DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 实验与分析 4.1. 数据准备 进行三维重建相片采集前必须对相应的数码设备进行相机检校 [ 6 ] 。然后使用手机或数码相机对目标物体按要求进行拍照；即目标物体与摄像头像平面之间的夹角控制在45度以下，对目标物体的姿势与位置进行对角度拍摄(最好全方位360˚)，进行目标物体拍摄时注意照片之间的交叠面积，注意摄像头分辨 率的设置。相片质量对相机内外参数提取精度十分重要。本文使用手机对目标物体水杯进行拍摄，拍摄有80张相片。相片样品如图2所示。 将拍摄得到所有相片导入SFM进行点云的处理。首先进行相片特征点的提取与匹配。由于手机拍摄的相片的不稳定因素多且误差大，而基于SURF的特征点检测方法具有良好的提取精度和鲁棒性，又加快了速度，且应用广泛。因此，本文特征点的提取使用的是SURT函数。然后使用OpenCV中的FlannBasedMatcher进行特征点的匹配。影像匹配 [ 7 ] [ 8 ] 可以适当借鉴全景影像的研究，有利于研究进展。 根据所得的匹配结果，利用射影定理得到相机的位置信息称稀疏重建。稀疏重建过程使用了PnP函数，而Lepetit和Moreno提出的透视成像摄像机高精度快速位姿估计算法EPnP (Efficient Perspective-n-point)效率和鲁棒性都得到了提高 [ 9 ] ，可得到较好的重建效果。结果的衡量标准常用基于Lecenberg-Marquardt算法的Bundler。进行稀疏重建的结果如图3所示。 稀疏重建得到了相机的位置信息，然后根据场景信息与原始照片，得到目标物体水杯的3D点云信息，即密集重建过程。密集重建运用多视立体重建(Multi-view Stereo Reconstruction)得到3D点云。处理图像精度的重建精度、执行效率和完整性对点云质量有影响，目前使用的算法有CMVS和PMVS，而本实验所用的密集重建方法为CMVS。密集重建的结果是一系列点云，三维重建结果可用其他三维建模软件进行显示，进行表面纹理贴图，目前常用的算法是泊松表面重建算法。 4.2. 三维重建结果 将拍摄的所有相片进行特征点提取与匹配，然后三维重建。拍摄照片的数量，拍摄时的稳定程度和角度，目标物体周围环境都会对三维建模的结果产生影响。本实验将三维重建结果的点云图用MeshLab软件进行显示，结果如图4所示。 图1. 多目重建流程图 图2. 二维非量测相片 图3. 稀疏重建 图4. 三维重建图像 在MeshLab软件中，可以对重建的三维点云图进行贴图渲染等操作，进而得到视觉效果较好的三维图像。 理想情况下，三维重建模型应与真实目标物形状、大小等一致或成比例，但在实际操作过程中，由于数据源、构建方法等各种问题，会出现一定的差异 [ 10 ] 。将三维重建的结果图与实物进行对比，可知此实验结果有诸多“粗差”点，使三维重建结果显示比较混乱，这与相机拍摄的标准与质量有莫大的关系，且与处理过程使用的函数算法有关。目前三维重建技术还处于初级发展，而精度的提高是三维建模重中之重。此外，目前复杂物体的三维重建只是显示物体的本貌，并不能智能显示目标物体的具体地理位置、尺寸大小等属性信息。
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user: 5. 结束语 基于非量测相片的三维重建可谓是新起之秀，此方法自动化高，可操作性强，适用范围广，但是算法复杂，精度低，无成型的智能软件。基于该方式的三维模型重建具有很高的实用性，可用于古文物保护、工艺品生产、工业零件检测等多领域，应用前景广阔。本文通过系统性介绍三维重建过程，并进行了实验，表明此方法可行，且对目标物体的三维重建效果好。
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user: 摘 要 目的：观察氟、砷联合作用对体外培养人成骨细胞活性的影响，从而探讨氟、砷对骨的作用，砷是否对氟骨病有一定的影响。方法：体外培养人成骨细胞，氟对人成骨细胞的作用终浓度分别为10 mg/L、1 mg/L、0.1 mg/L、0 mg/L，砷对人成骨细胞的作用终浓度分别为1 mg/L、0.1 mg/L、0.01 mg/L、0 mg/L，相互交叉作用于人成骨细胞，观察细胞形态变化。结果：砷浓度为1 mg/L与各浓度氟联合作用时，各组细胞全部死亡。砷浓度为0.1 mg/L与各浓度氟联合作用于人成骨细胞，可见部分细胞死亡，细胞形态较完整，可见细胞核，周围少量细胞碎片。砷浓度为0.01 mg/L、砷浓度为0 mg/L与氟浓度为10 mg/L联合作用于人成骨细胞时，显微镜内可见少量细胞死亡及少许细胞碎片。其余联合实验组镜下可见较多人成骨细胞，轮廓清晰，细胞核完整，未见明显细胞碎片。结论：氟砷联合作用时，对人成骨细胞毒性一定程度的增加。 关键词 :氟，砷，人成骨细胞，细胞活性，细胞形态 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 地方性氟中毒可损伤全身各个系统及器官。慢性氟中毒引起的以骨骼损害尤为严重，称之为氟骨症。近年来，有研究发现氟中毒病区大都存在氟砷联合中毒，其患者出现氟骨症、骨质疏松加重现象 [ 1 ] [ 2 ] 。因此，同时考虑氟和砷对骨骼的影响，以及砷在氟骨症中的作用，对于阐明氟骨症、骨质疏松等骨骼疾病非常重要。本研究通过细胞实验对成骨细胞在氟砷联合中毒的作用机制做初步探讨。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验材料 2.1.1. 细胞株 SV40转染人成骨细胞hFOB1.19 (中国医学科学院上海细胞库)。 2.1.2. 药品和主要试剂 氟化钠(NaF，天津科密欧化学试剂有限公司)；亚砷酸钠(NaAsO 2 ，国药化学试剂有限公司)；碳酸氢钠(NaHCO 3 ，上海虹光化工厂)；甲醇(上海振兴化工一厂)；DMEM/F12培养基、胎牛血清(Gibco公司，USA)；G418、青链霉素混合液、姬姆萨染液、谷氨酰胺、胰蛋白酶、二甲基亚砜、四甲基噻唑兰(北京索莱宝科技有限公司)。 2.1.3. 器材 RT-6000酶标分析仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司)；TS-8型转移振荡器(其林贝尔仪器制造有限公司)；SW-CJ-IFD型洁净工作台(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)；TG-16W台式高速离心机(长沙湘智离心机仪器有限公司)；8MCO-15AC二氧化碳培养箱(日本SANYO公司)；TE2000-U倒置荧光显微镜(日本Nikon公司)；AB104-N型电子分析天平(梅特勒-托利多仪器)。 2.2. 实验方法 2.2.1. SV40转染人成骨细胞的培养 SV40转染人成骨细胞hFOB1.19用含10%胎牛血清和青、链霉素100 U/mL的D-MEM/F-12培养基中，置33.5℃、5% CO 2 的饱和湿度培养箱培养，取对数生长期细胞用于实验。 2.2.2. 