DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 国内外民宿界定概述 民宿最早起源于欧洲，英国的B & B (Bed and Breakfast)即向客人提供床和早餐的家庭旅馆被视为民宿发展的鼻祖，随后陆续在日本、美国、法国等出现了相似的住宿形式 [ 1 ]。由于各地的语言文化有所差异，除B & B外，Family Hotel、Family Inn、House Hotel、Home Stay等词语也出现在对于这类住宿形式的表述中 [ 2 ] [ 3 ]。20世纪80年代，随着台湾地区旅游地的不断开发，大量游客在节假日前往，当地居民便将自家的闲置客房用来接待游客，并收取一定的费用，由日语“みんしゅく” (Minshuku)一词演变而来的“民宿”在中国开始发展 [ 4 ]。 由于各地对于民宿的标准与要求不同，民宿的定义也存在一定差别。Jackie Clarke认为，民宿是旅游体验的一个组成部分，除了住宿，还包括景点、设施、交通和目的地形象 [ 5 ]。Bobbi Zane在《The B & B Guest: A Comprehensive View》一文中提到，民宿的范围较小，属于私人所有，具有安静、私密的氛围，同时提供个性化的服务 [ 6 ]。南美旅游分级委员会(TGCSA)将民宿定义为：“在家庭(私人)住宅中提供住宿，业主/经理住在房屋中或具有房屋所有权。必须提供早餐。浴室可能是套间，也可能是公共的。一般来说，客人和寄宿家庭共享公共区域” [ 7 ]。瑞士的民宿是私人经营的小型家庭旅馆，但对于四周环境、居家设备、卫生状况等方面有严格的要求 [ 8 ]。日本的民宿是由政府批准个人经营的一种都市居民以家庭为单位寄居于农家民宅的新型度假方式 [ 9 ]。 在我国，民宿的发展起源于台湾地区。2001年，台湾出台《民宿管理办法》，并在2010年进行了修订，《民宿管理办法》将民宿确定为“利用自有住宅空闲房间，结合当地人文、自然景观、生态、环境资源及农林渔牧生产活动，以家庭副业方式经营，提供旅客乡野生活之住宿处所”。2017年8月，原国家旅游局提出了《旅游民宿基本要求与评价》，规定了旅游民宿的定义、评价原则、基本要求、管理规范和等级划分条件，其中对于旅游民宿的定义为“利用当地闲置资源，民宿主人参与接待，为游客提供体验当地自然、文化与生产生活方式的小型住宿设施” [ 10 ]。2019年7月，文化和旅游部对于标准进行了修改，也更加详细地确定了旅游民宿的建筑面积及大小，认为其是“利用当地民居等相关闲置资源，经营用客房不超过4层、建筑面积不超过800 m 2 ，主人参与接待，为游客提供体验当地自然、文化与生产生活方式的小型住宿设施”，根据所处地域的不同可分为城镇民宿和乡村民宿 [ 11 ]。 虽然目前国内外对于民宿还没有形成统一的定义，但不难从中总结出共性： (1) 民宿的房屋所有权为私人所有，且房屋面积有限。 (2) 民宿除满足基础性的住宿需求外，对于所在地的自然环境、人文风俗还应有所体现。 (3) 不同于标准化的酒店服务，民宿更多提供的是个性化的服务。
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user: 2. 国内民宿发展现状分析 随着共享经济和大众旅游时代的到来，民宿发展规模不断扩张，为游客提供了更多住宿选择，改变了传统酒店住宿的消费习惯 [ 12 ]。据不重合统计数据显示，2019上半年，全国共享住宿平台应用新增下载量7972.6万次，以中国13亿人口的数据统计来看，也就意味着在2019上半年有6%的新用户开始尝试预定民宿。据不完全统计，经过半年时间，国内爱彼迎、途家、木鸟、小猪等几大主流民宿预定APP的海内外房源数量也由2018年的894万套增长至970万套，涨幅超过5%。由此可见，我国游客对于民宿的接受度逐渐提升，更多的旅游者有意愿尝试民宿，体验民宿，同时也有更多的投资者将资本注入民宿市场，扩大了民宿市场供给量。 经历了粗放发展的1.0时代，民宿正面临由高端、特色向大众化转变的2.0时代。1.0时代以云南丽江、大理、香格里拉、腾冲、西双版纳等民族风情旅游目的地民宿为代表，早期提供单一的餐饮住宿，后期融入休闲体验的要素，产品种类单一，发展规划意识弱，在相似的产品被大量复制后，民宿平均房价出现了“过山车”式的急剧下降。云南地区也是国内民宿开发自主经营的代表，当地居民将自家空闲房屋提供给旅客，并收取一定的费用，是民宿最开始的形式。此外自主经营的典型还有依附于鼓浪屿老民宅的厦门民宿，由于岛上住宿酒店缺乏，很多岛内居民改造现有老民宅用于特色民宿经营。 2.0时代是以浙江民宿为代表的中国大陆民宿发展第二阶段。2012年浙江德清莫干山、安吉等地出现一批主打高端、奢华的民宿，揭开引入资本打造民宿的序幕。2018年7月中国旅游饭店业协会公布的“最佳民宿”中，有一半来自浙江地区，各具特色的民宿设计和专业化的运营管理为浙江民宿带去巨大收益，同时也成为大陆民宿发展的标杆。大众旅游的发展和激烈的市场竞争驱使价格高昂的浙江民宿探索大众化精品民宿发展的新路径 [ 13 ]。浙江莫干山民宿群、江苏昆山的周庄民宿村等在开发模式上选择由政府主导发展形成。当地政府为了促进旅游发展，大力扶持当地居民进行有特色的旅游项目建设，形成了一定规模的民宿群，进行集中管理，打造以“民宿”为旅游吸引物的新型旅游模式。 除了以云南、厦门为代表的自主经营模式和以莫干山、周庄为代表的政府主导模式，目前国内部分民宿由社会资本、财团和政府联合打造开发。当地政府的支持加上外来资本的注入为江西婺源、湖南岳麓地区民宿发展提供了政策支持和资本支撑，形成了江西婺源的篁岭集中经营模式、湖南岳麓黄泥岭集中租赁经营模式、雁南飞模式等，为其他地方民宿发展提供了参考。 目前国内民宿主要分布在南方城市，其中又多集中于景区附近，在经营方式上多为分散经营，部分地区有公司资本进行运营管理，部分民宿开始出现股份制和加盟制。
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user: 3. 天津市民宿发展SWOT分析 3.1. 优势(Strengths) 作为环渤海地区的经济中心，天津近些年经济得到再一次发展。随着京津城际铁路的通车，“京津冀”一体化的不断推进，天津和北京、河北等周边城市的联系再一次加深。数据显示，2018年天津市接待入境旅游者198.31万人次，接待国内游客2.27亿人次，比2017年增长9.1%，巨大的旅游市场为民宿发展提供了先决条件。 天津市具有数量繁多、种类丰富的旅游资源。“百年中国看天津”，在天津，五大道、意风街、小白楼汇聚着英、法、意、德等各国建筑，展现了丰富多彩的建筑艺术；鼓楼、古文化街、文昌阁、黄崖关长城、大沽口炮台是历史留给天津的宝贵财富；独乐寺、西开教堂、望海楼教堂是各种宗教文化在天津融合、发展的外在表现；杨柳青年画、泥人张、曲艺是天津独有的文化财富，外地无法复制；蓟州有良好的自然环境，远离城市，是放松紧张心情，回归田野生活的绝佳选择；方特欢乐世界、欢乐谷、航母主题公园是主题公园旅游的典范……丰富的旅游类型满足了多人群旅游需要，开阔了旅游市场，为民宿发展提供市场需求，也提供了不同的思路与方向。 天津地理位置优越，交通便利，紧靠北京，可将北京作为强大的度假主要客源市场，挖掘北京的民宿客源消费潜力，将民宿产品推向北京。 