DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 重金属通过工业废水、农业回流水、生活污水及其它废弃水等途径未经处理直接排入水体，是造成水体及水产品污染的重要途径 [ 1 ] [ 2 ] 。重金属在水中非常稳定，无法被微生物分解，且可以通过食物链在生物体中逐步浓缩富集 [ 3 ] 。人体摄入受污染的水产品后，重金属会在人体内蓄积并导致机体慢性中毒 [ 4 ] 。研究发现，铅进入机体后主要危害神经系统和生殖系统，并可引起高血压 [ 5 ] ；镉会引起贫血、高血压、骨质软化以及著名的骨痛病；铬会引起皮炎、色素沉着，甚至有致癌作用。 太白湖位于山东省济宁市太白湖新区，南接微山湖，北靠济宁老城区，西边毗邻京杭大运河、东边洸府河围绕，生态资源得天独厚，是山东省绿色生态示范区和国家4A级旅游景区。近年来，随着对太白湖的升级改造，太白湖区生态环境得到极大改善。但是，由于太白湖区及周边水产资源、农业资源及矿产资源丰富，农产品的种植、矿产资源的开发无不对太白湖水体及水产品造成严重污染 [ 6 ] 。本研究通过采用电感耦合等离子体质谱法以及石墨炉原子吸收法检测太白湖水体及水产品铅、镉、铬的含量，掌握太白湖水体及水产品受铅、镉、铬污染的基本情况，监测发生的变化趋势和分析可能的原因，从而提出科学有效的防治措施，改善太白湖水质，恢复自然生态资源，提高湖区水产品的食用安全性，为开展太白湖水产品安全风险监测和促进太白湖的生态建设提供科学依据。
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user: 2. 材料和方法 2.1. 材料与试剂 铅、铬、镉标准品：购自美国安捷伦科技有限公司，规格为10 ppm；所用硝酸、高氯酸均为优级纯；水为去离子水。 2.2. 仪器与设备 7700X液相色谱–电感耦合等离子体质谱仪(Agilent)；AA900Z石墨炉原子吸收光谱仪(铂金埃尔默公司)。 2.3. 试样采集 采集太白湖湖水、水草、藕、田螺和河蚌等5种试样。试样采集后均置于棕色瓶放在冰箱冷冻保存，待成批检测。试样采集的地点，时间，采样量及温度见表1。 2.4. 试样的前处理 2.4.1. 试样的预处理 采集的水样先用0.45 um微孔滤膜过滤，再经过1%的硝酸酸化处理，与采集的水草、藕、田螺和河蚌试样一起于置于4℃冰箱中密封保存，待测。 2.4.2. 铅检测试样的处理 精确称取5.000 g水草、藕、田螺和河蚌4种试样分别置于25 mL瓷坩埚中，先小火加热炭化至无烟后，再移入马弗炉中500℃灰化8小时，取出冷却，在4种试样中各加1 mL混合酸后在电炉上小火加热，至完全消解，取出放冷，用0.5 mol/L硝酸溶解，并定容至10 mL容量瓶中。同样方法做试剂空白。 2.4.3. 铬检测的试样处理 精确称取3.000 g水草、藕、田螺和河蚌4种试样分别置于25 mL瓷坩埚中，先小火加热炭化至无烟后，再移入马弗炉中550℃灰化4小时，取出冷却，为防止灰化不彻底，于4种试样中各加入4滴硝酸，在可调试电炉上小火加热，蒸干后，再转入550℃马弗炉内持续灰化2小时，待试样呈灰白状，取出冷却，用硝酸(1 + 1)溶解，并定容至10 mL容量瓶中。同样方法做试剂空白。 2.4.4. 镉检测的试样处理 精确称取2.000 g水草、藕、田螺和河蚌4种试样分别置于10 mL瓷坩埚中，先小火加热炭化至无烟后，再移入马弗炉500℃灰化8小时，取出冷却，加1 mL混合酸在可调式电炉上小火加热，待混合酸蒸干后，再转入马弗炉500℃持续灰化2小时，直到试样消化完全，呈灰白色或浅灰色。取出放冷，用硝酸(1%)溶解，并定容至25 mL容量瓶中。同样方法做试剂空白。 Table 1 Place， time， weigh and temperature of collecting sample 试样 Sample 采样地点 Place 采样时间 Time 采样量 Weigh 温度(℃) Temperature (℃) 水(water) 湖心(middle of the lake) 2015.3.25 1000 ml 18 水草(water plant ) 湖南侧(south of the lake) 2015.3.25 400 g 18 藕(lotus root) 湖南侧(south of the lake) 2015.4.6 500 g 18 田螺(river snails) 湖南侧(south of the lake) 2015.3.25 200 g 18 河蚌(freshwater mussel) 湖南侧(south of the lake) 2015.4.6 500 g 18 表1. 试样采集的地点，时间，采样量及温度 2.5. 标准系列的配制 将10 ppm的标准品使用溶液用纯化后的2%的硝酸稀释成浓度梯度为0 ng/mL、2 ng/mL、5 g/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL的标准系列。 2.6. 测定方法和条件 采用磷酸二氢铵做基体改进剂，用石墨炉原子吸收光谱法测定水草、藕、田螺和河蚌中的铅、铬、镉的含量；用ICP-MS测定水体中的铅、铬、镉的含量。石墨炉原子吸收法测定条件见表2。 2.7. 数据处理 所有试样均测三次，取平均值。
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user: 3. 结果与分析 3.1. 铅、铬、镉的标准曲线、线性范围及检出限 按表2仪器的工作条件分别检测铅、铬、镉标准系列的吸光度值，横坐标为质量浓度值(μg/L)，纵坐标为吸光度值，绘制标准工作曲线，得到回归方程和相关系数。见表3及图1、图2、图3。 图1. 铅的标准曲线 Table 2 GFAAS determination condition of Pb， Cr， C 元素 波长(nm) 狭缝(nm) 灯电流(mA) 铅(Pb) 283.3 0.2 7 铬(Cr) 357.9 0.2 7 镉(Cd) 228.8 0.4 10 表2. 铅、铬、镉的石墨炉原子吸收法测定条件 Table 3 The regression equation， correlation， linear range， the detection limit of Pb， Cr， C 元素 回归方程 相关系数 线性范围(μg/L) 检出限(ng/mL) 铅(Pb) Y = 0.0229X − 0.0008 0.999076 0~3.96 0.03 铬(Cr) Y = 0.0131X − 0.0024 0.998612 0~39.19 0.2 镉(Cd) Y = 0.0472X + 0.0070 0.997831 0~3.89 0.004 表3. 铅、铬、镉的回归方程、相关性、线性范围以及检出限 图2. 铬的标准曲线 图3. 镉的标准曲线 3.2. 太白湖区湖水及水产品铅、铬、镉的浓度 太白湖水样、水草、藕、田螺和河蚌中铅、铬、镉的浓度以及相对应的国家限量标准(GB 2762-2012)，见表4。
