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user: 3. 结果 3.1. 苓甘五味姜辛汤成分及靶点获取 通过检索TCMSP得到苓甘五味姜辛汤活性成分785个，以OB ≥ 30%和DL ≥ 0.18为筛选标准，筛选得到130个有效活性成分，其中茯苓15个，甘草93个，干姜5个，细辛8个，五味子9个，预测得到靶点346个，删除重复值后得到143个靶点，见表1。 Table 1 Active ingredients of LingganWuweiJiangxin Decoctio 药物名称 Mol ID Molecule Name OB (%) DL 茯苓 MOL000273 (2R)-2-[(3S，5R，10S，13R，14R，16R，17R)-3，16-dihydroxy-4，4，10，13，14-pentamethyl-2，3，5，6，12，15，16，17-octahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-6-methylhept-5-enoic acid 30.93 0.81 MOL000275 trametenolic acid 38.71 0.8 MOL000276 7，9(11)-dehydropachymic acid 35.11 0.81 MOL000279 Cerevisterol 37.96 0.77 MOL000280 (2R)-2-[(3S，5R，10S，13R，14R，16R，17R)-3，16-dihydroxy-4，4，10，13，14-pentamethyl-2，3，5，6，12，15，16，17-octahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-5-isopropyl-hex-5-enoic acid 31.07 0.82 MOL000282 ergosta-7，22E-dien-3beta-ol 43.51 0.72 MOL000283 Ergosterol peroxide 40.36 0.81 MOL000285 (2R)-2-[(5R，10S，13R，14R，16R，17R)-16-hydroxy-3-keto-4，4，10，13，14-pentamethyl-1，2，5，6，12，15，16，17-octahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-5-isopropyl-hex-5-enoic acid 38.26 0.82 MOL000287 3beta-Hydroxy-24-methylene-8-lanostene-21-oic acid 38.7 0.81 MOL000289 pachymic acid 33.63 0.81 MOL000290 Poricoic acid A 30.61 0.76 MOL000291 Poricoic acid B 30.52 0.75 MOL000292 poricoic acid C 38.15 0.75 MOL000296 hederagenin 36.91 0.75 MOL000300 dehydroeburicoic acid 44.17 0.83 甘草 MOL001484 Inermine 75.18 0.54 MOL001792 DFV 32.76 0.18 MOL000211 Mairin 55.38 0.78 MOL002311 Glycyrol 90.78 0.67 MOL000239 Jaranol 50.83 0.29 MOL002565 Medicarpin 49.22 0.34 MOL002844 Pinocembrin 64.72 0.18 MOL000354 isorhamnetin 49.6 0.31 甘草、干姜 MOL000359 sitosterol 36.91 0.75 MOL003656 Lupiwighteone 51.64 0.37 MOL003896 7-Methoxy-2-methyl isoflavone 42.56 0.2 MOL000392 formononetin 69.67 0.21 MOL000417 Calycosin 47.75 0.24 甘草、细辛 MOL000422 kaempferol 41.88 0.24 MOL004328 naringenin 59.29 0.21 MOL004805 (2S)-2-[4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl]-8，8-dimethyl-2，3-dihydropyrano[2，3-f]chromen-4-one 31.79 0.72 MOL004806 euchrenone 30.29 0.57 MOL004808 glyasperin B 65.22 0.44 MOL004810 glyasperin F 75.84 0.54 MOL004811 Glyasperin C 45.56 0.4 MOL004814 Isotrifoliol 31.94 0.42 MOL004815 (E)-1-(2，4-dihydroxyphenyl)-3-(2，2-dimethylchromen-6-yl)prop-2-en-1-one 39.62 0.35 MOL004820 kanzonols W 50.48 0.52 MOL004824 (2S)-6-(2，4-dihydroxyphenyl)-2-(2-hydroxypropan-2-yl)-4-methoxy-2，3-dihydrofuro[3，2-g]chromen-7-one 60.25 0.63 MOL004827 Semilicoisoflavone B 48.78 0.55 MOL004828 Glepidotin A 