DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 通过“选–培–赛–跟–育”，构建创新能力培养模式 随着高等教育对学生创新能力的关注，以及高等院校对竞赛的重视，学生需要受到更加系统、更加科学地指导，我校已逐渐形成“选拔–培训–参赛–跟踪–培育”的全过程竞赛指导体系，进而对“激发创新兴趣–树立创新意识–弘扬创新精神–开拓创新思维–深入创新实践”的培养模式进行了探索与实践，如图2所示。 图2. 创新能力培养模式 “选拔”主要是通过校赛进行的。校赛固定在每年5月份举办，受到了学生的喜爱。通过各种方式对数学建模有所了解的学生都想小试牛刀，亲身体会一下数学建模的过程。参加完校赛的学生才可以继续培训，所以感受到乐趣的学生会勇往直前，从而避免了学生盲目地报名国赛。暑期和冬季的“培训”是准备数学建模竞赛的关键环节，学校会邀请校外经验丰富的指导教师进行十天左右的专题培训。在培训结束后，还要进行写作单项考核和模拟赛两项“选拔”。写作单项考核是由每队中负责写作的学生完成的，主要是完成一篇建模论文的撰写，并按照指导教师的意见进行多次修改，目的在于锻炼各队的论文写作能力。模拟赛安排在秋季开学前，由各队在三天时间内完成一个建模题目，提交一篇完整的论文并进行答辩，也就是实战演练。因此，要想参加“国赛”，学生们必须参加校赛，还要通过暑期培训、写作单项考核以及模拟赛等进行层层选拔。参加过“国赛”的选手才可以参加“美赛”，但同样要经过赛前培训。在完成参赛后，指导团队教师会对学生进行后续的“跟踪”训练以及相应科研项目的“培育”。 3.1. 激发创新兴趣 创新的前提是有学习的兴趣和学习的快乐，只有解决这一根本问题，才能考虑创新能力培养过程中的其他环节。数学建模竞赛中的问题，都是来源于实际的生产生活，比如2015年B题“互联网+”时代的出租车资源配置、2018年A题高温作业专用服装设计、2019年A题高压油管的压力控制、2020年B题穿越沙漠等等，都有很强的实用性。所以首先要通过已构建的“三维融合”的数学建模教学模式，让学生领略数学建模的魅力，大力引导学生积极参加数学建模竞赛，激发他们产生创新兴趣，进而才能有不竭的动力，才能有创新的主观能动性。 3.2. 树立创新意识 创新意识需要学生在思考问题时能有自己独到的见解，这样才能相应得想出独到的解决方案。由于长期固定的教育方法和传统的思路所致，这种意识虽可以产生，却也是转瞬即逝。所以在数学建模竞赛的选拔、培训和参赛过程中，首先要求学生进行模仿，模仿是在多看别人创新的基础上进行的，在明白了别人实施创新的过程后，自己从模仿开始进行自我创新意识的培养；其次要积极鼓励学生考虑每个问题时从不同角度出发，试着找寻不同的解决方案，久而久之习惯成自然。在后续跟踪训练和科研项目培育过程中要刻意地要求学生去树立创新意识。 3.3. 弘扬创新精神 创新精神是一种实干精神，是一种学习精神，是一种团队精神。在数学建模竞赛中，要求三名学生组成一支队伍进行参赛，要求学生在72小时或96小时内的短时间内主动去收集资料、查阅大批文献以了解研究课题的实际背景及研究现状，然后创建数学模型、求解、检验和结果分析，最后将解决问题的最佳方案撰写成一篇符合学术规范的科技论文。这一过程中学生每天就睡三四个小时，三个人要进行充分的沟通和良好的合作，而且要进行主动式学习而非被动式学习，这就会使学生的自主学习能力、快速学习能力和团队协作意识得以锻炼，使创新精神在后续专业学习中得以弘扬。 3.4. 开拓创新思维 创新意味着思维上的新颖性、独创性和价值性，重要的是运用逆向思维、发散思维、否定思维和替代思维等方式，不断开辟新的道路。在选拔和培训中遇到了问题，要从多角度、多方面去进行思考，不要有任何的局限性，要充分发挥自己的想象力。而在参赛中就要学会放弃，学会否定，这样才能使解决问题的方案多样化。同时，开拓创新思维要避免一些误区，比如不要钻牛角尖，要多听取他人有益的建议，从而将创新思维真正地转化为生产力。 3.5. 深入创新实践 创新实践是培养创新能力的最关键环节，因而从参赛、跟踪和培育三个层次进行深入。首先，参加校赛、国赛和美赛是最基本的创新实践。为了完成比赛，学生会以实际问题为导向自主地去研究和学习解决问题所需的各种数学新知识及大量的相关学科的新知识，无形中培养了自主学习能力，体会了将课本上的理论知识转化成为解决实际问题能力的全过程。竞赛使学生完成了对赛题的“一无所知–简单了解–深入分析–解决问题”的复杂过程。其次，后续跟踪训练是在完成比赛后进行的创新实践，主要是对赛题的深入及拓展研究。由于比赛的要求，学生参赛仅仅是在规定时间内交上了一份尽可能完整的答卷，对于题目的分析和解答肯定是不全面的。所以完成比赛只是一个起点，要鼓励学生着眼于其中的一两个问题进行跟踪研究，对之前的方案进行分析、质疑甚至是否定，进而对问题形成一个完善的解决方案，完成创新过程的小试牛刀。最后，学生经过参加竞赛和跟踪训练的历练，其创新能力将有所提升，科研项目培育是为进一步培养学生创新能力进行的创新实践。数学建模竞赛指导团队的教师或者是学生所学专业的教师可以从自己的科研课题中选取一些研究内容对学生进行科研项目培育，让学生参与课题研究，指导教师定期的进行指导与研讨，从而将数学建模与培养学生创新能力有机地深入地结合起来。
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user: 4. 结论 通过“选拔–培训–参赛–跟踪–培育”，构建了“激发创新兴趣–树立创新意识–弘扬创新精神–开拓创新思维–深入创新实践”的大学生创新能力培养模式，几年来的探索与实践表明： 1) 学生受众面广。数学建模竞赛不是数学专业学生的专项竞赛，全校各专业学生都来参加竞赛，有利于培养复合型人才和创新型人才。 2) 培养具有可持续性。从最开始实施的“三维融合”的数学建模教学模式融入数学建模思想，到为参加竞赛进行的选拔和培训，再到后续跟踪训练和科研项目培育，“选–培–赛–跟–育”贯穿在学生大学四年的学习过程中，实现了创新能力的可持续培养。 3) 有利于教学相长。数学建模竞赛的题目一般是工程技术和管理科学方面经过适当简化、加工的实际问题，紧跟当今社会生产生活，这就促使指导教师不断补充知识，提升自身教学科研水平，让自己的知识成为“源头活水”灌溉给学生。
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user: 摘要 目的：探究分析保温护理对全身麻醉患者术中应激及术后心理情绪的影响。方法：选取我院于2018年3月至2019年6月所收治的60名行全身麻醉患者作为本次研究对象，通过随机数表法将其对照组和观察组，30例对照组患者接受普通护理管理，30例观察组患者接受保温护理干预模式管理。对比分析两组患者的术中应激反应、术后不良心理情绪情况、预后的生活质量情况以及患者对于护理的满意度。结果：相较于对照组患者，观察组患者的术中应激反应情况与术前相比较的增高幅度更低，两组数据比较结果具备统计学意义(P < 0.05)；且相较于对照组，观察组患者在接受护理干预后的不良心理情绪得到了更为显著的改善，其负性心理评分更低，术后不良心理情况发生明显优于对照组患者，两组数据比较结果具备统计学意义(P < 0.05)。结论：对全身麻醉患者采用保温护理，术后恢复效果更好、生存质量也更佳，各类负面、消极的心理情绪得到有效改善，患者对于护理的满意度也更高，具有临床推广应用价值。
