DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 近年来，随着计算机处理技术的高速发展，互联网中的信息呈爆炸形式的发展，人们希望能够更精炼快速地捕获重要信息。句子压缩就是一种将冗长句子转换成精炼简洁句子的信息提炼方法。该项技术广泛地用于主题自动获取、摘要生成、问答系统等技术中，压缩后的句子需要保证原本句意不变，并且还需要一定程度上保证句子的可读性和语法上的逻辑性。 经典的句子压缩工作主要依赖于语法信息来进行判断，其主要思路是使用传统的句法信息，如基于选区的解析树(parse trees)的方法，通过使用语法树解析句子，以此进一步裁剪句子中的单词并重写句子 [ 1 ] [ 2 ] 。近年随着神经网络的发展，使用深度学习解决这个问题越来越受到人们的关注。Fillippova [ 3 ] 首次将循环神经网络 [ 4 ] [ 5 ] (Long Short-Term Memory)引入英文句子压缩中去，将句子压缩视为一种删除句子中单词的分类任务，相比传统方法有了较大的提升。神经网络模型是一种基于数据驱动的模型，拥有强大的特征提取能力，可以节约大量的人力物力，通过在大量的数据集上对模型进行训练，可以得到优于传统方法的效果。 尽管神经网络具有强大的特征提取能力，但网络端到端是不可控的。从句子压缩层面来看，在一些重要的名词或动词等被误删之后，往往会导致句意歪曲或压缩句阅读不通顺的问题。其次，由于不同领域下的常用词汇一般有较大的区别，在使用单一训练数据集得到的模型往往难以应对不同领域下得到的句子。对于不同风格和来源的句子，都需要使用到特定领域的训练数据集来进行训练才能达到理想效果，而数据集的获取是非常困难的，这一点极大地增加了应用难度。 针对以上问题，本文提出了一个既会使用句子中的单词信息，还会对词性信息进行获取的模型。通过提出一种带有语法注意力机制的长短期记忆网络，使用词性信息通过语法门控得到语法注意力，最终结合单词信息进行输出。使用词性序列来作为辅助序列是因为词性属于更为一般的信息，在句子中组成的单词不同的情况下，其所对应的词性序列往往有一定的相似性。使用词性序列进行辅助输出能够促进输出结果的语法正确性，进而保证可读性。本文的主要贡献如下： 1) 将句子的词性序列单独作为一条辅助序列，使用完整的词性序列并通过计算注意力机制来引导进行句子压缩。 2) 在模型中显式加入语法序列信息，使用语法注意力机制让输出的结果具有更强的可读性和鲁棒性，一定程度上也具有更好的跨领域应用能力。 3) 通过使用单词的语法信息，即使在词向量词典中找不到该词，也可以通过单词的词性信息一定程度上协助进行协助判断。一定程度上解决了词典非常见单词的OOV (out of vocabulary)问题。
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user: 2. 相关工作 传统的句子压缩方法主要基于语法解析树(Parse Tree)。例如，Cohn [ 6 ] 使用语法解析树来决定怎样重构句子，Filippova [ 7 ] 通过剪枝依赖树删除冗余词进而达到压缩句子的目的。而随着神经网络技术的发展，越来越多学者考虑使用神经网络来解决这个问题。Fillippova将编码器–解码器框架应用于删除式句子压缩任务，其核心组成是一个三层单向LSTM结构构成的编码解码模型，输出端使用Softmax作为激活函数来对每个单词进行二分类判断是否进行保留来组成压缩句，在大规模训练数据集上训练得到的效果相比较传统方法有较大的提升。后续Lai [ 8 ] 使用双向LSTM对句子双向信息进行捕捉，并在输出端使用条件随机场提高了效果；Tran [ 9 ] 。提出适应于句子压缩任务的注意力机制即t-attention模型，通过对编码器序列每个节点的输出引入到对应的解码器中去，有了显著的提升。紧接着鹿忠磊 [ 10 ] 等人通过尝试增大t-attention的捕获范围来扩大信息捕获范围。 上述工作的输入为句中单词的词向量，改进的主要思路为通过增强编解码器的特征捕获能力来提高模型效果。而从语言学的角度来看，语法相关信息是一个同为通用的信息，Wilks [ 11 ] 研究了通过对英文句子进行词性标注从而达到一定程度上消歧。而近期刘杰等 [ 12 ] 又通过对比发现使用循环神经网络能够更好判别出作文句间的逻辑性。Wang [ 13 ] 等人开始尝试将语法信息显性地引入句子压缩任务中，输入到网络的词向量中加入词性和单词之间的依赖信息，在跨领域数据上验证了通过显式地加入相关语法信息能够增强模型的效果和迁移能力。
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user: 4. 数据与实验 4.1. 数据与预处理 对于有监督训练尤其是深度学习模型而言，需要大量对应带标注语料数据。本文的训练数据集使用Filippova [ 17 ] 公开的4万条数据集，这批数据来自谷歌新闻(Google News)中收集到的“标题–新闻”句子对，进而通过参考标题对原句的依赖树进行剪枝，使用这种方式能够构建为原句子序列的压缩句，进而得到删除式句子压缩所需要的“原句–压缩句”平行语料。数据分为三部分：36，000条句子对组成训练集用于模型训练，2000条验证集用于训练过程中的交叉验证，2000多条测试集用于最终测试模型效果。 实验采用了开源的自然语言处理工具spacy对句子进行了分词等预处理工作。对于单词的词向量，采用了开源word2vec中的skip-gram训练方式基于本次数据集进行训练最终得到维度为97的词向量，使用预训练好的词向量能够一定程度上提高实验效果。由于词向量的训练依赖于词典，通过统计数据集选出词频最高的8000个词构成词典训练他们的词向量。 超出单词表的单词或字符均使用符号 作为标识，在句子开头加入 作为句子开始的标志。由于句子长短不一，本次实验中通过统计选取数据集句子长度，选择了120个单词的句长，即对于小于120词的句子，使用 进行补齐，而对于超出120个单词的句子，则对超出的单词直接进行截断丢弃。 此外，由于本次任务为删除式的句子压缩，因而需要使用原句子和压缩后的句子构造对应的标签，标签为0表示句子中的该单词应该被删除，而标签为1则表示单词应该被保留，而 和 部分则使用标签2进行区别表示。 4.2. 实验设置 本次实验中的词性编码解码器和单词编码解码器的输入维度和隐含层维度大小统一设置均为100。其中输入的词性向量和词向量均为97维度，而末尾的3个维度为标志位。在编码阶段，标志位不会进行标记均设为0；而在解码阶段，当前词的标志位由上一个词的标签输出结果决定，标签输出1、2、3则对应的标志位上的第1、2、3位置为1，其他位置为0。通过使用标志位的方式，能够将上一个节点的输出的结果传递给下一个节点，当前节点结合上一输出标签引导当前节点的输出。 根据本次数据集的特点对模型采用了如表4模型基本参数的设定方式。并且采用了提前停止的策略 [ 18 ] (early stop)，当验证集的F1数值超过5轮不增加之后，停止训练。 