DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 讨论 4.1. 自我同一性、领悟社会支持和心理资本的相关关系 本研究首先分析了自我同一性、社会支持和心理资本的相关关系。自我同一性的各维度过去的危机、现在自我投入、将来的自我投入及自我同一性的总分与领悟社会支持显著正相关；领悟社会支持与心理资本总分及各维度乐观、希望、韧性、自我效能感显著正相关；自我同一性总分及各维度与心理资本总分及各维度显著正相关。这与我们的假设一致。自我同一性得分越高，越清楚自己想要什么，越容易获得周围人的支持，领悟社会支持得分也越高；领悟社会支持水平越高，越容易感受到来自家人、朋友及其他人的帮助和支持，培养成积极的心理状态，心理资本水平越高；则高自我同一性有助于提升心理资本。 本研究通过Bootstrap程序对中介效应的显著性进行检验发现：社会支持在自我同一性和心理资本之间的中介效应显著，且社会支持起部分中介作用。自我同一性对心理资本有显著的正向预测作用，并能够通过社会支持间接影响心理资本。这可能是自我同一性高的个体感受到自己是不同于他人的独立的个体；对自我的感受是连续统一的，即现在的我是由过去的我发展而来的，未来的我由现在的我决定；对 Table 3 Multiple regression analysis of self-identity， perceived social support and psychological capita 自变量 偏回归系数 标准化偏回归系数 系数(β) 标准误(SE) t值 P值 自我同一性 0.451 0.063 11.636 0.000 0.451 社会支持 0.330 0.063 8.530 0.000 0.330 表3. 以心理资本为因变量(自我同一性、社会支持为自变量)的多元回归分析(n = 452) Table 4 .The mediation analysis of perceived social support on the relation between self-identity and psychological capita 步骤 因变量 自变量 标准化偏回归系数(β) R 2 t值 1 (路径c) 心理资本 自我同一性 0.615 0.336 5.53** 2 (路径a) 社会支持 自我同一性 0.391 0.153 9.03** 3 (路径b) 心理资本 社会支持 0.330 0.335 8.53** （路径c’） 自我同一性 0.451 11.636** 表4. 社会支持在自我同一性和心理资本间的中介 注：**p < 0.01。 自我的认识与社会对其的认识相一致，能够被社会承认。比如青少年对学习、工作有很清楚的规划，并且结合自己的爱好符合实际，那么大家就会认同他的想法，对他进行物质上、精神上的支持，进而更加自信、乐观，对未来充满信心，勇敢的面对生活中的挑战。所以自我水平高的个体了解自己，明白适合自己的东西，在其追求的路上感受到别人的支持，更能坚持自己的目标不放弃，相信自己能成功。 本研究的结果，即自我同一性能够通过社会支持影响心理资本，该结果对于干预大学生心理资本进而提高心理健康水平具有实际指导作用。低自我同一性的个体可以通过提升领悟社会支持水平来增加心理资本。他们可以通过获得家人、朋友及他人的支持对未来充满信心，对事情保持乐观态度，自信面对一切。因此，自我同一性低的个体也能体验到较多的心理资本。 4.2. 未来研究方向 本研究发现，社会支持在自我同一性和心理资本之间起部分中介作用。由于直接研究三者的关系的文献并不多，因此本研究关注自我同一性、社会支持和心理资本三者的关系，构建了社会支持在自我同一性疏离感在羞怯和生命意义感之间的中介效应模型，对这三个变量进行了更深入的探讨，并且对三者关系的研究进行了补充。但是本研究也存在着一定的局限性。首先，取样范围有限，只选取了一所高校的学生作为样本，未做到随机取样且样本数量偏少。未来的研究可在大范围内随机抽样是样本更具代表性，进行全面分析。然后研究方法有待补充。本研究只采用文献法和问卷法进行研究，之后可用访谈和个案研究对自我同一性、领悟社会支持和心理资本三者之间的关系进行更深入的了解和探究。
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user: 5. 结论 1) 大学生的自我同一性和心理资本显著正相关； 2) 大学生的自我同一性、社会支持对心理资本有一定的预测作用； 3) 社会支持在自我同一性和心理资本之间起部分中介作用。
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user: 中职新生适应性团体心理辅导应用研究
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user: 摘 要 目的：探讨促进中职新生适应学校新环境的方法和策略，提高中职新生心理适应能力，进而促进学生心理健康。方法：对本校2016级秋季全体新生共2500名学生在开学一周内由心理咨询师进行新生适应性的团体心理辅导。辅导结束后随机抽取1000名学生运用心理适应能力自测量表进行问卷调查，考察新生心理适应能力。结果：新生心理适应能力大部分都较强，较强的占59.55%，很强的占4.51%，一般的占35.51%，较差的占0.43%，很差的所占比例为0。结论：对中职新生进行适应性团体心理辅导能够预防新生适应性不良，在一定程度上可以提高新生的心理适应能力。 关键词 :中职新生，适应性，团体心理辅导 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 心理适应能力是指一个人为适应客观环境，主动采取施，在一定程度上适应环境的能力，即一个人与现实生活和谐相处的一种能力 [ 1 ] 。心理适应能力的发展水平既直接影响其当前的身心发展，也影响成年期的发展，还对社会的未来发展具有潜在的重要价值 [ 2 ] 。新入校的学生面对全新的环境，如果不能很好的适应，很容易出现焦虑、困惑，烦躁不安，不仅影响其学习和生活，更有甚者可能会影响其身心健康。高职新生的适应问题已成为备受关注的重要研究课题，目前研究上取得了一定的成果，但对中职新生的适应性问题研究还不够。中职生年龄较小，来自不同地区，90%以上的学生为住校生且第一次独立生活，心理适应能力普遍较差 [ 3 ] 。本研究通过对中职新生进行适应性的团体辅导来探讨提升新生的适应能力的方法，不仅为中职院校提高教育教学质量，培养优秀人才提供理论支持和参考，并且能够有效的提高新生适应能力，具有一定的实践意义。
