集试验复检为准，新孢子虫病检测以rELISA的方式对牧区及农区两大区域的牛血清样本进行检测，发现牧区牛布氏杆菌病阳性率4.62%、新孢子虫病昭苏县阳性率0.70%，农区牛布氏杆菌病阳性率1.71%、新孢子虫病阳性率0.38%，牧区显著高于农区。该地区农牧区牛布病及新孢子虫病阳性率差异显著(P < 0.05)。详见表2： 4.4. 昭苏县不同养殖方式牛布病、新孢子虫病检测结果 结合疫病监测血清学采样登记表对养殖方式进行细化分析，发现舍饲牛阳性率最低，为2.69%、0.36%，该地区不同养殖方式牛布病及新孢子虫病阳性率差异显著(P < 0.05)。这次细化分析结果跟不同区域阳性率数据统计相一致，进一步证明了日常管理对牛疾病防控的重要性。详见表3： Table 2 Detection results of Bovine brucellosis and Neosporiasis in different area 检测区 布鲁氏杆菌病 新孢子虫病 检测数 阳性数 阳性率 检测数 阳性数 阳性率 农区 4724 81 1.71% 4724 18 0.38% 牧区 6814 315 4.62% 6814 48 0.70% 总计 11，538 396 3.43% 11，538 66 0.57% 表2. 不同区域牛布病及新孢子虫病检测结果 Table 3 Detection results of Bovine brucellosis and Neosporiasis in different culture method 养殖方式 布鲁氏杆菌病 新孢子虫病 检测数 阳性数 阳性率 检测数 阳性数 阳性率 舍饲 2483 67 2.69% 2483 9 0.36% 放牧 4347 188 4.32% 4347 31 0.71% 混合 4708 141 2.99% 4708 26 0.55% 总计 11，538 396 3.43% 11，538 66 0.57% 表3. 不同养殖方式牛布病及新孢子虫病检测结果 4.5. 昭苏地区不同年龄段牛血清样本布病检测结果 本次检测将被检牛分2~4岁、5~8岁、9~12岁三个年龄阶段进行布鲁氏菌病的检测数据汇总，结果发现，5~8岁为牛布病爆发的高发期，阳性率可达5.12%，该地区不同年龄段牛布病阳性率差异显著(P < 0.05)。详见表4： Table 4 Detection results of Bovine brucellosis in different age group 年龄段(岁) 检测数 阳性数 阳性率 2~4 2038 6 0.29% 5~8 4179 214 5.12% 9~12 5321 176 3.31% 总计 11，538 396 3.43% 表4. 不同年龄段牛布病检测结果
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user: 5. 结果讨论 昭苏地区2017~2018年牛布鲁氏杆菌及新孢子虫流行病学调查结果表明其布氏杆菌、新孢子虫病阳性率低于2016年以前的相关文献记载 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 。分析原因一是昭苏县牲畜品种改良冷链体系建设，减少了种公牛通过生殖器官传播疾病的可能性；二是昭苏县相关负责单位加大重视力度，积极组织乡兽医站进行采血送检，对确认感染牛迅速隔离扑杀；三是昭苏县在自外地调入家畜过程中，各相关部门密切配合，经布病检查阴性、出具相关阴性诊断报告才能通过。引进动物时进行产地检疫，隔离观察两个月，并两次血清学为阴性者，方可引进 [ 15 ] 。四是对牛场附近犬、猫等新孢子虫宿主严格驱离，禁止其接触草料场、饮水处，减少其同牛只接触的机会，以达到消灭传染源、切断传播途径，进而降低感染率的目的。 在将昭苏县阳性牛依养殖方式、流调地区进行细化分析中发现，牧区明显高于农区，混合饲养明显高于单纯舍饲或放牧。分析其主要原因在于一是混合饲养流动性大，昭苏县多是春夏季节在夏草场，秋季在秋草场，冬季舍饲。在转群过程中大群牛混在一起，很少有牧民主动对粪便、饮水等进行消毒，为疾病的传播创造条件。二是牧区牛只多在深山中放牧，难以进行有效的同期发情、人工授精计划，所以牛大多自然交配，造成一头种公牛感染一群的现象。
