DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 菇类为一种高等真菌，目前全球所发现之菇类约有14，000种，其中可食用者为2000种以上，但被人工驯化栽培成功的仅约100种左右，具有经济价值者约为40多种，约20多种可实际商业化栽培者则 [ 1 ] 。人类使用或食用的历史非常悠久，在二千多年前的《礼记》中即有对菇类的介绍，为中国最早食用菇相关的记载；此外，《神农本草经》亦有记载 [ 2 ] ，因而可以知道菇类在中国的传统药草中占有一席之地，灵芝(Ganoderma lucidum)、冬虫夏草(Hirsutella sinensis)、茯苓(Wolfiporia cocos)等已被使用数百年以上，而有些具有生理活性的新兴食药用菇菌，则在近数十年间才逐渐被研究与开发，如巴西蘑菇(Agaricus blazei Murill) [ 3 ] 、舞菇(Grifola frondosa) [ 4 ] 、云芝(Trametes versicolor， Coriolus versicolor或Polyporus versicolor) [ 5 ] 、桑黄(Phellinus linteus) [ 6 ] 和樟芝(Antrodia cinnamomea， Syn. Antrodia camphorata and Taiwan of ungus camphorata) [ 7 ] 等便是其中几种特殊且具机能性的菇类，其代谢产物成分对于健康具有调节及促进作用，因此被制成补疗药品或保健食品，如饮品、胶囊、浓缩液、调味料、茶和美容护肤产品等。多数的人认为改变饮食可以增进健康，这意味着保健食品的未来市场极为广大；但是食品最重要的就是讲求其安全性，大多数菇类虽具有长期食用历史，但在改变制程、剂型、加工制造时，少有针对菇类或复合性食品进行安全性的评估。到目前为止，巴西蘑菇子实体 [ 8 ] 、桑黄子实体水萃物 [ 9 ] 、云芝菌丝体 [ 10 ] [ 11 ] 和舞菇菌丝体 [ 12 ] [ 13 ] 在Ames试验、体外和体内染色体畸变试验及28天亚急毒性试验项目，于文献报导皆未观察到任何毒性症状，但也未找到相关致畸胎试验研究；樟芝菌丝体除了三项基因毒 [ 14 ] 和28天亚急毒性试验 [ 15 ] 之外，在90天亚慢毒性试验 [ 16 ] 及二期生殖与发育毒性试验 [ 17 ] [ 18 ] 中，结果均未观察到任何毒性症状。在2011年陈等人 [ 17 ] 就以樟芝液态发酵菌丝体冻干粉末进行大鼠致畸胎的评估，试验结果均无观察到任何生殖与发育毒性症状，但所使用的最高剂量为500 mg/kg/day，仅只达人体建议摄取剂量之20倍，且未对胎鼠的内脏及骨骼做深入的探讨；2014年李等人 [ 18 ] 进行评估的樟芝液态发酵菌丝体冻干粉致畸性试验，其最小无毒性剂量no-observed-adverse-effect level (NOAEL)达3500 mg/kg/day，在母鼠与胎鼠检查皆未发现明显的二期生殖与发育毒性，仅只在食物消耗量方面较对照组下降，但非为试验物质造成之影响；在2015年林等人 [ 19 ] 及2017年林佑鑫 [ 20 ] 分别进行了固态培养牛樟芝菌丝体的安全性评估，其中在致畸胎研究部分，剂量分别为700~2800及500~2500 mg/kg/day，也没有观察到相关的发育毒性(致畸胎性)反应。目前研究中并无发现巴西蘑菇、桑黄、云芝、舞菇等新兴和具功效性菇类对孕妇食用安全，也就是致畸胎的测试，也没有观察到复合菇类的安全性评估试验，故针对菇类菌丝体复合性饮品进行致畸胎性试验评估有其重要性，除了在追求食用功效之外，对于食用安全不会再有疑虑，为安全性评价提供依据，作为产品开发及人体食用之剂量考虑；本研究评估之菇类菌丝体复合性饮品，为结合具有保护肝脏 [ 3 ] [ 21 ] [ 22 ] [ 23 ] 、抑制发炎 [ 24 ] [ 25 ] 及改善肝脏功能 [ 4 ] [ 26 ] [ 27 ] 的菇类真菌发酵萃取物，是以樟芝液态发酵菌丝体调合巴西蘑菇菌丝体、云芝菌丝体、桑黄子实体萃取液和舞菇子实体萃取液制成，并依照卫生福利部公告的「健康食品安全性评估方法」 [ 28 ] [ 29 ] ，测试对大鼠胚胎发育之影响及造成畸胎的可能性，为其安全性评价提供依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 供试菌种、液态发酵菌丝体发酵条件 2.1.1. 供试菌种 樟芝菌丝体(Bioresource Collection and Research Center (BCRC) 35398)、云芝菌丝体(BCRC 36450)和巴西蘑菇菌丝体(BCRC 36814)购自台湾新竹市食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心。舞茸子实体购自台湾屏东县台湾北斗生技股份有限公司，桑黄子实体购自台湾桃园市源铭企业有限公司。 2.1.2. 菌丝体液体发酵条件及子实体萃取条件 樟芝菌丝体、云芝菌丝体和巴西蘑菇菌丝体为分别在发酵槽中进行液态发酵的培养，其无菌接种及发酵槽操作的参数相似。在无菌操作台中，将potato dextrose agar (PDA)平板上长好的菌丝体，取0.5 cm大小正方的菌块，接种入内含1 L液体培养基的2 L三角瓶中，于25℃、100 rpm中震荡培养七天，后接种入内含400 L液体培养液的500公升级发酵槽，在0.5 vvm的通气量和温度25℃中培养七天，再接种入内含有40吨液体培养液的50吨级发酵槽，在50 rpm的搅拌，0.5 vvm的通气量和25℃的温度中培养十四天后，得菌丝体发酵液；樟芝菌丝体发酵全液直接作为菇类菌丝复合饮品主体；云芝和巴西蘑菇菌丝体发酵液个别进行离心及上清液浓缩，可得到云芝和巴西蘑菇菌丝体浓缩发酵滤液。舞茸及桑黄子实体经清洗及解碎后，以100℃水萃取30分钟，滤渣后浓缩，即为舞茸及桑黄子实体浓缩萃取液。 2.2. 试验物质 以樟芝菌丝体发酵全液为主体，添加各1% (v/v)姬松茸菌丝体浓缩发酵滤液、云芝菌丝体浓缩发酵滤液、舞茸子实体浓缩萃取液及桑黄子实体浓缩萃取液，经调整糖酸比后制成的菇类菌丝复合性饮品(以下简称菇类复合饮，Antrodia aqua)。 2.3. 试验动物 Sprague-Dawley (SD)品系怀孕母鼠 (乐斯科生物科技股份有限公司，台湾)，饲养环境为22℃ ± 3℃、相对湿度55% ± 15%、换气频率10~15次/小时、照明12小时的动物房。采个别笼饲，动物经约3天适应后，期间每日进行临床症状之观察，经兽医确认状况良好，才用于进行试验。饲料为进口饲料(MFG，Oriental Yeast Co.， Ltd.， Tokyo， Japan)，垫料为Lognocel FS-14 (J. Rettenmaier & SöhneGmbH + Co.KG.， Germany)，饮水以水瓶方式供应经高温高压灭菌之逆渗透水。