DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 实验结果及分析 本文验证实验是基于UCSD数据集 [ 16 ] ，该数据集包含有两部分：Ped1和Ped2，分别描述两个不同的场景。两个子集中异常运动模式包括骑自行车的人、踩滑板的人、汽车等等，而正常运动模式都是人行道上正在行走的行人。为了提高计算效率，本文保持分辨率长宽比不变，统一把视频分辨率缩小为210 × 140像素。三层卷积核个数设置为100、100和210，卷积核尺寸分别为8 × 8，4 × 4及3 × 3。此外，本文所采用的学习框架是采用无监督方式进行学习。测试过程中以帧层和像素层的接受器操作特性曲线(Receiver Operating Characteristic，ROC)以及等错误率(Equal Error Rate，EER)作为最终的评价标准来验证本文方法的检测性能。其中，EER表示在漏检率等于假阳率情况下的检测错误率。该评价标准沿用了Mahadevan等人 [ 15 ] 提出的评估方式，即当某个像素被认为是异常的时候就判定该帧是异常帧；而如果引起异常的对象有40%的像素被检测到，就认为异常定位准确。 为了更有效评估方法的检测性能，本文采用以下四种对比方法：社会力模型 [ 3 ] ，混合动态纹理模型 [ 4 ] ，稀疏重构代价模型 [ 5 ] 及深度学习模型AMDN [ 6 ] 。该四类方法按其所采用特征可以分为两大类：1) 非深度学习方法，采用不同的传统手工设计特征来检测异常。其中，社会力模型是受物理学启发的用于异常检测的经典模型，主要通过交互力和环境因素来描述场景动态；混合动态纹理模型充分考虑场景外观和运动信息，基于局部特征表达来检测异常；稀疏重构代价模型是基于光流特征的稀疏表达思想，采用重构误差来评估运动的异常程度。2) 深度模型。AMDN方法是第一个用于异常检测的深度模型，采用自动去噪编码器层级结构。这四种方法代表不同的特征编码方法，也能够全面地反映出本文框架高效性。 实验一：验证层级编码框架的运动感知编码特性。图2表示层级学习框架中三层编码特征的可视化。针对图2，可以得出以下结论：1)低层主要编码运动边缘和方向等信息；2)中层则主要表征运动模式的局部结构信息，具有一定的类别信息，如头部运动、脚部运动等；3)高层更倾向于表达不同的运动模式类别信息，包含运动模式的全局结构信息。此外，深度学习的本质思想也是模拟人类视觉系统的视觉信息层次处理机制，从海量的数据中进行学习提取有用的特征。因此，无论其他检测方法使用了几层的处理机制，本文实验揭示的三层编码规律都应该能够去解释其编码特性。 图2. 三层神经元的特征表达可视化，(a) 低层；(b) 中层；(c) 高层 图3表示某卷积核特征响应图及其在原始数据上的感受野区域。针对图3，可以看到：1) 低层编码的边缘等信息与运动模式类别无关，具有共性，上述三层编码规律再次得到了充分验证；2) 中层局部结构信息的特征表达适用于分析某些拥挤场景下局部运动模式；而高层编码特征，可以有效用于运动模式检测和行为识别等视觉任务。基于此，本文将高层全局结构特征来建模场景中的运动模式用于异常检测。 实验二：评估三层学习框架在异常检测任务中的检测性能。图4和表1给出了不同方法在UCSD数据集上的异常检测和异常区域定位的定量结果。由于现有大多数方法都没有给出Ped2子数据集上的异常区域定位结果，因此，图4中也没有给出异常区域定位曲线。针对定量结果，可以得到：1) 异常帧检测层面：本文方法在Ped1子集上取得了与最好方法相当的性能，但明显优于其他对比方法；在Ped2子集上本文方法的性能是最好的，相比于其他方法，有了较大的性能提升。2) 异常区域定位层面：本文方法在EER和AUC两个标准下都获得最好的性能。此外在UCSD数据集上的一些异常检测实例如图5所示。 针对上述获得的优异定量结果进行分析：1) 相比于采用手工设计特征的传统方法，本文方法是采用学习机制提取高层全局特征，不需要专业的先验知识，并且特征具有更强的表达能力，因此本文方法的异常帧检测和异常区域定位性能都优于该类方法。2) 相比于基于深度学习的检测方法，AMDN是第一个用于异常检测的采用深度框架的方法，从结果不难发现，其取得了优异的检测性能。但是该方法采用的去噪自动编码器网络结构较为复杂，层级较多，忽略了运动感知层级编码特性。而本文方法采用结构较为简单的三层学习框架，模拟生物视觉的双通道机制，充分考虑运动感知层级编码规律。尽管AMDN方法在Ped1子集上的异常帧检测取得最好的性能，但是本文方法同样也取得了相当的性能，而且异常区域定位和Ped2子集上异常帧检测性能上都有一定提升，综合来看，本文方法的异常检测优势更明显。 图3. 响应特征图及其对应的感受野区域 Table 1 Quantitative comparison for anomaly detection on UCSD datase 检测方法 Ped1帧层 Ped1像素层 Ped2帧层 AUC (%) AUC (%) AUC (%) Social Force [ 3 ] MDT [ 4 ] Sparse Reconstruction [ 5 ] AMDN [ 6 ] 本文方法 67.5 81.8 86.0 92.1 89.8 19.7 44.1 46.1 67.2 72.5 55.6 82.9 — 90.8 92.3 表1. UCSD数据集上的异常检测定量评比结果 图4. UCSD数据集上异常检测结果定量曲线。 (a) Ped1帧层检测结果ROC曲线；(b) Ped1像素层检测结果的ROC曲线；(c) UCSD数据集上EER结果；(d) Ped2帧层检测结果ROC曲线 图5. UCSD数据集上异常检测实例
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user: 4. 结束语 现有异常检测方法在至关重要的特征编码层面存在不足，忽略了运动感知编码特性。针对该问题，本文模拟生物视觉系统的信息处理机制，通过采用具备稀疏特性的ICA算法构建HMAX计算模型，研究其运动感知层级编码特性，揭示了低中高三层编码规律，然后，采用高层运动全局结构特征来对视频场景中的正常运动模式进行建模，用于异常运动模式发现。UCSD数据集实验已经充分证明了本文方法的有效性，本文的异常检测方法获得的性能也优于其他传统方法和AMDN方法。