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user: 6. 结论 目前我国对布氏杆菌病的防控多以预防为主的方针，通过对非疫区家畜的严格监管、科学免疫，对疫区家畜采取免疫与阳性畜扑杀结合的方式控制布氏杆菌病的发生及流行 [ 16 ] [ 17 ] 。对于跨省市动物的布病检测，应在初检无阳性后，于30天后再进行复检，复检无阳性后方可混群。现在各省市开展动物布病检测工作大多以虎红平板凝集试验为初检，初检阳性再进行试管复检确认 [ 18 ] [ 19 ] 。目前经实践检验，行之有效的是猪二号布病菌苗，对于牛只用法包括喂服、饮服和注射，免疫周期为1年；而对于牛新孢子虫病的感染特效药、疫苗仍在研制阶段。 动物检疫、疫苗接种、阳性畜的淘汰及扑杀等综合防治措施的落实力度不够，进而导致布病的发病率呈上升趋势。昭苏县家畜主要以放牧饲养为主，同时阳性畜同牧民长期接触，导致人畜共患病的发生。本次流调结果：放牧饲养的牛阳性率高于舍饲饲养的牛，证实病原同饲养管理条件，日常防疫防控制度，兽医从业人员的水平是密切相关。另外，可通过公共媒体及宣传册等方式宣传布病及新孢子虫病防控知识，增强牧民对该病的防范意识和自我保护意识。同时，上级相关部门应加强对牧民及技术人员的技术培训，以提高从业人员的专业能力和业务水平。
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user: 摘 要 试验研究了频率和测距等因素对超声透射法测定砂浆凝结时间的影响，并讨论了采用超声透射法确定砂浆凝结时间的方法。试验结果表明，装置参数设置为54 kHz频率和40 mm测距时，可获得清晰、可靠的超声波信号，且试验过程较为简便。超声波声速增长起点对应的时间与贯入阻力法测得的凝结时间十分接近，可用于超声透射法确定砂浆的凝结时间。 关键词 :超声波，超声反射法，砂浆，凝结时间 Copyright © 2019 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 凝结时间是水泥基材料重要使用性能之一。现行凝结时间标准测试方法为贯入阻力法。该方法操作简单，但也存在较多缺点，如无法连续监测浆体的凝结硬化过程 [ 1 ] ；测试结果与操作者的技巧有关 [ 2 ] ，且时常出现平行测试结果差距大，难以准确判断试件的凝结时间 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 。另外，在测试混凝土凝结时间时需先将混凝土中砂浆筛出来，这对于流动度小的混凝土来说是很困难的 [ 2 ] 。 针对现行标准测试方法的不足，人们先后尝试了多种方法用于水泥基材料凝结时间测试，如超声反射法、水化热法、电阻率法等，并取得一系列成果。在这些新方法中，超声反射法因其无损、连续监测、简便易行等特点，具有较大开发潜力。本文以砂浆为测试对象，对超声反射法的试验参数设置及结果判断进行探究。
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user: 2. 原材料、配合比及试验参数 1) 原材料 水泥：安徽海螺水泥股份有限公司产P∙O 42.5级普通硅酸盐水泥，比表面积378 m 2 /kg，表观密度3.01 g/cm 3 ；细骨料：普通河砂，细度模数2.6，表观密度2618 kg/m 3 ；缓凝剂：浙江五龙新材股份有限公司，ZWL型，粉剂；速凝剂：浙江五龙新材股份有限公司，ZWL型，粉剂；引气剂：江苏苏博特新材料股份有限公司，GYQ-I混凝土高效引气剂，液剂；水：自来水。 2) 配合比 本文试验采用的配合比如表1所示。 Table 1 Test mix rati 配合比编号 水泥， C 砂， S 水， W 外加剂/% P1 1 3 0.6 / P2 1 3 0.6 0.6 (速凝剂) P3 1 3 0.6 0.04 (缓凝剂) P4 1 3 0.6 0.08 (缓凝剂) P5 1 3 0.6 0.05 (引气剂) P6 1 3 0.6 0.10 (引气剂) 表1. 试验配合比 2.1. 