DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 4. 讨论 外科手术是治疗早期肺癌的最主要方法，而术后剧烈疼痛的出现则影响患者的恢复进度并降低治疗满意度 [ 12 ]。本回顾性队列研究显示，20.52%的患者在术后48小时内遭受中重度疼痛。我们确定，年龄和手术时间是术后急性中重度疼痛发生的独立危险因素。胸腔镜肺叶切除术后的急性疼痛并不少见，手术切口的固有位置、伴有呼吸运动的胸廓扩张、手术损伤引起的炎症因子释放、胸腔持续引流还有一些个体相关因素 [ 9 ] [ 13 ]。在这项对502名接受微创肺叶切除术患者的回顾性研究中，术后48小时中重度疼痛的发生率为20.52%。这一发现与孙凯等人的结果不同 [ 9 ]，他们报告了更低的疼痛发生率(15.7%)。这主要是由于手术类型、术后镇痛方式和患者自身特点不同有关。 年轻通常被认为是许多手术后出现剧烈疼痛的先兆因素 [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ]。这与我们的研究得出的结论是一致的，Kwon ST等人的研究也得出了相同的结论 [ 10 ]；原因可能为1. 随着年龄的增大，老年患者中枢神经发生退行性变，其与年轻患者相比神经细胞和中枢神经递质数量减少且活力减低，神经传导速度下降，植物神经反应减慢，身体的肌力、感觉也出现不同程度的下降，对疼痛的敏感性降低；并且可能与年长患者长期受各种慢性疾病的困扰，活动量下降，痛阈较高有关 [ 19 ] [ 20 ]；2. 药代动力学的差异：老年患者对阿片类镇痛药的敏感性更高，药物代谢动力学的某些阶段，如分布、代谢和消除，在衰老过程中受到影响 [ 21 ] [ 22 ]；3. 心理社会机制敏感性及主观表达的差异：年轻患者更容易出现焦虑心理， 而不良的心理状态可降低患者疼痛的阈值；也可能与老年人群的炎症反应相对较轻、对疼痛忍耐度高， 而疼痛控制期望值低有关 [ 23 ] [ 24 ]；4. 病情差异：可能与年轻患者常存在肿瘤分化不良而手术范围大， 组织损伤比较严重有关。 我们的研究发现手术时间也是影响肺叶切除术后急性中重度疼痛的危险因素，手术时间长通常是源于病情复杂，组织损伤比较严重，其术后越容易发生严重的急性和慢性疼痛；并且越重的手术创伤及组织损伤其修复过程中细胞炎性因子的释放越多，TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8为参与炎症反应重要步骤的促炎性细胞因子，能诱导周围和中枢神经系统反应性增高，导致痛觉增敏，从而诱发术后严重疼痛的发生 [ 25 ]。先前的研究也曾发现手术时间较长与VATS术后中重度急性疼痛相关，但这种相关性仅存在于单因素分析中 [ 11 ]。尽管在各种手术研究中，女性和高BMI被证明与术后严重疼痛有关 [ 8 ] [ 9 ] [ 15 ]，但在我们的队列中没有发现这一点。 我们的研究表明，即使采取自控镇痛，仍然有20%左右的患者术后遭受着中到重度的疼痛，围术期镇痛效果的改善不仅是出于人道主义，也是减少术后并发症，降低死亡率及住院费用的基础。术后镇痛一直是一项重大的医疗挑战，最合理的应用是识别高危患者，并对这些患者采取更积极的术后预防和治疗方法。 研究存在以下不足：(1) 该研究为临床回顾性研究，存在相关偏倚(2) 该研究为单中心研究，未能涵盖其它同等级医院手术患者；(3) 我们仅探究了术后48小时的疼痛，因为他们都有胸腔引流管，且病人静脉自控镇痛泵通常在术后48小时后停用。我们认为术后48小时的疼痛评估对临床结果很重要。如果术后疼痛严重，有效咳嗽、深呼吸和运动受到抑制，则导致术后恢复延迟。
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user: 5. 结论 综上所述，年龄和手术时间是术后48小时出现中重度疼痛的独立危险因素，早期识别患者术后疼痛风险的预测因素将允许我们对术后急性疼痛进行更有效的干预和更好的管理，从而减少术后慢性疼痛的发生，提高患者的生活质量。
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user: 摘要 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease， AD)是一种进行性，不可逆转，无法治愈的神经退行性疾病，是痴呆最常见的一种。患者主要症状是认知功能持续降低，功能性自立丧失，行为改变，需要人员护理。在我国，由于患者和家属对本病认识的局限，70%的患者确诊时已为重度，错过了最佳干预和治疗时机，到目前为止，还没有一种能够预防或减缓疾病进展的药物。老年痴呆也被称为“无声威胁”，正成为最昂贵的疾病之一，本文对AD的临床研究进展作一综述。
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user: 1. 前言 AD是痴呆中最常见的一种，几乎占所有痴呆病的70%，其患病率随着年龄的增长而增加，在AD患者中，65岁以上人群占10%和85岁以上人群占50% [ 1 ]。随着人口老龄化的到来，到2025年，预计我国AD的人群将达到2千万。在医疗保健类疾病中高发病率，高死亡率，高治疗和护理成本使AD超过心血管疾病甚至比肩癌症，成为全社会关注的社会问题。到目前为止，还没有治疗AD的特效药，对AD患者来说无论是本人还是家里人都是痛苦的，因为几乎没有哪种病像AD病人一样需要家属长期的照顾和情感参与，所以AD成为以神经内科为主的多学科研究的热点。
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user: 2. 病因及发病机理 大多数AD病人都没有明确的病因或致病因素，发病机制尚未完全阐明，脑病变主要见于内侧颞叶，其次为海马及海马旁回，杏仁核，丘脑与后扣带回及梭状回也存在病变 [ 2 ]。 2.1. 遗传基因 在AD的致病因素中，家族患者有明确的遗传因素，他们以常染色体显性突变方式传播疾病，已经检测到多代称为家族性AD。对其研究发现，主要有以下方面：早老素1 (Presenilins1， PS-1)和早老素2 (Presenilins2， PS-2)分别位于14号染色体即14q24.3和14q42.13上。PS-1基因突变选择性的导致纤维原性较强，易聚集的β-淀粉样蛋白(amyloid β-proteion， Aβ) Aβ42产生过多，导致AD的形成 [ 3 ]，PS-2可通过对C末端肽水解酶的作用使淀粉样肽前体蛋白(APP)裂解，促进Aβ生成增多 [ 4 ]。淀粉样肽前体蛋白(APP)，位于21号染色体即21q21.3上，在生理条件下编码APP可裂解为可溶性的β-淀粉样肽前体蛋白(β-APP)，再进一步被γ-分解酶裂解。而当某些原因，导致APP基因突变时β-APP经胞质内溶酶体内的β-，γ-分泌酶作用裂解为Aβ [ 5 ]，Aβ的异常沉积，引起神经元的毒性进而促进形成早老素(PS)，促进AD的发展。Tau蛋白基因位于17号染色体即17q21上，是一种微管蛋白，对微管起促进和稳定作用，主要分布在大脑的额叶，颞叶海马及内嗅区，在AD患者脑中主要为异常过度磷酸化的Tau蛋白，聚集形成神经元纤维缠结(NFT)，使神经元的功能损失加剧，引起痴呆。PS-1基因异常最常见，差不多报告了200多例，而且这些突变在所有家族性AD病例中约占50%。APP基因异常较常见，有超过30个突变的记录描述。PS-2上的突变很罕见(20个家族报道有12例) [ 6 ]。AD百分之百将在这些受基因突变的人群中进展。AD的常染色体显性遗传形式通常较早开始(在他们的50 s~60 s)，与散发病例相比进展迅速。