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user: 3. 结果 3.1. 细鳞鲑胚胎发育过程 在水温4.4℃~12.5℃范围内，细鳞鲑卵自受精到孵化出膜历时663 h。参照鱼类胚胎发育的相关文献 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] ，将细鳞鲑胚胎发育分为6个阶段，26个发育时期(图1)。细鳞鲑胚胎6个发育阶段分别为受精卵阶段、卵裂阶段、囊胚阶段、原肠阶段、神经胚阶段、器官形成阶段(表1)，其中受精卵耗时3 h，卵裂历时38 h，囊胚94 h，原肠期66 h，神经胚17 h，器官形成至破膜经历445 h。 图1. 细鳞鲑胚胎发育时序 Table 1 Embryonic Development of Brachymystax leno 发育时期 Development stage 起始时间 Star Time 持续时间/h Duration of each stage 水温/℃ Tater temperation 积温/℃.d Accumulated temperature 图序 Plate 受精卵 Fertilized egg 0 3 h 6.0 I-1 1细胞期 1-cell stage 3 h 5 h 6.10 0.75 I-2 2细胞期 2-cell stage 8 h 4 h 5.94 2.02 I-3 4细胞期 4-cell stage 12 h 4 h 6.00 3.01 I-4 8细胞期 8-cell stage 16 h 4.5 h 5.90 4.01 I-5 16细胞期 16-cell stage 20.5 h 20.5 h 6.00 5.12 I-6 囊胚早期 Early blastula stage 41 h 30 h 5.40 10.25 I-7 囊胚中期 Mid-blastula stage 71 h 39 h 6.12 17.00 I-8 囊胚晚期 Late-blastula stage 110 h 25 h 6.32 26.95 I-9 原肠早期 Early gastrula stage 135 h 23 h 6.43 33.53 I-10 原肠中期 Mid-gastrula stage 158 h 32 h 6.32 39.69 I-11 原肠晚期 Late gastrula stage 190 h 11 h 7.44 48.12 I-12 神经胚期 Neural plate stage 201 h 17 h 6.91 51.53 I-13 眼基出现期 Eye anlage stage 218 h 23 h 7.88 56.42 I-14 胚孔封闭期 Blastopore closed stage 241 h 26 h 7.36 63.97 I-15 脑部分化期 Brain differentiation stage 267 h 47 h 8.29 71.94 I-16 胸鳍原基期 Pectoral fin anlage stage 314 h 23 h 7.21 88.17 I-17 尾芽形成期 Caudal bud appearance 337 h 30 h 6.83 95.08 I-18 心跳期 Heart beating 367 h 43 h 8.29 103.57 I-19 眼晶体出现期 Eye lens formationg 410 h 34 h 7.78 118.42 I-20 尾鳍出现期 Caudal fin appearance stage 444 h 61 h 7.92 129.43 I-21 眼色素出现期 Eye pigment stage 505 h 158 h 8.62 149.58 I-22 出膜期 Hatching 663 h 206.33 I-23 表1. 细鳞鲑胚胎发育进程表 3.1.1. 受精卵 细鳞鲑的卵呈圆球形，黄色，光泽明亮。比重比水大，无粘性。端黄卵，卵内含有丰富的卵黄，卵黄囊内颗粒状油脂。未吸水前卵直径4.06~4.43 mm，吸水后形成卵间隙，卵径为4.30~5.50 mm (图1(1))，卵膜较厚。精子进入卵子后，卵子受精子的作用而激活，原生质逐渐向动物极移动和集中。受精约3h后，在动物极形成一个隆起的胚盘，即1细胞期(图1(2))。从此细胞进入卵裂期。 3.1.2. 卵裂期 1) 二细胞期 受精8 h后，在胚盘的正上方出现一纵向的分裂沟，分裂沟不断加深将胚盘分割成两个大小相等的分裂球，即2细胞期(图1(3))。 2) 四细胞期 受精12 h后，发生第二次分裂，与第一次分裂相垂直，形成4个等大的细胞，进入4细胞期(图1(4))。 3) 八细胞期 受精17 h后，进行第三次卵裂，与第一次的分裂面平行，形成大小相似的8个分裂球(图1(5))，胚盘呈长方形。 4) 十六细胞期 受精20.5 h后，第四次卵裂与第二次分裂面平行，形成大小相似的16细胞(图1(6))。 