DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 荧光碳量子点(CQDs)是一种尺寸小于10 nm的球形纳米颗粒 [ 1 ] ，在水中分散性较高。形貌为类球形，是具有特殊结构(石墨烯、金刚石结构等)的多色荧光新型碳纳米材料，也是继富勒烯、碳纳米管、石墨烯之后最受关注的新型碳纳米材料之一。碳点的合成方法有自上而下法和自下向上法，自上而下是通过物理或化学方法将大块碳材料由大变小，尺寸直到纳米级，自下向上法是以小尺寸的含碳有机物为碳源，通过小分子有序或无序的组装结合由小变大，从而达到一定的尺寸来制备碳点。碳量子点的制备方法很多，如电化学法 [ 2 ] ，化学氧化法 [ 3 ] ，水热法 [ 4 ] 和超声处理 [ 5 ] 。目前方法合成的碳点都是由不同相对分子质量粒子组成的混合物，具有很强的紫外吸收峰，其荧光谱图大多是很宽的，发射谱覆盖了可见波长区域，发射波长随着激发波长的增加发生红移，表现出荧光最大发射波长，原因可能是由于碳量子点表面发光位点不同或者不同相对分子质量的碳量子点的尺寸效应造成的 [ 6 ] 。碳点具有独特的发光特性，如依赖激发的发射行为 [ 7 ] [ 8 ] 和上转换光致发光 [ 9 ] 。碳量子点的光致发光性能与其尺寸、形态、组成和结晶度有关，而这一般由原料和制备方法决定 [ 10 ] [ 11 ] 。不同方法合成的碳点荧光发射具有明显的尺寸依赖性和激发光依赖性。在荧光碳量子点的制备中，荧光碳量子点的分离纯化是目前存在的最大技术难题之一。 将碳量子点分离可以收集得到荧光性能更好的荧光碳点组分，多种分离技术已被应用，如柱色谱，电泳，超滤和高速离心法等。在去除无荧光和低荧光纳米颗粒后，进行凝胶分离，发现较小尺寸的碳量子点的量子产率很容易高于0.55。Liu等 [ 12 ] 通过凝胶分离得到不同颜色碳点，开启了碳点发光机理的研究。研究发现，高量子产率的碳点具有激发波长独立性，荧光发射峰的位置不会随着激发波长的改变而改变，低量子产率的碳点则相反。碳点的这种发光特性可能与他的相对分子质量分布有关 [ 13 ] 。Li等使用电化学方法制备碳点，结合柱色谱分离得到不同的碳点组分，发现不同组分碳点相对分子质量不同。当分子量增加时，碳点的激发光谱和发射光谱都发生红移，表明荧光性质与碳点的相对分子质量有关。荧光发射峰的位置相同说明碳点的粒子相对分子质量相同，随碳点粒径增加，共轭结构增加，荧光波长增大，荧光颜色发生红移。Kim等也发现碳点的吸收光谱和荧光光谱受粒径调节。Bao等证明了碳点的最大荧光发射波长随分子量增大而红移。郭课题组 [ 14 ] 制备了具有蓝绿色荧光的碳点，发现发射波长独立于激发波长，激发波长从310 nm增加到410 nm时，荧光发射光谱不变，最大发射波长均位于503 nm，推测可能是由于合成的碳点具有较均一的相对分子质量和相同的表面结构。然而并不是所有碳点都能观察到类似现象。到目前为止，关于碳点尺寸分离的研究是非常少的，有效地对所制备的碳点进行分离，对理解碳点的发光机理和光电方面等领域的应用有着重要的作用。柱层析技术能够根据碳点的相对分子质量进行分离，考察各组分的发光性质后发现分离前后所得的碳点具有不同的发射波长和量子产率。该技术能实现碳点中不同相对分子质量的碳点组分的分离，证明了碳点的发光性质与其相对分子质量有关。 本实验以柠檬酸和尿素为原料，获得了水溶性好且能在紫外灯下发出明亮黄绿色荧光的碳量子点，荧光光谱表明制备的碳点在535 nm处具有独立于激发波长的发射峰。这种制备方法简单，成本低，绿色环保。使用甲醇处理碳量子点，采用Pharmadex LH20凝胶色谱柱分离，对分离出的碳点馏分进行紫外测试，发现碳点的最大紫外吸收波长几乎不变，考察各组分的发光性质后发现分离前后所得的碳点具有不同的发射波长，该技术能实现碳点中不同相对分子质量组分的分离，证明了碳点的发光性质与其相对分子质量有关。调节碳点粒径的大小，实现发射峰向长波长方向移动能够提高光电器件的性能，碳量子点将能够更广泛地应用于各个领域。
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user: 2. 仪器与药品 2.1. 实验仪器 集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)，Pharmadex LH20葡聚糖凝胶(70微米)，柱总长：93 cm，有效长度：65.5 cm，外径：1.5 cm，内径：1.3 cm，PerkinElmer/VUVIS Lambda 35紫外可见分光光度计(夹缝2 nm，扫描速度600 nm/min，扫描范围200~700 nm)，T-P-8600荧光分光光度计(扫描速度200 nm/min，激发带宽5 nm，发射带宽5 nm，灵敏度中档，狭缝宽度1 nm)，0.22 μm微孔滤膜，5 mL注射器。 2.2. 实验试剂 柠檬酸，尿素，甲醇，乙酸乙酯，无水乙醇等分析纯试剂均购自国药集团，超纯水。
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user: 3. 实验方法 3.1. 荧光碳量子点的合成 取2 g柠檬酸和4 g尿素至圆颈烧瓶，放入集热式恒温加热磁力搅拌器中，程序升温至200℃，保持200℃加热37分钟，然后自然冷却至室温，随着反应时间的增加，产物的颜色由白色变为浅黄色，深黄色，最后变成深褐色，为了保证获得的样品的均一性，重复该方法6次，共合成10 g黑色固体碳量子点。反应结束后，将得到的固体碳量子点闭光保存于4℃备用，即可获得分散均一，水溶性良好的碳量子点。 3.2. 凝胶色谱柱对碳量子点的纯化 PharrmadexLH20为亲脂性的可在有机溶剂中进行分离的分子筛，是一种羟丙酰基交联葡聚糖凝胶。其排阻范围为500~2000。本次实验中，以甲醇为洗脱剂，流速为0.96 mL/min。在洗脱过程中，碳点通过层析柱，各组分由于分子量不同而受到的阻滞作用不同，分子大于2000的组分随着溶剂在凝胶颗粒间流动，流程短，先流出层析柱，分子小于500的组分渗入凝胶颗粒的孔隙中，流程长，后从层析柱中流出(图1)。因此，在多种成分进行凝胶层析分离时，从柱中流出的次序按分子量递减的顺序排列。 3.2.1. 制备色谱条件 色谱柱类型：Pharmadex LH20凝胶色谱柱，溶剂：甲醇。洗脱剂：甲醇(降低溶液粘度，加速分离过程)，流速：0.96 mL/min，上样量：1.0 mL，色谱柱填充材料：Pharmadex LH20葡聚糖，填充材料的长度：65.5 cm，外径：1.5 cm，内径：1.3 cm。待分离样品体积：1.0 mL。 3.2.2. 碳点的分离 碳点的分离：取5.0 g碳点固体于烧杯中，加入50.00 mL甲醇超声7 min后用定量滤纸将大颗粒碳过滤除去，获得碳点原液。称取葡聚糖凝胶Pharmadex LH20干粉置于100 mL烧杯中，室温浸泡过夜。待凝胶颗粒完全吸水膨胀后，将上清液中破碎的凝胶颗粒倾倒出，冲洗凝胶颗粒，将凝胶颗粒缓慢加入到层析柱中，加入凝胶颗粒后，将制备好的碳点(1 mL)溶液加入层析柱，用甲醇洗脱(1.0 mL/min)，分别收集不同时间段的碳点馏分来测试荧光光谱。
