DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 近年来，水产品中农药残留已经成为一个食品安全的问题，越来越受人们的关注 [ 1 ] 。敌敌畏属于高毒类农药，经常导致急性食物中毒。水产品的脂肪含量较高，在分析此类农药时，大量的脂肪也会被提取出来。脂肪对色谱柱和进样口都会造成严重的污染，所以在使用气相色谱质谱仪检测前，需将脂肪与农药残留进行分离。目前，国内外报道的前处理方法主要有液液萃取法、多次净化法、柱层析法及凝胶渗透色谱法 [ 2 ] 。其中，凝胶色谱法是依靠被分离物质本身相对分子质量的大小对样本进行分离的，凝胶本身与被分离试样之间没有相互作用，此被分离物质在分离过程中不会发生化学变化。在凝胶色谱渗透仪(Gel Penetrating Chromatogram，简称GPC)中，大分子物质将首先被洗脱出来，如油脂、类脂化合物、聚合物、蛋白质、色素及类固醇等，而小分子物质(如农药等)则扩散进入凝胶孔内，较迟流出色谱柱 [ 3 ] 。本文通过对黑鱼中敌敌畏方法的研究，建立凝胶色谱法–气相色谱质谱法的测定方法。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料与试剂 标准溶液：敌敌畏，来源于Dr. Ehrenstorfer Gmbh。 试剂：无水硫酸钠 分析纯；丙酮 色谱纯；乙腈 色谱纯；乙酸乙酯 色谱纯；环己烷 色谱纯。 样品：黑鱼500 g，市售，经测定不含敌敌畏农药。 2.2. 仪器与设备 Agilent 7890A-5975C气相色谱质谱仪；J2 preplinc凝胶色谱仪；绞肉机；电子天平；匀浆机；离心机。 2.3. 标准溶液制备 准确吸取100 μg/mL敌敌畏标准物质1 mL于10 mL的容量瓶中，用丙酮溶解并定容至刻度线，配制成浓度为10 μg/mL的标准储备液。再以储备液配制成浓度为1 μg/mL的标准工作液，并逐级稀释成0.025、0.05、0.1、0.25、0.5的标准溶液。 2.4. 样品前处理 2.4.1. 提取 准确称取5.00 g (精确到0.01 g)经绞碎混匀的样品于50 mL的塑料离心管中，加入5.0 g无水硫酸钠，加入5 mL的水，再加入10 mL乙腈，涡旋振荡混合1 min，6000 r/min离心10 min，将上清液转移至另一个离心管中。再向样品管中加入5 mL乙腈，重复上述操作，合并两次提取液。于40℃水浴中旋转浓缩至近干，加入10 mL环己烷–乙酸乙酯(1 + 1体积比)涡旋溶解残渣。 2.4.2. 凝胶色谱净化 将上述提取液按下述凝胶色谱净化条件进行净化，合并馏分收集器中收集液于浓缩瓶中，于40℃水浴中旋转浓缩至近干，加入2 mL乙酸乙酯溶解残渣，待净化。 2.4.3. 凝胶色谱净化条件 净化柱：300 mm × 20 mm，Bio Beads S-X3，或相当；流动相：环己烷：乙酸乙酯 = 1:1(体积比)；流速：5.0 mL/min；预淋洗时间：0 min~21 min；收集时间：21 min~32 min。收集液体待固相萃取柱净化。 2.4.4. 固相萃取柱净化 用6 mL乙酸乙酯预淋洗石墨化碳黑固相萃取柱，将上述收集的样液倾入柱中，用2 mL乙酸乙酯洗涤活性炭柱，然后用6 mL乙酸乙酯进行洗脱。收集全部洗脱液于15 mL刻度管中，40℃水浴中氮吹至干，用丙酮定容至1 mL，供气相色谱–质谱测定。 2.4.5. GC-MS仪器条件 色谱柱：Agilent DB-5MS: 30 m × 0.250 mm × 0.25 μm；载气：氦气(纯度 ≥ 99.999%)，1.2 mL/min；柱温：程序升温如下50℃保持2 min，30℃/min升温至180摄氏度，保持3 min；进样口温度：280℃；辅助加热温度：270℃；进样方式：不分流进样；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；溶剂延迟：3 min；选择离子检测：185 (定量)、109、187，丰度比为29:100:10。 2.5. 回收率和精确度及检出限的确定 将绞碎的肉泥分成4份，每份约50 g。其中三份分别添加成农药含量为0.01、0.02、0.1 mg/kg的样品，每份样品称取6个平行，根据1.4方法进行处理，计算测得量，利用Excel表计算回收率和相对标准偏差。 取空白样品色谱图中农药标准品保留时间处的基线噪音，将其与加标样品中标准品响应信号进行比较，以3倍信噪比(3S/N)所对应的样品中标准品浓度为检出限(Limit of Detection， LOD)。 2.6. 结果计算和表述 (1) 式中：X——试样中敌敌畏农药残留量，mg/kg；ρ——敌敌畏农药上机浓度，ug/mL；V——最终定容体积，vL；m——质量，g；f——稀释倍数。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 样品前处理的条件优化 3.1.1. 萃取剂的选择 本文对常用的丙酮以及乙腈两种提取剂进行了比较。将两种不同提取剂提取的样品，经过凝胶色谱柱净化时，选用calibration，发现丙酮提取的样品中油的峰面积明显比乙腈提取的样品中的峰面积大。水产品中脂肪含量比较高，在分析敌敌畏农药时，脂肪提取出来的越少，越有利于后面的净化过程。所以最终选择乙腈为提取试剂。这与Kate [ 4 ] 、吴刚 [ 5 ] 等人的研究结果一致。 3.1.2. 凝胶色谱仪参数选择 将经1.4.1处理过的溶液通过凝胶色谱仪calibrationmo模式出图，从图1可以看出，油在17 min之前出峰，敌敌畏在22 min开始出峰，所以选择的预淋洗时间为0 min~21 min；收集时间为21 min~32 min。 3.2. 标准曲线 依照1.3方法配制标准曲线，以质量浓度(μg/mL)横坐标，以峰面积为纵坐标制造标准曲线，得线性方程为Y = 7711.1x − 20.650，相关系数R 2 = 0.9999。相应的标准曲线见图2。 3.3. 回收率、精确度及检出限 空白样品中添加0.5 μg/mL标准溶液100 μL于5.000 g (即加标浓度为：0.01 mg/kg)，经样品前处理，仪器测定后，被测物敌敌畏的信噪比S/N = 41.2 > 3，表明方法的检出限可至0.01 mg/kg。 黑鱼在不同添加剂水平下的回收率、相对标准偏差见表1。添加水平为0.01、0.02、0.1 mg/kg时，目标化合物的回收率为73%~90%，3个添加水平的相对标准偏差(RSD)不大于10%，结果满意。 