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user: 3. 结果 3.1. 美洲鲥卵巢发育形态变化 美洲鲥卵巢成对存在，分为左右2叶，位于体腔中腹两侧，紧贴于体肾，在鱼体稍后端形成细小的输卵管。美洲鲥卵巢富有产卵板及大的卵巢腔，当卵巢发育成熟时，卵巢的滤泡膜破裂，大量成熟的卵子进入卵巢腔，后经输卵管由泄殖孔排出体外。根据卵巢外部形状、色泽及显微表观观察为卵巢划分依据，将美洲鲥的卵巢发育分为6期。 第Ⅰ期 卵巢较小，呈透明细线状，位于腹腔壁后体腔两侧，肉眼不能分辨雌雄。卵巢内主要以卵原细胞为主，其排列杂乱无章，多为圆形或椭圆形，具有较大的细胞核 [ 27 ] 。终生只出现一次，在亲鱼卵巢周年期发育过程中并未发现。 第Ⅱ期 卵巢长度继续增加，可见完整的双叶状结构，呈现前部钝圆逐渐往后细长延伸的圆锥形，肉红色，表面由一层淡红色被膜所覆盖，表明可见明显的微细血管，肉眼可初步分辨出雌雄，内部则观察不到卵粒，此时性指数GSI为1.91% (图2(A))。 第Ⅲ期 卵巢呈现粉红色或淡黄色，表面具丰富的血管。卵巢体积明显比II期增大，外部形态为扁平长囊状，前端膨胀延长，呈现三角形。卵巢上可见分叶所形成的横纹，此时，肉眼可观察到细小的卵粒，但不容易分离，此时性指数GSI为6.33% (图2(B))。 第Ⅳ期 卵巢呈现淡黄色或浅红色，其表面富满血管。其体积进一步膨胀，呈囊状，几乎充满体整个体腔。两侧卵巢在鳔处有少量重叠，卵巢内部卵细胞颗粒多而饱满，肉眼可见，但卵粒相互粘连，不游离，此时性指数GSI为16.81% (图2(C))。 第Ⅴ期 卵巢极度发育，表面血管密布，呈淡黄色，体表可见明显的圆柱形隆起。其膨大饱满、松软，内部透明卵粒较多，主要集中在前中部，末端较少。卵巢内卵粒大都呈游离态。轻轻挤压雌鱼腹部，泄殖孔处有成熟卵粒流出，遇水后快速膨胀而呈圆形。此时性指数GSI为29.24% (图2(D))。 第Ⅵ期 即产后卵巢，卵巢开始退化，体积和重量大幅度降低，质地松软、瘪塌，卵巢腔开始萎缩，其后端空虚，呈现暗红色。卵巢中仍然可见未产出退化的乳白色成熟卵，此时性指数GSI为5.68% (图2(E))。 图2. 美洲鲥鱼卵巢发育形态 3.2. 美洲鲥卵巢组织学分期 鱼类卵子的发生经过增殖、生长和成熟这几个时期。随着季节的变化和性周期的运转，在卵巢的组织发育过程中，可以观察到处在不同发育阶段的生殖细胞。根据显微拍照观察显示，美洲鲥卵巢发育分为6个时期： I期卵巢 卵巢内细胞主要为卵原细胞，呈现圆形或椭圆形。 II期卵巢 处于此时期的卵巢中的卵细胞进入小生长期，即卵原细胞经过卵质的合成、积累和贮存形成初级卵母细胞。此时期的卵母细胞主要处于染色质核仁阶段和核仁外周期阶段，其呈圆形、椭圆形或多角形，细胞核卵圆形，并可清晰观察到细胞核的偏位现象，细胞核切面上有约1~10个核仁，位于核膜的边缘。由于卵质的合成与积累，细胞质增长较快，细胞质呈现强嗜碱性，苏木精染色成蓝紫色(图3(A))。 III期卵巢 初级卵母细胞进入大生长期，其形态基本呈圆球形，细胞体积明显增大，细胞质呈现弱嗜碱性。核膜呈波状形，核仁明显增多，十几个到数十个不等的细小核仁附在核膜上。