DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 3. 结果 3.1. 近视眼视网膜周边部退行性病变患病率 本研究中周边部视网膜退行性病变在近视眼患病率中高达113例(131只眼)占12.81%。其中，需定期观察的非压迫变白54例(67只眼)占6.12%，实施视网膜激光光凝治疗59例(64只眼)占6.69%；包括单纯周边视网膜变性54例(59只眼)占6.12%；周边视网膜变性伴干性裂孔3例(3只眼)占0.34%；周边视网膜变性伴裂孔、视网膜浅脱离2例(2只眼)占0.23%。单眼发病95例(95只眼)占10.77%；双眼发病18例(36只眼)占2.04%。近视家族遗传史23例(38只眼)占2.61%，早产史7例(11只眼)占0.79%。 3.2. 不同屈光度的近视引起的周边视网膜退行性病变分布规律 Table 1 Retinal degenerative lesions and different quadrant 位置 例数 眼数 比例% 颞侧 51 62 45.13 鼻侧 9 10 7.96 上方 15 16 13.27 下方 8 8 7.08 两个及两个以上病变 30 35 26.55 合计 113 131 100 表1. 视网膜退行性病变累及不同象限情况 颞侧视网膜退行性病变出现的几率高于鼻侧、下方和上方，差异具有统计学意义(P < 0.05)，且两个及两个以上病变几率较大，差异具有统计学意义(P < 0.05)。 Table 2 Peripheral retinal degeneration composition ratio caused by different diopte 近视屈光度 例数 眼数 比例% ≤−3.00D 12 13 10.62 −3.25D~−6.00D 49 56 43.36 −6.25D~−9.00D 42 50 37.17 ≥−9.25D 10 12 8.85 合计 113 131 100 表2. 不同屈光度引起的周边视网膜退行性变性构成比 中、高度近视网膜退行性病变几率明显增加，与低度近视引起的退行性视网膜病变差异具有统计学意义(P < 0.05)。中高度近视视网膜退行性病变无明显统计学差异(P > 0.05)。 Table 3 Relationship between peripheral retinal degenerative lesions and diopte 近视屈光度 病变例数 总例数 比例% ≤−3.00D 12 118 1.36 (10.17) −3.25D~−6.00D 49 478 5.56 (10.25) −6.25D~−9.00D 42 259 4.76 (16.22) ≥−9.25D 10 27 1.13 (37.04) 合计 113 882 12.81 表3. 周边视网膜退行性病变与屈光度的关系 中、低度近视视网膜退行性病变几率无明显的统计学差异，高度近视退行性视网膜病变几率明显增加，差异具有统计学意义(P < 0.05)。
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user: 4. 讨论 近视已成为国民日益严重的健康问题，近视眼的患病率随年龄的增加而增长，研究显示，我国中学生近视的患病率高达95%。近视眼不仅是屈光不正，而且常伴有特征性的后极部和周边部视网膜病变 [ 3 ]。目前，屈光性角膜手术是矫正近视的主流手术。近视患者的术前检查对是否可行近视手术以及采取何种手术方式，至关重要。术前认真仔细检查周边视网膜的情况，避免因视网膜的病变而引起的视功能减退，从而精准、科学、个性化的选择手术方案，提高视觉质量，减少并发症。因此，拟行近视手术的患者，术前充分散大瞳孔行直接检眼镜和间接检眼镜检查，对于可疑的周边部视网膜退行性病变，均给予眼底照相、裂隙灯三面镜、全视网膜镜检查以及OCT检查等，减少漏诊和误诊。 在本研究中发现，表2、表3提示中高度近视视网膜退行性病变发生率明显增高，不同屈光度组的周边视网膜退行性病变的发生率存在明显的差异(P < 0.05)，随近视屈光度的增加发生率增高，高度近视病变几率明显增加，而在其他的研究中仅高度近视眼底病变几率增高。视网膜变性和裂孔在中高度近视发生率明显高于低度近视。不同屈光度的近视与视网膜退行性病变之间有明显的关联，并发现任何屈光度的近视都可能发生视网膜的退行性病变。研究报告 [ 4 ]，高度近视性视网膜病变患病率为1.3%，近视度数越高，周边视网膜变性的患病率越高 [ 5 ] [ 6 ]。因此，对于近视的病人无论近视的屈光度大小，是否有伴随症状，均应重视眼底周边部的检查，熟悉和研究这些病变，做到早发现，早诊断，早治疗，对防治孔源性视网膜脱离具有重要意义。 本研究中表明，表1提示颞侧视网膜退行性病变的几率明显增高，具有两个或者两个以上病变的比例增大(26.55%)。对于屈光不正的患者，早期发现视网膜退行性病变，显得尤为重要。熟悉并掌握近视退行性视网膜病变的程度和变化规律，对于选择合理的治疗方法，防止和减少视网膜并发症，具有重大的意义。 有关研究表明，非压迫变白在正常人群中发病率较高，尤其在屈光不正人群中高达10%~30%。我们的研究显示，113例近视眼视网膜退行性病变发生率12.81%。周边视网膜的非压迫变白需要观察的54例(6.12%)，需要行激光治疗的59例(6.69%)。其中具有早产史7例(11只眼，0.79%，早产儿视网膜病变3区1期)。也有文献表明 [ 7 ]，近视眼中眼底病的患病率为18.31%。目前，对于视网膜退行性病变的发病机制及病理基础仍不十分清楚。多数研究认为，视网膜与玻璃体之间的牵拉，周边视网膜血管的缓冲率下降，牵拉导致血管受力增加，血流缓慢，均可能与周边视网膜的营养不良、变性有关。周边视网膜血液供应减弱，导致周边视网膜变性。视网膜变性多位于视网膜的周边部，可形成裂孔的最常见变性为格子样变性，还有蜗牛样变性、囊样变性、视网膜劈裂等，变性的视网膜形成萎缩圆孔，如无玻璃体的牵拉可不引起视网膜的脱离。若玻璃体的液化与后脱离或者外伤导致对附着视网膜的反复牵拉，易形成马蹄形裂孔，液化的玻璃体经裂孔进入视网膜下形成视网膜脱离，导致视功能严重受损，因此研究和掌握近视眼视网膜退行性病变的情况，对预防视网膜脱离等严重并发症的发生具有重要意义。 尽管在本研究中发生无症状的视网膜裂孔和脱离的几率较低，但是，如果不是近视术前检查，及早发现并处理，病情可能会进一步的加剧，影响视功能。因此，基于本研究结果，近视术前检查眼底应全面认真细致，对于伴有退行性视网膜病变的病例，谨慎选择手术方式，对于非压迫变白区域需要定期的检查。对于预防性治疗的适应症以及远期临床价值，尚待进一步探探讨。
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user: 摘要 采用流域分析方法，系统分析了重庆市梁滩河流域内影响生态环境质量的城镇污水、垃圾、工业排污、畜禽养殖、农业面源污染、水土流失等问题，对规划目标年进行了污染负荷预测，确定了流域环境容量和污染物负荷削减目标，提出了实现规划水质目标和生态环境质量目标的污染控制措施和生态整治建设内容，为类似流域的水环境综合治理工程的规划建设提供参考。