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user: 4. 讨论 随着经济发展和人类活动，对工业废水、城镇生活污水、农业污水的不合理排放都会严重污染环境，还会威胁水生植物、水生动物的正常生长，破坏生态系统的稳定性。由于重金属难降解、易积累、毒性大等特点，影响水产品的质量安全，最终会威胁整个生态系统的稳定 [ 7 ] [ 8 ] 。太白湖位于中国济宁市南部，南接微山湖，北靠济宁老城区而济宁市又拥有丰富的煤炭资源、矿产资源和大量的耕地面积，大规模的 Table 4 Determination of the content of lead， chromium and cadmium in water and aquatic plants， lotus， snail， mussel in the Taibai Lak 试样 铅(以Pb计) mg/kg 铬(以Cr计) mg/kg 镉(以Cd计) mg/kg 试样含量 国家标准 试样含量 国家标准 试样含量 国家标准 水(mg/kg) 0.00349 ≤0.01 1 0.00229 ≤0.05 1 0.000612 ≤0.005 1 水草(mg/kg) 0.0116 ≤0.1 0.898 ≤0.5 0.0212 ≤0.1 藕(mg/kg) 0.00953 ≤0.1 0.956 ≤0.5 0.0101 ≤0.1 田螺(mg/kg) 0.09325 ≤0.5 2 5.128 a ≤2.0 0.0105 ≤0.5 2 河蚌(mg/kg) 0.110 ≤1.5 3 3.598 a ≤2.0 0.00226 ≤2.0 3 表4. 济宁市太白湖湖心水以及水草、藕、田螺、河蚌中铅、铬、镉浓度(mg/kg) 注： 1 为包装饮用水标准； 2 为甲壳类标准； 3 为双壳类标准； a 为超出食品安全国家标准。 资源开采在带动经济发展的同时也造成了重金属的污染，重金属以各种形式进入水体造成水资源的污染 [ 9 ] [ 10 ] 。这些情况可能会污染太白湖景区的水体及水产品。 我国水产品资源相对丰富，在人民的膳食结构中占有一定比例。但近年来，随着经济的发展，环境污染不断加重，水产品质量、安全和卫生存在诸多隐患，水产品质量与安全问题依然突出 [ 11 ] [ 12 ] 。屡屡发生的水产品安全事件不仅严重威胁人民群众的身心健康，还制约了我国水产品的出口，产生巨大的出口壁垒，对我国的水产品出口和国际水产品贸易产生较大的阻碍作用 [ 13 ] 。 本研究中，通过采用ICP-MS检测水体中的重金属，结果显示：水体中铅、铬、镉的含量分别是0.00349、0.00229、0.000612 mg/kg。与食品安全国家标准(GB 2762-2012)比较均未超标，而且采用的标准是包装饮用水的标准，说明太白湖受到重金属的污染少。分析原因可能有：1) 污染来源少。自2009年太白湖景区全面封闭开发建设以来，按照“以人为本，突显生态”的原则，致力于绿色、生态、和谐的景区建设，没有排污的工厂和企业，只有青山绿水的生态景观。2) 政府有力的治理措施。对传统产业实施技术改造，关闭淘汰重污染企业；建设人工湿地，利用生态系统净化水体；强化环境在线监控，在重点位置设置监控点。3) 公众的环保意识增强。高效、低毒、低残留农药的大力发展，一次性不可降解塑料袋的减少使用，废电池回收并集中处理。 通过石墨炉原子吸收法检测水产品中的重金属，结果显示：水草中铅、铬、镉含量分别为0.0212、0.898、0.0116 mg/kg，藕中铅、铬、镉含量分别为0.00953、0.956、0.0101 mg/kg，河蚌中铅、铬、镉含量分别为0.110、3.598、0.00226 mg/kg，田螺中铬和镉含量分别为5.128、0.0105 mg/kg，水产品中的重金属含量与食品安全国家标准(GB 2762-2012)比较发现，所测太白湖水体和水产品中铅、镉含量均未超过国家标准；水中铬含量未超过国家标准，水草、藕、田螺和河蚌中铬元素含量均超过国家标准。提示北湖水体有一定的重金属污染存在，而且要特别注意铬的污染。被铬污染的食物可以通过消化道进入人体，对人体的肝脏、肾脏造成损伤，同时还具有生殖毒性及遗传毒性 [ 14 ] 。 另外通过比较水体、水草、田螺、莲藕和河蚌中铬的浓度，可以发现在这些试样中铬浓度均成递增趋势，显示了生物富集这一现象。生物富集危害历来就被重视，重金属元素的浓度会通过食物链，最终在体内呈几何放大倍数，从而造成难以忽视的重大影响。韦丽丽对三峡水库水生生物的重金属含量分析，进一步说明了重金属通过食物链存在生物放大现象 [ 15 ] 。为了防止这一危害，应从源头抓起，严格控制水体中重金属含量，并且应做好水体重金属污染的应急处理以及相应的修复工作。而对于湖泊重金属污染的修复有林蔚等在小型湖泊重金属污染应急处理与修复研究中的报道提出的喷洒生石灰降低重金属镉的应急处理，还有通过水生植物对水体中的重金属元素的吸附作用来降低水体中的重金属元素浓度 [ 16 ] 。陶成等在水体重金属污染的微生物治理研究与应用中提出的利用微生物对重金属的转化作用和吸附作用降低重金属的含量 [ 17 ] 。以及王谦等在大型水生植物修复重金属污染水体研究进展中提到的利用大型水生植物对重金属进行治理 [ 18 ] 。张海锋则对水生植物修复重金属污染的特性和影响因素及存在的问题和展望进行了详细的介绍 [ 19 ] 。江用彬等详细介绍了藻类在吸附重金属上具有吸附量大、吸附快速可逆、吸附用藻类种类丰富、吸附过程动态平衡、应用处理经济等优点 [ 20 ] 。 本研究通过采用电感耦合等离子体质谱法以及石墨炉原子吸收法检测太白湖水体及水产品铅、镉、铬的含量，掌握了太白湖水体及水产品受铅、镉、铬污染的基本情况，从而提出科学有效的防治措施，改善太白湖水质，恢复自然生态资源，提高湖区水产品的食用安全性，为开展太白湖水产品安全风险监测和促进太白湖的生态建设提供科学依据。
