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user: 3. 实验结果与讨论 3.1. 虫草花活性成分提取物 按1.2.2所述方法，依次80%乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得到不同溶剂萃取物，结果如表3所示，平行测定三次结果。 Table 3 The active ingredient extract of Cordyceps flowe 序号 Number 80%醇提物/g 80% Ethanol extract 石油醚萃取物/g Petroleum extract 乙酸乙酯萃取物/g Ethyl acetate extract 正丁醇萃取物/g n-BuOH extract 水萃取物/g Water extract 1 8.99 2.54 0.69 0.54 4.45 2 8.89 2.53 0.70 0.54 4.40 3 9.12 2.55 0.72 0.55 4.50 表3. 虫草花活性成分提取物列表 3.2. 虫草花没食子酸标准曲线结果 以吸光度(A)为横坐标，以没食子酸含量(mg∙mL −1 )为纵坐标绘图，结果进行线性回归得回归方程：Y = 22.136x − 0.1277(R 2 = 0.9982)。标准曲线图1表明，没食子酸在质量浓度为0.01~0.06 mg∙mL −1 区间有良好的线性关系。 图1. 没食子酸标准曲线 3.3. 提取条件对虫草花多酚提取效果的影响 3.3.1. 料液比对总多酚提取效果的影响 浸泡时间2 h，乙醇含量60%，提取温度80℃，由图2可知，总多酚提取率随料液比的增大而先增大后降低，最佳提取的料液比为1:20，1:15，1:25的提取率也较高。这可能是因为料液比为1:20时，溶剂对多酚的溶解已基本达到饱和，继续增加溶剂用量，并不能显著提高多酚的提取量。而料液比越大，在浓缩过程中消耗的时间越长，多酚被氧化的可能性提高，同时也加大了浓缩时的能量消耗，不利于总多酚的提取，因此将正交试验中的料液比分别定为1:15、1:20和1:25。 图2. 料液比对总多酚提取效果的影响 3.3.2. 乙醇含量对总多酚提取效果的影响 浸泡时间2 h，料液比为1:20，提取温度80℃的提取。由图3可知，总多酚提取率随乙醇含量的增大而先增大后降低，最佳提取的乙醇含量为70%，60%，80%的提取率也较高。这可能是因为乙醇含量为80%时，乙醇含量过高，会将其他杂质也提取出来，不利于总多酚的提取，因此将正交试验中的乙醇含量分别定为60%、70%和80%。 图3. 乙醇含量对总多酚提取效果的影响 3.3.3. 提取温度对总多酚提取效果的影响 浸泡时间2 h，乙醇含量60%，料液比1:20的提取结果。由图4可知，总多酚提取率随温度的升高而先增大后降低，当温度超过70℃后，总多酚质量浓度下降。最佳提取的提取温度为70℃。50℃，60℃的提取率也较高。从中可推测影响提取率原因是：当提取温度超过60%乙醇的沸点时，溶液剧烈沸腾产生的气泡使原料粉末黏附于容器壁上，导致原料未能充分被溶剂浸提；另外也可能是由于提取温度过高造成多酚分子的结构破坏。因此将正交试验中的提取温度分别定为60℃、70℃和80℃。 图4. 提取温度对总多酚提取效果的影响 3.3.4. 浸泡时间对总多酚提取效果的影响 料液比1:20，乙醇含量60%，提取温度80℃的提取结果。由图5可知，总多酚提取率随浸泡时间的增加而先增大后降低，当浸泡时间为1.5小时时总多酚质量浓度最大，之后随浸泡时间的继续增加，总多酚质量浓度呈下降趋势，因此最佳提取的时间为1.5 h。2 h的提取率也较高。这可能是因为浸泡时间越长，多酚被氧化的可能性提高，乙醇含量也对多酚的分子结构，不利于总多酚的提取，因此将正交试验中的浸泡时间分别定为1 h、1.5 h和2 h。 图5. 浸泡时间对总多酚提取效果的影响 3.4. 正交试验结果 正交试验结果见表4，从表4分析可知：各因素对虫草花总多酚产率的影响程度不同，其影响的主次顺序为：B(乙醇含量) > C(提取温度) > A(料液比) > D(浸泡时间)。由试验数据可以得出：乙醇含量为显著影响因素，极差分析最优组合是A 3 B 3 C 3 D 1 ，最佳提取工艺条件为：料液比1:25 (g/mL)，乙醇含量为80％，提取温度80℃，浸泡时间为1 h。 