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user: 摘 要 操作系统内核受到攻击，会对操作系统以及应用程序造成重大的威胁，为了保证操作系统内核的完整性，本文提出了一种基于UEFI固件的操作系统完整性度量机制，该方案主要在UEFI BIOS启动过程中，利用TCM芯片的加密，认证和Hash运算等技术，对操作系统内核进行完整性度量，能够有效保护内核以及操作系统的安全。 关键词 :UEFI，操作系统内核，TCM，完整性度量 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 操作系统是计算机硬件和软件的纽带，是应用软件运行的基础环境，而内核的安全性是操作系统安全的核心问题，若操作系统内核受到攻击，会对操作系统以及应用程序造成重大的威胁。 文献 [ 1 ] 中指出了可信验证包括启动验证和运行时验证两种类型，启动验证来源于认证启动 [ 2 ] ，认证启动保证了操作系统开机启动时是安全可信的，如果开机启动时不能够保证操作系统的安全性，则开机启动之后的验证将不再有意义。如何在开机启动时保护操作系统的完整性，防止恶意程序攻击内核系统是可信计算 [ 3 ] [ 4 ] 亟待解决的问题。本文通过在UEFI BIOS启动的过程中，基于TCM [ 5 ] 芯片的加密和认证等功能，完成对操作系统内核文件的完整性度量，从而保证了操作系统内核的完整性和安全性。 IMA [ 6 ] (IBM integrity measurement)提出了一种有效的度量方法，该方法是在加载动态链接库或内核模块时，对用到的一些关键数据和信息进行度量，并将度量的结果扩展到通过TPM来保护的信任链中。IMA架构要求任何软件在加载的时候都要被度量，而用户可能只关心某一部分的完整性，对于这些用户来说IMA度量会有冗余，会降低系统的效率 [ 2 ] 。 而本文提出的基于UEFI [ 7 ] 的操作系统完整性度量方法只是对操作系统的内核进行完整性度量，而且适用于一台计算机装一个或者多个操作系统的情况。该方法是以硬件芯片作为起点，度量在BIOS中执行，增加了其自身的安全性，相对于那些在应用层做度量的方法更安全。而且将被检测的对象分离开，更能够有效的防止篡改和不可旁路性，在实现技术上，通过一台安全管理服务器来管理度量初始值的安全性，更简单方便。 UEFI (United Extensible Firmware Interface)是Intel联合业界采用开源方式共同制定推出的规范 [ 8 ] 。UEFI BIOS定义了操作系统和平台固件之间的接口标准，是运行在操作系统和硬件之间的一个新的模型 [ 9 ] 。UEFI较BIOS有可编程性好，可扩展性好，安全性高等优点，所以能够很快速的取代传统BIOS，成为新一代的趋势。
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user: 2. 基于UEFI的操作系统完整性度量的总体设计 基于UEFI的操作系统完整性度量主要包括两部分，一部分是需要度量的客户机，另一部分是进行安全管理的服务器。整个系统的流程图如图1所示，客户机首先在UEFI BIOS启动的时候获取操作系统的内核以及版本，对操作系统内核做Hash运算，然后判断本地存储的OsKernalFile文件是否被篡改，如果被篡改，则将OsKernalFile文件里的内容清空后向服务器发送请求，要求服务器发送该版本的安全内核文件；如果没有被篡改，再查看本机中是否存储该操作系统的安全内核Hash值以及该Hash值是否失 图1. 系统流程图 效，如果存在该操作系统的安全内核Hash值并且该Hash值在有效期内，则取出该安全内核Hash值，与开机启动时获取的操作系统内核Hash值进行对比，对比通过，进入到操作系统，对比不通过，直接关机；如果不存在该操作系统的安全内核Hash值或者该Hash值已经失效，则向服务器发送请求，要求服务器发送该版本的安全内核文件。客户机向服务器发送的内容主要包括操作系统的内核Hash值和版本信息，安全管理服务器通过通讯模块接收请求，对客户机进行身份的认证，然后得到操作系统内核镜像文件Hash值以及版本信息，进一步跟DB里存放的安全的操作系统内核镜像Hash值进行对比，对比通过之后，将该版本的操作系统内核相关的信息(内核Hash值，版本信息和有效期)发送给客户机，客户机接收到该信息之后，将该条信息更新到OsKernalFile文件，将整个OsKernalFile文件的Hash值更新到TCM上。 OsKernalFile文件存储的是客户端装的所有的操作系统内核相关的信息，每一条记录是一个操作系统相关的信息，包括内核的有效期，内核的版本信息和内核的Hash值。每次开机，要先对整个文件做Hash运算，再跟TCM中存储的整个文件的Hash做对比，对比通过，说明OsKernalFile文件没有被篡改，对比不通过，首先清空该文件，然后再请求服务器重新发送安全内核的Hash值。 本系统使用SM3杂凑算法 [ 10 ] 产生Hash值，SM3算法是国家密码管理局编制的商用算法，适用于商用密码应用中的数字签名和验证、消息认证码的生成与验证以及随机数的生成，可满足多种密码应用的安全需求。SM3密码杂凑算法的设计主要遵循的原则有3点，第一点是能够有效抵抗比特追踪法及其他分析方法；第二点是软硬件实现需求合理；第三点是在保障安全性的前提下综合性能指标与SHA-256同等条件下相当 [ 11 ] 。 安全管理服务器中的DB是专门用于存储所有安全的操作系统内核镜像文件的相关信息，包括系统的版本和内核的Hash值。在接收验证请求时，首先会对客户端发过来的操作系统内核镜像进行对比，如果在DB里能够找到该镜像文件，说明该镜像文件是安全的，将该安全的内核镜像文件发送给客户机，所以要想保证整个过程的一个安全性，首先要确保存放在安全管理服务器上的DB的安全性，如果用户攻击了DB，修改了部分操作系统内核镜像，那么在运行验证内核安全性模块的时候就不会通过，整个过程将会终止，针对这个问题，本系统采取的措施是在硬盘上存储加密的DB，秘钥存放到TCM上，每次修改该DB时，都要通过SMI中断进入SMM模式，在BIOS层修改。 整个系统的框架图如图2所示，客户机主要包括发送请求模块，安全内核管理模块，信息处理和度量模块，安全管理服务器包括通讯模块，内核安全性验证模块，数据管理模块，发送安全内核相关信息模块。客户机是在操作系统启动之前的UEFI BIOS启动的时候进行的一系列的操作，安全管理服务器是在操作系统起来之后的应用层进行的，在UEFI BIOS启动的DXE阶段，就已经能够进行网络传输，所以向安全管理服务器发送请求模块和安全管理服务器向客户机发送安全内核模块都具有可行性。
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user: 3. 基于UEFI固件的操作系统完整性度量的模块设计 3.1. 客户端模块的设计 客户机从本地获取安全的系统内核Hash值，通过跟自己机器中的内核Hash值对比，决定是否开关机，在本地没有内核Hash值时需要向服务器发出请求，要求服务器将安全的内核Hash值存储到本机中。如图3所示，客户机包括四个模块，分别是请求发送模块，安全内核文件管理模块，信息处理模块，度量模块，其中安全内核管理模块又包括文件的存储管理，失效检测和读取管理3个模块。 1) 请求发送模块 该模块主要是用来向服务器端发送请求，请求服务器端将某种版本的操作系统内核文件传输给自己。本地存储的OsKernalFile文件被篡改，或不存在该内核Hash值或存在但是不在有效期内时调用该模块。 图2. 系统的总体框架图 图3. 客户端的组织结构图 2) 安全内核管理模块 文件存储管理模块：主要用来存储安全管理服务器端发送过来的安全操作系统内核相关信息的模块。在存储该模块的时候，首先将该条消息存储到硬盘上，然后对整个文件进行杂凑运算得到新的文件Hash值，将整个文件Hash值更新到TCM中。 