Table 1 Recoveries， relative standard deviations (RSD) of dichlorvos at different spiked level in snakehea 敌敌畏数据 添加量(mg/kg) 平行 称样量m (g) 上机浓度ρ (μg/mL) 定容体积V (mL) 稀释系数f 实际检出浓度X (mg/kg) 回收率% 平均回收率% 相对标准偏差% 0.01 s1-1 5.021 0.0430 1 1 0.0086 85.7 79.1 8.8 s1-2 5.009 0.0449 1 1 0.0090 89.6 s1-3 5.014 0.0361 1 1 0.0072 72.0 s1-4 5.008 0.0381 1 1 0.0076 76.1 s1-5 5.016 0.0390 1 1 0.0078 77.8 s1-6 5.011 0.0369 1 1 0.0074 73.7 0.02 s2-1 5.017 0.0822 1 1 0.0164 82.0 84.2 2.8 s2-2 5.020 0.0813 1 1 0.0162 80.9 s2-3 5.018 0.0865 1 1 0.0172 86.2 s2-4 5.012 0.0844 1 1 0.0168 84.2 s2-5 5.017 0.0867 1 1 0.0173 86.4 s2-6 5.031 0.0863 1 1 0.0171 85.7 0.1 s3-1 5.028 0.4128 1 1 0.0821 82.1 81.2 3.6 s3-2 5.029 0.4047 1 1 0.0805 80.5 s3-3 5.015 0.4183 1 1 0.0834 83.4 s3-4 5.030 0.3817 1 1 0.0759 75.9 s3-5 5.034 0.4097 1 1 0.0814 81.4 s3-6 5.024 0.4223 1 1 0.0841 84.1 表1. 不同添加水平的黑鱼样品回收率与相对标准偏差 图1. 凝胶色谱仪图谱 图2. 敌敌畏标准曲线
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user: 4. 结论 本文以黑鱼为研究对象，通过乙腈提取剂提取，经过凝胶色谱净化后用气相色谱质谱法测定鱼肉中的敌敌畏农药残留量。该方法的检出限为0.01 mg/kg，加标回收率为73%~90%，相对标准偏差不大于10%，能获得较满意的回收率和重现性，为水产品食品测定敌敌畏农药提供了参考。
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user: 摘 要 本文以CaO-Al 2 O 3 -SiO 2 -MgO-CaF 2 基础精炼渣系，通过加入铝矾土等量取代CaF 2 ，研究铝矾土替代萤石对精炼脱硫效果的影响。实验结果表明：铝矾土替代萤石造渣对钢液脱硫有良好的效果，碱度的增加和适量的铝矾土加入量，能够提高精炼渣的脱硫率，当CaO/SiO 2 的比值在11~12，铝矾土的含量在4%~5%时，脱硫效果最佳，可达到80%以上；实验渣对钢中夹杂物的改性和去除也有良好的效果。 关键词 :铝矾土，精炼渣，脱硫，夹杂物
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user: 1. 引言 钢水的精炼过程中，造渣是冶炼的关键。CaF 2 具有良好的化渣性能，但是CaF 2 在高温时会反应生成HF、SiF 4 等气体，严重污染环境；同时，不断的开采利用使优质的萤石矿越来越少，价格也比较高。用铝矾土 [ 1 ] - [ 3 ] 替代萤石造渣能够减少污染，且铝矾土中的Al 2 O 3 含量较高，可达60%以上，而其中的氧化性物质如Fe 2 O 3 、SiO 2 的含量则较低，既可提高渣中的Al 2 O 3 含量，又不会导致渣的氧化性的增高。同时，由于铝矾土价格便宜，可大大降低生产成本。 本实验采用CaO-Al 2 O 3 -SiO 2 -MgO精炼渣系，通过向渣中加入铝矾土等量替代渣中的CaF 2 ，来研究铝矾土替代萤石后精炼渣的脱硫性能和对钢中夹杂物的影响。
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user: 2. 实验方案及操作 根据目前精炼渣的应用现状 [ 4 ] ，在CaO-Al 2 O 3 -SiO 2 -MgO精炼渣系的基础上，使用铝矾土等量替代CaF 2 ，实验炉渣的成分设计见表1。 Table 1 Slag composition of the experiment 序号 R 成分% CaO Al 2 O 3 SiO 2 MgO CaF 2 铝矾土 1 8 40.0 40 5 10 5 0 2 9.6 48.0 32 5 10 5 0 3 10.6 53 27 5 10 5 0 4 11.4 57 23 5 10 5 0 5 12 60.0 20.0 5 10 4 1 6 12 60 20 5 10 3 2 7 12 60 20 5 10 2 3 8 12 60 20 5 10 1 4 9 12 60 20 5 10 0 5 表1. 实验精炼渣成分 R为实验渣的二元碱度CaO/SiO 2 。 在高温炉，1600℃下进行渣—钢实验。实验的操作过程如下：钢样→升温至1600℃→加入配好的渣料，并通氮气保护→搅拌→40 min后取出整个钢样→钢的成分检测和夹杂物分析。(实验所用高温炉为MoSi 2 管式高温炉，CaO等实验试剂为分析纯试剂)。
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user: 3. 实验结果及讨论 3.1. 碱度对脱硫率的影响 根据离子理论，精炼过程中渣钢间的主要脱硫反应 [ 5 ] 为： (1) 实验渣系的脱硫效果通过脱硫率表达： 其中，[S] i 为LF精炼开始时钢中的硫含量，[S] f 为精炼终点钢水中的硫含量。 从实验1到实验5，实验渣的二元碱度R不断提高，脱硫率随碱度的变化如图1所示，随着二元碱度的增加，脱硫率总体呈增加趋势，到第五组时脱硫率最高，达到70%以上。由式(1)可知，随着碱度的增加，渣中的O 2− 也随之增加，促进反应向右进行，有利于炉渣的脱硫。是以在此基础上我们选取二元碱度R在12，进行铝矾土等量取代萤石实验。 3.2. 铝矾土取代量对脱硫率的影响 从图2可知，控制二元碱度R = 12，在4~8组的实验中，脱硫率随着铝矾土取代CaF 2 量的增加而变大，最高达到86.84%，并且实验中观察到随着铝矾土取代量的增加，实验渣的熔化性能并未受到太大的影响。这是因为铝矾土的主要成分为Al 2 O 3 ， 随着铝矾土加入量增加，渣中Al 2 O 3 的含量也随之增加，而Al 2 O 3 为酸性氧化物，能够与CaO结合形成多种低熔点的化合物，Al 2 O 3 含量的增加可以提高渣的流动性，对改善脱硫的动力学条件十分有利，尤其是其与CaO形成的12CaO·7Al 2 O 3 熔点很低，亦可改善脱硫效果。但从实验8到实验9，铝矾土取代量进一步增加，脱硫率却有所下降，这是由于铝矾土含量的上升使渣中Al 2 O 3 含量的增加，精炼渣体系的碱度降低，这对于精炼脱硫所需要的高碱度是不利的，从式(1)可知，碱度降低不利于平衡向右进行。因此为了利于化渣又不影响渣钢反应的进行，要控制铝矾土的加入量，不宜过多。 实验中降低CaF 2 量 [ 6 ] ，逐步增加铝矾土的含量，最后完全替代CaF 2 ，从脱硫率上看，实验设计的渣系脱硫效果良好，铝矾土替代CaF 2 完全可行。 3.3. 钢中夹杂物的形貌和成分分析 对精炼渣实验的原始钢样和实验终点试样的夹杂物在JSM-6510扫描电镜、能谱仪进行形貌和成分分析，所得谱线图和形貌图如图3。 在扫描电镜视场下发现为原钢样中的典型夹杂物主要为FeS-MnS夹杂，如图3，其夹杂物的尺寸大部分较小，分布较多。经实验渣系精炼后，钢中硫化物夹杂数量明显变少，少量也以Ca-Al-S的复合夹杂物形式存在且尺寸明显变大。 图4为精炼后的夹杂物形貌和能谱图，且为同一视场下的两个相邻夹杂，如图标记为1和2。由图 图1. 脱硫率随炉渣碱度的变化情况 图2. 脱硫率随铝矾土含量的变化情况 图3. 精炼前原始钢样夹杂形主要形貌及其成分 图4. 精炼后钢样的夹杂形主要形貌及其成分 谱1可知，视场中夹杂物1为Ca-Al-S的复合夹杂物，而从图谱2可知，较小的夹杂物2则为硫化物夹杂，从形貌图中可以看出这就是钢中硫化物夹杂在精炼渣处理过程与渣中的钙铝酸盐结合形成复杂夹杂物上浮的过程。钢中的细小夹杂物，在适当的条件下与精炼渣结合变性为尺寸较大，熔点低且更易上浮的夹杂物，进而达到去夹杂的目的。
