DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 花色呈现的分子基础 2.1. 花色呈现的生化生理基础 花色呈现物质主要有三大类：甜菜碱(betalains)、类胡萝卜素(carotenoids)和类黄酮(flavonoids) [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] 。其中甜菜碱、类胡萝卜素和部分类黄酮(如黄酮、黄酮醇、橙酮)可使花色呈现黄、红等色，类黄酮中的花青素是花色多样性最主要的物质基础。不同类型的花青素可使花呈现红、粉、紫、蓝等颜色。花青素在细胞质中不稳定而主要以花色苷(配糖体)的形式存在于植物液泡中 [ 1 ] [ 4 ] 。花青素苷元主要有天竺葵素(pelargnidin)、矢车菊素(cyanidin)、飞燕草素(delphinidin)、芍药花素(peonidin)、碧冬茄素(petunidin)和锦葵素(malvidin) 6大类 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 。它们均具有C6-C3-C6的基本骨架 [ 3 ] [ 8 ] [ 9 ] ，结构上的不同主要体现在B-环上羟基化、甲基化的程度。羟基越多，花色越蓝；甲基多则花色趋红。花青素苷元还会发生不同程度的糖基化和酰基化使其更稳定。糖基化使花色发生轻微红移；被香豆酸、肉桂酸等芳香族氨基酸酰化会使花色发生蓝移 [ 3 ] [ 10 ] 。羟基化、甲基化、糖基化和酰基化等修饰使花青素种类丰富多样，赋予了花色的多样性。随着技术的进步，越来越多的花青素被分离鉴定 [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] 。至2007年，自然界共有约500种花青素被鉴定 [ 14 ] 。除了花青素类别，花瓣细胞形状 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] 、液泡pH [ 18 ] - [ 25 ] 、细胞共色素及金属离子的存在 [ 3 ] [ 12 ] 都会影响花色的呈现。如飞燕草素在较高的Fe 3+ 下会使郁金香(Tulipa gesneriana)呈现蓝色 [ 26 ] [ 27 ] 。 2.2. 花色呈现的遗传基础 花青素的合成是研究比较清楚的一个次生代谢通路(图1) [ 3 ] [ 28 ] [ 29 ] 。它以香豆酰辅酶A(4-coumaroyl-CoA) 图1. 花青素代谢途径(修改自[ 132 ]) 和丙二酰辅酶A(malonyl-CoA)为底物，由结构基因(CHS、CHI、F3H、F3’H、F3’5’H、DFR和ANS)编码的一系列酶催化合成，并经糖基化、甲基化和酰基化等修饰后被转运至液泡中。其中F3H、F3’H和F3’5’H为花青素代谢途径的三个分支酶，其合成产物分别对应于天竺葵素、矢车菊素和飞燕草素。这些酶基因在许多植物中均已被克隆 [ 6 ] [ 28 ] 。它们可能是以多酶复合物的形式在内质网膜上行使催化功能 [ 2 ] [ 3 ] [ 30 ] 。花青素代谢与初级代谢之间具有密切的联系。来自圆叶牵牛的数据显示其底物香豆酰辅酶A与丙二酰辅酶A分别来自于苯丙氨酸(phenylalanine)合成途径和糖酵解(glycolysis)过程 [ 31 ] 。 已知花青素代谢途径由MYB、碱性螺旋–环–螺旋(bHLH)和WD40重复蛋白(WDR)三类调控因子主要以MBW三元复合物的形式调控 [ 3 ] [ 22 ] 。其中WDR的表达具有广泛性，而MYB和bHLH的表达却仅限于特定组织 [ 32 ] - [ 38 ] 。除参与花青素代谢途径外，不同组合的MBW复合物还参与液泡pH的控制、原花青素的合成、根毛形成、表皮细胞形状的决定和着色模式等过程。其中MYB决定了其功能的特异性 [ 33 ] [ 34 ] [ 39 ] 。在MBW复合物中，MYB和bHLH可分别特异地结合结构基因启动子区的cis元件——ANCNNCC (MRE， MYB-recognizing element)和CACN(A/C/T) (G/T) (BRE， bHLH-recognizing element)，且MRE与BRE之间偏爱6 bp的间隔 [ 29 ] [ 40 ] [ 41 ] 。 但一些MYB可单独起作用。如在玉米(Zea mays)中，P1(subgroup7)可单独激活花青素合成的一部分基因(CHS， CHI， DFR， FLS)而促进玉米粒中鞣酐(phlobaphene)的合成 [ 25 ] [ 36 ] [ 42 ] [ 43 ] 。在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中，CHS、CHI、F3H、F3’H、FLS可被一些冗余的R2R3MYB (MYB11， MYB12， MYB111) (subgroup7)单独激活 [ 44 ] 。
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user: 5. 展望 花色表型的丰富变异既存在于种间，也存在于种内。花色表型变异的分子机制和自然选择的研究对探究生物多样性的存在机制具有重要意义。目前对种内的数量变异研究相对较少。传粉者或非传粉者因素对花色变异所起的选择作用有可能影响花色的进化，但其作用机制还需要更多研究。已有的研究结果多数还需要生态学的调查加以确认。花色表型变异导致的植物-传粉者关系的变化如何影响物种的分化，进而影响生态系统的动态变化尚需更多关注。特别是随着气候变化的加剧，自然环境对植物性状和传粉者访花行为的影响将越来越受重视。显然，相关研究将会深化我们对未来气候下动植物互作关系的认识。
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user: 摘 要 生产实习是矿物加工工程专业的一个重要实践性教学环节，“紫金模式”下矿物加工专业人才培养以国际化矿业人才培养为目标，结合现代矿业的发展，根据紫金山金铜矿中金、铜选矿生产工艺，确定矿物加工专业本科生生产实习内容。结合三年的实践经验，就生产实习运行情况、考评体系完善过程中遇到的问题进行探讨，针对性指出了如何解决提高双师型教师的积极性问题。 关键词 :紫金模式，矿物加工，生产实习
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user: 1. 引言 “紫金模式”办学即紫金矿业集团资助福州大学紫金矿业学院办学建设、参与办学过程、检验办学成效的运行与管理机制，采用一校两地双师型的办学模式 [ 1 ] 。矿物加工专业生产实习是学生进行专业实践训练的重要途径，是加强学生理论联系实际，培养学生实践能力、创新能力不可缺少的实践教学环节。通过生产实习全面培养学生学习和了解矿物加工专业，加深对所学专业知识的理解，将课本上所学的专业知识结合到生产实际，使它们条理化、系统化，为本专业学生后续专业课的学习、课程设计和毕业设计奠定扎实的基础。在“紫金模式”下，如何提高本专业生产实习的效果是关系到提高教育质量与人才素质培养的大问题，是矿物加工专业教学改革的重点 [ 2 ] 。而影响矿物加工专业学生生产实习质量的主要是生产实习基地的选择及实习内容的优化，其次生产过程的管理也是影响实习效果的主要因素。