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user: 2. 研究方法 2.1. 研究对象 本校2016级秋季新生，对全体2500名新生进行适应性的团体心理辅导，辅导结束后随机抽取1000名学生运用心理适应能力自测量表进行问卷调查。删除数据不全的问卷，剩余有效数据932人。 2.2. 研究工具 心理适应能力自测量表(见附录)，该问卷是由我国心理学家陈会昌教授编制的一个简便易行的心理适应性测量量表。用于调查学生心理适应能力。该量表共设有20个条目，每个条目有5个备选答案，要求学生认真研读每个题目，然后根据自己实际情况选择与自己最相符的选项作答。根据计分规则(双题号反向计分)统计总分，总分越高说明心理适应能力越强(81~100分代表适应性很强，61~80分代表适应性较强，41~60分代表适应性一般，21~40代表适应性较差，0~20分代表适应性很差。 2.3. 团体心理辅导方案–认识你真好 2.3.1. 辅导时间 新生入学第一周进行，辅导1次，时间共90分钟。 2.3.2. 辅导场地 团体辅导室 2.3.3. 设计意图和目的 通过班集体成员之间的游戏与合作，促进学生之间积极互动，互相认识对方，消除新生之间的距离、陌生感和对环境的不适应感；能初步了解互相之间的基本资料，增强学生互相之间的交流和互相帮助，提升相互信任感与对班级的归属感，提高班级凝聚力与团结性。 2.3.4. 辅导内容及步骤 活动1：大风吹(15分钟) 目的：热身活动，调动学生参与的积极性。 活动程序： 学生围成一个圈坐好，主持人在圈中发号口令：“大风吹，大风吹，穿白色衣服的人动起来！”这时符合条件的同学要迅速从座位上起来寻找另一个座位去坐。发号口令可以是多种多样，如戴眼镜的同学、男同学等等，任何可以有标志性的口令都可以。 活动2：滚雪球(15分钟) 目的：帮助成员相互了解记住名字。 活动程序： 1) 6~8人分组，小组成员围圈而坐。 2) 任选一名成员作为第一个人，由第一个人开始介绍自己，依次以一句话介绍自己的名字、来自哪里、最满意自己的地方(如长相、特长……)等个人资料。在此过程中每个人专心去记其他成员的资料。 3) 由第一人开始，讲述自己的资料，第二人必须重复前一个人的资料后再介绍自已，以此类推，每个人都要讲述自己和前面小组成员的资料，最终第一人重复所有人的资料结束。 活动3：棒打薄情鸟(10分钟) 目的：尽快相识，增进团体凝聚力。 准备：用旧报纸卷成一根纸棒 活动程序：小组围坐成一圈，选一个执棒者站在圈中间，由他面对的人开始大声叫出一个成员的名字，执棒者马上转向那个被叫的人。被叫的人马上再叫出另一位成员的名字。如果叫不出来，就会受当头一棒，然后由他执棒。依次类推，直到大家熟悉互相的名字为止。 活动4：同舟共济(25分钟) 目的：集思广益，团队合作。 活动程序： 1) 以一张报纸作为汪洋大海里的一条船，团队成员必须全都上船，脚不能踩到地板上，但是可以悬空，坚持在船上20秒钟。 2) 小组成员第一回合进行讨论，拿出最佳方案。 3) 成功完成任务后，辅导员要求报纸的面积减半，继续游戏，能坚持到最后的一队获胜。 活动5：认识你真好(10分钟) 目的：感受成员之间的人际距离，提升同学之间的亲密感。 活动程序： 将所有人排成两个同心圆，随着歌声同心圆转动，歌声一停，面对面的两人要相互出拳胜利者决定问候方式，在用不同的姿体表达问候的同时都要说出：“认识你真好！”。出拳规则：1个手指微笑点头；2个手指鞠躬问好；3个指头握手；4个手指拍对方肩头；5个指头热情拥抱。歌声再起时，游戏继续进行。 结束活动：心灵电报(15分钟) 目的： 1) 学习等待与“聆听”来自他人的“心灵电波”。 2) 体验“心有灵犀一点通”的感受。 活动程序： 1) 所有学生围圈而坐，左手手心朝上，右手手心朝下并搭在相邻者左手的手心； 2) 闭上眼睛，静静地等待左手相邻者发出的信息——在手心里轻轻点击，收到信息后立即传给右手相邻者； 3) 比较每一次信息传来时的速度、强度和感受； 4) 主持人点评“心灵电波”的情况，集体交流分享。 注意事项： 1) 要安静的环境，避免噪音干扰。 2) 如果参加游戏的人数较多时，可以围坐两圈或同时发出两个波源进行。 3) 在游戏开始前要做好静心准备工作，保证同学能够用心去聆听、感受来自心灵的电波。出现短波、多波不用马上中止，让大家有所感觉，游戏结束时应该让每个同学真正体验到“心有灵犀”的感觉。
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user: 3. 结果 经过适应性团体心理辅导，2016级新生的心理适应能力大部分都较强，适应能力较强的占总人数的59.55%，很强的占4.51%，一般的占35.51%，较差的占0.43%，很差的所占比例为0。由此结果可以看出，该校中职新生大部分适应能力还不错，只有个别新生存在适应不良的问题，已经针对性的做个体心理辅导，效果显著。
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user: 4. 讨论 团体心理辅导是在团体情境下进行的一种心理辅导形式，通过团体内部人际的交互作用，促使团体成员在互动过程中观察、学习、体验，并认识、探索、接纳自我，进而调整、改善与他人的关系，学习新的行为方式，以发展良好的适应性和助人行为 [ 4 ] 。本研究通过进行新生适应性的团体心理辅导，有效的提升了新生对新的学校环境、生活、学习以及新的人际关系的适应能力，有效的避免了新生适应不良的问题。
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user: 5. 研究展望 本研究通过进行新生适应性的团体心理辅导，有效的提升了新生的适应能力，在一定程度上避免了新生适应不良的问题，但是一次的团体心理辅导不一定能收到持久的效果，因此，针对中职新生适应性问题，未来应该再融合一些其他的措施，结合新生适应性团体心理辅导以期达到更好的效果。 5.1. 开展新生心理普测，建立个人心理档案 以班级为单位，由每个班配备的班主任心助理(心理学专业的实习大学生，每周协助班主任开展一次以心理教育为主题的班会活动)和班主任共同实施，使用SCL-90 (90项症状自陈量表)、心理适应能力自测量表等对新生进行测查，测试结束后，由心理咨询师负责进行结果整理及信息反馈。根据测试结果，筛查出重点关注对象，针对性的进行团体心理辅导或个体咨询等干预措施。 5.2. 开展新生适应性讲座 由学校心理工作室的心理咨询师，根据新生的特点，进行一场新生适应性的讲座，讲座内容尽量涉及到学生亟待解决的问题，例如学校环境的适应，学习的适应，生活的适应以及人际关系的适应，让新生尽快的融入新的环境，尽快的度过这个非常时期。 5.3. 对班主任进行专业培训 心理工作的开展只依靠心理咨询师一个人的力量是远远不够的，平时与学生接触最多最了解学生的是本班的班主任，因此，对班主任进行心理学知识的培训非常有必要。可以从以下几个方面着手：如何筛查有问题的学生，面对挫折该如何应对，危机事件的预防与干预等。 5.4. 成立心理社团 社团是学生立足校园，基于共同兴趣和爱好，依照法律，按照一定的章程，自愿结成的具有固定成员和特定活动内容的群众性组织。社团活动是学生校园文化活动的重要组成部分，也是学生素质教育的重要载体，因此，为了让学生更快的融入学校这个大家庭，能够让自己的才能得到发挥，应引导新生加入学生社团，参加社团活动 [ 5 ] 。另外学校要成立一个专门的心理社团，由学校心理咨询室的老师担任指导老师，让对心理学感兴趣的同学在社团中发挥自己的才能，并获得一定的心理学知识，促进心理的健康成长。 5.5. 全面开展心理健康教育课程 根据教育部的相关规定，各中职学校已经开设了《心理健康》课程。《心理健康》课程对于提高中职新生的学校心理适应能力有较大的作用。中职新生处在个性尚未定型时期，可塑性非常强。学校应争取在第一学期能使其接受系统的《心理健康》课程教育，较好地提高中职新生的心理素质，达到人际适应、学习适应及生活适应的目的 [ 6 ] 。另外，为了更有针对性的对学生进行心理健康教育，可以针对本校学生的特点，通过长期上课的经验总结，制定最适合本校学生的心理健康校本教材，以达到更好的效果。
