DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 摘 要 倒立摆系统作为一种天然不稳定的系统，经常被用作验证控制方案是否可行的实验平台。在研究系统组成的基础上，建立了直线倒立摆系统的数学模型。在MATLAB的Simulink中，分别利用模块搭建的方法和编写S函数的方法，建立了直线倒立摆系统的线性和非线性模型，利用GUI完成PID控制器的设计。利用PID控制算法对直线倒立摆系统进行控制。仿真结果表明所用方法的可行性，为PID控制算法在倒立摆实验装置中的应用奠定了基础。 关键词 :倒立摆系统，PID控制，MATLAB仿真，GUI Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 倒立摆系统是一个非线性且不稳定的系统，是研究控制理论的经典实验装置。其结构简单、成本低廉的特点，使其成为进行控制理论教学及开展各种控制实验的理想实验平台，也是研究智能控制方法较为理想的实验装置 [ 1 ] 。倒立摆结合了控制理论、计算机控制等多个领域，其自身又是一个绝对不稳定、高阶次、多变量、强耦合的非线性系统，因此许多研究控制的人都把它当做经典的控制对象来研究。在欧美等发达国家的高等院校，它已成为必备的控制理论教学实验设备 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] 。 1984年，Wattes首先研究了用LQR方法控制倒立摆 [ 5 ] 。1994年，北京航空航天大学张明廉教授提出“拟人智能控制理论”框架，利用了人工智能与自动控制理论的结合，它是由规约规则和动态定性推理系统组成 [ 6 ] 。这种理论从被控对象的物理模型出发，引入了规约的思想，在定性分析中融合了人的控制经验和知识，由规则直接形成控制方法，成功地实现三级倒立摆的实物控制。1995年，T.-H. Li等人利用两个并行的模糊控制来分别控制小车位置和摆杆角度，用实验证明了智能控制方法可以应用在倒立摆系统上 [ 7 ] 。1996年，张乃尧等人采用模糊双闭环的控制方案成功地实现了对直线一级倒立摆的稳定控制 [ 8 ] 。2002年，李洪兴教授采用变论域自适应模糊控制的控制方法，在世界上首次实现了四级直线倒立摆的稳定性控制。 以上各位学者的工作充分表明了研究倒立摆系统控制方法的重要性。本文在对直线倒立摆系统进行机理分析的基础上，建立了其完整的非线性模型和线性模型。利用MATLAB GUI开发出PID仿真平台，利用本仿真平台对PID的控制算法进行仿真并评估该控制方法应用到倒立摆系统的可行性。
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user: 2. 倒立摆的数学模型 2.1. 直线一级倒立摆简介 完整的倒立摆系统包括计算机、运动控制卡、伺服系统、倒立摆本体和光电码盘、反馈测量元件等几大部分，共同组成一个闭环系统。闭环系统由控制器、受控对象和反馈通路组成。在倒立摆系统中控制器为计算机，受控对象为小车与摆杆。如图1所示。 2.2. 模型的建立 忽略空气阻力及各种摩擦力，将倒立摆系统看成由小车和匀质刚性摆杆组成。系统内部各项参数见表1。 分析小车水平方向所受的合力，可得： 图1. 直线型倒立摆系统结构图 Table 1 System resulting data of standard experimen 变量名称 数值 小车质量(M) 0.5 kg 摆杆质量(m) 0.2 kg 小车摩擦系数(b) 0.1 N/m/sec 摆杆转动轴心到杆质心的长度(l) 0.3 m 摆杆转动惯量(I) 0.006 kg∙m 2 加在小车上的力(F) 小车位置(x) 摆杆与垂直向上方向的夹角(f) 表1. 标准试验系统结果数据 (1) 在摆杆水平方向的受力进行分析可得： (2) 即： 将(2)代入(1)可得： (3) 对摆杆进行竖直方向的受力分析得： (4) 力矩平衡方程： (5) 将(4)、(5)合并得： 设 为倒立摆系统的竖直平衡状态， 为角度偏差， 一般不超过20˚。即 用u来代表施加于小车上的力得： 通过Laplace变换可以得到系统的传递函数模型： 其中， 。代入数值可得系统传函的表达式：
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user: 3. PID控制器的建立 3.1. PID控制器设计MATLAB仿真 用MATLAB可以建立PID控制器的Simulink的模型仿真，既可以节省编程的工作量，也可以清楚直观的进行操作。当模拟运行遇到问题时，可以轻松改变仿真中的参数，完成对仿真系统的校正。如图2所示。 3.2. 页面模块 这里使用GUI来完成页面的设计。页面包含三个数值输入文本框(edit)，分别对应K P 、K I 、K d 。一个按钮(pushbutton)作为程序的运行按钮；一个图像显示的窗口(axes)作为图像的输出窗口。使用者只需在K P 、K I 、K d 的文本框中输入想要仿真的数值然后单击上面的按钮即可进行仿真。 3.3. 界面的设计过程及设计结果 在GUI中设计页面，设计步骤如下： ① 首先，新建一个GUI，在界面编辑窗口中放入三个静态文本(text)从上到下以此命名为K P 、K I 、K d 。在它们的后边分别放一个输入文本框(edit)。在右侧空白的区域放一个大小合适的按钮(pushbutton)，在下方的空白区域放一个图像输出窗口(axes)。 ② 给三个输入文本框创建独立的回调函数，将程序运行时操作者输入的数值从上到下依次保存为m 函数中的变量P、I、D。作为PID控制器的系数带入Simulink中，并将按钮单击动作时触发运行事件。 ③ 将Simulink框图中的输出out1与GUI中的 axes相连接，使得仿真生成的曲线图在GUI的界面中显示。程序界面如图3所示 本模拟过程由软件来实现，只需要利用计算机就可以完成对PID算法的模拟，减少了实验的成本并提高了实验效率。
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user: 4. PID控制参数设定及仿真 4.1. PID控制器设计MATLAB仿真 在Simulink的模型仿真中，双击Scope打开图像生成窗口。在PID控制器中输入K P 、K I 、K d 的系数 ； ； ；单击运行曲线图如图4所示。 图2. 倒立摆系统Simulink仿真结构图 图3. GUI程序界面 从图4可以看出，控制曲线不收敛，因此增大控制量。将PID控制器系数改为 ； ； ；曲线如图5所示。 为消除系统的振荡，增加微分控制参数K d 。将PID控制器系数改为 ； ； ；曲线如图6所示。 图4. PID响应曲线(K P = 1; K I = 1; K d = 1) 图5. PID响应曲线(K P = 100; K I = 1; K d = 1) 图6. PID响应曲线(K P = 100; K I = 1; K d = 20) 从PID控制器系统响应曲线可以看出，系统在K P ，K I ，K d 没有调整前是不稳定的。当 ； ； 时系统经过3 s的波动达到稳定状态，此时稳态误差为0。此时调整微分系数K d ，可以有效减小系统超调量，使系统到达稳定时间减少为2 s。成功实现尽量少的时间达到稳定的目的。 4.2. PID控制实验 将参数 ； ； 在实验室直线一级倒立摆上进行控制实验，发现倒立摆可以实现较好的稳定性，摆杆的角度在3.14 rad左右。但是PID 控制器并不能对小车的位置进行控制，小车会沿滑杆有稍微的移动。当施加干扰后系统仍可以较好的抵换外界干扰，在干扰停止作用后，系统能很快回到平衡位置。证明了在PID控制器上仿真出的参数在实际的直线一级倒立摆控制上与仿真结果大致相同。