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user: 2. 生产实习基地的选择、建立及完善 生产实习基地的选择应注重矿物加工技术的最新发展成果，选矿方法要全面，选矿设备应多样，流程应有一定的复杂程度和代表性。这样学生可以系统掌握选厂的工艺流程，设备工作原理以及生产管理等方面的专业知识，培养学生理论联系实际，解决生产中出现的各种问题的能力，并为今后从事本专业工作打下基础 [ 3 ] [ 4 ] 。 基于本专业的培养方案，结合以上要求，进一步适应国际化矿业发展的需要，选择紫金山金铜矿作为矿物加工专业的生产实习基地。紫金山金铜矿位于上杭县，隶属于紫金矿业集团，是我国20世纪80年代发现并探明的特大型有色金属矿山之一，是典型的上金下铜，金矿床和铜矿床均达到特大型规模的斑岩型矿床。紫金山金铜矿是一个集地、采、选为一体的企业，是紫金矿业发展的核心企业，紫金矿业集团公司发展壮大的发源地、利润中心和人才基地。 紫金山金铜矿目前选矿车间包括金矿一选厂、金矿二选厂、金矿三选厂、铜矿一选厂、铜矿二选厂、铜矿湿法厂，不同的选矿车间生产工艺不同，完全可以满足矿物加工专业本科生生产实习目的。 通过本次实习，主要让学生达到以下目的：第一，了解不同性质的矿石处理方法是不同的，例如：如果处理低品位矿石。企业为了获得相应的利润，必须采取加大处理量的方式，运用湿法厂处理该类型矿石是适合的，而对于细粒嵌布的多金属矿石，应采用浮选工艺；第二，掌握主要设备的性能参数及工作原理(旋回破碎机、标准圆锥破碎机、格子型球磨机、膏体浓密机等)；第三，掌握车间流程的制定原则，例如铜矿选矿厂根据矿石中硫化矿的含量低，采取铜硫混浮-抑硫浮铜工艺分别等到铜精矿和硫精矿进行销售；第四，大体上了解车间的药剂制度，例如在磨矿过程中石灰的添加量、捕收剂及起泡剂的用量等；第五，初步了解现场的管理等，例如设备运转不正常要及时逐层向上反映问题，及时解决问题，提高设备运转率。 经过近十年的教学与实践环节的综合运行，该基地取得了丰富的管理运行经验和教学成果，并于2012年成功获批为“国家级工程实践教育中心”，2015年“紫金模式”获全国教改创新优秀奖。目前，矿物加工专业生产实习运行程序如下：学校专业指导教师提出每年的实习计划，详细列出需要紫金山金铜矿协助内容，由紫金矿业学院上杭教学基地负责人与紫金山金铜矿人力资源部培训处人员的沟通，由培训处人力专员与各个车间进行协调，解决学生实习过程中的吃、住、行方面问题，同时与实习选厂进行沟通，指定具有研究生学历的企业技术人员进行现场指导，建立良好的实习反馈机制，保证矿物加工专业本科生生产实习实践环节的顺利进行 [ 4 ] [ 5 ] 。
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user: 3. 生产实习内容的改革与探索 3.1. 进一步明确生产实习的目的与要求 矿物加工生产实习是矿物加工专业人才培养的重要环节，在“紫金模式”办学背景下，矿物加工专业生产实习按照矿物加工本科生培养方案的要求，扎实稳妥进行矿物加工生产实习过程。针对矿业发展出现的新问题，研究解决问题的具体措施，首先必须对生产实习的重要性有一个清楚的认识，制定出科学合理的矿物加工生产实习计划。根据人才培养计划阶段性要求，生产实习的目的使学生进一步接触生产实际，加深对所学专业知识的理解，掌握不同矿石性质的矿石需要不同的工艺，培养学生综合运用理论知识分析实际问题的能力，适应现代化国际矿业人才为目标。 3.2. 合理安排生产实习内容 紫金山金铜矿金的选矿厂的体现了传统与现代相结合的工艺，既有典型的重选、堆浸、碳浸工艺，又有古老的人工淘洗与现代尼尔森选矿设备相结合；而铜的选矿厂工艺同样具有传统硫化矿浮选工艺，又有先进的生物湿法浸铜工艺。如何在三周的生产实习过程中达到生产实习的目的与要求，需要指导教师在生产实习之前做两方面的工作：一是提高学生的学习兴趣，调动学生的积极性；二是对不同选厂的生产工艺特点进行分析，选择三个选矿厂的工艺作为矿物加工专业本科生的生产实习内容，然后根据不同工艺特点安排不同的实习时间。例如破碎车间、磨矿车间的工艺及设备是选矿厂的主要部分，也是每个选矿厂都必须具有的部分，亦是为后续课程设计、毕业设计收集资料做准备。在这个知识点上要求学生实习的时间长一些，让学生详细的了解旋回破碎机、颚式破碎机、格子型磨矿机、溢流型球磨机、圆运动双层筛的各项参数及选择原理，让学生学习到把不同厂房内的设备布置合理，并达到可以独立设计出技术上可行、经济上合理的选矿厂的目的。对于矿石开采部分，由于大多数矿山选矿与采矿是两个部门，矿石给矿部分基本由采矿部门负责，我们在此环节拟用半天的时间进行了解，把主要时间放在选矿厂。学生在具有不同工艺的矿山实习不仅掌握了传统的选矿工艺，又了解了现代矿物加工发展的趋势的目的。 3.3. 生产实习方式 福州大学紫金矿业学院矿物加工工程专业本科生生产实习采用集中实习的方式，由该课程负责人提出实习计划，把实习过程中需要得到紫金山金铜矿协助的事项，提交到紫金山金铜矿人力资源处，安排全部实习学生住宿在紫金山金铜矿，分三个小组在不同选矿车间轮换实习。指导教师与双师型教师共同探讨实习内容，确定不同工段的时间，保障学生在实习过程中对现代矿业发展有个大致的了解，以及不同矿石性质对应的选矿方法，不同设备的安装、运行状况等。双师型老师由于是现场技术人员，与选矿厂的工人及技术人员都熟悉，在确定实习内容之后，他们会把学生分配到各个实习地点，交代好当班的工人指导在该工艺点的实习的学生，保障学生的安全，有利于学生实习的顺利进行；学校的指导教师每天早晨、中午、晚上会召集该小组成员进行开会，布置当天的实习任务，了解学生前一天的实习状况，解决学生在实习过程中遇到的问题，对一天的实习内容进行复习，查漏补缺加深一天的实习内容。而对于当天实习内容较轻松的学生，我们会找到现场经验非常丰富的工人，采取座谈的方式学习，通过经验交流，学生更容易掌握现场的知识。同时在交流过程中，学生也会对工人的生活方式进行深入了解，这种可能会影响其后续工作的选择。 3.4. 生产实习指导书的修订 由于同类院校生产实习去的选矿厂大多只有某一特定的选矿工艺，没有紫金山金铜矿选矿工艺全面，同时紫金山金铜矿的选矿工艺、设备也随着科学技术的发展而变化，当今的生产实习指导书与紫金山金铜矿的选矿工艺存在较大差别，不能与紫金山金、铜选矿生产工艺相匹配。因此要对现存的生产实习指导书进行校正，适当章节进行修改，满足福州大学紫金矿业矿物加工专业本科生培养的要求。
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user: 4. 加强生产实习过程管理，提高实践教学质量 4.1. 加强生产实习过程管理 我们制订了严格的管理程序，确保学生在规定时间内进行生产实习而不做其他事情。第一，所有参与生产实习的学生及教师在进行生产实习之前都要进行三级安全教育，既矿部安全教育、厂部安全教育以及各个车间根据车间特点进行的车间安全教育。教育学生在生产实习过程中时刻牢记“不伤害自己，不伤害他人，不被他人伤害”的原则；意识到安全、环保对于自己、家庭、企业的重要性。第二，实习期间每个选矿厂都有一个校内指导教师与一个企业技术人员同时对学生实习环节进行指导，二者相互补充。第三，实习期间进行选矿厂轮换制度，每个小组在各个选厂的实习时间为5天，每个工段实习时间由校内指导教师与企业指导教师共同协商，保证实习效果。第四，阶段性答辩，主要考察每个小组在相应车间实习效果，由企业指导教师根据各个车间的特点、学生的实习情况，回答5个问题作为学生的平时成绩。根据回答问题情况，检验学生的实习效果，提醒后面同学在实习过程中需要注意的知识点。 4.2. 严格生产实习要求 要求学生在实习期间，根据实习内容，认真做好实习记录，包括工艺流程、技术参数、生产设备、产品质量检测、安全环保等方面，同时要求坚持写实习日志，把实习期间的感受和体会写下来，提高生产实习的认识水平。规范生产实习报告，按福州大学生产实习报告要求统一打印。严抓生产实习过程管理，首先让学生对近期要实习的车间进行大概了解，然后再进行岗位实习，定期由指导教师提出问题进行测评。