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user: 1. 引言 由于患者进行手术的时间比较长、手术室的室温也比较低再加上患者的身体也较长时间暴露在外进行皮肤消毒加上手术中的冷水冲洗、患者应用的麻醉后体温调节中枢功能的药物等都会导致患者低体温情况的出现 [ 1 ]。如果患者在手术中出现了低体温的情况，那么就会对患者的术后苏醒康复造成影响，严重情况下还会导致患者出现凝血功能的严重障碍等等并发症 [ 2 ]。本次研究通过选取我院于2018年3月份至2019年6月份的60例接受全身麻醉的患者，通过将其分组并给予不同的护理干预模式以判明保温护理对全身麻醉患者术中应激及术后心理情绪的影响，现作出报告如下。
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user: 2. 资料与方法 2.1. 一般资料 选取我院于2018年3月至2019年6月所收治的共计60名行全身麻醉患者作为本次研究的样本对象，随机均分30名对照组患者以及30名观察组患者。在30名的对照组患者中有19例女性患者以及11例男性患者，患者的年龄在25~60岁，平均年龄为(41.09 ± 1.02)；在30名的观察组患者中有15例女性患者以及15例男性患者，患者的年龄在24~65岁，平均年龄为(40.28 ± 3.25)。本次的研究报告已经通过了院方的批准和患者及其亲属的同意，纳入作为样本对象的患者及其亲属签署了知情同意书。排除标准：① 将患有严重精神疾病、丧失语言能力的患者排除；② 将患有心力衰竭、合并严重糖尿病或高血压的患者进行排除；③ 将亲属不配合、不同意的患者进行了排除。本次的研究中，观察组以及对照组患者的年龄、性别等基线资料比较P < 0.05，因此患者的基线资料比较不具备统计学意义。 2.2. 方法 给予对照组患者常规的护理管理干预措施：于患者进入手术室的前一个小时将温度预设为22摄氏度至25摄氏度、将湿度设置为40%至60%以便于患者吸入加温过后的氧气 [ 3 ]。 给予观察组患者保温护理干预：① 首先要对手术台进行预加热 [ 4 ]。在患者进行手术的前一个小时通过电热毯对手术台进行加热，患者的手术进行过程中要对患者的核心体温进行严格的监测，如温度高于37.5度后需要暂时关闭加热设施。② 尽可能缩短进行手术操作的时间。医生要于手术开展前首先进行详细的讨论，然后制定周密的手术计划，对患者的消毒处理要快速且熟练以防止患者的皮肤长时间并过多的暴露从而体温下降，节省手术时间，删减不必要的操作步骤 [ 5 ]。③ 加热液体。将电子加温仪的温度设置为37摄氏度并对患者需要输入的液体和血液进行保温，保温箱的预设温度要在42摄氏度，要将冲洗液放置在保温箱里。④由于人体新陈代谢所产生的90%左右的热量都会由皮肤的表面而散失 [ 6 ]，所以需要对患者手术区域外的皮肤及部位进行保暖处理，如冬季时可以增加棉被的厚度，或是采用T型棉被以及为患者穿戴棉裤棉袜等等。 2.3. 观察指标 对比分析两组患者的术中应激反应、术后不良心理情绪情况、预后的生活质量情况以及患者对于护理的满意度。 通过由William W.K.Z.编制的SAS焦虑自评量表以及由美国教育卫生部编制的SDS抑郁自评量量表对患者存在的负性心理进行评估，患者的评估分数越高则表示患者的心理条件越差 [ 7 ]。 患者的满意度通过满意度的问卷调查表中体现，根据调查表中患者对于本次医疗服务的认可度进行打分，可以将分值划分为3个部分：90~100分为非常满意；60~80分为满意，60分以下为不满意。 2.4. 统计学方法 本次研究报告所设计的样本对象资料如患者的基线资料、满意度等情况均是经由统计学软件SPASS25.0进行统计计算和结果验证的，以百分比卡方对设计数据中的计量资料进行表示和验算；以T值对符合正态分布的计数资料进行表示和验算；再通过P值的情况区分两组数据的对比是否具有统计学意义：当P > 0.05时则表明两组数据的比较差异不具备统计学意义；当P < 0.05时则表示两组数据的对比具备统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 两组患者的应激反应情况对比 由表1可知，相较于对照组患者而言，采用保温护理管理干预的观察组全身麻醉患者的术后应激反应情况与术前相比较的增高幅度更低，比较差异的P < 0.05，因此两组患者的对比差异存在统计学意义。 Table 1 Comparison of stress reaction between the two group 组别 例数 AD CRP NE 术前 术后 术前 术后 术前 术后 对照组 30 53.43 ± 5.46 179.88 ± 20.11 6.22 ± 1.26 98.23 ± 17.34 141.25 ± 20.41 172.35 ± 28.64 观察组 30 52.87 ± 5.54 101.33 ± 15.02 6.02 ± 1.43 53.27 ± 11.29 141.56 ± 20.53 151.26 ± 25.34 T - 0.39 17.14 0.57 11.90 0.06 3.02 P - 0.70 0.00 0.57 0.00 0.95 0.00 表1. 两组患者的应激反应对比 3.2. 两组患者的满意度对比 由表2可知，接受保温护理干预的对照组患者的预后生活质量以及对护理的满意度都是要更显著高于对照组患者的，比较差异的P < 0.05，因此两组患者的对比差异存在统计学意义。 Table 2 Comparison of satisfaction between the two groups [n (%) 组别 例数 非常满意 基本满意 不满意 总满意度 对照组 30 15 (50.00) 6 (20.00) 9 (30.0) 21 (70.00) 观察组 30 24 (80.00) 4 (13.33) 2 (6.67) 28 (93.33) χ 2 - - - - 5.45 P - - - - 0.02 表2. 两组患者的满意度对比[n (%)] 3.3. 两组患者的不良情绪对比 由表3可见，观察组患者的术后不良心理情况发生明显优于对照组患者，比较差异的P < 0.05，因此两组患者的对比差异存在统计学意义。 Table 3 Comparison of adverse emotions between the two groups [( x ¯ ± s ) points 组别 例数 SAS SDS 护理前 护理后 护理前 护理后 对照组 30 64.28 ± 3.54 57.66 ± 3.98 57.49 ± 7.14 53.22 ± 4.35 观察组 30 65.33 ± 3.45 46.27 ± 3.03 56.87 ± 7.33 40.13 ± 3.97 T - 1.16 12.47 0.33 12.17 P - 0.25 0.00 0.74 0.00 表3. 两组患者的不良情绪对比[( x ¯ ± s )分]