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user: 5. 结论 本文从倒立摆的数学建模入手，在此基础之上基于MATLAB中Simulink的仿真建模。并使用GUI设计并建立PID控制器，对K P 、K I 、K d 的参数进行调整。通过生成的控制曲线来评估这一组参数的控制效果。将得到的参数在倒立摆系统上进行验证，减少了实验的时间与花费的精力。本课题经检验达到了预期的目标，取得了理想的结果。但平衡的时候出现的小幅的振荡等问题都有待于改善，今后会在单纯的PID控制中加入模糊控制，来进行PID控制器的优化设计。
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user: 摘 要 由于人类活动及工业化的迅速发展，沿海滩涂湿地正在遭受前所未有的污染和破坏，其中铅、镉污染是主要的污染之一，而碱蓬有较强的重金属耐受性和耐盐性，在修复污染的同时也具有较高的经济价值。为研究不同生长时期碱蓬在Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫下的生理生化响应，采用蛭石室外培养，对碱蓬进行Pb 2+ 、Cd 2+ 单一及复合污染处理，结果表明：Pb 2+ 、Cd 2+ 单一及复合胁迫下，碱蓬幼苗期与花期的株高、超氧化物歧化酶(SOD)活性、脯氨酸(Pro)含量、丙二醛(MDA)含量均呈显著差异(P < 0.05)。碱蓬在抵御外界Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫时，以SOD活性的快速响应为先，Pro的渗透调节抵御为后，MDA的无序变化实时表征植物的受损状况。总之，碱蓬对Pb 2+ 、Cd 2+ 的胁迫有较强的自我调节能力，具有修复Pb 2+ 、Cd 2+ 污染的潜力，这为进一步利用盐生植物碱蓬修复滨海滩涂等高盐碱土壤，以及抵御Pb 2+ 、Cd 2+ 等重金属复合污染的损伤机制研究提供了理论依据。 关键词 :碱蓬，Pb 2+ ，Cd 2+ ，胁迫，生理生化 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 工业企业的临海布局、人类活动的增加，远超海洋环境容量，造成海洋滩涂重金属含量超标，破坏海洋湿地生态系统，影响海产品品质，严重制约当地的渔业经济，也不利于滨海经济的可持续发展 [ 1 ] [ 2 ] 。Pb 2+ 、Cd 2+ 是动植物生长的非必需元素 [ 3 ] ，镉会导致细胞死亡，植物黄化枯萎 [ 4 ] 。在铅胁迫时，即使很低的浓度，植物组织也会受到损害，如微核，DNA破坏 [ 5 ] ，膜通透性的改变 [ 6 ] 和部分酶活性降低 [ 7 ] 等。此外，铅对镉在植物体内的积累有增强效果 [ 8 ] 。植物对铅和镉累积，也会刺激超氧自由基产生，造成植物氧化应激 [ 9 ] ，使膜脂过氧化，引起超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase， SOD)活性、丙二醛(Malondialdehyde， MDA)含量、脯氨酸(Proline， Pro)含量等生理生化指标发生变化 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] 。 碱蓬(Suaeda salsa)属藜科，是本土一年草本真盐生植物，常见于盐碱地及沿海滩涂，在新疆、蒙、甘、陕、鲁、浙、晋、辽等省区均有分布。碱蓬3~6月出苗，7~8月为花期，9~10月为结实期，11月为种子枯熟期 [ 13 ] 。由于碱蓬耐盐性强，又为土著植物，从而受到盐碱湿地修复领域的广泛关注，对其重金属累积能力 [ 14 ] 、有机物吸收能力 [ 15 ] 以及对氮磷的吸收与再分配作用 [ 16 ] 等都有相关的研究报道，在一些沿海滩涂地区盐生植物碱蓬作为优势植物，可明显吸收盐渍土壤中的Cd、Pb等重金属 [ 17 ] ，被誉为盐碱地修复的先锋植物 [ 18 ] 。本文研究并比较了不同生长时期的碱蓬(幼苗期和花期)，在Pb 2+ 、Cd 2+ 单一及复合胁迫下的生理生化响应，旨在为碱蓬的生长代谢过程中长期适应和抵御Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫的损伤机制，及其修复重金属污染的高盐碱滩涂应用等提供理论依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 试剂与材料 盐地碱蓬(采集于杭州湾庵东湿地)；塑料花盆(直径16 cm，高16 cm)；蛭石(φ = 2~4 mm，填充花盆至2/3体积)、海水(取自象山港)。蛭石和海水中的Pb 2+ 、Cd 2+ 背景值如表1。 2.2. 试验方法 根据《土壤环境质量标准》 (GB15618-2008)、土壤背景值及工业区附近土壤中的Pb 2+ 、Cd 2+ 浓度，进行完全交互实验设计，共16个处理组，每个处理4盆重复，如表2所示。 实验分别于当年5月(幼苗期)，7月(花期)开始，时间均为60天，Pb 2+ 和Cd 2+ 以Pb(NO 3 ) 2 ∙6H 2 O、Cd(NO 3 ) 2 ∙4H 2 O配成溶液形式加入，于种植前2周平衡固定、装盆，其中，不添加任何重金属的为对照组。当年5月，采集株高相近的幼苗，洗净根部泥沙，种于上述盆中，每盆2棵，将蛭石填入花盆中，占盆体积2/3，以Hoagland营养液:海水 = 1: 1 (盐度约为1.6%)定期浇灌，室外自然光照下培养，以Hoagland营养液:海水 = 1: 1 (盐度约为1.6%)定期浇灌，既能保持基质湿润，还能满足碱蓬对盐分的需求，并逐步适应滨海环境中的土壤盐度。参照文献 [ 19 ] ，在幼苗期、花期分别检测株高，以盆为单位，采集每株主干上相同高度、成熟度一致且生长状况相近的绿色叶片，测量其超氧化物歧化酶(SOD)活性(氮蓝四唑法) [ 20 ] 、丙二醛(MDA)含量(硫代巴比妥酸法) [ 21 ] 、脯氨酸(Pro)含量(酸性茚三酮比色法) [ 22 ] ，每组重复测量3次。数据采用SPSS 20组间方差分析、Graph Pad Prism 5作图，结果以均值±标准差表示。