文件失效检测模块：该模块主要实现检测本机中已存在的安全操作系统内核Hash值是否失效，如果失效，调用请求发送模块。主要是通过有效期来判断，首先获得当前的日期，再跟服务器端发来的文件的有效期进行对比。 文件读取管理模块：该模块是用来实现对安全操作系统内核Hash值的读取，但是在读取信息之前，需要先确定该Hash值是不是被篡改过，需要将存储到本机硬盘上的安全操作系统内核Hash值文件在进行杂凑运算，将生成的整个文件的Hash值与TCM中已存的文件Hash值进行对比，对比通过之后，在对硬盘上的安全操作系统内核Hash值进行读取操作。 3) 信息处理模块 数据加解密模块：该模块主要实现的是TCM相关的一些算法，包括SM3杂凑算法，平台身份秘钥PIK (本质上是一对SM2秘钥)。 数字信封解封管理模块：该模块主要实现的功能主要包括两个：一个是对客户端向安全管理服务器端发送信息的封装操作，另一个是对服务器端向客户端发送数据的解封操作。 4) 度量模块 在BIOS启动的时候，首先获取os内核镜像文件，使用SM3杂凑算法产生Hash值，调用文件读取管理模块读取文件中的安全os内核Hash值，将这两个Hash值对比，从而决定操作系统的启动与关闭。 3.2. 安全服务器端的设计 服务器端接收到请求之后，将客户端发送过来的内核Hash值与本地安全内核DB中的同一版本的Hash值进行对比，通过之后给客户端发送安全的操作系统内核Hash值相关信息。如图4所示，服务器端主要包括通讯模块，内核安全性验证模块，信息处理模块，数据管理模块，安全内核相关信息生成模块5个模块，其中数据管理模块又包括数据增加模块，数据查找模块和数据删除模块。 图4. 服务器端模块图 1) 通讯模块 主要利用UEFI中的网络协议相关的知识实现接收验证请求，以及与客户端的通讯功能。 2) 内核安全性验证模块 该模块主要实现的是将客户端发送的操作系统内核Hash值与本地存储的同一版本os内核Hash值做对比，如果两个Hash值一致，说明该客户端发送的内核信息是安全的，如果不一致，则返回一个错误的信息。由于在安全服务器端存放的是已经加密的所有安全操作系统内核Hash值文件，所以需要先对其解密。 3) 数据管理模块 该模块是供安全服务器管理员使用的模块，主要实现的是对服务器中的安全操作系统内核Hash值文件的管理，包括数据的查找，增加和删除。在服务器端存放的是使用SM2公钥对整个文件加密过的，而秘钥存放在TCM中。 数据查找模块：该模块主要实现的是内核Hash值的获取，首先利用SMI中断进入到SMM模式，然后在SMM模式下获取SM2私钥信息，在BIOS下对文件进行解密，退出SMM模式，找到想要的内核Hash值，然后进入到SMM模式，在BIOS层对文件使用SM2公钥加密，最后退出SMM模式 [ 9 ] 。 数据增加模块：该模块主要实现的是管理员在SMM模式下增加一条或者多条安全的操作系统内核Hash值记录，同样需要对安全的操作系统内核Hash值整个文件在UEFI BIOS层进行解密和加密。 数据删除模块：该模块实现的过程与上述两个模块的实现过程类似，只不过是在对文件的操作不同。在UEFI BIOS层进行解密，删除一条信息之后，在对整个存放内核信息的文件进行加密。 4) 安全内核相关信息生成模块 该模块是在跟客户机发送的内核信息比较通过之后调用的模块，主要是用来生成安全内核文件的一些信息，在将这些信息发送到客户机端，生成的安全操作系统内核信息(OsKernalMessage)的格式如图5所示，设置分隔符的作用主要是为了便于程序的读取。 图5. 服务器端发送文件格式图 5) 信息处理模块 数字信封封装模块：该模块主要实现的是对客户端发过来的数字信封进行拆封以及将要发送给客户机的信息进行封装。 信息加解密模块：同客户端的信息加解密一样，调用TCM相关的算法完成对数据的加解密操作。
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user: 4. 基于UEFI固件的操作系统完整性度量流程设计及算法实现 4.1. 客户端存储度量初始值的流程及算法实现 Client： 1. 首先获得操作系统内核信息OsKernal和版本信息OsVersion； 2. 对操作系统内核信息做SM3杂凑运算：OsKernalHash = SM3 (OsKernal)； 3. 对本地存储的OsKernalFile文件做hash运算得到OsKernalFileHash，跟TCM中存储的OsKernalFileHashTCM值对比看是否一致，如果不一致，或者一致，但是本地没有存储该操作系统相关的信息，或者存储但是已经失效，拼接系统内核信息和版本信息：OsKernalMsg = OsVersion|OsKernal； 4. 将操作系统内核相关的信息封装成数字信封，封装数字信封的过程如下： 1) 产生一个对称的秘钥，用对称的秘钥对OsKernalMsg信息进行加密，利用TCM中的随机数生成器生成一个128位的数据，将这个数据作为SMS4的对称秘钥，利用SMS4对称算法对OsKernalMessage加密。 encOsKernalMessage = SMS4_Encrypt (SMS4Key，OsKernalMsg)； 2) 利用服务器的PIK公钥Server_PIK_public对SMS4Key对称秘钥进行加密，得到加密的对称秘钥EncryptSMS4Key，EncryptSMS4Key = SM2_Encrypt (Server_PIK_public，SMS4Key)； 3) 将加密的操作系统内核信息encOsKernalMsg和加密秘钥EncryptSMS4Key封装成数字信封。 DigitalEnvelop = encOsKernalMsg|EncryptSMS4Key。 5. 将封装好的DigitalEnvelop发送给安全管理服务器。 Server。 6. 安全管理服务器接收到DigitalEnvelop信息之后，对DigitalEnvelop进行拆封运算，具体的流程如下： 1) 拆封数据信封，分别得到encOsKernalMsg信息和EncryptSMS4Key信息。 2) 使用自己的PIK私钥Server_PIK_private解密，得到对称秘钥SMS4Key。 SMS4Key = SM2_Decode (Server_PIK_private，EncryptSMS4Key)。 3) 使用对称秘钥SMS4Key解密加密的操作系统内核信息encOsKernalMsg得到OsKernalMsg。 OsKernalMsg = SMS4_Decoode (SMS4Key，encOsKernalMsg)。 7. 查看os内核信息OsKernalMsg是否在本地库中，String SerchMessage (File f，String str)函数实现的是查找文件中是否存在s功能，查找成功返回数据库中的这条记录，并进行下一步信息的封装操作；查找失败返回NOT_EXIT，并将该消息发送给客户端，客户端收到该消息之后，执行关机命令。 8. 将整条os内核记录与有效期进行拼接，得到OsKernalMessage。 OsKernalMessage = indate|OsVersion|OsKernalHash。 9. 