所有动物实验根据国际药物及化学物质独行试验规范及卫生署健康食品安全性评估方法进行，大鼠为适用于致畸胎试验之实验动物，经实验动物照護及使用委员会审查同意，核准编号(IACUC No. 104-9b)。 2.4. 试验设计 在试验物质投予第一天，依据体重进行排序及随机分成四组，每组动物20只。分别为对照组、低剂量组、中剂量组及高剂量组。低、中及高剂量组大鼠试验物质投予剂量分别为180 mL/kg B.W.、360 mL/kg B.W.及720 mL/kg B.W.，分别为人体每日建议口服剂量(人体每日360 mL/kg B.W.)之30倍、60倍及120倍。详细分组如表1所显示。 试验期间，每天秤取适量之试验物质，加入逆渗透水至所需体积搅拌均匀后配置成浓度分别为0.073 g/mL、0.145 g/mL及0.291 g/mL之悬浮液。配置完成之试验物质容液限当天使用。口服为人体使用方式，本试验选择以管喂方式作为投予途径，以塑料针筒套上喂食针(16 gauge，80 mm长)之方式进行管喂。各剂量组及对照组大鼠每日管喂试验物质或对照物质，单次投予体积10 mL/kg B.W.，总体积过大才多次喂食，总投予体积为30 mL/kg B.W.，6小時內完成投予。 试验期间每日进行怀孕母鼠之临床观察及结算各组饲料摄取量，于怀孕的第6~20天每日对各组大鼠进行秤重。于母鼠怀孕第20天，以吸入二氧化碳方式将所有母鼠进行安乐死，剖腹取出子宫及胎鼠。秤取胎鼠的重量，并记录着床数、活胎数、死胎数、再吸收胎数(resorption number)及计算母鼠两侧卵巢之 Table 1 Four dose groups for reproductive and developmental toxicity test 动物组别 管喂物质 剂量(mL/kg) 投予体积(mL/kg) 母鼠数量 对照组 逆渗透水 - 10 20 低剂量组 菇类复合饮 180 10 20 中剂量组 菇类复合饮 360 10 20 高剂量组 菇类复合饮 720 10 20 表1.进行生殖与发育毒性试验的四个剂量组别 黄体数目。逐一检查所有胎鼠，外观是否显现任何异常，并根据其外生殖器辨别性别，计算雄性及雌性胎鼠的比率。每胎约一半的胎鼠经10%中性福尔马林溶液固定后，依据Leroy M. and Jocteur-Monrozier A. (2013) [ 30 ] 及Critcheell K. (2013) [ 31 ] 的方法检查胎鼠头部、颈部、胸腔及腹腔中器官之构造；每胎约一半的胎鼠经Alizarin red S染色处理后，依据Manson and Kang (1994) [ 32 ] 及Christian (2007) [ 33 ] 骨骼异常评估方法，观察其骨骼内部型态之变化。 2.5. 数据整理与分析 实验数据以平均值(mean)及标准偏差(standard deviation， S.D.)表示，母鼠之体重、摄食量、子宫重量、胎鼠重量、黄体数量、着床数量及着床前后损失率，均利用SPSS统计软件中单因子变异数分析(One-Way ANOVA)及Duncan’s multiple range test分析各组间差异性，并以p值小于0.05作为显着差异水平；此外，胎鼠性别比例、胎鼠外观检查、内脏检查及骨骼检查结果，则利用SPSS统计软件中的卡方测定(Chi-squared test)进行统计分析各组间之差异性，并以p值小于0.05作为显着差异水平。
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user: 3. 結果 3.1. 菇类复合饮对母鼠的影响 试验期间，各组母鼠经投予对照组质或试验物质后均无显现任何异常临床症状，所有动物均存活致试验结束，且肉眼病变检查均无显现任何异常。如图1所示，各剂量组母鼠怀孕第6~20天之体重与对照组相比较无统计上差异(p > 0.05)，显示投予菇类复合饮对怀孕母鼠之增重无不良之影响。平均摄食量如图2所示，母鼠怀孕之摄食量在高剂量组第8、9与17天，中剂量组第6、8、9、11、12、14与16天，低剂量组第6、8、14、18与19天，与对照组相比较出现统计上差异(p < 0.05)，但无剂量相关性，应与试验物质无关。 怀孕母鼠生殖毒性参数评估数据呈现于表2。对照组及3组剂量组成功怀孕的母鼠分别为20只、20只、20只及20只。胎鼠平均体重在中(4.2 ± 0.8)、高(4.1 ± 0.4)剂量组与对照组(3.9 ± 0.8)相比较具显著增加(p < 0.05)，但均于正常参考范围内 (胎数体重：3.03~5.78 g)；胎鼠性别比例在低剂量组(1.07)统计上明显高于对照组(0.68) (p < 0.05)，但仍在正常參考範圍內(性別比例：0.59~1.53)。其余生殖毒性参数包括胎鼠总数、带胎子宫重量、黄体数、活胎或死胎数、再吸收数、着床前损失、着床后损失等参数，组间并 图1. 怀孕母鼠平均体重 图2. 怀孕母鼠平均摄食量 Table 2 The assessment of reproductive toxicity parameters in pregnant rat 对照组 a 0 mg/kg 低剂量组 a 180 mL/kg 中剂量组 a 360 mL/kg 高剂量组 a 720 mL/kg 胎鼠窝数 20 20 20 20 各组胎鼠总数 259 259 253 267 平均子宫重量 (g) 80.2 ± 12.8 76.0 ± 17.4 77.2 ± 20.3 80.0± 12.7 胎鼠平均体重 (g) 3.9 ± 0.8 3.9 ± 0.9 4.2 ± 0.8 * 4.1 ± 0.4 * 胎鼠性别比例 b 0.68 1.07 * 0.70 0.67 卵巢黄体数 13.5 ± 1.7 13.6 ± 2.1 13.3 ± 2.7 14.0 ± 1.7 平均着床数 13.1 ± 1.7 13.1 ± 2.1 12.8 ± 3.3 13.5 ± 1.8 存活胎鼠数 259 259 253 267 死亡胎鼠数 0 0 0 0 胎鼠再吸收数 3 3 3 3 着床前损失率 c 2.9 ± 4.2 3.6 ± 6.0 5.8 ± 14.6 3.3 ± 5.7 着床后损失率 d 1.2 ± 3.0 1.0 ± 2.6 1.4 ± 3.7 1.0 ± 2.4 表2.怀孕母鼠生殖毒性参数评估 a 所有数据均以Mean ± S.D.表示。 b 胎鼠性别比例 = 雄性胎鼠数÷雌性胎鼠数。 c 着床前损失率 (%) = [(黄体数 − 着床数)/黄体数] × 100%。 d 着床后损失率 (%) = [(着床数 − 存活胎鼠数)/着床数] × 100%。 * 与对造组比较具显着性差异 (p < 0.05)。 无统计上的差异(p > 0.05)，显示菇类复合饮对胎鼠存活情形无不良影响。 3.2. 菇类复合饮对胎鼠的影响 胎鼠之外观及内脏检查结果如表3所示。外观检查结果显示各剂量组均无发现外观异常之胎鼠。内脏检查结果显示，各组均发现输尿管扩张及出现肾盂扩张情形之胎鼠，但组间并无统计上之差异(p > 0.05)，因此推测并非试验物质所引发的变异。 