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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验菌株 植物乳杆菌GKM3：葡萄王公司自传统发酵酸菜分离筛选获得，经16SrRNA鉴定为植物乳杆菌。 2.2. 植物乳杆菌GKM3益生菌冻干粉末制备 GKM3培养于1 L MRS培养基中，经37℃、16小时培养后，以5000 RPM、25℃、离心10分钟取得菌泥，混入20%脱脂乳粉后冷冻干燥而得。调整菌数为5 × 10 9 cfu/g保存于−20℃备用。 2.3. 试验动物与饲养 本次试验遵守动物伦理委员会3R规范，以SPF级Wistar大白鼠18只进行试验，体重介于201~225 g之雄性大白鼠经一周稳定其后进行六周的实验饲养。动物房温度控制在22℃ ± 2℃，湿度控制在60%~80%，光照与黑暗各十二小时(07:00~19:00为光照期；19:00~07:00为黑暗期)。 2.4. 试验设计 18只试验动物喂予正常成鼠饲料和饮用蒸馏水适应环境1周后，将其随机分为三组，每组六只。其分组如下：正常饮食组(normal diet，ND)、高脂饮食组(high-fat diet，HFD)(饲料配方：以AIN93G为基础加以调整油脂比例，包含饲料固形物68%、大豆油7%和猪油25%)及HFD + GKM3组[高脂饮食组合并管喂植物乳杆菌GKM3益生菌冻干粉末(其活菌数5 × 10 9 cfu/g，以成人每日攝取1020 mg/day换算成大白鼠摄取量为102.8 mg/kg rat/day)溶于100 μL磷酸盐缓冲溶液管喂食]。试验期间，大白鼠自由摄食饲料和蒸馏水。每日纪录大白鼠之食物摄取量(food intake)、饮水量(water intake)和食物利用率(feed efficiency)。试验开始先纪录大白鼠之起始体重(initial body weight)，随后每两日精秤体重并观察其变化。给予试验样品之时间为6周，并于试验结束前12小时进行禁食。利用CO 2 进行牺牲，并纪录其最终体重(final body weight)和体重改变量(weight change)。从大鼠静脉进行血液采集，并作为后续血清生化分析。同时，取出脏器组织(心脏、肺脏、肝脏、脾脏和肾脏)和脂肪组织(肾周围脂肪、副睪脂肪、肠系膜脂肪、腹股沟脂肪和腹膜外脂肪)利用生理食盐水清洗并擦拭，纪录各个脏器和脂肪组织的重量，秤量后用铝箔纸包覆，并以液态氮冷冻，储存于−80℃冰箱，以供试验分析使用。 2.4.1. 食物利用率(%)之计算公式如下 食物利用率(%) = [体重增加量(g) ¸ 总饲料摄取量(g)] ´ 100%。 2.4.2. 体重改变量(g)之计算公式如下 体重改变量(g) = [最终体重(g) − 起始体重(g)]。 2.4.3. 总脂肪量(total body fat， mg/g rat)之计算公式如下 总脂肪量(mg/g rat) = [肾周围脂肪量(mg) + 副睪脂肪量(mg) + 肠系膜脂肪量(mg) + 腹股沟脂肪 (mg) + 腹膜外脂肪量(mg)] ¸ 最终体重(g)。 2.4.4. 体脂肪率(body fat percentage， %)之计算公式如下 体脂肪率(body fat percentage) = 总脂肪量(g) ¸ 最终体重(g) ´ 100%。 2.4.5. 内脏脂肪量(visceral adipose tissue， mg/g rat)之计算公式如下 内脏脂肪量(mg/g rat) = [肾周围脂肪量(mg) + 副睪脂肪量(mg) + 肠系膜脂肪量(mg)] ¸ 最终体重(g)。 2.4.6. 皮下脂肪量(subcutaneous adipose tissue， mg/g rat)之计算公式如下 皮下脂肪量(mg/g rat) = [腹股沟脂肪(mg) + 腹膜外脂肪量(mg)] ¸ 最终体重(g)。 