DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 5. 算例仿真 假设某片区域有电动车共200辆，其中电动出租车与电动私家车各占一半，采用快速充电模式，充电功率设为25 KW；设每天早中晚有三个集中充电时段，对应电动出租车充电时段概率为0.2、0.5和0.3，电动私家车充电时段概率为0.1、0.2和0.7；规定一辆车每日只充电一次，且假设用户在电池荷电状态低于0.8时才会出现充电行为；设起始SOC服从正态分布，电动出租车起始SOC满足N(0.3， 0.1 2 )，电动私家车起始SOC满足N(0.6， 0.1 2 )。充电负荷预测仿真流程如下： 1) 输入电动出租车和电动私家车各自的仿真数目100辆，令算法循环次数为100次，每次记为j，其初始值设为1； 2) 按照电动出租车和电动私家车各自起始SOC服从的正态分布函数抽取SOC； 3) 判断起始SOC是否满足充电条件，即起始SOC是否大于0及小于0.8，若满足充电条件则累加计数一次；若不满足则无充电行为，即充电功率为0； 4) 由上一步计数得出所有具有充电行为的电动车总数，根据充电时段概率，计算分布于各个集中充电时段充电的车辆数； 5) 计算两种车各时段的充电负荷，判断循环是否达到100次，若没有，则继续；若j=100，则求取运行100次后两类车各时段充电功率的平均值； 6) 将同一时段的电动出租车和电动私家车的充电功率平均值求和，得到每个充电时段的总需求； 7) 比较各充电时段的充电总负荷，得到一天中最大充电负荷的大小。 通过MATLAB仿真得到充电负荷预测结果如表1所示： Table 1 Charge load prediction result 充电时段 早(时段一) 中(时段二) 晚(时段三) 车辆类型 出租车 私家车 出租车 私家车 出租车 私家车 充电功率/KW 500 250 1249.8 495.25 749.75 1729.8 总计/KW 750 1745.05 2479.55 表1. 充电负荷预测结果 由表1可知，该区域最大充电功率出现在时段三，该时段私家车充电功率明显大于出租车充电功率，且总充电功率大小为2479.55 KW，约2.48 MW。 以图1所示10 KV配电网为例，对电动汽车充电站的配网规划进行仿真。虚线表示可能新建的线路，该拓扑有20个节点，节点1为变电站，节点2-15和17为传统负荷节点，设定节点16、18、19和20为充电站待选站址，规划年限为5年。 该区域充电需求为2.48 MW，设电动汽车充电负荷功率因素为0.9，总充电负荷为2.76 MVA。拟建设两种容量的充电站，第一种为0.89 MVA，可满足0.8 MW的充电负荷，第二种为0.98 MVA，可满足0.88 MW的充电负荷。 设定充电站待选节点18和节点19采用第一种容量类型，充电站单位容量造价为220万元/MVA，设定充电站待选节点16和节点20的采用第二种容量类型，充电站单位容量造价分别为180万元/MVA和200万元/MVA。设充电站单位容量年运行成本1.4万元/年，线路年运行成本为2万元/年。要求电压幅值偏差为±5%，线路容量上限为5MVA，且仿真时，设置变电站的起始容量数值很大，即不考虑变电站的扩容。 图1. 算例节点图 利用MATLAB和MATPOWER对算例进行求解。求解流程图如图2所示： 图2. 算例求解流程图 仿真求解可得，满足辐射状约束和充电负荷需求的线路集合有508种情况，通过MATPOWER计算网络潮流，满足电压上下限约束以及线路传输容量约束的有65种，由于变电站容量初始值设定为一个较大的值，所以变电站无需扩容。因此，满足模型所有约束条件的线路集合共65种方案，均新建线路为18条，新建充电站数量为3个，仿真运行可得算例配网规划的结果，同时，为验证本文所提方法的准确性，选择了两个其他方案与最优方案进行比较，如表2和表3所示。 Table 2 Planning results of different scheme 规划方案 新建线路 充电站选址节点 最优方案 L 1 -L 7 、L 10 -L 18 、L 20 、L 22 节点16、18、20 方案一 L 1 -L 7 、L 10 -L 15 、L 17 -L 18 、L 20 -L 22 节点18、19、20 方案二 L 1 -L 7 、L 10 -L 17 、L 19 -L 21 节点16、18、19 表2. 不同方案的规划结果 Table 3 Cost comparison of different scheme 成本 规划方案 线路成本/万元 充电站成本/万元 总成本/万元 最优方案 8557 588.15 9145.15 方案一 9174 606.92 9780.92 方案二 9475 587.32 10062.32 表3. 不同方案的成本比较 对比方案可知，本文规划所得最优解的总成本最小，为9145.15万元，新建线路包括L 1 -L 7 、L 10 -L 18 、L 20 、L 22 ，投建的电动汽车充电站为节点16、18、20，对应的网络拓扑图如图3所示。其节点电压数据以及线路容量数据如表4和表5所示。 图3. 最优规划方案的拓扑图 Table 4 Load node voltage of the optimal planning schem 负荷节点编号 2 3 4 5 6 7 电压(p.u.) 0.9877 0.9894 0.9872 0.9925 0.9771 0.9829 负荷节点编号 8 9 10 11 12 13 电压(p.u.) 0.9904 0.9869 0.9595 0.9633 0.9704 0.9721 负荷节点编号 14 15 16 17 18 20 电压(p.u.) 0.9839 0.9878 0.9612 0.9679 0.9790 0.9629 表4. 最优规划方案的负荷节点电压 Table 5 Line transmission power of the optimal planning schem 支路编号 线路传输有功功率/MW 线路传输无功功率/MVar 线路传输容量/MVA L 1 2.6160 1.7946 3.1724 L 2 2.0993 1.4117 2.5298 L 3 1.8799 1.2421 2.2532 L 4 0.2505 0.2253 0.3369 L 5 2.0349 1.3243 2.4279 L 6 1.9704 1.3168 2.3699 L 7 1.4645 0.8945 1.7161 L 10 1.6580 1.0504 1.9628 L 11 1.7612 1.1621 2.1100 L 12 0.9099 0.4721 1.0251 L 13 0.4014 0.3107 0.5076 L 14 −0.1999 −0.1499 0.2499 L 15 0.3013 0.2307 0.3795 L 16 0.8819 0.4269 0.9798 L 17 0.2506 0.2303 0.3403 L 18 1.1898 0.6811 1.3709 L 20 0.8039 0.3890 0.8931 L 22 0.8845 0.4283 0.9828 表5. 最优规划方案的线路传输功率 从表4、表5数据可以看出，负荷节点电压(p.u.)满足大于0.95小于1.05的约束范围；线路传输容量满足小于5MVA的约束条件。 综上所述，算例仿真的结果满足配电网辐射状结构、变电站容量约束、电动汽车充电需求以及电网安全运行约束，验证了本文所提方法和模型的合理性与正确性。