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user: 摘 要 互联网的出现使得来自世界各地、各行各业的数据信息呈指数增长，由此形成的大数据已经成为堪比石油的新型社会财富，这不仅带来人们生活方式的随之改变，也有效地促进着保障政府廉洁高效的审计方式开始从传统的政府审计转向大数据审计。我们认为，政府审计基于大数据可以实现诸如审计分析实时快速、审计证据更加充分、审计技术更多选择、审计数据跨部门分享以及审计结果有效落实等优势，但与此同时，大数据也在审计数据的真实性及其保护与控制、审计人员的知识储备与技术使用、审计基础信息以及分析平台的选择等方面给政府审计带来了挑战。为此，我们建议通过完善相关法律法规、改革审计体制机制、落实问责制、创新计算机审计软件以及加强审计人员的职业化建设等措施来积极应对。 关键词 :大数据，政府审计，影响 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 大数据 (一) 大数据的概念与特征 随着信息技术的发展，互联网、云计算、流处理等词纷纷出现，近年来大数据一词也出现在公众的视野之中且已经成为堪比石油的新型社会财富 [ 1 ] 。大数据最早是由维克托∙迈尔∙舍恩伯格和肯尼斯∙库克在编写《大数据时代》中提出的 [ 2 ] 。Science杂志2011年专栏讨论了如何管理大数据 [ 3 ] ，美国政府也积极响应大数据时代的发展要求，第二年就提出了“大数据发展战略”，并宣布投资2亿美元用于该项目的研究和发展 [ 4 ] 。关于大数据学术界尚没有统一的定义，但都体现了数据量的巨大。全球研究所麦肯锡给出的定义是：一种规模大到在获取、存储、管理、分析方面大大超出了传统数据库软件工具能力范围的数据集合。在其研究报告 [ 5 ] 中指出，大数据技术可以优化公共部门的资金配置，提升公共部门的责任，降低管理成本，提高其工作的质量和效果。 从大数据的定义中我们可以看出大数据的某些特征，比如数据量的巨大、处理速度快等，目前公认的大数据特征主要是3V特征，又有学者完善为4V特征。第一，数据容量大(Volume)。即数据规模的庞大，随着信息技术的发展，来自各行各业的数据高速增长，由过去的TB级别增长到PB级别，有的甚至达到ZB级别；第二，数据种类多(Variety)。不仅包括结构性数据，而且包括非结构性数据和半结构性数据以及一些交叉性数据，除了传统的数据以外，还包括视频、音频、网页、文档、图片等未经加工的数据，种类极其复杂多样；第三，数据处理速度快(Velocity)。大数据时代下，数据量的剧增并不会降低人们对数据处理速度的要求，相反，人们要求实时得到查询结果；第四，价值密度低(Value)。海量的数据汇集在互联网上，增加了人们识别的难度，因为并不是所有的数据都是有用的，数据量越大，对我们有用的数据可能越少。比如一段视频录像中，对我们有用的信息只有几秒；互联网上的大量网页，我们需要的只是其中几页。这就需要我们合理运用大数据，以低成本挖掘数据背后潜在的巨大价值。 (二) 大数据的应用与价值 现代社会，大数据已越来越广泛地应用于IT行业、商业、服务业、学术科研以及政府治理，引起了以美国为首的众多发达国家的重视，广大发展中国家也在抓住机遇，积极推动大数据革命。我们知道决策是建立在数据和分析之上的，而不是根据经验和直觉，这正是大数据能创造巨大价值的秘密所在，不管是商业、经济还是政府管理，都依赖于大数据提供的技术与价值，大数据技术能分析和预见各项决策产生的商业和经济以及社会价值，为决策提供一定的“预见参考”。麦肯锡上海咨询公司2013年度收官季刊《大数据：你的规划是什么？》中指出，一旦大数据和分析技术被深入应用时，可为企业带来比竞争对手高出5到6个百分点的生产力和利润。著名学者陈振民 [ 6 ] 认为必须充分认识包括大数据和云计算在内的信息通信技术与人工智能在推动国家治理或政府治理现代化进程中的地位与作用，高度重视国家治理或政府治理变革的技术基础的研究。台湾行政院副院长张善政也曾在专访中提到大数据已是全球的趋势，接受这种观念、工具的人，未来将会立于重要位置 [ 7 ] 。同时，政府在利用大数据为民众谋利时，要制定相关政策法规，提高技术开发，对国民的隐私与人身财产安全负责，合理利用大数据技术。
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user: 2. 政府审计 (一) 政府审计的概念与特征 政府审计是确保国家安全和国民经济健康运行的重要保障，主要是指国家审计机关依照国家法规、审计准则和会计理论，运用专门的方法，对被审计单位会计账目，财政、财务收支真实、合法效益的行为进行独立的监督，其实质是对受托经济责任主体履行结果进行独立的监督用以维护财经法规、改善经营管理、提高经济效益，保护国家财产安全。其特点主要有：1) 独立性。政府审计是相对独立的，它是运行于体制内的一种治理手段，对于公共部门非法利用手中权力谋取私利的行为严格审查，始终保持客观公正、不偏不倚。2) 全面性。政府审计过程中不仅要保证审计对象和审计手段全面，还要保证审计过程全覆盖，即将审计贯穿于被审计单位运行全过程。3) 专业性。首先政府审计人员必须具有审计相关的专业知识；其次审计人员必须熟练掌握计算机应用等专业技术；最后还要懂得相关法律法规，具有良好的职业道德、敬业精神和正确的专业认同，能适应财经管理和审计监督第一线的需要。4) 权威性。政府审计是宪法确立的一项制度安排，拥有宪法的保护，具有权威性，其职责和地位是由效力最高的宪法文本固定下来的，任何违规违纪的人都要受到相应惩罚。 (二) 政府审计的意义与价值 刘家义审计长说过，审计是民主法治的产物，是国家治理大系统中的一个“免疫系统”，具有防御、揭示和抵御功能，对于推进国家治理体系和治理能力现代化具有重要作用 [ 8 ] 。政府审计作为国家治理的一个方面，是保证国民经济和国家财产安全的重要手段，有利于实现全面依法治国的总目标，在国家治理的各个领域发挥着基石性支撑和重要保障的作用。 1) 有利于确保国民经济和国家财产安全 国家审计部门利用宪法赋予的权力，依法行使审计权力，对关系国民利益的公权力部门进行审计，监督其权力的行使，揭露和查处违法违规问题，对国有资产和公共资源进行审计，能够有效预防贪污犯罪、以权谋私的现象出现，这对国民经济和国家财产安全有重要作用。 2) 有利于提高财务运行效率，展现政府治理能力 政府审计对财政部门依法进行监督，有利于转变其工作的态度，提高财政资源的利用率；对于财政部门运行中出现的问题，不仅给予指出，而且提供确切的建议，展现了政府的治理能力，提高在公民当中的公信力。 