Table 4 The result of orthogonal experimen 实验号 Number 因素 Factor 总多酚质量浓度 Polyphenols content A B C D 1 1 1 1 1 0.4690 2 1 2 2 2 0.5601 3 1 3 3 3 0.7803 4 2 1 2 3 0.3941 5 2 2 3 1 0.6930 6 2 3 1 2 0.7622 7 3 1 3 2 0.5355 8 3 2 1 3 0.6825 9 3 3 2 1 0.7641 K 1 1.8094 1.3986 1.9137 1.9261 K 2 1.8493 1.9356 1.7183 1.8578 K 3 1.9821 2.3066 2.0088 1.8569 R 0.1727 0.9080 0.2905 0.0692 表4. 正交实验结果 3.5. 虫草花多活性组分总多酚含量计算结果 样品中的多酚含量由没食子酸标准曲线：Y = 22.131x − 0.1283(R 2 = 0.99735)换算得来，① 各提取物部位多酚含量如表5所示：80%醇提物中多酚类化合物含量最高4.7817 mg∙g −1 ，然后依次是水萃取物、石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物，分别是3.8891 mg∙g −1 、3.8680 mg∙g −1 和3.4744 mg∙g − 1 。正丁醇萃取物多酚含量最低，仅为2.8769 mg∙g −1 。各活性组分总多酚含量的大小排序为：80%醇提物 > 水萃取物 > 石油醚萃取物 > 乙酸乙酯萃取物 > 正丁醇萃取物。 ② 测得虫草花提取液中总多酚的平均质量浓度是0.8382 mg∙g −1 。 Table 5 The content of Gallic acid in the different solvent extract 有效部位Effective parts 总多酚含量Total Polyphenols content/mg∙g − 1 80%醇提80% Ethanol extract 4.781729 石油醚萃取物Petroleum extract 3.867978 乙酸乙酯萃取物Ethyl acetate extract 3.474362 正丁醇萃取物n-BuOH extract 2.87691 水萃取物Water extract 3.889065 表5. 虫草花乙醇提取物不同溶剂萃取物中总酚含量测定(mg∙g − 1) 3.6. 虫草花不同溶剂提取物活性测试计算结果 由表6可知，对DPPH自由基的清除作用，不同极性部位清除DPPH自由基的能力顺序为：乙酸乙酯萃取物 > 正丁醇萃取物 > 石油醚萃取物 > 水萃取物 > 80%醇提物。对ABTS自由基的清除作用不同极性部位清除ABTS+·自由基的能力顺序为：乙酸乙酯萃取物 > 正丁醇萃取物 > 80%醇提物 > 石油醚萃取物 > 水萃取物。对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用乙酸乙酯部分对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最强，然后依次是80%醇提物部分 > 石油醚部分 > 剩余水相部分 > 正丁醇部分。 Table 6 The active ingredients of Cordyceps flower in the different solvent extract 有效部位Effective parts DPPH ABTS Α-葡萄糖苷酶抑制活性 Inhibition of alpha-glucoside(%) 80%醇提取物80% Ethanol extract 0.45698 0.07887 39.4 ±2.1 石油醚提取物Petroleum extract 0.28888 0.09047 30.3 ± 3.4 乙酸乙酯提取物Ethyl acetate extract 0.25979 0.05584 64.2 ± 4.6 正丁醇提取物n-BuOH extract 0.27368 0.07045 12.7 ± 2.1 水提取物Water extract 0.35252 0.09381 14.6 ± 3.4 表6. 虫草花不同溶剂萃取物活性成分