DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 拖延是我们日常生活中的一个普遍现象，指知道自己应该去做一件事，甚至想去做这件事，但却无法在预期的时间范围内激励自己去做这件事(Senécal， Koestner， & Vallerand， 1995)。拖延存在于我们生活中的各个方面，包括学习、工作、家庭等等。学业拖延作为学习领域中的常见现象，近些年来受到社会各领域的广泛关注。学业拖延指总是或几乎总是推迟学业任务，以及总是或几乎总是经历与拖延相关的问题焦虑(Solomon & Rothblum， 1984)。有研究发现学业拖延在中学生、高中生和大学生中十分常见(Ghosh & Roy， 2017; Ziegler & Opdenakker， 2018; Li et al.， 2019)，并且严重的学业拖延会对个体产生一系列的负面影响，如，长期的学业拖延会降低个体的自我效能感，提高个体的孤独感(冯文珍，刘亚平，罗增让，2020)，引发个体焦虑、抑郁等消极情绪(焦卉，郭检生，2020；兰岚，于双双，2018)，严重危害个体的心理健康。相关研究还表明，学业拖延可以降低个体的自尊和幸福感(赖运成，林文倩，2018；尹义力，2019)。因此，揭示个体的学业拖延的影响因素及其心理机制则成为十分有意义的问题。 初中是个体发展的特殊时期，处于青春期的初中生生理和心理上都有很大变化，第二性征的发展、心理的不成熟、自我意识的高涨及繁重的学业使得初中生的心理异常敏感脆弱，并且不愿听从别人意见与建议。学业拖延作为他们学习过程中出现的普遍现象(马春芳，2020；高亚利，2020；黄宏捷，2020)，如果此时不加注意任其发展下去，就有可能使学生永久形成拖延的不良习惯，并对其以后工作产生影响。同时，由学业拖延带来的学习成绩下降使得学生自尊心受挫并产生不良情绪，容易致使学生走向错误的道路，对他们的成长和终身发展都有极大影响。因此，了解拖延的成因及规律，有助于引导学生克服拖延问题，养成良好的学习习惯。 一些研究者从个人特质出发，寻找引起拖延行为的原因，例如自尊、人格、完美主义、自我效能感、自我肯定等(田艳辉，魏婷，2020；Lee， Kelly， & Edwards， 2006)。自我肯定是人格特质中的一个重要方面，指支持自我感知的完整性、整体适应性和道德充分性的行为或认知事件(Steele， 1988)。自我肯定不仅能够缓和受到威胁的自我概念，还能够控制重要结果(Steele， 1988)。研究发现自我肯定除了让人们感觉自己有能力控制重要结果之外，还能帮助人们实现自我控制(Schmeichel & Vohs， 2009)。自我肯定水平较低的个体由于反思与监控能力差，在任务过程中难以集中注意力，不能合理调节自己的行为，因此容易出现学业拖延现象。基于上述研究，有必要对自我肯定与学业拖延的关系进行深入探讨。 学业自我效能感是指个体相信自己能够在指定的水平上成功地完成给定的学业任务(Schunk， 1991)。已有研究证实，自我肯定和学业自我效能感二者之间存在密切的关系(刘磊，2012)。国外也有相关研究证实与非自我肯定的个体相比，自我肯定的参与者所报告的自我效能感水平更高(Jessop， Simmonds， & Sparks， 2009; Sherman， Nelson， & Steele， 2000)。其次，学业自我效能感是影响学业拖延的另外一个重要因素。实证研究表明，学业自我效能感与学业拖延呈显著负相关，学业自我效能感负向预测学业拖延(Ge & Li， 2018; Ziegler & Opdenakker， 2018; Przepiorka， Blachnio， & Siu， 2019)，对学业自我效能感进行干预可以有效减少学业拖延现象(Krispenz， Gort， Schultke， & Dickhauser， 2019)。学业自我效能感高的学生在学习中更多地使用有效的认知策略，更有效地管理自己的时间和学习环境，更善于监控和调节自己的努力，以按时完成目标，避免拖延(Chemers， Hu， & Garcia， 2001)。因此，本研究假设学业自我效能感在自我肯定与学业拖延的关系中起中介作用。 综上所述，本研究假设：自我肯定可能对学业拖延行为产生负向影响(H1)；自我肯定可能通过学业自我效能感的中介作用间接影响学业拖延行为(H2)。
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user: 2. 方法 2.1. 研究对象 采用随机取样方法，在河南省某所中学选取478名学生作为施测对象。剔除无效问卷后，获得有效问卷为471份，有效回收率为98.5%。其中，男生251人，女生220人，年龄为14.11 ± 0.87岁；初一学生157人，初二学生106人，初三学生208人。 2.2. 研究工具 2.2.1. 学业拖延 采用左艳梅(2010)编制的中学生学业拖延问卷。该问卷共17个题目，包括延迟计划、延迟执行、延迟补救、延迟总结四个维度。采用里克特5点计分法，1表示“完全不符合”，5表示“完全符合”，其中部分题项采用反向计分，得分越高表明个体的拖延水平越高。该量表具有良好的信效度，本研究中Cronbach’s α系数为0.94。 2.2.2. 学业自我效能感 采用梁宇颂(2000)编制的学业自我效能感量表。该量表共22个题目，包括学习能力效能感和学习行为效能感两个维度。采用里克特5点计分法，1表示“完全不符合”，5表示“完全符合”，其中部分题项采用反向计分，得分越高表明个体的自我效能感水平越高。该量表具有良好的信效度，本研究中Cronbach’s α系数为0.92。 2.2.3. 自我肯定 采用李虹和梅锦荣(2002)修订的一般健康问卷GHQ-20中的自我肯定量表。该量表共9个题目，采用“是–否”计分方法，选“是”得1分，选“否”得0分，其中部分题项采用反向计分，得分越高表明个体的自我肯定水平越高。该量表具有良好的信效度，本研究中Cronbach’s α系数为0.75。 2.3. 数据处理 使用SPSS26.0软件对各量表数据进行统计分析，使用Hayes (2013)建立的SPSS宏程序PROCESS进行中介效应检验。
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user: 3. 结果 3.1. 共同方法偏差检验 采用Harman单因素检验法对三个问卷的所有题目进行探索性因素分析，结果显示抽取特征根大于1的公因子数有7个，且第一个因子解释的变异量为36.89%，小于临界值40%，说明本研究不存在严重的共同方法偏差。 3.2. 学业拖延、自我肯定、学业自我效能感的描述统计及相关分析 各变量的描述统计和相关分析结果如表1所示，初中生学业拖延及各维度与学业自我效能感及各维度存在显著负相关；与自我肯定存在显著负相关；学业自我效能感及其各维度与自我肯定存在显著正相关。 