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user: 4. 结果 4.1. 材料表征 利用透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)表征纳米银的颗粒形态及粒径分布。如图1(a)，图1(b)所示，纳米银颗粒呈圆形，分散状态良好。图1(c)~(e)结果表明纳米银溶液在水中分散良好，粒径分布在7~45 nm，以10 nm左右为主；而在模拟胃液中粒径分布以10~25 nm为主，发生了部分团聚现象。 不同取样点的血液及脏器组织内银含量经ICP-MS方法测定，其结果如图2所示。图2(a)显示纳米银 比血液内银含量呈现蓄积性增加，因此血液内的银在低浓度时刺激炎性细胞反应性增加；而高浓度时则诱导细胞毒性，抑制了淋巴细胞的正常生长。这一结果提示，机体摄入纳米银的量不同可能会引起完全不同的毒性风险。 血液生化异常检测结果见表2。在纳米银单次灌胃给入的高剂量组和连续灌胃给入七天时的低剂量组均检测到了血糖的升高，提示胰脏可能受到了一定的影响。在纳米银单次灌胃给入和连续灌胃给入七天时的高剂量组分别检测到了磷酸酶的增高和谷草转氨酶的显著降低，提示肝脏可能受到了一定的影响。 4.2.4. 免疫学检测结果 大鼠血清免疫因子检测结果见图3，结果表明纳米银连续灌胃给入十四天时，高剂量组(与对照组相比)血清总IgG、IgE水平显著增高。纳米银连续灌胃给入七天时，高剂量组(与对照组相比)血清IL-4水平显著增高。在纳米银连续灌胃给入十四天后停止给入十四天时，高剂量组(与对照组相比)血清IL-6显著性增高，但在纳米银连续灌胃给入十四天时并没有检测到显著性增高。其在停止给入十四天后在高剂量组的高表达的原因未见相关报道。 大鼠血清IL-12p40，IL-1β检测结果在各组间没有显著性差异。所有大鼠的血清样本IL-10均在检测限以下。 4.2.5. 大鼠全血淋巴细胞亚群流式检测 如图4所示，纳米银经灌胃连续7天暴露后各淋巴细胞分型检测与对照组相比未见明显异常。纳米银连续14天暴露后高剂量组的Th细胞(CD3+CD4+) (与对照组相比)有明显的增加，但未达到显著性差异(p = 0.052)。低剂量组的B细胞(CD45RA+) (与对照组相比)有增高趋势；其它各淋巴细胞分型检测与对照组相比未见明显异常。连续14天暴露后停止暴露，继续饲养14天后，高剂量组、低剂量的组B细胞(CD45RA+) (与对照组相比)均显著增加(高剂量组p = 0.001：低剂量组p = 0.032)，其它各淋巴细胞分型检测与对照组相比未见明显异常。 4.3. 体外炎症因子诱导实验结果 如图5所示，在LPS诱导条件下，低剂量和高剂量纳米银(0.5 μg/ml，5 μg/ml)均抑制了LPS诱导的IgG和IL-6的分泌；但聚苯乙烯纳米颗粒没有引起显著性的减少。这一结果提示，纳米银引起淋巴细胞在LPS诱导下的IgG分泌的抑制主要由纳米银释放的银离子的毒性引起，银纳米级颗粒可能起到了协同作用。单纯的纳米级颗粒并不会引起淋巴细胞的毒性和刺激作用。 在LPS诱导条件下，聚苯乙烯纳米颗粒显著抑制了IL-12p40的释放，而纳米银高低剂量组均未见显著性变化。这一现象可能与纳米颗粒的粒径不同有关，聚苯乙烯纳米颗粒的粒径是50~100 nm，而纳米银的 Table 2 Abnormal results of blood biochemical assessment in rats after SNPs exposure (v.s control) Statistic method n Object Group Average Std Sig. Day 1 ANOVA-Dunnet-t 3 Glucose High-dose 3.22 0.89 0.02 3 Phosphate High-dose 3.22 1.02 0.035 Day 7 Games-Howell 6 Glucose Low-dose 1.43 0.44 0.036 ANOVA-Dunnet-t 6 AST High-dose −37 12.16 0.015 Day 14 ANOVA-Dunnet-t 6 Cl Low-dose 0.47 0.15 0.017 表2. 纳米银暴露后大鼠血液生化异常检测结果(与对照组比较) [ 1 ] Xu， L.， Shi， C.， Shao， A.， et al. (2014) Toxic responses in rat embryonic cells to silver nanoparticles and released silver ions as analyzed via gene expression profiles and transmission electron microscopy. Nanotoxicology， 1-10. [ 2 ] Xu， L.， Shao， A.， Zhao， Y.， et al. (2014) Neurotoxicity of silver nanoparticles in rat brain after intragastric exposure. Journal of Nanoscience and Nanotechnology， 14， 1-9. [ 3 ] Bouwmeester， H.， Poortman， J.， Peters， R.J.， et al. (2011) Characterization of translocation of silver nanoparticles and effects on whole-genome gene expression using an in vitro intestinal epithelium coculture model. ACS Nano， 5， 4091- 5103. [ 4 ] Shavandi， Z.， Ghazanfari， T. and Moghaddam， K.N. 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