对AD家族内部具有危险基因的人群对其基因改变，以减少患病的风险。在AD患者，磷酸化的Tau蛋白是非AD患者的三倍，Aschenbrenner [ 7 ] 认为tau的存在或积累是认知损害的预测因子，Hanseeuw [ 8 ] 研究发现 AD患者的认知能力下降和神经退行性变主要是由tau的形成和扩散所驱动的。 2.2. 高风险基因 载脂蛋白(APOE) ε4基因决定个体患AD的风险，在大脑中，APOE主要在星形胶质细胞中表达，在小胶质细胞中表达的程度较低 [ 9 ] [ 10 ]。APOEε4基因位于19号染色体即19q13.2上，研究表明APOEε4能够参与Aβ的合成，影响PS形成。临床、病理、流行病学、和全基因组测序研究中都证实了APOEε4是目前唯一确定的引起迟发型AD的易感基因，携带APOEε4基因可增加8~10倍患AD风险 [ 11 ]。根据AD患者基因检测及病理切片分析指出，ApoEε4基因可引起AD患者认知功能降低，并形成神经原纤维缠结。 2.3. 其他易引起AD发病的相关因素 在最新的研究中发现，在AD的致病因素中，免疫炎症反应、疱疹病毒、脑肠轴也与AD的形成有关，Aβ蛋白能激活小胶质细胞，星型胶质细胞，释放炎症介质，引发局部炎症反应，就目前研究发现十多种细胞因子如IL-1、IL-8、TNF-α等参与AD的形成 [ 12 ]；单纯疱疹病毒(HSV-1)和人类疱疹病毒6型(HHV-6)可刺激APP，使APP发生异常化，生成Aβ增多，引起AD [ 13 ]。肠道菌群与中枢神经系统之间通过脑–肠轴相互影响，中枢神经系统通过影响营养有效性的饱足信号肽，影响肠道功能的内分泌物质和神经通路来控制肠道微生物组的组成，肠道菌群也可通过神经、内分泌、代谢和免疫影响中枢神经系统。肠道菌群失衡，导致外周血中的“苯丙氨酸”和“异亮氨酸”的两种代谢物质异常积累，它会诱导外周促炎性细胞(Th1)的分化和增殖，并促进它们侵润入脑。而一旦这种细胞侵润入脑，就会和脑内原有的M1型小胶质细胞共同活化，从而导致与AD相关的神经炎症发生 [ 14 ]。
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user: 3. 临床表现 AD的主要表现是认知功能障碍，精神症状和行为障碍，独立生活功能逐渐丧失。认知功能障碍主要包括短期记忆、视空间和定向障碍，语言障碍，失认及意向性失用。精神和行为症状主要有抑郁，思维和行为改变，人格障碍，及异常饮食睡眠行为。 AD根据认知能力和日常生活能力及身体机能逐渐减退的情况，可将疾病分为轻度(早期)，中度和重度(晚期)阶段。 3.1. 早期阶段 在早期AD患者首发症状是近记忆障碍，都是来自遥远的记忆，早期常见的症状是语言障碍，运用语言能力下降，不能讲完整句子。视空间定向功能障碍同样发生在痴呆最初阶段，而执行功能障碍始于诊断AD阶段 [ 15 ]。这些损伤随着病情的进展而恶化。在AD的早期阶段，患者可以自主地生活，参加工作。周围接触的人会发现患者语言和记忆力相关问题越来越多，走错地方，丢失物品，不能胜任计划或组织活动。在AD的初期，出现一些神经精神症状，如焦虑，冷漠，烦躁和抑郁。在这个阶段神经系统检查大多是正常的。 3.2. 中期阶段 中度的AD患者，长时期生活紊乱并且可以持续多年。患者有情景记忆障碍，但仍然能记得有关他们生活的重要细节 [ 16 ]。患者所有认知功能的方面都受到影响。AD经常需要更多的照顾。一些人可能意识到对某些事件或关于自己个人经历的遗忘。患者想不起自己家的地址或电话号码，往往走错地方和记错日期。看护人在他们进行日常起居时必须帮助他们选择合适的衣服，洗澡或准备饭菜。在这个阶段AD各种神经精神症状和睡眠模式的变化都显示出来。 3.3. 重度(晚期)阶段 在晚期阶段，患者日常活动和个人起居都需要全面照顾。患者的所有技能都在不断恶化，大小便失禁，需要人喂饭，走路要人扶，甚至坐不稳，患者呈现缄默，肢体僵直。患者此时免疫系统全面恶化，免疫力下降，并发症出现，如：深静脉血栓、压疮、感染的风险，这些并发症也常常引起患者死亡 [ 17 ]。病理反射如进食困难，鼻饲也都存在于疾病的晚期阶段。 3.4. 特异性表现 AD还有一些特异型临床表现需要鉴别，如后部枕颞叶变异型AD患者早期会出现对目标，符号，单词，面孔等的视觉理解或识别障碍；少词变异型AD患者早期会出现进行性单词检索障碍和句子复述障碍；额部变异型患者早期会出现淡漠等进行性行为改变或执行功能障碍；还有Down综合征早期会出现行为改变和执行功能障碍，对这些患者在筛查时需结合一些辅助检查如颞中回萎缩，异常的脑脊液生物标记(脑脊液Aβ浓度降低，总Tau蛋白浓度增高)、PET扫描结合MRI、直系亲属中有常染色体14号或21号显性突变等情况进行确诊。
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user: 4. 治疗 从AD目前的治疗看，还没有一种药物能够预防或减缓疾病进展的速度。主要是受到中晚期临床试验的困扰。目前有四种FDA批准的药物用于治疗AD的认知和功能障碍的药。尽管如此，近年来在阐明潜在病理学的关键方面取得了重大进展，新的治疗策略仍在积极开发和测试中。 4.1. 胆碱酯酶抑制剂(ChEIs) 乙酰胆碱是中枢神经系统中重要的神经递质之，通过对AD患者进行尸检及脑组织活检发现，乙酰胆碱递质减少，神经元功能异常。而ChEIs能阻断突触后膜上的胆碱酯酶水解乙酰胆碱递质，增加乙酰胆碱在中枢神经中的浓度。目前有三种ChEIs被批准用于轻度至中度AD，多奈哌齐、利伐他明和加兰他明。它们的主要药代动力学特征不同，多奈哌齐的半衰期比其他两种药的长，每日服用一次，这些药物都能改善AD患者的认知能力，然而他们对AD整体治疗作用不大，并不能改变疾病的进展，Han [ 18 ] 等研究发现，对轻度认知障碍患者，在早期临床阶段应用ChEIs类药治疗会加重认知障碍。 4.2. NMD受体拮抗剂 NMD受体是突触后膜上的离子通道蛋白，为特殊类型的谷氨酸类型递质神经受体。NMDA受体可影响神经元回路的形成，支配学习和记忆等功能。研究发现 [ 19 ] Aβ能够通过NMDA诱导过量的钙进入神经元，导致突触功能障碍，进而导致神经元重新进入分裂周期，这是AD神经元死亡的前期。而NMDA抑制剂能显著减少Aβ蛋白沉积，降低tau蛋白的过度磷酸化，通过减少小角质细胞的过度激活来减少炎症因子，进而保护神经细胞。美金刚为NMDA受体拮抗药，Matsunaga [ 20 ] 等研究发现美金刚能显著改善AD患者的认知功能及神经精神症状，对中重度AD患者联合ChEIs类药治疗优于单纯应用ChEIs类药。然而NMDA受体拮抗药与ChEIs类药物一样，其作用范围很小，而且该药物对长期疾病进展没有效果。因此，不建议给轻度AD患者用这种药。 4.3. 针对Aβ蛋白抑制作用的药 目前，公认的是Aβ蛋白的积聚触发了AD的发病机制，因此，降低AD脑实质Aβ沉积的浓度可能会减缓疾病的进展，由于没有完整的AD动物模型来明确检验Aβ假说的有效性，只能通过研发疫苗来进行主动和被动免疫策略，以及分泌酶抑制剂的已成为临床试验中主要的靶向抗体模式。进二十年来，各大医药企业都进行了免疫试剂的研发，大部分药物均在实验阶段未取得成功，主要因疗效不佳或认知功能恶化，还有药物不良反应严重而不得不停止 [ 21 ]。Aducanumab，为美国百健公司研发的一款单抗体药物，该药物能够透过血脑屏障，能有效阻止Aβ的积聚，目前已完成了第二阶段的临床试验，最近在第三阶段试验中对APOE4/4的早期AD纯合子患者显示了适度但显著的疗效 [ 22 ]。 4.4. 调节脑肠轴药物 由于肠道菌群与中枢神经系统之间可通过脑肠轴相互影响，与AD的发病相关。甘露特钠胶囊(GV-971)是以海洋褐藻提取物为原料制备获得的低分子酸性寡糖化物。通过重塑肠道菌群平衡，抑制肠道菌群特定代谢产物的异常增多，减少外周及中枢炎症，降低β淀粉样蛋白沉积和Tau蛋白过度磷酸化，从而改善认知功能障碍 [ 14 ]。根据三期临床结果显示该药可改善轻度至中度阿尔茨海默症患者认知功能障碍，具有起效快、呈持续稳健改善的特点，安全性好。该药于2019年11月已获我国国家药品监督管理局批准，即将上市，为AD患者治疗带来新希望 [ 23 ]。 4.5. 年轻血液 Katsimpardi [ 24 ] 等在实验研究中发现，在老年小鼠中引入年轻血液可改善与年龄相关的认知障碍，注射人脐带血后也可达到这种效果。研究发现，幼年小鼠血清促进了人神经元和功能性突触数量的增加，突触对刺激的反应增强，NMDA突触反应增强，老年小鼠血清或胎牛血清(FBS)均未见上述作用 [ 24 ]。血浆交换目前尚在临床研究阶段，能起到去除旧血中有害血浆成分或刺激脑脊液产生抗体的作用，但不能提供治疗因子。