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user: 4. 结论 1) 随着二元碱度的增加，脱硫率总体呈增加趋势，当二元碱度为12时脱硫率最高，达到70%以上。 2) 本实验中铝矾土替代萤石脱硫有量好的效果。在一定范围内，铝矾土的加入有利于化渣，可以促进脱硫反应的进行；但铝矾土加入量过多会使渣中氧化铝含量升高，自由氧化钙含量降低，降低渣系的脱硫相率。因此为了利于化渣又不影响脱硫的效果，要控制铝矾土的加入量，不宜过多。 3) 对比精炼前后钢中典型夹杂物的种类和形貌可以发现实验精炼渣对于硫化物夹杂的变性以及夹杂物的上浮和去除有很好的效果。
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user: 摘 要 本文主要综述了近年来，国内外颗粒增强镍基复合材料制备研究进展。指出了研究实验中存在的不足，并在最后提出了建议与展望。 关键词 :镍基复合材料，颗粒增强，原位反应法
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user: 1. 引言 镍基复合材料是极具应用价值的复合材料，在航空航天、军工等领域有非常广泛的应用前景。复合材料主要由基体和增强体组成，增强体包括纤维、晶须、颗粒等。以纤维、晶须等作为镍基材料的增强体，会导致材料出现各向异性，材料制备过程相对复杂、成本高、综合力学性能差等问题。而以颗粒作为增强体便可以克服这些不足。根据颗粒增强体来源的不同，分为内生型和外生型两大类。外生型中的增强体是从基体外直接加入，增强体表面被污染，导致机体界面不干净，影响界面结合了；而内生型颗粒增强镍基复合材料的增强体是通过化学反应在基体中生成的，颗粒表面干净，无污染，界面结合强度高。本文主要就颗粒增强镍基复合材料制备工艺部分进行综述。
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user: 3. 展望 颗粒增强镍基复合材料具有优异的综合力学性能和耐腐蚀性能，且制备工艺简单，能在机械设备核心部位服役，有良好的应用前景。但目前的各种制备工艺仍然存在增强体颗粒与基体结合状况差，增强机理不明确，实验复现性不佳，材料制备成本高，制备成功率低等问题。 颗粒增强镍基复合材料应重点研究三个方面： 1) 增强体的选择对其与镍基的界面连接有很大影响，选择与基体性质差异小的增强体进行实验，提高界面性能。 2) 实现多种材料制备和加工技术的紧密结合。将热压烧结技术，自蔓延高温合成技术，电沉积电铸法和表面原位熔覆技术优势结合起来，制备高强度、抗蠕变、抗疲劳、耐腐蚀、耐磨等性能优越的颗粒增强镍基复合材料。 3) 将材料制备与改善性能合二为一进行研究，并借助计算机模拟与可视化表征的方法建立模型，利用Laguerre图构造算法、Monto-Carlo方法及Laguerre窗口技术构造金属基复合材料微结构 [ 41 ] ，提高分析效率。
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user: 摘 要 对一株分离自药用植物藜的内生放线菌LCB-A236进行系统学鉴定。电镜扫描后观察到螺旋状的孢子丝和椭球形的孢子，通过其形态和生理生化特征初步确定为链霉菌。分子鉴定和系统发育分析结果显示，其与Streptomyces violaceorubidus LMG 20319 T (AJ781374)进化地位最接近，相似度为99.71%，确定为Streptomyces sp.。通过平板法、SRB法和Lilian Sauma等人的激动率测试模型进行抗菌、抗癌及抗糖尿病活性测试，结果显示出较强的抗癌及抗糖尿病活性和中等的抗菌活性。菌株的5类抗生素合成酶基因PCR扩增筛查结果表明，该菌株含有I-型聚酮合成酶、II-型聚酮合成酶和非核糖体多肽合成酶的基因。 关键词 :藜，内生放线菌，鉴定，活性，抗生素合成酶基因
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user: 1. 引言 植物内生放线菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段存活于健康植物组织内部，而又不引发宿主植物表现出明显感染症状的放线菌 [ 1 ] 。研究资料表明，植物内生放线菌能产生一系列有生物活性的次级代谢物，如抗生素、抗肿瘤和抗感染药物、植物生长促进剂和酶 [ 2 ] 。随着大量内生放线菌新种的不断发现，从中寻找新型药物生物活性化合物显现出巨大潜力。Ezra等从龟背竹属植物中分离到1株能产生多肽类抗生素coronamycin的链霉菌属放线菌，对多种病原真菌均有抑制作用，特别是对腐霉菌表现出强烈的拮抗活性，可作为新一代杀真菌药物的候选菌株 [ 3 ] 。此外，Igarashi等从1株植物内生小单孢菌属新种的发酵液中成功分到两种新的蒽醌类化合物，对多种肿瘤细胞表现出了明显的拮抗活性 [ 4 ] 。从微生物基因组的角度出发，筛查抗生素生物合成酶基因，可以极大的减少候选菌株的筛选量；而且具有活性的抗生素合成酶基因的候选菌株，其产物结构类型可以作大致推测，便于进一步分离解析 [ 5 ] 。植物内生放线菌是一类开发程度相对较低的微生物资源，因此对植物内生放线菌的研究具有潜在的价值。本研究对1株分离自药用植物藜的内生放线菌LCB-A236进行鉴定及活性分析，初步考察此株内生放线菌的形态特征、生理生化特性及药用价值，以期为植物内生放线菌资源的开发与利用提供方法和理论参考。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 2.1.1. 实验材料 藜的根部组织由本实验室采自四川峨眉山。 2.1.2. 供试菌株 抗菌活性测试菌株：肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)、黑曲霉(Aspergillus niger)，由四川抗菌素工业研究所微生物菌种资源中心提供。抗癌活性测试细胞株：人肝癌细胞株HepG2，由成都地奥集团药物筛选中心提供。抗糖尿病活性测试细胞株：稳定共转染pPPRE-Luc (PPAR反应元件萤火虫荧光素酶报告基因质粒)和phRL-TK (Renilla荧光素酶报告基因质粒)的HepG2细胞，由成都地奥集团药物研究所提供。 2.1.3. 主要培养基 抗菌测试培养基：LB用于抗细菌测试，PDA用于抗真菌测试；细胞培养培养基：低糖DEME培养基+10%小牛血清。 2.1.4. 主要试剂 PCR试剂购于北京天根生化科技有限公司；细菌DNA提取试剂盒及通用引物购于上海生工生物工程技术服务有限公司。 2.2. 方法 2.2.1. 内生放线菌的分离纯化 采用QIU Peng等的方法 [ 6 ] 。新鲜的藜根部组织，用大量清水洗净，70%EtOH浸泡1 min，10%NaClO浸泡6 min，再用无菌水反复漂洗4~6次，在无菌条件下用手术刀将其切成3~5 mm的小块，植入ISP-3平板中，置于28℃恒温培养7 d，用无菌竹签挑取单菌落，重新划线接种于ISP-3琼脂培养基中，经多次纯化后转接于斜面，置于4℃保存备用。 