Table 1 The descriptive statistics and correlation analysis of academic procrastination， academic self-efficacy and self-affirmatio M SD 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1延迟计划 12.75 4.03 1 2延迟执行 10.87 3.99 0.70 ** 1 3延迟补救 9.16 3.42 0.72 ** 0.74 ** 1 4延迟总结 7.47 2.61 0.74 ** 0.71 ** 0.76 ** 1 5学业拖延 40.26 12.52 0.90 ** 0.89 ** 0.90 ** 0.88 ** 1 6能力效能感 38.62 8.07 –0.64 ** 0.61 ** –0.71 ** –0.69 ** –0.74 ** 1 7行为效能感 37.62 6.45 –0.73 ** –0.70 ** –0.74 ** –0.71 ** –0.81 ** 0.78 ** 1 8学业效能感 76.24 13.53 –0.72 ** –0.69 ** –0.77 ** –0.74 ** –0.82 ** 0.95 ** 0.94 ** 1 9自我肯定 6.37 2.30 –0.40 ** –0.40 ** –0.32 ** –0.43 ** –0.43 ** 0.44 ** 0.43 ** 0.46 ** 1 表1. 学业拖延、学业自我效能感、自我肯定的描述统计及相关分析 注： * ：p < 0.05； ** ：p < 0.01； *** ：p < 0.001，下同。 3.3. 学业自我效能感在自我肯定与学业拖延之间的中介作用 首先将模型中各变量进行标准化处理，然后参考温忠麟等人(温忠麟，侯杰泰，张雷，2005)的中介模型检验程序，对学业自我效能感在自我肯定与学业拖延之间的中介效应进行检验。回归分析结果如表2所示，自我肯定能显著负向预测学业拖延、正向预测学业自我效能感；当自我肯定和学业自我效能感同时进入回归方程时，二者均能显著负向预测学业拖延，且自我肯定对学业拖延的预测作用变小，表明学业自我效能感在自我肯定与学业拖延间起部分中介作用，中介效应占总效应的81.63%。 Table 2 Regression analysis of academic procrastination， academic self-efficacy and self-affirmation among junior high school student 回归方程 整体拟合指数 回归系数显著性 结果变量 预测变量 R R 2 F β t 学业拖延 自我肯定 0.43 0.19 109.07 –0.43 –10.44 *** 学业自我效能感 自我肯定 0.45 0.20 119.78 0.45 10.94 *** 学业拖延 学业自我效能感 0.82 0.68 487.92 –0.78 –26.52 *** 自我肯定 –0.08 –2.77 ** 表2. 初中生学业拖延与学业自我效能感、自我肯定的回归分析表 图1. 学业自我效能感的中介作用模型 采用Bootstrap法对中介效应的结果进行检验，抽取5000个样本对学业自我效能感中介效应的95%置信区间进行估计，结果如表3和图1所示。学业自我效能感在自我肯定与学业拖延间的间接效应的Boot标准误为0.18，其Bootstrap95%置信区间为[–2.27， –1.57]，不包含0，表明学业自我效能感在自我肯定与学业拖延间的中介效应显著。 Table 3 The mediating effect of academic self-efficacy on self-affirmation and academic procrastinatio 效应值 Boot标准误 Boot CI下限 Boot CI上限 相对中介效应 直接效应 –0.44 0.16 –0.76 –0.13 18.34% 间接效应 –1.92 0.18 –2.27 –1.57 81.36% 表3. 学业自我效能感在自我肯定与学业拖延间的中介效应
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user: 4. 讨论 4.1. 初中生自我肯定与学业拖延的关系 本研究发现自我肯定能够负向预测学业拖延行为。自我肯定理论认为人们有维持自我完整性的动机(Cohen & Sherman， 2014)，而自我完整性是指个体相信自己是胜任的和有效的(Cohen， Garcia， Apfel， & Master， 2006; Taylor， Lerner， Sherman， Sage， & McDowell， 2003)。根据自我决定理论，高自我肯定水平的个体更易将成功归因于自己的能力、努力，而非运气、环境等外在因素，因此他们对自身的学习能力充满信心，即使遇到困难也不退缩，相信自己能够克服困难，能够坚持学习行为，避免拖延行为。自我一致性理论认为对自己有积极认知的个体更容易察觉到自身行为和自我期望之间的差异(Stone & Cooper， 2003)，当他们意识到自己的消极行为所产生的结果与自我期望不一致时，就会想方设法改变行为，获得积极结果，因此为了实现高学业目标很少出现拖延行为。自我肯定的个体还培养了一种以威胁而不是逃避为取向的态度，如果威胁被视为重要且可解决的，他们更倾向于以一种建设性的方式处理威胁，而不是花精力在回避、抑制。此外，有拖延行为的个体通常都受担心失败的情绪困扰，这些情绪困扰最终源自不合理的信念，而自我肯定作为一种积极合理信念，相应地可以减少拖延行为(姚军，王坚，2015)。 4.2. 学业自我效能感的中介作用 本研究还考察了自我肯定对学业拖延的作用过程，通过中介效应检验发现，自我肯定不仅能够直接负向影响学业拖延，还可以通过学业自我效能感的中介作用对学业拖延产生间接影响。高自我肯定的个体往往具有较高的内部动机，他们执行某种行为或许是为了心理上的愉悦和满足。当个体更充分地内在化一种行为时，就会获得更大的自主性，当他们出于自主的原因参与一项活动时，可能会表现出更大的主动性和持久性，并且体验到普遍的积极情绪和态度，比如兴趣和享受。而研究发现积极的态度又可以增强学业自我效能感(Evashwick， Rowe， Diehr， & Branch， 1984; Motl， McAuley， Wynn， Sandroff， & Suh， 2013)。高学业效能感的个体更有兴趣从事某种学业活动，在学习过程中会更加主动地寻找解决问题的方式，采用积极的加工方式处理外界信息，面对失败时不退缩，尽管经历了挫折，他们仍会保持高水平的努力，从而减少拖延行为，形成良性循环，这与Wu和Fan (2017)的研究结果一致。此外，研究发现，拖延的动机来自于对相关过程的消极认知(Zhang & Feng， 2020)，而自我肯定可以增加积极的行为特异性认知(如自我效能感、对行为的态度、行为意向) (Lee， 2016)，学业自我效能感作为一种积极的高水平的心理加工方式，能监督、调节、控制自己的行为，减少拖延行为的发生。由此可见，学业自我效能感在减少学业拖延行为中起着积极的作用，是自我肯定与学业拖延之间的“中转站”。