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user: 4. 讨论 大部分研究表明 [ 23 ] [ 25 ] [ 27 ] (周玉卿等，2012；徐学华等，2009；郭天荣等，2015)，低浓度的重金属对植物有促进作用，高浓度则为抑制作用，甚至导致死亡。本试验中，幼苗期碱蓬在单一Cd 2+ 胁迫下符合这一规律；在单一Pb 2+ 胁迫下，低浓度(20 mg·kg −1 )的Pb 2+ 促进生长，较高浓度(200 mg·kg −1 )的Pb 2+ 抑制生长，更高浓度(500 mg·kg −1 )的Pb 2+ 反而促进碱蓬生长，出现异常，这可能是由于碱蓬对高Pb 2+ 存在一种规避机制，与何洁 [ 28 ] 研究翅碱蓬对单一铅的累积吸收结果类似；但随碱蓬继续生长，胁迫时间延长，花期碱蓬在各个浓度胁迫下的株高均显著小于对照组(P < 0.05)，抑制作用显著，这可能是由于碱蓬体内累积了一定量的重金属，阻碍碱蓬生长。单一胁迫与复合胁迫相较，任意浓度的Cd 2+ 与200 mg·kg −1 的Pb 2+ 复合胁迫，株高均显著大于相应的单一Pb 2+ 胁迫(P < 0.05)，为拮抗作用；与500、20 mg·kg −1 的Pb 2+ 复合胁迫，株高均显著小于相应的单一Pb 2+ 胁迫(P < 0.05)，为协同作用，并非两种重金属的复合毒害作用一定强于单一重金属的毒害，这与刘大林 [ 10 ] 以Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫饲用高粱、郭天荣 [ 27 ] 以Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫空心菜时，复合胁迫较单一胁迫会加剧对植物的毒害作用的结果不同，可能原因是与植物本身的调节方式有关，或许又与重金属在植物体内存在的部位、形式、累积量有一定联系，有待于进一步研究。 逆境胁迫对植物的损伤常常是由于产生过多的体内活性氧(ROS)，从而导致膜脂受损，细胞功能丧失。植物往往能有限地在体内合成一些物质来进行自我调节，以适应外界环境 [ 25 ] 。SOD活性在重金属胁迫下，往往有3种表现形式 [ 24 ] ：一是随浓度的增加而增加；二是随浓度增加先升高后下降；三是随浓度的增加而下降，本试验的SOD活性符合后两种情况。单一Pb 2+ 胁迫以及与20 mg∙kg −1 的Cd 2+ 复合胁迫，SOD活性均随Pb 2+ 增加先升高后降低，而与5， 50 mg∙kg −1 的Cd 2+ 复合胁迫，SOD活性随Pb 2+ 浓度增加而降低，这可能是由于Cd 2+ 浓度的增加使SOD调节机制受损，但其具体受损机理需进一步研究。 幼苗期，碱蓬在单一Pb 2+ 、Cd 2+ 胁迫下，Pro含量随重金属浓度增加先升高后降低；与Cd 2+ 复合胁迫时，Pro含量随Pb 2+ 浓度增加而降低；花期碱蓬的Pro含量基本高于对照组，说明幼苗期碱蓬的Pro调节能力较弱，而在花期Pro调节作用变得较为明显。在单一重金属胁迫时，Pro与SOD相比较，Pro在遇到重金属胁迫时，其响应较慢，在重金属浓度升高后才逐渐产生且产生量较SOD少，因此其调节存在先后，SOD为先，Pro为后。 幼苗期的MDA含量高于花期，随Pb 2+ 浓度增加呈无序变化，与孙永林 [ 12 ] 在研究Pb 2+ 对黄瓜的生理影响中，随Pb 2+ 浓度增加MDA含量也增加的结果不同，这可能是碱蓬对Pb 2+ 存在独特的调节机制。 综上所述，幼苗期，SOD活性能迅速对重金属胁迫响应，Pro在花期其渗透调节作用变得较为明显能抵御外界重金属胁迫，MDA含量呈无序变化，代表机体膜质受损状况，其无序变化随外界重金属胁迫及碱蓬体内Pro、SOD活性等组成的调节系统的动态变化而变化。因此，碱蓬在抵御外界重金属胁迫的整个过程中，会启动SOD、Pro两种物质协同抵抗，各自的调节能力有限，且存在先后之分，并能通过MDA含量实时表征植物的受损情况。
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user: 5. 结论 (1) Pb 2+ 、Cd 2+ 单一及复合胁迫均对碱蓬有毒害作用，且时间延长毒害作用增加，表现为抑制碱蓬生长；(2) SOD和Pro对重金属调控起重要作用，SOD响应为先，Pro为后；(3) 无论在幼苗期还是花期，当200 mg∙kg −1 Pb 2+ 与20、50 mg∙kg −1 Cd 2+ 复合胁迫时，重金属之间表现为拮抗作用，其他Pb 2+ 浓度与Cd 2+ 复合时均为协同作用。总之，碱蓬对重金属胁迫有独特的调节机制和较强的耐受性，且应对重金属复合胁迫的耐受性更强，因此碱蓬对于滨海滩涂铅、镉重金属污染修复有极大的应用潜力。
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user: 摘 要 外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma， PTCL)是一种多样化的淋巴系统恶性增殖性疾病，起源于胸腺后成熟的T淋巴细胞或NK/T细胞，占非霍奇金淋巴瘤的5%~15%，呈现明显的异质性，即临床和病理形态的多样性。骨髓纤维化是一种造血组织中胶原增生，造血功能严重受到影响的一种骨髓增生性疾病。外周T细胞淋巴瘤合并骨髓纤维化少见。 关键词 :外周T细胞淋巴瘤，骨髓纤维化 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 骨髓纤维化是一种造血组织中胶原增生，造血功能严重受到影响的一种骨髓增生性疾病。血液系统恶性肿瘤合并骨髓纤维化临床少见，其中淋巴瘤合并骨髓纤维化更为少见，外周T细胞淋巴瘤合并骨髓纤维化更为罕见，其发生机制不明，尚无统一标准治疗方案，在临床工作中为诊疗增加困难。为提高对该病的的认识，现将我院1例外周T细胞淋巴瘤合并骨髓纤维化患者的临床资料分析如下，并进行相关的文献复习。
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user: 2. 病历资料 患者女，46岁， 2013 年 09 月 01 日 无明显诱因出现头晕、乏力，于 2013 年 09 月 04 日 至大理大学附属医院血液科就诊，血常规：WBC 4.1 × 10 9 /L，RBC 4.85 × 10 12 /L、Hb 88 g/L、PLT232 × 10 9 /L、N 45.1%、L 40.7%、RET% 1.8%，未治疗。 2014 年 03 月 16 日 上述症状再伴发热，体温高达 40 ℃ 。 2014 年 03 月 19 日 血常规：WBC 2.90 × 10 9 /L，RBC 3.32 × 10 12 /L、Hb 81 g/L、PLT 232 × 10 9 /L、N 45.1%、L 40.7%、RET% 1.8%。以“全血细胞减少原因待查”收住血液科。全身皮肤黏膜苍白，全身浅表淋巴结未触及肿大。胸廓正常，无胸骨叩、压痛。心肺(-)。腹部柔软，无压痛及反跳痛，脾脏未触及肿大，左肋下4 cm可触及肝脏。骨髓细胞形态学：目前骨髓巨核系成熟障碍；红系占0.38，铁染色(-)，符合IDA诊断。 