2.2.2. 菌落培养特征 将菌株LCB-A236划线接种于胰胨酵母琼脂、ISP-2、燕麦粉琼脂-1、无机盐淀粉琼脂、高氏合成一号琼脂、酵母-麦芽浸膏琼脂、酵母膏-葡萄糖琼脂、甘油-天门冬酰胺琼脂、PDA琼脂、葡萄糖-天门冬酰胺琼脂等10种鉴定培养基上，置于28℃恒温培养4~10 d，观察并记录生长情况，对照美国ISCC-NBS标准色卡分别记录气生菌丝、基内菌丝和可溶性色素的有无及其颜色。 2.2.3. 扫描电镜观察 采用插片法制备电镜样品。将菌株LCB-A236接种并插片于燕麦粉琼脂培养基上，于28℃下恒温培养7~14 d，取出插片并送样于四川大学分析测试中心。 2.2.4. 生理生化特性分析 对菌株LCBA236的生长温度、pH范围、NaCl耐受性、碳源利用、氮源利用、淀粉水解、牛奶凝固、黑色素产生、纤维素分解、硝酸盐还原、明胶液化、酯酶分解、甲基红实验、硫化氢产生等生理生化实验进行了考察，具体方法参照文献 [ 7 ] 。 2.2.5. 菌株发酵及产物抽提 将菌株LCB-A236接种于LB液体发酵培养基中，于28℃、200 r/min震荡培养7 d。用等体积甲醇震荡提取发酵液，离心移取有机相，采用旋转蒸发减压浓缩后转移至EP管中进行冷冻干燥至干品，置于−20℃保存备用。 2.2.6. 抑菌活性测试 抑菌活性测试采用平板法测定 [ 7 ] 。称取适量样品，以DMSO溶解，配制成100 mg/mL的使用液，再用超纯水依次梯度稀释得100 μg/mL的测定液。培养基制备先以水–琼脂作为下层，预先制备；再以LB、PDA培养基作为上层，将其灭菌后冷却至45℃左右，再将预先配制好的细菌、真菌孢子悬液分别以适量充分混入LB、PDA培养基中；待培养基凝固后等距放入滤纸片，取样品测试液10 μL滴于滤纸片上；LB、PDA平板分别置于37℃、28℃培养3d、7d，观察有无抑菌圈产生并测量记录其平均直径。 2.2.7. 抗癌活性测试 抗癌活性测试采用SBR法 [ 8 ] 。将人肝癌HepG2细胞接种于96孔板，培养12 h后，分别制备加样对照、不加样品对照和加药前对照。加药前对照的细胞毒每孔加入30 μL 50% TCA固定，于4℃放置60 min后，弃固定液，用蒸馏水洗涤5次，自然晾干备用，加样对照和不加样品对照的细胞继续培养48 h后再固定。所有固定好的细胞以0.4% SRB染液室温下染色20 min，游离的染料用1%醋酸溶液漂洗4遍以除去。空气干燥后按200 μL/孔加入10 mmol/L Tris-base，以振荡溶解蛋白结合染料，混匀后于490 nm测定OD值。根据OD值计算生长率GR，再用GR值判断样品的抗癌活性强度。 2.2.8. 抗糖尿病活性测试 采用成都地奥集团药物研究所提供的高通量筛选模型筛查样品对II型糖尿病的活性，其PPAR-γ转录激活系统的筛选模型依据Lilian Sauma等 [ 9 ] 的激动率测试模型。将含有PPRE报告基因的质粒和表达PPAR-γ的质粒共转染到细胞中，同时向转染细胞中加入罗格列酮阳性对照作为阳性对照，再通过化学发光法来检测报告基因表达产物的变化，从而建立基于PPAR-γ信号通路的筛选模型，并利用其进行高通量筛选。 2.2.9. 16S rRNA基因测序及系统发育分析 按文献 [ 10 ] 中所述的快速提取法抽提目的菌株基因组DNA。PCR扩增LCB-A236的16S rRNA基因序列，选择细菌通用引物。 27F(PA): 5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’， 1492R(PB): 5’-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3’。25 μL PCR反应体系包括：14 μL dd H 2 O ，2.5 μL 10 × Taq酶缓冲液，1 μL DNA模板，2.5 μL 25 mmol/L MgCl 2 ，2.5 μL 10 μmol/L引物，0.75 μL 2.5 mmol/L dNTP，0.25 μL 2.5 U/μL Taq酶。扩增条件为94℃预变性3 min，94℃变性30 s，55℃退火30s；72℃延伸1.5 min，循环30次，最后72℃延伸10 min。反应结束后取出电泳检查，合格PCR产物送上海生工生物工程股份有限公司进行双向测序。根据测序结果，将菌株的16S rRNA基因序列提交至EzBioCloud (http://www.ezbiocloud.net/)中的EzTaxon在线比对服务进行相关标准菌株的相似性搜索，确定菌株的分类学地位，并调出相关模式菌种的16S rRNA基因序列，采用Clustal W进行序列比对，并通过软件MEGA5.2以 N-J法构建系统发育树。 2.2.10. 抗生素合成酶基因的PCR筛查 PCR扩增筛查5类抗生素合成关键酶的基因，具体方法依据文献 [ 11 ] - [ 13 ] 。I型聚酮合成酶(PKS-I)、非核糖体多肽合成酶(NRPS)和II型聚酮合成酶(PKS-II)的基因分别使用引物对K1F/M6R、A3F/A7R、ARO-PKS-F/ARO-PKS-R；安莎类抗生素关键酶3，5-AHBA合酶基因rifK(ANSA)和糖肽类抗生素合成关键酶P450单加氧酶基因(oxyB)分别使用引物对ANSA-F/ANSA-R和Foxy/Roxy。所用引物及其扩增片段见表1。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 内生放线菌的分离 从藜根部组织分离纯化获得9株内生放线菌，将其编号为LCB-A231~LCB-A239。 3.2. 抗菌、抗癌及抗糖尿病活性筛查 通过抗菌、抗癌及抗糖尿病活性测试筛选出一株具有较好活性的菌株LCB-A236。其发酵粗提物的活性测试结果见表2。该菌株对肺炎克雷伯氏菌和枯草芽胞杆菌表现出较强的抑菌活性，对金黄色葡萄 球菌的抑菌活性较弱，对铜绿假单孢菌、表皮葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉则无抑菌活性。该菌株人肝癌细胞株HepG2具有较强的细胞毒活性，对HepG2-pPPRE-Luc亦表现出了极强的活性。 3.3. 培养特征 菌株LCB-A236在胰胨酵母琼脂、ISP-2琼脂、燕麦粉琼脂-1等9种培养基上生长良好，在甘油-天门冬酰胺琼脂培养基上生长中等，在10种培养基上均无可溶性色素产生，且在各种培养基上气生菌丝和基内菌丝的颜色特征各不相同(见表3)。 3.4. 形态特征 在扫描电镜下观察，可见丰富的高度分枝菌丝，孢子丝呈螺旋状，孢子丝成熟后形成串珠状的孢子链；单个孢子表现为椭球状，表面褶皱，直径0.67~0.94 μm (见图1)。 3.5. 