胎鼠骨骼检查结果如表4所示，胎鼠骨骼变异主要为胸骨(sternebrae)未钙化、脊椎(vertebrae)椎体双 Table 3 Results of fetal external and organ examinatio 对照组 0 mg/kg 低剂量组 180 mL/kg 中剂量组 360 mL/kg 高剂量组 720 mL/kg 外观检查胎鼠窝数(n) 20 20 20 20 外观检查胎鼠数量(n) 259 259 253 267 显示外观异常胎鼠 数量(n) 0 0 0 0 百分比(%) 0 0 0 0 内脏检查胎鼠窝数(n) 20 20 20 20 内脏检查胎鼠数量(n) 135 134 129 137 内脏异常分类 输尿管扩张(Dliation) 显示异常胎鼠数量/百分比 4/30 3/2.2 1/0.8 2/1.5 显示异常胎鼠窝数/百分比 3/15.0 2/5.0 1/5.0 2/10.0 肾盂扩张(Dliation) 显示以长胎鼠数量/百分比 1/0.7 2/1.5 2/1.6 2/1.5 显示以长胎鼠窝数/百分比 1/10.0 2/10.0 1/5.0 1/5.0 表3. 胎鼠外观及内脏检查结果 Table 4 Results of fetal skeletal examinatio 对照组 0 mg/kg 低剂量组 180 mL/kg 中剂量组 360 mL/kg 高剂量组 720 mL/kg 骨骼检查胎鼠窝数(n) 20 20 20 20 骨骼检查胎鼠数量(n) 124 125 124 130 骨骼变异分类 胸椎椎体双叉(Bifid) 显示异常胎鼠数量/百分比 7/5.6 5/1.0 4/3.2 6/4.6 显示异常胎鼠窝数/百分比 3/15.0 4/20.0 2/15.0 4/20.0 第5胸骨未钙化(Unossified) 显示异常胎鼠数量/百分比 4/3.2 4/3.2 3/2.4 3/2.3 显示异常胎鼠窝数/百分比 3/15.0 2/10.0 2/10.0 3/15.0 第6胸骨未钙化(Unossified) 显示异常胎鼠数量/百分比 8/6.5 4/3.2 6/4.8 5/3.8 显示异常胎鼠窝数/百分比 3/15.0 2/10.0 2/10.0 3/15.0 第2或第5掌骨未钙化(Unossified) 显示以长胎鼠数量/百分比 6/4.8 2/16 4/3.2 1/0.8 * 显示以长胎鼠窝数/百分比 4/20.0 2/10.0 3/15.0 1/5.0 表4. 胎鼠骨骼检查结果 * 与对照组比较具显着差异性(p < 0.05)。 图3. 胎鼠骨骼检查结果 叉、掌骨(metacarpal)未钙化等(图3)。试验结果显示，在各胎鼠第2或第5掌骨未钙化之总数及比率，高剂量组在统计上显著低于对照组(p < 0.05)，对照组及3组剂量组分别为6/124 (4.8%)、2/125 (1.6%)、4/124 (3.2%)及1/130 (0.8%)，但在窝数与比率上各组间无统计上之差异(p > 0.05)，由于统计上下降之结果并非不良之反应，于此推测并非试验物质所引发的变异。其余胸椎椎体(centrum of vertebrae)双叉及第5、第6胸骨未钙化等结果，各组间均无统计上之差异(p > 0.05)，因此推测并非试验物质所引发的变异。
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user: 4. 讨论 根据研究统计指出，每年全球约有6%的婴儿(约800万)出生时带有严重的缺陷 [ 34 ] ，其中的25%为先天或部分遗传性的严重缺陷，10%为母体暴露于一些环境因素而导致孩童出生时带有缺陷，然而，大多数的重大出生缺陷，约65%，其病因不明 [ 35 ] 。因此，为保障孕妇服用菇类复合饮之安全性以及胎儿的健康，致畸胎试验的评估相当重要。本次试验结果显示，各剂量组与对照组相比较，母鼠子宫重量、胚胎着床数、胚胎着床前损失率、胚胎着床后损失率及胎鼠体重在统计上均无明显差异(p > 0.05)。胎鼠之外观，内脏及骨骼检查结果显示，各剂量组及对照组胎鼠均未显示明显致畸胎现象。综合以上试验结果，以樟芝液态发酵菌丝体调合巴西蘑菇菌丝体、云芝菌丝体、桑黄子实体萃取液和舞菇子实体萃取液制成的菇类菌丝体复合性饮品，于此试验条件设计下，对大鼠胚胎发育不会造成不良影响。其投予剂量最高达720 mL/kg B.W.，此剂量为人体建议摄取量(每日360 mL/60 kg B.W.)之120倍。
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user: 摘 要 本试验是以灵芝菌丝体粉及灵芝子实体萃取物制成之灵芝复合品，探讨其对四氯化碳(CCl 4 )肝炎的功效。四氯化碳(20%、0.2 ml/100g body weight)每星期投予两次，共八星期。大鼠于四氯化碳投予前一天，每日经口头喂予灵芝粉一次，直至实验结束。灵芝产品对第一、三、六、八周四氯化碳所升高的血清AST及ALT值由明显降低作用。四氯化碳诱发大鼠慢性肝炎明显增加脾脏重量，减少肝脏蛋白质含量，增加肝脏脂质过氧化程度及胶原蛋白含量。灵芝产品明显增加蛋白质含量，及降低脂质过氧化程度和胶原蛋白含量。由这些结果明确表示，灵芝粉可以减轻四氯化碳所诱发的大鼠慢性肝炎。 关键词 :灵芝，四氯化碳，慢性肝炎，护肝 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 灵芝(Ganoderma lucidum)又名赤芝，为担子菌多孔科(polyporaceae)的高等真菌，型态为伞状，坚硬，木质，菌盖肾形或半圆形，紫褐色有漆状光泽。其作为药用已具有千年的历史，从古至今为广泛使用的传统珍贵药材，被历代医药家视为滋补强壮、扶正固本的神奇珍品。许多古籍中均有提及药理活性，《神农本草经》始纪载灵芝「养命以应天，无毒，多服久服不伤人，轻身益气，不老延年」；《本草纲目》指出「苦、平、无毒。解胸胃郁结，补中益气，使人神志清明」，都意指灵芝无毒，适合长期食用，以渐进的方式，调节强化体质，维持身体健康。 灵芝以热带和亚热带地区居多，常寄生于栎及其他阔叶树根部。由于野生子实体生长周期长，易受气候影响产量与质量不稳定，在1950年代开启了大量人工培养技术的发展。如今，在日本、中国、美国，台湾以及亚洲等地皆有进行商业化种植。除了子实体栽培外，不少学者也利用高密度发酵培养菌丝体，透过培养基组成、pH与溶氧等发酵工艺提升灵芝活性物质，并广泛应用于医药及保健食品行业。近几十年来，陆续在中国与日本的临床研究发现，灵芝子实体及菌丝体对冠心病、心绞痛、高血脂症、支气管炎、神经衰弱及肝炎等慢性疾病有显着的疗效，证实了古籍中灵芝的药用价值也引发灵芝学术研究的热潮。灵芝的活性成分非常丰富，主要成分为多醣(polysaccharides)、三萜类(triterpenoids)、核苷酸(nucleotides)、小分子蛋白(LZ-8)、胺基酸(Amino acids)、多种微量元素和多肽类化合物(peptides)等 [ 1 ]。