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user: 5. 完善生产实习成绩评价体系 生产实习成绩评定主要由三部分组成，期中学生自评(12%)、教师(18%)、实习报告成绩(70%)。其中教师给学生的平时成绩部分包括校内指导教师的平时成绩以及现场指导教师的意见，部分企业指导教师根据学生实习效果进行测评。
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user: 6. 总结与思考 “紫金模式”下矿物加工生产实习取得了一定的成效，这与紫金矿业集团的大力支持分不开，但是还存在一定的问题。一方面，与双师型指导教师及企业指导教师相关的问题：例如双师型指导教师毕竟不属于学校教师，变动性较强：如何调动企业指导教师积极性问题：双师型教师最担心的是实习过程中的安全问题等。因此在每次实习前，要根据实际情况，提前考虑这些问题，着力解决问题，提前一步安排完毕，把一切不利的因素转化为有利的因素。另一方面，学生的学与思的问题，如何把学生的积极性调动起来，指导学生把书本知识与实际应用结合起来，引导学生根据实际情况学会思考。
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user: 摘 要 本文研究了物流二维货物配装问题。基于客户优先级等因素，建立了一个二维货物配装的整数线性规划模型，并设计了相应算法，给出了货物配装的优化策略。数值算例验证了算法的有效性。 关键词 :货物配装，整数线性规划模型，算法
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user: 1. 引言 货物配装问题关系到车辆空间、载重的利用率，影响企业物流成本和效益，合理配装是现代物流的一个关键性技术，是企业追求的目标之一。近年来，货物配装优化问题，无论是在实际应用还是在学术研究，已成为现代物流研究的一个热点，引起了国内外众多学者浓厚的研究兴趣( [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] )。随着国际物流产业的发展，货物的规模、种类和数量出现了大幅度增加，货物配装的目标更多、限制条件更多成为发展的必然趋势，这就导致货物配装问题模型的目标函数和约束条件变得更加复杂。对此，国内学者也做了大量的研究，基本的思路是基于遗传算法和背包问题进行模型建立和算法改进。史亚贝等( [ 4 ] )利用动态规划方法，基于对车厢的容积和载重量利用率的考虑，给出了求解该问题的算法，但由于考虑的约束条件过少，在实际的车厢配装过程中，对数量多、种类杂的货物配装效果不明显。明立立( [ 5 ] )在装载空间、载重量、容积、容重比的四大约束条件下，又增加了层级约束，建立了无层级约束和有层级约束的单车三维货物配装问题，应用遗传算法进行了求解。符丽锦( [ 6 ] )基于改进的量子遗传算法QGA的理论，给出新的动态调整量子旋转角方案，在货物配装的全局搜索货物、寻优货物等选择货物的环节里，加快了收敛速度，缩短了迭代次数。同时，再加上采用整车合并思想，该方法能够有效地减少配装车辆的数量，减少货物配装环节的成本。张卉( [ 7 ] )阐述了单车二维货物配装问题、单车三维货物配装问题和多车三维货物配装问题，并建立了相应的遗传算法。本文，基于客户优先级等因素，建立了一个单车二维货物配装的整数线性规划模型，并设计了相应算法，给出了货物配装的优化策略。数值算例验证了算法的有效性。
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user: 2. 模型建立与算法设计 2.1. 单车二维配装模型建立 按照客户优先级和最优路径，不仿假设配送中心 个客户的货物为 需要配送，用 表示货物集合，每个客户有 种货物(客户的货物少于 时，那么用0补齐)， 表示第 个客户的 种不同货物， 表示第 个客户的 不同货物的集合； 表示装第 个客户的第 种货物 ， 表示不装第 个客户的第 种货物 ； 分别表示第 个客户的第 种货物 的质量、体积、容重比(货物的体积和质量的比 )。有一订单(已知客户需求的货物、运达时间、配送路径)，现用一辆货车配送这些货物。这里，基于客户优先级和最优路径两个因素探讨货物的配装优先级及确定方法，制定一套合理的配装方案，使货车的车厢利用率更加合理。 基于以上问题，建立如下的整数线性规划模型： (1) 其中 表示货车车厢规定的载重量， 表示货车车厢规定的额定容积；(1)式中的第一式和第二式分别表示装载货物的总质量、总体积不能超过货车车厢的载重量、容积；(1)式中的第三式和第四式分别表示第 个客户的装载货物的总质量、总体积不超过车厢的剩余载重量、剩余容积。其中， 为装第 个客户货物之前已装载货物的总质量， 为装第 个客户货物之前已装载货物的总体积。 2.2. 算法设计 基于以上建立的模型，给出下面的求解算法。 Step 1. 计算货车车厢的容积与载重量之比，记为货车的容重比 。根据不同客户的货物配送的时间需求，按递增顺序排列，作成 。 Step 2. 规定 的值，如果规定 ，若 ，则 ，其中 。即是说配装这些货物，把这些 放在一起，作成集合 。此时如果有 ， ，则记 ，表示剩余货物的集合。 Step 3. 计算出剩余货物集合 中每一个货物的容重比 ， 表示第 个客户的第 种货物的容重比。并对这些剩余货物的容重比同样按递增顺序排列，作成集合 。 Step 4. 计算出已配装货物的总容重比，计算 和 ，并求出 。 如果 ，则从剩余货物中找出一个货物 ，满足条件：  ； ； 如果 ，则从剩余货物中找出一个货物 ，满足条件：  ； ； Step 5. 若上面的 不存在，则去掉条件，寻找满足、的 放入集合 中，即是说该 满足 。然后继续进入Step 4，重复Step 4~Step 5，直到 或 或条件不再满足。如果仍然寻不到这样的 ，则该货车的配装环节完毕，进入Step 6。 Step 6. 输出已经进行配装的货物集合 ，结束。
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user: 3. 举例说明 某配送中心负责给周边市场的商贩配送货物，现有一批货物需要给3家客户配送，9种货物已经采用集装箱包装，已知客户的需求时间排列顺序见表1。目前该配送中心有一辆载重量13 t，容积18 m 3 的货车，请制定合理的配送方案，在完成客户满意度的前提下，使得单车配送的利用率最大。 根据以上所提算法求解如下。 Step 1. 首先求出货车车厢的容重比 ； Step 2. 规定 。此时A和B客户的货物必须进行配装，则有 ， 令集合 为已装货物集合，集合 为剩余货物的集合； Step 3. 求出每个剩余货物的容重比： ，所以 ； Step 4. 求出已装货物的总容重比 ，可以得到 ，所以从剩余货物中找出一个货物 ，满足条件： ； ； 可以得到 满足条件； Table 1 Demand time order， quality and volume of goods for custome M i 客户 货物 质量/t 体积/m 3 2 A g 11 3 4 2 A g 12 1 2 2 A g 13 1 1 3 B g 21 2 3 3 B g 22 1 3 6 C g 31 3 1 6 C g 32 1 1 6 C g 33 1 3 6 C g 34 4 4 表1. 客户需求时间排列顺序、货物质量和体积 表中的A， B， C表示客户；M i (i = 1， 2， 3)表示客户A， B， C的需求时间；g 11 ， g 12 ， g 13 表示客户A的货物；g 21 ， g 22 表示客户B的货物；g 31 ， g 32 ， g 33 ， g 34 表示客户C的货物 Step 5. 重复上一个步骤，由上述算法可以计算出参与配装的货物有 ， ， ， ， ， ， 。