对OsKernalMessage进行封装，封装的过程如下，其中Client_PIK_public是客户端PIK公钥，SMS4Key是一个128位的随机数： encOsKernalMessage = SMS4_Encrypt (SMS4Key，OsKernalMessage)； EncryptSMS4Key = SM2_Encrypt(Client_PIK_public， SMS4Key)； DigitalEnvelop = OsKernalMessage|EncryptSMS4Key。 10. 使用服务器端的PIK私钥数字签名，并将签名信息发送给客户端。 SignatureDigitalEnvelop = SM2_Signature (Server_PIK_private，DigitalEnvelop)； Client。 11. 客户端用服务器端的PIK公钥验证签名，对安全管理服务器进行身份认证。 DigitalEnvelop = SM2_VerifySignature (Server_PIK_public，SignatureDigitalEnvelop)。 12. 拆封数字信封，得到OsKernalMessage信息，并将该信息存储到硬盘上。 SMS4Key = SM2_Decode (Client_PIK_private，EncryptSMS4Key)； OsKernalMessage = SMS4_Decoode (SMS4Key，encOsKernalMessage)。 13. 将存储OsKernalMessage的整个文件OsKernalFile做hash运算，得到文件Hash值，在将该信息更新到TCM中。 OsKernalFileHash = SM3 (OsKernalMessage)。 4.2. 客户机完整性度量的流程及算法实现 1. 客户机开机启动获取内核相关信息并对内核信息进行hash运算，得到内核的hash值。 OsKernalHash = SM3 (OsKernal)。 2. 对本地存储的OsKernalFile文件做hash运算得到OsKernalFileHash，跟TCM中存储的OsKernalFileHashTCM值是否一致，如果不一致，则清空OsKernalFile文件里的内容，然后调用客户端存储度量初始值模块，具体的步骤在上一小节已详细介绍；如果一致，则说明硬盘上存储的没有被篡改。 OsKernalFileHash = SM3 (OsKernalFile)。 3. 在本地OsKernalFile文件中取出该操作系统的OsKernalHash’，将OsKernalHash信息与OsKernalHash’做对比，如果一致，说明内核没有篡改，进入到操作系统；如果不一致，说明内核被篡改，执行关机命令。
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user: 5. 系统安全性的核心问题 本系统是在UEFI BIOS启动的时候根据本地存放的安全内核的文件，对操作系统内核文件进行完整性度量，度量通过开机启动，要想保证整个过程的安全性，需要做到以下3点： 1) 客户端OsKernalFile文件的安全存储问题。OsKernalFile文件中存储的是本计算机中装的所有操作系统内核Hash相关的信息，是度量的初始值，如果OsKernalFile文件被篡改，度量会失去意义。为了保证该文件的安全性，需要将整个的OsKernalFile文件的Hash值存储到TCM中。在每次读取该文件时，都需要将OsKernalFile文件的Hash值与TCM中的Hash值做对比，对比通过，说明存储到该硬盘上的OsKernalFile文件是安全的。 2) 服务器端DB的安全存储问题。在安全管理服务器端存放着所有安全可信的操作系统内核镜像的文件，每次都要判断客户机发过来的操作系统内核文件是否在该DB中，如果有，说明该操作系统内核镜像文件是安全的。如何保障DB的安全性是一件极其重要的工作，该系统采用的是硬件防护，将存储和数据加解密进行有效的隔离，在操作系统上存放的是已加密的文件，在加密和解密的时候在可信的UEFI BIOS完成。 3) 传输数据的安全性。数据在网络中传输，为了保证数据的安全性，一般采取的是对需要传输的数据进行加密，常见的一些传输加密技术包括数字信封技术，SSL协议等技术，由于客户机的固件只是在开机启动的时候工作，而SSL在传输数据的时候需要三次握手才能够确认其身份，所以在该系统中SSL协议不适用，所以本系统采用了数字信封的方式来保证数据传输的安全性。
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user: 6. 实验及结果 该系统的安全性在上一章节已经论述，下面我们将对整个系统的功能进行验证： 1) 在一台计算机中装一个win8的操作系统，调用该系统，能够正确的对操作系统的完整性度量，计算机正常开机。 2) 在重新开机启动该计算机，也能够实现对操作系统的完整性度量，计算机正常开机。 3) 修改操作系统内核文件，在开机时进行度量，该操作系统的内核摘要跟本地存储的内核度量初始值不一致，度量不通过，计算机不会开机。 4) 修改客户机本地硬盘中存储的内核度量初始值，在开机启动时度量，对OsKernalFile文件做SM3杂凑，跟TCM中存储的OsKernalFile文件hash不一致，会请求服务器重新发送该操作系统内核信息。 5) 伪装成服务器的身份，发送给客户机不安全的内核信息，客户机收到该消息后，对服务器进行身份认证不通过，会再次请求服务器发送安全内核信息。
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user: 7. 总结 OS的安全性是计算机安全的核心，而内核的安全性是操作系统安全的核心，本文提出了一种基于UEFI BIOS的操作系统完整性度量机制，实现了在UEFI BIOS的启动过程中对操作系统内核镜像文件的完整性度量，保证了操作系统内核的安全性。在实现的整个过程中最主要的是要保证操作系统度量初始值的完整性和安全性，这是该度量机制的难点也是关键点，如果不能够保证度量初始值的正确性，该系统的度量将不再有意义。 该机制会对电脑的开机速度有较大的影响，在后续的工作中，会对该问题进行改进。本机制只是实现对操作系统完整性的度量，但是不能够保证电脑安装操作系统时操作系统的安全性，下一步可以增加操作系统的远程安装功能，进一步保证电脑中操作系统的安全性。