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user: 6. 结论 本文提出了一种考虑电动汽车充电站的配网规划方法，该方法采用基于概率分布统计的蒙特卡洛方法对电动汽车充电负荷进行预测，同时在配电网辐射状约束以及电网安全运行约束的前提下，以充电站投资和配网线路投资成本之和最小为目标，建立了含充电站的配网规划数学模型，使最终规划方案的投资成本达到了综合最优，算例仿真结果表明，当对含电动汽车充电站的配网进行规划时，本文提出的方法和模型在满足约束条件的同时，还可使规划方案的综合成本最小，充分体现了本文提出的规划方法的合理性和经济性。本文提出的方法和模型将为实际电动汽车充电站的配网规划提供新的理论支持和参考，然而，本文考虑的仅是单阶段静态配电网规划模型，还未推广为多阶段规划模型，同时在目标函数中也没有考虑用户便利性、网络损耗等因素，这将作为下一阶段研究的重点。
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user: 摘 要 卡森·麦卡勒斯的《心是孤独的猎手》整体上对犹太人的描写不多，犹太人形象却时不时地被涉及并贯穿全作；且作品中虽非主人公却亦有犹太人角色，即小男孩哈利，直接出场。麦卡勒斯通过哈利之口对当时欧洲反犹迫害的历史背景进行了交代，又借黑人医生之口暗示犹太人整体的“大流散”、客居他国，成为寄居国主流社会眼中的他者，为美国的反犹主义提供了历史、社会语境的铺垫。本文旨在形象学家巴柔对他者形象构建的文本内部分析法理论框架内探索作者是如何通过构建被关进精神“隔都(Ghetto)”、代表美国南方少数族裔群体的犹太他者形象对自我标榜推崇人道主义的美国文化中隐藏的种族歧视进行批判的。 关键词 :形象学，犹太人，他者，《心是孤独的猎手》 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 卡森·麦卡勒斯(1917~1967)因其特殊的自身经历、作品中“南方哥特”写作特点及深刻的思想内涵在美国南方作家中占据重要地位。其创作的《心是孤独的猎手》主要讲述了以聋哑人辛格为核心和四个主要人物——咖啡店老板比夫、黑人医生科普兰、辛格房东家的小女儿米可、及工人运动积极分子杰克之间的故事。后四者都有着自己的人生梦想和追求，却苦于找不到志同道合的朋友且不被身边的人所理解而内心孤独彷徨，成为异于主流的“边缘人”。于是四人便将耐心倾听他们对理想的抒发或对烦恼的宣泄的辛格视为知己。情节随着四人的倾诉及各自的生活经历而展开；每个人也各自代表着当时美国社会不同阶层、种族的各自生存境况和由此产生的孤独感。 在这一作品中，犹太人虽非主要描写对象，却时不时通过不同的角色被提及，而且每次被提起几乎都在传达犹太人是属于异于美国主流人群的他者的信息。不管通过哪个角色说出口，这种对犹太形象的描述，是存在于作者及其所代表的美国主流群体意识中的，是“源于对自我与‘他者’，本土与‘异域’关系的自觉意识之中”( [ 1 ]， p.155)所体现出来的，也是将犹太人放在与自我或本土相区分的位置上的他者形象。笔者认为对犹太人他者形象的设定并非只是为了丰富作品人物的种族、民族和文化背景，而是通过对直接设定的犹太人身份的小男孩哈里相关内容的描写及其其他人物谈论犹太人的语境揭露了犹太人被孤立的境遇，成为美国南方边缘群体少数族裔的代表被关进精神“隔都(Ghetto)”，最终成为孤独的他者，是对自我标榜推崇人道主义的美国文化中隐藏的种族歧视的批判。
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user: 3. 结论 本文借鉴形象学中巴柔对他者形象构建的文本内部分析法，即词汇、大的文本单位及故事情节三个层面，对作品中孤独的犹太他者形象进行分析，体现出作者麦卡勒斯不仅对当时欧洲“反犹主义”及德国纳粹大屠杀的关注，更体现其对大萧条及二战时期美国南方少数族裔边缘群体受歧视和受压迫境遇的关注，是对标榜推崇人道主义的美国文化中隐藏的种族歧视进行的批判以及她的人文主义关怀。
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user: 摘 要 为了更好的开发月见草根中的多糖，本文运用单因素和响应面法对月见草根中多糖的最佳提取工艺进行了一系列研究。根据最佳提取工艺，对不同时期和不同土质中月见草根多糖的动态积累规律进行了的分析，并研究了月见草根中多糖对过氧化氢氧化损伤的RAW264.7细胞的修复作用。结果显示，用微波提取法提取月见草根中多糖比用超声提取法和传统工艺法有更好的提取效果。通过单因素和响应面法分析，在微波提取法中，月见草根中多糖的最佳提取条件：微波功率460 w、浸提时间25 min、料液比1:20，在此条件下的提取率为78.55%。在最佳提取方法下，对不同时期和不同土质中月见草根多糖的动态积累规律研究得知，11月份的月见草根多糖的含量最高为75.61%，而砂质中种植的月见草根的多糖含量高于壤土。抗氧化实验显示月见草多糖对过氧化氢氧化损伤的RAW264.7是有明显的修复效果。 关键词 :月见草，多糖，超声提取，微波提取，响应面，过氧化氢，RAW264.7 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 月见草(Oenothera erythrosepala Borb.)是柳叶菜科二年生草本植物，生于山区向阳坡地，林缘荒地、路旁等处 [ 1 ]。月见草被认为是欧美十大防治妇女更年期综合症(PMS)天然药用植物之一，也是二十世纪发现的最重要的营养药物来源之一 [ 2 ]。月见草的花具茉莉花的香气，主要成分是芳香醇及其衍生物，可制芳香浸膏或用于调和香精。月见草油中脂肪酸易被皮肤吸收，促进血液循环，防止表皮细胞角化，延缓衰老，可为皮肤提供韧性和保水功能，是化妆品中滋润剂和保湿剂 [ 3 ]。月见草油还可调节血液中类脂物质，对高胆固醇、高血脂引起的冠状动脉梗塞、粥样硬化及脑血栓等症有显著疗效。月见草的根是药食两用药材，工业可酿酒或做食材使用，而入药具有清热解毒、祛除湿、强筋骨的功效，还可治疗咳嗽、感冒、胃刺激和肠痉挛等病症。 近年来，主要围绕月见草挥发油成分及活性机制和临床疗效等方面进行研究 [ 4 ]，而对于月见草的根，尽管开发的产品类型多，但基础研究鲜有报道。月见草的根主要成分是多糖类化合物，但对多糖的提取工艺、多糖组分、质量标准等缺乏系统的研究。在对月见草多年种植的基础上，作者围绕月见草多糖的积累规律，提取工艺和活性等方面进行研究，这对于进一步深入开发月见草资源，具有重要的指导意义。 本文运用了传统工艺法、超声提取法、微波提取法分别对月见草根中的多糖进行单因素研究，研究每种方法的最佳提取工艺；进一步应用响应面法设计试验，使最佳提取条件更加明确；并研究了月见草根中多糖的动态积累规律和探究月见草多糖的抗氧化活性，为月见草更深入的研究提供了一定的基础。
