DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 在人才竞争日益激烈的当下，高校新进教师人才的培养是快速提高高校教育实力水平的关键因素，而国内外高校入职培训的开展，是新进教师能够快速适应工作环境和角色转换重要阶段。1972年英国教育学家詹姆斯·波特(James Porter)发表了著名的《詹姆士报告》中提出“教师教育三段论”，其中入职教育将引入教师教育系统 [ 1 ]，随后我国的各大高校新进教师入职培训成为教师教育的重要环节。当前，发达国家已经有多样化的方式进行培训，常用的方法有名师讲座，讲授法、小型讨论会、互动小组教学、教学模拟课堂等方式 [ 2 ]。我国新进教师入职培训，是根据教育部制定的相关要求政策开展 [ 3 ]，但因培训方式方法单一的影响，培训方式主要是教师主导型授课，在线讲座形式、培训方式较为单一，通过反馈显示认为培训后“效果很好”只占少数新进教师 [ 4 ]。
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user: 2. 问题分析 (一) 培训内容和形式单一，培训重视不够 因新进教师入职培训存在培训形式单一是问题之一。新进教师培训时，高校培训方式一般是讲座讲授的方式，缺乏交流互动，国际国内的前沿教学理念缺乏是主要原因。随着多种模式下的新教学方式不断改进和发展，例如：微课、雨课堂、喜鹊、腾讯课堂以及钉钉网课等，已成为现代高校教师教学发展新趋势，但在新进教师培训中因集中培训时只涉及2~3种网课授课技能。而在人才竞争日益激烈的当下，类似网课这类新式教学理念与方法，高校给予新进教师培训的投入明显不足，主要体现在缺乏与各大高校之间最新教学技能的互动，教师对培训中新观念缺少实践演练，以及高校对新进教师培训重视度不够所致。这个问题在新进教师入职培训反馈意见中明显体现出来，课程中新方法和新理念的展现仅依靠理论讲授，而在实操方面涉及内容较少，相比部分高校新进教师培训时的扫码签到、签字签到、培训效果的反馈以及手机答题等方式仍然不能体现出培训是否达到要求。 (二) 新进教师入职培训时的管理不到位 新进教师在教学培训上的投入度不足，在培训过程中的管理不到位是影响高校新进教师培训成效的关键因素之一，而没有建立新进教师有效的培训教学管理机制，仅凭签到打卡管理新进教师培训，远远达不到培训目的。不仅不能挖掘新进教师的教学潜能，同时也无法调动新老教师之间的积极性，也不能提高新老教师在培训教学和学习的投入度。新进教师的整体专业化水平无法提升，新进教师角色转换、自我认知和定位不够准确。在心理上的归属感缺失与事业走向迷茫是高校高层次人才流失最重要因素 [ 5 ] [ 6 ]。这对于各高校如何迅速建成一支专业化、高素质和优秀的青年教师队伍有着重要影响。 (三) 培训课程设计安排不合理 主要体现在两个方面：1) 培训课程安排时间需调整。大多高校对新进教师入职培训工作不够重视，培训开展形式化较为严重，究其主要原因是培训课程计划时间安排不合理。大多以集中时间进行培训的方式，涵盖内容多，时间却短，部分培训内容难以使新进教师感到满意。如高校教师学习中涉及的“心理学”、“教育学”以及“教学技能”等主要课程，大多采用短时间集训授课方法，学时集中，课时量少，大多新进教师感觉学习压力大，获取和掌握培训内容不够全面，另一方面，授课教师也会因集中授课的压力，课堂内容涉及不够完善，课堂反馈效果较差。新进教师会对培训有一种误导观念，认为这种授课方式就是高校主要的授课方式，想培养出多样化教学方式的理念逐渐淡化。2) 各阶段考核不合理。培训形式伴有功利化，致使培训考核方式不合理。新进教师培训后的成果以试卷考试的形式，使得新进教师教师角色转变误导，新进教师认为试卷考试和获得证书是培训的唯一目的，也是对培训学习有着极大的危害性，同时暗存败坏学习风气的隐患，而未来会影响所教授的学生。3) 培训内容中师德师风涉及较浅显，不能将教师行业神圣职责刻进新进教师内心，新进教师在提高自身素质方面缺乏足够认知。师德师风是一个高校名誉与形象，而新进师德师风培训需求是建立良好师德师最重要的内容。
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user: 3. 解决策略 (一) 培训方式多样化 许多高校在新进教师投入精力和资金相对匮乏，而“教”与“学”的问题是新进教师在教学与课程中的一个根本问题。可以收集新进教师的培训建议，针对性培训。培训要循序渐进的展开，例如：通过新进教师们之间“破冰之旅”新颖的小游戏互动，较短时间内熟知彼此，增强凝聚力，提升自信，然后再进行培训内容。而在培训过程中，要结合高校自身特点，将优势资源充分利用在新进教师培训中，因此新进教师的培训应该集中各高校的优势资源开展，同时与各高校的优秀教师对新教学方法与新理念思维培养工作相结合。随着科学技术不断进步，以多媒体和实操教学并重的教学方式迅速充盈教学过程中，可根据教学特色新建适合混合式教学课堂，替代传统授课方式作为新进教师入职培训基地。利用新进教师的主动性、积极性、参与性和创新思维能力强等优势，使新进教师入职培训新理念和新方法提升的重要手段。 (二) 依据专业和岗位特点新进教师需要“因材施教” 高校新进教师因所涉及的专业和岗位不同，在培训时可根据专业和岗位采用“因材施教”小组培训，逐步引导的授课方式。由于新进教师的教育环境和本身的实践以及年龄特征，存在着个体差异，所以要准确施教，这不仅能够提高自身的教学质量，又能在实践中较为快速的获得适合自己的教学方式。在新进教师正式进入教学过程中也能够对不同学生进行“因材施教”。在教学岗，教学与科研并重岗以及科研岗的新进教师根据高校发展方向因材培训。 (三) 依据高校特色培训和考核方式优化 为避免“未训即岗”的不利影响，各高校培训一般为1~3年，大多为集中学习。可将培训按照高校特色进行，例如从校史校情、名师成长历程、师德师风素养、人事与岗位明细、科研管理与政策、本校办学特色、培养人才与当地企业特色产学研结合实际，产学研结合的科技成果等，激发新进教师们对于高校办学特色与个人发展相适应，使其丰富岗前培训的特色，同时与“心理学”和“教育学”内容相结合，使新进教师更加能够理解与实践的课程。还可以优化培训考核方式，例如：开展小组讨论，组内辩论，公开试讲，小型比赛以及对比课堂突发状况等活动。将平时表现体现在最终成绩的一部分，这种培训思路更为有效。 (四) 培训后要应用于教学实践 通过对新进教师岗前培训的内容，设计阶段性的教学实践，主要以新进教师对高校教师的理念、目的和内容做了详细的剖析，从培训内容、方式、课程、师资构成和培训效果考核方式方面综合其对新进教师培训的成效，并从新进教师培训后的反馈以及具体教学实践中体现出来。例如模拟课堂，由国家级优秀教师指导，优秀青年教师现场演练教学技巧，新进教师模仿或再现等，新教师之间的慕课演练入手，并在此过程中提出在教学技能方面可以深入改进的一些措施。这对高校新进教师快速转换角色，自身特点和未来发展具有重要的影响。 (五) 加强师德师风培养，提高自身素质 新时代高校新进教师培训内容中，师德师风教育是不可或缺的部分，当前师德师风问题也成为各高校一个不容忽视的问题，多数师德师风问题其根本原因是没有兼顾新进师德培训的需求。高校应该对师德修养和综合素质的提升着重投入，在新进教师管理制度和考核方面都要有所体现。师德师风教育不仅仅是新进教师岗前培训时的必修课，也是在职教师定期培训教育的重要课程。要着重强调“育人”的重要性，可以邀请优秀高校教师，名师交流会等学习先进典范，定期前来开展针对性的培训和模范，增强职业素养和认同感，严肃要求教师自身素质的培养，进而引发新进教师以及广大高校教师对师德师风的重视。