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user: 4. 讨论 在患者进行各种手术的过程中，全麻患者一旦低温过低那么就会导致其体内麻醉药物的代谢减缓导致患者苏醒延迟，严重情况下甚至会有凝血功能障碍，因此对患者采取保温护理十分重要 [ 8 ]。根据本次研究结果表明，观察组的患者在接受保温护理管理后的心理情绪和对于护理的满意程度满意度均是比对照组的患者更佳的，比较差异的P < 0.05，因此两组患者的对比差异存在统计学意义；且经过保暖的观察组患者的应激反应增加幅度相较于对照组患者而言更低，P < 0.05，所以两组病人数据的比较具结果备统计学上的意义。 综上，对全身麻醉患者采用保温护理，相较于常规的护理，更能使全身麻醉患者的手术中的低体温发生率得到降低，也有效降低了患者对于手术的应激反应，因此患者的术后恢复效果更好、生存质量也更佳，各类负面、消极的心理情绪得到有效改善，患者对于护理的满意度也更高，临床上有着优秀的推广应用价值。
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user: 摘要 本研究对从医院临床分离并寄存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)的11份解脲支原体样本进行分群鉴定，结果表明其中9份样品为生物二群，2份样品为生物一群，对这两份生物一群的样本进行进一步血清型分析，结果表明一份为血清型1型样品，一份为血清型14样品，本鉴定结果为分离的解脲支原体样品的进一步研究和应用奠定了基础。
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user: 1. 引言 与人类疾病相关的脲支原体属可划分为2个种，14个基因型 [ 1 ] [ 2 ]，在人体分离到的主要是细小脲支原体和解脲脲支原体。解脲支原体(Ureaplasma urealyticum， UU)是属于柔膜体纲支原体目一种的原核微生物，缺乏细胞壁，体积处在细菌和病毒之间 [ 3 ]。解脲支原体在形态上呈高度多形性，在含低浓度琼脂的固体培养基上培养可出现典型的“荷包蛋样”菌落。其细胞膜上的糖脂与膜蛋白结合，构成解脲支原体的主要抗原成分，该抗原在人体可引起体液免疫。目前，解脲支原体是可在无生命体培养基中生长、繁殖的最小微生物，它既可以独立存在，也可以寄生。目前有研究认为解脲支原体与不孕有关，解脲支原体引起不孕的途径有多种，如影响排卵、精子质量、受精卵着床等。 解脲支原体是女性宫颈寄居最常见的微生物之一，具有一定的致病性。按照不同的生物表型和基因特征可以将解脲支原体划分为生物一群和生物二群两种生物亚群 [ 4 ]，生物一群即Parvo生物群，包括1、3、6、14四种血清型，生物二群即T960生物群，包括2、4、5、7~13十种血清型 [ 5 ]。有研究显示，解脲支原体在无临床症状的女性中的检出以生物一群为主 [ 6 ]，而在患有阴道炎的女性中，生物二群的检出率为43%，显著高于其在无阴道炎的女性中的检出率，后者为5% [ 7 ]。但也有研究认为生物一群中血清型1、3型的致病性强于其他血清型。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 样品材料 本实验中所用的解脲支原体样本均来源于中国典型培养物保藏中心。 2.2. 实验器材和设备 PCR仪，德国Biometra公司；小型旋转混合仪，上海新芝；生物安全柜，ESCO公司；倒置荧光显微镜，宁波舜宇仪器。 2.3. UU基因组提取 取200 μL解脲支原体样本，100℃加热10 min，冷却后12000 rpm离心3 min，收集上清。 2.4. PCR引物 解脲支原体Mba抗原基因含1200多个碱基，N端1/3是保守区，C端2/3是可变区。N端在同一生物群各血清型和同一血清型各变异株中长度一致，而C端的大小可变。根据此特征设计引物，根据片段大小鉴定样品的生物群及血清型。生物分群特异性引物UMS-125F、UMS-226R，该PCR产物:生物一群404 bp，生物二群448 bp；生物一群血清型特异性引物如下：血清型1引物：UMS1F、UMS1/6R，扩增产物399 bp；血清型3引物：UMS3F、UMS3/14R，扩增产物397 bp；血清型6引物：UMS6A、UMS1/6R，扩增产物369 bp；血清型14引物：UMS14F、UMS3/14R，扩增产物400 bp。引物序列信息如表1所示： Table 1 PCR primer sequences used in this stud 引物 序列(5’→3’) 扩增片段 UMS-125F GTATTTGCAATCTTTATATGTTTTCG 404 bp/448 bp UMS-226R CAGCTGATGTAAGTGCAGCATTAAATTC UMS1F TAACTGTAGAAATTATGTAAGATTGC 399 bp UMS1/6R CCAAATGACCTTTTGTAACTAGAT UMS3F ACTGTAGAAATTATGTAAGATTACC 397 bp UMS3/14R CTAAATGACCTTTTTCAAGTGTAC UMS6A CTTAGTGTTCATATTTTTTACTAG 369 bp UMS1/6R CCAAATGACCTTTTGTAACTAGAT UMS14 ATTACTGTAGAAATTATGTAAGATTAA 400 bp UMS3/14R CTAAATGACCTTTTTCAAGTGTAC 表1. 本研究中所用PCR引物序列 2.5. PCR反应条件 将每份样品的DNA先经UMS-125F、UMS-226R这对引物扩增，若样品为生物一群，则再分别用UMS1F、UMS1/6R；UMS3F、UMS3/14R；UMS6A、UMS1/6R；UMS14、UMS3/14R这四对引物扩增，PCR程序为95℃ 5 min→55℃ 30 s→72℃ 1 min，共计32轮循环扩增。50 μL的PCR工作体系：Taq聚合酶25 μL、5’→3’引物2 μL、3’→5’引物2 μL、样品DNA 2 μL。 2.6. 琼脂糖凝胶电泳 将2 g琼脂糖粉末和100 mL的1×TAE缓冲液置于锥形瓶，将锥形瓶置于微波炉内加热3~5 min，随后取出冷却2 min，用枪头吸取2.5 μL Gel-Red染料加至琼脂糖溶液中，轻微摇晃混匀。将梳子插进制胶板，将混匀的琼脂糖溶液倒入，室温静置30 min，待溶液冷却凝固。充分凝固后将梳子轻轻垂直拔出，将制胶板置入电泳槽中，在电泳槽中加入1×TAE缓冲液直至没过凝胶表面2 cm。取5 μL PCR产物，加1 μL的6×loading试剂，用移液枪轻轻吹打混匀，小心加入点样孔。打开电源开关，调节电压，可看到溴酚蓝条带移动位置，待其移动到适当位置时关闭电源，将制胶板从电泳槽取出。打开紫外灯和凝胶成像系统，将制胶板放置于台面，轻轻移去制胶板，观察并记录跑胶情况。