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user: 摘 要 目的：观察中药对异动症(levodopa-induced dyskinesias， LID)大鼠行为学和纹状体多巴胺D1受体活性及mRNA表达的影响。方法：6-OHDA构建(Parkinson’s disease， PD)大鼠模型，左旋多巴治疗4周制作LID大鼠模型，将成功建立的LID大鼠，随机分为模型组、中药干预组，另取相同数量的正常大鼠作为正常对照组，治疗四周后观察中药对LID大鼠异常不自主运动(abnormal involuntary movement， AIM)评分、剂峰旋转次数的影响；测定大鼠纹状体多巴胺D1受体的最大结合容量(maximum binding capacity， Bmax)和平衡解离常数(equilibrium dissociation constant， KD)；运用实时定量PCR检测多巴胺D1受体mRNA表达。结果：模型组大鼠随着左旋多巴治疗时间的延长，AIM评分及剂峰旋转次数进行性升高；与模型组比较，中药干预后可明显减少异动症大鼠的AIM积分及旋转次数(P < 0.05)。纹状体多巴胺D1受体活性结果显示：两组大鼠与正常对照组比较Bmax升高(P < 0.01)，KD值降低(P < 0.05)，受体活性明显增高，中药治疗可使Bmax降低，KD值升高(P < 0.01)，明显降低D1受体活性；荧光实时定量PCR结果显示模型组大鼠多巴胺D1受体mRNA表达明显上调(P < 0.01)；中药可以显著下调多巴胺D1受体mRNA的表达(P < 0.05)。结论：多巴胺D1受体介导的直接通路过度激活可能是异动症产生的主要机制。中药主要是通过下调多巴胺D1受体活性及基因表达从而有效缓解异动症症状。 关键词 :异动症大鼠，滋肾平颤颗粒，行为学，多巴胺D1受体，直接通路 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 帕金森病是中老年人常见的慢性进展性神经系统变性疾病，其主要病理特点是黑质致密部多巴胺(DA)能神经元变性。目前，左旋多巴(levodopa， LD)仍是改善帕金森病症状的金标准药物，但长期应用(一般大于5年)后50%以上的患者会出现异动症 [ 1 ] [ 2 ] ，主要表现为舞蹈症或手足徐动样不自主运动、肌强直或肌阵挛，可累及头面、四肢和躯干，严重影响了PD患者的生活质量。LID的发生与黑质-纹状体失多巴胺能支配、左旋多巴脉冲样治疗有关，但其确切机制还不完全清楚，目前多认为异动症是由于基底节直接与间接通路失平衡而导致，同时也与多巴胺受体超敏感有关 [ 3 ] [ 4 ] 。因此明确LD诱发LID的发生机制，寻找LID的防治措施对于改善晚期PD患者的症状，提高生活质量具有极其重要的意义。本研究主要探讨滋肾平颤颗粒对LID大鼠行为学和纹状体多巴胺D1受体活性及基因表达的影响，为进一步深入研究LID的发生机制及防治LID提供理论与实验依据。
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user: 2. 实验材料与方法 2.1. 实验药物 滋肾平颤颗粒(熟地黄15 g、枸杞15 g、桑寄生20 g、天麻15 g、僵蚕10 g、莪术15 g、白芍药20 g、天南星15 g、全蝎3 g、蜈蚣3 g)由江苏天江药业有限公司分别制成免煎颗粒剂(批号：1410302)，8 g/袋。左旋多巴粉剂(批号：SLD6438)和苄丝肼粉剂(批号：SL03323)，购自美国Sigma公司。 2.2. 实验动物 实验动物成年雄性SD大鼠50只，体质量160~180 g，由上海中医药大学动物实验中心提供，动物许可证号为SCXK沪2014-0004。 2.3. 主要试剂和仪器 6-hydroxydopamine (6-OHDA)、apomorphine (APO)、SCH23390、Spiperone，美国Sigma公司产品； 3 H-SCH23390 (比放射性69·8Ci/mmol)为美国Amersham公司产品；大鼠脑立体定位仪，68001型，深圳瑞沃德；冰冻离心机，Centrifuge 5417R，德国EPPENDORF公司；液体闪烁发光记数仪，Wallacl450型，美国PerkinElmer公司产品。IEppendorf核酸蛋白检测仪，德国Eppendorf。实时荧光定量PCR仪，7500fast，美国ABI；超低温冰箱，MDF-292，SANYO CO。 2.4. PD大鼠模型制备 [ 5 ] SPF级SD大鼠，麻醉后固定于大鼠脑立体定向仪上，参照大鼠脑立体定位图谱 [ 6 ] ，采用两点法造模，SNC：前囟后4.8 mm，矢状缝右侧2.0 mm；硬膜下8.0 mm；VTA：前囟后4.8 mm，矢状缝右侧1.2 mm，硬膜下8.2 mm。牙科钻打孔，向两坐标点各注射6-OHDA 6 μg注射速度为1 μl/min，留针10 min。术后14天应用阿朴吗啡腹腔注射(0.5 mg/kg体重)，若大鼠恒定转向左侧且旋转圈数 > 7圈/分钟则视为成功帕金森病模型。正常对照组大鼠模型制备：用上述同样方法向右侧SNC和VTA分别注射6 ul生理盐水。 2.5. LID大鼠模型制备 PD大鼠予以左旋多巴腹腔注射治疗四周，注射剂量为20 mg/kg/d，bid。行为学测定AIM评分 > 20分则视为成功的LID模型 [ 7 ] 。 2.6. 行为学测试方法 2.6.1. AIM评分测定 AIM评分方法 [ 8 ] ：AIM评分由4个部分(前肢、口面部、轴性及运动)进行评定，每部分又根据严重程度划分为五个等级(0~4分)，其中0分：无；1分：偶尔出现；2分：经常出现；3分：持续存在，刺激使之停止；4分：持续存在，刺激也不能使之停止。 2.6.2. 剂峰旋转次数测定 [ 9 ] 各组大鼠在治疗过程中于第7、14、21、28天上午用药后进行大鼠行为学观察和评分。剂峰旋转次数：注射左旋多巴后，每5 min记录旋转次数，最多的旋转次数为剂峰旋转次数。 2.7. 动物分组及给药 42只大鼠造模后经行为学测试，成功造模的PD模型大鼠22只，LD治疗4周后，筛选出成功的LID大鼠模型16只，随机分为模型组、中药干预组每组8只，另取8只生理盐水造模大鼠为正常对照组。异动症模型组继续予以左旋多巴/苄丝肼腹腔注射，每日10 mg/kg，2次/d；中药干预组在模型组处理基础上给予中药灌胃(滋肾平颤颗粒24 g溶于100 ml生理盐水中)，每次灌胃量为9 ml/kg，1次/d；正常对照组给予生理盐水灌胃及生理盐水腹腔注射，治疗4周。 2.8. 大鼠脑组织抽提RNA步骤 [ 10 ] 取大鼠纹状体组织50 mg，加入1 ml Trizol液，充分匀浆，22℃，静置5 min，加入氯仿0.2 ml，颠倒15 s，22℃，静置3 min，离心：4℃ × 14，000转/分 × 15 min，取上清液0.5 ml，加入0.5 ml异丙醇，混匀，22℃，静置10 min，离心：4℃ × 14，000转/分 × 10 min，弃上液，加入1 ml 4℃ 75%乙醇，离心：4℃ × 10，000转/分 × 5 min，弃上液，真空干燥5 min，用40 ul DEPC处理水溶解，−80℃保存。 2.9. 反转录反应 F(GCTATGCTGACTGGGCTGAC)；R(TTTCAGGGATGCTGCCTCT)反转录环境：37℃ 15 min，85℃ 5秒。−20℃保存。PCR反应条件为95℃ 30秒；95℃ 3 s，60℃ 30 s，40个循环。 2.10. RT-PCR数据换算方法 目的基因的相对表达量可以采用∆∆CT法加以分析。CT值—n：扩增循环，∆CT = 目的基因CT − 内参C (注：同一反转录产物扩增后)，∆∆CT = 观察样本∆CT − 对照样本∆CT = (观察样本目的基因CT − 观察样本内参CT) − (对照样本目的基因CT − 对照样本内参CT)，样本的相对表达量：= 2 − ∆∆ CT 。 