DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 边坡稳定分析研究 取边坡中一剖面为例进行分析计算，适当简化模型，边坡加固前后状态如图1所示，加固前分别采用极限平衡理论通用条分法、有限元强度折减法分析计算该边坡稳定性、安全系数，加固后采用有限元强度折减法计算该边坡的安全系数并与加固前对比分析。 3.1. 边坡稳定分析研究 3.1.1. 极限平衡理论 极限平衡理论首先在岩土体中假定一破坏面，取破坏面内土体为脱离体进行计算，得到当脱离体达到静力平衡状态时所需的岩土的抗力或抗剪强度，与破坏面实际所能提供的岩土的抗力或抗剪强度作比值，以求得稳定性安全系数的方法。剖面安全系数K可由式(1)求得，计算时材料参数如下所示。 (1) 式中T为作用于岩土体中潜在破坏面上块体沿破坏面的抗剪力； Q为该块体沿破坏面的剪切力。 极限平衡法的应用有两种，一种是严格条分法，另一种是非严格条分法。两种方法在应用中的不同点是：严格条分法同时满足力矩平衡和力平衡条件，而非严格条分法只满足两者其一。非严格条分法的主要采用标准圆弧计算法，有简化Bishop法、瑞典法等方法。根据工程项目调查结果显示现实中的土坡少有圆弧形，因此非严格条分法在应用时往往存在瓶颈，而严格条分法则能较好的满足实际工程情况，进而通过计算得到较为合理的安全因子，严格条分法主要有通用条分法、通用Janbu法、Morgenstern-Price法 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] 。 本文采用通用条分法 [ 6 ] 对边坡实例进行稳定性分析，将条间力合力的大小、方向设为未知参数，其次指定不同的条间力倾角函数，从而可便捷的对各种严格条分法进行模拟，可以使一个力矩平衡条件和两个力平衡条件同时得到满足，设置好土条并取为隔离体，再把假定滑动面上的土体进行垂直分条，分为n个土条，将条间力合力的大小、方向设为未知参数，进而在极限平衡状态下迭代求解得出土体的安全系数。 3.1.2. 有限元强度折减理论 本文采用岩土工程有限元软件Plaxis中的强度折减法计算剖面的安全系数，此方法通过将土体强度参数、粘聚力及接触面强度不断折减至结构破坏，板和锚杆等结构对象的强度不会受到折减，剖面安全系数因子SF可由式(2)求得，计算时材料参数如下所示。 (2) 式中 为模型破坏时的总乘子； 为材料输入的内摩擦角， 为分析里材料采用的折减内摩擦角； 为材料输入的粘聚力， 为分析里材料采用的粘聚力。 采用Plaxis软件选用15节点三角形单元，分析计算边坡加固前后的安全系数、滑坡体位移。通过对实际边坡进行简化，依据土层材料特性进行模型分层，其次采用点对点锚杆、土工格栅单元模拟预应力锚索，采用板单元模拟混凝土格构，最后在土层与土层间、土层与锚杆间设置接触面单元 [ 10 ] 。模型中取锚杆单元为弹塑性材料，其轴向刚度为2.5 × 105 kN/m，水平间距为4 m，预应力为200 kN/m；格构混凝土(板单元)的容重为8.3 kN/m 3 ，轴向刚度为1.2 × 107 kN/m，抗弯刚度为1.2 × 105 kN/m 3 ，等效厚度为0.346 m，泊松比为0.15；注浆体(土工格栅)为弹性材料，其轴向刚度为1 × 105 kN/m；模型及界面物理力学特性见表1所示。 3.2. 计算结果分析 加固前，通过极限平衡法计算得到的安全系数为0.7666，通过强度折减法计算得到的安全系数为0.6652，滑动面如图2所示，土层均沿潜在滑裂面滑动。两种方法计算得到的安全系数相差0.1014，该误差在容许范围内。通过对上述两种方法进行比较发现，Plaxis在分析边坡全局稳定性具有很强的适用性，能够便捷的模拟各类加筋结构在边坡支护过程中的力学状态，可以反映边坡滑动的实际状态，强度折减法相较极限平衡法而言，不用事先对滑动面的位置及滑动形式进行假定，可便捷的对出土体的位置、破坏区域进行计算。 由求得的安全系数可知，在天然工况下，边坡不稳定，达不到工程要求(规范规定正常运用条件下边坡稳定安全系数不得小于1.2) [ 11 ] ，若有水入侵潜在滑裂面，使得潜在滑裂面含水率增大，内摩擦角减小，粘聚力减小，强度降低，边坡将会处于更加危险的状态，因此决定选用预应力锚索加固措施。 通过使用强度折减法，对加固前后的边坡模型进行计算，所得安全系数见表2。计算得到的加固前 的安全系数为0.6652，边坡沿潜在滑裂面滑动，最大位移为1.28米，滑动位置在坡顶靠近潜在滑裂面一侧；采用预应力锚索进行边坡支护后，可见边坡沿潜在滑裂面滑动的同时滑楔体明显向边坡后方推移，滑体体积约为边坡加固前滑楔体的1.5倍，坡面最大位移减小至0.095米，其位置在坡顶顶角处，安全系数为1.2635，结构安全性得到提高，加固前后边坡滑动面如图3和图4所示。 Table 1 Physical and mechanical properties of soils and interface 岩土类别 容重(kN∙m −3 ) 泊松比 内摩擦角(˚) 粘聚力(kPa) 塑形粘土 18 0.3 7 30 白云质灰岩 27 0.25 20 200 潜在滑动面 27 0.25 12 20 表1. 岩土及界面物理力学特性 Table 2 Factors of safety of slopes before and after reinforcemen 边坡状态 加固前 加固后 安全系数 0.6652 1.2635 表2. 加固前后边坡安全系数 图2. 加固前边坡滑动面 图3. 加固前滑动面云图 锚索发挥的锚固力N i 可根据潜在滑裂面分解为垂直于滑裂面方向的法向分力N i sinαtanβ和平行于滑裂面方向的切向分力N i cosα，锚固力的发挥减小了边坡的下滑力(矩)的同时增大了边坡的抗滑力(矩)，锚索由下至上分别为1~5号锚杆，锚索受到的拉力如表3所示。 采用预应力锚索进行加固后，锚索通过钻孔，穿过潜在的滑裂面，再通过注浆体锚固在稳定土层中， 使得上下两层白云质灰岩及潜在滑裂面形成有效的联结，提高了边坡的整体性，同时混凝土格构的施作对坡面形成了有力的防护，坡面位移对比图如图5所示，由图5可得，边坡经预应力锚索加固后，滑动面向坡体后方推移13米，坡面滑动的最大位移也由1.28米减小至0.095米。边坡由未加固的不稳定状态经加固后达到稳定状态。