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user: 4. 结语 高等院校是全面服务区域经济和社会发展，强化教育教学实践，既是高校的职责使命，也是高校学术发展的源头活水。加强对新进教师人员的培训，要与高校未来发展深度融合，遏制高层次人才流失可行的手段，将新进教师培训内容融洽的点面结合，举全校之力服务社会发展各项事业紧紧相融。创新的培训方式，从理论向实践转变，激发新进教职工自觉参与的兴趣和角色转变，在丰富的培训中对教育事业的真正认识和自我认知、增强自我认同感，更有利于缓解高校高层次人才流失。在未来教育事业竞争发展中不失机遇，这样新进教师培训的质量和效果才能得到切实地发挥作用，值得让各大高校以及广大社会有所关注和重视。
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user: 摘要 随着人口老龄化、城市化进展迅速，不平衡的饮食搭配、突出的三高问题、肥胖、遗传等诸多因素导致2型糖尿病成为当代社会人类健康最大威胁之一，而微血管病变所带来的慢性并发症糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy， DR)患病率也逐渐升高，DR是糖尿病患者群体主要致盲疾病之一，根据进展程度及视网膜病变表现分为非增殖性糖尿病视网膜病变(non-proliferative diabetic retinopathy， NPDR)及增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy， PDR)。长久以来，对PDR治疗的研究较为透彻，而NPDR的治疗方式不尽详细。本文收集近几年国内外关于非NPDR的治疗方式，旨在增进临床医生对该病的了解，更有效地延缓糖尿病视网膜病变进展，提高患者生活质量。
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user: 1. 引言 非增殖性糖尿病视网膜病变(NPDR)是DR的一个发展进程，其眼底表现主要为微动脉瘤、出血点、软性渗出及硬性渗出，此阶段即可引起患者视力下降、视物模糊等症状。相较于PDR阶段，NPDR对视力的影响程度较小，但正因如此，不易引起患者的重视，不能进行及时的治疗及干预，导致NPDR逐步发展为PDR，严重影响患者视力及预后。故早期的健康教育及相关的药物治疗措施在延缓DR进展方面尤为重要。
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user: 2. 健康教育 2.1. 心理辅助 降血糖及维持血糖平稳是DR患者的长期目标，而控制血糖需要终生用药，严格控制饮食、定时监测血糖变化，保持健康的方式。处于健康不平等状态，长期控制血糖的过程中，患者容易产生焦虑，抑郁等负面情绪，从而影响工作生活 [ 1 ]，不愿按时定量服药，不配合医生治疗，不利于疾病预后。有研究表明 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]，有效的心理疏导，及时给予心理支持，能缓解糖尿病患者紧张、抑郁心情，保证患者能做到长期坚持，更好的配合治疗。故对于NPDR患者，应定期随访，予以社会心理论支持，家属及时疏导负面情绪，给与支持关怀。 2.2. 生活指导 对于DR患者，除胰岛素或降糖药外，良好的生活习惯也不可或缺。 2.2.1. 个性化健康档案 建立个人医疗档案，内容涵盖一般个人资料，如性别、年龄、职业、不良嗜好等；疾病资料应涵盖糖尿病分型、病程、治疗经过、并发症、全身状况、糖化血红蛋白、用药及用量情况、血糖表、眼底造影结果、DR分型分级等；健康档案可帮助医生及患者了解病情进展及控制情况，提醒患者按时复查，及时发现病情变化 [ 5 ]。 2.2.2. 饮食及运动指导 以知识讲座方式对DR患者开展教育，帮助患者建立科学的饮食结构，提高饮食均衡性、尤其是蛋白质、碳水化合物及纤维素的摄入量配比。帮助患者选择合适的运动加入到治疗方案中、戒掉不良嗜好、建立自我管理意识 [ 6 ]。
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user: 3. 药物治疗 3.1. 复方樟柳碱 复方樟柳碱是复合生物碱，其效应机制类似于阿托品类药物，作用：1) 抗胆碱能作用：松弛血管平滑肌、散大瞳孔、抑制唾液腺等腺体分泌、解除微血管痉挛；2) 调节脉络膜植物神经功能，保持脉络膜正常的血管舒缩活动，改善眼部血流循环；3) 抗自由基、抗炎、抑制纤维增，减轻炎症损伤；4) 修护管壁内皮细胞，维护血管壁的正常通透性。其主要作用即为改善眼部血液供应情况，促进出血、水肿、渗出的吸收 [ 7 ]。樟柳碱是目前治疗轻中度DR安全有效治疗方法之一，但研究中发现复方樟柳碱虽然可以促进眼底视网膜小点片状出血的吸收，但对视网膜初期病变如微血管瘤的作用有限且对视力的提升效果并不显著 [ 8 ]。 3.2. 醛糖还原酶抑制剂 醛糖还原酶是多元醇途径的限速酶，正常情况，细胞内葡萄糖参与糖酵解途径为机体供能，但糖尿病患者血糖高，激活多元醇途径，多余的葡萄糖在醛糖还原酶及山梨糖醇脱氢酶的作用下生成果糖 [ 9 ]。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)被利用消耗，导致抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)减少，而活性氧自由基(ROS)蓄积，从而引发氧化应激 [ 10 ]。醛糖还原酶DR发展过程中的一个重要节点，故其抑制剂可作为靶点去干预DR发展，目前依帕司已经应用于临床并有了一定的疗效，这与其抗氧化作用及减轻炎症有关 [ 11 ]。 3.3. 胰岛素治疗 有研究表明，相较于单纯口服降糖药患者，NPDR接受胰岛素强化治疗可保护视网膜神经细胞，有效改善视神经状态。国外学者研究给构造糖尿病大鼠模型注射胰岛素，在恢复了视网膜胰岛素受体的活性后也发现通过调节生长因子和炎症通路，胰岛素具有保护视网膜神经细胞的作用。但关于胰岛素对神经细胞保护作用相关文献不足，且临床应用研究缺乏 [ 12 ]。 3.4. 中药治疗 近年来，中药在NPDR的治疗中发挥了重要作用，现有药物如复方血栓通胶囊、盐酸川芎嗪、复方丹参滴丸、化瘀明目合剂、清热化瘀方等 [ 13 ]。其主要作用不尽相同，多为改善微血管循环、促进出血及渗出液吸收、降低血液黏度等 [ 14 ]。国内相关研究表明，NPDR患者单独或联合应用中药可减少微动脉瘤，减轻网膜出血及渗出，消黄斑水肿，提高网膜抗氧化应激能力，对患者视力有一定提升作用 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ]。 3.5. 神经营养因子 神经营养因子在神经元的发育、存活和凋亡各时期有调节作用，脑源性生长因子(BDNF)便是其中之一。支持、营养、保护感光细胞及各级神经元细胞的Muller细胞是网膜神经胶质细胞 [ 19 ]，Muller细胞摄取细胞的外代谢生成的谷氨酸，谷氨酸是神经元之间的神经递质，通过细胞中的谷氨酰胺合成酶将其转化为谷氨酰胺。DR患者Muller细胞作用减弱，致使谷氨酸在细胞外堆积，经过一系列反应诱导了神经细胞凋亡的发生。 BDNF可增加Muller细胞对谷氨酸敏感性，摄入增多，减少细胞外堆积，减轻其兴奋性毒性作用，对神经节细胞具有抗氧化应激作用 [ 20 ]。临床上现已应用鼠神经生长因子肌肉注射治疗DR患者，且临床证明早期应用神经营养因子效用优于晚期使用。
