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user: 2. 材料与方法 2.1. 试验饲料组成与营养成分分析 饲料原料秘鲁鱼粉、鱼油、次粉、大豆粕、菜籽粕、复合多维、复合多矿、磷酸二氢钙、氯化胆碱由广西百洋饲料公司提供；酵母(干啤酒酵母)、酵母RNA (有效含量90%)购自上海蓝季科技发展有限公司，β-葡聚糖(有效含量80%)购自上海蓝季科技发展有限公司。饲料原料全部经过粉碎，过40目筛，按配比称量后，微量成分采取逐级扩大法添加，并与大宗原料混合均匀，加油和水后再次均匀混合，用小型颗粒饲料机制粒直径为2.5 mm的颗粒饲料，于85℃烘干，储存于密封塑料袋中，置−20℃冰箱内保存直至投喂。本实验根据罗非鱼的营养需求(NRC， 2011) [ 5 ] ，以菜籽粕、大豆粕和秘鲁鱼粉为主要蛋白源，以鱼油为主要脂肪源，以次粉为主要糖源，设计基础饲料，并记为D1组。在基础饲料中分别添加0.2%酵母 [ 6 ] 、0.04%酵母RNA [ 7 ] [ 8 ] 、0.2%β-葡聚糖 [ 9 ] 、0.04%酵母RNA + 0.2%β-葡聚糖，共制成5组等氮等能饲料，分别记为D2~D5组。各个实验组的饲料组成和营养成分值见表1。 2.2. 实验用鱼与养殖期管理 本实验中，共采用吉富罗非鱼鱼苗600尾，均购自广西水产引育种中心同一批孵化鱼苗；所有鱼苗在同一水池中暂养一周，暂养期投喂商业罗非鱼鱼苗饲料。选取平均体重为5.0 g的罗非鱼幼鱼300尾；将其分为5组，包括4个试验组及1个对照组；每组设3个平行，每个平行20尾鱼。在规格为长10.0 m、宽1.5 m、高1.5 m的水泥池中放置15个长1.0 m、宽0.5 m、高1.0 m的尼龙网箱，养殖期间换水量控制为1/5 d −1 ；分别将15个平行的实验幼鱼随机放置于15个网箱中，每个网箱设置一个食台用于投喂饲料。实验鱼的投饲频率为一天两次，投喂时间点为每天9时与18时，投饲量为鱼体重量的15%~10%；每次投喂采取少量多次地将实验饲料投放至食台中，并在投喂时仔细观察实验鱼的摄食情况，当食台上开始出现剩余饲料时即停止当次投喂并将残饵捞出，每次喂食后记录当次投喂饲料量以及剩余残饵的量；养殖一周后对实验鱼进行称重并记录鱼体重量，用以调整投喂量。养殖实验在大棚中进行，为自然光周期；整个养殖期持续60天。整个实验期间水质监测(每天测3次水温；每周测一次水质指标)情况为：水温29.4℃ ± 3.6℃，pH 7.0 ± 0.2，溶解氧7.09 ± 0.24 mg∙L −1 ，氨氮0.45 ± 0.03 mg∙L −1 ，亚硝酸盐0.15 ± 0.02 mg∙L −1 ，硝酸盐0.09 ± 0.01 mg∙L −1 。 2.3. 样品采集与方法 养殖期结束后停止投饲一天。对每个网箱内存活的实验鱼进行称重并计数，所得体重为末重(W 2 )，所得鱼尾数为存活尾数(N 2 )；将间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(MS-222)与水按照20 g：1 m 3 的剂量配置后，每个平行随机取10尾鱼麻醉，用一次性无菌注射器(1 ml)从鱼体尾静脉采血；所采血液转入2 ml离心管中，使其在室温下静置2 h，然后转入4℃冰箱保存4~6 h，随后将血样在4℃下以3000 r/min离心10 min Table 1 Composition and nutrient levels of basal die 原料 Ingredient 含量(%) Concentration D1 D2 D3 D4 D5 次粉 Wheat middling 25 25 25 25 25 菜籽粕 Rapeseed meal 30 30 30 30 30 大豆粕 Soybean meal 30 30 30 30 30 秘鲁鱼粉 Fishmeal 10 10 10 10 10 鱼油 Fish oil 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 啤酒酵母 Beer yeast 0 0.2 0 0 0 酵母RNA Yeast RNA 0 0 0.04 0 0.04 β-葡聚糖 β-glucan 0 0 0 0.2 0.2 磷酸二氢钙 Monocalcium 1 1 1 1 1 氯化胆碱 Choline chloride 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 复合多矿 Min.premix 1) 1 1 1 1 1 复合多维 Vit. Premix. 2) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 合计 Total 100 100 100 100 100 营养水平 Nutrient level 3) 总能(MJ/Kg) Gross energy 4) 17.94 17.84 17.80 17.96 17.97 粗蛋白质 Crude protein 35.4 35.1 35.5 35.0 35.3 粗脂肪 Crude lipid 4.4 4.5 4.0 4.6 4.3 粗灰分 Ash 6.2 6.4 6.7 6.1 6.2 水分 Moisture 9.4 9.8 9.2 9.5 9.1 表1. 基础饲料组成及营养水平(%) 1. 复合多矿(kg −1 预混料)：亚硒酸钠(45.6% Se)，1g；硫酸铜(25.4% Cu)，30 g；硫酸亚锰(32.5% Mn )，15 g；硫酸锌(22.7% Zn)，120 g；硫酸亚铁(20.1% Fe)，100 g；氟化钠(42.5% F)，5 g；二氯化钴(24.8% Co)，3 g；2. 复合多维(kg −1 预混料)：维生素D 3 (50万IU/g)，5 g；维生素E (50%)，20 g；维生素K 3 ，50 g；维生素A (50万IU/g)，6 g；泛酸钙，100 g；核黄素，20 g；盐酸硫胺素，20 g；生物素，2 g；维生素B 12 ，0.1 g；叶酸，5 g；烟酸，30 g；维生素C，100 g；盐酸吡哆醇，20 g；脱脂米糠，222.9 g；肌醇，400 g；3. 无氮浸出物 = 100% − (粗蛋白% + 粗脂肪% + 粗灰分% + 水分%)；4. 总能(MJ/kg) = (粗蛋白 × 23.6 + 粗脂肪 × 39.5 + 无氮浸出物 × 17.6)/100。1. Mineral (per Kg premix): sodium selenite (45.6% Se)， copper sulphate (25.4% Cu)， 30 g; manganous sulphate (32.5% Mn)， 15 g; zinc sulphate (22.7% Zn)， 120 g; ferrous sulphate (20.1% Fe)， 100 g; 30 g; sodium fluoride (42.5% F)， 5 g; cobalt chloride (24.8% Co)， 3.0 g; 2. Vitamin (per Kg premix): vitamin D 3 ， 5 g (500，000 IU/g); vitamin E， 20 g (50%); vitamin K3， 50 g; vitamin A， 6 g (500，000 IU/g); d-Ca pantothenate， 100 g; thiamine， 20 g; pyridoxine， 20 g; biotin， 2.0 g; riboflavin， 20 mg; vitamin B 12 ， 0.1 g; folic acid， 5 g; niacin， 30 g; ascorbic acid， 100 g; defatted rice bran， 222.9 g; inositol， 400 g. 3. Nitrogen-free extract =100 − (moisture% + protein% + lipid% + ash%). 4. GE = (protein*23.64 KJ/g + lipid*39.54 KJ/g + nitrogen-free extract *17.15 KJ/g)/100。 后取上层血浆；使用南京建成生物公司生产的超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、溶菌酶、酸性磷酸酶试剂盒测定血浆酶含量；另随机取10尾进行尾静脉抽血，所采血样转入2 ml离心管中，以3000 r/min离心5 min后移取上层血清，使用日立自动血液生化分析仪检测所得血清中总蛋白、白蛋白、球蛋白的含量。实验样品的水分、粗蛋白、脂肪和灰分含量按A.O.A.C (1990)有关标准方法测定 [ 10 ] 。有关养殖效益参数计算公式如下 [ 11 ] ：成活率(SR) (%) = (实验结束鱼尾数/实验开始时尾数) × 100；摄食量(FI) (g) = 投喂量 − (余料 + 残饵)；特定生长率(SGR) (%t −1 ) = 100 × (LnW 2 − LnW 1 )/t；饲料效益(FER) (%) = 100 × (W 2 − W 1 )/FI (式中，W 1 —试验开始时鱼体重(g)，W 2 —试验结束时鱼体重(g)，t—养殖实验天数(d)，FI—摄食量)。 2.4. 数据处理和分析 采用SPSS19.0数据统计软件包对实验各组间数据进行统计分析，试验结果经过一元方差分析(One-way ANOVA)后，用平均数±标准差表示。进行方差齐性分析，显著水平采用0.05。