天津民宿类型多样，有城市住宅、独栋别墅、老洋房、郊区农家院等等，不同的民宿类型可满足不同人群的需要。在2019年11月召开的2019年第九届海峡两岸旅游观光研讨会暨民宿旅游发展高峰论坛中，首次发布了由国家研究院发布的权威民宿业发展报告。报告显示，2019年天津民宿有717家，民宿好评率为93.7%，在31个省级行政区中占第17位，表现优秀。 3.2. 劣势(Weaknesses) 除携程网外，在爱彼迎、木鸟、小猪短租等国内常用短租平台APP上，天津民宿数量都已形成一定的规模，但由于发展时间较晚，没有鲜明的特色，天津市目前尚未形成知名的民宿品牌。“试睡大师2019中国民宿必住榜TOP50”、“2019中国民宿榜TOP50”等具有权威性的榜单上都没有天津的民宿的身影，对天津民宿的推广造成了一定的难度，天津民宿想在周边及全国范围内产生一定的影响力还需要经过长时间的发展。 目前天津大部分民宿没有将天津特有的文化习俗融入其中，只是简单提供了餐饮及住宿的功能，缺少了“民”的灵魂。在民宿的装修与布置方面，风格大同小异，没有结合所在地的环境突出特色，同质化严重 [ 14 ]。 3.3. 机会(Opportunities) 2015年11月，国务院发布《关于加快发展生活性服务业促进消费结构升级的指导意见》 [ 15 ]，2017年8月原国家旅游局出台了全国性民宿规范性文件《旅游民宿基本要求与评价》并于2019年进行修改，还有《中国民宿客栈经营服务规范》、《农家乐(民宿)建筑防火导则(试行)》、《旅游绿皮书：2016~2017年中国旅游发展分析与预测》等国家层面规范性文件的先后出台都为民宿发展从范围、基本要求、安全管理等各方面提供了依据，对于民宿行业发展具有指导性意义 [ 16 ]。 自2011年中国人均GDP超过5000美元，游客已由传统的游览式旅游向多元化的休闲度假游转变。逐渐成为社会消费主力群体的80、90后不仅消费观念发生了改变，消费习惯也有所变化。自2011年起，中国在线旅游市场交易规模逐渐扩大，移动互联网为在线平台发展提供了条件，“共享”成为新的生活方式。可以体验生活、放松自我的民宿是共享经济的产物，更为当代年轻人追求自我解放提供了环境 [ 15 ]。 3.4. 威胁(Threats) 天津周边城市如北京、秦皇岛已经形成了一批有特色的民宿，这些民宿经营时间长，风格独特，运营体系完善，已经形成了一定的知名度和口碑，占据了相当的市场份额。如北京地区“姥姥家小院”、“呆住·幽蘭”等网红民宿风格在天津也有所体现，但其知名度远高于天津地区。风格相近，发展早，知名度高的周边民宿对天津民宿发展造成了威胁与挑战。
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user: 4. 天津市民宿开发存在的问题 4.1. 行业监管不规范 4.1.1. 立法缺失 迄今为止，国家还未出台与民宿相关的法律，没有以法规条例的形式将民宿经营管理规范化，合法化，很多民宿经营仍处在不合法的灰色地带 [ 17 ]。很多地方政府根据国家已出台的相关标准，制定了当地的民宿发展法律规制，如《北京市旅游管理条例》、《浙江省民宿管理办法》等，充分考虑本地民宿发展情况，使法规更有针对性，但天津市目前并没有出台相关的法律规制。虽然国家在2017年发布，2019年修改了《旅游民宿基本要求与评价》，作为首个民宿行业标准从民宿的定义、基本要求、管理规范及等级划分条件等方面对民宿行业发展给出了指导性意见，但其中的规定过于笼统，在实际执行过程中存在很大的难度，所以天津的民宿管理法律依据缺失严重 [ 1 ]。 4.1.2. 民宿定义宽泛，定位模糊 目前国内外学者对于民宿仍没有明确、统一的定义，导致“民宿”一词被滥用，衍生出各种形式。民宿不仅仅是提供住宿和餐饮，更应带给旅游者当地的生活体验和文化内涵，但目前很多民用住宅打着“民宿”、“客栈”的名号进入市场，实际与传统酒店、家庭旅馆没有差别，模糊不清的定位影响消费者的判断与选择，也影响国家及相关部门对民宿市场的监管 [ 18 ] [ 19 ]。 4.1.3. 责任主体不明确，维权难度大 目前国内民宿的运营模式多种多样，但以C2C (业主自主经营)、B2C (由平台管理)、C2B2C (商户经营)三种为主。C2C (业主自主经营)模式是拥有闲置房源的房主将房屋信息上传到Airbnb等在线民宿平台上，待平台审核通过后发布，消费者和房主可直接在平台上交易。B2C (由平台管理)模式是房主将闲置房源出租给在线民宿平台，由平台对房屋进行统一的运营与管理，并对外发布信息，消费者不直接与房东交易，而与平台签署相关的服务合同。C2B2C (商户经营)模式多为精品民宿运营，如大象民宿就是典型代表。房屋所有者将房源租给商户，商户统一运营管理，交由平台发布信息，消费者与在线平台签署服务协议，且商户和在线平台共同管理民宿。由此可见，不同的运营模式对应的责任主体差别很大，但现实生活中，消费者很难区分民宿的具体运营模式，一旦发生侵权行为，消费者难以在第一时间找到对应的责任主体进行维权，极大程度影响了维权效率。难以维权不仅会对消费者选择民宿产生顾虑，还可能影响民宿行业的正常运行 [ 1 ]。 4.2. 安全隐患多 4.2.1. 卫生、消防安全有隐患 不同于传统酒店的标准化，民宿的卫生标准和监管存在一定的差异性。且由于房屋所有权归私人所有，卫生、环保等部门对民宿的建筑卫生和餐饮卫生都难以按商业性建筑的标准进行监督和抽查 [ 20 ] [ 21 ]。 民宿多为住家房屋装修、布置而成，所选用的建筑材料与商用酒店建筑材料在耐火性能上可能存在差异。对于消防用具、消防通道等的设计、放置与商业性建筑的要求都有区别，消防部门对于住宅性质的房屋没有行政审批权，大多数民宿在经营前都未经过消防安全验收与检查，存在很大的消防安全隐患。 4.2.2. 公共安全隐患突出 民宿没有特定的部门进行监管，且流动人员数量多，极易成为违法犯罪人员或在逃人员的目标。在线运营平台只对房源信息和经营人的个人信息进行审核，无法对预订人及真实入住人员的身份信息进行查验，国家尚未出台制度规定，要求民宿经营者将入住人员信息联网上传公安系统，导致民宿内极易发生违法犯罪活动。尤其是城市民宿，所处位置具有一定的特殊性，民宿内一旦发生违法犯罪活动，还可能影响周边居民的正常生活 [ 22 ]。 4.3. 开发规划存在问题 4.3.1. 缺乏特色，可选择性少 当前天津的民宿还是以复制模仿为主，没有形成独特的“天津特色”。市区的城市民宿装修风格、环境布局大体一致，与国内其他的城市民宿没有明显区别，没有在民宿中体现出曲艺、相声、小洋楼文化等独具天津风味的元素。蓟州区的民宿更依赖自然环境，将自然与农家结合，但没有根据各乡镇、乡村特点，加入特有的民俗活动，游客的参与感较低，重游意愿不强烈 [ 23 ]。 4.3.2. 缺乏品牌意识 很多民宿经营者是基于近年民宿快速发展的前提或凭借个人兴趣进入民宿行业，对民宿管理并没有相关知识积累，没有发展品牌的意识，对营销有错误的理解。迈点研究院发布的《2016年度中国客栈民宿品牌发展报告》数据显示，仅有不到10%的民宿关注品牌 [ 19 ]。通过在线上平台搜索可以发现，天津市民宿仍以单体经营为主，不同于传统酒店依靠强大的品牌效应获取关注。 4.3.3. 没有形成联盟合作 在竞争激烈的今天，一味的单体抗争可能会带来巨大的成本和利益损失，竞争者之间的相互合作往往能实现利益最大化，双方实现共赢。天津市的民宿没有采用联盟合作的方式，而是选择独立经营，会造成大量的资源浪费。 4.4. 环境破坏严重 4.4.1. 自然资源浪费严重 民宿的快速发展吸引更多的人将资本投入民宿市场，对现有房屋进行大规模改造或者新建房屋开展民宿经营活动都会对自然环境造成一定的影响。建设与现有民宿类似或同质化程度高的民宿，不仅不会带来高收益，还可能因数量的增多而降低现有民宿的平均房价水平，造成同类型民宿的剩余，占用自然资源，变成资源浪费。 4.4.2. 人文资源遭到破坏 对于乡村的民宿而言，传统民居是原生的人文环境的一部分，是人文资源的外在表演。在蓟州地区，有些民宿为了能更满足现代人的生活需要，对传统民居进行大规模的改造，用现代的建筑代替了传统民居，破坏了人文资源的完整性。