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user: 2. 材料 2.1. 仪器与试剂 电子天平(上海菁海仪器有限公司)、DZTW型调温电热套(北京市永光明医疗仪器厂)、KQ-250DE型数控超声波清洗器、微波炉(青岛海尔成套家电服务有限公司)、旋转蒸发器 RE52CS (上海亚荣生化仪器厂)、循环水式多用真空泵SHB-IIIA (上海沪析实业有限公司)、754PC紫外–可见分光光度计(上海菁海仪器有限公司)、DHP-9162电热恒温培养箱(上海一恒)、Spectra Max M5酶标仪(美国Molecular Devices公司)、96孔培养板(南通新星实验器材公司)、一次性无菌培养皿(直径90 mm，南通新星实验器材公司)、苏净安泰BSC-1300IIA生物洁净安全柜(苏州苏净集团)。 丙酮、无水乙醇、石油醚、苯酚(AR)、浓硫酸(AR)、葡萄糖、过氧化氢、DMSO，均为分析纯；胎牛血清、DMEM+F12培养基(BR)、过氧化氢、RAW264.7细胞、DMSO、MTT (BR)，均来自山东德仁医药有限公司。 2.2. 实验材料与处理 月见草(Oenothera erythrosepala Borb.)来源于山东中医药大学百草园和山东鲁山神农药谷，由山东中医药大学药学院副教授高德民老师鉴定，凭证标本保存于山东中医药大学标本馆(表1)。 Table 1 Oenothera erythrosepala material 批号(标本号) 月见草材料来源地 采集日期 土壤类型 经纬度(E， N) 海拔(m) 20170620 山东中医药大学百草园 2017.06.20 壤土 116˚47'29.25“ 36˚33'24.22“ 29 20170919 山东中医药大学百草园 2017.09.09 壤土 116˚47'34.19'' 36˚33'34.69“ 48 20171120 山东中医药大学百草园 2017.11.20 壤土 116˚47'34.39“ 36˚33'34.28“ 51 20171121 山东鲁山神农药谷 2017.11.21 砂质土 118˚4'34.91“ 36˚16'6.86“ 423 20180221 山东中医药大学百草园 2018.02.21 壤土 116˚47'34.01“ 36˚33'34.28“ 51 20190420 山东中医药大学百草园 2019.04.20 壤土 116˚47'34.13“ 36˚33'33.74“ 51 20180619 山东中医药大学百草园 2018.06.19 壤土 116˚47'34.44“ 36˚33'33.7“ 51 20180821 山东中医药大学百草园 2018.08.21 壤土 116˚47'34.34“ 36˚33'34.02“ 51 表1. 供试样品月见草材料 将新鲜的月见草根切片于烘干箱中烘干后打成粉末状并过50目筛，得粗细均匀的月见草粉末，放置待用。
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user: 3. 方法 3.1. 多糖提取方法(单因素分析法) 3.1.1. 传统工艺法 精密称取多份月见草20 g粉末于烧杯中加入石油醚浸泡过夜，抽滤，将干燥的月见草粉末置于烧杯中分别以料液比(1:20)加入蒸馏水，分别回流4 h过滤，浓缩，Sevage法除蛋白，85%乙醇多次醇沉于4℃下静置过夜，过滤，干燥得粉末 [ 5 ] [ 6 ]。按2.2测定样品吸光度，计算多糖含量。 3.1.2. 微波提取法 精密称取多份月见草5 g粉末于烧杯中加入石油醚浸泡过夜，抽滤，将干燥的月见草根别在时间(5 h，15 h，20 h，25 h，30 h)、料液比(1:10，1:15，1:20，1:25，1:30)、功率(120 w，280 w，460 w)条件下进行如表2所示的单因素实验，过滤，浓缩，干燥 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ]。 Table 2 Microwave extraction of polysaccharides from Oenothera erythrosepal 试验号 (No.) 提取时间/min (Time/min) 料液比/g：mL (Ratio/g：mL) 微波功率/w (Power/w) 多糖提取率/% (Rate/%) 1 5 1:20 460 27.50 2 3 15 20 1:20 1:20 460 460 31.25 44.28 4 25 1:20 460 78.55 5 30 1:20 460 60.95 6 15 1:10 460 34.30 7 15 1:15 460 42.37 8 15 1:20 460 53.40 9 15 1:25 460 65.25 10 15 1:30 460 47.80 11 15 1:20 120 47.70 12 15 1:20 280 57.53 表2. 月见草多糖微波提取法 3.1.3. 超声提取法 精密称取多份月见草粉末5 g于烧杯中加入石油醚浸泡过夜，抽滤，将干燥的月见草分别在功率(40 w，50 w，60 w，70 w，80 w)、温度(20℃，30℃，40℃，50℃，60℃)、料液比(1:10，1:15，1:20，1:25)条件下进行如表3所示的单因素实验过滤，浓缩，离心，干燥 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ]。 Table 3 Ultrasonic extraction of polysaccharides from Oenothera erythrosepal 试验号 (No.) 温度/℃ (T/℃) 料液比/g：mL (Ratio/g：mL) 超声功率/w (Power/w) 时间/min (Time/min) 多糖提取率/% (Rate/%) 13 60 1:20 40 40 45.61 14 60 1:20 50 40 40.23 15 60 1:20 60 40 32.80 16 60 1:20 70 40 60.51 17 60 1:20 80 40 42.74 18 20 1:20 60 40 77.62 19 30 1:20 60 40 75.50 20 40 1:20 60 40 40.97 21 50 1:20 60 40 60.52 22 60 1:20 60 40 69.57 23 60 1:10 60 40 60.73 24 60 1:15 60 40 40.00 25 60 1:20 60 40 32.80 26 60 1:25 60 40 45.79 表3. 月见草多糖的超声提取法 3.2. 多糖含量和提取率测定 3.2.1. 标准曲线的绘制 精密称取葡萄糖0.01 g将其定容于100 mL容量瓶中，制得0.10 mg/mL的葡萄糖对照品溶液。