DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 摘 要 啶酰菌胺是一种新型广谱性的烟酰胺类杀菌剂。目前，国内外文献中，合成啶酰菌胺的相关路线的报道较多，本文简单的总结了其合成路线，并对中间体4-氯-2’-氨基联苯的合成方法也作了一定的阐述。在现有的合成方法的基础上，提出以邻溴硝基苯为起始原料，经过还原，与对氯苯硼酸通过Suziki偶联反应，合成4-氯-2’-氨基联苯，再与2-氯烟酰氯缩合，得到目标产物。总收率达到92%，纯度达到95%以上。此合成路线原料易得，步骤简单，收率高，降低了生产成本，适合工业化生产。 关键词 :啶酰菌胺，合成，4-氯-2’-氨基联苯，新工艺 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 啶酰菌胺(boscalid)是巴斯夫(BASF)公司开发的第一个广谱性SDHI类杀菌剂 [ 1 ] [ 2 ] 。它的作用机理是，作用于线粒体呼吸链复合体II，抑制琥珀酸脱氢酶，从而影响电子转移和能源供给，最终造成病原菌死亡。啶酰菌胺具有保护和治疗的作用，能抑制灰葡萄孢分生孢子萌发，同时还能抑制真菌菌丝生长。此外，由于其作用机理不易产生交互抗性，同时对作物安全和有利的毒理数据和生态效果 [ 3 ] ，因此，它是研发价值较大的新型烟酰胺类杀菌剂。 根据目前国内外文献的报道，啶酰菌胺的合成主要分为两类方法：一种是由4-氯-2’-氨基联苯和2-氯烟酰氯进行缩合反应得到，此方法的关键点是中间体4-氯-2’-氨基联苯的合成。另一种方法是不通过4-氯-2’-氨基联苯，经过多步反应直接得到啶酰菌胺 [ 4 ] [ 5 ] 。 本文主要讲述通过中间体4-氯-2’-氨基联苯和2-氯烟酰氯缩合的反应路线。4-氯-2’-氨基联苯是合成啶酰菌胺的重要中间体，也是研究的难点和关键点之一。根据文献报道，2-氨基-4’-氯联苯的合成路线较多，归纳总结，结合缩合反应，合成啶酰菌胺的方法主要有以下几种：1) 以苯胺、4-氯苯肼为原料，乙腈为溶剂，二氧化锰为催化剂，得到4-氯-2’-氨基联苯 [ 6 ] ，再与2-氯烟酰氯缩合，得到目标产物，此路线反应收率很低，且反应过程中要加入大量的苯胺和二氧化锰，会造成大量的三废，处理困难且成本昂贵；2) 以邻氯硝基苯为原料，与对氯苯硼酸进行偶联反应后，在缩合剂的作用下，与2-氯烟酸反应，得到目标产物 [ 7 ] ，此路线缩合剂成本较高，且后处理困难；3) 以邻碘苯胺为原料，与对氯苯硼酸进行Suzuki反应，得到4-氯-2’-氨基联苯 [ 8 ] ，再与2-氯烟酰氯缩合，得到目标产物，此路线原料成本较高，不适合大规模生产；4) 以邻氯硝基苯为起始原料，与对氯苯硼酸进行偶联反应后，再经过铁粉还原，得到4-氯-2’-氨基联苯 [ 9 ] ，再与2-氯烟酰氯缩合，得到目标产物，此路线中铁粉还容易造成三废污染，且还原过程中，脱卤现象较严重。 针对以上几种工艺存在的问题，我们尝试了新的合成路线，成功解决了以上路线中较为突出的问题，并取得了一定的效果。以邻溴硝基苯为原料，经过加氢还原，再与对氯苯硼酸进行偶联反应，合成目标产物4-氯-2’-氨基联苯，最后与2-氯烟酰氯缩合，得到啶酰菌胺，见图1。总收率达到92%，纯度达到95%以上。
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user: 2. 实验部分 2.1. 仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1260)；气相色谱仪(Agilent 7820A)；旋转蒸发仪(RE-52C型，上海亚荣生化仪器厂)；数字熔点仪(WRS-1A型，上海精密科学仪器有限公司)；循环水式真空泵(SHB-I型，郑州予华仪器厂)。 图1. 啶酰菌胺的合成新路线 2.2. 试剂 2-溴硝基苯，山东鲁科化工有限责任公司；铈改性镍催化剂 [ 10 ] 、氢气、钯催化剂，浙江林江化工股份有限公司；对氯苯硼酸，北京格林凯默科技有限公司；其他涉及的试剂和溶剂均为试剂级。 2.3. 实验方法 2.3.1. 2-溴苯胺(2)的合成 在1 L高压釜中投入2-溴硝基苯60.6 g、铈改性镍催化剂1 g和甲醇400 g，氮气置换后，通入氢气保持压力2 MPa、温度70℃反应3 h。转化合格后，过滤，滤液减压蒸馏回收甲醇，残液用甲苯萃取后，减压蒸馏浓缩得到2-溴苯胺50.1 g，纯度99.1%，收率97.0%。 2.3.2. 4-氯-2’-氨基联苯(3)的合成 在1000 mL的四口烧瓶中，依次加入200 g甲苯、150 g水、45.5 g对氯苯硼酸、50.1 g 2-溴苯胺和63.4 g碳酸钾，氮气置换三次后，加入0.09 g PdCl 2 (dtbpf)，升温至65℃~75℃反应3 h后，取样检测合格后，考虑到催化剂不溶于甲苯和水，故而将反应物料进行过滤，回收的催化剂可进行套用，水滤液静置1 h，分层，分去水层。有机层升温回流带水，至温度110℃左右，无明显水滴后停止带水，得到4-氯-2’-氨基联苯溶液，脱溶后，得到目标产物58.0 g，纯度为97.2%，收率为98.1%。 1 HNMR (400 MHz， DMSO-d 6 )， δ: 7.45 (d， 2 H， J = 10.3 Hz)， 7.42 (d， 2 H， J = 10.4 Hz)， 7.33 (d， 1 H， J = 9.6 Hz)， 7.14 (t， 1 H， 10.4 Hz)， 6.83 (t， 1 H， 9.7 Hz)， 6.71 (d， 1 H， J = 9.8 Hz)， 4.58 (s， cl， 2 H， NH 2 ). 2.3.3. 啶酰菌胺的(4)合成 在1000 mL的四口烧瓶中，加入4-氯-2’-氨基联苯58.0 g、甲苯200 g，搅拌升温至40℃~45℃，开始缓慢滴加50.6 g 2-氯烟酰氯和58.1 g甲苯的混合液，滴加结束后升温至70℃，保温反应4 h，取样检测合格后，分别用100 g 5%的稀盐酸、100 g10%碳酸氢钠和100 g水洗涤，静置分层，分出水层。甲苯层缓慢降温至10℃以下，析出白色固体，离心，烘干得啶酰菌胺白色固体95.4 g，纯度98.0%，收率97.6%。 1 HNMR (600 MHz， CDCl 3 )， δ: 7.29 (d， J = 3.6 Hz， 1 H)， 7.34~7.37 (m， 3 H)， 7.45~7.48 (m， 2 H)， 8.13 (d， J= 7.1 Hz， 1 H)， 8.20 (s， 1 H)， 8.41 (d， J = 7.7 Hz， 1 H)， 8.44~8.50 (m， 1 H).