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user: 5. 促进天津市民宿发展的建议 5.1. 完善监管机制 5.1.1. 完善立法立规 天津市应尽快推出民宿经营相关法律法规，结合民宿发展现状，对民宿的范围作出明确的界定，并根据法律法规，对不符合要求的民宿及经营者提出整改要求和建议，使民宿管理经营有据可循。在民宿消防、安全方面尽快出台相关制度，由政府相关部门(如天津市文化和旅游局、消防、公安)监管，行业协会引导约束，消费者评价。 5.1.2. 形成行业联盟 由天津市政府牵头，鼓励现有的民宿形成行业联盟，可按照类型或地区分类，充分发挥协同合作。一方面减少应不必要的竞争而造成的经济损失，另一方面行业联盟的形成有助于天津民宿行业进行自我监督、自我管理 [ 24 ]。 5.1.3. 建立惩处机制 由天津市政府相关部门和行业联盟共同制定惩处机制，并向民宿管理者公示。进行定期和不定期抽检，发现不合格现象及时根据惩处机制作出处理，并在全市范围内公示。 5.1.4. 引入保险机制 天津市民宿行业联盟可与大型保险公司合作，将保险公司纳入监管体系中，为消费者的每一次民宿体验提供保障。一旦发生需要赔付的行为，由保险公司先行赔付消费者的损失，再由保险公司和民宿运行平台或民宿所有者进行核算。同时保险公司的赔付情况作为政府和行业联盟监管民宿经营的有效证据，真实客观地反映民宿经营的实际情况。 5.2. 打造品牌，突出特色 [ 25 ] 5.2.1. 挖掘自然资源 合理挖掘和利用天津特有的自然资源，将自然资源融入民宿发展中，在细节处体现独特，形成令人影响深刻的“天津民宿”。 5.2.2. 深化文化内涵 时刻铭记民宿不仅是提供住宿和餐饮服务，更需要有文化的渗入。将天津的相声文化、小洋楼文化、民俗文化通过各种方式融入民宿，让入住民宿的游客有所参与，有所体验，形成印象深刻的天津记忆。 5.2.3. 聚焦精品民宿 现阶段，天津民宿已达到了一定的数量规模，发展应更加偏重精品化。民宿不仅仅承载着住宿功能，更是城市的风景线和独特名片，是向外来游客展现本地生活风貌的舞台。天津市可适当减少民宿数量，着重发展精品民宿，以各行政区为单位，在各区文化和旅游局的帮助下，发展突出区域特色的民宿，让外来游客感受到天津与其他城市的不同以及天津市各区域之间的差别，增加游客的重游意愿。 5.3. 专业化经营，培养专业运营人才 借鉴国内知名民宿品牌的运营模式，邀请专业的团队对天津民宿进行统一管理，针对民宿的特色进行专业化经营，使其更有针对的面向市场。同时培养民宿专业运营人才，建立智库，为天津民宿发展把握总体方向，出谋划策。 5.4. 列入政府采购计划 选取个别有特色的民宿，列入政府采购计划，承接政府接待、会议等重要活动，使天津市及其他城市的政府工作人员了解天津民宿，形成独特的推广渠道。同时减少旅游淡旺季对于民宿收益的影响，激励天津民宿向特色化经营转变。 5.5. 推进“民宿+”模式 5.5.1. 尝试“民宿+”智慧旅游 将智慧旅游与民宿结合，在民宿中体现科技的现代性，为民宿增加独特吸引力，使其成为新的卖点。智慧旅游的加入，会使民宿更加人性化，旅游更加方便化，满足游客的多元需求，是民宿“以人为本”的另类表现。 5.5.2. 探索产研结合 尝试民宿和学科研究相结合，探究民宿除提供服务外的其他功能。将研究地点由研究院搬到民宿，一方面可以帮助研究人员改变仅依靠理论，不联系实际的现状，使研究成果更具有可行性；另一方面可以让民宿经营者在做中学，在学中做，给民宿经营者提供学习理论知识的机会。
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user: 6. 结论 共享经济时代，我国民宿行业发展迅速，涌现了一批具有代表性的民宿。天津民宿行业跟随时代得到发展，同时也暴露出行业监管不规范，安全隐患多，开发规划存在问题，环境破坏严重四大问题。为此，笔者建议天津市完善监管，打造品牌，突出特色，专业化经营，培养专业运营人才，列入政府采购计划，推进“民宿+”模式，以此助力天津市民宿行业更快更好发展。
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user: 摘 要 农房建设问题正逐步成为江苏省工程建设中关注的热点问题。基于苏南、苏中、苏北3个区域中的26个自然村207户住宅，通过实地调研，总结江苏省农房在质量安全、建设经济性、建筑功能、用能情况四个方面的现状。根据调研结果分析江苏省农房绿色技术应用的五大影响因素，调研结果表明，江苏省农房建设中采用的绿色技术较少，需在今后农房建设中注重绿色技术的推广。鉴于此，以期为制定江苏省绿色农房建设提供参考。 关键词 :农房，现状调查，绿色技术 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 十九大报告提出，实施乡村振兴战略，按照产业兴旺、生态宜居、乡风文明、治理有效、生活富裕的总要求，坚持农业农村优先发展。结合江苏省省情实际，紧紧围绕高质量发展的目标，江苏省开展了“村庄环境整治”、“美丽乡村建设”、“苏北地区农房改善”等一系列推进乡村生态宜居的重大行动。与此同时，江苏省住房和城乡建设厅开展了“乡村人居环境改善农民意愿调查”，据调查显示，江苏90%以上的农房是1979年以后建造的，这一比例在苏南地区更高，普遍存在建筑质量差、缺乏设计、不方便和不舒适等问题。 因此，调研以江苏省内所属村落为对象，对目前农房建设基本情况进行调查，查清当前农房现状。从提高农房建筑质量，延长农房使用寿命，改善农房居住功能，提升农民居住健康安全，促进绿色建材及绿色建筑新技术的推广应用方面入手，结合太阳能、生物质能可再生能源技术、建筑保温隔热技术、抗震加固技术、生活污水及生活垃圾处理技术等，寻求绿色技术推广应用的重点，发现影响绿色技术应用的问题所在，为构建完整的江苏省绿色农房建设技术体系打下基础，从而为制定江苏省绿色农房建设技术导则提供参考，推动全省绿色农房建设。