44.72 0.35 MOL004829 Glepidotin B 64.46 0.34 MOL004833 Phaseolinisoflavan 32.01 0.45 MOL004835 Glypallichalcone 61.6 0.19 MOL004838 8-(6-hydroxy-2-benzofuranyl)-2，2-dimethyl-5-chromenol 58.44 0.38 MOL004841 Licochalcone B 76.76 0.19 MOL004848 licochalcone G 49.25 0.32 MOL004849 3-(2，4-dihydroxyphenyl)-8-(1，1-dimethylprop-2-enyl)-7-hydroxy-5-methoxy-coumarin 59.62 0.43 MOL004855 Licoricone 63.58 0.47 MOL004856 Gancaonin A 51.08 0.4 MOL004857 Gancaonin B 48.79 0.45 MOL004860 licorice glycoside E 32.89 0.27 MOL004863 3-(3，4-dihydroxyphenyl)-5，7-dihydroxy-8-(3-methylbut-2-enyl)chromone 66.37 0.41 MOL004864 5，7-dihydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-enyl)chromone 30.49 0.41 MOL004866 2-(3，4-dihydroxyphenyl)-5，7-dihydroxy-6-(3-methylbut-2-enyl)chromone 44.15 0.41 MOL004879 Glycyrin 52.61 0.47 MOL004882 Licocoumarone 33.21 0.36 MOL004883 Licoisoflavone 41.61 0.42 MOL004884 Licoisoflavone B 38.93 0.55 MOL004885 licoisoflavanone 52.47 0.54 MOL004891 shinpterocarpin 80.3 0.73 MOL004898 (E)-3-[3，4-dihydroxy-5-(3-methylbut-2-enyl)phenyl]-1-(2，4-dihydroxyphenyl)prop-2-en-1-one 46.27 0.31 MOL004903 liquiritin 65.69 0.74 MOL004904 licopyranocoumarin 80.36 0.65 MOL004905 3，22-Dihydroxy-11-oxo-delta(12)-oleanene-27-alpha-methoxycarbonyl-29-oic acid 34.32 0.55 MOL004907 Glyzaglabrin 61.07 0.35 MOL004908 Glabridin 53.25 0.47 MOL004910 Glabranin 52.9 0.31 MOL004911 Glabrene 46.27 0.44 MOL004912 Glabrone 52.51 0.5 MOL004913 1，3-dihydroxy-9-methoxy-6-benzofurano[3，2-c]chromenone 48.14 0.43 MOL004914 1，3-dihydroxy-8，9-dimethoxy-6-benzofurano[3，2-c]chromenone 62.9 0.53 MOL004915 Eurycarpin A 43.28 0.37 MOL004917 glycyroside 37.25 0.79 MOL004924 (-)-Medicocarpin 40.99 0.95 MOL004935 Sigmoidin-B 34.88 0.41 MOL004941 (2R)-7-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)chroman-4-one 71.12 0.18 MOL004945 (2S)-7-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-enyl)chroman-4-one 36.57 0.32 MOL004948 Isoglycyrol 44.7 0.84 MOL004949 Isolicoflavonol 45.17 0.42 MOL004957 HMO 38.37 0.21 MOL004959 1-Methoxyphaseollidin 69.98 0.64 MOL004961 Quercetin der. 46.45 0.33 MOL004966 3’-Hydroxy-4’-O-Methylglabridin 43.71 0.57 MOL000497 licochalcone a 40.79 0.29 MOL004974 3’-Methoxyglabridin 46.16 0.57 MOL004978 2-[(3R)-8，8-dimethyl-3，4-dihydro-2H-pyrano[6，5-f]chromen-3-yl]-5-methoxyphenol 36.21 0.52 MOL004980 Inflacoumarin A 39.71 0.33 MOL004985 icos-5-enoic acid 30.7 0.2 MOL004988 Kanzonol F 32.47 0.89 MOL004989 6-prenylated eriodictyol 39.22 0.41 MOL004990 7，2’，4’-trihydroxy-5-methoxy-3-arylcoumarin 83.71 0.27 