吸取葡萄糖标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL定容于10 mL容量瓶，分别取2 mL于具塞的试管中，精密加入5%苯酚溶液1 mL并迅速加入浓硫酸5 mL，摇匀，放置10 min，于40℃水浴锅中保温15 min，用分光光度计在波长480 nm处测定吸光度 [ 13 ]，得标准曲线方程：Y = 9.06X − 0.0162，R² = 0.9997。 3.2.2. 测定方法 取多糖粉末0.01 g定容于100 mL容量瓶中，取2 mL进行苯酚硫酸法。 3.3. 月见草多糖的动态分析 对采集的不同土质、不同时期下的月见草根(表1)，采用3.1中最佳提取方法提取月见草根中多糖并测定多糖含量，每次测定均做三组平行实验。 3.4. 月见草根中多糖体外抗氧化活性 3.4.1. 月见草根中多糖对过氧化氢损伤的RAW264.7细胞模型建立 取对数生长RAW264.7细胞，用含10%胎牛血清的DMEM+F12培养基重悬成细胞悬液。取对数生长期的RAW264.7细胞以3 × 10 5 个/孔密度将细胞接种于96孔板，用含10%胎牛血清的培养基于37℃，5%二氧化碳培养24 h后，弃去原有细胞培养液，空白组加入不含血清的培养基100 µL，模型组和样品组加入用不含血清培养基稀释的1000 μM过氧化氢100 µL。继续培养10 h，弃去原有细胞培养液，样品组加入不含血清培养基稀释的不同浓度月见草多糖(62.5 μg/mL，125 μg/mL，250 μg/mL，500 μg/mL，1000 μg/mL，2000 μg/mL)，每孔最终体积100 µL，每个浓度设3个复孔；空白组和模型组只加入不含血清培养基100 µL，继续培养10 h，MTT法检测细胞活性。 3.4.2. MTT法测细胞活性 培养10 h后，加入20 µL的MTT溶液，继续培养4 h，吸去培养液，加入100 µL DMSO，10 min后在490 nm下测吸光度，计算细胞存活率 [ 14 ] [ 15 ]。
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user: 4. 结果及分析 4.1. 传统工艺法 通过对温度、料液比等参数的比较，传统工艺法提取月见草根多糖在温度75℃、料液比为1 g:20 mL时，多糖的最高提取率为75.00%。 4.2. 单因素水平试验及结果 [ 16 ] 4.2.1. 微波提取法 采用微波提取法对月见草多糖进行提取，结果(表2)所示，通过对比，最佳提取时间为25 min，最佳料液比为1 g:20 mL，最佳微波功率为460 w。 4.2.2. 超声提取法 采用超声提取法对月见草多糖进行提取，结果如表3所示，通过对比，超声提取法的最佳提取温度为20℃，最佳料液比为1 g:20 mL，最佳超声功率为60 w。 4.3. 月见草根多糖的动态分析 不同采收时间月见草根的多糖含量结果显示(表4)，不同时期月见草根的多糖含量差异显著。在每年的11月份和3月份多糖含量较高，而在7、8月份多糖的含量明显偏低。不同土质对月见草根中多糖的含量如表4所示，不同土质下种植的月见草的根中多糖含量不同，月见草的根中多糖的含量砂质土中要高于壤土中。 Table 4 The extraction rate of polysaccharides at different stage 样品批号 土壤类型 多糖含量(%) 20170620 壤土 39.82 ± 5.13 20170919 壤土 50.63 ± 3.93 20171120 壤土 75.61 ± 4.15 20171121 砂质土 75.96 ± 4.58 20180221 壤土 65.79 ± 3.85 20170420 壤土 53.49± 4.95 20180619 壤土 42.87 ± 4.62 20180821 壤土 36.51 ± 3.83 表4. 不同时期月见草根中多糖含量 4.4. 月见草根中多糖的抗氧化活性 样品组与模型组有显著差异，与模型组相比较月见草多糖能够明显提高经过氧化氢诱导损伤的RAW264.7的存活率(图1)。在多糖浓度为5 μg/mL、25 μg/mL、250 μg/mL时，有一定的抗氧化活性且有剂量效应；在多糖浓度为500 μg/mL、1000 μg/mL、2000 μg/mL时，与模型组差异有统计学意义(P < 0.05)。 图1. 月见草多糖对过氧化氢损伤的RAW264.7细胞的修复作用
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user: 5. 响应面法优化月见草多糖提取工艺 5.1. 微波提取法 在单因素实验的基础上，参考文献 [ 17 ] [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] 选取提取时间、料液比、微波功率进行三因素三水平的实验设计，因素水平分别以−1、0、1编码，以月见草根多糖的得率为响应值，见表5。 Table 5 Table of test factor 水平 (horizontal) 因素(factor) 提取时间/h (Time/min) 料液比/g:mL (Ratio/g：mL) 微波功率/w (Power/w) −1 5 0.1 120 0 15 0.2 290 1 25 0.3 460 表5. 试验因素水平表 以提取时间、微波功率、料液比为自变量，月见草多糖提取率为响应值，利用Design-Expert8.0.6软件进行三因素三水平的响面数据分析，结果见表6、表7。 Table 6 Response surface analysis of experimental design and result 编号(No.) 提取时间(Time) 微波功率(Power) 料液比(Ratio) 提取率% (Rate/%) 1 −1 1 0 27.5 2 0 1 0 53.4 3 1 1 0 78.55 4 0 1 −1 34.3 5 0 1 1 62.25 6 0 −1 0 47.7 7 0 0 0 57.53 表6. 响应面分析实验设计及结果 Table 7 Fitting regression analysis result 方差源(source) 平方和(sum of square) 自由度(free degree) 均方和(Mean square) F值F value P值(P>F) P value 总模型 1773.44 6 307.50 21.50 0.0157 A 1303.05 1 1303.05 49.59 0.0059 B 2.70 1 16.25 0.036 0.8610 C 478.95 1 478.95 14.86 0.0308 AB 0.000 0 - - - AC 0.000 0 - - - BC 0.000 0 - - - A 2 0.094 1 0.094 - - B 2 34.02 1 34.02 - - C 2 8.76 1 8.76 - - 纯误差 0.000 0 - - - 总离差 1773.44 6 - - - 表7. 拟合回归分析结果 表注：A-时间，B-微波功率，C-料液比。 