5) 桑椹期 经过32、64细胞，继续进行分裂，细胞越来越小层次逐渐增多，排列规律亦不明显。受精35 h后，分裂的多层细胞高高的举在卵黄上方，形似桑椹，即桑椹胚，此时细胞界限清楚。 3.1.3. 囊胚期 1) 囊胚早期 受精41 h后，胚胎细胞不断地分裂，分裂球越来越小，细胞界限不清楚，有很多分裂球堆积在卵黄囊上方，此时隆起最高，中间为囊胚腔，胚盘边缘与卵黄囊交界清晰，此时期为囊胚早期(图1(7))。 2) 囊胚中期 此后囊胚细胞继续不断分裂，分裂球变小，细胞间的界限逐渐模糊不清。受精71 h后，胚胎边缘细胞不断增多，胚盘面积不断扩大，并开始下包，囊胚顶变得稍扁平，进入囊胚中期(图1(8))。 3) 囊胚晚期 受精101 h后，胚胎细胞继续下包，胚盘高度下降变为扁平紧贴在卵黄囊上方，外形上似受精卵刚形成胚盘，进入囊胚晚期(图1(9))。 3.1.4. 原肠期 1) 原肠早期 受精135 h后，囊胚细胞向植物极扩展，边缘细胞向胚盘边缘流动，外包并内卷形成一圈环状隆起即胚环，胚胎中轴部分出现一增厚的胚盾，胚胎细胞下包到卵黄的1/2，进入原肠早期(图1(10))。 2) 原肠中期 受精158 h后，胚盘细胞下包至卵黄囊2/3处，进入原肠中期(图1(11))，胚盾明显增长。 3) 原肠晚期 受精190 h后，胚盘细胞下包至卵黄的3/4处，胚盾继续延伸，胚体雏形开始形成，并于前端形成略微膨大的脑泡原基，之后植物极由胚层细胞包裹形成圆孔，即胚孔，进入原肠晚期(图1(12))。 3.1.5. 神经胚期 发育至201 h，胚盾中线形成神经索(图1(13))，脑部逐渐膨大，胚盘下包至卵黄囊底部，下包4/5，植物极部分露出胚环以外，形成卵黄栓，胚孔继续收缩，逐渐合拢，241 h左右，胚孔完全封闭，此时，脑泡原基清晰可见，胚体已初步形成。 3.1.6. 器官形成期 1) 眼基出现期 受精218 h后，在前脑两侧，形成一对肾形突起，即眼的原基(图1(14))。 2) 胚孔封闭期 胚体经过241 h发育，胚孔逐渐关闭(图1(15))，此时脊索呈柱状。镜检可见4~6对肌节对称分布于胚体两侧，之后肌节数量逐渐增多。 3) 脑分化期 受精267 h后，脑分化出前、中、后脑(图1(16))。眼囊发育明显，呈长椭圆形，在脑泡两侧。 4) 胸鳍原基期 受精314 h后，在胚体脑部后下方出现两个左右对称的长卵圆形的盾状原点，即为胸鳍原基(图1(17))。此时鱼体头部膨大明显，分为前、中、后三部分，椭圆形眼囊大而明显，尾部为尾泡。 5) 尾牙形成期 受精337 h后，胚体末端出现锥状尾牙，尾牙与卵黄球分离，尾部延长弯曲贴于卵黄囊的上面(图1(18))。眼囊轮廓清晰，且眼囊逐渐变圆。首次出现胎动，间隔一段时间身体扭动几下。 6) 心跳期 受精367 h后，头部眼囊与听囊之间的后下方出现近圆形心脏，开始出现轻微搏动(图1(19))，随着胚胎发育时间延长搏动频率加快、跳动有力，此时胸鳍雏形出现在胚体两侧，尾部活力增强。 7) 晶体出现期 受精410 h后，眼囊中间出现圆形的晶囊。眼囊随着胚胎发育不断扩大并向外伸展，在眼囊与脑相连处形成较细的眼柄，眼囊继续向外突出抵达与其相连的外胚层，通过外胚层的诱导作用，使眼囊内陷而形成双层壁的眼杯，此后，通过诱导作用，逐渐形成眼的水晶体(图1(20))。胸鳍明显。 8) 尾鳍出现期 胚胎经过444 h发育，尾的边缘表皮外突形成皮褶状的鳍(图1(21))。眼杯扩大，再经过154 h背鳍、臀鳍雏形初现，到615 h时尾鳍鳍条清晰可见。心跳速率增大到60次/min左右。 9) 眼色素出现期 受精505 h后，显微观察可见眼囊中有清晰的黑色素分布，之后眼囊颜色逐渐加深，直至出现两个黑色眼点(图1(22))，密集血管分布于卵黄上。这一时期胚体摆动能力增强，卵膜逐渐变薄，为幼体破膜做准备。 10) 出膜期 胚体在卵膜内不停摆动，肌肉抽动更加频繁有力，经历663 h后，胚体破膜而出(图1(23))，大多数头部首先破膜。新破膜仔鱼平均全长1.25 cm左右，平均体重约0.0429 g。身体呈棕褐色，眼黑色，卵黄囊由圆形变椭圆形，其长径0.55 cm左右。心脏搏动有力，心率为120次/分，全身躯干部可见红色血液流动。肛门突出，消化道为直管形状，内有皱褶环，末端呈45度弯曲，在消化道末端可见一圆形的膀胱。肌节清楚，口已开启。胸鳍已展开，尾鳍雏形出现。从背部到尾部为一连贯的透明鳍膜。孵出后仔鱼侧卧水底，遇到惊吓靠尾部摆动而垂直上浮。 3.2. 积温 在水温4.4℃~12.5℃范围内，从受精卵至孵化出膜需要的积温约206.33℃∙d左右，卵裂期需要积温10.25℃∙d，占总积温的4.96%；囊胚期需要积温23.28℃∙d，占总积温的11.28%；原肠期需要积温18.00℃∙d，占总积温的8.72%；神经胚期4.89℃∙d，占总积温的2.37%；器官形成期需要积温最多，为149.91℃∙d，占总积温的72.66%。