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user: 3. 结果与讨论 3.1. 加氢还原催化剂的的选择 此步骤以2-溴硝基苯为原料，甲醇作为溶剂，在催化剂的条件下进行加氢反应，主要研究了在相同的条件下，不同催化剂在反应过程中，脱卤的抑制效果，结果在表1。 Table 1 Inhibition effect of catalyst on dehalogenatio 反应序号 催化剂 脱卤率率(%) 1 Ni(R) 2.4% 2 Pd(PPh 3 ) 4 3.5% 3 PdCl 2 2.0% 4 铈改性镍催化剂 0.3% 5 Pd(OAc) 2 2.7% 表1. 催化剂对脱卤的抑制效果 由表1中可以看出，不同的催化剂对脱卤抑制效果的差距非常大，尝试了Ni(R)、Pd(PPh 3 ) 4 、Pd(OAc) 2 、PdCl 2 及铈改性镍催化剂等五种催化剂，其中以铈改性镍催化剂的抑制效果最佳，所以最终选择铈改性镍催化剂作为加氢还原反应的催化剂。 3.2. 偶联反应条件的优化选择 此步骤Suzuki-Miyaura偶联反应的条件为：2-溴苯胺(0.29 mol， 1.02 equiv)，4-氯苯硼酸(0.285 mol)，碱(0.46 mol， 1.62 equiv)，催化剂，3 h，N 2 ，75℃。 对于这个情况，研究了不同的催化剂和碱对反应收率以及反应时间的影响，如表2所示。 Table 2 Optimization of Suzuki-Miyaara coupling reaction condition 反应序号 催化剂 配体 碱 反应时间(h) 收率(%) 1 PdCl 2 (dtbpf) PCy 3 ·HBF 4 KOH 4 90 2 PdCl 2 (dtbpf) PCy 3 ·HBF 4 K 3 PO 4 5 93 3 PdCl 2 (dtbpf) PCy 3 ·HBF 4 K 2 CO 3 3 98 4 PdCl 2 (dtbpf) PCy 3 ·HBF 4 NaOH 4.5 87 5 PdCl 2 PCy 3 ·HBF 4 K 2 CO 3 5 75 6 Pd(OAc) 2 PCy 3 ·HBF 4 K 2 CO 3 4 85 7 Pd(PPh) 3 Cl 2 PCy 3 ·HBF 4 K 2 CO 3 4 83 8 Pd(PPh 3 ) 4 PCy 3 ·HBF 4 K 2 CO 3 6 72 表2. Suzuki-Miyaura偶联反应条件优化选择 从表2中可以看出，不同的碱对收率的影响比较大，其中以K 2 CO 3 对应的收率最高，且碳酸钾成本较低，因此，我们最终选择了K 2 CO 3 作为这步Suzuki-Miyaura偶联反应的碱。此外，不同的催化剂对反应收率的影响更大，我们尝试了PdCl 2 (dtbpf)、PdCl 2 、Pd(OAc) 2 、Pd(PPh) 3 Cl 2 及Pd(PPh 3 ) 4 等五种常用的偶联催化剂，收率差距明显，其中以PdCl 2 (dtbpf)效果最佳，所以我们最终选择了PdCl 2 (dtbpf)作为这步偶联反应的催化剂。 3.3. 缩合反应的条件的优化选择 此步骤是以中间体4-氯-2’-氨基联苯和2-氯烟酰氯为原料，在甲苯做溶剂的条件下进行缩合反应，研究了在两种原料配比一定的情况下，反应温度对反应时间、含量及收率的影响，如表3所示。 从表3中可以看出，不同的反应温度对反应时间、含量和收率的影响较大。温度太低，转化不完全，导致含量和收率偏低，温度过高，反应时间缩短，但副反应增多，导致含量和收率开始下降。最终确定了缩合反应的最佳条件为：反应温度70℃，反应时间4 h。此条件下，缩合反应的含量和收率均达到最佳。 Table 3 Effect of reaction temperature on condensation reactio 反应序号 反应温度(℃) 反应时间(h) 含量(%) 收率(%) 1 30 17 90.1 87.4 2 50 9 95.6 94.7 3 70 4 98.0 97.6 4 90 2 97.7 97.3 表3. 反应温度对缩合反应的影响
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user: 4. 结论 笔者以2-溴硝基苯为起始原料，经过还原，再与对氯苯硼酸通过suziki偶联反应，合成4-氯-2’-氨基联苯，最后与2-氯烟酰氯缩合，得到啶酰菌胺，总收率92%，纯度95%以上。此路线与其它文献报道的方法相比具有如下优点：1) 原料价格便宜，操作简单方便；2) 合成4-氯-2’-氨基联苯过程中，脱卤抑制效果极佳；3) 整体收率有明显的提高，产品的纯度也得到一定提高；4) 用2-溴硝基苯合成2-溴苯胺，可以缩短步骤，同时避免硝化等危险工艺步骤，同时在一定程度上，降低三废的产生，安全系数更高。
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user: 摘 要 随着全基因组测序的发展，肠道菌群成为学术界研究热点。肠道菌群参与人体多种生理活动，并与多种疾病发生有关。肠道菌群与呼吸道疾病，尤其是与结核病之间的研究颇受关注。研究证实肠道菌群失调可影响宿主对结核分枝杆菌的易感性，感染结核分枝杆菌会导致宿主肠道菌群的改变。两者通过宿主免疫反应、肠道菌群代谢产物等相互影响。因此，本文就结核杆菌感染与肠道菌群的关系及相关作用机制等进行综述，为结核病治疗提供新思路。 关键词 :肠道菌群，肺结核，菌群失调，免疫 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 结核病(Tuberculosis， TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis， Mtb)引起的一种具有潜在致命性的慢性传染病，是作为世界头号传染病杀手。根据2019年WHO公布的全球结核病报告 [ 1 ] ，2018年全球估计有1000万人罹患TB，多数为潜伏感染，这意味着宿主和环境因素在决定Mtb的结果(包括耐药和结核复发)方面至关重要。肠道菌群的组成和活性从出生起便与宿主共同发展，相互作用。肠道菌群通过影响细胞信号传导、参与机体免疫应答、参与多种宿主代谢途径的调节等机制影响疾病的发生发展。大量研究证明 [ 2 ] 肠道菌群与哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺囊性纤维化等呼吸道疾病有关。肺结核也不例外。肠道菌群失调可影响宿主对Mtb的易感性，Mtb感染可影响宿主肠道菌群。另外，Mtb感染的严重程度与肠道菌群相关 [ 3 ] 。因此，本文就肠道菌群与Mtb感染的相互影响及具体作用机制等进行综述。
