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user: 3. 结果和讨论 3.1. QCM实时动态检测活性分子接枝量 图2(a)为PPAam@TA表面BVLD的实时接枝量，结果显示324 ng/cm 2 的BVLD有效固定在PPAam@TA表面；从其局部放大图(b)中可看出，接枝饱和量的1/2的时间点为40 min，该时间点作为BVLD + SeCA共固定时间设定的依据；图2(c)是QCM-D实时动态监测技术检测SeCA在PPAam@TA表面接枝量的动态曲线，结果显示约450 ng/cm 2 的SeCA固定在PPAam@TA表面；图2(d)为PPAam@TA表面BVLD和SeCA共固定的动态曲线，如图所示，通入BVLD溶液反应40 min后时，接枝量达到200 ng/cm 2 左右，通入PBS缓冲液清待洗。清洗结束后通入SeCA溶液反应6h。最终结果显示BVLD的有效结合量为163 ng/cm 2 而SeCA的结合量为176 ng/cm 2 ，PPAam@TA表面BVLD和SeCA的有效结合量基本满足1:1的比例。 图2. (a)通过QCM-D技术监测BVLD；(c) SeCA；(d) BVLD + SeCA在PPAam表面的实时接枝曲线图; (b):(a)的局部放大图 3.2. 涂层的FTIR及XPS结果 图3是PPAam、PPAam@TA和PPAam@TA@BVLD涂层的红外光谱图，从图中可以看出，PPAam涂层在3350 cm −1 出现了N-H的伸缩振动峰以及在1650 cm −1 出现了N-H的变型振动峰；接枝TA后，PPAam@TA的红外光谱中在1580和1500 cm −1 出现了苯环的特征峰，可以证实PPAam表面上成功接枝了TA；进一步接枝BVLD后，PPAam@TA@BVLD涂层中出现了酰胺键(O=C-NH-)的吸收峰，强有力的证明了BVLD的有效固定。 图4(a)是PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD、PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的XPS全谱图，表1为各涂层的元素百分含量。PPAam涂层的全谱中出现了C、N、O的特征峰，证明了PPAam涂层在基底上的沉积；进一步接枝TA后，由于TA中不含有N元素，使得PPAam@TA涂层中N元素含量的明显下降；由于BVLD中的O含量明显高于PPAam@TA涂层的O含量，使得PPAam@TA@BVLD涂层中测得的O原子含量高于PPAam@TA，可进一步说明BVLD的成功固定；PPAam@TA@SeCA涂层的谱线中出现了Se的特征峰，有力的证实了SeCA在涂层表面的接枝；PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的谱线中同样存在Se的特征峰，由于SeCA中O含量为19.1%，BVLD中O含量为24.24%，而PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层中O含量介于PPAam@TA@SeCA和PPAam@TA@BVLD涂层的O含量之间，可间接的说明PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的成功制备。 图3. PPAam、PPAam@TA和PPAam@TA@BVLD的红外光谱 Table 1 Atomic composition of samples obtained using XP Sample C (%) N (%) O (%) Se (%) PPAam 71.04 15.49 13.48 / PPAam@TA 74.53 11.68 13.79 / PPAam@TA@BVLD 75.71 9.74 14.55 / PPAam@TA@SeCA 74.87 11.2 12.1 1.83 PPAam@TA@BVLD + SeCA 74.42 11.64 12.39 1.55 表1. 通过XPS得到的各样品的原子组成 图4. (a) PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD和PPAam@TA@BVLD + SeCA的XPS的全谱图(b)局部放大图；(b):(a)的局部放大图 3.3. NO催化速率结果 图5是PPAam@TA@SeCA和 PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的NO催化释放速率曲线，可以看出，PPAam@TA@SeCA涂层稳定后的催化速率为0.8 × 10 −10 mol∙cm −2 ∙min −1 。PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的催化速率为0.45 × 10 −10 mol∙cm −2 ∙min −1 。该催化释放速率也间接说明PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层中SeCA的接枝量为PPAam@TA@SeCA涂层的1/2。 3.4. APTT 图6是各组样品的凝血时间，结果显示，316L SS、PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA涂层没有抗凝活性分子，凝血时间均在35~45 s之间，不存在显著性差异；而对PPAam@TA@BVLD涂层的APTT试剂实验显示抗凝时间在65 s以上，与不含BVLD活性分子的其他对照组相比，抗凝血效果明显增强；PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层与不含BVLD活性分子的其他对照组相比，也表现出明显的抗凝效果。1/2接枝量的BVLD涂层抗凝效果比完全接枝BVLD涂层抗凝效果略有下降，是由于SeCA占据了涂层一部分接枝的活性位点，造成BVLD的接枝量有所减少，导致凝血时间的下降。 3.5. HUVECs及HUVSMCs增殖 图7是各组样品表面内皮细胞1天和3天的形态结果。1天的结果显示，316L SS表面内皮细胞数量较少，而接枝PPAam后，所引入的-NH 2 对内皮增殖有促进作用，使得内皮细胞数量有一定的上升；PPAam@TA和PPAam@TA@SeCA上内皮细胞的数量与PPAam相比，无明显差异；而PPAam@TA@BVLD上的内皮细胞数量有了明显的上升，说明BVLD对内皮细胞的增殖有一定的促进作用；PPAam@TA@BVLD + SeCA上的内皮细胞虽不及PPAam@TA@BVLD的多，但相比于其他涂层，数量上仍有较为明显的增加。当培养基中添加了NO供体后，供体组中PPAam@TA@SeCA和PPAam@TA@BVLD + SeCA相比于非供体组，内皮细胞数量的增加十分明显，说明了NO对内皮细胞的增殖起到了促进的作用。这与图(b)中使用CCK-8定量检测内皮细胞增殖的结果一致，均说明了构建的PPAam@TA@BVLD + SeCA表现出良好的促内皮功能。 图5. (a) PPAam@TA@SeCA涂层的NO催化释放速率；(b) PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层的NO催化释放速率 图6. 316L SS、PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD和PPAam@TA@BVLD + SeCA的凝血时间 图8是316L SS、PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD和PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层表面平滑肌细胞的1天和3天的荧光图及增殖的结果。如图8(a)中1天的结果显示，非供体组中316L SS、PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD 和PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层表面的细胞数量基本相差不大，无显著性差异，且细胞呈长梭形，铺展状态良好。而供体组中PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD + SeCA涂层上平滑肌细胞的数量与非供体组相比明显减少，表明了NO对平滑肌细胞增殖的抑制作用，且由于PPAam@TA@BVLD + SeCA催化释放NO的速率低于PPAam@TA@SeCA，对平滑肌细胞的抑制作用也没有PPAam@TA@SeCA强。3天的结果与1天的结果基本一致，更加明显的表现出NO能抑制平滑肌细胞的增生。这与图(b)中使用CCK-8定量检测内皮细胞增殖的结果一致，均说明了构建的PPAam@TA@BVLD + SeCA表现出抑制平滑肌生长的功能。 图7. HUVECs在316L SS、PPAam、PPAam@TA、PPAam@TA@SeCA、PPAam@TA@BVLD和PPAam@TA@BVLD + SeCA表面的粘附与增殖。(a) 免疫荧光图片，(b) CCK-8检测结果