表7表明A、B、C因素对多糖提取率影响显著，表明三个因素对月见草多糖的提取有影响，提取时间、微波功率、料液比均对月见草多糖的提取有显著影响。 5.2. 超声提取法 在单因素基础上选取提取温度、料液比、超声功率进行三因素三水平的实验设计，实验结果见表8。 Table 8 Table of test factor 水平 (horizontal) 因素(factor) 提取温度/℃ (T/℃) 料液比/g:mL (Ratio/g：mL) 超声功率/w (Power/w) −1 20 0.1 40 0 40 0.2 60 1 60 0.3 80 表8. 试验因素水平表 以提取时间、微波功率、料液比为自变量，月见草多糖提取率为响应值，利用Design-Expert8.0.6软件进行三因素三水平的响面数据分析，结果见表9和表10。 Table 9 Response surface analysis of experimental design and result 编号(No.) 提取温度(T) 微波功率(Power/w) 料液比(Ratio) 提取率% (Rate/%) 1 −1 −1 0 77.62 2 0 1 −1 40.97 3 1 0 0 69.57 4 1 0 −1 60.73 5 1 0 −1 32.8 6 1 0 0 45.79 7 1 −1 1 45.61 表9. 响应面分析实验设计及结果 Table 1 0 Fitting regression analysis result 方差源 (source) 平方和 (sum of square) 自由度 (free degree) 均方和 (Mean square) F值 F value P值(P > F) P value 总模型 2428.84 5 485.77 0.91 0.5987 A 30.24 1 30.24 0.056 0.8343 B 1.99 1 1.99 3.724E-003 0.9569 C 305.38 1 305.38 0.57 0.5289 AB 147.84 1 147.84 0.28 0.6517 AC 0.000 0 - - - BC 71.10 1 71.10 0.13 0.7505 A 2 0.000 0 - - - B 2 0.000 0 - - - C 2 0.000 0 - - - 纯误差 1070.85 2 535.42 - - 总离差 3499.69 7 - - - 表10. 拟合回归分析结果 表注：A-温度，B-料液比，C-超声功率。 表9表明A、B、C因素对多糖提取率影响显著，表明三个因素对月见草多糖的提取有影响，其中料液比对月见草多糖的提取有显著影响。
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user: 6. 响应面图分析 [ 21 ] 根据上述表格分别得到微波提取法和超声提取法的三因素对月见草多糖提取率影响的响应面图和等高线图。 6.1. 微波提取法 由图2~4可知，说明微波功率和时间之间、时间和料液比之间对多糖提取率影响显著；料液比和微波功率之间对多糖提取率的影响不显著。 图2. 微波功率与提取时间对月见草根多糖提取率的响应面及其等高线 图3. 料液比与提取时间对月见草根多糖提取率响应面及其等高线 图4. 料液比与微波功率对月见草根多糖响应面及其等高线 6.2. 超声提取法 图5~7说明温度和料液比之间、温度和超声功率之间对月见草多糖的提取率影响显著：超声功率和料液比之间相互作用较小，对月见草多糖的提取率影响不显著。 图5. 料液比与提取温度对月见草根多糖提取率响应面及其等高线 图6. 超声功率与提取温度对月见草根多糖提取率响应面及其等高线 图7. 料液比与超声功率对月见草根多糖提取率响应面及其等高线
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user: 7. 结论 本实验通过单因素试验和响应面法分析设计，得到了月见草根中多糖在微波提取法中的最佳工艺条件：最佳提取时间为25 min，最佳料液比为1:20，最佳微波功率为460 w，在此条件下的多糖提取率为78.55%；在超声提取法中的最佳工艺条件：最佳提取温度为20℃，最佳料液比为1:20，最佳超声功率为60 w，在此条件下的多糖提取率为77.62%。通过研究得出，本实验所选用的微波提取法提取月见草中的多糖，与其它两种方法相比，具有提取效率高、速度快等特点。该提取方法也被用于紫荆花多糖 [ 7 ] 、天麻多糖 [ 13 ] 等多种多糖的提取工艺中，并获得了较好的效果。 微波提取多糖的效率高，其原理是微波能根据所遇介质性质不同会产生反射、吸收和穿透等现象 [ 22 ]。微波辐射植物维管束和腺细胞，使细胞内部快速升温，内压提高，细胞壁膨胀破裂，提高溶剂活性细胞，内含物流出而溶解在溶剂中 [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ]。但超声的作用效果没有微波的更彻底，超声时间太长，杂质可随有效成分一起被提取出来，而且超声时间越长，杂质含量越高 [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ]。与传统工艺法相比较，超声提取法和微波提取法，提取月见草多糖所用时间短，提取率也较高。综合分析上述三种提取方法，我们得到了月见草多糖的最佳提取工艺为微波提取法，并进一步明确了微波提取的最佳提取参数。 本实验通过对不同时期、不同土质的月见草根中多糖的含量进行分析，发现经过生长期的生长，11月份的月见草多糖含量最高，可达75.61%。月见草的花期为第二年6~9月，在其花期时茎高50~200厘米，因此根部的营养成分在此时向上运输，导致根部多糖含量降低。在11月和3月附近，月见草的基生叶丛紧贴地面，根吸收主要的营养成分，因此，月见草根中的多糖在11月份时最高，且研究发现月见草更适合在砂质土壤中生长。通过对不同时期的月见草的根中的多糖含量进行比较，明确了提取月见草的根的多糖的最佳时期。并通过不同浓度的月见草根中多糖对过氧化氢损伤的RAW264.7细胞的修复作用进行比较，发现月见草多糖具有一定的抗氧化活性，为月见草根中多糖的进一步研究与开发奠定了基础。
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user: 摘 要 对西安市灞桥区45条道路绿化带灌木和地被植物多样性进行调查，结果发现：西安市灞桥区道路绿地主要应用的灌木有22种，分属12科，地被植物有16种，分属10科。出现频度最高的灌木为大叶黄杨、红叶石楠、小蜡和海桐，而出现频度最高的地被植物为高羊茅和麦冬。通过对城市道路绿化植物配置以及多样性的调查分析，以期为城市道路绿化建设提供理论依据和参考，助力城市绿化建设进一步发展。 关键词 :西安市，城市道路绿化带，植物配置，植物多样性 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 城市道路绿化建设是城市建设中的一个重要组成部分，也是城市生物多样性的最直接体现 [ 1 ]。调查分析城市道路绿化带的生物多样性和植物配置结构对于改善人居环境和保护城市生态都具有十分重大的意义 [ 2 ] [ 3 ]。
