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user: 3. 结果与分析 3.1. 影响灵芝多糖提取的单因素分析 3.1.1. 计算多糖的含量及得率 将粗多糖沉淀物置于60℃干燥至恒重。按以下公式计算 样 品 多 糖 含 量 ( mg ) = C 2 − C 1 式3-1 式中C 1 为葡萄糖含量(mg)；C 2 为总糖含量(mg) (图1)。 多 糖 得 率 = 样 品 溶 液 多 糖 含 量 ( mg ) × 提 出 粗 多 糖 量 ( mg ) 5 灵 芝 干 粉 量 × 1000 × 100 % 式3-2 3.1.2. 不同浸提比对灵芝多糖提取的影响 用不同的浸提比进行提取效果比较，结果见表6和图2。从图2看出随着浸提比的增加多糖得率提高，最后曲线出现一个高峰，即在1:40，这是由于当浸提比小于1:40时增加水分更有利于多糖的浸出，达到一定值之后无影响。从实验结果考虑，选取1:20，1:30，1:40三个浸提比作为正交试验浸提比的三个水平。 3.1.3. 不同pH值对灵芝多糖提取的影响 调节不同的pH值，提取灵芝多糖。从图3和表7看出，在pH 7.0时多糖得率最高，达0.41%，pH < 7.0多糖得率随着pH值升高呈上升趋势，在pH > 7.5以后，多糖得率则随pH值升高呈下降趋势。这是由于灵芝多糖大多是碱性多糖根据相似相溶原理碱性环境有利于多糖浸出，多糖提取率较高，但当碱性过强时浸提液呈粘性不利于过滤导致多糖得率降低。对比它们的多糖含量进行分析，在pH 7.0时多糖含量最高，在pH > 7.0以后，多糖含量均较高，故选取pH 6.5、7.0、7.5三值作为正交试验pH值的因素水平。 图1. 葡萄糖标准曲线 图2. 不同浸提比的多糖含量 图3. 不同pH值的多糖含量 Table 6 Effect of different extraction ratio of polysaccharide conten 试验号 浸提比 (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 1:10 0.2727 0.1276 0.44 2 1:20 0.2910 0.1488 0.47 3 1:30 0.3148 0.2389 0.51 4 1:40 0.3163 0.2488 0.52 5 1:50 0.3170 0.2141 0.52 表6. 不同浸提比对多糖含量的影响 Table 7 Effect of different pH on the content of polysaccharid 试验号 pH值 (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 6 0.2391 0.1571 0.35 2 6.5 0.2480 0.2073 0.37 3 7 0.2734 0.2202 0.41 4 7.5 0.2712 0.2242 0.41 5 8 0.2661 0.2026 0.39 表7. 不同pH对多糖含量的影响 3.1.4. 不同浸提温度对灵芝多糖提取的影响 温度的高低直接影响多糖提取率。以不同的温度提取灵芝多糖。由实验结果(见图4、表8)得知，浸提温度为80℃、90℃多糖量均较高，分别达0.41%、0.42%，但100℃提取率明显下降，出现此现象的原因可能是高温对多糖的结构与活性有一定的影响，100℃时多糖容易分解产生单糖而溶解在浓乙醇中进而影响多糖的提取率，从多糖含量看，90℃时所得多糖含量也较高，因此取70℃、80℃、90℃为正交试验浸提温度的三个水平。 3.1.5. 不同浸提时间对灵芝多糖提取的影响 以不同的浸提时间提取灵芝多糖，结果见图5和表9。从曲线走势看到，浸提2 h时，多糖得率高达0.62%，以后增加较为平缓，多糖提取率几乎保持不变。可能由于加热时间过长，促进多糖的溶解使得提取率增大，但是加热时间过长提取率无明显变化，因此提取时间选择由此确定1.5 h，2 h，2.5 h作为正交试验浸提时间因素的三个水平。 3.1.6. 不同乙醇浓度对灵芝多糖提取的影响 用乙醇沉淀法提取多糖时，乙醇的浓度对多糖的含量影响最大。图6、表10结果显示，低浓度的醇析效果不佳，多糖得率低，多糖含量也低，当乙醇浓度达95%时，醇析效果最好，多糖含量最高，100%乙醇时多糖含量也较高，但从经济、实验成本角度考虑，不宜选用100%乙醇，乙醇浓度为85%和90%时的多糖得率和含量都明显高于80%的提取效果。选取85%、90%、95%三个数据作为正交试验乙醇浓度因素的三个水平。 3.2. 灵芝多糖提取工艺的优化 为了提高在多因素条件下灵芝多糖的提取率，我们在单因素试验的基础上进行多因素正交试验，以优化提取工艺。