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user: 3. 结果与讨论 3.1. 化合物的结构鉴定 化合物1：白色簇晶，[α] 25D -70.1˚ (c 0.4 in H 2 O)，ESI-MS准分子离子峰m/z 407 [M+Na] + ，结合化合物的 1 H-NMR和 13 C-NMR谱，确定化合物的分子式：C 13 H 24 N 2 O 11 ，不饱和度为3。 1 H-NMR(500MHz， DMSO-d 6 ) δ: 4.56 (1H， d， J = 7.9 Hz， H-1)， 3.28 (1H， d， J = 8.3 Hz， H-2)， 3.40 (1H， m， H-3)， 3.38 (1H， m， H-4)， 3.48 (1H， m， H-5)， 4.04 (1H， d， J = 11.7 Hz， H-6a)， 3.73 (1H， m， H-6b)， 5.12 (1H， d， J = 16.5 Hz， H-7a)， 5.03 (1H， d， J = 16.5 Hz， H-7b)， 4.02 (3H， s， H-8)， 4.33 (1H， d， J = 7.8 Hz， H-1’)， 3.18 (1H， m， H-2’)， 3.33 (1H， m， H-4’)， 3.51 (1H， m， H-4’)， 3.85 (1H， d， J = 16.6 Hz， H-5’a)， 4.33 (1H， d， J = 16.6 Hz， H-6’b); 13 C-NMR (125MHz， DMSO-d 6 ) δ: 101.2 (C-1)， 72.8 (C-2)， 75.5 (C-3)， 69.1 (C-4)， 75.0 (C-5)， 68.6 (C-6)， 82.2 (C-7)， 56.6 图1. 化合物1~12的结构式 (C-8)， 103.5 (C-1’)， 72.9 (C-2’)， 75.6 (C-3’)， 69.2 (C-4’)， 65.1 (C-5’)。以上数据和文献报道一致 [ 9 ] ，故鉴定化合物为大泽明素(macrozamin)。 化合物2：白色粉末，ESI-MS准分子离子峰m/z 275 [M+Na] + ，结合化合物的 1 H-NMR和 13 C-NMR谱，确定其分子式：C 8 H 16 N 2 O 7 ，不饱和度为2，易溶于水，UV显示化合物在215 nm处有最大吸收，而且保留时间和紫外图谱都和大泽明素相近，推断为甲基氧化偶氮糖苷类成分。 1 H-NMR (500 MHz， D 2 O) δ: 4.61 (1H， d， J = 7.9 Hz， H-1)， 3.32 (1H， d， J = 8.3 Hz， H-2)， 3.38 (1H， m， H-3)， 3.46 (1H， m， H-4)， 3.37 (1H， m， H-5)， 3.86 (1H， d， J = 12.4 Hz， H-6a)， 3.67 (1H， m， H-6b)， 5.18 (1H， d， J = 16.6 Hz， H-7a)， 5.08 (1H， d， J = 16.6 Hz， H-7b)， 4.07 (3H， s， H-8); 13 C-NMR (125 MHz， D 2 O) δ: 99.0 (C-1)， 70.7 (C-2)， 73.9 (C-3)， 73.3 (C-4)， 67.2 (C-5)， 58.3 (C-6)， 80.0 (C-7)， 54.3 (C-8)。以上数据和文献报道一致 [ 10 ] ，故鉴定化合物为苏铁素Cycasin。 化合物3：白色粉末，ESI-MS m/z 153 [M-H] - ，分子组成：C 7 H 6 O 4 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 9.62 (1H， s， H-7)， 9.41 (3H，brs， 3，4，5-OH)， 6.84 (2H， s， H-2，6)； 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 191.8 (C-7)， 146.6 (C-3，5)， 140.7 (C-4)， 127.9 (C-1)， 109.2 (C-2， 6)。以上波谱数据与文献报道一致 [ 11 ] ，从而确定化合物结构为3，4，5-三羟基苯甲醛(3，4，5-three hydroxy benzaldehyde)。 化合物4：白色粉末，ESI-MS，m/z 137 [M-H] - ，分子组成：C 7 H 6 O 3 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 12.32 (1H， brs， -COOH)， 9.57 (1H， brs， -OH)， 9.33 (1H， brs， -OH)， 7.34 (1H， d， J = 1.8 Hz， H-6)， 7.28 (1H， dd， J = 1.79， 8.2 Hz， H-4)， 6.79 (1H， d， J = 8.2 Hz， H-3); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 167.8 (C-7)， 150.5 (C-2)， 145.3 (C-5)， 122.3 (C-4)， 122.1 (C-1) 117.0 (C-6)， 115.6 (C-3)。