DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 在经济全球化及国际工程市场竞争日趋激烈的今天，国际工程承包商初入新兴市场，需科学统筹、深入调研，高度关注项目执行、公司运行的各类经营风险 [ 1 ]。其中，关系项目落地的分包风险便是承包商需谨慎研究的一类重要风险，而在管控分包风险的各类措施中，高效遴选优质分包商又是在源头保障项目分包商顺利履约、实现既定项目及公司效益的关键环节。 然而，在实际的分包管理中，总承包商依然投入了大量的人力、物力和资源来管理劳务队，管理精力被牵制，管理水平无法提高 [ 2 ]。分包商的优质与否似乎成为了总承包商提升管理能力的关键 [ 3 ]。 进入新兴市场区域，面对各种外部挑战和风险，如何把握外部环境的发展趋向和基本脉络并准确地判断和防范化解外部挑战和风险是重中之重，而分包商水平的不可预知性也是巨大的阻碍 [ 4 ]。 因此，初入新兴市场区域，国际工程承包商能否高效遴选出优质分包商，对在执行项目及公司长远发展至关重要。
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user: 2. 承包商在国际工程新兴市场区域高效遴选优质分包商的意义 承包商在国际工程新兴市场区域高效遴选优质分包商，不仅因分包商的商务、技术实力关系项目及公司的效益、长远发展，而且在于分包商本身良莠不齐的客观属性及东道国属地分包的法律要求。 2.1. 重要性 2.1.1. 优质分包商是承包商实现合同目的的主要载体 因专业化分工的不同，国际工程承包商一般有三种类似：设计咨询公司、工程承包公司、设备供应商。因这三类公司，在工程的设计、采购、施工的其中一环占有相对优势的技术、商务优势，往往能够通过业主方的资格预审，继而成功突围成为工程的承包商或联合体的牵头方。尽管如此，在复杂的工程承包执行中，诸如以上三类的任何一种承包商都无法独自以自身现有的资源承揽工程的全部工作，需要根据工程实际情况，将其工程的部分或全部进行分包。从这个角度讲，优质分包商是承包商实现合同目的不可或缺的资源补充 [ 5 ]。 2.1.2. 良好的总分包关系是承包商品牌维护的关键方面 因初入新兴市场，多数分包商与承包商相比，与政府、业主及各类利害关系人保保持着更为密切的联系，承包商项目或承包商发生的任何事件，将很可能通过分包商及其人员快速传播出去。尤其，在作者所工作过的中东地区国家，分包商多为由当地人担保或参股的公司，加之伊斯兰宗教或家族的聚居性特征，分包商成为连接外籍承包商与当地社会的重要渠道。 精品工程项目与总分包关系，有利于承包商迅速打造公司品牌与声誉，并促进承包商迅速融入当地社区文化。 2.2. 迫切性 2.2.1. 分包资源良莠不齐 对于国际工程承包商来说，之所以现在才进入某些新兴市场区域，比如沙特、伊朗、欧洲某些国家或地区等，多数原因在于新市场的各类风险，包括经过市场调研后的望而却步、东道国对外资的准入与开放等。无一例外，东道国工程建设市场因缺少国际承包商的充分参与、竞争，分包市场的培育自然也缺乏压力与动力，分包资源往往良莠不齐，因此需要承包商采取一定措施、谨慎选商。 2.2.2. 东道国属地分包的法律要求 关于外资的准入与开放，多数国家都有保护本国产业及国民的倾向，并颁布相关法律。以中东国家为例，沙特有沙化(Saudization)与属地价值提升(In Kingdom Total Value Added，简称IKTVA)，要求在沙特承揽工程的国际承包商设定雇佣沙籍的比例及属地分包、属地采购、沙籍工资、供应商培训等费用需占合同额一定比例；在阿拉伯联合酋长国承揽工程项目，也需满足属地价值要求(In Country Value)，与沙特IKTVA异曲同工。
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user: 3. 承包商高效遴选分包商的路径及应对 以作者所执行的某个沙特阿美项目为例，项目工期19个月，承包商需完成各类口径管线300公里，阀室3座，站场设施10座。因初入沙特市场，项目部没有已完工项目的数据支持，而且根据项目部的计划分析以及主合同里程碑要求，需要在合同签订后短短3个月内完成所有相关工作的招标、分包，以便保证项目进度要求。 3.1. 指导理念 在环境新、工期紧、任务重的重重困难下，承包商从沙特阿美的工程实际出发，以PMBOK知识体系为指导，从启动、规划、执行、监控、收尾等5大过程和47个项目管理过程组成的10大知识领域入手，以遴选分包商为中心，形成了“招标分包四部工作法” [ 6 ]。 3.2. 具体应对路径及措施 3.2.1. 启动阶段 合同静态与动态分析相结合，充分识别分包风险。静态分析合同体系与条款、技术与商务、程序与实质中涉及分包商的相关风险，并与动态分析相结合，将对每种风险可能产生的影响和概率进行估计。只有这样，才能真正地识别分包风险，并可在未来不可承受时，采取规避、转移、减轻、接受风险的控制措施。 3.2.2. 制定分包方案及计划，科学规划 承包商应综合自有资源、分包市场、合同规定、法律要求等情况，并结合启动阶段识别到各类分包风险，如某类资源紧张、分包商管理水平低等，综合合同、经营、设计、生产、采购等各部门，合理制定招标分包方案及计划，并及时召开启动会，以便有序推动各个工作包坚实落地。 3.2.3. 执行方面，平稳、有序推进，依法招标分包 扩散讯息、放大选商范围。初入新市场，针对劳务供应、设备租赁等常见业务，承包商不会遇到分包商资源紧张的情况，但对特殊作业，比如非开挖穿越、智能检测等，则需要扩大选商的范围。这样的专业服务商，尤其在阿美体系内提供服务，一方面可选择的范围极其有限，另一方面提供服务的质量、价格差别很大、参差不齐。承包商可以通过以下几个方面的渠道保障选商的范围：第一，利用前期市场调研、投标询价时的部分包商，作为选商的基础数据库。前期历史数据及实际的合作情况，可以有效挖掘出分包商的资源、管理、履约等方面的情况；第二，通过业主及合作伙伴的推介，可以吸引众多分包商前来洽谈，可以扩大招标选商的基础数据库。阿美系统内相关工作的分包商短名单，也可以作为具体工作招标选商的有效资源。但该类分包商，因在阿美短名单内，实力较强，但价格往往偏高、工作比较饱满、合作态度有待改善。相关合作伙伴，包括公司代理、项目投标时已联系的分包商，也会推荐部分属地分包商；第三，承包商也可采用报纸广告等公众媒体，扩大选商的范围；第四，初入新市场，承包商为配合招标、择优选商，也应在团队内设置专门的招标管理岗。选择曾在当地油气工程企业有过招标经验的工程师，利用他对沙特当地工程市场及油气工程分包商资源的熟悉，将会有效扩大选商的范围与效率 [ 7 ]。 承包商应面谈分包商，对其进行资格预审。经过第一步后，承包商已经有了针对项目分包工作的相对健全的分包商数据库，但是否收录其中的分包商、其技术、商务实力如何，则需要经过面谈，尤其需经过严格的资格预审，才可以纳入招标分包的短名单。承包商通过与分包商探讨其及对一些具体问题的理解，可以比较清晰地判断该分包商是否拥有阿美相关工作的经验。比如，可以聊下分包商曾经给阿美或阿美承包商的工作业绩，可以问下分包商为阿美提供服务时对设备、人员有哪些要求，可以与分包商交流下现场工作许可的问题，最后可以再请教下阿美针对该类工作的标准和要求。这样的面谈，涉及资源、管理、技术，基本可以初步检验分包商对阿美及具体工作的了解。