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user: 2. 肠道菌群概述 全基因组测序的出现使得人们对人体不同腔表面菌群的相互连接、组成、多样性、代谢物和生物活性有了更加深入的了解。人类肠道中大约有1014个细菌 [ 4 ] ，这些肠道菌群的代谢过程及代谢产物参与人体多种生理活动，例如肠道菌群代谢产物短链脂肪酸(Short-chain fatty acids， SCFAs)可降低结肠pH值、抑制病原体生长、提供能量，且与肥胖、胰岛素抵抗、结直肠癌等有关 [ 5 ] 。胆碱代谢产物可调节脂质代谢和葡萄糖动态平衡，与肥胖、糖尿病和心血管疾病有关 [ 6 ] 。同时，宿主主要通过先天和适应性免疫，如上皮分泌的防御素、IgA等反过来影响和维持肠道菌群的稳态，二者处于“共生”状态。例如，维生素D信号通过调节潘氏细胞a防御素维持肠道菌群，并改善动物模型中的代谢紊乱和肝脂肪变性 [ 7 ] 。不平衡的微生物群，也就是所谓的“生态失调”，可导致各种退化性疾病，包括肥胖、糖尿病、脂肪肝、肝硬化和某些癌症等，并影响多种疾病的进展 [ 5 ] 。 同样，肺部菌群在维持宿主稳态中也起着重要作用。肺部菌群通过影响TLR2介导的促炎细胞因子的产生、中性粒细胞募集、以及抗菌肽的释放(如Th17细胞刺激β-防御素2的释放)等，影响粘膜免疫和诱导免疫耐受 [ 8 ] 。Brown等 [ 9 ] 研究证实肺部菌群能够通过IL-17和NOD2刺激肺内粒细胞–巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的产生，增强呼吸道防御，通过细胞外信号调节激酶信号传导，并刺激肺泡巨噬细胞杀死并清除病原体，从而保护肺部免受肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌感染。 基于肠道与肺部菌群在维持宿主稳态和疾病发展中作用，肠–肺轴近年来受到广泛关注。作为连接肠道与肺部的纽带，肠–肺轴是由肠道和肺部微生物群的不同微生物组成之间的复杂相互作用以及局部和长期的免疫效应共同作用的结果。已知肠–肺轴参与哮喘、肺部感染、肺结核、慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化等多种呼吸道疾病的调控，影响疾病发展演变。Mtb被认为是肺部菌群失调后迅速定植的最重要的病原菌之一 [ 10 ] ，Mtb感染后启动人体细胞免疫应答，并通过肠–肺轴影响肠道菌群。肠道菌群通过免疫反应、菌群代谢物影响Mtb的感染和预后。
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user: 3. 肠道菌群代谢物对TB的影响 3.1. 吲哚丙酸阻断Mtb中的色氨酸生物合成 人类微生物群产生多种分子，包括非核糖体肽、硫肽、抗生素、细菌素和氨基酸代谢物。吲哚丙酸(Indole propionic acid，IPA)是人类肠道细菌产生的第一个抗结核代谢物 [ 11 ] 。IPA存在于人血清中，已被证明可抑制β-淀粉样纤维的形成，并可作为神经保护剂对抗多种氧化毒素。已有研究证明，IPA可影响小鼠的肠道屏障和宿主免疫 [ 12 ] 。另外，IPA可干扰Mtb的生长。IPA是色氨酸(Trp)的脱氨基产物，是这种重要的芳香氨基酸的一个紧密的结构类似物。在结核分枝杆菌中，Trp的从头合成是通过反馈抑制来调节的：Trp作为邻氨基苯甲酸合成酶(TrpE)的变构抑制剂，催化Trp生物合成途径的第一步。而IPA可通过模拟该酶的生理变构抑制剂Trp来抑制TrpE，从而在TrpE催化步骤阻断结核分枝杆菌Trp的生物合成 [ 11 ] 。TrpE或将成为抗结核治疗的新靶点。 3.2. SCFAs通过影响宿主免疫反应增加Mtb易感性 SCFAs作为肠道微生物发酵不可消化膳食纤维的主要代谢物，除了提供能量来源外，还可调节多种细胞过程，包括基因表达、细胞的分化、增殖和凋亡 [ 13 ] 。G蛋白偶联受体(GPCRs)的激活、组蛋白脱乙酰化酶的抑制、组蛋白乙酰转移酶活性的刺激等信号通路，以及稳定缺氧诱导因子都与SCFAs有关 [ 14 ] 。作为肠道菌群和免疫系统之间的重要纽带，SCFAs对维持肠道内稳态至关重要。一项关于糖尿病增加TB易感性的研究认为 [ 15 ] ，丁酸(SCFAs的一种)可拮抗Mtb引起的巨噬细胞的促炎反应并促进IL-10的表达。而抗炎细胞因子IL-10可能在补体C4对结核分枝杆菌的免疫应答中起重要作用。糖尿病作为一种代谢性疾病，其与肠道菌群关系密切。有研究表明 [ 16 ] ，糖尿病患者肠道菌群的组成发生了改变，这随后改变了他们体内的SCFAs水平，然后SCFAs通过激活GPCRs和抑制组蛋白脱乙酰化酶等作用于免疫和内皮细胞，从而发挥免疫活性，影响宿主对Mtb的反应。多项流行病学证据表明糖尿病患者发生Mtb感染和罹患TB的风险更高 [ 17 ] ，更加肯定了肠道菌群失调增加Mtb易感性。
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user: 4. Mtb感染对肠道菌群的影响 肠道菌群在Mtb感染期间受到调节，并可能对宿主免疫状态的变化做出应答 [ 18 ] 。Winglee等 [ 19 ] 使用16S rRNA基因测序研究了气溶胶感染CDC1551Mtb菌株对Balb/c小鼠肠道菌群的影响，对其进行监测直至死亡。在感染后的前6天内，所有小鼠的菌群Shannon多样性指数(计算菌群多样性的指数)突然下降，特别是Bacteroidales (拟杆菌目)和Clostridiales (梭菌目)的菌群显著减少。研究发现，在感染前和未感染的样本中Bacteroides (类杆菌属)存在显著差异(P < 0.001)。已有研究表明 [ 20 ] ，Bacteroides可抑制NF-kB途径的激活以及诱导产生IL-10的T细胞中发挥重要的抗炎作用。此外，Bacteroides fragilis (脆弱类杆菌)可纠正全身性T细胞缺陷和辅助性T细胞1/2 (Th1/Th2)失衡，Bacteroides fragilis产生的多糖A (PSA)能够激活T细胞依赖性免疫反应，影响宿主免疫系统 [ 21 ] 。为排除Mtb菌株的选择对菌群变化的影响，研究人员进一步对菌株H37Rv进行观察，结果同样表明小鼠的肠道菌群随Mtb感染而发生显著变化。
