DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 师范生教学技能实训模式创新的实现机制 师范生教学技能实训是一项复杂系统工程，它不仅需要师范生通过理论学习、实习观摩、体悟反思，不断地统整自身认知与外在行为进而逐步建构优秀教学技能，更需要师范生所属高校聚焦社会责任感、创新精神、实践能力等等当前人才培养的关键着力点。因此立足于师范生教育和实训模式的实际，把实训内容和要求落细、落小、落实，确保“学生发展核心素养”理念所蕴涵的三大主线——文化基础、自主发展、社会参与的价值和意义落到实处 [ 6 ]，这是当前师范生教学技能实训在理论、策略和实践层面亟待创新的一个关键。具体说来： 3.1. 在理论层面，即夯实核心素养主线之一文化基础，以教师教育课程设置和结构体系改革为核心构建师范生教学技能理论提升的实现机制 以“学生发展核心素养”为理念开启的新一论基础教育改革背景下，合理的教师教育课程设置和结构体系改革是师范生教学技能理论提升的关键。师范生毕业后从事着培养人才工作，肩负着“传道、授业、解惑”使命，新教改理念要求他们除了具备丰富知识和合理知识结构之外，还必须拥有深厚人文底蕴和科学精神，为此，将“核心素养”主线之一——文化基础(即人文底蕴、科学精神)置于教师教育课程设置和结构体系改革之中是贯彻新教改核心素养理念的必然选择。首先，在教师教育课程设置方面，核心素养可作为课程发展与设置的关键DNA [ 7 ]，明确界定核心素养在课程目标设计、课程内容安排、教学活动运作以及学习评价监督等各个层面所应该学习的知识、能力与态度，并透过课程规划、设计、实施与评价加以实践，从而为有系统地培养符合未来社会所需教育人才提供理论支撑。其次，在课程结构体系改革方面，除了不断增加教学类课程的课时比重、拓宽教学理论课程、教学技能课程和教学实践课程门类之外，核心素养主线的架构与内涵，在教育和课程改革中扮演着关键角色，可以透过教改课程政策，依据核心素养研订各领域课程规划设计、实施、评价体系或纲要，用以提供学校教学活动所需的具体规范性引导，培养学生的核心素养。 3.2. 在策略层面，即促进核心素养主线之二自主发展，以学生自主训练与志愿者指导相结合的“立体传帮带”策略为核心构建师范生教学技能自主发展的实现机制 师范生教学技能培养不仅要依靠高校培养，更需要师范生的自主发展，当前基础教育改革将自主发展(学会学习、健康生活)作为核心素养主线之一，其主旨就是引导学校教育通过挖掘学生自主发展潜能，唤醒学生对生命和生活质量渴望，培育学生形成兼顾个人与社会所需的一般生活及社会各种情境领域必要的知识、能力与态度。这不仅是以素养取向的教师教育和教师技能发展取代以往单向灌输式取向教学进路的重大变革，也是师范生教学技能培训模式创新的新挑战。因此建议师范类高校尝试形成以学生自主训练与志愿者指导相结合的新老师范生教学技能培训的“立体传帮带体系”，这是在整合学校、学生资源，增强师范生教学技能自主发展意识上的一种实践创新。具体说来，该体系要求从一些有一定实践教学经验的研究生(学科教学在职研究生大多是来自中小学教学一线在编教师或代课教师，实践经验相对比较丰富)和高年级参加教学技能大赛获奖学生(这些都是经过校内外专任指导老师精心培养和打造出来的优秀师范生)中选拔一批志愿者担任师范生自主训练的指导教师，他们可以利用自己丰富的教学实践经验和掌握的教学技能技巧，通过定期组织个人自主训练和小组集体训练等方式，有针对性地就低年级师范生的教学语言、板书、教学体态、课堂讲课能力等方面展开定期培训，这一训练模式一方面可以使志愿者依据不同师范生兴趣与爱好进行个性化的技能训练，提高培训工作的有效性，另一方面可以促进高低年级师范生与在职中小学教师之间相互学习、共同进步，进而大大提高师范生教学技能培养主体性和实效性。 3.3. 在实践层面，即增强核心素养主线之三社会参与，以政府、高校、地方一体化统筹安排为核心构建师范生教学技能实践能力培养的实现机制 师范生社会参与(责任担当、实践创新)核心素养发展，是持续发展到终其一生的学习历程 [ 6 ]。换言之，核心素养是可以后天习得，可透过各级教育阶段的“长期培育”的教学实践触动引发，基于此，构建以政府、高校、地方一体化统筹安排为核心的师范生教学技能实践能力培养联动机制，是促成师范生社会参与主体能动性提升的必要一环。所以政府、高校、地方作为师范生技能培养共同体，必须明确各自责任和义务，做一体化统筹安排。首先，政府要发挥在政策指导、资源调配、经费筹措、质量评估、保障安全等方面协调和导向作用，切实配合高校和地方将师范生技能培养工作持续、有效地开展下去。其次，高校要在政府和地方支持和配合下，发挥其人力资源优势，着力在师范生培养方案、教学计划、制度建设、实习模式、支援体系、评价体系等方面采取有效措施，为全面提升教师队伍质量奠定基础。第三，地方要发挥其对基础教育所需师资及发展等情况相对比较直接全面的优势，可以将信息迅速传递给政府和高校，便于政府和高校能够从基础教育实际出发制定能够满足基础教育需求的、可操作性的培养方案，从而真正使高校和政府服务基础教育、促进教育均衡发展、实现教育公平落到实处。
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user: 4. 结语 新世纪我国基础教育发生了巨大而深远变革，特别是新一轮以“学生发展核心素养”为理念的基础教育改革启动，综合改革和深化发展必然需要与之配套的适应时代要求的基础教育师资培养模式，因此，肩负着为一线教学实践提供有效师资培养与供应的师范院校，必须与时俱进，不断更新教育理念，努力挖掘核心素养理念在培养师范生教学技能方面的应用价值，努力寻找更适合、更有效地培养当前师范生教学技能的训练方法和策略，努力探索适合我国基础教育改革发展要求的高等师范院校实习的实践模式，满足教育实践对师资新需要、适应教育事业发展的新要求。
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user: 摘 要 随着人民生活水平的提高，居民出行需求不断增长，城市道路供需矛盾逐渐显现出来。部分城市由于道路规划设计前瞻性不足，建成区道路资源有限且配置不合理，导致近年来交通拥堵频发。本文通过分析出行结构与道路资源配置的关系，提出基于合理出行结构的道路资源优化配置方法，并应用到桂林市的道路资源配置方案中，验证了配置方法的可行性。 关键词 :资源配置，出行结构，优化模型 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 城市道路资源配置直接关系到每个出行者的切身利益和交通系统的整体效率。建成区道路红线不拓宽的前提下，利用有限的道路资源，达到公平、高效、低碳、可持续、高品质等目标，就需要对道路资源进行优化配置。 目前资源配置时较少考虑交通需求合理化，过多考虑供给满足规划年预测所得的交通需求，交通需求合理性有待探讨。对于道路资源配置方法的研究中多为结合当下政策和城市交通实际给出典型道路横断面设计方案 [ 1 ]，或设定几种横断面设计方案，并对其进行方案比选确定最优方案 [ 2 ]，或设定初始方案通过验证后逐步调整达到最优方案 [ 3 ]。从横断面资源优化配置角度，尚未构建一个科学、合理、系统的道路横断面资源优化配置方法，且优化配置思路具有单向和静态的不足，不具备反馈和互动能力。