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user: 5. 研究发展 虽然到目前为止，还没有一种药物能够预防或减缓AD进展，但是相信随着神经影像技术，疾病动物模型，基因研究和生物标志物的技术持续改进，人们对AD病因机理的深入研究，新的治疗药物不断研发，在不久的将来，人们一定能够发现阻断AD疾病进展的药物。
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user: 摘要 黄芩素(Baicalein， BE)是从双子叶唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis)的干燥根中提取分离出来的一种黄酮类天然小分子化合物。研究发现黄芩素在感染性疾病中具有抗真菌，抗炎，抗氧化，调节机体免疫功能等作用。但在真菌性角膜炎中尚未有研究，本文就黄芩素在烟曲霉菌性小鼠角膜炎模型中的作用进行研究。方法：体外实验用烟曲霉菌感染HCECs后，再用黄芩素处理，PCR和ELISA评估IL-1β，TNF-α，IL-6的mRNA及蛋白的表达。体内实验用烟曲霉菌菌丝感染C57BL/6小鼠角膜制造烟曲霉菌角膜炎模型，再用黄芩素或DMSO处理，PCR和ELISA评估IL-1β，TNF-α，IL-6的mRNA及蛋白的表达。结果：黄芩素通过降低IL-1β，TNF-α，IL-6mRNA及蛋白减轻角膜炎的炎症反应。结论：黄芩素通过抑制促炎因子表达减轻小鼠角膜炎炎症反应。
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user: 1. 引言 真菌性角膜炎是一种由真菌病原体入侵角膜导致的严重的化脓性角膜感染，通常是溃疡性角膜感染，如果治疗不当，可能导致角膜破坏和严重失明的眼内炎。最常见的病原体是丝状真菌如镰刀菌和烟曲霉菌。普遍存在于发展中国家农业地区，常发生于角膜外伤史，佩戴隐形眼镜，慢性眼表疾病，局部或全身长期使用抗生素或类固醇 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]。真菌性角膜炎的药物治疗失败是很常见的，目前可用的抗真菌药物存在多种缺点，如眼部渗透性差，生物利用度不可预测，以及全身用药相关的不良反应。因此需要更有效的局部抗真菌治疗。为了增加抗真菌滴眼液的使用量，重要的是要研究其他种类的局部使用的抗真菌药物的使用情况 [ 5 ] [ 6 ]。 免疫调节在真菌性角膜炎(FK)的发病机制中起重要作用。白细胞介素作为重要的促炎细胞因子，参与角膜真菌感染的免疫防御过程。IL-6在角膜的感染和炎症过程中起着至关重要的作用，IL-6是真菌性角膜炎潜在治疗靶标，真菌感染通过IL-6介导的跨细胞信号传导促进巨噬细胞和T细胞活化调节免疫细胞迁移和诱导趋化因子分泌 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]。在真菌性角膜炎中，眼表的粘膜上皮细胞和免疫细胞分泌IL-1β。信号通路Dectin-1/syk，TLR4，LOX-1等参与真菌性角膜炎中IL-1β的产生 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ]。肿瘤坏死因子-α (TNF-α)是一种多功能细胞因子，在炎症、感染中是重要免疫功能的中枢生物介质。已有多项研究发现真菌性角膜炎中IL-1β，TNF-α，IL-6表达升高，而抑制IL-1β，TNF-α，IL-6的表达会减轻真菌性角膜炎的炎症反应 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ]。 黄芩素是存在于黄芩干燥根中的一种酚类黄酮。黄芩素具有明显抗炎的作用，现在已经应用于感染、肝病、心脑血管疾病、神经退行性疾病等疾病中 [ 18 ]。在脂多糖诱导的RAW264.7细胞中，黄芩素通过ER依赖途径抑制诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶-2和肿瘤坏死因子-α基因的表达，抑制一氧化氮的产生，以及炎性细胞因子(IL-1β、前列腺素E2和肿瘤坏死因子-α)的产生，从而发挥抗炎作用 [ 19 ]。黄芩素通过减弱血清和肝脏IL-6、IL-1β和TNF-α的升高，对扑热息痛所致小鼠急性肝损伤起保护作用 [ 20 ]。黄芩素通过阻断Toll样受体4的表达，抑制髓过氧化物酶活性及肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β水平，在LPS诱导的乳腺炎小鼠中减轻炎症反应 [ 21 ]。而尚未发现黄芩素在真菌性角膜炎中的应用研究。本文主要研究黄芩素在真菌性小鼠角膜炎中的抗炎作用。
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user: 3. 结果 3.1. 黄芩素处理后小鼠烟曲霉菌角膜炎临床评分 在烟曲霉菌角膜炎小鼠第三天，DMSO处理组小鼠角膜溃疡面积大，角膜水肿，表面粗糙欠光滑，虹膜纹理不清，少数病例还可引起角膜穿孔。而黄芩素处理组小鼠角膜溃疡面积减小，角膜尚透明，无水肿(图1(a))。DMSO处理组烟曲霉菌性角膜炎模型与黄芩素处理组烟曲霉菌性角膜炎模型的临床评分相比，黄芩素处理组临床评分明显低于DMSO处理组，差异有统计学意义(图1(b))。 图1. 黄芩素治疗小鼠烟曲霉菌角膜炎的临床表现及临床评分 3.2. 黄芩素降低小鼠烟曲霉菌角膜炎促炎因子mRNA的产生 检测小鼠烟曲霉菌角膜炎模型第三天，角膜中促炎因子mRNA的变化。PCR结果显示，黄芩素处理组与对照组相比，明显降低了IL-1β，TNF-α和IL-6的mRNA表达。差别具有统计学意义(图2(a)~(c))。 3.3. 黄芩素降低小鼠烟曲霉菌角膜炎促炎因子蛋白的产生 检测小鼠烟曲霉菌角膜炎模型第三天，角膜中促炎因子蛋白的变化。Elisa结果显示黄芩素处理组与对照组相比，明显降低了IL-1β，TNF-α和IL-6的蛋白表达。具有统计学意义(图3(a)~(c))。 3.4. 黄芩素处理后，RAW中促炎因子的mRNA变化 灭活烟曲霉菌处理RAW1小时后，用黄芩素或DMSO处理7小时，检测IL-1β，TNF-α和IL-6的mRNA表达。PCR结果显示，单纯烟曲霉菌处理组IL-1β，TNF-α和IL-6的mRNA表达升高，烟曲霉菌+ DMSO组与单纯烟曲霉菌处理组相比，炎症因子无任何变化，排除DMSO对实验造成的影响，烟曲霉菌 + 黄芩素组与单纯烟曲霉菌处理组相比，降低IL-1β，TNF-α和IL-6的mRNA表达(图4(a)~(c))。 图2. 烟曲霉菌感染小鼠角膜第三天黄芩素处理组与DMSO处理组促炎因子mRNA表达 图3. 烟曲霉菌感染小鼠角膜第三天黄芩素处理组与DMSO处理组促炎因子蛋白表达 图4. 烟曲霉菌刺激RAW细胞，黄芩素处理组与DMSO处理组促炎因子mRNA表达 3.5. 黄芩素处理后，RAW中促炎因子的蛋白变化 灭活烟曲霉菌处理RAW1小时后，用黄芩素或DMSO处理23小时，检测IL-1β，TNF-α和IL-6的蛋白表达。Elisa结果显示，单纯烟曲霉菌处理组IL-1β，TNF-α和IL-6的蛋白表达升高，与对照组DMSO组相比，黄芩素组IL-1β，TNF-α和IL-6的蛋白表达下降。说明黄芩素通过抑制炎症因子的表达减轻炎症反应(图5(a)~(c))。 图5. 烟曲霉菌刺激RAW细胞，黄芩素处理组与DMSO处理组促炎因子蛋白表达