03 月 26 日 骨髓病检：骨髓极度活跃，造血组织约占90%~95%，三系可见。粒红比例减低，红系显著增生，各阶段细胞均可见；中幼以上阶段粒系增多；可见红细胞“热点”及ALIP现象；巨核细胞增生，小簇状聚集，可见单圆核及小巨核；网状纤维轻度增生(Ag+-++)。免疫组化结果显示：CD 235a (+红系)，MPO(+粒系)，CD68(+粒系及单核组织细胞)。腹部彩超提示：脾大声象。诊断：1. 脾功能亢进；2. 缺铁性贫血；3. 观察MDS。经抗感染、补充造血原料治疗后好转出院，出院时脾脏仍大。 2014 年 04 月 24 日 复查血常规：WBC 3.2 × 10 9 /L，RBC 3.5 × 10 12 /L、Hb 105 g/L、PLT 97 × 10 9 /L、N 0.4、L 39.5%、M 0.15。之后未在规律复诊。 2015 年 04 月 18 日 患者无明显诱因再次出现发热，体温波动于37℃~38℃，再次行血常规检查：WBC 2.18 × 10 9 /L，RBC 3.45 × 10 12 /L，PLT 35 × 10 9 /L，N 0.4，L0.45，M 0.15。查体：贫血貌，全身皮肤黏膜苍白，无淤点、瘀斑。心率116次/分，律齐，各瓣膜区未闻及病理性杂音。腹部柔软，无压痛及反跳痛，右肋骨下4 cm可触及肝脏，质软，边缘顿，无触痛及压痛。脾大，甲乙线15 cm，甲丙线19 cm，丁戊线4 cm，表面光滑，无触压痛。LDH 334 U/L，CRP 35.6 mg/L，血沉35 mm/H。腹部彩超：1. 肝大声象；2. 巨脾声象；3. 左颈部、双腋窝、双腹股沟多发肿大淋巴结声象(最大一枚2.1 × 0.8 cm)。 2015 年 05 月 08 日 骨髓病检：骨髓增生极度活跃，脂肪组织明显减少。造血组织减少，三系可见(红系CD 235a +)；粒系MPO+，PAS+；巨核细胞CD61(+)。间质内见中等偏小异性细胞增生浸润。网状纤维轻度增生(Ag+++)。免疫组化结果显示：异型细胞呈CD20(-)、CD3(+部分)，CD34(-)，CD61(+)，CD68(+)，CK-P(-)，Vim(+)，CD43(+部分)，CD45RO(+部分)，CD5(+部分)，CD99(±)，Ki-67(+5%)，TDT(-)，CD 79a (-)。综上考虑T-淋巴细胞性白血病，建议行流式细胞术或其他相关检查进一步确定，并排外肝脾T细胞淋巴瘤。 05 月 21 日 骨髓免疫分型结果：提示T细胞淋巴瘤。 2015 年 05 月 22 日 复查骨随细胞形态学：目前骨髓巨核系增生伴障碍，早幼粒细胞占0.14。诊断：1. 继发性骨髓纤维化；2. T细胞淋巴瘤IVB期。2015年05月23日行化疗，根据患者身高153 cm，体重56 Kg，体表面积1.5561 m 2 ，具体为：长春新碱2 mg d1、8、15、22，环磷酰胺1000 mg静滴d1，地塞米松15 mg d1-14逐渐减量。化疗过程中出现粒细胞缺乏，血小板最低降至20 × 10 9 /L，骨髓抑制情况重，予粒细胞集落刺激因子升白细胞治疗后，调整化疗方案为CHOP方案，于 2015 年 06 月 17 日 、 07 月 14 日 、 08 月 14 日 给予CHOP方案，具体为：环磷酰胺1100 mg d1，多柔比星70 mg d1，长春新碱2 mg d1，地塞米松15 mg d1-15，化疗顺利结束。化疗后患者肝脾肿大程度较前缩小，肝大，右肋下3 cm可触及，质软，边缘钝，无触压痛；脾大，甲乙线2 cm，甲丙线3 cm，丁戊线-10 cm，表面光滑，无触压痛。 09 月 02 日 予VDLD方案化疗：长春新碱2 mg (d1、8、15、22)、柔红霉素60 mg (d1-3)、门冬酰胺酶10000 IU (d11-18)，地塞米松10 mg d1-28，化疗过程中患者骨髓抑制重，持续粒细胞缺乏，予升白细胞治疗门冬酰胺酶推迟至第19天开始使用共7天， 9 月 24 日 (化疗第25天)全身肌肉酸痛，疼痛程度剧烈难忍，活动受限。复查血常规：WBC 1.58 × 10 9/ L，NEUT # 0.58 × 10 9 /L，RBC 2.38 × 10 12 /L，Hb 66 g/L，PLT 54 × 10 9/ L。后患者要求自动出院。未再返院，出院后2月电话随访患者已逝。
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user: 3. 讨论 外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma， PTCL)是一种多样化的淋巴系统恶性增殖性疾病，起源于胸腺后成熟的T淋巴细胞或NK/T细胞，占非霍奇金淋巴瘤的5%~15%，呈现明显的异质性，即临床和病理形态的多样性 [ 1 ] 。骨髓纤维化是一种造血组织中胶原增生，造血功能严重受到影响的一种骨髓增生性疾病。 骨髓纤维化是一种由于骨髓造血组织中胶原增生，其纤维组织严重地影响造血功能所引起的一种骨髓增生性疾病。骨髓纤维化包括原发性骨髓纤维化和继发性骨髓纤维化。原发性骨髓纤维化(PMF)并不常见，目前认为系克隆性造血祖细胞异常增生，尤以巨核细胞系为主。血小板衍化生长因子和异常巨核细胞相关因子刺激纤维母细胞增殖，胶原和纤维连结蛋白合成增加，引起骨髓纤维化，出现干抽，肝、脾、淋巴结髓样化生。晚期发生骨髓硬化症。临床表现为全血细胞相继进行性减少，骨髓衰竭，髓外造血，外周血中检出幼红幼粒细胞和泪滴形红细胞。继发性骨髓纤维化是指在原发病基础上出现骨髓纤维组织增生，并出现造血功能异常。 继发性骨髓纤维化常合并造血系统恶性肿瘤，然而，恶性淋巴瘤合并骨髓纤维化非常罕见，目前国内外个案报道共约100例，本例以MF为首发的外周T细胞淋巴瘤，并且存在肝脏肿大和巨脾，非常罕见。对该例患者，我们考虑MF是淋巴瘤侵犯骨髓的结果。之前有报道，诊断淋巴瘤的同时不仅可以后于淋巴瘤的发生，也可以同时或早于淋巴瘤发生，该例是早于淋巴瘤的发生 [ 2 ] 。 淋巴瘤合并骨髓纤维化是临床表现以两系或者三系减少，本例患者以三系减少为主。JAK2/V617多阴性，因此与原发性骨髓纤维化具有鉴别的意义 [ 3 ] 。 恶性淋巴瘤合并骨髓纤维化机制目前尚不清楚，先前的很多研究再到目前研究，普遍认为细胞因子异常在此类疾病中发挥重要作用。例如MF淋巴瘤中TNF-α推测为骨髓纤维化的报道，血清TNF-α在血清中水平增高，经过一个周期CHOP方案治疗后，TNF-α水平下降 [ 4 ] 。也有报道称进展较快的外周T细胞淋巴瘤患者TGF-B水平升高 [ 5 ] 。 外周T细胞淋巴瘤治疗面临巨大挑战，对化疗容易产生耐药性，目前缺乏有效的生物技术治疗 [ 6 ] 。合并骨髓纤维化的外周T细胞淋巴瘤在治疗方面将难度增加，具有发病急、预后差等特点。本例患者接受4周期化疗后虽有肝脾缩小，但效果仍不佳。淋巴瘤合并MF预后差。 淋巴瘤合并MF方案选择争议不一，尚无标准化疗方案。现阶段化疗主要针对淋巴瘤本身进行治疗。化疗后进行骨髓复查，骨髓纤维化病变程度减低也可以作为疗效评价，提示淋巴瘤得到了控制。也有报道建议使用免疫调节疗法，有一定的疗效 [ 7 ] 。