Table 4 Model basic parameter 参数 设定值 最大训练轮数 50 批大小 2000 学习率 0.001 最大句长 120 词典大小 8000 词向量维度 97 隐含层大小 100 表4. 模型基本参数 4.3. 实验结果 本文对实验结果的评价指标主要通过F1分数、以及压缩率CR(Compression Rate)二者进行衡量。F1指标是一种综合召回率和精确率的指标。其表示方法如下： F 1 = 2 ⋅ precision ⋅ recall precision + recall (10) 上述公式中的 表示精确率， 表示召回率。压缩率是一种用来描述句子压缩前后单词占比的指标，其计算公式如下： CR = N 压 缩 后 句 子 单 词 数 N 原 句 子 单 词 数 (11) 对于这一指标的目标是压缩率能够与原本句子中的基本保持一致，结合F1指标，CR能够一定程度说明压缩后的句子充分压缩了并且整体语义保留完整。 主要对比的网络主要包括Filippova提出的三层LSTM结构，一种使用双向LSTM更好捕获句子前后语义并进行解码的网络结构以及在神经机器翻译系统中提出来在双向LSTM的基础上加入注意力机制(Attention)，一种针对于句子压缩任务特点提出来的T-Attention结构，也是目前的state-of-the-art。实验测试集结果如表5 Google News数据集上的表现所示。 Table 5 Performance on the dataset of Google New Approach F1 CR (Ground Truth: 0.401) 3LSTM 0.7577 0.3749 Bi-LSTM 0.7510 0.4026 Attention 0.7631 0.3711 Bi-LSTM-TA 0.7698 0.3783 LSTM-Res 0.7706 0.3742 LSTM-Res-Syntax 0.7742 0.4025 表5. Google News 数据集上的表现 增加残差结构的LSTM-Res相比Filippova的三层LSTM结构F1数值上高出0.0129，并且是与当前达到state-of-the-art的Bi-LSTM-TA相当。而在通过加入语法信息，又在LSTM-Res又在原有的基础上有所提升，并且可以观察到压缩率CR和测试集的标准压缩率最为接近。对于同一来源的训练集的测试样本，加入语法门控的效果与当前state-of-the-art相当。 为了进一步比较模型的跨领域泛化能力，下面使用了与训练数据集不同来源且写作风格不同的NBC News数据集来做进一步的验证。 Table 6 Performance on the dataset of NBC New Approach F1 CR (Ground Truth: 0.6947) 3LSTM 0.4054 0.3177 Bi-LSTM 0.4007 0.3243 Attention 0.3963 0.3042 Bi-LSTM-TA 0.3918 0.3000 LSTM-Res 0.3958 0.3024 LSTM-Res-Syntax 0.4186 0.3274 表6. NBC News数据集上的表现 通过表6 NBC News数据集上的表现可以看到，在Google News的测试集中表现一般的3LSTM和Bi-LSTM在NBC News上表现良好，这一定程度上说明了简单的网络尽管对于单一数据上的拟合不够好，却能够在不同来源的数据集中变现出了良好的泛化能力。相比之下，原本表现良好的Bi-LSTM-tA在跨领域数据集中表现反而为最差。这反应了拟合能力强的模型往往在跨领域或者是在处理差别较大的数据时效果大打折扣。而本文提出的加入了语法信息的LSTM-Res-Syntax则通过捕捉句子中通用的语法信息，增强对于未见过句型的泛化能力。
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user: 5. 结论 本文提出一种融合语法信息的句子压缩方法。在该方法中，文本使用了词性序列来作为语法信息，然后提出了一种通过语法门来形成语法注意力的Syntax-LSTM，通过这一门控生成注意力，最终进行单词序列标签的判断。词性相比单词而言，是一种更为一般的信息，对于单词不同的句子其词性序列却有着一定的相似性，通过捕捉这类的相似结构，能够得到更好的输出并具有更强的泛化能力。最终实验取得了目前的state-of-the-art相当的分数，并在跨领域数据集NBC News上的性能均优于其他模型，证明了该方法具有更好的鲁棒性和可迁移性。下一步将对语法门控引入到文本摘要任务，尝试用删除式的方式做摘要的抽取。
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user: 摘 要 目的：分析胃肠道神经内分泌肿瘤(GI-NENs) CT表现与病理分级。方法：回顾性分析2013年5月至2018年7月我院经手术病理证实为GI-NENs的40例患者临床资料，评估其CT表现，并依据病理分级分为G1 + G2组、G3组，分析两组CT影像学特征。结果：40例患者中病理证实为G1级、G2级、G3级分别11例、5例、24例；CT可见28例呈局限性肠壁增厚，26例为均匀等密度，7例肿块中可见小斑片状坏死低密度区，2例为高密度出血灶，增强扫描动脉期明显强化34例，轻度强化6例，静脉期强化减退，部分病变侵犯浆膜、肠系膜淋巴结肿大、发生肝转移；G1 + G2组肿瘤直径小于G3组，经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移率低于G3组(P < 0.05)，两组边界、生长方式、远处器官转移、强化方式比较差异无统计学意义(P > 0.05)。结论：GI-NENs有其特征性CT表现，且CT对判断肿瘤侵犯范围与转移、评估病理分级等有重要价值，值得在临床推广实践。 关键词 :胃肠道神经内分泌肿瘤，CT，病理分级 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 神经内分泌肿瘤(neuroendocrine neoplasms， NEN)为起源于胃肠道管壁内肽能神经元及神经内分泌细胞的异质性肿瘤的总称 [ 1 ]，其中胃肠道神经内分泌肿瘤(gastrointestinal neuroendocrine neoplasms， GI-NENs)较少见，包括食管、十二指肠、小肠、阑尾、结肠与直肠的NENs。GI-NENs常缺乏典型临床症状，诊断难度高，目前临床医师对其认识不足 [ 2 ]。CT检查是临床常用的影像手段，可用于术前评估肿瘤的侵袭性，为临床选择治疗方案提供依据，因此GI-NENs的CT表现对判断病理分级可能有一定价值 [ 3 ]。本文通过比较不同病理级别GI-NENs患者的CT表现，分析其相互关系，以提高GI-NENs术前诊断率，结果如下。