3) 有利于维护社会稳定和国家长治久安 政府审计通过对公共部门运用公共财产的行为进行监督审计，一旦发现违法失职和滥用公权力的现象立即实施相应的惩罚，建国以来国家审计部门发现贪污受贿的案件多达几千起，追回财产损失30多亿。在2015年，截至10月国家审计署整改问题金额1605亿，3229人次因审计查出问题被处理，通过整改，促进增收节支和挽回损失等共计976亿元，制定完善制度2116项，有力地促进了国家重大政策措施贯彻落实，推动了依法行政和反腐倡廉建设，推进了深化改革和规范管理 [ 9 ] 。不可否认，政府审计有力地推动了政府反腐工作的开展，通过揭示国民经济中的风险隐患，极大地保护了人民群众的利益，有利于维护社会稳定和国家长治久安。 4) 有利于推进社会主义民主法治建设 审计是民主法治的产物，是法治精神的重要体现，政府审计作为国家治理的重要手段，依法监督公权力的运行，通过这种权力的制衡机制确保民主法治的推进，有利于实现建设社会主义法治体系，建设社会主义法治国家的总目标。
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user: 3. 大数据对政府审计的影响 大数据时代意味着科学技术的进步与创新，先进的科技不仅改变了人们的生活方式和生产方式，而且变革了政府的治理模式。政府审计作为国家财政的重要保障，对于维护经济安全、查处贪污腐败具有重大作用，但是我们也应认识到无效化审计带来的破坏性。加拿大温莎大学教授Jagdish Pathak认为政府信息技术审计是否有效主要看能否保护国家资产、维护信息完整性、有效实现组织目标和有效利用资源 [ 10 ] 。可见，大数据时代既是政府审计的机遇期，也给政府审计带来巨大挑战。 (一) 大数据给政府审计带来的机遇 大数据时代的到来，改变了政府审计的外部环境，政府审计的方式得到了根本性变革，审计效率也极大提高，政府审计信息化是对时代发展要求的应和。 1) 提高了政府审计效率，有利于实时和快速分析数据 云计算作为大数据处理的重要手段，在大数据审计中发挥重大作用，其强大的数据处理能力，能够实现实时和快速分析数据，并将分析结果反馈给求助方。通过全面分析数据，减少传统审计中的过精过细审查时间，同时又不降低审计的效果，为审计部门审计数据节约了人力、物力和财力资源，实现由传统审计向持续性审计的转变——由微观审计转向宏观与微观相结合，由事后审计转向贯穿审计全过程；由简单财务审计转向系统分析审计。 2) 提供了海量审计信息，使得审计证据更加充分 大数据时代，各种数据信息汇集于互联网上，尽管信息内容鱼龙混杂、有真有假，但这也意味着可用的数据在不断增加，只要经过细心的甄别，我们会发现更多有价值的数据。海量的数据使得政府审计的证据更加充分，弥补审计信息匮乏的问题，使得审计结果更加科学有效。 3) 改善了政府审计的技术，更多审计技术成为可选项 大数据时代，科学技术不断创新，云计算、流处理、物联网等广泛应用于生产生活当中，同时也改变了政府审计的技术，为政府审计带来更多机遇。传统的以手工审查纸质账本的低效率方式难以适应时代的要求，利用计算机以及开发的审计软件大大提高了审计的效率，不断更新审计软件以适应审计要求，使政府审计有更多的技术可供选择。 4) 有助于不同部门交换数据信息，促进数据的跨部门分享 大数据时代，各行各业不同部门的数据都汇集到互联网上，所有的部门都可以参考其他部门的数据信息，打破了过去的信息鸿沟和壁垒，政府审计更加全面科学，审计人员可以通过互联网多方了解数据信息，提出相应对策，有利于实现信息的跨部门共享，方便跨部门沟通协作。 5) 改变了审计人员的审计思维，有利于审计结果的有效落实 大数据技术的应用，改变了传统的手工审计抽样审查方式，大数据时代政府审计的对象不断增多，需要分析的数据量也在暴增，从而改变了他们的审计思维，由过去的抽样审计转向现在的运用大数据全面分析审计数据，审计思维变为从整体到局部，得到的审计结果也更加科学，有利于审计内容的有效落实。 (二) 大数据给政府审计带来的挑战 大数据在政府审计方面发挥的作用却不能掩盖它的缺点，大数据时代下，政府审计也受到一定的冲击，由于审计的方式和环境发生重大改变，政府在审计过程中面临着一系列挑战，极易被拖入低效的泥潭。 1) 审计数据的真实性有待推敲 被审计单位包括各行各业，其信息千差万别，海量的数据一方面使审计证据更加充分，另一方面也增加了审计的难度，审计人员有限的经验和知识难以从海量数据中辨别出有用的信息，许多虚假信息可能会混淆视听，影响审计结果的科学性，给审计人员的工作带来很大障碍，甚至给国家财产安全造成重大损失，损害人民群众的切身利益。 2) 审计数据的保护与控制 大数据时代下，与人们息息相关的各类信息都记录在互联网中，比如大家在网购或者购买车票时都会将大量含有个人隐私的私密信息登记在案，包括姓名、联系方式和住址等。大数据产业在给人们带来便利的同时，也让人们担忧隐私的泄露。网络黑客的大量存在极易使个人信息被盗，危害人们的生命财产安全。发生于2013年的“棱镜门事件”中，美国公众的电子邮件、聊天记录、视频及照片等私密信息都被窃取，报道刊出后外界哗然，先不论事件的发展去向，我们可以肯定的是民众对于个人隐私的担忧不无根据。政府在审计过程中掌握的大量数据也可能是含有公众或企业隐私的内容，因此政府审计大数据在数据收集、存储、分析和处理各环节必须提高警惕和技术支撑，以降低审计数据泄露风险，保护民众与企业的隐私不受侵害。 3) 大数据知识储备与技术使用人才缺乏 大数据审计对审计人员的素质与知识储备提出了更高的要求，数据显示，我国高层审计人员的审计素养普遍较高，但中低层审计人员的审计能力却有待提高。由于我国大数据审计起步较晚，而审计人才的培养需要一个长远的过程，现阶段审计队伍中的人员能力素质还跟不上。传统条件下的账套式审计对审计人员的要求很低，只需对物理、技术与运行程序进行简单的检查，而忽视了一个与信息安全紧密相关的最重要的因素——人，对于任何组织来说，人在业务中都处于中心位置，然而这也正是其最严重的威胁 [ 11 ] 。大数据审计不仅要求审计人员掌握专业的会计知识，还要熟练运用计算机和审计软件，懂得相关的法律知识和管理学知识，能与被审计单位人员友好沟通，使其配合审计工作的进展，这对审计结果的真实可靠性具有重要作用，为此，培养和选拔大数据方面的专业人才是当务之急。 4) 审计基础信息缺乏 政府审计需要在全面掌握信息的基础上进行分析处理，对信息的采集、存储、处理、分析等环节都有较高的要求，准确及时获取数据对于审计项目能否成功具有关键作用，然而这依然是政府审计部门的一个重要挑战。大数据条件下所获取的数据常常包含一些不完整的信息和错误的数据 [ 12 ] 。基层审计人员的素质相对较差，收集到的信息相对缺乏，对审计工作有用的信息就更少了，信息全面性和代表性不够，影响整个审计工作的进展；此外，在现实生活中，虽然大部分被审计单位愿意接受政府合法审计，但也有少部分单位会以信息保密为由拒绝接受审计，还有一些被审计单位虽然向审计部门开放了数据端口，但提供的数据早已经进行过过滤处理，其真实性有待推敲，影响了对被审计单位的分析和判断，大大降低了政府审计的实际效果。 5) 大数据分析平台的选择风险加大，处理平台尚未普及 大数据时代下，可用于政府审计的分析平台相对较多，统一的数据处理平台尚未普及，这就导致许多部门的数据平台不一致，这不仅给数据的存储与共享带来障碍，造成数据资源的闲置与浪费，还会影响政府审计职能的有效发挥，致使各级审计部门出现严重的信息孤岛现象。审计部门可以根据需要选择适合的分析平台，一个合适的平台不仅能提高审计效率，而且能降低审计的成本，选择不当则可能给审计过程带来各种障碍，不利于政府审计绩效的提升，甚至可能给审计造成某些风险。
