DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 2. 中医治疗肺间质纤维化的研究概况 2.1. 实验研究 雷宁宁 [ 5 ] 将40只大鼠随机分为空白组、模型组、麦门冬汤组和强的松组，观察麦门冬汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，麦门冬汤组中大鼠的炎症程度和胶原纤维表达明显下降，且CD44蛋白和CD90蛋白的表达水平升高，差异具有统计学意义(P < 0.05)，推测麦门冬汤可能通过提升CD44蛋白和CD90蛋白的表达来抑制肺纤维化。 宋启兰 [ 6 ] 将108只大鼠随机分成空白对照组、模型对照组、强的松组、十枣汤低剂量组、中剂量组和高剂量组，观察十枣汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型对照组相比，十枣汤三组中大鼠肺间质纤维化的程度都有明显改善，且肺组织中的转化生长因子-β1及肿瘤坏死因子-α表达水平明显降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)，推测十枣汤大概通过抑制肺组织中转化生长因子-β1及肿瘤坏死因子-α的表达，从而达到抑制肺纤维化的作用。 陆国辉等 [ 7 ] 将60只大鼠分为对照组、模型组、醋酸泼尼松组和甘草干姜汤低、中、高剂量组，观察甘草干姜汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，甘草干姜汤中、高剂量组谷胱甘肽和血清超氧化物歧化酶的含量明显增加，血清脂质过氧化物的含量明显降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)，提示甘草干姜汤通过提升肺组织中谷胱甘肽及血清超氧化物歧化酶的含量，降低肺组织中血清脂质过氧化物的含量，清除体内多余的氧自由基而从而抑制肺纤维化。 杨晗等 [ 8 ] 将144只大鼠随机分为即假手术组、模型组、强的松组、补阳还五汤低、中、高剂量组，观察补阳还五汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，补阳还五汤三组的肺泡炎及肺纤维化程度均有不同程度的改善，转化生长因子-β及Smad3蛋白的表达也有不同程度的降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)，提示补阳还五汤能够通过降低转化生长因子-β及Smad3蛋白的表达来改善该大鼠的肺纤维化程度。 朱曼 [ 9 ] 随机将大鼠随机分为正常组、模型组、四君子低剂量组、中剂量组、高剂量组，观察四君子汤对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，四君子汤三组中用力肺动态顺应性和肺活量较前均有显著增加，0.4秒率较前显著降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)，同时四君子汤三组的病理结果显示肺组织中纤维化面积比例下降，推测四君子汤能够通过减少肺组织中的胶原纤维沉积来改善该大鼠的肺功能。 2.2. 临床观察 于国强 [ 10 ] 将84例痰瘀痹阻证肺间质纤维化患者随机将其分为对照组和治疗组，每组各42例，对照组给予泼尼松口服，治疗组则给予旋覆花汤加减而组成的汤剂。结果两组的主要临床症状均较前均有所缓解，对照组和治疗组的有效率分别为66.7%和88.1%，两组肺功能中用力肺活量及一氧化碳弥散量较前均有所下降，但是治疗组的下降程度较对照组较小，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 谢银光 [ 11 ] 将90例肺间质纤维化气阴两虚证患者随机分为观察组和对照组，每组各45例，对照组给予醋酸地塞米松片口服，观察组给予自制养阴益气合剂口服。结果观察组和对照组的总有效率分别为88.89%和62.22%，两组6分钟步行试验距离均较前有所延长，且观察组比对照组延长的更为明显，两组第1秒用力呼气容积、1秒量及1秒率均较前有所上升，且观察组上升的更为明显，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 付玲 [ 12 ] 将100例肺间质纤维化患者随机分为试验组和对照组，每组各50例，两组均给予常规治疗，对照组在常规治疗基础上给予强的松口服，试验组在常规治疗基础上给予蒌贝棱术汤口服，结果两组中医症候积分均有明显下降，但试验组下降的更加明显，两组肺功能中肺总量及一氧化碳弥散量均较治疗前有所上升，但试验组上升的更为明显，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 王紫娟 [ 13 ] 将36例肺间质纤维化患者给予肺纤方加减口服，结果治疗后患者的CT积分较前有所下降，网格影、蜂窝影较前显著减少，肺总量治疗后较前明显升高，其差异均有统计学意义(P < 0.05)。支开叶 [ 14 ] 将就诊的54例肺间质纤维化患者随机分为治疗组和对照组，其中治疗组31例，对照组23例，对照组给予泼尼松口服，治疗组给予肺纤方胶囊剂口服，结果对照组和治疗组的总有效率分别为43.5%和87.1%，差异有统计学意义(P < 0.01)。 以上研究证表明，与西药相比，中药方剂的效果更好，对于改善患者的肺功能更为理想，在肺间质纤维化的治疗中显示出了独特的优势。但同时也存在一些问题：1) 各个医家对本病的病因病机认识不同，因此本病的辨证分型并没有形成统一的标准；2) 中药方剂的研究缺少横向的比较，临床中的研究样本含量较小，缺乏多中心、大样本的随机对照实验。因此，以后可以在学术会议上对该病进行充分讨论研究，以确定统一的辨证分型，建立公认的疗效判定标准，同时，在临床中进行多中心、大样本的实验研究，从而使中医治疗肺间质纤维化获得更大的进展。
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user: 3. 西医治疗肺间质纤维化的研究概况 3.1. 实验研究 邹华 [ 15 ] 将55只雄性小鼠随机分为液对照组、肺纤维化模型组、地塞米松干预组、红霉素低剂量和高剂量组，观察红霉素对博莱霉素所致肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与肺纤维化模型组相比，红霉素两组的肺系数、肺泡炎和肺纤维化程度评分均有显著降低，差异具有统计学意义(P < 0.05)，红霉素两组中羟脯氨酸及白细胞介素-17A的含量显著降低，推测红霉素能够通过减少羟脯氨酸及白细胞介素-17A的含量来降低肺泡炎和肺纤维化程度。 徐忠波等 [ 16 ] 将48只大鼠随机分成对照组、模型组、溶媒组和骨化三醇组，观察骨化三醇对矽肺纤维化大鼠模型的干预作用，结果与模型组相比，骨化三醇组大鼠的肺泡炎和肺纤维化的程度显著减轻，骨化三醇组转化生长因子-β1和SMAD3蛋白表达量显著低于模型组(P < 0.05)，SMAD7蛋白表达量显著高于模型组(P < 0.05)，提示骨化三醇能够通过调控转化生长因子-β1/SMAD通路中蛋白的表达来减轻大鼠的矽肺纤维化。 