药理活性成分广泛，包含免疫调节、抗肿瘤 [ 2 ] 保护肝功能 [ 3 ] [ 4 ] 、抗氧化 [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 、降血脂 [ 8 ] 以及抗衰老 [ 9 ] 等多项生物活性。 灵芝的保肝功能在动物实验已有多起报告，灵芝的水或乙醇抽出物对四氯化碳引起的大鼠或鼷鼠急性肝炎有保护作用 [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ]。已有文献指出灵芝所含的总三萜类能抑制四氯化碳及氨基半乳糖(D-galactosamine)所引起的肝损伤及急性肝炎 [ 12 ] [ 13 ] ，灵芝烯酸(ganoderenic acid) A、B或C2对四氯化碳的急性肝炎有保护作用 [ 14 ] ，灵芝菌丝体的热水及乙醇抽出物分离灵芝的三萜有抑制肝癌细胞的作用 [ 15 ] ，另一方面，也有报告指出灵芝多醣体具结抗大鼠胆道阻塞所引起的肝纤维化 [ 3 ] 及四氯化碳引起的肝损伤 [ 16 ]。Gao氏等人指出灵芝保肝作用机转有下列几个可能的途径，具有清除自由基的能力、抑制β-glucuronidase、抗纤维化、抗病毒活性、调节NO的产生、维持肝细胞内盖的恒定及免疫调节作用 [ 17 ]。 本试验依照台湾卫福部公告的评估方法 [ 18 ] ，使用四氯化碳(CCl 4 )诱发大鼠慢性肝炎的模式以评估灵芝菌丝体及灵芝子实体萃取物复合品的护肝功能，以做为日后产品开发提供预防保健之依据。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 灵芝液态发酵条件及子实体萃取物制备方法 菌种(G. lucidum) (BCRC36041)购自台湾新竹市食品工业发展研究所生物资源保存及研究中心。在无菌操作台，将PDA (Potato dextrose agar)平板之灵芝菌丝，取1 cm正方大小菌块接种内含于1 L培养基的2 L摇瓶中，25℃，120 rpm中震荡一周，后接入500 L发酵槽培养一周，发酵条件相同，再接入50吨发酵槽中，40 rpm搅拌，0.5 vvm的通气及30℃培养7天后，得灵芝菌丝体发酵液，经干燥后得灵芝菌丝体粉。培养基使用2%黄豆粉、2%蔗糖及0.5%酵母抽出物，pH 4.0。灵芝子实体经纯水于100℃萃取30分钟后，将萃取液干燥得灵芝子实体萃取物。而后将上述样品存于4℃备用。 2.2. 实验动物及材料 使用Wistar大鼠，购自国科会国家实验动物繁殖及研究中心，饲养于中国医药大学医学系动物室。饲养环境为22℃ ± 2℃，光照12小时亮、12小时暗。饲料使用福寿牌老鼠饲料，饮水经逆渗透处理。动物适应二周后筛选出健康大鼠70只，在试验物质投予第一天，大鼠依体重大小，分成适当重量群，随机分组，除正常控制组10只外，其余5组每组12只。 2.3. 试验物质配制 灵芝菌丝体粉及灵芝子实体萃取物之复合品(以下简称灵芝粉)为本次试验物质。灵芝粉的建议量一人每天食用2.52 g (体重70 Kg)，大鼠剂量依据大鼠与人的表面积比换算比率计算。因此将灵芝粉之低、中、高剂量以去离子水分别配制成22.5、67.5及180.0 mg/ml之悬浮液(分别为人体剂量1、3、8倍)，经口头给予，投予体积为每100公克大鼠体重投予1毫升。控制组大鼠给予同体积的去离子水，对照药物silymarin (Sigma)悬浮于0.5% carboxmethyl cellulose (CMC)，配制浓度为20 mg/ml。 2.4. 大鼠喂养及试验方法 试验物质于第一次四氯化碳溶液投予前一天开始投予，而后每日投予直至大鼠牺牲前一日止。每周两次经口投予四氯化碳溶液(溶于20%橄榄油溶液，每次投予量为0.2 ml/100g body weight)，于第一次及第三次投予时，大鼠先绝食一晚，其他投予时不绝食。于四氯化碳投予后满一、三、六周时，大鼠在乙醚麻醉下尾动脉抽血，供血液生化值检定。第八周采血也同时牺牲大鼠，迅速取肝脏及脾脏，以冰冷生理食盐水洗净后，吸干水份，秤重。最大液肝脏分成两部分，相同的部位分别为浸于10%中性福尔马林溶液，供病理切片使用，与称重后在100℃完全烘干供胶原蛋白含量测定。其余肝脏分装4袋，储存于−80℃备用。每周称重一次，作为当周投予试验物质的体重依据。 2.5. 血清生化学试验 血液取得后，静置待其凝固后，以4700 rpm离心15分钟，取血清供生化检验用。第一、三周只进行alanine aminotransferase (AST)及aspartate aminotransferase (ALT)检验。第六、八周除AST、ALT外，增加白蛋白(albumin)的测定。检验使用市售检验试剂 (Roche)， 以血清生化自动分析仪测定(COBAS MIRA)。 2.6. 肝脏组织其他指标的测定 肝组织Glutathione(GSH)的测定依据Sedlak and Lindsay [ 19 ] 的方法，使用5，5’-dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)呈色，412 nm测吸亮度；脂质过氧化测定依据Ohkawa等人 [ 20 ] 的方法，在532 nm测吸光值。肝脏蛋白质的测定使用脂质过氧化测定的肝组织上清液，以市售蛋白质测定试剂Coomassie Blue(KenlirIndus.；USA)呈色，于540 nm测吸光值，以牛血清白蛋白为标准品；肝组织胶原蛋白(Hydroxyproline)的测定参照Neuman and Logan [ 21 ] 的方法，肝组织水解后加H 2 O 2 氧化，再以p-dimethylaminobenzoaldehyde呈色，于540 nm测吸光值；测定hydroxyproline的肝组织湿重减去干燥后的肝脏重量即为肝脏含水量；肝组织之前处理采用Xia等人 [ 22 ] 的方法，分别使用市售Superoxide dismutase(SOD)活性检验试剂Ransod(RANDOX Lab. Ltd UK)及Glutathione peroxidase (GSH-Px)活性检验试剂Ransel(RANDOX Lab. Ltd UK)，依试剂说明步骤测定SOD及GSH-Px；Catalase(CAT)活性测定依据Aebi [ 23 ] 的方法测定。 2.7. 病理检验 组织经福尔马林固定后，进行石蜡包埋及切片制作，使用两种染色法，一为一般的H.E stain(He matoxylin and eosin stain)，另一种为胶原蛋白的特殊染色(Sirius red stain)。病理学比较依照台湾卫生福利部公告的护肝功能评估办法，将肝脏的损伤或纤维化分为四个等级，加以评分。为了使病变的分客观，病理切片委托台湾中国医药大学医学系组织学曾昌衍教授判读评分。 2.8. 统计分析 除了病理判读数据外，其他实验所得数据均以单尾变异数分析(one-way analysis of variance)，并进行Dunnet测试，以p < 0.05认为有显着意义。病理判读依据结果以Kruslall Wallis H变异数分析，而后进行Mann-Whitney U test检定，以p < 0.05认为有显着意义。