生理生化特性 对菌株LCB-A236的生长温度、pH值、NaCl耐受能力进行了初步测定，结果表明：该菌株生长的温 Table 1 Primers and relvent biosynthesis genes for PCR screenin 引物对 正向引物 反向引物 基因 片段长度/bp K1F/M6R 5’-TSAAGTCSAACATCGGBCA-3’ 5’-CGCAGGTTSCSGTACCAGTA-3’ PKS-I 1200~1400 A3F/A7R 5’-GCSTACSYSATSTACACSTCSGG-3’ 5’-SASGTCVCCSGTSCGGTAS-3’ NRPS 700 ARO-PKS-F/ARO-PKS-R 5’-GGCAGCGGITTCGGCGGITTCCAG-3’ 5’-CGITGTTIACIGCGTAGAACCAGGCG-3’ PKS-II 492~630 ANSA-F/ANSA-R 5’-CC(C/G)GC(G/C)TTCAC(C/G)TTCATCTC-3’ 5’-AI(G/C)(C/T)GGAICATIGCCATGTAG-3’ ANSA 641 Foxy/Roxy 5’-CTGGTCGGCAACCTGATGGAC-3’ 5’-CAGGTACCGGATCAGCTCGTC-3’ oxyB 591 表1. PCR筛查所用引物及其匹配生物合成基因 Table 2 Antimicrobial， anticancer and antidiabetes activity of strain LCB-A23 供试菌株 活性强弱 肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumonia) +++ 铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa) − 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ++ 表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) − 枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis) +++ 白色念珠菌(Candida albicans) − 黑曲霉(Aspergillus niger) − HepG2细胞株HepG2 cells +++ HepG2-pPPRE-Luc +++++ 表2. 菌株LCB-A236的抗菌、抗癌及抗糖尿病活性 注：“−”代表无活性；“++”代表抑菌圈直径为5.0~6.5 mm；“+++”代表抑菌圈直径为6.5~10.0 mm或抗癌活性生长率(GR)为70~80 mm；“+++++”代表抗糖尿病活性激动率(ER)大于100。 Table 3 Cultural characteristics of strain LCB-A236 on all kinds of mediu 培养基 生长 气生菌丝 基内菌丝 可溶性色素 胰胨酵母琼脂 良好 淡黄白色 亮黄 — ISP-2琼脂 良好 白色 灰红橙色 — 燕麦粉琼脂-1 良好 白色 米黄色 — 无机盐淀粉琼脂 良好 — 浅黄粉色 — 高氏合成一号琼脂 良好 白色 浅红色 — 酵母–麦芽浸膏琼脂 良好 灰白色 浅红色 — 酵母膏–葡萄糖琼脂 良好 — 浅黄色 — 甘油–天门冬酰胺琼脂 中等 — 浅绿色 — PDA琼脂 良好 白色 浅红褐色 — 葡萄糖–天门冬酰胺琼脂 良好 — 黄绿色 — 表3. 菌株LCB-A236在各种培养基上的培养特征 注：“—”表示无气生菌丝生长或不产可溶性色素。 图1. 菌株LCB-A236的扫描电镜照片 度范围在10℃~40℃之间，且最适生长温度在28℃附近；菌株适宜生长的pH范围在6.5~8.5之间，最适pH为为7.5，能耐受6~12的pH范围；NaCl的耐受范围在0%~6%之间。菌株LCB-A236可利用D-阿拉伯糖、肌醇、D-果糖、D-甘露醇、葡萄糖、鼠李糖、甘油、胶醛糖、α-半乳糖、D-木糖作为碳源生长，不能利用山梨醇和山梨糖；可利用L-色氨酸、L-缬氨酸、L-赖氨酸、L-谷氨酸、尿素、甘氨酸、L-组氨酸、L-酪氨酸作为氮源生长；能使牛奶凝固而不胨化，能产生黑色素和水解淀粉，但不能使酯酶分解、硝酸盐还原、纤维素分解、色氨酸分解和明胶液化，也不能产生H 2 S，甲基红实验为阳性反应(表4)。 3.6. 16S rRNA基因序列分析 经测序分析菌株LCB-A236扩增的16S rRNA基因序列长度为1374 bp，提交至NCBI GenBank，获得注册号为JF261620。EzTaxon在线比对搜索结果表明，与菌株LCB-A236的16S rRNA基因序列相似度较高的标准菌株均为链霉菌属，将菌株16S rRNA基因序列与所选取的18株相近模式菌的序列用Clustal X进行比对，构建N-J系统发育树。发育树上显示菌株LCB-A236与Streptomyces violaceorubidus LMG 20319 T (AJ781374)聚于同一分支中，具有较高的同源性，且其16S rRNA基因序列相似度高达99.71%，确定为Streptomyces sp.。系统发育树见图2。 3.7. 抗生素合成酶基因的PCR筛查 菌株LCB-A236的抗生素生物合成途径的5种关键酶基因进行PCR筛查，结果见表5。 由表5筛查结果知：该菌株PKS-I、PKS-II和NRPS的基因PCR筛查结果呈阳性，而ANSA和oxyB的基因筛查结果为阴性；说明菌株LCB-A236含I型聚酮合成酶、II型聚酮合成酶和非核糖体多肽合成酶三种抗生素合成途径关键酶的基因，不含安莎类抗生素关键酶3，5-AHBA合酶基因rifK和糖肽类抗生素合成关键酶P450单加氧酶基因，表明该菌株具有产生相应抗生素的潜力。
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user: 4. 讨论 放线菌是寻找天然抗感染活性产物的出发菌，特殊生境中的放线菌，为适应生存环境，经过不断演 Table 4 Physiological and biochemical characters of strain LCB-A23 碳源 结果 氮源 结果 项目 结果 D-阿拉伯糖 + L-色氨酸 + 酯酶分解 − 肌醇 + L-缬氨酸 + 牛奶凝固 + D-果糖 + L-赖氨酸 + 牛奶胨化 − 山梨醇 − L-谷氨酸 + 淀粉水解 + D-甘露醇 + 尿素 + 硝酸盐还原 − 山梨糖 − 甘氨酸 + M-R实验 − 葡萄糖 + L-组氨酸 + 色氨酸分解 − 鼠李糖 + L-酪氨酸 + H 2 S实验 − 甘油 + 纤维素分解 − 胶醛糖 + 黑色素产生 + α-半乳糖 + 明胶液化 − D-木糖 + 表4. 菌株LCB-A236的生理生化特征 注：“+”表示生长或反应阳性；“−”表示不生长或反应阴性。 Table 5 PCR screening of antibiotics synthetase gene 抗生素合成酶基因 PCR筛查结果 PKS-I + PKS-II + NRPS + ANSA − oxyB − 表5. 抗生素合成酶基因的PCR筛查 注：“+”表示筛查结果为阳性；“−”表示筛查结果为阴性。 图2. 基于16S rRNA基因序列构建菌株LCB-A236系统发育树 化，逐渐产生了独特的代谢系统和防御系统，从特殊环境中发现产生新型抗生素的放线菌概率相对较高 [ 14 ] 。还有研究表明，宿主植物与内生菌常具有相同或相似的次生代谢产物合成途径，在长期协同进化的过程中，两者相互影响，使得内生菌可以产生抗生素和酶等代谢产物，具有促生、抗菌、抗虫和抗氧化等多种生物学作用 [ 15 ] - [ 18 ] 。植物内生放线菌因其具有独特的生存环境，且在与宿主长期的相互作用过程中，物种间基因发生交流，使其能够产生能产生与宿主相同或相似的结构新颖、功能特殊的活性物质，这是药物筛选的新途径。Stierle 等在1993年首次从短叶红豆杉分离到的内生真菌能产生抗肿瘤物质紫杉醇 [ 19 ] 。杨桂柳等从北仑河红树分离获得106株内生放线菌，其中有38株对至少一株细菌有抑菌作用，35株对至少一株白色念珠菌有抑菌作用 [ 20 ] 。姚晓玲等含有抗肿瘤活性喜树碱的喜树种子种分离到33株内生疑似放线菌，并且分离到的内生放线菌中42.42%以上对立枯丝核菌有很强的抑制菌核形成的作用，54.54%内生菌有较强抑制芽孢杆菌生长的作用 [ 21 ] 。郭泽经等从罗汉杉分离得到1株具有较强抗菌及抗肿瘤活性的内生放线菌 [ 5 ] 。藜(Chenopodium album L.)为藜科藜属的植物，广泛分布于全球温带及热带以及中国各地；性味甘平，微毒，具有清热利湿，治痢疾腹泻、湿疮痒疹、毒虫咬伤等功效。刘松艳等 [ 22 ] 和赵良忠等 [ 23 ] 研究发现藜乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有明显的抑菌效果并从中分离到6个黄酮类化合物。综上所述，从药用植物藜中更有可能寻求到产新活性化合物的有价值的活性菌株和发现新的抗生素及其它活性先导化合物。