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user: 摘 要 近年来由于饮食与生活型态改变，使得肥胖盛行率在过去数十年间以倍数方式急遽增加。苦瓜(Momordica charantia)已知含有三萜类、酚类物质与共轭亚麻油酸，过去已被长期使用作为治疗第二型糖尿病与发炎反应上，然而利用新育种苦瓜探讨3T3-L1前脂肪细胞对细胞周期调控之影响，目前仍缺乏相关文献资料。因此，本研究利用三种新育种苦瓜 (苹果苦瓜、苦瓜明道选72与苦瓜冲绳选33) 之果肉与种子，分别以水、甲醇、乙醇、丙酮与乙酸乙酯所制备之萃取物，探讨三种新育种苦瓜对3T3-L1前脂肪细胞之细胞周期调控之影响。结果显示，在30种苦瓜萃取物中，以苹果苦瓜种子水萃取物具有最佳抑制3T3-L1前脂肪细胞生长之作用，在细胞周期分析结果显示，其亦可发现3T3-L1前脂肪细胞之细胞周期停滞于G1期。在分子机制结果显示，苹果苦瓜种子水萃取物可藉由增加p-p53、p27与p18之蛋白表现，进而抑制CDK2、CDK6、cyclin D1与p-Rb之蛋白表现。综合上述结果显示，苹果苦瓜种子水萃取物可藉由抑制3T3-L1前脂肪细胞之增生，并使细胞周期停滞于G1期。 关键词 :3T3-L1前脂肪细胞，新育种苦瓜，细胞周期 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肥胖为已开发和开发中国家之严重公共健康议题之一，亦是造成许多慢性疾病发生之危害因子，例如：第二型糖尿病、心血管疾病、高血压、血脂异常、肝脏疾病、骨关节炎与癌症。世界卫生组织(world health organization， WHO)在2008年的统计数据显示，目前世界上约有15亿的成年人口有体重过重的情形，亦有超过十分之一的人口具有肥胖的问题，预计2023年将有超过23亿人会有体重过重的问题 [ 1 ] 。在2005~2008年的台湾「国民营养健康状况变迁调查」报告显示，在近十年间，成年男性与女性体重过重与肥胖的比例，分别增加17.4%和5.2% [ 2 ] 。此外，根据卫生福利部统计，2012年国人十大死因中就有八项与肥胖有密切相关，此显示台湾民众因生活型态的改变，使得肥胖问题逐年增加。营养流行病学研究指出，用药物和手术等方式治疗肥胖，可能带给身体极大的副作用 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] 。因此，藉由摄食天然蔬果而获取机能性成分，作为改善肥胖之作用，已知是一种对身体负担较小，且能达到预防或推迟疾病的方法，亦是目前医学相关研究着重的目标和趋势之一。 苦瓜学名为Momordica charantia，别名为锦荔枝、癞瓜或凉瓜，为开花之葫芦科藤本植物。研究指出，苦瓜含有多种生理活性之成份，例如：生物碱(alkaloids)、固醇类葡萄醣苷(steroidal glucosides)、酚类物质(phenolics compounds)、溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholines， LPC)、共轭亚麻油酸异构体(conjugated linolenic acid isomers)与葫芦烷型三萜类化合物(cucurbitane-type triterpenoids) [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] 。许多文献指出，苦瓜能有效的增加胰岛素敏感性 [ 11 ] 、降低发炎反应 [ 12 ] [ 13 ] 、降血脂 [ 14 ] ，以及抑制癌细胞增生 [ 15 ] [ 16 ] 。研究亦指出，苦瓜能藉由降低PPARg、SREBP与perilipin之基因表现，并增加脂解作用，而达到抑制人类初代脂肪细胞的分化 [ 17 ] 。在本研究室先前研究显示，利用分离、纯化与鉴定等方法，从新育种苦瓜中分离出四种已知的三萜类化合物，且此分离之三萜类化合物能显著抑制LPS所诱导RAW 264.7巨噬细胞之一氧化氮与发炎相关激素之分泌 [ 18 ] 。 肥胖是由于前脂肪细胞的增生与分化，进而导致脂肪油滴之累积。因此，透过抑制前脂肪细胞的有丝分裂与脂肪细胞分化机制，将有助于抑制肥胖与相关疾病之发生 [ 19 ] 。由于肥胖的问题日渐严重，相对的抗肥胖的健康食品市场是具有发展潜力，但目前在台湾提供消费者可选择之不易形成体脂肪健康食品主要以纤维成份、茶类产品与结构性油脂为主，可选择之产品相当有限，且缺乏新颖性之材料作为抗肥胖之素材。因此，本研究将以新育种苦瓜作为材料并利用3T3-L1前脂肪细胞试验模式，探讨三种新育种苦瓜之果肉和种子利用不同溶剂(水、甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯)所萃取制得之萃取物，对3T3-L1前脂肪细胞生长和细胞周期停滞之影响，并厘清其分子作用机转。
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user: 2. 方法 2.1. 试验样品 本研究使用之三种新育种苦瓜材料来源由台湾明道大学精致农业学系刘程炜老师提供，其为利用纯化选种与田间试验培育出三种新育种苦瓜品系，分别为苹果苦瓜(Momordica charantia)、苦瓜明道选72 (Momordica charantia MDS72)与苦瓜冲绳选33 (Momordica charantia ONS33)。苹果苦瓜为早生种，果色白，果面珍珠粒，果型短肥型，果重约500公克，为白玉苦瓜突变种，为台湾中部地方品种；苦瓜明道选72亲本为台湾山苦瓜与印度苦瓜，人工杂交后经5年选拔后之新品种，果色深绿，果面刺排粒，果型细长型，果重约450公克；苦瓜冲绳选33为收集自日本琉球冲绳地区之苦瓜品种，经5年栽培驯化后选拔之地方品种，果色绿，果面珍珠粒，果型细长型，果重约600公克，分别收集此三种苦瓜之种子与果肉并将其冷冻干燥，再制成苦瓜种子与果肉粉末。 2.2. 不同品系、部位与溶剂之苦瓜萃取物制备 分别秤取4克苹果苦瓜、苦瓜明道选72与苦瓜冲绳选33之苦瓜之果肉与种子粉末于离心管中，再加入40 mL之不同极性溶剂(水、甲醇、乙醇、丙酮与乙酸乙酯)，以parafilm将管壁封好，利用面震荡器(rotator shaker)于室温下震荡(100 rpm、24小时)后，经过滤后以减压浓缩或冷冻干燥(针对水萃物)方式进行浓缩与定量，每一种溶剂进行三重复试验，并计算其萃取率。不同品系、部位与溶剂之萃取物缩写名称为：苹果苦瓜(Momordica charantia， MC)、苦瓜明道选72 (Momordica charantia MDS72， MCMDS72)、苦瓜冲绳选33 (Momordica charantia ONS33， MCONS33)、种子(seed， S)、果肉(fruit， F)、水萃取物(water extract， WE)、甲醇萃取物(methanol extract， ME)、乙醇萃取物(ethanol extract， EE)、丙酮萃取物(acetone extract， AE)与乙酸乙酯萃取物(ethyl acetate extract， EAE)。 