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user: 4. 实验结果与讨论 4.1. 碳量子点分离结果分析 如图2，图3为碳量子点溶液在365 nm紫外光下的照片，从照片中可以看出，碳量子点发出强的黄绿色荧光，与荧光发射波长范围为400~500 nm相吻合。 图1. 分离的原理和步骤 图2. 自然光下以甲醇为溶剂分离出的碳点各馏分 荧光作为碳点的主要性质，受到诸多的关注和研究，碳量子点的荧光性能主要来源于2种不同类型的发射，一种是其表面能的陷阱发射，另一种是其内在的状态发射，即电子和空穴的重新结合产生的发射，也就是通常所说的量子点的量子尺寸效应所导致的发射。碳点具有独特的发光性质，如依赖激发的发射行为。以下主要基于此理论，对比分离前后碳量子点的紫外及荧光性能。 4.2. 碳点的紫外性质 所有光谱分析均在室温下进行。用PerkinElmer/VUVIS Lambda 35紫外可见分光光度计测量溶液的紫外吸收光谱。 如图4所示，碳点在330和410 nm处显示吸收带，对于未分离碳点，最大紫外吸收波长为410 nm， 图3. 365 nm紫外灯下以甲醇为溶剂分离出的碳点各馏分 图4. 碳量子点的紫外吸收光谱 对于分离出的碳点馏分，最大紫外吸收波长在410 nm附近，而荧光发射扫描光谱在420 nm (图7)激发时在535 nm处显示最大发射。紫外可见光谱中330 nm吸收带通常与碳点中羰基的 n → π * 跃迁有关，而410 nm吸收带通常与碳点中多芳环中共轭体系的 π → π * 跃迁有关。 最大紫外吸收波长无迁移现象说明本研究中凝胶色谱柱分离碳量子点是依据碳点的相对分子质量不同，与碳点的结构无关。在日光灯照射下，碳点溶液呈浅黄色透明状，水溶性极好，而在365 nm紫外灯照射下，发出黄绿色荧光。碳点在4℃下保存8个月后仍呈现浅黄色透明状，未产生聚集现象，说明碳点具有较高的稳定性和发光强度。 4.3. 分离前后碳点的荧光性能 如图5所示，对于未分离碳量子点，随着激发波长的增加，碳点的发射峰位置逐渐红移，这种依赖激发波长的发射行为与之前文献报道的一致 [ 5 ] [ 6 ] 。 对于未分离碳量子点，在一定的激发波长范围内(300~480 nm)，荧光发射峰发生红移(467~553 nm)。 由图2，图3知馏分4在色谱柱中保留的时间较短，中间洗脱出来的馏分9在紫外灯下有强的黄绿色荧光，选择馏分4和馏分9作为研究对象，测试其荧光性质并与未分离碳点的荧光性质进行对比。 碳点表现出发射位置依赖激发波长的性质。对于馏分4，其分子量大，所以柱色谱中保留时间较短，如图6所示，在不同激发波长(300~480 nm)下，随着激发波长的增大，发射荧光红移，发射峰从420 nm 图5. 碳量子点的荧光发射光谱图 图6. 馏分4的荧光发射光谱图 红移至536 nm。产生这种现象的原因是不同分子量的纳米粒子对光的选择性不同。碳点的最佳激发波长为410 nm。 对于馏分9，其分子量小，柱色谱中保留时间较长，如图7所示随着激发波长的增加(340~440 nm)，发射波长荧光强度较高，发射波长不随着激发波长的改变而改变，具有激发独立的性能，碳点的分子质量比较均一。综上所述：分离前后的碳点具有不同的发射波长，对比碳点经过凝胶色谱柱分离前后的荧光谱图得出：碳点的发光特性与它的相对分子质量有关，凝胶色谱技术能够根据相对分子质量对碳点进行有效分离。
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user: 5. 碳点的质谱表征 对于未分离碳点，最高的丰度和最大质量离子m/z为1119。 如图8所示，未分离碳点的质荷比范围为1000~1200，并且质谱片段非常多，说明未经分离的碳点是一个非常复杂的团聚体。而经过凝胶色谱柱分离的碳点其荷质比非常均一并且都小于未分离的碳点，如图9和图10所示，经过分离后的馏分9质荷比相对馏分4更小，而馏分9更加均一。说明碳点分子量均一性决定碳点荧光性能的独立性。 图7. 馏分9在不同激发波长下的荧光发射光谱 图8. 未分离碳点的质谱 图9. 馏分4的质谱 图10. 馏分9的质谱
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user: 6. 结论 碳点具有独特的发光性质，通过凝胶柱层析分离碳点中不同尺寸的组分，本次采用凝胶色谱柱分离碳点得到了分子量范围窄的馏分，并且具有激发独立性能，研究结果表明，分离前后的碳点具有不同的激发波长和发射波长，最开始洗脱出来的馏分为相对分子质量大的馏分，最后洗脱出来的为相对分子质量小的馏分。分子量大的碳点的结构复杂，在吸收了相应的激发光能量并发射时，自身吸收对发射的光的能量，导致了一种“自吸”现象，而出现了激发依赖现象；而分子量小的碳点结构简单，则对发射光的影响小，没有吸收，所以出现了激发独立现象。本研究结果表明凝胶排阻柱层析技术能基本实现碳点中不同分子量组分的分离，通过紫外、荧光、红外与质谱等技术证明了碳点的发光性质与其分子量相关。
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user: 摘 要 采用升华法和重结晶法制备乙胺嘧啶药物的A、B、C三种晶型，通过扫描电镜，XRD和红外光谱对三种多晶型进行表征，采用粉末直接压片法分别制得A、B晶型乙胺嘧啶片剂，对制备的片剂按《中国药典》2015版乙胺嘧啶片中规定的主要项目进行检测。结果表明，乙胺嘧啶药物存在ABC三种晶型。A晶型在280℃时升华转化成B晶型，B晶型乙醇重结晶得到C晶型，证实A和C为同一种晶型，B晶型为另一种晶型。AB晶型的溶解性是有差异的，A晶型略有引湿性，B晶型有引湿性，所制备片剂的重量差异、含量、含量均匀度、溶出度检测结果均符合《中国药典》2015版乙胺嘧啶片标准规定的范围。乙胺嘧啶药物AB两种晶型片剂的溶出曲线相似。 关键词 :乙胺嘧啶，药物多晶型，片剂，溶出度 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 自18世纪20年代磷酸钠多晶型现象被发现后，药物多晶型这一研究得到了生化科学界广泛的关注。特别是20世纪60年代之后，很多相干技术的进步和科学表征方法的提高，如X-射线衍射、扫描电镜、红外光谱法等表征方法，药物晶型的研究得到了长足的发展。