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user: 5. 抗结核治疗对肠道菌群的影响 5.1. 抗生素诱导的肠道菌群失调影响肺泡巨噬细胞对Mtb的免疫 抗生素诱导的肠道菌群失调可增加感染性疾病的易感性。Becattini等 [ 22 ] 发现，肠道免疫系统可防止Listeria monocytogenes (单核细胞增多性李斯特氏菌)在肠腔的定植，并防止细菌的全身传播。在接种该菌前，小鼠低剂量口服抗生素可促进肠道中Listeria monocytogenes的生长。Sekirov等 [ 23 ] 研究证实，给小鼠使用广谱抗生素可增加肠道对Salmonella typhimurium (鼠伤寒沙门氏菌)的易感性。肠道菌群失调不仅影响肠道感染，而且还会损害包括呼吸道在内的其他屏障部位的免疫力。广谱抗生素治疗削弱了流感感染后的抗病毒免疫，并与CD8 + T细胞分泌的TNF-a和IFN-γ减少有关 [ 24 ] 。此外，类似的广谱抗生素方案可降低肺部对Mtb感染的免疫力 [ 25 ] 肺泡巨噬细胞的杀菌能力是Mtb感染早期免疫的核心，早期Mtb感染期间最大限度地发挥肺泡巨噬细胞的功能对于预防TB至关重要。 抗结核药物虽可控制Mtb的生长，但不能防止再次感染，抗结核治疗成功后的个体在再次感染时罹患TB的风险是未经治疗个体的4倍 [ 26 ] ，推测可能是由于长期抗结核治疗改变肠道菌群稳态，进而影响肺泡巨噬细胞的免疫功能 [ 27 ] 。Khan N等 [ 28 ] 发现给予异烟肼(INH)或吡嗪酰胺(PYZ)处理小鼠的Mtb易感性与肺泡巨噬细胞代谢受损和杀菌活性缺陷有关。给予INH/PYZ处理小鼠的肺泡巨噬细胞的细菌负荷较对照小鼠明显增高。Cohen等人 [ 29 ] 利用H37Rv菌株感染小鼠模型证明，在感染早期，Mtb主要针对肺泡巨噬细胞。感染Mtb后，小鼠肺泡巨噬细胞MHCII表达水平、TNF-a和IL-1β的产生均显著降低 [ 28 ] ；同时，肺泡巨噬细胞将代谢从氧化磷酸化转变为糖酵解，这是产生促炎细胞因子(如IL-1β)和有效杀菌能力所必需的 [ 29 ] 。抗结核治疗介导的肠道菌群失调促进了肺泡巨噬细胞的氧化磷酸化，进而影响其杀菌活性。 5.2. 抗结核治疗改变特定具有免疫学意义的肠道菌群 与通常使用的广谱抗生素不同，大多数用于治疗TB的一线药物都是具有Mtb特异性靶点的窄谱抗菌剂。抗结核药物在通过特异性靶点发挥抗菌活性同时，可导致宿主肠道菌群失调。Wipperman等 [ 30 ] 基于基因测序研究了未感染Mtb、结核潜伏感染(LTBI) (包括治疗、治愈)、正在接受抗结核(抗结核治疗方案：2HRZE/4HR)治疗的活动性肺结核、已治愈活动性肺结核的患者的肠道菌群，并以Shannon指数衡量菌群多样性。结果发现，接受抗结核治疗的活动性肺结核患者的肠道菌群多样性总体上与未感染Mtb组或LTBI组没有显著差异。然而，抗结核治疗导致特定肠道菌群显著丧失。与LTBI组相比，抗结核治疗导致Blautia (步劳特氏菌属)减少了10倍，Lactobacillus (乳杆菌)和Coprococcus (球菌)减少了200多倍，Ruminococcus (瘤胃球菌)减少了675倍。在Actinomyces (放线菌)门中，Bifidobacterium (双歧杆菌)的数量减少了近20倍。上述部分细菌已经被证实具有免疫功能，并与Mtb感染介导的免疫相关。已知Ruminococcus和Coprococcus可调节外周细胞因子的产生，包括IL-1和IFN-γ2 [ 31 ] ；Bifidobacterium可以在小鼠体内诱导Th17介导的免疫反应 [ 32 ] 。来自国内的一项研究表明 [ 33 ] ，在抗结核治疗期间，Clostridiales (梭状芽孢杆菌)属成员的相对丰度显著下降。Stefka等 [ 34 ] 认为含有Clostridiales的肠道微生物群落可调节免疫功能和上皮对食物抗原的渗透性，以防止过敏原过敏，维持肠道免疫稳态，对机体免疫功能亦有一定益处。除此之外，缺失的肠道菌群的代谢产物对免疫功能的影响不容忽视。作为促进肠道免疫稳态的经典例子，SCFAs可作为肠上皮细胞的能量来源，调节细胞因子的产生，诱导调节性T细胞的增殖 [ 35 ] 。基于以上研究，抗结核药物诱导的肠道菌群失调消耗了多种具有免疫学意义的肠道细菌，导致菌群代谢产物的缺失等，均可能对宿主免疫功能产生影响。
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user: 6. 结语与展望 TB患者肠道中的特定菌群或许将成为预测TB感染状态及预后的潜在生物标志物，更深入地了解两者之间的关系对优化TB治疗策略以治疗疾病至关重要。随着生物医学发展以及新一代测序技术的出现，肠道菌群与呼吸系统疾病之间相关分子机制愈加明确。在不久的将来，饮食、益生菌或更精准的调节或将成为临床辅助诊断及治疗疾病的重要手段。
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user: 摘 要 目的：探讨慢性心力衰竭(CHF)患者中肌少症除对心肌质量的影响。方法：试验设计属于回顾性研究，以2018年1月1日至2019年10月30日期间符合条件的120例CHF患者为研究对象，根据肌少症诊断标准分为肌少症组(43例)与非肌少症组(77例)，记录一般临床资料。对每位患者进行心脏超声检查，根据测量结果计算心肌质量。比较两组心肌质量的差异性。结果：肌少症组和非肌少症组年龄、B型利钠肽、高敏肌钙蛋白、左心室射血分数、心功能分级和心肌质量比较，差异均有统计学意义(均为P < 0.05)；对SMI与LVM进行相关性分析，研究结果显示SMI与LVM呈显著线性正相关(r = 0.869， P < 0.001)。结论：肌少症不仅可使CHF患者骨骼肌质量下降，对心肌质量也有削减作用，对CHF患者的远期预后生存指数存在显著影响。这有助于临床对CHF患者的预防性治疗。 关键词 :肌少症，心力衰竭，心肌质量 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肌肉减少症(sarcopenia)简称肌少症，早在10年前就被定义为是一种年龄相关性的进行性肌肉质量减少、肌肉力量减弱、肌肉功能减退的临床综合征 [ 1 ] ，以骨骼肌表现为著。近年来学术界越来越开始关注肌少症与慢性心力衰竭(chronic heart failure， CHF)二者的相关性，因为大部分CHF患者在病情进展过程中出现心肌收缩力下降，外周骨骼肌功能减退 [ 2 ] ，主要表现在射血分数减低，骨骼肌肌量减少、肌肉萎缩、肌肉力量下降等 [ 3 ] ，临床上常见的例如手握力下降、四肢如小腿腓肠肌萎缩等，易出现乏力、衰弱、跌倒、恶病质等不良后果，导致患者生活质量下降、再入院率高、死亡率高等不良事件的发生 [ 4 ] 。学者们也分别通过组织病理学、病理生理学、分子机制、细胞生物学等多学科 [ 5 ] ，研究了多种因素包括血管紧张素II [ 6 ] 、肌肉生长抑制素、促炎因子等 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] ，证实肌少症与CHF的相关性。肌少症与CHF患者的发病率及病情严重程度均随着年龄增长而升高及加重，二者往往相互作用，彼此加重恶化 [ 9 ] 。而均属于横纹肌的心肌与骨骼肌，作为共同构成人体肌肉的两大部分，必然有着不可分割的联系 [ 10 ] 。以往的研究仅聚集在肌少症对骨骼肌的影响，而本研究拟通过对肌少症与CHF相关性的解读，探讨肌少症对人体另一大类肌肉——心肌的影响，以更好的认识肌少症与CHF的相互作用机制，对于临床病情评估及预防性治疗起指导性作用。