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user: 3. 结果 3.1. 生物群引物鉴定结果 如图1所示，将样品1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11的DNA用生物分群特异性引物UMS-125F、UMS-226R进行PCR扩增，所得PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，结果表明，样品1、11为生物一群，样品2~10为生物二群。 图1. UU样品的生物群鉴定 3.2. 生物一群引物鉴定结果 如图2所示，将样品1、11的DNA分别经生物一群的1、3、6、14血清型特异性引物PCR扩增，所得PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，结果表明，样品1为血清型1型，样品11为血清型14型。 图2. UU样品1、14的血清型鉴定
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user: 4. 讨论 解脲支原体是人类泌尿生殖道中一类常见的共生微生物，在无临床症状表现的性成熟女性生殖道中也能检出。1954年Shepard首次从非淋菌性尿道炎患者的尿道中分离得到解脲支原体 [ 8 ]。近年来，解脲支原体的检出率逐渐上升，作为一种条件致病菌，当机体的免疫能力和内环境改变时，定植于黏膜表面促进释放出蛋白水解酶、过氧化物、各种磷脂酶等多种毒性代谢产物，可以导致机体损伤和炎症反应的发生 [ 9 ]。如其分解尿素产生的过氧化氢，能够提高生殖道的pH值，导致女性生殖道内的正常的弱酸性环境被破坏，增加了宿主被其他病原微生物感染的风险。 有大量文献报道，解脲支原体是非淋病性泌尿生殖系统炎症的主要病原体，与女性的多种疾病有关，解脲支原体感染能够引起输卵管积水、粘连，致使输卵管阻塞进而导致女性输卵管性不孕，解脲支原体还能引起非淋病性尿道炎、非特异性尿道炎、绒毛膜羊膜炎、生殖道感染、胎膜早破、早产儿呼吸窘迫综合症以及其他疾病等 [ 10 ]。虽然大多数解脲支原体感染是无症状的，但是这些感染会增加流产、早产和死产等不良妊娠结果的风险。 近年来对男性不育的关注增高，有研究发现解脲支原体的感染会增加男性不育的风险，解脲支原体致使男性不育的途径有多种，例如其可干扰精子的发生、影响精子的活力等。有研究者发现解脲支原体在不育男性精液中的检出率位48%，明显高于其在可生育男性精液中的检出率，后者为25%，这表明解脲支原体的感染可能威胁了男性的生殖健康。Wang等研究者发现，解脲支原体的感染与精液pH值的降低、精液密度降低密切相关 [ 11 ]；Moretti等研究者发现解脲支原体的感染可致使不育男性的精子质量降低 [ 12 ]。 解脲支原体包括2个生物亚群，对解脲支原体进行分群分型的依据主要是其表面抗原即MBA (多带抗原) [ 13 ]。MBA也是机体识别解脲支原体不同生物群及血清型的主要外膜抗原，在不同生物群和血清型种MBA的长度不同，因此不同生物群、血清型的解脲支原体表现的致病力有所差别。 影响解脲支原体致病性的因素有许多种。有研究结果显示它的致病性与生物亚群密切相关，如血清型1、3、4、8可引起女性生殖道炎症，血清型4与早产、流产、胎膜早破等关系密切，血清型3、4是引起不孕症的原因之一；生物二群的解脲支原体与男性不育的关系更为密切，有研究显示，被生物二群的UU感染后，精子的总活力明显降低，这可能与解脲支原体可诱导机体产生精子抗体，导致精子凝集，阻抑了精子的运动，且在电镜下观察，解脲支原体分别附着在精子的头尾部位，致使镜子头部出现折角及尾部卷尾，精子膜破损，增加畸形精子的占比 [ 14 ]。生物二群的解脲支原体还能降低精子的浓度，这可能与谷草转氨酶有关 [ 15 ]。也有研究表明，解脲支原体作为一种条件致病菌，当其浓度达到一定值时会导致人体免疫系统的失衡。有研究者在小鼠中接种不同浓度的血清型3型的解脲支原体，发现UU3在宫颈管的阳性检出率随接种浓度的增高而增高；除此之外，还有多种因素会影响解脲支原体的致病性，如宿主的性伴数、菌群失调、宿主免疫力等，如解脲支原体在尚无性生活史的女性生殖道和宫颈中的检出率明显低于其在性生活频率高的女性生殖道和宫颈中的检出率，且性乱行为可增加解脲支原体的传播，并使其感染复杂化。 检测解脲支原体的方法有多种，实验室最常用的方法是分离培养法，将其在液体培养基中扩增，再接种于琼脂糖固体培养基上培养，用低倍镜显微镜观察，可观察到有微小的“油煎蛋”样菌落，但是这种方法容易出现假阴性，且不能分群、分型。随着分子生物学的发展，PCR检测逐渐成为新的检测主流方法，且根据编码MBA的核酸序列设计不同血清型引物对其进行分群、分型检测，具有特异性高、耗时短的优点。血清学检测也是一种实验室常用的检测解脲支原体的方法，常用的血清型检测方法主要为间接免疫荧光染色检查法、酶联免疫吸附试验，具有很高的灵敏度和特异性。 目前针对解脲支原体感染的治疗方案仍以抗生素为主，临床上较常应用的药物主要有四环素类、大环内酯类及喹诺酮类，其中以四环素类药物为首选 [ 16 ]。本实验中对分离株进行分群分型，可对后续的药敏研究奠定基础。
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user: 摘要 本研究旨在研究底播虾夷扇贝肠道微生物多样性及其动态变化，并分离潜在益生菌应用于虾夷扇贝幼体培育。实验用底播虾夷扇贝于2014年12月份底播，分别于2015年1月、4月和7月进行样品采集。以2216E培养基对肠道细菌进行分离、纯化，提取DNA并通过16S rDNA测序对分离的细菌进行鉴定。结果表明所有可培养细菌属于变形菌门、厚壁菌门和放线菌门，其中变形菌门占比78.9%，占绝对优势。属水平上，肠道分离可培养细菌隶属于弧菌属Vibrio，Aliivibrio，希瓦氏菌属Shewanella，科迪单胞菌Kordiimonas，假交替单胞菌属Pseudoalteromonas，假单胞菌属Pseudomonas，气单胞菌属Aeromonas，海洋居住菌属Pelagicola，黑杆菌属Phaeobacter，沈氏菌属Shimia，噬琼胶菌属Agarivorans，噬冷杆菌属Psychrobacter，海单胞菌属Marinomonas，克鲁维菌属Kluyvera，芽孢杆菌属Bacillus，漫游球菌属Vagococcus，香味菌属Myroides，黄杆菌属Tenacibaculum和微球菌属Micrococcus。从多样性指数分析看，1月(4.24)和4月(4.28)的Shannon多样性指数高于7月(3.96)。1月、4月和7月的Pielou指数分别为0.97、0.97和0.95，说明三个采样日的物种分布较为均匀。Bray-Curtis和Sørensen相似性指数显示，7月份肠道微生物菌群与1月和4月份相似性较低(分别为0.27和0.23)，随着底播时间和季节转化，底播虾夷扇贝肠道微生物变化较大，尤其夏季(7月份)与春季(4月份)和冬季(1月份)差异较大。