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user: 4. 边坡检测资料 经上述对比分析后发现边坡工程采用预应力锚索加固法进行加固，可有效的提高边坡的安全性，此方法经工程应用过程中持续进行了长期边坡位移和沉降的健康监测，结合工程的预应力锚索支护形式， 图4. 加固后滑动面云图 图5. 加固前后坡面位移对比图 Table 3 Tensile forces in the anchor 锚索编号 1 2 3 4 5 拉力(kN/m) 278.9 231.1 352.2 446.3 626.3 表3. 模型锚索拉力 Table 4 Analysis of monitoring dat 监测内容 变化速率(mm/d) 累计变化值(mm) 深层土体 <3 <30 边坡 <3 <20 铁塔 <3 <20 坡顶房屋 <3 <20 表4. 监测结果分析 图6. 深层土体监测点深度–位移曲线 将传感器与锚索及格构梁安装在一起并埋置于设计位置，达到边坡监测的目地。由于边坡岩体表面与混凝土格构梁具有较好的粘结性能，且二者满足协调变形条件，故认为格构梁的节点位移可反映该处边坡对应坡面位置的位移。边坡监测的主要内容有：深层土体监测、铁塔监测、边坡监测、坡顶房屋监测。同时，混凝土格构梁的变形与受力均处于弹性限度范围内，边坡处于稳定状态，监测结果如下表所示。从表4以及图6~图9可以看出，测斜管测出的边坡深层土体水平位移、坡面位移计测得的坡面位移、单点 图7. 坡面监测点位移 图8. 坡顶铁塔基础监测点位移 图9. 坡顶房屋监测点沉降 沉降计测得的坡顶铁塔基础沉降和房屋沉降均较小，说明边坡处于稳定状态。
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user: 5. 结论 预应力锚索加固技术通过将锚索穿过钻孔，一端锚固在坚实土层中，另一端进行预应力张拉，达到加固边坡的效果，可高效率、省材料的对不稳定或存在软弱夹层的边坡进行有效的支护。本文以贵阳会文变至渔安变220千伏线路铁塔边坡为依托工程，采用极限平衡法和强度折减法对预应力锚索加固前后的边坡进行了稳定性计算分析，计算结果表明，有限元强度折减法和极限平衡理论得到的安全系数和滑动面较接近，预应力锚索加固技术减小了边坡滑移的位移大小，此时边坡滑动面向边坡内部移动，能提高结构的安全性、稳定性，边坡监测结果证实了预应力锚索的加固效果，边坡深部土体、坡面、坡顶及坡顶建筑物的位移和沉降均在容许范围内，表明边坡处于稳定状态。
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user: 摘 要 低孔、低渗储层物性差，孔隙结构复杂，不同的流体性质具有相似的物性、电性特征，增加了油气水层判别难度，以往的解释图版和解释方法已经不能完全满足测井解释的需求。测录井技术综合运用，通过由三种算法组成的交会图技术来识别流体性质及流体类型，解决了常规测井对低孔、低渗储层油气层识别的技术难题，提高了复杂储层烃类、非烃类流体的优快识别准确率和效果。最后，通过30个层段的识别结果与测压取样、试油结果对比，验证了该方法具有较好的应用效果。该技术的运用为低品位油气层勘探开发纵深发展提供技术保障。 关键词 :低孔低渗储层，流体性质，录井资料，测井资料 Copyright © 2017 by authors， Yangtze University and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 随着南海西部海域构造圈闭、岩性圈闭勘探开发的不断深入，其目标区逐渐转移至由岩性因素起主导作用的低孔渗砂岩油气藏。但目前尚未形成一套快速识别低孔渗砂岩油气藏的有效的方法及理论依据，尤其在低孔渗透砂岩油气藏的流体识别技术还十分欠缺。鉴于低孔渗砂岩油气藏形成的地质条件和分布规律具有复杂性和隐蔽性两个显著特点，其规律性认识难、勘探开发难度大 [ 1 ] [ 2 ] 。为适应新形势需要，须及时对已发现的低孔渗油气藏进行仔细分析和总结，掌握低孔渗油气藏的分布规律，确定适合于南海西部海域低孔渗砂岩油气藏识别方法和技术，优选勘探开发目标，为低孔渗油气圈闭的勘探开发提供理论依据、技术和方法，建立适合南海西部海域低渗透油气藏流体的测录井识别和评价技术。
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user: 2. 低孔渗储层流体性质识别方法 致密砂岩油气藏储层利用常规测井方法难以对孔隙结构进行有效评价；岩石骨架的测井响应特征远远大于流体的贡献，电阻值的高低受储层岩性及物性的双重影响，给油气水层评价带来了难度；相似的物性、电性特征，储层内的流体有很大差异，一定程度上制约了对致密砂岩储层的勘探开发 [ 3 ] [ 4 ] 。因此寻求新的油气层识别技术成为急需解决的问题。 目前为止南海西部海域已发现了众多的低渗砂岩油气藏，近年来最为典型的是在YZ区XY组和XZ区SG组。这些低孔、低渗透砂岩油气藏的流体识别问题一直是勘探开发中的难题。油气层识别与评价是测井解释过程中最难把握的技术之一，同时也是测井解释的核心 [ 5 ] 。 2.1. 利用测井资料识别地层流体性质 测井资料交会图是常用的直观显示地层含油性的交会图版，该图版综合应用电性和物性特征来反映地层含油性信息。通常在纯砂岩条件下，能够很好地反映含油性和物性的变化规律 [ 6 ] [ 7 ] (图1)。利用现有的测井资料，结合相关的DST测试和电缆地层测试分析结果以及相关的地质资料分地区分层位研究了相关的流体识别图版。 图1. 测井资料识别流体性质识别图版 注：(a) XY组一段密度与电阻率交会图；(b)XY组一段声波时差与电阻率交会图；(c) XY组一段孔隙度与电阻率交会图；(d) XY组二段孔隙度与电阻率交会图；(e) XY组二段密度与电阻率交会图；(f) XY组二段声波时差与电阻率交会图。 图1(a)~(f)为XY组一段和XY组二段储层流体性质识别图版。可以看出，目的层段不同流体性质的分区很明显；由图1(e)和图1(f)可见，密度、声波时差测井值与电阻率交会图对气层的敏感性不高，这是由于低孔渗地层中，测井响应值主要受岩石骨架的影响，而储层的流体性质的响应特征较弱，油气层与水层之间存在很大一个模糊区域，因此，仅利用测井资料不能够快速准确地识别地层流体性质。 2.2. 利用录井资料识别地层流体性质 录井气测反映地下钻井破碎岩石中烃类的体积分数，气测值得高低在一定条件下反映了地层的含烃丰度。但在低孔渗储层中，由于储层可动孔隙度低，有效储集空间中的烃类组分相对较低，单一利用录井气测技术难以像常规储层那样快速识别出流体性质。 图2(a)为油、气和水层的全烃体积分数与烃湿度交会图，从图中可以看出，油气层与水层在全烃体积分数的坐标轴上有一明显的分界线，而气层的烃湿度值则明显小于油层，可以把这三种流体的类型识别出来。图2(a)和图2(b)中的三种流体类型的样本点来自XZ与YZ地区(YZ区主要为气层、而XZ区则缺乏气层样本点)。 图2(b)为全烃体积分数与C 1 /C 2+ 体积分数比值交会图，从图中可以发现油、气层的C 1 /C 2+ 体积分数比值具有明显的分界线，可以较好地区分这两种流体类型。 但是，从图2(a)和图2(b)可见，含气水层的气测特征值与气层的相当，没有清晰的界限。 图2. 录井资料识别流体性质识别图版 注：(a) 全烃体积分数与烃湿度交会图；(b) 全烃体积分数与C 1 /C 2+ 体积分数比值交会图。 2.3. 录井与测井资料结合识别地层流体性质 低孔低渗储层受泥浆的侵入、岩性、地层水矿化度、孔隙结构特征等因素的影响 [ 8 ] ，使油水差异减小，部分高电阻率水层和低电阻率油层在该交会图中难以识别。因此，将反映地下烃类丰度的气测组分与反映地下岩石储集特性岩石物理参数结合起来将是解决低孔渗储层快速识别技术的关键。 研究区进行了大量的气测录井，取得了丰富的气测资料。在交会图版中利用气测资料与测井资料，不同流体类型的分区更明显，即图版对储层流体性质判别更敏感。把孔隙度∅与电阻率ρ t 综合考虑，整合成一个参数后，可以发现水层的[1/(∅ × ρ t )]值明显高于油气层的值，并且知道油气层的[1/(∅ × ρ t )]值是小于1的，对储层流体性质的识别效果最好，图3(a)和图3(b)为结合了气测资料得到的YZ区XY组流体性质识别图版。图3(c)和图3(d)为SG组常规测井资料结合气测资料得到的流体类型识别图版，可以看出，图版中利用气测资料后对流体性质的识别更有效了，分区重合样本点变少了。 图3. 录井与测井资料结合识别流体性质识别图版 注1：∅为孔隙度，1；φ(TG)为气测全烃体积分数，%；ρ t 为地层电阻率，Ω∙m。注2：(a)为XY组(∅ × φ(TG))与电阻率交会图；(b)为XY组(∅ × φ(TG))与[1/(∅ × ρ t )]交会图；(c)为SG组(∅×φ(TG))与电阻率交会图；(d)为SG组(∅ × φ(TG))与[1/(∅ × ρ t )]交会图。