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user: 5. 教育启示 根据青少年这一阶段生理心理发展特点，树立正确的人生价值观、形成良好的学习习惯尤为重要，但是随着课业压力的增加，不可避免地出现拖延现象，如果教育者能及时发现，给予心理教育、减压减负等活动，帮助学生减少拖延行为，形成良好学习习惯，将会对学生未来身心发展产生极大效益。本研究发现自我肯定和学业自我效能感在减少学业拖延方面起到积极作用，一方面自我肯定可以直接负向预测学业拖延，另一方面自我肯定可以通过学业自我效能感的中介作用对学业拖延产生间接影响，这为我国初中生的教育提供一些启示。 5.1. 培养学生的自我肯定能力 自我肯定即肯定学生无关威胁领域的地方，帮助学生认识到自我价值。对于勤奋努力却成绩一般的学生，应肯定其坚持不懈、积极向上的精神；对于成绩差的学生，应肯定其永不言弃、积极乐观的心态；对于性格内向的学生，应肯定其沉稳内敛、细致专注的品质；对于过于活跃的学生，应肯定其活泼开朗、灵活变通等特质，引导这类学生积极参加课外活动，为班级荣誉做贡献。这样，当威胁领域(如学业拖延)出现时，学生能够充分发挥自身价值，维持自我的完整性，直面威胁并做出适应性的行为。 5.2. 增强学生的自我效能感 学生自我效能感的培养具体来说有六种途径：1) 外部强化；2) 自我强化；3) 体验成功；4) 树立榜样；5) 正确归因；6) 创宽适环境(姜开真，2012)。在学习教育过程中，教育者要根据学生的个体差异制定合适的学习目标，让成绩差的学生也能体验到完成学习任务的成就感，同时发挥榜样的示范作用，让学生在观察学习中受到感染和鼓励。这样，当拖延行为出现时，根据以往自我经验和他人经验，学生认识到自己有能力战胜拖延，完成学习任务。此外，教育者应及时发现并详细了解拖延的原因，尽量将拖延归于写作业慢、学习方法不对等外部可控因素，同时给予学生真诚的关怀和鼓励，以积极的情绪感染学生，让学生相信自己有能力独立解决问题、完成任务。
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user: 6. 结论 1) 初中生自我肯定可以负向预测学业拖延。 2) 初中生学业自我效能感在自我肯定与学业拖延之间具有部分中介作用。
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user: 摘要 目的：建立安眠药中非法添加艾司唑仑的表面增强拉曼光谱分析方法。方法：利用正交实验确定最佳检出条件，结合拉曼图谱对艾司唑仑的特征峰进行分析，建立艾司唑仑快速检测的定性定量识别模型。结论：以艾司唑仑683 cm −1 处的特征峰强度建立标准曲线方程，检出限为0.1 μg∙mL −1 。本方法的简便操作和较低成本为现场快速检验安眠药中艾司唑仑非法添加成分提供了新方法。
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user: 1. 引言 随着生活节奏的加快，焦虑和失眠问题逐渐成为导致人类亚健康状态的一大重要因素。作为安眠类保健品的重要组成部分，艾司唑仑因其易产生依赖，且有较强的反弹效应并且可能对记忆产生一定损害而被列入国家管制药物。近年来，一些不法商贩利用此类保健品成分复杂、牟利空间大、质量标准不明确及监管措施待完善等现象，在其中非法添加镇静催眠化学药物，严重危害消费者身体健康，因此建立一种快速检测安眠药中非法添加的方法，对打击此类违法犯罪行为、保护人民身心健康具有重要作用 [ 1 ]。目前常采用的检测保健品中的非法添加的方法有GC-MS [ 2 ]，LC-MS [ 3 ] 等。这些方法普遍存在检测周期长，检测过程繁琐等问题。因此建立一种灵敏度高且快速准确的检测方法势在必行。 表面增强拉曼光谱(Surface Enhanced Raman Spectroscopy， SERS)是一种将检材吸附在纳米材料表面以增强拉曼信号的新型光谱技术。多年来SERS在食品安全、生物医学、痕量毒品、环境污染等多个方面 [ 4 ] 都有着广泛应用。表面增强拉曼光谱法检测方便捷、对样品损害较小，适合进行现场快速检测。本研究以艾司唑仑为例，利用纳米银表面增强拉曼光谱技术进行研究。设计试验优化表面增强拉曼光谱法的检测条件，建立了一种较为准确的检测艾司唑仑残留的定量检测方法，并使用该方法为检测绿茶中艾司唑仑残留提供了思路。
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user: 2. 实验部分 2.1. 实验仪器与试剂 本实验所用主要仪器见表1。 Table 1 The main instrument 仪器名称 生产厂家 SSR-3010简智仪器便携式拉曼光谱分析仪 南京简智仪器设备有限公司 85-2型磁力搅拌器 上海司乐仪器有限公司 HG202A-2电热鼓风干燥箱 南京金恒实验仪器厂 JEM-2100(HR)高分辨透射电子显微镜 日本电子株式会社 FA1104N电子天平 上海精密仪器有限公司 Fresco21台式高速冷冻离心机 THERMO FISHER公司 超声波清洗器 上海金棋实业公司 Milli-Q Intergral 5纯水机 Millipore公司 移液枪 北京大龙医疗设备有限公司 表1. 主要仪器 本实验所用主要试剂见表2。 Table 2 Main reagent 试剂名称 纯度 生产厂家 艾司唑仑 99.9% 中国食品药品检定研究院 硝酸银 分析纯，含量 ≥ 99.8% 国药集团化学试剂有限公司 柠檬酸三钠 分析纯，含量 ≥ 99.0% 南京化学试剂厂 盐酸 优级纯 国药集团化学试剂有限公司 表2. 主要试剂 2.2. 实验内容 2.2.1. 纳米银的合成与表征 利用柠檬酸三钠还原合成纳米银，具体步骤为：将一个400 mL的洁净烧杯放入一块干净的磁石；在烧杯中加入194 mL去离子水，移至磁力加热搅拌器上加热至沸腾；打开磁力搅拌器，调整转速至470 r/min，同时加入3.4 mL 1%的硝酸银溶液和4 mL 1%的柠檬酸钠溶液，继续加热搅拌1 h。加热过程中，溶液由无色透明变为浅黄色继而变成亮桔色最后变为深灰绿色；移去热源，调整搅拌速度为450 r/min，自然冷却至室温。将纳米银溶液装入2 mL离心管中，2000 r/min条件下离心8分钟，取上层清液，6000 r/min条件下离心15分钟后，取下层沉淀，用去离子水定容至1 mL，混合后避光冷藏 [ 5 ] [ 6 ]。 用透射电镜对制备的纳米银进行表征，把制备的纳米银样品分别滴在预先覆盖Formvar膜的铜网上，等待干燥后采用透射电子显微镜，在75 kV加速电压下，观察样品的形态和粒径。 2.2.2. 拉曼光谱检测条件优化 采用正交设计研究纳米银的量，样品量、盐酸量和反应时间对测定拉曼光谱的影响(以艾司唑仑为样品) [ 7 ]。实验共设上述3个因素，每个因素设立4个水平，进9次试验，每个试验进行两次平行实验。设计方案表3。 Table 3 Orthogonal design experimen 序号 纳米银量/μL 样品量/μL 盐酸量/μL 反应时间/min 1 100 50 10 0 2 100 100 20 1 3 100 200 50 5 4 200 50 20 5 5 200 100 50 0 6 200 200 10 1 7 300 50 50 1 8 300 100 10 5 9 300 200 20 0 表3. 正交设计试验 2.2.3. 表面增强拉曼光谱定量方法的建立 对不同浓度的艾司唑仑溶液(0.05 μg∙mL −1 ， 0.09 μg∙mL −1 ， 0.10 μg∙mL −1 ， 0.12 μg∙mL −1 ， 0.15 μg∙mL −1 ， 0.25 μg∙mL −1 ， 2.5 μg∙mL −1 ， 5 μg∙mL −1 ， 10.00 μg∙mL −1 )，在选定最佳检测条件下进行快速检测，建立定量检测模型，每个浓度的样品进行三次平行实验，提高检测准确性。