试验设备及装置 砂浆凝结时间测试仪，ZKS-100A型，无锡建材仪器机械厂制造； 超声仪，Pundit Lab型，瑞士Proceq制造； 试验容器，试样容器包括一个样品腔和两个探头腔，分别用于盛放待测试样和安放探头。试样容器采用树脂玻璃为材料，自行设计加工制作。探头放入探头腔时，需涂抹黄油以保证耦合效果。自制； 砂浆稠度仪，天津建筑仪器厂制造； 含气量测试仪，LC-615A型，日本三洋制造。 2.2. 试验方法 2.2.1. 超声透射法 将新拌砂浆装入试验装置容器中，在容器一侧发射超声超声波，在另一侧接收透射过来的超声波，由此测得超声波透射样品的声时。根据已知的测试间距，通过式(1)即可计算得某一时刻下超声波在样品介质中的传播速度。 V = L t (1) 式中：V——样品的超声波传播速度； L——探头测试间距； t——超声波传播声时。 超声波波速与水泥基浆体中的总固相和相连固相的体积分数密切相关 [ 1 ] [ 5 ] ，这是因为浆体中的固相为超声波的传播提供了更快捷的路径。随着水化反应进行，浆体中出现越来越多水化产物并相互连接，超声波的传播速度也因此发生变化。采用超声透射法对样品进行连续监测，即可通过波速的变化获得水泥基材料水化发展的信息。本文超声波试验研究中，自砂浆加水后15 min开始测试浆体的超声波波速，设定每15 min采集一次数据，直至加水后24 h结束测试。 2.2.2. 其他试验方法 砂浆凝结时间(贯入阻力法)和含气量分别参照JGJ/T 70-2009 《建筑砂浆基本性能试验方法标准》中相关试验方法进行。
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user: 3. 结果分析及讨论 3.1. 试验参数设置研究 超声透射法目前尚无标准可依，不同的学者使用不同的试验装置进行研究，因而所获试验数据有一定差异，甚至出现结论相左的情况。因此，有必要对主要试验参数如频率和测距展开研究，以确定最佳试验参数。 3.1.1. 频率 采用配合比P1的砂浆样品和40 mm测试间距，在不同测试频率下(54 kHz， 150 kHz， 250 kHz， 500 kHz)，分别测试了超声波波速随时间的变化，试验编号依次记为T1~T4。根据试验结果绘制的不同频率下波速-龄期曲线如图1所示。 由图1可见，无论何种测试频率，各曲线的发展趋势均一致。超声波波速在加水后的一段时间变化不大，这与水泥水化阶段的诱导期相应。随后在某一时间，波速开始迅速增长。此波速增长起点具有特殊水化意义，是需要关注的一个重要特征点。波速在经历快速增长后逐渐进入缓慢增长阶段，这分别与水泥水化的加速期和减速期相应。图1中各频率下的波速-时间曲线几乎重叠，由此也可看出超声透射法的重复性较好。 图1. 不同频率时的超声波波速发展 不同测试频率下，超声波试验简便性均较好。频率为54 kHz、150 kHz和250 kHz试验时均可获得清晰且稳定超声波信号，而频率为500 kHz试验时首次获得的超声波信号相对不清晰，较难判断超声波首波波速。根据波的传播特性，超声波频率越高，信号强度越强，但由于波长小绕射障碍物的能力低，适用于测距较长、障碍物较小较少的情况；超声波频率越低，其波长越大，抗障碍物散射的能力越强，适用于测距较短、障碍物相对较大的情况。砂浆浆体在搅拌制备及填装试验容器时均可能裹入一定量气泡，它们对超声波的传播形成了阻碍。因此，在保持测试信号清晰的基础上，优选较低频率即54 kHz作为测试频率，以备待测砂浆中可能存在微小缺陷。 3.1.2. 测距 制作了4个不同测距的试验容器，测距分别为20 mm，40 mm，60 mm，80 mm。设置超声仪测试频率54 kHz，采用配合比P1的砂浆样品，分别测试了不同测距下超声波波速随时间的变化，试验编号依次记为T5，T1，T6，T7。根据试验结果绘制的不同测距下波速–龄期曲线如图2所示。 图2. 不同测距时的超声波波速发展 T1~T4试验的超声波初始声速分别为333 m/s，693 m/s，730 m/s和742 m/s。可见后三者的超声波初始声速差别不大，但T5试验则明显低于它们。考虑到四个试验所用砂浆及其搅拌方式、装填方式均相同，且试验过程中未发现异常，因此认为此过低初始声速为异常情况，这可能是探头间距过小，近场效应使得测试结果的可靠性降低。