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user: 3. 实例应用 3.1. 桂林市合理出行结构求解 根据《桂林市城市综合交通体系规划修编》的统计数据，桂林市2019年常住人口为128万人，城市人均道路面积6.5 m 2 ，日均出行总量为38.5万人次，平均出行率为2.42次/人/日，全方式平均出行距离3.46 km。根据桂林市统计局数据，桂林市2019年城镇非私营单位就业人员月平均工资6100元，按照每月22个工作日8小时工作制计算，人均工资34元/小时。根据交通调查、交通年报和前人研究确定参数值，交通参数值汇总如表1所示。 Table 1 Traffic parameter values of Guili 指标 公交 出租车 私家车 电动自行车 自行车 步行 平均出行距离/km 5.08 6.11 6.11 3.74 3.11 1.64 平均载客量/人 60 1.5 1.5 1.2 1 1 平均速度/(km/h) 25 40 40 20 12 3 人均动态占道面积/m 2 1.50 30.00 15.00 15.00 8.00 0.75 平均出行经济成本/元 2 15 15 0.5 0 0 平均出行时耗/min 60 40 45 30 30 20 交通工具平均面积/m 2 17.5 3 3.5 1 1 0.5 人均碳排放量/(kg/人) 0.06 0.8 1.8 0 0 0 表1. 桂林市交通参数值 将相关参数代入出行结构优化模型，通过matlab计算得桂林市合理出行结构如表2所示，各目标函数均已达到约束条件内的最优值。 Table 2 Reasonable travel structure of Guili 出行方式 公交 出租车 私家车 电动自行车 自行车 步行 合理出行结构 25.94% 2.72% 3.69% 18.27% 22.5% 26.88% 表2. 桂林市合理出行结构 3.2. 桂林市道路资源配置方案 基于桂林市出行结构优化结果，以50米主干路为例给出道路资源优化配置方案。初始宽度配置如表3所示，最终配置方案如表4所示。 Table 3 Initial widt 路幅 公交/m 出租车/m 私家车/m 电动自行车/m 自行车/m 步行/m 四幅路 9.86 1.03 1.40 6.94 8.55 10.21 三幅路 11.15 1.17 1.59 7.86 9.68 11.56 表3. 初始宽度 主干道宜设置为四幅路或三幅路，即应设置机非分离；四幅路中间带宽分别设为6 m，三幅路中间带宽度为隔离栏宽度，取1 m；主干路一般易形成公交走廊，两侧带考虑公交停靠站布设要求设为3 m (单侧)，为设置港湾式公交停靠站提供条件。主干路机动车道取3.25 m，计算结果车道数取整；路段公交专用道取3.5 m，单侧公交专用道数上限取1；单向非机动车道不宜过宽，上限建议设为6 m [ 6 ]。 3.3. 配置方案评价 桂林市优化方案较现状方案具有如下优势： Table 4 The scheme of road resource allocatio 配置方案 机动车道数/条 公交专用道数/条 非机动车道宽度/m 人行道宽/m 四幅路方案一 3 0 6 3 四幅路方案二 2 1 6 3.25 三幅路方案一 3 0 6 5.5 三幅路方案二 2 1 6 5.75 表4. 道路资源配置方案 (1) 以桂林市出行结构优化结果为基础，明确了不同交通方式的道路空间资源占用，能够引导桂林市出行结构向公平、高效、低碳、可持续、高品质的方向发展。 (2) 优化方案能够达到约束条件内的最高客运周转量、最高交通资源利用率、最低出行成本和最低拥挤度。 (3) 优化方案能够使道路资源配置与出行方式结构达到最大程度的匹配，使全方式出行者平等地享有路权，有利于促进社会公平的实现。
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user: 4. 结论 城市道路资源配置直接关系到每个出行者的切身利益和交通系统的整体效率。本文提出的基于合理出行结构的道路资源优化配置方法，充分考虑了出行结构与道路资源的反馈关系，能够促进交通系统资源的高效利用、促进环境低碳可持续发展、促进社会公平的实现。桂林市的应用实例显示了配置方法的合理性，配置方法可为城市道路资源存量更新提供依据和参考。
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user: 摘 要 本文基于PolyMAX模态识别算法，采用力锤激励法，测试了不同边界条件下轨道车辆轮对的模态参数，对比分析轨道约束对轮对典型模态频率的影响规律。在此基础上，建立轮对有限元仿真模型，计算自由边界下的轮对模态频率与模态振型，并与试验结果进行置信度校验，结果表明轮对模态试验仿真结果一致性较好，轮对建模方法及仿真模型可以用于车辆设计及优化阶段振动模态匹配的快速预测。 关键词 :轮对，模态试验，模态仿真，边界条件，有限元仿真 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 列车运行过程中会受到各种激励，如轮轨激励、气动载荷激励等，由此引发的车辆振动与噪声问题已成为研究人员日益关注的问题。因此，对车辆动态特性的研究，有利于提高整车乘坐舒适性、安全性以及使用寿命 [ 1 ]。 轮对作为轨道车辆的重要走形部件，对车辆动力学研究起着关键性的作用。其结构的动态特性通常采用固有频率、阻尼比和振型等参数来描述，即所谓的模态参数 [ 2 ]。振动系统的模态特性不仅大大简化了复杂结构的动力分析，而且恰当地描述了系统整体的、固有的动态特性，具有明显的物理意义 [ 3 ]。 本文采用试验模态法对自由状态以及钢轨约束状态下的轮对结构进行测试研究，确定其模态频率与振型；对自由状态下的轮对进行仿真计算，建立仿真计算与试验结果能够互相吻合校验的轮对数值模型。