王文生等 [ 17 ] 将54只小鼠随机分为正常对照组、模型组、双环醇干预组，观察双环醇对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，双环醇干预组转化生长因子-β1的表达显著降低，且肺泡纤维化评分显著降低，差异均具有统计学意义(P < 0.05)，因此推测双环醇可使肺组织中转化生长因子-β1的表达降低，从而减轻肺纤维化的程度。 郭敬文等 [ 18 ] 将64只大鼠随机分为对照组、模型组、吡非尼酮低剂量组和高剂量组，观察吡非尼酮对矽肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与对照组相比，吡非尼酮两组肺组织中转化生长因子-β1、波形蛋白和Ⅰ型胶原含量均降低，差异均具有统计学意义(P < 0.05)，同时两组均使大鼠肺泡炎症、肺泡结构损伤和矽肺纤维化程度减轻，推测吡非尼酮可能通过降低肺组织转化生长因子-β1、波形蛋白和Ⅰ型胶原含量，从而减轻染矽尘大鼠的肺泡炎症和矽肺纤维化。 李俸敏等 [ 19 ] 将90只随机分成对照组、模型组、甘草酸灌胃组、甘草酸低浓度、高浓度组及布地奈德雾化组，每组各15只，观察雾化吸入甘草酸对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型的干预作用。结果与模型组相比，甘草酸两组中白细胞介素-17、转化生长因子-β1及Smad2水平降低的更为明显，其中白细胞介素-17、转化生长因子-β1的差异具有统计学意义(P < 0.05)，推测雾化吸入甘草酸能通过调控白细胞介素-17/转化生长因子-β/Smad通路的表达来抑制肺纤维化。 3.2. 临床观察 江训盛等 [ 20 ] 搜集尼达尼布治疗肺纤维化的随机对照试验，共包括1539例患者，其中尼达尼布治疗组1019例，安慰剂对照组520例，与对照组相比，尼达尼布明显提高患者的用力肺活量，延缓患者的血氧饱和度下降及用力肺活量年下降率，改善患者的一氧化碳弥散量，其差异有统计学意义(P < 0.05)。 焦明芝 [ 21 ] 将58例肺间质纤维化患者随机分为对照组和观察组，对照组28例和观察组30组，对照组给予泼尼松口服，观察组在对照组基础上加上缬沙坦口服。结果观察组和对照组的总有效率为93.5%和78.6%，且与对照组相比，观察组中一秒用力呼气容积、最大呼气中期流量、一氧化碳弥散量及用力肺活量改善的更为明显，其差异均具有统计学意义(P < 0.05)，说明缬沙坦联合应用泼尼松在改善肺功能方面有一定的优势。 尹庆和 [ 22 ] 将85例肺间质纤维化患者随机分为对照组和治疗组，其中对照组42例，治疗组43例，对照组给予泼尼松口服，治疗组在此基础上给予依达拉奉注射液，结果治疗组和对照组的总有效率分别为90.70%和71.43%，两组的一氧化碳弥散量及血氧分压均较前有所提高，但治疗组升高的更为明显，其差异均具有统计学意义(P < 0.05)，但两组均有不良反应，主要表现为低血钾、高血压及消化道反应(恶心、反酸等)。 穆丹 [ 23 ] 将50例肺间质纤维化患者随机分为对照组和观察组，两组均给予常规治疗，对照组在常规治疗基础上给予强的松片口服，观察组在对照组基础上乙酰半胱氨酸口服及布地奈德雾化吸入。结果观察组和对照组的总有效率分别为88%和64%，且与对照组相比，干扰素-γ显著低于对照组，白细胞介素-4显著高于对照组，其差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 柴玉生 [ 24 ] 将180例肺纤维化患者随机分为对照组和观察组，每组各90例，两组均给予常规对症治疗，对照组在此基础上给予N-乙酰半胱氨酸泡腾片，观察组在对照组基础上给予孟鲁司特钠片口服。结果两组用力肺活量、最大分钟通气量及弥散量检测结果均较治疗前升高，但观察组升高的更为明显，差异有统计学意(P < 0.05)。 虽然以上药物治疗肺间质纤维化取得了一定的疗效，但单纯使用西药时可能会出现低血钾、高血压、恶心及反酸等不良反应，且很多仍处于动物试验阶段，其效果仍需要进一步来验证。同时，可以从分子、基因水平上进一步研究肺间质纤维化的作用机制，以寻找新的治疗靶点。
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user: 4. 中西医结合治疗肺间质纤维化的研究概况 吕凌云 [ 25 ] 将50例肺纤维化患者随机分为联合组与对照组，每组25例，两组均给予常规治疗，对照组在此基础上给予乙酰半胱氨酸片口服，联合组在对照组基础上给予扶正化纤汤口服。结果对照组和联合组总有效率分别为56.0%和84.0%，联合组肺功能中1秒率、肺总量及一氧化碳弥散量显著高于对照组，动脉血气中血氧分压显著高于对照组，二氧化碳分压显著低于对照组，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 安世英等 [ 26 ] 将60例肺纤维化患者随机分为治疗组与对照组，每组30例，对照组给予乙酰半胱氨酸胶囊口服，治疗组在对照组治疗基础上给予加用加味下瘀血汤口服，结果治疗组中中医证候积分、生活质量积分及6分钟步行距离、肺功能中一氧化碳弥散量值显著高于对照组，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 韩正贵等 [ 27 ] 将94例肺纤维化患者随机分为研究组与对照组，每组47例，对照组给予泼尼松片口服，研究组在对照组基础上给予屏风生脉散口服，结果治疗组和对照组良好率分别为76.60%和40.43%，且研究组一氧化碳弥散量、最大肺活量、肺总量及血氧分压均显著高于对照组，呼吸困难评分显著低于对照组，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。 彭艳芳等 [ 28 ] 将50例肺纤维化患者随机分为观察组和对照组，每组25例，两组组均给常规对症治疗，对照组给予泼尼松片口服，观察组在对照组基础上给予芪归方口服。结果观察组和对照组的总有效率分别为84%和76%，两组生命质量积分及中医证候积分较前均有显著下降，6分钟步行距离较前显著上升，且观察组优于对照组，差异均具有统计学意义(P < 0.05)。
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user: 5. 小结 肺间质纤维化的发病率日益升高，但生存率低，故寻找一种有效的治疗药物显得尤为重要。本研究显示中西医均能改善大鼠模型的肺泡炎症及肺纤维化程度，改善肺间质纤维化患者的肺功能，但同样存在以下问题，如样本量少，缺乏多中心、大样本、随机对照研究，致使研究结果说服力不足，难以获得国际学术界的认同。结果同样表明中西药联合应用时疗效更好，而单用西药可能会出现低血钾、高血压、恶心及反酸等不良反应，故今后在临床治疗中，可以采取辨病与辨证相结合的方式，用中医药来减轻西药的毒副作用，以恢复机体的气血阴阳平衡，从而达到改善疾病的目的。相信随着医学科研水平的不断深提高和完善，在不久的将来对肺间质纤维化的治疗一定会有突破性的进展。