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user: 1. 流域现状及存在的主要问题 1.1. 流域概况 梁滩河系嘉陵江右岸一级支流，位于重庆西南部，其上游干流的白市河发源于九龙坡区福寿镇童家岭，在沙坪坝区土主镇的四塘埝上游约400 m处与支流龙凤河汇合后始称梁滩河。主干流经白市驿、西永、土主、回龙坝、歇马、龙凤桥等镇，在北碚区龙凤桥镇的毛背沱注入嘉陵江。干流全长85.4 km，流域面积498.2 km 2 ，主河道平均坡降1.79‰，总落差224 m，河口处多年平均流量6.08 m 3 /s，多年平均径流总量1.29亿m 3 。流域水系见图1 [ 1 ]。 图1. 梁滩河流域水系图 梁滩河流域是重庆市重要的粮食、蔬菜、油料、蚕茧生产基地及城市生活区。流域内总人口为54.91万人，其中城镇人口为29.12万人，工农业总产值为70.6亿元。 1.2. 水污染状况及主要问题 梁滩河流域除虎溪陈家桥以上水域执行地面水III类标准外，其余水域执行IV类标准。根据梁滩河五星桥、土主、曾家镇、西溪桥以及龙凤河口等断面的水质监测结果，各断面水体均为劣Ⅴ类水质，水体污染严重，以有机物污染为特征，无法满足功能区水质要求。超标项目主要为COD、BOD 5 、NH 3 -N、总氮和总磷，其中最为严重的是TP、NH3-N和粪大肠菌群。龙凤桥段还出现铅、汞等重金属污染物，与北碚区下游几家电镀厂排污密切相关。原本清澈见底、水生物种众多的清洁河流已成为鱼虾绝迹、恶臭污浊的大水沟，尚存的几类鱼种也因河水严重污染而无法食用。随着流域城镇化进程加快，如不及时进行污染治理，梁滩河流域水质势必继续恶化，不仅影响整个三峡库区水质达标，也危害着人群的身体健康，制约流域经济的可持续发展。2018年水质监测值结果如表1所示。表2为2018年各种污染源污染负荷统计。 Table 1 Water quality monitoring data of Liangtan River (2018 断面 pH值 溶解氧 (mg/L) 高锰酸盐指数(mg/L) COD (mg/L) BOD 5 (mg/L) NH 3 -N (mg/L) TN (mg/L) TP (mg/L) 石油类 (mg/L) 粪大肠菌群 (个/L) 水质级别 五星桥 7.59 3.55 5.94 66.14 28.50 10.61 13.72 2.09 0.171 7，300，000 劣V 西永 8.22 1.20 6.02 117 36.7 11.98 8.75 1.80 0.269 20，200，000 劣V 土主 7.78 1.15 6.11 73.4 17.6 7.51 9.05 1.52 0.154 2，000，000 劣V 回龙坝 8.04 9.46 5.98 90.0 7.8 11.07 5.68 2.05 0.075 33，000 劣V 西溪桥 7.81 5.74 8.48 47.6 3.78 3.53 4.249 0.664 0.124 12，200 劣V 龙凤河 7.83 5.49 8.63 50.83 4.98 3.907 4.613 0.766 0.115 747，100 劣V 表1. 梁滩河水质监测结果(2018) Table 2 Yearly pollutant load of Liangtan River basin (2018 污染来源 COD BOD 5 TN TP (t/a) (t/a) (t/a) (t/a) 工业废水 1047.5 152.8 0.3 / 城市污水 6658.8 3147.1 1004.2 102.1 生活垃圾 8515.7 815.7 163.5 32.6 畜禽养殖 5348.7 2243.0 448.6 168.2 农田面源 / / 264.5 51.0 河道底泥 1402.2 145.9 15.4 1.7 水土流失 467.2 62.3 3.0 0.62 合计 23，440.1 6566.8 1899.5 356.2 表2. 梁滩流域污染物负荷统计(2018) 从表2可以看出，城镇污水、畜禽养殖和城镇生活垃圾是梁滩河流域的主要污染源。目前流域内生活垃圾约有447 t/d，生活污水为6.2 × 10 4 m 3 /d，工业废水为0.43 × 10 4 m 3 /d。城镇生活垃圾由于没有完善的收运系统，绝大部分在街头路边或河边堆弃，对环境污染严重。生活污水基本未经任何处理，即直接排入梁滩河。工业废水虽在环保部门的监管下进行了处理，但是流域内仍有许多中小企业存在治污不力、偷排漏排现象。同时流域内畜禽养殖、水土流失和农田施肥对污染的贡献率也较大。 1.3. 生态环境状况及主要问题 梁滩河流域属于西南土石山区，流域水土流失总面积232.4 km 2 ，年平均侵蚀总量69.21万t，平均侵蚀模数达2978.2 t/km 2 ·a。其中极强度水土流失面积17.95 km 2 ，占水土流失面积的7.7%；强度水土流失面积24.29 km 2 ，占水土流失面积的10.5%；中度水土流失面积108.49 km 2 ，占水土流失面积的46.7%；轻度水土流失面积81.65 km 2 ，占水土流失面积的35.1%。 由于水土流失较为严重，造成河道淤积，直接影响行洪泄流。同时，大量的N、P营养元素随土壤流失进入河道，超过水土自净能力，引起水质下降，河流生物多样性严重受损，影响生产、生活和景观。
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user: 2. 污染负荷预测及环境容量分析 2.1. 污染负荷预测 本文采用基于流域分析的方法对水污染进行研究 [ 2 ] [ 3 ]。为预测规划目标年的河流水质状况，对规划目标年(2025年和2030年)进行了污染负荷预测。对于城镇生活污水和生活垃圾的负荷预测主要依据人口增长和单位人口排污定额确定。规划近期2025年梁滩河流域人口将达到81.50万，远期2030年将达到117.46万。 随着城镇化水平不断提高及人民生活水平的改善，人们对蛋肉等的消费也会不断增加。根据《重庆市都市区城市总体规划纲要》的要求，梁滩河流域属畜禽养殖限养区，需对畜禽养殖污染进行控制。由此确定规模化畜禽养殖规模维持现状不变 [ 4 ]。在不考虑治理的情况下，2025年和2030年规模化畜禽产生和污染负荷不变。畜禽养殖对水体造成的污染主要途径是畜禽粪尿作为农田肥料被地下径流和地表径流带入水体，在进行负荷估算时，其产生的污染负荷进入地表水体的比例按畜禽总排放量的15%计算。2025年和2030年梁滩河流域畜禽污染导致的COD负荷为5348.7 t/a，BOD 5 负荷为2243.0 t/a，TN负荷为448.6 t/a，TP负荷为168.2 t/a。 流域内人均生活垃圾日产量预测为近期2025年按 1.10 公斤 /(人/天)，远期2030年按 1.05 公斤 /(人/天)计。由于垃圾产生的污染负荷不可能全部贡献于梁滩河流域中，本规划取50%作为生活垃圾污染负荷入河贡献值。 对于因农田施肥、水土流失和底泥污染引起的污染负荷，在不考虑治理的情况下，在整个规划期限内按现状值计。 由此预测得出到规划目标年梁滩河流域内的污染负荷，结果如表3所示。 Table 3 Pollutant load prediction of Liangtan River basi 污染来源 2025年 2030年 COD (t/a) BOD 5 (t/a) TN (t/a) TP (t/a) COD (t/a) BOD 5 (t/a) TN (t/a) TP (t/a) 城市污水 17，579.2 9040.7 2260.1 251.1 33，432.5 17，193.8 4289.47 477.6 生活垃圾 7154 715.4 143.0 28.6 10，721.8 1072.1 214.4 42.8 畜禽养殖 5348.7 2243.0 448.6 168.2 5348.7 2243.0 448.6 168.2 河道底泥 1402.2 145.9 15.4 1.7 1402.2 145.9 15.4 1.7 农田面源 / / 264.5 51.0 / / 264.5 51.0 水土流失 467.2 62.3 3.0 0.62 467.2 62.3 3.0 0.62 小计 31，951.3 12，207.3 3134.7 501.2 51，372.5 20，717.2 5235.4 742.0 表3. 