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user: 3. 结果与讨论 3.1. SCT-PLGA MS的制备和表征 3.1.1. SCT-PLGA MS的制备 SCT的水溶液作为内水相在二氯甲烷溶剂中分散，超声形成W/O型初乳，在外水相PVA水溶液中分散后，机械搅拌，室温下有机溶剂二氯甲烷挥发，形成W/O/W型复乳，离心洗涤后冻干得到SCT-PLGA-20 COOH MS、SCT-PLGA-40 COOH MS、SCT-PLGA-60 COOH MS、SCT-PLGA-20 CH3 MS、SCT-PLGA-40 CH3 MS和SCT-PLGA-60 CH3 MS。 3.1.2. SCT载药量和包封率 SCT标准曲线为A = 0.0118 C + 0.0834，r = 0.997。可见0.5~40 μg/mL浓度范围内吸光值(A)与SCT浓度(C， μg/mL)线性关系良好。 各组微球的载药量和包封率见表1，相同分子量的微球中，-COOH末端微球的包封率高于-CH 3 末端微球，这是由于SCT的pI值为10.2，水环境下SCT结构中-NH 2 质子化形成 ，PLGA的-COOH末端释放质子，以-COO − 离子形式存在，可与 以离子键连接，增加稳定性，提高包封率，而-CH 3 末端微球与SCT无离子键连接，故包封率较低；PLGA分子量对微球包封率无显著影响。各组微球载药量约0.5%~0.6%。 3.1.3. 粒径 载药微球的粒径和分布见表2。微球粒径主要分布于71~226 μm，平均粒径约120 μm。文献研究表明，PLGA的黏度随分子量的增大而增加，高分子量PLGA乳化时易形成较大微滴，导致微球粒径较大 [ 4 ] ，但本实验中微球的分子量和末端基团对其粒径无显著影响，可能是由合成工艺的差异引起。 3.1.4. SEM 图1为SCT-PLGA MS的SEM照片，可见PLGA微球平均粒径大于100 μm，形态圆整，无明显黏连，外表面的孔洞结构是由制备过程中二氯甲烷的挥发所致。PLGA的分子量和末端基团不影响微球形态。 3.1.5. DSC 图2为SCT、blank-PLGA-20 COOH MS、SCT-PLGA-20 COOH MS以及PLGA原料20kDa-COOH和SCT物理混合物的DSC图谱，可见blank-PLGA-20 COOH MS和SCT-PLGA-20 COOH MS均出现尖锐的热焓松弛吸热峰，玻璃转化温度(Tg)分别为38.82℃和36.64℃，表明SCT与PLGA间的相互作用对聚合物的Tg值有较小影响；SCT图谱中110.58℃处出现宽吸热峰，PLGA和SCT物理混合物图谱中98.13℃处出现SCT的吸热峰，而SCT-PLGA-20 COOH MS中未见该吸热峰，表明SCT不是吸附于微球表面，而是包载于微球中，并以无定形态存在 [ 5 ] [ 6 ] 。 3.2. SCT-PLGA MS的体外释放 图3(A)为不同分子量和不同末端基团的SCT-PLGA MS在PBS (pH 7.4，含0.06% (w/v) NaN 3 )中的药物释放曲线。SCT-PLGA-20 COOH MS、SCT-PLGA-20 CH 3 MS、SCT-PLGA-40 COOH MS、SCT-PLGA-40 CH 3 MS、SCT-PLGA-60 COOH MS和SCT-PLGA-60 CH 3 MS的24 h 累积释放百分比分别为54.7%、16.0%、39.0%、31.9%、28.4%和19.3%，可见各组微球释药初期存在突释。分子量相同的PLGA微球，-COOH Table 1 Encapsulation efficiency and loading capacity of SCT for SCT-PLGA MS. Indicated values were mean ± SD (n = 3 Sample EE (%) LC (%) SCT-PLGA-20 COOH MS 76.52 ± 0.56 0.59 ± 0.03 SCT-PLGA-20 CH3 MS 65.74 ± 3.03 0.55 ± 0.03 SCT-PLGA-40 COOH MS 74.99 ± 3.87 0.56 ± 0.03 SCT-PLGA-40 CH3 MS 65.08 ± 3.40 0.52 ± 0.03 SCT-PLGA-60 COOH MS 68.84 ± 1.34 0.55 ± 0.01 SCT-PLGA-60 CH3 MS 61.88 ± 2.79 0.54 ± 0.01 表1. SCT-PLGA MS中SCT的包封率和载药量(n = 3) Table 2 Size distribution of SCT-PLGA MS (n = 3 Sample D 10 a (μm) D 50 b (μm) D 90 c (μm) Average Size(μm) SCT-PLGA-20 