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user: 4. 激光治疗 激光治疗是目前DR有效治疗措施，作用机制：1) 利用激光热效应损伤正常外层视网膜结构，减少其代谢及耗氧量，供给内层视网膜；2) 视网膜变薄，脉络氧气供应内层；3) 收缩小动脉、小静脉及毛细血管，减少血管的渗漏；4) 封闭无灌注区，控制新生血管生长因子(VEGF)生成 [ 21 ]。视网膜激光光凝术(PRP)简而言之是弃车保帅，破坏正常外层网膜结构，现阶段轻、中度的NPDR的患者并不推行PRP治疗，过度损伤正常网膜反而会引起视功能的下降。但有部分研究采用直径200~300 μm的较小的光斑对轻中度患者进行轻度播散全视网膜激光光凝，发现这样的光凝方式及实际对于轻中度DR患者周边视野影响较小，控制进展的同时也可维持现有视力水平 [ 22 ]。
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user: 5. 总结 按照DR的严重程度，临床上根据眼底视网膜表现将DR分为NPDR及PDR，PDR致盲风险较高，治疗较为复杂，激光为破坏性手术，部分患者需要重复多次激光治疗，玻璃体牵拉性视网膜脱离等增殖性DR患者往往需要手术治疗，视力预后相较于NPDR患者较差，且治疗费用增加，激光及手术治疗改善视力的作用并不显著，故DR的治疗重点不仅在于解决已经发生的新生血管，出血，黄斑水肿，甚至是视网膜脱离，延缓控制NPDR向PDR的发展显得更为重要，尤其是现今社会人们对生活的质量的要求日益增高，对视力恢复的要求也较高，除控制糖尿病发展外，寻求新的治疗方案延缓DR进展，提高患者生活体验也应该引起重视。
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user: 摘要 胆道疾病临床中多见，近年来随着宏基因组测序、扩增子测序、高通量测序等技术的应用，对胆道微生物领域的研究逐步增多，微生物与胆道疾病的关系正在被人们揭开。大量文献证实胆道结石与肿瘤的发病机制与微生物有关，胆道结石与肿瘤的微生物菌群也存在差异。本文简要阐述了胆道结石与肿瘤与微生物关系的研究进展。
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user: 1. 引言 胆道疾病是常见的消化系统疾病，主要包括胆结石、胆囊息肉、胆囊癌和胆管癌等。一般来说胆汁是富含脂质的无菌的溶液，是由肝脏产生的，但是在一些健康人体内发现了胆汁中有细菌定殖，由于胆汁流量是正常的，这些人没有临床症状。由于肿瘤、结石或增加胆道内压力的寄生虫阻碍胆汁的正常排泄，细菌可通过逆行侵入途径、或者通过血液和淋巴系统入侵进行增殖。此外，某些干预措施，如手术或内窥镜操作，可能对人类防御机制产生负面影响，使细菌移位进入循环，引起感染，可能导致严重脓毒症和脓毒症休克，甚至多器官功能障碍综合征，最终死亡 [ 1 ]。然而临床中胆汁培养需要时间，且阳性率较低，微生物还表现出区域和时间的变化，因此关于胆道微生物区系的数据还不充分，大部分研究都是在几十年前进行的。近年来随着宏基因组测序、扩增子测序等高通量测序等技术的应用，关于胆道系统微生物作用的研究逐步增多。现有关的文献表明，胆道系统疾病与微生物菌群之间存在广泛的联系，其中胆道结石与胆道肿瘤之间微生物种类也存在明显差异，本文就胆管结石、胆管肿瘤与微生物的关系进行综述。
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user: 2. 胆道结石 胆结石是一种结晶性结石，主要由胆固醇、脂肪酸、糖蛋白和胆红素、磷酸盐、碳酸盐和棕榈酸钙组成，位于胆囊或胆道内 [ 2 ]。目前已被报道在胆结石的形成中起重要作用的主要有：遗传和环境因素的相互作用，如致石基因、胆固醇和或胆红素分泌过多、胆汁淤滞、肠道因素、代谢因素、饮食因素、药物等 [ 3 ]。尚有研究表明胆结石发病机制与胆汁细菌有关，但对其组成和来源缺乏详细的了解，此外，胆汁环境通常对大多数细菌怀有敌意。但胆汁环境对胆汁细菌的影响尚不清楚 [ 4 ]。 很长一段时间，胆汁的生物被认为是无菌的，但是最近，通过16S rRNA基因分析证实了在人类完整的胆汁中存在可以改变胆道和胆囊的微生物群，这些微生物与胆道疾病密切相关 [ 5 ]。颜学波等对原发性硬化性胆管炎患者与胆道梗阻患者进行16S rRNA测序研究表明，原发性硬化性胆管炎以上消化道和胆管的微生物群改变为特征；且胆道菌群失调与具有促炎及潜在致癌作用的牛磺胆酸浓度增加有关 [ 6 ]。还有研究表明胆汁的微生物群与唾液的细菌组成有关，胆道的微生物群与十二指肠的微生物群有高度的相似性 [ 7 ]。Ye F等用16S rRNA扩增序列分对6例胆总管结石患者的胆道、十二指肠、胃和口腔的细菌群落进行比较，发现所有观察到的胆汁细菌都可以在上消化道检测到，胆汁微生物区系与十二指肠微生物区系的相似性相对较高，研究结果支持了胆道细菌起源于肠道细菌逆行感染的假设。此外通过胆道微生物群相对于上消化道微生物群的不同改变揭示了胆道环境对胆道细菌组成的影响，结果表明胆道微生物多样性较低，虽然大多数已鉴定的细菌在胆汁中的数量大大减少，但胆汁中仍含有3个肠杆菌科细菌属(大肠杆菌、克雷伯氏菌和一个未分类属)和金字塔杆菌，他们还评估了所有采样点的预测功能特征，分析表明胆汁细菌的环境信息处理能力和细胞运动能力增强，可能是胆道系统对常驻细菌功能的影响 [ 4 ]。微生物种属中大肠杆菌是从胆道疾病患者的胆汁中分离到的最常见的菌种。Razaghi M等对102例胆道疾病患者行内窥镜逆行胰胆管造影术，对stx1、stx2、exhA、eae、bfp、agg、pcvd432、lt、st、ipah、picc、pET、ast、set、sen和cdtB基因的引物进行PCR扩增，检测大肠埃希菌特征菌株对脱氧胆酸钠和19种抗生素的耐药性。研究的结果表明，大肠杆菌的定植与胆总管结石之间存在显著的相关性，这些菌株毒力基因组合的异常存在及其对多种抗生素的耐药性可能是它们在这种恶劣的微环境中持续存在的可能原因 [ 8 ]。Shen HZ等人采用WMS和16S rRNA测序方法对胆总管结石患者的胆管标本进行测序，这些患者的微生物群落被分为两类：第一类是以肠道和口腔/呼吸道为特征的微生物群落，第二类是以口腔/呼吸道为特征的微生物群落。由于胆道与小肠直接相连，一般认为胆道感染源于肠道细菌的逆行性感染，但意外的是他们观察到胆汁样本中口腔/呼吸道的微生物群落比肠道微生物群落更普遍。因此，除了肠道细菌外，来自口腔/呼吸道的细菌可能与人类胆道感染有关。另一方面，与健康个体的粪便样本相比，胆汁微生物群落的样本多样性降低，而参与炎症、氧化应激反应、鞭毛组装和膜转运的途径丰度水平升高 [ 9 ]。另外，幽门螺杆菌也有助于胆固醇结石的形成，某些种类的幽门螺杆菌，包括H.bilis和H.liver，栖息于肠内并侵入胆管和肝脏，在日本和中国的研究中，已经证实幽门螺杆菌的存在与胆结石呈正相关，根除幽门螺杆菌甚至可以预防胆结石，且已经注意到，胆道结石经常出现在眼胸虫病的流行区域：结石中可见虫卵的存在 [ 3 ]。
