DreamBlooms/HansPub-15000-to-45000 huggingface dataset:
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user: 1. 引言 在政策极大支持下我国乡村旅游发展迅速，乡村旅游已经成为我国旅游业的重要部分之一，也是我国目前建设社会主义新农村的主要途径之一。对大多数城市游客而言，乡村旅游能够有效释放工作压力；而对乡村旅游地居民来说，乡村旅游可以有效增加收入、改善生活水平。乡村居民作为乡村旅游的利益相关者之一，其社区参与程度和社区归属感的高低以及旅游影响感知的好坏，对于乡村旅游能否开发成功以及乡村旅游能否实现可持续发展有重大影响 [ 1 ] 。但我国乡村旅游大多是在政府或企业主导下开始发展的，没有将当地居民纳入旅游体系，未考虑居民在旅游发展中的利益分配问题，因此在旅游发展与社区以及与地方民众之间存在较大矛盾，产生了很多问题 [ 2 ] 。这就要求我们从社区居民参与的角度探讨乡村旅游发展问题，以实现乡村旅游可持续发展。 国外对于旅游业中社区参与问题的研究开展较早，从1985年P. E. Murphy提出了社区参与的概念之后，此后众多的学者从不同学科视角出发，对此进行了理论探索和实证研究。国外学者在社区参与旅游各方面均有涉及，研究方法包括定性和定量两种。在出现初期，有关社区参与的研究主要集中在社区是否有必要参与旅游规划与决策过程这一问题上 [ 3 ] [ 4 ] 。随着理论研究的发展，许多学者开始研究社区居民在参与旅游活动的过程中受到的各方面制约因素 [ 5 ] [ 6 ] [ 7 ] 。近年来，随着研究越来越深入，对旅游发展社区参与度的关注也越来越高 [ 8 ] [ 9 ] 。 我国对于社区参与的研究开始于上世纪90年代。国内学者对我国一些典型案例区的社区参与旅游发展模式的实证分析较多。许多学者对社区参与旅游发展的模式进行了研究，不同开发模式其特点不尽相同，此外也有学者选取典型案例区的参与模式进行比较分析 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 。在注重实证研究的同时，我国学者也基于不同视角对阻碍社区参与旅游发展的因素进行了研究，研究开始向定性与定量方法相结合的方向进行 [ 15 ] [ 16 ] [ 17 ] [ 18 ] (表1)。但与国外研究进展相比，国内关于社区参与旅游发展的研究还大多停留在理论部分，主要为分析影响和障碍因素的研究，实例分析大部分都是以某一特定地区为对象进行具体研究，缺乏较为系统的分析。 如何处理社区居民与乡村旅游开发之间的关系是时下旅游业热门的话题之一。实践证明社区参与旅游发展是有效解决社区与旅游发展之间存在矛盾的途径之一。本文以昆明市万溪冲社区居民为研究对象，通过问卷调查和实地访谈，采用量化分析与计算、主成份分析以及相关分析等方法，分析万溪冲村居民参与乡村旅游的特点，旨在揭示万溪冲村乡村旅游目前存在的主要问题，并尝试提出解决对策。
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user: 2. 研究区概况及问卷设计 2.1. 研究区概况 万溪冲社区位于昆明市呈贡区吴家营街道办事处，地处吴家营街道东南部，由一个自然村组成。截至2012年底，社区共有居民500户，总人口1756人，社区居民主要以宝珠梨、蔬菜等农产品种植为主 [ 19 ] 。万溪冲社区自2000年7月开办“农家乐”以来，到2001年仅半年时间就已经出现了11户，有床位112个，接待游客5000余人次 [ 20 ] 。万溪冲社区主打旅游特色为万亩梨园，自2013年举办第一届“梨花节”活动以来，知名度越来越高，前来旅游的游客剧增，尤其是在梨花开与宝珠梨成熟的季节。 Table 1 Comparison of community participation patterns in tourism developmen 研究学者 研究区域 社区参与旅游发展模式 郑群明、钟林 [ 10 ] 全国 1.“公司 + 农户”模式，包括“公司 + 农户”和“公司 + 社区 + 农户” 2.“政府 + 公司 + 农村旅游协会 + 旅行社”模式 3.股份制模式 4.“农户 + 农户”模式 5.个体农庄模式 蔡碧凡、陶卓民、 郎富平 [ 11 ] 浙江省 1.基层组织引导社区参与模式——衢州市柯城区七里乡黄土岭村 2.企业(景区)带动社区参与模式——临安市太湖源镇白沙村 3.社区居民自主参与模式——富阳市东洲街道黄公望村 樊忠涛 [ 12 ] 全国 1.居民自发型，包括共同兴趣型和共同利益型 2.动员型，包括政府型动员和社会型动员 3.互动合作型，包括社区组织、辖区单位合作型和社区居委会、专干合作型 严海涛 [ 13 ] 酒泉市 1.个体农庄模式 2.“农户 + 农户”模式 3.“公司 + (社区)农户”模式 4.“政府 + 社区 + 农户”模式 5.“政府 + 公司 + 社区 + 旅游企业”模式 6.股份制模式 杨晓红 [ 14 ] 全国 1.自发形式，如梅里雪山雨崩藏族村轮流接待模式 2.以项目方式来推进社区参与，如世界自然基金会在平武县开展的平武综合保护与发展项目 3.景区管委会推进下的社区参与模式，如九寨沟自然保护区社区参与模式 表1. 不同学者笔下社区参与旅游发展模式比较 注：基于参考文献 [ 10 ] [ 11 ] [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] 的整理。 2.2. 