其次，通过面试后，招标主管将事先制定的分包商资格预审文件清单发送对方，请他们按照资格预审文件的要求提供相关资质文件。提交这些基本资质文件后，经审核通过，证明这些分包商已具备进入我方招标选商的短名单。承包商方可给对方发送招标文件 [ 8 ]。 承包商应依法选商、合规招标、高效推进。根据公司招标管理办法，承包商拟招标的工程分包或服务合同的招标方案、招标结果需根据预算金额的大小报事业部、公司或中石油集团公司审核批准。为理清招标流程，需对招标团队进行培训，让他们分工协作、具体负责，以便尽快熟悉工作流程，做到依法合规。同时，为避免风险，承包商应编制一整套标准招标文件，并在主合同基础上，结合沙特阿美及项目的具体情况，对履约担保、付款周期、逾期违约金、违约条款等进行了适度调整，以保障承包商有效管控属地分包商。另外，根据主合同规定，任何分包商进场前都需报沙特阿美批准。为避免延误时间，在报送阿美前，承包商应首先与阿美相关部门进行沟通，以确认分包商有阿美认可的供应商编号，不至于报送分包商后遭阿美拒绝，影响后续工程进展。合规程序的培训、宣贯及与标准文件的准备，有利于保障承包商招标分包的合法、合规，将有效提升招标分包的进度 [ 9 ]。 承包商应多渠道落实承包商实力，并进行实地考察。沙特阿美对承包商资格预审后，还会安排其工程师对承包商目前进行施工的某处现场进行实地考察，以最终核实、验证承包商的管理、履约等能力。面对沙特鱼目混杂的分包市场，针对任何拟授标的分包商，承包商在最终授标前，也需对其正在执行的阿美项目的现场进行实地考察，或对其自有设备情况进行实地考察。作为最后一道保障，实地考察在实际执行中能够帮助承包商识破不少分包商，他们或推辞考察，或不能提供文件里描述的自有资源，以避免后期履约不能的现象发生。对分包商实地考察，最大程度保障了所选分包商名副其实 [ 10 ]。 同样对于供货商也是适用的，规范境外国际工程项目供货商现场技术服务管理流程，保障工程项目所需的供货商现场技术服务有序实施，保证供货商及时到场，提高供货商技术服务质量，缩短供货商现场服务时间，节约项目现场服务费用 [ 11 ]。 承包商初入新兴市场区域为高效遴选分包商，以PMBOK理念为指导，主要在启动、规划、执行等阶段，从资源获取、资格预审、合规程序、实地考察等方面提出了应对路径及措施，最大程度保障所选择的分包商可信赖，其提供的服务质优价廉。
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user: 4. 结论 初入新兴市场区域，优质分包商的协同、支持对于走出去的国际工程承包商来，不仅意义重大，而且是法律的客观要求。以沙特市场为例，承包商在PMBOK理念的指导下，主要在启动、规划、执行等阶段入手，从资源获取、资格预审、合规程序、实地考察等方面提出了应对路径及措施，最大程度保障所选择的分包商可信赖，其提供的服务质优价廉，并进而保障项目、公司的经营效益及品牌。 当然，因本文主要论述初入市场时高效选择分包商的应对措施，并未将PMBOK理念下五大过程中的监控、收尾纳入本次的讨论。严格意义上讲，承包商尽管在启动、规划、执行等阶段在选商方面做足了功课，但项目执行情况复杂，难免出现所选分包商因其它原因不能履约等情形，或本项目表现不错的分包商在公司其它项目上出现问题。 在未来的选商工作中，运用上述方法，选商方式横向到边，选商审批纵向到底，过程管控无缝衔接，弥补选商管理短板，规范企业经营行为 [ 12 ]，通过全面的分包商解析，选择最优质分包商将不再成为困惑承包商的难题。同时，从建立市场区域内优质分包资源库的角度，承包商仍应通过监控分包商实际履约表现、对分包商后期评估及建立黑名单制度等，在项目管理的五大过程中来全过程识别、选择、评估分包商。不过，这也将是本文立足承包商初入新兴市场区域高效遴选分包商的维度，提出应对路径及措施的价值所在。
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user: 摘 要 随着我国油气管网建设的发展，油气长输管道建设体量越来越大，但与此同时，穿越河流等特殊地段的长输管道随着建成年限的不断增加，由于自然冲刷或者人为因素的影响损坏程度日益增大，管道裸露悬空段失效是其主要因素。本文基于河流穿越管道段极限状态机理研究，考虑屈服破坏、振动破坏、疲劳破坏三种失效形式，提出针对悬空段长度、悬空段高度、周围水流速度、土体弹性模量等影响因素的悬空段稳管方法，考虑各方法适用性与经济性提出河流穿越管道悬空段稳管决策，并提出多种方法联合实施及管道监检测建议，为不同情境下河流穿越管道悬空段的安全维护提供理论与技术支持。 关键词 :河流穿越，管道悬空，稳管方法 Copyright © 2020 by author(s)， Yangtze University and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 随着我国长距离输油气管道建设的蓬勃发展，长输管道不可避免地需要穿越河流等特殊地段，河流穿越管道在运行过程中，由于水流冲刷及人工活动等原因，可能出现裸露的悬空段，悬空段在波和流的往复作用下可能发生断裂失效，造成巨大的经济损失 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]。因此，对河流穿越管道悬空段极限状态机理进行研究，总结悬空段露管稳管决策，对于河流穿越管道的安全运行具有重要意义。 1950年，Morison等人为了研究波浪流组合以及相关动力响应，提出研究有关小直径构件所受波浪力的Morison方程，从此管道悬空段极限状态机理研究便基于该方程进行展开 [ 6 ]。研究发现河流穿越管道的悬空长度是决定管道是否发生失效破坏的关键因素 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]，李亮亮等研究结果说明管道悬跨安全长度判定条件：悬跨段不发生振动破坏、不发生疲劳破坏且不发生屈服破坏 [ 11 ]。詹婷雯等学者针对河流穿越管道灾害问题，结合理论模型与有限元模拟方法对洪水作用下的管道应力应变情况进行分析，综合数值法以及有限元法对河流管道稳定性进行研究 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ]。巴建彬等学者从治理的可行性、可靠性、治理成本以及避免二次悬跨等多角度综合考虑悬空管道安全问题 [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ]。 本文基于河流穿越管道悬空段极限状态机理研究，针对不同影响因素提出悬空段露管稳管方法，考虑屈服破坏、振动破坏、疲劳破坏三种破坏形式，对各稳管方法进行可行性与可靠性分析，考虑各方法适用性与经济性提出河流穿越管道悬空段稳管决策，并提出多种方法联合实施及管道监检测建议，为不同情境下河流穿越管道悬空段的安全维护提供理论与技术支持。