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user: 2. 资料与方法 2.1. 一般资料 回顾性分析2013年5月至2018年7月我院经手术病理证实为GI-NENs的40例患者临床资料，入院时有头晕、嗳气、上腹部不适、黑便、恶心等临床表现，有1例无明显症状，但体检发现癌胚抗原(CEA)升高，接受CT检查前未行相关治疗。排除标准：1) 已行手术切除或化疗者；2) 原发病灶不明确者；3) 未接受CT增强检查者。其中男26例，女14例；年龄21~65岁，平均(43.18 ± 4.49)岁；病程7 d~5年，平均(2.53 ± 0.31)年；病灶部位：胃部26例，直肠8例，十二指肠3例，升结肠2例，乙状结肠1例。 2.2. 方法 2.2.1. 检查方法 扫描前1 d低渣饮食，晚餐后服用番泻叶清洁肠道，扫描当日禁食禁水。扫描前15 min分次服用对比剂(250 mL 20%甘露醇 + 1700 mL纯水) 2000 mL，充盈肠道，并肌注山莨菪碱20 mg。采用GE High Speed Advantage 64层螺旋CT机进行扫描，扫描参数：管电压120 kV，管电流400 mA，层厚5 mm，层距5 mm，螺距1.2，球管旋转速度0.5 s/r，重建层厚2 mm，患者先平扫，后经右肘静脉团注300 mg I/mL典比乐，给药剂量1.5 ml/kg，注射速率3.5 mL/s，后行增强三期扫描：动脉期25 s，门脉期60 s，延迟期120 s，扫描范围：上至膈顶下至坐骨关节，对食管病变者于注射对比剂后25 s行动脉期扫描，扫描范围自胸廓入口至肋膈角底平面。 2.2.2. 影像学处理及评估 将获取的图像传送至PACS工作站，由1名副主任医师及1名资深主治医师以双盲法阅片，主要观察肿瘤数目、部位、大小、形态及边界、邻近组织和器官改变等，当意见不一致时以讨论得出的结论为准。 2.2.3. GI-NENs分级及强化程度标准 依据指南 [ 4 ]，对肿瘤进行分类，G1级：低度恶性，肿瘤细胞大小中等，核圆形或卵圆形，核异型性轻至中度，核分裂象 < 2个/10 HPF，Ki-67增殖指数 < 3%，G2级：中度恶性，肿瘤细胞形态不一，呈多形性，核分裂象在2~20个/10 HPF，或Ki-67增殖指数在3%~20%，G3级：小细胞或大细胞神经内分泌癌，高度恶性，肿瘤细胞较小，核圆形，部分呈菊花团结构，弥散分布，且坏死广泛，核分裂像 > 20个/10 HPF，或Ki-67增殖指数 > 20%，混合型：同时有腺管样上皮或神经内分泌细胞，两种成分均有恶性潜能，每种成分占比 > 30%。强化程度评估：CT值增值 ≥ 40 HU为高度强化，CT值增值在21~39 HU为中度强化，CT值在6~20 HU为轻度强化，本研究将中度、重度强化归于明显强化。 2.3. 统计学方法 采用SPSS19.0软件处理数据，计数资料以%表示，采取χ 2 检验，计量资料以( )表示，行t检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 病理结果 40例患者中病理证实为G1级、G2级、G3级分别11例、5例、24例。 3.2. CT影像学表现 CT下可见28例呈局限性肠壁增厚，26例呈均匀等密度，7例肿块中有小斑片状坏死低密度区，2例为高密度出血灶，增强扫描动脉期明显强化28例，中度强化7例，静脉期强化减退，部分病变侵犯浆膜、肠系膜淋巴结肿大、发生肝转移。典型病例见图1(①)~(④)。 3.3. CT影像学表现与病理分级的关系 G1 + G2组肿瘤直径小于G3组，经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移率低于G3组(P < 0.05)，两组边界、生长方式、远处器官转移、强化程度、强化方式比较差异无统计学意义(P > 0.05)。见表1。 图1. ①：CT平扫动脉期见胃近幽门小弯侧胃壁增厚并有软组织肿胀，边缘整齐，尚未侵犯浆膜层；②：轴位CT静脉期显示胃窦壁增厚，局部结节样突起；③：轴位CT静脉期图像显示肝内多个转移灶，肝门部淋巴结肿大；④：HE染色(×200)镜下见癌细胞呈：条索状，细胞浆丰富，核分裂象少见。 Table 1 Relationship between CT imaging findings and pathological gradin 病理分级 肿瘤直径(cm) 边界 生长方式 经壁侵犯 坏死囊变 清晰 模糊 浸润性生长 局限性肿块 G1 + G2 (n = 16) 3.22 ± 0.41 5 (31.25) 11 (68.75) 9 (56.25) 7 (43.75) 6 (37.50) 3 (18.75) G3 (n = 24) 3.49 ± 0.33 5 (20.83) 19 (79.17) 7 (29.17) 17 (70.83) 19 (79.17) 12 (50.00) t值/χ 2 2.300 0.556 2.934 7.111 4.000 P值 0.027 0.456 0.087 0.008 0.045 病理分级 邻近组织侵犯 淋巴结转移 远处器官转移 强化程度 强化方式 轻度强化 明显强化 环状强化 不规则强化 G1+G2 (n = 16) 6 (37.50) 5 (31.25) 2 (12.50) 2 (12.50) 14 (87.50) 4 (25.00) 12 (75.00) G3 (n = 24) 20 (83.33) 17 (70.83) 6 (25.00) 4 (16.67) 20 (83.33) 5 (20.83) 19 (79.17) t值/χ 2 8.864 6.077 0.937 0.131 0.096 P值 0.003 0.014 0.333 0.718 0.757 表1. CT影像学表现与病理分级的关系
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user: 4. 讨论 GI-NENs为源自胃肠道黏膜或黏膜下功能不相同的内分泌细胞的低度恶性肿瘤，世界卫生组织按病理分级将其分为高分化(G1 + G2期)和低分化(G3期)两类 [ 5 ]，近年来研究发现GI-NENs发病率呈上升趋势，而大多数GI-NENs呈慢性浸润性生长，发展缓慢，且多为非功能性的，无明显神经内分泌症状，使该病较难诊断。CT在诊断GI-NENs及其分期中有重要作用 [ 6 ]，但目前关于GI-NENs的影像学分析及其与病理分级的关系研究甚少。 本研究结果显示，40例患者中病理证实为G1级、G2级、G3级分别11例、5例、24例，以G3级居多，可能是因为G1及G2级的GI-NENs多表现为小息肉突起，大部分可在内镜下诊断并切除，较少进行CT检查，而病灶较大及症状明显者才进行影像学检查，因此本组G3级居多。而CT检查可见28例呈局限性肠壁增厚，占70% (28/40)，可能与病理上该病沿胃肠壁呈浸润性生长有关，而肿瘤多呈均匀等密度，可能与肿瘤生长缓慢，且细胞成分多并单一有关 [ 7 ]。但当肿瘤较大时可呈现低密度坏死区，本研究7例肿块中可见小斑片状坏死低密度区，而2例为高密度出血灶，可能是病变出血所致。同时本研究也观察到增强扫描动脉期明显强化34例，轻度强化6例，与刘灶松等 [ 8 ] 的观察结果一致，可能与肿瘤血管丰富，而细胞成分多且单一有关。