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user: 2. 轮对模态试验 轮对模态试验采用多参考点锤击法，分别测试自由状态以及钢轨约束状态下轮对的模态频率与模态振型。 2.1. 试验方法 此次试验共布置33个测点，使其能够描述轮对的基本几何轮廓，根据实际尺寸建立如图1所示的测试几何模型。试验在点1和点12设置两处锤击参考点，分别对轮对施加垂向和横向激励。 轮对自由模态试验使用弹性较好的橡胶减振堆以及弹簧阻尼减振器支撑轮对，如图2(a)所示；轨道约束模态试验是将轮对直接置于钢轨上，并使用铁楔固定车轮，防止轮对在敲击过程中发生微小的转动，如图2(b)所示。 试验在33个测点处布置三轴向振动加速传感器，测试轮对垂向和横向响应，共计66个测试自由度。测试采样频率为4096 Hz，分析数据采用10次敲击结果的平均值。 2.2. 试验数据校验 (1) 频响校验： 图3为经信号处理后得到的激励位置12点(垂向)处的频率响应函数的相位(Phase)和幅值(Mag)图，表现出了较为明显的原点性质。 (2) 相干性校验： 图4中显示了典型测点的频响及相应的相干函数(Coherence)图，除了以刚体模态为主的低频段和信噪比较低的反共振段，在大部分频段上相干函数幅值均接近于1。 图1. 轮对模态测试几何模型 图2. 轮对模态测试现场布置图。(a) 弹性支持状态；(b) 钢轨约束状态 图3. 典型频率响应函数(相位及幅值) 图4. 相干函数及频响幅值 (3) 互异性校验： 图5为跨点频率响应函数的互异性检验，可见在整个频段内，频响函数的互异性良好。 图5. 频响函数一致性检验 2.3. 模态辨识结果 试验采用PolyMAX法作为模态识别方法，PolyMAX法是近些年发展起来的频域分析算法，该方法也称为多参考点最小二乘复频域算法 [ 4 ]。其识别步骤与最小二乘复指数法(LSCE)很类似。LSCE法是一种时域分析方法，在处理频率较高且模态密集的系统时易产生虚假模态，其稳态图较混乱，模态定阶较难，效果较差，难以取得教理想的结果。而PolyMAX方法的主要好处：一是奇异值求解能避免留数的分解，密集空间可以分离出来。二是该方法既适用于弱阻尼，也适用于强阻尼，密集模态系统的参数识别。三是在强阻尼、密集模态情况下，仍可获得非常清晰的稳态图，从而很容易实现物理模态定阶，结果的客观性更好 [ 5 ]。 表1对比了自由状态和钢轨约束状态下的轮对典型模态频率与振型。从表中可知，轮对垂向一阶弯曲和二阶弯曲的约束模态频率高于自由状态下的测试频率，原因是由于轮轨接触，轨道给轮对施加了附加刚度，导致轮对自振频率提高；而在高频范围内(400 Hz以上)，轨道附加刚度对车轮的局部模态影响较小，车轮的弯曲以及扭转模态在两种测试工况下，结果基本一致。 Table 1 Modal identification results of wheelse 模态振型 自由模态频率 钢轨约束模态频率 振型说明 87.5 Hz 145.6 Hz 轮轴垂向 一阶弯曲 188.6 Hz 261 Hz 轮轴垂向 二阶弯曲 424.8 Hz 427.2 Hz 左轮一阶弯 425.7 Hz 428.9 Hz 右轮一阶弯 1080 Hz 1082.5 Hz 左轮扭转 1086.1 Hz 1084.4 Hz 右轮扭转 表1. 轮对的模态识别结果 轨道的附加刚度同时会影响轮对的刚体模态，表2为钢轨约束状态的轮对低阶刚体模态，47.6 Hz为轮对沿轮轨接触点的横摆模态，128.6 Hz轮对绕质心的侧滚模态。研究轮轨接触状态的刚体模态有助于加深对轮对在现车运用条件下动态特性的理解。 Table 2 Rigid body modal frequencies and modal shapes of the wheelset under track-constrain 47.6 Hz轮对横摆 128.6 Hz轮对侧滚 表2. 钢轨约束状态下轮对的刚体模态频率及振型
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user: 3. 模态参数的数值求解与相关性分析方法 3.1. 模态参数的数值求解方法 模态有限元分析的实质就是求解具有有限自由度的无阻尼及无外载荷状态下的运动方程的特征值和特征向量，系统的无阻尼自由振动方程的矩阵表达式为： [ M ] { u ¨ } + [ K ] { u } = { 0 } (1) 这是一个其次线性微分方程组，其一般解可以由n个特解的线性组合来表示。 令其特解为： { u } = { A } n sin ( ω t + φ ) (2) 式中， { A } n 为各坐标振幅组成的n阶列阵。此特解便是系统内各个坐标偏离平衡位置时，均以同一频率ω和同一初相角φ作不同振幅的简谐振动。将式(2)带入式(1)并消去公因子 sin ( ω t + φ ) ，得到矩阵 [ K ] 和 [ M ] 的广义本征值方程： ( [ K ] − ω n 2 [ M ] ) { A } n = { 0 } (3) { A } 有非零解的充要条件是系数行列式等于零，即： | [ K ] − ω 2 [ M ] | = | 0 | (4) 由于方程组(3)中只有 n − 1 行是独立的，因此，只能求得每个振型 { A } n 中各点位移的相对值。以第一个自由度的位移作为基数，可得到规格化的振型向量 { Φ } n ，通常所说的特征值是指结构的各阶固有频率ω，特征向量就是对应某个振动频率的模态振型，公式(5)给出了对特征方程的表达式。 ( [ K ] − ω n 2 [ M ] ) { Φ } n = { 0 } (5) 可见如果结构系统共有n个自由度，那么就可以通过上述方程解得n个特征值和特征向量。 3.2. 模态参数的相关性分析 进行模态参数相关性分析，能够更加准确的确定仿真计算结果与试验测试结果的对应关系(例如模态匹配)以及误差准则。 对模态频率进行校验的常用方法是将计算结果和试验结果分别作为横坐标和纵坐标，在坐标系上标出匹配后的各阶模态频率。如果仿真与试验结果吻合较好，则所有的点应该落在45˚线上。如果大部分的点落在另一斜线附近，则有限元模型的材料参数可能存在误差。 对于模态振型的仿真试验校验，除了观察振型外，还可以利用数值的手段，例如模态比例因子(Modal Scale Factor， MSF)和模态置信度(Modal Assurance Criterion， MAC)。本文使用模态置信度评价方法。 模态置信度，也称为振型相关系数，是一个间于0~1之间的标量，如两个振型向量的MAC值为1，则说明两个振型向量代表的是同一阶模态，为0则代表不同模态。实际运用时，MAC是一个矩阵，好的相关性要求MAC矩阵的对角元 > 70%，非对角元 < 10%。 振型相关系数通常采用以下定义： M A C i j = | ( Φ i e T Φ j a ) | 2 ( Φ i e T Φ i e ) ( Φ j a T Φ j a ) (6) 其中， M A C i j 代表试验模型第i阶振型与有限元模型的第j阶振型之间的相关系数； Φ i e 代表试验模型的第i阶振型； Φ j a 是有限元分析模型的第j阶振型；T代表共轭转置。
