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user: 3. 结果 3.1. 金银花活性成分 通过TCMSP检索到236个金银花化合物，筛选出23个活性化合物，见表1。 Table 1 Main active ingredients in Lonicerae japonic 编号 MoI ID 分子名称 OB% DL JYH-01 MOL001494 Mandenol 42.00 0.19 JYH-02 MOL001495 Ethyl linolenate 46.10 0.20 JYH-03 MOL002707 phytofluene 43.18 0.50 JYH-04 MOL002914 Eriodyctiol (flavanone) 41.35 0.24 JYH-05 MOL003006 (-)-(3R，8S，9R，9aS，10aS)-9-ethenyl-8-(beta-D-glucopyranosyloxy)-2，3，9，9a，10，10a-hexahydro-5-oxo-5H，8H-pyrano[4，3-d]oxazolo[3，2-a]pyridine-3-carboxylic acid_qt 87.47 0.23 JYH-06 MOL003014 secologanicdibutylacetal_qt 53.65 0.29 JYH-07 MOL002773 beta-carotene 37.18 0.58 JYH-08 MOL003036 ZINC03978781 43.83 0.76 JYH-09 MOL003044 Chryseriol 35.85 0.27 JYH-10 MOL003059 kryptoxanthin 47.25 0.57 JYH-11 MOL003062 4，5’-Retro-.beta.，.beta.-Carotene-3，3’-dione， 4’，5’-didehydro- 31.22 0.55 JYH-12 MOL003095 5-hydroxy-7-methoxy-2-(3，4，5-trimethoxyphenyl)chromone 51.96 0.41 JYH-13 MOL003101 7-epi-Vogeloside 46.13 0.58 JYH-14 MOL003108 Caeruloside C 55.64 0.73 JYH-15 MOL003111 Centauroside_qt 55.79 0.50 JYH-16 MOL003117 IoniceracetalidesB_qt 61.19 0.19 JYH-17 MOL003124 XYLOSTOSIDINE 43.17 0.64 JYH-18 MOL003128 dinethylsecologanoside 48.46 0.48 JYH-19 MOL000358 beta-sitosterol 36.91 0.75 JYH-20 MOL000422 kaempferol 41.88 0.24 JYH-21 MOL000449 Stigmasterol 43.83 0.76 JYH-22 MOL000006 luteolin 36.16 0.25 JYH-23 MOL000098 quercetin 46.43 0.28 表1. 金银花活性成分基本信息 3.2. 金银花活性成分对应靶蛋白 通过TCMSP分别获取23个成分作用的相关靶点蛋白名称，根据Uniprot数据库筛选活性成分并为其添加相关靶标，排除无对应基因名部分，排除靶点重复部分，共获得活性成分17个，靶点193个。 3.3. 过敏性鼻炎相关靶点 以“allergic rhinitis”为关键词，检索Genecards数据库、TTD数据库、OMIM数据库的疾病潜在作用靶点，排除重复部分，得到过敏性鼻炎潜在作用靶点2089个。 3.4. 金银花与过敏性鼻炎Venn图构建 利用R语言软件将过敏性鼻炎与金银花的活性成分靶点进行匹配，得到疾病与药对靶点98个见图1，共同靶点见表2。 图1. 药物(JYH)与疾病(AR)靶点的Venn图 Table 2 98 Latent targets of 17 active ingredient 潜在靶点 PTGS1 HMOX1 ADRB2 TNF EGFR MET IL1A PTGS2 CYP3A4 CHRM3 MAPK8 BCL2L1 EGF MPO PIK3CG CYP1A2 HTR2A STAT1 MMP9 ODC1 NFE2L2 DPP4 CTNNB1 ADRA1A CYP1A1 MAPK1 SOD1 PARP1 ESR1 MYC CHRM2 ICAM1 IL10 HIF1A CXCL11 AKT1 GJA1 ADRA1B SELE IL6 IL1B CXCL2 VEGFA PGR SLC6A4 VCAM1 TP53 CCL2 DCAF5 BCL2 NOS2 CHRNA7 GSTP1 NFKBIA PTGER3 PPARA CASP9 AR PRKCA AHR ERBB2 CXCL8 CRP MMP2 PPARG TGFB1 GSTM1 BIRC5 NOS3 CXCL10 JUN MAPK14 PON1 SLPI IL2 PLAT CHUK CASP3 GSK3B ACHE ADRA2A IFNG THBD SPP1 CASP8 KCNH2 RELA PLAU IL4 SERPINE1 IRF1 MMP1 ESR2 IKBKB LTA4H CD40LG PTEN ERBB3 表2. 