问卷设计 为了获得万溪冲村居民参与当地旅游业意愿及对旅游产生的影响感知情况，本文参照郎富平 [ 21 ] 、谢飞 [ 22 ] 等人的问卷，结合万溪冲社区实际情况，设计了针对万溪冲社区居民的调查问卷。问卷内容包括三部分，第一部分是被调查者基本情况，第二部分是社区居民对旅游影响的感知情况，第三部分是社区居民参与旅游发展的意愿调查。 2.3. 调查对象及其基本情况 本文以万溪冲社区居民为调查对象，在正式发放问卷之前，首先随机发放了15份问卷进行预调查。通过被调查者的反馈，对问卷结构、题量、内容以及语言表达等方面进行了修改与完善。本次正式调查共发放问卷100份，回收100份，其中有效问卷81份，有效问卷回收率81%。问卷调查采用随机发放、现场填写和回收的方法进行，对于年龄较大不识字的村民进行当面访谈、现场记录。为了保证被调查对象在研究区的位置分布合理性，选择了分组开展问卷调查的方式，即两组调查者分别从村头和村尾出发发放调查问卷，最终进行数据整合。调查基本情况如表2所示。 通过对问卷数据进行统计发现：在此次调查的居民中，男女比例基本符合万溪冲村2008年人口普查数据中的男女比例；年龄段主要集中在41~60岁之间，各个年龄层均有被调查者；受教育程度主要集中 Table 2 Basic situation of residents surveyed in Wanxichon 基本信息 选项 人数 所占比例 性别 男 39 48.1% 女 42 51.9% 年龄 20岁及以下 2 2.5% 21~40岁 28 34.6% 41~60岁 42 51.9% 60岁以上 9 11.1% 受教育程度 小学及以下 35 43.2% 初中 24 29.6% 高中或中专 19 23.5% 大专或本科以上 3 3.7% 年收入 10，000元以下 18 22.2% 10，000~30，000元 40 49.4% 30，000~50，000元 11 13.6% 50，000元以上 9 11.1% 是否为本地人 是 58 71.6% 否 23 28.4% 是否从旅游业中受益 是 45 55.6% 否 36 44.4% 是否参与旅游业 是 39 48.1% 否 42 51.9% 表2. 万溪冲村被调查居民的基本情况 在高中及以下，符合万溪冲社区实际情况；在调查的居民中，71.6%的居民世居本地，另有28.4%的外地人接受调查。可见，调查具有较强的随机性和代表性，保障了后续分析结果的可靠性。
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user: 4. 结论与讨论 本文通过文献分析法对国内外学者有关社区参与乡村旅游的研究成果进行梳理、总结，结合万溪冲村的实际情况，通过问卷调查和实地访谈，经过量化分析与计算、主成份分析以及相关分析等方法，对万溪冲村居民参与旅游发展的意愿以及对万溪冲村居民对旅游影响的感知水平进行了初步评价，最后得出万溪冲居民参与乡村旅游的特点。研究的主要结论如下： 1) 从理论上分析得出社区参与旅游发展不仅是世界旅游业发展的必然趋势，是实现社区旅游可持续发展的重要保障，同时也是拓宽社区居民就业渠道、增加社区居民收入来源的有效途径之一，能够有效解决社区与旅游开发之间矛盾，从而可以提高旅游产品质量，为游客提供更好的旅游经历。因此，研究社区参与旅游发展具有很重要的现实意义。 2) 万溪冲的乡村旅游发展离不开社区居民的支持。通过实地调查得出：目前，万溪冲社区居民参与乡村旅游发展的参与率较高，对本地发展旅游业带来的影响作用持积极肯定态度，同时对于社区的旅游发展表现出强烈的参与意愿；但是万溪冲村居民参与旅游的层次较低，主要体现在居民主要参与具体的服务项目，而在制定旅游政策以及旅游规划等层面上社区居民很少甚至没有表达自己意见的机会；万溪冲社区参与旅游发展现处于组织参与阶段，即社区内部居民参与乡村旅游经济层面的活动，居民对于开发乡村旅游带来的负面影响已有初步认识，但是还未引起重视。
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user: 摘 要 近年来，旅游业已成为云南省重要的支柱产业，昆明得天独厚的地理区位与相对较高的居民收入优势使得它周边的乡村旅游表现出极强的生命力和发展潜力，但总体上乡村旅游还处于初级阶段。随着昆明市乡村旅游竞争火热化，乡村旅游经营者因人力、物力、财力、知识等客观原因的限制，对乡村旅游的开发只是简单的雷同复制，千篇一律的乡村旅游已无法满足旅游者多元化的需求，影响乡村旅游地的可持续发展。因此，为突出乡村旅游目的地的特色化内涵与差异性，提高旅游目的地品牌的核心竞争力是本论文研究的切入点。论文以呈贡万溪冲为案例点，从旅游者的视角，探讨昆明市万溪冲的乡村旅游品牌构成要素，通过问卷调查、收集数据和归纳总结对旅游目的地品牌的建立进行了定性分析和定量分析，提出万溪冲旅游品牌的构成要素并构建了模型，并据该模型提出从多方面塑造万溪冲旅游品牌形象、重视旅游品牌的管理、注重万溪冲旅游的服务和设施建设、万溪冲旅游品牌的建立应有主次之分、开展丰富多彩的活动和旅游产品等五点建议。 关键词 :万溪冲，乡村旅游，旅游品牌 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 我国国家信息中心发布的数据显示，2015年中国旅游业对中国GDP的综合贡献约为7.34万亿元人民币，约占全球旅游业对全球GDP综合贡献的14.5%；旅游产业综合带动就业人数达到了7911万人，是世界旅游业创造就业岗位数的27.8%。 