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user: 4. 轮对自由模态试验仿真分析 4.1. 轮对有限元数值模型 轮对有限元模型与模态分析的思路是保证整体质量以及局部刚度、质量分布，保证网格均匀。具体处理方法是：(1) 轮对有限元网格采用六面体实体单元划分；(2) 利用网格节点重合法等效轮轴的过盈配合；(3) 将齿轮箱箱体及内部齿轮的质量等效为一集中质量点，保证质量点的位置与齿轮箱质心一致，并将其通过刚体单元连接在轮轴相应位置；(4) 忽略轴端轴承内部细节，保证其质量、刚度与实际情况一致 [ 6 ]。 最终用于模态分析的轮对有限元模型约有2万个节点，1.7万个单元，如图6所示。模态有限元求解采用Lanczos求解器，计算自由状态下的模态频率与模态振型。 图6. 轮对有限元模型 4.2. 试验仿真校验 在对试验和仿真结果进行校核之前，首先需进行节点坐标匹配，即基于试验测点位置对有限元模型的节点进行缩聚。然后以试验测得的轮对自由状态下的7阶典型模态为基准，选择有限元模型的对应模态与其匹配，并计算两者振型相关系数MAC，表3为试验与仿真MAC值匹配表，通过MAC值分析，可知试验与仿真模态振型匹配性较好，从中还可看出，有限元计算的模态阶数多于试验测试的阶数，说明试验测试只得到了轮对的部分模态。 选取4阶典型模态的试验与仿真振型对比如表4所示，其中蓝色框架为有限元模型，内部红色线条为试验模型。从图中也可以直观的看出，仿真与试验的模态振型一致性较好。 Table 3 MAC value matching tabl 试验阶次 计算阶次 MAC值 1 1 0.86 2 2 0.81 3 3 0.88 4 4 0.85 5 5 0.94 14 21 0.91 15 22 0.88 表3. MAC值匹配顺序表 Table 4 Matching results of test and numerical moda 试验−87.5 Hz，仿真−81.1 Hz，MAC：0.81 试验−188.6 Hz，仿真−175.5 Hz，MAC：0.88 试验−424.8 Hz，仿真−414.3 Hz，MAC：0.85 试验−425.7Hz，仿真−414.3Hz，MAC：0.94 表4. 试验与计算振型匹配结果 基于试验测试和仿真计算的模态振型匹配结果，可以获得其对应的模态频率，见表5。比较结果表明，轮对的低阶模态频率(400 Hz以下)，试验测试结果数值普遍大于仿真计算结果，原因是在于试验过程中，支撑轮对用的橡胶减振堆以及弹簧阻尼减振器刚度较大，导致轮对系统引入附加刚度；400 Hz以上，随着频率的提高，附加刚度对于高频模态分布的影响逐渐减小，试验测得的轮对固有频率与仿真计算得到的频率一致性较好，说明所建立的有限元模型能够很好地反映实际结构的振动特性 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]。 Table 5 Modal identification results of wheelse 模态振型 试验结果 仿真结果 偏差(%) 轮轴垂向一弯 87.5 Hz 81.1 Hz 7.4% 轮轴垂向二弯 188.6 Hz 175.5 Hz 6.9% 轮对轴向伸缩 366.1 Hz 348.6 Hz 4.8 % 右轮一弯 424.8 Hz 414.3 Hz 2.4% 左轮一弯 425.7 Hz 414.3 Hz 2.6% 右轮扭转 1080 Hz 1081 Hz 0.1% 左轮扭转 1086.1 Hz 1082 Hz 0.3 % 表5. 轮对的模态识别结果
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user: 5. 结语 本文测试分析了自由边界条件以及轨道约束条件下，轨道车辆轮对结构的典型模态频率与模态振型，试验结果表明，轨道约束对于低频段(400 Hz以下)轮轴一阶弯曲和二阶弯曲的模态频率影响较大，对于高频段(400 Hz以上)，车轮的弯曲、扭转以及轮轴的高阶模态频率影响较小。另外，本文基于有限元模态分析基本理论，建立了轮对的模态分析有限元模型，并计算了其在自由状态下振动模态。通过MAC数值分析方法，证明所建有限元模型的计算结果与模态试验结果吻合较好，可以作为后续车辆结构设计及优化的理论依据。
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user: 摘 要 随着旅游客运需求的快速增长，桂林市现行的旅游包车运力投放模式已远远不能适应旅游业的发展需求，由于旅游客运企业对运力投放缺乏科学依据，造成了运力过剩、车辆结构不合理等问题，企业效益严重下降。本文通过对桂林市旅游包车市场进行充分调研，总结旅游包车市场存在的问题，根据供需平衡原理建立旅游包车运力需求预测模型，对桂林市旅游包车运力的需求量进行科学预测，避免盲目投放造成的运力浪费，为旅游包车运力的发展规划提供依据。 关键词 :旅游包车，运力，需求预测，桂林 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 旅游包车客运是指以运送游客为目的，汽车客运企业或旅行社将车辆承包给客户使用并提供驾驶服务，客户可自行定制旅游路线和发车时间，按照天或按里程向客户收取一定的费用的客运形式 [ 1 ]，其运力一般指可以从事旅游包车旅客运输、具有经营牌照的车辆总数，按车辆类型分类，可将其分为大型客车、中型客车和小型客车 [ 2 ]。 随着交通通信技术的快速发展和大众旅游时代的到来，桂林市旅游规模不断扩大，旅游形式也逐渐从“景点旅游”向“全域旅游”转变，旅游规模的增长和模式的转变为旅游交通的发展提供了新的机遇，旅游包车的客运需求日益增加 [ 3 ]。由于旅游客运具有季节性强的特点，经常出现高峰期运力需求不足，企业对运力盲目投放，而低峰期又造成运力闲置的现象，导致企业效益严重下降 [ 4 ]。 目前，国内对于旅游包车的研究主要集中在客运市场发展问题分析和客流预测上，较少涉及运力需求预测的研究。因此，本文通过对桂林市旅游包车市场的调查分析，总结桂林市旅游包车运力发展的问题，通过建立旅游包车运力需求预测模型对桂林市旅游包车运力需求进行科学预测，可以有效避免因盲目投放运力造成的资源浪费，对优化旅游包车市场运力结构具有重要意义。