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user: 5. 结论 菌株LCB-A236分离自药用植物藜，通过对该菌株的培养特征、扫描电镜特征及生理生化特性的分析表现出典型链霉菌特征，并对16S rRNA基因序列进一步分析，确定菌株LCB-A236为Streptomyces sp.。目前关于此类微生物的分离与活性菌株筛选已成为抗癌、抗菌及生物防治等领域研究与开发的一项重要工作。本研究对菌株LCB-A236分别进行了抗菌、抗癌、抗糖尿病活性研究及抗生素合成酶基因的PCR筛查。菌株发酵粗提物的抗菌、抗癌及抗糖尿病活性测试结果表明，该菌株的抗菌活性中等，但其具有极强的抗癌及抗糖尿病活性。抗生素合成酶基因的PCR筛查显示，该菌株具有I型聚酮合成酶、II型聚酮合成酶和非核糖体多肽合成酶的基因，因此在筛选抗生素生产候选菌株方面具有较大潜力，然而对其产生的抗生素类物质化学结构与作用机理有待进一步研究。
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user: 摘 要 通过对云南省西北部大理、迪庆、怒江州三个州境内的流域、河流、水利水电工程和水文站网进行调查，对各类监测站网密度及布局进行分析，结果表明云南省西北部除雨量站网、蒸发站网和地下水站网外的其它各类监测站网密度基本达到世界气象组织及《水文站网规划技术导则》规定的密度要求。根据完全水文空白河流与流量测验空白河流评价方法，对河流的水文监测覆盖程度进行分析与评价，结果表明云南省西北部部分流域河流存在流量测验空白河流。根据成果提出站网优化调整对策。 关键词 :站网密度，目标评价，优化，调整
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user: 1. 引言 大理州、迪庆州、怒江州位于云南省西北部，北纬24˚40'~29˚15'和东经98˚07'~100˚18'之间，三个州横跨长江流域、怒江流域、澜沧江流域、红河流域、伊洛瓦底江流域，是云南省水资源比较丰富的几个州市。长江干流与澜沧江干流从西藏进入云南省迪庆州境内，怒江干流与伊洛瓦底江干流从西藏进入云南省怒江州境内，红河流域干流发源于云南省大理州巍山县。澜沧江干流、怒江干流、伊洛瓦底江干流和红河干流是云南省比较重要的跨界河流，对于水资源管理具有重要意义。通过近五年的“云南省中小河流水文监测系统建设项目”、“云南省州市界河控制断面新建水量监测点建设项目”及“国家地下水监测工程”等项目的实施，各类水文监测站大规模增加，使云南水文站网密度得到了极大的提升。云南省西北部水文站网分布如图1所示。从2009年至今，还没有对云南省各类水文监测站网进行过统一的、系统的、科学的分析与评价工作。本文对云南省西北部大理、迪庆、怒江州三个州境内的流域、河流、水利水电工程和水文站网进行调查，按流域与行政区对各类监测站网密度及布局进行分析，并根据完全水文空白河流与流量测验空白河流评价方法，按流域与行政区对河流的水文监测覆盖程度进行分析与评价，并根据相应成果提出站网优化调整对策。
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user: 2. 流域河流概况 云南省西北部共有河流387条，其中澜沧江流域面积为28，623 km 2 ，50 km 2 以上河流共有146条，3000 km 2 以上河流共有4条；长江流域面积为24，145 km 2 ，50 km 2 以上河流共有139条，3000 km 2 以上河流共有3条；红河流域面积为4310 km 2 ，50 km 2 以上河流共有29条，3000 km 2 以上河流共有2条；怒江流域面积为8833 km 2 ，50 km 2 以上河流共有61条，3000 km 2 以上河流共有2条；伊洛瓦底江流域面积为2154 km 2 ，50 km 2 以上河流共有12条，3000 km 2 以上河流共有1条。云南省西北部河流概况详见表1。 大理州面积为29，193 km 2 ，50 km 2 以上河流共有155条，3000 km 2 以上河流共有6条。迪庆州面积为23，860 km 2 ，50 km 2 以上河流共有142条，3000 km 2 以上河流共有3条。怒江州面积为15，012 km 2 ，50 km 2 以上河流共有90条，3000 km 2 以上河流共有3条。大理州、迪庆州、怒江州河流概况详见表2。
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user: 3. 水利水电开发概况 大理州、迪庆州、怒江州分别有各类水电站120座、74座、75座，合计269座。其中只有大理州有大(1) 图1. 云南省西北部水文站网分布图 型水电站2座，分别为功果桥电站、龙开口电站，其余都是中型水电站和小(1)型水电站。水电站密度，详见表3。大理州、迪庆州、怒江州分别有各类水库431座、4座、18座，合计453座。其中只有迪庆州有大(2)型水库1座，为小中甸水库，其余都是中型水库、小(1)型水库和小(2)型水库。水库密度，详见表4。 Table 1 Rivers in the northwest of Yunna 流域名称 河流总数(条) 各流域面积的河流数目/条 50~200 km 2 200~500 km 2 500~1000 km 2 1000~3000 km 2 3000 km 2 以上 澜沧江 146 114 17 3 8 4 长江 139 102 20 6 8 3 红河 29 19 5 1 2 2 怒江 61 53 4 2 0 2 伊洛瓦底江 12 6 4 0 1 1 合计 387 294 50 12 19 12 表1. 云南省西北部河流概况 Table 2 Rivers in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 河流总数(条) 各流域面积的河流数目/条 50~200 km 2 200~500 km 2 500~1000 km 2 1000~3000 km 2 3000 km 2 以上 大理州 155 110 23 6 10 6 迪庆州 142 111 17 5 6 3 怒江 90 73 10 1 3 3 合计 387 294 50 12 19 12 表2. 大理、迪庆、怒江州河流概况 Table 3 Hydropower stations in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 水电站数目(座) 各类水电站数目/座 大(1)型水电站 大(2)型水电站 中型水电站 小(1)型水电站 小(2)型水电站 大理州 120 2 0 12 106 未统计 迪庆州 74 0 0 15 59 未统计 怒江州 75 0 0 13 62 未统计 合计 269 2 0 40 227 未统计 表3. 大理、迪庆、怒江州境内水电站概况 Table 4 Reservoirs in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 水库数目(座) 各类水库数目/座 大(1)型水库 大(2)型水库 中型水库 小(1)型水库 小(2)型水库 大理州 431 0 0 18 55 358 迪庆州 4 0 1 1 1 1 怒江州 18 0 0 14 3 1 合计 453 0 1 33 59 360 表4. 大理、迪庆、怒江州水库概况