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user: 1. 引言 虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)是北黄海最重要的经济贝类之一，尤其是在长海县獐子岛，随着市场需求的增加规模逐渐扩大，截止2011年增养殖面积已经达到30平方千米，年产量20万吨 [ 1 ]。然而，微生物病原引起的流行病学制约着虾夷扇贝产业的可持续发展，造成虾夷扇贝大规模的死亡，如灿烂弧菌Vibrio splendidus [ 2 ] 和查氏弧菌Vibriochagasii [ 3 ]。研究细菌与宿主动物健康之间的相互作用具有重要的意义，消化道中正常的微生物群包括胃肠道发育、营养、免疫反应和抗病能力 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]。肠道细菌与水生寄主动物之间可能存在几种类型的联系，如摄食的、过渡的和常驻的种群，而许多因素，如内部结构、肠道内膜(围食膜)、饮食、寄主条件、季节等都可能影响水生无脊椎动物的肠道细菌 [ 4 ]。贝类被认为是滤食性动物，食物来源复杂，严重依赖其栖息地。不同粒径的浮游生物、颗粒状有机物、有机物碎片和微生物可诱导扇贝产生复杂的肠道菌群 [ 7 ] [ 8 ]。本研究探索了虾夷扇贝底部增殖后肠道可培养菌群的多样性及其随时间的变化，为后续的益生菌筛选、虾夷扇贝状态评估提供研究基础。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 材料 实验用底播虾夷扇贝于2014年12月份底播，分别于2015年1月、4月和7月份进行拖网取样，每次取样15个扇贝，样品标记为M1、M4和M7。 2.2. 方法 2.2.1. 肠道获取方法 取15只底播虾夷扇贝，以无菌海水冲洗贝壳表面并以70%酒精擦拭 [ 9 ]，随后进行无菌解剖，取出整个肠道，以手术刀将肠道剪开，采用无菌生理盐水进行冲洗去除肠道内含物。将10只扇贝肠道合并经称重，加入9倍体积(w/v)无菌生理盐水、匀浆，选取合适稀释度，取0.01 mL涂布于2216E培养基，于20℃培养7天。选取可计数稀释度的培养基(菌落数在30~300之间)随机挑选30个菌落进行纯化，纯化至单菌落以后分别于4℃斜面保种和−80℃液体保种 [ 10 ]。 2.2.2. 细菌DNA的提取、PCR扩增及序列的测定 将纯菌株接种到2216E液体培养基过夜培养，采用使用土壤基因组DNA快速抽提试剂盒[生工生物工程(上海)股份有限公司]提取细菌基因组DNA。以引物F27/R1492，对细菌16S rRNA基因片段进行扩增，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，PCR反应体系及反应程序参考文献。用10 g/L琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物是否符合目标条带。由生工生物工程(上海)股份有限公司完成PCR产物的测序。 2.2.3. 数据处理和分析 将各菌株序列在Eztaxon (http://www.ezbiocloud.net/)公共数据库中进行检索和同源性比对，从结果中取相似性最高的序列，采用Mega 5.0进行统计和聚类分析采用邻接法获得分子系统树，并通过自举分析 (boostrap)进行置信度检测，自举数据集为1000次 [ 11 ]。为比较底播之后不同时间虾夷扇贝肠道可培养细菌多样性，计算Shannon’s指数 [ 12 ]、Pielou’s指数 [ 13 ]、Bray-Curtis指数 [ 14 ] 和Sorensen指数 [ 15 ]。
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user: 4. 讨论 本研究表明底播虾夷扇贝肠道微生物主要隶属于变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门和放线菌门，并且变形菌门占比78.9%占绝对优势，与栉孔扇贝消化盲囊细菌组成一致 [ 17 ]。从属水平上看，弧菌属占31.1%，占绝对优势，丁君等 [ 18 ] 利用于454焦磷酸测序分析虾夷扇贝外套膜菌群多样性，弧菌属占比26.3%，可以看出弧菌属在虾夷扇贝体内是常驻优势菌。而关于栉孔扇贝消化盲囊的研究中同样表明弧菌属为其优势菌 [ 19 ]。然而，弧菌的存在已被普遍认为是双壳类幼虫培养的致死因子，同时脓胞病等引起的大量死亡主要是由于弧菌的存在 [ 2 ] [ 3 ]。除了弧菌属，希瓦氏菌属、假交替单胞菌属、假单胞菌属、微球菌属、噬冷杆菌属和漫游球菌属都曾在虾夷扇贝体内分离得到 [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ]。而科迪单胞菌，海洋居住菌属，黑杆菌属，沈氏菌属，噬琼胶菌属，噬冷杆菌属，海单胞菌属，克鲁维菌属，漫香味菌属，黄杆菌属之前未在虾夷扇贝机体中分离得到。 本研究对肠道细菌多样性进行了分析，底播后不同时间肠道细菌Shannon指数在3.96~4.28之间，丁君等 [ 18 ] 利用于454焦磷酸测序分析虾夷扇贝外套膜细菌Shannon指数为3.31，Shannon指数的差异可能受实验方法和组织差别影响。Bray-Curtis和Sorensen相似性指数表明底播虾夷扇贝随着底播时间肠道微生物菌群相似性低，因为胃肠道中的一些微生物群被认为是短暂的(外来的)，而另一些(本地的)是作为与肠粘膜相关的已建立菌群的成员而存在的 [ 16 ]。不同粒径的浮游生物、颗粒状有机物、有机物碎片和微生物也可诱导形成复杂的肠道菌群 [ 7 ] [ 8 ]。 本研究采用传统培养基分离方法分离底播虾夷扇贝肠道微细菌分析其微生物多样性，其中气单胞菌、芽孢杆菌、假交替单胞菌和假单胞菌也被作为益生菌应用于双壳贝类的苗种繁育过程 [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ]。而本文利用保种细菌进行产酶和拮抗病原分析为后续虾夷扇贝育苗提供依据和基础。
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user: 5. 结论 本研究探索了虾夷扇贝底部增殖后肠道可培养菌群的多样性及其随时间的变化，为后续的益生菌筛选、虾夷扇贝状态评估提供研究基础。
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user: 摘要 为发掘内蒙古传统发酵乳制品益生酵母资源，从内蒙古阿拉善和乌审旗地区采用传统方法生产的奶酪中分离筛选得到2株益生酵母菌bing-8和a-3，通过形态观察、生理生化实验以及采用5.8S rDNA方法进行区域序列同源性分析鉴定菌种，结果表明2株酵母菌均为发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)。
