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user: 3. 结果与分析 3.1. 越鞠丸和柴胡疏肝散成分筛选的靶点 利用Batman-TCM和TCMID两个数据库筛选靶点，去除没有对应靶点的成分。越鞠丸和柴胡疏肝散中成分和靶点统计见表1。结果显示越鞠丸的化学成分和靶点分别为132个、1247个，柴胡疏肝散的化学成分和靶点分别为305个、1413个。越鞠丸和柴胡疏肝散共有的化学成分和靶点是104个、1140个。其中，香附和川芎为两药共有的两种组分，对应的化学成分和靶点分别为 12个、91个和449个、958个。越鞠丸特有的化学成分和靶点分别是27个、107个；柴胡疏肝散特有的化学成分和靶点分别是175个、273个。越鞠丸–柴胡疏肝散成分–靶点网络(图1)其中有299个有效成分节点，1473个靶点节点和6691条边线。有效成分与靶点之间相互联系，且多个靶点对应多个成分，体现了中药方剂以“多成分–多靶点–多途径调节”的特点。 Table 1 Statistics of components and targets of Yueju Pill and Chaihu Shugan Powde 复方 单味药 成分数目 靶点数目 越鞠丸 香附 12 449 苍术 15 315 川芎 91 958 栀子 14 664 合计 132 1247 柴胡疏肝散 陈皮 32 603 柴胡 67 1097 白芍 18 123 香附 12 449 枳壳 10 342 川芎 91 958 甘草 75 690 合计 305 1413 表1. 越鞠丸和柴胡疏肝散成分和靶点统计 图1. 成分–靶点网络。A1——越鞠丸特有成分；A2——柴胡疏肝散特有成分；A3——香附、川芎成分；A4——非香附、川芎共有成分；B1——鞠丸特有靶点；B2——香附、川芎靶点；B3——非香附、川芎共有靶点；B4——柴胡疏肝散特有靶点 3.2. 抑郁症相关基因分析与抑郁症靶点的分析 进入GEO数据库，下载GSE44593基因芯片数据，用R语言对其进行数据分析，筛选前50个差异基因，并绘制前50个差异基因热图(图2)。通过对疾病数据库的检索，筛选出抑郁症靶点有1630个。其中有310个共同靶点与抑郁症有关，20个越鞠丸特有靶点和52个柴胡疏肝散特有靶点与抑郁症有关。再运用String工具绘制共有抗抑靶点网络作用图(图3)，有309个节点和5293条边。越鞠丸特有抗抑靶点作用图有10个节点和11条边(图4)。柴胡疏肝散特有抗抑靶点作用网络(图5)有47个节点和160条边。 图2. 前50个差异表达基因热图 图3. 共有靶点作用网络图 图4. 越鞠丸特有抗抑靶点作用网络图 图5. 柴胡疏肝散特有抗抑靶点作用网络图 3.3. 拓扑和模块分析 在网络评价参数中，如果一个节点具有高连接度数和高节点中心度，那么，可能表明该节点在整个网络中具有重要影响。在对共有抗抑靶点PPI图分析中，度较高的四个是NS、ALB、BDNF、IL6。共有抗抑靶点PPI中前10靶点拓扑分析见表2。此外，运用ClusterViz中的MCODE算法进行分析，其中有6类模块的score > 4，这6类不同模块对应的参数如表3所示。 在越鞠丸特有抗抑靶点PPI中，度较高的是REN、SCNN1A、SCNN1G、SCNN1B与ESR1。在柴胡疏肝散特有抗抑靶点PPI中，度较高的是AKT1、MAPK1、EGF、HRAS与MPO。 Table 2 Topological analysis of common anti-targets (top 10 编号 基因 连接度 介度(介数中心性) 1 INS 158 0.0851 2 ALB 135 0.0528 3 BDNF 130 0.0440 4 IL6 118 0.0256 5 FOS 110 0.0236 6 TP53 99 0.0261 7 TNF 96 0.0173 8 TAC1 87 0.0091 9 IGF1 87 0.0089 10 TH 87 0.0167 表2. 共有抗抑靶点的拓扑分析(前10) Table 3 Analysis of 6 modules of Yueju Pill and Chaihu Shugan Powde 编号 模块 打分 点 边 1 22.407 60 855 2 19.417 49 586 3 9.529 35 174 4 6.667 22 70 5 5.917 25 101 6 5.667 7 17 表3. 越鞠丸和柴胡疏肝散6个模块分析 3.4. 共有抗抑靶点通路分析 每一个模块对应的基因数目为60、49、35、22、25和7。其中第三模块和第六模块暂不对应相应通路，运用DAVID在线平台对每一个模块进行相关通路分析。其中发现不同模块之间也有相同通路，如Calcium信号通路、神经活性配体–受体相互作用和细胞缝隙连接等。而这些通路都已经证明与抑郁症的发病机制相关 [ 18 ]。具体模块通路分析信息如表4所示。该结果表明两种方剂的活性成分可能通过相同的靶点所在的信号通路来发挥抗抑郁的作用。 