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user: 3. 结果与分析 3.1. 不同培养基与植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响 2周后观察，各处理愈伤组织块明显增大，但不均一。处理1、处理2愈伤组织大、致密、呈黄绿色，处理3和处理4愈伤组织块较大、较致密、淡黄绿色，处理5和处理6愈伤组织小、疏松、呈乳黄色。其中处理1和处理2的平均诱导率最高，为76.70%，比处理3和处理4、处理5和处理6的平均诱导率高；4周后处理1和处理2培养基愈伤组织生长普遍良好，小苗健壮，叶片浓绿；由此可见不同基质间对款冬诱导率有差别。而且就处理1和处理2间诱导率也不同，处理2的诱导率比处理1高42.9%，由此可见影响款冬诱导发芽的因素除基质外还与外源激素种类、浓度有关。处理2表面最先出现小疣突，款冬愈伤组织出愈程度大，愈伤化程度高，其颜色翠绿，为团簇状(见图1(a))，是较为理想的愈伤组织诱导培养组合，诱导率为90.0% (表2)。 3.2. 不同培养基与植物生长调节剂组合对款冬不定芽分化的影响 在不考虑交互作用的情况下，方差分析显示3种基质对款冬不定芽分化的影响差异不显著(F 0.05 = 1.43， ρ = 0.41)。3种基质对款冬不定芽分化的影响虽然差异不显著，但3种基质分化率的大小依次为MS (86.70 ± 14.14)%、White (84.95 ± 2.33)%、B5 (71.95 ± 2.33)%，NAA 2.0 mg∙L −1 的分化率 > NAA 1.0 mg∙L −1 ，6-BA 3.0 mg∙L −1 > 6-BA 2.0 mg∙L −1 ，NAA与6-BA高浓度与低浓度平均分化率相同，为(84.43 ± 13.48)%和(77.77 ± 5.08)%。NAA和6-BA浓度对不定芽分化率的影响趋势一致，都是较高浓度比低浓度有利于不定芽的分化。而NAA 1.0 mg∙L −1 + 6-BA 2.0 mg∙L −1 不定芽分化率平均为(77.77 ± 5.08)%，NAA 2.0 mg∙L −1 + 6-BA 3.0 mg∙L −1 的分化率是(84.43 ± 13.48)。分析可知MS + NAA 2.0 mg∙L −1 + 6-BA 3.0 mg∙L −1 组合不定芽分化率最高，达到96.67% (见图1(b))。 Table 2 Effects of different basic medium and plant growth regulator combinations on callus induction， adventitious bud differentiation and proliferation of Tussilago farfar 处理 试验1 试验2 试验3 诱导率(Induction rate) % 分化率(Differentiation rate) % 平均芽长 (Average bud length) cm 芽增殖倍数 (Bud Multiplication) 生长状况(Growth Condition) 1 63.30 76.70 4.19 2.30 长势旺盛，嫩绿色，生长慢 2 90.00 96.70 4.36 2.70 长势较旺盛，淡嫩绿色，生长较慢 3 50.00 83.30 4.86 6.50 长势较旺盛，浅绿色，生长较快，不定芽壮 4 43.30 86.60 4.53 5.90 长势较旺盛，嫩绿色，生长较快 5 53.30 73.30 2.04 1.80 长势一般浅绿色，不定芽较弱 6 40.00 70.00 2.39 1.20 生长慢，浅绿色，不定芽较弱 表2. 不同基本培养基与植物生长调节剂组合对款冬愈伤组织诱导、不定芽分化、增殖的影响 图1. 款冬的组培快繁与再生。(a)为款冬茎段诱导出的愈伤组织，(b)为款冬不定芽的分化，(c)为款冬继代培养，(d)为款冬生根培养，(e)为款冬炼苗 3.3. 不同基本培养基对款冬组培苗增殖的影响 方差分析结果，基质对款冬不定芽生长的影响差异达显著水平(F 0.05 = 56.77， ρ = 0.02)，多重比较结果，基质B 5 的平均芽长最低，为(2.22 ± 0.25) cm，且与MS和White差异显著，基质MS与White间差异不显著，其中White基质的平均芽最长为(4.70 ± 0.23) cm，其次就是MS基质，为(4.28 ± 0.12) cm。