人成骨细胞96孔板模型的建立 调整hFOB1.19细胞浓度为1.0 × 10 5 个/mL，96孔培养板上每孔接种1.0 × 10 4 个细胞，置33.5℃、5% CO 2 的饱和湿度培养箱培养24小时。用D-MEM/F-12完全培养基调整氟浓度为20 mg/L、2 mg/L、0.2 mg/L，调整砷浓度分别为2 mg/L、0.2 mg/L、0.02 mg/L。 弃去96孔板中培养基，分别以各浓度氟、砷离子工作液各100 μL交叉加入细胞孔内，每联合组各加3个副孔。加氟或砷后，各孔内氟对人成骨细胞的作用终浓度分别为10 mg/L、1 mg/L、0.1 mg/L、0 mg/L，砷对人成骨细胞的作用终浓度分别为1 mg/L、0.1 mg/L、0.01 mg/L、0 mg/L，相互交叉作用。详见表1。 分别在作用24 h、48 h、72 h后每孔加入MTT工作液各10 μl (5 mg/mL)，继续培养4 h后，弃去各孔内上清，加入DMSO 200 μL/孔后在振荡器上震荡10 min，酶标仪上测OD值，并计算细胞抑制率(%)。实验重复3次。 细 胞 抑 制 率 = 对 照 孔 平 均 O D − 实 验 孔 平 均 O D 对 照 孔 平 均 O D × 100 % 2.2.3. 氟、砷联合对人成骨细胞细胞形态的影响 弃去上清，灭菌PBS清洗2遍后，每孔加入200 μl的PBS浸润细胞，置显微镜下观察细胞形态并拍照。弃去PBS后加入甲醇10 uL/孔，静置1~2 min后甲醇自然挥发后加入配置好的姬姆萨工作液200 uL/孔，静置染色12 min后弃去染液，用双蒸水反复清洗4~5次，置显微镜下观察细胞形态并拍照。 2.2.4. 统计方法 采用SPSS 16.0建立数据库，定量实验数据均以( x ¯ ± s )表示，进行方差分析和t检验。
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user: 3. 结果 3.1. 氟、砷及其联合作用对人成骨细胞活性的影响 氟、砷及其联合作用于人成骨细胞24 h后，仅砷1 mg/L氟10 mg/L联合作用孔OD相对于对照孔明显下降，其他剂量的氟、砷单独或联合在作用24 h后对细胞没有明显的杀伤作用。 氟、砷及其联合作用于人成骨细胞48 h后，砷1 mg/L及其联合氟10、1、0.1 mg/L时，OD值明显低于对照孔，其他剂量的氟、砷单独或联合在作用48 h后对细胞没有明显的杀伤作用。 氟、砷及其联合作用于人成骨细胞72 h后，砷1 mg/L及其联合氟10、1、0.1 mg/L时，OD值明显低于对照孔，同时砷1 mg/L氟10 mg/L组的OD也明显低于对照孔。结果见表2和表3。 Table 1 Groups of fluorine and arsenic on HO 组别 NaF(mg/L， F − ) NaAsO 2 (mg/L， As 5+ ) 高氟高砷 10 1 高氟中砷 10 0.1 高氟低砷 10 0.01 高氟 10 0 中氟高砷 1 1 中氟中砷 1 0.1 中氟低砷 1 0.01 中氟 1 0 低氟高砷 0.1 1 低氟中砷 0.1 0.1 低氟低砷 0.1 0.01 低氟 0.1 0 高砷 0 1 中砷 0 0.1 低砷 0 0.01 对照 0 0 表1. 氟、砷联合对人成骨细胞作用的分组 Table 2 The OD value of HOB on fluorine and arsenic ( x ¯ ± s 组别 NaF(mg/L， F − ) NaAsO 2 (mg/L， As 5+ ) 24 h OD值 48 h OD值 72 h OD值 高氟高砷 10 1 0.248 ± 0.005 **## 0.189 ± 0.012 **## 0.193 ± 0.037 **## 高氟中砷 10 0.1 0.270 ± 0.017 0.253 ± 0.021 0.200 ± 0.030 **## △△ 高氟低砷 10 0.01 0.267 ± 0.011 0.259 ± 0.015 0.279 ± 0.031 高氟 10 0 0.262 ± 0.024 0.255 ± 0.029 0.234 ± 0.018 △△ 中氟高砷 1 1 0.286 ± 0.036 0.204 ± 0.020 **## 0.213 ± 0.035 **## 中氟中砷 1 0.1 0.280 ± 0.009 0.274 ± 0.024 0.296 ± 0.038 中氟低砷 1 0.01 0.283 ± 0.026 0.267 ± 0.018 0.334 ± 0.039 中氟 1 0 0.267 ± 0.015 0.277 ± 0.029 0.293 ± 0.023 △ 低氟高砷 0.1 1 0.269 ± 0.027 0.193 ± 0.017 **## 0.179 ± 0.032 **## 低氟中砷 0.1 0.1 0.278 ± 0.009 0.259 ± 0.018 0.283 ± 0.032 低氟低砷 0.1 0.01 0.274 ± 0.019 0.270 ± 0.022 0.324 ± 0.043 低氟 0.1 0 0.313 ± 0.059 0.255 ± 0.057 0.292 ± 0.021 △ 高砷 0 1 0.231 ± 0.023 *# 0.200 ± 0.021 **## 0.197 ± 0.013 **## 中砷 0 0.1 0.265 ± 0.020 0.258 ± 0.020 0.292 ± 0.021 低砷 0 0.01 0.259 ± 0.026 0.269 ± 0.028 0.298 ± 0.019 对照 0 0 0.286 ± 0.019 0.283 ± 0.013 0.342 ± 0.023 表2. 氟、砷联合对人成骨细胞作用的OD值( x ¯ ± s ) 注：与0浓度氟0浓度砷组相比， * P < 0.05， ** P < 0.01；与同浓度氟0浓度砷组相比， # P < 0.05， ## P < 0.01；与0浓度砷同浓度氟组相比， △ P < 0.05， △△ P < 0.01。 Table 3 The inhibitory effect of fluorine and arsenic on HO 组别 NaF(mg/L， F − ) NaAsO 2 (mg/L， As 5+ ) 24 h抑制率 48 h抑制率 72 h抑制率 高氟高砷 10 1 13.29% 33.22% 43.57% 高氟中砷 10 0.1 5.59% 10.60% 41.52% 高氟低砷 10 0.01 6.64% 8.48% 18.42% 高氟 10 0 8.39% 9.89% 31.58% 中氟高砷 1 1 0.00% 27.92% 37.72% 中氟中砷 1 0.1 2.10% 3.18% 13.45% 中氟低砷 1 0.01 1.05% 5.65% 2.34% 中氟 1 0 6.64% 2.12% 14.33% 低氟高砷 0.1 1 5.94% 31.80% 47.66% 低氟中砷 0.1 0.1 2.80% 8.48% 17.25% 低氟低砷 0.1 0.01 4.20% 4.59% 5.26% 低氟 0.1 0 −9.44% 9.89% 14.62% 高砷 0 1 19.23% 29.33% 42.40% 中砷 0 0.1 7.34% 8.83% 14.62% 低砷 0 0.01 9.44% 4.95% 12.87% 对照 0 0 - - - 表3. 氟、砷联合作用对人成骨细胞的抑制率 3.2. 氟、砷及其联合作用对人成骨细胞形态的影响 氟砷交叉联合作用于人成骨细胞48 h后，使用姬姆萨染液进行细胞染色。分别使用显微镜进行10倍、40倍放大显示后拍照。图中见，高砷(砷1 mg/L)与各浓度氟联合作用时，各组均未见完整细胞，见少许细胞碎片。中砷(砷0.1 mg/L)与各浓度氟联合作用于人成骨细胞，可见少量散在完整细胞，细胞核完整，周围少量细胞碎片。低砷(砷0.01 mg/L)、无砷与高氟(氟10 mg/L)联合作用于人成骨细胞时，显微镜内可见少量散在细胞及少许细胞碎片。余联合实验组镜下可见较多人成骨细胞，轮廓清晰，细胞核完整，未见明显细胞碎片。结果见图1和图2。