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user: 3. 结果与讨论 3.1. 纳米银的合成与表征 A1、A2为按照2.2.1中所述方法制备的纳米银做的2次平行实验，由图1，图2可知，纳米银主要呈球状，大部分粒径为50~80 nm，也存在少量棒状纳米银，可能与加热时常以及搅拌转速有关，因此需要严格控制加热温度250℃，转速450 rpm，才能控制合成纳米银的颗粒度和形态。 图1. A1合成纳米银的结果 图2. A2合成纳米银的结果 3.2. 拉曼光谱检测条件的优化 3.2.1. 正交实验结果 按照2.2.2中所述试验条件，测定艾司唑仑的拉曼光谱，做2次平行实验，实验结果见图3。 图3. 正交实验的拉曼光谱 以艾司唑仑的表面增强拉曼光谱特征峰作为鉴定标准，根据图3，艾司唑仑主要拉曼位移位于683 cm −1 ，778 cm −1 ，996 cm −1 ，1173 cm −1 ，1591 cm −1 处，特征峰所在位置会因为红移或蓝移发生细微的变动，大体位置不变，因此，选择以上五个峰为特征峰 [ 8 ]。本研究选定683 cm −1 处的峰作为后续实验的特征峰。 由两次平行实验结果可以看出，实验九的条件(即纳米银用量为300 μL，艾司唑仑用量为200 μL，盐酸用量为20 μL，反应时间为0)为最佳条件，但分析实验九数据可知，该条件下艾司唑仑的拉曼峰强度呈上升趋势。 3.2.2. 纳米银用量对拉曼光谱的影响 从图3看出，其他条件不变，艾司唑仑的表面增强效果随纳米银用量的增加而提高。在本研究中，纳米银是艾司唑仑产生表面增强拉曼效应的基础。因此，需要设计实验进一步考察纳米银的加入量对拉曼强度的影响。保持实验九其余条件不变(样品量200 μL，盐酸20 μL，反应时间0)增加纳米银用量，继续探究，比较加入300 μL至600 μL纳米银时，683 cm −1 处拉曼强度，结果见图4。 从图4可以看出，在纳米银加入量为300 μL~500 μL时，683 cm −1 处拉曼强度随着纳米银加入量的增大而增大，在纳米银加入量为500 μL~600 μL时，683 cm −1 处拉曼强度随着纳米银加入量的增大而减小。且在纳米银加入量为500 μL时，683 cm −1 处拉曼强度最高。因此，后续实验的分析都建立在纳米银加入量500 μL的基础上进行。 3.3. 定量方法的建立 对含不同浓度艾司唑仑(0.05 μg∙mL −1 ， 0.09 μg∙mL −1 ， 0.10 μg∙mL −1 ， 0.12 μg∙mL −1 ， 0.15 μg∙mL −1 ， 0.25 μg∙mL −1 ， 2.5 μg∙mL −1 ， 5 μg∙mL −1 ， 10.00 μg∙mL −1 )样本的表面增强拉曼光谱进行定量分析，以683 cm −1 拉曼位移处的特征峰强度为依据，绘制不同浓度艾司唑仑在683cm −1 处拉曼强度的曲线，见图5。可见，随着艾司唑仑浓度的增加，683 cm −1 拉曼位移处的特征峰峰强先增加后出现下降趋势。 图4. 纳米银加入量对683 cm −1 处拉曼强度的变化趋势图 图5. 特征峰拉曼强度随浓度变化曲线 由图5可知，艾司唑仑浓度在0.1 μg∙mL −1 ~0.25 μg∙mL −1 时，683 cm −1 处拉曼强度基本呈线性关系，跟据检测数据做出线性回归曲线，见图6，得到方程y = 2.1 × 10 5 x − 12580，决定系数R 2 为0.98197。 在最优条件下，检测不同浓度艾司唑仑溶液的拉曼光谱，见图7。对比图7中两个拉曼光谱，可以发现当艾司唑仑溶液的浓度降至0.1 μg∙mL −1 时，683 cm −1 ，778 cm −1 ，996 cm −1 ，1173 cm −1 ，1591 cm −1 处仍有特征峰存在，因此判定此方法的检出限为0.1 μg∙mL −1 。 为提升该方法的准确性，继续进行对含不同浓度艾司唑仑(0.10 μg∙mL −1 ， 0.11 μg∙mL −1 ， 0.12 μg∙mL −1 ， 0.13 μg∙mL −1 ， 0.15 μg∙mL −1 )的样本的回收率实验，结果见表4。根据表中数据，该方法测得的样本回收率均在95%~105%之间。由此可见，基于本方法快速检测样品中艾司唑仑具有可行性，在现场检测中有较好的应用前景。 图6. 线性回归曲线 图7. 检出限的确定 Table 4 The experimental results of the recovery rat 实际值/μg∙mL −1 拉曼强度1 拉曼强度2 拉曼强度均值 预测值/μg∙mL −1 回收率 0.10 7555 9211 8383 0.098 98% 0.11 10817 12893 11855 0.115 105% 0.12 12068 13934 13001 0.121 101% 0.13 15446 15616 15531 0.133 102% 0.15 19260 18824 19042 0.149 99% 表4. 回收率实验结果 3.4. 检测方法应用 在石英瓶中依次添加500 μL纳米银，200 μL含艾司唑仑的绿茶和20 μL 2:7盐酸溶液，振荡混合，进行拉曼光谱采集。得到图8，其683 cm −1 处的拉曼强度为9860，y = 212064.9x − 12580计算出绿茶中艾司唑仑浓度为0.106 μg∙mL −1 。 图8. 绿茶中表面增强拉曼检测结果
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user: 4. 结论 本实验初步建立了一种基于纳米银表面增强拉曼光谱法快速检测茶水中的艾司唑仑的方法。实验结果得到：当纳米银加入量为500 μL，盐酸溶液加入量为20 μL，迅速与样品反应时拉曼光谱的增强效果最好。在此基础上建立定性定量检测模型，拉曼位移683 cm −1 处的特征峰拉曼强度与艾司唑仑浓度建立的曲线方程呈现良好线性关系，其线性方程y = 2.1 × 10 5 x − 12580，决定系数(R 2 )为0.98197，检出限为0.1 μg∙mL −1 ，且回收率均在95%~105%之间。本方法操作简便且成本较低，检测准确率较高，可行性较好。因此，应用纳米银表面增强拉曼技术快速检测艾司唑仑有较好的应用前景。
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user: 摘要 评定电感耦合等离子质谱法测定草鱼中20种元素的不确定度。根据实验过程中变量因素并结合JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》的有关规定，分析影响各元素结果的不确定度因素，结合分析样品称量、样品消解、溶液制备、工作曲线拟合、测量重复性等因素对不确定度分量的影响建立模型，并对不确定度进行了评估。各元素的相对扩展不确定度在0.011~0.213 mg/kg之间，满足正常的工作需求。不确定度主要来源于标准曲线拟合和样品重复性测定两方面。