梁滩河流域污染负荷预测 2.2. 环境容量分析 (1) 计算模型 梁滩河主干流全长约85.4 km，宽约20~80 m，其间污染源是一个庞大复杂的系统，一般只考虑纵向即沿河道水流方向的浓度变化，结合梁滩河流域实际情况，本规划以非持久性污染物COD、BOD 5 、TN、TP作为控制指标，采用一维恒定河流水质单指标模型。参照《水域纳污能力计算规程(GB/T 25173.2010)》和《全国水环境容量核定技术指南》，当控制断面满足指定的水质标准时，河流中某种非持久性污染物的环境容量计算公式为 [ 5 ] [ 6 ]： W = 86.4 ⋅ ( Q h + Q 污 ) ⋅ [ C s ⋅ exp ( k ⋅ L ) − C 0 ] 式中：W——环境容量，kg/d； Q h ——河流枯水期流量，m 3 /s； Q 污 ——城市污水排放量，m 3 /s； C s ——河流水质控制标准浓度，mg/l； K——污染物综合降解系数，1/km； L——河段长度，m； C 0 ——河流对照断面的背景浓度，mg/l； (2) 参数选取及计算 基于水文水质资料和文献数据的方法，污染物综合降解系数根据下式进行计算 [ 7 ] [ 8 ]： K = ( 86400 u / Δ L ) ⋅ ln ( C 上 / C 下 ) 式中： Δ L ——功能区河段长度，km； C 上 ——功能区上断面污染物浓度，mg/l； C 下 ——功能区下断面污染物浓度，mg/l。 根据各断面的水质监测值以及各断面的现状污染负荷，并参考《三峡水库对重庆库段生态环境影响及整治对策研究》中水环境容量分析，可计算出梁滩河污染物综合降解系数，并用2018年的水质监测资料和污染负荷校核K值。经分析得出梁滩河流域污染物综合降解系数K值见表4。 Table 4 Value of pollutant degradable coefficien 序号 污染物种类 衰减系数K值(1/km) 1 COD 0.0053 2 BOD 5 0.0090 3 TN 0.0030 4 TP 0.0027 表4. 梁滩河污染物降解系数K值 由此可计算预测得出梁滩河流域各河段的水环境容量见表5。 Table 5 Environmental capacity of Liangtan Rive 项目 环境容量(t·a −1 ) COD BOD 5 TN TP 2025 15491.2 3379.5 731.9 165.2 2030 24727.6 5407.7 1167.8 292.6 表5. 梁滩河的环境容量 (3) 主要污染物的削减目标 根据梁滩河的污染物允许排放量和各规划水平年所预测的污染物负荷，可计算出到各规划水平年污染物所需削减量，如表6所示。 Table 6 Target of pollutant reduction in Liangtan River Basin (t·a 项目 COD BOD 5 TN TP 2025年所需削减量 16，460.1 8827.8 2402.8 336.0 2030年所需削减量 26，644.9 15，309.5 4067.6 449.4 表6. 梁滩河流域污染物削减量目标(t·a)
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user: 3. 主要规划内容 针对流域水污染控制可采用基于最大日负荷量(TDML)模式等方法 [ 9 ]。根据前述梁滩河流域污染物削减目标，为达到总量控制的要求，规划提出了流域综合整治工程内容。 3.1. 城镇污水处理 梁滩河流域规划污水处理厂7个，近期新建5座污水处理厂，与现有2座污水处理厂共形成污水处理总规模12.96万m 3 /d (其中新建污水处理厂规模2.96万m 3 /d)，建设配套污水管网222.46 km。在2025年前建设完成二期工程，对梁滩河流域的7座污水处理厂进行扩建，污水处理总规模达到24.87万m 3 /d (其中新增规模11.91万m 3 /d)。 对于工业废水要加强监督管理，坚决取缔“十五小”企业，特别要对流域内的小电镀、小染料、小纸厂、小油漆企业进行清理。 3.2. 城镇生活垃圾处理 梁滩河流域城镇生活垃圾近期运至附近同兴垃圾处理场处理，远期建成大路垃圾焚烧场后，垃圾可运往大路处理场处理。 综合考虑规划区各区块面积、与同兴焚烧厂距离、区块垃圾收运量，以及区块内部交通条件，确定规划区建设6个压缩式垃圾转运站。近期设计规模为940 t/d，远期设计规模为1460 t/d。 3.3. 底泥污染治理 梁滩河河道清淤总长107.919 km，河道清淤总量267.97万m 3 。污染底泥含有各种对环境有害的污染物，必须经无害化处理或采取防止污染扩散的措施，不能直接吹填堆放。经处理后的底泥，可作为河岸带绿化建设用土，无害化除处理后作为园林绿化用肥。 3.4. 河岸防护 由于梁滩河目前河床淤积严重，且由于人为的河道侵占，河堤年久失修护岸垮塌，以及大量垃圾冲入，致使河道排水不畅，特别是雨季，一遇暴雨极易造成洪水泛滥成灾。 规划修建河岸防护工程，使得护岸、行洪、城市建设、旅游、绿化等综合效益得以发挥。主要在城镇建成区河岸修建生态型防护堤，在其余河段以自然边坡为主，规划建设防护堤45.88 km。建成健全的水循环系统，营造多样化的生物栖息、繁殖环境，并使其具有亲水性、观赏性 [ 10 ]。典型河岸防护工程断面见图2。 图2. 河岸防护工程示意图 3.5. 生态环境建设 对全流域现有的23，240 ha的水土流失进行治理。对流域内坡度大于25度以上的坡耕地全部退耕还林还草，全流域退耕还林还草 16.25 km 2 ，流域内自然保护区面积达到2466 ha。将梁滩河流域生态修复分为滨水生态屏障建设、牛老滩湿地建设以及水生生态修复。采用退耕还林还草和水土流失治理措施后，可有效减少土壤侵蚀量30.74 × 10 4 t/a，减少泥沙流入1.38 × 10 4 t/a。推行生态农业后，还可减少农田化肥施用量40%左右。 3.6. 畜禽养殖污染治理 规模化畜禽养殖企业污染物处理要严格按照国家《畜禽养殖业污染物排放标准》和《污水综合排放标准》执行。对于产生的干粪，主要通过有机肥料加工厂制成有机肥料用于农田施肥，产生的沼气可用作燃料。
