DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 CO 2 减排是目前全世界共同关注的问题，而CCS [ 1 ] (碳捕捉与封存)技术普遍被认为是减少CO 2 排放的最有效措施，其主要包括地质固定、海洋封存及矿物碳酸化 [ 2 ] 。矿物碳酸化手段认为是最稳定的固定CO 2 的方法，同时反应后生成的碳酸盐可作为建材产品应用于生活中 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 。钢渣中由于含有大量的CaO和MgO等碱性氧化物，可广泛用于碳的捕捉与封存。Shashikant [ 6 ] 研究了钢渣中物相的溶解及CO 2 封存行为，结果发现利用钢渣碳酸化是实现CO 2 封存的有效方式。Teir [ 7 ] 等利用钢渣代替天然矿物间接碳酸化固定二氧化碳时发现，在一定条件下可实现钙的完全浸出。Kodama [ 8 ] 等提出以氯化铵-氨水为反应介质，其具有一定的酸性可将其中的钙元素浸出，另外氯化铵也可回收循环利用。 不锈钢渣与钢渣成分类似，但因含有一定的铬，而六价铬具有一定的毒性，故在使用安全性上与普通钢渣存在较大差异。所以采用不锈钢渣固定二氧化碳时，需要抑制铬的溶出。不锈钢渣中铬的赋存形式对铬的稳定性有很大的影响 [ 9 ] [ 10 ] ，文献指出尖晶石相结构稳定 [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] ，当不锈钢渣中的铬富集于尖晶石相中时可实现铬稳定化的目的，使不锈钢渣浸出过程中，在不发生铬溶出的条件下，实现Ca、Mg元素的浸出。高温改质工艺广泛用于复杂多元渣系中有价组元的选择性富集，是一种快速实现目标组元富集的有效手段 [ 14 ] [ 15 ] 。基于以上研究背景，首次提出一种绿色处理不锈钢渣的工艺：1) 高温改质不锈钢渣实现铬的定向富集与稳定化；2) 改质不锈钢渣Ca、Mg酸浸及CO 2 矿化固定。 本实验采用Al 2 O 3 改质不锈钢渣，以实现铬的稳定化控制。并基于醋酸+氯化铵浸出液体系，探究Al 2 O 3 改质不锈钢渣中钙、镁铬元素的浸出行为，并热力学和实验分析钙、镁元素的浸出机制，实验结果为实现不锈钢渣的资源化及CO 2 减排提供一种新的思路。
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user: 2. 实验材料方法 2.1. 实验材料及试剂 实验过程中采用CaO、MgO、SiO 2 、Al 2 O 3 、Cr 2 O 3 、FeC 2 O 4 ∙2H 2 O、CaF 2 等化学纯试剂合成的不锈钢渣，其中FeO以FeC 2 O 4 ∙2H 2 O的形式加入。实验开始前，分别将CaO、MgO、Al 2 O 3 等在1000˚C条件下煅烧1 h，以除去水分和碳酸盐；SiO 2 、Cr 2 O 3 、FeC 2 O 4 ∙2H 2 O在110˚C条件下保温1 h，以除去水分。依据现场渣成分范围，实验选取渣的碱度(CaO/SiO 2 )为1.5，实验渣成分如表1所示。 2.2. 实验步骤 1) 实验中将配好的15 g渣样放入到钼坩埚中，并置于MoSi 2 高温炉内加热。升温之前，以0.5 L/min的气体流量通入氩气，保证炉内的惰性气氛。当炉内升温加热到1600˚C后，保温30 min，使炉渣完全熔化，然后以3˚C/min降温到1300˚C后保温30 min。然后快速将试样从炉内取出，并放入水中冷却。利用扫描电镜SEM-EDS和XRD对各组试样的显微结构及形貌进行观察和分析，并结合X射线能谱仪(EDS)对微区化学成分进行分析。 2) 称取3 g经步骤(1)改质的3#实验渣，研磨至粉状置于锥形瓶中，并向其中加入100 ml、3 mol/L的氯化铵溶液，用醋酸调节其pH为2.0、3.0和4.0。采用磁力搅拌器控制搅拌速率为200 rpm，实验温度分别为30˚C、70˚C、80˚C、90˚C，搅拌时间设置为60 min。实验完成后经过抽滤处理，得到的滤渣放入烘干机中烘干，称量质量，并计算其失重。同时滤液定容至250 ml，并采用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)检测滤液中Ca、Mg、Cr等元素的含量。具体实验方案如表2所示。 为了表征不锈钢渣物相结构对Ca、Mg元素浸出行为的影响，实验将表面打磨抛光后的块状不锈钢渣置于pH = 3的浸出液中，反应1 h后，从浸出液中取出试样，烘干后采用SEM-EDS对表面结构进行 Table 1 Chemical composition of experiment slag (mass% No. CaO SiO 2 MgO FeO Al 2 O 3 Cr 2 O 3 CaF 2 碱度 1# 45.6 30.4 9.0 3.0 4.0 5.0 3.0 1.5 2# 43.2 28.8 9.0 3.0 8.0 5.0 3.0 1.5 3# 40.8 27.2 9.0 3.0 12.0 5.0 3.0 1.5 表1. 实验渣成分(质量百分数) Table 2 Experiment program of leaching tes 试样序号 浸出液pH 温度/˚C 1 2.0 30 2 2.0 70 3 2.0 80 4 2.0 90 5 3.0 30 6 3.0 70 7 3.0 80 8 3.0 90 9 4.0 30 10 4.0 70 11 4.0 80 12 4.0 90 表2. 浸出实验方案 分析，明确影响不锈钢渣中Ca、Mg等元素浸出的因素。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. Al 2 O 3 对不锈钢渣中铬赋存行为的影响 尖晶石是不锈钢渣中最佳的铬富集和稳定相。在尖晶石相的形成过程中，熔渣中MgO、Al 2 O 3 、Cr 2 O 3 等组元相互作用形成复合的尖晶石相，如下式所示： MgO + Al 2 O 3 + Cr 2 O 3 → ( Mg ) ( Cr ， Al ) 2 O 4 (1) 从式中可以看出，不锈钢渣中尖晶石的形成主要由二价组元(MgO)和三价组元(Al 2 O 3 、Cr 2 O 3 )反应形成。当在不锈钢渣中提高反应物Al 2 O 3 ，有利于尖晶石相的形成。 图1所示为不锈钢渣的扫描电镜图片，表3为渣样中各物相的能谱结果，图2为渣样的X射线衍射图谱。由图1(1#)、图2和表2可知，未改质渣中的主要物相为尖晶石相和蔷薇辉石相。熔渣中的铬同时赋存于尖晶石相和基体中，且基体中含有0.42%的Cr元素，这说明未改质条件下有一定量的Cr仍赋存于液相中。当Al 2 O 3 含量提高到8%时，不锈钢渣的矿物组成没有发生变化，液相中仍赋存有一定量的Cr元素，但液相中铬的溶解量下降到0.37%。