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user: 1. 引言 少数民族发酵奶酪制品，在当地饮食文化中起主要作用，传统发酵奶酪中蕴藏着丰富的微生物资源。这些历经千年进化和自然优化的微生态体系中保留着许多赋予传统发酵奶酪特殊质地和风味的多种微生物，为有益微生物的发掘提供了宝贵的资源。近年来研究发现，酵母作为一种辅助发酵剂，在乳制品发酵和成熟过程中可以影响其风味，抑制有害细菌的生长，有些菌株可预防和治疗急性痢疾、降低机体胆固醇、抗氧化和抗辐射等益生活性作用 [ 1 ] [ 2 ]。有研究表明，有些酵母菌不仅不会对乳制品的品质造成负面影响，相反，还会对发酵乳制品提供有益作用，尤其对奶酪的风味形成起到了非常重要的作用。在奶酪成熟过程中，酵母菌的蛋白水解、脂类降解、乳糖降解能力以及乳酸和柠檬酸同化起到很重要的作用 [ 3 ]，与奶酪的风味形成关系密切。 我国乳品产业发展迅速，市场对奶制品功能性需求不断增大，开发具有益生特性的乳制品成为行业未来发展趋势，从传统发酵乳制品中筛选具有潜在益生特性的酵母菌应用于乳制品加工中，开发新型乳制品已经是迫在眉睫。成果将打破发酵菌种单一的现状，研究混菌发酵的方法，开发具有我国自主知识产权的酵母菌菌株及相关产品，为传统乳制品的开发提供理论和实践支持。本研究以内蒙古阿拉善和乌审旗传统奶酪为原料，筛选具有潜在益生活性酵母菌，通过形态观察、生理生化试验及5.8S rDNA ITS1/ITS4区域序列同源性分析鉴定菌种，并测定其耐酸及耐胆盐性能。以期筛选到益生性能较好的酵母菌，为其在发酵食品中的应用提供依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料试剂及设备 试验材料：在内蒙古地区的阿拉善和乌审旗采集传统奶酪，标号记录采样地点后封口低温(4℃)储存，并及时进行筛选分离。 试验药品：胆盐、酵母膏、蛋白胨、葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、棉子糖、可溶性淀粉(均为分析纯)，试剂均来自于博迈德公司；2*Taq PCR Master mix (货号：T201-01)、胶回收试剂盒(货号：DH101-01)，定制引物均由博迈德生物提供；YPD培养基、YEPD固体培养基、碳源培养基、氮源培养基 [ 4 ]。 试验仪器：PCR扩增使用Biometra PCR仪，电泳仪为bio-rad，紫外可见分光光度计(SP-721/721E)上海光谱仪器有限公司；标准型洁净工作台(SW-CJ-2FD)上海博迅实业有限公司；显微镜(CX21)日本奥林巴斯株式会社。 2.2. 实验方法 2.2.1. 传统奶酪中酵母菌的分离筛选 取1 g样品，溶于9 mL无菌水中，混匀后置于25℃培养箱。培养1 h后，接种1 mL于YPD液体培养基中活化，25℃培养24 h~36 h，然后在PDA培养基上用平板稀释法分离活化菌株。培养板在25℃下培养。观察并记录菌落特征。选取形态不同的单菌落，染色后观察细胞形态，将具有酵母特征的单菌落接种于PDA培养基中纯化培养3~4次，镜检合格后，二次纯化的酵母YEPD斜面，25℃培养24 h~36 h，然后4℃保存备用 [ 5 ]。 2.2.2. 潜在益生酵母菌的筛选 1) 耐酸试验 所选菌株的耐酸性测定，试验调节培养基的pH值分别为(1.5，2.0，3.0，5.0和6.5)。测定32株酵母菌株在不同pH值下的耐受性。将4%的细菌悬浮液加入5种不同pH值的液体筛选培养基中 [ 6 ]，以中性条件pH值作为空白对照。在30℃下，以180 r/min转速振荡24 h培养，测定OD 600 nm的吸光度。 2) 耐胆盐试验 将上述耐酸性好的酵母菌株接种于含0%、0.2%、0.4%和0.6%猪胆盐的固体胆盐培养基中，恒温培养12 h，用菌落计数法计算活菌数 [ 7 ]。观察不同胆盐浓度对酵母生长的影响。耐胆汁盐能力计算公式为：耐受率(%)耐受性(%) = ΔE/ΔF × 100；Δf：对照培养基中细胞增长量；ΔE：细胞在添加胆盐的培养基中增长量。 3) 模拟人体温度下的生长测试 将所选菌株的悬浮液接种于YEPD固体培养基上，在37℃摇床(180 r/min)培养24 h，采用活菌平板计数法计数。试验设置3组重复。 4) 人工模拟胃液耐受能力测定 按0.5%的量向液体肉汤培养基中加入NaCl，调pH3.0，高压灭菌。无菌条件下添加胃蛋白酶，使其浓度为5 g/L，制成模拟胃液。将菌悬液以10%的量加入到模拟胃液中，37℃培养2 h。将模拟胃液处理前后的菌液分别均匀涂布于固体肉汤培养基固体平板上，作三个平行，37℃培养48 h。用平板计数法计算活菌数，比较胃液处理前与处理后菌株的存活量，判断菌株对胃液的耐受能力。 Δlog (存活率) = 胃液处理后的活菌数/胃液处理前的活菌数 2.2.3. 菌株的生理生化鉴定 生化鉴定方法参照《酵母菌的特征与鉴定手册》 [ 8 ]，通过繁殖方式观察、碳源同化试验、氮源同化试验、产酸试验等生理生化特征进行鉴定 [ 9 ]，根据菌株的培养形态特征及生理生化特性初步确定其分类地位。 2.2.4. 菌株的分子学鉴定 1) 引物序列 [ 10 ] ITS1: 5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG -3’ ITS2: 5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’ 2) 酵母基因组DNA提取过程 ① 超净台中取出部分菌体于无菌研钵中，加入适量干冰，进行快速研磨至粉状，加入细胞裂解液PL (400 uL)，继续研磨至液态； ② 移液枪取出上述液体于1.5 mL无菌EP管，65℃水浴15 min，取出，自然冷却至室温； ③ 上述EP管中加入等体积酚氯仿溶液，充分混合，进行抽提。离心5 min。缓慢取上清与1 mL乙醇溶液中(含50 uL，3M乙酸钠)，并轻轻混匀，于−20℃冷冻60 min。 ④ 13000 rpm离心10 min，并有1 mL 70%乙醇水溶液漂洗2遍。去除上清留下沉淀，室温放置5~10 min，至溶液挥发。 ⑤ 加入50 uL溶解液TE。充分溶解。 ⑥ 取2 uL溶液加入到2 uL 2x Loading Buffer，进行1%琼脂糖凝胶电泳。(160 V， 15 min)，得到基因组DNA凝胶电泳图谱。 3) PCR扩增 扩增体系及条件见表1： Table 1 Amplification system and condition 1xTaq PCR Mix 46 uL 95℃ 5 min 1 cycle gDNA 2 uL 95℃ 30 s 35 cycles ITS1 1 uL 55℃ 30 s ITS4 1 uL 72℃ 60 s 72℃ 5 min 1 cycle 表1. 扩增体系及条件 4) PCR产物电泳检测及回收测序 取上述扩增产物50 uL进行2%琼脂糖凝胶电泳(160 V， 13 min)，将目标片段大小(500 bp左右)切割与2 mL EP管中，加入600 uL溶胶液，65℃水浴10 min，经吸附柱回收PCR产物。然后将回收产物进行测序。 2.2.5. 数据分析 将菌株的5.8S rDNA基因序列提交到NCBI数据库进行DNA序列的同源比对，将相似度高的序列与测定序列通过Clustalx进行多重序列比对，比对结果用MEGA软件中的Neighbor-Joining法构建系统发育树 [ 11 ]。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 益生酵母菌筛选 3.1.1. 菌株耐酸性 对筛选酵母菌进行益生性筛选实验发现，在不同pH值条件下，(bing-8和a-3)菌株均能够正常生长，且生长活性较高，在高酸(pH = 1.5)条件下，测定其吸光值均高于0.4，在此条件下，酵母菌细胞均能存活，表明这2株菌具有较好的耐酸特性。 3.1.2. 菌株耐胆盐测定 在胆盐含量浓度达到1 g/L条件下，(bing-8和a-3)菌株增长率分别达到13.68%、6.05%，而在5 g/L胆盐下增长率分别为13.01%和3.03%，增长率略微下降，说明bing-8和a-3在5 g/L胆盐下具有一定的生长力、耐受性。