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user: 摘 要 当今时代，生物能源已经成为一种绿色经济的能源。为了更有效地利用纤维素，在这项研究中，自江苏盐城工业园区采集的土样中分离到一株既可耐受甲醇，又可产生高活性纤维素酶的细菌。通过16S rDNA序列分析，构建系统发育树，该菌株与巨大芽孢杆菌(B. megaterium)相似性为99.7%。甲醇耐受实验表明，菌株具有较高的甲醇耐受，甚至能在11.85%甲醇的M9培养基中生长。 关键词 :巨大芽孢杆菌，纤维素酶，16S rDNA
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user: 1. 引言 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)为好氧型革兰氏阳性菌，属芽孢杆菌属(Bacillus)，是原核生物中一类能够形成芽孢，具有复杂细胞行为的微生物 [ 1 ] 。已有研究发现，以巨大芽孢杆菌作为分泌性的基因工程宿主菌，具有遗传稳定、表达率高、发酵工艺成熟、产物可分泌等优点，因此常在工业上用于葡萄糖异构酶的生产；同时因其可分解有机磷，也被用于农业上制造磷细菌肥料 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] 。纤维素(Cellulose)作为自然界中分布最广、含量最多的一种大分子多糖 [ 5 ] [ 6 ] ，由葡萄糖单体聚合而成，是植物细胞壁的主要组成成分，占了植物总生物量的50%以上 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] 。纤维素来源广泛，是宝贵的天然可再生资源，然而在生产中却难以有效利用，主要是由于纤维素自身的晶体结构致密，纤维素酶难以接近内部分子，导致了分解效率的低下 [ 10 ] 。微生物工程技术的发展为纤维素的合理利用提供了新的解决思路，多种纤维素酶工程菌也陆续被研究和构建 [ 11 ] [ 12 ] 。本文研究了新分离的一株产纤维素酶细菌在纤维素分解和甲醇耐受等方面的性质。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 耐受甲醇产纤维素酶细菌的筛选和形态观察 2.1.1. 土样 江苏盐城工业园区取样。 2.1.2. 培养基 筛选培养基：Yeast Extract (FMB)：1 g；CMC(BC)：10 g；KH 2 PO 4 (AR)：2 g；NaCl(AR)：5 g；NH 4 NO 3 (AR)：5 g；MgSO 4 ∙7H 2 O(AR)：0.5 g；蒸馏水定容至1000 mL。M9培养基：K 2 HPO 4 (AR)：12.8 g；KH 2 PO 4 (AR)：3.0 g；NaCl(AR)：0.5 g；NH 4 NO 3 (AR)：0.5 g；蒸馏水定容至1000 mL。所用试剂购自国药集团化学试剂有限公司。 2.1.3. 菌株分离步骤 取少量土样，用适量蒸馏水进行稀释，取200 µl稀释后菌液，加入到200 mL筛选培养基中，于37℃、250 rpm条件下，摇床培养12 h。取少量菌液，分别在筛选培养基和含6%甲醇的M9培养基上平板涂布，挑取生长良好的单菌落，再分别在另一种培养基(筛选培养基或含6%甲醇的M9培养基)上平板涂布。经过多次对应涂布划线，获得纯菌。 2.1.4. 形态学观察 将分离得到的菌株在固体培养基上培养，观察菌落形态。革兰氏染色后在光学显微镜下观察菌体形态。 2.2. 分子生物学鉴定 以分离菌株基因组DNA为模板，用细菌16S rDNA的通用引物[正向引物序列为：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'，反向引物序列为：5'-AAGGAGGTGATCCAGCC-3'，上海生工合成]，通过PCR 扩增分离菌株的16S rDNA。PCR扩增用Taq 酶(TaKaRa)，94℃变性5 min 后进入循环：94℃ 30 s，53℃ 1 min，72℃ 1.50 min，共30个循环；最后72℃延伸10 min。16S rDNA序列的测定以及BLAST序列对比参照文献。 2.3. 生长曲线的测定 取50 mL液体培养基于250 mL的锥形瓶中，接种5 mL生长至最大值状态的分离菌的菌液，在37℃、250 rpm恒温摇床中培养，每隔一定时间测定菌体的OD 600 值。 2.4. 耐受甲醇的初步验证 以大肠杆菌(E. coli)作为阴性对照，将分离菌和E. coli同时在含2%甲醇的M9培养基上培养。 2.5. 不同PH值条件下产纤维素酶活力的测定 配制4瓶50 mL筛选培养基，分别调节初始PH值为6.0、7.0、8.0、9.0。分别接种5 mL生长至最大值状态的分离菌菌液，在37℃、250 rpm恒温摇床中培养，12 h后，取5 mL菌液离心后进行DNS法酶活测定。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. 耐受甲醇产纤维素酶细菌的分离和鉴定 采集得到的土样在含甲醇的M9培养基和含CMC的筛选培养基上的分别涂布培养，以及交叉点样，最终得到一株具有既可以产纤维素酶又可以在甲醇作为单一碳源的培养基上生长的菌株。在固体培养基上划线，恒温37℃培养12 h，进行分离纯化。 所测菌株.的16S rDNA核苷酸序列为1543 bp。将所测序列与GenBank数据库中相关菌种进行比较，构建以16S rDNA全序列为基础的系统发育树(图1)。结果表明：所测菌株与芽孢杆菌属具有较大的同源性，并且与巨大芽孢杆菌(B. megaterium)同源性最高，为99.7%。根据《伯杰氏细菌鉴定手册》，结合菌落、细胞形态可以鉴定菌株属于芽孢杆菌属。 3.2. 菌株B. megaterium sp.的革兰氏染色结果 在图2中，通过革兰氏染色发现该分离菌为革兰氏阳性菌；通过电子显微镜观察，发现该菌的形态为短杆菌。 3.3. 菌株B. megaterium sp.的生长曲线 由图3可知，B. megaterium sp.的延迟期很短，以很快的速度就进入对数期，并且只用了3 h时间就处于稳定期。 图1. 根据16S rDNA序列构建的系统发育树 图2. B. megaterium sp.的菌落形态(1000×) 图3. B. megaterium sp.生长曲线 3.4. 菌株在不同PH值条件下的酶活测定 图4和图5为B. megaterium sp.在不同PH值时的对CMC的酶活力(CMCA)和对滤纸的酶活力(FPA)。可以看出，当PH值为8时，B. megaterium sp.对CMC和滤纸的降解能力最强。 3.5. 耐受甲醇菌B. megaterium sp.在含甲醇的M9培养基上生长情况 由图6可知，将E. coli作为阴性对照，将分离菌和E. coli同时在含甲醇2%的M9培养基上培养，发现分离菌(2f3区域)长势良好，而E. coli不生长。 图4. B. megaterium sp.在不同PH值时的CMCA 图5. B. megaterium sp.在不同PH值时的FPA 图6. 平板法检测B. megaterium sp.对甲醇的耐受性