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user: 5. 结论 经动物实验结果明确显示本试验之灵芝粉对CCl 4 诱发大鼠慢性肝炎具改善效果，得到下列结论： 1) 灵芝粉可降低血液中AST、ALT值，显示其有减轻肝损伤作用。 2) 灵芝粉能提升血清中白蛋白，提升肝组织可溶性蛋白质含量，减轻脾脏肿大，降低肝脏脂质过氧化程度及降低肝组织中hydroxyproline值，显示其可降低肝脏纤维化程度。
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user: 摘 要 橄榄多酚是从橄榄中提取出来的活性成分，具有很好的药理作用。该文采用橄榄粉作为原料研究超声提取橄榄多酚的工艺。以单因素实验为基础，进而进行二次正交旋转实验设计来优化提取工艺。实验得到的最佳提取条件为：超声时间37 min、水浴温度46℃、乙醇浓度为43%，固液比为1:32，多酚提取率为14%。并以DPPH自由基清除来测定橄榄多酚的抗氧化能力，在质量浓度0.1 mg∙mL − 1 时，消除率可达到96%。 关键词 :橄榄多酚，超声提取，抗氧化活性，二次正交旋转 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 橄榄又名福果、青果等，是橄榄科橄榄属植物的果实，栽植面积广，产率高，是一种很容易购买到的食材，具有很大的发展潜力 [ 1 ] 。橄榄果肉拥有丰富的营养价值，含钙量高而且容易被人体所吸收，可以通过开发和利用成为药品或者保健品；橄榄还有很高的药用价值，药用橄榄对降血压、血糖、血脂、糖尿病、咽喉肿痛、口腔溃疡、咳嗽、哮喘等病症有明显疗效 [ 2 ] 。 抗氧化剂目前广泛应用于食品加工，自然界中许多植物中的天然抗氧化成分因其安全、健康、无毒而得到人们越来越多的关注。而橄榄多酚作为一种自然抗氧化剂，是一种广泛存在与植物体内的多元酚，主要分布于物的皮、根、木、叶、果中，它也是一类具有独特生理活性和药理活性的天然产物。大量研究表明，橄榄多酚在抗诱变、抗肿瘤、抗病毒、抗微生物、抗衰老、抗氧化等很多方面具有良好的作用，具有很高的发展前景 [ 3 ] 。 DPPH自由基在517 nm波长附近存在最大吸收峰 [ 4 ] 。DPPH自由基和抗氧化剂反应后，抗氧化剂可以配对DPPH的孤对电子对使DPPH褪色，接受电子量与褪色程度呈定量关系，所以可用比色定量分析来测定橄榄多酚溶液的抗氧化能力，DPPH清除率越大，抗氧化能力越强 [ 5 ] 。因为该方法简单、快捷、灵敏，操作方便，所以本论文使用DPPH消除法来测定橄榄多酚的抗氧化性，并使用Vc和BHA这两种常用食品添加剂作为对比，反映橄榄多酚还原能力的强弱。 由于提取抗氧化剂的原材料不同，抗氧化剂可以采取多种提取方法。常用的有超声辅助提取法、微波辅助提取法、酸碱提取法、酶解法、醇浸法等 [ 6 ] 。罗永会等 [ 7 ] 用传统乙醇浸取橄榄多酚，有较好的提取率5.75%，但是耗时达到4 h。曾培源等 [ 8 ] 用超声提取橄榄多酚，工艺流程需要3次，每次40 min，得率2.3%。何志勇等 [ 9 ] 用微波提取，时间仅需5 s，得率1.2%。传统提取法消耗时间但提取率较高，现代提取法省时但提取率较低。 多酚类化合物在碱性溶液中，钨钼酸与体系中存在的酚羟基发生反应，钨离子从正六价转换为正五价，导致反应体系从青绿色转换为蓝色，溶液中蓝色的深浅程度与含酚基团的数目成正比，所以可以利用紫外/可见分光光度计测量溶液的吸光度，从而求得多酚的提取率 [ 10 ] 。 二次正交旋转组合设计是国外近年应用较多的一种实验设计方法。结合了响应面优化法，并且通过统计软件对实验结果进行非线性数学模型拟合。 该论文首先对超声时间、超声水浴温度、乙醇浓度、固液比四个因素分别进行单因素实验，研究这四个因素对橄榄多酚提取率的影响，得到各个因素的最佳条件所在的大致范围。再利用二次正交旋转组合设计，以单因素实验中各个因素的最佳条件作为中心水平，进行四因素五水平的正交实验设计，最终得到最佳的工艺参数。
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user: 4. 结论 本文采用了超声辅助提取橄榄多酚的工艺，通过单因素和二次回归旋转正交试验的方法，确定了提取橄榄多酚工艺的最佳条件，即超声时间37 min、水浴温度46℃、乙醇浓度为43%，固液比为1:32。从影响提取率的因素来看，超声时间越长，提取率虽然有所增加但是逐渐趋近于平缓，在实际制作工艺过程中会使得成本增加，故应取提取率效率最高的超声时间。同时也并不是水浴温度越高，固液比越高，乙醇浓度越高，橄榄多酚的提取率就越高。故达到最佳条件附近时，橄榄多酚的提取达到饱和。 橄榄多酚对DPPH溶液的消除效果很高，介于Vc和BHA这两种公用食品添加剂中间，可见橄榄多酚作为抗氧化剂有较为显著的效果。因为温度上升，导致液体体积下降，乙醇浓度变化，所以温度和溶液体积、乙醇浓度的交互作用比较难以控制，导致了模型显著性的减低，如果使用更好的密封装置，可以使模型显著性更高，模型的公信力越强。
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user: 摘 要 大黄酸是中药芦荟、大黄的有效成分之一，含有平面状的1，8-二羟基蒽醌结构单元，存在溶解度差、生物利用度低等问题。为了改善其理化性质，提高生物利用度，发现新的适应症，国内外学者围绕大黄酸衍生物做了深入研究。本文简要综述了大黄酸衍生物的合成及其在降血糖、消炎以及抗肿瘤等方面的生物活性研究进展。 关键词 :大黄酸衍生物，合成，生物活性评价 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 大黄酸在蓼科、豆科、芸香科及百合科等多种植物中广泛分布，具有抗病毒、抗肿瘤、抗炎以及降糖调脂等生物活性 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] 。从结构上看，大黄酸含有平面状的1，8-二羟基蒽醌结构单元，具有电化学氧化还原性质 [ 5 ] [ 6 ] ，其特殊的平面结构以及结构中存在的1位羟基、8位羟基和3位羧基导致该化合物溶解度差，生物利用度低。近年来，研究人员为了改善大黄酸类衍生物的理化性质，提高生物利用度，发现新的适应症，主要围绕大黄酸的1位羟基、8位羟基和3位羧基进行修饰 [ 7 ] ，以期得到成药性好的衍生物。值得一提的是，将大黄酸1位和8位的羟基乙酰化后得到双乙酰大黄酸(双醋瑞因，Diacerein)(结构如图1所示)，作为治疗骨关节炎的药物已经在意大利上市，可被人体迅速代谢为大黄酸而发挥作用 [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] 。本文简要综述了大黄酸衍生物的合成及其在降血糖、消炎以及抗肿瘤等方面的生物活性研究进展。