改革开放后，全国旅游业开始兴起，云南省作为旅游大省开始大力发展旅游业，1999年云南省旅游业总收入位居全国第二，第三产业的总收入首次超过第二产业，表明旅游业已经成为云南省的支柱产业 [ 1 ] 。 位于昆明市呈贡区的万溪冲具有良好的乡村旅游资源基础，不仅具有优美的自然景观和独特的人文建筑，而且由于紧邻昆明市呈贡大学城因此拥有稳定的客源，可以服务大学城甚至市区的居民，提供丰富多彩的乡村旅游体验。乡村旅游市场的竞争愈发激烈，为了在激烈的市场竞争中脱颖而出，昆明呈贡万溪冲需要发掘其特色的旅游资源，打造独特的旅游品牌，提高景区的市场竞争力。 目前，国内外对于旅游品牌的研究成果比较丰富 [ 2 ] - [ 11 ] 。旅游品牌是旅游地形象的具体体现，用以识别旅游地的产品和服务，并使之同其他旅游地的产品和服务区别开来。旅游品牌不仅用于区分其竞争者，更是浓缩了旅游地的核心价值和文化，使之呈现在游客面前，增强旅游地对游客的吸引力。 为了建立具有市场竞争力的旅游品牌，就需要对旅游品牌的构成要素进行深入研究。贾英(2009)认为旅游景区品牌主要由旅游景区、旅游景区名称及其标志、经营者表达或公众认知三方面构成 [ 12 ] ；白翠玲(2013)将旅游品牌的要素分为品牌符号的内涵要素、品牌塑造载体要素、品牌塑造传播要素以及品牌塑造体验要素四个方面 [ 13 ] ；秦安臣(2005)将评价生态旅游品牌形象的因子分为知名度、满意度、美誉度、推荐度和忠诚度五种类型，并通过计算因子的权重来确定生态旅游品牌规划方案 [ 14 ] 。由此可见，对于旅游品牌的建立不仅要注重旅游景区的名称、标志等载体要素，也要重视品牌的传播以及游客的感知等要素，并可通过定量计算来制定旅游品牌的建立方案。
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user: 2. 研究区域背景及数据来源 2.1. 昆明市万溪冲 万溪冲坐落于梁王山脚，位于昆明市呈贡区的东南边，距离昆明市中心31公里，占地面积约9.95平方公里，海拔2042米，年平均气温在16℃左右，气候适宜。雨季和旱季分别明显，年降水量769毫米，适宜种植蔬菜水果等农作物。根据2008年的人口统计，万溪冲共有474户1684人，均为汉族。全村有耕地764.70亩，人均耕地0.47亩；有林地约11，500亩，经济林果地3300亩，人均经济林果地约3.48亩，主要种植宝珠梨等经济林果，万溪冲尤以宝珠梨闻名，可以称为宝珠梨的原产地，每年三月份梨花盛开的季节，万溪冲会举办“梨花节”，届时大量游客纷纷至万溪冲赏梨花，休闲踏青。 2.2. 研究设计与数据收集 参考丹恩、由赛尔、帝力提出的“推–引力”模型中旅游地的自然及人文资源、吸引力程度、旅游价值等“引力”要素以及白翠玲 [ 15 ] 提出的品牌符号的内涵、品牌塑造载体、品牌塑造传播、品牌塑造体验四种要素，发现“引力”模型中的自然及人文资源可归结为旅游资源要素，吸引力程度要素可分为旅游资源要素与服务设施要素，旅游价值要素可归结为旅游体验要素，在此基础上结合昆明市万溪冲的旅游资源以植物景观等自然景观为主、旅游服务和设施还处于起步阶段等具体情况，将昆明市万溪冲旅游品牌模型分为旅游品牌载体、旅游资源、旅游服务设施和旅游管理四个维度，如图1。 由于研究的目的是获取昆明市万溪冲旅游品牌构成要素模型并提出建设旅游品牌参考意见，主要调查对象为到万溪冲旅游的游客以及有意向到万溪冲旅游的潜在游客。调查问卷除了关于被调查者基本信息的题项之外，其他题项采用里克特五点量表的形式，其中1分表示“非常不重要”，2分表示“不太重要”，3分表示“一般”，4分表示“比较重要”，5分表示“非常重要”。除此之外，还有一道非结构性问题“您认为万溪冲最吸引您的地方是什么”，旨在了解万溪冲的独特的旅游资源。 参照已经建立好的研究假设模型以及万溪冲的实际情况，初步确定了万溪冲旅游品牌要素模型中各维度下的具体测量指标，如表1。 图1. 万溪冲旅游品牌构成维度 Table 1 The main indicators of Wanxichong tourism brand compositio 名称 维度 序号 题项 昆明市万溪冲旅游品牌 旅游品牌载体 1 旅游地的名称 2 旅游地品牌的商标和标志 3 旅游地的宣传口号 4 特色的节庆活动 5 美誉度 6 广告宣传 旅游资源 7 气候条件 8 地理位置 9 地形条件 10 旅游地规模大小 11 历史文化 12 民俗风情 13 特色建筑 14 生物(动、植物)景观 旅游服务设施 15 特色商品 16 商品价格 17 餐饮服务及设施 18 住宿服务及设施 19 交通系统和设施 20 导游服务及设施 21 购物设施 22 休闲娱乐设施 23 通讯及网络设施 24 道路设施 25 卫生设施 26 安保设施 27 医疗急救设施 旅游管理 28 旅游服务人员的态度 29 旅游服务人员的服务水平 30 当地政府对旅游业的管理 31 当地政府对旅游业的扶持 32 当地旅游公司的经营理念 33 环境维护人员及设施 表1. 万溪冲旅游品牌构成主要指标 2.3. 调研实施 本次问卷发放采用实地发放和网上发放相结合，实地发放即在万溪冲当地对前来游玩的游客进行调查问卷的发放，调研时间约为一周；网上发放即在关于“旅游”、“云南旅游”和“昆明旅游”等主题的贴吧、论坛等平台进行发放。 调查问卷的实地发放采用随机抽样的方式选取调查样本，网上发放以在线填写的方式进行调查。共发放调查问卷182份，回收182份，根据网络问卷中的“您去过昆明市万溪冲吗”和“您有意愿去昆明市万溪冲旅游吗”两道问题对调查对象进行筛选，选取对万溪冲有一定了解的调查对象进行问卷的填写，剔除无效问卷29份，共获得有效问卷153份，有效总回收率为84.07%，调查问卷的发放及回收情况见表2。