以上波谱数据与文献报道一致 [ 12 ] ，从而确定化合物结构为3，4-二羟基苯甲醛(3，4-dihydroxy benzaldehyde)。 化合物5：白色粉末，ESI-MS m/z 137 [M-H] - ，分子组成：C 7 H 6 O 3 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 12.61 (1H， brs， -COOH)， 9.21 (1H，brs， 4-OH)， 7.79 (2H， d， J = 8.3， H-2， 6)，6.83 (2H， d， J = 8.3， H-3， 5); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 167.6 (C-7)， 162.1 (C-4)， 132.0 (C-2， 6)， 121.8 (C-1)， 115.6 (C-3， 5)。以上波谱数据与文献报道 [ 13 ] 的数据一致，从而确定化合物结构为4-羟基苯甲酸(4-hydroxy benzoic acid)。 化合物6：白色粉末，ESI-MS，m/z 153 [M-H] - ，分子组成：C 7 H 6 O 4 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 7.17 (1H， d， J = 3.1 Hz)， 6.94 (1H， dd， J = 3.1， 8.8 Hz)， 6.77 (1H， d， J = 8.8 Hz); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 172.3 (C-7)， 154.6 (C-4)， 150.0 (C-3)， 123.9 (C-6)， 118.1 (C-2)， 115.1 (C-5)， 113.5 (C-1)。以上波谱数据与文献报道一致 [ 14 ] ，从而确定化合物结构为3，4-二羟基苯甲酸(3，4-dihydroxy benzoic acid)。 化合物7：白色粉末，ESI-MS m/z 153 [M-H] - ，分子组成：C 7 H 6 O 4 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 9.70 (1H， s， H-7)， 7.27 (1H， dd， J = 1.99， 7.97 Hz)， 7.23 (1H， d， J = 1.99 Hz)， 6.91 (1H， d， J = 7.97 Hz); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 191.6 (C-7)， 152.6 (C-4)， 146.4 (C-3)， 129.3 (C-1)， 125.0 (C-6)， 116.0 (C-2)， 114.8 (C-5)。以上波谱数据与文献报道一致 [ 15 ] ，从而确定化合物结构为2， 5-二羟基苯甲酸(2，5-dihydroxy-benzoic acid)。 化合物8：白色粉末，ESI-MS m/z 197 [M-H] − ，分子组成：C 9 H 10 O 5 ，不饱和度为5。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 12.43 (1H， brs， -COOH)， 10.25 (1H， brs， 4-OH)， 7.21 (2H， s， H-2， 6)， 3.81 (6H， s， -OCH 3 ); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 167.7 (C-7)， 147.9 (C-3，5)， 140.6 (C-4)， 120.8 (C-1)， 107.3 (C-2，6)， 56.4 (-OCH 3 )。以上波谱数据与文献报道一致 [ 16 ] ，从而确定化合物结构为3，5-二甲氧基4-羟基苯甲酸(3，5-dimethoxyl-4-hydroxy benzoic acid)。 化合物9：白色粉末，ESI-MS m/z 147 [M-H] - ，分子组成：C 9 H 8 O 2 ，不饱和度为6。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 7.69 (2H， m， H-2，6)， 7.42 (3H， m， H-3，4，5)， 7.59 (1H， d， J = 16.0 Hz， H-7)， 6.53 (1H， d， J = 16.0 Hz， H-8); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 134.7 (C-1)， 128.7 (C-2，6)， 129.4 (C-3，5)， 130.7 (C-4)， 144.4 (C-7)， 119.7 (C-8)， 168.1 (C-9)。以上波谱数据与文献报道一致 [ 17 ] ，从而确定化合物结构为反式桂皮酸(Trans-cinnamic acid)。 化合物10：白色粉末，ESI-MS m/z 191 [M-H] - ，分子组成：C 11 H 12 O 3 ，不饱和度为6。