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user: 2. 桂林市旅游包车运力基本情况 2.1. 桂林市旅游包车客运企业旅游包车车辆情况 截至2019年底，桂林市现有的32家旅游包车营运企业共有旅游客车辆2741辆。通过调研，桂林市客运企业拥有旅游包车营运车辆大致有三种类型，即大、中、小巴，由于近几年桂林旅游主要以散客旅游为主，团队游客稳定发展，桂林各客运公司自动调整了车型，由原来多为大型客车，逐渐向满足散客、家庭式客源等小型旅游团需要的中型和小型客车转变，目前三种客车车型分布情况如图1所示。 2.2. 桂林市客运企业旅游包车车辆的利用情况 在桂林市年接待游客量持续增加的情况下，为了了解桂林市旅游包车车辆(图2)是否能够满足需要，课题组成员对桂林5家客运企业进行了调研，调研情况如表1所示。 根据调查的数据，为了得出桂林式客运企业旅游包车车辆利用情况，课题组成员采用加权平均的算法，即用调研每家公司出车率乘以该公司的旅游客运车辆数之和除以调研公司所拥有的旅游包车车辆数，计算结果如上表，即桂林市在旅游旺季、旅游淡季、一般季节的车辆利用率分别是106%、70%和34%。由此可以看到，桂林旅游包车车辆在旅游旺季出现供不应求的情况，满足不了桂林旅游包车的需要，而在淡季车辆利用率只有34%，也就是将近2000台车处于闲置状态，造成了资源的浪费。 图1. 桂林市旅游包车各类运营车辆类型及数量 Table 1 List of use of tourist chartered vehicles for passenger transport enterprises in Guili 公司名称 车辆数(辆) N 一般季节 旅游旺季 旅游淡季 出车率(%) K N × K 出车率(%) K N × K 出车率(%) K N × K 桂林市鼎翔旅游运输有限公司 171 40 68.4 150 256.5 7 11.97 桂林市天天游运输有限公司 20 80 16 100 20 25 5 桂林市旅游股份有限公司 240 70 168 100 240 30 72 桂林市泓顺运输公司 383 86 329.38 93 356.19 50 191.5 骏达运输有限公司 103 60 61.8 100 103 30 30.9 合计 917 - 643.58 - 975.69 - 311.37 加权平均数 = ∑(N × K)/∑N 70 106 34 表1. 桂林客运企业旅游包车车辆使用情况一览表 图2. 桂林市旅游包车车辆
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user: 3. 桂林市包车运力发展问题分析 通过对桂林市旅游包车市场的调研，从游客、旅行社、包车客运企业三个方面对桂林市旅游包车运力发展存在问题进行分析，具体问题总结如下： (1) 旅游包车市场经营主体分散，资源集中程度低 桂林市现有32家旅游包车企业，共2741辆旅游客车。其中20家企业拥有的车辆数为428辆，不到市场的16%，更有甚至某一公司仅有1辆旅游客运客车，导致管理难以规范到位。 (2) 高档车缺乏 在2741辆旅游包车中，大巴客车占31%、中巴客车占40%、小巴客车占29%。但随着外国游客的数量不断增加，对高档次车辆的需求也逐渐增大，尤其体现在对高档桥车的需求上，不能满足游客对高品质、高层次的包车需求。 (3) 客运企业组织能力不强，车辆运输效率较低 由于桂林市旅游包车市场没有建立起有效的旅游包车调度管理系统，车辆需求量大时，客运企业对车辆的组织混乱，运输效率低下，运力不能得到充分利用，影响企业的效益。 (4) 行业缺乏标杆企业，品牌企业少 在桂林市的旅游包车企业中，拥有车辆数在100辆以上的有12家，在50~100辆之间的有2家，10~50辆之间的有11家，10辆以下的有7家，尚未有一家可以作为行业标杆的企业，缺乏品牌带动能力。 (5) 经营方式粗放，变相挂靠经营不容乐观 调研的6家客运企业中，除了一家企业承认自己绝大部分车辆实质上仍然是挂靠经营的，两家大型的客运企业说自己绝对是公车公营，其他三家都是通过折价入股的方式使车辆公有化，但其实司机和驾驶员都是按照挂靠的方式管理，只是形式上的公车公营，实际上仍然是挂靠经营。所以，中小型企业在管理、车辆调度和结算上仍然难以做到统一化。 (6) 旅游客运市场的准入和退出机制不够完善 《道路运输管理条例》中对旅游客运企业的经营条件进行了规定，但对运力数量、投放规则等都没有具体要求，旅游客运企业通常按自己对市场客流需求的主观判断进行运力的投放。可实际上，旅游包车的运力需求受到客流变化、经济发展和政策等众多因素的影响，旅游客运企业通过主观的判断很难对运力进行准确预测，造成了许多企业在盲目进入到旅游客运市场之后经营状况不佳，加上没有强制的市场退出机制，这些企业就会通过不正规的手段拉拢游客，影响市场正常秩序。
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user: 5. 结语 本文通过对桂林市旅游包车市场的调研，在充分了解桂林市游客接待量和旅游包车运力的基本情况的基础上，总结桂林市旅游包车市场发展存在的问题。针对桂林市旅游包车市场存在的运力胡乱投放、车辆结构不合理等问题，基于供需平衡原理建立旅游包车运力需求预测模型，对桂林市旅游包车运力的需求量进行预测，为桂林市包车运力投放提供依据，同时也验证了方法的可操作性。 对旅游包车运力需求的有效预测，不仅可以优化旅游包车市场运力结构配置，提升客运服务水平；还可以加强对旅游包车运力投放的监管，实现包车运力的供需平衡，对旅游包车客运行业的发展具有重要意义。
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user: 摘 要 分层教学是响应以学生为主体的教学改革的一种理想的教学理念，但在“互联网+教育”模式之前，其实是难以实现的。本文主要讨论了借助新型智慧教学软件雨课堂的教学分层优势及借助雨课堂进行中学数学教学的分层策略。 关键词 :分层教学，中学数学，雨课堂 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 分层教学是面对全体学生，尊重学生的差异性，依据一定的标准对学生进行合理分层，运用相应的方法对学生进行教学，让学生的个性得到充分发展并最大程度地发挥学生的学习潜能的教学策略。中学生课程紧凑，自学时间非常有限，课堂知识的学习效果及课下作业的完成情况直接决定了学生数学成绩的好坏。显然分层教学在中学数学课堂中的实施有重要的现实意义。但是，由于条件限制，在现实课堂中真正实现分层教学的难度还是很大的。教育者需要很多精力来分层设计教学内容，在课堂教学的过程中也需要不断掌握学生接受知识及领悟知识的情况，这些都是在传统意义下的教学过程中难以实现的，对课后作业的分层设置也很难做到科学性。而借助雨课堂，则可以最大限度地实现分层教学的理想教学模式。