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user: 4. 讨论 大量研究证实，适量的氟促进成骨细胞分化，过量氟却可引起骨骼损害 [ 3 ] [ 4 ] 。而尚未有文献报道砷对骨的直接损害，仅动物实验发现五价砷可蓄积在骨骼中。但是，氟砷联合中毒病区，往往存在氟骨症加重现象 [ 5 ] 。有学者报道氟砷暴露水平与Runt相关转录因子2 (Runx2)、尿I型胶原交联氨基末端肽(UNTX)等多种骨代谢指标存在交互作用 [ 6 ] [ 7 ] 。然而，氟砷联合中毒在人群调查、动物实验及细胞实验中结论不完全一致，砷如何会影响氟骨症尚不十分清楚，氟、砷的相互作用十分复杂，又缺乏统一的标准。本研究试图寻找氟、砷联合作用导致成骨细胞损害的作用浓度和时间，探索砷影响氟骨病发生、发展的有力依据。 本研究结果表明，随着氟砷联合作用于人成骨细胞的时间延长，对细胞杀伤作用增强。作用24 h后，高氟高砷组有统计学变化；作用48 h后，中氟高砷组、低氟高砷组有统计学变化；作用72 h后，高氟中砷组有统计学变化。 图1. 氟砷联合作用48 h对人成骨细胞形态的影响(×10) 图2. 氟砷联合作用48 h对人成骨细胞形态的影响(×40) 本研究的细胞染色图片显示，在氟单独作用下，细胞质和细胞核没有因氟的作用而破坏；在砷单独作用下，细胞核和细胞质的完整性随着砷的浓度增加逐渐降低。中浓度的砷与各浓度氟联合作用下，高氟中砷、中氟中砷对细胞质和细胞核均有一定破坏，而中砷联合低氟和无氟均未出现明显联合作用。 在一定范围内，随着氟浓度的增加，人成骨细胞活性呈现先抑制后无效，再到抑制的过程。低氟与高氟明显抑制人成骨细胞活性。砷在一定范围内具有成骨细胞毒性。高砷(≥1 mg/L)对人成骨细胞的作用是致死性的，随着砷浓度减低，其毒性迅速下降，当接近0.1 mg/L时，无明显细胞毒性。氟砷联合作用十分复杂，短期氟砷联合对人成骨细胞作用不明显；中期时砷对人成骨细胞的毒性明显，适量氟(1 mg/L)对砷的毒性作用有明显的抑制作用；而长期高氟与中砷可形成毒性的叠加。低氟与中砷又无明显叠加效果。目前对氟、砷对骨影响的研究只是冰山一角，我们需要更多研究来进一步了解氟砷联合作用对骨的毒性。
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user: 摘 要 目的：研究CEA-EPO质粒的构建及诱导造血干细胞定向生成红细胞疫苗抗结肠癌的研究。方法：将EPO-cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点，用CEA基因启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子，构建成CEA-EPO重组质粒。用含抗体CD117磁珠分离纯化和收集小鼠骨髓造血干细胞，用重组腺病毒法将CEA-EPO基因体外转染CEA-EPOmRNA基因到造血干细胞内，检测CEA-EPO基因和蛋白表达，将疫苗注入小鼠体内，进行扩增，使造血干细胞定向生成携带CEA-EPO双基因红细胞，经过提取和纯化获得CEA-EPO基因共转染红细胞疫苗，再进行双基因共转染红细胞疫苗的体外和体内实验。结果：成功收集造血干细胞，流式细胞仪分析结果表明：纯化前后有明显差异(P < 0.05)；检测CEA-EPOmRNA和蛋白表达的结果表明：造血干细胞体外转染CEA-EPOmRNA基因成功，获得CEA-EPO双基因共转染红细胞疫苗；应用细胞红系相关标志抗体GPA和CD71标记，利用流式细胞证实红细胞疫苗培养成功；研究相关疫苗激活的单核细胞对结肠癌细胞株CT26细胞杀伤作用表明：在比例为40:1时，CEA-EPO疫苗组杀伤作用为57.34 ± 1.13，高于空载组、CEA疫苗组和EPO疫苗组(P < 0.05)，体内试验的成瘤性研究表明：CEA-EPO疫苗组肿瘤的生长的大小为0.29 ± 0.11 (cm 3 )；高于其他各组的大小(P < 0.05)，CEA-EPO疫苗组的成活期分别为：69 ± 6.91天，高于其他各组的大小(P < 0.05)；CEA-EPO疫苗组在肿瘤大小和小鼠的生存时间上，与空载组、CEA疫苗组，EPO疫苗组之间差异有统计学意义(P < 0.05)。结论：携带CEA-EPO双基因肿瘤抗原的红细胞疫苗对结肠癌有明显的抗肿瘤作用，既可以诱导造血干细胞定向分化成红细胞疫苗，又可以合成肿瘤抗原的红细胞疫苗，是临床治疗结肠的重要疫苗。 关键词 :cDNA，CEA-EPO基因，转染，红细胞疫苗，结肠癌 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 癌胚抗原(eareinoembryonic antigen， CEA)，主要表达于结肠等消化道肿瘤中而不表达于成人正常组织，目前，在应用于临床的结直肠癌肿瘤标志物中，血清癌胚抗原是最重要的一种，血清CEA水平能预测结直肠癌的预后及复发，文献表明它能诱发结肠癌机体特异性免疫反应，因此，CEA启动子可用作肿瘤靶向治疗的工具，启动下游杀伤基因特异性表达于肿瘤细胞，从而避免损伤正常细胞 [ 1 ] 。造血干细胞(Hematopoietic stem cell， HSC)具有自我更新和分化为血液及免疫系统中各种成熟细胞的能力因而成为基因治疗理想的细胞疫苗；红细胞生成素(erythropoietin， EPO)是造血分化中的主要刺激因子，能促进造血干细胞向原始红细胞分化，加速幼红细胞的分裂、增殖，促进血红蛋白的合成，在红细胞疫苗诱导分化研究中发挥重要的作用 [ 2 ] 。本研究建立了转CEA及EPO双基因的造血干细胞，既可以诱导造血干细胞定向分化成红细胞疫苗，又可以合成肿瘤抗原的红细胞疫苗，有望合成一种多功能的红细胞疫苗，在抗结肠癌治疗中发挥重要的作用。