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user: 2. 管道悬空段极限状态机理 河流穿越管道悬空段破坏形式包括屈服破坏、振动破坏、疲劳破坏。 2.1. 屈服破坏机理 河流穿越管道悬空段所受静力荷载主要包括管道自重、输送油气重量、输送内压、防腐保温层及其附件重量、绕流阻力等，动力载荷主要来源于波和流的往复作用产生的绕流升力、脉动拖曳力等。当悬空段所受到的有效应力 σ e 超过管材的许用应力 [ σ ] ，或管道应变超过管道允许最大形变量时，悬空段将发生屈服破坏，按照von-Mises应力条件有： f n ≥ n f s (1) 2.2. 振动破坏机理 当稳恒水流横向流河流穿越经管道悬空段时，将在管道的背水侧出现旋涡泄放，若旋涡泄放的频率与悬空段的自振频率相同或相近时，可能导致悬空段出现“频率锁定”的共振现象，即悬空段的振动响应出现大振幅，控制旋涡发放过程中悬空段与流体之间的相互作用，由于流体的粘性特征及管道与流体之间的复杂相互作用，悬空段发生剧烈耦合振动，导致悬空段发生振动破坏，如图1所示为涡流引起的管道振动示意图。 图1. 管道涡流引起振动示意图 当悬空段发生振动破坏时，管道及周围流体呈现如下特点： 1) 管后漩涡泄放的强度增大，“涡激”的规律性增强； 2) 管道所受的升力和拖曳力都明显增大，可达管道不发生共振时的4~5倍； 3) 发生“频率锁定”现象，即当悬空段的涡激振动频率接近其自振频率时，管道与流体的耦合振动会驱使漩涡泄放频率在一个较大的范围内固定在管道自振频率附近，而不按其本身的涡激振动频率泄放，类似于被“锁定”在自振频率上。 当悬空段的涡激振动频率 f s 与其自振频率 f n 满足关系式(2)时，认为可以有效避免悬空段发生共振现象，即： σ M i s e s = 1 2 ( σ 1 − σ 2 ) 2 + ( σ 2 − σ 3 ) 2 + ( σ 3 − σ 1 ) 2 ≤ [ σ ] = ϕ σ s (2) 式中 f n ——悬空段的自振频率，Hz； f s ——悬空段的涡激振动频率，Hz； n——关系常数，一般认为 n ∈ [ 0.7 ， 1.3 ] 时“频率锁定”现象有可能发生。 2.3. 疲劳破坏机理 水流在河流穿越管道悬空段的周围出现绕流作用，导致悬空段受到绕流阻力及绕流升力的作用，其中绕流升力的方向及大小均呈周期性变化，是典型的周期性交变载荷，是引起悬空段疲劳破坏的主要原因。在绕流升力的往复作用下，悬空段可能在其所受有效应力并未达到许用应力时就会产生局部疲劳裂纹，随着裂纹的逐渐扩展管道可能发生突然断裂失效，即疲劳破坏。由于疲劳裂纹的形成及扩展极具隐蔽性，而疲劳断裂又具有瞬发性，因此疲劳破坏可能造成较为严重的失效后果，需要采取必要的措施加以预防。 在计算管道的疲劳寿命时，各国船级社规范中通常采用英国健康与安全执行委员会(HSE)提出的S-N曲线进行估算，S-N曲线如图2。 图2. 管材的S-N曲线 因此，防止河流穿越管道悬空段发生疲劳失效的安全判定条件为 σ Mises ≤ S (3) 有在考虑屈服破坏、振动破坏和疲劳破坏三种破坏形式时管道均能满足安全条件的情况下，才能判定管道安全，因此本文分别提出河流穿越管道悬空段稳管方法，对各稳管方法进行对比分析，为不同情境下的河流穿越管道悬空段极限状态稳管方法提供参考。
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user: 4. 结论 本文在管道悬空段极限状态机理研究的基础上，对河流穿越管道悬空段稳管方法进行总结调研，取得如下成果： 1) 针对悬空长度、土体弹性模量、周围水流速度、悬空高度等不同影响因素，考虑三种破坏形式对河流穿越管道悬空段稳管方法进行可行性与可靠性分析； 2) 考虑适用性及经济性，对各稳管方法的优缺点进行分析，为不同情境下悬空段的稳管治理提供决策参考。
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user: 摘要 探究大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury， TBI)基因表达差异同miRNA的调节网络，为阐明TBI治疗靶点提供理论基础，并以期寻找TBI临床诊断的客观指标。本研究实验方法使用美国国立生物技术信息中心(NCBI)，从GEO数据库获得有关TBI基因表达与miRNA表达的原始数据。通过筛选差异表达基因和miRNA，并经过一系列生物信息学软件处理，对差异表达的miRNA进行靶基因预测，将系统提供的靶基因与差异表达基因进行比较，保留重合的差异表达基因构建了miRNA-Gene靶向调控网络，并对差异表达的基因进行了基因本体论(GO)功能富集分析。本研究结果最终筛选出95个差异表达基因和4个靶向miRNA。利用筛选结果构建完成了miRNA-Gene靶向调控网络，并通过GO功能富集分析，得到了从生物学过程、细胞成分及分子功能三个角度对这些基因进行的功能描述。miRNA-Gene靶向调控网络展示了创伤性脑损伤后相关miRNA与其靶基因是如何通过相互作用而进一步产生一系列生物学效应的。本研究通过GO功能富集分析和调控网络，有助于理解和阐明TBI的潜在机制和miRNA调节的关系，并为TBI临床诊断提供了4个可能选择的生物标志物。
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user: 1. 引言 创伤性脑损伤(traumatic brain injury， TBI)是一种由外力导致的脑组织损伤，包括高空坠物、交通事故、暴力等意外原因引起的脑组织损坏及神经细胞坏死 [ 1 ]。近年来，TBI的发生率受交通运输和工业水平飞速发展的影响而进一步上升，TBI作为一种常见的神经外科疾病，已成为导致世界范围内死亡和残疾的主要原因之一，并严重威胁了人群生命健康 [ 2 ]。同时，TBI也因其高发生率、高致残率、高死亡率的特点，一直受到国内外学者的密切关注 [ 3 ]。 微小RNA(microRNA， miRNA)是一类广泛存在于真核生物中的内源性单链小分子RNA，长度在21~25个碱基之间。当前已被证明，miRNA作为非编码RNA参与基因表达的调控中发挥着关键作用。近年来，有研究通过微阵列分析发现了神经损伤组织中miRNA表达模式的动态变化，并确定了miRNA参与神经损伤和再生过程 [ 4 ]。 当前，TBI的临床诊断主要依靠神经系统检查和影像学技术，具有一定的局限性，对于不同程度的脑损伤至今没有诊断的金标准 [ 5 ]；而miRNA这种参与神经损伤修复的能力使得其成为TBI临床诊断的生物标志物成为可能。于是，本研究旨在通过生物信息学分析，筛选TBI后与差异表达基因相关的miRNA，以期寻找TBI临床诊断的客观指标；并构建gene-miRNA网络，从而对TBI分子水平调节做出整体性预测，为寻找其治疗靶点提供理论基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)平台的基因表达综合数据库GEO (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)，在大鼠物种下以“创伤性脑损伤(TBI)”为关键词寻找相关数据芯片，分别检索有关miRNA及基因的原始数据。其他选择标准包括：1) 含有假手术与实验组相关对照；2) 含有多组实验样本；3) 样本支持线上分析工具GEO2R。根据选择标准，筛选出涉及大鼠脑组织创伤性损伤手术后有关miRNA和基因的四组数据集。本次实验选取含有miRNA相关表达量变化的两个数据集(GSE59646和GSE115614-GPL22696)和基因表达量变化的两个数据集(GSE115614-GPL15084和 GSE59647-GPL14746)作为后期分析的样本。 2.2. 