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user: 2. 借助雨课堂进行数学分层教学的优势 2.1. 雨课堂有利于提高学生的参与度 雨课堂中有小组讨论和相互评分的功能，这使得学生在课堂中成为了真正的主体。加之弹幕的匿名功能，学生可以放松地发送对问题的分析和解决结果，另外，通过把课件推送到学生的手机上。学生如果对本张幻灯片的内容存在疑问或者不懂，都可以通过幻灯片下方的“不懂”按钮对此内容进行标记 [ 1 ]。老师对标记较多的幻灯片进行针对性的讲解，这种方式就使得学生的参与度非常高，对学习的兴趣和积极性大大提高，教师在此基础上可以对整个班级的学生的学习效果和学习状态进行宏观把握，有利于制定分层方式和策略，有利于分层教学的科学性和有效性。 2.2. 大数据下更容易了解学生学习状况 分层教学需要随时了解每位学生各方面的情况。首先在知识的掌握考察方面过去教师一般在上课前发放测试题，快速批改，或者进行大面积提问等方式来掌握学生的情况，势必效率低下。课上对学生的提问和了解更是由于时间的限制难以顾及到每位同学，实际上对学生的学习信息掌握并不全面。可以说在现代智慧教学工具应用之前，分层教学的实施起来是非常困难的。 借助雨课堂可以更轻松有效的了解各层学生的学习情况。课前预习课件推送，课堂限时练习和课后作业发布等功能会自动生成学生的学习行为数据。教师需要近期或上节课的学生学习情况的数据，可以点击雨课堂手机端的教学日志，找到详细数据，点击后雨课堂将会把所有的教学数据以Excel表格的形式发送到老师邮箱。如果老师需要一个学期的教学数据汇总时，可以登陆网页版雨课堂和下载原始的教学数据报表，了解学生的学习情况。这些数据可以使老师更容易和清晰地先借助量化了解学生的学习情况，并有利于教师反思教学，及时优化分层教学策略。
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user: 3. 如何借助雨课堂进行中学数学的分层教学 雨课堂是一种新的智慧移动教学工具，它可以贯穿教学的全过程，使教学方法更加科学化 [ 2 ]。雨课堂的使用便捷，软件界面主要基于老师经常使用的PPT和人们使用最广泛的微信。借助雨课堂教师可以相对容易的依据学生的学习基础和学习接收能力进行分层教学。本节以把每个班级分为三个层次 [ 3 ] A，B，C为例来说说明如何借助雨课堂进行中学数学的分层教学。A层次的学生基础知识扎实，接收能力强，悟性高。B层次的学生基础知识熟练但理解不透彻，接收能力稍弱。C层次的学生基础知识不全面，领会新知识前需要复习旧知识，掌握新知识所用时间较长。老师在手机端关注雨课堂，对应的创建三个班级，分别命名为ABC，教师在电脑端制作好的各个层次的学习任务可以通过手机端直接发送到相应的班级。最后，教师在每隔一段时间对学生进行层次的调整，以减少后进生层次人数，增加优等生层次人数为进行分层教学的目标。这样的分层教学，更具针对性，既做到了面向全体学生，又兼顾了提优和补差。接下来我们具体分析如何利用雨课堂来进行课前预习，课堂教学和作业布置分层。 3.1. 课前预习分层 借助雨课堂教师可以把课前，课中和课后紧密地联系在一起，可以通过电脑端精心制作相关的预习课件并发布给学生。在运用雨课堂设计预习课件时，除了插入图文，还可以充分利用雨课堂内置的18000多段各个名校的慕课视频来完善学生的预习材料。除此之外，雨课堂可以插入网络视频，支持多种软件视频的插入。手机端的视频页面可以插入老师的语音讲解，使得传统的课件变成语音微课。对于A层的学生，可以在学生预习并理解新的数学定义或定理的基础上增加更有深度和广度的知识，相关的扩展资料视频也可以作为丰富学生的知识面，培养学生的发散思维的方式。对于B层次的学生，主要是要求学生了解新的数学定义和定理，插入自主学习的慕课视频并设计一些基础的问题，必要时可以在手机端插入针对性语音讲解。对于C层次的学生，主要以复习新课所需要的基础知识为主。 3.2. 课堂教学分层 课堂教学分层是分层策略里重要的一个环节，是学生获取知识的关键环节。教师要尽量保证在一节课中既做到“合”，即课堂面对全体学生，完成基本教学目标，又做到“分”，即同时兼顾各个层次学生的学习情况，在教学过程中，教师前半节课进行集中教学，同时面向各个层次的学生，落实好主要教学目标 [ 3 ]。在后半节课时，老师可以利用雨课堂发布一些预先准备好的习题，进行分层次的随堂练习，并可以随时关注回复。对于A层次的学生，可以通过推送一些所学概念定义的背景知识及在实际中的应用让他们更加深入全面把握概念的内涵和外延，以培养学生的数学抽象和逻辑思维为主。对于B层次的学生，推送针对所学新知识的相关题目来练习，达到熟练运用的目的。对于C层次的学生，多采用激励性的评价，推送从各个角度及各种变换方式的概念公式表达来充分了解所学概念定义公式等新知识。 3.3. 作业布置分层 合理的作业设计旨在学生通过训练之后，逐渐完善思维结构，掌握重要的数学知识点和培养学生的学习能力。教师在布置作业的时候要对各层次学生的知识掌握情况了然于心，对作业的难度和数量设置梯度，体现差异化。A层次的学生只是靠课本上的课后题，往往吃不饱，需要推送有难度的练习题并要求学生对运用该知识点进行解题的方法作总结。B层次的学生，可推送四分之三的题目可以偏向于基础，培养学生的自信心，增强其学习的内部动机。四分之一的题目中等偏难，重视学生解题能力的培养。C层次的学生，课先要求只要完成课后习题，理解和掌握上课的内容即可，注重基础知识的重复，巩固知识扎实基础为主。利用雨课堂布置分层作业，可以保护后进生的自尊心，增强中等生的自信心，避免优等生的好胜心，全方面促进学生发展，使学生的潜能得到最大的发挥。
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user: 4. 小结 分层教学有很多的优点，却也有实际课堂操作不易的局限。教师需要钻研的精神，开阔的眼界，勇于去接受新的事物，雨课堂作为一种新的智慧教学工具，操作简单方便和智能管理，能够很好地弥补分层教学的局限。随着信息化的进一步发展，会有更多有助于实现教学的科学理念的智慧教学解决方案被开发出来，教师从繁重的学生管理琐事中解脱出来，更好地钻研专业知识，更好地学习利用这些工具，真正能够从容做到以学生为主体的课堂教学。
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user: 摘 要 以开展的“船体结构强度”课程教学为研究对象，提出改进教学效果的方法，并积极地进行教学实践，取得良好的教学效果，最后，笔者针对进一步优化课堂教学效果提出建议。 关键词 :概念，批判性思维，创新 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 海洋可以为人类提供丰富的资源，因此国家明确提出建设海洋强国战略，这对于涉海专业的江苏海洋大学来说是一个前所未有的发展机遇。人才培养是实现海洋强国战略的重要一环，但是培养合格人才是一个既复杂又重要的课题，因此高校的船舶专业应不断地改进教学方法 [ 1 ] [ 2 ]，确保能培养出有理论、有实践、有创造力的高素质人才。 船舶方向的专业课涉及较多的力学，理论性较强，而目前课堂授课多数沿用传统的单向灌输方式，其结果是学生上课的积极性很低，对课堂不感兴趣。具体表现为逃课、低头沉默、玩手机等课堂行为。学生所反映出来的问题包括对所学知识点的理解不到位、相关知识的具体应用不熟练、理论脱离实践，学而不知如何致用、脱离实际工程问题而被动地接受理论带来的枯燥感等。这种授课方式必然导致教学效果不理想，但是苦于当前又没有更好的教学模式能替代。 本文主要阐述了在教授“船体结构强度”这门课程的过程中探索出的一些方法，这些方法是经过教学实践并取得较好教学效果的；最后针对进一步改进本科课堂教学方法进行了初步的探讨并给出几点建议。
