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user: 3. 结果 3.1. 草履虫 用蓝墨水染色在显微镜下观察到的草履虫形态如图1所示。 3.2. CHCl 3 的急性毒性作用 对CHCl 3 对草履虫1 h的急性毒性实验结果如表1所示，采用SPSS 17.0统计软件对实验结果进行统 图1. 草履虫形态 Table 1 The acute toxicity of CHCl3 to P. caudatum (1 h 组别 剂量C (μg/L) lgC 死亡个数 死亡率 概率单位/Y 1 0 0 0 0 / 2 1005.18 3.00 1.33 ± 0.58 11 ± 2.65 3.77 3 1295.27 3.12 3.33 ± 0.57 27.67 ± 3.06 3.42 4 1667.74 3.22 7.33 ± 1.53 59.33 ± 8.08 5.23 5 2052.14 3.13 10.67 ± 0.58 80.33 ± 4.16 5.84 6 2779.16 3.44 12.00 ± 1.73 100 / 表1. CHCl 3 对草履虫急性毒性实验结果(1 h) 计分析，结果显示，回归系数为0.002，相伴概率差异具有统计学意义，说明相关性很强 [ 11 ] ；拟合优度Chi-square检验χ2 = 0.677，P = 0.954，说明样本来自总体分布，没有异质性因素，模型拟合良好。得到回归方程y = −3.268 + 0.002x，通过观察置信区间CHCl 3 对草履虫的1 h半致死浓度LC 50 为1585.27 μg/L，LC 50 (F检验)95%的可信限为1473.86~1698.66 μg/L，5%致死浓度LC 5 为787.48 μg/L，95%致死浓度LC 95 为2383.06 μg/L。 CHCl 3 对草履虫死亡率的影响如图2所示，CHCl 3 浓度与死亡率成梯度增长，在设计的暴露组中，各浓度组与对照比较均具有极显著差异(P < 0.01)。 3.3. CHBr 3 的急性毒性作用 CHBr 3 对草履虫1 h急性毒性实验结果表2所示，采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行统计分析，结果显示回归系数为0.003，相伴概率差异具有统计学意义，说明相关性很强。得到回归方程y = −1.705 + 0.003x。CHBr 3 对草履虫的1 h半致死浓度LC 50 为656.37 μg/L，LC 50 (F检验)95%的可信限为403.69~1000.12 μg/L，5%致死浓度为LC 5 为23.34 μg/L，95%致死浓度LC 95 为1289.41 μg/L。 CHBr 3 对草履虫死亡率影响如图3所示CHBr 3 浓度与死亡率成梯度增长，260.32 μg/L CHBr 3 浓度暴露组与空白对照组比较无显著性差异(P > 0.05)。说明低浓度CHBr 3 对草履虫伤害很小，后四组与空白对照组比较有极显著性差异(P < 0.01)，说明草履虫对大于404.36 μg/L CHBr 3 非常敏感。 3.4. 联合毒性试验 CHCl 3 + CHBr 3 对草履虫的联合毒性试验结果见表3。通过查找CHCl 3 急性毒性置信区间可得1389.58 μg/L的死亡率为35%，647.63 μg/L的死亡率为3%。查找CHBr3急性毒性置信区间可得799.67 μg/L的死亡率为66%，202.184 mg/L的死亡率为15%。整理单一毒性和联合毒性实验质量浓度与死亡率之间的关系见表4。 对CHCl 3 + CHBr 3 联合作用对草履虫急性毒性作用的影响如表4所示，202.18 μg/L CHBr 3 + 647.63 μg/L CHCl 3 联合作用于草履虫后，草履虫的死亡率为53%；202.184 μg/L CHBr 3 + 1389.58 μg/L CHCl 3 联合作用于草履虫后，草履虫的死亡率为82%；同样799.67 μg/L CHBr 3 + 647.63 μg/L CHCl 3 、799.67 μg/L CHBr 3 + 1389.58 μg/L CHCl 3 联合作用于草履虫后，草履虫的死亡率为100%。