当Al 2 O 3 的含量继续添加到12%时，从XRD分析可知，此时不锈钢渣析出了大量的黄长石相，从EDS结果可知，此时铬仅富集于稳定的尖晶石相中，而液相和硅酸盐相中均没有检测到铬的存在。实验结果表明Al 2 O 3 能显著影响铬的赋存行为，促进铬向尖晶石相富 图1. Al 2 O 3 改质不锈钢渣的扫描电镜图 Table 3 EDS analysis of 1#、2# and 3# slag with basicity of 1. 试样 物相 Ca Mg Si Al Cr Fe O 1# 液相-1 21.43 3.22 14.08 3.39 0.42 nd 57.89 尖晶石-2 0.60 13.10 nd 4.43 24.60 nd 57.26 蔷薇辉石-3 21.74 6.20 14.70 nd nd nd 57.36 2# 液相-1 21.79 2.72 12.79 4.67 0.37 nd 57.66 尖晶石-2 nd 13.04 nd 7.35 22.22 nd 57.39 蔷薇辉石-3 22.23 6.41 14.24 nd nd nd 57.12 3# 液相-1 22.22 3.26 12.35 2.28 nd 2.94 57.25 尖晶石-2 0.32 11.71 nd 10.88 15.00 1.45 60.64 蔷薇辉石-3 20.28 6.46 14.39 nd nd 0.22 58.65 黄长石-4 15.90 2.78 9.33 11.57 nd 0.30 60.12 表3. 碱度1.5时淬冷条件下1#、2#和3#渣样的能谱分析，at% 图2. Al 2 O 3 改质不锈钢渣的XRD衍射图谱 集。从图2所示的XRD衍射图谱分析可知，改质后不锈钢渣主要物相为蔷薇辉石、黄长石和尖晶石相，而Ca元素主要赋存于液相、蔷薇辉石和黄长石相，Mg元素可同时赋存于液相、尖晶石、蔷薇辉石和黄长石相。 3.2. 不锈钢渣中物相的浸出行为 根据上节的研究可知，不锈钢渣中Ca、Mg元素可赋存于多种物相中，而Ca、Mg的赋存状态对浸出行为有很大的影响，为了表征各物相在水溶液的溶出行为，前期工作已经采用热力学计算分析了不锈钢渣中各物相的稳定性 [ 16 ] ，如图3所示。从图中可以看出，蔷薇辉石和钙镁黄长石等物相在水溶液中钙的溶出浓度明显高钙铝黄长石相。当溶液的pH小于4，钙离子的溶出量很大，这说明蔷薇辉石和钙镁黄长石等硅酸盐相在弱酸性溶液易发生溶出，而钙铝黄长石相在酸性溶液不易发生溶出。 3.3. 不锈钢渣中元素的浸出行为 3.3.1. 温度对不锈钢渣浸出行为的影响 图4所示为不同温度条件下不锈钢渣失重率的变化趋势，从图中可以看出，在相同pH条件下，当反应温度从30˚C升高至80˚C，不锈钢渣的失重率随温度的提高有一定的上升，但影响不明显，当温度继续升高至90˚C，失重率几乎不发生变化，说明温度对不锈钢渣的浸出没有明显促进作用。 3.3.2. pH对不锈钢渣浸出行为的影响 图5所示为溶液pH对不锈钢渣浸出行为的影响，从图中可以看出，当浸出液pH为2时，不锈钢渣的失重率最大，失重率达到44.83%。此时，Ca、Mg的浸出率分别为72.36%、65.19%。但铬同时发生明显的浸出，浸出液中铬的浓度达到15.8 mg/L。实验结果表明在该条件下虽然能有效促进Ca、Mg元素的浸出，但铬元素的大量溶出，反而带来新的污染问题，不利于不锈钢渣的资源化利用。当浸出液pH为3和4时，不锈钢渣的失重率分别为20.33%和19.00%，这表明当pH大于3时，不锈钢渣的浸出行为几乎 图3. 不锈钢渣中各物相的浸出行为 图4. 温度对不锈钢渣浸出过程失重率的影响 图5. pH对不锈钢渣浸出过程失重率的影响 没有发生变化。其中，Ca 2+ 的浸出率分别为30.60%、24.59%，Mg 2+ 的浸出率分别为29.32%、24.69%。相较于pH = 2条件下，此时Ca 2+ 和 Mg 2+ 浸出率有明显的下降，但不锈钢渣中的铬基本不发生溶出，符合环境要求。因此，在本实验条件下选取pH为3.0的浸出液更为合理。 3.4. 浸出机理分析 为了明确不锈钢渣中Ca、Mg元素的浸出机理，明确影响Ca、Mg元素浸出的因素。本实验对比分析了不锈钢渣浸出前后物相结构的变化行为。图6所示为淬冷抛光后Al 2 O 3 改质不锈钢渣试样在pH为3.0的酸性溶液侵蚀前后的扫描电镜图片。从图中可以看出，当不锈钢渣试样浸泡在酸性浸出液中，不锈钢渣的微观形貌有明显变化。结合表4的EDS分析结果可知，渣中蔷薇辉石相表面侵蚀严重，物相中Ca元素的含量明显降低，其组元成分与蔷薇辉石相的组成产生明显的变化。而其他物相(黄长石相和尖晶石相)和玻璃相的相结构保持稳定，Ca、Mg等元素也几乎不发生变化。图7所示为不锈钢渣浸出前后的XRD图谱。从图中可以看出，黄长石相和尖晶石相的衍射峰强度变化不大，而蔷薇辉石相的衍射峰明显降低。实验结果表明玻璃相、黄长石相和尖晶石相在本实验条件下不易发生溶解，蔷薇辉石相是不锈钢渣浸出液中Ca、Mg元素的主要来源。
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user: 4. 结论 1) 当不锈钢渣中Al 2 O 3 含量为4%和8%时，不锈钢渣主要由尖晶石相、蔷薇辉石相组成，当Al 2 O 3 含量增加到12%时，析出了大量的黄长石相。Al 2 O 3 改性后液相中的铬含量逐渐降低，有利于尖晶石相的 图6. 不锈钢渣浸出前后的扫描电镜图片 Table 4 EDS results of stainless steel slag before and after leaching， at 物相 实验条件 Ca Mg Si Al Fe Cr O 玻璃相 浸出前 18.32 2.26 11.54 4.24 1.31 nd 58.62 浸出后 16.00 2.70 13.66 3.21 1.37 nd 65.00 蔷薇辉石 浸出前 21.62 5.73 14.35 nd nd nd 58.30 浸出后 14.30 4.99 13.16 0.52 0.64 nd 65.49 黄长石 浸出前 16.52 2.52 11.06 9.13 nd nd 60.77 浸出后 14.81 2.45 10.88 10.16 0.29 nd 61.41 尖晶石 浸出前 0.39 11.65 nd 7.22 1.28 19.79 59.66 浸出后 0.44 12.28 nd 6.36 1.22 19.35 60.35 表4. 不锈钢渣浸出前后的能谱分析结果，原子比% 图7. pH = 3，T = 80˚C下不锈钢渣浸出前后的XRD衍射图谱 析出和铬向稳定的尖晶石相富集。 2) 不锈钢渣浸出过程中，在不发生铬溶出的条件下，不锈钢渣中Ca、Mg元素的浸出主要来源于蔷薇辉石相，玻璃相、黄长石相及尖晶石的相结构保持稳定，不发生明显的浸出行为。 3) 控制不锈渣中的Ca、Mg元素富集于蔷薇辉石相，有利于Ca、Mg元素的浸出。