2.11. 膜蛋白制备 参照张旺明等 [ 11 ] 方法制备膜蛋白，最后1次给药2 小时后，大鼠以1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，快速断头取脑，于冰块上分离并切取双侧尾壳核脑组织各一块。加入4℃预冷的离心缓冲液，冰浴中制成匀浆，离心后取沉淀以Tris-盐酸缓冲液(pH 7.4) 1~2 ml稀释，充分混悬，即成膜蛋白悬液。以考马斯亮蓝法测定膜蛋白浓度，并调整浓度为1 g/L左右。 2.12. 多巴胺受体活性的测定 采用双复管法(每个样本分为9个不同浓度反应管，重复测定2次)测定，反应管内加入浓度呈倍比递增的标记配基(特异性结合：10、20、40、60、80和100 ul；非特异性结合：20、60和100 ul)和非标记配基(非特异性结合：100 ul)以及定量的膜蛋白液0.2 ml，加入Buffer缓冲液，使每管总反应体积为0.4 m1，37℃水浴中孵育15 min，于冰浴中终止反应。以多头细胞样品收集器收集于玻璃纤维滤纸上，置80℃烘箱中烤干，剪下样品，以2000CA/LL型液态闪烁计数仪测定其放射活性，以空白滤纸点样进行校正。计算各点特异性结合计数，使用受体数据软件包(上海第二医科大学编制)，按Scanchard公式计算出多巴胺受体的最大结合容量(Bmax， fmol∙mg)和平衡解离常数(KD， nmol∙L)。 2.13. 统计方法 所有数据以均数士标准差( )表示，用SPSS18.0统计学软件分析，(1) 行为学统计：使用重复测量数据多重比较配对的t检验法(Bonferroni法)，可进行每个分组每个时间点上作用的两两比较；使用多元方差分析的方法，可进行每个时间点上每个分组之间作用的两两比较。P < 0.05为差异有显著性意义。(2) 多巴胺受体检测：两组间的比较采用独立样本t检验，多组组间差异的显著性采用单因素方差分析进行检验，P < 0.05为差异有显著性意义。
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user: 3. 实验结果 3.1. 各组大鼠给药前后神经行为学(AIM评分)的变化 与治疗前(第0天)比较，模型组大鼠用药后第14、、21和28天的AIM评分逐步增高(P < 0.01)；中药干预组第14天AIM评分较治疗前升高(P < 0.05)，14天后AIM评分逐步降低，至第28天评分显著低于治疗前(第0天)。与同期模型组比较，中药干预组大鼠第7天AIM评分差异无统计学意义，自第14天起的AIM评分值低于同期模型组(P < 0.05)。见表1，图1。 3.2. 各组大鼠给药前后神经行为学(剂峰旋转次数)的变化 与治疗前(第0天)比较，模型组大鼠用药后第7、14、21和28天的剂峰旋转次数逐步增高(P < 0.05)，中药组自第14天起剂峰旋转次数逐步增高(P < 0.01)，中药干预组大鼠自第14天起的旋转评分值低于同期模型组(P < 0.01)。见表2，图2。 Table 1 Comparison of AIM score between two group 组别 n 检测时间 0 Day 7 th Day 14 th Day 21 st Day 28 th Day 模型组 8 34.63 ± 2.97 38.75 ± 3.11 48.50 ± 9.55 ** 51.88 ± 6.60 ** 53.88 ± 5.06 ** 中药干预组 8 33.13 ± 5.87 38.13 ± 9.05 40.50 ± 6.19 △ 31.50 ± 2.45 △△ 27.00 ± 2.56 △△ 表1. 两组大鼠AIM评分比较( ) 图1. 两组大鼠AIM评分比较 3.3. 各组大鼠双侧尾壳核多巴胺D1受体活性变化 损毁侧模型组、中药干预组与正常对照组比较Bmax显著升高(P < 0.01)，模型组上升幅度最大；KD值较之正常对照组，各治疗组均明显降低(P < 0.05)；中药干预组与模型组比较，Bmax降低，KD值升高(P < 0.01)。健侧模型组较之正常对照组Bmax升高，KD值降低(P < 0.01)，中药干预组较之正常对照组Bmax升高(P < 0.01)，其余无明显差异。模型组、中药干预组损毁侧较健侧Bmax升高，KD值降低(P < 0.01)。见表3。 3.4. 各组大鼠双侧尾壳核多巴胺D1受体基因表达变化 损毁侧模型组、中药干预组与正常对照组比较D1受体mRNA表达显著升高(P < 0.05)，模型组上升幅度最大；中药干预组与模型组比较，D1受体mRNA表达降低(P < 0.01)。健侧模型组、中药干预组较之正常对照组D1受体mRNA表达明显升高(P < 0.01)，其余无明显差异。模型组损毁侧较健侧D1受体mRNA表达升高(P < 0.05)。见表4，图3。 Table 2 Comparison of the rotation times between two group 组别 n 检测时间 0 Day 7 th Day 14 th Day 21 st Day 28 th Day 模型组 8 128.50 ± 4.96 137.38 ± 9.09 * 151.63 ± 6.57 ** 175.88 ± 6.03 ** 179.88 ± 5.99 ** 中药干预组 8 131.25 ± 6.90 133.25 ± 8.05 147.25 ± 7.27 ** 154.38 ± 9.61 ** △△ 156.25 ± 9.87 ** △△ 表2. 两组大鼠剂峰旋转次数比较( ) Table 3 Changes of dopamine D1 receptor activity in the caudate putamen among each grou 组别 n Bmax(fmol/mg) KD(nmol/L) 损毁侧 健侧 损毁侧 健侧 正常对照组 8 1118.99 ± 86.84 1075.22 ± 90.92 2.499 ± 0.289 2.554 ± 0.216 模型组 8 1653.63 ± 59.88 **## 1440.80 ± 55.37 ** 0.730 ± 0.035 **## 1.858 ± 0.126 ** 中药干预组 8 1390.97 ± 52.40 **△△## 1306.00 ± 51.64 ** 1.342 ± 0.063 **△△## 2.485 ± 0.197 表3. 各组大鼠双侧尾壳核多巴胺D1受体活性变化( ) 注：与正常对照组比较，*P < 0.05，**P < 0.01；与模型组比较， △ P < 0.05， △△ P < 0.01；与健侧比较， # P < 0.05， ## P < 0.01。 图2. 两组大鼠剂峰旋转次数比较 Table 4 Comparison of relative expression of dopamine D1 receptor mRNA in the caudate putamen among each grou 组别 n 损毁侧 健侧 正常对照组 8 1.081±0.128 0.987±0.129 模型组 8 1.567±0.172 **# 1.363±0.095 ** 中药干预组 8 1.320±0.211 * △△ 1.153±0.118 ** 表4. 各组大鼠双侧尾壳核多巴胺D1受体mRNA相对表达量比较( ) 图3. 两组大鼠剂峰旋转次数比较
