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user: 3. 结果与分析 3.1. 野巴子粗多糖(YBZc)提取及理化性质 在料液比1:30 g/mL，提取温度70℃，提取时间2 h，超声功率300 W条件下，YBZc提取率为5.63%。YBZc为棕黄色粉末，易溶于水，不溶于有机溶剂。对YBZc定性检测，结果如表1所示。 Table 1 The qualitative test results of YBZ 试剂 现象 试验结论 I 2 -KI 无蓝色出现 不含有淀粉 Fehling试剂 砖红色沉淀 含有还原性糖 硫酸-咔唑 溶液呈现紫色 多糖含有糖醛酸 硫酸-苯酚 溶液呈橘红色 含有糖 表1. 野巴子粗多糖定性试验结果 3.2. YBZc中糖醛酸的含量测定及气相色谱分析 采用硫酸–咔唑法对YBZc中的糖醛酸含量进行测定 [ 10 ] ，制作糖醛酸标准曲线如图1： 图1. 糖醛酸含量的标准曲线 线性回归方程y = 0.072x + 0.038，R 2 = 0.9978。将野巴子粗多糖溶液吸光度值代入，计算得YBZc中糖醛酸含量为32.2%，表明YBZc中含有糖醛酸。 YBZc进行GC单糖组成分析 [ 12 ] ，与标准单糖比较，结果显示YBZc的单糖组成为Rha、Ara、Man、Glc、Gal，相对摩尔比为1.000:0.793:0.440:0.557:0.994，其中Rha占比最高，Man占比最低，YBZc是含有糖醛酸的酸性粗多糖。 3.3. YBZc中的蛋白质含量测定 凯氏定氮法测得实验提取到的YBZc中，蛋白质含量为2.98%，可见粗提物中含有游离的蛋白质。 3.4. YBZc的相对分子质量测定 多糖的活性同分子量大小关系密切 [ 16 ] ，所以对YBZc分子量分布范围进行测定。采用HPLC和标准曲线法测YBZc的分子量(图2)，得到标准葡聚糖的标准曲线，线性方程为y = −0.7956x + 14.654，R 2 = 0.9935。 图2. YBZc的分子量标准曲线图 YBZc的最高峰的保留时间为13.67 min，代入上述线性方程，计算得分子量为5901.84 u。 3.5. YBZc清除自由基活性测定 3.5.1. YBZc体外清除•OH自由基 在清除∙OH体系中加入YBZc，以抗坏血酸(Vitamin C，Vc)为阳性对照，酶标仪检测 [ 13 ] ，结果如图3。 图3. YBZc及Vc对•OH的清除作用 YBZc对∙OH清除作用存在一定的剂量关系；当野巴子粗多糖溶液浓度为0.1 mg/mL时，其对∙OH的清除率为8.7%；当野巴子粗多糖溶液浓度达到3.2 mg/mL时，其对∙OH的清除率达50.14%，剂量关系表明野巴子多糖在高浓度条件下具有良好的清除∙OH的活性。 3.5.2. 野巴子多糖体外清除DPPH自由基的活性 测定不同浓度多糖对DPPH∙的清除作用，以Vc为阳性对照，酶标仪检测 [ 13 ] ，结果见图4。 图4. YBZc及Vc对DPPH•的清除作用 YBZc对DPPH∙清除作用存在一定的剂量关系；当野巴子粗多糖溶液浓度为0.1 mg/mL时，其对DPPH∙的清除率为65.22%；当野巴子粗多糖溶液浓度达到3.2 mg/mL时，其对DPPH∙的清除率达97.37%，与Vc清除率相当，表明野巴子多糖具有良好的清除DPPH∙的活性。而多糖具有毒副作用小、无抗药性等优点，为后续研发为清除自由基替代药物提供一定的依据。 3.6. 野巴子体外降血糖的活性 测定不同浓度多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率，以阿卡波糖为阳性对照，酶标仪进行检测 [ 14 ] 。如图5： 图5. 野巴子多糖及阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率 不同浓度的野巴子粗多糖对α-葡萄糖苷酶均有显著的抑制作用；随着浓度的增加，抑制作用显著升高，在浓度达到1 mg/mL时，多糖对α-葡萄糖苷酶抑制效果最佳，达到90.28%。表明野巴子粗多糖有一定的降血糖作用，且效果较好。 3.7. 野巴子多糖对STS介导的神经元损伤的保护作用 3.7.1. YBZc对乳鼠海马神经元细胞增殖率的影响 与对照组相比，STS模型组乳鼠海马神经元细胞的吸光值下降为0.174 (P < 0.001)，表明损伤模型建立成功。不同浓度的YBZc + STS预处理组增殖率明显高于STS模型组(P < 0.001)，且增殖率随YBZc浓度升高而升高；不同浓度的YBZc与正常处理组比较无显著性差异(表2)。说明YBZc能减弱STS介导的乳鼠海马神经元损伤。 Table 2 The cell viability of each group with the treatment of different YBZc (n = 6 组别 A值 细胞增殖率(%) Control 0.265 ± 0.0082 100.00 STS模型组 0.174 ± 0.0049 *** 65.50 0.001 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.204 ± 0.0065 ## 76.82 0.01 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.219 ± 0.0079 ### 82.84 0.1 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.231 ± 0.0046 ### 86.94 1 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.249 ± 0.0084 ### 93.93 0.001 mg/L YBZc处理组 0.246 ± 0.0202 92.58 0.01 mg/mL YBZc处理组 0.232 ± 0.0233 87.30 0.1 mg/mL YBZc处理组 0.265 ± 0.0190 99.85 1 mg/mL YBZc处理组 0.229 ± 0.0167 86.20 表2. 不同浓度的YBZc对各组细胞存活率的影响(n = 6) (注： * 与对照组比， # 与STS模型组比较；##或 ** P < 0. 01， ### 或 *** P < 0. 001)。 3.7.2. YBZc对STS介导的乳鼠海马神经元LDH释放率的影响 STS模型组的细胞毒性损伤程度明显大于对照组(P < 0.001)；不同浓度的YBZc + STS预处理组的神经细胞毒性损伤程度明显低于STS模型组(P < 0.01)。结果表明，YBZc能减弱STS介导的乳鼠海马神经元损伤(表3)。 Table 3 Comparison of the degree of cell toxicity damage of each group analyzed by LDH release rate (n = 6 组别 A值 细胞毒性损伤程度(%) Control 0.019 ± 0.0013 100.00 STS模型组 0.044 ± 0.0015 *** 235.77 0.001 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.032 ± 0.0008 ### 172.25 0.01 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.034 ± 0.0008 ### 183.33 0.1 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.034 ± 0.0013 ### 181.08 1 mg/mL YBZc + STS预处理组 0.032 ± 0.0022 ## 170.54 0.001 mg/L YBZc处理组 0.022 ± 0.0005 118.74 0.01 mg/mL YBZc处理组 0.022 ± 0.0006 119.01 0.1 mg/mL YBZc处理组 0.022 ± 0.0005 119.28 1 mg/mL YBZc处理组 0.026 ± 0.0004 140.23 表3. 各组LDH释放率及细胞毒性损伤程度比较(n = 6) (注： * 与对照组比， # 与STS模型组比较； ## 或 ** P < 0. 01， ### 或 *** P < 0. 001)。