2.3. 3T3-L1前脂肪细胞之培养 3T3-L1前脂肪细胞株(BCRC No.60159)购自财团法人食品工业发展研究所，生物资源保存及研究中心(台湾，新竹)。以培养基[90% Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM 含有4 mM L-glutamine与4.5 g/L glucose)， 1.5 g/L sodium bicarbonate， 10% bovine calf serum与1% Penicillin-Streptomycin]，于37˚C、5%二氧化碳培养箱培养，平均每两天更换一次培养液。 2.4. 3T3-L1前脂肪细胞之细胞生长测定 将3T3-L1前脂肪细胞依1 ´ 10 4 cells/well种入96 well plate中，以200 mL high-glucose DMEM培养，并分别加入不同品系、部位与溶剂之苦瓜萃取物(0， 50， 100与250 mg/mL)，进行48小时培养。先从每个well中取出110 mL之培养液，再分别加入10 mL之MTT [3-(4，5-dimethylthiazolyl-2)-2，5-diphenyltetrazolium bromide] solution (5 mg/mL)于培养箱中培养3小时后，将所有培养液移除，再加入80 mL之DMSO后，置于暗室2小时，以溶出formazan，并利用全波长酵素免疫分析仪(UVM340， Biochrome， USA)，以570 nm测定吸光值，计算数值变化。 2.5. 3T3-L1前脂肪细胞之细胞周期分析 将培养于10 cm dish之3T3-L1前脂肪细胞(1 ´ 10 6 cell/mL)以不同品系、部位与溶剂之苦瓜萃取物处理后(0， 25， 50与100 mg/mL、24小时)，以trypsin-EDTA切下后，以1000 rpm、4℃离心5分钟收集细胞，加入1 mL之70%乙醇固定细胞，室温下反应20分钟后，以4℃、900 rpm离心5分钟除去乙醇，并以1 mL之PBS清洗两次后，加入0.5 mL之PI solution (40 mg/mL propidium iodide)，在37℃下暗室反应15分钟，最后以FACScan流式细胞仪(Becton-Dickinson Immunocytometery Systems， San Jose， CA， USA)进行分析。 2.6. 蛋白质表现分析 3T3-L1前脂肪细胞以不同时间点(1， 3， 6， 9与12小时)加入25 mg/mL之苹果苦瓜种子水萃取物处理，经PBS冲洗二次后，加入300 mL之lysis buffer solution，将细胞以刮刀刮下后，置于冰浴中，利用超音波破碎机进行细胞破碎，取得细胞破碎液后，以bio-rad protein assay (Bio-rad Laboratories， Hercules， CA， USA)进行蛋白质浓度测试，并使用bovine serum albumin作标准物之定量分析。细胞破碎液加入60 mL (5×) protein loading dye，于100℃沸水中加热10分钟后，立即置于冰上快速冷却，并存放于−20℃冰箱备用。将制备好之细胞液和标示标准分子量的multimarker (1~2 mL/lane)于10%聚丙烯酰胺胶体电泳的胶体孔槽中，进行垂直式电泳分离，通以电压70伏特约15分钟，待样品通过stacking gel后，将电压调整为140伏特，约电泳60分钟。电泳结束后，利用bio-rad mini protein湿式转渍设备，以400 mA进行转渍，1小时后取出PVDF membrane，置于5%之脱脂牛奶中[脱脂奶粉溶于PBST buffer (PBS加入0.1% Tween-20)]，作为空白处抑制(blocking)，于室温下摇晃1小时，接着以PBST buffer，清洗5分钟2次，加入一级抗体(primary antibody)，于4℃下作用隔夜，再以PBST清洗8分钟3次后，加入二级抗体(secondary antibody)于室温下作用1小时，经PBST清洗8分钟3次后，以ECL kit进行呈色，并利用冷光影像分析系统(Luminescent image analyze， LAS-1000， FUJIFLM， Japan)进行分析。 2.7. 统计分析 实验数据使用SPSS计算机统计软件进行分析。变异数分析则以Student’s t-test进行分析，p < 0.05为具有显著性差异。
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user: 4. 结论 综合上述结果得知，本研究利用不同品系、部位与溶剂萃取所得之苦瓜萃取物，由结果发现30种苦瓜萃取物中以苹果苦瓜种子水萃取物(WESMC)最具抑制3T3-L1前脂肪细胞之生长和调控细胞周期停滞，其可透过提升p-p53与CDK抑制子p18与p27之蛋白质表现，并降低CDK2、CDK6、cyclin D1与pRb之蛋白质表现，进而达到减低3T3-L1前脂肪细胞增生数目。故本研究成果证实苹果苦瓜种子水萃取物，确实可透过细胞周期之调控，而抑制3T3-L1前脂肪细胞之细胞生长。
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user: 摘 要 目的：为了探讨不同动物来源中粪肠球菌(E.faecais)菌株之间的遗传关系。方法：利用PCR技术对59株不同来源粪肠球菌的7个管家基因gdh、gyd、pstS、gki、aroE、xpt、yiqL分别进行扩增测序，根据测序结果，利用多位点序列分型技术(Multilocus Sequence Typing， MLST)进行分析、比对。结果：59株不同来源粪肠球菌被分成了27个序列型(Sequence type， ST)，其中，主要流行序列型是ST-16 (占16.9%)，其次是ST-163 (占6.8%)、ST-238 (占6.8%)和ST-631 (占6.8%)，而与医院内感染密切相关的ST-16序列型，广泛分布在除熟食食品和羊粪外的其它5种来源中。另外，猪和蜂猴的粪便中分别含有7种序列型，且均有ST-16序列型。结论：多种动物来源中均含有感染人的粪肠球菌序列型，这也为粪肠球菌致病机理研究奠定了基础。 关键词 :粪肠球菌，多位点序列分析，管家基因，序列型(ST) Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肠球菌(Enterococcus)是一种条件致病菌，可引起严重的医院内感染和感染多种动物 [ 1 ] [ 2 ] ，其中，粪肠球菌引起的感染占85%~95% [ 3 ] 。引起的主要症状包括尿路感染、腹腔感染、败血症、心内膜炎、腹泻等 [ 2 ] [ 4 ] [ 5 ] 。