MOL004991 7-Acetoxy-2-methylisoflavone 38.92 0.26 MOL004993 8-prenylated eriodictyol 53.79 0.4 MOL004996 gadelaidic acid 30.7 0.2 MOL000500 Vestitol 74.66 0.21 MOL005000 Gancaonin G 60.44 0.39 MOL005001 Gancaonin H 50.1 0.78 MOL005003 Licoagrocarpin 58.81 0.58 MOL005007 Glyasperins M 72.67 0.59 MOL005008 Glycyrrhiza flavonol A 41.28 0.6 MOL005012 Licoagroisoflavone 57.28 0.49 MOL005013 18α-hydroxyglycyrrhetic acid 41.16 0.71 MOL005016 Odoratin 49.95 0.3 MOL005017 Phaseol 78.77 0.58 MOL005018 Xambioona 54.85 0.87 MOL005020 dehydroglyasperins C 53.82 0.37 MOL000098 quercetin 46.43 0.28 干姜 MOL002464 1-Monolinolein 37.18 0.3 干姜、细辛 MOL002501 [(1S)-3-[(E)-but-2-enyl]-2-methyl-4-oxo-1-cyclopent-2-enyl] (1R，3R)-3-[(E)-3-methoxy-2-methyl-3-oxoprop-1-enyl]-2，2-dimethylcyclopropane-1-carboxylate 62.52 0.31 MOL002514 Sexangularetin 62.86 0.3 MOL000358 beta-sitosterol 36.91 0.75 MOL012140 4，9-dimethoxy-1-vinyl-$b-carboline 65.3 0.19 细辛 MOL012141 Caribine 37.06 0.83 MOL001460 Cryptopin 78.74 0.72 MOL001558 sesamin 56.55 0.83 MOL002962 (3S)-7-hydroxy-3-(2，3，4-trimethoxyphenyl)chroman-4-one 48.23 0.33 MOL009849 ZINC05223929 31.57 0.83 MOL004624 Longikaurin A 47.72 0.53 MOL005317 Deoxyharringtonine 39.27 0.81 MOL007719 Arnebin 7 73.85 0.18 五味子 MOL008956 Angeloylgomisin O 31.97 0.85 MOL008957 Schizandrer B 30.71 0.83 MOL008968 Gomisin-A 30.69 0.78 MOL008974 Gomisin G 32.68 0.83 MOL008978 Gomisin R 34.84 0.86 MOL008992 Wuweizisu C 46.27 0.84 表1. 苓甘五味姜辛汤活性成分表 3.2. 药物与疾病交集靶点Venn图 通过检索OMIM和GeneCards数据库共获得4875个疾病靶点，合并数据库删除重复值后得到4717个疾病靶点。将药物靶点映射到疾病靶点中，获得122个交集靶点，制成Venn图，见图1。说明以上靶点是苓甘五味姜辛汤治疗COPD的潜在靶点。 图1. 药物与疾病交集靶点Venn图 3.3. 药物–成分–靶点–疾病网络图构建 运用Cytoscape3.7.2软件构建“药物–成分–靶点–疾病”网络图，图2所示，图中共有285个节点(疾病1个，药物5个，靶点152个，成分127个)，2746条边。其中黄色代表甘草活性成分，紫色代表茯苓活性成分，红色代表五味子活性成分，蓝色代表细辛活性成分，绿色代表干姜活性成分，三角形代表“药物–成分–疾病”共同作用靶点。苓甘五味姜辛汤中的活性成分如来源于细辛的山奈酚、来源于甘草的槲皮素、来源于干姜的β-谷甾醇等节点的度值分别为112、88、52，说明以上成分在苓甘五味姜辛汤治疗COPD疾病中参与度较高。 图2. 药物–成分–靶点–疾病网络图 3.4. PPI网络图及核心靶点网络图构建 将药物与疾病的交集靶点导入STING数据库，得到映射靶点之间的蛋白互作网络图，见图3。图中共有122个节点，1294条边，平均节点数为21.2。节点代表靶蛋白，节点值越高证明该靶点在药物治疗疾病中越处于核心地位，边代表靶蛋白之间的相互作用关系。将STRING数据库得到的数据以TSV格式导入Cytoscape3.7.2软件筛选核心靶点，以Degree > 22为筛选标准筛选得到苓甘五味姜辛汤治疗COPD的核心靶点(见图4)。通过比较Degree值大小，预测VEGFA、PTGS2、TNF、IL6、MAPK1、MAPK8等靶点与苓甘五味姜辛汤治疗COPD的关系紧密。 3.5. GO功能富集分析 对苓甘五味姜辛汤治疗COPD的潜在靶点进行GO生物功能分析，以P < 0.05和FDR < 0.05为筛选标准，得到GO生物条目(P < 0.05，FDR < 0.05) 68条，其中生物过程(biological process， BP) 47条，分子功能(molecular function， MF) 13条，细胞组分(cellular component， CC) 8条，其中BP主要涉及对药物的反应(response to drug)、细胞增殖的正调控(positive regulation of cell proliferation)、对乙醇的反应(response to ethanol)等，CC主要涉及细胞外空间(extracellular space)、质膜(plasma membrane)等，MF主要包括酶结合(enzyme binding)、药物结合(drug binding)、类固醇激素受体活性(steroid hormone receptor activity)等。