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user: 3. 交会图版的算法实现 交会图版算法由聚类算法、点与线位置关系算法和点与折线位置关系算法组成。软件通过该算法实现将用户绘制的分界线转换为Line或Broken数据结构，以实现识别算法的及时更新。以下将对这三种算法详细介绍。 3.1. 聚类算法 聚类分析法是根据模式之间的相似性对模式进行分类，对一批没有标出类别的模式样本集，将相似的归为一类，不相似的归为另一类。在流体性质交会图版中，当遇到没有明显的流体性质分界标准的图版时，可以通过模式识别中的聚类分析法算法达到识别流体性质的目的。模式类别之间的相似性或差异性可以聚类准则函数来表示，是通过计算未知流体性质的储层与已知流体性质试油数据的距离，并比较未知流体性质的储层与各流体性质试油点均值，将均值最小的流体性质作为结果输出。 3.2. 点与线位置关系算法 交会图版中经常使用画直线的方法实现对流体性质分布的划分。在双线性坐标中，点与线位置关系算法的实现通过Lines数据结构起点坐标和终点坐标拟合直线方程y = kx + b (当k > 20时，该线为垂线)，通过代入自变量值来对比因变量值进而判断点与直线位置关系。当坐标系内有一轴或两轴是对数坐标时，需要纠正使用直线方程y = kx + b带来的视觉误差。其实现方法是采用了计算相对距离的方法间接的实现了坐标轴的转换。该坐标中y轴为对数刻度的坐标，定义y轴的总长度为1；同理如果x轴为对数刻度，亦可以通过此公式进行转换。 3.3. 点与折线位置关系算法 当流体性质分界线为折线时，需要应用到点与折线位置关系算法。点与折线的位置关系只有两种，点在折线内(折线小于π的角)和点在折线外，其通过计算“角度和”的方法实现。该算法的原理如下，如果点在折线内，则点与折线两边的角度和必等于折角和。为了减少计算量，软件采用坐标轴原点平移的方法，将坐标轴的原点平移到折线的拐点，然后利用Math.Atan2(y，x)方法计算角度。Math.Atan2方法返回值是θ，以弧度为单位，满足−π ≤ θ ≤ π，且tan(θ) = y /x，其中x、y是坐标轴值。
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user: 4. 应用效果分析 表1为层位取自ZH2的识别结果与测压取样、试油结果对比数据表，由表可见符合率为90%。该方法能快速、直观和准确地判断低孔低渗储层流体性质。 Table 1 Comparison of quick identification results of fluid properties with pressure sampling and oil test result 井号 起始深度/m 终止深度/m 识别结论 测试方式 符合情况 U 3520.6 3526.2 水层 电缆地层测试取样 符合 V 3392.9 3397.9 气层 电缆地层测试取样 符合 3452.1 3455.9 水层 电缆地层测试取样 符合 W 3385.4 3393.4 气层 DST取样 符合 3460.0 3470.2 气层 符合 3489.9 3497.4 气层 符合 3748.7 3756.6 油层 电缆地层测试取样 符合 X 2025.5 2032.0 油层 DST取样 符合 Y 2032.6 2038.7 油层 符合 Z 3625.3 3632.1 气层 电缆地层测试取样 不符合 表1. 流体性质快速识别结果与测压取样、试油结果对比
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user: 5. 结论 1) 储层物性好时，测井或录井资料交会图可以直观准确地反映地层流体性质。 2) 利用录井资料并结合常规测井资料交会图可以对低孔、低渗透砂岩油气藏流体性质进行有效的识别。 3) 交会图通过聚类算法、点与线位置关系算法和点与折线位置关系算法来实现。 4) 通过30个测试层段结果与交会图解释结果对比，验证了地质录井资料与测井资料相结合的方法识别低孔低渗储层流体性质的方法具有较好的应用效果。
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user: 摘 要 本文以辽宁省学校体育与社区体育互动发展为研究的逻辑起点，采用文献资料法、系统方法和逻辑分析法，通过学校体育与社区体育互动模式实现学校体育与社区体育一体化。并通过互动模式建构模式运行和保障机制。 关键词 :辽宁省，学校体育，社区体育，互动模式，运行机制 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 大众体育、全民健身时代正在进行时，体育已成为人们一种不可或缺的生活方式，健康快乐一元化和体育需求多元化格局正在形成。学校体育和社区体育是大众体育的重要组成部分，二者融合或一体化是大众体育当下和未来的必然趋势。正如习近平总书记2014年9月在“全国群众体育先进单位和先进个人表彰会”上指出：“体育强的根本在于开展广泛的群众性体育活动，让人民群众都参与进来” [ 1 ] 。如何实现学校体育和社区体育互动、互补和互融，直至一体化成为学界研究的热点。不论是学校体育和社区体育实现优势互补、资源共享，还是学校、家庭、社区一体化发展。找到学校体育和社区体育实现融合的“交叉点”是关键。基于辽宁学校体育和社区体育现状，要实现二者融合，要从辽宁“体育文化”入手，厘清辽宁各地区体育文化的特点，形成“体育文化”互动，“内容差异”互补模式，从“体制机制”互融互通，构建辽宁学校体育和社区体育一体化建设。