筛选差异表达基因和miRNA 在本研究中，利用GEO (Gene Expression Omnibus)数据库自带的交互式线上分析工具GEO2R对GSE59646、GSE115614-GPL22696、GSE115614-GPL15084和GSE59647-GPL14746四个数据集进行分析，在miRNA及基因表达数据中比较出实验组与假手术组中存在差异表达的信息，分别对miRNA及基因各两组数据集的差异数据取交集，以P < 0.05，|log2FC| > 1为筛选条件，筛选出差异表达的基因和miRNA。 2.3. 差异表达miRNA的靶基因预测 为了探究差异表达的miRNA与差异基因的靶向关系，本研究通过miRwalk 3.0软件 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de/)对差异表达的miRNA进行靶基因预测，筛选标准为P < 0.05，将系统提供的靶基因与差异表达基因进行比较，保留重合的差异表达基因。 2.4. miRNA-Gene靶向调控网络的构建 为了讨论TBI后分子水平调节的相互作用，利用cytoscape v3.7.1软件，通过输入差异表达数据，自动生成初步的miRNA-Gene调控网络图。再通过导入差异表达上下调关系(根据log2FC值得出上调和下调结果)，对不同属性的网络节点(Node)进行标注与区分，并将边(Edge)和网络(Network)样式进行调整，绘制一个清晰的miRNA-Gene靶向网络布局图。 2.5. 差异表达基因的基因本体论(GO)功能富集分析 将与差异表达miRNA靶向基因重合的差异表达基因导入在线分析软件DAVID (https://david.ncifcrf.gov/)进行GO功能富集分析，筛选标准为P < 0.05，从生物学过程(BP， Biological Process)、细胞成分(CC， Cellular Component)及分子功能(MF， Molecular Function)三个角度，对这些基因的功能进行描述，从而对TBI分子水平调节做出整体性预测。
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user: 3. 结果 3.1. 大鼠创伤性脑损伤后典型差异表达的基因及miRNA 将基因芯片数据库集GSE59646和GSE115614-GPL22696中的四例假手术组作为空白组、六例TBI手术组作为对照组分别进行差异表达分析，分别筛选出375、1120个差异表达miRNA，将两组数据集基因取交集，共筛选出4个差异miRNA，其中4个miRNA表达上调、无miRNA表达下调。运用相同的步骤进行操作，在GSE115614-GPL15084和GSE59647-GPL14746两组差异基因数据集中，取交集后共筛选出608个差异基因，其中411个基因表达上调、197个基因表达下调(见图1)。 图1. 大鼠创伤性脑损伤后差异表达的基因及miRNA 3.2. 大鼠创伤性脑损伤后差异表达miRNA的靶基因预测 利用miRwalk软件对筛选miRNA的靶基因进行预测，将靶基因与筛选基因进行比较，得到重合的差异表达基因共95个。表1展示了筛选出的差异表达miRNA及其靶向的差异基因，并标明了其差异表达的上下调情况。 Table 1 Differentially expressed miRNAs and differentially targeted gene miRNA名称 基因表达变化 基因名称 rno-miR-27a-3p 上调 Tnfrsf26， Tmem43， Spp1， Nek6， Fam188b， Sec14l2， Napg， Lrrc4， Insig2， Appl2 下调 Rwdd4， RGD1307830， Crem， Atf3， Anapc1， Scn5a， Ptprj， Pip4k2b， Nkain4， Gramd3， Acss1 rno-miR-188-5p 上调 Zfp703， Zfp593， Tspan 4， Sox7， Runx1， Rhoj， Txnrd1， Ttc4， Tm6sf1， Stk38l， Socs3， Slc1a5， Rnaseh2b， Rassf4， Poldip3， Plau， Myo1e， Myd88， Mefv， Maff， LOC684871， Klf6， Itgb2， Hbegf， Fosl1， Fam188b， Fam167a， Elavl1， Eif4ebp1， Cytip， Csk， Crispld2， Cnn3， Clcf1， Cdc6， Cda， Cd74， Cd160， Ccna2， Asf1b 下调 Zfp280d， Traf3， Sec14l2， Rspo2， Spryd3， Slc40a1， Slc25a42， RGD1559896， Ralgapa1， Rab22a， Papd7， Ndrg4， Napg， Mmp17， Kat5， Insig2， Grm3， Fam163a， Emid1， Dlx4， Dio1， Chmp7， Cacnb3， Acsl6， Ablim2 rno-miR-19b-3p 上调 43527， Foxk2， LOC684871， LOC691113， Rwdd4， Stat3， Zdhhc18 下调 Gabrd， Kcnab1， Olfml1， Rspo2， Zfp280d rno-miR-192-5p 上调 Aldh18a1， Sh3bp2， Sv2c， Hmox1 下调 Fam163a， Slc40a1， Ndrg4， Acot4 表1. 差异表达miRNA及其靶向的差异基因 3.3. miRNA-Gene靶向调控网络的构建 利用从miRwalk 3.0软件预测出的靶基因，将系统提供的靶基因与差异表达基因进行比较，保留重合的差异表达基因，并使用Cytoscape 3.7.1对获得的两组数据构建了miRNA-Gene靶向调控网络(见图2)，其中共加入了4条miRNA和与之对应的95个靶向基因，通过红色来标记基因或miRNA的上调、绿色标记下调。该网络展示了创伤性脑损伤后相关miRNA与其靶基因是如何通过相互作用而进一步产生一系列生物学效应的。本研究试图通过对网络中核心节点的分析，从而对miRNA与其靶基因的调控在整个创伤性脑损伤生物学过程中所产生的影响进行了相关预测和描述，并借此讨论其相关的生物学意义。 图2. miRNA-Gene靶向调控网络 3.4. 差异表达基因的本体论功能富集分析结果 在本研究中，miRNA的靶向基因通过DAVID软件中基因本体论功能富集分析得到的结果，差异表达基因中CDC6、RNASEH2B、CCNA2、CD74在成纤维细胞正调节(positive regulation of fibroblast proliferation)的生物学进程中起作用，CLCF1、SOCS3、STAT3在JAK-STAT信号转导途径(JAK-STAT cascade)中起作用，PTPRJ、HMOX1、SOX7等7个基因在对细胞增殖的负调节(negative regulation of cell proliferation)中发挥作用。根据P值大小排序，GO分析中生物学过程(BP)富集结果及相关基因数量结果见图3。 图3. 差异表达基因GO功能富集——生物学过程BP结果 差异表达基因在细胞内(intracellular)、核质(nucleoplasm)、肌动蛋白细胞骨架(actin cytoskeleton)等处发挥作用。根据P值大小排序，GO分析中细胞成分(CC)富集结果及相关基因数量结果见图4。 图4. 差异表达基因GO功能富集——细胞组分CC结果 差异表达基因在蛋白质激酶结合(protein kinase binding)、抑制转录因子结合(repressing transcription factor binding)、受体结合(receptor binding)等分子功能中起作用。根据P值大小排序，GO分析中分子功能(MF)富集结果及相关基因数量结果见图5。 图5. 差异表达基因GO功能富集——分子功能MF结果