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user: 4. 对于大数据审计的相关建议 大数据时代的到来改变了政府审计的外部环境，对审计的各方面都提出了新的挑战和要求，政府审计作为国家治理的重要保障，要想发挥其有效作用必须积极应对大数据带来的一系列挑战，认清发展中的各类问题，从充实法律、完善制度、运行监督、人才与技术培养、软件更新等方面全面进行提升。 (一) 完善相关法律法规，监督法律法规的执行情况 制定与大数据审计相关的法律法规，明确大数据审计的程序。质量标准和有关规范，并监督法律法规的执行情况，推进依法行政的实现。对于审计过程中发现的违法失职、滥用公权力现象应严厉处罚，维护法律的尊严，保护公共财产不被侵害，维护公众利益。在监督过程中要关注公权力的行使和责任的落实，完善政府官员终身问责制，管好权、尽好责。 (二) 完善审计体制机制，提高审计监督效能 西方国家的审计体制一般都具有相对独立性，独立于行政部门和司法部门，这就保证了其审计过程中能客观公正 [ 13 ] 。与西方国家制度设计不同，我国国家审计机关实行的是双重领导体制，作为被审计单位的国务院各部门、地方各级政府部门与审计机关同属于上级部门的领导，他们往往有着共同利益，这就无法有效保障审计机关的独立性，上级部门经常会利用手中的权力影响审计单位的正常工作，以权压审、内部变通审计的现象时有发生，使得政府审计失去其原有的目的，因此必须要提高政府审计的独立性和权威性。让审计单位隶属于人民代表大会则会提高其独立性，有利于避免受到来自被审计单位的权力压制，更好地履行审计职责，实现用制度管人、管权、管事。针对审计部门自身的问题也要设立相应的部门来进行监督，以保证审计部门公正合法客观地行使法律赋予的权力，提高监督效能。 (三) 加强对权力运行情况的监督，落实和完善问责制 公权力是宪法和法律赋予的，国家机关应当依法行使权力，政府官员要管好自己手中的权力，不以权谋私、渎职失职，不滥用权力、损害公共利益。国家在审计过程中重点审查领导干部是否有违法失职行为，对于滥用公权力的现象严厉打击，落实和完善问责制，损害公共利益的领导干部要终身追究责任。刘家义审计长认为，当前和今后一个时期审计工作要牢牢把握权力运行和责任落实两个重点，把守法守规守纪尽责放在突出的位置，加大对有法不依、执法不严问题的揭示和查处 [ 14 ] 。 (四) 构建全覆盖的审计监督体系，提高审计水平 构建全覆盖的审计监督体系，首先要实现审计对象全覆盖，凡是涉及到管理、使用公共资产的单位及其工作人员都应当接受审计部门的审查，对其相关经济活动的真实、合法情况进行审查，对领导干部的履职行为进行审查，对公共资产的使用结果进行跟踪审查；其次是审计过程的全覆盖，要对被审计单位使用公权力的整个过程进行审计，事前发现问题应当及时指出，并提出改进意见，事中跟踪审计，事后总结审计的经验；最后还要实现审计手段的多样化，政府审计事关国计民生，事关国家财产安全，因此要实行动态的、全方位、多层次的审计，保证审计过程科学有效。 (五) 提高审计人员的审计素质，加强审计人员的职业化建设 政府审计是一项专业性要求很强的工作，对于审计人员的专业化素质要求相当高，审计人员是整个审计工作中最重要的一个部分。邱发森认为现阶段，要顺应审计信息化浪潮，做好统一规划和人才培养 [ 15 ] 。人才培养中要加强审计人员的专业化素养和职业胜任能力，培养与国家审计相适应的审计人员，建立相关的职业资格审查制度和培训制度，使全体审计人员树立依法审计意识和规范审计意识，构建系统的持续性培训平台，根据审计工作的要求定期对国家审计人员进行培训，通过相关平台向专业人士寻求帮助，提高其业务能力，在引入新人才时也要注重相关素质的考核，推动政府审计的顺利展开。 (六) 不断完善计算机审计软件，合理使用大数据平台 政府审计需要有统一的审计项目管理软件，不仅要规范审计程序，还要对审计事项范围和审计过程进行规范，审计人员应按照审计规定的要求运用审计软件严格实施审计步骤。王晓春 [ 16 ] 提出：在信息化背景下，审计机关必须加强审计信息化建设，用数字化带动信息化，用信息化推动审计技术方法创新，加大计算机前沿技术在审计中的应用。不同的大数据平台各有优劣，要多方选择合适的平台进行操作，此外，对于政府审计过程也要进行必要监督，加强大数据分析模型和软件开发，创造条件支持计算机审计软件的开发与创新发展，创造适应大数据发展的外部环境。 大数据的发展是人类历史上又一次革命性的进步，对生产力的发展具有极大的推动作用，其“价值堪比石油”。东西方国家都积极把握住机遇，进行开创性的技术革新，作为保障政府治理的重要方式的政府审计，也在大数据的浪潮下取得重大进步，政府审计运用大数据技术不仅提高了效率，而且提高了效益，给整个国民经济带来重大益处，推动经济发展，保障了国家财产安全和国民公共利益，从另一角度看，也促进了民主法治的发展。虽然大数据的应用对政府审计具有很大的挑战，但是其好处远大于坏处，通过制定适当的监督和改善措施便能有效减少其带来的负面作用，使其造福于国家治理的方方面面。我国在审计现代化的过程中应积极把握大数据的浪潮，同时优化审计技术，运用先进的审计技术与方法，在提高政府审计独立性的前提下实现审计的创新性发展，加快推动大数据审计，为国家治理发挥保障性作用。
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user: 浅析非营利性公益组织与基层政府职能转变
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user: 摘 要 当今中国政府在发挥公共服务功能的过程中，因其直接微观的履行职能，在解决具体问题上仍承担着较大的压力，尤其是直面具体民生问题的基层政府。非营利公益组织这种“第三部门”的理论与实践发展，为进一步推动基层政府职能转变开辟了新路，使政府回归“宏观调控”的管理者角色。将第三方管理理论作为解释政府与非营利部门在社会治理中的关系的一个视角，以中益老龄事业发展中心为例，通过对其组织结构、运行模式的分析，有利于对非营利性公益组织在基层政府职能转变中的作用进行浅要的阐述。 关键词 :第三方管理理论，非营利性公益组织，政府职能转变 Copyright © 2017 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 深化政府职能转变，是当前中国行政体制改革绕不过去的路径。责任型、高效型、服务型政府的建设需要在政府、市场、社会的分工上进一步明晰，这也体现了涉及行政处理社会问题高效率的行政合理性要求。基层政府由于主要解决的是公众日常生活的具体问题，贴近人民群众的生活，因此在“形式上”较为明显而直接地反映了政府职能的履行效果。“上面千条线、下面一根针”，基层政府承接了数量庞大，种类繁杂的具体事务，“超负荷”在所难免。从公共治理与政府职能转变的角度看，基层政府与其他主体建立合作关系对公共生活合作管理，有利于降低公共服务的成本，提升公共服务的质量，推动“责任政府”与“社会自律” [ 1 ] 的进程。非营利公益组织就能够成为主体之一。 非营利性公益组织作为具有公益性、非营利性等特征的非政府组织(NGO)，“为公众提供切实的、具有普遍性或个性化的服务” [ 2 ] ，与基层政府的公共服务职能有着微妙的联系。利用第三方管理理论的视角，以中益老龄事业发展中心的简介为例，对分析非营利性公益组织对基层政府深化行政管理体制改革、转变职能的作用具有重要的意义。