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user: 4. 结论与讨论 4.1. 结论 据已建立的模型可知，万溪冲旅游品牌形象是一个具有多维度结构的模型，是旅游品牌载体、旅游品牌资源、旅游服务及设施以及旅游品牌管理等要素在游客心中的总体印象和评价，它主要由16个指标构成并可划分为四个维度，即旅游品牌载体、旅游品牌资源、旅游服务及设施以及旅游品牌管理。其中旅游品牌载体包含3个测量指标，旅游品牌资源包含4个测量指标，旅游服务及设施包含4个测量指标，旅游品牌管理包含5个测量指标。 Table 1 6 The ideal model variance explains the rati 成份 初始特征值 提取平方和载入 旋转平方和载入 合计 方差% 累积% 合计 方差% 累积% 合计 方差% 累积% 1 9.004 56.278 56.278 9.004 56.278 56.278 4.152 25.947 25.947 2 1.285 8.032 64.310 1.285 8.032 64.310 3.133 19.579 45.527 3 0.873 5.456 69.766 0.873 5.456 69.766 2.568 16.052 61.578 4 0.787 4.921 74.687 0.787 4.921 74.687 2.098 13.109 74.687 5 0.604 3.773 78.461 6 0.524 3.273 81.733 7 0.497 3.105 84.838 8 0.406 2.535 87.373 9 0.372 2.328 89.701 10 0.329 2.057 91.758 11 0.291 1.819 93.576 12 0.271 1.694 95.270 13 0.233 1.457 96.727 14 0.204 1.276 98.004 15 0.165 1.033 99.037 · 0.154 0.963 100.000 表16. 理想模型方差解释比例 Table 1 7 The ideal model is the factor loading matrix after rotatio 编号 成份 1 2 3 4 D02 0.772 0.330 0.218 0.207 D05 0.771 0.392 0.233 0.198 D03 0.749 0.276 0.268 0.267 D04 0.748 0.261 0.301 0.198 D01 0.723 0.443 0.179 0.183 B03 0.348 0.820 0.138 0.176 B04 0.358 0.738 0.223 0.261 B02 0.447 0.675 0.160 0.173 B01 0.414 0.573 0.296 0.266 A01 0.164 0.158 0.821 0.053 A02 0.226 0.187 0.789 0.128 A03 0.234 0.123 0.737 0.227 C04 0.290 0.200 0.122 0.782 C03 0.544 0.131 0.147 0.675 C01 0.041 0.466 0.262 0.633 C02 0.383 0.422 0.365 0.512 表17. 理想模型旋转后的因子载荷矩阵 根据因素解释量法，万溪冲旅游品牌形象模型构成的四个维度分别解释了总量表的25.947%、19.579%、16.052、13.109%，因此这4个维度的重要性依次为：旅游品牌管理、旅游品牌资源、旅游品牌载体、旅游服务及设施，由此可见游客对于万溪冲的旅游品牌管理很重视。 根据问卷调查的结果，游客对于“旅游服务人员的态度”、“卫生设施”、“医疗急救设施”、“安保设施”等旅游服务和设施方面比较重视，因此万溪冲发展旅游业要重视提高旅游服务质量和完善基础设施的建设。 从调查问卷的结果来看，到万溪冲旅游的游客对于万溪冲“旅游地的名称”、“旅游地品牌的商标和标志”、“旅游地的宣传口号”等因素不是很看重，对于“旅游服务人员的态度”、“卫生设施”、“医疗急救设施”、“安保设施”等旅游服务和设施方面比较重视。 由问卷调查的结果可知，大部分游客认为“梨花”是吸引游客到万溪冲旅游的主要旅游资源，但梨花盛开的时间有限，梨花盛开期间游客数量蜂拥而至，而从梨花凋谢到宝珠梨成熟的这段时间里，到万溪冲的游客数量骤然减少。 4.2. 提出的建议与对策 1、从多方面塑造万溪冲旅游品牌形象 旅游品牌形象的构成是多方面的，并非只是单一的宣传口号与视觉符号的组合。打造完整的旅游品牌，既要有旅游品牌的标志、口号等品牌载体与外部宣传，又要有旅游地的服务和设施等内部建设以及后续的旅游品牌管理。 2、重视旅游品牌的管理 旅游品牌的建立是一个建立品牌、投入运营、获得意见、加强管理、不断完善的长期循环过程，而不是建立起旅游品牌就完成的一次性过程。重视旅游品牌的管理，可以及时根据游客的反馈对旅游品牌进行内部与外部的完善。首先，旅游品牌的视觉标志和口号要符合游客的审美和取向的变化以吸引游客。其次，在旅游地应设置意见箱，有助于游客根据自己的旅游体验对旅游地的建设提供宝贵意见，有助于健全和完善相应的旅游服务和设施。最后，政府和旅游相关部门对于旅游地的旅游服务人员和旅游公司及旅游市场需要进行监督和管理，完善问责制度，明确各部门职责，避免旅游地肆意涨价、有关部门相互推卸责任、损害游客利益等现象的发生。 