但目前肠球菌的致病机理不清，各感染菌株携带的毒力因子和抗生素抗性不同，尤其是在食品安全日趋严峻的形势下，动物源粪肠球菌与人的感染关系不明 [ 1 ] [ 3 ] 。因此，了解各来源粪肠球菌遗传关系就成为首要条件。 多位点序列分型(MLST)是1998年Achtman等提出并发展起来的分子生物学分型方法，是通过使用标准的核苷酸测序技术，通过分析多个管家基因450 bp左右的核心片段的核酸序列，从而对菌株的等位基因进行多样性的比较，根据不同的菌株对应不同的序列型来说明其遗传学关系 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] 。由于MLST操作简单，实验重复性高，它有一个庞大的数据库，可将数据结果直接提交到数据库中进行国际间菌株比对、溯源分析、遗传进化分析等，这对研究不同来源、不同菌株、动物源与人类感染之间菌株的遗传关系和抗生素抗性、流行株、毒力基因携带等之间的相关性奠定了基础 [ 6 ] [ 9 ] - [ 14 ] 。因此，本试验将不同来源59株粪肠球菌利用7个管家基因进行多位点序列分析，根据得出不同的序列型来进行不同来源、不同菌株的遗传关系分析，以期为研究粪肠球菌致病机理奠定基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 菌种 59株试验菌种为本实验室保存菌种，且均通过16S rRNA方法鉴定，确认59株菌种均为粪肠球菌，并于50%甘油中−20℃保存，其来源与菌株编号如下表(表1)所示。 Table 1 The source of the enterococcus faecalis isolate 来源 菌株数 菌株编号 蜂猴 12 2-9， 2-10， 2-11， 3-2， 3-5， 6-5， 6-6， 6-7， 6-11， 9-5， 9-8， 9-9 鸡源 10 1′A， 18A， 22A， 26A， 34A， 37B， 41B， 43B， 44B 猪病变内脏 12 N1， N2， N4， N5， N7， N8， N9， N10， N12， N30， N33， N41 生鲜肉样 9 4-1a， 4-1b， 6-2a， 12b， 14-2b， 16-1b， 20a ， 27-2b， 27a 熟肉制品 7 S1， S2， S4， S7， S15， S18， S19 猪粪 7 F4， F7， F8， F9， Z肥20-1， Z育肥④， Z种6-1 羊粪 3 D7①， J1-2， J9-1 表1. 粪肠球菌分离株的来源 注：菌株的NCBI accession number为：N1 (FJ378656)， N2 (FJ378657)， N4 (FJ378659)， N5 (FJ378660)， N7 (FJ378662)， N8 (FJ378663)， N9 (FJ378664)， N10 (FJ378665)， N12 (FJ378667)， N30 (FJ378685)， N33 (FJ378688)， N41 (FJ378696) 2.2. 主要试剂 PCR反应试剂：DL2000 DNA Ladder Marker、Agarose-Molecular Biology Grade琼脂糖购自宝生物工程(大连)有限公司；TaqPCR Mastermix和Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒均购自上海生工生物工程有限公司；DNA Green核酸染料购自北京天恩泽生物技术有限公司；BHI培养基；1 × TAE电泳缓冲液；无水乙醇；异丙醇和双蒸水等。 2.3. 操作过程 2.3.1. 细菌的活化与纯化培养 将保存的菌种活化后无菌条件下划线于BHI琼脂平板上， 37 ℃ 培养24~48 h。挑取单个菌落，接种于5 ml液体BHI培养基中，37℃培养12小时。 2.3.2. DNA的提取 将上述培养好的菌液按照Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒说明书进行DNA的提取。 2.3.3. PCR引物设计与合成 根据www.mlst.net网站确定粪肠球菌的7对管家基因gdh、gyd、pstS、gki、aroE、xpt和yiqL作为目标基因，应用软件Premier 5.0设计引物(见表2)，并送往上海生工生物工程有限公司合成，按照各引物的分子量将引物稀释为20 pmol/μl，−20℃保存备用。 2.3.4. PCR反应体系及扩增条件 对59株粪肠球菌进行单独扩增：模板DNA 2 μl(空白对照为双蒸去离子水2 μl)，上、下游引物各1 μl (20 pmol/μl)，Taq酶10 μl，其余用去离子水补足，总体积25 μl。7种基因PCR扩增条件均为： 94 ℃ 预变性5 min， 95 ℃ 变性30 s，56℃退火30 s， 72 ℃ 延伸1 min，共进行30个循环； 72 ℃ 延伸7 min。 2.3.5. PCR扩增产物测序 将经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测后的PCR产物，送上海生工生物工程技术服务有限公司进行序列测定。 2.3.6. MLST数椐分析 测序后在线递交到肠球菌MLST分析网络服务器进行分析得出等位基因型和序列型(ST)。 Table 2 PCR primer sequence and the gene lengt 基因 引物序列(5′-3′) 产物大小(bp) gdh-1 GGCGCACTAAAAGATATGGT 530 gdh-2 CCAAGATTGGGCAACTTCGTCCCA gyd-1 CAAACTGCTTAGCTCCAATGGC 395 gyd-2 CATTTCGTTGTCATACCAAGC pstS-1 CGGAACAGGACTTTCGC 583 pstS-2 ATTTACATCACGTTCTACTTGC gki-1 GATTTTGTGGGAATTGGTATGG 438 gki-2 ACCATTAAAGCAAAATGATCGC aroE-1 TGGAAAACTTTACGGAGACAGC 459 aroE-2 GTCCTGTCCATTGTTCAAAAGC xpt-1 AAAATGATGGCCGTGTATTAGG 456 xpt-2 AACGTCACCGTTCCTTCACTTA yiqL-1 CAGCTTAAGTCAAGTAAGTGCCG 436 yiqL-2 GAATATCCCTTCTGCTTGTGCT 表2. PCR引物序列与目的基因长度