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user: 摘 要 目的：探讨MDT精细化护理对少数民族食管癌根治手术患者心理状况的影响效果，以期改善少数民族食管癌手术患者的生存质量。方法：以我院胸外科2015年7月~2016年6月进行食管癌根治手术的少数民族患者80例为研究对象，随机分成两组，实验组40例，对照组40例。对照组采用传统的常规护理，实验组在常规护理的基础上采用MDT精细化管理护理，MDT包括医师、责任护师、心理师、营养师，两组患者干预时间均为4周，干预前及干预1个月后对两组患者采用贝克抑郁自评量表、健康促进生活方式量表(HPLP-ll)、护理满意度调查表进行评分。结果 两组患者干预前的抑郁评分无统计学差异(p > 0.05)，干预后有差异有统计学意义(p < 0.05)；两组患者健康促进生活方式评分明显提高(p < 0.05)，与对照组比较，护理后试验组的健康促进生活方式评分提高明显，差异有统计学意义(p < 0.05)；护理满意度均高于对照组，两组比较均差异有统计学意义(P < 0.05)。结论：MDT精细化护理可改善食管癌患者的心理状态，提高患者的依从性，提高患者的生命质量有效地提高医疗护理质量及患者的满意度，值得在临床中推广应用。 关键词 :MDT精细化化护理，食管癌根治术，心理状况，影响研究 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 食管癌是常见的胸部恶性肿瘤，发病率在恶性肿瘤中排第五位，死亡率排第四位，5年生存率仅为27% [ 1 ] ，严重威胁人的生命和生活质量。病人在心理上和精神上因疾病的不可治愈而产生巨大的困扰，表现为愤怒、罪恶感、自责、难过及哭泣等，术前普遍存在抑郁、焦虑、恐惧等负性情绪严重影响手术的安全性和术后的快速康复 [ 2 ] 。新疆是少数民族聚集的省区，少数民族患者因其生活习俗及语言等的特点，其心理问题更加突出。多学科协作(Multi-disciplinary team， MDT)的工作模式是由临床多个学科，针对一个临床疾病，通过多学科的讨论会议，制定出最合理治疗方案的临床治疗模式。精细化管理是在常规基础管理的基础上，对分工更加精细化，服务质量精细化，是现代管理的必然要求，强调以最佳、准确、细致，完全严格执行为原则，以达到医疗质量高度的可控性 [ 3 ] [ 4 ] 。为满足少数民族食管癌手术患者心理及精神的需求，我院胸外科尝试为患者提供MDT细化护理管理，取得较好的成效。
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user: 2. 资料与方法 2.1. 临床资料 选取2015年7月~2016年6月接受全腔镜下食管癌根治术患者80例为研究对象，2015年7月~2015年12月40例手术患者为对照组，其中维吾尔族患者32例，哈萨克族患者8例，男29例，女11例，年龄35~77岁，实施常规护理，2016年1月~2016年6月接受全腔镜下食管癌根治少数民族患者40例为实验组，其中维吾尔族患者34例，哈萨克族患者6例，男31例，女9例，年龄37~78岁。实施MDT精细化管理模式的护理。纳入标准：两组患者既往均无手术史，胃镜检查病理证实，术前常规行胸部增强CT以了解肿瘤大小及外侵的程度，均采用胸腹腔镜行食管癌根治术+纵膈淋巴结清扫术+幽门成形术。两组患者在性别、族别、年龄、文化程度、手术方式方面差异无统计学意义p > 0.05，具有可比性。两组患者神志均清楚，已知晓病情同意参加本研究。 2.2. 方法 2.2.1. 对照组干预方法 采用传统护理方法，给予常规治疗和胸外科常规护理，包括对疾病的个体化健康教育、肿瘤手术患者的饮食指导、患者及家属的心理护理、围手术期护理等。 2.2.2. 观察组干预方法 在与对照组治疗护理相同的基础上应用MDT精细化护理模式给予围手术期护理 [ 4 ] ，以时间为横轴，以入院指导、检查、用药、治疗、护理、饮食、活动、出院指导等护理环节为纵轴，每次干预时间根据患者病情及意愿决定。MDT精细化管理团队包括主管医师、少数民族责任护士、心理医师、营养师。具体措施：1) 注重心理护理：心理医师帮助患者重新自我认知，正确看待目前的患病状态，及时疏导患者心理；2) 建立家庭支持网络，鼓励患者及家属增加身体接触及主动性关怀语言让患者感受关爱，消除家属及患者对疾病及手术的恐慌，帮助其走出焦虑、悲观的不良情绪；3) 饮食治疗：根据患者的生活习俗、民族习惯及病情，营养师为患者制定营养计划；4) 医师在基于营养师、心理医师建议的基础上为患者制定综合的治疗方案；5) 少数民族责任护士负责具体组织，引导患者对手术的正确认识，提高应对策略。两组患者均为4周。 2.3. 观察指标 干预前及干预1个月对两组患者进行采用贝克抑郁自评量表、健康促进生活方式量表(HPLP-Ⅱ)、护理服务满意度调查表进行评分。 2.3.1. 抑郁情况评分 贝克抑郁自评量表是由美国心理学家贝克于1967年编制。共二十一个条目，每个条目为0分到3分四个等级，目前在国内被广泛应用与于评估病人在过去一周中的抑郁症状的严重程度，总分0分到4分为无抑郁或轻度抑郁；5分到13分为轻度抑郁；14分到20分为中度抑郁；21分及以上为重度抑郁 [ 5 ] 。 2.3.2. 健康促进生活方式状况评分 采用HPLP-ll [ 6 ] 进行患者健康促生活方式状况评定，包含自我实现、健康责任、运动、营养、人际关系、应对能力等六个维度，共计五十二个条目，每个条目包括从不、有时、经常、总是4个层次，分值50分到208分，得分越高患者的生活质量越高。 2.3.3. 患者的护理满意度 采用问卷法进行满意度调查。科室护理满意度调查表为自行设计，分为满意、较满意和不满意。共发放调查表80份，收回有效调查表80份，回收率100%。 2.4. 统计学方法 采用SPSS21.0进行统计学软件数据分析。计量资料数据采用均数±标准差表示，采用t检验。计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，p < 0.05差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 两组患者护理前后抑郁自评状况评分比较 干预前两组间患者抑郁评分无差异(p > 0.05)，干预后两组间患者抑郁评分有明显差异(p < 0.05)见表1。 3.2. 两组患者护理前后健康促进生活评方式分比较 护理前后两组患者的健康促进生活评方式评分均有提高(p < 0.05)，与对照组比较，实验组得分明显提高(p<0.05)差异有统计学意义，见表2。 3.3. 两组患者护理对护理满意度评分的比较 两组患者护理对护理满意度评分有差异(p < 0.05)，见表3。 Table 1 Two groups of patients with beck depression self rating scale score comparison before and after interventio 组别 例数 干预前 干预后 t p 实验组 40 23.20 ± 7.09 16.20 ± 7.09 6.441 0.000 对照组 40 24.56 ± 8.15 24.26 ± 8.19 0.689 0.497 t −1.590 −5.710 P 0.110 0.0000 表1. 