COOH MS 76.4 117.1 195.3 127.7 ± 44.7 SCT-PLGA-20 CH 3 MS 76.1 117.2 182.4 123.1 ± 41.7 SCT-PLGA-40 COOH MS 86.3 120.4 173.2 126.4 ± 35.9 SCT-PLGA-40 CH 3 MS 81.3 118.3 173.1 124.6 ± 38.4 SCT-PLGA-60 COOH MS 82.3 123.2 187.2 130.8 ± 43.8 SCT-PLGA-60 CH 3 MS 71.1 124.0 226.1 136.8 ± 59.4 表2. SCT-PLGA MS的粒径分布(n = 3) a 10%的粒子其粒径小于该值； b 50%的粒子其粒径小于该值； c 90%的粒子其粒径小于该值；注：结果以mean ± SD表示，n = 3。 图1. SCT-PLGA-20 COOH MS (a)，SCT-PLGA-40 COOH MS (b)，SCT-PLGA-60 COOH MS (c)，SCT- PLGA-20 CH 3 MS (d)，SCT-PLGA-40 CH 3 MS (e)和SCT-PLGA-60 CH 3 MS (f)的扫描电镜照片 末端微球突释量高于-CH 3 末端微球。这是由于突释药物主要来自微球表面SCT的解吸附和孔壁上SCT的溶解，-COOH末端微球的蛋白吸附率高于-CH 3 末端微球，故突释量较大。-COOH末端微球中，释放 图2. blank-PLGA-20 COOH S (a)，SCT-PLGA-20 COOH MS (b)，SCT (c)，及PLGA和SCT的混合物(d)的DSC图谱 图3. (A) PBS缓冲液(pH 7.4，含0.06% (w/v) NaN 3 )，37℃条件下，不同SCT-PLGA MS中SCT的体外释放曲线(n = 3)；(B) 不同时间各种SCT-PLGA MS溶液的pH值(n = 3) 速率随分子量的增大而减小，这是由于以下两个原因：低分子量PLGA黏度低，分子间作用力较弱，药物可较快从聚合物基质中扩散 [ 7 ] ；低分子量PLGA固化较快，形成较多孔隙，高孔隙度使药物扩散速率增大。-CH 3 末端微球中，SCT-PLGA-20 CH 3 MS和SCT-PLGA-60 CH 3 MS释放较少，一方面由于吸附蛋白较少，另一方面可能是粒径分布较宽，大粒径微球较多，药物通过微球扩散的途径较长，导致累积释放百分率较低 [ 8 ] 。释放7 d后SCT主要从孔隙中扩散，释放速率降低；20 d后释放速率增加，这是由于PLGA逐步降解，形成孔隙，且降解生成的单体易溶于介质中，导致微球的快速溶蚀，SCT释放增多 [ 9 ] 。40 d时，SCT-PLGA-20 COOH MS、SCT-PLGA-20 CH 3 MS、SCT-PLGA-40 COOH MS、SCT-PLGA-40 CH 3 MS、SCT-PLGA-60 COOH MS和SCT-PLGA-60 CH 3 MS的累积释放百分比分别为85.4%、44.3%、79.6%、63.0%、70.1%和59.0%，表明本研究制备的SCT-PLGA MS具有良好的缓释效果，其中-COOH末端微球较-CH 3 末端微球释放更完全，SCT-PLGA-20 COOH MS 释放较理想。 3.3. SCT-PLGA MS的体外降解 PLGA微球的体外降解对SCT的体外释放有重要影响，体外降解越快释药速率越大，释药越多。PLGA降解产物为酸性较强的LA和GA。图3(B)为随降解时间延长不同分子量和不同末端基团的SCT-PLGA MS溶液pH的变化曲线。第3周时，SCT-PLGA-20 COOH MS、SCT-PLGA-20 CH 3 MS、SCT-PLGA-40 COOH MS、SCT-PLGA-40 CH 3 MS、SCT-PLGA-60 COOH MS和SCT-PLGA-60 CH 3 MS 溶液的pH值分别降至5.14、7.08、5.87、6.59、6.42和6.48，表明SCT-PLGA-20 COOH MS的降解速率最快。降解初期，聚合物发生水合作用，水性介质首先渗透到PLGA内部，使聚合物结构松散 [ 10 ] [ 11 ] 。-COOH末端微球亲水性强，摄取水分多，故PLGA骨架降解较快，而-CH 3 末端微球亲水性弱，摄取水分少，PLGA骨架降解缓慢 [ 12 ] 。3周后，各组微球pH下降速率增大，这是由于聚合物开始水解，PLGA分子量逐渐减小，机械强度下降。随后PLGA的链状结构被破坏，更多的介质渗透进入微球，PLGA降解为水溶性单体，暴露更多羧基，导致pH值下降。如内部的降解产物未及时扩散到外部环境中，会引起微球内部pH局部降低，引发“自催化效应” [ 13 ] 。第7周时，各组pH值分别为3.22、3.33、3.04、3.26、3.43和3.57，较接近，表明PLGA MS已接近完全降解。