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user: 3. 胆道肿瘤 胆道癌或肝外胆管癌包括胆管、胆囊和壶腹的肿瘤，是西方国家胃肠道恶性病变的第6大原因，胆道癌通常在晚期诊断，对放疗和化疗敏感性较低，预后很差，在过去的十年里，这些病人的诊断和治疗方法已经开始改变，但胰胆系统恶性肿瘤的生存率仍然很低 [ 10 ]。 3.1. 胆道癌的发病机制 胆道癌的发病机制包括遗传背景和环境因素作用，但癌症的发生机制尚不清楚，目前认为可能与胃肠癌的发展相似，从增生到上皮化生、异型增生和腺癌。在日本、泰国和墨西哥胆红素被认为与胆道和胆囊癌有关，而亚洲一些地区寄生虫感染也被认为是主要危险因素。21世纪以来，科学家们开始假设细菌感染引起的慢性炎症可能导致癌变，其中细菌毒素和由慢性细菌感染产生的次生代谢产物可能导致癌变，并描述了胆管癌发生的一些机制。目前研究显示人类微生物菌群的变化与结肠癌、口腔癌和肺癌的发生有一定关系，结直肠癌患者肠道菌群中拟杆菌、普氏菌和梭杆菌的数量增加，而产生丁酸盐的细菌减少 [ 11 ]。肠道微生物群落通过调节免疫和代谢过程，在保护宿主免受病原微生物侵袭方面起着至关重要的作用，作为对环境因素的反应，微生物菌群的改变会改变定植细菌与上皮细胞或免疫细胞之间的许多信号，导致炎症、上皮细胞增殖或粘液增多等改变，其中一些变化会促进细胞转化或DNA损伤，有发生癌前病变和癌症的风险，且对胆道疾病的研究表明胆道的炎症环境是胆道癌发生发展的重要因素，细菌感染引起的炎症也可能在胆道癌的发病机制中起重要作用 [ 12 ]。尚有研究表明，感染幽门螺杆菌可能会导致胆道癌，就像幽门螺杆菌对胃癌的影响一样 [ 11 ]。世界卫生组织的国际癌症研究机构将食源性肝吸虫、泰国肝吸虫和华支睾吸虫列为致癌物，幽门螺杆菌感染同样也被归类为致癌物 [ 13 ]。幽门螺杆菌是第一个被证实引起胃疾病的原核生物，包括消化性溃疡、胃粘膜相关组织淋巴瘤和腺癌 [ 14 ]。幽门螺杆菌可从胃转至十二指肠，通过十二指肠乳头和壶腹进入胆道，也可被肝吸虫引导，有报道在胆管肿瘤中发现了幽门螺杆菌特异性的DNA序列，在眼胸虫病流行区域也发现了诊断为胆囊炎/胆结石的病变，眼胸虫病和幽门螺杆菌同时定殖可能加速甚至协同胆管细胞恶性转化 [ 15 ]。体外研究发现幽门螺旋杆菌对胆管癌细胞系有多种作用，包括炎症(IL-8的产生)、细胞增殖和凋亡，即使在低多样性感染情况下，幽门螺杆菌也能诱导胆道细胞系的促炎细胞因子和细胞增殖反应，即使少量的杆菌就可能到达胆道，足以促进炎症和胆道上皮的转化 [ 16 ]。Thanaphongdecha P等研究表明幽门螺杆菌定殖可引起上皮细胞到间质细胞的转化、细胞增殖、细胞迁移和侵袭反应，并可引起H69人胆管细胞系和CC-LP-1胆管癌细胞系细胞的伤口关闭，证明了感染可以导致胆管上皮恶变 [ 16 ]。 肿瘤患者可能受到营养不良或恶病质的影响，使生活质量降低，对治疗的反应降低，发病率和死亡率增加，住院时间延长，术后并发症也可能影响胆道菌群。Di CP等对152例胆胰系统疾病患者胆汁培养、治疗和存活率进行分析探讨胆汁微生物群在这些患者中的潜在临床影响，以及肠杆菌科是否与和胆道肿瘤显著相关，结果表明主要培养细菌为大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和绿脓杆菌，其对3CGS、氨基糖苷类、喹诺酮类的耐药菌比例较高，认为胆汁史无前例的增加导致存活率下降，且在胆汁标本中分离到的某些菌株可能是肝胆系恶性肿瘤发生和(或)进展的危险因素之一 [ 17 ]。 3.2. 胆道菌群 Chng等人采用高通量16S rRNA测序，对有或没有OpV感染的患者的成对肿瘤和邻近非肿瘤新鲜/冷冻组织胆道微生物进行了分析。发现正常OpV +ve患者与正常OpV −ve患者的Shanon指数多样性显著增加(p = 0.026)，并且一个属在所有细菌属中显著富集。与正常组织相比，OpV −ve患者肿瘤组织中可见狭营养单胞菌(狭营养单胞菌科)富集。OpV +ve与OpV −ve组织比较，双歧杆菌、肠杆菌均有富集 [ 18 ]。ChenB等人从不同的范围，不包括肝吸虫患者，设计了一项胆道微生态研究。他们在标准内镜下逆行胆管造影术(ERCP)中收集胆汁样本，取出至少5~10 mL胆汁，这些胆汁样本用于扩增16S rRNA基因的可变区域V3和V4，结果提示在胆管癌患者中，变形杆菌、纤毛杆菌、类杆菌和放线杆菌是胆汁中最主要的类群，也是胆总管结石发病的主要原因 [ 19 ]。Avilez-Jimenez等人在墨西哥胆管癌患者中寻找微生物群的差异。他们在内镜逆行胰胆管造影(ERCP)中，通过刷胆囊附近的胆总管或壶腹附近的胆总管进行DNA分析，然后，采用PCR法，筛选出肝螺杆菌和幽门螺杆菌阳性的患者。进行16S rRNA基因V4区扩增结果表明，变形菌门是胆道癌患者中最常见的门(平均60.4%)，在4002个鉴定出的OTUs中，涅斯捷连科氏菌等门有所减少，而嗜甲基菌科、梭杆菌属、普氏菌属、放线菌属、新鞘脂菌属、幽门螺旋杆菌等门增加 [ 11 ]。
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user: 4. 胆道结石与肿瘤菌群差异 ChenB等通过比较胆管癌、新发胆管结石和复发性胆管结石的患者，得到的结果是与胆总管结石患者相比，远端胆管癌患者中双歧杆菌门、硝酸螺旋菌门、氯柔菌门、隐孢子菌门和浮霉状菌属门的数量明显增加，最后根据252个细菌属水平的测序结果，揭示了个体间的异质性，他们认为胆道核心微生物群的组成变化提示了微生物在胆道疾病具有潜在的生物学和医学意义 [ 19 ]。还有研究结果表明，氧化还原依赖性的半胱氨酸修饰和胆汁液中的铁蛋白作用可能是肝外胆管癌的机制。一些与PTM相关的蛋白质和致癌途径如p53和mTORC1在胆管癌组织中也被发现，在胆汁中也得到了丰富，提示胆汁具有肝外胆管癌组织的致癌特征。因此，胆汁中的生物标志物可用于诊断胆道癌以及区分胆道癌和良性胆道疾病，而大肠杆菌、肠球菌、铜绿假单胞菌和肺炎K.球菌是恶性和良性疾病患者中最常见的细菌 [ 20 ]。张晓芬等通过16S rDNA对胆道良恶性梗阻患者(胆管结石组92例，胆道肿瘤组32例)进行胆道菌群分析，结果表明胆管结石组与胆道肿瘤组胆道菌群在菌群多样性方面无显著差异，但物种差异分析方面发现两组存在明显差异的菌群，其中胆管结石组主要的特征菌群为：Granulicatella (颗粒链菌属)、Neisseriaceae (奈瑟氏球菌科)、Carnobacteriaceae (肉杆菌科)、Erythrobacteraceae (赤杆菌科)、Bulleidia (牛肝菌属)、Hyphomicrobium (生丝微菌属)、Parvimonas (单胞菌属)、Filifactor (产线菌属)；胆道肿瘤组主要的特征菌群包括：Lactobacillus (乳酸杆菌属)、Anaerovibrio (厌氧弧菌属)、Mitsuokella multacida (多酸光冈菌种)、Mitsuokell (光冈菌属)、Peptococcaceae (消化球菌科)、Bifidobacterium longum、Pasteurella pneumotropica (嗜肺巴氏杆菌种) [ 21 ]。Alves JR等对30例胆胰良恶性疾病患者的胆汁培养进行回顾性研究。对样本进行评估，以确定胆汁微生物区系，并寻找其与合并症、癌变和术后感染并发症的可能联系。结果证实大肠埃希菌和克雷伯氏菌多见于良性疾病，克雷伯氏菌和链球菌多见于癌症患者 [ 22 ]。
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user: 5. 小结与展望 综上所述，近年来关于胆道结石、肿瘤与微生物的关系研究逐步增多，微生物与胆道结石及肿瘤的发生发展有关，但其机制仍不明确，研究胆道微生物与胆道疾病的作用及胆汁中微生物菌群差异可能为胆道结石与肿瘤的预防及治疗提供新的思路。