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user: 4. 结论 本研究筛选出一株具有较强甲醇耐受并能产生纤维素酶的细菌，通过16S rDNA序列测定和系统发育树分析，并结合菌落、细胞形态的观察，初步鉴定该菌为巨大芽孢杆菌，并命名为B. megaterium sp.。最高甲醇耐受为11.85%，CMCA为3.1865 U/mg，FPA为3.9671 U/mg。 新分离的巨大芽孢杆菌具有的甲醇耐受性，可被用作细菌种类筛选的选择性条件，即通过加入一定浓度甲醇的选择性培养基，进行杂菌的去除和目标菌种的富集，为后期产纤维素基因工程菌的构建提供了天然性的有利条件。 能源问题是21世纪的头等问题，纤维素作为用之不竭的天然可再生资源，有着广阔的利用前景，研究表明新分离的甲醇耐受的巨大芽孢杆菌具有产生纤维素酶的能力，有成为优质工程菌的潜力。该细菌具体的降解机制还有待于进一步研究。
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user: 摘 要 为保证河南油田VII1-3层系高温油藏聚合物驱先导试验的成功，项目在室内系统评价了聚合物性能及聚合物与油藏配伍性能。配制水质、溶液中溶解氧含量、剪切、高温老化等都影响高温聚合物溶液粘度。特别是溶液中溶解氧含量对聚合物粘度长期热稳定性影响显著。氧含量对水解度影响不大。溶解氧含量小于0.5 mg/L条件下，聚合物在95℃高温下老化90天后，结构具有一定的稳定性，拉伸流变稳定性和剪切流变稳定性，老化180 d后粘度保留率可达到80%以上。渗透率为油藏渗透率0.587 μm 2 ，聚合物浓度在1000 - 2000 mg/L范围内，具有较好的注入性。进入矿场应用后，聚合物现场注入性良好，已取得明显的增油降水效果。 关键词 :耐温聚合物，性能评价，溶解氧，长期热稳定性，注入性能，矿场应用
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user: 1. 引言 虽然聚合物驱技术已经成功应用于河南油田I类、II类油藏，但Ⅲ类油藏由于温度高，普通聚合物高温下增粘性、稳定性急剧变差，目前适用的聚合物工业产品少，因此还没有实行聚合物驱技术。为保证河南油田“十二五”期间三次采油持续发展，并为其它同类油田提供经验借鉴和技术支撑，河南油田决定在双河VII1-3层系开展高温油藏聚合物驱技术先导试验，双河油田VII1-3层系含油面积9.15 km 2 ，地质储量862.6 × 10 4 t，油藏温度为93.7℃，平均空气渗透率0.587 μm 2 ，地下原油粘度2.3 mPa∙s，地层水矿化度13，087 mg/L [ 1 ] 。为保证先导试验的成功实施，室内系统评价了耐高温聚合物与油藏的配伍性能。
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user: 2. 实验材料和仪器 2.1. 实验仪器及设备 DV-III型Brooker粘度计，美国Brooker公司；高温烘箱，日本三洋公司制造；微观驱替物理模拟装置，江苏省海安石油科研仪器有限公司；鼓风干燥箱，北京恒泰丰科试验设备有限公司；AJ-llla原子力显微镜(AFM)，上海爱建纳米科技发展有限公司。美国哈克流变仪；美国HAAKE CaBER1； FIIR-1500红外光谱仪。 2.2. 实验材料 人造岩心：柱状岩心(φ2.5 × 8 cm)，方岩心(2.5 × 2.5 × 30 cm)；聚合物：耐温聚合物，基本性能指标如表1所示；实验用油：双河油田Ⅶ1-3层单元脱水原油；实验用岩心：双河油田VII1-3层单元天然砂；实验用水：双河清水、双河江河陈化污水，实验用水离子组成如表2所示。 Table 1 The basic parameters of the polyme 项目 测定结果 技术指标 固含量/% 91.31 ≥89 残余丙烯酰胺含量/% 0.02 ≤0.1 不溶物/% 0.06 ≤0.20 特性粘数/(mL/g) 2670.2 分子量/10 4 2265.0 溶解速度/min ≤120 ≤120 过滤因子 1.08 ≤1.5 水解度/% 20.58 复合粘弹模量/(mN/m) 50.67 ≥40 弹性模量/(mN/m) 49.92 ≥38 表1. 聚合物基本参数性能评价 Table 2 The ion composition of experimental wate 离 子 Na + 、K + Ca 2+ Mg 2+ Cl − TDS 江河污水mg/L 2485 41 7 3114 1798 1285 8730 双河污水mg/L 1601 14 7.5 1172 391.5 1819 5002 表2. 实验用水的离子组成 2.3. 名词解释 2.3.1. 粘均相对分子量 (1-1) 式中： M-分子量； [η]-特性粘数，mL/g； 802-经验常数。 2.3.2. 聚丙烯酰胺的水解度 聚丙烯酰胺的水解度取决于盐酸的浓度，称取的配置好聚合物溶液的质量和聚合物的固含量，滴定终点时消耗盐酸的体积，： (1-2) 式中： HD—水解度，%； C—盐酸标准溶液的浓度，mol/L； V—试样溶液消耗标准盐酸溶液的体积，ml； m—试样的质量，g； s—试样的固含量，%； 23—丙烯酸钠与丙烯酰胺链节质量的差值； 71—与1.00 ml盐酸标准溶液(C HCI = 1.000 mol/L)相当的丙烯酰胺链节的质量。 2.3.3. 粘度保留率 (1-3) 式中：N-粘度保留率，%； η i -热老化前的粘度，mPa∙s； η f -热老化后的粘度，mPa∙s。
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user: 4. 现场应用 根据油藏精细描述和剩余油饱和度分布的研究结果，方案进行了聚合物驱合理井网井距的研究，把不规则的水驱井网调整为适合聚合物驱的合理井网，最大限度改变液流方向，提高油井的多向受效率和聚驱井网的储量控制程度。试验区井网调整后总井数为26口，其中注入井10口，聚驱对应采油井16口，油水井数比为1.6，平均注采井距为270 m，试验区井位图如图11所示。根据数模优化结果，注入分为两级段塞式，前置段塞和主段塞，前置段塞：2500 mg/L × 0.08 PV；主体段塞：1600 mg/L × 0.52 PV，保持年注入速度为0.11 PV/a，注采比为1.05，Ⅶ 1-3 层系聚合物驱注入时间为1990天，总段塞尺寸为0.6 PV，聚合物干粉商品用量为4460 t。双河油田Ⅶ 1-3 层系高温聚合物驱先导试验区控制储量为220.0 × 10 4 t。预计聚合物驱含水98%时，井网调整后聚驱比原井网水驱增产原油20.50 × 10 4 t，提高采收率9.32个百分点，增油高峰期含水降低4.3个百分点。 2014年3月在94℃高温油藏Ⅶ1-3层系矿场实施，现场采用无氧配制聚合物母液，氧含量控制在0.3 mg/L以下。现场注入0.16 PV，注入压力上升3.8 MPa，动液面由190 m下降到670 m，现场10口井见效，见效率62.5%，日产油由22.7 t/d上升到40.3 t/d，含水由97.6%下降到 95.7%，聚合物驱动态特征明显，已取得明显的增油降水效果。