3、注重万溪冲旅游的服务和设施建设 旅游地的服务和基础设施与游客的旅游体验息息相关，旅游服务质量高、基础设施完善，游客不必在交通、医疗、安全和卫生等方面花费较多的时间、金钱和精力，而是可以全身心地投入到对旅游地的游览之中，获得高质量的旅游体验，从而提高旅游地的吸引力和美誉度。 要提高旅游地的服务和完善基础设施的建设，就需要当地政府及相关部门或当地的旅游公司对于旅游服务人员进行统一的培训和管理，同时，还应对旅游地进行合理的规划，建立公交、旅游大巴等交通网，提高旅游地的交通便捷度，缩短游客到达旅游地的时间；引进医疗服务及急救设施，在旅游地设置多个药品提供点，对游客进行医疗或急救服务；引进安保公司以完善旅游地的安保设施，维护旅游地的公共秩序，保障游客的财产和人身安全；引进保洁公司以维持旅游地的环境卫生。 4、万溪冲旅游品牌的建设应有主次之分 万溪冲现在正处于旅游业发展的起步阶段，各项旅游服务和旅游设施还不够完善，到万溪冲游玩的游客首先注重的是自身的旅游体验，其次才是万溪冲旅游品牌的外部宣传，因此万溪冲的旅游品牌建设首先要进行旅游地基础设施的建设，其次才是旅游品牌载体的广告宣传建设。 5、开展丰富多彩的活动和旅游产品 除了极具特色的“梨花节”以外，万溪冲没有其他可以吸引游客的活动。鉴于此，万溪冲应开展更多的活动以及相关产业及产品。如万溪冲可以开发果汁生产或果酒生产产业，利用万溪冲特有的宝珠梨进行果汁和果酒的酿造，使其成为万溪冲特有的旅游产品和旅游纪念品，同时还能带动果酒企业的产生和发展，增加万溪冲的经济收入。
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user: 摘 要 血脂异常被世界医学界公认是导致动脉粥样硬化和心脑血管各种疾病的“元凶”。目前临床上的用于治疗血脂异常的药物主要包括他汀类、贝特类、烟酸类及胆汁酸螯合剂等。近年来，随着胆固醇代谢的一些新靶点的发现，也催生出很多有新作用机制的药物走向临床试验或上市，本文将介绍近年来新型调血脂药物的应用研究进展。 关键词 :调血脂药，前蛋白转化酶枯草溶菌素-9 (PSCK-9)抑制剂，胆固醇吸收抑制剂，ω-3脂肪酸，微粒体甘油三脂转运蛋白(MTP)抑制剂 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 随着人民的生活水平不断提高，居民整体健康水平的现况却不容乐观，心血管疾病已经成为威胁人们生命健康的“头号杀手”。《中国心血管病报告(2017)》指出，我国心血管病的患病率和死亡率仍然处于持续上升阶段，根据往年数据推算，目前国内心血管病患病人数高达2.9亿 [ 1 ]。心血管病死亡率近年来始终居高不下，高于肿瘤及其他疾病 [ 2 ] [ 3 ] ，占居民死亡构成45%以上。而脂质异常是导致心血管疾病的重要原因之一。 他汀类作为调血脂药的一线药物在临床上广泛应用，该类药物疗效确切，效果显著，但副作用也同样给医生和患者带来了一定的困扰。贝特类，烟酸类和胆酸螯合剂在临床上应用于无法耐受他汀类药物的其他患者。近年来，新型调血脂药前蛋白转化酶枯草溶菌素-9 (PSCK-9)抑制剂，胆固醇吸收抑制剂及微粒体甘油三脂转运蛋白(MTP)抑制剂在治疗血脂异常的应用开始引起人们的关注，本文将综述近年来新型调血脂药物应用研究进展。
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user: 2. 降低胆固醇为主的药物 2.1. 依折麦布 依折麦布于2002年在美国获批上市。到目前为止，该药是唯一一个上市的胆固醇吸收抑制剂。NPC1L1是一种负责转运肠道中的胆固醇进入细胞的跨膜蛋白，该药作用于小肠粘膜上的NPC1L1转运蛋白，选择性抑制食物和胆汁中的胆固醇跨小肠转运。减少总胆固醇储存，增加肝脏低密度脂蛋白受体的合成，并且降低低密度脂蛋白水平。非饮食性高胆固醇血症患者不建议使用该种药物。 依折麦布通常用于治疗降低LDL-C水平尚未达到治疗目标或不耐受他汀类药物的患者。在心脏和肾脏保护(SHARP)试验中研究了依折麦布与辛伐他汀联合应用的疗效，该试验比较了依折麦布10 mg加辛伐他汀20 mg/天与安慰剂组治疗中重度慢性肾病患者的疗效 [ 4 ]。接受依折麦布加辛伐他汀组的患者发生非致命性心肌梗死或冠状动脉死亡，非出血性中风或任何动脉血运重建术的主要复合终点的发生率显著降低。辛伐他汀与更有效的降脂方案即辛伐他汀加依折麦布合用提供了依折麦布的有效性和安全性作为他汀类药物治疗的辅助药物的证据。依折麦布联合他汀类药物对于不耐受中高量他汀类的患者是一种不错的选择。 目前依折麦布临床上主要用于治疗高胆固醇血症，纯合子家族性高胆固醇血症和纯合子谷甾醇血症，副作用较小，肝肾功能损害患者都可以服用。仅有小部分患者可能会出现胃肠道的不良反应，如腹痛腹泻等症状。 2.2. 前蛋白转化酶枯草溶菌素-9 (PSCK-9)抑制剂 新型的蛋白酶前蛋白转化酶枯草溶菌素-9 (PSCK-9)抑制剂(最初称为神经凋亡调节转化酶-1)首先由Seidah等人提出 [ 5 ]。该类药物结合PCSK9并抑制PCSK9与低密度脂蛋白受体(LDLR)的结合，从而阻止PCSK9介导的低密度脂蛋白受体降解。 Stein等人报道了静脉内或皮下注射alirocumab的三期I期试验的结果 [ 6 ]。一项研究是在血清LDL-C浓度 > 100 mg/dl的健康志愿者中进行的，而另外两项研究是在用阿托伐他汀治疗杂合子家族性高胆固醇血症(FH)或非FH患者中进行的。PCSK9抑制剂耐受良好，并与LDL-C，总胆固醇，非HDL-C，apoB和脂蛋白(a) (Lp(a))水平的降低均有关。 