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user: 2. 辽宁体育文化是学校体育和社区体育互动基础 2.1. 辽宁体育文化溯源 体育文化作为文化的组成部分，不仅反映了一个时代、一个国家或民族的体育特征，还规范着人们的体育行为，甚至影响着人们的价值观念。辽宁体育强盛源于体育文化深厚。辽宁历史文化悠久、民族众多和资源丰富的地域等特点成就了体育大省和体育强省的地位。特别是辽宁群众体育基础非常深厚，居民身体素质强壮，具有很好的耐力。传统的民族体育活动中都追求技术、技法的高超，体育文化积淀体现在辽宁人在各种体育运动中均表现了对于技术、技法的追求，同时也表现了对技术、技法的较高的悟性。 辽宁满蒙族传统体育是重要的民族文化遗产，能骑善射的满蒙族文化逐渐形成了独具特色的满族传统体育文化，至今还在传承和发展。如“那达慕”中的赛马、摔跤、射箭的“好汉三艺”，展示了蒙古族拼搏进取的豪放气质和威武勇猛的英雄气概。满族的“二贵摔跤”成为满族的艺术精华，满族以其“冰上的民族”闻名遐迩，今天的速度滑冰和花样滑冰是辽宁满族人民喜爱的冰戏活动的现代翻版。北方传统节日文化中的秧歌、踩高跷、舞龙、舞狮都来自满族人的庆典、宗教等喜庆活动 [ 2 ] 。从文化发展的规律看，辽宁满蒙传统体育是辽宁大众体育发展的根源，并逐步演化成竞技体育、大众体育、各民族传统体育等不同体系。 20世纪二三十年代，中国奥运第一人刘长春在救亡和启蒙为现代体育的主要目标的指引下，展现辽宁青年在世界赛场上飒爽英姿。这种体育精神一直传承到今天，辽宁竞技体育人才辈出，成绩卓著。多年来辽宁培养了大量的优秀体育后备人才，成为向国家级运动队输送运动员的最大省份之一。大众体育蓬勃发展，辽宁的群众体育工作连续18年被评为全国群众体育先进省。而且大众体育在长期的发展过程中形成了自身的地域性、民族性、娱乐性、兼融性等特征。辽宁体育文化底蕴深厚。丰富多彩的体育文化为学校体育和社区体育实现互动奠定了基础。 2.2. 辽宁体育文化亮点 中国经济发展促进城镇化快速发展，也催生了社区各项文化事业发展。学校体育和社区体育不仅继承了辽宁民族文化传统，并经过一定历史时期积淀的结果孕育了辽宁地区体育文化。如大连的足球和徒步、阜新的篮球、鞍山的乒乓球、朝阳的柔道，本溪的冬泳、丹东的国际马拉松赛、锦州的羽毛球、辽阳和沈阳的冰雪等体育项目。都可以成为学校体育和社区体育互动的“交叉点”。以此为基础，社区体育规划和发展中要有学校体育一片天地，这样社区开展体育工作既能够让社区体育活动内容充满朝气和活力，还能得到学校体育规范性、专业性的指导。同时学校体育有社区体育的参与，丰富了学校体育视野和意趣。
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user: 3. 文化差异性是辽宁学校体育和社区体育互补基础 学校体育和社区体育同属社会体育的范畴，学校体育和社区体育分属不同组织模式，成长路径、内容设置和参与主体各不相同，在社会体育中社区体育和学校体育有着不同的文化体系。 3.1. 学校体育和社区体育的区别与联系 社区是当下经济社会最小的单元，可谓麻雀虽小，五脏俱全。社区具有区域性、功能整体性、网络性、开放性、方便性和层次性等特点。社区体育本身丰富多彩的体育活动具有灵活性、兴趣性、娱乐性、健身性等特点。学校体育作为国家教育体系中重要组成部分，以体育运动的形式，有目的、有计划、有组织的对受教育者的身体方面施加一定的影响，培养合格人才的一种教育过程，具有义务性、强制性、基础性和开放性等特点。 从目标来看，社区体育工作目标是发展体育运动，增强人民体质，引导群众科学健身；学校体育目标是传授学生运动知识技能，促进学生的全面健康发展。因此，学校体育和社区体育不论是在观念形态、还是在组织形态和实践形态上，二者文化差别较大。从体育观念看，学校体育观念是“教与学”为载体，以“育”为目的，实现学生全面发展的教育理念、社区体育观念是以“参与”为载体，以“愉悦”为目的，增进社区成员的身心健康，巩固和发展社区情感。从体育组织形态和实践形态看，学校体育有完善的组织架构和实践规划，内容基础性和专业性强，体育设施、人才资源充足。社区体育组织形式既有自组织，也有他组织，内容以实际需要为主，且灵活多变，娱乐性和趣味性较强。体育设施薄弱，专业人才匮乏。但二者都从属于体育文化，文化的差异性恰恰是学校体育和社区体育实现互补的基础和条件。从体育多元化发展需要，大众体育应包含更多主体、更多内容，建构多维度、多元化的体育元素 [ 3 ] 。因此，社区体育和学校体育的融合，首要的是实现二者互为资源、互为服务对象的理念。其次，推动学校体育与社区体育的关系共生共长。最后实现校园体育文化和社区体育文化的相互渗透。 3.2. 学校体育和社区体育融合互动内涵及其必要性 提高学校体育与社区体育融合的深度和广度，使其具有鲜明的时代性、主体的多样性、覆盖的广泛性、活动的有效性和文化的渗透性。以体育文化为背景，以全民健康为指导，以共享共建为手段，搭建体育组织形式、共同举办竞赛活动，营造体育文化环境、创新体育文化内容、丰富体育文化形式、提升体育文化的品质，最终达到校园体育文化和社区体育文化的共生共长。 从学校体育和社区体育的特点来看，二者各具特色，既有交叉点，又有差异性。融合互动十分必要。社区体育在高大上的“场馆”和运动场等运动资源比较短缺，更缺乏专门专业体育指导员。社区体育的缺陷恰恰是学校体育的优势，学校拥有丰富的体育资源，比如具有知识、经验丰富的体育教师、充足的体育场地设施等。学校体育虽然在运动设施、场地场馆和专业体育指导教师等资源充足，但学校体育具有教育阶段性特点，学校体育内容设置上与社会相脱节，不利于学生接受终身体育思想和观念，限制了学生的全面发展 [ 4 ] 。而社区体育是非课程化的体育模式，在一定程度可以促进学生身心的健康发展，实现终身体育的目标。社区体育营造的科学、健康、文明的生活方式，也能够影响学生的生活方式。可以说，社区体育让学生学会交往，增进友谊，感受生活。
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user: 4. 学校体育和社区体育融合互动模式 学校体育和社区体育融合互动模式主要是以学校和社区各自体育特点的融合互动的为主。社区居民和学生作为融合互动模式通过“点、线、面”相结合把学校体育和社区体育统一协调起来。 4.1. 城市体育品牌“点式”融合模式 城市体育品牌是城市向其目标公众所展示和传达的能表现其城市运动核心价值、核心定位和核心特色的名称、术语、标记或符号。是城市体育在长期的实践发展中积淀和升华出来的文化标识。以城市体育品牌作为学校体育和社区体育的融合点，是因为城市体育品牌的产生具有广泛的群众基础，不论是学校师生，还是广大市民，都给予其认可和关注。如辽宁阜新是全国第一批篮球城市，从学校到社区，从城市到农村都能看到三人制或五人制的篮球运动。每年都举办篮球活动月，经常举办国际或国内大型篮球赛事。再如羽毛球是辽宁锦州人民的最爱。锦州人喜爱羽毛球运动历史悠久，普及程度很高。习练者遍布学校、单位、大街小巷，各类群众性的羽毛球竞赛活动更是如同催化剂一样，推动着大众羽毛球运动的蓬勃发展。 4.2. 人–财–物体育资源共享“线式”互动模式 互动发展就是两者利用对方的优点来弥补自身的不足。对于社区体育与学校体育来说，一方面社区体育要利用学校体育中的人力和物力，另一方面体育要利用社区资源促进学校体育社会化发展。 学校体育和社区体育作为互动主体。首先是“体育人才”互动，学校有专业的体育教师，社区也藏龙卧虎，专业教师和体育爱好者可以联合形成体育健康指导团队，丰富多彩的体育俱乐部等。通过各种方式和手段而向运动主体开展运动健康指导。