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user: 2. 良好教学效果的具体实践 2.1. 课堂教学注重概念的深入剖析 “船体结构强度”是船舶与海洋工程领域的一门应用型很强的课程，内容中涉及较多的公式与概念。教学过程中发现很多学生机械地记忆书中的知识点，而对概念的理解不够深刻，以至于在描述船舶结构力学现象时往往张冠李戴。比如讨论船体结构的刚度与强度问题时，很多同学就会把它与材料力学中材料的刚度与强度相混淆。结构的刚度描述的是构件发生单位位移所需的力，是宏观的概念。材料性质、构件几何形状、边界条件及受力形式都对结构刚度有影响。材料刚度用弹性模量来描述，它取决于材料的组织特性，属于微观概念，它不受构件几何形状、边界条件及受力形式的影响。现代科学技术起源于西方，它的主要特点之一是采用一套专门术语和符号来构建严密的理论体系，其核心思想在于概念与逻辑。因此，授课过程中只有把诸如此类的这些基本概念讲解透彻，才能让学生真正掌握相关知识点；当学生真正理解这些概念的区别与联系后，也会激发他们学习的热情。当然，深刻讲解、剖析基本概念的前提是要求教师自身需要对课程中的概念有深刻的理解与认识。 2.2. 课堂教学注重学科知识的交叉与综合运用 船舶与海洋工程方向大多数的专业基础课均与应用力学紧密相关 [ 3 ] [ 4 ]，教材中涉及很多概念与公式，这也使得一部分学生学起来倍感吃力。对于诸如“船体结构强度”这种理论性强的专业课涉及到多门力学和数学，比如材料力学、结构力学、高等数学、矩阵理论等等。传统的授课方式就是教师按部就班的把公式的推演过程展现给学生，这样的授课效果不佳，导致相当一部分学生畏惧公式。如何让学生走出惧怕公式的窘境是教学过程中值得思考的事情。 笔者认为，专业课中涉及到的多数公式都有其力学背景，教师不能局限于仅仅讲授公式的推导过程，更不能认为公式的推演是学生自己的事情而不在课堂讲解，教师应该侧重于对公式的解读，包括从力学模型的建立到数学工具的应用，再到公式所体现的力学含义。这牵涉到多门学科知识的交叉与综合运用，需要教师在教学过程中不断完善自己的知识体系。比如对于船体梁在组合载荷作用下的挠度计算问题，教材中利用叠加原理计算。讲授过程不能仅仅列出教材中给出的计算公式，而应该提出船体梁受载弯曲的力学模型为什么能利用叠加原理计算？是什么样的限制条件使得该力学模型能利用叠加原理？在线性代数中，线性空间具有叠加性与齐次性，诸如二阶常微分方程这种线性系统也具有叠加性，它们与该力学模型有什么关系?带着这样的问题向学生讲授清楚，才能让学生真正掌握数学工具的运用、理解该力学模型的本质，可能也会让学生感受到数学之美和力学之美。 2.3. 教学过程应紧密结合学科前沿 教育的一个主要目标是培养具有创新能力的人才，创新必须先要知新，因此笔者提倡对高年级的本科专业课教学过程中，授课教师结合所授课程的特点和自身的研究方向，引入一些学科的前沿问题介绍予学生，这样不仅能拓展学生学术的视野，也能激发学生的求知欲；更进一步地，针对学科前沿问题让学生做纵向深入思考和横向广度思考，这样学生可以关联到学过的知识点或者公式的应用等等。比如关于船舶舷侧结构强度计算的外载荷讨论，总体设计时教材中只考虑了静水压力，但笔者在授课过程中适当的讲授在详细设计阶段所要考虑的晃荡载荷，结合视频展现晃荡的物理过程，介绍这一问题的最新研究进展，比如涉及弹性舱壁与油液的流固耦合效应等。课后学生反映对这样的教学效果不错，也可以为一部分想继续深造读研的学生提供有用的科研信息。
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user: 3. 改善教学效果的进一步建议 3.1. 高年级本科生适当的参与研究工作 当前的本科教育主要是以学生接受知识为主要模式，对于自主学习知识与发现知识的能力颇显不足。对于高年级本科生，笔者认为可以采用“工程案例教学”模式 [ 5 ]，让科研走进课堂，也可以让学生适当的介入与课程紧密相关的科研中。这种以问题为导向的研究型学习效果可能会更好。因为带着问题学习，学生的注意力会更加集中、思考问题更加专注、求得知识的方向性更加聚焦，这使得学生由被动的接受教材中的结论或结果转变成为了得到结论或结果而进行积极主动的探索过程，这无形中提升了学生分析问题、解决问题能力和创新能力，而只有具备创新能力的人才可能创造新知识。 3.2. 正确引导学生在课堂中使用手机 本科教学过程大学生课堂使用手机是普遍性的现象。智能手机作为信息化社会的产物有其积极作用，但是笔者在课堂教学中观察到的大学生课堂使用手机多数是打游戏、或做与课堂无关的事情。尽管当前高校多采用强制性措施禁止或者监管学生课堂使用手机，但教学效果并没有显著提升，更何况学生总是有很多方法把手机带入座位违规使用。信息化学习是高等教育的趋势，而智能手机是获取信息的一种重要手段，基于此，笔者认为学生手机进课堂就如治水，堵水不如导水，要因势利导，正确引导学生课堂使用手机才是可行之法，当然，这需要相应的管理制度及配合合理的教学模式加以保证。比如在教学环节中可以增添一些开放性的学术问题，此时可以给学生一定的时间，让学生利用手机查阅资料，然后进行师–生或生–生的交流与讨论；如果发现学生在不需要或不允许使用手机的情况下违规使用，则可以立马启动惩罚措施来约束之。 3.3. 课堂教学中鼓励学生要有质疑精神 研讨式教学的核心目标是培养学生的质疑与批判性思维，这也是北京大学“独立之精神，自由之思想”的体现。在传统的教学方法中，教师往往处于绝对权威的地位，教师学术水平与讲课水平直接决定教学效果。即使教师有较高的学术水平，由于绝对权威不受控的施加于学生，也会使得学生丧失独立自主意识，学生的创新能力得不到培养与锻炼。课堂教学过程，尤其教师，应该意识到教师与学生的平等地位，多鼓励学生敢于提出自己的见解，让学生具有“怀疑一切”的勇气，并积极的与学生沟通、探讨，正如先贤大哲亚里斯多德所说“吾爱吾师，吾更爱真理”。
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user: 4. 结束语 本科教学质量决定着国家高等教育的发展的水平，而提高本科教学质量的关键是提升学生的课堂学习质量。本文结合笔者的教学实践经验论述了教学过程中提升课堂教学效果的方法，并提出进一步改进的建议。