IBA浓度对不定芽生长的影响差异不显著，IBA 0.1 mg∙L −1 和0.2 mg∙L −1 的平均芽长分别为(3.70 ± 1.47) cm和(3.76 ± 1.19) cm，0.2 mg∙L −1 IBA的平均芽长比1.0 mg∙L −1 略高1.7%。 对款冬不定芽增殖倍数的影响3种基质间具有显著差异(F 0.05 = 73.56， ρ = 0.01)，IBA浓度的影响差异不显著。多重比较显示White款冬芽的增殖倍数最高，为(6.20 ± 0.42)，且与MS和B 5 差异显著，MS和B 5 间差异不显著，款冬不定芽的增殖倍数分别为(2.50 ± 0.28)和(1.50 ± 0.42)。本实验中White + 0.1 mg∙L −1 IBA组合(添加2.0 mg∙L −1 的6-BA)款冬不定芽的生长和增殖倍数是所有组合中最高的，分别达到4.86 cm和6.50倍(图1(c))。综合来看款冬丛生芽分化和增殖的理想基质为White，IBA浓度宜选用0.2 mg∙L −1 ，理想组合为White + 0.2 mg∙L −1 IBA (添加2.0 mg∙L −1 的6-BA) (本实验没有涉及该组合)。 3.4. 不同基本培养基和生长素组合对款冬生根的影响 1/2MS、1/2White和1/2B 5 等3种生根基本培养基对款冬生根率的影响差异达显著水平(F 0.05 = 170.23， ρ = 0.01)。多重比较显示，1/2B 5 的生根率最低，为(89.65 ± 2.19)%，且与1/2MS和1/2White差异达显著水平，1/2MS和1/2White间生根率相同，均为(100.00 ± 0.00)%。激素浓度的影响无差异。 3种培养基质对款冬生根数、根系长度的影响差异不显著。虽然差异不显著，但生根数从大到小的顺序为1/2MS (5.20 ± 0.42)条∙株 −1 、1/2White (4.07 ± 0.43)条∙株 −1 、1/2B 5 (3.34 ± 0.42)条∙株 −1 ，平均根长的大小顺序是1/2MS (3.17 ± 0.61) cm、1/2B 5 (1.62 ± 0.57) cm、1/2White (1.57 ± 0.57) cm。IBA 0.1 mg∙L −1 和NAA 1.0 mg∙L −1 与IBA 0.2 mg∙L −1 和NAA 2.0 mg∙L −1 对生根数的影响一致，其值分别是(4.30 ± 1.23)条∙株 −1 与(4.10 ± 0.70)条∙株 −1 ，对平均根长的影响效果与生根数的影响一样，影响的大小为(2.26 ± 1.22) cm与(1.97 ± 0.79) cm。 根据生根率及根的生长情况，1/2MS + IBA 0.1 mg∙L −1 + NAA 1.0 mg∙L −1 组合对款冬生根、根系生长较适合，生根率达到100.00%，平均生根数5.50条∙株 −1 ，根系平均长3.60 cm (见表3)，是所有组合中最好的，而且生长旺盛，根系粗壮发达(见图1(d))。 Table 3 Effects of different basic media and Auxin combinations on the rooting of Tussilago farfar 实验组合 生根率(%) Rooting rate 平均生根数(条) Average rooting number 平均根长(cm) Average root length 生长状况 Growth Condition 1 100 5.5 3.60 长势旺盛，根系粗壮发达 2 100 4.9 2.74 长势较旺盛，根较粗壮 3 100 4.37 1.97 长势较旺盛，根系较粗壮 4 100 3.76 1.16 长势较旺盛，根系较细弱 5 88.1 3.04 1.22 生长缓慢，根系细弱不发达 6 91.2 3.64 2.02 长势一般，根系细弱发达 表3. 不同基本培养基和生长素组合对款冬生根的影响 3.5. 移栽驯化 款冬生根瓶苗移栽驯化40 d后，统计其成活率(采用随机抽样调查法，调查了165株，成活160株)，平均成活率可达96.00%以上，且小苗的生长状态良好(见图1(e))。能满足款冬工厂化和规模化生产需要，是新的栽培途径。