多晶型现象在有机药物中广泛存在。多晶型在固体有机物质，尤其在具有多种官能团的有机物质中的常见现象 [ 1 ] [ 2 ] ，如在多晶型药物巴比妥类中(38种)，有63%多晶型 [ 3 ] 。据统计，美国药典38版片剂药物中，约40%的药品具有多晶型。药物多晶型问题已成为药物开发过程中的重要项目以及药剂品质控制中不可缺失的研究内容。 对于固体化学药物，由于其质点的排列形式及空间对称性的差异，同一种物质可以形成不同的外观形态、晶体结构、药理性质多晶型药物。药物在重结晶因素的改变下。可以产生空间的差异，使药物质点之间作用力或结合形式的差异，和一些化合物的化学键位置变换、部分空间构象改变等等，导致药物晶体形成2种或2种以上的空间构象和晶胞数据 [ 4 ] 。药物的多晶型，有相同的分子式和分子量，但有不同的空间结构 [ 5 ] 。随后多晶型的类别也逐渐被人们所区分，药物多晶型主要分为6种类型：构象型多晶型、构型型多晶型、堆叠型多晶型、氧键型多晶型、假多晶型、药物成盐产生的多晶型。有的情况下，同一药物的不同晶体中某一晶型甚至是有毒的 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] 。因此，药物的多晶型研究在生产制造时和贮存过程中，研究药物的多晶型特征以及了解其理化性质是非常重要的。 生物利用度是药物或代谢物被吸收的速度和分量，进而能让药物或代谢物通过血液到达作用部位。固体药物由于空间结构的不同以及质点之间的作用力不同而导致晶型的不同，从而影响药物的形态和颗粒表面积，进而导致药物在体内时吸收的不同，继而使药物疗效存在差别 [ 10 ] [ 11 ] 。药物的多晶型可以分为不稳定型和亚稳定型以及稳定型。从亚稳定型转化为稳定型一般是很缓慢的过程，所以亚稳定型也能在一定环境下稳定的保存。亚稳定型位于两者之间。亚稳定型和不稳定型会在一某些的环境下渐渐向稳定型转化。药物的晶型在温度、湿度、放置时间等一定条件下可以相互转化。为确保每批次药物的等效性，从而研究不同晶型的稳定性，针对不同晶型制订相关保证制药和存储过程中的措施 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 。 药物多晶型表征，通过比较熔点、溶解度、外观等药理性质的差异，并且借助红外、X衍射等谱图，来判断区分是何种晶型，确定药物的稳定性、生物利用度以及疗效，从而影响药物稳定性、生物利用度等疗效的发挥 [ 15 ] 。 乙胺嘧啶(结构如图1所示)主要用于预防疟疾，其机制是影响疟原虫的核酸合成，阻碍疟原虫叶酸代谢过程，影响疟原虫的二氢叶酸还原酶，致使疟原虫的生长繁殖受到抑制，存在多晶型现象。本文采用升华法和重结晶法制备乙胺嘧啶药物的晶型，通过光学显微镜，扫描电镜，红外分光光度法对多晶型进行表征，采用粉末直接压片法分别制得晶型乙胺嘧啶片剂，对制备的片剂按《中国药典》2015版中规定的主要项目进行考察。
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user: 2. 实验部分 2.1. 实验试剂 实验所用试剂均为分析纯，乙胺嘧啶(原料药，常熟市联创化学有限公司)，水为二次蒸馏水。 2.2. 实验仪器及过程 2.2.1. 药物晶体制备及性质测试 1) 乙胺嘧啶转晶试验。取乙胺嘧啶原料药适量，分别用乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂溶解，在一定条件下重结晶得到乙胺嘧啶(分别自然放置重结晶和加速蒸发重结晶)。经显微镜初步表征得出以上重结晶均为同一种，并未发生晶型转变，即同为晶型A。取乙胺嘧啶原料药(A晶型)约0.5 g，置于白色磁蒸发皿中，放入电热套中使之平稳，上面盖一块无色透明表面皿，以便观察，加热直到药品开始熔化，随后看见蒸发皿内药品熔融升华，直到药品刚好彻底熔融，并且沉积在蒸发皿的边沿，继续加热4 min，关掉电热套，冷却至室温，取下并小心刮至药品盒，得到针状结晶(B晶型)。再取晶型B少许，再用乙醇重结晶，得颗粒状晶体(C)。 2) 溶解性实验。分别称取0.02 g晶型A、B乙胺嘧啶样品置试管中，各6份，依次加入磷酸盐缓冲液(pH 6.8)、醋酸－醋酸钠缓冲液(pH 4.5)、pH 1.2盐酸溶液(0.1 mol/L)、三氯甲烷、乙醇、丙酮6种介质，记录30 min内观察溶解情况，直到彻底溶解，记录数据。 3) 引湿性测定。取烘干的具塞玻璃称量瓶，在试验前一天放置在装有硫酸铵饱和溶液的干燥器内，置于25℃ ± 1 ℃ 恒温培养箱中，放置24小时取出精密称定具塞玻璃称量瓶重量m 1 = 31.8123 g，m 2 = 31.8123 g。取A晶型和B晶型乙胺嘧啶原料药，分别均匀铺在已恒重烘干的上述两个称量瓶中，平铺厚度约为1 mm，准确称量装有药物一起的具塞称量瓶m 3 = 32.0307 g ，m 4 = 31.8840 g。将称量瓶打开，和瓶盖一起放到恒温干燥器中，在25℃ ± 1 ℃ 环境下恒温恒湿放置24小时。取出，准确称量具塞玻璃称量瓶和药品重量m 5 = 32.0339，m 6 = 31.8857。计算A晶型增重百分率 = (m 5 − m 3 )/(m 3 − m 1 ) × 100% = (32.0339 g − 32.0307 g)/(32.0307g − 31.8123 g) × 100% = 0.0032/0.2184 × 100% = 1.47%、B晶型增重百分率 = (m 6 − m 4 )/(m 4 − m 2 ) × 100% = (31.0339 g − 31.8840 g)/(31.8840 g − 31.8123 g) × 100% = 2.37%。 4) 乙胺嘧啶晶型片剂的制备。分别取A晶型乙胺嘧啶和B晶型乙胺嘧啶约35 g用研钵研细，用显微镜放大倍数100倍时观察粒径为0.001 mm时，停止研磨，干燥后装入药瓶中。采用粉末直接压片法使用处方(1000片用量：乙胺嘧啶6.25 g、干淀粉15 g、聚维酮3.95 g、微晶纤维素42 g、羧甲淀粉钠8 g、 图1. 乙胺嘧啶结构 硬脂酸镁1.8 g)制备片剂，分别制得A、B晶型乙胺嘧啶片各2000片。 5) 重量差异。分别称取A晶型制作的片剂和B晶型制作的片剂20片总重量为M A = 1.5203 g，M B = 1.5698。并分别称取A晶型片剂和B晶型片剂的每片重量(mg)，记录数据，计算片重差异。 2.2.2. 光学显微镜 将适量的A晶型、B1晶型、B2晶型放在BH200生物显微镜(上海长方光学仪器有限公司)下观察并拍照。 2.2.3. 红外光谱分析 分别用溴化钾在红外灯下置于玛瑙研钵中研细，压片，在岛津FTIR-8400红外分光光度计上绘制红外光吸收图谱。 2.2.4. 扫描电镜 采用JCM-600扫描电子显微镜扫描不同晶型的电子显微镜图。 2.2.5. X-射线衍射 将适量A、B晶型乙胺嘧啶制样后，置于Rigaku D/Max-2550v/pc粉末衍射仪(日本理学公司)上测定。测试条件为：Cu靶(λ = 1.54059 Å)，扫描范围是5.0˚~40.0˚ 2θ，步长sampling：0.02˚，扫描速度5˚/min，电流150 mA，电压40 kV。