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user: 2. 调查概况 2.1. 调查内容 主要调查内容为江苏省农房建设现状，围绕江苏省村庄环境整治行动计划，开展农房建设技术现状调研，参照绿色建筑节能、节地、节水、节材与保护环境 [ 1 ] 的要求，筛选适宜技术，满足绿色农房建筑要求，主要包括以下几个方面： (1) 农房质量安全调查，包括选址、基础、材料、结构、墙体等 [ 2 ]； (2) 农房建设经济性调查，包括农民收入情况、建设成本、装修成本等； (3) 农房建筑功能调查，包括布局形态、功能空间等； (4) 农房用能情况抽样调查，包括用电、用水以及现有农房绿色技术的调查，包括太阳能、外墙保温、外遮阳技术等的使用情况等；同时根据江苏省域气候、经济、社会条件等指标，对江苏省农房利用情况采用聚类法进行分区，然后在每个区选择若干农户进行农村居民用能习惯、节能意识、建设绿色农房意愿的抽样调查 [ 3 ]。 2.2. 调查对象 本次调查地点为江苏省的自然村，按照地理位置分为苏南，苏北，苏中三个地区，具体情况如表1、表2、表3所示。 Table 1 Sample distribution in southern Jiangs 各地区 苏南 江宁区 高淳区 丹阳市 调查自然村个数 6 2 2 2 按户统计样本 52 11 20 21 表1. 苏南地区样本分布情况 Table 2 Sample distribution in central Jiangs 各地区 苏中 高港区 泰兴市 通州区 仪征市 宝应县 调查自然村个数 10 2 2 2 2 2 按户统计样本 55 22 10 1 12 10 表2. 苏中地区样本分布情况 Table 3 Sample distribution in northern Jiangs 各地区 苏北 徐州市铜山区 新沂市 连云港东海县 淮安市盱眙县 宿迁市沭阳县 调查自然村个数 10 2 2 2 2 2 按户统计样本 100 20 20 20 20 20 表3. 苏北地区样本分布情况
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user: 4. 农房绿色技术应用影响因素分析 基于江苏省农房现状的实地调查结果，发现影响江苏省农房绿色技术应用的因素有以下五个方面： (一) 个人及家庭收入 成本因素是村民是否采用绿色技术很关键的一个因素，根据调查统计，家庭收入高的往往会选择使用多项绿色技术，而且对于绿色技术也比较了解，家庭收入低的可能只会选择使用1个甚至不会考虑采用任何绿色技术。例如，选择使用外遮阳形式的农户很少，且都是家庭收入在10万元以上的村民才会选择；炊事灶具方面，采用节能灶具及生物质炉具的有83.64%是家庭年收入在6万元以上的，使用土灶的有95.20%是家庭年收入在6万元以下。在选用绿色技术的时候，选择3项及以上绿色技术的有87.03%家庭年收入在6万元以上。 (二) 绿色技术成本及成效 根据对村民使用意愿的调查，有42.03%的村民会因为一次性投入成本太高而不会选择使用某些绿色技术；因为缺乏了解，村民不知道使用绿色技术后效果会否很好或者使用后效果跟没使用差不多，不值得花费，68.60%的村民对于使用效果的疑虑也是阻碍绿色技术应用的原因。 因此，推广性价比高，实用的绿色技术，并且对村民进行普及宣传，是当下推广绿色技术应用的当务之急。 (三) 自然条件 江苏省属于温带向亚热带的过度性气候，气候温和，雨量适中，四季气候分明，以淮河、苏北灌溉总渠一线为界，以北属暖温带湿润、半湿润季风气候，以南属亚热带湿润季风气候。此次调查区域分为苏中、苏南、苏北正是考虑到地域气候上的差异，针对不同区域的绿色农房，采取不同的适宜当地气候的绿色技术。 比如在冬季寒冷地区，针对传统农房屋面、门窗等保温节能相对薄弱的外围护构件，应优先利用地方传统经验进行改造，尽量使用本地传统绝热材料和被动式节能技术。在夏季炎热地区，针对部分传统农房室内存在的湿热问题，优先通过屋面加入隔热材料、利用阁楼及其孔洞形成对流式绝热间层、根据夏季主导风向开设高窗或孔洞等被动式节能措施，来提升围护结构绝热性能，增强室内通风效果。 (四) 村民对绿色技术认知度 从目前的调查结果来看，村民对于什么是绿色技术，为何使用绿色技术，都不太了解，甚至会有误区。而绿色技术的认知将直接影响到村民是否会使用绿色技术，会否尽可能多的选择适宜的绿色技术。因为实际条件的限制，农村地区缺乏对于绿色技术的宣传和引导，有的绿色技术可能因此都无法实现操作。所以在推进绿色农房建设的过程中，首先使得绿色技术的概念和优势之处深入人心是十分必要的，其次提供给村民绿色技术及设施帮助他们选择，并保证有施工单位会做这些绿色技术，可以极大提升村民对绿色技术的认识和认可。 (五) 建设方式 绿色农房的建设将会分为以下三种方式进行，不同的方式对于绿色技术的应用的影响也不同。 (1) 完全由政府统一建设的绿色农房。经政府统一建设的绿色农房，其招投标程序，规划审图过程，施工装修过程等都有政府的统一规定，绿色技术的应用有着政府的统一指导，比较容易得到实现及贯彻。 (2) 完全由村民自建的绿色农房。这种方式根据情况又分为两类：一是原有农房的改建，村民的经济状况，使用绿色技术的意愿，农房的现状等问题使得此类农房应用绿色技术将会较难实现，受牵制的主客观因素较多；二是新建农房，此种情况如果提供给村民绿色技术以及设施，村民会较容易接受，绿色技术应用的情况会稍好一些。 (3) 按规定图纸在同一规划的土地建设。此种方式需要政府更多的引导，使用激励措施去鼓励村民按此种方式建设农房，同时也要保证绿色技术的可操作性，需要有相关单位会做这些技术，村民也能方便买到技术材料。
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user: 5. 结论 目前看来，江苏省农房普遍存在建筑质量差、缺乏设计、不方便和不舒适等问题，这使得农房实际使用年限短、翻建更新频繁、能耗大能效低，浪费能源资源、破坏环境。 推进农房绿色技术应用，有利于提高农房建筑质量，改善农房舒适性和安全性，强化农房节能减排；有利于延长农房使用寿命，帮助农民减支增收，提升农村宜居性，加快美丽乡村建设；有利于带动绿色建材下乡，促进区域大气污染防治、产业结构调整和经济转型升级。因此，要充分认识推进农房绿色技术应用的重要意义，农房绿色技术的应用有很大的可操作性。
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user: 摘 要 临兴中区块是典型的低压、低孔、低渗、自然产能低的致密气藏，区内储层非均质性强、分布不稳定，砂体平面连续性差，气田开发过程中面临着直井、定向井井控产量不足的问题，采用水平井开发是提高井口产量的有效办法；局部地区存在微构造及岩性变化，水平井实施过程中有一定的困难。为克服困难，保证钻井成功同时提高储层钻遇率，本文从精细地层对比出发进而展开研究区内的储层及沉积研究，结合地震反演预测结果精细刻画储层构造模型，利用电性界面随钻中实时矫正构造模型指导落靶，水平段采用岩性精细对比结合钻井参数、录井信息、随钻曲线等对储层构造及岩性变化进行准确识别和预判，为水平井随钻调整提供有利支持。 关键词 :临兴中先导试验区，强非均质性，地质建模，地层倾角，地质导向 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 工区概况 临兴中区块位于鄂尔多斯盆地的东缘，晋西挠折带，见图1，矿权面积744.455 km 2 ，探明地质储量832.25 × 10 8 m 3 。