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user: 摘 要 对于一个简单图G，变换图G +−− 定义为 V ( G + − − ) = V ( G ) ∪ E ( G ) ，且两个顶点 x ， y ∈ V ( G + − − ) 相邻当且仅当满足下列三个条件：1) x ， y ∈ V ( G ) 并且 x ， y ∈ E ( G ) ，2) x ， y ∈ E ( G ) 并且 x ， y 在G 中不相邻，3) x和y，其中一个在 V ( G ) 中，另一个在 E ( G ) 中，并且它们在G中关联。在这篇文章里，我们将证明G +−− 是平面的当且仅当 | E ( G ) | ≤ 2 或者与下列的某个图同构：C 3 ，C 3 + K 1 ，P 4 ，P 4 + K 1 ，P 3 + K 2 ，P 3 + K 2 + K 1 ，K 1，3 ，K 1，3 + K 1 ，3K 2 ，3K 2 + K 1 ，3K 2 + 2K 1 ，C 4 ，C 4 + K 1 ，2P 3 。 关键词 :全图，平面性，变换图 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 这篇文章里所有的图都是有限的，简单的，无向的。在 [ 1 ] 中可以找到没有被定义的术语和符号。图 G = ( V ( G ) ∪ E ( G ) ) ， | V ( G ) | 是G的顶点的个数， | E ( G ) | 是G的边的个数，v的邻集N G (v)是G中所有与v相邻的顶点的集合。因为G是简单图，所以有 | N G ( v ) | = d G ( v ) 。 假设V'是V(G)的一个非空子集。图G的导出子图 G [ V ′ ] 定义为 V ( G [ V ′ ] ) = V ′ 并且 u v ∈ E ( G [ V ′ ] ) 当且仅当 u v ∈ E ( G ) 。两个图 G = ( V ( G ) ， E ( G ) ) ， H = ( V ( H ) ， E ( H ) ) 的并，记为 G ∪ H ，点集是 V ( G ) ∪ V ( H ) ，边集是 E ( G ) ∪ E ( H ) 。如果它们不交，即 V ( G ) ∩ V ( H ) = ∅ ，它们的并记为G + H。 图G的线图L(G)的点集是E(G)，其两个顶点相邻当且仅当它们在G中相邻。图G的全图G +++ ，它的点集是 V ( G ) ∪ E ( G ) ，任意两点相邻当且仅当它们在G中或者是相邻的，或者是关联的。吴和孟 [ 2 ] 推广了全图的概念，并且引入了一些新的变换图。我们也采用了G xyz 这个符号， x ， y ， z ∈ { + ， − } ，这个符号是在 [ 2 ] 中被引入的。 如果一个图可以在平面中画出来使得他们的边不交，只有在端点处相交，我们就说这个图在平面上是可嵌入的，或者是可平面的。图G的剖分是在G的边上插入一系列的点之后得到的。Behzad [ 3 ] 刻画了图G的变换图G +++ 是可平面的。刘 [ 4 ] 给出了图G的变换图G −−− 是可平面的充要条件。吴等 [ 5 ] 证明了图G的变换图G − ++ 可平面的充要条件是G点数至多为4。读者可参考 [ 6 ] - [ 13 ] 了解更多的关于图G xyz 的结论。按习惯，n个顶点的完全图，圈，路分别记为K n ，C n ，P n 。两部分中的顶点数分别为m，n的完全二部图记为K m ，n 。 文章的第二部分我们使用了著名的Kuratowski [ 1 ] 定理。 定理1.1：一个图是可平面的当且仅当它不包含K 5 或者K 3，3 的剖分。 推论1.2：每个可平面简单图都有一个顶点的度数至多为5。 下面是这篇文章的主要结论。 定理1.3：对于一个边数为m的图G，G + −− 是可平面的当且仅当m ≤ 2或者G与下面的某个图同构：C 3 ，C 3 + K 1 ，P 4 ，P 4 + K 1 ，P 3 + K 2 ，P 3 + K 2 + K 1 ，K 1， 3 ，K 1， 3 +K 1 ，3K 2 ，3K 2 + K 1 ，3K 2 + 2K 1 ，C 4 ， C 4 + K 1 ，2P 3 。 证明：由引理2.1~2.5的结论可以立即得到。
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user: 2. 证明 下面的结论容易证明，但很有用。 引理2.1：如果H是G的子图，那么H + −− 是G + −− 的子图。 由引理2.1，如果H + −− 是非可平面的， G = H + k K 1 ，k是一个整数，并且k ≥ 1，那么G + −− 是非可平面的。我们很容易检测到对于边数m ≤ 2的图，G + −− 是非可平面的。接下来我们考虑边数为3的图，在图1中我们精确地给出了所有边数为3的并且没有孤立点的5个图。 引理2.2：对于一个边数为3的图G，G +−− 是可平面的当且仅当 G ∈ { C 3 ， C 3 + K 1 ， P 4 ， P 4 + K 1 ， P 3 + K 2 ， P 3 + K 2 + K 1 ， K 1 ， 3 ， K 1 ， 3 + K 1 ， 3 K 2 ， 3 K 2 + K 1 ， 3 K 2 + 2 K 1 } . 证明：充分性：正如图2中所示： G +−− ：3K 2 + 2K 1 ，P 3 + K 2 + K 1 ，K 1，3 + K 1 ，C 3 + K 1 ，P 4 + K 1 的变换图G +−− 是可平面的。根据引理2.1，C 3 ，P 4 ，P 3 + K 2 ，K 1，3 ，3K 2 ，3K 2 + K 1 的变换图G +−− 也是可平面的。 必要性：对于每一个图 G ∈ { P 3 + K 2 + 2 K 1 ， K 1 ， 3 + 2 K 1 ， C 3 + 2 K 1 ， P 4 + 2 K 1 } ，其变换图 ( G + 2 K 1 ) + − − 是非可平面的，因为它们都包含K 3，3 的剖分，如图3所示。 图1. 所有边数为3的没有孤立点的图 图2. 3K 2 + 2K 1 ，P 3 + K 2 + K 1 ，K 1，3 + K 1 ，C 3 + K 1 ，P 4 + K 1 的变换图G +−− 图3. P 3 + K 2 + 2K 1 ，K 1，3 + 2K 1 ，C 3 + 2K 1 ，P 4 + 2K 1 的变换图G +−− 图4. 所有边数为4的没有孤立点的图 图5. 一些边数为4的变换图 图6. 一些边数为4的变换图 现在我们来考虑边数为4的图，我们精确地给出了11种边数为4的没有孤立点的图，如图4所示。 