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user: 摘要 目的：研究清热解毒方与软坚散结方对人肺腺癌A549细胞增殖及Bcl-2表达的影响。方法：将不同浓度的清热解毒方、软坚散结方分别作用于人肺腺癌A549细胞，CCK8法检测细胞生长抑制率，流式细胞仪检测细胞凋亡率，RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达。结果：清热解毒方、软坚散结方均呈剂量依赖性抑制A549细胞生长(P < 0.05)，并下调Bcl-2 mRNA表达(P < 0.05)。结论：清热解毒方、软坚散结方均能不同程度地抑制人肺腺癌A549细胞的增殖，其机制可能与下调Bcl-2 mRNA表达有关，从而促进人肺腺癌A549细胞凋亡。
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user: 1. 引言 肺癌是临床上常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居全世界首位。在肺癌的分型中，非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的80%，其中腺癌是目前最常见的肺癌病理类型 [ 1 ]。肺癌的传统治疗手段是手术、化疗或放疗，但大多数肺癌患者在确诊时已处于晚期，往往对传统治疗手段不能耐受，而中医药在治疗中晚期NSCLC具有稳定病灶、防止肿瘤细胞转移、改善临床症状、提高患者生存质量、延长生存期等显著的优势 [ 2 ]。周仲瑛认为治疗肺癌祛邪重于扶正，治法上以清热解毒、化痰散结、活血化瘀、益气养阴等复法组方为主 [ 3 ]。本研究旨在通过体外实验，检测清热解毒方、软坚散结方对人肺腺癌A549细胞增殖的影响，并初步探讨其作用机制。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 2.1.1. 细胞株 人肺腺癌细胞A549，由青岛大学附属医院中心实验室提供。 2.1.2. 实验药品 清热解毒方(牡丹皮15 g，栀子10 g，连翘10 g，夏枯草15 g，鱼腥草15 g，金荞麦15 g)，软坚散结方(牡蛎20 g，夏枯草10 g，山慈菇10 g，白花舌蛇草20 g，瓜蒌10 g，半夏10 g)，两组中药方剂配方均由青岛大学附属医院中医科提供，药材均购自青岛大学附属医院中药房。以分析天平精密称取两种按原方比例配伍的各中药免煎颗粒，将其粉碎后置入试管中，分别加入100℃去离子水80 ml振荡溶解，静置放凉，此时所得中药免煎颗粒溶剂浓度相当于原饮片1 g/ml，超净工作台内将药液经0.22 um微孔滤膜除菌，得清热解毒方、软坚散结方原液，4℃冰箱保存备用。根据预实验情况确定两种方剂有效抑制浓度范围，实验时将上述原液用培养液稀释后配置成所需终浓度，分别为2.5、5、10、20、40、80、160 mg/ml后使用。药物均为实验前新鲜配用。 2.1.3. 实验试剂 CCK8试剂盒购自大连美仑生物技术有限公司，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购自上海优宁维生物科技股份有限公司，SYBR® Premix Ex Taq™ II PCR扩增试剂盒购自日本TaKaRa公司，Bcl-2及β-actin (内参)上下游引物均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。 2.2. 方法 2.2.1. 人肺腺癌A549细胞培养及处理 将A549细胞用DMEM培养基(含10%血清、青霉素100 ug/L，链霉素100 ug/L)于37℃、5% CO 2 饱和湿度培养箱中培养，以0.25%胰蛋白酶消化，选择对数生长期，且生长状态良好的A549细胞随机分为3组：两种不同功效中药方剂组，DMEM培养基阴性对照组。 2.2.2. CCK8法检测细胞生长抑制率 选择对数生长期，且生长状态良好的A549细胞，以3 × 10 4 /ml的密度接种到96孔板中，培养过夜。向细胞中添加终浓度分别为2.5、5、10、20、40、80、160 mg/ml的两种不同功效中药方剂，设置添加DMEM培养基的A549细胞为阴性对照组，设置添加DMEM培养基为空白组。每组设3复孔。培养48 h后，常规CCK8显色，用全自动酶标仪在波长450 nm测定各孔吸光度(OD值)。计算细胞生长抑制率，抑制率(%) = [1 − (实验组OD值 − 空白组OD值)/(对照组OD值 − 空白组OD值)] × 100%。应用加权直线回归分析法计算IC50值。以下实验均选用两种中药方剂的IC50值作为实验浓度。每组实验至少重复3次，下同。 2.2.3. 流式细胞仪检测细胞凋亡率 选择对数生长期，且生长状态良好的A549细胞，按照1 × 10 5 /ml的密度接种到6孔板中，培养过夜。向细胞中添加两种不同功效的中药方剂，药物浓度为相对应中药方剂的IC50值，设置添加DMEM培养基的A549细胞为阴性对照。培养48 h后，用不含EDTA胰酶消化、离心收集细胞。用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)重悬冲洗、离心收集细胞。用300 ul Binding Buffer (1:10)重悬细胞，加入5 ul Annexin V-FITC，混匀后室温避光孵育15分钟，再加入5 ul溴化丙锭(PI)，混匀后室温避光孵育5分钟，上流式细胞仪检测细胞凋亡率。 2.2.4. RT-PCR法检测A549细胞Bcl-2 mRNA表达 选择对数生长期，且生长状态良好的A549细胞，按照1 × 10 5 /ml的密度接种到6孔板中，培养过夜。向细胞中添加两种不同治法的中药方剂，药物浓度为相对应中药方剂的IC50值，设置添加DMEM培养基的A549细胞作为阴性对照。每组设3复孔。培养48 h后，用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗一次，Trizol裂解细胞，提取RNA并检测RNA浓度和纯度。将RNA反转录为cDNA。RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达。 2.2.5. 统计学方法 应用SPSS 22.0软件将实验所得数据进行统计分析，所得数据用平均数 ± 标准差( x ¯ ± s)表示，两组间比较采用方差分析。*P < 0.05，**P < 0.01，差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 不同浓度两组中药方剂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响(图1) 不同浓度两组中药方剂均呈剂量依赖性抑制人肺腺癌A549细胞的增殖。与阴性对照组比较，2.5 mg/ml软坚散结方作用于A549细胞后吸光度下降，差异无统计学意义(P > 0.05)，余不同浓度两组中药方剂作用于A549细胞后吸光度下降，差异均有统计学意义(P < 0.05， P < 0.01)。清热解毒方、软坚散结方的IC50值分别为11.313 mg/ml、23.874 mg/ml。 图1. 不同浓度两组中药方剂作用于A549细胞后吸光度比较 3.2. 细胞凋亡情况(图2) 细胞经Annexin V-FITC/PI染色后，利用流式细胞仪检测细胞凋亡率，清热解毒方、软坚散结方作用于A549细胞48 h后检测细胞凋亡率(早期凋亡 + 晚期凋亡)分别为8.66%、11.17%，与空白对照组(3.53%)比较，细胞凋亡率增加，差异有统计学意义(P < 0.01)。 图2. 两组中药方剂作用于A549细胞后凋亡率比较 3.3. Bcl-2 mRNA表达(图3) 与阴性对照组比较，清热解毒方、软坚散结方均能不同程度下调Bcl-2 mRNA表达，差异有统计学意义(P < 0.05，P < 0.01)。