T7试验首次测得的超声波信号的不清晰，难以判定首波，这是由于测距过长，超声波信号在新拌砂浆中受到水泥、砂等颗粒及气泡的散射、折射等影响较大所致。四个不同测距的试验容器具有相同截面积(约200 cm 2 )，则测距越大，其所用试验材料越多。试验容器中浆体越多则其内部集聚的热量越大，对水化进程的影响也越大。因此，在满足试验可靠性及信号清晰稳定的前提下，测距宜小较好。但测距不宜过小，否则装填浆体时操作不便。因此，测距优选40 mm。 通过综合比较各条件下试验可靠性、信号清晰性及试验简便性，得出测试间距优选40 mm，频率优选54 kHz。 3.2. 凝结时间确定方法研究 采用最佳试验参数(54 kHz频率和40 mm测距)，分别以配合比P2~P6的砂浆为样品，对每个样品的凝结时间同步采用标准贯入阻力法和超声透射法进行测试，结果如表2所示。 Table 2 Summary of setting time test resul 试验编号 含气量/% 贯入阻力法测得凝结时间/min 波速1400 m/s 波速增长起点 对应时间 与贯入阻力法误差*/min 对应时间 与贯入阻力法误差 * /min U2 2.2 3 h 38 min 5 h 36 min −118 3 h 45 min +7 U8 2.4 1 h 48 min 3 h 7 min +79 1 h 30 min −18 U9 2.4 7 h 17 min 9 h 2 min +105 7 h 30 min +13 U10 2.1 11 h 48 min 15 h 36 min +228 12 h 15 min +27 U14 4.3 5 h 20 min 12 h 34 min +434 5 h 30 min +10 U15 7.8 6 h 23 min 18 h 3 min +700 6 h 45 min +22 表2. 凝结时间测试结果汇总 *“−”表示提前，“+”表示延缓。 有学者在研究超声透射法测试水泥净浆凝结时间时发现，超声波波速接近其在水中传播速度时(1400 m/s~1450 m/s)对应的时间可用来十分精确地确定水泥净浆的凝结时间 [ 1 ] 。表2同样列出了砂浆浆体其超声波波速在1400 m/s时对应时间，可见其与贯入阻力法测得凝结时间有较大差距，且分析发现，两者间拟合曲线的相关系数较小，无拟合意义。这表明，上述水泥净浆超声波凝结时间确定方法并不适用于砂浆浆体。 通过对比贯入法测得的凝结时间及波速曲线上波速增长起点对应的时间，发现两者十分接近，误差在±30 min范围内，考虑到贯入法的相对粗放性，可认为此差距较小。超声波波速与浆体固相体积分数密切相关，当超声波波速从相对平稳状态开始迅速增长，反映浆体内部开始形成固相框架体系，为超声波的传播提供便捷路径，此时也正好对于砂浆的凝结时间。因此，可用超声波波速增长起点对应的时间来确定砂浆的凝结时间。
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user: 4. 结论 超声透射法可灵敏监测水泥基材料的水化过程，具有测试水泥基材料凝结时间的潜力。本课题以砂浆为研究对象，研究了超声透射法的参数设置和凝结时间的确定方法，得到以下结论： 1) 对于砂浆样品，超声透射法的最佳设置参数是频率为54 kHz，测距为40 mm； 2) 特定超声波声速对应的时间与贯入阻力法测得的凝结时间有较大差异，不适用于超声透射法确定砂浆的凝结时间； 3) 超声波声速增长起点对应的时间与贯入阻力法测得的凝结时间十分接近，可用于超声透射法确定砂浆的凝结时间。
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user: 摘 要 本文分析了圆形钢管混凝土轴压短柱的受力机理，并借鉴典型约束混凝土的本构关系建立了该类构件极限承载力的计算公式。然后，用建议公式对57个试件进行承载力计算，计算结果与试验结果和规范计算结果吻合良好。 关键词 :圆形钢管混凝土，极限承载力，约束混凝土 Copyright © 2019 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 目前，国内外关于钢管混凝土设计的规范、规程大都包含圆形钢管混凝土方面的条文。