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user: 5. 水文站网河流控制目标评价 5.1. 评价基础与方法 河流水文控制目标评价就是针对测站对河流的覆盖程度进行评价，也就是测站支撑水文特征值空间关系描绘能力的评价 [ 2 ] 。本次红河流域水文站网调查，调查了流域面积在500 km 2 以上的河流及其水文站网设置的情况，并以此作为调查与评价对象。 本次评价采用的方法是完全水文空白河流评价和流量测验空白河流评价。 Table 1 1 Groundwater station network density in the northwest of Yunna 流域名称 站数 (处) 水利部门现有站 国家地下水监测工程 计算面积 (km 2 ) 密度 (站/1000 km 2 ) 水利部门 国土部门 澜沧江 17 0 5 12 28623 0.59 长江 9 1 4 4 24145 0.37 红河 4 0 4 0 4310 0.93 怒江 0 0 0 0 8833 0.00 伊洛瓦底江 0 0 0 0 2154 0.00 合计 30 1 13 16 68065 0.44 表11. 云南省西北部地下水站网密度 Table 1 2 Groundwater station network density in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 站数 (处) 水利部门现有站 国家地下水监测工程 计算面积 (km 2 ) 密度 (站/1000 km 2 ) 水利部门 国土部门 大理州 30 1 13 16 29193 1.03 迪庆州 0 0 0 0 23860 0.00 怒江州 0 0 0 0 15012 0.00 合计 30 1 13 16 68065 0.44 表12. 大理、迪庆、怒江州地下水站网密度 Table 1 3 Water quality station network density in the northwest of Yunna 流域名称 站数(处) 独立水质站 水文站、水位站 (带水质监测) 计算面积(km 2 ) 密度 (站/1000 km 2 ) 澜沧江 40 34 6 28623 1.40 长江 32 26 6 24145 1.33 红河 14 10 4 4310 3.25 怒江 9 7 2 8833 1.02 伊洛瓦底江 2 2 0 2154 0.93 合计 97 79 18 68065 1.43 表13. 云南省西北部水质站网密度 Table 1 4 Water quality station network density in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 站数(处) 独立水质站 水文站、水位站 (带水质监测) 计算面积(km 2 ) 密度 (站/1000 km 2 ) 大理州 56 45 11 29193 1.92 迪庆州 24 20 4 23860 1.01 怒江州 17 14 3 15012 1.13 合计 97 79 18 68065 1.43 表14. 大理、迪庆、怒江州水质站网密度 (1) (2) 其中R 1 为既无流量站也无雨量站、水位站，完全为水文空白区的河流所占比率；R 2 为仅有水位站、雨量站，缺乏流量的空白河流比率；N为评价的河流总数；n 1 为完全水文空白河流数；n 2 为水文部门已设水文(流量)站河流数；n 3 为完全由其他部门已设水文(流量)站控制河流数。 5.2. 评价结论 云南省西北部各流域参加评价的流域面积大于500 km 2 的河流共计43条，无完全水文空白河流。澜沧江流域流量测验空白河流有1条，为歪脚河，所占比例为6.7%；长江流域流量测验空白河流有5条，为中河、翁水河、浪都河、洛吉河和尼汝河，所占比例为29.4%；伊洛瓦底江流域流量测验空白河流有1条，为独龙江干流，所占比例为50%；红河流域和怒江流域无流量测验空白河流。云南省西北部各流域与各州市水质站网密度详见表15与表16。 云南省西北部各州市参加评价的流域面积大于500 km 2 的河流共计43条，无完全水文空白河流。大理州流量测验空白河流有2条，为澜沧江流域的歪脚河和长江流域的中河，所占比例为9.1%；迪庆州流量测验空白河流有4条，为长江流域的翁水河、浪都河、洛吉河和尼汝河，所占比例为28.6%；怒江州流量测验空白河流有1条，为伊洛瓦底江流域的独龙江干流，所占比例为14.3%。
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user: 6. 优化调整对策 6.1. 科学提高水文站网密度，优化完善站网布局 1) 在整个水文站网中，大河控制站居首要地位，根据当前云南省大理州、迪庆州、怒江州的水电开发情况，一些已达设站年限和设站目的且无特殊任务的大河控制站，可考虑撤销或搬迁。现状站点未达到设站目标的大 Table 1 5 Hydrologic control station with river basin area is more than 500 km2 in Yunna 流域名称 河流总数 完全水文空白河流 流量测验空白河流 河流数 R 1 比例(%) 河流数 R 2 比例(%) 澜沧江 15 0 0.0 1 6.7 长江 17 0 0.0 5 29.4 红河 5 0 0.0 0 0.0 怒江 4 0 0.0 0 0.0 伊洛瓦底江 2 0 0.0 1 50.0 合计 43 0 0.0 7 16.3 表15. 流域面积大于500 km 2 河流水文控制情况表 Table 1 6 Hydrologic control station with river basin area is more than 500 km2 in Dali， Diqing and Nujiang state 州市名称 河流总数 完全水文空白河流 流量测验空白河流 河流数 R 1 比例(%) 河流数 R 2 比例(%) 大理州 22 0 0.0 2 9.1 迪庆州 14 0 0.0 4 28.6 怒江州 7 0 0.0 1 14.3 合计 43 0 0.0 7 16.3 表16. 