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user: 摘 要 太行山地区自然条件多样，植物资源丰富，对该地区进行了野生菊科种质资源调查。结果表明：太行山地区菊科植物有65属，165种，11变种。文章介绍了太行山地区野生菊科植物的属、种、药用部位及功效、原生地、生境及变种，为太行山菊科植物资源的进一步开发利用提供基础。 关键词 :河南省，太行山，菊科，药用功能 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 菊科(Asteraceae)是被子植物的第一大科，属于双子叶植物纲，约1000属，25，000~30，000种，广泛分布全世界，主要分布于温带地区 [ 1 ] ，热带较少。我国约240多属，2300种，产于全国各地 [ 2 ] 。菊科植物大多经济价值高、用途广。在中国菊科植物中，大约有300种可为药用，如泽兰、紫菀、旋覆花、茵陈蒿、艾、蒲公英等，这些品种含有许多活性成分具有多方面的药用价值 [ 3 ] ，如萜类、黄酮类、生物碱类等，在抑菌消肿、清热解毒、调节血糖血脂 [ 4 ] 、保肝利胆 [ 5 ] 、抑制肿瘤等方面有显著作用。此外，菊科植物还具有其他多方面的用途，如莴苣、莴笋、茼蒿等作蔬菜；向日葵、小葵子、苍耳的种子可榨油，供食用或工业用；菊、翠菊、大丽菊等，花朵美丽鲜艳，是良好的观赏植物 [ 6 ] 。目前，国内外学者对菊科植物的野生资源、化学成分及药理作用方面有一定的研究，但对太行山一带野生菊科植物种质资源的调查较少。本文对太行山野生菊科植物进行调查分析，以期为该地区菊科植物资源的开发与利用提供依据。
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user: 2. 太行山自然概况 太行山又名五行山、王母山、女娲山。是中国东部地区的重要山脉和地理分界线，位于(北纬34˚34'~40˚43'、东经110˚14'~114˚33')华北中心地带 [ 7 ] ，北起北京西山，南至豫北黄河北崖，西接山西高原，东临华北平原，绵延400余公里，是山西东部、东南部与河北、河南两省的天然界山。为中国地形第二阶梯的东缘，也是黄土高原的东部界线。太行山北高南低，河北省一侧海拔较低，山西省境内海拔较高 [ 8 ] ；山势东陡西缓，由多种岩石构成，呈现不同的地貌，东西两侧的植被垂直带特征存在明显差异，东侧植被属于暖温带落叶阔叶林地带类型，西侧植被则属于森林草原和干草原地带类型，海拔多在1200 m以上 [ 9 ] 。 太行山属于暖温带半湿润大陆性季风气候，全年无严寒酷暑，雨热同季，四季分明，冬长夏短。年平均气温在10℃左右，1月份最冷，平均气温为−5℃，平均最低气温在−10℃左右；7月份最热，平均气温为23℃，平均最高气温在28℃上下，高温天气较少。年日照时数将近2500小时，月平均日照时数在200小时左右。太行山年降水量在534 mm左右，7月温度较高、降水最多，为132.3 mm左右，12月最少，为4.4 mm左右。
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user: 3. 太行山野生菊科种质资源调查方法 自2015年9月至2018年10月，对太行山河南省境内菊科植物进行实地考察，采集样本，根据其生长性状进行分类，记录各个品种的生长环境和分布地区；并查阅《中国植物志》、《救荒本草》等大量相关菊科植物资料，总结不同品种的药用价值。
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user: 5. 太行山河南境内野生菊科种质资源特点分析 通过对调查结果的深入分析，发现太行山河南境内野生菊科种质资源有以下特点。 1) 太行山河南境内菊科药用植物资源丰富，具有较大的开发潜力。 从表1可以看出：其中具有药理作用的46属，85种，分别占太行山菊花总数的70.77%和51.51%，集中分布在济源的天台山、水洪池、鳌背山、曼坪、黄楝树、五龙口、上架及沁阳的云台、白松岭、榆树坪、天苍峪等地区。在所有药用植物中，全草入药的有63种，占太行山河南境内药用菊科植物的74.12%，根入药的有21种，茎入药的有13种。这些药用菊科植物具有清热解毒、润肺止咳，解毒、活血散瘀、调经、利尿、消炎止血、祛风湿、健胃、祛痰等功效，具体见表1。其中清热解毒作用的最多，有48种，占太行山河南境内药用菊科植物的56.47%；其次是消肿止痛、活血散瘀，有45种；第三是止咳化痰，有19种。菊科药用植物资源主要分布在在蒿属、千里光属、莴苣属、蓍属等，其中蒿属高达8种，占太行山药用植物总数的9.41%。风毛菊属、火绒草属、蟹甲草属、麻花头属和盘果菊属等的药用价值较低。 2) 在菊科植物中除药用价值外，很多种类还有其它用途。 进一步对表1调查结果进行分析发现：黄鹌菜嫩叶含有较高的膳食纤维可作野菜食用，也可作饲料；莴苣可作为蔬菜，有促进人体肠胃蠕动、提高食欲的功效；金盏花、大丽花因花期长、花色多，可用于全国各地做观赏花卉；黄花蒿可用作制酒饼或香料，也可用作牲畜饲料；金盏花富含多种维生素可用于化妆品原料和茶饮；马兰有较强的抗病虫力，一般不需要用药治虫防病，可开发人工栽培，作为淡季蔬菜；红花因出油率高可作为食品添加剂和油料作物，也可制油漆；葵花籽可作坚果，花穗、种子皮壳及茎秆可用作工业原料和饲料；山莴苣由于粗纤维含量少，畜禽的采食率和消化率都很高，可作为优良饲用植物饲喂猪、禽等；沙蒿由于茎多数丛生，阻沙作用好，可用作优良的固沙植物等。这些广泛用途有利于人们对太行山地区菊科植物进行综合开发利用。
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user: 6. 结束语 太行山河南境内的菊科种质资源十分丰富，有多种药用和观赏价值，但目前对菊科药用植物的研究和开发利用仍较落后，可加强对这些资源的利用，收集、保存并保护现有品种。菊科植物具有种类多、数量大、活性物质含量丰富的优势，市场发展前景广阔，在保健品、绿色食品、添加剂、化妆品等方面进行综合开发利用后，必然会获得更大的价值和经济效益。
