system: [SYSTEM]

user: 4. 结果与讨论 4.1. 168个样本检测结果 对无漆光滑铝板，光滑塑料板，光滑玻璃板，漆面实木地板这四种客体上的各42个汗斑样本分别用TES溶液二步提取法、NaCl溶液二步提取法和双面胶粘贴法转移脱落细胞，之后将使用同一种转移方法的两组样本分别用Chelex法和硅珠法提取DNA。经PCR扩增，得到的检测结果，笔者得到了各种变量相同的每组中7个(每个样本16组等位基因的)平均峰面积： 式中A为13个杂合子的26个峰面积之和，B为3个纯合子峰面积之和，n = 16；以及基因型数： 式中C为检测出的杂合子数，D为检测出的纯合子数。 将上述两者进行统计，得到每组的组平均峰面积(每组的7个平均峰面积的平均值)、组峰面积相对标准差(每组的7个平均峰面积的相对标准差)及组平均基因型数(每组的7个基因型数的平均值)。使用Chelex法的84个样本结果见表1，使用硅珠法的84个样本结果见表2。 4.2. 验证结果 根据表1、表2中168个样本的数据得出的结论，在客体为铝板时，使用NaCl溶液二步提取法和硅珠法DNA提取效果最佳。遂选用铝板，使用NaCl溶液二步提取法和硅珠法进行验证实验。笔者将得到的该组10个样本的16个位点的平均峰面积(同前)及基因型数(同前)进行统计，得到该组的基因型检出率： 分析结果见表3。 4.3. 讨论 4.3.1. 在同一客体表面不同脱落细胞转移方法比较 根据表1和表2可以得到：在玻璃表面，TES溶液二步提取法效果最佳，总平均峰面积(在该客体上和转移方法时，Chelex法中组平均峰面积值与硅珠法中组平均峰面积的平均值，下同)为2147.785，总平 Table 1 Each sample group’s group average peak area， relative standard deviation and group average number of Genotype by using Chelex metho 客体 转移方法 组平均峰面积 相对标准偏差(%) 组平均基因型数 玻璃 TES溶液二步提取法 1569.86 33.15% 28.43 NaCl溶液二步提取法 1043.00 41.03% 18.14 双面胶粘贴法 1478.86 69.80% 22.43 铝板 TES溶液二步提取法 1066.71 46.25% 22.00 NaCl溶液二步提取法 907.71 40.47% 23.29 双面胶粘贴法 1630.57 48.89% 26.14 塑料 TES溶液二步提取法 800.71 32.53% 21.86 NaCl溶液二步提取法 774.57 15.36% 22.71 双面胶粘贴法 1293.71 16.11% 28.57 木板 TES溶液二步提取法 403.71 50.17% 15.43 NaCl溶液二步提取法 434.00 59.00% 16.71 双面胶粘贴法 1268.86 29.94% 27.14 表1. 使用Chelex法的各组样本组平均峰面积、相对标准差及组平均基因型数 Table 2 Each sample group’s group average peak area， relative standard deviation and group average number of Genotype by using silicon bead tes 客体 转移方法 组平均峰面积 相对标准偏差(%) 组平均基因型数 玻璃 TES溶液二步提取法 2725.71 27.77% 31.71 NaCl溶液二步提取法 3025.86 27.65% 31.29 双面胶粘贴法 587.45 63.91% 18.57 铝板 TES溶液二步提取法 3223.43 34.34% 32.00 NaCl溶液二步提取法 4049.29 16.78% 32.00 双面胶粘贴法 1234.14 42.07% 27.43 塑料 TES溶液二步提取法 3036.43 42.85% 31.14 NaCl溶液二步提取法 3989.14 11.52% 32.00 双面胶粘贴法 972.00 53.15% 25.43 木板 TES溶液二步提取法 2278.43 44.63% 31.29 NaCl溶液二步提取法 3426.57 33.77% 32.00 双面胶粘贴法 742.00 39.92% 23.29 表2. 使用硅珠法的各组样本组平均峰面积、相对标准差及组平均基因型数 Table 3 The validation group’s average peak area， number of Genotype and detection rat 样本 平均峰面积 基因型数 1 928.81 21 2 1096.75 28 3 1753.31 30 4 2156.00 30 5 4253.69 32 6 2164.50 29 7 2719.38 32 8 5142.69 32 9 4725.44 32 10 2508.19 31 检出率(%) 92.81% 表3. 验证组的平均峰面积、基因型数及检出率 均基因型数(在该客体上和转移方法时，Chelex法中组平均基因型数与硅珠法中组平均基因型数的平均值，下同)为30.07，其两个组峰面积相对标准偏差数据与其他转移方法的相比最小。在铝板、塑料以及木板表面，NaCl溶液二步提取法效果最佳，总平均峰面积分别为2478.500、2381.855、1930.285，总平均基因型数分别为27.65、27.36、24.36，其两个组峰面积相对标准偏差数据与其他转移方法的相比较小。总体而言，使用NaCl溶液二步提取法的效果相对较好，平均峰面积数值较大，多组的数值也较为稳定(组相对标准偏差较小)，等位基因所检出的位点较为完整。 4.3.2. 在同一客体表面不同DNA提取方法比较 根据表1和表2可以得到：在玻璃、铝板、塑料以及木板表面，硅珠法效果最佳，总平均峰面积(在该客体上和提取方法时，TES溶液二步提取法中组平均峰面积、NaCl溶液二步提取法中组平均峰面积和双面胶粘贴法中组平均峰面积的平均值)分别为2113.007、2835.620、2665.857、2149.000，总平均基因型数(在该客体上和提取方法时，TES溶液二步提取法中组平均基因型数、NaCl溶液二步提取法中组平均基因型数和双面胶粘贴法中组平均基因型数的平均值)分别为27.19、30.48、29.52、28.86，其三个组峰面积相对标准偏差数据与另一个提取方法的相比相对较小。总体而言，使用硅珠法的效果相对较好，平均峰面积数值较大，多组的数值也较为稳定(组相对标准偏差较小)，等位基因所检出的位点较为完整。 4.3.3. 不同脱离细胞转移方法和DNA提取方法的探讨 由表1和表2的数据表明，使用Chelex法的84个样本总体的平均峰面积小于使用硅珠法的平均峰面积，与杨电的结论相吻合 [ 3 ] ：Chelex法的缺点是提取的DNA纯度不高，容易出现等位基因扩增不平衡、甚至小片段优势扩增导致大片段等位基因缺失现象。但是使用双面胶粘贴法的Chelex法的样本检测效果优于使用双面胶粘贴法的硅珠法，原因可能是Chelex法提取到的双面胶上脱落细胞的DNA量较多，而硅珠法由于提取步骤较多，DNA损失较大。 在使用Chelex法时，使用双面胶粘贴法的样本与使用另外两种转移方法的样本相比，整体而言，平均峰面积值较大，等位基因位点较为完整。在使用硅珠法时，使用双面胶粘贴法效果最差，等位基因位点缺失较为严重；使用NaCl溶液二步提取法与TES溶液二步提取法，效果均较好，而NaCl溶液二步提取法效果更胜一筹，原因可能是生理盐水模拟了人体环境，能够更好的保存脱落细胞。 4.3.4. 验证结果的探讨 由表3的数据我们可以看到，验证实验中，等位基因位点较为完整，十个样本总体的基因型检出率较高，达到了预期效果，适合公安机关的办案实践。由于在验证实验中，采用的是指纹中的脱落细胞，无法定量，也无法保证其细胞数达到汗斑中的数量。