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user: 4. 效益分析 梁滩河流域通过建设污水处理厂、生活垃圾转运站以及规模化养殖畜禽粪便处理工程，将有效地削减因生活垃圾、污水排放、规模化畜禽养殖产生的污染负荷。表7为整治实施后预测梁滩河流域污染负荷削减量。 根据整治后污染负荷预测削减量与削减目标对比分析，预测到2025年，梁滩河流域水质情况将得到好转，各主要监测断面的COD达到IV类，但BOD 5 、TN仍不能达标；到2030年，梁滩河水质得到明显好转，主要控制污染物均得到大幅削减，各主要监测断面的COD、BOD 5 、TP能满足地表水环境质量IV类水质标准，但TP仍无法满足IV类水域功能要求。 通过梁滩河流域综合整治，显著拦截减少了污染物进入河道，净化水质；逐步恢复了水生生物，丰富了河道生物多样性；防止水土流失，减缓了河道淤积。通过滞洪区湿地建设，使滞洪区在生境发生突变的同时迅速调整群落组成，并逐步演替达到稳定的湿地生态系统，并能通过吸附、沉降、分解等作用净化水质。对其他野生动物、植物的生存营造一个健康良好的生存环境，将极大改善梁滩河流域的生态环境，生态效益及社会效益显著。 Table 7 Prediction of pollution load reduction in Liangtan River Basin (t·a 规划期限 污染削减类型 COD BOD 5 TN TP 2025年 城市污水 13606 6339 1716 217 生活垃圾 3046.5 304.7 60.9 12.2 畜禽养殖 4279 1794.4 358.9 134.6 河道底泥 450 53.5 8.5 1.1 水土流失 130 13.4 3.65 0.12 农田面源 / / 65.8 18.9 合计 21511.5 8505 2213.75 383.92 2030年 城市污水 33027 14849 3826 457 生活垃圾 5269.3 526.9 105.4 21.1 畜禽养殖 4635.6 1943.9 388.8 145.8 河道底泥 1308.1 136.1 14.3 1.6 水土流失 205.57 27.41 7.89 0.27 农田面源 / / 118.8 32.1 合计 44，445.57 17，483.31 4461.19 657.87 表7. 梁滩河流域污染负荷削减量预测(t·a)
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user: 5. 结论 采用流域分析方法，分析了影响生态环境质量的各污染因子的贡献率。对规划目标年进行了污染负荷预测，确定了流域环境容量和污染物负荷削减目标，以环境容量和污染物总量控制为主线，提出了切实可行的能够满足生态环境目标要求的水污染治理措施和生态建设内容，贯彻了绿色发展理念，可以用于指导该流域的水污染防治和生态建设工作，也可为流域产业结构调整及经济发展提供参考。
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user: 摘要 对注射PVX后烟苗的发病症状；总RNA快速检测PVX侵染烟草叶片的方法；注射抗病毒抗性诱导物质处理后周围病斑扩散情况；摩擦法接种抗性诱导物质效果等方面进行了研究。结果表明：注射1周后观察云烟叶片，PVX在云烟中可产生严重的花叶症状，PVX在云烟中表达成功；提取RNA，利用病毒的引物检测PVX病毒的纯度，经检测RNA OD 260/280 = 1.955，C = 755.89 ng/μL，说明发病叶片是由纯的PVX引起；注射1 d后用抗性诱导物质比施壮处理叶片，2 d后利用UV光照射并拍照，发现经比施壮处理后，病毒扩散斑明显小于非施用处理；在抗性诱导物质胁迫下，病毒复制效率运动扩散能力都有所降低，抗性诱导物质处理后的叶片荧光斑虽有所扩大，但病毒尚未发生明显转移。由此可见：提取侵染烟草叶片总RNA进行PVX纯度检测，可灵敏地检测出马铃薯X病毒，可作为快速评价感染马铃薯X病毒的指标。抗性诱导物质(比施壮)可抑制马铃薯X病毒的扩散。
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user: 1. 引言 马铃薯X病毒是Potexvirus属的典型成员，是危害茄科作物的一种重要病毒。马铃薯X病毒和马铃薯Y病毒复合侵染大田的马铃薯，表现为粗缩花叶、条纹花叶、叶皱而小、坏死、病株矮化 [ 1 ]。建立一种对马铃薯X病毒快速检测体系，是快速识别马铃薯X病毒，和快速采取措施防治马铃薯X病毒有效手段。尚晓楠 [ 2 ] 等建立了特异性检测PVX的实时荧光定量PCR体系检测，马铃薯X病毒，成功检测到以含pCaPVX440侵染性克隆载体的农杆菌C58C1接种后的本氏烟(Nicotiana benthamiana)中PVX病毒RNA。冯光惠等 [ 3 ] 得出RT-PCR方法可快速、准确地检测到马铃薯X病毒。雷新云等 [ 4 ] 用抗性诱导物质NS-83，具有体外钝化TMV、抑制TMV初侵染的作用，经根部吸收可降低叶部的侵染；可诱导与抗性相关的细胞分裂素和过氧化物酶活性的增加。在不同地区的番茄、辣椒、烟草上，NS-83均具有降低发病率的抑制侵染作用和压低病情指数的治疗作用。本试验探讨了用总RNA进行PVX烟草内马铃薯X病毒感染情况快速检测的方法，并探讨抗性诱导物质比施壮对马铃薯X病毒的抑制效果。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 2.1.1. 植物材料 本氏烟(Nicotiana benthamiana)种子由西南大学植物保护学院植物病理实验室提供，光照培养室培养。 2.1.2. 毒源材料 马铃薯X病毒(Potatoes virus X， PVX)毒源为西南大学植物保护学院植物病。 毒实验室保存的含有PVX-GFP病毒全长质粒的农杆菌菌液。 2.1.3. 生化试剂 RT-PCR反应试剂购自TaKaRa (大连宝生物工程有限公司)，通用型DNA纯化回收试剂盒(购自天根生化科技有限公司)，比施壮(重庆市优胜科技发展有限公司)。 2.1.4. PCR引物 本研究中所用到的引物由Invitrogen公司合成，序列如下表1。 Tabe 1. The primer of PVX CP and virus primers used commonly in laboratory 表1. PVX外壳蛋白区域引物及实验室常用病毒引物 注：表中退火温度为62℃。 2.2. 方法 2.2.1. PVX纯病毒毒源的活化 将实验室保存在−80℃含PVX全长载体的农杆菌菌液活化，并注射到烟草中获得单一毒源。具体操作步骤如下： 1) 从−80℃冰箱中取出含PVX全长载体的农杆菌菌液5 μL。 2) 将5 μL菌液加入5 mL含有卡那霉素和链霉素YEP培养基中，225 rpm/min，30℃，培养12~16 h。 3) 从5 mL菌液中取1 mL加入浓度为20 μM的乙酰丁香酮(AS)5μL，加入到25 mL含有卡那霉素和链霉素YEP培养基中225 rpm/min，30℃培养12~16 h。 4) 从25 mL农杆菌菌液中取2 mL加入到50 mL离心管中，室温，5000 rpm/min离心15 min，弃上清。 5) 将沉淀用新配置的缓冲液重悬并调节OD 600 值至1.0~1.2，室温静置3 h。 缓冲液配方100 mL体系： MgCl 2 ( 1   M )           1   mL MES ( 0. 5   M )         2   mL AS ( 1 00   mM )     1 00   μL } 加 灭 菌 水 至 1 00   mL 6) 取培养至5~6叶期生长健壮的本氏烟，在叶片背面用针头打一小孔，用去掉针头的2.5 mL离心管吸取农杆菌悬浮液注射到叶片内。 注射时带一次性手套，防止交叉污染。 2.2.2. 注射一周后观察症状并提取烟草中病毒总RNA 采用重庆升博公司的RNA提取试剂盒提取。 1) 称取0.1~0.2 g样品放入研钵。 2) 将500 μL RLT和50 μL Plantaid放入1.5 mL离心管中。 3) 用液氮研磨样品至细粉转入离心管内，立即剧烈震荡20 S，放入56℃水浴锅中3 min。 