肝脏为GI-NENs常见转移部位，肝转移灶的强化方式与原发灶类似，多为动脉期明显环形强化，静脉期强化减退 [ 9 ]，本研究也观察到静脉期强化减退。本研究也发现，部分病变侵犯浆膜、肠系膜淋巴结肿大、发生肝转移，因此CT对观察肿瘤侵犯范围及转移情况有重要作用，甚至在判断肿瘤恶性程度方面有一定帮助，能指导临床进一步治疗 [ 10 ]。 本研究也发现，G1 + G2组肿瘤直径小于G3组，经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移率低于G3组，两组边界、生长方式、远处器官转移、强化方式比较差异无统计学意义，这与张雪辉等 [ 11 ] 的研究结果一致，表明CT中经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移等征象有助于临床进行病理分级，G1 + G2组肿瘤直径低于G3组，证实肿瘤直径越大，低分化的GI-NENs可能性越大，病理分级则越高，而病理分级高的GI-NENs更易累及周围系膜脂肪及器官，因此本研究观察到G3组的经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移率更高 [ 12 ] [ 13 ]。理论上来看，病理分级高的GI-NENs较易发生远处器官转移，但本研究中两组远处器官转移率无差异，可能与病例较少有关。 本研究也存在一定不足之处：样本量较少，且采用回顾性分析，有待进一步扩大样本量，以功能成像结合形态学表现进行前瞻性研究。 综上所述，GI-NENs患者采用CT扫描有一定影像学特征，通过观察其经壁侵犯、坏死囊变、邻近组织侵犯、淋巴结转移等征象，能为病理分级及手术方案的制定提供有辅助价值的信息。
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user: 摘 要 研究表明，多巴胺作为一种儿茶酚胺类神经传导物质，其通常作用是帮助细胞传送脉冲，从而使他们能够相互联系、紧密合作。加入多巴胺对于治疗精神类疾病有着良好的辅助作用，并可能有助于预测药物的反应性。为此，多巴胺的检测就显得至关重要，经过多年发展一般检测多巴胺的手段中虽然不乏有很多非常好的结果，但他们仍需被进一步完善。所以研究出一种方法，使其可以快速、灵敏、环保地检测出多巴胺成为了一个很值得研究课题。经实验研究发现，多巴胺与LTA沸石(Linde Type A、林德型沸石A)存在着一定相关性。所以应用新修饰过的LTA沸石，利用其与多巴胺之间的相互作用，使LTA沸石应用到多巴胺检测中。目的在于能够获得更优检出限，解决复杂条件下的多巴胺问题。 关键词 :多巴胺检测，LTA沸石，反应性 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 多巴胺是一种儿茶酚胺类神经传导物质，其通常作用是帮助细胞传送脉冲，从而使他们能够相互联系、紧密合作。最早由阿维德·卡尔松发现多巴胺是一种神经递质 [ 1 ]。他发现导致帕金森氏症和精神分裂症的原因是由于在大脑中缺乏多巴胺这种神经递质，并可能导致药物无法有效地治疗这种疾病。虽然大脑多巴胺与运动和动机功能有关的一些动机假说已经受到挑战，并被发现一些说法论据不充分，但仍然清楚的是，多巴胺对于刺激–奖励和反应–奖励的关联的“冲击”是至关重要的 [ 2 ]。并且对于多巴胺在治疗精神病方面，还有很多正面的影响，药物之间逆激动作用导致受体阈值在长时间治疗后上调，并因此改变了多巴胺突触的某些性质。多巴胺受体受到刺激之后存在了多种不同的变异DNA序列，在某些情况下还有不同的氨基酸酸序列。这些有不同性质的变体可能改变了多巴胺和抗精神病药之间的相互作用。而患者中此类变异的测定可能有助于预测药物的反应性 [ 3 ]。所以，多巴胺的含量检测就显得尤为重要。 随着科学技术的发展，检测多巴胺含量的方法和技术手段也越来越多。经过大量文献查阅，总结出了近年来多巴胺检测的方法如表1。 Table 1 System resulting data of standard experimen 检测方法 优缺点 检出限 参考文献 荧光比较法 灵敏、便捷但选择性不好 5.3 nM [ 4 ] 蚀刻电极法 稳定重现好但实验要求高 3.47 × 10 −7 M [ 5 ] 二氧化钛光电极法 简易高效但材料昂贵 0.15 nm [ 6 ] 石墨修饰玻碳电极法 电容降低检测物电流强度增加但操作复杂 2.64 μM [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] 有机高聚合膜法 可重复性高但合成复杂有毒性 3.34 nM [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] 表1. 多巴胺检测方法 由表1可知在过去的几年里，多巴胺的检测技术变得越来越先进。最新技术将石墨–环氧树脂和合成沸石改性的石墨–环氧树脂复合大电极微型化作为准微电极，旨在体外，并且设想在体内同时电化学检测多巴胺(DA)和抗坏血酸(AA)神经递质，或在AA存在下进行DA检测。通过循环伏安法 [ 14 ] 和恒电位安培法 [ 15 ] 研究了设计材料在没有任何保护膜的情况下的电化学行为和对多巴胺和抗坏血酸的反应。证明了合成沸石改性的石墨–环氧复合准微电极对多巴胺检测的催化作用，除了多巴胺阳离子与合成沸石的负表面之间可能存在的静电吸引外，还提高了该分析物检测的灵敏度和选择性。同样，合成沸石改性的石墨–环氧复合准微电极提供了使用恒电位安培法检测多巴胺的最佳电分析参数，这是实际应用中最有用的技术 [ 16 ]。 2017年，Chandra等在2017年用火柴棒烧蚀简单石墨铅笔电极(GPE)头并在蚀刻部分观察到一种深黑色的沉积。通过x射线衍射(XRD)和扫描电镜对这部分GPE的腐蚀进行了表征。此外，将蚀刻电极同时用于检测pH 7.4、0.2 M磷酸缓冲液中的多巴胺和抗坏血酸。改良的GPE进行多巴胺的检测不仅稳定而且重现性好。检测限为3.4708 × 10 −7 M，定量限为11.5693 × 10 −7 M。火焰蚀刻电极用于抗坏血酸、尿酸存在时多巴胺的检测。结果表明，该电极对多巴胺、抗坏血酸和尿酸的溶出有较好的选择性，且分别具有氧化峰和还原峰电位。采用差分脉冲伏安法，通过改变一种物质的浓度来检测干扰的效果，而另外两种物质的浓度则保持不变 [ 5 ]。 Yanmei Xin等人在2017年以TiO 2 纳米管光子晶体(TiO 2 NTPCs)为光电极，多巴胺(DA)分子为敏化剂和目标分析物，提出了一种具有自清洁活性的识别生物分子无单元光电电化学(PEC)传感平台原型。独特的吸附DA和二氧化钛之间NTPC诱导电荷转移形成的复合物，这不仅消耗二氧化钛在可见光区域的光学吸收，从而显著提高可见光的照明下压电陶瓷的性能，而且实现了DA在二氧化钛光电极的选择性检测。该简易高效的PEC分析平台检测DA的检出限为0.15 nm，结合微透析探针，可实现对小鼠脑内DA释放的灵敏、选择性测定，具有实际应用价值。