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user: 4. 讨论 中医认为，肿瘤的发生与正气虚损、阴阳失衡、脏腑功能失调、留滞客邪有关，致使气滞血瘀、痰凝毒聚，相互胶结日久形成肿瘤 [ 4 ]，故痰淤热毒、气阴两伤是肺癌的基本病机，而清热解毒、软坚散结即成为治疗肺癌的重要治则 [ 3 ]。 图3. 两组中药方剂作用于A549细胞后Bcl-2 mRNA相对表达量比较 研究证实，抑制肿瘤增殖、诱导肿瘤细胞分化和凋亡是中医药抗肿瘤的重要机制 [ 2 ]。细胞凋亡包括外在的死亡受体通路和内在的线粒体信号通路。Bcl-2凋亡信号通路为内源性通路，可分为促凋亡蛋白和抑凋亡蛋白两大类，其中Bax和Bcl-2分别是典型的促凋亡和抑凋亡蛋白。当Bax高表达或者Bcl-2基因低表达所致其比值上升，Bax同源二聚体增多，可引起细胞凋亡增加 [ 5 ]。李小江等观察到具有益气滋阴、活血祛瘀、清热解毒、扶正祛邪功效的消岩汤及其拆方组(清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组)在体外实验中均能抑制人肺腺癌A549细胞的生长 [ 6 ]。研究证实，软坚散结方中多种药物均具有抑制人肺腺癌A549细胞的增殖，诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用，其中白花蛇草乙醇提取物可呈剂量依赖性抑制人肺腺癌A549细胞的增殖 [ 7 ]。 本实验采用CCK8法观察不同浓度清热解毒方、软坚散结方对人肺腺癌A549细胞体外增殖作用的影响，结果提示：不同浓度两组中药方剂均呈剂量依赖性抑制A549细胞的增殖，说明清热解毒方、软坚散结方在体外均具有较强的细胞毒性和抑制肿瘤细胞增殖的作用。采用流式细胞仪观察发现，清热解毒方、软坚散结方作用于A549细胞48 h后细胞凋亡率(早期凋亡 + 晚期凋亡)明显增加，提示两组中药方剂均能不同程度诱导A549细胞凋亡。采用PCR法观察发现，清热解毒方、软坚散结方均能不同程度下调Bcl-2表达，提示两组中药方剂诱导A549细胞凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2 mRNA表达有关。
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user: 5. 结论 综上所述，清热解毒方、软坚散结方均具有较强的抑制人肺腺癌A549细胞增殖及诱导细胞凋亡的能力，其共同作用机制可能为通过下调Bcl-2 mRNA表达来诱导A549细胞凋亡。因此，清热解毒方、软坚散结方均具有较强的抗肿瘤作用，两种中药方剂不同的作用机制有待进一步阐明。
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user: 摘要 本研究选取根据基因预测结果存在大量生物合成基因簇但目前次级代谢产物研究的仍较少的费希新萨托菌(Neosartorya fischeri NRRL 181)作为研究对象，先利用OSMAC策略研究了不同培养基下费希新萨托菌的次级代谢产物情况，再选择了大米作为培养基对该菌进行了大规模发酵。发酵结束后对95%乙醇提取所得的浸膏利用传统的柱层析手段进行了系统的次级代谢产物分离工作，共分离并鉴定了8个化合物。
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user: 1. 引言 近年来，对微生物基因组序列的分析结果显示，对于任意给定真菌，目前已经得到的次级代谢物不管在数量还是种类上都远不及它基因序列所显示的可能编码次级代谢物的生物合成基因簇数(BGCs) [ 1 ] [ 2 ]。这也就意味着目前绝大部分已知微生物仍具有巨大的研究潜力，只要实验设计得当，仍能获得大量结构新颖的活性化合物。造成这种现象的最主要原因是许多生物合成基因簇在实验室条件下不表达，通常被认为是沉默或隐蔽的。诱导这些沉默基因的表达可以解锁它们所控制的化学多样性，从而发现在医学和生物技术上具有巨大潜力的活性新分子。为了刺激这些沉默生物合成基因簇的表达，目前已有较多的方法，包括了遗传手段及培养手段的综合运用 [ 3 ]。 OSMAC (one strain many compounds)策略是其中较为巧妙，也是应用最为广泛且成熟的方法。OSMAC方法不是针对特定的沉默基因簇的激活，而是针对易于获取的培养参数的系统改变，包括了对培养基成分(碳源、氮源及盐)，pH值，培养通气和培养温度的改变 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ]。这使得OSMAC方法成为用于调节微生物代谢一种可用、通用、廉价且相对简单的研究方法。通过更改培养基或加入一些物质，尽可能的打破或在一定程度上打破基因沉默现象，利用多种培养条件获得尽可能多类型的次级代谢产物。 费希新萨托菌Neosartorya fischeri NRRL 181是一种生长迅速的曲霉属真菌，已完成全基因测序，目前只发现了有限类型的化合物 [ 9 ] - [ 15 ]。antiSMASH的生物信息学预测却显示N. fischeri的基因组含有39个生物合成基因簇，其中25个与以前报道的任何天然产物无关，非常值得进行深入研究。本课题尝试了利用不同的培养基对费希新萨托菌进行培养，根据液相结果和薄层显色的结果选择了大米作为培养基进行大规模发酵，再对发酵浸膏进行了次级代谢产物研究，从代谢产物中共分离得到8个次级代谢产物。
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user: 2. 实验材料与研究方法 2.1. 实验仪器与实验材料 2.1.1. 实验仪器 高效液相色谱(安捷伦1100)、恒温摇床(上海福玛QYC-2112)、生化培养箱(上海博讯)、旋转蒸发仪(上海亚荣)、高压灭菌锅(日本Hirayama)、双人单面净化工作台(苏州SW-CJ-2FD)、超声波清洗器(昆山市KQ3200E)、电热恒温鼓风干燥箱(上海森信DGG-9140A)。 2.1.2. 实验材料 N. fischeri NRRL 181 (购自德国菌种保藏中心DSMZ)、乙酸乙酯(江苏强盛，分析纯)、色谱甲醇(美国TEDIA)、葡萄糖(AR)、硝酸钠(AR)、磷酸氢二钾(AR)、氯化钾(AR)、七水合硫酸镁(AR)、硫酸亚铁(AR)、石油醚(分析纯)、无水甲醇(分析纯)、氯仿(分析纯)、丙酮(分析纯)、MCI (上海BOS-M0001)、YMC ODS C-18反相填料(日本YMC)等。 2.2. 实验方法 2.2.1. OSMAC策略筛选较优的培养基 主要采用了在液体培养基(以察氏培养基作为起始培养基)中分别加入金属元素(Mn 2+ 、Fe 3+ 、Ba 2+ 、Al 3+ 、Co 2+ 、Na + 、Mg 2+ 等)、抗菌药物(酮康唑、氟康唑)、其它微生物(面包酵母)，或采用低氮(氮源比例降至原来的1/10)及低碳(碳源比例降至原来的1/10)策略、用富含营养成分的天然培养基(大米、豆粕、小麦麸、土豆培养基等)进行培养等方法对费希新萨托菌进行培养。 2.2.2. 大规模发酵 根据2.2.1的实验结果，选取了大米作为培养基进行了大规模发酵。发酵温度28℃，发酵时间30 d，发酵结束后用95%乙醇浸泡，每次浸泡5天，浸泡3次，过滤并合并滤液。 2.2.3. 次级代谢产物分离、纯化与结构鉴定 对2.2.2的中得到的滤液浓缩获得浸膏，再用乙酸乙酯萃取，分层后将乙酸乙酯层浓缩，后面反复利用普通硅胶、MCI、YMC ODS C-18反相填料、HW-40C凝胶等进行柱层析分离，利用制备型HPLC等仪器，结合重结晶等手段对化合物进行纯化，得到目标单体化合物。然后，综合运用现代波谱学方法(NMR、MS、IR、UV等)确定化合物的结构。