引理2.3：对于一个边数为4的图G，G + −− 是可平面的当且仅当 G ∈ { C 4 ， C 4 + K 1 ， 2 P 3 } 。 证明：充分性：在图6和图7中我们给出了 ( C 4 + K 1 ) + − − ， ( 2 P 3 ) + − − 平面嵌入，因此 ( C 4 + K 1 ) + − − ， ( 2 P 3 ) + − − 是可平面的，由引理2.1， ( C 4 ) + − − 也是可平面的。 必要性：设G是一个边数为4的图，那么G可以由图4增加一些孤立点得到，由图4~图7和引理2.1，如果 G ∉ { C 4 ， C 4 + K 1 ， 2 P 3 } ，G + −− 是非可平面的。 现在我们来考虑边数为5的图。我们精确地给出了边数为5的没有孤立点的图，如图8所示。 引理2.4：对于边数为5的图G，其变换图G +−− 是非可平面的。 证明：因为图G是一个边数为5的图(如图8所示)，G包含一个边数为4的子图H，不同构于 C 4 ， C 4 + K 1 ， 2 P 3 。由引理2.3，H +−− 是非平面图。又由引理2.1知，H +−− 是G + −− 的子图。所以，G + −− 也是非平面的。 引理2.5：如果图G的边数m ≥ 6，那么G +−− 是非可平面的。 图7. 一些边数为4的变换图 图8. 所有边数为5的没有孤立点的图 证明：显然，G包含一个边数为5的子图H，由引理2.1得到H +−− 是G +−− 的子图。更进一步，由引理2.4得到G +−− 是非可平面的。
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user: 摘 要 彩色马铃薯中富含花色苷，是天然抗氧化物质来源之一。本研究从彩色马铃薯“黑金刚”中克隆了与花色苷合成相关的调控基因，其编码产物且与马铃薯R2R3-MYB转录因子高度同源，被命名为StMyb-like基因。该基因全长798 bp，编码个265个氨基酸，分子量为30.23 kD。通过半定量RT-PCR分析StMyb-like基因的表达，发现该基因在根和茎中表达量很低，而在富花色苷的薯肉、薯皮、芽和叶片中表达量比较高。为了研究彩色马铃薯StMyb-like基因的功能，利用DNA重组技术构建该基因的植物RNA干涉载体pART-MybRNAi，为后续研究该基因可能所参与的生命活动提供了基础。 关键词 :StMyb-like基因，花色苷，表达，RNAi，彩色马铃薯 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 马铃薯是是继玉米、水稻、小麦之后的第四大主要作物 [ 1 ] 。目前，栽培生产用的大部分是白色或黄色等薯肉的马铃薯，随着近几年来人们对彩色食品的偏爱，世界的研究热点也开始转向红色、紫色、蓝色等薯肉的彩色马铃薯，马铃薯产业也在云南省有着重要的地位 [ 2 ] 。花色苷是一种天然的抗氧化剂，具有抗氧化活性、抗衰老、防止血管硬化的功能，是一种潜在的抗癌化合物，在彩色马铃薯中含量丰富，使得彩色马铃薯不仅外形美观，而且抗氧化活性也很高 [ 3 ] 。 花色苷形合成涉及多种基因。它们可分为两大类：一类是结构基因，另一类是调节基因，即转录因子等 [ 4 ] 。研究表明，马铃薯花色苷合成调控基因编码产物为转录因子，激活或抑制靶基因的转录表达的蛋白，包括WD40、MYB、bHLH、WRKY、bZIP和MADS.BOX等，它们通过DNA序列特异性结合蛋白以及蛋白与蛋白之间的相互作用，结合到花色苷合成结构基因启动子的顺式作用元件上，特异性地激活或者抑制结构基因的表达，从而使得花色苷合成关键基因在不同组织不同阶段协同表达 [ 5 ] 。目前已经从拟南芥，玉米，矮牵牛，灯盏花，番茄等多个物种分离得到许多MYB转录因子他们大都直接或者间接转录激活花色苷多种结构基因，MYB类转录因子家族相关基因的调节活性的多样性是自然界中植物着色模式多变的主要原因 [ 6 ] 。本研究通过同源克隆技术，从彩色马铃薯中克隆新的转录因子MYB类型转录因子StMyb-like，并进行表达模式分析与RNA干涉载体构建，为研究彩色马铃薯花色苷合成途径的调控机制奠定理论基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料与试剂 2.1.1. 植物材料 供实验材料为云南主要栽培彩色马铃薯品种“黑金刚”，种植于云南农业大学后山实验田，共采集健康的马铃薯“黑金刚”的叶片、根、茎、薯皮、薯肉和嫩芽，为实验对象，于无菌保鲜袋−80℃冰箱保存。 2.1.2. 载体与菌株 实验使用到的中间载体和终载体分别为pKANNIBAL载体(中间载体)和pART载体(最终载体)由本实验室保存，载体示意图参见刘正杰等(2013) [ 7 ] 。 PCR所用EasyTaq、EasyTaq Buffer、dNTPs、各种限制性内切酶以及T4连接酶都是TaKaRa公司产品；DNA操作试剂盒(柱式质粒DNA小量抽提试剂盒、柱式PCR产物纯化试剂盒以及柱式DNA胶回收试剂盒)都是生工公司产品。 2.2. RNA提取、cDNA合成 彩色马铃薯RNA提取参照CTAB-PVP法 [ 8 ] ，cDNA合成方法参照RT-PCR试剂盒(Promega公司)说明书。 2.3. 基因的克隆与分析 通过应用其他物种的花色苷合成相关转录因子保守区域在NCBI上Blast比对马铃薯EST数据库获得分值较高的Unigene或EST序列，经拼接获得马铃薯中花色苷合成相关转录因子MYB的部分基因序列，再重新比对马铃薯EST数据库，获得更多的Unigene或EST并进行拼接，直到获得包含完整ORF的基因序列。根据获得的包含完整ORF的基因序列，设计引物StMybF1和StMybR1 (见表1)，以cDNA为模板进行扩增。 PCR体系为：cDNA模板2 ul、上游引物(10×) 1 ul、下游引物(10×) 1 μl、TaKaRa {dNTP Mixture 2 μl、Buffer (10×) 2.5 μl、TaqDNA聚合酶0.5 μl}、ddH2O补齐至总体积25 μl。 PCR反应条件：94℃预变性4 min；94℃变性30 s，退火温度57℃，72℃延伸30 S，循环30个；72℃延伸10分钟，回收PCR产物。 PCR产物连接至pMD18-T载体，转化至大肠杆菌E. coli DH5α，挑取经PCR检测的阳性单克隆送样测序。 