DA功能化的TiO 2 NTPCs PEC传感平台开辟了一种新的PEC检测模型，无需生物分子外辅助，只需将目标分子自然吸附在电极上进行灵敏选择性检测，为极简主义思想的生物传感器设计开辟了新途径 [ 6 ]。 这些方法经过多年发展虽然不乏有很多非常好的结果，但他们仍需被进一步完善。而在研究中发现多巴胺与LTA之间存在着良好的相关性。Yuan和他的团队受到海洋贻贝生物粘附能力的启发，在2017年用一种简单、多用途、有效且绿色的合成技术制定了制备致密、相纯、可再生的膜的方法。利用多多巴胺(PDA)作为新型共价连接剂形成强的非共价和共价化学键，分子筛LTA的营养物质可以被吸引并结合到载体表面，从而促进均匀、良好、相纯的沸石的成核和无核膜生长。对改性的Al 2 O 3 圆盘上制备的沸石LTA膜进行了单一气体渗透和混合气体分离的研究。由此，制备了经PDA修饰的沸石LTA膜载体，而经修饰后的载体具有较高的气体分离选择性。在373 K和1 bar时，其中混合物H 2 /CO 2 ，H 2 /N 2 ，H 2 /CH 4 和H 2 /C 3 H 8 的分离因子分别为7.8、7.2、6.6和18.3超过相应的克努森系数。此外，与之前相比提出了一种化学改性方法，用PDA对其进行改性环境(DPA的缓冲水溶液在室温下简单浸泡)有助于大规模制备沸石膜，降低膜的成本制造业 [ 17 ]。而沸石LTA膜的耐酸性能较差。氧化石墨烯保护层的加入改善了沸石膜的酸性稳定性，提高了膜的选择性和稳定性 [ 18 ]。 经过实验，在众多的多巴胺检测方法中电化学监测是最佳选择 [ 19 ]。而电化学检测的最关键的一步是电极材料的选择 [ 20 ]。在众多电极材料中，LTA分子筛 [ 21 ] 就具有很好的电化学性质。特别是改性后的LTA沸石 [ 7 ] [ 22 ] 具有良好的吸附性能和稳定性，可以用无毒无害的电化学方法更快速、灵敏地检测多巴胺 [ 5 ] [ 6 ] [ 16 ]。
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user: 2. 结语与展望 多巴胺与LTA沸石存在着很多很好的相关性，研究一种方法怎样应用新修饰过的LTA沸石利用多巴胺之间的某种联系使LTA沸石应用到多巴胺检测中，使其能够获得更优检出限，解决复杂条件下的多巴胺问题，帮助预测药物的反应性。
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user: 摘 要 目的：探究6S管理在住院药房管理中的应用效果。方法：收集6S管理实行前(2017年1月~2017年12月)与实行后(2018年1月~2018年12月)相关资料，比较实行前后工作效率、药品调剂差错、药品报损情况及病区满意度。结果：6S管理实行后，员工单方调剂时间、取药等候时间、药品盘点时间均显著低于实行前，而人均日调剂量显著高于实行前(P < 0.05)；药品调剂各类型差错情况及总差错率均显著低于实行前(P < 0.05)；失效药品种类、滞销药品报损金额均显著低于实行前，而账物相符率显著高于实行前(P < 0.05)；病区对住院药房服务环境、服务流程、服务态度、调配差错、等候时间各维度满意度均显著高于实行前(P < 0.05)。结论：6S管理能提高住院药房员工工作效率，减少药品调剂差错及药品损耗，提高病区满意度。 关键词 :住院药房，6S管理，调剂差错，工作效率 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 住院药房是为医院各病区患者提供药品调剂服务的部门，工作核心环节是药品储存与调配，其工作效率、药品调剂准确性、失效药品报损等直接关乎住院医疗秩序、患者用药安全及医院经济效益 [ 1 ]。减少药房药品损耗、提高工作效率及服务质量一直是住院药房关注重点，而这都离不开有效的管理 [ 2 ]。6S管理源于上世纪50年代日本，由企业“5S管理”模式扩展而来，其核心指导思想为整理(sort)、整顿(straighten)、清洁(sweep)、规范(standardize)、素养(sustain)、安全(safety)，因各管理核心环节英文首字母均为“S”，故称之“6S管理” [ 3 ]。按此管理要求，可以规范企业办公环境中的现物、现场，营造整洁、规范的工作环境，促使员工养成良好工作习惯，最终提升企业素养、减少安全隐患，从而提高企业工作效率及服务水平 [ 4 ]。当前6S管理已在医院管理中有所应用，但在住院药房管理中应用研究报道较少，本研究将其应用与本院住院药房管理中，旨在观察其应用效果，现报道如下。
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user: 2. 资料与方法 2.1. 一般资料 收集本院2017年1月~2018年12月住院药房药品调配、工作效率等资料，其中2017年1月~2017年12月未实行6S管理(实行前)，2018年1月~2018年12月实行6S管理(实行后)，实行前年度调剂处方数821486张，发放药物1163561件；实行后年度调剂处方数822064张，发放药物1189973件。本院住院药房工作人员25人，男8人，女17人，年龄25~52 (32.16 ± 5.82)岁，副高级职称1人，中级职称6人，初级职称11人，后勤人员7人，服务病区35个，实行前后住院药房科室人员、服务病区等无明显调整。 2.2. 方法 2.2.1. 成立6S管理小组 在院领导、科主任领导下，由全体药房工作人员成立6S管理小组，参与相关管理知识学习、药房管理计划制定及实施等，研究人员进行相关数据整理，共同促进住院药房工作质量改进。 2.2.2. 6S管理内容 1) 整理：① 分类划区：整理药房工作区域，将工作区与生活区分开，避免工作区存放私人物品，生活区放置药品等；根据药品剂型及储存条件设置输液区、针剂区、口服区、冷藏、贵重药、精二药品大区，再将药品按照品种如急救类药物、抗生素类、麻醉类、心血管系统用药、呼吸系统用药等细化各区域药品摆放，进行严格分类放置。② 药品品种梳理：落实药物“一品双规”，避免重复采购同等药理性质药物，品种数不得超过规定要求；选择适合住院患者应用的药品规格；对长期未使用(至少1个月)药品，可先退回药库，临床现领现用。③ 定量储备：根据既往领药记录确定一段时间内药品用量，设置最大量、最低量，避免过多或过少存储，以减少药品过多占位、过期损耗、频繁领取等影响工作质量事件。④ 定期检查：规范药品领取、补充，安排专人定期核对、查看、记录，存在药品积累、有效期等方面问题及时上报并处理，及时清理库存、补充不足，避免药品积压过多、药品存储不足、药品过期等情况出现。2) 整顿：① 标识醒目：危险药品要标识醒目，如高危药品设置黄底黑字在“高危”标识，毒麻药品设置绿色警示线，急救药品粘贴红色“急救标识”等等。② 位置易取：根据物品、不同分类药品使用频率，定点摆放于醒目、易取位置，如高频(日使用超过50次)放于离发药者近、视线平齐、易取处。