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user: 摘 要 本研究在吉林省西部7个地区13个群落中，调查了杨树菌根真菌的种类和分布，共鉴定出菌根真菌3属8种，其中最多的是球囊霉属，占总种数的75%，在所有调查样点中，菌根真菌物种丰富度最大值为5，球囊霉属物种出现的频度最高为76.92%，各样点菌根真菌对杨树根系的侵染频率平均值为49.44%，侵染强度平均值为37.59%，孢子密度平均值为22.08，各样点菌根真菌侵染频率、侵染强度与孢子密度三者之间均呈极显著正相关，相关系数最大值为0.863。结果表明在吉林省西部杨树群落中存在较丰富的菌根真菌资源，为进一步利用杨树改良盐碱地提供理论依据。 关键词 :菌根真菌，杨树，物种丰富度，相关性分析 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 丛枝菌根真菌是迄今为止发现的广泛分布于土壤中且与植物关系最为密切的微生物之一，能与绝大多数的高等植物形成共生体系 [ 1 ]。由于地区生存条件的差异，在不同区域的菌根真菌的种类和分布也不同，能够表现出地域和生境差异，从而形成丰富的种质资源 [ 2 ] [ 3 ]。在不同生境中，菌根真菌的物种丰富度、孢子密度、侵染频度以及侵染强度也不同。菌根真菌的资源分布不仅受宿主植物影响外，还受到气候、土壤等环境因子的影响 [ 4 ] [ 5 ]。近年来，AM真菌在盐碱地、荒漠土地、退化草地、以及工业污染区等生境中的分布问题已成为研究热点 [ 6 ]。了解菌根真菌的资源分布，利用菌根真菌修复退化生态系统 [ 7 ]，具有较高的应用价值，是进一步开发利用菌根真菌的基础。 吉林省西部由于过度开垦放牧，加上全球气候变暖等因素的影响，生态系统退化严重，主要表现为不同程度的盐碱化 [ 8 ]。由于杨树具有较强的适应性，是吉林省西部造林绿化的主要树种，杨树菌根资源丰富，是菌根营养型树种 [ 9 ]。本研究开展吉林西部杨树菌根真菌资源调查，了解侵染杨树根系的AM真菌种类和分布，为进一步利用杨树改良盐碱地提供理论依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 采样地点 本次实验开始于2017年9月，对吉林省西部7个地区13个群落(见表1)进行调查研究，按林龄对所调查的群落进行划分，包括长春市农安县开安镇成过熟林、长春市农安县开安镇中幼龄林、长春市农安县哈拉海镇成过熟林、长春市农安县哈拉海镇中幼龄林、松原市长岭县中幼龄林、松原市前郭县王府站镇中幼龄林、松原市前郭县王府站镇成过熟林、松原市长山镇中幼龄林、松原市长山镇成过熟林、大安市中幼龄林、大安市成过熟林、大安市舍力镇成过熟林和大安市舍力镇中幼龄林。 2.2. 采样方法 对当地具有代表性的杨树群落进行调查，按照25 cm × 25 cm的取样面积，移除羊草地上部分后，去掉表层土2 cm，根系和土壤利用撬挖深20~30 cm，取土约2 Kg，装入已经准备好的取样袋中，袋上标明采样时间、地点、周围环境同时注明采样人员。为了将取得的新鲜杨树根系带回实验室进行实验，需将其立即置于配好的福尔马林：冰醋酸：酒精(FAA固定液)中，样品确保3次重复。 Table 1 The information of sites where mycorrhizal fungi resources was investigated in rhizosphere of Populu 市区 地点 群落 经纬度 长春 农安县开安镇 杨树成过熟林 44˚17'N，125˚19'E 长春 农安县开安镇 杨树中幼龄林 44˚17'N，125˚19'E 长春 农安县哈拉海镇 杨树成过熟林 44˚64'N，125˚12'E 长春 农安县哈拉海镇 杨树中幼龄林 44˚64'N，125˚12'E 松原 长岭县八十八乡 杨树中幼龄林 44˚85'N，125˚02'E 松原 前郭县王府站镇 杨树中幼龄林 44˚86'N，124˚51'E 松原 前郭县王府站镇 杨树成过熟林 44˚86'N，124˚51'E 松原 前郭县长山镇 杨树中幼龄林 45˚29'N，124˚50'E 松原 前郭县长山镇 杨树成过熟林 45˚29'N，124˚24'E 大安 大安市区 杨树中幼龄林 45˚49'N，124˚25'E 大安 大安市区 杨树成过熟林 45˚55'N，123˚33'E 大安 舍力镇 杨树成过熟林 45˚55'N，123˚32'E 大安 舍力镇 杨树中幼龄林 44˚29'N，123˚46'E 表1. 杨树根际土壤菌根真菌资源调查地点基础情况 2.3. 样品处理 2.3.1. AMF孢子分类及计数 AM孢子进行分离采用湿筛倾析–蔗糖离心法 [ 10 ]。利用四分法称取100 g土样，放入准备好的烧杯中加水进行搅拌，然后浸泡30 min，分别过0.8 mm，0.25 mm和0.05 mm的筛子，将筛出物装入离心管中，转速调至3000 r/min，离心3 min，去掉上清液，加入50%的蔗糖溶液搅匀，同样转速调至3000 r/min离心1.5 min。把上清液过0.05 mm筛子后获得孢子。得到的孢子在体视显微镜下于培养皿内分格计数，测定孢子密度(SD， spore density)和物种丰度(SR， species richness)。 孢子密度：采用每100 g观测土样内AM真菌孢子总数。 SD = AM真菌所有物种的孢子总数/100g土壤 物种丰富度：即统计某样点100 g土壤中含有的AM真菌物种的数目 SR = AM真菌所有物种的数目 在体视显微镜下先观察并记录孢子的大小、颜色、连孢菌丝特征等。再用移液枪挑取孢子放置于载玻片上，用PVLG、PVLG和Melzer试剂制成标本，根据孢子的大小、颜色、类型、厚度、内含物性质等特征，并参考Schenck和Perez [ 11 ] 的“VA菌根真菌鉴定手册”，以及国际丛枝菌根真菌保藏中心(INVAM)网站上提供的鉴定图片对AMF进行鉴定，按照Morton和Redecker [ 12 ] 的分类系统对AMF进行鉴定分类。 2.3.2. 杨树根系透明、染色和侵染情况 对杨树根系采用KOH透明–乳酸甘油酸性品红染色法进行染色 [ 12 ]。首先将选出的根系切成1~2 cm的根段，蒸馏水冲洗5次，将根段放入10% KOH溶液中，溶液完全淹没根段，放置于90℃水浴锅中60 min，蒸馏水冲洗5次，放入碱性双氧水(H 2 O 2 )中软化20 min后，用清水清洗干净，放入2%的盐酸(HCl)中酸化4 min，盐酸倒出，加入配置好的酸性品红溶液(85%乳酸500 ml + 甘油500 ml + 水500 ml + 酸性品红0.75 g)，然后在90℃水浴锅中继续染色30 min。取出样根，放在乳酸甘油溶液(1:1)中浸泡脱色。将根样从乳酸甘油溶液中取出进行压片，每个样品随机选取50条根段，在显微镜下观察每条根的侵染长度(以mm记录)，并记录侵染根段数和总根段数。按照公式计算侵染频率(Colonization Rate， CR %)和侵染强度(Infection Intensity， II %)，如下： 侵染频率 = (侵染根段数/总根段数) × 100 侵染强度 = (侵染根长/总根长) × 100 2.4. 分析方法 数据使用SPSS 19.0进行处理，同时利用线性回归法，分析了侵染频率、侵染强度与孢子密度三者之间的关系。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 杨树AM真菌种源分布 通过对吉林省西部7个地区13个群落中杨树林进行根际丛枝菌根真菌资源调查，初步了解了该地区杨树AM真菌的种类，结果见表2。