2.5. 血清生化参数测定 血液收集于血清分离管(BD Vacutainer， Plymouth，UK)中，以4000 g离心10分钟取出血清，分装于微量离心管中并储存于−80℃冰箱，作为分析使用。血清三酸甘油酯、葡萄糖、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、天门冬胺酸转胺酶、丙胺酸转胺酶、尿酸、肌酸酐、钠离子、钾离子与氯离子浓度以市售分析套组(Diasys Co. Ltd.，Holzheim，Germany)进行测定。酮体以市售分析套组(Denka Seiken Co. Ltd.，Taipei City，Taiwan)进行测定。 2.6. 肝脏总脂质分析 2.6.1. 总脂肪萃取 称取肝脏组织0.3 g于离心管，加入甲醇(methanol) 1.3 mL与小钢珠后，置于均质机上(Mini-beadbeater-16，Biospec，OK，USA)，以30秒3次进行肝脏组织破碎，即可获得肝脏均质液。吸取肝脏均质液至玻璃螺旋试管，于均质小管再次加入甲醇1 mL冲洗后，同样吸取至玻璃螺旋试管。玻璃螺旋试管加入氯仿(chloroform) 4.6 mL后，利用超音波震荡器(ultrasonic cleaner) (DC150H，DELTA ® ，New Taipei City，Taiwan)，于室温下震荡90分钟后，置于10℃冷冻离心机(refrigerated benchtop centrifuge)经1250 g离心10分钟后，取上清液至已称量空重(W 0 )之玻璃螺旋试管。最后，将玻璃螺旋试管置于吹氮式试管浓缩装置下，利用吹氮浓缩方式使有机溶剂挥发，直到W n − W (n-1) £ 0.01 g时，即达恒重。于玻璃螺旋试管加入异丙醇(isopropanol)回溶肝脏脂质，利用超音波震荡器使肝脏脂质完全溶于异丙醇，作为后续三酸甘油酯与总胆固醇含量分析测定。 2.6.2. 三酸甘油酯测定 以市售之三酸甘油酯测定套组(TG assay kit，Teco Diagnostics，CA，USA)进行测定。于96 well盘加入2 μL标准品或肝脂质均质液与200 μL之TG reagent，置于37℃之热循环烘箱(FD-115，BINDER，Tuttlingen，Germany)反应5分钟后，利用分光亮度计(microplate reader) (UVM340，Biochrom，Cambridge，UK)测量520 nm吸光值，计算肝脏中三酸甘油酯含量(mg/g liver)。 2.6.3. 总胆固醇测定 以市售总胆固醇分析套组(Cholesterol assay kit，Teco Diagnostics，Randox Laboratories Co. Ltd.，Antrim，UK) 进行测定。于96 well盘加入2 μL标准品或肝脂质均质液与200 μL之TG reagent，置于37℃之热循环烘箱反应5分钟后，利用分光亮度计测量500 nm吸光值，计算肝脏中总胆固醇含量(mg/g liver)。 2.6.4. 粪便脂质分析 粪便总脂质萃取参考Tzang等人 [ 17 ] 之方法进行。将收集到之粪便放入烘箱进行烘干。将粪便捣碎后，取0.3 g放入10 mL的玻璃试管中，进行脂质萃取，并且分析粪便总脂质含量，此部份之方法同肝脏总脂质萃取，含有粪便脂肪之均质液加入isopropanol后，室温下利用超音波震荡器进行震荡10分钟，使粪便脂质完全溶解，将其吸取至微量离心管内，至−20℃冰箱保存，以待后续进行粪便三酸甘油酯和总胆固醇含量之检测。粪便中三酸甘油酯和总胆固醇分析方法同肝脏三酸甘油酯和总胆固醇含量之测定方法。 2.7. 统计分析 实验数据使用SPSS计算机统计软件进行分析。变异数分析则以PROC ANOVA与Duncan’s multiple range test进行分析，p < 0.05为具有显著性差异。