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user: 3. 结果 3.1. 造血干细胞的磁珠纯化和收集 流式细胞仪分析结果：免疫磁珠纯化前CD117阳性CD117阳性细胞纯度由36.88% ± 4.51%提高到纯度为(90.28 ± 3.77)%，纯化前后有明显差异(P < 0.05)。 3.2. 检测CEA-EPO mRNA和蛋白表达 RT-PCR结果显示，在598 bp和630 bp处扩增获得特异性目的片段，表明转染的CEA-EPO基因成功。用Westernblot方法检测未转染、转染空载体和转染CEA-EPO慢病毒表达载体的造血干细胞中CEA-EPO表达水平。结果显示，转染CEA-EPO的造血干细胞中可检测到CEA-EPO的表达，未转染和转染空载体的无CEA-EPO的表达(图1)。 · 病毒转染效率 倒置相差显微镜观察显示：空载GFP质粒转染组无荧光表达，CEA-EPO转染组可见大量绿色荧光(如图2所示)，提示重组腺病毒成功转染细胞。 图1. (a) 检测EPO和CEA基因的表达；(b) Westernblot方法检测 CEA和 EPO蛋白表达 图2. CEA-EPO 转染组可见大量绿色荧光 3.3. CEA-EPO基因转染红细胞疫苗的获得 收集各组从Balb/c小鼠外周血和脾脏得到的红细胞疫苗，用用表达CEA及EPO抗体的免疫磁珠分离，应用细胞红系相关标志抗体GPA和CD71标记，通过流式细胞仪进行分析GPA和CD71的结果如下(见表1)：表明C组单纯EPO转染组和D组CEA-EPO转染组可以有效地向红细胞定向转化。 3.4. 双基因共转染红细胞疫苗的体外实验 CEA-EPO基因共转染红细胞疫苗激活的单核细胞对CT26细胞的杀伤作用，见表2，疫苗刺激增殖的单核细胞对CT26细胞的杀伤作用明显高于其他对照组，为57.34 ± 1.13%，(p < 0.05)，而其他组(1:10， 1:20， 20:1)共转染组的杀伤作用没有统计学意义，在比例为40:1时，表明淋巴细胞:肿瘤细胞在40:1比例时，疫苗刺激增殖后的单核细胞对结肠癌细胞的杀伤具有明显特异性。 3.5. CEA-EPO转染红细胞疫苗的体内实验 结果表明：双基因共转染红细胞疫苗对肿瘤成瘤性有明显的影响，经过计算，肿瘤的生长的大小分别为：空载组1.33 ± 0.11、CEA-疫苗组1.27 ± 0.27，EPO疫苗组1.65 ± 0.22，CEA-EPO疫苗组0.29 ± 0.11 (cm 3 )；各组小鼠的成活期分别为：空载组35.1±9.16天、CEA组36.23±2.88天、EPO疫苗组35.91±2.11天、CEA-EPO疫苗组69 ± 6.91天。肿瘤的生长情况及小鼠的生存时间见图3和图4。CEA-EPO疫苗组 Table 1 The positive of GPA and CD71 of erythrocyte vaccine（% GFP质粒组 CEA转染组 EPO转染组 CEA-EPO转染组 GPA 23.14 ± 1.43 31.89 ± 2.12 69.17 ± 4.31 82.31 ± 7.11 * CD71 32.87 ± 3.54 43.77 ± 2.13 59.33 ± 3.99 71.11 ± 5.54 ** 表1. 红细胞疫苗GPA和CD71阳性率(%) * 分别与其他组相比，p < 0.05； ** 分别与其他组相比，p < 0.05 Table 2 Mononuclear cells in peripheral blood to activate cytotoxic lymphocytes (CTL) to CT26 (χ ± s 淋巴细胞:肿瘤细胞 空载组 CEA疫苗组 EPO疫苗组 CEA-EPO疫苗 1:10， 10.451 ± 1.11 14.99 ± 2.21 11.89 ± 1.42 13.89 ± 2.21 △ 1:20， 16.89 ± 3.72 17.15 ± 5.11 12.59 ± 3.11 24.32 ± 3.11 ▲ 20:1， 19.11 ± 3.43 12.04 ± 3.11 17.02 ± 2.12 29.09 ± 1.21 ● 40:1 17.15 ± 1.31 17.11 ± 5.22 26.11 ± 4.78 57.34 ± 1.13 * 表2. 疫苗激活的单核细胞对CT26细胞的杀伤作用(%) (χ ± s) * 分别与其他组相比，p < 0.05； △▲● 分别与其他组相比，p > 0.05 图3. 双基因共转染红细胞疫苗对肿瘤成瘤大小的影响 图4. 双基因共转染红细胞疫苗对小鼠的生存时间的影响 在肿瘤大小和小鼠的生存时间方面，与空载组、CEA疫苗组，EPO疫苗组之间差异有统计学意义(P < 0.05)。
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user: 4. 讨论 采用非基因修饰方法携带肿瘤抗原的红细胞作为免疫疫苗治疗肿瘤的研究在国外已有报道，携带抗原的红细胞可以诱导机体产生免疫反应的现象早已在医学界引起关注 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] ，红细胞源于骨髓多能造血干细胞，是血液中数量最多的一种血细胞，在全血中容积百分比约为50%，通过血红蛋白起着运输氧和二氧化碳的重要生理功能，红细胞输注是目前治疗贫血的常用手段。已进入临床试验阶段的肿瘤疫苗主要有树突状细胞疫苗、DNA肿瘤抗原疫苗、肿瘤抗原蛋白或肽为基础的疫苗、自体或异体的肿瘤细胞疫苗和病毒携带肿瘤抗原疫苗，目前还没有哪一种疫苗治疗结肠癌有明显的疗效 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] ，结肠癌的免疫治疗依然有待我们去研究，红细胞疫苗治疗肿瘤有重要的前景。 研究表明，与供体红细胞结合的抗原可以通过交叉激活进入受体抗原递呈细胞的主要组织相容性抗原(MHC-I)通路，从而导致受体CD8+T细胞对供体抗原特异性的激活和增殖。此外，抗原与细胞结合可以使其通过MHC-I交叉激活CD8+T细胞的效率增加，这些数据充分地证明采用携带抗原的红细胞作为肿瘤疫苗的可行性 [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] 。 促红细胞生成素(EPO)是一种小分子糖蛋白感应激素，参与调节许多细胞的生长发育过程，能促进血管再生和神经发育等。促红细胞生成素是促进红系祖细胞的增殖、分化和红细胞成熟的主要刺激因子，EPO能促进造血干细胞向原始红细胞分化，加速幼红细胞的分裂、增殖，促进血红蛋白的合成，红细胞疫苗能抑制淋巴细胞增生，促进静止和效应性T细胞、NK细胞和成熟树突状细胞抗肿瘤癌免疫作用。我们在本项的研究中发现：携带肿瘤抗原的红细胞可以通过EPO基因修饰胚胎干细胞、诱导多能干细胞或造血干细胞及其在体外红细胞分化大量产生 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 。 癌胚抗原是一种分子量为150~300 kD的糖蛋白，45%为蛋白质，其它为岩藻糖，甘露糖，半乳糖以及唾液酸。CEA属于免疫球蛋白IG超基因家族的成员，人类CEA家族含29个基因，其中18个基因表达。CEA的编码基因位于19号染色体。癌胚抗原是最早被发现和鉴定的肿瘤相关抗原之一，1965年Gold和Freedman首先自人结肠癌组织发现，是胚胎性致癌抗原，主要存在于胎儿消化道上皮组织、胰脏和肝脏，正常成人血清中CEA含量极低。