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user: 1. 引言 水产品有着丰富的营养价值和良好的口感，深受人们的喜爱。然而重金属是典型的累积性污染物，近年来重金属污染使河流水体遭到破坏 [ 1 ] [ 2 ]，重金属污染具有持久性，被水产动物摄食后，经食物链逐级传递、富集，可与有机物结合成毒性更大的化合物危害人体健康 [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]，逐步引起食品安全监管部门的高度重视。随着对水产品需求与日俱增，如何快速准确的检测水产品中的各种无机元素含量，降低食用风险逐步提上日程 [ 7 ]。 世界各国及各级组织的法规均制定金属元素的限量标准，我国国家标准GB 4764-2016和中国药典2015均严格限定了食品和药品中重金属元素的最大浓度 [ 8 ]。 目前，水产品金属元素的测定主要包括原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法、原子荧光光谱法和电感耦合等离子体质谱法。电感耦合等离子体质谱法所拥有的高灵敏度、低检出限以及多元素的快速分析功能，完全可以取代其他无机元素分析技术，已成为痕量元的最有效手段 [ 9 ]。 本文依据JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》 [ 10 ] 和CNAL/AG06 2003《测量不确定度政策实施指南》 [ 11 ]，按照GB 5009.268-2016《食品安全国家标准食品中多元素的测定》 [ 12 ] 规定的方法，建立电感耦合等离子质谱法对鲜草鱼肉中钠、镁、铝、钾、钙、钛、铬、锰、铁、钴、镍、铜、锌、砷、锶、镉、锡、锑、钡和铅等元素的含量的不确定度评定方法 [ 13 ] - [ 19 ]，为开展食品中多种元素的同时测定奠定了基础，以期进一步优化检测方法、提高实验室检测水平和出具准确公正的检测报告提供依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料与仪器 草鱼：本地农贸市场。 钠、镁、铝、钾、钙、钛、铬、锰、铁、钴、镍、铜、锌、砷、锶、镉、锡、锑、钡和铅元素标准溶液(1000 µg/mL，国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院)，测定元素时内标元素分别是72Ge：Na，Mg，Al，K，Fe； 115 In：Co，Ni，Cu，Zn，As，Sr，Cd，Sn，Sb，Ba；209Bi：Hg，Tl，Pb。其中铅的计算采用元素干扰校正方程： 208 Pb = 206 + 207 + 208；硝酸(优级纯，德国默克集团)。 Milli-Q超纯水仪(德国默克集团)；Bruker 820-MS ICP-MS(德国Bruker集团)；CEM微波消解仪(美国CEM公司)。 2.2. 实验方法 2.2.1. 仪器工作条件 等离子体气流速：16.5 L/min；载气流速：l.8 L/min；射频功率：1400 W；雾化室温度：2℃；采样深度：8.0 mm；测点数：3；扫描时间：0.85 s；重复次数：3；氦气碰撞，截取锥气体流量：115 mL/min。 2.2.2. 标准溶液制备 精密吸取适量各元素标准溶液至100 mL容量瓶，用2%硝酸溶液定容，各元素浓度如GB 5009.268表A.1。 2.2.3. 内标溶液制备 精密量取浓度10 µg/mL的混合内标标准溶液1 mL，2%硝酸溶液定容至100 mL，得到100 µg/L的混合内标溶液。 2.2.4. 供试样品溶液制备 取鱼肉匀浆，聚四氟乙烯微波消解罐称取约1.0 g，加硝酸10.0 mL，浸泡过夜。置微波消解仪内，设置微波消解程序升温程序，升温10分钟至120℃保持10分钟，升温至150℃保持10分钟，升温至180℃保持30分钟。消解程序结束待冷却完成后，取出消解罐，置赶酸仪内，100℃赶酸60分钟。将赶完酸的消解液转移至100 mL容量瓶中，超纯水定容至刻度，摇匀。同时制备样品试剂空白溶液及样品加标溶液。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 工作曲线绘制 以仪器信号值与标液浓度建立线性回归方程，各种元素的工作曲线线性关系良好，相关系数均在0.999以上。 Na： c / s = 1248.0 + 595.7 + 35280 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； Mg： c / s = 63.0 + 1298 + 17830 × 浓 度 ， r = 0.99995 ； Al： c / s = 8673.7 + 59270 + 1037000 × 浓 度 ， r = 0.99977 ； K： c / s = 5043.0 + 2309 + 12950 × 浓 度 ， r = 0.99986 ； Ca： c / s = 2270.3 + 5553 + 40530 × 浓 度 ， r = 0.99992 ； Ti： c / s = 20.0 + 48.90 + 126.0 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； Cr： c / s = 634.3 − 111.2 + 3005 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； Mn： c / s = 2045.3 + 7357 + 2739 × 浓 度 ， r = 0.99993 ； Fe： c / s = 1366.7 + 1249 + 75200 × 浓 度 ， r = 0.99996 ； Co： c / s = 5.7 + 58.84 + 4371 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； Ni： c / s = 1471.0 − 104.0 + 1034 × 浓 度 ， r = 0.99994 ； Cu： c / s = 211.0 + 411.6 + 12.9 × 浓 度 ， r = 0.99995 ； Zn： c / s = 930.0 − 434.5 + 352.8 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； As： c / s = 70.0 + 4.762 + 246.0 × 浓 度 ， r = 0.99999 ； Sr： c / s = 320.0 + 3857 + 2188 × 浓 度 ， r = 0.99996 ； Cd： c / s = 155.2 + 177.8 + 1170 × 浓 度 ， r = 0.99998 ； Sn： c / s = 105.3 + 46.13 + 1395 × 浓 度 ， r = 0.99968 ； Sb： c / s = 18.7 − 46.75 + 1156 × 浓 度 ， r = 0.99983 ； Ba： c / s = 1376.7 − 942.2 + 565.4 × 浓 度 ， r = 0.99996 ； Pb： c / s = 4679.0 − 2352 + 11210 × 浓 度 ， r = 0.99990 ； 3.2. 仪器精密度 取最高点标准溶液，连续进样6次，各元素RSD分别介于0.4233%～0.5468%之间，均小于2％，说明仪器精密度良好。 3.3. 样品重复性及回收率 取草鱼样品6份，各约1.0 g，3份样品加标，按“1.3.4”项前处理，上机进行测定，由各元素工作曲线计算出含量。Na：376 mg/kg；镁：371mg/kg；铝：<2 mg/kg；钾：5198 mg/kg；钙：1162 mg/kg；钛：0.259 mg/kg；铬：<0.2 mg/kg；锰：0.839 mg/kg；铁：26.3 mg/kg；钴：0.0153 mg/kg；镍：0.536 mg/kg；铜：0.265 mg/kg；锌：5.28 mg/kg；砷：0.112 mg/kg；锶：2.06 mg/kg；镉：0.108 mg/kg；锡：<0.03 mg/kg；锑：<0.03 mg/kg；钡：0.604 mg/kg；铅：0.106 mg/kg。各元素回收率在73%~118%之间。