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user: 2. 对象和方法 2.1. 研究对象 本试验设计属于回顾性研究，以2018年1月1日至2019年10月30日期间符合条件的120例CHF患者为研究对象，其中男性69例，女性51例，年龄60~87岁，平均(74 ± 6.22)岁。纳入标准：1) 年龄≥60岁的老年患者；2) 符合CHF诊断标准，具有典型心力衰竭的症状及体征 [ 11 ] ，左心室射血分数(LVEF) < 40%，或LVEF > 40%但存在结构性心脏病，且左心室未扩大；3) 签署试验知情同意书。排除标准：1) 因卧床或精神意识障碍不能配合完成检查者；2) 危重症患者；3) 不同意参与试验者。研究经医院伦理委员会批准，研究对象及其家属均知情同意。 2.2. 研究方法 肌少症的诊断标准和方法 肌少症的诊断标准：根据亚洲肌少症工作组(AWGS)在2014年公布的亚洲肌少症共识 [ 12 ] ，目前公认的肌少症的诊断标准为：1) 双能X线吸收法测定全身骨骼肌质量，与身高平方的比值，男性<7.0 kg/m 2 、女性<5.4 kg/m 2 ；2) 优势手握力，男性<26 kg、女性<18 kg；3) 日常步速<0.8 m/s。(1)合并(2)或(3)即可诊断为肌少症 [ 12 ] [ 13 ] ，见图1。 肌少症的检查方法：可通过以下途径对肌少症进行检查与评估 [ 14 ] ：1) 握力测量：平静状态下应用手握力计重复2次测量优势手，取平均值；2) 步速测量：室内以正常速度行走6 m，重复2次测量所用时间，取平均值；3) 肌量测量：采用inbody人体成分测量仪测定骨骼肌质量指数(relative skeletal muscle index， RSMI) [ 15 ] 。在肌量减少的基础上合并握力下降或步速减慢即可诊断为肌少症：1) 优势手握力，男<26 kg，女<18 kg；2) 步行速度<0.8 m/s；3) 男性RSMI < 7.0 kg/m 2 ，女性RSMI < 5.4 kg/m 2 [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] 。 图1. 肌少症AWGS诊断标准 [ 12 ] 根据肌少症的诊断标准将120位研究对象分为两组：肌少症组(43例)与非肌少症组(31例)，分别记录两组患者的一般资料，包括性别、年龄、主要病史等，所有患者均于住院期间行BNP、心梗三项等检验及心脏超声检查。 心肌质量的计算 准确测量左室心肌质量(LVM)对于评价心血管疾病及心衰具有重要意义 [ 16 ] 。通过心脏超声于心室舒张末期测量左室内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVS)及左室后壁厚度(LVPW) [ 17 ] ，采用Devereux的经验公式 [ 18 ] 计算LVM： LVM = 1.05 ∗ ( ( LVEDD + IVS + LVPW ) 3 − ( LVEDD ) 3 ) − 13.6 ，连续3次取平均值 [ 19 ] ，见图2。 图2. 研究方法 2.3. 统计学方法 应用SPSS24.0统计软件，计量资料以 x ¯ ± s 表示，用t检验，计数资料以百分率表示，用c 2 检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 肌少症组和非肌少症组的一般临床特点 本课题纳入的120例CHF患者均已完成上述评估，其中男性患者69例，占整体57.5%，女性患者51例，占整体42.5%。研究对象的年龄在60~87岁，平均年龄为74 ± 6.22岁。按照上述肌少症的诊断标准，符合诊断标准纳入肌少症组(A组)的患者共43例(35.8%)，其中男性31例(72.1%)，女性12例(27.9%)；非肌少症组(B组)患者共77例(64.2%)，其中男性38例(49.4%)，女性39例(50.7%)。两组的年龄分布及肌少症组的性别构成情况如图3和图4所示。 图3. 肌少症组(A组)与非肌少症组(B组)的年龄分布图 图4. 肌少症组的性别构成图 研究结果显示，两组患者性别差异明显，男性比例A组患者为72.1%，B组患者为49.4%，A组患者男性比例明显高于B组，其差异有统计学意义(c 2 = 5.840， P < 0.05)，见表1。 两组患者在年龄、体重、BMI方面同样具有显著差异，A组患者年龄普遍高于B组患者，但A组患者体重及BMI普遍低于B组，差异均有统计学意义(均为P < 0.05)。但两组患者在病史(糖尿病、高血压、陈旧性心肌梗死)方面无明显差异，无统计学意义(均为P > 0.05)，见表1。 Table 1 Comparison of general clinical data between sarcopenia group (group A) and non-sarcopenia group (group B 项目 肌少症组(N = 43) 非肌少症组(N = 77) t (或c 2 )值 P值 男性[例(%)] 31 (72.1) 38 (49.4) 5.840 0.016 年龄(岁) 76.9 ± 5.9 72.4 ± 5.9 3.980 0.000 体重(kg) 62 ± 6.1 66 ± 5.4 −3.595 0.000 BMI (kg/m 2 ) 21.7 ± 2.1 22.9 ± 1.5 −3.294 0.002 病史[例(%)] 高血压 19 (44.2) 39 (50.7) 0.462 0.497 糖尿病 17 (39.5) 32 (41.6) 0.047 0.829 陈旧性心肌梗死 8 (18.6) 15 (19.5) 0.014 0.907 表1. 肌少症组(A组)与非肌少症组(B组)一般临床资料比较 注：BMI (身体质量指数) = 体重(kg)/身高(m) 2 。 3.2. 两组患者肌肉质量的比较 研究结果显示，两组患者在6 m步速、手握力、ASM及RSMI方面差异显著，A患者的步速较B组患者明显减慢，手握力普遍减低，ASM及RSMI均下降，差异均具有统计学意义(P < 0.05)，见表2。 Table 2 Comparison of muscle mass between sarcopenia group (group A) and non-sarcopenia group (group B 项目 肌少症组(N=43) 非肌少症组(N = 77) t (或c 2 )值 P值 步速(m/s) 0.7 ± 0.1 0.9 ± 0.1 −15.811 0.000 手握力(kg) 18.6 ± 4.5 28.7 ± 5.1 −11.238 0.000 RSMI (kg/m 2 ) 6.1 ± 1.0 8.2 ± 2.3 −6.987 0.000 表2. 肌少症组(A组)与非肌少症组(B组)肌肉质量比较 3.3. 两组患者心功能指标的比较 研究结果显示，两组患者在高敏肌钙蛋白及LVEF的比较上均具有显著差异，A组的高敏肌钙蛋白水平普遍高于B组，LVEF方面A组普遍小于B组，差异有统计学意义(均为P < 0.05)。但在BNP方面，两组患者的BNP结果差异不显著，无统计学意义(P > 0.05)。见表3。 