Table 1 Primer sequences used in this stud 引物名称 碱基序列 用途 StMybF1 5’-ATGACTTCACATGCCATG-3’ 基因全长克隆 StMybR1 5’-TTAATTAAGTAGATTCCATATATC-3’ 基因全长克隆 StMyb-zpF1 5’-CCCTCGAGGTTGTAGACTGAGGTGGCTAAAT-3’ RNAi载体构建 StMyb-zpR1 5’-GGGGTACCCCTCCCTCATGTAACAAACTTG-3’ RNAi载体构建 StMyb-fpF1 5’-CGGGATCCGTTGTAGACTGAGGTGGCTAAAT-3’ RNAi载体构建 StMyb-fpR1 5’-CCATCGATCCTCCCTCATGTAACAAACTTG-3’ RNAi载体构建 StMybqF1 5’-GTTGTAGACTGAGGTGGCTAAAT-3’ 半定量RT-PCR StMybqF1 5’-CCAGTATATTTGCCCACCATTGC-3’ 半定量RT-PCR StEF-1αF1 5’-ATTCAAGlrATGCCTGGGTGCT-3’ 半定量RT-PCR St EF-1αR1 5’-GTGGTGGAGTCAAl’AATGAGGAC-3’ 半定量RT-PCR 表1. 本研究所用到的引物序列 根据目的基因StMyb-like的测序结果，应用不同软件进行初步的生物信息学分析。通过Blastn软件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)，预测目的基因可能所属于的基因家族；以NCBI-BlastORF软件进行其读码框分析；在线http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi分析蛋白结合结构域。 2.4. StMyb-like基因RNA干涉载体构建 2.4.1. 目的基因RNA干涉片段的扩增 以彩色马铃薯“黑金刚”cDNA为模板，引物StMyb-zpF1和StMyb-zpR1 (见表1)扩增StMyb-like正向片段StMyb-zp (约600 bp)；以引物StMyb-fpF1和StMyb-fpR1 (见表1)扩增StMyb-like反向片段StMyb-fp。PCR体系和反应条件参照2.3所示。正向片段StMyb-zp和反向片段StMyb-fp均通过琼脂糖凝胶试剂盒回收备用。 2.4.2. RNA干涉片段连接至中间载体pKANNIBAL 以XhoI和KpnI酶切中间载体pKANNIBAL和StMyb-zp。酶切体系：StDof-z 30 ul、XhoI 0.5 ul、KpnI 0.5 ul、10×Buffer 5 ul、ddH 2 O14 ul 合计50 ul，37℃恒温酶切6 h。回收酶切后的StMyb-zp片段和pKANNIBAL载体，以片段：载体 = 3:1左右配制连接体系：StMyb-zp 14 μl、pKANNIBAL 3 μl、T4-DNA连接酶1 μl、T4-DNA连接酶Buffer 2 μl，16摄氏度过夜连接(不超过12小时)，将连接产物转化至大肠杆菌E. coli DH5α，挑取经酶切检测的阳性单克隆提取质粒，并将质粒命名为pKANNIBAL-Mybzp。 以BamH I和Cla I酶切pKANNIBAL-Mybzp质粒和StMyb-fp。酶切体系如上所示，回收酶切后的StMyb-fp片段和pKANNIBAL-Mybzp质粒，以片段：载体 = 3:1左右配制连接体系(如上所示)，16摄氏度过夜连接，将连接产物转化至大肠杆菌E. coli DH5α，挑取经酶切检测的阳性单克隆提取质粒，并将质粒命名为pKANNIBAL-Mybzf。 2.4.3. RNA干涉最终载体的构建 以NotI单酶切pKANNIBAL-Mybzf质粒和pART载体。酶切体系：质粒载体30 ul、NotI 0.5 ul、10×Buffer 5 ul、ddH 2 O补平至50 ul，37℃恒温酶切6 h。回收pKANNIBAL-Mybzf质粒单酶切后较大的约4.3 kb的片段(包含启动子、RNA干涉区段以及终止子)，同时回收pART载体单酶切产物。将回收的4.3 kb的片段与pART载体进行连接，将连接产物转化至大肠杆菌E. coli DH5α，挑取经酶切检测的阳性单克隆提取质粒，并将质粒命名为pART-MybRNAi。
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user: 3. 结果与分析 3.1. StMyb-like基因的RT-PCR扩增与分析 提取彩色马铃薯叶片RNA，经反转录获得cDNA模板，以StMybF1和StMybR1 (见表1)为引物进行RT-PCR扩增，获得目的基因全长序列。该基因全长798 bp，编码个265个氨基酸，分子量为30.23 kD，理论等电点为6.95。经在线预测，该序列中含有两个HTH DNA结合结构域，是两个串联的MYB类功能域，第一个功能域位于17至73个氨基酸，第二个功能域位于第74至124个氨基酸，该基因编码的蛋白质与马铃薯R2R3-MYB转录因子高度同源性，因此该基因被命名为StMyb-like，如图1。 3.2. StMyb-like基因的表达模式分析 利用半定量RT-PCR分析StMyb-like基因组织表达模式，结果显示，StMyb-like基因在花色苷含量较低的根和茎中表达量都非常低，而与之相比，在薯皮、薯肉、叶和芽等富有花色苷的组织中表达量都比较高，如图2。 图1. StMyb-like基因RT-PCR扩增。泳道M：DL2000的Maker (从上到下分别为2000， 1000， 750， 500， 250， 100 bp)；泳道1~5：基因扩增产物 图2. StMyb-like基因在不同组织的表达分析。1：薯皮；2：薯肉；3：芽； 4：叶；5：根；6：茎 3.3. RNA干涉载体的构建与酶切验证 3.3.1. RNA干涉中间载体pKANNIBAL-Mybzf的构建与酶切验证 以XhoI和KpnI酶切StMyb-like基因特异的部分正向片段StMyb-zp，回收后连接至以相同酶(XhoI和KpnI)酶切的pKANNIBAL载体中，获得pKANNIBAL-Mybzp。对pKANNIBAL-Mybzp质粒DNA进行XhoI单酶切以及XhoI和KpnI双酶切验证，双酶切获得约600 bp的目的片段，如图3(a)，说明构建正确。 再以BamH I和Cla I酶切StMyb-like基因特异的部分正向片段StMyb-fp，回收后连接至以相同酶酶切的pKANNIBAL-Mybzp质粒载体中，获得pKANNIBAL-Mybzf。对pKANNIBAL-Mybzf质粒DNA进行BamH I单酶切以及BamH I和Cla I双酶切验证，双酶切获得约600 bp的目的片段，如图3(b)，说明RNA干涉中间载体pKANNIBAL-Mybzf构建正确。 3.3.2. RNA干涉载体pART-MybRNAi的构建与酶切验证 以NotI单酶切和pART载体，回收单酶切pKANNIBAL-Mybzf获得的约4.3 kb的大片段，如图4(a)， 图3. RNA干涉中间载体的酶切验证。(a)：pKANNIBAL-Mybzp质粒的单酶切和双酶切验证；(b)：pKANNIBAL-Mybzf质粒的单酶切和双酶切验证。泳道1~3：单酶切；泳道4~6：双酶切；泳道M：1 kb DL (从上到下分别为10， 8， 6， 5， 4， 3， 2， 1 kb) 图4. RNA干涉载体的酶切验证。(a)：NotI单酶切pKANNIBAL-Mybzf质粒；(b)：NotI单酶切验证RNA干涉载体pART-MybRNAi。泳道1~3：NotI单酶切产物；泳道M：15 kb DL (从上到下分别为15， 10， 8， 5， 4， 2.5， 1.5， 1， 0.5， 0.2 kb) 并连接至pART载pKANNIBAL-Mybzf质粒体，获得pART-MybRNAi。对pART-MybRNAi质粒DNA进行NotI单酶切检测，能获得约4.3 kb的目的片段，如图4(b)，说明RNA干涉载体pART-MybRNAi构建正确。