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user: 4. 结论 本文采用光学显微镜法、扫描电子显微镜法、粉末X射线衍射法、红外光谱法对乙胺嘧啶的不同晶型进行表征，A、B、C晶型均是因构型不同而引起的多晶型，并且A晶型、C晶型为同一种晶型，B晶型为另一种不同的晶型，A晶型为冰块状，B晶型为针状和片状。将A晶型在280℃加热处理，完全转变成B晶型。两种晶型制备的片剂各项质量指标(重量差异、鉴别、含量均匀度、溶出度、含量)均符合中国药典2015版规定的范围。溶出曲线表明两种片剂溶出曲线相似因子f 2 = 69.04，相似性良好，测定其溶出度B晶型大于A晶型。
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user: 摘 要 钢铁的腐蚀是工业上面临的一个严重问题，若从工艺和资金上来考虑，需添加一种缓蚀剂来降低腐蚀速度。目前，胺盐型腐蚀抑制剂使用较多，且效果优越。本文通过对样品的物理、化学分析、紫外光谱、红外光谱、核磁共振氢谱及离子色谱等系列分析并推测判断出不同离子体的二环己胺盐在钢铁防腐气相缓蚀剂的分析，最终确定该固体样品可能为亚硝酸二环己胺。 关键词 :气相缓蚀剂，二环己胺盐，谱学分析，有机离子化合物 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 前言 气相缓蚀剂是一种具有抑制金属锈蚀性质的一类无机物质和有机物质的总称。由于气相缓蚀剂具有防锈期长、操作简便、成本较低等特点，近年来被广泛应用在防锈包装材料上。本文所检测的固体样品即是来自某公司气相防锈纸中的一种重要气相缓蚀剂的成分，并希望通过检测出该样品的成分来改良或优化其缓蚀性能。 气相防锈纸是一种易挥发性的防锈包装材料，它是通过在具有良好物理强度的中性纸基上均匀涂布含有挥发性的化学缓蚀剂而制成的 [ 1 ] 。在室温下，这种气相防锈纸的表面能够缓慢地散发出一种气体，可减少对金属基体表面的氧化，而且这种气体能与空气中的多种腐蚀介质在金属表面生成一种肉眼看不见的保护膜，使其免于锈蚀或降低锈蚀速率。由于生成的复合防锈气体无孔不入，所以即使防锈纸不与金属表面直接接触，也能使金属制品表面、内孔和沟缝在气体环境下得到有效保护 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] 。这类气相缓蚀剂在一定pH值范围内，以不同的比例来配制成水相为主体的溶液，经浸图工艺均匀地涂覆在防锈纸的表面，从而制备成不同材料要求的气相防锈纸包装材料。 因此，本文主要对某公司所提供的气相防锈纸中某种气相缓蚀剂进行分析，通过熔点测试可初步确定该固体样品是否为单一物质，经紫外光谱和红外光谱测试进一步推测该物质可能含有的官能团，再通过核磁共振氢谱测试得出该物质可能含有二环己胺离子，离子色谱测试可确定该样品中是否含有亚硝酸根离子。最终通过不同离子体的二环己胺盐在钢铁防腐气相缓蚀剂中的分析，确定该固体样品可能为亚硝酸二环己胺。
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user: 2. 试验部分 2.1. 主要仪器 仪器：精密pH试纸；X-4显微熔点仪；日本岛津UV3600紫外可见分光光度计；Nicolet 6700傅立叶红外光谱仪(溴化钾压片，美国Nicolet公司)；BrukerAvance II 400 MHz核磁共振波谱仪(氘代氯仿作溶剂，四甲基硅烷为内标，瑞士Bruker公司)；日本岛津公司LC-2010 PLUS离子色谱。 2.2. 固体样品物理性能测试 1) 颜色、状态：直接观察； 2) pH：精密pH试纸； 3) 熔点：采用X-4显微熔点仪测试仪器，用玻璃棒沾取少量该固体样品，平铺在玻片上，通过显微镜观察并记录最后熔点范围。 4) 溶解性：取一定量的样品分别置于多个25 mL的烧杯中，并用相同体积的不同溶剂(如去离子水、甲醇、乙醇、二氯甲烷、氯仿、乙醚和甲苯等)溶解，静置数小时后观察其溶解性。 2.3. 固体样品的紫外光谱测试 采用日本岛津UV3600紫外/可见/近红外分光光谱仪对固体样品进行紫外测试，测试前用适量去离子水将样品溶解，待用。取一定量溶解后的样品，待仪器运行稳定后，以去离子水作为空白样，再对样品进行紫外测试。 2.4. 固体样品的红外光谱测试 采用美国尼高力公司Nicolet 6700型傅立叶红外光谱仪对固体样品进行红外测试，测试前先将溴化钾烘干备用。取一定量样品，待仪器运行稳定后，以溴化钾的红外光谱图作为空白样，再对固体样品进行红外测试。 2.5. 固体样品的 1 H NMR测试 采用BrukerAvance II 400 MHz核磁共振波谱仪对固体样品进行核磁测试，测试前，用氘代氯仿将适量固体样品溶解在核磁管中，再对样品进行核磁测试，分析 1 H NMR。 2.6. 固体样品的离子色谱测试 采用日本岛津LC-2010 PLUS离子色谱仪检测固体样品中的离子成分。以碳酸钠、硫酸氢钠为流动相，测试前，称取样品10 mg置于烧杯中，并用适量去离子水溶解，再用容量瓶定容，配制成1 ppm的溶液，待测。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 固体样品物理性能分析 由上述物理性能测试可知：该固体样品是白色至淡黄色晶体，几乎无气味，易溶于水，其水溶液的pH值为7左右，呈中性。其样品也溶于甲醇、乙醇、二氯甲烷及氯仿，但不溶于乙醚和甲苯。经X-4熔点仪测出该固体物质的熔点范围为167.5℃~173.0℃。 3.2. 固体样品的紫外光谱分析 由图1可知，该固体物质在270~400 nm之间有最大吸收峰值，而已知芳香苯环的紫外最大吸收峰值在230~270 nm，说明该固体样品中不含芳香类苯环体系，并可以初步推测有可能是烷烃类的有机胺盐。 图1. 固体样品的UV谱图 3.3. 固体样品的红外光谱分析 由图2可知，红外图谱在3436.3 cm −1 处有吸收峰值，可能是N-H键的伸缩振动；在2800~2900 cm −1 的范围内的中等强度的吸收峰，应可归属为饱和CH 2 键的伸缩振动；在1617.1 cm −1 处吸收峰应归属为N=O双键的伸缩振动；在1271.0 cm −1 处有吸收峰，可归属为P=O键振动特征，说明可能含有P=O基团的化合物。 3.4. 固体样品的 1 H NMR谱图分析 从图3 1 H NMR图谱中， 1 H NMR (400 MHz， CDCl 3 )其化学位移分别是3.12 (tt， J = 11.6， 3.8 Hz， 1H， NHCH )，2.05 (d， J = 10.6 Hz， 2H， NHCHCH)，1.87~1.73 (m， 2H， NHCHCH)，1.64 (d， J = 11.2 Hz， 1H， NHCHCH 2 CH 2 CH)，1.57~1.41 (m， 2H， NHCHCH 2 CH)，1.32~1.08 (m， 3H， NHCHCH 2 CH， NHCHCH 2 CH 2 CH)。结构式如图4。 图2. 固体样品的FT-IR谱图 图3. 固体样品的 1 H NMR谱图 图4. 结构式