在模拟胃液中培养4 h后，bing-8和a-3株酵母菌数量略微降低，有较好的耐胆盐性，具有一定的存活性。 3.1.3. 人体温度下的生长测试 菌株耐温性实验中，(bing-8和a-3)菌株在37℃恒温培养24 h，2株酵母菌生长正常，结果显示37℃条件菌株生长不受影响。 3.1.4. 人工模拟胃液耐受能力测定 菌株粘附在肠黏膜上，形成稳定菌群，是促进人体肠道内的菌群平衡的首要条件 [ 12 ]，胃液的pH一般在3.0左右 [ 13 ]，所以在人工模拟胃液(pH 3.0)的环境中对2株代表性菌株进行培养，用平板计数法统计胃液处理前后平板中的活菌数。结果见表2。 Table 2 Results of artificial gastric juice tolerance tes 菌株 胃液处理前的活菌数 (log10 CFUs∙mL −1 ) 胃液处理2 h后的活菌数 (log10 CFUs∙mL −1 ) Δlog (存活率) bing-8 11.77 ± 0.0479* 12.65 ± 0.0234b** +0.85 a-3 12.92 ± 0.0096* 12.74 ± 0.0255b** −0.15 表2. 人工模拟胃液耐受试验结果 注：*表示P < 0.05差异显著；**表示P < 0.01差异极显著；上标含有相同字母的无显著差异。 由表2可以看出，在模拟胃转运过程中菌株活菌数虽有不同程度下降，但经过人工模拟胃液处理2h后都能保持活菌数在10 6 CFU/mL以上，且差异极显著，显示出菌株在胃液中具有不同程度的耐受能力。菌株bing-8的Δlog值为+0.85，比胃液处理前的活菌数有所增加，说明该菌株能够在胃液中存活并生长，有很强的耐受能力。菌株a-3的Δlog值在−1至0之间，存活率较高，耐受能力较强。 3.2. 菌落形态及细胞形态特征 菌株bing-8培养皿中有单菌落出现，菌落形态呈椭圆形，表面光滑湿润，干燥，颜色呈乳白色，表面有凸点，边缘整齐。显微镜下细胞染色为蓝色，形态为椭圆。无性繁殖方式为芽殖，一端出芽。a-3酵母菌培养皿中有单菌落出现，菌落形态呈圆形，表面光滑湿润，干燥，颜色呈白色，边缘整齐。显微镜下细胞染色为蓝色，形态为圆型，无性繁殖方式为芽殖，一端出芽，划线接种于YPD固体培养基培养后，菌落形态及美兰染色结果见图1。 图1. (bing-8和a-3)酵母菌菌落形态及细胞形态(100×) 3.3. 酵母菌的生理生化鉴定结果 结合图1酵母菌的菌落形态和表3生理生化试验鉴定结果，分离株均为芽殖，在糖发酵实验中，葡萄糖、半乳糖和蔗糖可以被发酵，乙醇和柠檬酸可以在碳源同化实验中被同化，硝酸盐在氮源同化实验中不能被同化，属于毕赤酵母。 Table 3 Physiological and biochemical identification results of strain 项目 bing-8菌株 a-3菌株 项目 bing-8菌株 a-3菌株 碳源同化 实验 半乳糖 + + 糖发酵 实验 葡萄糖 + + 蔗糖 + − 半乳酸 + + 可溶性淀粉 − − 蔗糖 + + 乙醇 + + 麦芽糖 − − 柠檬酸 + + 乳糖 − − 氮源同化 实验 尿素 − − 产酸 − − 硫酸铵 + + 产酯 − + 硝酸钾 − − 产淀粉 − − 表3. 菌株的生理生化鉴定结果 注：“+”表示阳性；“−”表示阴性。 3.4. 酵母菌的5.8S rDNA鉴定 3.4.1. 分离菌株5.8S rDNA PCR扩增结果 通过对酵母菌株DNA用5.8S rDNA的区引物进行PCR扩增，扩增电泳图如图2。可以看出(bing-8和a-3)酵母菌株的DNA片段长度在500 bp左右。符合酵母菌5.8S rDNA区理论预期值 [ 14 ]，可初步鉴定为酵母菌。 图2. (bing-8和a-3)菌株PCR扩增电泳图 3.4.2. 基于5.8S rDNA基因序列的酵母菌株系统发育分析 2株分离酵母菌的分子生物学鉴定结果DNA测序结果在NCBI网站上进行序列同源性比对，最终确定两株菌为发酵毕氏酵母(Pichia fermentans)。用MEGA6.0构建系统进化树见图3。 图3. 酵母菌株5.8S rDNA构建的系统进化树
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user: 4. 结论 本试验从内蒙古阿拉善和乌审旗传统方法生产的奶酪中，进行益生酵母菌的分离，对分离菌株进行耐酸性、耐胆盐、模拟人体温度下的生长测试及胃液耐受能力测定，最终筛选得到2株益生酵母菌bing-8和a-3。釆用传统的培养方法进行形态观察，通过生理生化试验结合5.8S rDNA分子生物学鉴定，结果显示2株益生酵母菌均为发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)。
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user: 摘要 本文利用传统水浸法、水浸法 + 图像处理法及接触角法开展不同沥青与集料之间的黏附性研究，测定黏附等级、剥落率、接触角及黏附功等指标，并进行与沥青混合料冻融劈裂试验之间的相关性分析，探索黏附性与沥青、集料指标的影响关系，结果表明：传统水浸法采用目测判断的方法，不能很好地对比出同种集料与不同沥青的粘附性差别，在实际工程应用只能作为一种简单的参考，对实际工程应用指导不足；水浸法 + 图像处理法得到的剥落率，接触角法得到的黏附功测定黏附功，均能够准确定量的表征不同沥青与集料的黏附性优劣；对于基质沥青，水浸法 + 图像处理法、接触角法与沥青混合料水稳定性具有良好的相关性，对工程实际应用具有很好的指导作用；三种试验方法评价改性沥青与集料黏附性均存在一定的弊端，还需开发准确度更高、适用性更广的黏附性评价方法。
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user: 1. 引言 沥青路面以其均衡的高低温性能及良好的驾驶体验感，已成为我国目前最常用的路面形式。沥青混合料的各项技术指标与沥青、集料性能及两者之间的黏附优劣息息相关，现行规范 [ 1 ] 中均有明确的沥青、集料技术指标试验检测方法及评价标准，虽有沥青–集料之间的黏附性试验检测方法，但是是一种半定量方法，与实际沥青混合料性能之间缺乏相关性研究。自20世纪20年代开始，国内外路面工程学者就开始研究沥青与集料间的黏附性，主要有五种理论 [ 2 ]：1) 力学理论；2) 化学反应理论；3) 表面能理论；4) 分子定向理论；5) 静电理论。伴随五种理论产生众多试验评价方法，主要有水煮水浸法、光电比色法、溶剂洗脱法、SHRP净吸附法、图像处理法、超声波法、原子力显微镜法、接触角法、动态力学分析仪法、动态剪切流变仪法等 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]。经试验证明上述试验方法均能表征沥青与集料的黏附性，但至今仍无学术界及工程应用界公认的标准评价方法。 我国规范中规定表征沥青与集料之间的黏附性方法主要为水煮水浸法、浸水马歇尔试验及沥青混合料冻融劈裂试验等 [ 7 ]。水煮水浸法为半定量试验方法，采用人眼观察判断黏附性等级，定量不准确。在实际工程应用中，水煮水浸法与实际工程相关性较差 [ 8 ]，与沥青混合料实际受力情况相差太多，各类人员均是将水煮水浸法作为一种简单参考，并不将其作为预判沥青混合料性能的关键指标。因此，为更好地表征沥青–集料的黏附特性，为更好地结合并指导实际工程，利用高科技实验评价手段，开展沥青–集料之间黏附特性的快速评价方法，对工程质量的保证具有很重要的意义。 本文利用传统水浸法、水浸法 + 图像处理法及接触角法开展不同沥青与集料之间的黏附性研究，测定黏附等级、剥落率、接触角及黏附功等指标，并进行与沥青混合料冻融劈裂试验之间的相关性分析，以期为实际工程应用提供能够定量、快速并准确预判沥青混合料水稳定性能的黏附性测试方法，并为以后的沥青与集料黏附性试验评价方法的发展提供指导及建议。