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user: 3. 案例——中益老龄事业发展中心 [ 7 ] 3.1. 中益老龄事业发展中心简介 中益老龄事业发展中心(ZhongYi Ageing Development Center 缩写：ZYAC)成立于2011年，其中心简介中提到自身性质是非营利性社会公益组织。国家民政部是其登记管理机关以及业务主管单位，登记住所位于北京。以“构建和谐社会为目标，以发展老龄事业为重点，开展多种形式的‘敬老养老助老’社会公益活动，促进我国老龄公益事业的健康发展”为宗旨。 3.2. 中益老龄事业发展中心的组织机构 该中心借鉴企业式管理，由理事会负责具体运作，设监事会负责监督，理事会下设主任，统筹管理各个分部门(办公室、事业部、宣传教育部、财务部)工作，并对理事会负责。旗下有6个理事单位 6 (见图1)。一个有趣的现象是其14名中心顾问成员大多有“军政背景”，除一位国家行政学院副院长以外，有5名少将，4名中将以及4名上将。 3.3. 中益老龄事业发展中心的运行模式 3.3.1. 中益老龄事业发展中心的工作内容 中益老龄事业发展中心的工作重点在于老龄公益事业，其开展的相关活动也是围绕着这一基本点与社区结合展开的：一是加强宣传。如建立老龄公益事业信息传播平台在若干城市社区开展“敬老养老助老”公益宣传活动，宣传为老服务理念；二是增强相关理论水平如开展与老龄问题相关的理论研究和学术交流活动、开展与老龄相关的国际合作与业务交流等；三是开发老龄事业的项目与产品。包括1)承接政府部门职能转移或委托办理的为老服务项目；2)在若干城市社区建立“怡老之家”等老年服务场所；3)依据国内地理分布情况，建设一批集休闲、农业、生态、观光旅游为一体的新型老年公寓；4)利用现代 图1. 中益老龄事业发展中心的组织架构 科技成果，开发、推广为老服务产品；5)支持社会组织和志愿者开展为老服务工作、面向社会开展各种为老公益活动等等。 3.3.2. 中益老龄事业发展中心的运行机制与工作成果 就中益老龄事业发展中心的运行机制而言，推动老龄事业发展是目的，而在推动这一目的领域中形成了一种“依靠政府、依赖企业资金、自主与合作开发项目”的模式或轨道。即在推动老龄事业的过程中，政府提供的是“平台”，企业提供的是项目运行的根本动力(通过吸纳企业捐款，与企业合办项目，项目公开招标等形式落实物质条件)，而中益老龄事业发展中心提供的是操作层上具体的管理“智慧”。 从其工作成果上看，理论与宣传层：截至2016年6月8日，其网站上转发了96条政策法规，刊载了202篇相关理论文章，发布了1175篇公益资讯；接受或争取政府委托，开展老龄问题的理论研究和学术交流，为政府提供决策咨询服务。实践层：其配合政府及相关部门，在若干城市社区建立“敬老爱老助老”公益宣传栏、在若干城市社区建立“怡老之家”等老年服务场所；开发“康保”健康随身管家项目(针对患有心血管疾病老人推出的具有健康检测功能的3G智能手机)；根据国内地理分布情况，建设一批候鸟式国际养老公寓；建设与社会公益组织合作的为老公益事业等。 3.3.3. 中益老龄事业发展中心的财务情况 根据中益老龄事业发展中心发布的2014年财务情况的报告中可得，截止2014年12月31日中心签订捐赠协议3份，到账率为100%。总收入231.1万元。捐赠收入总额230万元占主体，以利息收入为代表的其他收入为1.1万元，占总收入的0.4%；费用支出总额163.8万元。业务活动支出62.07万元，占支出总额的37.89%。其中：“中益云端数据科技管理平台项目”支出15.19万元，“中益怡老之家项目”支出14.71万元，“新型老龄公寓项目”21.58万元，对“千阳县老人健康体检与健康管理项目”的资助支出10.59万元。管理费用(以工资及福利支出为主)支出101.73万元，占总费用支出的62.11%。年底期末净资产1332.08万元，其中限定性资产1020万元，非限定性资产312.08万元。比去年增加67.31万元，增长率为5.32%。可以说，企业的捐赠仍是其主要资金来源，但是还是能看出其吸纳资金的数额仍然十分有限。
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user: 4. 案例分析——非营利性公益组织在基层政府职能转变中的作用 4.1. 易获得活动的合法性前提 由于中益老龄事业发展中心具有“官方”身份，社会资本雄厚，更主要的是其在理论与学术活动中为政府“出谋划策”，在实践中配合政府尤其是基层政府职能的落实，具体表现则是根据相关“精神”承接或开发项目。而项目的本身最终是要“落户”或者植根“社区”的，贴近民生，贴近社区居民尤其是老年人的生活实际，更易获得公众的信赖与支持，从而一方面把政府要办的事儿办了，另一方面也搭建了在基层政府与公众之间“沟通对话”的桥梁。加之我国现行的制度下，非营利组织的建立多少离不开点“经济实力”——企业支持与“官方背景”——登记与业务主管单位。易获得民众认可、官方信赖，发挥政府与公民个人间的纽带作用，成为了以中益老龄事业为代表的非营利公益组织的天然优势。 4.2. 克服政府失灵的各种限制 政府提供的服务和公共物品总是普遍统一的，老年事业中，对于老年群体与其他群体或者老年群体中的需要是不尽相同的。而政府出于“公平性”的考量往往遵循多数原则，造成了“众口难调”的局面。而虽然在市场中经营的企业，对科技与创新的反应最为敏感和迅速，但其以营利为目的的特性导致了难以直接从事“公益性”活动。而此时，非营利公益组织能够解决这个问题。中益老龄事业发展中心在政府的指导下，与中国联通合作开发了“康保”健康随身管家项目，我国多地也进行了“落户”，是采用科技手段(“云 + 端”技术)来满足老年人多样化的需求，同时也回应了老年群体中的少数人；此外，克服了在短暂任期的限制下，政府官员仅倾向于关注短期问题和结果的局限性，中益老龄事业发展中心的项目不随政府官员的任期改变，有利于解决长期的社会问题；同时，正由于其在理论上的不断探索，其相关成果以及观点有利于为政府提供政策决策需要的信息。总之，克服了政府在种类上、数量上、时限上、知识上等诸多限制。 4.3. 提供必要的公共服务、参与社会管理，解决实际问题 中益老龄事业发展中心直接提供公共服务，减少了基层政府提供公共服务的交易成本，基层政府更多的处于一个宏观管理的地位，有利于其有更多的时间以及精力进一步判断并把控局势、做出选择、发挥作用。而中益老龄事业发展中心这样的非营利性公益组织以其具有弹性的特点，在小范围内开展服务，满足人们的需求，一方面具体落实了政府职能，另一方面以其独有的形式参与社会管理：实际运行中，社区居委会进一步承担了街道的职能，而以中益老龄事业发展中心为代表的非营利公益组织在具体发挥其作用的时候，往往落户于社区，与居委会或与当地的社会组织结合开展项目：在若干城市社区建立“怡老之家”等老年服务场所、建设一批候鸟式国际养老公寓、建设与社会公益组织合作的为老公益事业等等，离不开社区居委会、与其他社会组织的公共参与，这不仅有利于结合当地情况的条件下参与社会管理，而且在解决实际问题的同时推动政府、市场、社会的互动。