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 10.05 (1H， brs， -COOH)， 7.55 (2H， d， J = 8.64， H-2， 6)， 7.55 (1H， d， J = 16.0， H-7)， 6.79 (2H， d， J = 8.6， H-3， 5)， 6.38 (1H， d， J = 16.0 Hz， H-8)， 4.16 (2H， q， J = 7.0 Hz， H-10)， 1.24 (3H， t， J = 7.0 Hz， H-11); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 126.8 (C-1)， 129.8 (C-2，6)， 114.3 (C-3，5)， 158.6 (C-4)， 144.4 (C-7)， 119.7 (C-8)， 168.1 (C-9)， 60.6 (C-10)， 14.8 (C-11)。通过以上的波谱数据，确定化合物结构为4-乙氧基苯丙烯酸(4-ethyoxyl-Cinnamic acid)。 化合物11：白色粉末，ESI-MS m/z 167 [M-H] - ，分子组成：C 9 H 12 O 3 ，不饱和度为4。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 6.84 (2H， d， J = 8.6 Hz， H-2， 6)， 7.43 (2H， d， J = 8.6 Hz， H-3， 5)， 7.43 (1H， s， H-7)， 3.80 (6H， s， H-8， 9); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 151.3 (C-1)， 115.4 (C-2，6)， 123.8 (C-3，5)， 147.6 (C-4)， 113.2 (C-7)， 56.0 (C-8，9)。通过以上核磁数据，确定化合物结构为4-(二甲氧基甲基)-苯酚4-(dimethoxymethyl)-phenol。 化合物12：无色油状物，ESI-MS - m/z 232[M-H] - ，结合 1 H-NMR和 13 C-NMR确定化合物的分子组成C 10 H 19 NO 5 ，不饱和度为2。 1 H-NMR (500 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 12.07 (1H， brs， H-1)， 1.63 (2H， t， J = 7.1 Hz， H-2)， 2.21 (2H， t， J = 7.5 Hz， H-3)， 7.77 (1H， t， J = 7.1 Hz， H-4)， 3.12 (1H， m， H-6a)， 3.06 (1H， m， H-6b)， 3.71 (1H， d， J = 5.1 Hz， H-4)， 3.30 (1H， d， J = 10.5， 3.6 Hz， H-9a)， 3.18 (1H， d， J = 10.5， 3.6 Hz， H-9b)， 0.81 (3H， s， H-10)， 0.80 (3H， s， H-11); 13 C-NMR (125 MHz， DMSO-d 6 ) δ: 174.7 (C-1)， 25.1 (C-2)， 31.6 (C-3)， 25.1 (C-2)， 173.5 (C-5)， 38.0 (C-6)， 75.6 (C-7)， 39.4 (C-8)， 68.5 (C-9)， 21.4 (C-10)， 20.9 (C-11). 以上波谱数据与文献报道 [ 18 ] 数据一致，从而确定化合物为N-3-(3，5-dihydroxy- 4，4-dimethyl-1-oxopentyl)-β-Alanine。 3.2. 讨论分析 本文综合应用大孔树脂、正相及反相硅胶色谱、Sephadex LH-20、半制备液相等色谱方法以及质谱、核磁等波谱技术对短柱肖菝葜根部的30%大孔树脂部位的化学成分进行了分离纯化和结构鉴定。共得到12个化合物：大泽明素(1)、苏铁素(2)、3，4，5-三羟基苯甲醛(3)、3，4-二羟基苯甲醛(4)、4-羟基苯甲酸(5)、3，4-二羟基苯甲酸(6)、2，5-二羟基苯甲酸(7)、3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(8)、反式桂皮酸(9)、4-乙氧基-苯丙烯酸(10)、4-(二甲氧基甲基)-苯酚(11)和N-3-(3，5-dihydroxy-4，4-dimethyl-1-oxopentyl)-β-Alanine (12)。化合物2~12均为首次从该属植物中分离得到。 其中大泽明素(1)和苏铁素(2)是短柱肖菝葜中的代表性成分，为甲基氧化偶氮糖苷类化合物。该类成分在自然界的植物中分布较少且具有抗肿瘤的作用 [ 9 ] [ 10 ] ，是短柱肖菝葜的主要活性成分。化合物3-11为酚酸类成分，一般具有抗氧，抗氧化的药理活性 [ 19 ] 。化合物N-3-(3，5-dihydroxy-4，4-dimethyl-1-oxopentyl)- β-Alanine的结构也较为新颖，为β-丙氨酸同异庚酸衍生物形成的酰胺类成分，在自然界也分布较少，有抗维生素的作用 [ 20 ] 。