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user: 2. 具降血糖活性的大黄酸衍生物 最初，曹贺 [ 8 ] 等人以大黄酸为母体，设计并合成大黄酸-酰胺类衍生物，得到化合物库1 (见图2)。在糖尿病肾病小鼠模型上的构效关系研究表明：当把3位羧基衍生化为酰胺时，这些衍生物均表现出明显的降血糖活性。为了丰富化合物的结构多样性，改善衍生物的生物利用度，Zhu [ 10 ] 等人用酸酐或TBSCl 图1. 双醋瑞因的结构 图2. 化合物库1的合成 保护大黄酸母核上的两个羟基，分别得到中间体2和3，然后在碱性条件下与各种类型的胺缩合，得到化合物库2(见图3)。 在HepG2细胞模型上摄取葡萄糖的能力研究结果显示 [ 11 ] ，当这些化合物浓度设定为10 mg∙L −1 时，HepG2细胞吸收葡萄糖的能力较对照组大黄酸在相同浓度下HepG2细胞吸收葡萄糖的能力有所提升，通过测定其ClogP值对比发现，尤其化合物4(ClogP = 8.924)和化合物5(ClogP = 9.938)较对照组大黄酸(ClogP = −1.633)具有显著的差异。这些结果说明，一方面引入的TBS基团可以调节其脂水分配系数，改善其溶解度，进而使其生物利用度得到进一步提升，另一方面当把羧基修饰改造生成各种酰胺类化合物时，可明显提高其降血糖活性。 基于此，为了得到高活性的降血糖药物，Zhu [ 12 ] 等人设想：如果保留羧基，在母核上引入其他基团，还能否具有降血糖活性？他们以大黄素(Emodin)为原料，在大黄酸母核的6位引入烷氧基，设计并合成了化合物21-25，以期得到高活性降血糖化合物。具体合成路线如图4所示 [ 12 ] [ 13 ] ，首先以商品化合物大黄素为母体和不同链长的溴代烷烃于微波反应器中反应得到化合物6-10，然后在碱性条件下，化合物6-10和乙酸酐反应得到含乙酰氧基的化合物11-15，最后经过氧化和脱保护得到化合物21-25。 通过测定化合物21-25对α-葡萄糖淀粉酶的抑制活性研究显示 [ 12 ] ，所有化合物对酶均有抑制作用。当浓度为100 mg∙L −1 时，化合物21和化合物22较对照组大黄素对α-葡萄糖淀粉酶的抑制活性有所提高，有意思的是，含正辛烷氧基的化合物23(Ki = 60.6%)对酶表现出最强的抑制活性，是大黄素(Ki = 23.6%)的3倍左右，而化合物24和化合物25抑制作用又逐渐减弱，说明取代基的链长对活性有明显的影响。这些结果显示，保留羧基，对大黄酸母核其他位置进行修饰改造，引入一些脂溶性基团，有利于改善溶解度，提高生物利用度和降血糖活性。有趣的是，随着引入的烷烃链的增长，化合物对α-葡萄糖淀粉酶的抑制作用也随之加强，但当碳原子数大于8时，其抑制作用又逐渐减弱 [ 11 ] 。这些结果说明，当引入的 图3. 化合物库2的合成 图4. 化合物21-25的合成 烷烃链越长，产生的位阻就越大，从而会影响化合物与酶的相互作用。因此只有当引入适当链长的烷烃时，才具有较好降血糖活性。
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user: 3. 具抗炎活性的大黄酸衍生物 研究表明，大黄酸还具有显著的抗炎活性，Owton [ 14 ] 等人早期以大黄酸为母体，设计合成治疗骨关节炎的大黄酸衍生物。经对豚鼠口服给药后发现：当大黄酸的1，8-二羟基甲基化，5号位置连接氟原子时得到化合物26(图5)，与双醋瑞因相比可以显著提高抗炎作用，但这类化合物具有遗传毒性 [ 14 ] 。为了克服以上缺陷，Baxter [ 15 ] 等人在大黄酸1，8-二羟基位置进行结构修饰，设计合成一系列大黄酸酯类衍生物，实验结果表明，化合物27(图6)抗炎作用最为显著，究其原因，主要在于连接的酯基不但能够改善其溶解度、降低胃肠道毒副作用，还可以阻碍抗炎因子的释放，从而大大增强抗炎活性。后来蔡进等人将以多聚醇为连接体，将大黄酸和非甾体抗炎药对接偶联，形成新型抗炎化合物，合成得到小型化合物库3和化合物库4。具体合成路线如图7所示 [ 16 ] [ 17 ] ，首先大黄酸先经过乙酰化和酰氯化得到化合物28，然后与不同链长的多聚醇(n = 1，2，3)反应得到化合物29-31，随后在碱性条件下，化合物29-31和非甾体抗炎药偶联得到化合物库3，化合物库3的化合物经去乙酰化得到化合物库4。 在体外活性测试结果表明 [ 16 ] ，化合物库3和化合物库4中的所有化合物对HAP(羟基磷灰石)都有一定的吸收能力。当剂量为80mg时，化合物32和化合物33对HAP的吸收率均能达到70%，表现了良好的骨靶向性。在体内活性测试结果表明，大部分化合物对耳廓肿大老鼠显示抗炎效果，其中化合物32和化合物33的抗炎作用最为突出。值得一提的是化合物32的抗炎效果明显优于双醋瑞因，这些结果为开发新型高效抗炎药物提供了思路。
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user: 4. 具抗肿瘤活性的大黄酸衍生物 研究显示，大黄酸具有一定的抗肿瘤活性，这主要与平面状的1，8-二羟基蒽醌结构单元有关 [ 18 ] 。Yang等人将大黄酸3位的羧基转换成氨基，设计并合成了小规模化合物库5 [ 19 ] ，以期得到具有抗肿瘤活性的化合物。具体合成路线如图8所示 [ 20 ] [ 21 ] ，首先将大黄酸的两个羟基和一个羧基甲基化，得到中 图5. 化合物26 图6. 化合物27 图7. 化合物库3和化合物库4的合成 图8. 化合物库5的合成 间体34，然后水解得到酸性中间体35，中间体35在碱性条件下和叠氮磷酸二苯酯反应得到化合物36，经库尔提斯重排(Curtius rearrangement)反应得到氨基化合物37，化合物37经去甲基化后得到化合物38，之后与氯乙酰氯反应得到化合物39，最后化合物39与不同的胺反应得到化合物库5。 在HeLa细胞和MOLT4细胞模型上的活性测试结果表明，这些衍生物对这2种细胞都有一定的抑制作用 [ 19 ] 。其中化合物39的抗肿瘤活性明显优于化合物库5中的所有化合物，对HeLa细胞(IC 50 = 2.7 μmol∙L −1 )和MOLT4细胞(IC 50 = 0.6 μmol∙L −1 )分别表现了良好的细胞毒活性。这些结果说明，化合物39连接的氯乙酰基侧链容易与DNA结合，使其构象发生改变，从而抑制肿瘤细胞的生长 [ 20 ] 。 此外，Huang [ 22 ] 等人将大黄酸3位的羧基通过酯化反应得到酯衍生物(化合物库6，见图9)。 HeLa细胞活性测试结果表明，随着化合物浓度的增大，这些酯类衍生物对HeLa细胞株的抑制作用普遍强于相同浓度下大黄酸对HeLa细胞株的抑制作用，其中化合物40在浓度为100 μg∙mL −1 时，抑制作用最为明显，可达到70%，但低于对照组喜树碱在相同浓度下对HeLa细胞株的抑制作用。此外，随着酯基的位阻变大，衍生物对HeLa细胞株的抑制作用明显减弱，这些信息为设计、合成新型高效抗肿瘤的大黄酸衍生物提供了宝贵的思路。 在Huang等人的研究基础上，Tian [ 23 ] [ 24 ] 等人继续设计并合成了1，8-二乙酰基大黄酸-(2-溴)-乙酯(化合物41)。具体的合成路线如图10所示 [ 23 ] ，先将大黄酸的1，8-二羟基进行双乙酰化得双乙酰大黄酸，然后在碱性条件下，与1，2-二溴乙烷反应得化合物41。对比化合物41和大黄酸的LogP值，发现化合物41的LogP值明显小于大黄酸，说明化合物41的水溶性明显优于大黄酸。化合物41对骨肉瘤MG-63细胞的生长抑制结果表明，化合物41对骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用明显高于相同浓度下大黄酸对MG-63细胞的抑制作用，有可能是因为引入的卤素增强了化合物与DNA的相互作用，从而提高化合物的抗肿瘤活性。