3) 清洁：① 工作环境清洁：制定药房《清洁管理制度》《清洁值班表》，要求工作人员养成良好清洁习惯，避免生活垃圾、工作垃圾乱放乱扔，药品、药单要摆放有序，避免任意摆放造成污染、损坏，用过的物品及时整理归位，方便下次及他人取用，保证工作环境整洁、有序；每班次交班前由保洁人员进行地面清洁、垃圾清理等，保障干净、舒适的大环境。② 标识清洁：物品、药品、柜台等标识要能清晰、干净，出现污染、破损及时更换，保证能清楚辨认。4) 规范：① 制度规范：将整理、整顿、清洁工作制度化、规范化，确保贯彻落实，每周进行督促检查，并纳入个人绩效考核；② 流程规范：制定合理的发药流程、退药规定，让药房工作流程更符合规范，减少因操作不规范造成的药品发放错误、退药隐患等。5) 素养：① 职业素养：定期组织学习、培训，加强药师自身药学知识积累，掌握药物选择、配伍禁忌等知识，对不合理的处方有能力、有职责进行询问，避免盲目调配后病区出现退换药情况；确保工作人员熟悉工作流程，对实习生、新员工进行严格培训、管理。② 人文素养：要求工作人员注重自身仪表、工作纪律，避免工作期间夸张的着装、打扮，自由懒散、纪律涣散，造成不良影响；工作时要注意文明用语、服务态度良好，避免矛盾纠纷。6) 安全：① 药品质量安全：加强药品质量管理，严格按药品储存要求(温湿度、避光等)进行储存、登记；拆零药品调配后要盖紧瓶盖、进行标识管理；制定药品近效期一览表，及时清理药品，杜绝药品过期发放情况；② 药品调配安全：发药时严格遵循发药流程、查对制度，药品调配、发放分开，保证双人核查；对看似、听似、一品多规药物进行区分放置，并贴示警示标语，提醒发药时加强核查。③ 科室及员工安全：制定《住院药房安全管理制度》，提高员工安全意识，注意科室财产安全、消防安全、人身安全；员工合理排班，避免过度劳累造成的个人及工作安全隐患。 2.3. 观察指标 ① 工作效率：比较6S管理实行前后，单方调剂时间(调剂人员拿到处方到完成配置时间)、人均日调剂量(各人调剂处方量/各人工作日)、取药等候时间(病区取药人员到达药房取药至核对完领药后离开之间等待时间)及药品盘点时间(员工对药品进行盘点检查时间)。② 药品调剂差错：统计年药品发放件数及差错情况，比较实行前后差错种类及总差错率。③ 药品报损情况：统计实行前后每月药品失效种类、滞销药品报损金额及账物相符率(账物相符药品品种数/盘点药品品种总数)。④ 病区满意度：自制满意度调查表，对各个病区进行住院药房满意度调查，内容包括服务环境、服务流程、服务态度、调配差错、等候时间，根据非常不满意、不满意、一般、满意、非常满意，对应0分、5分、10分、15分、20分。 2.4. 数据分析 采用SPSS 17.0软件处理数据，计量资料用( )列出，采用t检验；计数资料用[n(%)]表示，行χ 2 检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 实行前后工作效率比较 6S管理实行后，员工单方调剂时间、取药等候时间、药品盘点时间均显著低于实行前、人均日调剂量显著高于实行前(P < 0.05)，详见表1。 Table 1 Comparison of work efficiency before and after implementation ( 组别 n 单方调剂时间(min) 人均日调剂量(张/天) 取药等候时间(min) 药品盘点时间(min) 实行前 25 5.38 ± 1.16 163.15 ± 12.87 15.87 ± 3.36 115.42 ± 21.85 实行后 25 2.92 ± 0.54 195.56 ± 15.64 9.62 ± 2.13 79.62 ± 10.43 t 9.613 8.001 7.855 7.393 P 0.000 0.000 0.000 0.000 表1. 实行前后工作效率比较( ) 3.2. 实行前后药品调剂差错情况比较 6S管理实行后，各类型差错情况及总差错率均显著低于实行前(P < 0.05)，详见表2。 Table 2 Comparison of drug adjustment errors before and after implementation [n (%) 组别 年发放件数(件) 差错情况 数量错 种类错 其他 差错件数 总差错率 实行前 1163561 768 394 102 1264 0.109% 实行后 1189973 410 242 49 701 0.059% χ 2 117.055 39.835 19.815 174.359 P 0.000 0.000 0.000 0.000 表2. 实行前后药品调剂差错情况比较[n(%)] 3.3. 实行前后药品报损比较 实行前，平均每月失效药品种类为(2.38 ± 0.42)种/月，滞销药品报损金额(10462.85 ± 496.41)元/月，账物相符率(92.26 ± 4.42)%；实行后，平均每月失效药品种类为(1.16 ± 0.32)种/月，滞销药品报损金额(5841.35 ± 312.67)元/月，账物相符率(97.36 ± 2.14)%；实行后失效药品种类(t = 8.004， P < 0.05)、滞销药品报损金额(t = 27.288， P < 0.05)均显著低于实行前，而账物相符率(t = 3.598， P < 0.05)显著高于实行前。 3.4. 实行前后病区满意度比较 6S管理实行后，病区对住院药房服务环境、服务流程、服务态度、调配差错、等候时间各维度满意度均显著高于实行前(P < 0.05)，详见表3。 Table 3 Comparison of ward satisfaction before and after implementation (， points 组别 n 服务环境 服务流程 服务态度 调配差错 等候时间 实行前 35 17.86 ± 2.42 17.64 ± 2.11 17.14 ± 2.26 18.06 ± 1.47 17.26 ± 3.14 实行后 35 19.15 ± 1.14 19.58 ± 1.07 19.37 ± 1.14 19.63 ± 1.04 19.04 ± 1.82 t 2.853 4.851 5.212 5.158 2.902 P 0.006 0.000 0.000 0.000 0.000 表3. 实行前后病区满意度比较( ，分)