Table 3 Comparison of cardiac function indexes between sarcopenia group (group A) and non-sarcopenia group (group B 项目 肌少症组(N = 43) 非肌少症组(N = 77) t (或c 2 )值 P值 BNP (ng/L) 511.2 ± 592.8 474.5 ± 425.3 1.044 0.198 高敏肌钙蛋白(mg/L) 0.14 ± 0.26 0.04 ± 0.07 2.574 0.013 LVEF (%) 46.7 ± 9.5 59.1 ± 8.1 −7.204 0.000 表3. 肌少症组(A组)与非肌少症组(B组)心功能指标的比较 3.4. 两组患者LVM及LVMI的比较 两组患者LVM及LVMI进行比较结果存在显著差异，A组患者的LVM明显低于B组，LVMI (即LVM与BSA的比值)结果示A组患者较B组患者明显下降，差异均具有统计学意义(P < 0.05)，见表4。 Table 4 Comparison of LVM and LVMI between sarcopenia group (group A) and non-sarcopenia group (group B 项目 肌少症组(N = 43) 非肌少症组(N = 77) t (或c 2 )值 P值 LVM (g) 169.6 ± 35.4 206.5 ± 42.9 −5.079 0.000 LVMI (g/m 2 ) 101.8 ± 22.2 119.9 ± 25.3 −4.059 0.000 表4. 肌少症组(A组)与非肌少症组(B组) LVM及LVMI的比较 3.5. 骨骼肌质量与心肌质量相关性分析 对SMI与LVM进行相关性分析，应用Pearson相关性分析方法，研究结果显示SMI与LVM呈显著线性正相关(r = 0.869， P < 0.001)，见图5。 图5. SMI与LVM的相关性分析
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user: 4. 讨论 CHF患者合并肌少症的发病率逐年升高，本研究中120例CHF患者中即有43例肌少症患者，患病率高达35.83%。 近年来肌少症与CHF越来越受到各界学者的关注，但机制尚不明确。以往的研究证实，肌少症患者骨骼肌的表现譬如骨骼肌肌量减少、肌力下降、功能减退等尤为显著 [ 20 ] ，但关于肌少症对心肌的影响的研究甚少。CHF患者通常在疾病早期即可出现胸闷、憋气、虚弱及乏力等，伴或不伴LVEF降低，一方面是由于CHF患者心血管功能下降、血流动力学异常、血供不足引起，另一方面与外周骨骼肌肌肉萎缩、肌力下降相关 [ 21 ] 。但肌少症是否会对心肌产生直接影响有待进一步研究证实。CHF患者并发肌少症的病理生理机制尚未明确，已报道的研究提示与血管紧张素、肌肉生长抑制素、促炎症因子等相关 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] 。合并肌少症的CHF患者更易出现LVEF下降、衰弱、恶病质、死亡，病情更易恶化 [ 22 ] ，本研究结果与以往研究一致。 心脏病的发病率和病死率与心肌质量密切相关 [ 23 ] ，心肌重塑是心血管疾病发生发展的共同病理过程，也是心力衰竭发生发展的决定性机制，而在心肌重塑过程中，左心室心肌质量(left ventricular mass， LVM)及左心室心肌质量指数(left ventricular mass index， LVMI)的变化尤为明显 [ 24 ] 。LVM是心脏病变的指标，与心功能密切相关，对判断心血管疾病及心力衰竭起着重要作用 [ 25 ] 。所以研究肌少症对慢性心力衰竭的影响最直接有效的方法即为研究肌少症对心肌质量的影响。 目前缺乏可广泛应用且准确的LVM测量方法。本研究通过超声心动图于心室舒张末期测量左室内径(LVEDD)、室间隔厚度(IVS)及左室后壁厚度(LVPW)，利用Deiereux的心室重量(LVM)校正公式计算LVM及LVMI [ 19 ] 。 我们将条件限定在慢性心力衰竭范围内，在慢性心力衰竭的心脏病变基础上，更有针对性的对比肌少症与非肌少症组心肌质量的区别。根据既往研究，肌少症的病变主要表现在通过对II型骨骼肌纤维的影响所致，其骨骼肌肌量减少、肌力下降及功能减退在组织生理学上已得到证实。人体肌肉可分为三大类：平滑肌、骨骼肌、心肌，肌少症对平滑肌与骨骼肌的影响较为显著，但肌少症对心肌的影响尚未得到证实。本研究旨在探讨肌少症对心肌的影响，研究结果证实肌少症对心肌有对骨骼肌等同样的作用，可减少心肌质量，加剧心力衰竭的发生发展。 但目前的研究尚存在诸多局限性。首先，评估住院患者住院期间的各种指标是非常困难的。其次，对于活动受限的患者，无法进行步速测量。第三，由于检查设备的限制，无法用上面讨论的方法进行测量；第四，部分患者有突然出院的情况，导致试验中断。
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user: 利益冲突 本文无利益冲突。
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user: 摘 要 磷是重要的植物营养元素，影响植物的生长和代谢。在文献调查与分析的基础上，本文归纳总结了解磷菌的种类、解磷机理以及在生产中的应用，探讨了提高土壤中磷素利用率的技术途径，对解磷微生物的应用研究进行了展望，最后，根据解磷菌研究和应用中存在的问题指出了今后努力的方向。 关键词 :解磷菌，农业应用，研究进展，展望 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 磷是维持植物体正常生长不可或缺的营养元素之一，可提高植物的抗性及其对环境的缓冲能力，在植物体的新陈代谢活动中发挥着重要作用。对于缺磷土壤，农业生产实践中，人们通常施用磷肥来解决磷素缺乏问题，但磷在土壤中易被固定，转化效率较低且对土壤、水体以及生态环境等造成了负面影响。土壤中存在大量的有益微生物，其中解磷微生物即解磷菌能够将难溶性的磷通过其代谢活动转化为土壤和植物可吸收利用的形态；同时，由于解磷菌对于土壤、植物以及环境之间的物质循环等具有积极影响，而受到了广泛地关注。因此，本文将重点围绕解磷菌的研究与应用进行阐述。