4) 将离心管从水浴锅中取出立即涡旋30 S，4℃离心机13，000 rpm离心10 min，将上清液转移至新的1.5 mL离心管中，加入0.5体积的无水乙醇。 5) 将混合液加入到吸附柱中(每次小于750 μL)，4℃离心机中13，000 rpm离心2 min，弃废液。 6) 在吸附柱中加入700 μL去蛋白液RW1，室温放置30 S，13，000 rpm离心30S，弃废液。 7) 在吸附柱中加入500 μL漂洗液RW，13，000 rpm离心30 S，弃废液并重复一次。 8) 将吸附柱放入收集管中，13，000 rpm离心2 min，弃废液。 9) 将吸附柱放入一新1.5 mL离心管中室温放置1 min，加入温度为70℃~80℃的RNase-free water 30~50 μL，13，000 rpm离心2 min。 10) 弃吸附柱，收集样品，并用2%琼脂糖凝胶检测提取结果，利用Goldview染色，用凝胶成像仪观察电泳结果。 2.2.3. RT-PCR 将提取的RNA利用PrimeScript™ RT reagent Kit进行反转录，试剂盒购自TaKaRa (大连宝生物工程有限公司)。 RT体系： 5 × Prime   Suript   Buffer                                         2   μL PrimeScript   RT   Enzyme                           0. 5   μL Oligo   dT   Primer                                                   0. 5   μL Random   6   mers                                                   0. 5   μL Total   RNA                                                             2 . 5   μL RNase-free   ddH 2 O                           up   to   1 0 μL RT程序为： 37 ℃   15   min ，     85 ℃   2 0 S PCR检测： 利用实验室常见病毒引物进行PCR的扩增。 扩增体系： 1 0 × ExBuffer                   2 . 5   μL MgCl 2                                     1 . 5   μL dNTP                                       0. 5   μL 上 游 引 物                             0. 5   μL 下 游 引 物                             0. 5   μL Ex T a q 酶                               0. 3   μL cDNA                                       1 . 5   μL ddH 2 O                       up   to   25   μL 扩增条件： 94 ℃       3   min 94 ℃       45   s 56 ℃       45   s 72 ℃       9 0   s 72 ℃       延 伸 1 0   min } 3 0   cycles 电泳后用浓度为1%琼脂糖凝胶检测PCR产物，Goldview染色，用凝胶成像仪观察电泳结果。 2.2.4. 快速评价体系建立方法 1) 将含有的PVX-GFP载体的农杆菌菌液注射到本氏烟中。 2) 注射48 h之后利用共聚焦显微镜观察PVX-GFP在本氏烟中的表达情况。 3) 重新注射并在1 d后在注射叶片喷比施壮，3 d后利用UV灯观察注射点周围病毒扩散情况并拍照。 4) 另取一批苗子注射后喷清水作对照，同样利用UV灯观察并拍照，测定病毒扩增直径。 5) 利用半叶法将含有GFP标记病毒的叶片摩擦接种到健康烟苗中喷药并设置清水对照，观察喷药前后荧光斑点大小及数量。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 注射PVX后烟苗的发病症状 为确定注射后PVX是否在云烟中表达，我们在注射1周后观察云烟叶片，PVX在云烟中可产生严重的花叶症状，1周后在非注射叶的叶片中观察到严重的花叶症状，初步证明PVX在云烟中表达成功(图1)。 图1. 云烟上PVX引起的花叶症状 3.2. PVX侵染烟草叶片总RNA的提取及PVX纯度检测 将症状明显的云烟叶片取样，提取RNA，并利用实验室常见其他病毒的引物检测PVX病毒的纯度。经检测RNA OD 260/280 = 1.955，C = 755.89 ng/μL可用于后续实验。图2为利用多种病毒的特异性引物检测注射后PVX纯度，结果可知只有PVX引物产生条带，证明发病叶片是由纯的PVX引起，可用于后续接种。 图2. 几种病毒外壳蛋白特异性引物RT-PCR检测 3.3. 在共聚焦显微镜下观察PVX-GFP的表达情况 在共聚焦显微镜下观察到PVX-GFP在烟草细胞中具有较高的表达量，如图3，而对照组则没有荧光现象发生，因此可知该载体表达情况较好能够用于下一步实验。 图3. 农杆菌介导PVX-GFP在烟草叶片中表达 3.4. 用抗病毒抗性诱导物质处理后注射点周围病斑扩散情况 注射1 d后用比施壮处理叶片，对照利用清水处理，2 d后利用UV光照射并拍照，观察荧光斑扩散情况，并与空白对照做对比，发现经比施壮处理后，病毒扩散斑小于清水对照，见图4。 3.5. 摩擦法接种抗性诱导物质效果分析 烟草摩擦接种携带GFP的病毒，接种后利用比施壮处理，2 d后观察结果(图5)，比施壮处理的植株上病毒荧光斑点与清水处理相比，单斑荧光面积明显小，并且荧光强度明显弱。表明在抗性诱导物质胁迫下病毒复制效率运动扩散能力都有所降低，而第3 d观察后可明显观察到清水处理植株荧光斑点扩大，并且病毒已经移动至植株根部随液流转移至新叶。而抗性诱导物质处理后的叶片荧光斑虽有所扩大，但病毒尚未发生明显转移。 图4. 荧光斑点扩散情况(自左到右依次为清水对照，比施壮处理，空白对照) 图5. 紫外灯照射下的病毒荧光斑点
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user: 4. 讨论 1) 将含有的PVX-GFP载体的农杆菌菌液注射到本氏烟中，在共聚焦显微镜下观察到，PVX-GFP在烟草细胞中具有较高的表达量，而对照组则没有荧光现象发生。 2) 烟草摩擦接种携带GFP的病毒，接种后利用比施壮处理，2 d后观察结果，比施壮处理的植株上病毒荧光斑点与清水处理相比，单斑荧光面积明显小，并且荧光强度明显弱。表明在抗性诱导物质胁迫下，病毒复制效率运动扩散能力都有所降低。植株根部随液流转移至新叶，而抗性诱导物质处理后的叶片荧光斑虽有所增长，但病毒尚未发生明显转移。 3) 植物抗性诱导物质室内筛选过程中，为了更好地明确植物病毒抑制的效果，通常都是用单一的纯病毒来作为研究对象。由于烟草病毒种类繁多，多种病毒复合侵染现象十分严重，导致病毒病症状表现更加复杂，在四川、云南、湖南等烟叶主产区均有相关报道。病毒的复合侵染会对植物症状产生较大影响，甚至能改变发病症状，使我们不能准确记录PVX纯病毒侵染烟苗后的症状，并且两种复合侵染还可能会在植物体中产生协同或拮抗作用，影响病毒在植物体中的传播。