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user: 3. 结果 1) Western blot法检测CIS对MHCC97H肝癌细胞VEGF-A和VEGF-C、MMP-9表达 用含有蛋白酶抑制剂的细胞裂解溶液裂解收集的细胞，经BCA蛋白质浓度测定试剂盒进行蛋白质定量。等量的细胞总蛋白(20 μg/泳道)上样进行12% SDS-PAGE电泳，显色后紫外灯下观察结果。采用凝胶图像分析系统，对电泳条带进行密度扫描后进行灰度分析。DDP组VEGF-A表达较肿瘤模型组明显减少，抑制率为25.8%。CIS L组VEGF-A抑制率为17.2%，CIS H组VEGF-A表达较肿瘤模型组显著减少，抑制率为23.8%。β-Actin表达在各组中无明显差异。DDP组MMP-9抑制率为12.6%。CIS L组MMP-9抑制率为13.2%，CIS H组MMP-9表达较肿瘤模型组减少显著，抑制率为18.1%。DDP组VEGF-C抑制率为9.2%。CIS H组VEGF-C表达抑制率为7.3%，结果见图1。 图1. Western blot法检测CIS对MHCC97H肝癌细胞VEGF-A、MMP-9和VEGF-C表达。(a) Western blot检测各组中VEGF-A蛋白的表达；(b) Western blot检测各组中MMP-9蛋白的表达；(c) Western blot检测各组中VEGF-C蛋白的表达。泳道1，2：模型对照组；泳道3，4：DDP组；泳道5，6：CIS L组；泳道7，8：CIS H组 光学倒置显微镜下观察可见：肝癌模型对照组细胞生长旺盛，细胞密集。DDP组肿瘤细胞明显减少。CIS L组较肿瘤模型组也明显减少，CIS H组较肿瘤模型组显著减少。结果见图2。 2) CIS对人肝癌细胞株HCC9204裸鼠移植瘤抑制作用 基因重组CIS液对裸鼠接种人肝癌HCC9204体内给药具有抑制作用，皮下注射(10 mg/kg和5 mg/kg，SC × 24)肿瘤抑制率分别为54.13%和35.86%，统计学比较，差异显著(P < 0.01，10 g/kg SC × 24)，对照药紫素(25 mg/kg，ip × 6)肿瘤抑制率为72.28%，实验结果见表1、图3(a)和图3(b)。 3) CIS对人乳腺癌细胞株BCaP-37裸鼠移植瘤抑制作用 基因重组CIS液对人乳腺癌BCaP-37裸鼠体内给药具有抑制作用，皮下注射(10 mg/kg和5 mg/kg，SC × 24)肿瘤抑制率分别为53.88%和26.52%，统计学比较，差异显著(P < 0.001，10 g/kg SC × 24)，对照药紫素(25 mg/kg，ip × 6)肿瘤抑制率为73.62%，实验结果见表2、图4(a)和图4(b)。 4) CIS对人结肠癌细胞株HCT116裸鼠移植瘤抑制作用 CIS液对裸鼠接种人结肠癌HCT116体内给药具有抑制作用，皮下注射(10 mg/kg和5 mg/kg，SC × 24)肿瘤抑制率分别为41.12%和32.02%，统计学比较，差异显著(P < 0.01，10 mg/kg SC × 24)，对照药注射用顺铂(5 mg/kg，ip × 6)肿瘤抑制率为49.78%，实验结果见表3、图5(a)和图5(b)。 图2. CIS对人肝癌细胞株MHCC97H细胞作用48小时后观察。(a)肝癌对照；(b) DDP，2 mg/ml，作用48小时；(c) CIS，100 mg/ml作用48小时；(d) CIS，200 mg/ml作用48小时 图3. (a) CIS液对裸鼠接种人可移植性肝癌HCC9204抑制作用；(b) CIS液对裸鼠接种人可移植性肝癌HCC9204抑制作用 图4. (a) CIS液对裸鼠接种人可移植性乳腺癌BCaP-37抑制作用；(b) CIS液对裸鼠接种人可移植性乳腺癌BCaP-37抑制作用 Table 1 Inhibition of CIS on transplanted human hepatoma HCC9204 cells in nude mice mode 组别 剂量 动物数 给药方式 体重(实验前/实验结束) 瘤重 肿瘤抑制率 P Groups Dose (mg/kg) Number of