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user: 4. 讨论 目前，关于异动症的发生机制仍不清楚，有学者 [ 12 ] [ 13 ] 提出LID与纹状体多巴胺Dl和D2受体分别介导的直接通路(兴奋性)和间接通路(抑制性)活动失衡导致的基底节-丘脑-皮质环路活动异常有关。也有学者 [ 14 ] 提出LID的发生可能与纹状体内多巴胺D1受体所介导的直接通路功能活化有关。 本次实验结果显示：模型组大鼠随着LD腹腔注射时间的延长，AIM评分进行性升高，剂峰旋转次数亦进行性升高，异动症症状愈发加重。模型组大鼠多巴胺D1受体活性明显增加，基因表达上调，直接通路激活。所以我们认为，LID的发生主要是多巴胺D1受体所介导的直接通路功能活化所引起，当直接通路活化时，由纹状体释放并传递至GPi和SNr的主要神经递质GABA含量增加，对GPi和SNr的抑制作用增强，使后者对丘脑的抑制作用减少，使其释放的兴奋性神经递质Glu增加 [ 15 ] ，也进一步使大脑皮层的兴奋性神经递质Glu释放增加，最终导致LID症状的出现 [ 16 ] 。研究中还观察到随着LD治疗时间的延长，健侧纹状体亦出现多巴胺D1受体活性及亲和力增加，基因表达上调的现象，说明大鼠DA能神经元可能存在双侧交叉支配现象，6-OHDA破坏一侧DA能通路后，对侧尾壳核交叉支配纤维亦被破坏。 滋肾平颤颗粒源于熟地平颤方，以滋补肝肾、通络解毒为基本思路，是已故上海市名老中医胡建华教授治疗帕金森病的经验总结方。临床应用数十年，治疗PD疗效显著 [ 17 ] 。在之前的实验研究中发现：中药可以通过调节突触后多巴胺D1、D2受体表达 [ 18 ] ，下调过度激活的ERK凋亡通路 [ 19 ] 等发挥神经保护作用。本次试验结果显示，滋肾平颤颗粒通过下调纹状体多巴胺D1受体活性及基因表达，改善基底节区直接通路的过度活化状态，从而有效缓解了异动症症状。
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user: 5. 结论 多巴胺D1受体介导的直接通路过度激活可能是帕金森病异动症产生的主要机制。滋肾平颤颗粒主要是通过下调多巴胺D1受体活性及基因表达从而有效缓解异动症症状。
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user: 摘 要 高油脂饮食已经被证实造成许多肥胖相关疾病之发生，例如：第二型糖尿病、脑中风、心血管疾病、脂肪肝、肠癌、高血压与高血脂症等。本研究以分离自台湾产腌制酸菜中的植物乳杆菌GKM3益生菌冻干粉末喂食高脂饮食诱导Wistar大鼠，探讨其对体脂肪、体重及血液生化分析之影响。试验大鼠分为三组，分别正常组(ND)喂食正常饲料，高脂饲料组(HFD)及高脂饲料管喂给予GKM3益生菌组(HFD + GKM3)。结果显示给予GKM3可显著抑制高脂饮食诱导之体重增加，抑制肝脏的肿大、降低内脏脂肪与体脂肪堆积、降低血清中三酸甘油酯与尿酸浓度、降低肝脏中脂质含量及提高粪便中脂质含量(p < 0.05)。 关键词 :植物乳杆菌 GKM3，益生菌，肥胖，体脂，尿酸 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 肥胖是国人常见的现象，WHO亦在1996年将肥胖列为慢性病的一种，由于经济发展的提升，使的人们的生活方式改变、饮食的改变，导致全球肥胖人口不断的增加 [ 1 ] 。根据研究调查指出，在2012年在美国所进行的调查中，39.96%的男性及29.74%的女性过重(BMI > 25)，而过重比例中的35.04%男性与26.84%的女性肥胖(BMI > 30)的。追踪肥胖人口数增加的原因，被发现肥胖人口的比例随着经济的提升而成正比 [ 2 ] ，显示现代的经济发展与肥胖关系俨然已密不可分。 现代的饮食西化，肥胖的人数上升情形也如同美国肥胖人口一般的大幅度增加。摄取过多的油脂、蛋白与醣类乃是导致肥胖发生的主因。过多的能量在体内将被转换为三酸甘油酯，以油滴的形式累积在皮下脂肪细胞或内脏器官中。人们体内的脂肪细胞的数量在成年后不再增加，所以以油滴增大的方式在细胞内储存能量，因此生物体主要观察油脂细胞的判别时，主要以每个脂肪细胞内所含有的油滴含量或脂肪细胞大小为依据 [ 3 ] 。 高热量的摄取除了因脂肪堆积改变体态与体型之外，在体内，脂肪细胞肿大，过多的脂肪油滴导致代谢异常而引起发炎反应的发生，长期的慢性发炎就在体内孕育而生。慢性发炎将促使巨噬细胞累积于脂肪组织中，除了发炎反应脂外，更会产生胰岛素阻抗性(insulin resistance)而导致糖尿病的发生及低密度脂蛋白的加速氧化，堆积在血管中引起动脉粥状硬化(atherosclerosis)发生的主因 [ 4 ] 。 研究指出，高三酸甘油酯血症所引起的慢性发炎乃是引起胰岛素阻抗的主因，其亦是周围胰岛素敏感性受损的主要原因 [ 5 ] 。高油脂堆积的脂肪细胞中将导致游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)浓度提高，体内的游离脂肪酸易导致身体器官组织因子(tissue factor，TF)与纤维酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)增加，使的血管中血小板蓄积凝集而形成血栓 [ 6 ] 。 三酸甘油酯堆积在体内中，除了堆积在皮下组织，将会影响血管中三酸甘油酯、胆固醇在血清中浓度提升之外，更容易堆积在器官组织内或周围如肾脏周遭脂肪细胞及脂肪油滴堆积在肝脏中形成了脂肪肝，脂肪肝的形成主因主要可分为酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease，NAFLD)或非酒精性脂肪肝(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD) [ 7 ] ：脂肪肝可分为单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝纤维化与肝硬化。非酒精性脂肪肝的形成缘由发现跟肥胖具有高度相关性 [ 8 ] 。过多的油脂摄取在体内被堆积在肝脏中而成的脂肪肝慢性发炎，虽然可经由脂肪代谢而逆转恢复，但是饮食及生活习惯若不调整，将导致脂肪肝发炎的累积与恶化，如果未做控制，将恶化发展为肝纤维化、肝硬化或是肝衰竭 [ 9 ] 。 