结合3.2的试验结果和分析，我们采用五因素三水平L18(35)正交法进行正交试验。采用热水浸提法，提取灵芝多糖，结果见表11。 图4. 不同浸提温度的多糖含量 图5. 不同浸提时间的多糖含量 图6. 不同乙醇浓度的多糖含量 Table 8 Influence of different extraction temperatures on polysaccharide conten 试验号 浸提温度(℃) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 60 0.2443 0.1583 0.35 2 70 0.2574 0.1617 0.38 3 80 0.2755 0.1635 0.41 4 90 0.2799 0.1648 0.42 5 100 0.2785 0.1609 0.40 表8. 不同浸提温度对多糖含量的影响 Table 9 Effect of different extraction time on polysaccharide conten 试验号 浸提时间(h) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 1 0.3206 0.2531 0.55 2 1.5 0.3388 0.2627 0.59 3 2 0.3527 0.2652 0.62 4 2.5 0.3548 0.2648 0.63 5 3 0.3591 0.2614 0.63 表9. 不同浸提时间对多糖含量的影响 Table 1 0 The effect of different ethanol concentration on the content of polysaccharid 试验号 乙醇浓度(%) (1)灵芝多糖含量(mg) (2)灵芝多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 80 0.2024 0.1248 0.29 2 85 0.2188 0.1387 0.31 3 90 0.2247 0.1659 0.32 4 95 0.2356 0.1846 0.34 5 100 0.2312 0.1538 0.32 表10. 不同乙醇浓度对多糖含量的影响 Table 1 1 L18 (35) orthogonal test scheme and test result 试验号 A B C D E (1)多糖含量(mg) (1)多糖得率(%) 1 1 1 1 1 1 0.3189 0.509 2 1 2 2 2 2 0.3538 0.626 3 1 3 3 3 3 0.3799 0.722 4 2 1 1 2 2 0.3471 0.603 5 2 2 2 3 3 0.3876 0.751 6 2 3 3 1 1 0.3706 0.687 7 3 1 2 1 3 0.3537 0.626 8 3 2 3 2 1 0.3918 0.768 9 3 3 1 3 2 0.3789 0.721 10 1 1 3 3 2 0.3857 0.744 11 1 2 1 1 3 0.3506 0.615 12 1 3 2 2 1 0.3897 0.760 13 2 1 2 3 1 0.3912 0.765 14 2 2 3 1 2 0.3554 0.632 15 2 3 1 2 3 0.3302 0.545 16 3 1 3 2 3 0.3958 0.775 17 3 2 1 3 1 0.3756 0.705 18 3 3 2 1 2 0.3679 0.677 K ¯ 1 0.663 0.670 0.616 0.624 0.691 K ¯ 2 0.664 0.683 0.701 0.679 0.655 K ¯ 3 0.712 0.685 0.721 0.735 0.672 极差R 0.049 0.015 0.105 0.111 0.032 表11. L18(35)正交试验方案及试验结果 注：l，2，3分别表示各因素水平； K ¯ 1 ， K ¯ 2 ， K ¯ 3 为各因素各水平多糖含量的总和。 由正交试验结果可知，极差R愈大的因素对指标的影响愈显著，即影响灵芝多糖提取率因素大小依次是D (乙醇浓度)、C (浸提温度)、E (浸提比)、A (pH值)、B (浸取时间)，其中乙醇浓度和浸提温度是主要因素，浸提时间对多糖提取的影响最小。正交试验结果显示，18组实验中，第16组灵芝多糖得率最高为0.775%，提取条件是A3B1C3D2E3，即pH 7.5，浸取时间1.5 h，浸取温度90℃，乙醇浓度90%，浸提比1:40。