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user: 3. 研究结果和讨论 3.1. OSMAC策略筛选较优的培养基 3.1.1. 加入重金属对N. fischeri代谢产物的影响 实验结果表明，在培养基中加入较大量的Mn 2+ 、Fe 3+ 、Al 3+ 、Co 2+ 、Na + 等金属离子后，菌株无法很好的在这些环境中生长，因此代谢产物也无法产生，而在Mg 2+ 、Ba 2+ 下生长状况良好。对比液相图(如图1，箭头指示的为色谱图中新出现的色谱峰或者化合物量明显增大的色谱峰，1#培养基代表相同实验条件下在原察氏培养基中培养N. fischeri的代谢产物，下同)可知加入Ba 2+ 、Mg 2+ 后对N. fischeri代谢产物均有大幅度提高，甚至产生了一些原本不产生的化合物，对比普通察氏培养基，20分钟以后几乎为一条直线，因此，这些新的突出峰均为N. fischeri产生得到的新的代谢产物，特别是在加入Mg 2+ 后产生了三个新的峰位。研究可以证明，加入不同金属离子，Mg 2+ 、Ba 2+ 可能会增加N. fischeri代谢产物量，而其他金属离子大多对N. fischeri产生抑制甚至致命的作用。 3.1.2. 加入抗菌药物对N. fischeri代谢产物的影响 实验结果表明酮康唑浓度对菌株生长的抑制作用成正比。观察液相图(如图2)，加入氟康唑和酮康唑后，在20分钟的时候的代谢产物均有增加，而其中加入氟康唑后没有其他代谢产物产生，加入酮康唑后在28分钟处产生了一个新的峰位，对比普通察氏培养基28分钟处为一条直线，可以得出该化合物为N. fischeri新的代谢产物，而且产生量特别大。 图1. 加入金属离子对N. fischeri代谢产物的变化 图2. 加入酮康唑和氟康唑对N. fischeri代谢产物的变化 3.1.3. 降低氮源比例对N. fischeri代谢产物的影响 氮源比例降低后的N. fischeri代谢产物明显比在正常的察氏培养基中培养得到的代谢产物要丰富的多，产生了很多原本不产生的化合物(图3)。 图3. N. fischeri在低氮察氏培养基和正常察氏培养基中代谢产物的差异。(a、b、c分别表示采用225 nm、254 nm、280 nm波长进行检测的色谱图差异) 3.1.4. 降低碳源比例对N. fischeri代谢产物的影响 碳源比例降低后的N. fischeri代谢产物种类与正常的察氏培养基中培养得到的代谢产物相近，但是其中某些化合物的代谢产物量得到了大幅度提高(图4)。 图4. N. fischeri在低碳察氏培养基和正常察氏培养基中代谢产物的差异。(a、b、c分别表示采用225 nm、254 nm、280 nm波长进行检测的色谱图差异) 3.1.5. 加入其它微生物对N. fischeri代谢产物的影响 发现加入面包酵母后，N. fischeri代谢产物中某些化合物的量得到了大幅度提高，甚至产生了一些原本不产生的化合物(结果见图5，如43.0 min的色谱峰)。从基因簇来分析可知面包酵母几乎没什么次级代谢产物，在相同条件下培养相同时间的面包酵母的代谢产物几乎为一条直线，这些都表明增加的化合物应该属于N. fischeri的代谢产物。 图5. 与酵母共培养对N. fischeri次级代谢产物的影响(a、b、c分别表示采用225 nm、254 nm、280 nm波长进行检测的色谱图差异) 3.1.6. N. fischeri在天然培养基中的培养结果 实验结果表明大米培养基培养下N. fischeri代谢产物均较前文中涉及的液体培养的代谢产物更为丰富，且代谢产物量更大，为此选取了大米培养基这种天然培养基作为大规模发酵的培养基进行后续实验。 3.2. 大米培养基下获得的N. fischeri次级代谢产物 对在大米培养基中进行培养的N. fischeri代谢产物进行分离纯化后得到8个化合物，再通过核磁手段鉴定了它们的结构(如图6)，分别为aszonalenin (1) [ 16 ]、acetylaszonalenin (2) [ 16 ]、麦角甾醇(3) [ 17 ]、(14α， 22E)-14-hydroxyergosta-7， 22-diene-3， 6-dione (4) [ 18 ]、β-胡萝卜苷(5) [ 19 ]、过氧麦角甾醇(6) [ 20 ]、(22E， 24R)-24-methyl-6b-methoxy-5a-cholesta-7，22-diene-3b，5-diol (7) [ 21 ]、cyathisterol (8) [ 22 ]。 图6. 大米培养基培养下的N. fischeri代谢产物
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user: 4. 结论 1) 通过OSMAC策略对费希新萨托菌的次级代谢产物进行研究，我们发现： ① 加入不同重金属元素对费希新萨托菌的次级代谢产物有不同的影响，尤其是Mg 2+ 、Ba 2+ 会增加N. fischeri次级代谢产物的量，而其他金属离子在达到一定浓度后大多对N. fischeri产生抑制甚至致死作用。 ② 加入酮康唑和氟康唑均会对N. fischeri代谢产物量产生一定的影响，其中酮康唑的影响较为明显。 ③ 降低氮源和碳源比例均会丰富N. fischeri代谢产物量。 ④ 加入其它微生物后会刺激N. fischeri产生一些原来培养基中不产的化合物。 ⑤ 富含营养的天然培养基培养下N. fischeri代谢产物较为丰富。 2) 对大米作为培养基培养N. fischeri结果的浸膏中的次级代谢产物进行研究，共分离并鉴定了其中8个化合物。
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user: 摘要 为提高钢包炉产量，降低行车超重的安全隐患，本文介绍了宝钢湛江钢铁炼钢厂350吨钢包减重措施，将钢包平均重量控制在140吨以下。
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user: 1. 背景介绍 湛钢炼钢厂于2015年9月投产，现有3座350吨转炉、3座RH精炼工位、2座LF精炼工位、2座LATS精炼工位、3台连铸机。新增1座350转炉和1台连铸机于2021年上半年投产，届时炼钢厂全年产能将超1200万吨。现有主要钢种涉及汽车板、管线钢、家电用钢、无取向硅钢、超高强钢、容器用钢等。 湛钢炼钢厂投产初期出现钢包粘渣严重，严重影响生产正常运行。钢包粘渣严重时，平均钢包重量为152 t，超重比例达50%以上 [ 1 ]。2017年炼钢厂在采取优化炉后石灰加入量等措施下，将钢包重量由152吨降低至142吨，对炼钢厂产能提升和钢包运行周转有较大的帮助。现今，在面对着提高产量和炉产量的高要求下，炉产量的提升仍受限于钢包重量，钢包增重导致行车超载次数多，行车寿命缩减，存在安全隐患。一方面，钢包粘渣增重，不利于观察包衬残厚，不能及时发现钢包安全隐患，同时，包口挖渣次数增多也会影响渣线砖的寿命。另一方面，渣钢残留包底增重会影响钢包自开率和透气砖烧通率，可能会导致后炉钢水元素超标改钢等。因此，需进一步降低钢包重量，成立攻关组采取措施开展相关钢包减重工作。