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user: 4. 讨论 真菌性角膜炎是一种严重的溃疡性化脓性疾病，患者主要是发展中国家的农民，因其治疗手段有限，有效药物匮乏，角膜供体缺乏，导致致盲率很高，并有失明风险。引起角膜炎的常见致病真菌是曲霉，镰刀菌，念珠菌，弯孢菌和青霉菌，其中镰刀菌和曲霉菌是主要的 [ 23 ] [ 24 ]，真菌感染角膜时，首先触发先天性免疫，激活的先天免疫随后会导致有效的适应性免疫 [ 25 ]。在真菌和宿主之间接触后，真菌可以被宿主上皮细胞和免疫细胞表达的模式识别受体(PRR)识别。PPR包括Toll样受体(TLR，包括TLR2和TLR4)，C型凝集素受体(CLR，Dectin-1，Dectin-2和Mincle)和NOD样受体(NLR)并不直接有助于真菌识别。在烟曲霉性角膜炎期间，识别受体的表达增加可导致下游IL-1β，TNF-α，IL-6升高，明显高于非角膜炎对照组。IL-1β，IL-6被认为是反映炎症严重程度的标志物，然而过度表达炎症成分可能会对宿主产生破坏性影响，造成导致角膜细胞和组织成分的破坏引起角膜透明度降低，角膜水肿，混浊溃疡面积增加。而抑制过度炎症反应可能会改善真菌性角膜炎患者的预后 [ 26 ] [ 27 ]。 黄芩素是一种广泛存在于植物中的黄酮类化合物，具有明显的抗炎，抗氧化、抗病毒、抗菌等多种药理活性。其中抗氧化和抗炎作用已在各种疾病模型中得到证实，包括糖尿病、心血管疾病、炎症性肠道疾病、痛风和类风湿性关节炎、哮喘、神经退行性疾病、肝脏和肾脏疾病、脑脊髓炎等。并且黄芩素对人体正常的细胞几乎没有毒性 [ 28 ]。有报道黄芩素通过抑制巨噬细胞MAPK和NFκB信号转导通路的激活，抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α的分泌，抑制铜绿假单胞菌感染引起的炎症反应 [ 29 ]；通过抑制巨噬细胞中的IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α的产生，发挥抗H5N1病毒的作用 [ 30 ]；通过减少心肌组织损伤，减少中性粒细胞浸润，减少促炎细胞因子TNF-α，IL-1β的产生，缓解心肌缺血/再灌注(I/R)损伤 [ 31 ]。 在本实验结果中可以看到，在烟曲霉菌小鼠角膜炎角膜中检测到IL-1β、IL-6、TNF-α分泌增高，而黄芩素处理组会抑制IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子mRNA及蛋白的表达。同样，在烟曲霉菌感染的巨噬细胞中会检测到上述促炎因子的表达增加，而这些促炎因子在黄芩素处理后却表达下调，另外黄芩素处理过小鼠角膜较对照组更加透明，溃疡面积减小，虹膜纹理清楚。所以这些结果提示黄芩素具有减轻烟曲霉菌小鼠角膜炎炎症反应的作用。可为以后作为真菌性角膜炎代替药物，或者联合用药奠定基础。
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user: 摘要 去整合素–金属蛋白酶家族(adisintegrin and metalloproteinase， ADAMs)是一类锌依赖的跨膜糖蛋白，ADAMs家族分子具有相似的分子结构包括：结构域(单肽)末端金属域、整合素域、富含半胱氨酸的序列、膜近端上皮生长因子样序列。ADAM9在胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胰腺导管腺癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和肝癌等实体肿瘤中均有过表达。免疫组织化学分析强调了ADAM9在实际癌细胞中的表达，并将其丰富的表达与临床病理特征联系起来，如总体生存期缩短、肿瘤分级较差、去分化、治疗耐药性和转移形成。本文综述了ADAM9在肿瘤中的研究现状，以及它在推动肿瘤进展方面的不同机制。
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user: 1. 引言 金属蛋白酶蛋白家族(ADAMs ，a disintegrin and metalloproteinase)由33个成员组成，它们调控一系列细胞过程，包括细胞融合、细胞粘附和迁移 [ 1 ]。蛋白水解活性分子通过胞外区细胞因子、生长因子和受体的脱落来调控这些和其他细胞过程 [ 2 ]。约有一半的ADAMs具有蛋白水解能力，并被发现可以调节细胞膜细胞因子和生长因子、它们的受体和细胞粘附分子的活性，这对肿瘤发生的许多方面都有意义 [ 2 ]。在肿瘤组织和细胞系中都有许多蛋白水解物ADAMs的表达或上调的例子 [ 3 ]。 ADAM9作为ADAMs家族成员，参与肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肾癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤发生发展、侵袭转移及预后 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]。ADAM9对不同实体肿瘤的预后和诊断价值已被确定，基于它可能脱落一些能够刺激迁移、粘附和增殖的膜结合配体。已发现的ADAM9底物包括淀粉样前体蛋白(APP)、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)、胶原蛋白XVII、肿瘤坏死因子-p75、纤连蛋白、成纤维细胞生长因子受体2、胰岛素B链和明胶，这些在包括癌症在内的各种病理中都有涉及 [ 1 ] [ 7 ]。ADAM9在内皮细胞生物学中发挥着与其他ADAMs不同的重要作用，William R. English 等人发现ADAM9是内皮细胞–细胞连接的组成部分，并证明了它可以通过生态域相互作用进行自我关联；此外，虽然可溶性ADAM9外域发生在生理学上，但它调节内皮细胞间的相互作用而不是内皮细胞的通透性 [ 8 ]。 ADAM9在实体瘤中的过表达与侵袭性肿瘤表型和不良临床预后有关 [ 9 ] - [ 14 ]。例如，ADAM9 mRNA表达与胶质瘤的肿瘤分级和组织学类型有关，在低级别瘤变患者中，ADAM9的高表达与较差的临床结果之间存在显著的相关性，研究表明，ADAM9表达可作为低级别瘤变患者的预后指标，同时也是一个潜在的治疗靶点 [ 13 ]。Kim等发现ADAM9在胃癌的增殖和侵袭中起着重要作用，ADAM9可能是晚期胃癌的有效治疗靶点 [ 9 ]。ADAM9是miR-126-3p在达拉非尼耐药细胞中的一个靶点，它的沉默会损害细胞的增殖和侵袭性，并增加达拉菲尼的敏感性，ADAM9的沉默延迟了达拉菲尼抗药的建立 [ 15 ]。机制上，ADAM9可能通过非蛋白水解或蛋白水解机制驱动肿瘤进展。蛋白水解机制可能涉及细胞表面蛋白的脱落或加工，例如CDCP1或MHC I类多肽相关序列A (MICA)，它们直接驱动肿瘤生长 [ 16 ]。另一方面，非蛋白水解机制包括肿瘤细胞与内皮细胞或瘤周基质细胞之间的相互作用，主要由不同的整合素家族成员介导 [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ]。