共鉴定出AM真菌3属8种，其中球囊霉属(Glomus) 6种，球囊霉属包括聚生球囊霉(G. fasiculatum)、聚丛球囊霉(G. aggregatum)、摩西球囊霉(G. mossea)、近明球囊霉(G. claroideum)、地球囊霉(G. geosporum)、微丛球囊霉(G. microaggregatum)，占总种数的75%；无梗囊霉属(Acaulospora) 1种，为光壁无梗囊霉(A. laevis)，占总种数的12.5%；类球囊霉属(Paraglomus) 1种，为隐类球囊霉(P. occultum)，占总种数的12.5%。在所有调查样点中，AM真菌物种丰富度最小值为1，出现在地块2(农安县开安镇中幼龄林)中；最大值为5，出现在地块3 (农安县哈拉海镇成过熟林)中。在所有鉴定出的杨树根际土壤的 AM真菌中，球囊霉属物种出现的频度最高，其中聚生球囊霉在10个调查样点中出现，频度达到76.92%，其次是聚丛球囊霉和摩西球囊霉，出现频度均为46.15%，双型球囊霉的出现频度最低，仅为7.69% (见表2)。 Table 2 The resources and distribution of AM fungi in Populu 属名 Genus 学名 Latin name 调查地点Investigation sites 频度 Frequency (%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 球囊霉(Glomus) 聚生球囊霉(G. fasiculatum) + + + + + + + + + + 76.92% 聚丛球囊霉(G. aggregatum) + + + + + + 46.15% 摩西球囊霉(G. mossea) + + + + + + 46.15% 近明球囊霉(G. claroideum) + + + + + 38.46% 微丛球囊霉 (G. microaggregatum) + + 15.38% 地球囊霉(G. geosporum) + + 15.38% 无梗囊霉属(Acaulospora) 光壁无梗囊霉(A. laevis) + + 15.38% 类球囊霉属(Paraglomus) 隐类球囊霉(P. occultum) + 7.69% 物种丰富度Species richness 2 1 5 2 3 2 2 4 3 3 2 2 3 表2. 杨树土壤 AM 真菌资源及地区分布 3.2. 杨树AM真菌侵染情况及影响因素 在所调查的杨树群落中，各样点AM真菌对杨树根系的侵染频率范围为30.00%~71.33%，平均值为49.44%，侵染强度范围为9.33%~50.67%，平均值为37.59%，孢子密度范围为12.33%~35.33%，平均值为22.08 (见表3)。 Table 3 The resources and distribution of AM fungi in rhizosphere of Populu 地点 侵染频率 Colonization Rate CR (%) 侵染强度 Infection Intensity II (%) 孢子密度 Spore Density SD (No./100g soil) 1 30.00 ± 2.00 22.00 ± 2.00 12.33 ± 0.58 2 33.33 ± 1.16 14.673 ± 1.16 21.33 ± 0.58 3 50.00 ± 2.00 34.00 ± 4.00 16.67 ± 0.58 4 42.67 ± 1.16 29.33 ± 1.16 23.00 ± 1.00 5 49.33 ± 3.01 38.00 ± 2.00 22.67 ± 0.58 6 42.00 ± 2.00 9.33 ± 1.16 22.67 ± 0.58 7 42.67 ± 1.16 30.67 ± 1.16 9.00 ± 1.00 8 52.67 ± 1.16 42.00 ± 2.00 24.33 ± 0.58 9 48.00 ± 2.00 42.67 ± 1.16 17.67 ± 0.58 10 71.33 ± 2.31 50.00 ± 2.00 35.33 ± 0.58 11 63.33 ± 1.16 50.67 ± 1.16 28.00 ± 1.00 12 65.33 ± 4.16 48.00 ± 2.00 30.00 ± 1.00 13 52.00 ± 2.00 47.33 ± 3.06 24.00 ± 1.00 总计 49.44 ± 11.83 37.59 ± 10.92 22.08 ± 6.91 表3. 各调查地点杨树根系侵染频度、侵染强度和孢子密度 3.3. 杨树AM真菌侵染情况相关性分析 在所调查的杨树群落中，各样点AM真菌侵染频率、侵染强度与孢子密度三者之间均呈极显著正相关，相关系数最大值为0.863 (侵染频率与侵染强度)，即AM菌侵染的杨树根系数量越多，其在每条根上侵染的长度越长(见表4)。 Table 4 Correlation coefficients among infection frequency， intensity and spore density in rhizosphere of Populu 性状 侵染频率 侵染强度 侵染强度 0.863 ** 孢子密度 0.764 ** 0.634 ** 表4. 各调查地点杨树根系侵染频度、侵染强度和孢子密度相关性分析 ** 在0.01水平(双侧)上显著相关。
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user: 4. 讨论 自然界中，广泛存在着 AM真菌与高等植物的共生关系 [ 13 ]。AM真菌属于专性共生真菌，宿主植物的多样性在一定程度上决定AM真菌的多样性 [ 14 ]，不同宿主植物根围的AM真菌组成和数量不同。杨树是一种内外生菌根植物，AM真菌的共生能够在杨树的苗期发挥重要作用，为后期杨树的健康生长奠定基础，同时也有研究发现AM真菌的共生能够促进杨树生长和营养吸收 [ 15 ]。 我国对AM真菌的研究从20世纪80年代开始。已报道发现了7属99种AM真菌 [ 16 ]。张美庆 [ 17 ] 、王幼珊 [ 18 ] 等进行了以北方、东南沿海和西南、华中等地区为主的全国范围的丛枝菌根调查，已报道AM真菌51种，内含一个新种，13个国内新纪录种。 根据孢子的大小、颜色、类型、厚度、内含物性质等特征为主要依据，并参考“VA菌根真菌鉴定手册”，以及国际丛枝菌根真菌保藏中心(INVAM)网站上提供的鉴定图片对AMF进行鉴定。本研究中，根据这个方法，鉴定出AM真菌3属8种，其中球囊霉属(Glomus) 6种，无梗囊霉属(Acaulospora) 1种，类球囊霉属(Paraglomus) 1种。对杨树菌根菌的研究也有很多，利用同样的方法，赵忠等 [ 19 ] 在陕西省的杨树中发现外生菌根真菌11种。这种鉴定方法要求熟悉鉴定材料，同时需要对孢子的各项形态特征进行综合分析，反复比较以减少鉴定误差，使鉴定结果较为准确可靠。 对吉林省西部7个地区13个群落杨树根围AM真菌的调查，发现在吉林省西部盐碱化土壤中存在较丰富的AM真菌资源，侵染率很高，根围土壤中的孢子密度大。