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user: 2. 钢包粘渣机理 分析表明，不管是砖砌包还是整体包，包衬表面附着的薄层渣不是渣与耐材的反应产物，而是钢包渣冷凝后的析晶产物，由于形成了RO相、SP和MA等高熔点相，并且有些是以RO相为核心生长成自形尖晶石，这样使得粘附的渣层致密而牢固 [ 2 ]。湛钢炼钢厂钢包粘渣增重原因为炉渣熔点较高，炉渣熔点主要分布在1530℃~1750℃之间 [ 1 ]。当钢包渣的碱度(CaO/SiO 2 )与CaO/Al 2 O 3 比低时，渣中形成CA2 (CaO∙2Al 2 O 3 ， 1780℃)、CA6 (CaO∙6Al 2 O 3 ， 1880℃)及C2AS (2CaO∙Al 2 O 3 ∙SiO 2 ， 1590℃)和MA (MgO∙Al 2 O 3 ， 2130℃)等高熔点物质，在钢包周转过程中，渣层温度降低，又厚又硬的渣壳与钢包渣线砖紧紧粘结，包口结渣圈导致钢包在翻铸余渣时翻不出或翻不净，剩余的铸余渣残留在钢包底部，影响钢包重量上升。
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user: 3. 钢包减重措施 湛钢炼钢厂使用的是520 t行车，但是在实际使用中，经常出现行车称量值超过530 t的现象，行车超载次数增加。长此以往，行车寿命降低，增加安全风险。湛钢炼钢厂从脱氧工艺、炉后钢包渣改质和优化物流节奏等角度，在钢包减重方面采取了一系列改进工作，具体有以下几个措施。 3.1. 优化脱氧工艺 湛钢炼钢厂冶炼方式均采用铝脱氧工艺，因而铝镇静钢渣中的Al 2 O 3 较高，CaO少，钢包渣钙铝比低，钢包渣粘度大，极易粘在钢包包壁上。加上中碳钢本身钢包温度就比较低，渣中高熔点物质增加，钢包渣容易变得又厚又硬，浇铸结束后的返回钢包经常出现满包口结渣盖的现象，见图1。中碳钢钢包重量一直处于较高水平，为此，湛钢炼钢厂优化中碳钢脱氧工艺，取消中碳钢炉后加石灰、除渣剂和铝铁，使用硅铁脱氧。经过跟踪，钢包渣中钙铝比在0.9~1.0左右，较试验前0.5~0.7有明显提升。现场跟踪发现，采用硅铁脱氧的钢包渣粘度小，流动性更好，满包口结渣盖现象得到改善。 图1. 中碳钢钢包用后结渣盖 统计10月份试验炉次与7~9月厚板向中碳钢种翻损、钢包增重、挖渣比例，见表1，从数据分析可知，硅脱氧试验炉次钢包翻损为5.7吨，钢包增重为40 kg，挖渣比例为6.7%，数据明显优于7~9月，硅脱氧不仅改善了厚板向中碳钢种钢包增重问题与挖渣情况，而且翻损量也控制较好。 Table 1 The proportion of weight and excavation of ladl 时间 炉数 翻损/t 钢包增重/kg 挖渣比例 10月试验 120 5.7 40 6.7 9月 401 5.9 289 10.8 8月 376 6.1 508 9.1 7月 491 5.6 451 7.1 表1. 钢包增重与挖渣比例 3.2. 炉后钢包使用除渣剂和石灰进行渣改质 湛钢炼钢厂吴政等人在前期研究中，研究了湛钢炼钢厂钢包粘渣原因及钢包减重措施，为了减少钢包粘渣，在出钢过程中加入400~800 kg的石灰，以此提高钢渣碱度与CaO/Al 2 O 3 比，从而降低钢渣的熔点至1500℃以下 [ 1 ]。从炼钢厂成本角度考虑，为使本项工作更具有经济性，在钢包出钢时加入钢包除渣剂，用部分除渣剂代替部分石灰。除渣剂的主要成分为CaF 2 ，石灰的主要成分为CaO。在钢包Al含量不调整的情况下，提高钢包渣中的Ca含量，提高渣中碱度和CaO/Al 2 O 3 比，增加钢包渣子流动性，减缓包口粘渣程度。不同钢包重量加入不同的除渣剂，具体见表2。 3.3. 控制新包上线传搁时间 湛钢炼钢厂要求钢包烘烤终点温度为1000℃，新上线钢包需加热盖保温，减少钢包温降。但在加热盖前，钢包需经过一段时间无盖传隔，在这过程中钢包温度逐渐降低，等到达倾翻台做包时，包内温度仅有600度左右。经过跟踪7月和8月上半月小修、大修新钢包上线传隔时间，小修前5次中，钢包第1次小修返回平均增重2.5吨，后4次小修返回增重无明显规律，见图2。攻关组确定了新包上线传隔时间控制在60分钟以内的要求。8月第3周，新包上线传搁时间 ≤ 60 min的符合率100%，新包第1次小修返回增重1.9吨。上线传隔时间越短，钢包温降损失越小，钢包首炉返回增重也少。因此，钢包上线前要充分蓄热，尽可能缩短空包传隔时间，要求上线传搁时间 ≤ 60 min。 Table 2 The standard of adding slag agent 项目 加入量/kg 钢包重量 < 138吨 0 138吨 ≤ 钢包重量 < 142吨 180~220 142吨 ≤ 钢包重量 < 146吨 280~320 146吨 ≤ 钢包重量 < 155吨 380~420 钢包重量 ≥ 155吨 安排下线处理 石灰加入量 600~800 表2. 除渣剂加入标准 图2. 不同寿命下钢包增重量与空包传隔时间的关系 钢包加盖后，钢包内衬温降减少，钢包可始终处于红包状态，减少对钢包耐火材料急冷急热影响，有利于提高钢包寿命 [ 3 ]。 3.4. 控制钢包浇注结束至翻渣结束时间 钢包浇注结束至翻渣结束时间的长短也是影响钢包增重的一个关键因素。钢包中的钢水在浇注过程中温度逐渐降低，浇注结束后，残留在钢包底部的含渣钢水若不能及时翻出，极易凝固残留在钢包底部，造成钢包增重。结合炼钢厂内实际物流情况，要求钢包浇注结束至翻渣结束时间 ≤ 15 min，并对比了不同钢种翻渣后增重情况，见图3，钢包浇注结束至翻渣结束时间 ≤ 15 min的炉次炉均增重量小于钢包浇注结束至翻渣结束时间 > 15 min的炉次炉均增重量。缩短钢包浇注结束至翻渣结束时间在一定程度上减少了因翻渣慢、钢水温度低导致翻不出留包底的情况，钢包自开率和透气砖吹氩成功率上升。 图3. 不同钢种钢包浇注结束至翻渣结束时间与增重情况 3.5. 机械清渣 对于一些粘渣异常严重导致增重的钢包采取机械清渣的方式，机械挖渣虽然作为快速减重的有效措施，但锋利的挖齿会对渣线砖造成损坏。炼钢厂钢包渣线为五环镁碳砖砌筑而成，挖机在清除包口渣子时，锋利的挖齿极易直接撞击渣线砖和砖缝，造成渣线镁碳砖脱落，存在钢包穿钢水的安全风险。对此，需有效控制机械清渣次数。
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user: 4. 结论 对包口易结渣粘渣的钢种优化脱氧工艺，采取加除渣剂和石灰的方式，提高钢包渣子流动性，使钢包渣子不易粘结在渣线砖处，翻渣时利于残钢残渣及时翻出。 加快钢包物流周转速度，严控新包上线传隔时间，减少温降，缩短钢包浇注结束至翻渣结束时间，及时翻出铸余渣，减少残钢凝固在钢包底部造成增重。合理控制钢包机械清渣次数，降低钢包穿钢风险，确保钢包安全运行。 钢包是炼钢厂重要的热工设备，包衬寿命长短不仅关系到耐火材料的消耗和炼钢成本，而且直接影响钢的产量和质量 [ 4 ]。通过采取一系列措施，钢包平均包重降低至140吨并稳定保持。在保证厂内行车不超载的情况下，提高钢包炉产量以提高炼钢产能，年效益可增加千万元。
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user: 摘要 湛江钢铁投产已经超过四年，在贯彻高效率低成本的理念下，坚持固废不出厂，最大化利用渣钢、渣铁、OG泥等二次资源。二次资源的使用不仅可以改善环境，更是降低成本、保持企业可持续发展的重要途径。渣钢渣铁由于具有较高的含铁量而作为二次资源的重要组成部分，在转炉低成本炼钢中发挥着重要的作用。本文研究的目标是通过回收利用渣钢铁来代替部分重废入炉，从而降低转炉钢铁料成本。