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user: 4. 讨论 自Ambros和Ruvkun [ 6 ] 各自团队发现第一个microRNA开始，microRNA的研究至今可以大致分为三个阶段：第一阶段是从最初的发现到了解它广泛参与生命活动从发生到生长发育的各个时期；第二阶段，从分子水平层面揭示了成熟的miRNA可与其特异性mRNA分子部分互补，从而发挥其下调基因表达的作用，调节蛋白质的表达水平；第三阶段，miRNA分子病理学研究的大量实验证明miRNA与肿瘤及各类疾病有关，由此展开针对诊断标志物及病理机制的研究。 创伤性脑损伤作为神经外科最常见疾病，多数会引起继发性脑损伤，涉及氧化应激、炎症、神经元凋亡坏死、轴突损伤等诸多方面，并以细胞及突触的退化而告终。目前临床上尚没有诊断TBI的分子标志物，过去很长一段时间，许多分子被提出可作为TBI的生物标志物，但由于神经系统的复杂和TBI病情程度的不同，在临床应用上并不理想 [ 7 ]。近年来，大量实验证明miRNA与TBI上述生物学活动有关 [ 8 ]，本研究通过生物信息学分析，实现了利用数据库筛选扩充miRNA调节TBI网络的认识。 结合本研究最终筛选出的95个差异表达基因和4个靶向miRNA，构建完成了miRNA-Gene靶向调控网络，并通过GO功能富集分析，得到了从生物学过程、细胞成分及分子功能三个角度对这些基因进行的功能描述。其中，值得注意的是，多个基因靶向对应miRNA参与了炎症反应、血管生成、以细胞坏死凋亡为主的继发性脑损伤和突出可塑性等生物过程 [ 9 ] [ 10 ]。 基因表达水平显示，CDC6，RNASEH2B，CCNA2，CD74在TBI组中相比对照组明显上调，并均与miRNA-188-5p存在靶向关系，共同参与成纤维细胞增殖的正向调节，由此推测miRNA-188-5p下调在TBI后可能促进了成纤维细胞的增殖，相关方面还应设计实验加以证明研究。此外，HMOX1，ITGB2，RUNX1在TBI组中同样表达上调，并分别靶向下调了miRNA-192-5p和miRNA-188-5p共同参与对血管生成素的正向调节，近年来，多项实验证明血管生成是脑损伤后神经修复与再生的关键因素，miRNA在其中可以起到调控血管生成的功能 [ 11 ]。 在本研究中值得注意的还有MYD88，CD74参与免疫球蛋白介导的免疫反应以及由LRRC4，KLF6，MYD88，SOCS3参与细胞因子介导的信号转导通路，二者在分子机制上同炎症反应均有相关性。此外，有研究表明miRNA-1224可以调节肿瘤坏死因子α (tumornecrosis factor-α， TNF-α)，由此说明miRNA-1224可能参与了炎症反应 [ 12 ]。另一项研究证明，miRNA-124能诱导小胶质细胞炎症反应显著缓解，可见miRNA-124参与炎症反应的调控。此外miRNA-155，miRNA-414，miRNA-104，miRNA-125，miRNA-146和miRNA-21均参与炎症因子的表达 [ 13 ] [ 14 ]。因此，有理由推断部分miRNAs参与了中枢神经系统的炎症反应调节。 必须指出，本研究的实验结果可能依旧存在不足，有研究表明，miRNA在执行生物功能时常常表现出时空特异性，在TBI后的不同时间、脑组织不同部位遭到外力创伤，都会对miRNA的表达量产生影响 [ 15 ] [ 16 ]。因此，对TBI进程中miRNA调控更详尽的机制还有待后续研究。生物信息学分析所给出的4个miRNA是否能够成为TBI的生物标志物，同样需要更多基础研究的实验证明；但总的来说，本研究所得出的miRNA-gene的靶向关系无疑将有助于指导我们研究更复杂的TBI分子机制和miRNA调控机理，为我们开展进一步的实验设计提供帮助。
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user: 摘要 心力衰竭是多种心血管系统疾病发展终末期的共同结局。近年来随着生活方式改变和人口老龄化进程加快，射血分数保留的心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction， HFpEF)患病率及死亡率逐年上升，严重影响了人们的生活质量，故探寻与其诊断及预后相关的血清生物标志物有重要意义。本文主要就N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)及可溶性生长刺激表达基因2蛋白(s-ST2)与HFpEF之间的关系做一综述，以期明确HFpEF的诊断，并为其治疗及预后评估提供参考。
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user: 1. 引言 2016年欧洲心脏病学会 [ 1 ] (ESC)心力衰竭协会(HFA)修正了心力衰竭(HF)的分类，根据左室射血分数将HF分成3类：射血分数保留的心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction， HFpEF; LVEF ≥ 50%)、射血分数中间值的心力衰竭(heart failure with mid-range ejection fraction， HFmrEF; LVEF 40%~49%)及射血分数减低的心力衰竭(heart failure with reduced ejection fraction， HFrEF; LVEF < 40%)。射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)既往被称为舒张性心力衰竭，其是相对于收缩功能不全性心衰提出的。HFpEF [ 2 ] 是由于心室舒张功能障碍和(或)心室肌顺应性降低僵硬度增高而导致左心室充盈受损、心脏搏出量减少而不能满足机体组织代谢需求，主要表现为运动耐力下降、呼吸困难和体液潴留，是一种多因素导致的复杂临床综合征。据统计 [ 3 ]，HFpEF在全部心力衰竭中占比约为40%~71% (平均50%)，其主要危险因素包括：高龄、高血压、左心室肥厚、心肌梗死、瓣膜性心脏病、心房颤动、肥胖和糖尿病。研究显示 [ 4 ]，HFpEF是由危险因素和基础共患疾病引起的全身、微血管内皮炎症、过度氧化应激和血管功能障碍，进而导致心肌细胞炎症、肥大和心肌纤维化。故探讨反映心血管系统压力负荷、炎症及心室肌纤维化的指标，对HFpEF早期发现和明确诊断有重要意义。