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user: 2. 肝癌 有研究表明，ADAM9的过表达与肝细胞癌的临床病理特征相关，可能导致肿瘤发生发展、侵袭、转移及预后不良 [ 6 ] [ 16 ] [ 20 ]。Tao等人发现与ADAM9阴性患者相比，ADAM9阳性患者的肿瘤更大，分化更差，肝内转移、胆管和肝静脉侵犯更多，ADAM9在肝细胞癌组织中过表达，是肝切除术后总体生存的独立预后标志物 [ 6 ]。Arai等发现化疗药物索拉非尼(sorafenib)和雷格拉非尼(regorafenib)通过抑制分解素和金属蛋白酶9 (ADAM9)，抑制肝癌细胞中MHC I类相关A链(MICA)的脱落 [ 21 ]。Sooyeon等使用癌症基因组图谱数据库，发现肿瘤组织中ADAM9的高表达与HCC患者较差的生存率相关(log-rank p = 0.00039)，ADAM9 mRNA可能作为预测临床反应的生物标志物，而ADAM9-MICA-NKG2D系统可能是HCC免疫治疗的良好治疗靶点 [ 22 ]。Dong等研究发现ADAM9通过产生ROS介导肝癌细胞中IL-6诱导的上皮-间充质转化和转移，促进肝癌细胞的浸润和转移 [ 23 ]。Li等评估了ADAM9信号在四氯化碳致肝损伤反应中的重要性(CCl4)体内，他们的研究提示，ADAM9通过激活IL-6反式信号通路，调控肝细胞增殖、凋亡、血管生成和CYP2E1表达，在CCl4诱导的小鼠肝损伤中发挥重要的保护作用 [ 24 ]。 许多micro-RNAs已被证实为ADAM9调节因子和潜在的治疗靶点 [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ]。Wan等报道HCC中miR-203的下调与患者生存期缩短相关，miR-203的上调降低了HCC癌细胞中ADAM9的表达，过表达miR-203可明显抑制细胞增殖、侵袭和诱导细胞凋亡 [ 25 ]。在HCC中，ADAM9作为miR-488的直接靶点，介导miR-488表达降低，从而诱导细胞增殖和侵袭 [ 26 ]。肿瘤抑制因子miR-126的缺失通过上调ADAM9促进了乙肝病毒相关肝癌转移的发生 [ 27 ]。
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user: 3. 前列腺癌 前列腺癌的临床研究表明，ADAM9的表达与疾病的预后相关。Fritzsche等人在198个样本的队列研究中发现与正常组织相比，肿瘤中ADAM9 mRNA和蛋白水平更高，并且与PSA无复发生存率密切相关 [ 28 ]。氧化应激诱导人前列腺癌细胞中ADAM9蛋白的表达，当人类前列腺癌细胞暴露于压力条件下(如细胞拥挤、缺氧和过氧化氢)时，ADAM9 mRNA和蛋白表达升高，ADAM9可能参与调控前列腺癌细胞的生存和进展，通过降低ADAM9的表达，可以观察到前列腺癌细胞的凋亡 [ 29 ]。 Josson等人证明ADAM9有助于前列腺癌的进展，可能是一个治疗靶点，作者发现ADAM9通过改变e-钙粘蛋白和整合素的表达，在前列腺癌进展和治疗耐药中起着关键作用 [ 30 ]。Liu等在体外和体内研究表明，ADAM9可能是治疗前列腺癌的药物靶点，在体外和体内的证据表明，通过慢病毒传递的小发夹RNA (shRNA)靶向治疗ADAM9基因表达，在小鼠前列腺癌骨转移模型中显著抑制了人前列腺癌细胞株的增殖，并阻断了肿瘤的生长，芯片数据显示，前列腺癌细胞中再生胰岛来源家族成员4 (REG4)表达水平明显下降，ADAM9基因表达下调 [ 31 ]。在前列腺癌组织和细胞系中，Hua等通过荧光素酶报告基因实验确定ADAM9为miR-126的靶基因，随后，他们使用Kaplan-Meier和log-rank分析来研究ADAM9表达与前列腺癌预后之间的关系，结果显示MicroRNA-126通过调控ADAM9抑制前列腺癌的增殖和转移 [ 32 ]。
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user: 4. 胃癌 许多研究也将ADAM9的表达与胃癌的不良预后联系起来。Carl-McGrath等在肿瘤组织和相应的非肿瘤组织以及5种胃癌细胞株中使用qPCR和免疫组化方法研究了不同类型ADAMs 9，12和15的发病机制 [ 33 ]。肿瘤组织中ADAM9表达明显高于正常胃组织，体外应用抗ADAM9抗体抑制胃癌细胞的生长，提示ADAM9通过信号分子的脱落或与粘附分子的相互作用在细胞增殖中发挥作用，在表达最高水平ADAM9的GC细胞中，敲除ADAM9减弱了细胞增殖，这与细胞周期阻滞在G0/G1期相一致 [ 33 ]。Wang等报道了ADAM9在胃癌组织中的异常表达与不同的临床病理特征如局部浸润、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤–淋巴结转移相关 [ 34 ]。此外，他们发现在胃癌细胞中，ADAM9作为胃癌生长的启动子，在转录后受到miR-126的负性调控，这与在其他实体肿瘤中所做的研究相一致 [ 34 ] [ 35 ] [ 36 ]。Liu等通过靶向关联分析、双荧光素酶分析、qRT-PCR和western blot分析结果验证了miR-129-5p能够靶向ADAM9 mRNA的3'UTR并调控其蛋白表达，发现MiR-129-5p通过靶向ADAM9在胃癌进展中发挥抑癌作用 [ 37 ]。 Kim等人证明ADAM9在胃癌进展中起关键作用，这取决于其蛋白酶活性。使用RAV-18 (一种ADAM9阻断抗体)抑制ADAM9活性仅在高ADAM9表达的GC细胞中显示了酶活性的剂量依赖性下降；低氧条件下的免疫印迹分析表明，这些细胞系的侵袭性增加与ADAM9蛋白表达增加相关，提示缺氧和ADAM9表达之间存在联系 [ 9 ]。
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user: 5. 胰腺癌 基因表达谱显示ADAM9在胰腺导管腺癌(PDAC)中明显过表达。Grützmann等人通过免疫组织化学分析和多因素分析证实，ADAM9的表达将PDACs与其他实体胰腺肿瘤区分开来，细胞质中ADAM9过表达与分化差和生存期缩短有关，ADAM9过表达可能促进了PDACs的侵袭性 [ 38 ]。Yamada等人在11个癌细胞和11个正常胰腺上皮细胞的微解剖样本中定量表达了ADAM9，结果显示，癌细胞表达的ADAM9水平高于正常上皮细胞(p = 0.016) [ 39 ]。Xing等人的一项研究也得出了同样的结果，他们发现胰腺癌组织和细胞系中miR-217低表达和circ-ADAM9高表达，与临床晚期及淋巴结转移密切相关 [ 40 ]。 Xing等人进一步的机制研究表明circ-ADAM9通过直接抑制miR-217提高PRSS3表达水平，从而激活ERK/VEGF信号通路，进而减轻了miR-217对PRSS3的抑制作用，circ-ADAM9沉默或miR-217过表达明显延缓了肿瘤的生长，两者的联合对肿瘤的发生发展具有抑制作用 [ 40 ]。最近的研究强调了microRNAs (miRNAs)在包括肿瘤进展在内的各种肿瘤过程中的重要调节作用。Wu DM等初步筛选了与胰腺癌相关的候选miRNA和相关基因，用miR-126-3p转染PANC-1细胞或沉默PANC-1细胞的ADAM9基因，以检查它们在胰腺癌细胞中的调节作用，结果表明骨髓间充质干细胞来源的外泌体MicroRNA-126-3p通过负向调控ADAM9，抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，促进细胞凋亡 [ 41 ]。Hamada等研究了micro-RNA在胰腺癌中的抑瘤作用及其潜在的分子机制，他们对PDAC组织中micro-RNA表达的综合分析显示，与正常胰腺组织相比，miR-126表达降低。Hamada等实验结果表明胰腺癌细胞中miR-126的重表达降低了ADAM9的蛋白表达水平，抑制了AsPC-1和Panc-1细胞的迁移、侵袭和上皮标志物E-cadherin的诱导减少，MiR-126通过调控ADAM9在胰腺癌细胞中发挥抑癌作用 [ 42 ]。