国外规程主要有：美国的LRFD (1999) [ 1 ] 规程考虑构件的整体稳定性，将混凝土的强度折算到钢材中，再由钢材的名义抗压强度乘以钢管的横截面积来确定钢管混凝土轴压构件的承载力；日本AIJ (1997) [ 2 ] 规程采用叠加钢管和混凝土承载力的方法计算钢管混凝土轴压构件的承载力，并考虑长期荷载作用，将混凝土的抗压强度乘以0.85；欧洲EC4 (1996) [ 3 ] 规程与日本AIJ规程相似也采用叠加法来确定钢管混凝土轴压构件的承载力。我国GB50936-2014 [ 4 ] 规范和军用标准GJB4142-2000 [ 5 ] 规程将钢管和混凝土当成一种新型材料，运用统一理论来确定钢管混凝土轴压构件的承载力。综上所述，EC4和AIJ规程未考虑钢管对混凝土的约束效应；LRFD (1999)和我国GB50936-2014、GJB4142-2000规程分别用将混凝土强度折算到钢材中和统一新材料的方法考虑了钢管与混凝土之间的相互作用，但设计公式主要由试验数据的回归分析所得，使公式参数的物理意义并不十分明确，同时，混凝土本身的离散性使得公式的外延性也相对较差。 本文分析了圆形钢管混凝土轴压短柱的受力机理，借鉴等侧压力作用下混凝土的极限强度理论，合理评估了钢管与混凝土之间的相互作用，并尝试建立一种外延相对稳定、力学概念清晰、参数物理意义相对明确的该类构件极限承载力的计算公式，为该类构件的工程设计提供参考。
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user: 2. 圆形钢管混凝土轴压短柱的受力机理 圆形钢管混凝土轴压短柱在轴向荷载作用下混凝土处于三向受压状态，而圆钢管处于纵向、径向受压而环向受拉的复杂应力状态。由于钢管的径向应力与其他方向应力相比，相对较小，可以忽略不计，因此可以简单地认为圆钢管处于纵向、环向应力共同作用的平面应力状态 [ 6 ] 。假设钢管屈服时为构件达到承载力的临界状态，则圆形钢管混凝土轴压短柱的极限承载力表达式为 N c r = f s l A s + f c c A c (1) 式中，f sl 为圆钢管屈服时钢管内的纵向应力；A s 为钢管的横截面积；f cc 为临界状态下混凝土的纵向抗压强度；A c 为混凝土的横截面积。
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user: 3. 论钢管纵向应力f sl 和环向应力f sh 的确定 由于钢管壁薄，计算时假设：1) 钢管与混凝土之间无滑移；2) 环向应力沿壁厚均匀分布；3) 由于径向应力不大，忽略径向应力，钢管处于纵向应力f sl 和环向应力f sh 的平面应力状态，屈服时满足Von-Mise屈服准则，沿着Mises屈服椭圆的运动轨迹如图1所示。 图1. Von-Mise屈服椭圆 要临界状态下，钢管应力强度表达式为： f y 2 = f s l 2 + f s h 2 − f s l f s h (2) 式中，f syl 、f syh 分别为钢管纵向应力和环向应力；f y 为钢材屈服强度。 f sh 和f sl 根据试验结果并参考日本AIJ推荐公式取值，即： f s h = 0.19 f y ， f s l = 0.89 f y (3)
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user: 4. 核心混凝土纵向抗压强度f cc 的确定 4.1. 圆钢管侧向压力的计算 假设混凝土的侧向压力沿钢管均匀分布，将构件沿纵向剖开，以圆形钢管为研究对象作受力分析，如图2所示。 图2. 圆形钢管受力分析示意图 由 ∑ F x = 0 可知： f = 2 t f s h / ( D − 2 t ) (4) 式中，f为混凝土对钢管壁的侧压力；f sh 为钢管的环向拉力；D、t分别为圆钢管的直径、厚度。 4.2. 核心混凝土纵向强度f cc 的确定 文献 [ 7 ] 的研究成果表明，等侧压力作用下的三向受压混凝土强度与等侧压力之间具有线性关系。圆形钢管混凝土属于等侧压力混凝土构件，其核心混凝土的极限强度f cc 表达式 f c c = f c 0 + k f 文 标 式中，f cc 为临界状态时圆钢管核心混凝土强度；f c0 为混凝土无侧压时的抗压强度；k为侧压系数，试验资料显示，k值介于3~5之间，一般取4；f为混凝土的侧向压应力。