17个活性成分作用的98个潜在靶点 3.5. 金银花治疗过敏性鼻炎的“活性成分–作用靶点”网络构建 利用Perl软件整理数据，导入Cytoscape软件，构建金银花抗过敏性鼻炎的“活性成分–作用靶点”调控网络。其中右侧为药物靶点，左侧为活性成分，见图2。利用CytoNCA得出Degree前3的活性成分是槲皮素、木犀草素和山柰酚。 图2. 金银花治疗过敏性鼻炎的“活性成分–作用靶点”网络 图3. 药物(JYH)与疾病(AR) PPI图 3.6. 金银花与过敏性鼻炎的靶点蛋白互作网络(PPI) 将“3.4”项中获得的交集靶点导入String网站，物种设置为人源性，以交互作用证据类型为边，以置信区间0.40为要求，获得蛋白互作网络图，导出PPI网络图(见图3)，其中节点数98、边数1762、平均节点度36、平均局部聚类系数0.684；黄绿色连线表示文字挖掘、黑色连线表示共表达、灰色连线表示蛋白质同源性、荧光绿连线表示基因邻里、红色连线表示基因融合、晶蓝色连线表示基因共现、天蓝色连线表示数据库挖掘、粉紫色连线表示实验获得。 3.7. 金银花与过敏性鼻炎的GO富集分析和KEGG通路富集分析 应用Metascape数据平台对金银花治疗过敏性鼻炎相关靶点进行信号通路分析，借助Excel对结果可视化。由结果可见多个靶点的功能与过敏性鼻炎的产生密不可分。金银花主要参与的生物学过程包括生物对脂多糖的应答过程(response to lipopolysaccharide)、凋亡细胞通路(apoptotic signaling pathway)、调节细胞黏附(regulation of cell adhesion)、对受伤的应答(response to wounding)、对毒性物质的应答(response to toxic substance)、见图4 (A)；相关靶点治疗过敏性鼻炎的功能主要富集于转录因子结合(transcription factor binding)、蛋白均二聚活性(protein homodimerization activity)、细胞因子受体结合(cytokine receptor binding)、激酶结合(kinase binding)、蛋白激酶活性(protein kinase activity)等，见图5 (B)；细胞成分主要富集于膜筏(membrane raft)等，见图6 (C)；参与的通路主要有癌症信号通路(pathways in cancer)、流体剪切应力与动脉粥样硬化(fluid shear stress and atherosclerosis)、IL-17信号通路(IL-17 signaling pathway)以及癌症蛋白聚糖(proteoglycans in cancer)等，见图7 (D)。 图4. 药物(JYH)与疾病(AR) GO-BP富集分析 3.8. 金银花治疗过敏性鼻炎分子对接结果 为了验证金银花有效组分与相关靶标关系，剖析药物–靶点间的分子作用机制，根据“3.5”及“3.6”的结果，本研究选择了选择相关度最高的槲皮素、木犀草素、山柰酚和AKT1 (PDB ID: 4EJN)进行分子对接。目前尚无分子对接的评价标准，以自由结合能 ≤ −5.0 kcal/mol作为评定标准 [ 11 ]。根据Ledock自动打分，槲皮素、木犀草素、山柰酚与AKT1 (PDB ID: 4EJN)之间的自由结合能为−6.07、−6.91、−5.81 kcal/mol，这说明槲皮素、木犀草素、山柰酚与AKT1 (PDB ID: 4EJN)紧密结合，证实预测结果的可靠性，结果见表3。 图5. 药物(JYH)与疾病(AR) GO-MF富集分析 图6. 药物(JYH)与疾病(AR) GO-CC富集分析 图7. 药物(JYH)与疾病(AR) KEGG富集分析 Table 3 Molecular docking of key compounds and key protein targe 关键化合物 关键靶蛋白 PDB ID 对接亲和力(kcal/mol) quercetin AKT1 4EJN −6.07 luteolin −6.91 kaempferol −5.81 表3. 关键化合物与关键靶蛋白分子对接结果