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user: 摘 要 研究表明γ–变形杆菌中的Csr/Rsm家族小RNA主要在转录后水平参与全局调控基因表达、控制多种生物学过程，以及调节细菌运动性和生物膜形成等社会行为，并参与调控氢氰酸和酚嗪等抗生素的生物合成。本研究使用内生菌普城沙雷氏菌野生菌株G3及其小RNA突变株ΔrsmB为试验菌株，组合表型突变分析、定性TLC层析和LC-MS定量分析，检测了抗生素硝吡咯菌素PRN和群体感应信号分子N-乙酰基高丝氨酸内酯AHL (N-acylhomoserine lactone)的合成水平。结果表明G3菌株RsmB小RNA作为全局调控子可正向控制PRN和AHL产生，以及蛋白酶活性和生物膜的形成。首次证明RsmB小RNA可通过影响AHL介导的群体感应系统，分别在转录和转录后水平上调控PRN生物合成水平。为进一步通过操纵细菌Rsm系统遗传改良生防菌提供了新策略。 关键词 :普城沙雷氏菌，RsmB小RNA，硝吡咯菌素合成，群体感应，N-乙酰基高丝氨酸内酯 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 表观遗传学研究表明，非编码调控RNA，也称为小RNA (sRNA)在调控细菌基因表达方面发挥多元化重要作用，因而也备受关注 [ 1 ] [ 2 ]。在革兰氏阴性细菌中已知有两种主要类型的调控sRNA。一种属于依赖Hfq的sRNAs，通过RNA分子伴侣Hfq介导靶基因mRNA的5’-非翻译区(5’-UTR)与某些sRNAs的碱基配对，干扰或促进靶基因mRNA与核糖体的结合，从而调控mRNA的翻译或稳定性。第二种是CsrB家族sRNAs，他们与RNA结合蛋白CsrA/RsmA，以及sRNA分解因子GGDEF/EAL域蛋白CsrD等一起组成Csr/Rsm转录后全局调控系统，位于细菌调控网络的中心，并整合其他调控因子协同控制细菌的碳代谢、分泌系统、毒力或生防因子、运动性以及生物膜形成、胁迫反应和细菌定植等生理活动和行为，从而影响其适应性。其中CsrA/RsmA，通常与核糖体的SD序列结合，导致靶基因mRNA的翻译受抑制。而CsrB/CsrC sRNAs及其同源物RsmB/RsmC等，包含多个CsrA/RsmA的结合位点A(N)GGA，作为CsrA/RsmA翻译阻遏蛋白的拮抗物发挥作用。可与多个CsrA/RsmA蛋白结合释放核糖体结合位点，解除其翻译抑制 [ 3 ] [ 4 ]。 生防因子普城沙雷氏菌S. plymuthica，可产生多种抗真菌因子，包括几丁质酶、β-1，3-葡聚糖酶等细胞壁降解酶，以及硝吡咯菌素(pyrrolnitrin， PRN)和植物生长素吲哚乙酸IAA等，在德国已经被开发并注册为生物农药。其中抗生素PRN具有广谱抗真菌、抗细菌和抗线虫活性，作为苯吡咯家族杀真菌剂(fludioxonil and fenpiclonil)的天然前导化合物在农业和制药领域具有广阔的应用前景。更重要的是，30多年来鲜有田间应用产生抗药性的报道 [ 5 ] [ 6 ]。PRN由操纵子prnABCD编码，核酸序列高度保守，仅由少数细菌Pseudomonas Burkholderia和Serratia等产生。我们前期已经克隆和鉴定了S. plymuthica内生菌株G3中的prn操纵子，并且阐明PRN生物合成在G3菌株中受到严格调控。例如转录水平的N-乙酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactones， AHLs)介导的群体感应系统(quorum sensing， QS)和稳定期的Sigma因子RpoS [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ]，以及转录后调控子Hfq [ 11 ] 及其相互作用形成了调控PRN的网络。本研究在前期已构建获得G3菌株RsmB突变体ΔrsmB的基础上 [ 12 ]，通过组合突变分析和LC-MS液质联用定量分析等，首次证明细菌sRNA RsmB可通过与QS互作，分别在转录和翻译水平上参与全局调控G3菌株PRN的生物合成和生物膜形成等。为进一步通过遗传操纵Rsm系统改良生防菌的效率和稳定性提供了新策略。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 细菌菌株及其生长条件 内生菌株S. plymuthica G3 (Rif R )野生型是分离自小麦的内生菌，具有自然利福平抗性。野生型G3和前期研究中已经构建完成的RsmB突变体ΔrsmB(Gm R )，和检测AHLs信号的报告菌株产紫色杆菌Chromobacterium violaceum CV026 (Km R ) [ 8 ] [ 12 ] 等生长于LB或LBA培养基，置于28℃恒温培养。抗生素使用的终浓度如下：利福平 (Rif) 30 μg/ml；卡那霉素(Km) 50 μg/ml；庆大霉素(Gm) 25 μg/ml。 2.2. 试验方法 2.2.1. 抗生素PRN的提取与定性和定量分析 挑取野生菌G3及其RsmB突变体ΔrsmB的单菌落接种添加利福平或庆大霉素的LB，过夜培养16 h。OD 600 调至0.1，分别取等量菌液涂布于含2%甘油的PDA平板上，每个菌株设四个重复，28℃培养5天。经乙酸乙酯萃取2次合并上清有机相，旋转蒸发干燥后，用甲醇溶解。真空干燥后，重新溶解于20 μL甲醇，置于−20℃冰箱中避光密封保存待用。 TLC板37℃过夜预热，点样时以2 μL的标准样品(2 mg/mL)为对照，提取的样品各10 μL上样，展开剂为正己烷:乙酸乙酯 = 2:1，进行TLC层析。完成后使用2%对二甲氨基苯甲醛喷雾显色观察，待TLC板干燥后，拍照。同时，以上样品参照Liu et al.， 2018的方法 [ 10 ]，采用LC-MS液质联用方法定量分析PRN的产量，进一步验证TLC薄层层析的结果。 2.2.2. 抗真菌活性等表型分析 在PDA平板中央接入直径为6 mm的板栗疫病菌(Cryphonectria parasitica)菌丝饼，在距菌中心2 cm处的同心圆上接种2 μL 28℃过夜培养的野生菌G3或∆rsmB突变株。25℃恒温培养4天，观察测量抑菌圈的大小。野生菌与RsmB突变株的蛋白酶和生物膜检测方法参见Liu et al.2016的方法 [ 9 ]。每个实验处理设置至少三个重复。 2.2.3. 群体感应信号分子的提取和TLC分析 参照李惠等方法 [ 13 ]，主要用乙酸乙酯提取不同细菌菌株的QS信号分子AHLs。然后取5 μl提取液点样于RP18、F254S反相TLC平板(德国Merck)，展开剂为甲醇:水 (60:40， V/V)。约4 h充分展开后，取出置于通风橱中干燥。待溶剂被蒸发后，干燥的TLC平板用混有C. violaceum CV026检测菌株的软琼脂(0.6% agar)覆盖。琼脂凝固后，置于密闭的容器中，于30℃恒温箱中培养过夜，观察结果并拍照。分别以合成的AHLs标准样品N-丁酰基高丝氨酸内酯BHL (N-butanoyl-homoserinelactone)、N-己酰基高丝氨酸内酯HHL (N-hexanoyl-homoserinelactone)和N-3-O-己酰基高丝氨酸内酯OHHL (N-3-oxo-hexanoyl- homoserine lactone)作对照 [ 7 ]。 2.3. 数据处理 每个实验处理至少设置3个重复，数据采用SPSS软件进行统计分析。