为了保证实验结果的可靠性，本实验利用实验室已保存的含有PVX-GFP瞬时表达载体的农杆菌菌液，注射到本氏烟中，利用多种实验室常见病毒特异性引物检测农杆菌注射后病毒纯度，结果表明，我们通过该方法获得了PVX病毒的纯毒源。因此该方法可有效防止病毒毒源在保存或后期接种过程中的交叉感染以及病毒在反复接种传代过程中的致病性变异，确保后续实验结果的准确性。 4) 本试验先利用共聚焦显微镜观察注射后烟苗确定PVX-GFP能够在本氏烟中大量表达，可知该毒源可应用到抗性诱导物质快速评价体系构建的实验中去。该体系能够快速直观地在实验室中观察到抗性诱导物质对病毒扩散过程中的抑制效果，我们利用一般寄主的汁液摩擦法进行实验，结果也再次验证了本方法室内筛选植物抗性诱导元素的可靠性。传统的抗性诱导物质评价系统使用半叶法 [ 5 ]，利用枯斑寄主接种观察，耗时长大约需要7~10天，并且要求必须是病毒的枯斑寄主，而本实验只需3~5天即可，且任何繁殖寄主均可以用来实验。 5) 本试验确立了一种实验室中新的评价体系思路，并为以后建立完善的抗性诱导物质药效评价体系奠定了基础。
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user: 摘要 本试验选用了5种杀虫机制不同的高效低毒药剂进行生菜上甜菜夜蛾的田间药效试验，结果表明：试验所用5种杀虫剂对生菜上的甜菜夜蛾均有一定防效。药后1 d，供试5种药剂的防效均达最高值，都具有速效杀虫性。药后7 d，200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂、10.5%三氟甲吡醚乳油、300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂3种药剂仍表现出较好的持效性，防效仍可达89%以上，且对生菜无不良影响。
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user: 1. 引言 甜菜夜蛾(Laphygma exigua)，又名贪夜蛾，白菜褐夜蛾、玉米夜蛾，属鳞翅目，夜蛾科。全国分布。间歇性爆发、年度间发生数量差异很大。食性杂，寄主范围广泛，涉及35科，108属，138种植物，可为害十字花科、茄科、豆科、葫芦科、菊科、伞形花科、藜科、百合科等200多种蔬菜及其他植物。甜菜夜蛾在华北地区每年7~8月为害较重，北京、山东发生5代，世代重叠。甜菜夜蛾自上世纪80年代中后期，已经由次要害虫逐步上升为主要害虫，遍及全国20个以上省，给农业生产带来严重损失。长期使用单一杀虫剂进行化学防治，导致甜菜夜蛾抗性发展很快，成为我国蔬菜上抗性水平较高的害虫之一 [ 1 ] [ 2 ]。据报道，已经对有机磷、拟除虫菊酯类、氨基甲酸酯类、苯甲酰基脲等多种化学杀虫剂产生了抗性 [ 3 ]。生菜作为通州区主要农作物之一，登记病虫防控药剂太少，选择范围窄，大大制约了生菜产业的发展，本试验选用5种抗虫机制各不相同的杀虫剂，研究其对生菜上甜菜夜蛾的田间防效作用，为农药登记和生菜生产者提供数据参考。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 供试材料 供试药剂：200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂，美国杜邦公司生产；10.5%三氟甲吡醚乳油，日本住友化学株式会社生产；300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂，河南省济源白云实业有限公司生产；物理杀虫矿粉、维大力粉剂，北京中捷四方生物科技股份有限公司生产。五种供试药剂均未在生菜、叶用莴苣上登记。 供试作物：生菜，品种为射手101； 防治对象：甜菜夜蛾。 2.2. 试验地概况 试验安排在北京市通州区于家务乡永盛园内生菜地块，面积2亩，肥力中等。土地平整，土壤肥力中等。 2.3. 天气状况 2019年9月11日施药。9月11日施药当日晴，无风，9月12日至18日平均气温25.8℃，最高气温28℃，最低气温24℃。 2.4. 试验设计 试验设5个药剂处理(见表1)和1个对照处理，每个处理3次重复，按随机区组设置试验小区，每个小区面积20 m 2 。在每个小区采用五点取样调查，每点随机选取2株生菜，每小区共调查10株，调查整株生菜上甜菜夜蛾幼虫数，并做定株标识。 2.5. 试验方法 按照试验设计用量，于2019年9月11日生菜幼苗时期施药一次，施药器械为背负式手动喷雾器，茎叶常规喷雾。试验地除发生甜菜夜蛾危害外，还有甘蓝夜蛾和小菜蛾危害，未使用其他农药处理。喷药前每个小区选择5点，每点选择2株生菜挂牌，调查虫口基数。分别于施药后1 d、3 d、5 d、7 d调查固定生菜上的残虫数量，计算虫口减退率和校正防效。 Table 1 Test reagent and experimental desig 编号 供试药剂 有效成分用量 A 200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂 5 ml/亩 B 10.5%三氟甲吡醚乳油 50 ml/亩 C 300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂 3 g/亩 D 物理杀虫矿粉 500 g/亩 E 维大力粉剂 50 g/亩 F 清水 —— 表1. 供试药剂及试验设计 2.6. 数据分析 数据处理公式如下，采用邓肯新复极差法(DM-RT)，利用spss数据统计软件分析差异显著性。 虫 口 减 退 率 = ( 药 前 基 数 − 药 后 残 活 虫 数 ) / 药 前 基 数 × 100 % (1) 防 治 效 果 = ( 处 理 区 虫 口 减 退 率 − 对 照 区 虫 口 减 退 率 ) / ( 1 − 对 照 区 虫 口 减 退 率 ) × 100 % (2)
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user: 3. 结果与分析 3.1. 对生菜作物安全性 试验期间，所有试验药剂未对生菜生长产生不良影响。 3.2. 对其他虫害的影响 试验期间，通过对药剂处理区的观察，所有试验药剂对生菜上发生的甘蓝夜蛾和小菜蛾均有较好的防治效果，且对作物安全无药害。 3.3. 对生菜甜菜夜蛾的防治效果 药后1 d、3 d、5 d、7 d，对照的虫口减退率在降低，符合自然规律。 防效调查结果如(表2)所示，试验所用5种药剂对生菜上的甜菜夜蛾均有一定防效，但处理间存在一定差异。药后1 d，供试5种药剂的虫口减退率都在60%以上，各个处理的防效均达最高值，其中，200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂和10.5%三氟甲吡醚乳油两种化学药剂防效均为100%，300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂的防效达到了96.31%，与两种化学药剂间的防效无显著差异。物理杀虫矿粉和维大力粉剂处理的防治效果最低，分别为87.07%和67.42%，显著低于其他施药处理(P < 0.05)。 药后3 d，除10.5%三氟甲吡醚乳油外，其余4个处理的防效均有所下降。