mice (n) Mode of administration Body weight ( ± s， g) Tumor weight ( ± s， g) Inhibition of rate (%) Before exp. After exp. Control N.S. 10 mL 8 BID PO × 24 18.5 ± 0.5 21.0 ± 1.0 1.14 ± 0.29 Taxol 25 8 Tiw ip × 6 18.2 ± 0.8 19.6 ± 1.0 0.32 ± 0.10 72.28 * <0.001 CIS 5 8 BID SC × 24 18.5 ± 0.6 20.5 ± 0.7 0.73 ± 0.24 35.86 <0.05 CIS 10 8 BID SC × 24 18.0 ± 0.8 20.7 ± 1.1 0.52 ± 0.10 54.13 <0.01 表1. CIS对裸鼠移植人可移植性肝癌HCC9204抑制作用 注：*：与对照组比较；NS：无菌0.9%氯化钠注射液；BID：每日2次；Tiw：每周3次隔日1次 图5. (a) CIS液对裸鼠接种人可移植性结肠癌HCT116抑制作用；(b) CIS液对裸鼠接种人可移植性结肠癌HCT116抑制作用 Table 2 Inhibition of CIS on transplanted human breast cancer BCaP-37 in nude mice mode 组别 剂量 动物数 给药方式 体重(实验前/实验结束) 瘤重 肿瘤抑制率 P Groups Dose (mg/kg) Number of mice (n) Mode of administration Body weight ( ± s， g) Tumor weight ( ± s， g) Inhibition of rate (%) Before exp. After exp. Control N.S. 10 mL 8 BID PO × 24 19.2 ± 0.8 21.6 ± 1.0 0.89 ± 0.32 Taxol 25 8 Tiw ip × 6 18.5 ± 0.8 20.4 ± 0.9 0.23 ± 0.08 73.62 * <0.001 CIS 5 8 BID SC × 24 19.2 ± 1.1 21.1 ± 1.5 0.65 ± 0.22 26.52 >0.05 CIS 10 8 BID SC × 24 18.8 ± 1.2 20.8 ± 1.0 0.41 ± 0.12 53.88 <0.01 表 2. CIS对裸鼠移植人可移植性乳腺癌BCaP-37抑制作用 注：*：与对照组比较；NS：无菌0.9%氯化钠注射液；BID：每日2次；Tiw：每周3次隔日1次 Table 3 Inhibition of CIS on transplanted human colonic carcinoma HCT116 in nude mic 组别 剂量 动物数 给药方式 体重(实验前/实验结束) 瘤重 肿瘤抑制率 P Groups Dose (mg/kg) Number of mice (n) Mode of administration Body weight ( ± s， g) Tumor weight ( ± s， g) Inhibition of rate (%) Before exp. After exp. Control N.S. 10 mL 6 BID PO × 24 19.6 ± 1.1 21.6 ± 1.7 1.14 ± 0.36 DDP 5 6 Tiw ip × 6 18.6 ± 1.3 21.2 ± 1.4 0.57 ± 0.22 49.78 * <0.001 CIS 5 6 BID SC × 24 19.1 ± 1.1 22.2 ± 1.7 0.78 ± 0.39 33.02 <0.05 CIS 10 6 BID SC × 24 19.4 ± 1.9 22.6 ± 1.3 0.67 ± 0.30 41.12 <0.01 表 3. CIS对裸鼠移植人可移植性结肠癌HCT116抑制作用 注：*：与对照组比较；NS：无菌0.9%氯化钠注射液；BID：每日2次；Tiw：每周3次隔日1次