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user: 5. 结论与认识 1、浓度、温度、剪切、高温老化都对耐温聚合物溶液粘度有着明显的影响作用，特别是溶液中溶解氧含量对耐温聚合物溶液高温老化后的粘度影响显著。 2、通过对耐温聚合物溶液进行长期稳定性评价，研究表明聚合物溶液在含氧量小于0.5 mg/L条件下，在95℃下老化180 d后粘度保留率都能达到80%以上。 3、耐温聚合物老化前后原子力显微镜表征结果表明：耐温聚合物在95℃下经过0 d，30 d，60 d，90d老化后，其聚集程度不同，老化前有很大程度的聚集，呈松散树枝状分布；老化30 d后聚集程度下降，树枝状长度变短；老化60 d后聚集状态发生较大变化，呈“非”字形梳状分布；老化90d后聚合物形成直径为10 μm左右的短粗圆片状聚集，不易展开。 图11. 高温聚合物驱试验区井网示意图 4、目前现场注入0.16 PV，已取得了一些效果，日产油由22.7 t/d上升到40.3 t/d，含水由97.6%下降到95.7%。
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user: 摘 要 初步探讨雌二醇、胰岛素诱导子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞中血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的产生及临床意义。采用荧光定量PCR技术分别检测雌二醇、胰岛素、雌二醇 + 胰岛素作用后Ishikawa细胞中VEGF、bFGF基因表达的情况。结果显示相同浓度雌二醇(1 × 10 −8 mol/L)，胰岛素(1 × 10 −8 mol/L)，雌二醇 + 胰岛素(1 × 10 −8 mol/L雌二醇 + 1 × 10 −8 mol/L胰岛素)对Ishikawa细胞中VEGF、bFGF均有不同程度促进表达作用；VEGF、bFGF基因在雌二醇+胰岛素组中表达与雌二醇、胰岛素组比较无明显增高，差异没有统计学意义(p > 0.05)。因此，雌激素、胰岛素诱导子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞产生VEGF、bFGF，促进了子宫内膜癌发生、发展。 关键词 :子宫内膜癌，雌二醇，胰岛素，Ishikawa细胞系，血管内皮生长因子，碱性成纤维细胞生长因子
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user: 1. 引言 子宫内膜癌(endometrialcarcinoma EC)是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，其发病机制至今不清。目前普遍认为子宫内膜癌的发生与子宫内膜长期受雌激素作用而缺乏孕激素拮抗有关 [ 1 ] 。肥胖、高血压、糖尿病、多囊卵巢综合征作为子宫内膜癌发生的相关危险因素越来越受到重视，这些因素共同病理生理特征是胰岛素抵抗和继发的高胰岛素血症 [ 2 ] 。有研究发现血管内皮生长因子(VEGF)，能够明显促进新生血管形成，在子宫内膜癌发生发展中发挥重要作用 [ 3 ] 。bFG与调控体内血管新生过程，其主要生物学效应是促进细胞增殖，增加血管的血液供应，从而提供大量营养物质促使肿瘤细胞快速增长 [ 4 ] 。bFGF与子宫内膜癌的发生有密切的关系 [ 5 ] 。我们旨在通过对子宫内膜癌细胞ER表达阳性Ishikawa细胞株中VEGF和bFGF的表达与雌激素、胰岛素的关系进行初步探讨，分析子宫内膜癌发生发展可能的分子机制。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料来源 子宫内膜癌细胞系Ishikawa，来自于子宫内膜高分化腺癌，其雌激素受体(ER)表达阳性，购自于南京凯基生物技术公司。β雌二醇及胰岛素(牛来源)购自北京博奥拓达科技有限公司；胎牛血清、McCoy′s5A培养液、RPMI 1640培养液、胰蛋白酶消化液均购自于美国gibco公司；酶标仪E1808(BiTek)、流式细胞仪accuri C6(BD)、二氧化碳培养箱HF90(Heal force)、荧光定量PCR仪(Roche 480)；荧光定量引物由Primer 3在线设计：VEGFA-F AAGAGCGACCCTCACATCAA，VEGFA-R AAAGAAACACTCATCCGTAACAC，全长147 bp；bFGF-F GCTGTACTGCAAAAACGGGG，bFGF-R TAGCTTGATGTGAGGGTCGC全长94 bp，引物由上海生工合成。 2.2. 方法 2.2.1. Ishikawa增殖实验 1) 96孔板铺板：将稳定传代的Ishikawa细胞消化离心，计数，每孔加入细胞100 ul/孔(约1 × 10 4 )。其中96孔边缘孔空出来，设置空白对照组1个(不加细胞不给药)，阴性对照组1个(有细胞不给药)，实验组各三个孔。放置二氧化碳培养箱培养24小时。 2) 细胞培养：吸去上清，3个实验孔加入200 ul含有β雌二醇的培养液，3个实验孔加入200 ul含有胰岛素的培养液，3个实验孔加入200 ul含有β雌二醇和胰岛素的培养液，阴性对照孔不加。其中配制的雌二醇浓度最终为10 −8 mmol/l，胰岛素最终浓度10 −8 mmol/l。 3) 四甲基偶氮唑蓝(MTT)：在24 h、48 h、72 h、96 h分别终止反应，吸去上清，每孔加入1 × MTT20 ul，80 ul的无血清培养液。37℃培养4小时。4小时后吸出上清每孔加入150 ul DMSO摇动混匀10 min，酶标仪上490 nm波长下测定各吸光度值。 4) 荧光定量PCR技术分别检测雌二醇、胰岛素、雌二醇 + 胰岛素作用后Ishikawa细胞中VEGF、bFGF基因的表达：TRIzol法提取各组细胞总RNA，利用RT试剂盒逆转录合成cDNA。VEGF基因引物序列，上游；5′-AAGAGCGACCCTCACATCAA-3′，下游：5′-AAAGAAACACTCATCCGTAACAC-3′，扩增产物片段147bp；bFGF基因引物序列，上游：5′-GCTGTACTGCAAAAACGGGG-3′，下游：5′-TAGCTTGATGTGAGGGTCGC-3′，扩增产物片段长度94 bp，PCR反应体系共20 ul，包括DNA荧光燃料SYBR Green 10 ul，PCR Forward Primer (10 μM) 0.8 μl，PCR Reverse Primer (10 μM) 0.8 μl，DNA模板(<100 ng) 2 μl，加水至20 μl。PCR反应条件：预变性95℃ 30 sec 1 cycle PCR 95℃ 5 sec，60℃ 30 sec 45 cycles 融解95℃ 5 sec，60℃ 1 sec， 95℃ 1 cycle 降温 50℃ 30 sec 1 cycle。采用2 - △△ CT 法计算mRNA的表达水平。 2.2.2. 统计学方法 采用SPSS17.0软件进行统计学处理。计量资料以均数 ± 标准差( ± S)表示，多样本间的两两比较，采用单因素方差分析。