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user: 5. 结语 中益老龄事业发展中心在老龄事业上为公众提供服务，减轻政府压力的同时帮助政府更好地履行具体职能，推动了社会管理的发展。我们可以看到类似于中益老龄事业发展中心这样的非营利性公益组织在全国还有很多，在不同的领域处理着各种各样的具体问题。对于政府尤其是基层政府而言，给予非营利性公益组织必要的处理权或者与其发展一种健康的互动关系既是“还权”于社会领域的举措，又进一步推动了政府职能的转变：有利于从以往的“我认为公众需要什么服务，就提供什么服务”转变为“公众需要什么服务，就引导提供什么服务”，进而有利于建设服务型政府。但是，我们也应该认识到，非营利性公益组织自身也有其局限性，因此政府在一定时期内也不可以完全“放手”不管。非营利性公益组织的发展离不开政府，需要政府支持才能发展，其资金来源较为单一，在公众认可方面同样需要政府提供支持。并且由于其在中国的发展还不是很成熟，缺乏一整套完善健全的制度，因此容易出现一系列诸如过度营利、慈善供给不足，业余性等“志愿失灵”(voluntary failure)问题。而这些“弱点”正好是政府组织的优势之所在。由于这两种组织存在着一定程度上的“互补性”(compensatory complementarity)，基层政府与非营利公益组织之间应保持何种互动深度与程度，如何在降低成本、保证提供福利的同时，真正惠及民生，解决实际问题仍是值得进一步探讨的问题。
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user: 摘 要 氨单加氧酶(AMO)是异养硝化过程中起催化作用的关键酶之一，其相应的基因为amo。本研究根据NCBI数据库中amo基因序列设计引物，成功扩增粪产碱杆菌Alcaligenes faecalis NR基因组DNA中amo基因序列，得到长度为1639 bp的DNA序列。该段序列包含1个完整的开放阅读框(ORF)，编码长度为346 aa的多肽链。经过BLAST在线比对分析，该序列为AMO蛋白质序列。该蛋白序列分子量大小为36.7 kDa，是碱性蛋白也是疏水性蛋白。此外，AMO也是跨膜蛋白，有12个跨膜区。采用串线法成功构建AMO三级结构模型，模型置信度为98.6%。模型显示AMO含有一个镍原子结合位点。拉氏图表明，AMO模型位于最佳区域的氨基酸残基所占比例为94.9 %，这说明模型构象良好。上述研究可为深入了解异养硝化过程中的关键酶提供参考。 关键词 :异养硝化，粪产碱杆菌，氨单加氧酶，三级结构 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 氮素污染是引起水体富营养化的原因之一。生物脱氮被公认为是经济有效的污水脱氮方法之一。硝化作用是污水生物脱氮处理过程中的一个重要环节。传统的硝化作用是由自养型微生物完成的。然而，自养硝化细菌存在着生长缓慢，对高浓度有机物耐受性较差等问题。随着研究的深入，人们发现异养硝化现象广泛地存在于不同的环境中。异养硝化 [ 1 ] 作用一般是指异养微生物在好氧条件下将氨/铵或化合价为−3的有机氮化合物转化为羟胺，进而转化为亚硝酸盐和硝酸盐的过程 [ 2 ] 。与传统自养硝化微生物相比，异养硝化微生物具有生长快速、适应能力强等特点。异养硝化微生物在高氨氮和高C/N废水处理中有较大的应用前景。 目前对于异养硝化的研究多集中于菌株的分离鉴定、性能测试 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 以及异养硝化菌株在反应器中的应用 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] ，而对于异养硝化过程中关键酶的研究相对较少。异养硝化过程中的关键酶有氨氮加氧酶(AMO)、羟胺氧化酶(HAO) [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] 等。AMO是异养硝化过程中第一个关键酶，起着将 转化为NH 2 OH的作用，常被用作硝化过程的功能标记基因 [ 12 ] 。由于AMO为膜结合型酶 [ 13 ] [ 14 ] ，其分离纯化难度较大。因此，目前关于AMO酶纯化及三维结晶的报道很少。 本实验室在前期研究中分离纯化出的一株具有异养硝化功能的细菌Alcaligenes faecalis (粪产碱杆菌) NR [ 15 ] 。在本研究中，采用PCR技术以及生物信息学方法，对粪产碱杆菌NR的AMO的基础理化性质以及三级结构进行分析，以期为深入了解异养硝化过程中的关键酶提供参考。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 菌株培养 本研究所使用菌株为实验室分离的粪产碱杆菌NR，NCBI数据库登录号为FJ151629。将储存于4℃条件下的粪产碱杆菌NR接种于灭菌后LB培养基中，于30℃、120 rpm条件下隔夜培养后用于提取基因组DNA。 LB培养基：酵母粉5 g/L，蛋白胨10 g/L，NaCl 5 g/L。 2.2. PCR扩增 取1 mL隔夜培养的粪产碱杆菌NR菌悬液，使用Omega细菌基因组DNA提取试剂盒，按照操作说明提取细菌基因组DNA，作为PCR扩增所用模板。采用DNAMAN 7软件根据NCBI数据库中检索到的Alcaligenes faecalis ZD02氨单加氧酶基因序列（GenBank登录号为NZ-CP013119）设计引物A1 (表1)，根据Alcaligenes faecalis ZD02氨单加氧酶基因序列向3’和5’端分别延伸500 bp后所得序列设计引物A2 (表1)。PCR反应采用25μL体系，体系包含以下溶液、试剂：2 × Premix Ex Taq 12.5 μL，正、反向引物各1 μL (10 μmol/L)，DNA模板1 μl (40 ng/μL)，RNase-free water 9.5 μL。PCR扩增条件如下：94℃预变性5 min，接着进行30循环：94℃变性30 S，退火30 S (引物A1退火温度52℃，A2退火温度55℃)，72℃延伸1 min，最后72℃下补充延伸7 min。