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user: 4. 结论 经紫外、红外及核磁测试表征，该固体样品可以初步确定为二环己胺盐；进一步的离子色谱测试表征表明该固体样品中可能含有亚硝酸根阴离子，最后对照其表观形态、pH值、溶解性及所测的熔点范围(167.5℃~173.0℃)，最终确定该固体样品可能为亚硝酸二环己胺。亚硝酸二环己胺是一种缓蚀性能较好的气相缓蚀剂，它能使黑色金属表面钝化从而保护金属。但亚硝酸根离子是强致癌物，因此，可以使用硝酸根、磷酸二氢根等来代替亚硝酸根，从而得到绿色、低毒且缓蚀效果优良气相缓蚀剂。
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user: 摘 要 三游洞位于宜昌长江西陵峡峡口，现存摩崖题刻47处，2006年被国务院列为第六批全国重点文物保护单位。在长期的自然营力和人类活动的影响下，三游洞摩崖题刻产生了严重的渗水病害，造成题刻起壳、剥落，不利于摩崖题刻的长期保存。为研究三游洞渗水病害的机理，进行了三游洞水文地质和岩溶调查，查明了三游洞景区的地层岩性、地下水类型、埋藏条件和裂隙发育规律，揭示了地下水的补给、径流和排泄的规律，建立水文地质模型，分析了渗水机理，提出了病害防治对策。 关键词 :三游洞题刻，渗水病害，水文地质模型，防治对策 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 三游洞在湖北省宜昌市西北十公里西陵山北峰的峭壁之间，背靠长江西陵峡口，面临下牢溪，坐南朝北 [ 1 ] ，如图1所示。宜昌三游洞历史悠久，据史料记载，唐元和十四年(公元819年)，诗人白居易作诗书于洞壁 [ 2 ] 。到了宋代嘉祐元年(1056年)，文学家苏洵、苏轼、苏辙父子三人途经夷陵，寻胜游洞，赋诗唱和 [ 3 ] 。除此之外，还包括抗战题刻 [ 4 ] 。三游洞地势险峻，下临深谷，峭壁百丈，形若穹厦。洞室开阔，宽约30 m，深约20 m，高约6 m。洞中分前后两室：前室明旷，诗文满壁。后室幽奥，陈列有白居易、白行简、元稹三人的汉白玉石刻像。三游洞为湖北省重点文物保护单位，是宜昌市峡口风景区的一个重要组成部分，2006年被列为第六批全国重点文物保护单位。 历经数百万年岁月的洗礼，在各种自然、地质营力长期作用及人类活动影响下，三游洞及保护区范围内发育形成了危岩体、渗水、表面起壳、剥落等工程地质问题和病害，严重威胁游客的人身安全及题刻的长久保存。杨毅 [ 5 ] 曾对三游洞50余处题刻的风化程度及风化产物进行了分析，但对渗水病害机理分析较少。而石质文物的病害防治必须重视对地质环境的研究，地质环境的研究是彻底根治病害的前提 [ 6 ] 。本文首先查明了三游洞渗水病害的类型及其成因，给出三游洞题记的水文地质模型，揭示渗水病害形成的机理，最后给出防治对策。
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user: 2. 题刻水害类型及其影响 题刻区水害类型有裂隙渗水、凝结水、坡面雨水，其中裂隙渗水是对题刻影响最大的，受裂隙渗水影响的题刻占总数74.19% (如图2)。对三游洞共31块题刻进行调查后，由裂隙控制的外室渗水环境，导致了南壁17块题刻中有14块不同程度的遭受渗水及碳酸钙附着影响；在东壁第二区内的4块题刻，其赋存于裂隙发育的钟乳石上，由于裂隙不断有地下水渗出，导致题刻表面苔藓大量滋生，题刻本体风化、溶蚀加剧，碳酸钙附着；西壁第三区的3~6号题刻，受裂隙切割渗水及崖壁挂流影响突出。题刻区内高湿度气候，题刻位于半开放的溶洞空间内，由于空气不流通，促进水汽凝结，题刻表面形成凝结水，苔藓及其它微生物生长，受凝结水影响的题刻占总数19.35%。 图1. 宜昌三游洞摩崖题刻区全貌 图2. 受不同水害影响题刻数量统计图
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user: 3. 题刻渗水机理分析 3.1. 地形地貌 三游洞摩崖题刻区在地貌上相对独立，北西侧宜莲(宜昌市–莲沱)公路将其与西陵山体隔开，北、南两侧下牢溪、长江下切形成深谷，东侧由一相对缓坡与临江陡崖相接。山顶平台较为开阔，由多块岩溶洼地组成(如图3所示)，是题刻区内直接接受大气降水、地表生活用水补给的源点。 平台接收的大气降水、生活用水补给，沿岩溶裂隙下渗到三游洞内，形成裂隙渗水，在长江及下牢溪两侧会沿着崖壁面以挂流的形式向下方题刻区排泄，形成面流。 3.2. 地质构造 由于区内岩体受构造运动影响变形强烈，构造裂隙和卸荷裂隙较发育，岩体完整性较差。围绕三游洞题刻区进行裂隙调查，共统计出41条裂隙，裂隙的玫瑰花图如图4所示。从统计结果可以看出，区内裂隙以NWW-SEE，NE-SE向最为发育，该结果与这一地区区域裂隙分布规律吻合。裂隙的发育控制了地下水的运移及岩溶发育环境 [ 7 ] ，区内岩溶洞穴的普遍发育与裂隙亦息息相关，三游洞耳洞，正是两组主要裂隙交汇之处，加剧地下水汇聚，加速白云岩溶解所致，由于题刻区岩石裂隙发育，为地表水提供了渗流到题刻周边的通道，形成水害。 3.3. 地层岩性 宜昌三游洞摩崖题刻区地层主要由第四系覆盖层和寒武系上统三游洞群白云岩、灰岩组成 [ 8 ] 。由于洞室和摩崖题刻主要分布在白云岩中，为了进一步分析摩崖题刻所依附白云岩的物理、化学和微观结构，对研究区的白云质灰岩及白云岩进行物理力学测试，化学成分、矿物组成测试，扫描电子显微镜分析，表明：区内三游洞群地层可分三套：上部为巴楚乐宫、至喜亭基础下部含碎石条带白云质灰岩，抗溶蚀性能较强；中部为出露于三游洞底部、顶部及陆游泉一带的细晶白云岩，区内溶洞一般顺该层发育；底部为白云质灰岩，岩结构致密，坚硬性脆，不易风化，但易被溶蚀，在区内主要形成两侧陡崖。