本区块储层是典型的低孔低渗低压，岩性致密，自然产能低的致密气藏。 随着临兴中区气田的生产开发过程中，为提高气田开发效果，在地质条件合适的区域进行了水平井开发试验，水平井因单井产量高、控制储量高，在近两年作为开发试验井型得以在整个区块进行推广。临兴气田先导试验区位于整个临兴区块的东部，做好先导试验区水平井的地质导向技术的研究对于整个临兴区块的开发生产均具有指导意义。临兴先导试验区做好水平井地质导向技术的研究与应用工作，提高储层钻遇率，使井轨迹处于储层最佳位置，同时压裂时候控制缝高，保证产量的同时也要避免沟通顶底部的含水层，优化压裂级数，做到经济有效压裂，提高气井产能 [ 1 ]。 1.1. 临兴中区块盒八段储层基本地质特征 临兴中先导试验区盒八段储层为典型的三角洲平原水上分流河道沉积，具有多期次性和复杂性等特点。河道整体，连井对比上也可见河道的多期次叠加。 纵向上的多期河道充填砂岩与心滩砂岩相互叠置切割，形成复合连片的辫状河道复合砂体。沿河道方向砂体连通性好，延伸规模较大；横切河道方向砂体受河道发育规模影响，连续性较差，延伸规模小。 平面上砂体呈北西–南东向展布，河道宽度200~400 m不等，发育规模和几何形态受河道的宽度控制，其内部砂体结构也存在差异，非均质性强 [ 1 ]。盒八段常见的砂体叠加模式有垂向切割叠置，侧向切割叠置，横向串联，单层孤立以及垂向堆积叠置等 [ 2 ]。 1.2. 水平井实施中存在的技术难点 水平井钻井过程中主要存在以下几个主要技术难点：首先研究区域井控程度较低，同时由于河道的多次迁移，导致有效储层平面分布预测难度加大，钻井过程中有储层相变为泥岩的风险；其次地震资料的分辨率有限，不能准确有效的识别单砂层；此外河道多重叠置，不能完整准确的刻画但河道；此外使用PDC钻头，岩屑细小混杂，甚至呈粉末状，且滑动钻进时存在碾磨岩屑的情况，导致岩屑代表性较差，粒度判别失真；同时随钻自然伽马曲线及测斜数据由于仪器零长的问题而相对滞后。以上诸多因素均加大利用水平井开发气藏的难度，部分因素还能导致水平井钻井失败，因此加强地质导向技术的研究与应用意义重大 [ 3 ]。 图1. 临兴中区块位置
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user: 2. 强非均质性河流相致密储层水平井随钻跟踪技术 2.1. 水平井眼轨迹的设计 导眼井设计尽量靠近A靶点，保证落靶精度，造斜段采用者单增剖面或“上急下缓”的双增剖面 [ 4 ] [ 5 ]，使轨迹控制始终占居主动，针对储层倾角确定入窗探顶井斜角，确保准确入窗；如果地层倾角不太确定或者砂体的深度预测不准，则采用探层落靶的方式进行掌控，设计中在落靶之前按照86~87度设计一个稳斜段，探砂层可避由于涉及精度问题导致的落靶过浅或者过深。 2.2. 对比标志的选取及确定 对比标志在地质导向中起着校深及识别微构造的作用，是入靶调整最重要的依据之一，直接关系到能否准确入靶。选取原则是在现场技术手段和条件下，能够有效识别。 对于储层较复杂的河流相地层，对比标志的选取尽可能多，以防止地下地质体发生变化，为后续调整提供充分依据，见图2。 此外，对比标志的选取应合理，若选取的对比标志与目的层顶界距离相差太大，则其间地层厚度变化的不可确定性大，导致调整精度降低；若距离太小，则留给工程上调整的余地太小，有可能导致无法实现调整的目的，致使无法准确入靶。 钻过程中依据随钻测量曲线，不断加强对比，深化地质认识。单个砂体或泥岩层段的变化，在实钻过程中较为常见，因此以多个对比标志为组合进行对比，可提高对比精度。 图2. 临兴中气田 6H井水平段目的层与邻井地层对比 2.2.1. 电性对比标志 水平井随钻在二开井段有随钻自然伽马及电阻率曲线，由于电阻率曲线受井斜影响较大，越靠近入窗位置局部会出现电阻率曲线突然增到极大然后急剧减小的现象，即电阻率曲线的极化角现象。所以在实钻过程中，主要随钻自然伽马曲线对比邻井特征计算地层倾角，落靶垂深变化，实时修正地质模型，确保精准落靶 [ 6 ] [ 7 ]。 2.2.2. 岩性对比标志 岩性对比标志主要应用于现场，抓住不同层位出岩屑的岩性、颜色、粒度等特点可以判断层位。一般选择稳定性较好的，具有一定厚度的泥岩段，例如盒5段的桃花泥岩。 2.3. 精细构造模型的建立 对水平井钻遇目的层构造的精细刻画研究是保证成功着陆以及砂体钻遇率的重要条件。需要对标志层顶底界构造、以及目的层顶底界构造进行分析，预测对比标志顶底界以及目的层砂体顶底界垂深或海拔。根据微构造模型对目的层地层产状进行分析，为入靶和水平段调整提供依据。实钻过程中及时利用随钻测量曲线对比，依据标志利用造斜段砂顶的深度，加入虚拟井从而精细的控制微构造的变化。 2.4. 地层倾角的计算 首先要找到一个发育较稳定的层，可以根据该层的顶底垂深及水平位移计算地层倾角，注意计算地层倾角时，一定要找区域上稳定发育的层，否则计算的地层倾角不具有代表性，且容易造成误导。地质模型塑造大的构造趋势，地层倾角塑造局部微构造。 2.5. 钻头零长段储层岩性的实时预测 实钻过程中，由于随钻测井仪器存在零长，仪器测量的地层信息不能及时直接的反馈到办公室，获取随钻信息存在着一定的延迟时间，这段距离对于地质导向来说是一个“盲区”。 在水平井钻井过程中，随钻人员依据钻压、钻时、扭矩、地层自然造斜能力等相关钻井参数，能够较有效预判井底岩性，达到快速预测井底岩性的目的。利用上返岩屑、气测曲线以及随钻曲线应证岩性及含气性，尽可能克服因岩屑滞后、失真，测量仪器存在零长等因素造成的岩性判断的困难。 临兴先导试验区使用的MWD随钻仪器伽马零长一般为12~14 m，定向探管测点距离钻头零长一般为11~17 m，因探管组装位置及螺杆弯度不同而有所差异，若添加随钻电阻率测量会使定向探管零长增加至17 m。由于零长的存在，致使地质导向人员无法实时准确的掌握钻头至测量段所钻地层的发育情况以及井斜角等的变化，需要井斜调整时无法实时掌握滑动钻进的效果。对这一“盲区”段储层进行预测，对地质导向人员来说至关重要。 利用三维地质模型，结合实钻钻时、气测录井等信息，结合邻井以及领眼井的沉积旋回组合特征，配合上返岩屑颜色及粒序，预测“盲区”段储层变化状况；利用储层三维地质建模技术，预判钻头前方有效储层的变化。