在没有服用其他降脂药的高胆固醇血症患者中应用依伏库单抗的研究显示，所有剂量组中LDL-C显着降低约40%~50% [ 7 ]。另一项II期临床试验涉及使用或不使用依折麦布的他汀治疗的高胆固醇血症患者，每2周接受依伏库单抗组的LDL-C降低42%~66%，每4周一次接受依伏库单抗组降低42%~50% [ 8 ]。在该项研究中，该药物的耐受性一般都很好。随着越来越多令人欣喜的临床试验结果的出现，阿利库单抗和依伏库单抗于2015年在美国获批上市。 PCSK-9抑制剂作为新型调血脂药物，其降低胆固醇和心血管病事件作用得到了众多临床试验证实。但是，PCSK9还有一些对神经系统和内分泌系统的影响值得引起科研人员的重视。其参与肝脏再生 [ 5 ] 、神经细胞凋亡 [ 9 ] 的调节，并有可能导致胰岛细胞功能异常和糖耐量受损 [ 10 ] ，因此，PCSK9抑制剂是否会对内分泌系统、循环系统和中枢神经系统产生不良影响仍有待观察。而且目前PCSK-9抑制剂仅能通过皮下注射用药，存在注射部位红斑、瘙痒、肿胀、疼痛等不良反应，加之昂贵的价格可能导致患者依从性下降。 2.3. 微粒体甘油三脂转运蛋白(MTP)抑制剂 MTP抑制剂通过减少肝脏VLDL和小肠乳糜微粒的合成和分泌，从而使血液VLDL、TG和LDL-C水平的水平降低 [ 11 ]。在临床前的研究中发现影响MTP活性的药物使甘油三酯和胆固醇水平的显着降低。对MTP抑制剂(如英普他派)的早期研究揭示了它们降低LDL-C水平的能力。然而，由于担心该类药物与胃肠副作用和肝脏脂肪堆积有关，大多数药物的进一步开发已经停止。Lomitapide成为唯一一个超过II期临床试验开发的MTP抑制剂 [ 12 ]。该药在纯合子家族性高胆固醇血症(hoFH)动物模型中显着降低LDL-C水平 [ 13 ]。在临床情况下，该药物单独或联合依折麦布时被证明可有效减少hoFH39患者 [ 14 ] 和中度高胆固醇血症患者的血浆脂质(单独降低LDL-C和apoB分别为30%和24%，合用依折麦布降低LDL-C为46%) [ 15 ]。然而，在这些研究中发现了胃肠副作用，轻微转氨酶水平的升高和肝脂肪的增加。尽管有这些副作用，洛美他派于2012年12月被批准用于治疗hoFH。 如上所述，在临床试验中给予MTP抑制剂会导致肝转氨酶水平不可接受地升高和肝脂肪分解增加。由于这些原因，除了已被批准用来治疗hoFH洛美他派外，基本上停止了MTP抑制剂的临床开发。
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user: 3. 降TG为主的药物 ω-3脂肪酸 尽管ω-3脂肪酸(二十碳五烯酸-二十二碳六烯酸[EPA-DHA])不能降低LDL的水平，但膳食补充鱼油或使用ω-3酸乙酯在高危心血管疾病的人群甚至甘油三酯升高的人群中的使用已经比较普遍。尽管ω-3脂肪酸对于调控胆固醇的作用机制尚不明确，但目前清楚的是可以降低VLDL-C和甘油三脂的合成，也可以增加甘油三脂的清除率 [ 16 ]。当和他汀类药物联用时，ω-3酸乙酯分别平均降低总胆固醇和甘油三酯水平5%和30%。分别增加LDL和HDL的水平1%和3% [ 17 ]。令人感兴趣的是，有证据表明，最近批准在美国使用的纯化EPA (二十碳五烯乙基)不会增加LDL-C，并且实际上降低了这些水平 [ 18 ]。 总体而言，临床试验表明，ω-3酸乙酯是安全的，并可能降低某些人群心血管事件的风险。额外的临床试验有必要评估纯的EPA和EPA-DHA对心血管预后可能存在的差异。
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user: 4. 升高HDL-C为主的药物 胆固醇酯转运蛋白(CETP)抑制剂 流行病学研究证明，低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)是调整心血管事件的独立因子。大量的流行病学资料证明血清高密度脂蛋白胆固醇水平与心血管事件呈现明显的负相关关系 [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ]。胆固醇酯转运蛋白(CETP)是胆固醇酯逆转运过程中的关键蛋白，促进HDL-C向LDL-C和极低密度脂蛋白(VLDL-C)转运，从而降低体内HDL-C水平，升高LDL-C水平，诱发心血管疾病的发生。CETP抑制剂抑制脂蛋白之间的脂质交换，从而达到升高HDL-C，降低LDL-C的目的 [ 23 ]。 CETP抑制剂torcetrapib (托塞匹布)和dalcetrapib (达塞曲匹)的相关临床研究显示，虽然上述两种药物都可以升高HDL-C，但是却不能降低心血管风险 [ 24 ]。2006年，torcetrapib最终因为其安全问题而宣告停止研发，5年后罗氏公司的也因为类似的原因停止了dalcetrapib的研发工作。ACCELERATE研究显示evacetrapib (暂无中文译文)同样不能降低心血管事件发生风险 [ 25 ] ，礼来公司于2015年宣布停止该药的研发工作。而此时默沙东却知难而进，宣布将开展其CETP新药anacetrapib的临床三期研究。 虽然CETP抑制剂的研发工作坎坷不断，但CETP抑制剂的高选择性一直是人们关注的热点，随着研发人员对CETP结构和作用机制的研究越来越深入，相信会有疗效更优和安全性更好药物开发出来。