说明苓甘五味姜辛汤的活性成分可能通过以上生物过程参与治疗COPD。按P值降序排列，分别选取前8条制成柱状图展示，见图5。 图3. 苓甘五味姜辛汤治疗COPD蛋白互作网络图 图4. 苓甘五味姜辛汤治疗COPD核心靶点网络图 图5. GO功能富集分析结果 3.6. KEGG通路富集分析 对苓甘五味姜辛汤治疗COPD的潜在靶点进行KEGG通路富集分析，以P < 0.05和FDR < 0.05为筛选标准，富集分析得到15条KEGG通路(P < 0.05， FDR < 0.05)，靶基因主要富集在癌症信号通路、钙离子信号通路、TNF信号通路、HIF-1信号通路、非小细胞肺癌信号通路、小细胞肺癌、PI3K-Akt信号通路等信号通路中，说明苓甘五味姜辛汤中的潜在靶点可能通过调控以上通路参与治疗COPD。按P值降序排列，将筛选出的前15条信号通路信息制成三线表展示，见表2。 Table 2 Enrichment analysis results of KEG 编号 通路 Count 基因 PValue hsa05200 Pathways in cancer 25 PIK3CG， EGFR， AR， IL6， PPARD， PTGS2， RXRB， RXRA， PPARG， TP53， RB1， CDK4， MMP2， MMP1， CDK2， MAPK1， JUN， BCL2， GSK3B， VEGFA， MAPK8， PRKACA， NOS2， EGF， GSTP1 9.83E−09 hsa04020 Calcium signaling pathway 17 EGFR， DRD1， CACNA1S， CHRM5， ADRB2， ADRB1， CHRM3， CHRM2， CHRM1， ADRA1B， ADRA1A， CHRNA7， NOS3， PRKACA， NOS2， ADRA1D， HTR2A 2.14E−08 hsa04080 Neuroactive ligand-receptor interaction 20 OPRM1， GABRA2， DRD1， GABRA1， PRSS1， NR3C1， CHRM5， ADRB2， ADRB1， CHRM3， CHRM2， CHRM1， F2， ADRA1B， ADRA1A， CHRNA7， ADRA1D， HTR2A， CHRNA2， OPRD1 6.94E−08 hsa04668 TNF signaling pathway 13 PIK3CG， IL6， TNF， CCL2， PTGS2， MMP3， VCAM1， MAPK1， MAPK14， JUN， IL1B， MAPK8， SELE 1.18E−07 hsa05219 Bladder cancer 9 EGFR， MAPK1， VEGFA， TP53， RB1， EGF， CDK4， MMP2， MMP1 2.19E−07 hsa04066 HIF-1 signaling pathway 12 PIK3CG， EGFR， MAPK1， IL6， HMOX1， BCL2， VEGFA， IFNG， NOS3， NOS2， EGF， INSR 3.28E−07 hsa05142 Chagas disease (American trypanosomiasis) 12 PIK3CG， MAPK1， IL6， TNF， CCL2， MAPK14， JUN， IFNG， IL1B， MAPK8， NOS2， IL2 7.44E−07 hsa05223 Non-small cell lung cancer 9 PIK3CG， EGFR， MAPK1， RXRB， RXRA， TP53， RB1， EGF， CDK4 2.66E−06 hsa05222 Small cell lung cancer 10 PIK3CG， PTGS2， RXRB， RXRA， BCL2， TP53， RB1， NOS2， CDK4， CDK2 7.92E−06 hsa05212 Pancreatic cancer 9 PIK3CG， EGFR， MAPK1， VEGFA， TP53， MAPK8， RB1， EGF， CDK4 8.38E−06 hsa04151 PI3K-Akt signaling pathway 19 EGFR， PIK3CG， IL6， RXRA， TP53， CDK4， CDK2， KDR， MAPK1， CHRM2， BCL2， GSK3B， CHRM1， VEGFA， NOS3， COL1A1， EGF， INSR， IL2 8.53E−06 hsa04725 Cholinergic synapse 11 PIK3CG， MAPK1， ACHE， CHRM5， CHRM3， CHRM2， CHRM1， BCL2， PRKACA， CHRNA7， CACNA1S 1.05E−05 hsa05215 Prostate cancer 10 PIK3CG， EGFR， MAPK1， AR， BCL2， GSK3B， TP53， RB1， EGF， CDK2 1.06E−05 hsa05161 Hepatitis B 12 PIK3CG， MAPK1， IL6， TNF， JUN， BCL2， TP53， MAPK8， RB1， CDK4， CCNA2， CDK2 1.94E−05 hsa04915 Estrogen signaling pathway 10 OPRM1， PIK3CG， EGFR， MAPK1， JUN， ESR1， PRKACA， NOS3， ESR2， MMP2 2.76E−05 表2. KEGG富集分析结果