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user: 3. 地质导向技术在实钻中的应用 现场地质导向得到的水平井设计轨迹一般是根据地震资料预测得来的，由于地震资料精度问题以及时深转换的误差，所以会与实钻随钻测量深度存在一定的偏差 [ 8 ] [ 9 ]，以及储层有效砂岩分布的变化，实际地层存在微构造等情况，故实钻的轨迹需要进行调整，见图3。 水平井随钻跟踪调整按时期可分为造斜段调整及水平段调整两个阶段，其中造斜段调整主要目的是为了确保准确落靶，为水平段有个好的开始；水平段调整目的为使井轨迹尽量平滑并处于储层含气性最好位置，从而获得较高的有效储层钻遇率。水平井随钻地质导向技术临兴中区块的先导试验区得到了很好的应用，且均取得了较好的效果。 现以6H井为例，进行应用分析。6H井设计目的层为上古生界二叠系盒八段上段。设计水平段长961 m，水平段方位336˚，水平段倾角90˚，靶前位移450 m，A点垂深1459 m，B点垂深1459 m。 图3. 临兴中气田康宁东西区6H井井区目的层顶面微构造模型 3.1. 落靶姿态调整 精确着陆相当于水平井成功的一半，而落靶前准确调整是成功着陆的关键。着落点地层倾角计算尤为重要。着落点位于砂体中的位置，决定了后期水平段井轨迹的姿态。 在稳定钻压条件下钻时的变化、岩屑特征、钻井液参数指标、随钻自然伽马值的变化、气测异常以及地层造斜能力强弱变化等均能反映岩性，部分参数还能体现含气性。从进入造斜段开始，即开始对能够反映岩性的指标进行分析，提前建立各参数或指标与岩性关系，做到准确预判井底岩性。 根据钻前分析，水平井段微构造较发育，A点落靶处发育的砂体为薄互层，所以水平段砂体的延伸存在着一定的不确定性，这是实钻过程中的风险之一。 本井二开落靶前选用的是MWD带GR探管随钻仪器，GR仪器零长13.04 m，落靶可通过GR曲线和岩屑录井数据共同卡层判断，该井所在台子的直井中，该落靶层是砂泥岩的薄互层，气层有一定起伏，测井解释为差气层，所以入窗难度较大，如何落到低GR高气测对于随钻地质导向人员来说是一个考验。 工区目的层为盒八段上部砂岩，以上的地层缺少发育较稳定的对比层，仅有一套盒6段底部砂岩在周围有一定的发育，进入盒八段有一个GR增加的高GR泥岩，配合观察录井岩屑颜色的变化 [ 10 ] [ 11 ]。本井设计落靶垂深为1459 m，随钻过程中发现地层有大概加深3~4 m，如果根据原设计落靶可能会造成落靶深度过浅，所以在实钻过程中，井斜达到87度的时候采取稳斜钻探一柱，再根据实钻曲线计算微构造地层倾角，及时修正构造模型，及落靶轨迹，再砂顶之上4 m左右采取3度狗腿增斜至砂顶井斜达到88.5度，观察岩屑气测变化，当气测总烃值达到10%以上，岩屑砂岩变纯，则全力增斜至89.5度落靶，此时入砂1.5 m，根据邻井对比，该层位处于砂岩发育较好位置。 3.2. 水平段井轨迹调整 水平段调整的原则是尽量只调整井斜，微调或者尽量不调方位。由于预测水平段岩性会有一定的变化，所以水平段采用方位GR随钻工具进行地质导向，这样可以较有效的判断砂岩顶出、底出或者是侧向出层，该工具GR曲线的零长为13.94 m。根据实钻情况修正地质模型，该井段A靶点开始是降斜趋势，所以三开开始整体轨迹以降斜为主。 本井在水平段开始根据地质模型计算地层倾角下倾0.5度左右，所以在89.5~90度区间钻进，由于三开刚开始钻井，地层自然增降斜趋势并不明显，所以部分测斜点井斜有超过90度的现象存在，且在1844.18 m (MD)/1468.73 m (MD)时气测显示变差，方位GR显示上GR较下GR略高，经过判断认为是顶部出层，地质模型中地层倾角可能较实际略低。于是降低井斜角至88~89度区间，待气测岩性重新变好，则以89~89.5度区间内稳斜钻进。 在2148.63 m (MD)/1478.26 m (TVD)处钻时突然变慢，地质循环后气测降至基值，录井岩屑显示为泥岩，结合地震资料及地质认识认为存在两种可能性：一是侧向出层，二是顶出，井斜角略高于地层倾角；若是第一种情况则需要超过一定厚度泥岩段才可重新回到砂岩调整井斜意义不大；若是第二种情况，则实际地层倾角要略低于地质模型，故需要降低井斜且角度大于地层倾角，以尽快追上砂岩，顶部入层，然后根据水平段位移和顶部出层泥岩深度计算可能的地层倾角是下倾1度左右，所以调整井斜至88~88.5度区间，需要一柱可以追上砂顶，若一柱过后再加一根仍不见砂顶，则可能是侧向出层，通过井斜调整钻至1870 m (MD)后仍未见砂岩，且结合方位GR曲线形态，呈现刀切状，地震剖面上也有波谷变成了复波形态，经过分析判断认为已经钻至两条河道之间的泥岩段，即为侧向出层；结合后半段地层倾角略微上翘的趋势，地质模型中倾角为0.6度上倾，认为应该略调整井斜角至89-90度区间为后期地层上翘提前做准备，经过调整于2381.07 m (MD)/1479.6 m (TVD)后重回砂层，且河道边部砂岩较致密，气测值低，进入河道中，砂岩气测逐渐变好。实钻证实，轨迹调整有效，且第二个河道整体含气性较第一段河道要好。 水平段后半段存在地层倾角不确定的情况，整个地质模型中地层倾向是下倾，倾角为0.5度左右，但是本井实钻结果呈现略微上翘的趋势，根据钻进过程中薄的泥岩夹层计算实际地层倾角为1度上从而修正地质模型趋势，同时紧密结合钻井参数钻时、气测、自然伽马曲线特征适时调整轨迹，防止钻头从储层底部穿出目的层，在斜深钻进了280 m后再次钻遇泥岩，根据地震反演、原始剖面、地质认识及随钻情况认为是侧向出河道，且已经达到设计水平段长度961 m，决定就地完钻。 3.3. 水平井钻探效果 6H井完钻井深2706 m，水平段长961 m，砂岩钻遇率为72.5%，有效气层钻遇率为47.2% (图4)。 图4. 临兴中区块2019年水平井钻探效果统计
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user: 4. 结论 1) 水平井地质导向以地质认识为基础，结合反演、已有井地质分析、储层地质构造建模等多种手段钻前提高储层预测精度； 2) 选择对比标志层精细预测构造变化，及时调整落靶深度；利用钻时、气测、录井、岩屑等多参数预判井底岩性，保证水平段轨迹在砂岩中间穿行，钻遇两条河道中间的泥岩部分尽量放平井斜减少泥岩段进尺，同时降低钻井风险； 3) 根据地质模型以及地震中地层倾角变化提前增斜或者降斜避免钻出砂层浪费进尺； 通过二开井段及水平段的地质导向工作，有效的提升了砂岩钻遇率及有效储层钻遇率，为钻后压裂增产提供基础。
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user: 摘 要 通过对川贝母外植体愈伤组织的培养，建立了培养周期短、愈伤组织生长效率高的培养体系。利用多因子正交实验设计及分析，筛选出最佳愈伤组织诱导培养基是MS + 2.0 mg/L 6-BA+ 0.5 mg/L 2，4-D + 0.1 mg/L NAA。通过分析原药材与愈伤组织中总生物碱的含量，从而考察愈伤组织生物量及药效物质积累的影响，并揭示正常培养的愈伤组织中总生物碱含量稍低于原药材。因此，通过培养愈伤组织是一种获得大量川贝母活性物质的有效方法，为川贝母产品生产的提供一种原材料途径。 关键词 :川贝母，愈伤组织，生物碱，植物生长激素，含量 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 川贝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)为百合科贝母属的一种多年生草本植物，始载于《神农本草经》，以干燥地下鳞茎入药，为名贵的川产道地药材之一。川贝母是《中华人民共和国药典》收载的药材川贝的基源品种之一，主要分布于西藏、云南、四川和青海等海拔1800~4200 m的高寒区域 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]。其具有清热润肺、化痰止咳、散结消痛的功效 [ 4 ]，用于肺热燥咳、干咳少痰、阴虚劳嗽、痰中带血等，具有止咳圣药之称 [ 5 ]，中药处方用量巨大。 