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user: 5. 讨论 使用ICP-MS法测定草鱼中多种无机元素含量时，不确定度来源主要为样品消解、标准溶液配制和工作曲线拟合。样品消解过程较为复杂，主要是待测元素损失和样品污染，设置合理的消解升温程序使样品消解完全，赶酸时尽量减少待测元素损失，消解过程中使用的聚四氟乙烯消解管尽可能保持清洁，可以有效提高样品回收率。标准溶液配制过程中，尽量减少稀释步骤，使用计量检定合格的容器，熟练掌握移取的操作步骤，可以降低标准溶液配制带来的不确定度。仪器状态稳定时开始测定工作曲线和绘制标准工作曲线时选择适当的浓度范围可降低工作曲线拟合产生的不确定度。
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user: 摘要 以牛肉、豆瓣酱、芝麻、花生及美拉德风味肽为主要原料，枸杞、香叶、八角、辣椒等为辅料，开发一种风味层次丰富且氧化稳定性较高的牛肉芝麻酱。以感官质量作为评价指标，通过单因素试验，确定了芝麻、豆瓣酱、美拉德风味肽、复合香料、牛肉及枸杞的添加量。在此基础上，采用四因素三水平L 9 (3 4 )正交试验，优化了产品的最佳配方，其结果为：豆瓣酱35%，芝麻8%，花生5.75%，复合香料3%，美拉德风味肽0.4%，牛肉10%，枸杞1.05%。当美拉德风味肽添加量为0.4%时，芝麻酱在110℃下的氧化诱导时间从8.7 h升高至14.8 h，提高了6.1 h，添加美拉德风味肽可以显著提高产品的氧化稳定性。本研究结果将为美拉德风味肽在芝麻酱的产业化开发中的应用提供技术支持。
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user: 1. 引言 芝麻，又名脂麻、胡麻，一年生直立草本植物，是中国主要油料作物之一。芝麻中油脂、不饱和脂肪酸和蛋白质含量较高，还有芝麻素、芝麻酚、维生素A、维生素E、卵磷脂、钙、铁、铬等营养成分。芝麻常被加工成芝麻油、芝麻糊、芝麻酱等产品，其中芝麻酱因其浓香醇厚的独特风味而深受消费者喜爱 [ 1 ] [ 2 ]。目前，市场上的芝麻酱产品口感单一，不能满足多样化的市场需求 [ 3 ]。另外，芝麻及其深加工产品在储存过程中油脂容易出现氧化哈败等现象，影响产品的保质期 [ 4 ] [ 5 ]。对于芝麻酱制品来说，这一现象严重影响了芝麻酱的货架寿命，降低了芝麻酱的品质，制约了芝麻酱行业的发展 [ 6 ]。 牛肉，指从牛身上获得的肉，为常见的肉品之一。牛肉含有丰富的营养价值，其中最突出的是蛋白质、铁、钙、锌、肌氨酸、维A、维B1的含量，具有滋养脾胃、降胆固醇、提高机体免疫力等功效，其味道鲜美，具有“肉中骄子”的美称 [ 7 ]。2017年，全球牛肉消费量为5936.2万吨，中国的年消费量为798.5万吨，位于第4位。中国虽然是牛肉进出口大国以及消费大国，却不是牛肉加工强国 [ 8 ]。我国牛肉的附加值非常低，且多为中低端产品，发达国家牛肉加工附加值高达30%~40%，而我国仅为3%~4% [ 9 ]。 美拉德反应是指氨基化合物(氨基酸、肽及蛋白质)与羰基化合物(糖类)之间的非酶褐变反应经过一系列的复杂历程，最终生成含各种小分子和高分子的棕色甚至黑色的混合物。这些混合物称为美拉德反应产物(Maillard Reaction Products，简写MRPs) [ 10 ]。美拉德风味肽是MRPs中一类具有风味特征的短肽类化合物。在食品的加热或储存过程中，美拉德反应产物对香气和颜色有所影响，如：为面包提供金黄的颜色和诱人的香味；对茶叶的香气、色泽、滋味及品质的形成具有重要作用 [ 11 ] - [ 16 ]。文献 [ 17 ] 以谷氨酸和木糖为起始原料，通过美拉德反应制备美拉德反应中间体，从反应物配比、初始反应pH及真空脱水方法等方面进行优化，提高了水相中反应中间体转化率，显著提高了桃酥中吡嗪、吡咯的含量，丰富了焙烤风味。另外，美拉德反应产物还具有各种生物活性，能降低胃肠对蛋白质或氨基酸的消化性，从而增加其进入大肠并被肠道微生物发酵和利用的可能性 [ 18 ]。美拉德反应产物还具有抗氧化活性。麦芽在焙焦过程中产生的类黑精等物质，在黑啤酒中的抗氧化能力可以达到95%，较麦芽本身含有的酚类抗氧化物质的抗氧化性更强。因此，美拉德反应产物可被作为啤酒中的主要抗氧化剂 [ 19 ] [ 20 ]。 本研究以芝麻粕为原料制得美拉德风味肽，加入以牛肉、豆瓣酱、芝麻、花生和复合调料为主的牛肉芝麻酱中，拟开发一种既有牛肉与芝麻的鲜香，豆瓣的香辣，又有美拉德风味肽所带来的浓厚和鲜香味的牛肉芝麻酱。并且，通过添加美拉德风味肽，提升产品的氧化稳定性。
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user: 4. 结论 本文以豆瓣酱、花生、芝麻、美拉德风味肽、牛肉及枸杞为主要原料，以感官质量为评价指标，依次通过单因素和四因素三水平L 9 (3 4 )正交试验，得到一种风味层次丰富且氧化稳定性较高的牛肉芝麻酱。产品最佳的配方为：牛肉10%，枸杞1.05%，豆瓣酱35%，芝麻8%，花生5.75%，复合香料3%，美拉德风味肽0.4%。此配方所得的牛肉芝麻酱既有牛肉与芝麻的鲜香，豆瓣的香辣，又有美拉德风味肽所带来的浓厚和鲜香味。并且，当美拉德风味肽的添加量达到0.4%时，产品在110℃下的氧化诱导时间从8.7 h提高至14.8 h，提高了6.1 h，表明添加美拉德风味肽后牛肉芝麻酱的储存稳定性显著提高。本研究可为芝麻酱产品进一步的开发与利用提供理论依据。
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user: 摘要 目的：探讨油茶叶提取物(Camellia oleifera Leaves Extract， COLE)对金黄地鼠皮脂分泌的影响及其作用机制。方法：以金黄地鼠皮脂腺斑为研究载体，设置COLE低、高剂量组，空白对照组，丹参酮胶囊阳性对照组，进行为期28天灌胃实验。观察不同时间段COLE对金黄地鼠皮脂腺斑外观、显微结构、皮脂分泌的影响，测定比较各组血清、皮脂腺斑组织中脂质含量和雄性激素含量，最后通过研究SRD5A1/AR/ SREBP-1c信号通路探究COLE物抑制皮脂腺以及皮脂分泌的作用机制。结果：与空白对照组比较，COLE能够减小皮脂腺面积使其颜色变浅，显著缩小皮脂斑面积(p < 0.05)。HE染色结果显示COLE能够抑制皮脂腺的生长。油红O染色以及游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇结果显示COLE显著能降低油脂的分泌水平。雄激素测定结果显示COLE能极显著降低金黄地鼠血清以及皮脂腺斑组织中双氢睾酮含量。Western blot实验结果证明COLE能够降低SRD5A1、AR、SREBP-1c蛋白表达的水平。结论：COLE通过抑制SRD5A1/AR/SREBP1c信号通路降低金黄地鼠皮脂腺脂质分泌，限制皮脂腺的发育进而改善皮脂腺斑的性状。