能有效地解决大众健身体育指导员缺乏的现象，提供更多的健身指导员。其次是“体育钱财”互动。学校体育场所和体育设施丰富，不同地区可以因地制宜，一方面经济条件好的政府可以通过购买体育服务的方式为社区成员服务，经济条件较差地区可以通过互享社会资源方式实现社区居民普遍参与社区体育活动，学校可以分享社区体育健身中心、培训中心、指导中心、体疗康复中心等，社区体育机构或体育俱乐部可以为学生建立参与社区体育实践的提供社区体育实践的机会。社区资源丰富，社区可以联合学校开展体育文化活动，撬动社会资源介入体育文化活动。如拉赞助商，比赛植入广告、赛事冠杯等，即解决了资金问题，又服务了企业，为双方体育文化做大做强奠定经济基础。 4.3. 体育文化双向互通的“全面”融合互动模式 学校体育和社区体育一体化是大众体育的必然结果。学校体育和社区体育一体化可以促成体育资源共享，聚升体育资源合力，即可以满足学校和社区对体育资源的需求，而且对促进整个体育社会可持续性发展意义重大而深远。促进社会和谐有着不可替代的作用。实现学校体育和社区体育“毛细血管”系统通融，构筑“学校—社区健身圈”，通过弘扬学校和社区人们身边的体育健身文化，引导学生和居民树立体育健身文化新理念，讲好身边的健身好故事，宣传草根健身棒典型，评选全民健身模范，让每个人在健身中有成就感、幸福感和荣誉感。努力形成人人要健身、天天想健身、身边能健身、科学来健身的大众体育文化氛围。让不同年龄和性别的个体、不同的群体、步入同一舞台进行体育信息传递和体育文化交流，分享体育观念、体育科技、运动技术、健身健康方法和体育管理，极大程度地增进了个体之间、群体之间和组织之间的交往。
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user: 5. “创新机制”是辽宁学校体育和社区体育互动保障 学校体育和社区体育互动是社会互动的一种基本形式 [ 5 ] ，具有行动者、目标、载体、规范和环境等基本构成要素。要使构成要素最优化发挥作用，必然需要创新互动机制。 5.1. 建立和完善学校和社区的全民健身工作协调机制 以“全民参与、全民运动、全民健康”为宗旨由政府、社会、市场和学校四轮驱动，积极探索学校体育和社区体育互动机制社会化、市场化的多主体互动模式。健全学校和社区各级各类体育健身组织，形成体育总会、单项体育协会、体育俱乐部等组织网络，使有健身需求的学生、群众都加入到组织中。多渠道、多手段选拔体育人才投入学校和社区公益体育服务工作，强化体育健身指导，实现科学健身。 5.2. 构建体育设施共享与社会化运作机制 强化政府在学校体育和社区体育服务供给中的主体地位和主导作用，确保财政用于公体育服务的支出增长幅度与财力的增长相匹配。通过机制引导各类市场主体在服务学校和社区全民健身中发展壮大，激发民间资本投资学校和社区全民健身活力。 5.3. 构建民众需求表达和体育健身活动机制 扩大学校和社区体育活动的形式和途径，提高学生、居民体育服务的参与程度。收集意见和建议，确保体育活动主体的满意度。开展全民健身日、青少年阳光体育、老年人体育健身大会等形式多样的体育活动，丰富和完善全民健身活动体系。
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user: 摘 要 随着地层孔隙压力较高的页岩气的开发，在确保页岩井壁稳定的同时，如何提高页岩层的钻井效率和确保井下工具的正常运转，成为降本增效的关键，其中措施之一就是在保证井下安全的情况下降低钻井液密度。由于品质均一的页岩层本身具有低孔低渗的特点，页岩层内地层流体靠负压差进入井筒的能力有限，故在欠平衡状态下也很难造成溢流和井涌的风险，这一点在研究区块的探井实钻中得到证实。同时，利用实钻数据及科研成果对井壁稳定性加以分析，认为在欠平衡模式下该区的水平段高压页岩层依然可以保持良好的井壁稳定性，使得使用欠平衡模式进行水平段钻进具有了一定的可行性。 关键词 :高压页岩，地层流体，侵入，井壁稳定性，欠平衡钻进 Copyright © 2017 by authors， Yangtze University and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 地层压力评价技术可以获得井筒内地层的孔隙压力，同时提出调整钻井液密度的作业建议。最合理的钻井液密度应该是在顺利完成钻井进尺情况下的最小密度值，此值与地层孔隙压力有关，但未必就由孔隙压力决定，若较小的钻井液密度也能保证井壁稳定和地层流体可控，则此密度值也同样实现了钻井液应起的作用，且有利于钻头破岩。钻探作业中保证井壁稳定不垮塌是作业的前提，可控状态下有限的地层流体进入井筒，在本质上与近平衡钻井时随着井深的增加地层背景气也在不断地增加的情况具有相同的内在原因，只是这种情况的诱因不同：一个是压差引起，另一个是与井深有关的含烃量增多，若均在可控的条件下，二者必然都是可行的方案。 使用低密度钻井液时必须对地层流体侵入井筒的程度和井壁能否保持稳定做出明确的判断。页岩的孔隙度较小，喉道窄，当缺少有效裂缝时，其内部的地层流体以束缚流体为主，逃逸能力差，钻进时的地层流体将以岩屑破碎气和靠近井壁有限距离内的地层流体为主，后者形成具有一定增幅的地层背景气，而形成规模性侵入井筒的可能性较低，在两口直井的实钻中已经得以印证；同时，在页岩气的开发阶段通常是要有压裂工艺，也说明了页岩层内的地层流体侵入井筒能力的有限。对于井壁稳定性而言，由于钻后分析可知，两口直井在钻进时，实际使用的钻井液密度已经低于地层孔隙压力却没有形成井壁垮塌的情况，说明此钻井液密度足以应对坍塌压力。科研成果表明，定向井的坍塌压力与同区块的直井的坍塌压力有一定的对比关系 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] ，由此可以预测水平井井段的坍塌压力情况，从而判断在水平段可以使用的最小钻井液密度，这个密度将既低于地层孔隙压力，又可实现安全的欠平衡钻进。
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user: 2. 地质背景 T区块是开发页岩气的区块，目的层页岩为古生代志留纪时期沉积的巨厚页岩体，埋深为2200~2500 m，该区块已钻探了若干口探井(直井)和开发井(水平井)，部分井进行了钻井取心，岩心显示该套页岩较致密，均一性较好，肉眼可见的裂缝为方解石全充填。在水平井钻探过程中有随钻测井工具进行地质导向服务，当钻进中使用密度较高的钻井液时，测井仪器的作业稳定性在一定程度上会受到高密度钻井液的影响，因此，以一个合适的钻井液密度钻进，既能满足提高钻井效率的要求，也是随钻测井工具工作窗口的需要。本案通过对已钻井的地层压力分析，结合井壁稳定性研究的成果，对T区块水平段钻进过程中的高密度钻井液提出调整方案。 T区块的页岩层为接受陆源碎屑沉积为主的深水陆棚相沉积体，可应用欠压实模式的地层压力分析方法对其进行地层压力评价 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 。根据所收集的数据情况，在评价过程中分别使用dc指数、地层电阻率、地层声波时差这3条曲线进行地层孔隙压力的量化。