大理、迪庆、怒江州流域面积大于500 km 2 河流水文控制情况表 河干流，应根据设站目标，并结合目前水电梯级开发情况，确定布站数目，按上游稀、下游密原则合理布设控制站点 [ 3 ] ； 2) 对于流域面积500 km 2 以上的河流以及流域面积500 km 2 以下、且对水资源管理有重要需求的重点河流，应弥补水文空白区和流量测验空白区监测； 3) 随着近几年中小河流监测项目与山洪灾害项目建设，雨量站网密度大幅提高，达到控制局部强降水的需要，且满足山洪灾害防治需要，但缺乏合理的雨量站网布局，必须对雨量站网科学分析，优化并调整雨量站网布局； 4) 由于蒸发站点稀少、空间分布不均，且监测都是人工观测，效率低，在合理增加蒸发站点的同时，应加强蒸发观测新仪器新技术的使用与推广，特别是自动蒸发器的试验，以经济的投入，解放劳动力的同时，得到高精度的蒸发资料； 5) 部分城市发生洪涝灾害，且大理州、怒江州、迪庆州基本还未开展城市洪涝监测，必须同意规划、建设城市洪水监测站网，满足城市防洪需要。 6.2. 完善并加强州州市级与区县级行政区界水文站网 大理州、迪庆州、怒江州水资源丰富，水事矛盾不突出，目前对州市行政区界河流水文控制基本满足要求，但密度不高，区县级行政区界水资源监测站网是基本空白，随着最严格水资源管理制度的落实，对行政区界河流水量、水质监测控制需求更高。因此，应在现有水文站网的基础上，加强各级行政区域界水资源监测站网建设，优先完善州市级行政区界及水事矛盾突出区县级行政区界水资源监测站网，支撑最严格水资源管理制度的实施。 6.3. 加强地下水监测网和墒情监测网建设 1) 大理州地下水监测站网密度较低，迪庆州和怒江州无地下水监测站，且部分地区处于地下水限采区，为加快地下水监测网络建设，开展地下水动态监测，应加强地下水监测站网建设，提高地下水监测站网密度，最大限度满足流域水资源管理及监控地下水限采效果的需要。 2) 大理州有墒情监测站1个，由于仪器老化、年久失修，处于停用状态。迪庆州和怒江州无墒情监测站。由于墒情监测站网是抗旱工作的基础，且云南省近几年连续大旱，人民群众生命财产安全受到威胁，所以必须加大土壤墒情站点的布设和加强墒情信息与水文信息实时上报与分析工作。 6.4.有机结合水资源监测站网和水质监测站网 进行水资源监测站网规划时，应和现有的水质监测站网有机地结合起来，重点加强大中型灌区监测站网、重要入河排污口监测站网、重要取水口监测站网、水功能区监测站网以及重要供水源地监测站网的建设。 6.5. 改善水文测验方式，扩大水文资料收集范围 随着流域经济社会的快速发展、水资源利用程度的提高，社会对水文的需求越来越多，在现有水文站网的基础上，通过改革测验方式、增加巡测控制断面、推广应用先进水文监测仪器设备，进一步扩大水文监测范围，提高水文服务能力与水平 [ 4 ] 。
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user: 7. 结论 本文对云南省西北部大理、迪庆、怒江州三个州境内的流域、河流、水利水电工程和水文站网进行调查，按流域与行政区对各类监测站网密度及布局进行分析，结果表明云南省西北部除雨量站网、蒸发站网和地下水站网外的其它各类监测站网密度基本达到世界气象组织及《水文站网规划技术导则》规定的密度要求。并根据完全水文空白河流与流量测验空白河流评价方法，按流域与行政区对河流的水文监测覆盖程度进行分析与评价，结果表明云南省西北部部分流域河流存在流量测验空白河流。并根据上述成果提出站网优化调整对策。本文研究成果为今后云南西北部水文站网的规划及调整、防洪抗旱、水利规划设计、水资源开发利用管理等提供了技术支撑。
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user: 试论CBA外援暴力现象频发的原因
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user: 摘 要 随着CBA联赛的不断发展，竞技水平不断提高的同时也伴随着球场暴力现象的凸显，其中CBA联赛外援暴力事件在赛场上屡见不鲜。本文通过文献资料法，观看录像法，逻辑推理法对CBA2014-2015赛季外援暴力事件进行分析、探究，得出引起外援球场暴力事件的原因，并根据原因提出个相关的建议，为优化CBA赛场提供帮助。 关键词 :CBA联赛，外援暴力现象，原因
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user: 1. 引言 职业化的篮球竞赛是篮球运动发展过程中的产物，给人们带来愉悦和美的享受，更给人们带来刺激感。人们在享受着比赛的同时，也发现了篮球竞赛场上很多不和谐的东西，比如说球场暴力现象。这些不和谐现象不仅仅违背了竞技体育的精神，损坏了CBA的形象，更是与和谐体育、和谐社会的建设背道而驰。因此针对CBA2014-2015赛季外援的暴力事件的原因进行了研究，并提出营造和谐赛场环境的建议，以期为CBA联赛更好、更快、更健康的发展服务。
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user: 2. 研究对象与研究方法 2.1. 研究对象 CBA2014-2015赛季外援暴力现象。 2.2. 研究方法 本文通过文献资料法，查阅了大量相关的书籍及文献，并通过观看实战录像，运用逻辑推理的方法，对外援暴力现象进行了推理、演绎、归纳。
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user: 3. CBA2014-2015赛季外援暴力事件 CBA联赛第22轮四川与天津比赛还剩4分钟的时候，四川外援奥顿在突破中倒地，天津球员刘伟突然抬脚蹬踹了奥顿的腹部，奥顿随即起身抱住刘伟并用力击打其腿部一拳，引发了双方球员的混战，比赛被迫终断。 2014年12月7日，CBA山西与青岛的比赛进行到第三节还有39秒结束的时候，山西队的阿巴斯在篮下抢位时故意用右手肘部狠狠的击打了宋康明的后脑勺，后者倒地不起。 2014年12月12日，CBA联赛在东莞马可波罗对阵浙江广厦的时候，浙江小外援富兰克林对东莞球员赵杰恶意犯规之后，跑到新世纪的替补席前进行挑衅，一把打开了罗汉真的手，双方球员迅速冲到了一起，场面陷入混乱。 2014-2015CBA联赛，在进行到20轮的山东高速对阵江苏中天的比赛中，江苏队外援道格拉斯铁肘狠狠打在8号球员李敬宇的头部，随后李敬宇推搡了一下道格拉斯，前者随即把球狠狠的砸向李敬宇。 2014年12月21日，北京队对阵浙江队，北京队外援马布里上篮中一脚踹伤浙江队中锋张大宇，令后者难以继续比赛。裁判并未判罚犯规，但马布里的“黑腿”一时间引发全国范围内的争议。 2014年12月6日，新疆队对阵北京队，新疆队外援布拉奇卡了北京队朱彦西的脖子，导致现场一片混乱，比赛中断长达22分钟。
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user: 5. 结论 造成CBA外援暴力事件的原因是多方面的，从自身讲，球员自身文化素养不高；在经济利益的冲击下道德观念和价值观的扭曲；超强的个人进攻和防守能力，被视为严防死守的对象。CBA联赛的裁判存在着个人业务水平不高，在比赛中出现漏判，错判的现象，导致球员在场上动作不检点或过大，从而引起外援暴力事件的发生。篮球运动本身是一项同场对抗的竞技性项目。随着篮球运动的不断发展，篮球竞赛的对抗性越来越明显，身体频繁的接触，是导致外援球场暴力的另一个原因。球场不良的看台文化是引起外援情绪失控，爆发冲突的。赛产温度和嘈杂的环境导致球员唤醒水平升高，产生不良的情绪。此外还有赛场解说声、助威声、呐喊声、哨声以及可能出现的噪音等造成赛场环境嘈杂，比分差距拉大、技术失误、，场地服务人员水平低等等。