此时一些卵母细胞处在染色质核仁阶段，大部分卵母细胞处于核仁外周期，更大的卵母细胞的细胞质外缘出现皮质液泡，进入皮质泡阶段(图3(B))，随后液泡数目不断增加并逐渐向内缘移位，从一层、两层到数层，细胞质中清晰可见卵黄颗粒，此时卵黄细胞进入早期卵黄积累阶段(图3(C))。 图3. 美洲鲥的卵巢发育组织学 IV期卵巢处于大生长期晚期的初级卵母细胞，即卵黄充满期，此时是卵黄快速积累的时期，细胞体积不断增大，卵黄颗粒迅速向细胞质外周扩散，液泡被挤压到卵母细胞边缘的细胞质中，并最终消失，卵黄颗粒充满整个细胞质，此时卵母细胞进入晚期卵黄积累阶段。IV时相卵巢中，大部分卵母细胞处于卵黄卵母细胞晚期，也存在部分卵黄卵母细胞早期，少部分处于III期(图3(D))。 V时相 该期卵巢中的卵母细胞经过充分发育后，细胞达到成熟，成为次级卵母细胞。核膜破裂并消失，细胞质被卵黄挤到细胞的边缘。卵黄球散布于整个卵母细胞的胞质内，大多数呈椭圆形，排列十分紧密，有的卵黄球已经融合成卵黄板，呈均质红染。卵质的边缘仍有液泡，即将排卵的滤泡膜松驰，大部分与卵膜分离。V时相卵巢中，V时相卵母细胞数量优势显著，少量III和IV时相的卵黄卵母细胞(图3(E))。 VI时相 卵母细胞形状不规则，蜷曲于卵巢内，开始闭锁，其特征是核消失，卵黄液化。卵巢中还有少量未产出的卵细胞和大量的排卵后残留的滤泡壁，大部分卵母细胞与II时相的类似(图3(F))。 3.3. 美洲鲥精巢发育形态变化 美洲鲥精巢为小叶型，精巢与卵巢相似成对存在，基本对称。精巢由许多精小叶构成，分布及形状不规则。精小叶由许多精小囊组成。当精细胞发育成熟形成精子后，精小囊破裂，精子进入小叶腔中，经输精管排出。非成熟期精巢外观呈现浅粉色，成熟期的为乳白色。根据精巢外部形状、色泽，将美洲鲥的精巢发育分为6个时期。 第Ⅰ期 精巢很小，呈透明线状，精巢内以精原细胞为主，终生只出现一次。 第II期 精巢呈现粗线状，为半透明粉红色，紧贴于腹腔的背侧，表面可见细微血管，此时性指数GSI为0.89% (图4(A))。 图4. 美洲鲥精巢发育形态 第III期 精巢体积开始增加，外表面紧致，微血管增多，此时性指数GSI为2.88% (图4(B))。 第IV期 精巢体积进一步增大，精巢的两个分支部分延长，外观呈现灰白色，较为饱满，此时性指数GSI为6.57% (图4(C))。 第V期 精巢体积达到最大，非常饱满，占据整个腹部，精巢质地软，颜色乳白色，血管清晰可见，将精巢剪断有乳白色精液流出，此时性指数GSI为8.06% (图4(D))。 第VI期 此时精巢开始萎缩，表面出现褶皱，体积变小，精巢质地开始变硬，此时性指数GSI为5.49% (图4(E))。 3.4. 美洲鲥精巢组织学分期 美洲鲥自第一次性成熟时，雄鱼生殖细胞会经过5个发育时期，即精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子。依据雄性生殖细胞的发育阶段、分布和数量，将精巢分为6个时期： I期精巢精巢中主要为精原细胞。 II期精巢 精巢中出现初级精母细胞，其体积较大，呈圆形或椭圆形，核大，核膜明显，HE染色核较深，细胞质染色较浅(图5(A))。 III期精巢 精巢发育到III期，其内已无精原细胞。在精小囊边缘的位置为体积较大、排列松散的初级精母细胞，嗜碱性增强，整个细胞被苏木精染成深蓝色，在其内侧分布的是排列更紧密的体积较小的次级精母细胞。