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user: 3. 地层孔隙压力分析 以T区块的3口井T1井、T2井、T3井对T区块的地层孔隙压力状况进行分析，分析数据情况如表1所示。 Table 1 The statistics of parameter analysi 井名 dc指数分析 电阻率分析 声波时差分析 T1 无 有 无 T2 无 无 有 T3 有 无 无 表1. 分析参数统计表 3.1. T1井地层孔隙压力分析 T1井为T区块上的一口探井，井型为直井，地层孔隙压力分析结果见图1。从钻穿井深2240 m处的薄层碳酸盐岩后进入页岩目的层。从压力分析情况来看，地层在井深1880 m之前为静水压力，在井段1880~2250 m地层孔隙压力(当量密度)总体呈上升趋势，局部呈现跳跃状的压力高值判断为岩性和压力共同作用所致；在井段2250~2365 m地层孔隙压力(当量密度)趋于稳定，其梯度范围为1.50~1.60 g/cm 3 ，在井段2365~2510 m地层孔隙压力(当量密度)升至本井最高压力，梯度范围为1.93~2.03 g/cm 3 ，在井深2510 m地层孔隙压力开始下降。 该井实钻中未进行随钻地层压力监测作业，因此钻井液密度的选择依据主要为钻前设计，并依据实钻情况进行调整。实钻中使用的钻井液最大密度为1.43 g/cm 3 ，页岩井段井壁稳定无掉块，由此判断T1井目的层页岩段最大坍塌压力(当量密度)为1.43 g/cm 3 。钻进过程中目的层全烃背景值较高，为3%~10%，局部达到60%~90%。最终顺利钻至设计井深完钻。 3.2. T2井地层孔隙压力分析 T2井也为T区块上的一口探井，井型为直井，地层孔隙压力分析结果见图2。从钻穿井深2080 m处的砂岩层后进入页岩目的层。从压力分析情况来看，地层在井深1700 m之前为静水压力，在井段1700~2110 m地层孔隙压力(当量密度)总体呈上升趋势，梯度值最高升至1.35 g/cm 3 ；在井段2110~2320 m 图1. T1井地层孔隙压力分析图 图2. T2井地层孔隙压力分析图 地层孔隙压力(当量密度)稳定上升，其梯度值最高升至1.94 g/cm 3 ，之后地层孔隙压力(当量密度)在高位波动，最高升至2.00 g/cm 3 。 该井实钻中未进行随钻地层压力监测作业，因此钻井液密度的选择依据主要为钻前设计，并依据实钻情况进行调整。实钻中目的层页岩段使用的钻井液最大密度为1.42 g/cm 3 ，页岩井段井壁稳定无掉块，由此判断T2井目的层页岩段最大坍塌压力(当量密度)为1.42 g/cm 3 。最终顺利钻至设计井深完钻。 3.3. T3井地层孔隙压力分析 T3井为T区块上的一口水平井，地层压力分析结果见图3。从井深2080 m开始侧钻，在垂深2120 m进入页岩目的层。分析表明地层从垂深1570 m处开始出现压力异常，至垂深1880 m地层孔隙压力(当量密度)梯度升至1.50 g/cm 3 。在井段1880~2080 m地层孔隙压力(当量密度)梯度稳定在1.46~1.52 g/cm 3 。从垂深2040 m至井底地层孔隙压力(当量密度)逐渐升高，在最大垂深2416 m梯度值达到最大的2.01 g/cm 3 。 图3. T3井地层孔隙压力分析图 该井实钻中未进行随钻地层孔隙压力监测作业，因此钻井液密度的选择依据主要为钻前设计，并依据实钻情况进行调整。实钻中目的层页岩段使用的钻井液最大密度为2.04 g/cm 3 ，页岩井段井壁稳定无掉块，由此判断T3井目的层页岩段最大坍塌压力(当量密度)为2.04 g/cm 3 。最终顺利钻至设计井深完钻。
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user: 4. 钻井过程安全分析及技术措施建议 4.1. 地层流体侵入风险分析 在页岩段目的层，地层岩性为一大套岩性较为均一的页岩，地层流体侵入井筒的风险较小，原因包括：①从页岩的核磁共振结果看，页岩的孔隙度为5%~8%，其中的地层流体以束缚流体为主，可动流体占比很小(见图4)；②连续的钻井取心证实目的层页岩段缺少有效裂缝，肉眼可见裂缝均为方解石脉充填；③页岩渗透率低，开发页岩气时一般均采用压裂工序以提高采收率；④实钻中，T1井、T2井均以大大低于孔隙压力的钻井液密度完钻，并无溢流事件发生，只是背景气较高，在T3井水平段实钻过程中，钻井液密度为2.01 g/cm 3 时观察到一次液面上涨0.61 m，关井未见压力，表明气体能量较低，之后提高密度至2.03 g/cm 3 却发生井漏，表明钻井液密度窗口较小，过高的钻井液密度对钻井造成了较大的井下风险。综上所述，判断在目的层页岩段地层流体侵入井筒风险较小。 图4. 页岩实测核磁共振τ 2 谱图 4.2. 井壁稳定性分析 实钻表明T1井、T2井的最大坍塌压力(当量密度)为1.43 g/cm 3 。而相同区块下直井与水平井之间的坍塌压力有着一定的关联，水平段坍塌压力值比直井段塌压力值大 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] ，最大差值为0.30 g/cm 3 (见图5)。由此计算T区块目的层水平段页岩的最大坍塌压力(当量密度)为1.73 g/cm 3 ，考虑到可能的误差，将此值附以10%的安全系数，得到页岩层在水平段的最大坍塌压力(当量密度)为1.90 g/cm 3 。 图5. 坍塌压力随井斜角与方位角的变化规律 4.3. 技术措施建议 钻后分析表明直井T1井和T2井是以欠平衡方式完成了钻井作业，直井坍塌压力(当量密度)最大值为1.43 g/cm 3 ，由此判断水平井段的坍塌压力(当量密度)最大值为1.90 g/cm 3 ，考虑到之前的水平井段实钻钻井液密度均为2.0 g/cm 3 左右，因此，为安全起见，在对水平井段已经附加了10%安全系数的基础上，再与实钻钻井液密度为2.0 g/cm 3 的相比较，取二者中间值，即1.95 g/cm 3 作为钻探T区块水平段页岩建议使用的钻井液密度，该密度比孔隙压力(当量密度)梯度低约0.05 g/cm 3 ，同时实钻中应用此密度时应配制部分高密度钻井液备用，并做好井况监测、井场通风及热工作业控制等。
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user: 5. 结语 在钻井作业中，安全钻进无疑是重中之重，但若能以现有的技术为基础，在确保井下安全的同时尽可能地提高钻井效率，同时降低钻探成本，则这种作业方法是值得去尝试的。笔者通过对T区块页岩层的地层孔隙压力和坍塌压力的状况进行深入的分析，找到了使用欠平衡方法进行钻进的理论和实践依据，并对井下安全进行了分析，是一个兼顾钻井效率和井下安全的作业方案。