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user: 2. sST2及其与HFpEF的关系 2.1. sST2的来源、生物学特性及其功能 1989年日本学者Tominaga等 [ 5 ] 从BALB/c-3T3细胞(即小鼠成纤维细胞)中分离出一组生长特异性cDNAs，其中一个cDNA (被暂命名为ST2)编码的蛋白质序列与小鼠ILl-R系统的脱细胞部分高度相似，此蛋白即被称为ST2蛋白。2002年WEINBERG等 [ 6 ] 发现ST2基因在心肌细胞发生机械应变时被显著激活，进而使ST2蛋白的表达异常上调。通过实验进一步验证：冠状动脉结扎组小鼠血清ST2水平较未结扎组瞬时升高(20.8 ± 4.4 vs 0.8 ± 0.8 ng/mL， P < 0.05)，心肌梗死后1天，血清可溶性ST2水平升高，且ST2水平与射血分数呈负相关。2017年美国心脏病学会、美国心脏协会、美国心力衰竭学会对2013年的心衰管理指南进行了更新 [ 7 ]，更新内容包括心衰生物标记部分、射血分数减低心衰(HFrEF)的新疗法、与HFpEF相关的重要共病的新数据以及预防心衰的新视点。指南 [ 7 ] 指出：可溶性ST2与心室重塑和心肌纤维化相关，BNP和NT proBNP可用于心衰的诊断及其严重程度的判断。 sST2即可溶性生长刺激表达基因2蛋白，也被称为可溶性人基质裂解素2，是白细胞介素1受体家族的成员，其配体是细胞因子白细胞介素33 (IL-33)。ST2蛋白主要有两种异构体 [ 8 ]：一种是可溶性形式的ST2或sST2，另一种是膜结合受体形式的ST2或ST2L。sST2可以捕获IL-33，进而影响IL-33/ST2L信号转导通路使心肌纤维化和心室重塑。细胞因子IL-33是sST2和ST2L的功能性配体，IL-33与ST2L结合对心血管系统产生有益作用，可以抑制心肌细胞肥大及心肌纤维化，从而起到保护心脏的作用。但sST2作为一种诱骗受体捕获白细胞介素33 [ 9 ]，抑制其与ST2L的结合，阻止了IL-33对心脏的保护作用。 2.2. sST2与HFpEF的关系 可溶性ST2与心室肥厚、纤维化及左心室重构密切相关 [ 10 ]，其浓度升高>35 ng/ml可预测为心衰预后不良。研究显示 [ 11 ] 可溶性ST2水平与年龄、肾功能损害、体重指数、是否有心衰及心房颤动史无关，且对于NT-proBNP升高不明显的心衰也有很好地预测作用，对心衰患者病情的评估更准确。杨东慧等 [ 12 ] 指出可溶性ST2对于HFpEF更有临床诊断价值。一项纳入了134例心力衰竭患者的研究 [ 13 ] 显示，sST2与左室射血分数及收缩末期容积明显相关，即其与心脏结构之间存在相关性。可溶性ST2 [ 14 ] 作为一种新型心力衰竭标志物，其参与心力衰竭之后心肌重构的病理生理过程，且在炎症反应、心肌纤维化和心脏氧化应激中的作用引起广泛关注。多项临床试验证明 [ 15 ] sST2在多种心血管疾病发生的早期就有提示作用，且其水平对多种心血管疾病的预后有较高临床价值。sST2与心衰严重程度和不良预后显著相关，且对于急、慢性心衰患者的危险分层有一定的补充作用。由于sST2在机体发生炎症反应和免疫性疾病时水平升高 [ 16 ]，因此联合检测NT-proBNP可以更准确的判断心衰的严重程度及预后情况。
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user: 3. NT-proBNP及其与HFpEF的关系 3.1. NT-proBNP的来源、生物学特性及其功能 美国国家临床生物化学研究院(NACB)的一个多学科专家小组 [ 17 ] 将B型钠尿肽(BNP)、N末端pro BNP (NT-proBNP)纳入心血管疾病的危险因素中，并将其应用于心脏病和中风的一级预防。BNP是一种主要由心室肌细胞产生的多肽类激素 [ 18 ]，最初由日本学者发现，并命名为脑钠肽。心肌细胞释放脑钠肽的主要触发因素是心肌细胞的伸展，当心室肌细胞受到的压力增大而发生主动或被动伸展就会促使BNP的产生和释放。但随后的研究表明 [ 19 ]，其合成和分泌主要是受BNP基因表达水平的调控，当心室压力超负荷、容积扩张拉伸和心肌缺血时BNP基因大量激活，其被激活后产生pro-BNP (BNP前体或称BNP原)，pro-BNP是一种非活性多肽，其再经裂解酶作用生成等量的BNP和NT-proBNP。BNP是脑钠肽的一种活性形式 [ 20 ]，半衰期短且性质相对不稳定，故更具有临床应用价值的是NT-proBNP，其半衰期长达1~2 h，在体内浓度24 h维持恒定，且检测不受时间、体位及日常活动的影响。人体内BNP和NT-proBNP的水平受年龄、体重指数、肾脏功能等多种因素的影响 [ 21 ]，且由于二者代谢机制不同，在不同人群中二者的水平不完全一致，故不能仅依靠BNP或NT-proBNP的水平诊断HFpEF。所以在诊断HFpEF时不能依赖于单一指标，应该将多种指标联合检测、综合考虑，从而更科学准确地判断病情。 3.2. NT-proBNP与HFpEF的关系 HFpEF患者约占心力衰竭患者总数的50% [ 22 ]，其临床表现虽不及HFrEF严重，但预后与HFrEF相当，且更容易发生猝死。由于预期寿命延长、人口老龄化和心脏、非心脏性基础共患疾病的流行使得HFpEF的患病率呈现逐年上升的趋势。一项流行病学研究发现 [ 23 ]：和HFrEF相比，HFpEF正以每年1%的速度增长。目前，HFpEF的病理机制尚未阐明，临床症状和体征缺乏特异性，临床医生的诊断存在很大难度，也缺乏有效的治疗策略。HFpEF患者 [ 24 ] 的左心室没有明显的扩张，但会出现左室壁厚度增加和(或)左心房扩大，左心室的充盈和抽吸能力受损。2019ESC-HFA (欧洲心脏病学会心力衰竭协会)针对HFpEF的诊断提出了新的专家共识 [ 25 ]，即四步诊断流程和HFA-PEFF评分。评估内容的第一步：心衰的症状和体征、心电图、合并症、危险因素、心脏超声心动图和心肺运动试验。第二步：采用HFA-PEFF评分，其是以超声心动图和利钠肽为基础评估内容，评分 ≥ 5分即可诊断为HFpEF。第三步：对于不能明确诊断的，需进行运动负荷超声心动图以及有创血流动力学检查。第四步：进行病因学诊断，包括心肌组织活检或基因检测等。该指南强调，对于HFpEF的诊断和治疗要注重基础疾病的作用，针对病因进行对应的治疗。 N末端脑钠肽前体蛋白是近年来很有前途的生物标志物。它已被用作 [ 26 ] 心脏病患者、普通人群和重症监护室患者的风险分层工具。在一项纳入了576名非选择重症监护室患者的大规模研究中 [ 27 ] 发现，在对患者的年龄、肾功能和炎症等混杂因素进行调整后，NT-proBNP可以独立预测心脏病病人的重症监护室死亡率。王云的一项研究 [ 28 ] 纳入了60例心力衰竭患者，选择同期健康体检者60例作为对照组，并将心衰组按照美国纽约心脏病学会心功能分级的标准分为四组，结果发现：心衰各组的NT-proBNP水平均高于健康对照组，且随着心功能分级的增加其水平逐渐升高，说明NT-proBNP水平与心衰的严重程度存在一定的相关性。其次，NT-proBNP在鉴别心源性和非心源性呼吸困难方面发挥了很大作用，从而对临床的诊断和治疗起到了指导作用。杨国平 [ 29 ] 纳入了因急性呼吸困难入院和在住院期间出现呼吸困难症状的101例患者，综合所有患者的病史、临床症状、体征、超声心动图、胸片、心电图以及各项化验检查结果将其分为心脏病引起的呼吸困难组(49例)和肺脏疾病引起的呼吸困难组(52例)，同时检测所有入选者的血浆NT-proBNP水平。结果发现：心脏病引起的呼吸困难患者的NT-proBNP水平明显高于肺脏疾病引起的呼吸困难者。