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user: 3. 结果 3.1. VEGF、bFGF在雌二醇，胰岛素，雌二醇 + 胰岛素中的表达情况 荧光定量PCR技术检测显示：雌二醇组细胞中VEGF基因表达自24 h至72 h远高于对照组，24小时表达差异极显著(p < 0.0001)，48 h和72 h表达差异极显著(p < 0.01)，96 h与对照组相比较，该基因表达呈下降趋势；胰岛素组细胞中VEGF基因表达呈持续升高趋势，与对照组比较，24 h、48 h升高趋势并不明显，但从72 h开始，与对照组比较，72 h、96 h表达升高趋势显著(p < 0.05)，见表1；雌二醇组细胞中bFGF基因在24 h、48 h、72 h和96 h表达均呈递增趋势，24 h、48 h表达略低于对照组，72 h、96 h高于对照组，其中72 h该基因表达与对照组比较差异显著(p < 0.05)，96 h该基因表达与对照组比较差异极显著(p < 0.01)；胰岛素组细胞中24 h bFGF表达相对于对照组，呈短暂抑制后升高，48 h与对照组比较差异显著(p < 0.05)，然后72 h、96 h呈下降趋势，但均高于各时间点对照组的表达水平；雌二醇 +胰岛素组细胞中bFGF在48 h、72 h、96 h表达水平均高于对照组，且72 h表达水平最高，差异有统计学意义(p < 0.05)。本研究显示结果显示：雌二醇，胰岛素，雌二醇+胰岛素均不同程度的诱导Ishikawa细胞中bFGF mRNA的表达，且在72小时表达最显著，见表2。 3.2. VEGF、bFGF基因在雌二醇 + 胰岛素组中表达与雌二醇、胰岛素组的比较 该研究结果显示：雌二醇 + 胰岛素组细胞中VEGF的表达与相同时间点雌二醇、胰岛素组中VEGF的表达比较无明显增高，差异没有统计学意义(p > 0.05)；雌激素+胰岛素组细胞中bFGF的表达与相同时间点雌二醇、胰岛素组中bFGF的表达比较无明显增高，差异没有统计学意义(p > 0.05)，见图1，图2。 Table 1 The comparison of VEGFmRNA expression level in every group Ishikawa cells (± S 组别 样本数 24 48 72 96 E2组 3 8.51 ± 0.44 ** 2.50 ± 0.05 ** 2.38 ± 0.48 ** 0.68 ± 0.21 Insulin组 3 1.66 ± 0.38 * 2.64 ± 0.26 ** 0.90 ± 0.33 0.55 ± 0.29 E2 + Insulin组 3 3.23 ± 0.50 ** 1.21 ± 0.28 * 1.11 ± 0.32 * 1.11 ± 0.06 Control组 3 1.00 ± 0.48 1.00 ± 0.18 1.00 ± 0.14 1.00 ± 0.14 表1. 各组Ishikawa细胞中VEGFmRNA表达水平的比较( ± S) 注： * 与对照组比较p < 0.05。 Table 2 The comparison of bFGFmRNA expression level in every group Ishikawa cells (± S 组别 样本数 24 48 72 96 E2组 3 0.61 ± 0.10 0.90 ± 0.19 1.82 ± 0.30 ** 2.30 ± 0.36 ** Insulin组 3 0.49 ± 0.04 1.60 ± 0.10 ** 1.27 ± 0.07 ** 1.16 ± 0.04 * E2 + Insulin组 3 0.52 ± 0.05 1.30 ± 0.03 * 1.75 ± 0.25 ** 1.06 ± 0.23 * Control组 3 1.00 ± 0.20 1.00 ± 0.20 1.00 ± 0.22 1.00 ± 0.23 表2. 各组Ishikawa细胞中bFGFmRNA表达水平的比较( ± S) 注： * 与对照组比较p < 0.05。 图1. 不同处理组VEGF基因表达情况(mean ± SD， n = 3) 图2. 不同处理组bFGF基因表达情况(mean ± SD， n = 3)
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user: 4. 讨论 子宫内膜癌是一个多基因参与的渐进性发展疾病，主要是由于抑癌基因与癌基因之间失去平衡，抑癌基因缺失、突变失活导致细胞增殖失去控制并且多个癌基因的编码蛋白过度表达而出现异常激活，从而导致细胞出现恶性转变，具体机制尚不清楚 [ 4 ] [ 6 ] 。血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是子宫内膜癌重要的细胞因子，参与调控体内血管新生过程，其主要生物学效应是促进细胞增殖、刺激血管内皮细胞迁移和促进血管生成，增加血管的血液供应，从而提供大量营养物质促使肿瘤细胞快速增长 [ 5 ] 。 目前，肥胖、糖尿病、高血压是公认的子宫内膜癌的三大高危因素，肥胖是首要危险因素。流行病学研究表明子宫内膜癌的发生与肥胖有关，子宫内膜癌患者中40%~50%为过度肥胖。体重指数(BMI)是衡量肥胖的指标，成人超重和肥胖的体重指数WHO标准为：BMI正常值为18.5~24.9，25~27.9为超重，>30为肥胖。肥胖，糖尿病，高血压的共同的病理生理基础为胰岛素抵抗及高胰岛素血症。国际多项研究证实子宫内膜癌的发病风险直接与C肽和胰岛素水平呈正相关。胰岛素和胰岛素抵抗在肿瘤的形成和恶性转化阶段起重要作用。胰岛素可促进性激素的合成，同时可降低性激素结合球蛋白的水平，从而使雌激素和其他促肿瘤因子的水平增高，促进肿瘤生长。同时，胰岛素可激活胰岛素受体的酪氨酸激酶生长受体通路，进一步引起下游的信号通路的激活，促进肿瘤细胞的增殖。 肿瘤细胞增殖及血管形成是在多种生长因子调控下完成的，肿瘤的血管生成主要由肿瘤细胞产生的某些血管生长因子诱导，VEGF和bFGF是目前人们关注较多的促血管生长因子。VEGF又名血管通透因子，是一种内皮细胞有丝分裂原，同时能诱导血管通透性增加，导致血浆蛋白外渗到血管外间隙，形成富于纤维的基质，诱导内皮细胞等的增生，最后形成高度血管化的间质。雌激素可通过非基因转录效应诱导子宫内膜癌细胞产生VEGF、bFGF，促进子宫内膜癌发生发展，而胰岛素与VEGF、bFGF表达关系相关研究较少。本研究结果显示：雌二醇，胰岛素，雌二醇+胰岛素对Ishikawa细胞中VEGF、bFGF均有不同程度促进表达作用。雌二醇组细胞中VEGF在24小时表达差异极显著(p < 0.0001)，48 h和72 h表达差异极显著(p < 0.01)；胰岛素组细胞中VEGF基因表达呈持续升高趋势，与对照组比较72 h、96 h表达升高趋势显著(p < 0.05)；雌二醇组细胞中bFGF基因在24 h、48 h、72 h和96 h表达均呈递增趋势，其中72 h该基因表达与对照组比较差异显著(p < 0.05)，96 h该基因表达与对照组比较差异极显著(p < 0.01)；胰岛素组细胞中24 h bFGF表达相对于对照组，呈短暂抑制后升高，48 h与对照组比较差异显著(p < 0.05)，然后72 h、96 h呈下降趋势，但均高于各时间点对照组的表达水平；雌二醇 + 胰岛素组细胞中bFGF在48 h、72 h、96 h表达水平均高于对照组，且72 h表达水平最高，差异有统计学意义(p < 0.05)。 雌激素、胰岛素诱发子宫内膜癌细胞产生的VEGF、bFGF，通过调控体内血管新生，刺激血管内皮细胞迁移和促进血管生成，增加血管的血液供应，从而提供大量营养物质促使肿瘤细胞快速增长，促进子宫内膜癌发生、发展。肥胖、高血压、糖尿病、多囊卵巢综合征，作为子宫内膜癌的高危因素，其共同病理生理特征是胰岛素抵抗和继发的高胰岛素血症，由此可以推测这些高危因素促进子宫内膜癌的发生发展与胰岛素促进VEGF、bFGF产生有关，VEGF、bFGF可能为子宫内膜癌高危因素向内膜癌发展过程中的一个重要的分子机制。 综上所述，本研究探讨了子宫内膜癌发生发展可能的分子机制，雌激素、胰岛素通过诱导子宫内膜癌ER表达阳性细胞株VEGF、bFGF基因表达，促进了子内膜癌的发生、发展，本研究对临床该病的防治提供了相关的基础支持。