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user: 4. 讨论 药品是疾病治疗的重要环节，药品质量安全、用药规范等与患者治疗效果、生命健康密切相关 [ 5 ]。住院药房是医院药品流通的重要部门，其工作效率、药品质量及服务水平关乎患者及医院的切身利益，而完善药房管理往往可以从源头上把控患者用药安全、促进医院经济效益 [ 6 ]。既往住院药房管理以习惯性经验管理为主，而缺乏系统、完整的管理理念，其管理效果有时并不尽如人意，为此引入先进的管理模式势在必行 [ 7 ]。 6S管理是一项彼此关联、系统的管理模式，其中“整理”、“整顿”、“清洁”是具体内容，旨在营造整洁、有序、高效的工作环境及氛围；规范是将上述内容实行进行规范化、制度化，使其能贯彻实行；而素养旨在提高员工自身职业、人文素养，养成良好工作习惯，是上述管理内容持续实施的关键；安全旨在保障客户、员工、企业的安全，是企业正常运行的基础 [ 8 ]。6S管理作为国际一种先进的管理模式，为众多企业管理者引用，被证实在提升企业形象、减少浪费、保证质量、提高效率、保障安全等方面有诸多益处 [ 9 ]。近些年来，6S管理在医院管理中也有不少应用研究报道，诸静等 [ 10 ] 将6S管理用于门诊药房管理中，发现能减少失效药品报损及药品调剂差错，提高药师高危药品相关知识知晓率，改善患者满意度；许静等 [ 11 ] 将6S管理模式用于消化内镜中心，发现能提高消化内镜清洗消毒合格率、护士专业知识水平及患者满意度。本研究将6S管理模式用于本院住院药房管理中，结果显示，6S管理实行后，员工单方调剂时间、取药等候时间、药品盘点时间均显著低于实行前，而人均日调剂量显著高于实行前，说明6S管理能提高员工工作效率；实行后药品调剂各类型差错情况及总差错率均显著低于实行前，说明6S管理能减少药品调剂差错；实行后失效药品种类、滞销药品报损金额均显著低于实行前，而账物相符率显著高于实行前，说明6S管理能减少医院药品损耗；实行后病区对住院药房服务环境、服务流程、服务态度、调配差错、等候时间各维度满意度均显著高于实行前，说明6S管理能提高病区对住院药房工作满意度。分析原因，在6S管理中，通过整理、整顿、清洁，一来能规范药品存储，可以使药品按需存放，避免药品堆积、不足等情况影响工作效率；二来可以规范药品摆放，让特殊药品标识醒目，能提高警惕性，确保给药安全，让高频药品易取易拿，可提高药品调剂速度；而注重清洁可以进一步改善工作环境，避免拖拉扯皮情况，让员工感到舒适，确保优质、高效、安全的工作环境。将管理制度规范化，则可以使管理可持续进行，整改工作贯彻到底；将工作流程规范化，可以保障工作有序、规范进行，能进一步减少药品调剂差错等事件发生。提高员工职业素养、人文素养，可以让员工保证良好工作状态、改善服务态度，并养成良好习惯，从而改善工作效率、减少差错、提高满意度。注重工作中药品质量、调配以及个人、科室安全意识培养，可以减小用药危险性，提高工作环境的安全性，是保障工作正常开展的基础。故实行6S管理后，工作效率、药品调剂差错、药品损耗、病区满意度等方面均得到了改善。当然一项管理的实施也是一个系统工程，如何将管理模式与住院药房工作进行有机结合，需要管理者及员工的共同努力，在实际应用中及时发现问题并持续改进，才能使管理能持续、有效的为工作服务，让员工个人、患者、科室及医院均受益 [ 12 ]。 综上所述，6S管理用于住院药房中，能提高员工工作效率，减少药品调剂差错及日常损耗，改善病区满意度，值得管理者借鉴、应用。
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user: 摘 要 目的：检测冷热型大鼠支气管平滑肌细胞(ASMCs)内钙离子浓度，探讨两型支气管哮喘中的差异，为冷热型哮喘治疗提供理论依据。方法：27只SD大鼠随机分组为寒哮组、热哮组，正常对照组，每组9只，构建冷热哮喘模型后，应用共聚焦技术测定荧光值、荧光面积，以评估哮喘SD大鼠支气管平滑肌细胞钙离子浓度变化。结果：1) 荧光值比较：3组间差异，有统计学意义(P < 0.01)。3组间两两比较，差异均非常显著(P < 0.01)。热哮组 > 冷哮组 > 正常组。2) 荧光面积比较：3组间有统计学意义(P < 0.05)。3组间两两比较，热哮组 > 冷哮组 > 正常组。正常组与热哮组相比，有统计学意义(P < 0.05)，正常组与冷哮组、热哮组与冷哮组两两比较，差异无显著性(P > 0.05)。结论：支气管平滑肌钙离子浓度增加，是冷、热哮的共同特征，热哮组较冷哮组增加明显可能是热哮组的发病，多与感染相关，推测感染也是导致钙离子增高的一个因素。 关键词 :支气管哮喘，支气管平滑肌，钙通道 Copyright © 2020 by author(s) and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY 4.0). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 支气管哮喘是一种异质性、慢性气道炎症为特征的疾病，主要特征是以慢性气道炎症、气道高反应性和气道重塑。钙离子作为细胞内第二信使，发挥着调节ASMCs兴奋–收缩耦联作用。ASMCs是导致气道重塑的主要构成因素之一，而ASMCs收缩及增殖与细胞内的钙离子浓度是密不可分，细胞内钙离子浓度升高对增加和维持ASMCs收缩起主要作用 [ 1 ]。本研究通过共聚焦技术，测定3组间SD大鼠支气管平滑肌荧光值、荧光面积，探讨钙离子浓度变化对冷热型哮喘影响及其可能的机制。
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user: 2. 实验材料和方法 2.1. 材料与方法 2.1.1. 实验动物 5~6周健康雄性大鼠，来源南京市江宁区青龙山动物繁殖场，生产许可证号(SCXK(苏)2017-0001)。 2.1.2. 主要设备 雾化机(粤华，WH-2000)，DMEM (Hyclone， SH30809)，冰箱(海尔，BCD-196TMPI)，T-25培养瓶(Corning， 430639)，CO 2 培养箱(Thermo fisher， 3131)，荧光倒置显微镜(Nikon， Ts2R)，拉制仪参数(RAMP-20)，微电极推制器(sutter， P-1000)，激光共聚焦显微镜(Zeiss， LSM710)，Flou-3AM (Solarbio， F8840)，DMEM/high (Hyclone， SH30022.01B)。 主要试剂：卵蛋白(sigma， A5503)，戊巴比妥钠(上海隆盛化工，CAS:57-33-0)，细菌脂多糖LPS (sigma， S0130)，氢氧化铝(上海凌峰化学，21645-51-2)，PBS (南京生兴生物，SN331)，I型胶原酶(Solarbio， C8140)，木瓜蛋白酶(sigma， P4762)，胰酶(Hyclone， SH30042.01)，牛血清白蛋白(BSA) (Hyclone， SH30070.03)，PBS (Hyclone， SH30070.03)。 2.1.3. 实验分组及模型建立 [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 本课题已通过医院伦理委员会审查。随机分组分为正常对照组、冷哮组、热哮组，每组各9只，饲养于SPF级动物实验室，恒温恒湿，模拟标准日夜系统(12 h光照/12 h黑夜)，予以自由饮食及饮水。热哮喘模型：大鼠自由摄食、饮水7天后开始造模。大鼠分别于造模第1、8天腹腔注射卵蛋白和氢氧化铝混悬液1 ml (含卵清蛋白100 mg和氢氧化铝干粉100 mg)致敏，同时0.4%戊巴比妥钠麻醉大鼠后，用移液管鼻滴40 μL细菌脂多糖(LPS)稀释液入大鼠双侧鼻孔(终浓度400 μg/mL)，从第15天开始以1%卵蛋白溶液超声雾化诱喘，每次30 min，每日1次，连续7 d，以大鼠出现发热、烦躁、汗多、口渴、点头、节律性收腹样喘促等现象，提示模型复制成功。