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user: 6. 肺癌 肺癌研究结果表明，ADAM9过表达在肺癌的进展和转移调节过程中起着重要作用。Zhang等使用免疫组织化学方法研究了ADAM9在人类切除的非小细胞肺癌中的异常表达，与正常肺组织相比，ADAM9在肿瘤中高表达，并且与ADAM9表达低水平的非小细胞肺癌(NSCLC)患者相比，ADAM9表达高水平的患者5年生存率明显缩短(分别为56.9和88.9%)，多因素分析也显示，ADAM9过表达是缩短生存时间的独立因素 [ 43 ] [ 44 ]。在肺癌中ADAM9的表达受很多因素的调控，circ_0020123可以通过海绵miR-488-3p的释放来抑制ADAM9的表达，促进非小细胞肺癌的进展沉默circ_0020123可明显抑制A549细胞的生长、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡 [ 45 ]。Wan J.等的研究结果显示环状RNA circ_0020123作为miR-488-3p调控ADAM9表达的ceRNA，促进非小细胞肺癌的进展 [ 46 ]。microRNA-590通过靶向ADAM9抑制非小细胞肺癌细胞的肿瘤发生和侵袭性 [ 47 ]。Chang GH等发现槲皮素通过抑制ADAM9表达途径进而抑制肺癌转移能力 [ 48 ]。Shintani等人早期的研究发现，在A549和EBC-1细胞中ADAM9过表达通过调节其他粘附分子和改变对生长因子的敏感性，增强了细胞粘附和非小细胞肺癌细胞的侵袭能力，从而促进了向脑的转移能力 [ 14 ]。 Chang等在A549细胞系(NSCLC细胞系)验证了上述过表达研究，在A549肿瘤细胞中，通过RNA沉默方法下调ADAM9表达可以显著抑制细胞在体外的增殖、迁移、侵袭和诱导细胞凋亡，并在肺转移实验小鼠模型中抑制体内肿瘤生长 [ 49 ]。Chang等还采用TUNEL法检测Lv/sh-ADAM9处理后对A549人肺腺癌细胞系凋亡的影响，结果显示Lv/sh-ADAM9处理显著增加细胞凋亡，显著增加caspase-3、8、9活性(P < 0.05) [ 50 ]。ADAM9介导的脑转移在很久以后才被详细描述，Shintani Y等的研究发现ADAM9过表达通过调节其他粘附分子和改变对生长因子的敏感性，增强了细胞粘附和非小细胞肺癌细胞的侵袭能力，从而促进了向脑的转移能力 [ 14 ]。Lin等证明ADAM9增强了组织纤溶酶原激活物(tPA)切割和刺激前迁移蛋白CDCP1促进肺转移的能力，此外，肺肿瘤脑转移瘤中ADAM9的水平相对高于在原发性肺肿瘤中观察到的水平，ADAM9通过基于纤溶酶原激活剂的途径促进肺癌向脑转移 [ 51 ]。对临床标本的分析显示，高水平的ADAM9与高水平的CDCP1有关，这导致了较差的临床预后和高死亡率风险 [ 51 ] [ 52 ]。Chiu等的研究结果进一步支持了这些结果，miR-218在正常肺组织中含量丰富，但在肺肿瘤中受到抑制，在ADAM9介导的CDCP1表达过程中受到调控，他们发现CDCP1表达和活性增强与miR-128表达降低相关 [ 52 ]。虽然这些作者证实了ADAM9高表达与脑转移相关，但其作用机制尚不清楚。后续研究表明，血管生成是脑转移的关键步骤 [ 53 ]。血管重构中ADAM9调控基因的微阵列分析显示，在ADAM9沉默细胞中，血管内皮生长因子A (VEGFA)、血管生成素-2 (ANGPT2)和组织纤溶酶原激活剂(PLAT)的表达水平被抑制，从而导致体内血管生成、血管重塑和肿瘤生长的减少 [ 53 ]。免疫组化分析显示，同时高表达ADAM9和VEGFA或ADAM9和ANGPT2与不良预后相关。总之，这些结果解释了ADAM9如何通过调节血管重塑和血管生成来促进肺癌进展 [ 53 ]。Kossmann等人也证明ADAM9在侵袭性肺腺癌中以血管生成依赖的机制驱动转移。在裸鼠体内静脉注射ADAM9 (shADAM9)稳定下调的A549细胞，显示肺内结节数量减少，提示外溢和转移能力降低 [ 4 ]。将这些细胞皮下注射到裸鼠体内，与对照组相比，实验组裸鼠的肿瘤更小，只有少量新血管。这些结果在体外也得到验证，与对照组相比，A549 shADAM9细胞上清处理后，人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的血管形成明显减少 [ 4 ]。
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user: 7. 乳腺癌 乳腺癌是一种常见的实体肿瘤，多种报告表明ADAM9在疾病进展中起重要作用。O 'Shea等人进行了初步研究，研究了与正常乳腺组织相比，浸润性导管/小叶性乳腺癌中ADAM9的mRNA和蛋白表达水平，他们的结果显示，ADAM9 mRNA在乳腺癌中经常表达(72/110， 60%)，与正常乳腺组织相比(6/25， 24%) [ 54 ]。研究表明，miR-154通过靶向ADAM9抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，ADAM9被确定为miR-154在乳腺癌中的一个新的直接靶点 [ 55 ]。Micocci等使用MDAMB-231浸润性导管乳腺癌细胞证明，RNAi沉默ADAM9在体外抑制肿瘤侵袭，而不影响增殖和迁移，这支持了ADAM9可能在乳腺癌的侵袭和转移中发挥作用的假设 [ 5 ]。数年后，Micocci等人通过使用MDA-MB-231细胞进行跨上皮细胞迁移实验证明了这一观察结果。与对照组相比，这些癌症细胞中ADAM9的RNAi沉默强烈抑制了它们通过HUVEC (50%)、HMEC-1 (40%)，和 HMVEC-Der-dLy cells (32%)的迁移 [ 17 ]。这些结果证实了ADAM9参与MDA-MB-231外渗，这一过程包括通过血管系统迁移、粘附内皮细胞、外渗并最终侵入继发组织 [ 17 ]。 Moelans等人对浸润性乳腺癌样本进行了分子谱分析，以确定驱动治疗进展和耐药性的基因。使用多路连接依赖探针扩增(MLPA)，他们分析了104例患者样本中的20个乳腺肿瘤相关基因。在32%的样本中发现了ADAM9基因扩增，并与肿瘤有丝分裂指数、组织学分级和雌激素受体状态呈正相关 [ 56 ]。ADAM9-S以金属蛋白酶依赖的方式促进细胞迁移，而ADAM9-L以崩解蛋白域–整合蛋白结合的方式抑制癌细胞迁移，但独立于其蛋白水解活性 [ 57 ]。Jessica L Fry研究发现，ADAM9-S促进乳腺癌细胞迁移的方式需要其金属蛋白酶活性，而ADAM9-L抑制细胞迁移独立于其金属蛋白酶活性，ADAM9-L对迁移的抑制需要一个功能性的崩解素结构域和整合素结合 [ 57 ]。