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user: 4. 讨论 随着目前对彩色马铃薯花色素苷生物合成途径的认识的逐步加深，彩色马铃薯花色素苷生物合成关键酶基因和转录因子相继被克隆，马铃薯花色苷生物合成途径中相关基因和转录因子功能鉴定也逐步深入 [ 9 ] ，其中，转录因子可通过单独或协作作用与结构基因启动子中含有的能被其识别的顺式作用元件结合，促进花色苷生物合成途径中多个基因表达，从而有效启动花色素苷生物合成途径 [ 4 ] [ 10 ] 。Jung等将马铃薯花色苷调节基因an2转入普通马铃薯栽培种中，其转基因植株叶片、薯皮、薯肉都出现不同程度的紫色 [ 11 ] 。Li等从彩色马铃薯品种中克隆了一个WD40类型的转录因子StAN11，StAN11基因的过表达使转基因块茎中花色苷的含量大幅增加，最高是对照的5倍以上 [ 12 ] 。 本研究基于同源克隆的方法顺利从彩色马铃薯“黑金刚”栽培品种分离克隆得到一个Myb转录因子家族编码基因，全长798 bp，包含完整CDS的序列，其核酸序列与Gen Bank数据库中R2R3类花青素转录激活基因高度同源，被命名为StMyb-like基因。对该基因的表达模式进行半定量RT-PCT分析发现，在富花色苷的组织中基因的表达量明显高于花色苷含量缺乏的组织，说明该基因的表达与花色苷的合成存在一定的关联，但具体的机理还需要进一步研究。 基因沉默是在生物体生命进程中普遍存在的一种现象，是基因表达调控的一种重要的方式。对于转录后的基因沉默，特别是RNAi技术是分子生物学研究的常用方法，其中，利用含有内含子重复序列来沉默内源基因，是目前应用于转基因诱导基因沉默的有效方法 [ 13 ] 。本研究成功构建了含有内含子重复序列的StMyb-like基因RNA干涉载体，为下一步载体的遗传转化和基因功能的剖析提供了研究基础。
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user: 摘 要 本文通过对白龙江流域甘肃陇南宕昌沙湾、甘肃甘南舟曲立节，犀牛江流域武都龙坝、礼县龙林、西和西高山等高海拔种植基地和扩区驯化试验点不同品种、不同栽培方式、不同管理措施等因素的受冻情况进行了调查分析。结果表明：陇南油橄榄主栽品种抗冻性(越冬性)依次为阿斯(Ascolana) > 鄂植8(Ezhi8) > 城固32 (Chenggu32) > 莱星(Leccino) > 科拉蒂(Cotatin) > 奇迹(Koroneiki)。新引西班牙油橄榄品种依次为豆果(Arbequina) > 柯尼卡(Cornicabra) > 贺吉布兰克(Hojiblanca) > 曼萨尼约(Manzanill0) > 恩帕雷特(Empeltre) > 皮瓜儿(Picua) > 阿尔伯萨娜(Arbosana) > 奇迹(Koroneiki)。为油橄榄品种适应性研究和生产中选用品种提供参考。 关键词 :油橄榄，冻害，调查与分析 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 植物栽培历史表明，油橄榄与所有的亚热带常绿果树和经济树种一样，在他的主要分布区区域和边缘产区，都存在周期性的冻害 [ 1 ] 。油橄榄原产地也存在这种周期性的冻害，2004年冬季希腊遭遇40年历史罕见的冰雪灾害，导致80%的果园受灾，来年油橄榄减产达到20%左右。对油橄榄抗冻性研究一直是原产地和新发展区研究的重点。陇南引种油橄榄41年，历经1976的−8.1℃、1991年的−8.6℃和2016年的−8.3℃冬季极端低温(高山半高山油橄榄种植地点实际温度还要低于这个温度，在武都两水前村实测温度达到−11℃)。实践证明，油橄榄从地中海的希腊、西班牙等原产地国家引种到位于北亚热带的中国甘肃陇南白龙江流域半山河谷地带，在气候、土壤、降雨等诸多气候因子中，低温冻害成为制约陇南油橄榄发展的关键性限制因子 [ 2 ] 。2016年1月24~27陇南地区发生极端气候过程，最低气温达到−8.3℃接近历史极端最低温−8.6℃，且低温持续时间长达7天，特别是一些新引进品种，没有经过适应性栽培试验，大面积推广应用，在生产上造成很大损失。这次冻害为我们调查研究品种间的抗(耐)冻性(越冬性)提供了难得的机遇，也为今后陇南不同流域、不同海拔高度油橄榄建园选择品种提供了指导意见。 油橄榄原产于希腊、意大利、突尼斯、西班牙等地中海沿岸国家，属典型的地中海气候类型，具有“夏季炎热干燥，冬季温和多雨”的气象表现。油橄榄引种国内后，在气候上引种到北亚热半湿润气候向暖温半干旱气候的过渡带，季风性气候特征显著；在雨型上属夏雨型气候类型，冬季干旱，夏季炎热多雨，表现为雨热同季；从低海拔地区引种到高海拔地区(地中海希腊种植海拔在0~500 m，甘肃陇南白龙江流域油橄榄种植在海拔650~1624 m，云南昆明种植在1500~2200 m之间)，虽然生长开会结实，但随着低温的侵袭，对安全越冬，生长开会结实造成严重影响。陇南地处青藏高原东侧边坡地带，辖区内沟壑纵横，高山河谷交错分布，素以“山大沟深”而著称，地势西北高、东南低，是甘肃省唯一的长江流域市区。由于受山地地形及大气环流和太阳辐射的影响，气候差异悬殊，地域性立体小气候特点十分明显，雨热同季，四季分明，光热充足。陇南白龙江沿岸是全国油橄榄最佳适生区之一，现有油橄榄3.6万hm 2 ，是国家油橄榄示范基地和中国油橄榄之乡。低温冻害是陇南油橄榄生产上的主要气象灾害，由于出现较长时期低于油橄榄生育要求的临界致害低温，包括低温冰冻、寒潮、强降温、霜冻、倒春寒和秋季低温等形成的冻害，特别是冬季低温对油橄榄安全越冬影响极大，如表1所示。当前现有油橄榄品种不能在高于海拔1500 m和不能低于−8.0˚的条件下生长，而陇南可以发展油橄榄的土地分布在1500 m以上和冬季温度低于−8.6˚的地区。选引抗寒品种突破现有海拔和低温成为做大做强陇南油橄榄产业的关键因素 [ 3 ] 。