对于结直肠癌的诊断，临床可以应用的有价值的肿瘤标志物很少，但血清CEA在结直肠癌预后、复发的评估中发挥重要作用 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] ；CEA在正常人体内扮演着非特异性防御作用的角色，而在肿瘤患者中主要起调节肿瘤细胞对细胞毒性淋巴细胞敏感性的作用，使肿瘤细胞逃避免疫攻击。癌胚抗原对大肠癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物。由于CEA的免疫原性很弱，一般不能引起机体产生有效的免疫反应，因此机体的免疫系统无法识别肿瘤细胞表面的癌胚抗原，使肿瘤细胞逃避了免疫系统的杀伤，因此增强CEA的免疫原性，诱导机体产生特异性的免疫反应成为肿瘤治疗的一个新的靶点 [ 18 ] [ 19 ] 。 由于其表达量远高于端粒酶且在相应的正常组织细胞中没有表达，说明该基因启动子的应用有可能提高肿瘤细胞内目的基因表达水平，从而起到特异和高效治疗作用。本试验成功扩增了1 kb大小CEA启动子片断，构建了CEA启动子真核表达载体，所构建的CEA启动子有较强的启动活性，将EPO-cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点，用CEA基因启动子替代pcDNA3.1质粒的CMV启动子，构建成CEA-EPO重组质粒。并且，将CEA启动子连接到EPOcDNA上游，构建表达载体。我们将CEA-EPO基因导入造血干细胞后，利用RT-PCR在mRNA水平检测到CEA-EPO的表达，说明CEA-EPO的转染成功。 我们的研究发现：携带CEA-EPO双基因肿瘤抗原的红细胞疫苗对结肠癌有明显的抗肿瘤作用，既可以诱导造血干细胞定向分化成红细胞疫苗，又可以合成肿瘤抗原的红细胞疫苗，是临床治疗肿瘤的理想疫苗。 骨髓细胞中造血干细胞含量少是分离纯化的困难之一，造血干细胞约占骨髓有核细胞的0.5%，而在外周血中的含量更低，我们的研究结果表明：免疫磁珠分离法、造血干细胞表面特异的抗原标记法、单克隆抗体特异性结合法，再借助抗体上的磁珠在磁场中进行分离，技术简单、易行、对细胞活力影响小，获得造血干细胞的纯度高 [ 20 ] [ 21 ] ，我们利用携带CEA-EPO基因构建肿瘤抗原的红细胞疫苗的方法可以在结肠癌的基因治疗。 本项目的结果表明：我们收集造血干细胞，并且定向转化成转染CEA-EPOmRNA基因的红细胞疫苗，流式细胞仪分析结果表明：纯化前后有明显差异(P < 0.05)；检测CEA及EPOmRNA和蛋白表达的结果表明：造血干细胞体外转染CEA-EPOmRNA基因成功，获得CEA-EPO基因共转染红细胞疫苗；应用细胞红系相关标志抗体GPA和CD71标记，红系相关标志GPA和CD71的表达比率明显高于对照组。流式细胞证实红细胞疫苗培养成功；研究相关疫苗激活的单核细胞对结肠癌细胞系CT26细胞杀伤作用表明：在比例为40:1时，CEA-EPO疫苗组杀伤作用为57.34 ± 1.13%，高于空载组、CEA疫苗组和EPO疫苗组(P < 0.05)，体内试验的成瘤性研究表明：CEA-EPO疫苗组肿瘤的生长的大小为0.29 ± 0.11 (cm 3 )；高于其他各组的大小(P < 0.05)，CEA-EPO疫苗组的成活期分别为：69 ± 6.91天，高于其他各组的大小(P<0.05)；CEA-EPO疫苗组在肿瘤大小和小鼠的生存时间上，与空载组、CEA疫苗组，EPO疫苗组之间差异有统计学意义(P < 0.05)。 本实验采用免疫磁珠阳性选择法分选HSC，从小鼠股骨、胫骨可收集HSC，先进行系别细胞去除的阴性分选，磁性标记后去除系别细胞，根据CD117的表达对这些细胞做进一步的磁珠阳性分选，从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。 在本项研究携带CEA-EPO的红细胞的抗肿瘤作用在小鼠结肠癌模型进行了研究，这一治疗效果对发展更加有效的新型肿瘤疫苗具有重要的意义，我们认为：采取基因修饰的方法获得的携带抗原的红细胞有以下优点：携带抗原的红细胞可通过基因修饰胚胎干细胞、诱导多能干细胞或造血干细胞在体外大量产生；与使用其他方法获得的携带抗原的红细胞相比，基因修饰表达肿瘤抗原的红细胞可以同时表达促进交叉激活的共刺激免疫分子，进一步增强免疫反应，使肿瘤疫苗达到更好的疗效，本研究建立了转CEA及EPO双基因的造血干细胞的红细胞疫苗，有望在抗结肠癌治疗中发挥重要的作用。
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user: 摘 要 伴随着专利集中战略的扩张和专利诉讼中的利益获取手段被挖掘，囤积大量专利并以此作为诱饵开展诉讼活动的专利海盗不断增加，甚至一些以创新为原始目的的专利运营实体也开始参与进来。大量的侵权主张使得科技创新实体苦不堪言，而专利海盗却得到了丰厚的利润。制度对专利权的保护已经开始向遏制创新进行异化。“海盗行为”与正当专利维权诉讼的界线模糊以及专利海盗不断更新的获利手段导致其定性的困难。本文试图对专利海盗的范畴进行较为合理地界定，并在此基础上提出一些解决专利海盗问题的方案。 关键词 :专利海盗，范畴，法律规制 Copyright © 2018 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 专利海盗(Patent Trolls)的问题源自NPE (Non-Practicing Entities)，即非专利实施主体。NPE在20世纪末开始出现，主流观点认为这与美国在八十年代开始施行的“亲专利”政策息息相关，即在急剧扩大专利申请数量的同时并未严格确保专利质量。这种问题同样出现在了今天的中国。根据Patent Freedom的统计，截至2011年1月1日，全球有380多家NPE；而到2013年8月，该数量已经增长到了710家。 [ 1 ] 其中较为著名的NPE包括高智发明(Intellectual Ventures)，交互数字专利控股公司(Inter Digital)等。与传统专利运营“创新–受益–再创新–再受益”的模式不同，NPE的科研人员相对于通常的技术创新企业来说非常少，它的专利主要来源于直接购买和资助研发。除了NPE之外，美国白宫国家经济会议在2013年发布的《专利操控与美国创新》报告书中还采用了PAE (Patent Assertion Entities)的称谓，即专利操控实体，强调的是以诉讼作为盈利手段的市场主体。 但NPE本身是一个中性的语词，它既包含了正当运营的非专利实施主体，也包含靠侵权诉讼和禁止令相威胁获取谈判利益的主体，而正当与不正当的界线是动态的，一个从事正常发明与运营业务的主体同样也能在一定情况下被认定为专利海盗。如NPE巨头高智发明，其公司设立了三种基金，其中ISF (Intellectual Science Fund)发明科学基金就是用于内部研发和召开科学家会议进行“头脑风暴”，以获取具有前瞻性和市场前景的专利技术 [ 2 ] ，这本身是一种值得提倡的科研创新模式，但它同时也可能涉嫌利用收购并囤积的大量专利进行恶意诉讼。