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user: 摘 要 对龙井茶艺的未尽完美之处进行了分析，提出通过茶水分离、适度润洗、小杯品饮等方式，使龙井茶艺更趋合理的建议。 关键词 :龙井，茶艺，分离，润洗，茶舞
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user: 1. 引言 龙井茶，作为茶中名品，因其色翠、香郁、味甘、形美的特质，深受茶人的喜爱；位于龙井茶核心产区的西湖龙井，凭借其集名山、名寺、名湖、名泉于一体的优势，名贯古今、饮誉中外；位于西湖龙井一级产区的狮峰龙井，作为茶中上品，由于乾隆皇帝与十八棵御茶树的传说，使人在品赏龙井茶色、香、味、形之美的同时，亦可感受到其美妙的茶韵和厚重的文化 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 。春暖花开之季，清明谷雨之时，置身龙井村中，游览茶园、嗅闻茶香、观赏茶舞、品啜茶汤，实乃人生之乐事、美事、雅事矣。 客来敬茶，是中华民族的优秀传统。唐代刘贞亮曾赞美茶有十德，认为饮茶既可以健身，也能“以茶表敬意” [ 6 ] ，表明我国客来敬茶的传统由来已久。早在三千多年前的周朝，茶就被奉为礼品与贡品。两晋、南北朝时期，客来敬茶即已成为人际交往的社交礼仪 [ 7 ] [ 8 ] 。 以佳茗待贵客，乃中国式待客的风雅之事。古有唐代陆士修“泛花邀坐客，代饮引清言”，宋代杜耒“寒夜客来茶当酒，竹炉汤沸火初红”，清代高鹗“晴窗分乳后，寒夜客来时”的佳句 [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] ；近有李克强总理以徽茶为礼，赠予德国总理默克尔，并一同观看太平猴魁茶艺表演的佳话 [ 12 ] 。2005年4月28日，原国民党主席连战率访问团首次到北京著名的“老舍茶馆”喝茶听戏之际，连战先生所题“振兴茶文化，祥和两岸情”之墨宝 [ 13 ] ，则生动地诠释了以茶为媒、两岸品茗、一味同心的理念。 在有关连战到北京老舍茶馆喝茶看戏并题词的报道中，几杯用玻璃杯冲泡的绿茶颇为醒目。据悉，杯中所泡之茶为特意从浙江空运进京的大佛龙井。时值春日，在古色古香、京味十足的著名茶馆，想必连战先生定能嗅闻品赏到由杯中逸散出的茶香春色。不过，细观连战先生面前的桌台，难免令人有些许缺憾的感觉。 近日，在以“我为马英九先生奉杯茶”为题开展的调研中，仍有人将宜奉茶品设定为龙井茶。其理由，除因西湖龙井属茶中翘楚之外，还因该茶产自习近平主席曾作为省委书记主政数载的浙江，不无道理。至于奉茶方式，倘用当年为连战奉茶之法，似有不妥。故此，有必要对以龙井茶为代表的优质绿茶茶艺进行思索和探析。
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user: 2. 龙井茶艺——茶水分离又何妨 以透明的玻璃杯为器，利用下投法/中投法/上投法向杯中投入茶叶，采用凤凰三点头的手法冲泡龙井、碧螺春等优质绿茶，是茶艺师培训中普遍传授的方法 [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] 。该法由于采用晶莹剔透的玻璃杯盛放茶叶和茶汤，使人既可真实地观赏汤色，亦可直观地欣赏茶芽在茶汤中渐次舒展、上浮下沉的“茶舞”，达到视觉、听觉、嗅觉、味觉的多重享受。但是，由于玻璃杯既是泡茶用器，也是品茶用具，茶叶和茶汤始终处于同一空间。随着泡茶时间的推移，茶叶中可溶性物质的浸出，茶汤浓度不断增加，茶汤滋味势必也会不断变化。实验结果表明，利用80℃温水，按照1:50的茶水比冲泡4 min，茶汤中的茶多酚浓度可达115 mg/100mL；冲泡时间延长到10 min，其浓度可增加42%，达到163 mg/100mL。与此同时，咖啡碱的浓度也会从26 mg/100mL提高19%，达到31 mg/100mL [ 18 ] 。由于茶多酚和咖啡碱分别是茶汤涩味、苦味的主导物质，茶汤滋味则会出现由鲜爽甘醇到变涩变苦的问题，不得不说乃美中之不足。 其实，解决这一问题并无甚难处——将茶叶与茶汤在适当时候予以分离，即可轻易实现。
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user: 3. 龙井茶艺——润洗既雅又健康 观赏乌龙茶艺，在置茶入器之后、开水冲泡之前，往往会有一道温润泡的程序。该程序通过将适当温度的水注入盛有茶叶的泡茶器后，短时间内将水倒出。通过此程序，茶叶吸收水分、适度舒展，一方面有利于接下来冲泡茶汤时香气与滋味的发挥；另一方面也兼具有清洗茶叶表面浮尘、提高茶汤清洁透明程度的作用，因此也被称作醒茶、润茶或洗茶 [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] 。 然而在西湖龙井等名优绿茶的茶艺展示中，很难看到润洗茶叶的程序。对此，有观点认为，这类茶由于采自嫩芽，一旦遇到沸水，茶叶中的营养物质就会迅速溶解，致使这些有效成分大量损失，实在可惜，因此，此类茶叶不该润洗 [ 22 ] 。 持此观点者并非没有道理。因为研究结果表明，利用100℃甚或80℃的温水进行5秒钟的淋洗，茶叶中的茶多酚、咖啡碱、氨基酸等呈味物质的浸出率即可达到10%以上(100℃/80℃分别为茶多酚12.49%/10.64%、咖啡碱24.56%/20.19%、氨基酸15.09%/13.15%) [ 18 ] 。如若倒掉，的确可惜。 不过，对此观点笔者一则不置可否；二则想提示一下，何不换个思路，采用低温净水，而非高温沸水，对茶叶进行润洗？这样既不致于使茶叶中的有效物质产生明显的损失，又可达到润泽叶面、清除浮尘、浅嗅茶香、雅致怡人的效果。因为研究结果同样表明，利用25℃的常温水淋洗同样的时间，茶多酚与咖啡碱的浸出率不足100℃条件下的1/10 (茶多酚：0.72%，咖啡碱：2.19%)，虽有少量溶出，但因兼具有对茶叶进行润洗和醒茶的作用，故此建议不妨采用。
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user: 4. 龙井茶艺——茶舞不妨赏又赏 龙井等细嫩的名优绿茶茶艺首选晶莹剔透的高档玻璃杯作为泡饮茶器的重要原因，在于便于欣赏“茶舞”——茶芽在汤水中舒展、浮沉、游动等动态变化 [ 21 ] 。这一方面可以增添观赏者视觉的美感，另一方面甚可触发品饮者品茶品味品人生的共鸣。然而，由于茶汤达到最佳品饮浓度的时间与茶叶尽展优美舞姿的时刻往往并不同步，故而使得观赏者难免会因视觉或味觉的享受并不充分，而产生这样或那样的缺憾。 研究结果显示，采用下投法冲泡龙井茶，茶叶会呈现出先上浮至水面，然后叶面渐次展开、上下游弋、沉至杯底的过程。这一过程所需要的时间与水温密切相关。其中，利用100℃的开水需要长达8分钟以上，利用80℃的温水则要延长至十余分钟。而经过这样长时间所冲泡出的茶汤，其滋味已因浓度过高而非最适。 解决这个问题，其实并不困难——在玻璃杯中的茶汤达到最适品饮浓度、茶舞尚未十分充分之时，即刻使茶汤与茶叶分离；随后，向盛放茶叶的玻璃杯中再次以高悬壶、斜冲水的方式，将适温净水紧贴杯壁斜冲而下。通过这种方式，一方面给了对第一泡茶汤滋味不利、对人体有益、在第一泡中尚未来得及浸出的茶叶中的可溶性物质得以继续释放的机会，另一方面也给在第一泡中未能尽展舞姿之美的茶叶随水流形成漩涡、翩翩起舞、再展美姿的机会。