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user: 2. 调查区概况 西安市地处关中盆地，位于33.42˚~34.45˚N和107.40˚~109.49˚E之间，北临黄土高原和渭河，南邻秦岭。西安市属于暖温带半湿润大陆性季风气候，年平均气温为13.0℃~13.7℃，1月份最低平均气温−1.2℃~0℃，7月份最高平均气温26.3℃~26.6℃，历年极端最低和最高气温分别为−21.2℃(蓝田县，1991年12月28日)和43.4℃ (长安区，1966年6月19日)。年平均日照时数为1646.1~2114.9 h，年降水量522.4~719.5 mm，由北向南逐渐增加。灞桥区位于西安市主城区东部，西与雁塔区、新城区和未央区相接，东与临潼区、蓝田县相连。
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user: 3. 调查方法 本项目的调查时间为2019年6月中旬，采用实地调查的方法 [ 4 ]，详尽了解西安市灞桥区市政道路的灌木及地被植物构成和配置。灌木区别于乔木，主干不明显，通常在基部发出多个枝干的木本植物，如玫瑰、牡丹等。地被植物，是指铺设于裸地或坡地，或适于阴湿林下和林间隙地等各种环境覆盖地面的多年生草本或低矮丛生的灌木。具体灌木及地被植物的认定参考中国植物志。调查范围包括城市主干道和次干道，其中含有一板两带式及两板三带式道路。本次调查涉及白鹿原片区、洪庆片区、纺织城片区、席王片区、纺织园片区5个片区，包括灞临路、狄寨南路、狄寨北路、水安路、田洪正街、向阳北路、宇航东路、洪庆街、纺织城正街、纺织城东街、半引路、纺建路、纺织城西街、纺一路、纺二路、纺三路、纺四路、纺五路、纺六路、纺七路、纺八路、纺九路、新医路、纺科路、长乐东路、电厂东路、电厂西路、柳新路、柳虹路、灞瑞一路、纺渭路、柳烟路、柳莺路、柳雪路、祥云路、灞柳一路、纺园一路、灞柳二路、纺园二路、纺园三路、纺园四路、纺园五路、纺园六路、纺园七路、河堤东路等45条道路。详细记录各条道路绿化带内的灌木及地被植物种类、出现频度等 [ 5 ]。
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user: 4. 结果与分析 4.1. 灌木和地被植物种类及分布特征 按照种植道路从多到少的顺序列出所有的灌木和地被植物物种，形成物种重要性顺序表，分别见表1和表2。 Table 1 Shrub species and importance order in road green bel 顺序 灌木名称 拉丁名 科名 属名 道路条数 1 大叶黄杨 Buxus megistophylla 黄杨科 黄杨属 34 2 红叶石楠 Photinia serrulata 蔷薇科 石楠属 32 3 小蜡 Ligustrum sinense 木犀科 女贞属 28 4 海桐 Pittosporum tobira 海桐花科 海桐花属 24 5 紫叶小檗 Berberis thunbergii 小檗科 小檗属 13 6 小叶黄杨 Buxus sinica 黄杨科 黄杨属 8 7 小叶女贞 Ligustrum quihoui 木犀科 女贞属 7 8 紫薇 Lagerstroemia indica 千屈菜科 紫薇属 6 9 木槿 Hibiscus syriacus 锦葵科 木槿属 5 10 紫叶矮樱 Prunus × cistena 蔷薇科 李属 4 11 紫荆 Cercis chinensis 豆科 紫荆属 3 12 夹竹桃 Nerium indicum 夹竹桃科 夹竹桃属 3 13 树状月季 Rosa chinensis 蔷薇科 蔷薇属 3 14 重瓣棣棠花 Kerria japonica 蔷薇科 棣棠花属 2 15 丁香 Syringa oblata 木犀科 丁香属 2 16 南天竹 Nandina domestica 小檗科 南天竹属 2 17 龙柏 Sabina chinensis 柏科 圆柏属 2 18 八角金盘 Fatsia japonica 五加科 八角金盘属 1 19 贴梗海棠 Chaenomeles speciosa 蔷薇科 木瓜属 1 20 洒金桃叶珊瑚 Ancuba japonica 山茱萸科 桃叶珊瑚属 1 21 粉花绣线菊 Spiraea japonica 蔷薇科 绣线菊属 1 22 火棘 Pyracantha fortuneana 蔷薇科 火棘属 1 表1. 道路绿化带灌木种类及重要性顺序 Table 2 The types and importance of ground cover plants in road green belt 顺序 灌木名称 拉丁名 科名 属名 道路条数 1 高羊茅 Festuca elata 禾本科 羊茅属 26 2 麦冬 Ophiopogon japonicus 百合科 沿阶草属 23 3 黑麦草 Lolium perenne 禾本科 黑麦草属 14 4 早熟禾 Poa annua 禾本科 早熟禾属 13 5 白车轴草 Trifolium repens 豆科 车轴草属 11 6 狗牙根 Cynodon dactylon 禾本科 狗牙根属 6 7 鸢尾 Iris tectorum 鸢尾科 鸢尾属 3 8 萱草 Hemerocallis fulva 百合科 萱草属 2 9 万寿菊 Tagetes erecta 菊科 万寿菊属 2 10 四季海棠 Begonia semperflorens 秋海棠科 秋海棠属 2 11 碧冬茄 Petunia hybrida 茄科 碧冬茄属 2 12 紫叶酢浆草 Oxalis corniculata 酢浆草科 酢浆草属 2 13 玉簪 Hosta plantaginea 百合科 玉簪属 2 14 野燕麦 Avena fatua 禾本科 燕麦属 1 15 石竹 Dianthus chinensis 石竹科 石竹属 1 16 佛甲草 Sedum lineare 景天科 景天属 1 表2. 道路绿化带地被植物种类及重要性顺序 4.2. 灌木和地被植物配比种植现状分析 调查结果显示，灌木种类有22种，地被植物种类有16种，从提高物种多样性方面来说，西安市灞桥区城市道路地被植物的种类偏少。 4.3. 植物观赏效果分析 在灞桥区调查路段所种植的绿化植物中，包含一些观赏性较强的植物。应用较多的观花植物是紫薇，夹竹桃和紫荆数量较少；色叶植物应用较多的是红叶石楠和紫叶小檗，洒金桃叶珊瑚和南天竹数量相对较少；观果植物数量较少，种植有少数南天竹和火棘。在现行的道路绿化带中观赏植物数量较少，其中观花类占的比例最大，其次是彩叶植物，观果植物最少。