两组患者干预前后贝克抑郁自评量表评分比较(分， ) Table 2 Nursing evaluation way points to compare two groups of patients' health promotion lif 组别 例数 自我实现 健康责任 运动 营养 人际关系 应对压力 总分 对照组 40 干预前 19.6 ± 1.2 15.9 ± 1.3 17.0 ± 1.6 18.1 ± 1.3 20.6 ± 1.5 18.4 ± 2.2 109.8 ± 9.5 干预后 23.8 ± 1.9 18.9 ± 2.1 18.8 ± 3.3 21.1 ± 2.1 25.9 ± 2.9 23.8 ± 3.0 132.3 ± 14.2 t 2.270 2.17 2.390 2.130 2.230 2.240 2.140 P 0.035 0.040 0.019 0.044 0.036 0.034 0.042 实验租 40 干预前 19.8 ± 1.1 15.8 ± 1.5 17.1 ± 1.3 18.0 ± 1.4 18.6 ± 1.5 20.8 ± 1.4 109.7 ± 8.9 干预后 32.1 ± 3.3 24.2 ± 241 26.1 ± 3.5 21.1 ± 2.1 28.2 ± 2.8 35.1 ± 1.3 179.1 ± 19.8 t 2.580 2.230 2.470 2.130 2.650 2.430 2.320 P 0.013 0.036 0.015 0.044 0.007 0.026 0.022 表2. 护理两组患者健康促进生活评方式分比较(分， ) Table 3 Compare two groups of patients satisfaction (% 组别 例数 满意 较满意 不满意 满意率(%) 实验租 40 40 0 0 100 对照组 40 36 3 1 90.24 X 2 4.40 P 0.000 表3. 两组患者满意度比较(%)
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user: 4. 讨论 4.1. MDT精细化护理有助于改善少数民族食管癌根治手术患者的心理状态 由于癌症的高死亡率以及检查治疗过程中经受的痛苦体验会使癌症患者特别是新发的癌症患者，产生强烈的心理反应，他们经受病魔的折磨遭遇肉体和精神的痛苦困扰而得不到舒缓则可影响患者身心症状和治疗的疗效。癌症患者伴抑郁状态普遍存在，且高达74.2% [ 7 ] 。本研究显示：实验组少数民族患者实施MDT精细化护理干预后，抑郁状况明显好转(p < 0.05)见表1。说明MDT精细化护理干预改善患者的抑郁严重的程度。由于中国国情的影响护士往往把工作的重心放在治疗上以至于忽略了病的心理感受。MDT模式 [ 8 ] 使传统个体经验性医疗模式转变为现代团队协作规范化模式，对患者关爱和人性尊重融入。强调的是团队合作精神，实施全程的管理，在满足病人生理需要的同时，还要关注病人的各种心理需求和心理反应，提供医疗综合照顾，以爱心专业知识和积极态度为病人家属提供全面服务。 4.2. MDT精细化管理明显提高患者的健康促进的状况 生存质量涉及患者的躯体、精神或心理、社会及总体主观感觉等各个方面的内容，在肿瘤的临床研究中生存质量的评价也成为临床研究的主要内容之一 [ 9 ] ，并且越来越多的学者认同生存质量做为一种新兴的健康评价方法的价值。针对患者存在的心理问题，对健康良好的生活方式进行宣讲，用患者熟悉的语言讲述与癌症进行抗争的成功案例从而树立患者产生疾病的信心，使患者理解手术的安全性急效果，建立手术信心，使心理障碍得以消除获得安全感，减少不良情绪，从而以最佳的状态对手术治疗进行配合。本研究显示：护理前后两组患者的健康促进生活评方式评分均有提高(p < 0.05)，与对照组比较，实验组得分明显提高(p < 0.05)差异有统计学意义，见表2。MDT精细化护理提供专业指导消除患者的负性情绪以及检查和治疗等给患者的身心痛苦，充分体现专业性强的人文关怀，制定实施个性化的护理方案，有效提高少数民族患者的依从性，提高对胸腔镜手术的应对能力，从而明显的提高患者生活和生命质量。 4.3. MDT精细化管理创新了护理模式提高了患者满意度 MDT精细化管理其核心是“以患者为中心”，改进各个环节中的细节，多学科参与护理，形成团队一体化的工作流程，进一步规范救治程序，明确各协作体的职责，评估决策执行结果，做好环节、终末质量控制。提高患者对护理工作的满意度，从而利于患者不良情绪的缓解。本研究中实验组患者满意度明显高于对照组(p < 0.05)差异有统计学意义，见表3。
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user: 5. 小结 癌症患者的负性情绪源于病痛折磨及对死亡的恐惧。新疆为食管癌的高发区，少数民族食管癌患者因其特殊的地域特点及对手术诊疗的恐惧等，其负性情绪较多见，往往影响患者及时有效的治疗。本研究探讨应用MDT精细化护理的模式对少数民族食管癌根治手术的患者负性情绪的影响，结果显示患者不良情绪得到有效缓解，患者的生活质量及满意度得到明显提高。MDT精细化管理模式在现有技术，人力的基础上，通过合理的资源调配和管理，即能减少时间浪费，提高救治质量及效率，达到优化资源的目的，从而为患者提供更完整的全程服务保障体系，加快患者的快速康复 [ 10 ] ，本研究的结果有很好的临床实际参考意义，由于此次研究仅在我院进行，为肿瘤病人的心理护理提供了一种新的护理模式，同时创新了胸外科护理专科护理内涵，在临床进一步推广还有待于扩大样本深入研究。
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user: 摘 要 目的：检测肝癌病人血清中MFG-E8水平及探讨其在肝癌中作用。方法：ELISA法检测血清中MFG-E8水平；分子克隆构建MFG-E8真核表达载体；MTT法和Migration assay法分别检测肝癌增殖和转移作用。结果：肝癌病人血清中MFG-E8水平明显升高，对肝癌诊断具有很好的价值，且和AFP水平呈正相关；过表达MFG-E8促进肝癌转移。结论：肝癌病人血清MFG-E8水平升高，其促进肝癌转移，对肝癌诊断具有很好价值。 关键词 :肝癌，MFG-E8，肿瘤转移 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肝癌是最常见的恶性肿瘤，其致死率在肿瘤中排第三 [ 1 ] [ 2 ] 。在过去的几十年中，肝癌诊断主要依靠影像学技术和血清标志物 [ 3 ] 。然而，大多数患者在诊断时已经处于肝癌晚期，其生存期一般小于1年 [ 4 ] [ 5 ] 。依靠血液或血清样本检测肝癌相关生物标志物对肝癌的诊断具有重要意义。血清甲胎蛋白AFP水平在肝癌检测中得到了广泛的应用 [ 6 ] 。但是，AFP诊断肝癌的灵敏性和特异性只有60% 和80%左右 [ 7 ] [ 8 ] 。因此，寻找其它更有效的血清标志物尤为重要。 乳脂肪球表皮生长因子8 (Milk fat globule–EGF factor 8，MFG-E8)是一种多功能糖蛋白，最早发现于小鼠乳房上皮细胞中，在清除凋亡细胞中起着重要作用 [ 9 ] 。MFG-E8存在于心脏、大脑、肾脏、脾脏、肺脏等中 [ 10 ] ，具有调控受精卵结合 [ 11 ] 、血管新生 [ 12 ] 、凋亡细胞清除等 [ 13 ] 作用。最近还发现其具有免疫调控和促进炎症反应作用 [ 14 ] [ 15 ] 。MFG-E8可分泌到血液中，在细胞培养液中也可检测到 [ 16 ] 。研究表明MFG-E8科促进肿瘤的上皮间质化(EMT)和肿瘤的药物抵抗 [ 17 ] [ 18 ] 。最近研究发现阻断MFG-E8可抑制乳腺癌增殖和转移 [ 19 ] 。但是，MFG-E8在肝癌病人血清中水平及其在肝癌中作用尚未清楚。 在这篇论文中，我们首先用ELISA方法检测肝癌病人血清中MFG-E8水平，同时进行ROC曲线分析研究其在肝癌诊断中价值。此外，我们也构建MFG-E8质粒，并进一步在肝癌细胞株HepG2中研究其对肝癌增殖和转移作用。