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user: 4. NT-proBNP联合sST2与HFpEF的关系 NT-proBNP和sST2作为新型心力衰竭标志物，都与心血管系统压力负荷、炎症及心室肌纤维化的程度相关。闫福堂等 [ 30 ] 纳入了216例心衰患者，按照纽约心功能分级标准分为心功能I级(62例)、II级(58例)、III级(54例)和IV级组(42例)，同时将心功能正常的80例作为健康对照组，检测血清中的sST2和血浆中的NT-proBNP水平。结果发现病例组的sST2和NT-proBNP水平显著高于健康对照组，差异具有统计学意义(P < 0.05)，且随着心功能分级升高，二者的水平也逐渐升高。sST2和NT-proBNP可以作为心力衰竭诊断的新型生物标志物，二者联合检测优于单独检测，有助于提高对心力衰竭的诊断价值。崔圆等 [ 31 ] 选择了70例慢性心衰患者作为病例组，将同期诊断为单纯性高血压和心律失常的30例患者作为对照组，检测所有纳入者的GDF-15、sST2和BNP，得出三者的水平与心功能分级密切相关，且均可反映病情严重程度；通过ROC曲线分析得出：在判断慢性心衰患者心功能分级时，BNP有较高的特异度和灵敏度。
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user: 5. 小结及展望 综上所述，sST2和NT-proBNP在心衰的早期诊断、鉴别诊断、严重程度的分级和治疗方面有重要的临床价值，同时血清sST2可作为心衰患者预后的生物标志物。但是，sST2在判断心力衰竭病情严重程度时的截值尚无确切定论，因此，有待于多中心大样本研究，进一步明确其与心衰严重程度分级的关系，以指导心衰的早期诊断及精准治疗。最后，临床研究显示：sST2和NT-proBNP的浓度还与高血压、肺动脉高压、急性创伤等疾病相关。因此，如何将二者与其他实验室指标相结合用于心衰相关性疾病的鉴别、诊断及预后将成为研究热点。
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user: 摘要 NET-1基因是新发现的肿瘤相关基因，与肝细胞癌的发生发展密切相关，研究发现NET-1通过PI3K/AKT等各种信号通路和相关分子共同促进HCC的发生发展，可作为肝细胞癌早期诊断的生物标志物和治疗靶点。本文综述近几年NET1基因在肝癌中的研究进展，揭示其潜在分子机制，具有重要临床意义。
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user: 1. 引言 肝细胞癌(HCC)是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，它的特点是肿瘤生长迅速，早期无明显临床症状，发现时常为疾病中晚期，错过最佳手术时机。寻找新的生物标志物，研究其可能分子机制，尤其是肝癌侵袭转移机制，力求寻找新的药物靶点对肝细胞癌的治疗至关重要。NET-1在许多肿瘤组织中均有表达，被认为在肿瘤的诊断和治疗中具有潜在的价值。近年来NET-1基因在肝细胞癌的研究越来越多，也被看作是肝细胞癌基因治疗的潜在靶点，本文将近几年NET-1基因在肝癌中的研究进展作一综述。
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user: 2. NET-1基因及蛋白 神经上皮细胞转化基因1 (Neuroepithelial cell transforming gene 1， NET-1)是Ras同源基因家族的一员，于2000年被Serru等人发现 [ 1 ]，也是新发现的一种肿瘤相关基因，定位于染色体1p34.1上，其mRNA全长为1297 bp，编码序列为128~853 bp，有241个氨基酸的开放阅读框。它的蛋白质产物，最初是从神经上皮瘤细胞中分离出来的，它属于NET-X超家族，是一种四次跨膜蛋白，该家族目前包括NET-2、NET-3、NET-4、NET-5、NET-6和NET-7，其特征在于存在4个跨膜结构域，2个具有保守氨基酸残基的细胞外区域，这些都与肿瘤细胞的迁移分化、粘附增殖及信号通道相关 [ 2 ]。研究发现，NET-1的异常表达与多种癌症的淋巴结转移和远处转移密切相关，包括肺癌、结直肠癌、胃癌和乳腺癌等 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ]。
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user: 3. NET-1与肝癌的发生、发展 3.1. NET-1基因促进HCC的形成 NET-1是一种特异性激活RhoA蛋白的鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)，可增强癌细胞的迁移和侵袭 [ 6 ]。陈莉等 [ 7 ] 研究发现NET-1基因在肝癌和癌旁组织cDNA中扩增表达。相反在正常肝组织和胎儿肝组织中cDNA中未见到NET-1基因mRNA扩增表达。Shen等 [ 8 ] 报道了NET-1mRNA在正常肝组织中的低水平表达，在HCC组织中高表达(P < 0.05)。NET-1常在肝癌细胞的胞膜及胞质中表达，在HCC组织中NET-1的表达显著高于癌旁及正常肝脏组织，提示肝癌细胞功能的表现可能与癌细胞群体表面蛋白NET-1积聚有关，进一步说明NET-1基因能促进癌的形成，提示该蛋白可作为肝癌早期诊断的生物标志物。 3.2. NET-1基因促进HCC的发展 NET-1蛋白作为四跨膜蛋白家族的一员，与各成员之间或与整合素、生长因子受体等细胞表面蛋白相互结合形成四跨膜蛋白网络，通过直接或间接作用于信号通道从而影响肝癌细胞的粘附、增殖、分化、转移及侵袭 [ 9 ]。 Net-1A是RhoA子家族GEF，RhoA鸟嘌呤核苷酸交换因子(RhoGEF)Net-1A的Jnk依赖性磷酸化促进其胞浆积累，从而驱动RhoA活化和肌动蛋白细胞骨架重组。Jnk刺激激活的Net1A胞浆定位足以刺激非侵袭性乳腺癌细胞的细胞运动和细胞外基质的侵袭，揭示Net-1A的表达有助于癌症的转移 [ 10 ]。此外，Ahmad等 [ 11 ] 发现，NET-1是肿瘤抑制因子MicroRNA-22的靶点，MiR-22的过度表达可能通过下调NET-1来抑制肌动蛋白纤维的形成。即正常细胞向癌细胞的转化可能部分通过NET-1介导。Sun等 [ 12 ] 通过培养肝癌细胞株MHCC97-H，检测凋亡相关蛋白Bax、cyclinD1、凋亡调节因子Bcl-2和Caspase-3的表达水平。在NET-1基因敲除后，Bax和CyclinD1表达降低，Bcl-2和caspase-3表达增加，PI3K/AKT信号通路受到抑制，研究结果表明，抑制NET-1可以通过PI3K/AKT信号通路来抑制HCC的细胞增殖，促进细胞凋亡。同时NET-1还可以激活JNK、NF-λB和WNT等信号通路 [ 13 ]。Wei Zong等 [ 13 ] 发现MiR-22是NET1的靶基因，CTC-497E21.4与MiR-22竞争调节NET-1的表达，且CTC-497E21.4/MiR-22-3p/NET-1形成RhoA信号通路的一部分，促进了癌症的进展。一项研究显示，肝癌组织中NET-1的表达水平与肿瘤的转移阶段有关 [ 14 ]，且NET-1的表达水平与HCC的病理分级有很强的相关性 [ 2 ]。