但200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂和300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂与10.5%三氟甲吡醚乳油之间差异未达显著水平(P < 0.05)。 Table 2 The control effect of different insecticides on Spodoptera exigu 处理 1 d 3 d 5 d 7 d 虫口减退率(%) 防效(%) 虫口减退率(%) 防效(%) 虫口减退率(%) 防效(%) 虫口减退率(%) 防效(%) A 100.00 100.00 ± 0.00a 96.67 97.48 ± 4.36a 89.94 93.36 ± 1.59a 87.37 93.13 ± 1.47a B 100.00 100.00 ± 0.00a 100.00 100.00 ± 0.00a 93.89 95.97 ± 3.54a 87.99 93.47 ± 3.77a C 95.83 96.31 ± 6.39a 92.13 94.05 ± 5.18a 84.26 89.62 ± 5.29ab 80.56 89.42 ± 4.00a D 85.40 87.07 ± 6.03b 77.53 83.01 ± 9.31b 60.35 73.85 ± 15.45b 41.12 67.98 ± 11.31b E 63.21 67.42 ± 5.72c 44.29 57.87 ± 3.90c 9.40 40.25 ± 14.71c −26.79 31.05 ± 12.70c CK −12.90 —— −32.26 —— −51.61 —— −83.87 —— 表2. 不同药剂处理对甜菜夜蛾的防治效果 注：表中同列数据不同字母表示0.05水平差异显著。 药后7 d，各处理药效继续下降。200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂、10.5%三氟甲吡醚乳油、300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂3种药剂仍表现出较好的持效性，药效仍可达89%以上。随着施药时间的延长，物理杀虫矿粉和维大力粉剂施药后3 d、5 d、7 d的防效递减，到施药后7 d时分别降到了67.98%和31.05%，与其他3种药剂的防效也达到了差异显著水平(P < 0.05)。
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user: 4. 讨论与结论 试验结果表明，5种药剂处理均对生菜上甜菜夜蛾有防治效果。从速效性来讲，5种药剂药后1 d均对甜菜夜蛾产生作用，达到较高的防效；从持效性来讲，以200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂、10.5%三氟甲吡醚乳油、300亿PIB/g甜菜夜蛾核型多角体病毒水分散粒剂3种药剂的效果较其他药剂好。 生产上甜菜夜蛾的防治主要依赖化学杀虫剂，长期和频繁地使用杀虫剂使该害虫对多种常规杀虫剂以及新化合物杀虫剂产生了抗药性。本试验选用了5种杀虫机制不同的药剂，其中包括2种化学药剂，3种生物制剂，为寻求甜菜夜蛾快速有效的防治措施，进行田间药效试验，旨在筛选防治效果较好的药剂品种，有效防治甜菜夜蛾，为生产上合理轮换用药提供科学依据。两种化学杀虫剂与目前几种主流杀虫剂的作用机理都不相同，而且不易与已有杀虫剂产生交互抗性。试验结果表明200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂和10.5%三氟甲吡醚都表现出持效性好和耐雨水冲刷的特点，是由于都具有较好的渗透作用，在较短时间内即可渗透到叶肉组织，耐雨水冲刷。甜菜夜蛾核型多角体病毒悬浮剂是昆虫病毒生物杀虫剂，属一类纯天然的微生物农药，对害虫具胃毒作用。甜菜夜蛾取食喷洒后的叶片的同时，一并食入大量病毒包涵体而被感染，病毒在虫体内大量复制增殖，吞噬消耗虫体细胞营养，致使甜菜夜蛾全身化脓而死亡。由于甜菜夜蛾核型多角体病毒在昆虫体内增殖，因此同样具有药效长、耐雨水冲刷等特点，与孙广忠试验中所提防效药后3天为96.1%，5天为90.5%一致 [ 4 ]。物理杀虫矿粉不是农药，是一种食品级的矿产品，属于物理杀虫，颗粒表面有刺，里面有许多空隙，吸水性特强，害虫身体接触后，会被划破表皮，然后体内水分被吸干，在12~72小时左右脱水死亡。并且害虫无耐药性，不会产生免疫力。结果显示防治效果稍差于其他3种药剂，在施药7 d后处理区可见大龄幼虫，可能与甜菜夜蛾体壁较厚有关。另一可能是药剂喷施剂量有待进一步摸索。维大力粉剂中含有独特的植物免疫激活蛋白，通过调节植物叶绿体光合天线蛋白，调控植物体内多种激素信号通路，起到提高作物抗逆能力，促进植物生长发育、提高作物产量及改善品质等作用。虽然维大力粉剂对甜菜夜蛾的防效在所选5种药剂中最低，但是由于其主要通过提高作物光合作用，调节激素平衡，增强作物自身免疫力来提高抗虫能力，且利用维大力对鳞翅目害虫防治本试验为首创，只观察到了药后7 d，要想完全提高作物自身的免疫力，可能需要更长时间的观察，是一个有必要继续探索的抗虫过程。本试验首次将维大力粉剂用来防治生菜上甜菜夜蛾，还需要继续探索的抗虫过程。 供试药剂不同施药量的防治效果和最佳用量有待进一步研究。200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂是现在市场上广泛使用的可有效防治几乎所有重要的鳞翅目害虫杀虫剂，10.5%三氟甲吡醚乳油作为近几年新研发的杀虫剂，可与氯虫苯甲酰胺交替使用，延缓甜菜夜蛾对此两种药剂产生抗性和耐药性。供试生物源药剂甜菜夜蛾核型多角体病毒和维大力粉剂、矿物源药剂物理杀虫矿粉，均具有高效、低毒、低残留和对环境、人畜安全的特点，将来在生菜上登记后可以作为替代药剂进行示范推广，在有效防治虫害、降低农药残留和食品安全方面具有较好的应用前景。
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user: 摘要 页岩气田S区块，随着气藏开发深入，气井出现产量和压力双递减，气体携液能力逐渐下降，表现出不同程度井筒积液特征，严重制约气井连续生产。针对井筒积液问题，先后通过采取气举、泡排、柱塞、增压开采等排水采气工艺，均取得了不同程度增产效果。但各工艺措施适用条件及增产效果不一，因此有必要开展应用评价。
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user: 1. 引言 页岩气是指以吸附或游离状态聚集在暗色泥页岩或高碳泥页岩、以及粉砂质岩类夹层中的一种非常规天然气，储集空间为有机质孔隙及矿物基质孔隙和裂缝。 由于页岩气藏岩性致密，储层渗透率低、孔隙度低，基本无自然产能，为实现页岩气藏高效开发，必须进行长水平井人工水力压裂才能获得较高产能 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]。不同于常规中高渗气井，页岩气井投产初期产能较高，地层压力较高，压裂液能够随着页岩气返排至地面，但周期较短。随着气藏开发深入，页岩气井生产中后期，地层压力和产气量双递减，气体携液能力逐渐下降，当气体流速低于临界携液流速时，井筒积液日益严重，无法有效排液，影响气井连续生产。 针对井筒积液问题，页岩气田S区块自2018年以来先后通过采取气举、泡排、柱塞、增压开采等排水采气工艺，均取得了不同程度增产效果。但各工艺措施适用条件及增产效果不一，因此有必要开展应用评价，优选最适宜该区块的排采工艺，保障气井生产，提高该区块采收率。