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user: 2. 学界对专利海盗属性的论争 由于与“NPE、PAE”等中性的专利运营主体的范畴有交叉重叠的部分，专利海盗本身的性质以及社会影响都饱受争议，学界目前存在反对、支持与中立三种基本态度： 持反对态度的学者多从专利海盗对技术创新之冲击的角度来讨论。因为专利海盗本身并不生产产品，甚至不研发技术，他们在现行制度之下所承担的风险微乎其微，而被诉侵权的企业却有可能因为禁令的实施导致产业链的断裂，造成销售额的巨大亏损。专利海盗提高了科技企业的创新风险与成本，而这部分创新的风险最终会转化成为社会整体价值的无端流失；并且，专利海盗低风险高收益的模式会对整个社会的创新环境进行价值诱导，专利丛林的现象会越来越严重，科技创新将进入一个恶性循环。 支持者们则多从专利流通和技术潜在价值挖掘等角度论证广义NPE为社会和专利市场带来的正面效用。他们认为广义上的NPE是专利集中战略对技术优化整合的典型代表，能够较好地刺激前瞻性技术的研发和专利的转让。退一步讲，NPE所从事的所有专利流转、诉讼等活动，都是建立在合法专利权的基础上，具有形式正当性。 而持中立态度的学者们，则认为问题的症结在于专利有效性的判断和专利诉讼中可能被利用的一些不合理的漏洞。专利海盗本身对创新既有积极影响也有消极影响，专利海盗行为的界定没有一个普适性的标准，需要在个案中具体分析。因为对于专利非实施主体而言，专利诉讼是其无法避免的一种手段，正当的业务行为向恶意诉讼的异化的标准难以确定。
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user: 3. 专利海盗的应然范畴 上述观点产生分歧的根本原因是对专利海盗范畴界定存在偏差。我们无法否认，NPE、PAE这样庞大的群体范围中，存在规模化运作的具有专利流转刺激性作用的专利运营实体，但也必须认识到，其中相当多一部分已经向利用诉讼进行市场投机的主体进行异化。因此，对专利海盗群体的范畴进行一个合理的界定，将会是我们对专利诉讼投机行为限制的必要基础。 作为一个舶来品，不妨先对“专利海盗”一词在美国的学术定义进行考察。Markus Reitzig教授认为，专利海盗所指向的，是专门以通过许可或出售专利技术给其他生产商来谋取利益的公司或个人。而这些生产商在与公司或个人达成协议时已经被指责侵犯了这些公司或个人的专利技术，从而使生产商迫于压力达成协议 [ 3 ] 。另一位教授Sujitha Subramanian则认为专利海盗指那些不会通过将其专利商业化来获利，反而是通过向潜在的侵权人寻求不合理的许可费获利的团体，最后靠专利诉讼存活。这些定义皆存在瑕疵，如Markus教授的定义，既没有对专利海盗囤积专利的行为进行归纳，也没有概括生产商妥协的压力来源；而Sujitha教授定义中的商业化是一个模糊的概念，外延不甚明确，既包含商品化，也包含货币化。专利海盗没有将专利技术商品化，而是将其货币化 [ 4 ] 。专利的货币化，不论是通过购买获取专利，还是高价许可给生产商，通常就是一个商业化的过程。 笔者认为，专利海盗获取收益的价值链条，应当包含专利的恶意囤积、寻找目标企业并以侵权为由提起诉讼、以禁止令等手段威胁以及获取高额乃至超额许可费用。随着专利攻防战的拉开，专利海盗投放钓饵的手法也在更迭之中，甚至在其专利策略价值实现的过程中已经出现寻找“专利打手”进行技术流转的环节。根据以上价值链条所涉及的步骤逐一分析专利海盗与传统NPE的区别，应更加具有合理性与可行性。 3.1. 专利的恶意囤积 持有专利是专利海盗进行滥诉活动的前提。专利海盗的一般运营模式是囤积专利–恶意诉讼–强迫对方接受许可–获取利润–新一轮的专利囤积，所以对专利海盗集中专利行为性质的界定，将是我们建立整体规制框架的出发点。有的学者认为，应将专利海盗囤积的专利限定为“明显缺乏价值”的专利。但是这样会带来更多的问题，首先“明显缺乏价值”本身就是一个范围不甚清晰的表述。这种价值量的确定，在专利运营机构、司法机关和市场交易主体之间基本无法达成共识，而且专利的价值并非一成不变，一个当前价值未被发掘的专利技术可能在不同市场背景下的受重视程度是不一样的；其次，这个限定对专利海盗界定的实质作用并不大，根据Lexis Nexis专利信息数据库显示，在2006年美国所有专利纠纷中，经营实体作为原告的胜诉率为20%，专利海盗作为原告的胜诉率为18%，有NPE倾向的个体发明者作为原告的胜诉率为33%。这表明专利海盗所持有的专利技术水平是具有一定创新性的，并非毫无价值 [ 5 ] 。对于高智发明，交互数字等专利运营实体，决定它们是否为专利海盗的要素并非持有专利的质量，而是持有专利后的行为的性质。 理论上而言，对非实施专利主体行为的主观恶性的考察是较为合理的方式。但NPE的主观状态的探知是一件几乎无法实现的司法任务，从可行性的角度来看我们仍然需要一些能够被量化的要件作为替代性的标准。笔者认为，这其中应包含实体所拥有的非实施专利所占的比例以及收益的来源。专利海盗的共同特点就是持有的非实施专利数量占到了其总专利数量的全部或绝大部分，在专利集中效应的基础上加以整合形成专利丛林，再寻找目标企业。但是非实施专利的集中同样也是广义NPE群体的特点之一，仅凭借非实施专利数量似乎难以将专利海盗从NPE群体中剥离出来。如Vringo公司，它本身声称运营一个移动社交应用的发布平台，但是平台所带来的收益和运营平台所付出的成本完全不成比例，产生了巨大的净亏损。2012年其从诺基亚取得蜂窝设施技术和标准必要专利后便立即向中兴通讯提起诉讼。Vringo专利许可的费率为每部中兴制造或销售的手机收取2.5美元且其他用户装置收取1.2美元 [ 6 ] 。由此可见，专利海盗用一些伪装服务来掩饰实际的恶意诉讼，但这掩饰不了其另一特点：收益主要来源于非实施专利的许可或存在“超竞争价格”许可。这样一个标准的实现可以通过对公司财务报表的审查进行核实，得到较为清晰的收益比例的统计。这些因为双方地位不平等而签订的许可协议的费率通常与市场竞争价格相背离，倘若在这其中因诉讼而达成的许可协议所收取的许可费用占到了公司收入的一定比例，则其便可能具有专利海盗之嫌。 3.2. 专利的恶意流转 随着司法界和学界对于专利海盗问题的关注度和警惕性越来越高，专利海盗们自身的风险也在增加，由于自身持有专利数量与关注度正相关，并且亲自参与诉讼可能导致其“海盗属性”的暴露进而落入多数企业的黑名单，于是它们也开始寻求新的组织形式，尝试把自己持有的专利转让给他人，进而间接获取经济利益。 利用专利转让实现专利诉讼大概有两种模式，一种是将专利转让给第三人之后由第三方提起诉讼。这种形式下不论专利转让方还是专利受让方，其本身行为的正当性都是不容置疑的。但是在实际产生的社会效果方面，这种情形下的NPE似乎成为了专利诉讼的催化剂，在企业间的专利诉讼中，专利海盗公司往往会通过关联公司给涉及诉讼的一方或者双方企业提供专利乃至专利组合，供双方诉讼 [ 7 ] 。为了赢得诉讼，涉诉双方都不得不大规模收购专利。虽然这样的专利流通并不贴和专利法的精神，但是规制起来实属不易。另外需要考量的模式是，专利海盗将专利形式上转让给自己的空壳公司(专利打手)，让专利打手参与诉讼，由此专利海盗公司的实际获利手段就具有相当高的隐蔽性。即便空壳公司受到追踪，其母体专利海盗实体也不用担心受到太大的影响。这种模式当前俨然成为PAE进化的新趋势。此外，独立发明人的地位也值得关注。在专利海盗问题中，独立发明人一般是作为专利打手参与诉讼，因此独立发明人可以与空壳公司作为同一类主体加以规制。 总之，结合上述论证，可以将专利海盗界定为： 拥有非实施专利数量超过其全部持有专利数量一定比例，且盈利主要来自于非实施专利的许可费用，或； 非实施专利许可费率定价超出市场竞争价格一定限度，或； 将若干非实施专利转让给关联公司，操纵关联公司进行恶意诉讼的专利实体。