CHCl 3 + CHBr 3 联合染毒对草履虫的致死率明显高于单一剂量组，差异显著(P < 0.05)。析因分析结果表明：CHCl 3 + CHBr 3 联合染毒对草履虫致死率交互作用明显，CHCl 3 和CHBr 3 联合作用表现为协同作用(F = 8.345，P = 0.02)。 3.5. 讨论 关于CHCl 3 、CHBr 3 毒性作用已有一些报导。沈洛夫 [ 12 ] 等人试验得出CHCl 3 对盐澡的48 h半数有效抑制浓度EC50为1.17 μmol/L，CHBr 3 对盐澡的48 h半数有效抑制浓度EC 50 为1.02 μmol/L，得到毒性大小CHBr 3 > CHCl 3 。金志玉 [ 13 ] 等人试验得出CHCl 3 的浓度在0~6000 μg/L范围内时，微核细胞率随受试液浓度的增高而升高，呈明显的剂量–反应关系。王东 [ 14 ] 等人研究表明在PCR反应体系中三氯甲烷的摩尔浓度大于等于3.77 mol/L时，能完全抑制PCR反应。李艳霞 [ 15 ] 研究了CHBr 3 对DNA吸收光谱的影响，随加入CHBr 3 的浓度逐渐增加，DNA吸收光谱产生减色效应，并伴随着明显的光谱红移，这些结果表明，CHBr 3 和DNA之间有较强的结合作用。 本研究显示，CHCl 3 对草履虫1 h急性毒性作用LC 50 为1585.27 μg/L，其浓度越高，草履虫死亡率越高；CHBr 3 对草履虫1 h急性毒性作用LC 50 为656.37 μg/L，其浓度越高，草履虫死亡率越高。充分证明了草履虫死亡率随二者浓度的升高而增高，呈明显的剂量–反应关系。本实验结果表明CHBr 3 毒性大于CHCl 3 ，与沈洛夫等人的研究结果一致。 图2. CHCl 3 浓度与草履虫死亡率柱状图 图3. CHBr 3 质量浓度与草履虫死亡率柱状图 Table 2 The acute toxicity of CHBr3 to P. caudatum (1 h 组别 剂量C(μg/L) lgC 死亡个数 死亡率 概率单位/Y 1 0 0 0 0 / 2 260.31 2.42 0.67 ± 0.58 5.33 ± 4.62 3.36 3 404.36 2.61 4.00 ± 1 30.67 ± 5.51 4.50 4 624.24 2.80 7.33 ± 1.53 61.67 ± 12.58 5.28 5 967.85 2.98 10.67 ± 0.58 82.33 ± 3.06 5.92 6 1559.34 3.19 12.00 ± 0 94.67 ± 4.62 6.64 表2. CHBr 3 对草履虫急性毒性实验结果(1 h) Table 3 Test result of toxicity CHCl3 + CHBr3 combination (1 h 组别 CHBr 3 + CHCl 3 剂量C/(μg/L) lgC 死亡个数 死亡率% 概率单位/Y 1 799.67 + 1389.58 2.89/3.14 12.67 ± 0.58 100 / 2 799.67 + 647.63 2.89/2.81 12.33 ± 1.16 100 / 3 202.18 + 1389.58 2.31/3.14 9.33 ± 2.89 82.00 ± 8.89 4.50 4 202.18 + 647.63 2.31/2.81 7.33 ± 2.08 52.33 ± 15.63 5.28 表3. CHCl 3 + CHBr 3 联合毒性试验结果(1 h) Table 4 The test results of CHCl3 + CHBr3 concentration and mortality of single and combined effects (1 h CHCl 3 (μg/L) CHBr 3 (μg/L) 0 202.18 799.67 0 0 15% 65% 647.63 3% 53% 100% 1389.58 35% 82% 100% 析因分析 F P CHCl 3 8.345 0.02 CHBr 3 41.397 0.00 CHCl 3 + CHBr 3 8.345 0.02 表4. CHCl 3 + CHBr 3 单独与联合作用浓度与死亡率试验结果(1 h)