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user: 3. 方法与结果 3.1. 布洛芬体外分析方法的建立 3.1.1. 含量测定 1) 吸收波长 精密称定0.024 g IBU于15 ml容量瓶，加适量无水乙醇溶解并定容至刻度线。以无水乙醇为空白对照，在200~400 nm进行全波长扫描，结果表明，IBU在264 nm处有最大吸收，故确定方法的测定波长为264 nm。 2) 储备液的制备 精密称定0.2030 g IBU于15 mL的容量瓶中，加少量无水乙醇溶解，定容至容量瓶的刻度线作为储备液。 3) 标准曲线的制备 分别精密量取“3.1.1.2”项下储备液0.5、1、2、3、4、5、6 mL于15 mL的容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，得0.0406，0.0812，0.1624，0.2436，0.3248，0.4000，0.4872 mg/l系列浓度对照品溶液，以无水乙醇作为空白对照。在最大吸收波长264 nm测定其吸光度，以吸光度(A)为纵坐标，以IBU对照品浓度(C)为横坐标，得标准曲线方程为：A = 1.4209C − 0.0015 (r = 0.9996)，结果表明IBU在0.0406~0.4872 mg/ml线性关系良好。 4) 重复性实验 精密量取3 ml储备液6份分别置于15 ml容量瓶，无水乙醇定容至刻度线，进样测定。得IBU的相对标准偏差(RSD， relative standard deviation)为0.91%，表明分析方法重现性良好。 5) 精密度实验 精密量取“3.1.1.2”项下储备液0.5、3、6 mL分别置于15 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，配制成3种不同浓度(0.0406、0.2436、0.4872 mg/mL)的布洛芬溶液。在1 d内各浓度样品连续进样3次，得不同浓度日内RSD分别为0.91%，0.35%，0.17%；每天测一次，连续测定5 d，得低、中、高浓度日间RSD分别为1.16%，0.84%，0.41%；结果表明日内RSD和日间RSD良好，符合含量测定要求。 6) 样品含量测定 精密称定IBU固体分散体(相当于药品0.1 g)，置于15 ml的容量瓶中，加适量无水乙醇溶解，并定容至刻度线，在波长264 nm处测定吸光度，根据标准曲线计算其含量。 3.1.2. 体外溶出度测定 根据2015版《中国药典》第四部要求，参照溶出度与释放度测定(通则0931第二法)，精确称取布洛芬65 mg于溶出杯中，以900 ml水为溶出介质，温度为37℃，转速为100 r/min。分别在5、10、15、30、45、60、120 min经0.45 µm微孔滤膜过滤后取样5 ml，同补加等体积的水 [ 5 ]。以水作为空白对照，在布洛芬最大吸收波长处测定吸光度，计算累计溶出百分率。 3.2. 布洛芬固体分散体的制备 3.2.1. 布洛芬物理混合物的制备 按最佳配方比例精密称定药物和载体，充分混合，精细研细后，过80目筛，备用。 3.2.2. 溶剂法 精密称定布洛芬原料药0.1000 g于25 ml的圆底烧瓶中，加入10 ml无水乙醇震荡至溶解完全，缓慢加入处方量的载体PVPP，磁力搅拌一定时间至混合均匀。一定温度下，水浴旋转蒸发混合溶液以除去大量无水乙醇，使其呈粘稠状态，所得产物于40℃烘箱干燥24 h，取出后研细，过80目筛，备用。 1) 考察载体用量 将布洛芬与PVPP (质量比1:1、1:3、1:5)的物理混合物置于圆底烧瓶中，磁力搅拌60 min，旋蒸温度40℃，制备固体分散体。所得产物的累积溶出度结果见图1。 图1. 溶剂法中不同比例的IBU固体分散体溶出曲线图 载体用量对固体分散体的体外溶出有影响。在图1中，同一制备条件下，不同载体用量所制备SD的累积溶出度随载体比例的增加呈上升趋势，其中药物:载体 = 1:5时，2 h即可溶出87.60%，比原料药提高了2.48倍，且相比其他载体比例的SD溶出度的增幅较大。因此，确定布洛芬与PVPP的最佳质量比是1:5。 2) 考察旋转蒸发温度 将布洛芬与PVPP (质量比1:5)的物理混合物置于圆底烧瓶中，磁力搅拌60 min，旋蒸温度分别为40℃、50℃、60℃，制备固体分散体。所得产物的累积溶出结果见图2。 试验发现，旋转蒸发温度是影响固体分散体的体外溶出速率的一个因素。在图2中，在其他制备条件相同的条件下，随旋蒸温度升高，SD的累积溶出度有所降低，结果显示旋蒸温度为40℃制备的SD的效果较好，这可能是由于温度过高，溶剂还未充分分布在载体表面或内部空隙中就被除去，没有很好地提高药物的分散性所致。因此，确定布洛芬与PVPP的最佳旋蒸温度是40℃。 