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user: 2. 解磷菌分类及其功能 在生态系统中，磷在土壤、植物以及微生物之间进行流通，主要以无机磷和有机磷两种形式存在，其中难溶性磷约占全磷的95% [ 1 ] 。在农业生产中，人们采用施磷肥的方法来解决土壤缺磷问题，但是磷元素进入土壤中易与Mg 2+ 、Ca 2+ 、Al 3+ 、Fe 3+ 等阳离子结合，形成难溶性的磷酸盐，如磷酸钙、磷酸铁、磷酸铝等，导致磷肥利用率较低(约15%左右)。众所周知，土壤中存在着大量有益微生物，对土壤肥力演变、植物生长发育以及它们之间的物质循环等具有重要影响。H. Ram等田间试验结果表明，根际有益微生物如溶磷真菌(Phosphate-solubilizing fungus， PSF)能提高土壤磷素有效性，提高作物产量 [ 2 ] 。其中解磷微生物即解磷菌(phosphate-solubilizing microorganisms， PSM)能够将土壤中植物难以吸收利用的磷转化为容易吸收利用的形态，如Ca(H 2 PO 4 ) 2 、KH 2 PO 4 、NaH 2 PO 4 、Mg(H 2 PO 4 ) 2 、CaHPO 4 、MgHPO 4 等。张云霞的盆栽小麦试验结果表明，解磷菌B. sub-tilis JT-1作为生物菌肥，施用后不仅能提高植物对磷的利用率，而且使农作物增产 [ 3 ] 。 由于气候条件、土壤类型、土壤性质、作物类型、根际环境、种植模式、施肥情况以及管理水平等的不同，导致解磷菌的种类和数量存在差异。解磷菌主要分为细菌、真菌、放线菌。根据其分解底物的不同，分为解无机磷微生物和解有机磷微生物。研究表明，有些微生物如链霉菌属(Streptomy， ces)既可以溶解有机磷，又可以溶解无机磷，所以它们之间没有明确的界限 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] 。其中，解磷细菌的种类和研究较多，主要涉及芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、固氮菌(Azotobacter)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、黄杆菌属(Flavobacterium)、欧文氏菌属(Erwinia)等 [ 5 ] [ 7 ] 。在这些解磷细菌中，研究应用较多的是巨大芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌，它们的解磷能力最强 [ 1 ] [ 8 ] 。解磷真菌主要有青霉菌属(Penicillium)、曲霉菌属(Aspergillus)、镰刀菌属(Fusarium)以及AM菌根属(Arbusclar mycorrhiza)等，应用报道较多的是解磷能力强的曲霉和青霉。解磷放线菌主要有链霉菌属(Streptomyces)和小单胞菌属(Micromonospora)等 [ 7 ] [ 9 ] 。此外，相关研究发现 [ 10 ] ，有的蓝细菌也具有解磷功能，如繁育拟惠氏蓝细菌(Westiellopsisprolifica)和鱼腥藻(Anabaena)等。虽然解磷真菌在数量和种类上较解磷细菌少，但是其解磷能力更强、更持久、更稳定，究其原因是许多解磷细菌在进一步纯化培养后，其解磷能力逐渐减弱且不再恢复，而解磷真菌的解磷能力较为稳定 [ 10 ] 。 同时，解磷菌也能促进植物对Ca、N、Fe、K、Mg、Zn等营养元素的吸收，但由于土壤含磷量本底值的不同，这种促进作用会有所差异；除此之外，解磷菌还具有促进植物生长和抑制土壤病原菌等功能。Sarkar等研究发现，PSB与TSP (三重磷酸盐)混合使用，能增加水稻株高、单株分蘖数以及植株矿质营养含量 [ 11 ] 。Singh等研究表明，土壤解磷细菌具有促进植物生长的作用 [ 12 ] 。彭静静等表明葡糖醋杆菌 qzr14应用于黄瓜苗，具有抵抗病原的功能 [ 1 ] 。总结前人研究可得，解磷菌在提高营养元素利用率、恢复土壤结构、改良土壤理化性状及维持生态环境稳态等过程中发挥着重要作用 [ 8 ] [ 13 ] 。Srivastwa P.等的盆栽试验结果表明 [ 14 ] ，微生物菌株添加到盐土中能够改善土壤pH、电导率、速效磷、速效氮等理化性质，增产提质，从而达到“减肥增效”的目的。因此，如何充分地利用解磷菌的功能来提高土壤中磷的有效性以及改良土壤已经成为研究焦点以及亟待解决的问题。
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user: 3. 关于解磷菌的解磷机理研究 目前，一般认为解磷菌解磷是一个动态的过程，且解磷的机理较为复杂。研究者通常从生理生化和分子生物学角度，解析解磷菌的解磷机理。 从生理生化角度看，解磷菌之所以能够解难溶性无机磷，主要是加入解磷菌后产生了各种类型的小分子有机酸，主要包括葡萄糖酸、酮葡萄糖酸、苹果酸、草酸、酒石酸、乙酸、丙酮酸等酸性物质。这些有机酸可以与难溶性磷酸盐中的钙、铁、铝等阳离子发生螯合作用或者通过降低环境的PH，从而溶解并释放出磷酸根。在碱性土壤中，解磷菌释放的有机酸在一定程度上减轻了根际土壤的碱性胁迫，进一步提高了土壤和植物对磷的利用率。有研究表明 [ 15 ] ，解磷菌呼吸作用释放的CO 2 能够间接的提高磷的利用率；解磷菌合成的胞外多糖通过结合其培养基中游离的磷间接参与了无机磷的溶解过程；解磷菌在代谢过程中释放的质子能够降低植物根际环境的PH，可促进土壤和植物对磷的吸收。但通过释放CO 2 、质子以及合成胞外多糖来溶解难溶性磷酸盐，远不如释放小分子有机酸的作用大。所以，目前普遍认为解磷菌溶解无机磷的主要机制是释放各类小分子有机酸。需要提出的是，土壤类型、作物类型等不同，有机酸在种类和数量上会有所差异 [ 1 ] [ 16 ] 。 关于解磷菌能解难溶性有机磷的机理，从生理生化角度看，主要是解磷菌可利用合成磷酸酶(磷酸单酯酶、磷酸二酯酶和磷酸三酯酶)、水解磷酸酯来溶解有机磷 [ 15 ] 。磷酸酶可分为酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，它们能够将难溶性有机磷降解为可溶性的小分子以供植物和土壤之需。此外，同一解磷菌株可以兼具解无机磷和解有机磷的功能 [ 15 ] 。 一些研究者借助分子生物技术和基因克隆等手段，从分子生物学角度研究解磷菌溶解难溶性磷的作用机理，目前主要是通过研究菌株产酸及其分泌水解酶的相关基因的手段了解其分子学机理。Hilda Rodríguez等认为 [ 17 ] ，克隆与矿物磷酸盐增溶有关的基因，例如那些影响有机酸合成的基因以及磷酸酶编码基因，将是这种基因操作程序的第一步；López-Bucio等指出 [ 18 ] ，细菌柠檬酸合成酶基因在烟草根系表达时增加了有机酸的分泌以及植物磷的有效性。Rossolini等从洋葱伯克霍尔德菌中分离出了一个促进磷酸酶活性的基因 [ 19 ] ，指出该基因编码一种外膜蛋白，在培养基中不含可溶性磷酸盐的情况下促进合成，并可能参与P向细胞的转运。Rodriguez等认为，在自然根际细菌中引入或过量表达土壤磷溶(有机和无机)相关基因是提高微生物接种能力的一个非常有效的途径 [ 20 ] 。Jun Lü等认为 [ 21 ] ，在大肠杆菌中表达的草酸P.oxalicumC2-mMDH基因可增加有机酸分泌，从而增强磷素溶解。赵为容的试验表明 [ 22 ] ，在低磷环境中磷缺陷指示基因表达明显增强，解磷菌株可下调相关基因减弱其表达，对植物有促生作用的基因则可上调其表达。