在所有鉴定出的杨树根际土壤的AM真菌中，球囊霉属物种出现的频度最高，其中聚生球囊霉(G. fasiculatum)在10个调查样点中均出现，频度达到76.92%，可能为此地区的优势菌种，这与王桂君 [ 20 ] 对吉林省西部盐碱化羊草草原的研究结果一致。王发园等 [ 21 ] 在黄河三角洲盐碱土壤中丛枝菌根真菌的资源状况中也有同样的结论，共分离鉴定出32种菌根真菌，其中球囊霉属(Glomus)有24种。而刘润进等 [ 22 ] 对我国盐碱土壤中丛枝菌根菌的种属进行了研究，结果发现盐渍化砂土、壤土和粘土中存在大量的AM真菌，球囊霉属(Glomus)中的摩西球囊霉(G. mosseae)则是分布最为广泛的菌种。摩西球囊霉在本地区数量也较多，一些研究证明摩西球囊霉是重度盐土中最优势的物种 [ 23 ] [ 24 ]，并且地球囊霉也是重度退化地区的优势种 [ 25 ] [ 26 ]。 土壤中AM真菌孢子的多少对菌化植物的形成意义重大，本研究表明，各个调查样点的孢子密度变化较大，孢子密度范围为12.33%~35.33%，因此，强烈的土壤干扰和侵蚀可能是影响AM真菌繁殖体数量的主要原因之一。通过相关性分析发现，AM真菌对杨树根系的侵染频率和侵染强度在各个调查样点间变化较大。各样点AM真菌侵染频率、侵染强度与孢子密度三者之间均呈极显著正相关，即AM菌侵染的杨树根系数量越多，其在每条根上侵染的长度越长。不同AM真菌对相同植物的侵染率不同 [ 27 ]，这说明植物和AM真菌的亲和性影响侵染速度 [ 28 ]，也与根系生长的土壤条件和环境因子有很大关系 [ 29 ]。已有研究表明植物对营养元素的选择性吸收受AM真菌的影响，但是植物的生长还与盐碱胁迫有关 [ 30 ] [ 31 ]，在重度盐碱化草地植被恢复中，只有耐盐能力强的AM菌种才能发挥积极作用 [ 32 ]。
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user: 摘 要 综述了雪菊中主要活性成分及其功能与检测方法的研究进展，着重阐述了雪菊中黄酮、挥发油、皂苷、绿原酸、木犀草苷、氨基酸和多糖的功能特性及检测方法，旨在为进一步开发利用雪菊资源提供参考。 关键词 :雪菊，活性成分，功能特性，检测方法 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 雪菊(Coreopsis tinctorial Nutt.)又名两色金鸡菊，属于菊科(Compositae)金鸡菊属(Coreopsis)的一年生高寒草本野生植物，原产于美洲、非洲及大洋洲部分地区，后多作为观赏性植物被引种栽培在世界各地。雪菊在我国主要分布在新疆和田、昆仑山脉(海拔3000米以上)，其它平原地区也有少量分布。此外，在众多栽培品种中，新疆昆仑雪菊以其极高的药用价值和独特的功效在2009年初次亮相茶博会时便获得较高的知名度 [ 1 ]。 雪菊中富含20多种氨基酸、蛋白质、维生素、30多种人体必需矿质元素等营养成分和30多种黄酮类物质、挥发油、皂苷、木犀草苷、有机酸、酶类、多糖等具有保健功能的活性成分 [ 2 ]，是一种药食两用植物。其活性成分具有抑制肿瘤、调节血糖血压、抗炎、抗辐射、抗衰老等功效，因此雪菊是天然的保健养生植物。也因含有较高的营养成分 [ 3 ]，雪菊已成为研究热点，且蛋白质、糖类和总黄酮含量明显高于其它菊类 [ 4 ]，具有广阔的发展前景。为了更好地开发利用雪菊，本文就雪菊的主要活性成分及其功能与检测方法进行了综述。
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user: 2. 雪菊主要活性成分及其功能特性 2.1. 雪菊中总黄酮的功能特性 总黄酮是一种很强的抗氧化剂，在大豆、蜂胶、银杏等一些植物和浆果中广泛存在，常被作为保健品原料，深受大家青睐。黄酮的抗氧化能力是维生素E的十倍以上，雪菊总黄酮的含量约11.6%，高于市售其它品种菊花(小毫菊、晚贡菊、黄菊、济菊等) [ 4 ]，主要含有黄诺玛苷、马里苷等黄酮类活性成分 [ 5 ]。帕尔哈提·买买提依明等研究发现雪菊中总黄酮可以明显抑制人肝癌细胞、非小细胞肺癌细胞及结肠癌细胞株的增殖 [ 6 ] [ 7 ]。另外，雪菊中总黄酮在控制三高、抗辐射、增强人体免疫力、美白等方面也具有显著作用 [ 8 ]。例如，方煊等用不同浓度雪菊黄酮提取物培养高脂细胞模型，结果表明浓度较高的黄酮能显著降低脂肪变性肝细胞中甘油三酯的含量，一定条件下效果与处理时间及浓度成正比 [ 8 ]；张燕用昆仑雪菊五种提取物处理α-葡萄糖苷酶，结果表明黄酮对该酶的抑制作用最强 [ 9 ]，有望用于糖尿病相关产品；沙爱龙等建立急性衰老小鼠模型，采用灌服的方法观察不同浓度的昆仑雪菊黄酮对小鼠脑及脏器指数的影响，数据表明，灌服黄酮的小鼠相关指数均明显高于对照组，且有明显的剂量依赖效应 [ 10 ]，宋烨威选取100种原料提取活性成分，并进行体外抗氧化实验法和生化酶法评价其美白效果，结果表明昆仑雪菊抗氧化活性最好，对酪氨酸酶的抑制作用也优于其他植物，可作为美白类化妆品添加剂原料 [ 11 ]。 2.2. 雪菊中挥发油的功能特性 挥发油是雪菊活性成分中的重要组分，约占9.85% [ 12 ]，其种类及含量较市售菊花种类多 [ 13 ]，对心脑血管疾病有显著疗效。萜类、醇类、酚类、酮类、烯类和烷烃类化合物是雪菊中挥发油的主要成分 [ 14 ]，具有抗心肌缺血、抗心律失常 [ 15 ] [ 16 ]、止痛、抑菌 [ 17 ]、消炎 [ 18 ]、保护脑组织、抑制肿瘤 [ 19 ]、抑制常见的条件致病真菌新生隐球菌 [ 20 ]、祛痰、止咳、溶解胆结石、抑制癌症 [ 12 ] 等作用，其抗氧化的能力远高于胎菊、野金菊、洋甘菊等多种菊科花茶 [ 21 ] [ 22 ]；挥发油中含量最多的柠檬烯具有抗肿瘤功效 [ 13 ] [ 23 ]，多酚类化合物含量也高于杭白菊、黄山贡菊、滁菊等市售菊花 [ 24 ]。李瑶用昆仑雪菊多酚类化合物对建立急性肝损伤的昆明小鼠进行处理，结果发现多酚类化合物对D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝损伤有一定的保护作用 [ 25 ]。另有研究表明，从雪菊挥发油中分离得到的萜烯醇类物质能明显抑制由12-O-十四酰大戟二萜醇-13-酰诱发产生的早期抗原，对白血病HL-60细胞具有极其显著的细胞毒活性 [ 26 ]。 2.3. 雪菊中皂苷类物质的功能特性 植物皂苷是人参、远志、甘草、三七等多种中草药的主要药用成分。研究发现皂苷能明显抑制肿瘤活性，降低血栓、病毒、炎症、水肿的发生，对心血管 [ 27 ] 和脑组织 [ 28 ] 有保护作用，且能改善记忆。研究表明，人参皂苷可将异丙肾上腺素所致家兔动物模型的室性心律失常转为窦性心律，并维持其节律时间 [ 28 ]。金晶等对皂苷的生物活性的总结中提到皂苷也能有效抑制绿色木霉菌和罗氏白绢菌等植物真菌的生长，能提高动物对新城疫病毒的免疫，并抑制前列腺癌细胞(PC-3)在小鼠体内的增殖 [ 29 ]。Zhang等从雪菊中分离提取的4种新型C14-聚乙炔苷类物质能预防心血管疾病，Marco等做类似研究发现聚乙炔苷类物质在治疗心脏病方面将会发挥特殊功效 [ 30 ]。 2.4. 