在精小叶中间的精子细胞体积比次级精母细胞更小，嗜碱性强，整个细胞被苏木精染成深蓝色。此时的小叶腔被以上三种细胞充满(图5(B))。 图5. 美洲鲥的精巢发育组织学 IV期精巢 精巢小叶腔内充满流动的精子(图5(C))。 V期精巢此时期精巢完全成熟，部分精子开始排出(图5(D))。 VI期精巢经过排精或自然退化到达VI期。此时期的精巢中仍然可见稀松未完全排出的精子，整个精巢开始萎缩，结缔组织增多(图5(E))。经过一段时间的生长，精巢将过渡到II时期，进行下一周的发育。 3.5. 繁殖季节 美洲鲥雌雄腺腺指数(GSI)、肝体比(HSI)及肥满度(CF)的月变化见图6。由图可见，2015年10月到12月，雌鱼和雄鱼的GSI较为稳定，自2016年1月开始，雌鱼和雄鱼的GSI快速增加，且最高值均出现在5月(雌鱼：29.24% ± 3.84%，雄鱼：8.06% ± 1.19%) (ANOVA， Tukey’s post hoc， P < 0.05)。6月份，雌鱼和雄鱼的GSI有所降低，但仍保持较高水平，之后快速降低到7月份。自8月份开始，雌雄GSI保持一定的水平(图6(A))。 自2015年10月到12月，雌鱼的HIS逐渐增加；自2016年1月到3月份，HIS迅速增加，且在3月到达最大值(2.05% ± 0.05%) (ANOVA， Tukey’s post hoc， P < 0.05)，之后HIS略有降低，但仍然保持较高的水平一直到6月份。自7月开始，HIS开始降低；自2015年10月到12月，雄鱼的HIS表现出了轻微的波动；自2016年1月到6月，指数快速降低，在6月到达最低值(0.93% ± 0.1%)，之后开始缓慢升高(图6(B))。 自2015年10月到12月，雌雄鱼CF缓慢增加，自2016年1月份开始，快速增加，且在2016年5月达到最大值(雌鱼：1.88% ± 0.9%；雄鱼：1.65% ± 0.02%) (ANOVA， Tukey’s post hoc， P < 0.05)，自6月份开始下降，9月份开始回升(图6(C))。 图6. 美洲鲥雌雄腺指数(GSI)、肝体比(HSI)及肥满度(CF)的月变化 3.6. 卵径 对2015年10月-2016年9月每个月中的美洲鲥卵巢卵子的卵径进行了测量(图7)。从图可知，从2015年10月到2016年2月，美洲鲥平均卵径展现了增加的趋势，此时卵径表现出单峰分布。自3月份，美洲鲥平均卵径进一步增加，此时卵黄开始积累，呈现了2个峰，平均卵径分别分布在0.15~0.6 mm和0.7~1.2 mm两个范围内。随着生长发育，较大卵径的卵母细胞进一步发育成为首批成熟卵子(1.2~1.8 mm)，这时大规模的成批次的产卵行为发生在4、5、6三个月份。自7月份开始，平均卵径开始变小，卵巢中成熟卵的数量较少。从那时起，美洲鲥卵巢开始进入恢复期(图7)。 图7. 美洲鲥卵径频率分布图(2015.10~2016.9) 3.7. 繁殖力 计数了30尾Ⅳ期雌鱼的怀卵量，其体长范围为40.5到45.0 cm，体重在1.25 ± 0.46 kg。可知，绝对繁殖力为69，033.99粒~414，184.28粒(平均304，251.71 ± 61，293.27)，相对繁殖力为71.38粒/g~395.38粒/g (平均254.44 ± 49.11粒/g)。