三游洞底部的细晶白云岩渗透性差，阻止了岩溶裂隙水的下渗，导致裂隙水在此层出露，形成水害。 3.4. 渗水机理分析 由于三游洞顶板岩体与西陵山体完全隔开，故三游洞内的渗水主要来自洞顶平台补给。 三游洞景区内大气降水及生活用水在重力作用下垂直下渗补给覆盖于三游洞顶部的残坡积层，由于该层具有一定的孔隙，故能存储部分渗水形成松散岩类孔隙水。一般来说该层土所储水量有限，可形成季节性泉水，其常沿第四纪覆盖层及下伏基岩层交界面处以挂流的形式出露。水化学分析的结果表明：三游洞泉水中钙镁离子差异巨大，说明区内岩石可溶性强，且含有较多碳酸镁及碳酸钙化合物，地下水的循环条件较好。按库尔洛夫分类标准，石刻区地下水属低矿化度、弱碱性的重碳酸钙镁型：HCO 3 -Ca∙Mg水。 图3. 三游洞三维地表形态分布图 图4. 裂隙统计玫瑰花图 由于整个区内的最低排泄基准面位于长江，故更多的渗水将以巴楚乐宫及至喜亭一带的分水岭为界，向两侧沿着前期溶蚀形成的通道及构造裂隙继续下渗，直至遇到细晶白云岩层，因该层可溶性及渗透性均较差，故上部水流渗流至该层时流向发生突变，主要沿两套地层的接触面发生向最低排泄基准面的流动。当有裂隙切穿该弱透水层时，沿层面流动的水会继续下渗，直至遇到下一层细晶白云岩时，流向再次转为沿层面流动。当具备一定的排泄空间时，沿层面流动的水流将出露形成泉点。可将发育于上述这套白云质灰岩中的地下水定义为碳酸盐岩类裂隙溶洞水。由于该区内岩层整体北东倾，这决定了地下水沿层面的流动只能朝北东向，故其出露的地点更多只能在区内北东侧(下牢溪侧)。三游洞摩崖题刻水文地质剖面如图5所示。
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user: 4. 水害防治对策 4.1. 防治原则 4.1.1. 安全第一 水害治理措施应能有效保持摩崖题刻本体的稳定与安全状态；任何保护措施不得破坏文物本体，或对其构成威胁。 4.1.2. 以排为主，综合治理 坚持以疏排为主，堵截为辅，多种工程措施有机结合。主要采取将水导出文物区，防止直接堵截，产生过大的水压，造成新的出水点。 4.1.3. 源头入手，区别对待 由于彻底查明山体内部的渗水通道，难度较大，因此治理地表水相对简单，治理应考虑阻止地表水转化为地下水，从源头治理。同时，对石刻分布的区域作为重点治理区域，其他区域不予过多干预，防止改变区域水文条件，对文物区带来不利影响。 4.2. 洞内裂隙渗水防治对策 洞内裂隙渗水治理主要采取地面防渗铺盖、修筑排水沟、裂隙灌浆措施。包括： 图5. 三游洞水文地质剖面图 1) 对三游洞山顶区域进行防渗铺盖，阻滞地表水渗入岩体裂隙。铺盖材料选用膨润土防水毯，具有体积小、重量轻、施工简便、抗剪强度和抗拉强度高与柔性好的特点，可以较好地适应不均匀性沉降，对人体无害无毒，对环境无影响，具有良好的环保性能。 2) 修筑排水沟，在崖顶的修建以崖顶中心为最高点，向四周呈放射状的排水系统，沟底与防水毯搭接，阻止雨水进入题刻区域，将崖顶区域雨水及时排走。 3) 对题刻有影响的裂隙进行灌浆处理，无影响的通道不进行处理，作为天然排泄通道，起导水作用。 4.3. 洞内凝结水防治对策 过大的湿度及洞窟内外的温差变化、通风状况等是凝结水形成的主要机理。因此凝结水的主要治理措施为:一是降低石窟内的湿度；二是加速石窟内空气与外界空气的流通。对洞内题刻的保护，建议清洗受污染表面，保持干燥通风环境，对价值意义较高的题刻，可采用一定的隔离手段，如透明隔离箱密封，避免其与空气直接接触。 4.4. 洞外雨水面流防治对策 三游洞外处于露天环境的石刻，原有龛檐或引水槽因年代久远均已不同程度损坏或残缺。针对此，本工程石刻区水害治理设计与原水害防治措施一致。即采取在石刻上部设置龛檐和导流槽的方式，各工程措施制式均与原设施观感保持一致。龛檐防止雨水直接飘落到题刻表面和隔断岩壁挂流，导流槽亦能切断岩壁挂流，改变挂流走向。
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user: 5. 结论 通过对宜昌三游洞摩崖题刻区地形地貌、地层岩性、节理裂隙和地下水类型等进行分析，建立了三游洞水文地质模型，查明了地下水的补给、径流和排泄条件，得出了三游洞渗水病害机理，最后给出了防治对策，达到文物长久保存和研究利用的目的，具体结论如下： 1) 三游洞摩崖题刻的水害主要为裂隙渗水、凝结水、坡面雨水病害，其中以裂隙渗水影响最为严重。 2) 水害产生与题刻区的地形地貌、地质构造，地层岩性有直接关系。 3) 石刻水害防治应根据不同的水害类型和产生机理，采取对应的治理措施。对于洞内裂隙渗水情况，可以采用地面防渗铺盖，修建排水系统，裂隙灌浆治理措施。对于洞内凝结水，可采用通风、干燥处理。对于洞外存在坡面流水害的题刻，可采用与环境协调的龛檐和导水槽进行治理。
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user: 摘 要 目的：探讨缝隙连接蛋白-43在膀胱出口部分梗阻大鼠逼尿肌细胞膜中表达的变化。方法：将33只雌性Wistar大鼠(10周龄)分为模型组和假手术组，两组大鼠分别于术后2、4和8周处死，同时进行膀胱内测压、缝隙连接数量、形态变化及缝隙连接蛋白-43的检测。结果：在模型组中缝隙连接的数量显著降低，并且术后4周缝隙连接蛋白-43在模型组大鼠逼尿肌细胞膜上的表达显著降低。模型组大鼠逼尿肌细胞膜上的缝隙连接数量也明显减少。结论：正常的排尿过程是通过逼尿肌细胞间的缝隙连接直接作用的结果。缝隙连接介导的细胞间通讯功能障碍可能是导致排尿功能障碍的原因。 关键词 :缝隙连接蛋白-43，膀胱，梗阻，动物，模型，逼尿肌细胞，细胞膜 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 人类膀胱出口部分梗阻(Partial bladder outlet obstruction，P-BOO)常继发于慢性前列腺增生，一般认为膀胱逼尿肌细胞的增生、肥大是该病的病理学基础。这些组织学的改变伴随相应的功能改变，包括残余尿量增多，尿频及排尿压的改变。缝隙连接是通过位于相邻细胞膜之间的连接子构成，其化学成分为六聚体的连接蛋白。目前发现在人体中至少有13种缝隙连接蛋白基因。缝隙连接蛋白介导的细胞间通讯可能在调控胚胎的发育，细胞的生长、分化等方面发挥重要作用。缝隙连接是人体及动物细胞膜上的特殊结构，构成了相邻细胞间的特殊通道，信息离子(包括钙离子)及小分子可通过此通道进入细胞间的转运，调节许多重要的生理功能。在心血管疾病的基础研究中发现缝隙连接介导的细胞间通讯参与了细胞间的兴奋传导 [ 1 ] 。缝隙连接介导的细胞间通讯直接参与相邻细胞间神经信号的传收缩方面发挥重要作用 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] 。 