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user: 5. 试验验证 采用建议公式(1)~(5)对文献 [ 8 ] [ 9 ] 中57个圆形钢管混凝土轴压试件进行承载力计算，并将计算结果与EC4、GB50936-2014计算结果进行比较，结果如下：GB50936-2014计算结果/试验结果的均值1.07，方差0.07；EC4计算结果/试验结果的均值0.913，方差0.012；建议公式计算结果/试验结果的均值1.024，方差0.01。建议公式的计算结果处于GB50936-2014和EC4计算结果之间，由此可知建议公式可对该类构件承载力进行有效地评估。图3给出了本文计算结果与试验结果、EC4、GB50936-2014计算结果的比较图，由图3可知建议公式与试验值和规范计算结果吻合良好。 图3. 本文计算值与试验值和规范计算值的比较
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user: 6. 结语 本文在建立圆形钢管混凝土轴压短柱极限承载力计算公式的过程中得出以下结论： 1) 假定钢管屈曲时为构件极限承载力的临界状态，并借鉴经典等侧压力作用下混凝土的强度理论建立的圆形钢管混凝土轴压短柱的极限承载力计算公式，可以有效地评估该类构件的极限承载能力； 2) 建议公式的计算结果与试验结果和规范计算结果吻合良好； 3) 建议公式可对该类构件的工程设计提供参考依据。
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user: 摘 要 本文引入格上Null–范数的概念，从Null–范数的不同区间的取值入手进行讨论，证明了有界格上的Null–范数的构造方法有且仅有三种，并给出了三种Null–范数的大小关系。 关键词 :格，Null–范数，零元 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 近年来，有界格上Null–范数的研究是个热点问题，Null–范数在许多不同的领域中都是一个很重要的工具，例如，计算机科学技术中的专家系统，神经网络，模糊逻辑学，此外，Null–范数也常常用于模糊逻辑中的聚合算子。文章中，我们将讨论有界格上Null–范数的构造方法。F. Karacal， M.A. Ince， R. Mesiar在文 [ 1 ] 中给出了三种有界格上的Null–范数的构造方法，Umit Ertugrul在文 [ 2 ] 中给出了两种有界格上Null–范数的构造方法，那么在一般有界格上Null–范数的构造方法究竟有多少种，前人并没有给出明确的结论。我们从Null–范数在不同区间上可能的取值入手，分别讨论每个区间的具体取值，得出有界格上Null–范数的构造方法有且仅有三种，并对这三种零范数的序关系作了比较。
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user: 4. 小结 从Null–范数的定义出发，在前人给出的五种有界格上Null–范数的构造方法的基础上，讨论了有界格上不同区间上的Null–范数的取值情况，证明了有界格上Null–范数的构造方法有且仅有三种，我们发现当 V T S 中 T = T W 时， V T S = V a ( S ) ；当 V S T 中 S = S W 时， V S T = V a ( T ) 。并给出了三种Null–范数之间的大小关系。