酒精性脂肪肝风行的主因来自国人的应酬酗酒所造成的脂肪肝疾病极为普遍，而酗酒的风潮下导致酒精性脂肪肝、酒精性肝炎及酒精性肝硬化的病例逐年提升。临床上，酒精性脂肪肝患者之肝功能检查可能仍正常或轻度异常。急性酒精性肝炎并不常见因而常常被忽略。急性酒精性肝炎常见的症状如发烧、厌食、体重减轻、肝脏肿大、白血球升高及营养不良等现象。直到1989年才开始使用酒精饲料喂食小鼠引发慢性酒精性肝损伤。试验结果显示将导致动物诱发脂肪肝且伴随着三酸甘油酯及胆固醇的上升 [ 10 ] 。此一模式慢慢的形成脂肪肝评估的最主要方法且沿用至今。 代谢症候群在国际组织-国际糖尿病联盟(International diabetes federation，IDF)上有着明确的定义指出在中间型肥胖的患者中具有下列两项指标者，即是代谢症候群患者，其中指标包含了：1) 三酸甘油酯升高(大于150 mg/dL)；2) 高密度脂蛋白胆固醇不足(男性小于40 mg/dL，女性小于50 mg/dL)；3) 高血压(收缩压大于130 mm Hg，舒张压大于85 mm Hg)；4) 空腹血糖升高(大于100 mg/dL)。由以上定义可知代谢症候群也已经被证实与肥胖具有密不可分的关系，肥胖易导致代谢症候群的发生，其衍生并发症如糖尿病、心血管疾病、高血压及脑中风而其中心血管疾病及脑中风方面的危害更是立即性的伤害 [ 11 ] 。 肥胖引起糖尿病的主因是提升胰岛素阻抗性而降低血糖的吸收，长期下来形成第二型糖尿病 [ 12 ] 。因此肥胖症患者易好发糖尿病，而糖尿病患者容易引发心血管方面并发症，追根究底原因为肥胖细胞除了提升胰岛素抗性之外，更会诱导TNF-a浓度偏高而引起慢性发炎，脂质因此容易被分解为游离脂肪酸，导致血浆中游离脂肪酸浓度的提高，堆积与氧化后堆积在血管中，导致血管失去弹性或血管堵塞，高血压及心血管疾病也就因此伴随产生。 文献中指出体内过多的脂肪与存在肾脏中的肾素–血管收缩素转换素系统均是向上调控(up-regulation)的关系，两者之间呈现正相关 [ 13 ] 。肾素在体内扮演了提高血压的重要角色，可催化血管收缩素原水解产生血管收缩素I。经血管收缩素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE)剪切C-末端两个胺基酸残基而形成血管收缩素II。血管收缩素II具有高效的收缩血管作用，从而使血压升高；血管收缩素II也能刺激肾上腺皮质分泌醛固酮。醛固酮能促进肾脏对水和钠离子的重吸收，继而增加体液容量，升高血压。 在肾脏中，因过度肥胖而易导致肾小球病变，其统称为肥胖相关性肾小球病(obesity-associated glomerulonephropathy，ORG)，又可区分为肾小球肥大症与局部肾小球硬化症造成日后肾病变之发生原因 [ 14 ] 。证明肥胖所引起的代谢症候群，除了血脂、血压、血糖异常与心血管疾病之外，更容易导致多重器官的异常，针对肥胖的预防与控制可以藉由降低卡路里(calorie)之摄取或身体之活动，来达到减低发炎反应与癌症之危害 [ 15 ] 。民众因此容易误认为高血压、糖尿病等疾病容易引起相关并发症，追根究底，肥胖才是众多并发症的起始源头。 近几年，益生菌被用在抑制肥胖的文献中，主要锁定在发炎与体脂肪的改善部分 [ 16 ] ，部分文献纪载了可同步降低三酸甘油酯与胆固醇，但是进一步应用在消化代谢上的左证数据却很少，因此本次研究选用具有降血脂功效之植物乳杆菌GKM3进行降低体脂脂功效试验，希望可探讨与获得更多代谢与消化上的改善证据及关联性。
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user: 4. 讨论 文献指出，高热量饮食实验模式已被使用在多种动物模式中，主要诱导试验动物肥胖与脂肪堆积于内脏形成内脏脂肪。许多的实验结果皆证实在高热量饮食后试验动物将导致体重改变与三酸甘油酯形成脂肪，堆积于脂肪细胞中而脂肪细胞肿大，产生代谢症候群相关病征 [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] 。美国心脏协会(American heart association，AHA)指出，腹部肥胖、血脂异常、高血压和胰岛素阻抗等高危险因子的聚集现象，为造成代谢性症候群发生的判断指标 [ 22 ] 。 本试验中高脂饮食合并给予植物乳杆菌GKM3益生菌冻干粉末，与HFD组相比之下，发现可在相同的饮食与摄取水量条件中降低体重的增加(表1和表2)。体重增加的减少不仅优于HFD组，甚至更优于ND组，达到统计上的差异(p < 0.05)。显示GKM3益生菌在体重管理上具有显著性的功效潜力。高油脂饮食摄取下，导致脂肪堆积于肝脏中而肝肿大，但是经由GKM3益生菌介入而降低脂肪的堆积。故未发现肝脏有任何肿大情形，甚至HFD + GKM3组肝脏器官重量更小于ND组，进一步比较表7，检测肝脏中总脂质、三酸甘油酯与胆固醇含量，HFD + GKM3组则高于ND组，推测有效降低脂肪堆积于肝脏之外，使肝脏组织重量小于ND组且达统计上差异。 体脂的部分，发现实验鼠全身体脂肪HFD + GKM3较ND组减少27%、较HFD组减少42.27% (表4)，再进一步比较实验鼠体内不同部位脂肪组织含量(表5)。结果可见GKM3益生菌不仅在局部的脏器或血清中，亦可在全身体脂肪的调节上。具有显著的功效，从表8中可看出GKM3可有效的降低油脂的吸收，加速总脂质、胆固醇与三酸甘油酯随着粪便的排除，因此在粪便中观察到总油脂类的显著增加，HFD + GKM3组较HFD组多增加排出了43%总脂质含量，故推测GKM3乃透过抑制脂肪吸收及增加粪便中脂肪排出量来降低体脂与内脏脂肪的堆积。 油脂吸收消化主要在小肠中，GKM3益生菌具有良好的肠道吸附性与96%以上的强耐酸胆盐耐受特性，可顺利抵达小肠，在小肠内降低油脂的被消化吸收而达到改善体重管理与体脂的功效。 Table 8 Effect of Lactobacillus plantarum GKM3 powder on the fecal total lipid， triglyceride， and cholesterol in high-fat diet-induced obese rat Groups ND HFD HFD + GKM3 Fecal total lipid (mg/g dried feces) 23.66 ± 3.64 c 35.17 ± 3.02 b 50.34 ± 4.22 a Fecal triglyceride (mg/g dried feces) 3.93 ± 0.07 b 6.90 ± 0.58 a 7.35 ± 0.15 a Fecal cholesterol (mg/g dried feces) 5.27 ± 0.45 b 7.88 ± 0.03 a 8.54 ± 0.13 a 表8. 