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user: 2. 调查地点及方法 2.1. 调查地点的自然概况 本次调查分为三种情况，一是油橄榄种植的高海拔区域，包括陇南白龙江上游的宕昌沙湾，犀牛江流域礼县龙林、西和西高山、武都龙坝；二是同一海拔不同品种的受冻情况，高、中、低海拔兼顾，选取有代表性的油橄榄种植基地开展取样调查；三是陇南、甘南舟曲属白龙江河谷，油橄榄种植在河谷泥石流冲击扇和河谷二级阶地上，地形地势复杂多样，犀牛江流域处于山区，兼顾油橄榄种植区地小气候的影响。 陇南油橄榄调查区气候在分布上属北亚热带向暖温带过度区域，包括康县北部、武都白龙江河谷、文县东部、礼县南部、西和东部，白龙江、白水江、嘉陵江河谷浅山地区。地理坐标东经104˚1'~106˚35'，北纬32˚38'~34˚31'之间，处于国内引种栽培的北缘，油橄榄种植区海拔650~1624 m。年平均气温9℃~15.3℃，极端最高温度37.8℃，极端最低温度−8.6℃，年降雨量411.6~1000 mm，全年日照时数1600~2104.4 h，全年无霜期160~280 d、平均252 d。土壤为黄棕坡土和钙质沙壤土，沙粒含量62%，土层深厚，ph值7.8，中性偏微碱性。地形复杂，沟壑纵横，高差悬殊，是典型的高山峡谷区，气候垂直变化显著，区域小气候特征明显。 2.2. 调查时间 为了全面了解此次低温对油橄榄越冬造成的危害和冻害后的恢复情况，冻害调查分三个阶段进行。第一阶段为2016年2月26~30日间进行，22~25日是本次低温的武都最低点，气象局发布实测低温为−8.3˚，从感官上对低温危害进行冻害等级的现场观察，也就是低温即时造成的危害，对根、茎干、枝干、叶的受冻感性认识。第二阶段为气温回升的4月上旬到下旬，日低温为8℃~12℃，日高温为17℃~26℃。此时遭受低温危害的树体发芽复绿，受冻树体与未受冻树体的部分形成明显反差，区分明显，调查准确度高。第三阶段7月21~8月21进行，日低温为21℃~24℃，日高温为32℃~43℃，对受冻树体恢复状况进行调查，调查样本树遭受低温冻害后树体恢复情况。 Table 1 Statistics of strong cooling and cold wave frequency in Longnan oil producing region from 1971 to 201 县名 强降温次数 平均/(次/年) 寒潮次数 平均/(次/年) 强降温、 寒潮次数 平均/(次/年) 极端低温 备注 武都 8 0.2 4 0.1 12 0.3 -8.3 全县 文县 5 0.1 1 0 6 0.2 -7.4 全县 宕昌 9 0.2 5 0.1 14 0.4 -9 沙湾片 康县 11 0.3 6 0.2 17 0.4 -14 犀牛江片 表1. 陇南油橄榄产区1971~2010年强降温、寒潮次数统计 资料来源：陇南市气象局肖志强等。 2.3. 调查方法 调查采用实地实测的方法，对样本数进行精确的受冻分级划分，按照不同品种、不同海拔高度、不同立地条件、不同管理措施、以及是否冬季修剪等因素进行，本次调查借鉴已有相关研究成果，结合油橄榄特殊性，根据受冻情况，将油橄榄受冻状况分为若干等级 [ 4 ] 。 2.4. 调查品种及影响因素 本次调查涉及的油橄榄品种为，一是甘肃省林木良种审定委员会审定的甘肃省油橄榄良种：莱星、城固32、鄂植8、阿斯、科拉蒂、奇迹、皮瓜儿7个。二是新引进的西班牙油橄榄新品种8个。本次调查涉及的管理及修剪等因素为，一是冬季综合管理情况；二是冬季修剪情况；三是所处立地条件。
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user: 4. 结论与建议 首先应该明确，油橄榄主产区或边缘区发生周期性的冻害这是亚热带地区经常发生的一种自然现象，不能因此一次偶尔的周期性低温冻害动摇发展油橄榄产业的坚定性和积极性。我们要做的就是在这些地区选择耐低温的品种建园，并采取抗低温的栽培管理措施，把低温冻害造成的损失降到最低。 4.1. 油橄榄品种间抗冻性(越冬性)差异大 调查结果表明，陇南油橄榄主栽品种抗冻性(越冬性)依次为阿斯 > 鄂植8 > 城固32 > 莱星 > 科拉蒂 > 奇迹。新引西班牙油橄榄品种抗冻性(越冬性)依次为阿贝奎拉(Arbequina) > 柯尼卡(Cornicabra) > 贺吉布兰克(Hojiblanca) > 曼萨尼约(Manzanillo) > 恩帕雷特(Empeltre) > 皮瓜儿(Picua) > 阿尔伯萨娜(Arbosana) > 奇迹(Koroneiki)。在建园时，按照不同海拔高度和区域小气候的特征选择品种，一般认为奇迹(Koroneiki)在陇南建园海拔高度不能高于1000 m。莱星(Leccino)、科拉蒂(Cotatin)、皮瓜儿(Picua)、贺吉布兰克(Hojiblanca)、恩帕雷特(Empeltre)、阿贝奎拉(Arbequina)、柯尼卡(Cornicabra)在陇南建园海拔高度不能高于1300 m。在1300~1600 m之间应该选择阿斯(Ascolana)、鄂植8 (Ezhi8)、城固32 (Chenggu32)建园。按照这个技术要求建园，正常年份都能实现丰产丰收，极端气候年份虽不能完全避免低温冻害，但能在灾害年后树体得到恢复，果园不致受到毁灭性灾害。 4.2. 加强综合管理可以提高油橄榄耐冻强度 从树体生长情况调查，加强水肥管理能保证树体生长健壮，树冠结构紧凑，开花结构早而不徒长，根系发达，可以提高树体抗冻性。 4.3. 对油橄榄品种的抗冻性研究在生产上急需 近年来国内科研单位、企业引进了一些世界原产地含油率高、结实早、丰产性强的新品种，陇南引进了希腊−17℃的新品种，这些新品种是为适应原产地生境条件下有目的选育的品种，在进入大面积推广之前，我们应尽快开展这些新品种的国内大区的适应性试验研究，避免生产上的盲目性，提出推广发展的理论依据。 4.4. 加快品种选育是做强做大油橄榄产业的必由之路 原产地与中国新发展区生境条件差异显著，要做大做强中国油橄榄产业，必须尽快启动适应中国生境条件下的油橄榄育种工作。产业发展品种是关键，50多年来老一辈油橄榄科技工作者，选育出了鄂植8、城固32等新品种，经过长期栽培试验，有的省份审定命名为良种，大面积推广，取得了显著成绩。但各地气候、土壤、海拔、光照等因素又千差万别，区域小气候的特征十分明显，因此尽快启动油橄榄育种工作，选育满足不同生境条件下油橄榄品种。 4.5. 改变修剪时间是解决油橄榄冬季低温冻害的有效方法 陇南油橄榄的修剪应从现在的冬季修剪(即采果后修剪)推迟到早春修剪。