雪菊中绿原酸和木犀草苷的功能特性 绿原酸和木犀草苷是菊科药用植物中常见的活性物质，雪菊中绿原酸和木犀草苷的含量分别为8.05~120.72 mg/ml和0.1~1.0 mg/ml [ 31 ] [ 32 ]。其中，绿原酸具有清热解毒、刺激兴奋、抗菌消炎、保肝利胆、调节血压和血脂、抑制溶血和突变及美容养颜等作用 [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ]，对急性咽喉炎症和化脓性皮肤疾病疗效显著 [ 36 ]。作为一种抗氧化性物质，绿原酸不仅可作为食品中天然的抗氧化剂，也可添加到护肤品中防止紫外线对皮肤的伤害 [ 37 ]。木犀草苷具有较强的呼吸道杀菌、降低胆固醇在动脉中的粥样硬化、增强毛细血管的舒张、解热抗炎、抗病毒 [ 38 ]、抗肿瘤 [ 39 ] 等作用。例如，马双成等用木犀草苷、木犀草素及病毒唑对多种病毒进行毒性试验，结果表明，木犀草苷抗呼吸道合胞体病毒的活性最强，其还具有一定的抗副流感病毒3型病毒的活性 [ 40 ]。还有研究表明，木犀草苷对K562细胞、人食管癌Eca109细胞、豚鼠胚肺细胞的生长增殖有抑制作用 [ 38 ]。 2.5. 雪菊中氨基酸和多糖的功能特性 雪菊中氨基酸与市售菊花杭白菊、黄山贡菊、滁菊相比含量最高(10.8%) [ 4 ]，且种类丰富包括天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸等17种，其中人体必需的8种氨基酸含量高达40.3% [ 41 ]。氨基酸是蛋白质的基本组成单位，在人体内通过代谢可以发挥多种作用：合成组织蛋白质；变成酸、激素、抗体、肌酸等含氨物质；转变为碳水化合物和脂肪以及氧化成二氧化碳、水和尿素，产生能量。雪菊中含有丰富的多糖，李洁等发现昆仑雪菊多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶有较好的抑制效果，因此雪菊中的多糖有抗糖尿病、抗氧化等作用 [ 42 ]。
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user: 3. 雪菊主要活性成分的检测方法 3.1. 雪菊中黄酮的检测方法 目前，雪菊中总黄酮提取可采用热水法、乙醇回流法、超声–微波协同萃取法、水萃取法等 [ 43 ]。张彦丽等对雪菊中总黄酮提取方法进行比较研究，发现：超声–微波协同萃取法因其比乙醇回流法和超声波法提取时间短且提取效率高，简单、快速、高效且无污染等优点效果最好，水提法因其成本较低、提纯效果略低于超声–微波协同萃取法，而常用于大量提取 [ 44 ]。其含量测定的方法有荧光光度法、高效液相色谱法、超临界流体色谱法、紫外分光光度法等，其中高效液相色谱法结果稳定可靠但对相关仪器的要求较高，超临界流体色谱法作为新兴技术，我国还处于摸索阶段，荧光光度法在测量黄酮含量上还没有成熟的技术体系，而紫外分光光度法因其具有的准确、简便、对仪器要求较低等优势使用较为普遍 [ 37 ]。其分离纯化可用柱层析、薄层层析、硼酸络合、溶剂萃取、铅盐沉淀、大孔吸附树脂法、高效液相色谱法等，大孔吸附树脂作为一类有机高分子聚合物吸附剂，在分离黄酮时分离程度较高，成本低，在工业化生产上较为普遍 [ 45 ] [ 46 ]。 3.2. 雪菊中挥发油的检测方法 雪菊中挥发油的提取一般用水蒸馏法、溶剂法、超临界法和超声法等 [ 37 ]。古丽江·马合苏提汗用超声辅助热回流和水蒸气蒸馏的方法提取新疆昆仑雪菊挥发油，并用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除方法(DPPH法)测定比较其抗氧化活性，结果表明超声波辅助热回流法效果最好 [ 12 ]。张彦丽等采用气相色谱–质谱联用技术并结合计算机检索分析鉴定出了挥发油的22种成分，采用面积归一化法成功测定了昆仑雪菊挥发油中各成分的相对质量分数 [ 14 ]。 3.3. 雪菊中皂苷类物质的检测方法 雪菊中皂苷的提取方法有溶剂萃取法、大孔树脂法、超临界流体萃取法、微波辅助提取技术等，溶剂法提取因成本较低使用广泛 [ 37 ]。马超等以昆仑雪菊为原料，从水料、时间、温度三个方面对超声辅助提取昆仑雪菊皂苷的方法进行优化，最终提取率为7.1% [ 47 ]，刘厚赫等采用正交试验法优化建立了稳定的用乙醇浸提昆仑雪菊总皂苷的方法，最终提取率为6.8% [ 48 ]。张彦丽采用分光光度法成功测出昆仑雪菊中总皂苷含量为8.36%，该方法较为简便灵敏、快速准确 [ 49 ]。 3.4. 雪菊中绿原酸和木犀草苷的检测方法 雪菊绿原酸常采用石硫醇、超声波、水提醇沉、聚酰胺柱层析及超临界流体萃取等方法进行提取。由于绿原酸多不稳定，其结构易受到压力、温度等因素的影响，而低温下进行的超临界流体萃取法恰好解决这一问题而应用广泛 [ 37 ]；买买提·艾买提等采用反相高效液相色谱法测出绿原酸的含量 [ 50 ]；王省超等用正交试验优化了超声提取工艺，并用高效液相色谱法也成功测出昆仑雪菊中绿原酸的含量 [ 2 ] [ 31 ]。雪菊中木犀草苷的提取常采用醇提取法，赵文惠等以木犀草素标准溶液为标准液，建立了用反相高效液相色谱法测定昆仑雪菊木犀草苷含量的体系 [ 32 ]。 3.5. 雪菊中氨基酸和多糖的检测方法 雪菊氨基酸提取主要采用超声–微波协同萃取法。其含量的测定可用比色法和氨基酸自动分析仪及高效液相色谱法 [ 51 ]。王亮成功采用氨基酸分析仪法对来自新疆和田昆仑山区的昆仑雪菊粉碎并对其进行各种氨基酸含量的测定；氨基酸成分分析也可用刘立业建立的高效液相色谱–蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法 [ 52 ]。雪菊多糖的提取常采用水提醇沉法、微波辅助法、超声波辅助法等：阿赛古丽对这些方法进行比较优化，其中超声波辅助提取效果最好，提取率为10.90%，水提醇沉与微波辅助的提取率分别为8.96%和9.95% [ 53 ]；另外，张彦丽等采用苯酚–硫酸法测定昆仑雪菊多糖的含量，此方法简单、重复性和稳定性较好 [ 54 ]；曹志龙等利用气相色谱法测定了雪菊多糖提取物中的单糖组成 [ 55 ]。
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user: 4. 结论与展望 雪菊中主要含有黄酮、挥发油、皂苷类物质、绿原酸、木犀草苷、氨基酸和多糖等活性成分，其药理作用广泛，可用于治疗高血压、降血脂、抵抗癌症和抗衰老等，在美容方面可以淡斑祛痘、美白养颜、滋润保护肌肤等。目前有关各活性成分的检测方法基本确定，雪菊在医药、食品、美容养生等方面具有极大的应用前景，由于雪菊地域性状突出，相关开发研究较少，人们对雪菊的研究侧重于其生长特性、药理作用和化学成分定性定量的分析，但对其活性成分的进一步挖掘和药用作用机理的探讨方面仍很欠缺，现多被作为茶饮。故可加强这些方面的研究，以促进雪菊在医学和食品保健上更好的开发利用。