目前，以川贝母为原料的中成药达100种以上 [ 6 ]；因其生境，种子休眠期长、自然萌发率低、野生资源长期滥采滥挖以及生态环境恶化等原因 [ 4 ] [ 7 ]，川贝母资源严重匮乏，已被列入国家三级保护植物名单 [ 3 ]，并且来源物种已被《国家重点保护野生药材物种名录》收录 [ 5 ]。 采用组织培养技术可在一定程度上解决这一问题。而川贝母作为道地药材，其总生物碱是其主要的有效活性成分。因此，通过分析各种因素对川贝母叶形成愈伤组织的影响，从而获得生长速度快、有效活性组分含量高的组织培养物，是实现大规模生产川贝母有效活性组分的重要途径之一；同时，为进一步深入挖掘其药用价值奠定基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 植物材料 试验所需植物材料来源于四川的川贝母(Fritillaria cirrhosa D. Don)。 2.2. 外植体的处理 叶片用清水冲洗干净，再用75% (V/V)酒精浸泡15 s，用无菌水清洗3次，然后放入0.5%的氯化汞(HgCl 2 )溶液浸泡5 min，最后用无菌水冲洗干净。 2.3. 愈伤组织的诱导和继代培养 将无菌的叶片切成1 cm 2 的小块，块中可带有叶缘或中脉，接入愈伤组织诱导培养基。愈伤组织诱导培养基配方为如下：MS [ 8 ] + 1.0~3.0 mg/L 6-BA，或是MS + 1.0~3.0 mg/L 6-BA + 0.1~1.0 mg/L 2，4-D + 0.05~0.2 mg/L NAA。愈伤组织诱导培养基附加有3%蔗糖、0.7%琼脂粉，pH = 5.8，室温22℃。叶块分为2组，一组置于光周期16 h/8 h中培养，光强2000 Lx；另一组暗培养，均培养20 d，对比光培养与暗培养对愈伤组织的影响。愈伤组织诱导设计为20个叶块一个处理，3次重复。20 d后，将诱导出的愈伤组织切成1.0 cm 3 的小块，分成2组，一组接入再生培养基诱导不定芽，另一组转接入新鲜的愈伤组织诱导培养基中进行继代培养，每20 d重复一次，比较多次继代培养对愈伤组织的影响。 2.4. 总生物碱的测定 [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] 2.4.1. 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒定质量的贝母甲素对照品约2.0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，其浓度为0.2 mg/mL的对照品贮备液。 2.4.2. 供试品溶液的制备 称取采集的待测贝母样品各5.0 g左右，用液氮处理后研磨至粉末，然后过100目筛，置烘箱中60℃干燥2 h。精密称取各贝母样品粉末约0.5 g，加氨水1.2 mL放置30 min，加入氯仿20 mL，密封，放置24 h后，干燥滤纸过滤。吸取滤液10 mL，回收氯仿至干，残渣加甲醇定溶于2 mL量瓶中，放置1 h后取出，通过孔径0.45 μm的微孔滤膜，滤液即为样品供试液，4℃保存并备用。 2.4.3. 标准曲线的制备 采用WondaSil C18-WR色谱柱(250 mm × 4.6 mm， 5 μm)；色谱条件为流动相：水–乙睛–二乙胺(体积比，70:30:0.03)；进样量：20 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；泵压：5.7 Mpa；检测波长：208 nm。分别进样5 μL，10 μL，20 μL，30 μL，40 μL，50 μL的对照品溶液各4次，并记录各色谱图及峰面积数据。以其进样量为X轴(μL)，峰面积为Y轴构建标准曲线。 2.4.4. 样品含量测定及精密度实验 制备同批次样品供试溶液，每批次4份，共16份，每份取20 μL进样，按照HPLC法进行实验并记录色谱图及相关数据，计算其每批次每份贝母甲素含量、各样品组贝母甲素平均含量及RSD值。 2.4.5. 样品贝母甲素含量测定计算 V 样 品 = S 样 品 峰 / ( S 对 照 峰 / V 对 照 品 ) ； m 样 品 = V 样 品 × C 对 照 品 ； A 样 品 = m 样 品 / M 样 品 ； 其中，C对照品为0.2 g/L，M样品为约0.5 g。 2.4.6. 回收率测定 向已知贝母甲素含量的各批次每份样品溶液中分别加入(每批次样品为4份，共16份) 0.2 mg/mL的贝母甲素对照品溶液10 μL，依法提取测定，计算回收率、平均回收率及RSD值。 2.5. 计算方法 愈 伤 组 织 诱 导 率 = ( 愈 伤 组 织 块 数 / 接 种 外 植 体 数 ) × 100 % 试验数据用SPSS软件进行方差分析，采用邓肯氏最小显著差数测验进行差异分析，显著水平为0.05，每个处理3次重复。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 植物生长素对愈伤组织的诱导 将叶片接种到愈伤组织诱导培养基后，7 d内就会产生愈伤组织。表1显示，6-BA是诱导川贝母叶片产生愈伤组织的关键植物生长调节剂，培养基中添加6-BA，可顺利诱导叶片出愈。随着6-BA浓度的升高，叶片出愈率随之升高，但愈伤组织的质地变得松散。浓度2.0 mg/L的6-BA能诱导82.93% ± 3.2%的叶片产生瘤状愈伤组织，3.0 mg/L的6-BA虽然也能诱导愈伤组织大量产生，但愈伤组织质地疏松，瘤状结构稀少，再生能力差。添加2，4-D、NAA后发现，浓度0.5 mg/L的2，4-D和0.1 mg/L的NAA对川贝母叶片形成愈伤有促进作用。2.0 mg/L 6-BA与0.5 mg/L的2，4-D及0.1 mg/L的NAA组合对诱导川贝母叶片产生瘤状愈伤组织的效果最佳，诱导率高达87.91% ± 2.5%。 Table 1 Effect of plant growth regulators (PGRs) on callus induction from leaf of Fritillaria cirrhos 激素浓度/mg∙L −1 Concentration of PGRs (mg∙L −1 ) 出愈率/% Callus induction rate (r/%) 愈伤组织形态 Morphology of callus 6-BA 2，4-D NAA 1.0 0 0 61.14 ± 4.0 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0 0 82.93 ± 3.2 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0 0 85.51 ± 4.2 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0 0.05 62.57 ± 3.8 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0 0.1 84.34 ± 2.9 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0 0.2 86.36 ± 4.1 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.1 0 64.16 ± 1.8 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0.5 0 86.77 ± 2.3 a 紧实，瘤状结构多 3.0 1.0 0 88.15 ± 1.9 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.1 0.05 65.52 ± 1.7 b 紧实，瘤状结构少 2.0 0.5 0.1 87.91 ± 2.5 a 紧实，瘤状结构多 3.0 1.0 0.2 88.73 ± 2.7 a 疏松，瘤状结构少 1.0 0.5 0.2 65.48 ± 1.6 b 紧实，瘤状结构少 2.0 1.0 0.1 80.26 ± 2.2 a 紧实，瘤状结构多 3.0 0.1 0.05 85.04 ± 2.1 a 疏松，瘤状结构少 表1. 