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user: 3. 结果与分析 3.1. PCR产物扩增结果 根据上述引物、扩增条件，以59株粪肠球菌DNA为模板进行PCR扩增，59株粪肠球菌均获得了gdh、gyd、pstS、gki、aroE、xpt和yiqL 7个基因片段，经1.0%琼脂糖凝胶电泳，大小与预期大小一致，详见图1和图2。 3.2. 59株粪肠球菌MLST分析结果 将59株粪肠球菌的7个管家基因gdh、gyd、pstS、gki、aroE、xpt和yiqL的扩增产物送基因公司测序，测序结果在国际MLST网络数据库中比对分析，结果59株粪肠球菌被分成了27个ST型，详细结果见表3。通过对27个序列型分析，ST-16序列型最多，占总数的16.9%，其次是ST-163、ST-238、ST-631序列型，分别占6.8%，ST-69、ST-138、ST-330、ST-597序列型分别占5.1%。 从ST序列型和菌株来源关系分析，ST-16序列型的菌株来源较广，在猪病变内脏、生鲜肉样、猪粪、蜂猴、鸡源均有分布；从菌株来源中所含的ST序列型分析，猪病变内脏、猪粪和蜂猴来源的菌株分别均含有7个ST型，其中，猪病变内脏和猪粪便中均含有ST-16和ST-330两个序列型；而猪粪便和蜂猴粪便则分别含有ST-16和ST-225两个序列型。除过ST-16外，其他来源的菌株中则不含有相同的序列型。
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user: 4. 讨论 肠球菌广泛的分布性与环境抵抗力以及它的抗药性和致病性，都使得人们对肠球菌越来越重视，而对来源、菌株与抗性和毒力因子携带等遗传关系的研究，以试图为肠球菌致病机理研究打下基础已成为当今研究的一大热点 [ 1 ] [ 15 ] [ 16 ] 。MLST可通过揭示管家基因的变异来揭示病原菌之间遗传关系，且操作十分简单，分型结果具有高度的可重复性及可比性 [ 3 ] 。 图1. 粪肠球菌7个管家基因的PCR扩增结果。M：DL2000DNA Marker 1：gdh基因 2：gyd基因 3：pstS基因 4：gki基因 5：aroE基因 6：xpt基因7：yiqL基因 8：空白对照 Table 3 MLST data analysis of 59 dung enterococcus strain 菌株数 等位基因 ST 菌株编号 Gdh gyd pstS gki aroE xpt yqil 1 8 7 7 5 4 4 1 4 Z育肥4 10 5 1 1 3 7 7 6 16 N8… 3 27 12 1 32 6 2 33 69 N4， N12， N41 1 24 11 17 25 39 35 3 80 D7① 2 17 2 22 1 14 14 1 116 N33， 9-9 3 27 7 46 5 39 2 36 138 18A， 26A， 43B 4 1 5 29 25 4 3 12 163 S7… 2 4 4 46 33 2 1 3 207 2-10， 3-5 2 39 2 49 3 7 57 17 225 6-5， F7 4 10 1 51 24 49 12 50 238 4-1b… 1 9 5 29 25 4 3 12 240 S4 2 27 12 35 32 50 57 23 22 J9-1， F9 1 40 11 1 37 9 7 21 265 4-1a 1 5 11 49 45 7 11 60 320 3-2 1 9 6 4 49 11 15 61 314 1′A 3 14 1 18 22 16 17 12 330 N5， N7， F4 1 8 7 7 5 4 66 1 338 Z种6-2 1 54 11 1 3 7 7 6 363 Z肥20-1 1 62 17 29 11 1 10 17 367 37B 1 5 1 1 3 7 7 69 372 6-11 2 1 7 69 1 1 10 1 409 S1， S2 1 8 7 7 5 7 4 1 410 J1-2 1 4 6 56 29 7 1 20 475 N10 2 12 7 3 32 1 48 46 525 N1， N30 1 12 7 3 32 1 23 1 543 N2 3 74 2 73 72 78 18 17 597 6-2a， 20a， 27a 4 40 11 17 15 15 17 34 631 2-11… 表3. 59株粪肠球菌的MLST数据结果 注：N8…表示N8， N9， 14-2b， F8， 6-6， 6-7， 9-5， 9-8， 2-9， 44B; S7…表示S7， S15， S18， S19; 4-1b…表示4-1b， 12b， 16-1b， 27-2b; 2-11…表示2-11， 22A， 41B， 34A 图2. 部分管家基因PCR扩增结果。M：DL2000DNA Marker 1， 2， 3：gki基因4， 5， 6：pstS基因7， 8， 9：aroE基因 K：空白对照 ST-16序列型在本次分型试验中占16.9%，共包括了10个菌株，而且菌株来源广泛，在猪病变内脏、生鲜肉样、猪粪、蜂猴和鸡源中均有分布。而且也是医院内的感染菌株 [ 17 ] [ 18 ] ，ST-16序列型虽对万古霉素、替考拉宁、莫西沙星等药物敏感，但含有氨基糖苷类抗性基因aac(6′)-Ie-aph(2″)-Ia， aph(3′)， ant(6)， ant(3″)(9)在ST-16中能被频繁地检测到，且对庆大霉素有较强的耐药性。ST-16在西班牙、荷兰、丹麦、波兰和匈牙利等多个国家均有分布 [ 17 ] 。因此，从ST-16序列型感染和分布情况分析，ST-16很可能是一种在不同国家、不同来源间流行的感染菌株，而且有可能携带氨基糖苷类抗性基因，具体情况有待进一步研究。 肠球菌引起的临床感染的治疗越来越困难，其原因除了具有复杂的耐药机制外还有其具有众多的毒力因子，肠球菌的毒力因子已被确认为是这种微生物在宿主上生存及致病性的重要因素 [ 17 ] [ 19 ] 。据了解，cyl基因的存与ST-16具有一定的联系，而且esp、gelE和agg基因的存在不针对任何特定的ST， 但在ST-16中，却同时含有esp阳性和esp阴性菌株 [ 16 ] 。因此，ST-16在动物源性粪肠球菌中是否存在这种毒力因子关系，需要进一步研究。 ST-163、ST-238序列型各自占总数的6.8%，这两个序列型菌株均来源肉制品中，ST-163主要出现在熟肉制品中，ST-238则来源于生鲜肉样中，而且在其他的来源中均没有出现。这说明熟肉制品和生鲜肉中污染的本型菌株来源于其它来源，如环境污染，提示我们应加强环境卫生，避免污染，并应加强加强食品中对ST-163和ST-238的监控。 本次研究主要着重于各菌株间的遗传关系研究，下一步工作将是将这种分型与各菌株表型特性进行结合，以便更好地为致病性、耐药性以及防治打下基础。
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user: 摘 要 重金属污染是目前全国各地较为突出污染现象，主要表现为土壤和水的污染，由于工业的发展，加上废水废气处理不当，导致这个现象愈发严重，如何治理也成为了迫在眉睫的问题。本试验主要通过给土壤加入适当的镉、锌含量，小型模拟污染土壤，通过对九层塔、柠檬薄荷、迷迭香、柠檬香草4种植物的种植，对形态指标、生物量、植株重金属含量和土壤重金属含量进行测定，同时引入转运系数和富集系数，对比得出对土壤修复更有潜力的植物。 关键词 :芳香植物，土壤修复，重金属含量 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/