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user: 5. 总结与展望 综上所述，大黄酸作为生物活性广泛的天然产物，引起了国内外学者的广泛关注。对大黄酸及其衍生物在抗肿瘤、抗炎、降血糖等领域的研究成果，为后续进一步改善化合物的成药性和发现新的适应症积累宝贵的经验，也为基于天然产物发现新型药物的研发理念提供了新的案例。由于其特殊的平面结构导致化合物溶解度差，生物利用度低，但以双醋瑞因为代表的实例作为治疗骨关节的药物已经在意大利上市。因此，我们坚信在不久的将来会有成药性好的大黄酸药物出现，前景广阔，值得我们进一步探究。 图9. 化合物库6的合成 图10. 化合物41的合成
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user: 摘 要 我们通过建立S180荷瘤模型，探索地胆草提取物对S180实体瘤的抗肿瘤研究。通过对健康雄性小鼠接种S180肉瘤随机分成对照组、环磷酰胺组以及地胆草提取物低、中、高剂量组，给药后观察探索荷瘤鼠的抑瘤率、小鼠存活时间以及胸腺和脾脏指数。结果研究表明地胆草提取物对S180实瘤小鼠具有一定的抑瘤效果：地胆草提取物高剂量组的抑瘤率为44.12%；荷瘤鼠的生存率提高至36.27%；对S180荷瘤鼠的胸腺指数和脾脏指数有一定的提高，在一定程度上能有效提高S180荷瘤鼠的免疫能力。 关键词 :抗肿瘤，三萜提取物，地胆草，羽扇豆醇，S180 Copyright © 2018 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 地胆草，为菊科地胆草属植物，主要用于治疗感冒、扁桃体炎、眼结膜炎、黄疸和湿疹等症，有清热、凉血、解毒和利湿的功效。据文献报道地胆草的主要化学成分为倍半萜内酯、三萜、黄酮及甾醇等化合物 [ 1 ] ，其中倍半萜内酯具有一定的抑制肿瘤及细胞毒作用 [ 2 ] ，但其三萜类主要成分的抗肿瘤效果尚未见报道。地胆草三萜提取物的主要成分为羽扇豆醇，羽扇豆醇(Lupeol)是一种来源于草莓、芒果等多种果蔬及中草药等植物的五环三萜类化合物。药理学研究表明：羽扇豆醇具有广泛的药理及生物学活性，如抗肿瘤、抗风湿、抗氧化、预防基因突变、抗炎、抗疟疾等 [ 3 ] 。同时分子药理学证据显示羽扇豆醇对小鼠黑色素瘤有抑制生长及诱导分化作用、对小鼠皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌细胞和肝癌细胞等都具有抑制作用，同时对人卵巢癌细胞也具有一定的抑制作用 [ 4 ] - [ 9 ] 。本实验旨在前期地胆草中羽扇豆醇提取研究的工作基础上，观察并探讨地胆草三萜提取物的主要成分羽扇豆醇对S180小鼠体内抗肿瘤作用的影响。
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user: 2. 材料与方法 2.1. 材料 实验动物：SPF级健康雄性昆明种小鼠，体重(20 ± 2) g，由赣南医学院实验动物中心提供。S180肉瘤株，由中国医学科学院医药研究所提供。 仪器：连续光谱多功能酶标仪(Varioskan Flash)，美国Thermo Fisher公司；倒置相差显微镜(CKX 41)，日本Olympus公司。 羽扇豆醇对照品，购于Alfa公司，HPLC检测其纯度 ≥ 98%。地胆草三萜提取物，赣南医学院药学院药物化学实验室制备。 2.2. 实验方法 2.2.1. 瘤株移植方法 [ 10 ] S180细胞株经昆明种小鼠腹腔内移植传代，经过一周培养后，通过无菌操作抽取小鼠内的腹水瘤细胞液，通过离心，弃去上清，用无菌生理盐水配制浓度为1 × 10 7 个/mL，然后在每只小鼠的右腋皮下接种0.2 mL，建立小鼠实体瘤模型。 2.2.2. 分组及给药 取健康雄性小鼠40只，随机分成五组，依次为空白组、阳性对照组以及地胆草提取液低(5 g/kg)、中(10 g/kg)、高(20 g/kg)剂量组，每组8只，接种24 h后开始给药。环磷酰胺腹腔注射给药，注射剂量为25 mg/kg，连续给药7 d，其余为灌胃给药，每连续14 d。 2.2.3. 观察指标 通过观察并记录小鼠的生长、体重等变化，通过以下公式计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数： 1) 抑瘤率/% = (对照组平均瘤重 − 给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重 × 100%； 2) 胸腺指数 = 胸腺平均质量(mg)/平均体质量(g)； 3) 脾脏指数 = 脾脏平均质量(mg)/平均体质量(g)。 2.2.4. 统计学方法 数据分析采用SPSS17.0统计软件进行分析，其计量数据以 ( x ¯ ± s ) 表示，使用方差分析，P < 0.05表示差异有统计学意义。
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user: 3. 方法与结果 3.1. 抗肿瘤作用药理试验 3.1.1. 地胆草三萜提取物对S180实体瘤的抑瘤作用 对S180荷瘤小鼠体内进行了抑瘤分析：由表1实验结果表明，三个剂量组的地胆草三萜类提取物对S180荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显抑制作用，且呈一定的量效关系，最高抑瘤率达44.12%。阳性对照组(环磷酰胺)抑瘤率为62.35%。 3.1.2. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠存活时间的影响 通过表2结果分析显示：对照组的小鼠由于受到实体瘤的影响使得小鼠的机体免疫力明显降低，导致其生存时间大为缩短。给药组与对照组相比，地胆草提取物低、中、高剂量组能在一定的范围内提高S180小鼠的存活时间，提高率分别为22.55%，33.33%，36.27%，结果表明地胆草提取物对小鼠瘤有较好的抑制效果。