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user: 1. 引言 痤疮是一种全球性的疾病，是最常见的一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病 [ 1 ]，痤疮的发病率很高，据调查12~24岁青少年的痤疮发病率高达85%，而且发病年龄逐渐向儿童 [ 2 ] 和中年两极扩展，患病人数有逐年增加的趋势。痤疮发生的部位常为额头、面部、背部、胸部等皮脂腺丰富的地方，一般表现为粉刺，严重时则表现为丘疹、脓疱、结节、囊肿、瘢痕和色素沉着，甚至会造成患者毁容，因此痤疮对患者身心健康、生活、社交、学习也会造成极大的困扰 [ 3 ]。痤疮最主要的发病原因是皮脂分泌旺盛 [ 4 ]。皮脂腺的发育以及皮脂的合成与分泌均受到雄性激素的调控 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ]，因此抑制皮脂腺雄性激素水平是治疗痤疮的途径之一。 在皮肤中5α-还原酶(5α-Reductase， 5α-R)是十分重要的雄性激素代谢酶，睾酮(testosterone， T)在皮脂腺5α-R的作用下可以转化为活性更强的双氢睾酮(Dihydrotestosterone， DHT)，它与雄性激素受体(Androgen receptor， AR)的亲和性比T高2~5倍，诱导AR信号传导的效力比Ｔ高10倍 [ 8 ]。被DHT激活的AR与固醇调节元件结合蛋白(Sterol-regulatory element binding proteins， SREBPs)裂解活化蛋白的内含子上结合 [ 9 ]，促进SREBPs的活化，接着SREBPs将通过影响更多脂质合成酶基因以及相关调控因子进一步刺激皮脂分泌，增强诱发痤疮的能力。Rosignoli [ 7 ] 等的研究表明雄性激素可以激活并上调SREBPs的表达。SREBPs能够调控脂肪酸、甘油三酯、胆固醇的合成，因此SREBPs的过量表达将促进脂质的大量合成甚至引起脂质代谢的紊乱 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]。 《中华本草》中提到油茶叶味微苦，性平，有治疗皮肤溃烂瘙痒，疮疽的功效。本课题组前期证明油茶叶提取物具有良好的5α-R抑制活性，具有抵抗雄性激素能力。金黄地鼠是研究抗雄激素药物及对皮脂腺影响的理想动物模型，其背部皮脂腺斑可以提供天然的雄激素控制的皮脂腺系统，对雄激素类药物刺激的反应与人相似，且不需要人工处理造模，比如兔耳模型需要被涂抹煤焦油 [ 13 ] 或者油酸 [ 14 ] 或者接种痤疮丙酸杆菌 [ 15 ] 来建立痤疮状态模型。因此本文将以金黄地鼠为研究载体研究油茶叶提取物对金黄地鼠皮脂分泌的影响及其作用机制。
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user: 2. 材料试剂与仪器 2.1. 实验动物 SPF级健康雄性LVG叙利亚金黄地鼠(LVG Golden Syrian Hamsters) 49只，6周龄，体重100 ± 20 g：由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为SCXK(京)2016-0011。 2.2. 实验原料 油茶叶：由江山之间生物科技有限公司提供。 油茶叶提取物：实验室自制。 2.3. 实验试剂 总胆固醇(TC)试剂盒、甘油三脂(TG)试剂盒：南京建成生物工程研究所；金黄地鼠游离脂肪酸(NEFA)酶联免疫吸附试剂盒、金黄地鼠双氢睾酮(DHT)酶联免疫吸附试剂盒：江苏酶免实业有限公司；β-Actin购自Abcam公司；SRD5A1购自Thermo Fisher公司；SREBP-1c、AR购自SANTA CRUZ公司；丹参酮胶囊：河北兴隆希力药业有限公司。 2.4. 实验仪器 游标卡尺：得力集团有限公司；剃毛器：科德士有限公司；酶标仪：美国BioTek公司；冰冻切片机：THERMO CRYOSTAR NX50；正置光学显微镜：日本尼康NIKON ECLIPSE E100；成像系统：日本尼康NIKON DS-U3。
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user: 3. 方法 3.1. 油茶叶提取物的制备 将干燥油茶叶粉碎、过60目筛，称取油茶叶粉末按1:40 (w:v)加入50%乙醇溶液先搅拌浸泡3 h，再在50℃下超声震荡提取2 h (提取2次)，4000 rpm离心10 min使得固液分离，采用旋转蒸发的方式减压浓缩上清液除去有机试剂，然后真空冷冻干燥至干粉，得到的油茶叶提取物，记为COLE (Camellia oleifera Leaves Extract， COLE)。 3.2. 动物分组及给药 《中华本草》中提到油茶叶的内服方式为取30 g/d煎汤喝下，成人体重按70 kg计，金黄地鼠与人的换算因子按7:1计 [ 16 ] [ 17 ]，经过计算以900 mg/kg·d、2700 mg/kg·d作为COLE的低、高剂量。选用丹参酮胶囊作为本实验阳性对照物，根据等效计量换算，选择300 mg/kg·d作为施药剂量。根据实验需要28只金黄地鼠随机分成4组，每组7只，根据实验需求分为0.5% CMC-Na灌胃组(Gavage control group with 0.5% CMC-Na， G-CON)、COLE低剂量灌胃组(Gavage group with Low-dose COLE， G-LC)、COLE高剂量灌胃组(Gavage group with High-dose COLE， G-HC)、丹参酮胶囊灌胃组(Gavage group with Tanshinone， G-Tan)如下表1。 动物适应性饲养一周之后，进入正式试验，连续给药28 d，灌胃量为0.02 mL/g。 Table 1 Animal grouping and gavage administratio 序号 实验组 只数 灌胃药物 剂量mg/kg·d 1 G-CON 7 0.5% CMC-Na - 2 G-LC 7 COLE 900 3 G-HC 7 COLE 2700 4 G-Tan 7 丹参酮胶囊 300 表1. 实验动物分组与灌胃给药 3.3. 皮脂腺斑面积的测量 实验前用电动剃须刀将金黄地鼠背部毛发剃除，用脱毛膏脱毛使背部的两只皮脂腺斑清晰露出，强光辅助下，使用游标卡尺测量双侧皮脂腺斑的最大横径(DT)和最大纵径(DL)，计算皮脂腺斑的面积(S)，并拍照记录。 S ( mm 2 ) = D T × D L 3.4. HE染色 末次给药后切取金黄地鼠2 cm × 2 cm皮脂腺斑组织，10%甲醛固定液固定，石蜡包埋，切片，HE染色观察皮脂腺斑组织病理变化。 3.5. 油红O染色 固定皮肤组织，蔗糖脱水，制备冰冻切片，油红O避光染色观察皮脂腺皮脂分泌状况。 3.6. 血清以及皮脂腺斑组织TG、TC、NEFA含量的测定 金黄地鼠腹部采血，室温静置1 h待血液完全凝固，1000 × g离心10 min，分离血清。取0.5 g皮脂腺斑组织，加入9倍PBS缓冲液(pH7.4)，进行匀浆，取上清液。按照试剂盒中说明进行操作，分别测定金黄地鼠血清以及测定皮脂腺斑组织内TG、TC、NEFA的含量。 3.7. 血清以及皮脂腺斑组织DHT含量的测定 样本处理同3.6，按照试剂盒中说明进行操作，测定金黄地鼠血清以及测定皮脂腺斑组织内DHT的含量。 3.8. 皮脂腺斑组织SRD5A1/AR/SREBP-1c信号通路相关蛋白的测定 采用Western blot技术测定金黄地鼠皮脂腺斑处皮肤组织SRD5A1、AR、SREBP-1c三种蛋白的表达水平，Western blot参照王薇 [ 18 ] 的方法进行：提取总蛋白，采用BCA定量试剂盒进行总蛋白定量；配制8%~12%分离胶和5%浓缩胶，每孔60 μg总蛋白上样，以浓缩胶60 V，分离胶80 V进行电泳2 h；蛋白质转膜及染色；脱脂奶粉封闭2 h；一抗杂交与二抗杂交；化学发光法显影。 3.9. 统计学方法 数据采用SPSS 17.0进行分析，用Graphpad Prism 6.0绘制，通过ANOVA分析进行统计学结果检验；采用Image J软件分析蛋白条带的光密度值。