Haefliger， J.A.等通过实验发现缝隙连接蛋白-43(Connexin-43，Cx-43)是大鼠逼尿肌细胞中重要的连蛋白。在人类的逼尿肌细胞中同样发现了Cx-43与Cx-45 [ 5 ] [ 6 ] 。在一项关于排尿功能障碍的研究中发现Cx-43在逼尿肌中的表达发生改变。Fry等指出逼尿肌的兴奋依赖于缝隙连接的存在 [ 7 ] [ 8 ] 。 本实验通过探讨P-BOO的大鼠逼尿肌细胞膜上缝隙连接和Cx-43表达的变化，为逼尿肌中缝隙连接的改变可导致尿流动力学改变提出了形态学和免疫组织化学的证据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. P-BOO动物模型的建立 10周龄雌性Wistar大鼠，体重170~260 g，均由北京维通利华实验动物有限公司提供(动物合格证SCXK (京) 2007-0009、SPF级)。33只大鼠被随机分为6组：模型组中造模后2周处死6只；造模后4周处死6只；造模后8周处死6只。假手术组中2周处死5只；4周处死5只；8周处死5只。上述各组大鼠处死后取膀胱逼尿肌组织进行后期实验。P-BOO动物模型的建立参照Mattiasson 和 Uvelius [ 9 ] 和Malmgren等 [ 10 ] 的造模方法。大鼠通过腹腔注射25%乌拉坦(1 g/kg)麻醉后，用硬膜外导管(直径1 mm)经尿道插入膀胱，小心游离尿道，游离至近膀胱颈口处，4-0 PGLA医用可吸收丝线结扎近膀胱颈口处尿道，结扎松紧度以线结刚靠近尿道为宜，拔出导管，缝合皮肤。假手术组操作同上，但不结扎尿道。 2.2. 排尿压测定 将实验大鼠，25%乌拉坦(1 g/kg)腹腔注射麻醉 [ 11 ] ，仰卧固定，用硬膜外导管(直径1 mm)经尿道插入膀胱，硬膜外导管接经三通管与尿动力仪及微量泵(UDS-600，加拿大)相连。标定零点，生理盐水经微量灌注泵向膀胱灌注，速度为0.2 mL/min [ 12 ] ，同步记录随容积增加膀胱压力波形、大小变化，至尿道口周围溢水定义为膀胱最大容量(灌注速度×灌注时间=膀胱最大容量)并记录膀胱残余尿量。 2.3. 免疫组织化学检测 所有膀胱逼尿肌样本均用4%的多聚甲醛浸泡固定，常规石蜡包埋，连续切片。随后加入一抗兔抗大鼠的Cx-43多克隆抗体(1:100武汉博士德生物工程有限公司)，过氧化物酶标记的二抗(1:100武汉博士德生物工程有限公司)。对照组中用0.01 mmoL/L PBS (武汉博士德生物工程有限公司)代替一抗作阴性对照。 2.4. 冰冻蚀刻分析 样本加戊二醛固定，随后加入30%的甘油缓冲液，置入液氮中冷冻。样本在−112℃的冷冻断裂机(JFD-7000日本)中被反复破碎断裂。样本在次氯酸钠溶液中被消化，随后加入浓度为1:1的甲基氯仿对丙烯基苯酚和100%二甲基甲酰胺。将复合物置于网格中在透射电子显微镜(JEM-1210日本)下观察。 2.5. 免疫蛋白印记(Western-blotting)检测 膀胱逼尿肌组织被剔除粘膜层后加入1 mmol/L碳酸氢钠溶液和2 mmol/L苯基甲磺酰氟化物蛋白酶抑制剂的混合片剂(Roche美国)，同时经高频声波处理。Western-blotting和SDS-PAGE 电泳(每个泳道上样40 μg)。为了检测Cx-43的含量，先后加入兔抗大鼠的Cx-43多克隆抗体和用过氧化物酶标记的荧光二抗。检测结果采用增强化学发光法显色，X光片曝光显影，凝胶图象处理系统(EPA-3000日本)分析目标带的分子量和净光密度值。 2.6. 统计学分析 所有数据均以均数±标准差( x ¯ ± s)表示，Mann-Whitney U test进行模型组和假手术组的比较。结果差异显著，有统计学意义(P < 0.05)。
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user: 3. 结果 3.1. 膀胱重量及容量 对18只模型组大鼠及15只假手术组大鼠进行测定，发现模型组大鼠的膀胱重量较假手术组大鼠显著增加(P < 0.01；表1)。在术后4周和8周模型组大鼠的膀胱容积较术后2周显著增加(P < 0.05)。 3.2. 膀胱测压结果 在假手术组中大鼠的排尿模式正常。在术后2周模型组大鼠的排尿压较假手术组显著增加。然而，模型组中术后4周大鼠的排尿压较术后2周显著降低。在模型组中术后8周大鼠的逼尿肌没有发生收缩，同时出现尿失禁现象(图1)。 3.3. 大鼠逼尿肌细胞膜中Cx-43的免疫组织化学染色结果 对模型组和假手术组大鼠逼尿肌细胞进行Cx-43的免疫组织化学染色观察。Cx-43在术后2周模型组大鼠的逼尿肌细胞胞膜、胞质、胞核中均有表达。另外，术后4周在模型组大鼠逼尿肌细胞的胞质、胞核和胞膜上均有部分表达。然而，在术后8周模型组大鼠逼尿肌细胞中Cx-43主要被检测到在胞质或胞核中，胞膜未见其表达(图2)。在假手术组大鼠的逼尿肌细胞中Cx-43的表达未见异常。模型组中随着术后时间的延长，Cx-43的表达也随之降低：2周100%；4周76.4% ± 2.3%；8周4.3% ± 1.6%。 3.4. 缝隙连接的形态学分析 观察缝隙连接的数量。每个缝隙连接像凝聚的圆形颗粒(图3)。在假手术组大鼠逼尿肌中存在许多缝隙连接，并且每个网格中缝隙连接的数量分别为：术后2周3.2 ± 0.12；术后4周2.1 ± 0.77；术后8周3.0 ± 0.57。然而，在模型组大鼠逼尿肌中缝隙连接的数量在对应时间内较假手术组显著降低，分别为：术后2周1.7 ± 0.42；术后4周1.1 ± 0.55；术后8周没有检测到缝隙连接的存在。缝隙连接的形态在两组 Table 1 Bladder weight and capacit 术后2周 术后4周 术后8周 膀胱重量(g) 假手术组 模型组 膀胱容积(mL) 假手术组 模型组 0.1 ± 0.0 0.9 ± 0.2 * 0.5 ± 0.3 4.9 ± 2.2 * 0.1 ± 0.0 1.2 ± 0.4 * 0.5 ± 0.3 10.5 ± 3.8 * 0.2 ± 0.0 1.6 ± 0.5 * 0.6 ± 0.3 13.1 ± 3.1 * 表1. 膀胱重量及容积 注： * P < 0.01。 图1. 膀胱测压。假手术组大鼠排尿期膀胱内压力正常，模型组中大鼠在术后第2周(PB2W)、第4周(PB4W)、第8周(PB8W)排尿期膀胱内压力均发生变化。其中，术后2周膀胱内压力较假手术组明显增高，且随着时间的推移有逐渐减弱的趋势，在术后第8周出现无逼尿肌收缩并出现尿失禁 图2. 缝隙连接蛋白-43免疫组织化学染色(×400)。(A) 阳性对照组选取Cx-43在大鼠心肌细胞膜上的表达；(B) 假手术组术后8周Cx-43在大鼠逼尿肌细胞胞膜上的表达；(C) 阴性对照组；(D) 模型组术后2周Cx-43在大鼠逼尿肌细胞胞膜、胞质和胞核上均有表达；(E) 模型组术后4周Cx-43在大鼠逼尿肌细胞胞膜、胞质和胞核上均有部分表达；(F) 模型组术后8周大鼠逼尿肌细胞中Cx-43在胞质或胞核中有表达，胞膜未见其表达 图3. 冰冻蚀刻分析逼尿肌中缝隙连接的形态(×25，000) (白色箭头所示缝隙连接；A假手术组、B 模型组) 中没有差异。 3.5. Western-blotting检测与SDS-PAG电泳结果 在假手术组中Cx-43的表达没有显著不同。在模型组中Cx-43的表达较假手术组显著增高。而且，在模型组中Cx-43的表达随时间的延长而逐渐增强(图4)。