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user: 2. 区块概况 2.1. 构造特征 构造主体位于四川盆地川东高陡褶皱带东南部，万县复向斜南扬起端，构造上以北东向为主，构造主体平缓、边缘被大耳山西、吊水岩等断层夹持，为北东走向的断背斜 [ 5 ]。S区块位于构造主体区西南部，为多个构造单元(沿江鞍部、乌江二号断背斜、石门向斜)交汇区，见图1。 图1. S区块构造位置图 2.2. 地层特征 S区块目的层为下志留统龙马溪组，相比主体区北部其埋藏更深压力更高，储层埋深2800~3900 m，地层初期平均静压39.6 MPa (2019年底推算静压18.53 MPa)，但气井无阻流量较低4.0~22.0 × 10 4 m 3 /d，平均无阻流量9.98 × 10 4 m 3 /d。 2.3. 生产特征 S区块于2016年5月23日正式投产，共投产气井25口，分布在5个平台(A/B/C/D/E平台)，同时建有1个脱水站。区块投产初期平均套压21.62 MPa，油压25.92 MPa，最高日产气113.49 × 10 4 m 3 /d，最大开井数22口。截至2019年12月25日，区块累产气6.72 × 10 8 m 3 ，累产水44.06 × 10 4 m 3 ，平均水气比6.56。 从S区块产量变化曲线(图2)来看，生产初期产气量低，随着动液面的降低产气量逐步上升，到达峰值后在长时期内产气量趋于稳定，这与北美典型的“迅速到达产气高峰并随之快速递减”的产气模式 [ 6 ] 有很大区别，但与煤层气井吸附气解吸生产特征相似 [ 7 ] [ 8 ]。 图2. S区块产量变化曲线图 2.4. 气井特征 2018年以来，随着S区块页岩气井全面进入低压低产和措施工艺辅助生产阶段，气井具有典型的“两低两高”特征，即低生产时率(平均34.7%)、低产气(平均1.03万方)、高产水(平均6.55方)、高水气比(平均6.47方/万方)。
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user: 3. 排采工艺应用 3.1. 气举排水采气 气举排水采气工艺是指从地面将高压气源(膜制氮气或天然气)注入井筒中，利用气体能量举升井筒中的液体，使气井恢复生产，适用于弱喷、间歇自喷和水淹的斜井、水平井，排液量高达300 m 3 /d，适宜气藏强排液。 2018年以来，现场根据实际情况，利用井筒采气管柱直接进行气举。由于采取间歇气举，气井在气举过程中排液效果明显，但停止气举后，气井产量很快恢复到措施前，有效期短、措施持续性较差。现场气举措施主要用于停产井复产和辅助排液，取得了一定的排水采气效果。 3.2. 泡沫排水采气 泡沫排水采气工艺是指通过油管或油套环空注入液体泡排剂或通过油管投放固体泡棒，借助气流搅拌作用，使气液充分混合，产生大量较稳定的含水泡沫，减小液体表面张力，进而减少气体滑脱量，使气液混合物密度大大降低，改善产水气井携液生产能力，从而将积液携带至地面，以达到排水采气目的。 泡排工艺适用于低压、产水量不大的弱喷或间歇自喷气井排水，最大排液量100 m 3 /d，最大井深3500 m。不适用于油管下深太浅、油套管互不连通或油管串不严密、水淹停产、水气比较大、矿化度较高等气井。 S区块于2018年3月开始先后挑选共计9口井实施泡排，统计措施前后(1个月内)各项指标发现(见图3)，泡排措施后气井日产气量和生产时率均有所提升，泡排平均日产气增量1.28 × 10 4 m 3 /d，油套压差平均下降1.31 Mpa，排水采气效果较明显。 图3. 泡排井措施前后生产情况对比 但随着措施时间延长，发现9口气井均不同程度泡排效果变差，导致关井(见表1)。由此可见，目前泡沫排水采气工艺尚不能完全满足页岩气水平井排液要求 [ 9 ]。同时，泡排工艺存在环保风险，且输气管道对消泡要求较高。 Table 1 Production statistics of bubble drainage wells in S bloc 井号 B-1 B-2 B-3 B-6 C-1 C-2 C-3 D-4 D-5 泡排时间 6.4~2.9 3.17~2.10 6.4~6.19 6.10~9.13 4.3~12.27 6.23~3.17 5.21~4.4 3.14~4.15 4.24~12.30 累计天数/d 251 178 16 96 269 268 319 398 251 累产气/104 m3 319.27 371.8 26.21 179.98 391.08 793.08 1339.45 474.55 307.12 累产水/m3 2664.31 2668.86 197.91 1396.08 2878.6 3213.06 4332.28 4089.14 2517.7 表1. S区块泡排井生产情况统计 3.3. 柱塞气举排水采气 柱塞气举排水采气工艺是在气井油管中下入合适的柱塞，将柱塞作为气液之间的机械界面，利用气井储层自身能量推动油管内柱塞，将柱塞和液体载荷从井下举升至井口，依靠举升气体于液体之间形成的一个固体界面，有效地防止液体回落以及气体上窜，减少了气液之间的滑脱损失，增加了气井举升效率。 柱塞工艺适用于自身具有一定产能且携液能力较弱的自喷或间喷生产井，要求气井产水量<50 m 3 /d，产气量<3.0 × 10 4 m 3 /d，同时井底具有一定深度的积液，且井底清洁、无钻井液等污物。 S区块于2018年3月开始先后挑选共计13口井实施柱塞，统计措施前后(1个月内)各项指标发现(见图4)，柱塞措施气井后日产气量上升7口，下降6口(2口转泡排，3口转增压)，生产时率有所降低，但8口柱塞井保持连续生产至今(均已超过365 d)，效果较好(见表2)。 图4. 柱塞井措施前后生产情况对比 Table 2 S block plunger well production statistic 井号 A-1 A-2 A-3 A-4 A-5 A-6 B-5 B-6 柱塞日期 2018/8/23 2018/8/29 2018/8/21 2018/11/25 2018/7/6 2018/7/4 2018/6/4 2018/9/17 日产气/10 4 m 3 0.57 1.99 1.98 1.61 1.42 0.56 1.04 1.02 日产水/m 3 6.63 4.25 4.07 3.63 4.17 2.78 6.23 6.02 表2. S区块柱塞井生产情况统计 3.4. 增压开采 增压开采是气田开发后期常用的增产工艺之一，随着气田开发进入中后期，井口压力迅速下降，天然气无法进入外输管网，气井被迫关井，产能无法得到释放。通过增压开采，可有效降低气井井口流动压力，维持气井生产，提高气藏采收率。 S区块仅D平台(6口井)于2019年7月开始实施集气站增压开采，即利用井口压力将天然气输送到集气站集中增压。其主要流程为各井口采出天然气经集气干线输送至集气站，在站内通过除砂器除去固体杂质，再通过卧式分离器出去液体杂质，流量计计量后汇入过滤分离器，最后压缩机增压，空冷器换热后输送到脱水站处理。 统计措施前后(1个月内)各项指标发现(见图5)，增压开采后气井日产气、水量和开井数均明显提升，平均日产气增量5.56 × 10 4 m 3 /d，日产水增量24.61 m 3 /d，排水采气效果较明显，且保持连续生产至今(均已超过180 d)，效果较好。 图5. D集气站增压开采前后生产情况对比