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user: 5. 讨论与结论 西安市灞桥区道路绿化带的植物种类数量偏少，特别是特色乡土植物种类的数量有待增加。实地调查结果显示，道路绿化带共有灌木和地被植物种类38种，其中灌木22种、地被植物16种。在应用的绿化植物中，乡土植物的种类则更少。因此，在今后道路绿化带设计、种植和植物更换时，应尽量考虑选择乡土植物，不仅可以体现地域特色，而且可以提高植物种类的多样性，还可以提高植物的存活率，易于后期管护。 调查结果表明绿化植物中大多数种类的实际应用仍不广泛，应用频率高的植物集中在少数几个种类上，如灌木为大叶黄杨和红叶石楠，地被植物为高羊茅和麦冬。高频度地大量使用少数几种绿化代表植物，不利于塑造城市道路绿化带的景观特色，应适当增加绿化植物的种类，建议种植季相变化明显的灌木和地被植物，达到春夏观花、秋季观果、冬季观叶的观赏效果。 西安市灞桥区道路绿化带的植物群落丰富度明显低于西安市内公园的植物群落丰富度，植物种类的多样性还有待进一步提升。实地调查分析表明道路绿化带植物种类较单一且集中，植物多样性水平较低，道路绿化带中目前尚未形成典型的优势种群，需逐渐增加优势种群的数量，丰富植物类别。
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user: 摘 要 花芽分化是草莓植株由营养生长转向生殖生长的重要阶段，是影响草莓产量和品质的重要因素。本文以阐述草莓花芽形态分化的特点和分化历程，总结草莓花芽形态分化的研究方法与多地开始分化的时间，讨论草莓花芽分化的影响因素和调控管理措施，并对草莓花芽分化的研究方向进行了展望，以期为草莓花芽分化进一步研究及生产上确定花芽形态分化时期提供参考。 关键词 :草莓，花芽形态分化，研究方法，影响因素，调控措施 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 草莓(Fragaria ananassa Duch.)是我国的主要果树树种之一，属蔷薇科草莓属多年生常绿草本植物。草莓果实色泽鲜艳、风味独特，营养丰富，素有“水果皇后”的美誉，具有很高的营养和食疗价值，深受人们喜爱 [ 1 ]。草莓是果树中鲜果上市最早的水果，露地栽培为“早春第一果”，大棚栽培在冬季12月份就能采收，堪称“冬季一果独秀”。草莓以其栽培周期短、见效快、经济效益高、适于温室大棚栽培等优势成为各国农业种植的热点 [ 2 ]。且草莓种植效益大于其它种植业，市场需求量大于生产量。目前，我国草莓生产面积和总产量均居世界第1位 [ 3 ]。 花芽分化是指植物由营养生长向生殖生长转化的过程，可分为生理分化期和形态分化期。花芽生理分化是将营养物质、激素、遗传物质等在芽生长点细胞群中积累、共同协调作用，从量变到质变的过程，为形态分化提供物质基础的过程 [ 4 ]。生理分化完成后，叶原基的物质代谢及生长点形态结构开始发生变化，逐渐可区分出花芽和叶芽，由此进入了花芽的形态分化期，并逐渐发育形成花萼、花瓣、雄蕊、雌蕊，直到开花前才完成整个花器的发育 [ 5 ]。 草莓花芽分化是开花多少和花质量好坏的基础，是生长发育过程中的关键阶段，花芽分化时期与开花坐果时期密切相关，花芽的数量和质量直接影响草莓的品质和产量 [ 6 ]。尤其是草莓花芽的形态分化时期，影响草莓的定植时间，而精准确定草莓的定植时间直接关系到草莓的收获时间，也就关系着经济效益。在栽培技术要求越来越精细的今天，需要我们掌握草莓花芽进入形态分化的时期，需要一种更加科学的方法，来判断花芽分化情况。因此，本文以草莓花芽形态分化为主，通过总结花芽形态分化历程、各地区多个品种分化时间、花芽形态分化的研究方法，分析影响花芽分化的因素，结合产业需求和目前试验研究进展，总结了调控花芽形态分化的措施，旨在为进一步研究草莓花芽分化以及生产上确定花芽形态分化时期提供参考。
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user: 2. 草莓花芽分化的特点及机理 一般而言，植物的茎尖分生组织(生长点)从营养生长转变为生殖生长，从叶片的连续分化状态进入花芽形成阶段的时候，就定义为“花芽分化”。草莓相对扁平的茎尖开始变得肥厚，多数情况下即判定花芽开始分化。大多数情况下，当肥大的茎尖分生组织一分为二时，即可明确判定是形态上的“花芽分化”，这一阶段通常称之为“花序分化期”。草莓花芽分化的特点为顶花先分化，然后在顶花花柄下位节上分化出第2朵、第3朵花 [ 6 ]。 自然条件下生长的草莓自夏末开始，在初秋短日低温的条件下进行花芽分化，进入矮化(呈莲座状，休眠)状态，越冬后于第二年春天开花结果。之后，在夏季的长日高温条件发生和增殖匍匐茎。现在通过设施栽培，草莓花芽分化从9月中旬至翌年3月均可进行，花芽分化与露地栽培相比延长4个月，从当年11月份开始开花结果，整过结果期从11月下旬到翌年5月份 [ 7 ]。 草莓花芽分化的机理假说与植物的花芽分化机理假说相似，有五种假说。1) 1977年Sachs [ 8 ] 提出的营养假说，其指生长点内部不同组织所获得的营养差异决定了花芽的形成与否，当中心分生组织获得较多的养分供应时，则转向花芽分化方向发育。2) Klebes提出了开花的碳氮比理论，认为植物体内氮化合物与同化糖类含量的比例是决定花芽分化的关键，当碳占优势时，花芽分化受促进；当氮占优势时，营养生长受到促进，但高含量的碳水化合物不是成花的唯一决定因子 [ 9 ]。3) Bernier等 [ 10 ] 提出了基因表达假说，认为花的形成受多种相互交叉的途径控制，不同的成花诱导刺激可以启动不同的成花基因，只要有一条途径畅通，那么花芽分化就能启动。4) 激素平衡假说：人们在长期研究花芽孕育同激素的关系时发现，花芽孕育是各种激素在时间、空间上的相互作用而产生的综合结果。该假说提出了花芽孕育所需的条件和激素环境 [ 11 ] [ 12 ]。5) 激素信号调节假说：正在发育的果实种子所输出的激素是果树花芽分化的信使，而否定了前人所提出的碳、氮化合物对果树花芽分化起决定作用的假说。但该假说仅涉及正在发育果实的种子，而未包括旺盛营养生长的梢尖输出的激素信号 [ 13 ]。
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user: 3. 草莓花芽形态分化的历程 品种不同，草莓花芽形态分化的进程不同，但是草莓花芽形态分化时期基本相同。总的来说，草莓的花芽形态分化需要经历未分化期、肥厚初期、肥厚中期、肥厚后期、花序分化期、花萼形成期、花瓣形成期、雄蕊形成期、雌蕊形成期，最后才是开花期，共计9个小阶段 [ 14 ]。而只有在确定花序分化期之后定植才是最佳的定植时间，也更利于草莓的生长和最终收获期的提前。草莓花芽形态分化每个阶段的特征如下 [ 4 ] [ 15 ] ： 1) 未分化期：茎尖生长点突小，被幼叶包被，其上有一个明显的呈三角锥状的幼叶原基，并不断分化出新的叶原基(图1(a)，图2(a))。 2) 肥厚初期(分化初始期)：茎尖生长点逐渐变得宽阔平坦，略有馒头状的小突起(图1(b)，图2(b))。 3) 肥厚中期：生长点细胞突起而平圆，高起约半球形(图1(c))。 4) 肥厚后期(分化后期)：茎尖生长点在前一时期的基础上，进一步增加高度，并高出了包被的幼叶(图1(d)，图2(c))。 5) 花序分化期：二分割期后，在突起的茎尖生长点继续增高呈柱状，在生长点一侧或两侧分化出 1个或2个退化的幼叶，在其腋部产生突出，形成二级花序原基(图2(d))。 6) 萼片分化期：突起部进一步变宽大，并在周围出现突起，突起的即为萼片原基(图1(e)，图2(e))。 7) 花瓣形成期：萼片原基的内侧产生小的突起，即为花瓣原基，未来能够发育成花瓣(图2(f))。 8) 雄蕊形成期：在花瓣原基内侧产生两排密集的突起，这就是雄蕊原基(图1(g)，图2(g))。 9) 雌蕊形成期：雄蕊已形成花药，在花药的下方又产生一些珠状突起——雌蕊原基(图1(h)，图2(h))。雌蕊的产生顺序是从花的四周向中心逐步形成的。 10) 雌蕊大量形成期：萼片开始长出绒毛并已完全收拢，雌蕊已基本布满了花托(图2(i))。