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user: 4. 解磷菌在农业中的应用 在科学研究和生产实践的基础上，人们发现微生物肥料肥效期长，能产生各种活性物质，有助于培肥地力、为植物提供了生长所需的营养元素 [ 23 ] 。微生物的代谢活动能够增加土壤有机质含量、改良土壤性质、固定土壤中的重金属含量、减轻水体污染，使得土壤环境更加适用于植物的生长发育。因此，利用微生物肥料部分替代化肥日益得到重视。早在20世纪初，研究者们就从植物根际中发现了解磷菌，20世纪60年代后人们便逐渐开始将微生物肥料应用于农业生产 [ 10 ] 。很多微生物菌肥产品，如苹果专用生物有机菌肥、地之宝、菌状元、土壤多菌宝等的使用效果说明，解磷菌不仅有解磷功能，有的还能够固氮、释钾，产生植物激素、铁载体，分泌抗生素等多种功能。目前，在微生物肥料生产应用中，解磷微生物肥料仅次于固氮微生物肥料。 将解磷能力强的解磷菌经过发酵制成微生物肥料，施入土壤后可以促进植物根际对磷的吸收利用，增加植物对N、K、Ca、Fe、Mg、Zn等营养元素的吸收，抑制土壤病原菌的生长，保证植物生命活动正常进行 [ 1 ] [ 8 ] 。在生产实践中，解磷菌可制成的颗粒微生物肥料与种肥混合作为种肥使用，与其他肥料混合使用作基肥，解磷菌肥还可用于对水稻秧苗进行蘸根处理，将固体解磷菌肥料加水稀释后拌种。与同等条件下没有使用解磷微生物肥料相比，使用解磷微生物肥料后玉米、花生、油菜、水稻、蔬菜的产量都有不同程度增加，且解磷微生物肥料的肥效比其他肥料持续时间要长 [ 24 ] 。 在柑橘园内，将微生物菌剂与有机肥混合施用替代部分化肥，相较于其它处理组优势明显，能够提高柑桔产量和品质 [ 24 ] [ 25 ] 。有研究表明 [ 26 ] ，解磷菌剂与生物炭配施能够提高土壤有机质、碱解氮、有效P、速效K的含量。对于生菜地土壤，解磷菌剂与化肥配合施用可以显著地改善根际土壤微生物结构和酶活性 [ 27 ] 。对于油菜田，将微生物功能菌剂与土壤调理剂配施，可显著改良土壤的理化性状、油菜的生物学性状以及增加产量 [ 28 ] 。 除以上应用外，解磷菌还应用于土壤修复和农业面源污染控制。为了提高作物产量，人们在农业生产中大量使用化肥，破坏了农业生态环境的稳态，造成土壤的酸化、盐碱化、板结、重金属超标以及水体的富营养化等。研究表明 [ 1 ] ，解磷菌不仅能够降低重金属的毒性，而且还可以固定土壤中的重金属，使其形成稳定的化合物。Biswas等从蚯蚓肠道分离出一种解磷菌株，具有生物修复、抗金属腐蚀、促生和溶解磷酸盐的能力 [ 29 ] 。Yi-Fu等通过研究认为，微生物可以钝化Cd，这一研究结果为解决重金属超标土壤的修复问题提供了一种新途径 [ 30 ] 。
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user: 5. 解磷菌研究及其微生物菌肥研发展望 在科学研究和生产实践的基础上，人们发现微生物肥料肥效期长，能产生各种活性物质，能够减少化肥用量、提高作物抵御病虫害的能力，有助于培肥地力、增加作物产量和提质增效，可减少温室气体排放。更重要的是，所研究应用的微生物都是在土壤内部筛选出来的，然后应用于实践，几乎不会污染土壤环境，有利农业环保。因此，利用微生物肥料部分替代化肥将日益得到重视，研究和开发适当的解磷菌肥是农业生产的客观需要。 磷在土壤中易被土壤固定，转化效率较低，如何提高磷的有效性是农业生产中必须要解决的问题，而解磷微生物在这方面发挥着重要作用。解磷微生物肥料在我国已应用多年，但还不够普遍，原因是多方面的，主要是解磷微生物种类多，解磷机理复杂且不尽相同，研究工作还有待深入。目前，解磷类微生物施入土壤后的活动和消长动态及解磷作用发挥的条件尚不十分明确。加之菌剂质量不能保证，使得其从实验室转型到田间大规模生产应用上受到了很大限制。只要克服以上难题，解磷微生物肥料的发展前景将十分广阔。 关于解磷菌相关研究，目前国内外还处于初级阶段，分离鉴定的解磷菌种类还不多，适用于大田生产的比较有限。根据解磷菌研究和生产实践状况，今后需要做好以下几方面工作：1) 探究解磷菌株和土壤、植物、环境的生态关系，分离纯化解磷菌株，筛选高效菌株进行培育，提高菌株的解磷能力；2) 从分子生物学的角度深究解磷菌株的解磷机理、相关基因及其表达调控机制，利用现代分子生物技术对解磷菌进一步进行改良，以筛选出更高效的解磷菌株；3) 研究解磷菌株与其它微生物菌株的交互作用，研制高效复合菌剂，提高微生物菌肥的利用率；4) 进一步研究微生物肥料与有机肥、无机肥适量配施对土壤和植物的影响，为植物生产和改良土壤提供技术；5) 完善微生物肥料登记管理制度，基于科学研究和生产检验制订相关产品标准，科学指导农民和新型农业经营主体进行田间施肥。
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user: 摘 要 传统财务管理模式会阻碍交通运输行业的发展，企事业单位的财务信息化是大势所趋。文章结合交通运输行业的特点，详细阐述了财务信息化的意义、实现途径和注意事项，探讨了实施过程中的问题和相应的解决对策。 关键词 :交通运输，企事业单位，财务信息化 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 近年来，交通运输行业财务信息化应用水平不断提高，纸质文件及报表的上传下达和上门检查、审计的传统管理模式难以实现全领域、全过程的实时管控，财务管理水平和效率都不能适应形势发展的需要 [ 1 ] 。同期财政部门推行的各项财政体制改革和企事业单位内部控制体系的建设也对财务管理信息化提出了明确的要求，因此交通运输行业单位很有必要开发财务信息管理平台，以实现从单一的事后反映转变到实时反映与事后分析相结合，从单一的静态管理转变到静态管理与动态管理相结合，从单一的现场检查转变到现场检查与远程检查相结合，以更好地提升交通运输行业财务管理和服务的能力。 从财务管理角度来说，传统的手工操作和简单计算机管理已不能满足当前跨越式发展的客观需要，所以交通行业财务管理网络化的意义非同寻常，首先实现物流、资金流、信息流同步化 [ 2 ] 。这可以人大的节省时间，为保证物流运输的流畅性提供保障，也为经济发展做出了贡献。从财务管理的技术手段出发，通过经济业务事件驱动会计模式，就是由交通行业的业务终端提供和产生相关的经营活动财务数据，并通过无线和有线转播方式传递给财务部门，而这个传递的过程足自动的，财务部门从系统不仅获得业务信息也及时取得资金信息；其次从物流的角度来说，通过资金流动状况也可以为企业提供物流成本以及提供决策所需要的信息：另外财务管理网络化还有一个很重要的特征就是可以进一步的统筹和实现交能行业内财务人员、资金、信息等的优化管理，这种优化的特点就是管理不再是僵硬的、垂直式的管理，也不是由领导一言堂所决定的，存有很大弊端的管理模式，而是根据实际管理的需求，管理的中心在不停地移动，终端业务窗口甚至可以直接与财务管理部分对话，而整个管理的软件是由最高财务管理中心控制，这样保证整个系统的有序和安全，同时为交通行业在信息化时代的跨越式发展奠定了基础；特别是网络成为信息化时代重要的标志，建设好财务管理的网络化具有不可替代的重要价值 [ 3 ] 。