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user: 2. 材料与方法 标本收集 健康人血清来自广州医科大学附属第三医院体检中心。肝癌病人血清来自暨南大学附属华侨医院检验科。所有病人资料和标本收集都严格按照广州医科大学和暨南大学伦理委员会相关规定。伦理批准时间为2016年5月。 试剂和耗材 MFG-E8 ELISA检测试剂盒购自上海星科生物科技公司。AFPELISA检测试剂盒购自安图生物公司。DNA maker购自Bio-Rad公司。引物由Invitrogen公司合成。MFG-E8一抗购自CST公司。MTT购自北京鼎国公司。Transwell小室购自BD公司。 MFG-E8过表达质粒构建 在Pubmed上面调出MFG-E8基因CDS序列，根据MFG-E8基因CDS序列设计克隆引物(引物1F:5'-CCCAAGCTTATGCCGCGCCCCC-3'；引物1R:5'-CCGGAATTCCTAACAGCCCAGC-3'；引物2F:5'-CCCAAGCTTATGCCGCGCCCCCGCCTGCTGGCC-3'；引物2R： 5'-CCGGAATTCCTAACAGCCCAGCAGCTCCAGGCG-3')，以HepG2细胞cDNA为模板，进行PCR钓取MFG-E8基因，酶切、连接到pcDNA3.1+载体上，经公司测序确定MFG-E8过表达质粒构建成功。 MTT法检测肝癌细胞增殖能力 MTT法，即噻唑兰颜色反应法，是反映细胞增殖活力的测定方法 [ 19 ] 。活细胞里面线粒体琥珀酸脱氢酶能使MTT还原为不溶于水的蓝紫色晶体——甲缵，并沉淀在细胞里面，而死细胞则并不能使细胞里面的甲缵沉淀。取对数生长期肝癌细胞，接种到48孔细胞培养板中，每孔加入500 ml细胞悬液，置于37℃、5% CO 2 cell incubator中培养；细胞贴壁后其融合度达到80%左右，瞬时转染MFG-E8过表达质粒，不同时间点(24 h， 48 h， 72 h)加入200 µl的MTT工作液(浓度为5 mg/ml)，继续培养4小时；去掉上清后每孔加入2 ml dimethyl sulfoxide(二甲基亚砜，DMSO)，用摇床震荡摇匀，以使蓝色结晶颗粒甲缵完全溶解，用酶标仪测定OD 570 的光密度值。实验中每个实验组设置3个重复的培养孔，重复进行3次。 Migration assay检测肝癌转移能力 Migration assay是用Boyden transwell小室来进行实验的。将细胞消化后种植到6孔板中，等细胞融合度到达80%至90%时，瞬时转入MFG-E8质粒，在不同时间点消化细胞；将消化的细胞置于15 ml离心管中，用无血清的培养液配制成一定浓度细胞悬液。于24孔板中先加入500 μl含有10%血清的培养液，把transwell小室放到24孔板中，使transwell小室底端刚好接触到下面的培养液。以每孔加入1 × 10 5 个细胞加入transwell小室的上室。在不同时间点取出transwell小室，用4%的多聚甲醛固定15 min。然后进行结晶紫染色30 min，用清水轻轻洗去多余结晶紫染液，用棉签小心擦去transwell小室里面的细胞，然后室温晾干，使用显微镜观察transwell小室外面细胞和拍照。统计迁移过去的细胞数目。 统计学分析 采用SPSS17.0软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示。血清中MFG-E8水平和AFP水平采用t检验。ROC曲线分析用来判断血清MFG-E8对肝癌诊断价值。P < 0.05表示具有统计学意义。
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user: 3. 实验结果 肝癌病人血清MFG-E8水平升高且具有诊断价值 为了检测MFG-E8在肝癌病人血清中水平，我们收集了30例健康人和肝癌病人的血清，用ELISA试剂盒检测血清中MFG-E8水平。结果显示，与对照组相比，肝癌病人血清中MFG-E8水平明显高于健康人(图1(a))。此外，为了验证血清MFG-E8对肝癌病人的诊断价值，我们也进行了ROC曲线分析。结果显示，AUC面积为0.987，表明血清MFG-E8对肝癌的诊断具有很好的价值(图1(b))。同时ROC曲线分析表明血清MFG-E8对肝癌诊断敏感性和特异性分别为93.3%和90%；其诊断的cutoff值为11.95，95%置信区间为0.967~1.006 (图1(c))。 肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平呈正相关 甲胎蛋白AFP是肝癌诊断重要指标之一。为了进一步研究血清MFG-E8对肝癌诊断的价值，我们用肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平进行相关性分析。我们首先检测30例肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平(图2(a))，然后进行相关性分析。结果显示肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平呈 图1. MFG-E8在肝癌病人血清中水平及其ROC曲线分析。(a) ELISA法检测肝癌病人血清中MFG-E8水平(n = 30)。*** < 0.0001；(b) ROC曲线分析MFG-E8对肝癌诊断的价值；(c) ROC曲线分析MFG-E8对肝癌诊断的价值相关指标 图2. 肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平呈正相关。(a)肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平。ELISA法检测肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平；(b)肝癌病人血清MFG-E8水平和AFP水平相关性分析 正相关(图2(b))，具有明显的统计学意义，表明血清MFG-E8水平可以联合AFP水平来诊断肝癌，可能成为肝癌诊断指标之一。 MFG-E8真核质粒构建及其在肝癌细胞株HepG2中表达 上面结果提示了血清中MFG-E8在肝癌中诊断意义。为了进一步研究MFG-E8在肝癌中作用，我们首先构建MFG-E8真核质粒。首先，我们设计特异性引物，进行PCR试验，在肝癌细胞株HepG2中钓取MFG-E8基因。结果显示，在不同的退火温度，引物2都可以有效地钓取MFG-E8基因，而引物1钓取其它基因片段(图3(a))。因此，我们选用引物2进行PCR钓取的MFG-E8基因进行酶切、连接到pcDNA3.1+载体上，最后送公司测序。