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user: 4. 讨论 通过缝隙连接介导的细胞与细胞间的信息通讯对排尿功能调节有密切关系。术后2周Cx-43在两组大鼠逼尿肌细胞膜上均有表达，说明逼尿肌的收缩是通过缝隙连接介导的。术后4周模型组大鼠逼尿肌细胞中Cx-43在胞质、胞核及胞膜上均有表达。在术后8周模型组大鼠逼尿肌细胞中Cx-43主要集中表达于胞质或胞核上而不是在胞膜上。上述结果提示细胞膜上Cx-43表达降低导致了缝隙连接介导的细胞间通讯障碍。通过电子显微镜观察发现模型组大鼠逼尿肌中随着梗阻时间的延长缝隙连接数量逐渐减少。因此，Cx-43在细胞膜上表达的降低与逼尿肌的收缩和梗阻时间呈平行关系。 Christ等 [ 13 ] 报道在膀胱过度活动症的大鼠逼尿肌中Cx-43mRNA和蛋白表达是显著增加的。在本研 图4. 缝隙连接蛋白-43的免疫蛋白印记分析。模型组中Cx-43在大鼠逼尿肌细胞中的表达显著高于假手术组，且随着时间的推移在模型组中Cx-43的表达也明显增高 究中发现Cx-43在模型组中的表达较假手术组显著增强，并且通过制造P-BOO导致Cx-43在逼尿肌中的表达上调。Cx-43的表达上调与Cx-43在胞膜中的表达下降可能是由于P-BOO所致逼尿肌细胞过分拉伸。 国外报道Cx-43参与膀胱壁收缩来增加排尿压。然而，逼尿肌的收缩和Cx-43的定位没有明确 [ 14 ] 。Cx-43的表达位置在研究缝隙连接耦连功能上发挥重要作用 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] 。本实验结果提示在P-BOO的大鼠逼尿肌细胞膜上Cx-43的表达是降低的。因此，相信当Cx-43不能表达在逼尿肌细胞膜上时膀胱逼尿肌细胞是不能发生同步收缩的。 在膀胱逼尿肌中缝隙连接介导的细胞间通讯的功能障碍，究其原因是因为Cx-43在逼尿肌细胞膜上的表达降低所致。因此，正常的电信号不能在逼尿肌细胞中传递，致使排尿功能障碍。所以，缝隙连接的改变可能是导致排尿功能障碍性疾病发生的原因之一。
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user: 摘 要 目的：探讨胞壁酰二肽(MDP)对儿童急性白血病骨髓树突状细胞(DC)功能的影响。方法：应用Ficoll-Hypaque法分离急性白血病患儿骨髓单个核细胞，对照组：用细胞因子诱导培养DC；实验组实验组分为5个亚组，1组：与对照组等量的MNC+ MDP (10 ug/l)，2~5组分别对应为：与对照组等量的MNC + 与对照组等量的细胞因子 + 不同浓度的MDP (10 2 ug/l，10 2 ug/l，10 3 ug/l，10 4 ug/l)；分别诱导培养DC，第9天收获各组DC，与同种异体外周血T淋巴细胞混合反应96 h，观察淋巴细胞的增殖情况，ELISA方法检测上清液中IL-12、IFN-γ的含量；经HL-60抗原致敏后的DC与T淋巴细胞混合培养6 d后，加入HL-60细胞共同孵育12 h，LDH释放改良法检测各组细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性。结果：1) 混合淋巴细胞反应显示：① T细胞扩增指数：固定刺激细胞数，不同组比较，对照组与1组、2组比较均无显著性差异(p均 > 0.05)；3组、4组、5组T细胞扩增指数明显高于对照组，亦明显高于1组(p均 < 0.01)。当刺激细胞数量为1 × 10 3 至1 × 10 4 ，同组间T细胞扩增指数逐渐增加(p均 < 0.01)，1 × 10 4 与5 × 10 4 之间T细胞扩增指数的增加无统计学意义(p > 0.05)。② T细胞分泌细胞因子：当刺激细胞数为5 × 10 4 时，对照组与1组、2组IL-12含量的比较均无显著性差异(p > 0.05)；3组、4组、5组明显高于对照组，亦明显高于1组(p均 < 0.01)。对照组与1组、2组IFN-γ含量的比较均无显著性差异(p > 0.05)；3组、4组、5组明显高于对照组，亦明显高于1组(p均 < 0.01)。2) 杀瘤活性结果显示：实验各组杀伤HL-60细胞活性均较对照组显著增强(p均 < 0.01)；当MDP浓度由10 2 ug/l递增至10 4 ug/l，2组、3组、4组、5组组间比较，杀伤活性逐渐增加(p均 < 0.01)，以5组杀伤HL-60细胞活性最强。结论：① 当MDP诱导后的DC数量 ≥ 1 × 10 3 时，即能促进T细胞的增殖，且有MDP浓度依赖性。② 经MDP诱导后的DC具有促进T细胞分泌的作用，与细胞因子联合作用更强。③ MDP能从儿童急性白血病骨髓中诱导出有较强的抗原刺激能力的DC，且有MDP浓度依赖性。 关键词 :胞壁酰二肽，树突状细胞，白血病，免疫功能，增殖 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 免疫细胞治疗是继化疗、骨髓移植(bone marrow transplantation， BMT)后治疗白血病的一种新方法，在治疗白血病及清除微小残留病(minimal residual disease， MRD)中被寄予很大希望。树突状细胞(dendritic cell， DC)是目前所知抗原提呈能力最强的抗原提呈细胞(antigen presenting cells， APC)，在肿瘤细胞和 T淋巴细胞的相互作用中起桥梁和枢纽作用。大量的动物实验证明，DC可以诱导机体特异性免疫反应的发生，使机体得以抵御肿瘤的入侵或消灭机体现存的肿瘤 [ 1 ] [ 2 ]。胞壁酰二肽(N-乙酰胞壁酰-L-Ala-D-isoGln，即壁氨酰-L-丙氨酰-D-谷氨酰胺，Muramyl Dipeptide，简称MDP)是具有免疫增强活性的分枝杆菌细胞壁的最小有效成分 [ 3 ]，对肿瘤及病原微生物具有免疫刺激及免疫治疗作用。本文就MDP在体外对儿童急性白血病骨髓来源DC的扩增和相关免疫功能进行研究。