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user: 3. 结果与讨论 3.1. 结果与分析 3.1.1. 杜香挥发油提取 挥发油提取方法较多，如溶剂提取、CO 2 超临界萃取法等，本文中采用经典的水蒸气蒸馏法。该方法提取的杜香挥发油得率为1.5%，挥发油呈无色至浅黄色，为澄清透明液体，挥发性成分含量高。提取的长白山杜香挥发油有强烈的松油味、木香味，密度为0.88 mg/mL。 3.1.2. 杜香挥发油GC-MS分析 对杜香挥发油进行GC-MS分析，杜香挥发油成分鉴定结果见表1。从长白山杜香挥发油中鉴定出32种化学成分，其中含量较高的组分为β-水芹烯(43.55%)，萜烯醇(11.86%)，3，5，6，7，8，8a-六氢-4，8a-二甲基-6-(1-甲基乙基)-2-(1H)萘酚(6.91%)，γ-松油烯(5.34%)，5-异丙基-二环[3.1.0]-己3-烯-2-酮(4.73%)，(+)-4-蒈烯(4.09%)，螺[2.4]庚-4，6-二烯(3.99%)，桃金娘烯醛(2.45%)，4-异丙基苯甲醛(2.07%)，对伞花烃(2.05%)，桃金娘烯醇(1.64%)，异松油烯(1.22%)等。 Table 1 GC-MS analysis of the volatile oil from Ledum palustr 序号 保留时间 组分 面积% 1 4.328 Bicyclo[3.1.0]hexane， 4-methyl-1-(1-methylethyl)-didehydro deriv 4-甲基-1-(1-甲基乙基)双环[3.1.0]-2-己烯 0.88 2 4.434 alpha-Pinene α-蒎烯 0.42 3 4.557 (1-nitropropyl)-Benzene 1-硝基丙基苯 0.10 4 4.963 beta-Phellandrene β-水芹烯 43.55 5 5.087 beta-Myrcene β-月桂烯 0.26 6 5.31 alpha-Phellandrene α-水芹烯 0.32 7 5.469 (+)-4-Carene 蒈烯 4.09 8 5.569 1-methyl-4-(1-methylethyl)-Benzene 对伞花烃 2.05 9 5.639 2-Thujene 2-侧柏烯 0.55 10 5.681 (E)-1，3，6-Octatriene， 3，7-dimethyl- 罗勒烯 0.61 11 5.822 (Z)-1，3，6-Octatriene， 3，7-dimethyl- 罗勒烯异构体 0.22 12 6.01 1-methyl-4-(1-methylethyl)-1，4-Cyclohexadiene γ-松油烯 5.34 13 6.116 cis-beta-Terpineol， 松油醇 0.16 14 6.386 Cyclohexene， 1-methyl-4-(1-methylethylidene)- 异松油烯 1.22 15 6.516 cis-1-methyl-4-(1-methylethyl)-2-Cyclohexen-1-ol 顺式－1-甲基-4-(1-甲基乙基)-2-环己烯-1-醇 0.20 16 6.804 5-(1-methylethyl)-Bicyclo[3.1.0]hex-3-en-2-one 5-异丙基-二环[3.1.0]-己3-烯-2-酮 4.73 17 7.292 (1R，5S)-sabina ketone 桧酮 1.36 18 7.569 4-methyl-1-(1-methylethyl)-3-Cyclohexen-1-ol 萜烯醇 11.86 19 7.633 (1R)-(-)-Myrtenal 桃金娘烯醛 2.45 20 7.704 6，6-dimethyl-Bicyclo[3.1.1]hept-2-ene-2-methanol 桃金娘烯醇 1.64 21 8.051 3-(1-methylethyl)-Phenol 3-(1-甲乙基)苯酚 0.29 22 8.304 Benzaldehyde， 4-(1-methylethyl)- 4-异丙基苯甲醛 2.07 23 8.875 Spiro[2.4]hepta-4，6-diene 螺[2.4]庚-4，6-二烯 3.99 24 9.298 4-(1-methylethyl)-1，4-Cyclohexadiene-1-methanol 1-甲基-4-(1-甲基乙基)-1，4-环己二烯 0.51 25 9.833 