为了研究MFG-E8在肝癌中作用，我们用构建成功的MFG-E8质粒转染肝癌细胞株HepG2，验证其表达水平。Real-time PCR和Western blot结果显示MFG-E8在肝癌细胞株HepG2成功表达(图3(b)和图3(c))，为下一步功能研究提供了基础。 MFG-E8对肝癌细胞株HepG2生长作用 肿瘤异常增殖是肿瘤恶性特征之一。为了研究MFG-E8在肝癌中作用，我们首先检测MFG-E8对肝癌增殖作用。转染MFG-E8后在不同时间点(24h、48h、72h)进行MTT实验。结果显示，MFG-E8对肝癌生长并没有影响(图4(a))。为了进一步确认MFG-E8对肝癌增殖作用，我们也进行了平板克隆形成实验。与MTT实验结果一致，平板克隆形成实验结果也表明MFG-E8对肝癌生长作用没有影响(图4(b))。 图3. MFG-E8真核质粒构建及其在肝癌细胞株HepG2中表达。(a) MFG-E8目的片段钓取。用两对引物和不同退火温度来钓取目的基因；(b) Real-time PCR检测肝癌细胞株HepG2中MFG-E8转录水平。*** < 0.0001；(c) Western blot检测肝癌细胞株HepG2中MFG-E8蛋白水平 MFG-E8促进肝癌细胞株HepG2转移作用 肿瘤转移也是肿瘤恶性特征之一。接下来我们研究MFG-E8对肝癌细胞株HepG2转移作用。划痕实验表明MFG-E8促进肝癌细胞株HepG2转移(图5(a))。为了进一步确认MFG-E8对肝癌细胞株HepG2转移作用，我们也进行了Migration assay。结果同样表明MFG-E8促进肝癌细胞株HepG2转移(图5(b))。 图4. MFG-E8对肝癌细胞株HepG2生长作用。(a) MTT法检测MFG-E8对肝癌细胞株HepG2生长作用；(b)平板克隆形成实验检测MFG-E8对肝癌细胞株HepG2生长作用 图5. MFG-E8促进肝癌细胞株HepG2转移作用。(a)划痕实验检测MFG-E8对肝癌细胞株HepG2转移作用；(b) Migration assay检测MFG-E8对肝癌细胞株HepG2转移作用
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user: 4. 讨论 肝癌是最常见的恶性肿瘤，其死亡率在恶性肿瘤中排名前列 [ 1 ] 。许多研究表明肝癌的早期诊断和治疗可明显改善患者预后和生存期 [ 2 ] 。迄今为止，还没有理想的检查手段来筛查早期肝癌。甲胎蛋白是诊断肝癌的重要指标之一，但是，其灵敏性和特异性低 [ 7 ] 。因此，寻找新的高灵敏性和特异性的血清标志物对肝癌诊断尤为重要。乳脂球表皮生长因子8 (milk fat globule-epidermal growth factor-factor 8，MFG-E8)是包裹着蛋白质和甘油三酯的脂肪球膜组成部分 [ 9 ] 。新生的MFG-E8蛋白N-末端含有信号肽序列，介导MFG-E8分泌到细胞外 [ 13 ] 。MFG-E8广泛存在于人体各个组织和器官中，涉及到许多生理功能，如调控受精卵结合、血管新生、凋亡细胞清除、免疫调控和促进炎症反应作用 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] 。研究表明MFG-E8可促进乳腺癌和黑色素瘤的发展 [ 17 ] 。最近研究表明MFG-E8促进卵巢癌和乳腺癌的增殖和转移 [ 19 ] 。但是，MFG-E8在肝癌病人血清中水平、其能否成为诊断肝癌的指标以及MFG-E8在肝癌中作用尚未清楚。在这篇文章中，我们研究发现肝癌病人血清MFG-E8表达增高，且ROC曲线表明血清MFG-E8对肝癌具有很好的诊断价值(AUC = 0.987；敏感性为93.3%；特异性为90%；cutoff值为11.95)。此外，我们构建MFG-E8过表达质粒并在肝癌细胞HepG2成功表达。功能实验表明MFG-E8促进肝癌的转移。 越来越多研究表明，肝癌的早期诊断和手术明显改善肝癌病人疾病状态和存活期。AFP是肝癌诊断的重要指标之一 [ 13 ] 。但是，在许多疾病中AFP水平也升高 [ 8 ] ，AFP在肝癌诊断中特异性仅为80% [ 7 ] [ 8 ] 。因此，寻找更加敏感性和特异性的诊断标志物尤为重要。我们发现肝癌病人血清MFG-E8水平明显升高，进一步的ROC曲线分析表明其具有良好的诊断价值，其特异性优于AFP，表明血清MFG-E8可能成为诊断肝癌指标之一。 为了研究MFG-E8对肝癌功能影响，我们首先构建MFG-E8过表达质粒，并且成功转染肝癌细胞HepG2，表达高水平的MFG-E8 (图3)。MTT实验和平板克隆形成实验都表明MFG-E8对肝癌增殖能力并没有影响，这和MFG-E8促进乳腺癌增殖结果不一致 [ 19 ] ，可能是因为MFG-E8在不同的肿瘤中其功能不一样。进一步的功能实验表明，MFG-E8具有促进肝癌转移作用，结果类似于MFG-E8促进乳腺癌转移 [ 19 ] ，证明MFG-E8促进肿瘤转移具有广泛性。但是，MFG-E8促进肝癌转移的信号通路及详细分子机制尚未清楚，是我们本论文的局限地方，还值得我们进一步研究。 总之，在这篇论文中，我们实验结果证明MFG-E8在肝癌病人血清中高表达，且对肝癌具有良好的诊断意义；进一步研究表明MFG-E8促进肝癌转移，而不影响肝癌的增殖能力。
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user: 摘 要 目的：研究基因重组心肌肌钙蛋白I 与人工短肽融合蛋白(CIS)对肿瘤生长的抑制作用。方法：用Western Blot法观察对人肝癌细胞MHCC97H的VEGF-A和VEGF-C、MMP-9的影响。用3种人肿瘤异位可移植瘤模型观察CIS在裸鼠体内对肿瘤生长的抑制作用。结果：CIS对MHCC97H细胞，CIS 200 mg/ml，48 h，对VEGF-A表达较肿瘤模型组显著减少，抑制率为23.8%。DDP 2 mg/ml，48 h，对VEGF-A表抑制率为25.8%。CIS 200 mg/ml，48 h，对MMP-9表达较肿瘤模型组减少显著，抑制率为18.1%，DDP 2 mg/ml，48 h，对MMP-9表达比较肿瘤模型组抑制率为12.6%。CIS H组和DDP组对VEGF-C表达抑制作用较弱。荷瘤鼠体内皮下移植瘤模型实验显示CIS (10 mg/kg，SC)处理组肿瘤生长缓慢，瘤体明显小于模型对照组，对人肝癌HCC9204肿瘤瘤重抑制率为54.13%，对人可移植性乳腺癌BCaP-37肿瘤瘤重抑制率为53.88%，对人可移植性结肠癌HCT116肿瘤瘤重抑制率为41.12%。结论：基因重组心肌肌钙I与人工短肽融合蛋白CIS对人肝癌细胞MHCC97H VEGF-A和MMP-9表达具有抑制作用。在体内，CIS融合蛋白可有效的抑制人可移植肿瘤细胞的生长，CIS抗肿瘤效应与抑制肿瘤组织中血管内皮生长因子的表达和人基质金属蛋白酶-9的表达有关。 关键词 :基因重组心肌肌钙蛋白融合蛋白，VEGF-A，MMP-9，人可移植瘤，肿瘤抑制作用 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/