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user: 2. 原材料及试验方法 2.1. 原材料 选用四种沥青，分别为50号沥青、70号沥青、90号沥青和SBS改性沥青。四种沥青的技术指标见表1。 Table 1 Technical indexes of asphal 试验项目 50号沥青 70号沥青 90号沥青 SBS改性沥青 针入度25℃，5 s，100 g (0.1 mm) 51 69 84 57 软化点(R&B) (℃) 49.0 48.0 45.0 88.0 135℃黏度(Pa∙s) 0.45 0.40 0.38 1.6 延度(cm) 39 (10℃) 37 (10℃) >100 (10℃) 36 (5℃) 表1. 沥青技术指标 化学反应理论认为，沥青呈酸性，与碱性集料的黏附性最优，根据规范主要采用SiO 2 含量判断集料的酸碱性，将SiO 2 的含量小于52%的集料称为碱性集料，SiO 2 的含量在52%和65%之间的集料称为中性集料，SiO 2 的含量大于65%的集料称为酸性集料。因此选用三种化学性质不同的集料，分别为石灰岩、玄武岩和花岗岩，三种集料中的SiO 2 含量见表2。采用接触角法时采用切割机切割成规整的形状，然后用1000目砂纸打磨光滑。 Table 2 SiO2 content of three aggregate 集料类型 SiO 2 含量/% 石灰岩 15.50 玄武岩 53.99 花岗岩 72.77 表2. 三种集料SiO 2 含量 2.2. 试验方法 (1) 水浸法 水浸法试验采用文献 [ 7 ] 中的方法。 (2) 水浸法 + 图像处理法 在试验方法(1)的基础上，采用图像处理法对试验结果进行处理，得到沥青在集料上的剥落率，具体的图像采集处理方法借鉴樊亮学者 [ 9 ] 的研究方法。 (3) 接触角测试 接触角法采用躺滴法，采用德国KRUSS公司的DSA 100接触角测量仪，测试方法参考魏建明 [ 10 ] 学者的试验方法，采用已知表面自由能的三种液体，分别测定三种液体与沥青、集料的接触角，通过表面能理论公式计算得到沥青、集料的表面自由能。具体的计算公式如下： 沥青在高温条件下呈现流动液体状态 [ 11 ]，沥青在集料表面的润湿过程遵循吉布斯函数： Δ G = γ s l − γ 1 − γ s (1) 粘附功定义为： W s l = − Δ G (2) 即： W s l = γ s + γ 1 − γ s l (3) 结合Young方程： γ 1 cos θ = γ s − γ s l (4) 可得黏附功为： W s l = γ 1 ( 1 + cos θ ) (5) 式中： ∆G——吉布斯自由能，mJ/m 2 ； γ 1 ——液体表面自由能，mJ/m 2 ； γ s ——固体表面自由能，mJ/m 2 ； γ sl ——固液界面自由能，mJ/m 2 ； W sl ——固液粘附功，mJ/m 2 ； Θ——固液接触角，(˚)。 (3) 冻融劈裂试验 冻融劈裂试验参考文献 [ 7 ] 中的方法。
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user: 4. 结论 1) 传统水浸法采用目测判断的方法，不能很好地对比出同种集料与不同沥青的粘附性差别，在实际工程应用只能作为一种简单的参考，对实际工程应用指导不足。 2) 水浸法 + 图像处理法得到的剥落率，接触角法得到的黏附功测定黏附功，均能够准确定量地表征不同沥青与集料的黏附性优劣。 3) 对于基质沥青，沥青标号越高，沥青在集料表面的润湿性更好，分离需要做的功越少，黏附性变差。 4) 水浸法 + 图像处理法与冻融劈裂试验相关性系数为0.9814、0.9378、0.9659，接触角法与冻融劈裂试验相关性系数为0.8674、0.9347、0.9798，两种试验方法与沥青混合料水稳定性具有良好的相关性，对工程实际应用具有很好的指导作用。 5) 对于SBS改性沥青，三种试验方法得到的黏附等级、剥落率、黏附功与冻融劈裂强度比的线性相关系数分别为0.0146、0.6733、0.04，说明传统水浸法、水浸法 + 图像处理法及接触角法在评价改性沥青与集料黏附性均存在一定的弊端，还需开发准确度更高、适用性更广的黏附性评价方法。
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user: 摘要 本文旨在研究用户对铁路12306 APP界面信息的需求与用户体验之间的关系，从而优化界面信息设计，提高用户满意度。本文首先将用户关注的信息呈现分为6大类：广告图片信息呈现、小图标图片、重要文字信息呈现、界面信息呈现、数字密码登录，周围景区信息呈现。进而根据铁路12306 APP的用户使用体验，借助Kano模型，制作调查问卷，通过网络调查方式获取有效问卷66份。问卷分析结果表明，较小的广告图片呈现，界面中重要文字加粗设计，界面中有抢票日期提醒可以提升用户的满意度，给用户带来更好的用户体验。
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user: 1. 引言 随着移动互联网、人工智能的快速发展，智能手机的使用率也得到了大幅度的提升。根据中国互联网络信息中心(CNNIC)近期发布的第46次《中国互联网络发展状况统计报告》，截止2020年6月，中国手机网民规模达9.40亿，智能手机的发展已成为不可抗拒的趋势，在这样的环境下，移动互联网产品迅速发展，各种移动端应用(APP)竞相涌现。于此同时，随着经济的快速增长，人们在满足自己生理需求，安全需求的情况下，更倾向于追求社会需求，进而促进了我国的旅游出行人数的增加，带动我国交通行业的蓬勃发展。 随着人们对智能手机依赖程度的不断增加，相对于过去人们排队购票，电脑网页购票的习惯，如今更多的人选择在APP上进行购票。其中，铁路12306 APP作为交通票务类APP的一种，有很大的需求及下载量。然而，相对于飞猪旅行APP和携程旅行APP等交通票务APP，其评分极低，说明铁路12306 APP没有很好地满足用户的使用需求。 因此，本研究此次从用户体验的角度出发，基于Kano模型研究铁路12306 APP用户对其信息呈现方式的需求，并借助Better-Worse公式，明确用户对各问题的满意度分析，帮助我们对APP界面设计提供优化建议，进而提升用户对该产品的满意度，增加产品的下载量使用量，同时也能为交通购票类APP研究做一定的补充。