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user: 4. 浅议专利海盗法律规制进路 4.1. 宏观视角：《反垄断法》的规制 专利海盗的行为看似是对自身持有专利自由且正当地使用，但是它们不依托于产品的生产，也不依托于正常的专利运营，仅仅着眼于专利的直接货币化，通过诉讼等隐性威胁制造许可谈判地位的不对等。其手中不断扩充的专利“武器库”就是制造威胁的资本。这实际上是对专利权利的滥用，其限制竞争和创新的社会效果甚至比依托于具体产品的垄断行为更加严重。我国《反垄断法》第五十五条规定“经营者滥用知识产权，排除、限制竞争的行为，适用本法”能够为规制专利海盗行为提供一定的依据。 那么关于《反垄断法》之于专利海盗的可适用性，一个重要的问题就在于，专利海盗能否被认定为《反垄断法》意义上的“经营者”。《反垄断法》第十二条规定“本法所称经营者，是指从事商品生产、经营或者提供服务的自然人、法人和其他组织”，那么，专利海盗所从事的活动是否能被认定为“商品生产、经营或提供服务”呢？笔者认为是比较牵强的。专利海盗的核心行动是从独立发明人、小型技术公司、破产企业处购获技术并“雪藏”，静待市场时机成熟时用作发动侵略性诉讼和谈判的砝码 [ 8 ] ，这并不符合“生产商品、提供服务”的范畴。当然，我们不能否认也有高智这样可能由专利运营机构异化而来的专利海盗，但总而言之，当前的《反垄断法》规制的经营者主体难以完全涵盖专利海盗的范畴，尤其是大量存在的仅仅从事典型“滥诉——许可”活动的专利海盗类型，有必要依据技术市场实体的性质对“经营者”的范畴做一定的扩充。 4.2. 微观视角：司法程序与行政管理 在立法层面，我国《专利法》第四十八条规定了专利的强制许可，其中包含了三年内没有充分实施专利和被认定为垄断行为的强制许可，这对专利海盗活动起到了一定制约作用。但是在涉及专利海盗滥诉的司法程序改良上，以及针对专利海盗恶意囤积、流转专利的行政监管中，还有很大的修缮空间。 4.2.1. 限制“禁止令” 在美国“易趣案”中，最高法院提出了衡量是否颁布禁令救济需要考虑的四个因素：原告是否遭受了不可弥补的损害；法律救济是否足以赔偿损失；衡平救济是否正当；颁布永久禁令是否损害公共利益 [ 9 ] 。这对我国的专利诉讼中“停止侵权”民事责任承担的标准确定有较好的借鉴意义。“停止侵权”的门槛不宜过低，这不仅是出于双方利益平衡的考虑，也是对技术和产品市场秩序稳定性的维护。 4.2.2. 提高诉讼成本 专利海盗引发“专利诉讼爆炸”的关键因素之一，就是滥诉的低风险，低成本，就算败诉也未必承担巨大的经济负担。而被告方则有可能因为诉讼导致其专利实施和产品销售遭受不可逆的损失。因此，可以引入以下两个措施提高专利海盗的诉讼成本：美国《创新法案》的费用转移制度，以及适当地适用反赔制度。《创新法案》提出了较为激进的“费用承担转移条款”，并将费用扩大至胜诉方合理律师费之外的其他诉讼费用 [ 10 ] 。反赔制度则是要求原告针对因诉讼而造成被告在商业上的损失予以赔偿，其适用应当以慎重考察原告行为确实符合专利海盗的相关界定为前提。 4.2.3. 建立合法NPE白名单制度 针对NPE专利运营市场的无序性，将公权力机关监管引入NPE市场能够使以专利恶意囤积和恶意流转为核心的众多问题得到解决。所谓NPE白名单制度，也就是非实施专利运营行业准入制度。这种制度的建立，能够使得技术市场上的交易、运营实体的动态受到行政机关的监督。NPE极容易造成技术市场的垄断，对其实行登记、审查合格后才能准入专利技术服务市场，能够有效遏制专利海盗主体的泛滥。以此白名单为基础，定期对所有技术市场主体进行审核，监测其持有专利的数量，防止专利恶意囤积。同时，这个白名单使得专利贸易制度的建立变得更加具有可行性，凡涉及非实施专利主体的专利流转需强制进行登记，可以防止NPE操纵空壳公司在合法的市场运作表象之下从事阻碍创新和专利实施的不正当活动。
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user: 5. 结语 在专利集中成为一种技术趋势的情况下，合法专利运营主体中掺杂着大量专利蟑螂的情况是难以逆转的；而为了技术市场的繁荣以及保护善意专利权人的合法权利，专利流转的行政监管手段也难以过度紧收。面对如此两难的局面，首先要解决的便是专利海盗的属性界定。通过对目前技术市场上专利海盗行为模式的类型化梳理，可以得出一个专利海盗的基本范畴，并且依据其行为模式在立法与行政监管层面限制其通过权利滥用而得到的收益。这不仅维护了技术市场的有序竞争，刺激了创新技术实体的研发活力，也体现了专利法乃至知识产权制度的利益平衡理念。
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user: 摘 要 当前，我国农业实现了“十二连增”，总量问题得到了有效解决，但是农业的结构与人民群众的日益增长的需求之间的不均衡的矛盾问题依旧突出，中央决策实施农业供给侧结构性改革。“互联网+”农业通过高效精准服务农业全产业链，提高农业生产经营规模化、组织化、标准化、品牌化程度，是现代农业新模式与新业态，是提高农业供给侧改革效率的有效手段。文章分析我国“互联网+”农业发展中出现的问题，聚焦农业和信息化领域标准缺失问题，提出以标准化手段推进“互联网+”农业，融合现代技术新动力和管理新模式，努力打造“信息支撑、管理协同，产出高效、产品安全、资源节约、环境友好”的我国现代农业发展升级版。 关键词 :农业标准化，“互联网+”，农业，农业供给侧改革 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 概述 推进农业供给侧结构性改革是一个事关我国经济社会发展的全局性的战略部署。我国农业经过“十二连增”，总量问题得到解决。但是，结构性矛盾依然突出，人们的消费结构和水平和农产品供给之间的矛盾也明显提高，如一般的农产品不缺，但是优质、绿色农产品不足，从国际上看，我国农业发展也面临着严峻的国际竞争。中央提出要大力推进农业供给侧结构性改革，习近平总书记指出，这是农业政策调整和完善的方向和重点。农业供给侧结构性改革，主要解决三个方面的问题：一是适应市场需求，改善农产品的供求关系。二是提高农业的质量和效益，增加农民的收入。三是促进农业转型升级，提高竞争力。“互联网+”农业是充分利用移动互联、大数据、云计算、物联网等互联网的创新成果与农业进行深度的融合，推动农业技术的进步、效率的提升以及组织的变革，不断地提升农业经济创新力和生产力，形成以互联网为基础设施和创新要素的农业新形态 [ 1 ] ，是新常态下推进我国现代农业的重大战略，是“信息支撑、管理协同，产出高效、产品安全、资源节约、环境友好”为主要特征的我国现代农业发展升级版。