PCR产物采用1.5%琼脂糖电泳进行分析检测，对符合预期的条带运用Omega胶回收试剂盒回收，并AT克隆测序。 2.3. AMO基因序列分析 对测序得到的基因序列先采用NCBI在线比对工具BLASTN进行比对分析，确认该段序列是否为AMO基因序列。确定为目标基因序列后，使用NCBI在线开放阅读框(ORF)预测工具ORF finder预测该段序列可能编码的AMO氨基酸序列。所得AMO氨基酸序列运用在线软件ProtParam和ProtScale对其等电点、分子量以及亲疏水性进行分析 [ 16 ] 。采用在线跨膜分析软件TMHMM-2.0 [ 17 ] 对AMO跨膜区进行分析预测。 2.4. AMO高级结构分析 使用在线蛋白质三维结构预测工具Phyre 2 [ 18 ] 对AMO的三维结构进行分析预测，并采用3DligandSite [ 19 ] 服务器对模型可能存在的结合位点进行预测，运用PDBsum Generation对所得模型进行评估。最后使用Chimera 1.11对模型进行可视化操作。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. PCR结果 采用Primer BLAST工具以数据库中粪产碱杆菌基因组DNA为模板，对引物A1和A2进行进一步的验证，结果显示两对引物均只有一种特异性产物，且长短与预期相当，这说明引物A1和A2对粪产碱杆菌都具有较好的特异性，可以用于后续PCR扩增实验。然而PCR结果显示(图1)，引物A1的产物具有多条条带，且目标条带亮度很低；而A2引物虽然产物条带单一，特异性也好，但是其长度约为1700 bp比预期长500 bp (表1)。然而A2产物单一且特异性良好，可以排除引物错配的可能。经测序该段PCR产物长度为1639 bp。 3.2. 序列分析 经BLAST比对，本研究所得到基因序列为amoA基因。ORF finder预测结果显示(图2)，该段基因序列有一长度为1041 bp的阅读框(304-1344 bp)。这个阅读框编码总共编码346个氨基酸，该阅读框包含初始密码和终止密码，并且阅读框5’和3’还余有约300 bp碱基。因此，认为该阅读框所编码的是一条完整的肽链。此外，ExPASy工具预测的蛋白质的理论等电点为9.38，属于碱性蛋白。其分子量大小为36.7 kDa， Table 1 Primers for amo gene PCR amplificatio 编号 引物名称 引物序列(5' → 3') 产物长度 A1 amo F619 TGGTCTTGTGCTGTATCGG 557 bp amo R1176 GTAGGCAAAGCCAAATGC A2 amo F040 GCAAGATGAATGTGCCTATG 1203 bp amo R1244 GCAATACCACCAGGACTGA 表1. 氨单加氧酶基因引物序列 注：F为正向引物，R为反向引物。 图1. 氨单加氧酶基因PCR产物琼脂糖电泳图 图2. 氨单加氧酶基因ORF分析结果 比自养硝化菌AmoA大6-8 kDa [ 20 ] ，与从异养硝化菌Paracoccus denitrificans胞内分离纯化得到AmoA分子量大小相近(38 kDa) [ 13 ] 。 运用ExPASy网站的在线分析工具ProtScale对Amo序列的亲疏水性进行分析，结果显示该段氨基酸序列的最大亲水性指数(hydropath)为2.658，最小亲水性为−0.8，总平均亲水性(GRAVY， Grand average of hydropathicity)为0.972，总平均亲水性的数值越大说明该蛋白疏水性越强。此外，预测结果图显示，AmoA蛋白大部分区域是疏水的(图3)。因此，该蛋白是疏水性蛋白。 在线跨膜预测软件TMHMM-2.0预测显示(图4(a))，AmoA蛋白的氨基酸非跨膜螺旋指数为195.86 ( > 18，当大于18时该蛋白分有可能是跨膜蛋白，或者有信号肽)，首端60个氨基酸的跨膜指数为34.98 ( > 10，当大于10时N端存在信号肽)。因此可断定，AmoA的N端可能存在信号肽，且该蛋白为跨膜蛋白，这与Moir [ 13 ] 等和Klotz等 [ 20 ] 得研究结果一致。如图4(b)所示该蛋白总共存在12个跨膜螺旋区，且该蛋白的N−端和C−端均位于膜外细胞周质一侧。 图3. 标准试验系统结果曲线 图4. 氨单加氧酶氨基酸序列跨膜预测结果。(a) TMHMM跨膜预测结果，红色阴影为跨膜区；(b) Phyre 2跨膜预测结果，黑色表示细胞膜，黄色表示跨膜结构 图5. 氨单加氧酶三级结构预测结果，(a) AMO 三级结构骨架；(b) AMO三级结构亲疏水表面，红色表示疏水，蓝色表示亲水 图6. 氨单加氧酶三级结构模型拉氏图 3.3. AMO三级结构 由于PDB数据库中未找到现有的AMO模型，也未找到同源性> 30%的模型。因此，使用Phyre 2采用串线法对AMO的三维结构进行预测。模型以c4n7wA为模板构建，目标序列与模板序列的覆盖率为85%，最终得出的模型的置信度为98.6%。使用Chimera 1.11软件对预测结果进行可视化操作，所得结果如图5所示。如图5(a)所示，AMO绝大部分区域为α螺旋结构，一般而言α螺旋区域也是跨膜区域 [ 21 ] 。如图5(b)所示，该蛋白表面大部分为疏水区域(红色为疏水区域，蓝色为亲水区域)，特别是中间部分，这与前面跨膜结构预测及亲疏水性分析相吻合。此外，3DLigandSite预测结果显示AMO具有一个镍原子结合位点，然而有报道认为AMO含有的是Cu原子结合位点 [ 14 ] 。 拉氏图常用于指明蛋白质或多肽高级结构中允许和不允许的构象，一共分为最佳区域(红色)、次允许区(褐色)、最大允许区域(黄色)和不允许区域(浅黄色)四个区域。当位于最佳区域的氨基酸残基所占比例大于90%，且位于不允许区域的氨基酸比例不超过1%时所得模型的稳定性较好 [ 21 ] 。图6为AMO模型所对应拉氏图。如图6所示，所得模型中位于红色区域的残基所占比例为94.9%，余下5.1%位于褐色区域，没有残基位于黄色和浅黄色区域，这说明预测所得AMO模型构象良好。
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user: 4. 结论 采用PCR技术成功扩增粪产碱杆菌NR基因组DNA中AMO基因序列，得到长度为1639 bp的DNA序列。经BLAST比对所得基因序列为amoA序列，包含编码AMO活性位点序列。该段序列包含1个完整的开放阅读框(ORF)，编码长度为346 aa的多肽链。经比对分析该序列为AMO蛋白质序列。该蛋白序列分子量大小为36.7 kDa，是碱性蛋白(pI = 9.38)也是疏水性蛋白(GRAVY = 0.972)。此外，AMO也是跨膜蛋白，有12个跨膜区，C端和N端均位于膜外细胞周质一侧。成功构建AMO三级结构模型，模型置信度为98.6%，含有一个金属镍原子结合位点。拉氏图表明，AMO模型位于最佳区域的氨基酸残基所占比例为94.9 %，该模型构象良好。