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user: 5. 总结 他汀类药物是降脂治疗的基石，在过去的30年中，该类药物已被证明是安全有效的药物。最近，随着新的基因技术和转化方法的发展，创新疗法的开发已经取得了相当大的进展。事实上，新药的开发给降脂治疗和降低心血管风险发生率带来了很大的希望。然而，从安全性的角度考虑，很多新药的发展都受到了限制，比如MTP抑制剂。因此，接下来的研究应该进一步探索这些药物的安全性。这些新兴疗法的试验目前正在进行中，在未来几年预计会在脂质调节领域取得惊人的进展。
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user: 摘 要 油菜是世界和我国的主要油料作物。随着全球气候变暖，高温热害已成为油菜稳产高产的主要威胁之一，提高油菜高温适应性对确保我国油料作物生产安全具有重要意义。国内外学者在高温胁迫对油菜产量、品质、生理生化的影响、油菜高温响应分子调控机制以及耐热资源鉴定等方面开展了广泛研究，取得了诸多有价值的结果。本文就相关研究领域取得的重要进展、所涉及的关键问题进行了综述和回顾，以期为油菜耐热遗传改良提供参考。 关键词 :油菜，高温胁迫，产量，含油量，分子机制 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 油菜是世界主要油料作物，我国油菜面积和产量均居世界前列 [ 1 ] 。油菜生产在国民经济和人民生活中占有重要地位，目前已占我国油料作物产油量的57.2%。虽然我国油菜生产总体发展良好，但食用植物油供给依然形势严峻，国内植物油消费总量的60%以上依赖进口 [ 2 ] 。由于我国耕地资源缺乏、全球生态环境不断恶化，如何利用有限的耕地面积产出更多油脂是油料作物育种所面临的巨大挑战 [ 3 ] ，培育高产、稳产、高含油量油菜品种是稳定油菜产能、确保食用油供给安全最重要的途径之一。 高温胁迫严重影响作物生长发育，是作物稳产高产的主要威胁。油菜种子发育期日平均温度与含油量呈负相关 [ 4 ] 。油菜成熟期间气温在 20 ℃ 以上、光照充足、昼夜温差大、土壤湿度适宜有利于油分积累，产量和含油量高；而温度过高，会导致“高温逼熟”，植株衰老加速、灌浆期缩短，千粒重和含油量降低，是影响油菜产量和含油量的重要环境胁迫因素 [ 5 ] [ 6 ] 。随着全球气候变暖，占我国油菜面积约80%的长江流域主产区呈初夏高温热浪提前来临趋势，高温胁迫对油菜等作物的不利影响日渐显现，生产的不稳定性显著增加 [ 3 ] 。提高油菜等作物的耐热性是农业生产面临的紧迫课题，深入研究油菜种子发育期高温耐受的分子机理，特别是油菜胚胎发育、油脂积累和高温胁迫响应的协同调控机制，将为全球气候变化形势下的油菜高产抗逆分子育种提供重要理论参考。
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user: 2. 高温胁迫对油菜籽粒产量和品质的影响 高温热害严重影响油菜生长发育过程和最终产量、品质。花期高温胁迫降低雌、雄配子体活力，导致角果败育，干扰种子生产 [ 7 ] 。Angadi [ 8 ] 等选择芸薹属白菜型(B. rapa L.)、芥菜型(Brassica juncea L.)和甘蓝型(B. napus L.)三个物种的多个油菜品种在始花期、角果发育早期分别进行7天35℃/白天、15℃/黑夜的高温胁迫处理，3个不同物种油菜的生殖器官均产生了高温伤害，并且花期高温胁迫对产量形成的影响大于角果发育期高温胁迫。在主茎上，因高温胁迫引起的平均种子产量降低了89%，但分枝角果数增多，产生了部分的补偿效应，最终的单株种子产量平均值为对照植株(生长温度20℃/白天，15℃/黑夜)的52%。可育荚(不是总荚数)、千粒重和每荚种子数的减少是单株种子产量降低的原因。他们还发现白菜型油菜比芥菜型和甘蓝型油菜对高温更为敏感，但甘蓝型油菜在高温胁迫消除后的修复能力相对较弱。Gan [ 9 ] 等在不同生长期对多个甘蓝型和芥菜型油菜品种进行高温胁迫(处理10天：35℃、16 h光照；18℃、8 h黑暗)，高温使油菜各产量构成因素均有显著下降(P < 0.01)，主花序角果数、每角粒数、粒重平均分别下降了75%、25%和22%。不同生长时期高温处理对油菜单株种子产量的影响幅度差异明显，花芽形成期、开花期、角果发育期10天高温胁迫使单株种子产量分别下降了15%、58%和77%。他们发现在较早生长时期高温胁迫后植株可以有一定程度的修复，而角果发育期的高温胁迫导致大部分产量构成因素严重下降。Brunel-Muguet [ 10 ] 等在油菜灌浆期采用33℃/白天，19℃/黑夜(对照为20℃/白天，15℃/黑夜)高温胁迫处理降低了单株种子量，可能是由于代偿作用，种子干重没有太大变化。总体而言，不同研究结果均显示生殖生长期遭遇高温胁迫会显著降低油菜产量。 高温胁迫不仅使油菜产量下降，也影响了油菜品质，Aksouh-Harradj [ 11 ] 等发现开花后25天至29天每天5小时38℃高温处理导致各受试油菜品种的种子产量和油脂/蛋白质比例均有降低，但对脂肪酸组分的影响不大。 2011年3月至5月期间，长江流域冬油菜区遭遇50年一遇的极端高温，姚仪敏 [ 12 ] 等调查了江汉平原油菜集中产区7个县市区的油菜千粒重，发现受热害影响的油菜千粒重比所涉品种“标准千粒重”普遍明显降低，其中水田油菜和旱田油菜千粒重降低值分别达0.527 g和0.390 g。结合对当地长期气象观测资料的分析，证明了“高温逼熟”对千粒重这一油菜产量构成要素的负面影响。