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user: 2. “互联网+”现代农业面临的问题 当前“互联网”+农业发展中面临的问题：一是对“互联网+”农业的重要性的认识不足。目前，仅将互联网作为发展农业的一种技术手段，对其发展农业农村的基础性、社会性的战略地位认识不充分，作用认识不到位，难以带动整个社会就“互联网+”农业进行积极合作与参与，其典型的特征就是“信息的不互联不互通”，各平台、部门间、各区域层次之间的数据兼容性欠佳，缺少统一的信息标准体系，不利于“互联网+”农业的整体推进、协调发展。二是农业农村信息基础设施标准程度低，目前很难承接“互联网+”农业的快速发展。就目前情况来看，农村网民规模增加到1.95亿，但农村互联网普及率仅32.3%，低于城镇地区互联网普及率35.6个百分点，农村地区互联网基础设施配置标准低，互联网接入能力还较低，农村家庭宽带接入能力仅达到4兆比特每秒(Mbps) [ 2 ] ，农业信息技术标准和信息服务体系不健全，重要信息系统安全面临严峻挑战。三是“互联网+”在农业领域的应用大多仍停留在试验试点阶段，信息技术转化为现实生产力的任务艰巨。农业信息技术数据资源的标准缺失、碎片化和利用效率偏低的情况比较普遍。如农业大数据采集、传输、存储、共享的性能不稳定，技术标准亟待提高和明确；支撑农村电子商务发展的分等分级、包装仓储、冷链物流等标准缺失或制订时间较早要求偏低，农村基础设施薄弱，技术和系统集成度低、整体效能差。加上农业的季节性和周期性使农业很难像工业生产那样根据市场信息实时调节生产，农业与互联网的融合程度低，挑战重重。
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user: 3. 以标准化手段推动“互联网+”现代农业弯道超车 标准是经济和社会活动的基础性技术依据，在便利经贸往来、支撑产业发展、促进科技进步、规范社会治理中的作用日益凸显，是产业核心竞争力的基本要素，是实施创新驱动发展战略的重要内容。信息作为数据资源，是隐形的资源，具有完整的商品属性，标准化是其发展的必然阶段。实践证明，充分发挥标准对推进技术融合、业务融合、数据融合的引领和支撑作用，对进一步增强农业信息化发展能力，提升农业信息化应用水平具有重要意义，是保障农产品安全的技术和管理的新引擎和新动力，是解决“互联网+”农业发展中面临的问题的有效手段和工作模式。应明确推进“互联网+”农业标准化工作的主要内容和工作措施，促进传统农业产业标准化、在线化、自动化，实现管理高效化和服务便捷化，生产智能化和经营网络化迈上新台阶，推动“互联网+”农业高效发展。 (一) 以标准化手段推进“互联网+”现代农业提档升级。一是强化规划引领。要把“互联网+”农业工作纳入当地经济发展总体规划、“互联网+”发展和现代农业发展规划 [ 3 ] 。二是强化标准引领。研究建立“互联网+”农业标准体系，加强产销环节信息化标准的统筹。加强农业生产、经营、管理和服务等环节信息化标准研制力度，加快农业物联网、农业农村大数据、农产品电子商务等标准化体系建设和标准制修订工作，支撑智慧农业建设。以标准化支撑农业生产自动化、精准化，实现农业可持续发展，大力提高农业生产效率。三是强化质量安全保障。以标准化产业链条保障农产品的安全，提供农产品质量的一致性，实行农产品质量等追溯管理，实现生产和消费有效对接，形成以消费引导生产的市场机制。四是强化政府服务功能。在政府管理服务环节，建立各数据元及接口的标准化，建立有效的农业大数据采集与决策机制，集成综合性农业云服务平台，有效提高农业管理与服务效率。 (二) 以标准化手段推进“互联网+”现代农业“腾笼换鸟”。“互联网+”不同于简单的“+互联网”，是农业新型经营模式，是对农业生产、供应、流通农业链条的价值再造，核心是信息共享，信息流和农产品流的融合。一是要加大对新型农业经营主体的培育力度。要加强新型经营主体、特别是新型职业农民的培育力度，使其尽快成为新农业的市场主体。强化主体责任的监管，促进农业经营标准化。二要协调新型经营主体与市场对接，让农户分享“互联网+”的增值利润，逐步形成“优质优价”的品牌化发展格局。打造农产品品牌，核心是农产品的标准化。商品的一致性、健全完善的农产(商)品分类分级标准，关键是农业生产、存储、流通的标准化。三要抓好农产品交易制度的标准化建设。以打造区域性、专业性和全国性一二三产业融合发展信息平台为突破口，为农产品提供标准化、公开、透明的信息数据，解决供给侧与需求侧信息对称的问题;同时，加大对全球农业数据的调查分析能力，增强我国的话语权、定价权和影响力。 (三) 以标准化推动“互联网+”现代农业生态绿色发展。“互联网+”现代农业的核心在于推动传统产业的标准化、在线化、数据化。要数据资源标准化为手段，以数据共享开放为核心，以大数据开发利用为着力点，逐步形成覆盖全面、业务协同、上下互通、众筹共享的农业农村大数据发展格局。我国地形复杂，城乡发展不均衡造成的农村基础设施不完善，以及我国农业数量大、类型多等诸多问题，使得机械化、大规模农业无法在全国范围内普及，但在区域性大气、水、土壤分析、农业风险预警、病虫害防治、农产品质量安全追溯、农产品交易等方面都具有巨大的市场前景 [ 4 ] 。通过大数据梳理出本地区农产品的最佳数据，健全完善标准化生产规程，提高农业生产精准化、智能化水平，优化农业资源的分配和利用，有助于协调经济生产与环境保护之间的矛盾。 (四) 以标准化手段提高为农服务水平，打破城乡壁垒。一要建设统一的为农信息服务平台。以互联互通为目标，以全面提高信息进村入户标准，农业农村数据元标准化为基础，统筹建设为农信息服务平台。要推动信息上传，服务下延。要重视涉农信息大数据开发利用，注重汇集农户、农业生产经营主体、各类农业服务信息，准确地把握农民需求，开发大数据，利用大数据，提供有针对性的精准服务，推动平台终端向县乡村延伸，破解农技服务“最后一公里”难题。二是要发挥农业专家作用。进一步充实专家队伍，做到线上与线下服务相结合、应急与长期服务相结合、专项与综合、标准化和差异化服务相结合，加强专家与农户互动，突出信息交流的有效性。三要进一步推动“放管服”，加速推动农业管理服务事项标准化、程序化。推动为农服务事项进一步下放，做到能放即放，利用农村信息化服务平台，推动为农服务的提档升级。
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user: 4. 结论 农业作为国民经济的基础，是人民日益增长的美好生活需要的保障，实践证明标准化支撑“互联网+农业”是解决农业发展的不平衡不充分问题的符合我国客观实际的确实可行的实施方案。应及时总结经验，形成可推广、可复制的标准体系。依托龙头企业、合作社等新型农业经营主体，充分发挥科研院所力量，开展“互联网+”农业研究，加快推进“互联网+”农业试点应用，形成模块化、标准化技术集成平台，打造现代农业新模式。
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user: 摘 要 介绍了早、中、晚稻洪涝灾害后的补救技术措施要领及灾后农田补种。 关键词 :水稻，洪涝灾害，补救技术措施，灾后防治 Copyright © 2018 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/