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user: 4. 结果 4.1. 皮脂腺斑外观的变化 如图1所示，与G-CON相比，低、高剂量COLE和丹参酮胶囊随着给药时间的延长可以使皮脂腺斑变浅，皮脂腺斑与周围皮肤交界处逐渐模糊，斑点突起范围缩小。说明COLE能够改善金黄地鼠皮脂腺斑性状，使其颜色变浅。 图1. COLE对金黄地鼠皮脂腺斑表观的影响 4.2. 皮脂腺斑面积的变化 金黄地鼠皮脂腺斑面积变化结果如图2所示，灌胃给药的2周内各组双侧皮脂腺斑面积变化不明显(p > 0.05)，从第3周到第4周药物作用开始显现，与G-CON组相比，低、高剂量的COLE显著使双侧皮脂腺斑面积缩小(p < 0.05)。 图2. COLE对金黄地鼠左右皮脂腺斑面积的影响 4.3. 皮脂腺斑病理学观察 如图3所示，与G-CON相比，G-LC组、G-HC组以及G-Tan组的皮脂腺泡明显减少且排列松散，腺体收缩变小，呈现梭状，腺体内部囊状腺泡和周围腺细胞均较少，说明COLE可以干预皮脂腺腺体的发育。 图3. COLE对金黄地鼠皮脂腺斑组织形态显微结构的影响 4.4. 皮脂腺斑脂质分泌观察 油红O为脂溶性染料可使组织中脂滴着橘红色，通过油红O染色观察金黄地鼠皮脂腺皮脂分泌情况，如图4所示G-CON组金黄地鼠皮脂腺斑组织内皮脂腺细胞胞浆内部明显可见大量团状红色脂滴，且融合成片状，脂滴分泌旺盛。与G-CON组相比，G-LC、G-HC、G-Tan组腺泡周围橘红色脂滴积累明显减少，说明COLE可抑制金黄地鼠皮脂腺皮脂分泌。 图4. 油红O染色法检测COLE对皮脂腺斑中脂质积累的影响 4.5. 血清TG、TC、NEFA的含量 金黄地鼠血清中TG、TC、NEFA的含量变化如图5所示，G-CON相比，不同剂量的COLE与阳性药物可以极显著降低金黄地鼠血清中TG与NEFA的含量(p < 0.001)，其中高剂量COLE显著减低血清中TC (p < 0.05)，说明COLE可有效降低金黄地鼠体内脂质水平，并呈现剂量依赖性。 4.6. 皮脂腺斑组织TG、TC、NEFA的含量 如图6所示与G-CON，相比不同剂量的COLE与阳性药物丹参酮胶囊均可以极显著降低金黄地鼠皮脂腺斑组织中TG和NEFA (p < 0.001)，该结果基本与血清脂质含量结果一致。说明COLE不仅可以显著降低体内血清脂质类成分含量，还可显著降低金黄地鼠皮脂腺斑皮脂含量。 图5. 金黄地鼠血清中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸含量的变化 图6. 金黄地鼠皮脂腺斑组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸的含量 4.7. 血清以及皮脂腺斑组织中DHT的含量 金黄地鼠血清中DHT含量如图7(A)所示，不同剂量COLE与阳性药物丹参酮胶囊灌胃组DHT含量水平极显著低于空白组(p < 0.001)，说明COLE的干预可以极显著地抑制金黄地鼠体内DHT的生成，而血清雄性激素水平与皮脂腺分泌脂质密切相关。 金黄地鼠皮脂腺斑组织中DHT的含量结果如图7(B)所示，与G-CON相比不同剂量的COLE与阳性药物丹参酮胶囊均可以极显著降低(p < 0.01)，其中G-HC组DHT水平最低。该结果基本与金黄地鼠血清DHT含量结果一致。 图7. COLE对金黄地鼠血清、皮脂腺斑组织内双氢睾酮含量的影响 4.8. 皮脂腺斑组织SRD5A1/AR/SREBP-1c信号通路相关蛋白的表达 COLE对于金黄地鼠皮脂腺斑组织SRD5A1/AR/SREBP-1c信号通路的影响如图8所示。与G-CON相比，不同剂量的COLE与阳性药物丹参酮胶囊的干预使得SRD5A1蛋白、SREBP1c蛋白、AR蛋白条带变浅，G-LC、G-HC、G-Tan组三种蛋白的相对表达量均极显著降低(p < 0.01)。COLE对蛋白表达的影响呈现剂量依赖性，高剂量COLE对三种蛋白表达下降程度的干预效果更加明显，说明COLE可有效降低SRD5A1-AR-SREBP1c信号通路表达，其中高剂量COLE作用效果最好。 图8. COLE对金黄地鼠皮脂腺斑组织SRD5A1-AR-SREBP1c信号通路的影响
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user: 5. 结论 本研究以金黄地鼠为研究载体探究COLE对其皮脂腺斑外观、显微结构、皮脂分泌的影响。研究结果如下：通过观察不同时间段皮脂腺斑性状发现COLE可以使皮脂腺斑颜色变浅，真皮中色素部分消失，皮脂腺斑会萎缩，色素性粗毛退化；通过比较不同时间段皮脂腺斑面积发现COLE可有效减小皮脂腺斑的面积，起到了抑制金黄地鼠皮脂腺的作用；组织病理学结果再次从微观层面印证明COLE的干预使得皮脂腺腺体排列松散，体积收缩变小，说明COLE能够抑制皮脂腺发育；油红O染色结果显示，COLE减少了金黄地鼠皮脂腺皮脂分泌；通过测定血清和皮脂腺斑组织中脂质类物质的含量发现，COLE不仅可以降低体内脂质水平，也能够降低皮脂腺脂质水平，这与油红O染色的结果一致；另外COLE还能抑制皮脂腺斑组织以及血清DHT水平。 Western blot技术测定SRD5A1/AR/SREBP-1c信号通路相关蛋白结果显示COLE的干预均可显著降低SRD5A1、AR、SREBP-1c这三种蛋白的表达。说明COLE改善其皮脂腺斑是通过激活SRD5A1/AR/ SREBP1c通路降低皮脂腺内5α-R酶蛋白的表达水平，影响其活性，使DHT的生成量大大减少，通过抑制AR的表达影响其发挥生物活性，减少DHT与AR结合的机会，进而在低水平下诱导调节脂质代谢的重要核转录因子SREBPs的表达，SREBPs内含子中的ARE与同样低水平的AR的结合调节下游脂质合成相关基因，使得整体脂质合成与分泌水平下降，缓和金黄地鼠皮脂腺斑部位旺盛的皮质分泌水平和雄激素水平。联系HE染色和油红O染色结果，COLE正是通过该过程使金黄地鼠皮脂腺斑处内部皮脂腺腺泡减少、体积变小、分布松散，从而改善外部表观性状，使其斑点变小变浅。 综上所述，本研究探讨了油茶叶提取物可以通过抑SRD5A1/AR/SREBP1c信号通路降低金黄地鼠皮脂腺脂质分泌，限制皮脂腺的发育进而改善皮脂腺斑的性状，为油茶叶和相关产品作为新的天然抗痤疮剂和化妆品添加剂的开发利用提供了研究思路和理论依据。
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user: 摘要 桩网复合地基具有良好的协调差异变形的能力，但由于受地基固结沉降特征的影响，其承载特性的发挥与桩–土差异沉降量密切相关。为揭示路基渐进沉降模式下桩网复合地基桩–土荷载分担效应，设计了室内缩尺模型模型，考虑桩–土差异沉降、桩间距等参数变化，通过对比桩网复合地基与普通复合地基，对分级沉降条件下的桩–土荷载分担效应开展了研究。研究表明，在同等桩间距条件下，随着桩–土差异沉降量的增大，桩网复合地基与普通复合地基桩顶荷载均增大，且前者明显高于后者；在同等桩–土差异沉降量下，桩网复合地基荷载分担比例及桩土应力比更高，但随着桩间距的增大，桩土应力比以及桩土荷载分担比逐渐减小。通过分析桩–土应力比与桩间距及桩–土差异沉降的关系，建立了分级沉降条件下桩–土应力比的预测公式，为桩网复合地基设计可提供良好的借鉴意义。