植物生长调节剂对川贝母叶片愈伤组织诱导的影响 表中不同字母表示邓肯氏最小显著差数测验差异显著(P ≤ 0.05)。其它表同。The different letters in the same column mean the significant difference (P ≤ 0.05) by Duncan’s LSD Test， the same below. 3.2. 光周期对愈伤组织诱导的影响 外植体分别进行光培养与暗培养10 d，观察发现光培养与暗培养均能诱导愈伤组织形成。暗培养产生的愈伤组织出现早，平均5 d就能观察到愈伤产生，且体积大、质地松散、无法分化，须在光下培养10 d，并转绿后才能恢复分化能力。光培养条件下，至少6 d后才有愈伤组织生成，但愈伤组织颜色墨绿，质地紧密，瘤状结构明显；30 d后愈伤组织则需要继代培养。 3.3. 继代次数对愈伤组织及总生物碱含量的影响 多次继代培养会使愈伤组织的结构和颜色发生明显变化。随着继代次数的增加，愈伤组织逐渐失绿褐化，增殖能力下降，质地变得松散，瘤状结构消失；同时总生物碱含量在前3代基本稳定，且随继代数的增加有上升趋势，但到第4代开始，总生物碱含量明显下降(表2)。结果表明，继代次数过多不仅影响愈伤组织生长，使其增殖能力下降，同时也影响总生物碱的积累。 Table 2 Effect of subculture times on callus growth and alkaloid contents of Fritillaria cirrhos 继代次数 Subculture times 愈伤组织形态 Morphology of callus 总生物碱含量 Alkaloid contents 1 绿白色，瘤状结构丰富 1.170% 2 绿白色，瘤状结构丰富 1.139% 3 绿白色，较少瘤状结构 1.215% 4 黄绿色，较少瘤状结构 0.948% 5 黄褐色，松散 0.789% 表2. 继代次数对愈伤组织生长和总生物碱含量的影响 2.4. 愈伤组织生长与总生物碱积累的关系 愈伤组织在培养7 d后，开始采样，分别为7，14，21，28，35，42 d，愈伤组织的干物重基本稳定。在培养的第35 d，愈伤组织中川贝母总生物碱含量达最大值(表3)。同时随着培养时间继续增加，川贝母总生物碱的含量和产量也开始大幅度下降。因此，在愈伤组织培养第28~35 d之间为最佳采集时间。 Table 3 Effect of growth days on callus biomass and accumulation of alkaloid in Fritillaria cirrhosa (n = 4 生长天数(d) Growth days 干重(g) Dry Weight 总生物碱含量(μg/g) Alkaloid contents RSD (%) 7 0.512 0.714 2.65 14 0.527 0.888 2.61 21 0.506 0.939 3.18 28 0.533 1.170 5.02 35 0.519 1.325 1.77 42 0.551 0.847 3.98 表3. 川贝母愈伤组织生长天数和总生物碱积累的情况(n = 4)
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user: 4. 讨论 适宜的激素水平、继代次数以及愈伤组织疏松程度是川贝母愈伤组织培养体系建立所必需的。本实验对川贝母的愈伤组织诱导进行了研究，结果显示多组合的植物激素配合可以有效地缓冲外植体细胞适应性的影响，稳定诱导愈伤组织。植物激素在愈伤组织增殖生长中起关键作用，生长素与细胞分裂素的多种组合使用优于单一生长调节剂；继代培养时间对川贝母愈伤组织生长能力有较明显的影响，随着继代时间的延长，活力逐渐下降。川贝母属于高海拔植物，在低海拔区生长时，其生长状态会受到一定的影响，最直接的表现是生长速度有可能减慢，对愈伤组织的形成及生长产生不利影响。川贝母初代愈伤组织是由颜色、质地和形态无明显差异的细胞团块形成，经继代后产生绿色致密型、略黄色致密型等外观，但不影响稳定生长。 为实现中药资源的可持续利用，将植物组织培养技术应用于药用植物的生产开发中具有重大意义。药用植物组织培养是指在无菌和人为控制的营养(培养基)及环境条件下对药用植物器官、组织或细胞进行培养，用来生产药用活性成分 [ 12 ]。目前，商品川贝母主要为野生品种，其采收期一般是6~7月的川贝母开花的时期(8月份川贝母化苗后难以采挖)；而其他栽培品种，采收期一般在8月份。因此，川贝母在成分含量上的波动与采收期的不同有一定的关系，需要进一步研究。此外，生物碱是各种贝母的主要有效成分；川贝母是贝母中品质最佳的品种，其生物碱含量按理应比较高 [ 13 ]。本研究测定发现其生物碱含量并没有明显优势，其结果可能表明，代表川贝母药效特色的成分不仅有生物碱类成分，还可能有其他成分类型。 研究川贝母愈伤组织的诱导与快速繁育，获得大量生长速度快、有效组分含量高的愈伤组织，可以为进一步开展川贝母细胞悬浮培养，大规模工业生产药物有效成分奠定坚实基础。同时，利用川贝母诱导愈伤组织，更可充分地利用川贝母植物资源，对川贝母野生资源的保护也具有重要的作用。
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user: 摘 要 为探讨皂角叶片对干旱胁迫及复水的生理响应。测定分析不同干旱胁迫程度及复水处理下，叶片的叶绿素含量、丙二醛含量、过氧化物酶活性等生理生化表征指标及酚类代谢的动态变化。结果显示，随干旱加剧，叶绿素含量降低；丙二醛含量、过氧化物酶活性升高；复水后各项指标均恢复到近似对照组水平，但与对照组有一定差距。此外，酚类代谢物在干旱及复水中产生了不同程度的变化。其中L-苯丙氨酸在干旱胁迫中含量升高，复水后含量降低；C6C3C6碳骨架的黄酮类化合物在干旱胁迫后含量降低，复水后略有恢复。证明在干旱中，皂角叶片启动了自身防御机制，抗氧化物酶和酚类化合物协同作用，减少活性氧对细胞的伤害。此外，皂角对于干旱胁迫的伤害具有一定的承受范围，高强度的胁迫会对皂角叶片造成不可逆的伤害。 关键词 :皂角，干旱，复水，生理，次生代谢 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/