冷哮模型：第1、8天造模方法同热哮组。第15天开始，将大鼠放入雾化箱内，以1%卵蛋白超声雾化激发，每次20~30 min，每天1次，同时将大鼠放入寒冷箱内(0℃~2℃)，每次20分钟，每天1次，连续7天；上述方法将大鼠激发至哮喘发作，出现点头、身体颤抖、节律性收腹样喘促现象等，提示模型复制成功。造模成功后，继续雾化激发及寒冷刺激4周。正常对照模型：大鼠以生理盐水1 ml取代卵蛋白生理盐水混悬液进行腹腔注射。第15天开始，以生理盐水超声雾化激发，每次20~30 min，每天1次。 2.1.4. 支气管平滑肌的急性分离 腹腔注射大剂量戊巴比妥钠将大鼠处死后，将肺取出，置于含双抗的PBS中漂洗，分离大鼠两侧肺组织中3~4级支气管，剪成1 mm 3 大小的组织块。加入2 mg/ml I型胶原酶和2.5 mg/ml木瓜蛋白酶，置于37℃培养箱中消化90 min，常温，1000 rpm离心8 min，去除上清，加入0.125%胰酶37℃消化5 min，加入含血清的DMEM培养基终止消化，1000 rpm离心8 min，去除上清，加入含血清的DMEM培养基重悬细胞，用100目筛过滤(细胞筛)，用DMEM培养液反复冲洗、离心2次，即可得到含支气管平滑肌细胞的细胞悬液。将细胞悬液接种至T-25培养瓶中，放入培养箱中培养。3天后，更换培养基，待细胞长至80%~90%融合度时，使用胰酶将细胞消化下来接种至3个培养瓶中。培养2~3代的细胞用于实验。 2.1.5. 免疫组化鉴定 将分离的大鼠支气管平滑肌细胞铺板于培养皿内，制作细胞爬片，培养24 h后，去除培养液，PBS清洗后加入多聚甲醛固定30 min。吸去多聚甲醛后，PBS洗3次后加入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10 min，以阻断内源性过氧化物酶。PBS洗3次，每次5 min，吸去PBS后加5% BSA封闭20 min (封闭电荷)。去除BSA液，每孔加入100 μL 1:200稀释的一抗，4℃过夜。PBS洗3次后每孔加100 μl的二抗，37℃孵育30 min。PBS洗3次后，每张切片加50~100 μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。显色完全后，蒸馏水洗，苏木素复染，吸去苏木素，水洗，镜下拍照。 2.1.6. 钙离子浓度测定 将3种不同模型的细胞从培养箱中取出，去除培养基，加入2 ml PBS溶液，轻轻晃两次以去除培养基，去除PBS。向培养板中加Fluo-3/AM，置于37℃、5% CO 2 培养箱中避光孵育60 min。去除含有Fluo-3/AM的溶液，并用PBS清洗两遍。37℃下孵育10分钟，用激光共聚焦显微镜进行拍照。激发波长506 nm，发射波长526 nm。拍照结束后，使用ImageJ软件对每组细胞中钙离子荧光强度进行检测。检测出荧光值，对各组细胞荧光值进行统计分析。 2.1.7. 统计学处理 应用SPSS23.0统计软件，符合正态分布，用( )表示，组间比较采用t检验和方差分析，方差齐用LSD，不齐用Games-Howell；不符合正态分布采用秩和检验，以中位数和四分位数表示，P < 0.05具有统计学意义。
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user: 3. 结果 3.1. 大鼠气道平滑肌细胞的鉴定 如图1，镜下随机选取3个视野拍照，可见细胞呈长梭形，细胞质内呈棕色丝状为α-sma蛋白表达，由此可以证明该细胞确实为大鼠支气管平滑肌细胞。 图1. 分离后不同倍数下正常组支气管平滑肌细胞 3.2. 钙离子浓度测定 3.2.1. 荧光值方面比较 如表1，3组组间荧光值比较，有非常显著性差异(P < 0.01)。荧光值热哮组 > 冷哮组 > 正常组，正常组、冷哮组、热哮组两两比较，差异均显著(P < 0.01)。 Table 1 Comparison of fluorescence values of the three groups (n，) and pairwise comparison of normal group， cold wheeze group， and hot wheeze grou 组别 例数 荧光值 正常组 9 7608.038 ± 814.009 △ 冷哮组 9 10980.758 ± 816.689 ★ 热哮组 9 13438.185 ± 1900.768 ★★ F 46.802 P 0.000 表1. 三组荧光值比较(n， )及正常组、冷哮组、热哮组两两比较 三组组间比较，P < 0.01，△热哮组与正常组比较，P < 0.01，★冷哮组与正常组比较，P < 0.01，★★热哮组与冷哮组比较，P < 0.01。 3.2.2. 荧光值面积方面比较 如表2，三组组间荧光值面积比较，有差异，具有统计意义(P < 0.05)。荧光值面积，热哮组 > 冷哮组 > 正常组，正常组与热哮组相比，差异显著(P < 0.01)，正常组与冷哮组、热哮组与冷哮组相比较，差异无显著性(P > 0.05)。 Table 2 Area comparison of three groups (n，) and pairwise comparison of normal group， cold wheeze group and hot wheeze grou 组别 例数 荧光面积 正常组 9 52166.951 ± 6274.816 △ 冷哮组 9 56462.066 ± 6875.824 ★ 热哮组 9 59479.835 ± 2739.161 ★★ F 3.873 P 0.035 表2. 三组面积比较(n， )及正常组、冷哮组、热哮组两两比较 三组组间比较，P < 0.05，△热哮组与正常组比较，P < 0.01，★冷哮组与正常组比较，P > 0.05，★★热哮组与冷哮组比较，P > 0.05。 3.2.3. 荧光值、荧光面积比较 如表3，正常组、哮喘组在荧光值比较，差异显著(P < 0.01)，具有统计意义；在荧光面积比较，有差异，具有统计学意义(P < 0.05)。 Table 3 Comparison of fluorescence value and area of normal group and asthma group (n，)/[M(P25， P75) 组别 例数 荧光值 荧光面积 正常组 9 7608.038 ± 814.009 52764.498 (46849.842， 55417.161) 哮喘组 ◆ 18 12209.471 ± 1900.688 58811.147 (54848.669， 61339.014) t/Z −8.785 0.021 P 0.000 0.020 表3. 正常组、哮喘组荧光值、面积比较(n， )/[M(P25， P75)] ◆哮喘组 = 冷哮组 + 热哮组；正常组与哮喘组比较，荧光值，P < 0.01，荧光面积，P < 0.05。