植物乳杆菌GKM3粉末对对高脂饮食诱导肥胖大鼠之粪便总脂质、三酸甘油酯与胆固醇含量之影响 The reported values are the mean ± SEM (n = 6). Mean values with different letters were significantly different (p < 0.05). 在表6，血清的检验分析中可发现，HFD与HFD + GKM3组相比血清中三酸甘油酯降低了220%，期望更多的研究与后续投入了解更多相关机制。血清中HFD组及HFD + GKM3组胆固醇类皆少于ND组，推测主因是本研究结果并没有特别诱导高血脂之增加；HFD组之血清中胆固醇呈现正常的脂质堆积现象，此为高油脂饮食模式中常见的肝脏脂质堆积现象。据文献指出，此为实验模式上的差异所致 [ 23 ] 。如肝指数与血糖无差异性乃因无进一步诱导所致。 酮体(Ketone bodies)是处在身体饥饿或淀粉摄取不足时所产生的代谢异常。体内脂肪浓度过高，大量的脂肪酸被肝细胞吸收和氧化;为了维持血糖浓度的稳定，在体内糖异生作用(gluconenogenesis)草酰乙酸被大量消耗，影响到草酰乙酸所参与的另一代谢途径三羧酸循环(tricarboxylic cycle)，大量中间物乙酰CoA得不到消耗、出现堆积，并因此生成酮体。酮体被发现在肾脏中，影响尿酸排泄，最终导致尿酸代谢异常而堆积在血液中 [ 24 ] 。在表6中可发现，HFD + GKM3组对体脂达到有效控制之后，可改善体内代谢途径与能量产生。因高油脂所导致异常的酮体与尿酸在本次GKM3益生菌的介入后浓度具有显著性的降低，相较HFD组达统计上差异，与ND组十分接近而无统计差异，说明GKM3对于高油脂所引起的尿酸代谢异常具改善效果。 整体而言，在本次试验中，可显著的观察到因高油脂饮食所诱导产生的肥胖相关风险与疾病指标，在GKM3益生菌的介入之后可达到有效的改善，体脂的堆积下降、油脂的排出提高及代谢上的趋向良性改变，且对Wistar大鼠不具任何负面影响。
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user: 5. 结论 植物乳杆菌GKM3有降低血脂、预防心血管疾病之功效，也可有效防止体重增加、改善体脂肪堆积、降低高油脂饮食所带来的消化代谢异常与加速油脂的排除，有效地降低油脂在肠道中的消化吸收与提高脂质、三酸甘油酯及胆固醇在粪便中的含量，加速排出。实验中大鼠摄取过多能量后形成体脂肪囤积于皮下与内脏中。当日常饮食中糖分摄取不足而饥饿时，皮下脂肪会分解、燃烧而产生能量，同时导致许多酮体积存在体内。在内脏中堆积过多的脂肪，将影响内脏中的能量代谢，导致内脏中脂肪细胞因油滴堆积而导致脏器肿大，走向肝脏病变的开始，即是典型的脂肪肝。高量的酮体，来自高油脂的消化代谢而产生，酮体将妨碍肾脏排泄尿酸，使体内尿酸升高。本实验中因摄取GKM3改善脂质在体内堆积，同时也预防了体脂代谢异常的酮体及维持了肾脏中尿酸的正常代谢。综合来说，植物乳杆菌GKM3降低了体脂肪、改善油脂的代谢，更可减轻肾脏的伤害与维持正常机能。
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user: 摘 要 阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease， AD)是老年人常见的一种神经退行性疾病。AD发病机制还不是很清楚，研究发现淀粉样蛋白沉积激活神经胶质细胞所导致的炎症反应是其核心病理机制。近期研究表明CD14信号传导通路及其基因多态性在小胶质细胞(Microglia， MG)激活过程中发挥着一定的作用。本文主要就近年来阿尔茨海默病人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell， PBMC)中CD14细胞与MG之间关系的研究进行综述。 关键词 :阿尔茨海默病，小胶质细胞，CD14 Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 随着老龄化人口进程的不断加速，阿尔茨海默病(Alzheimer disease)以情景记忆障碍为早期突出的表现，逐渐出现认知功能全面衰退、精神和行为症状的老年常见神经退行性疾病 [ 1 ] 。AD主要病理特征为神经炎性斑块和过度磷酸化tau蛋白构成的神经原纤维缠结。近年来愈来愈多的研究表明脑内的慢性炎症反应可能是其重要发病机制之一，参与炎性反应的细胞有星形胶质细胞、小胶质细胞、少突胶质细胞等，其中小胶质细胞(Microglia， MG)是其主要的炎症细胞。AD患者脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid， Aβ)的周围存在大量被激活的小胶质细胞，另外在其脑内还发现大量由MG产生的细胞因子和其它免疫介质，共同形成了AD病人脑内的慢性炎症环境，MG依存性脑炎症是AD发病机制的关键 [ 2 ] ，Aβ已被公认是MG依存性脑炎症的重要诱导物，被其激活的MG分泌促炎症因子和释放神经毒素，在AD的病程中引起大脑炎症及增强细胞毒性。
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user: 2. CD14在AD患者脑内MG激活中的作用 近期研究利用正电子发射断层扫描(position emission tomography， PET)技术可以使激活的小胶质细胞在人类活体大脑内成像，为研究MG以及何时被激活提供了一个新的视角 [ 3 ] 。Edison最近研究发现大脑皮层内被激活的MG数目的增多不仅与Aβ淀粉样斑块含量密切相关，而且与逐渐下降的认知能力有关 [ 4 ] 。Okello等研究认为在轻度认知缺损的病人认知能力的降低与MG的激活有关 [ 5 ] 。AD小鼠模型使用高灵敏度的放射性配体进行分析后显示MG的激活与Aβ的沉积有极大的相关性 [ 6 ] 。以上研究结果可能与实验中使用的放射性配体的灵敏度有关，灵敏度越高分析得到的结果可能就越准确 [ 7 ] 。 白细胞分化抗原14 (CD14)是一种特异性单核细胞和巨噬细胞表面标记物，在机体免疫、防御系统引起的一系列病理反应中起关键作用。CD14为革兰阴性细菌细胞壁成分脂多糖(LPS)的受体，是体内一种促炎细胞因子，属细胞表面糖蛋白家族成员之一，主要由成熟的单核巨噬细胞所产生，CD14的主要功能是在LPS结合蛋白的协助下结合LPS并引起细胞活化，活化的单核巨噬细胞可释放前炎症反应性细胞因子TNF-α，IL-1，IL-6等，参与炎症反应导致组织器官损伤。CD14基因位于第5号染色体5q23-31区，全长约为3900 bp，编码含有375个氨基酸的糖蛋白，分子质量为55000。在其基因启动子区上游-159 bp处存在C-159T基因多态性 [ 8 ] ，这种基因多态性可影响CD14基因转录和表达，进而影响到CD14的生物学功能，从而影响一些相关疾病的发生、发展和转归 [ 9 ] 。 