3) 考察磁力搅拌时间 将布洛芬与PVPP (质量比1:5)的物理混合物置于圆底烧瓶中，磁力搅拌时间分别设置为30 min、60 min、90 min，旋蒸温度40℃，制备固体分散体。所得产物的体外溶出结果见图3。 磁力搅拌时间也是固体分散体体外溶出的影响因素之一。在图3中，在其余制备条件相同的条件下，磁力搅拌时间90 min所制备的SD溶出效果最好，搅拌时间每延长30 min，可提高累积溶出度约7%。这是药物和载体充分接触，很好地分布在载体地表面及内部间隙的结果。因此，确定布洛芬与PVPP的最佳磁力搅拌时间是90 min。 图2. 溶剂法中不同旋转蒸发温度的IBU固体分散体溶出曲线图 图3. 溶剂法中不同磁力搅拌时间的IBU固体分散体的溶出曲线图 3.2.3. 熔融法 精密称定布洛芬原料药0.1000 g和处方量的载体PEG6000于25 ml的烧杯中，均匀混合后得到物理混合物。再将烧杯放在水浴锅中，在制备的温度下搅拌一定时间后，迅速放在冰水中骤冷5 min。所得产物于40℃烘箱干燥24 h，取出后研细，过80目筛，备用。 1) 考察载体用量 将布洛芬与PEG6000 (质量比1:1、1:3、1:5)的物理混合物置于烧杯中，按“2.2.3项”制备固体分散体，熔融温度100℃，熔融时间30 min。所得固体分散体体外溶出结果见图4。 图4. 熔融法中不同比例的IBU固体分散体溶出曲线图 由图4结果可知，同一制备条件下制备不同载体比例的SD累积溶出度均高于IBU和相应的PM。这表明，随载体比例的增加，累计体外溶出度呈增长趋势，有利于SD的体外溶出。因此，确定布洛芬与PEG6000的最佳质量比是1:5。 2) 考察熔融时间 将布洛芬与PEG6000 (质量比1:5)的物理混合物置于烧杯中，按“2.2.3项”制备固体分散体，熔融温度100℃，熔融时间分别为15 min，30 min，45 min。所得固体分散体体外溶出结果见图5。 图5. 熔融法中不同熔融时间的IBU固体分散体溶出曲线图 由图5结果可知，在其他条件不变的情况下，熔融时间对固体分散体体外溶出有影响。随熔融时间的延长，产品的累积溶出度有所上升。在熔融时间为15 min时，SD的累积溶出度较低；在熔融时间为30 min和45 min时，SD的累积溶出度随熔融时间增长而上升，但增幅只有0.3%。因此，确定布洛芬与PEG6000的最佳熔融时长是30 min。 3) 考察熔融温度 将布洛芬与PEG6000 (1:5)的物理混合物置于烧杯中，按“2.2.3项”制备固体分散体，熔融温度分别为80℃，90℃，100℃，熔融时间30 min。所得固体分散体体外溶出结果见图6。 图6. 熔融法中不同熔融温度的IBU固体分散体溶出曲线图 由图6结果可知，同一制备条件下，改变熔融温度，所得产品的累积溶出度存在差异。随熔融温度的上升，SD累积溶出度呈增加趋势且增幅较大，当熔融温度达到100℃时，SD的累积溶出度可达81.94%，最大增幅值为17.62%。因此，确定布洛芬与PEG6000的最佳熔融时间为100℃。 3.3. 布洛芬固体分散体的物相鉴别 3.3.1. 差示热扫描分析DSC 图7是布洛芬、布洛芬-PVPP物理混合物和固体分散体的DSC图谱。 布洛芬在77.01℃处存在尖锐的熔化吸热峰；PVPP与布洛芬的物理混合物(PM)在该位置也出现了一 图7. 布洛芬、物理混合物和固体分散体的DSC图谱 个较小的吸热峰，说明物理混合可在一定程度上减少药物结晶的产生，但大部分药物仍以原有晶型存在；而在固体分散体曲线中，布洛芬的吸收峰消失，由此可推出，SD中的原料药已转化为无定形或分子形态。 3.3.2. 粉末X射线衍射分析XRD 图8是布洛芬、布洛芬-PVPP物理混合物和固体分散体的XRD图谱。 布洛芬在6.05，11.74，15.88，16.86，18.59，19.28，21.29˚等位置出现高清晰的狭窄衍射峰，说明IBU以晶体形式存在；物理混合物中布洛芬的特征峰有不同程度的减弱和偏移，说明有部分的布洛芬以非晶体形式存在；在固体分散体中无明显的布洛芬晶体特征衍射峰，说明药物失去了原来的晶型，以无定形或分子形态存在于载体中。 3.3.3. 扫描电子显微镜分析SEM 图9表明，布洛芬大多以规则的棒状结晶存在且形态清晰可见；图10表明，布洛芬-PVPP物理混合物中，仍可见少量游离的药物晶体存在；图11表明，在以PVPP为载体的SD中已无IBU结晶存在，说明药物可能以无定形或分子形态高度分散在固体分散体中，这可能是由于IBU与PVP之间存在的作用力破坏了药物的晶型，也可能是制备SD时，有机溶剂(无水乙醇)在旋蒸过程中被除去，IBU立即被载体包合，抑制了其晶体的生长 [ 3 ]。 图8. 布洛芬、物理混合物和固体分散体的XRD图谱 图9. 布洛芬的SEM结果 图10. 布洛芬-PVPP物理混合物的SEM结果 图11. 布洛芬-PVPP固体分散体的SEM结果