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user: 摘 要 为构建猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白的B、C抗原域(E2BC)酿酒酵母表面展示体系，以pVEXE2为模板，用PCR克隆了E2BC基因，并插入酵母展示表达载体p1v5AG的BamH I和EcoRI位点，构建重组酵母展示表达载体，用LiAC方法转化酿酒酵母细胞W303，构建重组酵母菌。重组菌经培养后，对酵母菌细胞进行针对His标签的间接免疫荧光染色，检测His-E2BC融合表达蛋白。结果显示，重组酵母菌表面有绿色荧光，表明E2BC蛋白成功表达于酵母表面，为开发酵母载体口服疫苗奠定了基础。 关键词 :酵母表面展示，猪瘟病毒，E2BC抗原域，口服疫苗 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 猪瘟病毒(classical swine fever virus， CSFV)是黄病毒科瘟病毒属有囊膜的单股正链RNA病毒 [ 1 ] 。病毒基因组编码一个约有4000个氨基酸的多聚蛋白，此蛋白在翻译后可由细胞和病毒蛋白酶裂解生成4个结构蛋白(C、E rns 、E1和E2)和8个非结构蛋白(N pro 、P7、NS2、NS3、NS 4A 、NS4B、NS 5A 和NS5B) [ 2 ] 。结构蛋白E2位于病毒的囊膜表面，参与病毒的感染过程，能诱导产生强有力的保护性免疫，是CSFV的主要保护性抗原蛋白。E2可分为A、B、C、D四个抗原域，其中B、C区域为产生抗原决定簇的主要区域 [ 3 ] [ 4 ] 。 酵母细胞表面展示系统是一种固定化表达异源蛋白质的真核展示系统，近几年来已被广泛应用于生物催化剂、细胞吸附剂、活疫苗、环境治理、蛋白质文库筛选、高亲和抗体、生物传感器、抗原/抗体库构建、癌症诊断等领域 [ 5 ] 。 本研究利用酿酒酵母表面展示系统(以细胞壁甘露糖蛋白а凝集素碳端320个氨基酸域为锚定蛋白)将CSFV E2蛋白BC抗原域展示在酵母细胞表面，用间接免疫荧光方法检测了带有His蛋白标签的BC抗原域融合蛋白的表达，为基于E2蛋白BC抗原域的酵母载体疫苗研制奠定了基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 2.1.1. 菌株、载体 细胞株E. coli DH5α购自北京全式金生物技术有限公司；酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) W303、表达载体p1V5-AG [ 6 ] 及酿酒酵母w303由东北大学杨婷博士提供；pcDNA3.1表达载体、pVEXE2重组质粒(含E2序列)由本实验室保存。 2.1.2. 试剂 限制性内切酶BamH I和EcoR I、DNA Marker DL2000、T4 DNA Ligase、10 × T4 DNA Ligase Buffer、6 × Loading Buffer为TaKaRa公司产品；DNA Marker 5000，2 × Power Pfu MasterMix购自北京BioTeke生物技术有限公司；质粒DNA小量快速制备试剂盒、胶回收试剂盒购自爱思进生物技术(杭州)有限公司；His-probe (AD 1.1.10 ) mouse monoclonal IgG和goat anti-mouse IgG-FITC购自Stanta Cruz Biotechnology。引物(Primer)合成和PCR产物测序由中美泰和生物技术(北京)有限公司完成。 2.1.3. 培养基 Yeast Nitrogen Base W/O Amino acids，adenine，L-Trytophan，L-Histidine，L-Leucine为BIOSHARP公司产品；胰蛋白胨、琼脂粉购自北京奥博星生物技术有限责任公司；酵母提取物购自OXUID LTD。Luria-Bertani (LB)培养基含1%氯化钠，0.5%酵母提取物，1%胰蛋白胨。YPDA培养基含有1%酵母提取物，2%胰蛋白胨，2%葡萄糖，0.003% adenine。SD培养基含0.7%无氨基酸酵母氮源(Yeast Nitrogen Base， 2%)，葡萄糖，0.003% L-his，0.003% L-trp，0.003% L-leu，0.005% adenine，固体平板添加2%的琼脂。 2.2. 方法 2.2.1. E2蛋白BC抗原域(E2BC)的基因克隆 根据E2BC基因的序列，设计一对上、下游引物。为便于表达蛋白的检测，在上游引物的5'端加入His标签蛋白基因序列，上下游引物序列为：U: 5'-CAAGGATCCCATCATCACCATCACCATCGCGTTATA CCTCATATTGC-3'，L:5'-AGCGAATTCACCCTGGTTAAATCCCTCA-3'，上、下游引物5'端分别加入酶切位点BamH I、EcoRI (下划线标识，斜体为His标签蛋白)。以pVEXE2重组质粒为模板，利用PCR扩增E2BC基因片段，PCR产物经BamH I和EcoR I双酶切、凝胶回收后，连接于pcDNA3.1载体的相应位点。 连接产物转化E. coli DH5α感受态细胞，涂布于Amp抗性LB固体平板，培养过夜。挑取菌落进行菌落PCR，鉴定阳性转化子。取PCR鉴定阳性的菌落，接种液体LB培养基，提取质粒进行双酶切鉴定。双酶切鉴定正确的阳性转化子进行测序。 2.2.2. 酵母展示表达载体的构建 对测序正确的重组载体pcDNA3.1-E2BC进行BamH I和EcoR I双酶切，将获得的E2BC片段克隆至p1v5AG载体的相应位点，替换载体的v5片段(图1)，构建重组载体p1-AG-E2BC，转化E. coli DH5α感受态细胞，制备重组表达载体p1-AG-E2BC。 2.2.3. 表达质粒转化至酿酒酵母 参照文献，将重组载体p1-AG-E2BC转化酿酒酵母 [ 7 ] 。取酿酒酵母W303接种于5 ml液体培养基YPAD， 30 ℃ ，200 r/min下振荡培养过夜。以5 × 10 6 个/ml的细胞密度接种至50 ml YPAD培养液。置 30 ℃ ，200 r/min振荡培养至细胞密度2 × 10 7 个/ml，用50 ml无菌离心管以3000 g离心5分钟，收集细胞。重悬细胞于25 ml无菌水中，再同上离心，弃上清。用1 ml 100 mmol的乙酸锂(LiAc)溶液重悬酵母 图1. 表达载体p1v5-AG图谱 细胞，并转移至一个无菌的1.5 ml离心管，高速离心5 s沉淀细胞，吸尽乙酸锂。用500 μL 100 mmol的乙酸锂(LiAc)溶液悬浮细胞(2 × 10 9 个/ml)，将1 ml ss DNA(单体)样品煮沸5 min，快速在冰水中冷却。振荡细胞悬浮液，取50 μL酵母细胞加到标记的离心管中，离心沉淀细胞，除去乙酸锂。按下列顺序加入基本“转化混合液”：240 μL PEG (50% m/V)，36 μL 1.0 mol/L乙酸锂，25 μL，ssDNA (2.0 mg/ml)；50 μL水和质粒DNA (0.1 μg到10 μg))。振荡离心管直到细胞完全混匀。置 30 ℃ 保温30 min后，置 42 ℃ 水浴中热激20到25 min。以6000~8000 r/min的速度离心15 s，除去转化混合液。吸0.2 ml无菌PBS加到离心管中，悬浮菌体，取适量涂布接种于选择性平板培养基(SD)。 2.2.4. 重组酵母E2BC蛋白表达的检测 挑取在SD平板上的酵母转化子接种于10 ml的SDC培养基，培养16 h。以此为种子液接种于100 ml SDC培养基，摇瓶培养48 h。培养液4500 rpm离心5 min收集菌体，用PBS离心洗涤3次后，用PBS重悬菌体至OD600 = 6。取200 µL悬浮液离心，弃上清，再悬浮于200 µL含有1%BSA的PBS中。加入1 µL(工作浓度1:200)一抗(鼠抗His单抗)，37℃温育2 h，离心弃上清，用PBS洗涤3次，再悬浮于200 µL含1%(W/V)BSA的PBS中，加1 µL(工作浓度1:200)二抗(羊抗鼠IgG-FITC)，避光37℃温育2 h。PBS洗涤3次后悬浮沉淀，然后用荧光显微镜观察 [ 8 ] 。