目前研究表明CD14信号传导通路及其基因多态性在小胶质细胞(Microglia， MG)激活过程以及Aβ清除过程中发挥着一定的作用，CD14信号传导通路及其基因多态性成为AD的研究热点 [ 10 ] 。近年单核细胞CD14被认为参与了MG对fAβ (fibrillar Aβ， fAβ) (也可能是寡聚体)的反应。这个重要发现证实了fAβ确实是MG的免疫刺激物，可以通过Toll样受体(Toll-like receptor， TLR)激活小胶质细胞TLR在功能上可以与其它细胞表面受体相互作用，包括CD36、α6β1整联蛋白、CD47和清道夫受体A，fAβ与这些受体结合后激活了MG内信号转导途径，进而触发细胞内的多个并联的信号级联放大反应 [ 11 ] 。这是fAβ能够诱发MG产生和释放炎症(Th1-type)细胞因子以及活性氧和氮自由基的机制之一。近期研究发现TLR辅助受体CD14和Aβ之间来相互作用可以通过fAβ和CD14重组体共同孵育、实时表面等离子共振光谱法、荧光寿命显微成像技术基础上的荧光共振能量转移技术(FLIM-based FRET)以及抗体封闭等技术 [ 12 ] 。无论是AD动物模型还是AD患者，脑中CD14、TLR2和TLR4的表达都会增高 [ 12 ] 。结果提示TLR参与了AD脑内MG表型转化和反应的调节作用。 MG表面除含有CD14固有免疫受体外，还有晚期糖化终产物受体(receptor of advanced glycationendo production， RAGE)、清道夫受体(scavenger receptor， SR)和丝氨酸蛋白酶抑制剂酶复合物受(SEC-R)，在体外及动物实验已经证实它们可通过Aβ 42 介导MG的活化 [ 13 ] [ 14 ] 。研究报道Aβ 42 诱导的大鼠MG的CD14激活途径是神经毒性产物产生并最终导致神经元死亡的重要原因 [ 15 ] 。近期，Liu等 [ 16 ] 用多种方法证实转基因鼠Aβ 42 诱导MG表达CD14，并对AD患者的额叶和枕叶皮质及海马进行免疫组化法检测，发现CD14在AD患者脑内的MG中过度表达。Fassbender等 [ 10 ] 发现在CD14受体功能缺失的APP转基因大鼠脑内Aβ 42 沉积物的增加，MG的CD14受体对Aβ 42 的吞噬作用明显减少。Reed-Geaghan等 [ 17 ] 研究认为CD14缺失的转基因小鼠在7个月大时小鼠脑内不溶性的散发的硫磺素-S染色阳性的蛋白斑的大小和数量均降低，这可能与活化的MG的数量总体下降有关。上述研究提示CD14在Aβ沉积导致小胶质细胞激活的过程中发挥了重要的作用。
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user: 3. CD14在MG清除Aβ中的作用 CD14与fAβ42在小胶质细胞表面有着共同的结构域，fAβ与小胶质细胞表面的CD14结合后进入到细胞内，然后被转运到溶酶体参与了小胶质细胞吞噬Aβ的过程。 [ 11 ] 许多研究采用AD动物模型来评价TLR2、TLR4和CD14在Aβ清除中的作用。APPswe/PSEN1dE9双转基因AD小鼠模型具有(8888TLR2， TLR4)基因的特点，它可以促进宿主细胞表面CD14和髓系分化的蛋白质(MD)-2相互结合 [ 16 ] ，而这对下游信号分子活化起着关键作用。Tahara等利用这种AD小鼠模型研究活体内TLR4在淀粉样病变中的作用 [ 18 ] ，发现与有完整TLR4基因的小鼠相比TLR4缺失的APPswe/PSEN1dE9小鼠大脑皮层和海马内Aβ含量要高。这些研究认为MG介导的Aβ清除机制有赖于TLR4功能的完整性。相反地，APPswe/P SEN1 dE9小鼠与TLR2-/-小鼠交配后出生的TLR2-/-转基因小鼠在出生后6个月内显示Aβ沉积延迟。这是否是由于TLR基因、CD14信号传导通路对Aβ的清除作用导致的还不是很清楚。Hickman等 [ 19 ] 发现8个月APPswe/PSEN1dE9小鼠各种不同Aβ结合受体的表达和各种降解酶都减少，同时炎症因子的基因表达明显增高。 在AD的发病及进展中，MG的作用有两面性。一方面Aβ激活的MG过量产生多种促炎因子如TNF-α，IL-1β，IL-6及增加Aβ生成导致神经元损伤、另一方面MG反应性产生部分抗炎因子参与抑制MG依存性脑炎症。AD早期MG能够有效地清除形成的Aβ，但在AD晚期，由于Aβ的不断累积MG参与Aβ清除机制的基因下调 [ 20 ] 。本组最新研究发现，慢性缺氧可上调MG线粒体内ROS及DNA损伤，诱发其产生IL-1β等促炎因子导致MG活化依存性脑炎症 [ 21 ] 。Herber等 [ 22 ] 的研究发现向AD动物模型的海马内注射TLR4的配体LPS，可以清除散发的而不是紧密分布的Aβ，而这个过程中伴随着CD14促进MG的激活。另外外周注射LPS可以激活大脑皮层的MG并且导致Aβ含量的降低，也为TLR、CD14有助于Aβ清除提供了依据 [ 23 ] 。近期研究表明AD发病是由于Ａβ清除受损导致的，而与Aβ的生成增多无关 [ 24 ] 。导致Aβ清除减弱的原因是与年龄相关的MG功能障碍，这种功能障碍并不意味着细胞活性的降低，而是指活化后表型的转变 [ 25 ] 。有研究发现炎症细胞因子能够抑制MG的吞噬功能，但是否是因为CD14在MG吞噬作用被损坏仍有待于进一步研究 [ 26 ] 。
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user: 4. 结语 近年来神经病理学、临床流行病学及动物模型等多项研究证实神经炎症机制与AD的发生发展逐步成为本领域的研究热点。CD14在MG的激活和MG对Aβ的清除方面均发挥着重要作用，MG介导的炎性反应在AD发病病程中起双刃剑作用，活化的MG一方面会导致细胞因子和神经毒性介质的释放增加从而使疾病恶化，同时也可以通过增强对Aβ的吞噬及蛋白降解功能发挥神经保护作用。综上所述，通过CD14细胞与MG之间关系及其在AD发病中的作用的研究，为AD的诊治提供了新的思路。同时CD14单核细胞在感染和炎症中均起到重要作用，但其在其他疾病中的发挥何种作用以及如何更合理的论证并诠释与AD之间的关系，也是我们今后所要研究的方向。
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user: 摘 要 通过锤击实验，对五层房屋缩尺模型进行了实验模态分析，利用数学软件MATLAB对所得数据进行相关处理得到结构模型的频响函数，运用模态参数识别频域法的相关原理对得到的频响函数进行相关模态参数的识别，获得了结构模型弱轴水平方向的固有频率和模态振型，并将所得结果与ANSYS有限元分析结果进行比较，检验了实验结果的准确性和有效性。 关键词 :缩尺模型，实验模态分析，频响函数，模态参数 Copyright © 2017 by author and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/