这种相反的表型可能与这两个变种的定位有关，因为ADAM9-S能够处理某些底物或细胞外基质，ADAM9-L由于膜系带而无法接触。表达分析显示，这两种ADAM9亚型均在乳腺癌细胞系和组织中表达，因此，ADAM9的膜系和分泌变异的相对水平是与乳腺癌进展相关的侵袭性迁移表型表现的关键决定因素 [ 56 ] [ 57 ]。这些结果得到了Mazzocca等人的证实，他们在基质检测中显示肝星状细胞分泌的ADAM9 (ADAM9-s)促进了不同人肿瘤细胞系的细胞侵袭 [ 58 ]。 三阴性乳腺癌(TNBC)是一种异质性疾病，由于缺乏有效的靶向治疗，预后较差 [ 59 ]。表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor， EGFR)是一种在大多数三阴性乳腺癌(TNBCs)中经常过表达的靶向性受体(在一些研究中超过50%)，EGFR的表达和激活在肿瘤等人的研究细胞存活、生长、侵袭和肿瘤转移中起重要作用 [ 60 ] [ 61 ] [ 62 ]。Wang等人的最新研究显示，组蛋白甲基转移酶NSD2通过刺激ADAM9-EGFR-AKT信号介导三阴性乳腺癌细胞的生存和侵袭 [ 63 ]。
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user: 8. 胶质瘤 越来越多的证据表明，ADAM9过表达在胶质瘤的进展中起着重要作用。癌症基因组图谱的表达预测(TCGA)强调，在多形性胶质母细胞瘤(GBM)中，ADAM9水平升高与生存期缩短相关。甘草查耳酮A (Licochalcone A， LicA)被报道具有抗肿瘤作用，Huang等人的研究观察到，LicA通过靶向MEK/ERK和ADAM9信号通路显著抑制了ADAM9的表达和人胶质瘤细胞(M059K， U-251 MG， GBM8901)的迁移侵袭活性，不表现出细胞毒性 [ 64 ]。高良姜(3，5，7-三羟黄酮)是一种天然的植物类黄酮，有研究发现高良姜可增加ERK1/2磷酸化，降低ADAM9表达，并防止A172胶质瘤细胞的侵袭 [ 65 ]。Fan等发现，与低级别胶质瘤(LGG)患者相比，在多形性胶质母细胞瘤(GBM)中ADAM9 mRNA表达水平更高 [ 13 ]。此外，在LGG患者中，侵袭性星形细胞癌ADAM9 mRNA表达水平较高，这与组织学类型、肿瘤分级、临床预后等相关 [ 13 ]。恶性胶质瘤的主要细胞外基质蛋白腱鞘蛋白c在体外被证实能刺激胶质瘤U87和U251细胞的侵袭 [ 66 ]。但其对脑肿瘤起始细胞(BTIC)发生胶质瘤的调控作用尚不清楚。通过一系列体外检测，包括微阵列分析和RNA干扰，Sarkar等人发现腱鞘蛋白c以金属蛋白酶依赖的方式促进了BTICs的侵袭，这种表型在蛋白酶抑制剂BB94的作用下被消除，基因表达的微阵列分析显示，ADAM9是这种侵袭性的潜在调节因子 [ 67 ]。 为了进一步支持这一观点，Liu等人发现ADAM9是miR-140在胶质瘤中的一个新的直接靶基因，他们的研究显示miR-140在胶质瘤组织和细胞系中下调，这与WHO对胶质瘤的分级相关。miR-140在胶质瘤细胞系中的表达恢复可通过直接靶向ADAM9减弱细胞的增殖、迁移和侵袭。此外，敲低ADAM9模拟了miR-140的抑癌功能，而过表达ADAM9则消除了miR-140在胶质瘤细胞中的抑制作用 [ 68 ]。Formolo等人利用蛋白质组学研究了四种胶质母细胞瘤细胞系(U87、U118、T98和LN18)的分泌体特征，证实了ADAM9在胶质瘤中的促肿瘤作用。这四种细胞系的侵袭能力有差异，其中U87侵袭性最强，这可能表明有额外的分泌蛋白促成了这种侵袭性表型。与侵袭性最小的GBM细胞相比，他们发现了几种U87细胞特异或高表达的蛋白，包括蛋白水解酶cathepsin B、ADAM9和ADAM10，这些蛋白已知可促进胶质瘤的侵袭 [ 69 ]。
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user: 9. 其它肿瘤 ADAM9过表达也与其它很多肿瘤的预后不良有关。Zigrino等对具有不同侵袭能力的黑素瘤细胞系的RNA分析显示，adam9在所有细胞系中均有不同数量的表达，与它们的侵袭和转移能力无关 [ 70 ]。Zigrino等的后续研究表明，ADAM9的表达在促进黑色素瘤细胞和瘤周基质成纤维细胞的相互作用中至关重要，这有助于黑素瘤侵袭 [ 18 ]。Seoparjoo等研究了ADAM9在子宫颈癌中的表达及其相关因素，在95例宫颈癌患者中，72例(75.8%)患者表现为ADAM9阳性表达，鳞状细胞癌是宫颈癌中最常见的类型(n = 67， 70.5%)，与ADAM9阳性表达具有统计学意义的相关因素是肿瘤大小，远处转移及子宫颈癌的组织学类型(即鳞状细胞癌) [ 71 ]。在口腔鳞状细胞癌(OSCC)和口腔癌细胞系中，ADAM9表达增强，OSCC组织中ADAM9表达的免疫组化中位评分显著高于正常组织(P < 0.001)。此外，在OSCC中，高分化和中分化的OSCC中检测到强烈的ADAM9表达染色；ADAM9的表达也与细胞分化程度的增加相关(r = 0.557; P = 0.001) [ 72 ]。 Simona等研究发现，在黑色素瘤中上调miR-126-3p表达可以上调VEGF-A或ADAM9的表达，从而提高Dabrafenib药物敏感性 [ 15 ]。非瑟酮通过激活参与CTSS/ADAM9表达的MEK/ERK通路抑制了人类肾细胞癌细胞(RCC)的转移能力 [ 73 ]。MicroRNA-302a通过靶向ADAM9抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭 [ 74 ]。
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user: 10. 展望 对于许多实体肿瘤，有多项研究将ADAM9与肿瘤进展、转移形成和/或恶化结果联系起来。ADAM-9是一种在实体肿瘤中表达强烈的锌依赖细胞表面蛋白酶，参与肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌、肾癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤发生发展、侵袭转移及预后。深入研究阐述ADAM9在肿瘤中的表达与功能，并阐明其分子机制，有助于进一步认识恶性肿瘤的发生发展与转移的分子机制，拓宽临床治疗方面的应用前景，为肿瘤的早期预防、诊断提供新的潜在分子标志物，为靶向治疗肿瘤提供理论依据及新靶点。
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user: 摘要 将激光清洗技术应用于核材料的清洗回收，以铈为模拟元素，通过激光清洗回收实验和SEM、EDS、ICP-AES等元素分析手段考察了激光脉冲频率、激光器功率密度、激光清洗速率等工艺条件对不锈钢表面氧化镀层激光清洗效果的影响，总结了不锈钢上氧化镀层激光清洗回收的最佳工艺条件。