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user: 4. 草莓花芽形态分化的研究方法 草莓花芽形态分化的观察，主要通过剥除草莓外部已经长出的叶子和表面绒毛，继续进行更深层的剥离，直至露出生长点，并观察生长点的状态，从而确定草莓花芽分化的情况。现在国内外研究草莓花芽形态分化的方法主要有：扫描电镜法、石蜡切片法、双目立体显微镜观察法和体视解剖镜观察法等。部分学者采用扫描电镜来观察花芽形态分化过程 [ 16 ] [ 17 ]，该方法能够真实而立体地呈现出花芽分化中各种原基的形态。但由于扫描电镜法观察花芽分化成本较贵，限制了扫描电镜法在国内大多科研单位中的广泛应用。石蜡切片为组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，可以清晰观察到花芽形态变化过程，但其过程繁琐，且不能及时反映出草莓花芽形态分化的时期，因此，现国内外多数学者采用徒手剥芽解剖置双目立体显微镜 [ 6 ] [ 18 ] [ 19 ] 或体视解剖镜 [ 14 ] 下观察的方法。生产上确定花芽形态分化时期，也建议采用徒手剥芽解剖置双目立体显微镜或体视解剖镜观察。 图1. 体视解剖镜观察花芽形态分化的各时期(引自韩佩汝等 [ 14 ] ) 4.1. 扫描电镜观察法 扫描电子显微镜常用于观察植物花、叶、果实表面结构，观察花芽形态分化的具体操作如下：1) 取样：将植株的顶芽解剖后取其生长点；2) 固定：用2.5%的戊二醛固定，再用1%锇酸固定，保存；3) 清洗：一般采用缓冲液在4℃下彻底清洗3次，每次15 min；4) 脱水和置换：用系列乙醇或丙酮逐级脱水，一般从30%→50%→70%→80%→95% →100%，每步15~20 min，用乙酸异戊酯置换100%的乙醇，在室温下，置换20 min以上；5) 干燥：采用临界点干燥；6) 粘样：将干燥好的样品用导电胶或双面透明胶纸粘在样品台上，做好标记；7) 喷涂：镀上一层很薄的、并且非常均匀的金属膜；8) 观察：取出样品，用扫描电子显微镜在20 kV加速电压下观察、拍照 [ 20 ] [ 21 ]。 图2. 石蜡切片观察花芽形态分化的各时期(引自张志宏等 [ 15 ] ) 4.2. 石蜡切片法 石蜡切片方法观察草莓花芽形态分化，首先确定采样时间，多数研究者从8月下旬或9月上旬至10月下旬取样，每3天采一次样，每次每个品种5株，其次将芽剥出后，切取茎尖生长点，放在配好的FAA固定液里，4℃下保存备用。采用石蜡切片方法进行花芽形态分化观察，不同研究者所用的染色剂不一致，杨红 [ 6 ] 用番红作为染色剂，张志宏等 [ 15 ] 采用番红——固绿对染，赵秀梅等 [ 22 ] 采用高碘酸——席夫试剂染色，但整体过程大同小异。现以FAA为固定液，番红为染色剂为例 [ 6 ]，介绍具体操作过程，如下所示： 1) 配制固定液：用70%酒精、5%乙酸、5%甲醛配成FAA固定液。 2) 脱水、透明：用乙醇做脱水剂，将固定好的材料置于不同浓度梯度的乙醇中，逐级脱水、透明。 3) 浸蜡、包埋、切片：用硫酸纸作“桥”，正好在液面上，桥面铺满石蜡碎屑，使其慢慢溶解。再置于35℃温箱中浸蜡24 h，然后取出“桥”，倒出1/2溶液，加入已溶化的液体石蜡，在60℃~65℃温箱中使蜡处于溶液状态，每4小时更换一次，重复进行2次，最后更换纯石蜡，在60℃~65℃温箱中浸至2~3 d。将浸透好的材料用纯石蜡包埋在准备好的小纸盒中。然后修整蜡块，并将其固定在台木上。用旋转式切片机进行切片，厚度为10~12 μm。 4) 贴片及展片：将载玻片上涂匀少许粘贴剂，再将切好的蜡片置于载玻片上。然后再展片台上展片。 5) 脱蜡、复水、染色、脱水、透明：二甲苯脱蜡后，用番红染色。 6) 封片：在载玻片上放上中性树胶，再放上材料，盖上盖玻片。然后放在30℃左右的温箱中烘干。 7) 显微摄影：将做好的片子采用Olympus BH-2显微镜观察并显微摄影、记录。 4.3. 双目立体显微镜观察法 取草莓植株带回实验室，用镊子将其芽剥出后，然后用刀片切取茎尖生长点，然后用刀片从花序原始体的左上方轻轻往右下方切割，切割的花序原始体呈勺片，越薄越好，1个花序原始体可连续切割数片，将切下的薄片放入盛水的培养皿中。1个花序原始体切割完毕后，将培养皿中的小薄片，依次排列于载玻片上，用1%的刚果红染色，经1~3分钟后，用清水洗净，加上盖玻片，即可在显微镜下观察。如无染色剂，亦可直接在显微镜下观察。将制成的切片置于双目立体显微镜或低倍显微镜下依次检查。并与标准固定切片相对照，以识别花芽分化所处的时期 [ 23 ] [ 24 ]。 4.4. 体视解剖镜观察法 体视显微镜主要观察标本的三维状态，亦可直接观察草莓茎尖生长点。体视显微镜观察前，样品的制备一般采取徒手切片法，其指用刀片把新鲜的材料切成薄片，用临时装片法装片后在显微镜下观察植物内部结构的方法 [ 21 ]。该方法简单、制片快速，能观察到植物组织的自然色泽和活体结构。用体视显微镜观察草莓花芽形态分化操作步骤：取草莓植株带回实验室，将其芽剥出后，切取茎尖生长点，放置于盛有适量清水的小培养皿中，或直接于体视显微镜观察、拍照记录花芽分化形态。体视解剖镜观察花芽分化操作简单，且能快速观察到花芽分化时期，因此，其方法为现多数研究者所用。
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user: 5. 草莓花芽形态分化的时期 草莓花芽分化时期的早晚因品种和环境条件而异。早熟品种比晚熟品种开始分化早，停止分化也早。顶芽比腋芽早1个月开始分化。同一品种在不同地区，花芽分化期也不相同。北方高纬度地区，秋季低温来临和日照变短早，花芽分化开始期也早；南方低纬度地区，花芽分化则晚。同纬度地区海拔不同，花芽分化期不同，在海拔高的地方，花芽分化早 [ 19 ]。例如贺雷风等 [ 25 ] 采用丰香品种在不同海拔高度(800 m、1000 m)开展的草莓高山育苗研究表明，高海拔育苗可完成草莓花芽分化所需的低温累积，促进花芽提前分化；800m 苗比对照至少提前10 d开花；1000 m苗比对照至少提前5 d开花，且前期花量大，发育饱满。同一品种，氮素过多、植株徒长、叶数过多过少等都会使花芽分化期延迟。在自然条件下，我国草莓一般在9月或更晚开始花芽分化，北方与中部地区草莓多在9月中旬开始花芽分化，而在南方地区草莓在10月上旬前后开始分化 [ 1 ]。因此，根据国内研究者对不同地区不同品种草莓花芽形态分化的观察结果，总结了多地未假植露地草莓苗进入花芽形态分化的时间(见表1)。