2，6-Octadien-1-ol， 3，7-dimethyl-acetate 乙酸牻牛儿酯 0.32 26 10.304 α-Gurjunene α-古芸烯 0.60 27 10.875 Alloaromadendren 香树烯 0.75 28 11.021 Cycloheptasiloxane， tetradecamethyl- 十四甲基环庚硅氧烷 0.50 29 12.222 (十)-γ-Gurjunene (十)-γ-古芸烯 0.00 30 12.339 Ledol 杜香醇 0.96 31 13.651 8，9-epoxy-Neoisolongifolene 8，9-环氧新异长叶烯 0.56 32 13.833 3，5，6，7，8，8a-hexahydro-4，8a-dimethyl-6-(1-methylethenyl)-2(1H)Naphthalenone 3，5，6，7，8，8a-六氢-4，8a-二甲基-6-(1-甲基乙基)-2(1H)萘酮 7.45 表1. 杜香挥发油成分的GC-MS分析 3.1.3. 杜香挥发油的抗氧化活性 根据预实验结果中杜香挥发油及Vc清除DPPH自由基的最大用量，设置杜香挥发油及Vc的浓度梯度。以杜香挥发油浓度为横坐标，以平均相对清除率为纵坐标，绘制杜香挥发油相对清除率曲线，如图1所示，平均清除率在加入量低时呈急速上升状态，在杜香挥发油所加入量接近最大用量后增加趋势逐渐趋于平稳。杜香挥发油及Vc的IC 50 值分别为14.08 mg/mL和58.63 mg/mL。杜香挥发油的抗氧化活性是Vc的4.16倍。 图1. 杜香挥发油的DPPH清除曲线 3.1.4. 杜香挥发油的抑菌活性 根据抑菌圈的大小可以判断杜香挥发油的抑菌能力，杜香挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑制作用见图2。结果显示，杜香挥发油对三种菌的抑制作用随浓度的增加而增强，高浓度挥发油对金黄色葡萄球菌抑制效果最好，对大肠杆菌作用最差。枯草杆菌对挥发油较为敏感，在低浓度时就有较好的抑制作用，高浓度(100%)时抑制作用反而下降。 杜香挥发油的最低抑菌浓度实验结果显示，三种菌的最低抑菌浓度由低到高依次为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌(表2)，即对大肠杆菌抑制作用最强，对枯草杆菌抑制作用最弱。这一结果与抑菌圈结果有较大差异。我们分析可能是该实验加入挥发油量过高，在培养基不能完全溶解而导致产生较大差异。 图2. 杜香挥发油的抑菌作用 Table 2 The lowest bacteriostatic concentration of volatile oil from Ledum palustr 菌种 最低抑菌浓度 大肠杆菌 1.26 mg/mL 金黄色葡萄球菌 1.52 mg/mL 枯草芽孢杆菌 2.53 mg/mL 表2. 杜香挥发油的最低抑菌浓度 3.2. 讨论 本实验采用水蒸气蒸馏法提取杜香叶中挥发油，并对其进行GC-MS分析，确定其中32种化学成分，含量较高的组分有β-水芹烯(43.55%)，萜烯醇(11.86%)等，但与王炎 [ 7 ] ，尤莉艳 [ 8 ] 等文中的杜香挥发油的成分及含量有较大差异。通过对欧洲细叶杜香挥发油成分进行分析 [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] ，与亚洲杜香成分及含量也不尽相同。可能由于采集的杜香产地不同，杜香生长的环境不同，提取杜香植株的部位不同，使杜香挥发油的成分及含量差别较大。 实验结果表明，长白山杜香挥发油有较强的抗氧化活性，为Vc的4倍以上。缪成贵等 [ 12 ] 采用DPPH法测定了四大名菊的抗氧化性，其中抗氧化效果最好的是滁菊，其IC 50 值是139.59 µL/mL，而杜香挥发油的IC 50 值为15.93 µL/mL，因此杜香挥发油是良好的天然抗氧化剂。 本文选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌三种常见致病菌，检测挥发油抑菌能力。证实杜香挥发油对三种菌均有一定抑菌效果。江佩芬等考察了杜香挥发油对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的有效剂量分别为5 × 10 −3 ml/mL和1 × 10 −3 ml/mL [ 6 ] ，即杜香挥发油对金黄色葡萄球菌的抑制作用较大肠杆菌高。这一结果与本文抑菌圈法实验结果相近。