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user: 1. 引言 在核工业中的特定环境中，铀等元素通过磁控溅射等方式沉积在不锈钢板表面，铀的化学性质活泼，在不锈钢表面形成氧化层，并通过范德瓦尔斯力、毛细力和静电作用力 [ 1 ] 与不锈钢基体结合。铀是一种较为珍贵的核材料，并具有少量的放射性，出于进一步地回收物料并降低放射性废物的含量和放射性活度的目的需要对氧化层进行剥离和回收。 在核设施运行过程中，放射性核素也会吸附在核设施、设备、仪器、仪表、工件等表层，表面去污是核设施退役过程必不可少的环节 [ 2 ] [ 3 ]。通过对核设施、设备、仪器、仪表、工件等进行表面激光清洗，可以有效减少放射性废物的含量，降低操作区的放射性水平，从而降低操作人员的受照计剂量，也有利于延长核设施、设备、仪器、仪表等的使用寿命，有利于核设施、设备和工件的回收使用。 激光清洗技术是近些年来飞速发展起来的新型清洗技术，其中激光除氧化层是目前激光清洗应用最广泛的领域 [ 4 ]，其基本原理是利用金属基体与表面氧化物对某一特定波长的激光吸收系数的差异和热膨胀系数的差异，氧化物吸收激光能量后，产生振动、或瞬间受热膨胀，通过震动脱落、热应力剥离、或相爆炸等形式最终脱离基体表面，从而达到氧化物与基体分离的目的 [ 5 ]。 与水法溶解相比，激光清洗技术工艺流程短，清洗效率高，无需任何化学试剂，不产生放射性废液。与机械剥离相比，激光清洗技术通过激光作用于氧化层和不锈钢表面，可实现非接触式分离，对基体的损伤小，操作简便、安全，激光头能够进入狭小空间内作业，能适用于复杂环境，应用范围广 [ 6 ]。 目前，美国、日本、韩国、法国等都对激光去污进行了一定程度的研究，其实验对象包括放射性污染的金属表面、一回路冷却系统的碳钢和不锈钢、输送高浓度放射性废液的管道、核厂房墙壁地板、反应堆中被放射性污染的组件等 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]，我国的中国原子能科学研究院 [ 11 ]、中国核动力研究设计院 [ 12 ] 等单位近些年也开展了此方向的研究，但对于采用激光清洗技术回收核材料的研究还较少，鉴于激光清洗技术在氧化镀层清洗上的独特优势和应用价值，开展氧化镀层的激光清洗回收技术的研究十分必要。
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user: 2. 实验装置和材料 实验选用Nd:YAG激光器作为激光清洗光源。Nd:YAG激光器是固体激光器的一种，其寿命较长，产生光震荡所必需的光泵激励阈值较低，激光器的能量转换效率较高，可在室温条件下进行长期的连续运转或较高重复率脉冲式运转，是激光清洗领域最常用的激光器。Nd:YAG激光器产生的基频光是1064 nm的红外光，具有高功率、窄线宽的特点。在本文中选取的Nd:YAG激光器工作参数如表1所示。 Table 1 Technical parameters of the lase 参数 数值 激光器功率 0~500 W可调 峰值功率 18 kW 单脉冲能量 1.5 mJ 脉冲频率 0~200 kHz 输出功率稳定度 <5% 扫描宽度 5~80 mm可调 扫描速度 0~20 mm/s 最大焦深 ±10 mm 激光中心波长 1064 nm 表1. 激光器的技术参数 实验采用铈作为模拟料代替铀等放射性元素进行，实验材料为316L不锈钢板，其中铈通过磁控溅射沉积在不锈钢板上，其表面被氧化形成氧化层，如图1所示。 图1. 表面氧化后的镀铈不锈钢板
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user: 4. 结论 通过条件实验，探究了激光的脉冲频率对激光清洗不锈钢表面铈氧化镀层的影响，认为在20~100 kHz的脉冲频率范围内，脉冲频率对激光清洗效果无明显影响。激光功率密度为4.67 W/mm、激光清洗速率为10 mm/s为激光清洗回收不锈钢表面镀铈氧化层的最佳工艺条件，在此工艺条件下，铈的回收率达97.2%。通过最优化工艺条件的研究，论证了激光清洗技术用于特定条件下放射性核素清洗和回收的可行性，对于激光清洗技术在核工业的应用有重要意义。
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user: 摘要 超临界二氧化碳布雷顿循环系统凭借着效率高、结构紧凑等特点引起了全世界的关注。梳齿式密封作为循环系统旋转机械中非接触式密封形式之一，密封性能决定着系统的循环效率和系统安全性。为了研究超临界二氧化碳系统直通式梳齿密封结构泄漏特性，基于高压条件下梳齿密封结构27组实验数据，评价了2种迭代式计算模型以及2种快速计算模型的预测能力，给出了不同结构参数及热力学参数条件下的适用范围。
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user: 1. 引言 近十年来，超临界二氧化碳动力循环系统引起了全世界的关注 [ 1 ]。将二氧化碳作为动力循环工质能够避免循环中相变的发生，减少透平机械体积，提高系统体积功率密度和安全性，因此超临界二氧化碳布雷顿循环被提出用于第四代反应堆系统以及太阳能系统的能源生产中 [ 2 ]。能源循环系统中广泛存在着旋转机械，旋转机械中轴端密封、围带密封的密封性能决定着循环系统的效率。过量的工质泄漏将导致循环输出效率降低、材料脆性老化加速以及环境污染等问题 [ 3 ]。在现阶段的旋转机械轴端密封中，梳齿式密封结构凭借着结构简单、密封性能可靠等优点适用于超临界二氧化碳布雷顿循环。 梳齿密封泄漏量的理论研究起源于将梳齿几何结构类比光轴结构的粗糙元思想。Martin [ 4 ] 等人的理论研究假设压降在密封齿中是呈线性分布的，流体动能在进入每一个腔内会全部耗散，得到了形式简洁的计算泄漏量方程。该计算方程只需要几个简单的热力学参数就能计算得到工质泄漏量，有利于工程应用条件下泄漏量的快速计算，同时为后续研究提供了理论研究思路和基础。Egli [ 5 ] 等人通过实验研究水蒸气流过交错式和直通式梳齿密封结构的泄漏量，发现经过一次节流后增加的动能转化为三种能量：一部分再转换为压力，一部分消散转换为热能，一部分被带入下一个腔室，故在Martin研究的基础上引入动能携带系数增加模型精准度。后续Hodkinson [ 6 ]，Vermes [ 7 ]，Zimmerman和Wolf [ 8 ] 等人相继在该模型基础上进行修正，引入了梳齿结构几何参数等使得梳齿结构泄漏量研究更加完善。由于该类理论将梳齿结构视为整体，通过梳齿结构进出口参数直接计算得到梳齿结构泄漏量，本文将这类理论研究归类于快速计算模型，这种快速简便就能得到泄漏量的特性有利于满足工程上对新的梳齿结构泄漏量预测的需求。 有别于快速计算模型研究，迭代式计算模型研究起步较晚，是将齿间每一级腔室作为一个计算节点。首先假设每一级腔室内热工参数从而计算得到流经每个齿间的泄漏量，然后通过质量守恒条件约束每一级齿间的泄漏量收敛，最后计算出每级腔室内热工参数以及泄漏量。在迭代收敛中能减少等熵假设及忽略摩擦压降带来的误差，提升模型计算精度。De Saint Venant [ 9 ] 等人基于一维水平流动的能量守恒方程，结合等熵假设和理想气体假设得到了梳齿结构流量方程。Neumann [ 9 ]，Scharrer [ 10 ]，Esser和Kazakia [ 11 ] 等人相继在该方程的基础上进行了修改，增加了流量系数与动能携带系数，提高了模型在不同条件下计算的精准度。现阶段迭代式计算模型与快速计算模型主要研究的工质对象是空气或者水蒸气等，并且在公式推演中基于理想空气假设，针对对于高压条件下超临界二氧化碳泄漏量理论模型研究是相对缺乏的。 本文基于已有梳齿密封结构实验参数，对现有2种迭代式计算模型以及2种快速计算模型进行评价。研究了4种模型在5种压比Pr (1.1至1.3)、5种上游滞止压力P in (7.5 MPa至14 MPa)、4种腔长与间隙比L/Cr (4.0至11.35)共27种不同结构参数及热力学参数条件下的预测能力和适用范围。通过数据评估获得合适的模型，对指导梳齿密封结构设计起到重要作用。