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user: 摘 要 肿瘤微环境是由肿瘤细胞、肿瘤支持细胞、细胞基质、细胞因子等构成。其中肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-Associated Fibroblasts， CAFs)在肿瘤微环境中含量最为丰富，其在肿瘤的形成、肿瘤血管生成、增殖、侵袭和转移等事件过程中起着重要作用。这促使一些研究人员对CAFs的分子和细胞特征进行研究，探索其在预防和治疗癌症方面的潜在应用。目前有大量关于CAFs的定义、起源以及其对肿瘤细胞的作用的研究。在此，本文总结了目前CAFs定义的分歧，来源的多样性，以及其在乳腺癌治疗中的可能机制，并对该领域未来研究方向做出了分析。 关键词 :乳腺癌，肿瘤相关成纤维细胞，肿瘤微环境 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 乳腺癌是目前女性发病率最高的恶性肿瘤，也是全世界女性癌症死亡的主要原因之一 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] 。和所有恶性肿瘤类似，早诊早治对乳腺癌的治疗效果影响显著。雷洛昔芬或他莫昔芬等抗雌激素药物在乳腺癌的预防方面起着积极作用；大量新药上市也为乳腺癌治疗效果的改善做出了贡献；高患病风险女性乳腺预防切除也降低了乳腺癌发生 [ 4 ] 。手术、放化疗、内分泌治疗、靶向治疗等是乳腺癌主要的治疗手段。对晚期乳腺癌而言，治疗目的主要是提高生活质量和延长患者寿命。乳腺癌是存在着高度异质性的恶性肿瘤，乳腺癌细胞主要通过局部浸润或者经血管、淋巴管转移到骨、肺，肝脏和脑等部位 [ 5 ] 。转移是连续的、复杂的多步骤过程，具有高度侵袭性的癌细胞亚群首先通过降解细胞外基质，继而通过血液或淋巴系统，转移到远处器官组织 [ 6 ] 。以往认为乳腺癌细胞的转移是其晚期表现，但不断有新的证据表明，乳腺癌在早期就可以出现全身转移 [ 7 ] 。大量科研工作者正不断深入探索其可能机制，如有研究表明乳腺癌肺转移与富含半胱氨酸(SPARC)的蛋白质酸、基质金属蛋白酶2 (MMP2)、白细胞介素-2受体α、血管细胞黏附分子1 (VCAM1)等有密切关系。乳腺癌骨转移与结缔组织生长因子(CTGF)、白介素-11 (IL-11)有紧密关系；而乳腺癌脑转移由唾液酸转移酶介导。以上种种证据都表明乳腺癌转移不仅与自身细胞特性有关还与其微环境有着密切关系 [ 8 ] 。自1889年“种子和土壤”学说被提出来以来，大量的证据表明肿瘤组织自身特性和肿瘤微环境在肿瘤的产生、进展过程中都起着重要作用。肿瘤微环境包括细胞成分和非细胞成分；主要由成纤维细胞、免疫细胞、内皮细胞、细胞外基质等组成。而成纤维细胞是含量最多肿瘤微环境成分；其具有多种作用，包括分泌趋化因子、细胞因子、细胞外基质，参与免疫调控、上皮细胞分化，影响肿瘤的发生、发展 [ 9 ] 。大量证据表明乳腺癌相关成纤维细胞在乳腺癌的发生以及发展过程中起着重要作用，下面对其进行综述。
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user: 2. 肿瘤相关成纤维细胞定义？ 目前对CAFs的定义尚不明确。尽管肿瘤相关成纤维细胞有许多标志物，但特异性不高。肿瘤相关成纤维细胞高表达肾小球足突细胞膜黏蛋白、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p53、CD10、基质金属蛋白酶(MMPs)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)，但韧粘素、血小板源性生长因子(PDGFR)和Caveolin-1 (Cav-1)表达缺失 [ 6 ] 。有研究者将肿瘤相关成纤维细胞定义为形态为梭形的α-SMA阳性的肿瘤组织成纤维细胞。然而，α-SMA并不是肿瘤相关成纤维细胞特异性表达，在正常的成纤维细胞、纤维结缔组织病的骨骼肌中也可以观察到其表达 [ 10 ] 。 成纤维细胞是肿瘤微环境细胞中最丰富的细胞类型。Gabbiani等在人伤口愈合过程中首次发现肿瘤相关成纤维细胞 [ 11 ]。肿瘤相关成纤维细胞是成纤维细胞的一个亚群，其通过分泌各种趋化因子、细胞因子，及降解细胞外基质蛋白促进肿瘤的进展和转移 [ 12 ] 。正常组织中，成纤维细胞增殖指数低；伤口愈合过程以及在肿瘤组织中，成纤维细胞被激活，增殖加快并分泌大量的细胞外基质成分，同时获得收缩功能。肿瘤组织中，这些细胞被称为活化的成纤维细胞，肿瘤周围成纤维细胞、肿瘤相关成纤维细胞、肿瘤或癌相关成纤维细胞 [ 13 ] 。