Table 4 The pathway analysis of the common anti-inhibition target 编号 模块 通路 1 NR3C1， GHRH， IL13， FOXP3， HTR2A， ADRB3， ADRA1D， ADIPOQ， HTR7， CALCA， ADRA1B， VCAM1， ESR1， SLC18A3， DRD1， ACHE， SLC6A2， ADRA1A， CHRNA4， FOS， SIRT1， IGF1， ADRB1， NOTCH1， IL6， SOD1， CAT， TGFB1， HTR3A， FASLG， ADORA2B， MIF， ADRB2， EPO， FGF2， OPRK1， DRD5， MAOB， OXT， BDNF， ICAM1， PPARG， SOD2， TAC1， HRH2， LEP， HMOX1， MAP2K1， TAAR1， APOE， IL1RN， TLR3， IDO1， PTGS2， MTOR， TNF， CRP， ALB， HTR6， SELP Neuroactiveligand-receptor interaction、Calcium signaling pathway、Pathways in cancer、 Cytokine-cytokine receptor interaction、MAPK signaling pathway、Prion diseases、 Toll-like receptor signaling pathway、Vascular smooth muscle contraction、Adipocytokine signaling pathway、Hypertrophic cardiomyopathy (HCM)、Gap junction、Graft-versus-host disease、Dilated cardiomyopathy、Tryptophan metabolism 2 ADORA1， CHRM2， F2， HTR1A， AGTR2， DRD3， TH， KISS1， DDC， AVPR1A， CNR2， AVP， DBH， PLCB1， ADRA2A， ADRA2C， CCL2， DRD4， IL4， AGTR1， MAOA， HRH1， IL1B， SLC18A2， PF4， HTR1B， IL10， HTR2C， ENSG00000196689， IFNG， PIK3CA， OXTR， PIK3R1， GRM7， COMT， CRH， CHRM4， TACR2， TP53， CHRM1， HTR1D， OPN4， CHRM5， HRH4， DRD2， AGT， SLC6A4， CHRM3， HTR2B Neuroactive ligand-receptor、Calcium signaling pathway、Tyrosine metabolism、Regulation of actin cytoskeleton、Renin-angiotensin system、T cell receptor signaling pathway、Apoptosis、Allograft rejection、Gap junction、Jak-STAT signaling pathway 3 GRIA4， HTR3B， GRIA3， DNMT1， GNAS， FGFR2， CACNG2， NRXN1， NLGN1， MYOD1， PDGFB， GRIA1， GRIN1， GSR， HOMER1， SHBG， NOS1， SLC1A3， IGF2， SLC17A7， ESR2， CYP19A1， SHH， GABRB2， SLC6A3， EDN1， CAMK2G， GRIN2D， GRIN2C， GRIN2B， SNCA， CACNA1C， RET， GRIA2， BMP4 4 NEFL， CACNA1A， GABRB3， GABRA1， GABRG2， KCNE1L， GRIN2A， KCNA1， KCND3， GABRG3， ABCC9， FMR1， PDE4B， PDE4D， CACNA1H， KCNJ5， SCN2A， DLG4， GABRA3， CACNA1G， HTT， HOMER2 Neuroactiveligand-receptor interaction、Calcium signaling pathway 5 HCRT， GHRL， BCHE， IL5， LTA， NGF， COL1A1， ADORA2A， CNTF， BMP2， MC4R， MAPT， CRHR2， CCL5， NGFR， AR， CNR1， INS， CALB1， ADRA2B， KIT， SOX9， ACE， PPARA， APOA1 Calcium signaling pathway、Neuroactiveligand-receptor interaction 6 KCNH2， KCNQ1， SCN5A， KCND2， SCN1B， SCN8A， ANK3 表4. 共有抗抑靶点的通路分析 3.5. 特有抗抑靶点通路分析 同样运用DAVID分析得出，越鞠丸潜在抗抑靶点的代谢通路有：醛固酮调节的钠重吸收信号通路(15.00%)、味觉转导信号通路(15.00%) (图6)。柴胡疏肝散潜在抗抑靶点的代谢通路排在前面的有：癌症通路(25.00%)、ErbB信号通路(17.31%)、MAPK信号通路(15.38%)等(图7)。该结果表明越鞠丸和柴胡疏肝散的活性成分可能通过作用于这些特有靶点影响信号通路来达到抗抑郁的效果。