此外，结果显示环磷酰胺组可以非常有效地提高S180荷瘤的存活时间，其存活率提高至54.90%，即环磷酰胺组能够显著抑制S180实体瘤的生长。 3.1.3. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠免疫器官的影响 由表3数据可知，环磷酰胺组实验的小鼠的胸腺质量具有明显的下降，而由于充血坏死原因导致肝 Table 1 Effect of triterpene extraction on the tumor growth of S180 solid tumor mice ( x ¯ ± s ， n = 8 分组 肿瘤重量(g) 抑制率(%) 对照组 1.70 ± 0.23 --- 地胆草提取物低剂量 1.19 ± 0.35 * 30.00% 地胆草提取物中剂量 1.07 ± 0.41 * 37.06% 地胆草提取物高剂量 0.95 ± 0.39 * 44.12% 环磷酰胺组 0.64 ± 0.16 * 62.35% 表1. 地胆草三萜类提取物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 ( x ¯ ± s ， n = 8 ) 注： * 表示与对照组相比，P < 0.05。 Table 2 Effect of triterpene extraction on the survival time of S180 solid tumor mic 分组 存活时间/d 提高率/% 对照组 10.2 ± 0.8 0 地胆草提取物低剂量 12.5 ± 1.3 * 22.55 * 地胆草提取物中剂量 13.6 ± 1.5 * 33.33 * 地胆草提取物高剂量 13.9 ± 1.3 * 36.27 * 环磷酰胺组 15.8 ± 1.7 * 54.90 * 表2. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠存活时间的影响 注： * 表示与对照组相比，P < 0.05。 Table 3 Effect of triterpene extraction on liver and spleen index of S180 solid tumor mice ( x ¯ ± s ， n = 8 分组 胸腺指数/mg/g 脾脏指数/mg/g 对照组 1.61 ± 0.80 3.51 ± 1.04 地胆草提取物低剂量 1.75 ± 0.77 * 3.79 ± 1.11 * 地胆草提取物中剂量 1.89 ± 0.82 * 3.91 ± 1.06 * 地胆草提取物高剂量 1.94 ± 0.90 * 4.00 ± 1.51 * 环磷酰胺组 0.69 ± 0.27 * 4.06 ± 1.76 * 表3. 地胆草三萜提取物对S180小鼠的脾脏、胸腺器官的影响 ( x ¯ ± s ， n = 8 ) 注： * 表示与对照组相比，P < 0.05。 脏质量有一定的升高，这表明环磷酰胺对S180荷瘤小鼠有一定的免疫作用。不同剂量的地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠的胸腺指数和脾脏指数有一定的提高，呈现一定的浓度剂量依赖关系，即高剂量组的作用效果更明显些，该实验结果表明地胆草三萜提取物的有效活性成分羽扇豆醇在一定程度上能有效提高S180荷瘤鼠的免疫能力。
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user: 4. 结论 综上所述，本实验研究了地胆草三萜类主要成分羽扇豆醇对S180荷瘤鼠的抗肿瘤作用，结果表明地胆草三萜提取物主要成分羽扇豆醇能较好地抑制S180实体瘤的增长，延长荷瘤鼠的存活率；对S180荷瘤鼠的胸腺指数和脾脏指数有一定的提高，在一定程度上能有效提高S180荷瘤鼠的免疫能力。综上结果表明地胆草提取物三萜类主要成分羽扇豆醇具有一定的抗肿瘤效果，本研究为羽扇豆醇的抗肿瘤作用提供了一定的临床前期研究基础。
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user: 摘 要 本文以供应链金融为视角研究商业银行对中小企业信用风险的评估，首先通过分析供应链金融的特点，分析影响供应链金融模式下中小企业信用风险评价的因素，确定基于供应链金融的信用风险评价指标体系；本文从上市公司中小企业板块以及新三板中，挑选了供应链服务成熟的汽车制造业企业，借助东方财富choice金融终端中得到232家中小企业原始数据，采用BP神经网络建立模型对供应链金融模式下中小企业信用风险评价，并通过实证研究和Logistic回归模型的对比，来证明其适用性。 关键词 :供应链金融，信用风险，BP神经网络模型，Logistic回归模型 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 供应链服务的出现是社会生产方式进步的必然趋势，这意味着在市场经济下，商业竞争已经变成不同供应链之间的竞争，而随着商品交易的主流方式变成赊销，供应链中上游的中小供应商则很可能出现资金断流，由此，供应链金融服务应运而生。随着国内经济转型升级，在十九大强调供给侧结构性改革的宏观大背景下，供应链金融作为“产业发展需求”而生的金融服务，有望成为金融端改革的重点。加上近年来国家加大对中小企业的帮扶力度，而供应链金融又是解决中小企业融资难的有效方案之一，这些使得近年来供应链金融成为许多金融机构关注的焦点。 以往，商业银行对中小融资企业信用风险评价主要侧重中小融资企业本身带来的风险，包括企业财务状况，可供抵质押物情况等，而在供应链金融模式中，对中小融资企业信用风险的识别和评估则转变为全新视角：把供应链融资模式中的核心企业也作为考量的主体，整个供应链链条的稳定性也作为参考因素。
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user: 2. 供应链金融模式下小企业中信用风险评价指标体系建立 传统信贷业务中，在分析企业的还贷能力时，是以单个的企业作为考察主体，考察内容是三大财务报表所反映的盈利能力、偿债能力等指标，通过对财务报表的分析来确定授信与否。而在供应链金融融资模式下，银行不再仅仅评估单个企业的抵押物或资信水平，更侧重于对整条供应链及其交易的信用状况进行全方位的分析，不仅考察融资企业的经营状况，融资企业所处的行业状况、供应链上核心企业的资信状况以及供应链的运作状况等也列入其中。本文借助Allen和 Gregory、Erik Hofmann、Alquisira等国外学者 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] 以及周立群，李智华等国内学者 [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] 对供应链金融的研究，同时考虑到国内中小企业的特殊性，对传统模式下的评价指标加以改进，形成新的评价指标体系，具体如表1所示。