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user: 3. 结果 3.1. E2BC基因克隆 以pVEXE2重组质粒为模板，PCR扩增E2BC目的基因片段，图2可见250 bp处有一明亮DNA条带，与E2BC基因预期大小255 bp相符，显示成功获得目的基因E2BC。 将E2BC基因片段连接到真核表达载体pcDNA3.1的BamH I和EcoR I位点，构建重组质粒载体pcDNA3.1-E2BC。用BamH I和EcoRI进行双酶切鉴定，得到了与E2BC大小相应的基因片段。用序列分析软件DNAMAN 5.2.2 将测得的序列与模板序列进行比对分析，显示插入的目的基因E2BC序列与模板序列一致，显示成功构建重组载体pcDNA3.1-E2BC。 图2. PCR扩增E2BC基因 3.2. 酵母展示表达载体的构建 用BamH I和EcoR I双酶切pcDNA3.1-E2BC获得E2BC基因片段，将其纯化后插入p1v5-AG质粒载体的相应位点，替换载体p1v5-AG的v5片段(图1)，经BamH I和EcoR I双酶切鉴定，获得与E2BC大小一致的基因片段，显示成功构建了重组载体p1 E2BC-AG (图3)。 3.3. 重组酵母菌E2BC蛋白表达 用间接免疫荧光染色法检测带有His标签的E2BC蛋白是否已经成功展示在酵母细胞表面。以鼠源抗His标签单克隆抗体为一抗，二抗为FITC标记的羊抗鼠IgG。间接免疫荧光染色后，用荧光显微镜观察，阴性对照酵母细胞没有观察到绿色荧光(图4(a)，转化重组表达载体p1-AG-E2BC的酵母细胞观察到了绿色荧光(图4(b)，表明E2BC蛋白成功表达在了酵母细胞表面。 图3. 重组载体p1E2BC-AG双酶切鉴定 图4. 简接免疫荧光染色检测E2BC蛋白的表达
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user: 4. 讨论 酵母展示系统可用来展示病原微生物的抗原，制备疫苗。重组酵母载体疫苗具有生产成本低，应用方便，可口服免疫等优点。酵母细胞壁成分还具有天然的佐剂活性，因此在酵母表面展示的抗原蛋白能够诱导良好的免疫 [ 9 ] 。 Wasilenko等 [ 10 ] 将高致病禽流感病毒的血凝素蛋白展示于酵母细胞表面，重组酵母菌口服免疫鸡，诱导机体产生了中和抗体。Lei等 [ 11 ] 将禽流感病毒H5N1血凝素展示到酵母菌表面，口服免疫小鼠诱导产生了体液和细胞介导的免疫。加强免疫后，可产生高水平的HA特异的IgG1和IG2a抗体。攻毒实验显示，口服疫苗组可全部抵抗致死性H5N1的攻击。Kim等 [ 12 ] 将胸膜肺炎放线杆菌血清型2株的ApxIIA毒素表位片段展示于酿酒酵母细胞表面。每次用5 × 10 7 个重组酵母口服免疫小鼠，免疫四次后，小鼠产生了针对胸膜肺炎放线杆菌的保护性特异抗体。免疫小鼠接种胸膜肺炎放线杆菌72小时后，免疫保护率是40%。Zhao等 [ 13 ] 利用酵母细胞表面展示技术制备了口服传染性造血组织坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus， IHNV))疫苗EBY100/pYD1-bi-G。虹鳟鱼口服该疫苗后，可获得非特异和特异的免疫反应。口服免疫后，在脾、后肠和前肾IFN-1和Mx-1表达水平显著提高，诱导产生了高滴度的中和抗体，攻毒保护率为45.8%。 CSFV的E2糖蛋白是最主要的免疫抗原，能够独立诱导机体产生保护性抗体。E2蛋白可分为A、B、C、D四个功能区，其中B、C区域是主要的抗原决定簇区，能够诱导产生保护性中和抗体。Dong等 [ 14 ] 合成制备了E2蛋白BC抗原决定区的五个重叠多肽P1-P5，并分别与牛血清白蛋白(BSA)相偶联。用这些多肽混合铝佐剂免疫猪，产生了强有力的免疫保护力。攻毒试验显示，免疫组全部健康存活，对照组的猪全部很快出现临床症状并死亡。 本研究将CSFV的E2BC基因插入酵母展示表达载体，将E2BC与酵母细胞壁甘露糖蛋白а凝集素融合表达，利用酿酒酵母细胞内蛋白转运到膜表面的机制(GPI锚定)将E2BC蛋白锚定在酵母细胞表面。针对His标签蛋白的间接免疫荧光染色显示E2BC得到表达，并锚定在酿酒酵母细胞的表面。这些工作为基于E2蛋白B、C抗原域的CSFV酵母载体口服疫苗的研制奠定了基础。
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user: 摘 要 本文开展了DEH系统改造后的600 WM机组甩负荷试验，计算了改造后机组的各项动态特性参数，确定了其良好的动态调节特性；结合改造前后数据的对比发现，改造后机组的转子飞升时间常数变小，在甩负荷后可能出现动态超速难易控制的情况，蒸汽容积时间常数也变小，这可能与汽门严密性试验不合格有关。进而提出了相关甩负荷试验进行时需注意的几个问题。 关键词 :600 MW，汽轮机组，甩负荷试验，DEH Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 随着能源短缺和环境污染问题的加重，政府部门正在逐步加大清洁、可再生能源的使用比重，核电、太阳能发电、风电等装机容量不断提高，然而在我国煤炭为主的能源架构中，火电仍占总发电量的80%以上 [ 1 ] [ 2 ] 。目前，火力电网发电的主力机型为亚临界、超临界和超超临界参数的600 MW等级机组，在发生甩负荷时大容量汽轮机转子的转速提升飞快，为确保安全，在新机组投入使用前或机组改造后都必须进行甩负荷试验以检验汽轮机的动态调节特性 [ 3 ] 。田丰 [ 4 ] 对我国22台600 MW等级机组甩负荷试验进行对比分析后发现：电液控制系统DEH抑制转速飞升的能力都比较强，且DEH系统控制水平的提高是机组整体建设水平高的重要标志。 北仑电厂2期三台600 MW汽轮机组早在投入运行前就已成功进行了甩负荷试验，获得了大型机组甩负荷试验的一些宝贵经验 [ 5 ] 。随着运行年限的增加，DEH系统老化比较严重，致使机组故障率明显增多，且国外进口机组维修比较困难、费用高。一系列问题限制了机组的高质量运行，迫使对其进行改造提升。这也将是未来几年我国600 MW机组普遍面临的问题。早期有关于110 MW和300 MW汽轮机组DEH改造方面的报道 [ 6 ] [ 7 ] ，但关于600 MW机组的DEH系统改造后的甩负荷试验分析则极少。