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user: 摘 要 为了探究插穗年龄对不定根生根的影响，本研究以1、2、3年生毛白杨杂交三倍体新品种“北林雄株2号”的嫩枝插穗为研究材料，扦插五天后进行转录组测序分析，共检测到5153个差异表达基因。GO分析显示，上调基因主要富集在线粒体呼吸、氧化磷酸化和类黄酮合成等过程，下调基因主要富集在油菜素内酯合成、水杨酸信号转导和赤霉素合成等途径。KEGG结果显示，差异基因在信号转导、能量代谢、翻译、糖代谢、其他次生代谢产物合成、氨基酸代谢和运输等通路富集。最后，对三个比较组中5个共下调基因和4个共上调基因与不定根形成的关系进行了讨论。转录组分析说明随着母株年龄的增长，不定根形成相关基因表达谱发生变化，导致插穗不定根生根受到抑制。 关键词 :杨树插穗，成熟效应，不定根，转录组 Copyright © 2019 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 毛白杨是我国北方的主栽树种之一，在全国木材供应、生态环境建设、城乡绿化等方面具有重要意义。北京林业大学林木遗传育种国家工程实验室科研团队选育出的雄性杨树杂种三倍体新品种“北林雄株2号”，父本为银腺杨(Populus alba × P. glandulosa)，母本为毛新杨(P. tomentosa × P. bolleana)，具有雄株不飞絮、生长迅速、抗风能力强等特点，是解决杨树飞絮问题和用于速生丰产林建设的适宜品种 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]。 通过无性繁殖的技术进行培育，并将无性繁殖与林木育种相结合是目前杨树栽培的主要道路 [ 4 ]。然而无性繁殖容易受到成熟效应(age effect)的影响，从而导致品种退化。成熟效应有时也被称为年龄效应，是指无性繁殖材料的发育阶段对无性繁殖效果的滞后影响，例如随着母株年龄的老化，插穗枝条的生根能力逐渐丧失。在杨树等成熟效应比较明显的树种中，苗木幼年期的速生性削弱，很快进入发育的衰老阶段，生长受到抑制，年生长量降低 [ 5 ]。本研究通过对1、2、3年生“北林雄株2号”扦插五天的插穗进行转录组测序分析，分析了年龄对不定根生根状态的影响，为杂交三倍体新品种“北林雄株2号”的插穗繁育提供新的理论基础。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 实验材料 杂交三倍体新品种“北林雄株2号”无性繁殖实验材料来自山东省聊城市冠县国营苗圃。 2.2. 实验处理 插穗采集：选取生长良好、健壮无病虫害的1、2、3年生母株当年生嫩枝条(直径为0.8~1.2 cm，长度为10 cm)。扦插基质为沙质土：营养土：珍珠岩按2:1:1比例混合。采取扦插五天(D5)的插穗基部以上5 cm范围内部位(1、2、3年生分别取3株重复)，立即放入液氮速冻，于−80℃超低温保存，用于后续转录组测序分析。 2.3. 实验方法 2.3.1. RNA-Seq 技术和Illumina 测序 对1、2、3年生扦插五天的插穗基部进行转录组测序，对样品总RNA进行提取，使用DNase处理杂质DNA，将富集的mRNA打成短片段。然后将这些片段作为模版，用六碱基随机引物合成一链cDNA，之后合成二链cDNA，双链cDNA采用试剂盒进行纯化；纯化后的双链cDNA再进行末端修复、加A尾并连接测序接头和片段大小选择，最后进行PCR扩增；构建好的文库用Agilent 2100 Bioanalyzer质检合格后，使用Illumina HiSeq X Ten测序仪进行测序，产生150 bp的双端数据。 2.3.2. 数据预处理、质量控制与组装 为了得到可供后续分析的高质量reads，需要对高通量测序中产生的原始数据raw reads进行进一步的质量过滤。使用Trimmomatic [ 6 ] 软件对数据进行质控并去除接头，过滤掉低质量碱基以及N碱基得到高质量的clean reads。通过Trinity (version:trinityrnaseq_r20131110) [ 7 ] 软件paired-end的拼接方法拼接 clean reads得到Transcript序列，根据序列相似性以及长度，挑选出最长的一条作为Unigene。 2.3.3. Unigene 功能注释 采用diamond [ 8 ] 软件，取e < 1e−5，筛选序列相似性最高的蛋白，从而得到NR、KOG、GO、Swiss-Prot、eggNOG、KEGG数据库注释功能注释信息。利用HMMER [ 9 ] 软件将Unigene与Pfam数据库进行比较，完成对Pfam数据库的注释。 2.3.4. Unigene 定量和差异Unigene 筛选 FPKM (fragments per kilobase of transcript per million mapped reads)是每一百万个片段中映射到每1千个外显子碱基的片段数。FPKM兼顾了测序深度和Unigene长度对片段计数的影响，是目前最常用的估计表达水平的方法。Unigene的FPKM [ 10 ] 和count使用bowtie 2 [ 11 ] 和eXpress [ 12 ] 软件分析得到。通过eXpress软件获取落到各个样本中Unigene的reads数目，使用DESeq [ 13 ] R package的estimate Size Factors函数对数据进行标准化，并使用nbinomTest函数计算差异比较的P value和Fold change值。挑选出P value小于等于0.05，Fold change大于等于2的差异表达基因，对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析。 2.3.5. 差异Unigene富集分析 GO (Gene Ontology)富集分析可通过注释结果对差异Unigene进行统计学分析和功能描述。统计每个GO term中所包括的差异mRNA个数，并用超几何分布检验方法计算每个GO term中差异Unigene的P value和FDR值，定位差异Unigene最可能相关的GO term。P value小表示差异Unigene在该GO term中出现了富集。 超几何分布检验计算公式为： p = 1 − ∑ i = 0 m − 1 ( M i ) ( N − M n − i ) (Nn) Enrichment score计算公式为： Enrichmentscore = m n / M N KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)是一个整合了基因组、化学和系统功能信息的公共数据库。统计每个pathway中所包括的差异mRNA个数，并用超几何分布检验方法计算每个pathway中差异Unigene的P value和FDR值，定位差异Unigene最可能相关的pathway。P value小表示差异Unigene 在该pathway中出现了富集。相关计算公式参考GO富集分析。通过对差异Unigene进行GO和KEGG富集分析，来研究影响杨树不定根生根过程的生物学功能或者通路。