修剪是影响树体抗冻性的重要因素，避开冬季修剪后树势较弱，又遭受低温危害双重打击，避免加剧低温危害。 4.6. 同步开展相关研究，提高栽培水平 突破低温限制是解决油橄榄做大做强的重要因素，维度、海拔、温度相互制约又互为条件，继续开展相关研究，解决低温等制约陇南油橄榄发展的瓶颈问题。 油橄榄从地中海引种到中国，是从一种气候条件引种到另一种气候条件的植物引种驯化的典型引种案例，面临研究的问题很多，油橄榄品种的抗冻性研究是诸多问题之一，也是油橄榄引种驯化和选育中国气候条件下适宜大面积发展的油橄榄品种的基础性工作。本研究是对2016年极端天气的调查分析，事发突然，条件所限，没有进行实验室对受冻叶片内含物变化测定和枝条离体抗冻性鉴定，具有很大局限性，与以往实验室测定不同油橄榄品种对低温胁迫的生理响应及抗寒性的综合评价也有不一致的地方 [ 5 ] 。分析原因，一是实验室测定低温条件下油橄榄叶片脯氨酸含量、丙二醛含量、SOD活性等内含物变化是在恒定条件下取得的，而从实际调查得出的结论是在天气过程起伏变化的情况下取得的；二是局地小气候和不同栽培措施对油橄榄不同品种抗冻性的影响，没有严格的对照，结论可靠性有待继续验证。三是虽然极端最低温是温度因子的主要指标，但是实际上冻害的出现与否，往往并不完全依照极端最低温度指标的界限，而受温较差的很大影响，这种一过性或短时低温对树体受冻影响不大，持续性的低温(低于−5℃)对树体影响较大。四是调查在我们发现，在背风处或有局地小气候的地方，往往受冻影响比较大，这是因为低温过后回暖速度过快，树体体温突然上升，解冻过快造成的。今后应在条件允许的情况下，继续开展不同品种抗冻性的田间观测和实验室测定，进行精密统计分析，定量与定性相结合，得出更为准确的结论为生产服务。
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user: 摘 要 本文以乙二胺(En)为模板，采用溶剂热法一步合成了结晶度较好的六方相ZnSb纳米材料。通过改变En与水的浓度比，成功合成球状、棒状，以及花状的ZnSb纳米材料。实验结果表明，En浓度对ZnSb纳米结构和结晶性具有一定影响，过量的En浓度会抑制晶体生长以及破坏产物结构。基于ZnSb纳米形貌和结晶性的变化，解释了不同En与水的浓度比条件下，ZnSb纳米形貌结构形成的机理。这将为制备特殊纳米形貌结构材料，以及在电化学、热电等领域中得广泛应用提供了研究基础。 关键词 :ZnSb纳米结构，溶剂热法，乙二胺，形成机理 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 特殊结构的纳米材料具有较大的比表面积和量子限制效应(QCE)，使其在微纳电子器件 [ 1 ] ，催化 [ 2 ] ，生物技术等领域中得到应用 [ 3 ] 。ZnSb纳米材料，作为二元锑化物之一，具备较低的热导率 [ 4 ] 、较高的电导率 [ 5 ] ，和较强的热稳定性 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] 等物理特性，引起了热电 [ 9 ] 、锂离子电池阳极 [ 10 ] 、相变储存器 [ 11 ] 等领域研究者关注的热点。Park C M等 [ 12 ] 通过电化学方法合成了零维颗粒状的ZnSb纳米材料，作为Li离子电池阳极，因其较大的比表面积，增强了锂离子的扩散速率，显著提升了电子的输运能力，以及稳定性。Hicks L D等 [ 13 ] 通过熔融法制备一维ZnSb纳米材料，受量子限制效应的影响增强了其态密度，强化了载流子的收集和轴向电子的高速输运能力，提高了Seebeck系数并增强了热电性能，被应用于热电领域中。H B Lee等 [ 14 ] 通过丝网印刷法制备了二维结构的ZnSb薄膜，通过控制薄膜厚度可以调控材料的电学性能，已在热电领域得到应用。S Liao等 [ 15 ] 通过化学气相沉积法在C 60 上沉积三维结构的ZnSb纳米线，作为钠离子阳极，因具有较短的钠离子扩散路径，有效的缓解了由钠离子在吸附/脱附过程中因体积膨胀导致循环能力变差的问题，被应用于钠电池领域的研究。然而，对比以上不同ZnSb纳米结构的制备方法，都不能简单、有效地调控其不同形貌的纳米结构。因此，选择一个简单、有效地可控合成不同形貌的方法，成为当前ZnSb纳米材料研究的重点之一。乙二胺(En)，作为一种有效的分子模板剂，可以使无机金属离子在溶剂分子控制下成核和生长，因此该方法为未来在低成本和潜在的大规模量产合成不同结构ZnSb纳米材料提供了可能 [ 16 ] - [ 24 ] ，例如：一维的Cu 3 SbS 3 、CeO 2 、Cu纳米线 [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] ，二维ZnO/石墨烯、MoS 2 薄膜 [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] ，以及三维Cu 2 SnS 3 纳米花、Cu 2 SnSe 3 纳米球、NiSe纳米球 [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] 等。因此，本文采用En溶剂作为分子模板，在180℃、10 h下，调节En与水不同混合浓度，成功合成了多种形貌结构的ZnSb纳米材料。基于ZnSb不同形貌的纳米结构和晶体结构，讨论了不同En和水混合比例条件下，产物形成的机理。
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user: 2. 实验方法 本实验采用溶剂热法制备不同形貌结构的ZnSb纳米材料。实验中使用的锑源为三氯化锑(SbCl 3 )，锌源为锌粉(Zn)、En作为有机溶剂，实验中药品均为分析纯，购于长春鼎国生物技术有限责任公司。在实验过程中，使用1 mmol的SbCl 3 和1 mmol的Zn混合，然后加入70 ml的En与水的混合溶液(En:H 2 O = 0.5:1-2:1)。在离心搅拌后转移至反应釜中，其混合溶液在反应釜的填充度为70%。在180℃，反应10 h，获得黑色产物。产物冷却至室温后，经过丙酮、乙醇、去离子水的反复洗涤后干燥收集。
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user: 3. 实验仪器 XRD分析采用德国布鲁克AXS有限公司的AXS D8设备，测试条件为：Cu Kα辐射X射线衍射仪(λ = 1.5406 Å)，测试区间为2θ = 20˚~80˚。测试过程中电流为30 mA，加速电压为40 KV；产物的形貌分析采用的是日本日立公司的Hitachi-4800型场致发射扫描电镜(FE-SEM)。使用FE-SEM自带的X射线能谱仪分析仪(EDS)测定产物的成分及组成。