活化的成纤维细胞大量分泌各种生长因子，这些因子被活化的成纤维细胞用于与癌细胞以及其他基质细胞进行信息交流。基因芯片和蛋白质组学分析发现，与正常乳房成纤维细胞(Normal breast fibroblasts， NBFs)相比，CAFs遗传和表观遗传信息均发生变化 [ 14 ] [ 15 ] 。CAFs表现出一些癌症特异性的变化，如缺陷的p53基因、存活素蛋白高表达，增殖标志物Ki-67、PCNA高表达；对顺铂和紫外光抵抗增强 [ 16 ] 。CAFs可以通过NF-kB介导肿瘤细胞增强炎症谱，同时通过释放生长因子(FGFs、TGF-b、HGF、SDF1等)，细胞因子(CXCL12，IL-6等)，雌激素等促进血管生成与肿瘤生长。CAFs可以富集免疫细胞(如：Foxp3 T细胞和髓系衍生抑制细胞)到肿瘤微环境中，这些免疫细胞可以抑制T细胞、自然杀伤细胞功能。清除CAFs可以减少肿瘤相关巨噬细胞，髓系抑制性细胞在肿瘤组织中的聚集。相关动物实验表明，CAFs能通过抑制Th1细胞因子从而抑制Th1的免疫反应，同时增强免疫抑制Th2细胞因子促进肿瘤生长 [ 17 ] 。
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user: 3. 乳腺癌相关成纤维细胞的起源 乳腺癌相关成纤维细胞的来源是多样性的，目前已知主要有三种来源。一是肿瘤组织内静息间质成纤维细胞转化为乳腺癌相关成纤维细胞。三维共培养实验表明，成纤维细胞与乳腺癌细胞共培养时可分化成乳腺癌相关成纤维细胞，同时可反作用于肿瘤细胞，对其产生促进作用 [ 18 ] [ 19 ] 。在异种移植乳腺癌动物模型中，也有相同发现 [ 20 ] 。这些结果显示CAFs是通过旁分泌作用将正常乳腺间质成纤维细胞向CAFs发生转变。例如，TGF-β可诱导体外培养的乳腺成纤维细胞产生α-SMA，进而将成纤维细胞转变成CAFs。研究发现正常成纤维细胞与CAFs相比，CAFs中的许多基因表达上调，如：肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子β (TGFβ)、基质细胞衍生因子1 (SDF-1)、效应物细胞蛋白酶受体1 (EPR-1)]、细胞因子巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、癌基因(K-ras)等。这些基因产物中有许多是具有促进侵袭和转移的作用 [ 21 ] 。在胰腺癌与肝癌的相关研究中发现：胰腺和肝脏中的正常成纤维细胞可被胰腺癌和肝癌细胞诱导获得表达α-SMA的CAFs [ 22 ] [ 23 ] 。其次是来自特循环祖细胞，如成纤维细胞和骨髓间充质干细胞(MSCs)。研究显示，成纤维细胞表达造血干细胞、单核细胞和成纤维细胞谱系标志物。骨髓间充质干细胞可以分化为活跃的表达α-SMA的成纤维细胞，并已被证实能迁移到肿瘤部位并分化为CAFs。这些现象在胶质瘤、乳腺癌、胰腺癌和胃癌的相关研究中均被发现 [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] 。值得注意的是间充质干细胞可分为肿瘤相关的间充质干细胞(tumour-associated MSCs， TA-MSCS)，和非CAF细胞类型；TA-MSCS具有较高的自我更新能力和低表达CAF相关的标记物，如波形蛋白、成纤维细胞活化蛋白(FAP)和S100A4 (也称为成纤维细胞特异性蛋白-1)，其机制尚待进一步研究 [ 28 ] 。这些发现有力地表明MSCs是CAF的来源之一。第三个来源是乳腺上皮细胞，内皮细胞，脂肪细胞向肌纤维母细胞转分化。上皮间质转化(EMT)是癌症进展的重要过程，转化生成的成纤维细胞，增强肿瘤迁移、侵袭能力 [ 28 ] [ 29 ] 。大量证据表明内皮细胞间质转化(EndMT)可以产生肿瘤相关成纤维细胞 [ 30 ] [ 31 ] 。此外，利用转基因小鼠的研究表明，通过EndMT可产生高达40% CAFs，肿瘤组织在不同癌变阶段CAFs构成比也不同 [ 32 ] 。局部细胞转化似乎是最主要的来源，远处细胞迁移浸润也是肿瘤相关成纤维细胞的组成部分。总之，这些发现表明乳腺癌相关的成纤维细胞可能有不同的起源。