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user: 4. NET-1与其他分子共同作用于肝癌 NET1-1基因作为四跨膜蛋白超家族的一员，其不可能独自发挥作用，可与其他表面分子相结合形成四跨膜蛋白网络，共同调控肝癌细胞的粘附，分化，迁移和浸润等过程从而影响肝癌细胞的发生发展 [ 9 ]。目前已发现的分子有：Ki-67，MIB-1，PCNA等。 4.1. NET-1基因与Ki-67 Ki-67是一种核抗原，主要用于判断细胞的增殖活性，表达在所有活动的细胞周期(G1、S、G2和有丝分裂期)中，但在G0期不表达，是判断肿瘤细胞增殖活性应用较广的指标。NET-1表达越强，肿瘤细胞分化越低，越易发生转移，临床分期越高，即恶性程度越高。经过大量的实验研究证明，HCC中Ki-67阳性表达为66.3%~76.3% [ 15 ]，NET-1与Ki-67蛋白在肝细胞癌组织中的表达与肝细胞癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关，NET-1与Ki-67高表达提示患者预后不良，可以作为肝细胞癌临床预测转移和判断预后的分子标记物 [ 16 ]。 4.2. NET-1基因与MIB-1 MIB-1是一种Ig G1类单克隆抗体，可以与Ki67抗原结合，检测Ki67的表达情况常用MIB-1阳性细胞为指标 [ 17 ]。同时MIB-1标记指数被认为是衡量肿瘤细胞增殖水平和预测肿瘤复发的一项可靠指标，研究发现，肿瘤细胞增殖速度越快，MIB-1标记指数值越高 [ 18 ]。有研究显示，分裂增殖旺盛的细胞大小形态不一，核大、胞浆少，各细胞胞浆内均有NET-1阳性反应，荧光分布似有极性呈凝块或斑点状偏在一侧，相似于细胞高尔基体处。MIB-1阳性信号见于细胞核内，呈颗粒状 [ 19 ]。肝细胞癌的细胞中常同时表达NET-1和MIB-1，两者的荧光标记在同一细胞内存在良好的共定位，当核中MIB-1颗粒增多时，其胞浆内NET-1的表达荧光强度增强。NET-1表达在细胞学类型、肿瘤分级、肿瘤转移、临床分期及肝炎肝硬化背景中差异有统计学意义。肝细胞性肝癌、伴有肝炎肝硬化的肝癌中NET-1表达很高，且肿瘤中NET-1表达越强，肿瘤分化程度越低，其临床分期也越晚，也更易发生转移 [ 19 ]。其结果与科学家在宫颈癌中研究的结果类似。肝癌组织中MIB-1表达强度在不同肿瘤分级、不同临床分期及转移与否差异均具有统计学意义。肿瘤分化越低，MIB-1表达越高，临床分期3-4期中MIB-1表达高于1-2期，更易转移。因此，NET-1基因与MIB-1表达在肝癌组织中呈显著正相关，与肝癌细胞增殖有关，在HCC发展中上调肿瘤细胞增殖活性，促进肝癌的发展。 4.3. NET-1基因与PCNA PCNA是存在于细胞核中能影响细胞增殖的一种蛋白质，它可作为细胞增殖的一个指标，已证实可在多种实体癌、炎性增殖乃至正常增殖组织的细胞核中表达，并被认为PCNA阳性率与肿瘤的分级、分期、疗效和预后有一定关系 [ 20 ]。 近年来研究结果显示，肝细胞癌增殖活性的改变在肝癌形成过程中的作用尤为重要，有科学家对肝癌发生不同时期肝组织病变中肝细胞增殖和凋亡进行了研究，认为在肝癌形成的各个阶段，凋亡和增殖均有不同程度的增加，但其增加程度不同，细胞的增殖速度高于凋亡速度，细胞数量净增加，增殖和凋亡的平衡打破最终导致肝癌的发生。PCNA作为一种肿瘤的标记物，可反映肿瘤细胞的代谢以及DNA和RNA的合成状态，其阳性表达与肿瘤细胞的分化和肿瘤组织类型与关，肝癌组织分化越差，PCNA标记指数越高。经过研究表明，NET-1和PCNA在肝癌组织中的表达水平呈正相关 [ 21 ]，表明PCNA和NET-1可能与肝细胞癌的增殖密切相关。
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user: 5. NET-1作为治疗性靶基因的相关研究 肝癌的治疗方法会因为疾病的程度不同而不同，包括小的局部肿瘤的外科手术切除，还有肝移植，非外科侵入性治疗，如射频消融术(RFA)和经动脉化疗栓塞(TACE)，以及更先进的新生物疗法。随着生物技术的发展，基因治疗已成为治疗癌症的新策略。与传统的手术治疗方法相比，基因治疗可准确有效的杀死肿瘤细胞，副作用少 [ 22 ]。靶向治疗通过沉默与肿瘤细胞增殖或转移相关的基因，作为基因治疗的一种方法，在肝癌治疗中显示出巨大的潜力。高选择性、序列特异性和高效性使靶向治疗技术适用于治疗肝癌，副作用小 [ 23 ]。而靶向治疗的关键是要找到肝癌的特异性基因。NET-1基因可能通过与位于分泌细胞器膜上的其他跨膜和细胞溶质蛋白相互作用来调节癌细胞的增殖，并在细胞质中发挥作用。Ye等 [ 24 ] 发现，敲低NET-1基因可使HCC癌细胞的迁移，侵袭和转移分别减少44%，65%和77%。Zhang等 [ 25 ] 研究发现NET-1 siRNA可能通过下调VEGF而诱导体内宫颈鳞癌血管生成和肿瘤生长。VEGF途径可能代表了大多数癌症的抗血管生成治疗。抑制NET-1表达导致SiHa细胞VEGF表达下调。越来越多的研究表明，以NET-1基因为靶点的SiRNA技术可以有效抑制NET-1基因在肝癌中的表达和功能，NET-1可能是肝癌的治疗靶点，有希望通过NET-1基因靶向治疗肝细胞癌。
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user: 6. 小结与展望 NET-1在许多肿瘤组织中均有表达，被认为在肿瘤的诊断和治疗中具有潜在的价值。近年来，越来越多的研究发现NET-1通过PI3K/AKT等各种信号通路促进HCC的发生发展，同时，NET-1通过与MIB-1，PCNA，Ki-67，MicroRNA-630等多种分子共同作用于HCC，NET-1可能是肝癌的治疗靶点。目前，由于HCC基因治疗的研究有限看，尚需更多NET-1的基础及临床试验探索，力求早期应用于HCC的治疗上。
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user: 摘要 血栓栓塞性疾病是当前发病率及病死率较高的心血管系统疾病之一。准确检测血栓的存在是临床工作中的重点问题。传统的血清学、影像学方法结合当前最新的分子技术已经被广泛运用到临床和科研的血栓检测工作中。本文将以血栓形成途径的为基础，对现有的血清学、影像学等检测手段的优缺点以及区别动静脉血栓的方法进行描述，讨论检测动静脉血栓的新方法和分子影像学探针的最新研究进展。
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user: 1. 引言 不同类型的血栓在起源、形成过程及成分方面有着很大的差别，按照血栓的来源可以将血栓分为动脉血栓和静脉血栓 [ 1 ]。栓体可导致血管闭塞，血栓脱落进入血循环造成栓塞，导致严重的危及生命的事件，如动脉血栓引起心肌梗塞、中风，静脉血栓造成肺栓塞、脑梗死等。动静脉血栓的治疗方法不同 [ 2 ]，利用各类型血栓的组成特点和影像学特征差异进行诊断，可以帮助提高血栓诊断、治疗和检测的效率。并有希望利用这些差异早期筛检或预防血栓性疾病。