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user: 3. 油菜高温胁迫的生理响应 高温胁迫也会影响一些油菜重要生理过程。苗期高温处理使油菜叶绿素含量下降，并由于细胞膜受到损伤、膜透性增大，以致组织浸提液的电导率增大 [ 13 ] 。 光合作用是植物物质转化和能量代谢的关键，也是植物对高温最为敏感的生理过程之一 [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ] 。黄纯倩 [ 17 ] 等发现苗期高温胁迫使油菜叶片净光合速率持续降低。通过叶绿素荧光参数测定发现，高温胁迫后叶片光化学效率(Fv/Fm)、最大电子传递速率(ETRmax)的降幅明显，说明高温使油菜叶片PSII反应中心受损、光合电子传递受阻。光合作用相关酶活性测定结果显示，持续高温显著抑制Rubisco酶活性。更为重要的是高温胁迫对油菜叶片PSII损伤是不可逆的。 木质素在增强植物抵御生物和非生物胁迫方面都具有积极作用，高温胁迫也显著影响油菜根、茎的木质化过程。尹能文 [ 18 ] 等研究了油菜根、茎木质化对高温胁迫的应答，结果显示高温使根、茎的木质部显著增厚、木质素总量增加、S型木质素比例提高。
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user: 4. 油菜耐热资源鉴定 通过选育耐热品种可有效减轻高温胁迫对油菜生产的危害。伊淑丽 [ 19 ] 等利用温控温室筛选高温胁迫后品质稳定的油菜材料，他们从开花后30天起进行15天35℃~40℃的高温处理，与常温种植的相应材料种子油脂、蛋白质积累过程动态比较，筛选出了3个油脂积累过程受高温胁迫影响不明显的品质高温稳定型油菜材料。 耐热性不同的作物品种在高温胁迫下会存在许多生理生化指标的显著差异，可以作为评价作物耐热性的间接指标。王敏 [ 13 ] 等测定了16个油菜材料高温胁迫前后多个生理、生化指标的变化，筛选出组织浸提液电导率、叶片可溶性蛋白质含量、丙二醛含量、脯氨酸含量可作为油菜苗期耐热性鉴定的生理指标。 官春云 [ 20 ] 等则通过跟踪不同生育期油菜品种种子干重、油脂、蛋白质以及硫苷和芥酸累积动态，并分析了各品种种子成熟天数、成熟所经历的总积温、日均温，发现油菜角果发育成熟期的适宜日均温度为16℃~17℃，日均温度超过20℃即会引起高温逼熟。他们进而提出了在现有基础上进行品种改良，选育日均温度20℃以上仍能正常成熟的油菜，以解决高温逼熟的问题。
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user: 5. 高温胁迫影响油菜产量和品质的分子机制 作物对高温的感知和响应机制非常复杂，提高作物的耐热性有待于对作物耐热机制的深入阐述。Yu [ 21 ] 等采用甘蓝型油菜95K EST芯片分析了开花后20天油菜角果在高温胁迫后的转录表达谱，发现大量高温诱导的差异表达基因。上调的基因包括许多HSF/HSP转录本和其他高温相关的标记基因，如RoF2、DRYB2A、MbF1C和HSA32 [ 22 ] [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] ，该结果反映了油菜与其他植物重要耐热因子间的保守性。并且40.9% (511)的高温上调基因在角果皮和种子中同时受高温诱导表达，其中包括一些转录因子和潜在的发育调控因子。相反，高温下调的基因在角果皮和种子之间不同，主要与各个组织的生物学功能有关，如在角果皮中的硫甙代谢和种子中的类黄酮合成。此外，这些差异表达基因的很大一部分(三分之一)具有未知的功能。李超 [ 26 ] 等采用高通量测序技术分析了籽粒成熟期油菜高温胁迫下的基因表达谱，检测到的差异表达基因相当一部分与环境胁迫以及淀粉和糖代谢途径相关。Yan [ 27 ] 等运用蛋白质组学技术鉴定了一个油菜种子中被高温诱导表达提高的乙二醛酶蛋白GLYI，他们进一步利用酵母系统证明BnGLYI-3基因超表达可以提高酵母的耐热性，显示BnGLYI-3可能在油菜对高温的响应过程中具有重要作用。Zhu [ 28 ] 等对甘蓝型油菜Hsf基因家族的表达特性进行系统分析，发现大部分的BnaHsf家族基因受高温诱导表达上调。张腾国 [ 29 ] 等发现高温等逆境胁迫提高白菜型油菜谷胱甘肽还原酶基因GR2表达水平和酶活性。 种子发育期间夜间高温也会影响油脂积累。Zhou [ 30 ] 等比较了两个含油量差异显著的油菜品种在不同夜间温度下种子含油量和脂肪酸组成的变化。研究表明，夜间高温使种子含油量显著下降(高、低含油量品种分别下降了13.7%和18.9%)，并且饱和、单不饱和脂肪酸硬脂酸(C18:0)与油酸(C18:1)的比例下降，多不饱和脂肪酸如亚油酸(C18:2)与亚麻酸(C18:3)等的比值升高。对种子转录组谱的深入分析显示，夜间高温度抑制了赤霉素传导途径负调控因子DELLA基因的表达，从而增强种子内源赤霉素信号，并进一步显著上调脂肪酸β-氧化途径、乙醛酸循环途径等脂肪酸分解代谢相关基因的表达。研究揭示了夜间高温导致油菜含油量下降的分子机制。 DNA甲基化在调控作物抗逆过程中起重要作用。Gao [ 31 ] 等研究了热敏和耐热两个不同基因型甘蓝型油菜苗期高温胁迫下甲基化水平和胞嘧啶甲基化模式的变化。结果表明，在高温胁迫后，热敏感基因型油菜的甲基化比耐热基因型油菜增加更多。耐热基因型油菜中出现较多的DNA去甲基化现象，而热敏基因型油菜中出现较多的DNA甲基化。高温胁迫通过胞嘧啶甲基化的变化影响了大量的基因，表明这些基因可能在甘蓝型油菜的对高温胁迫的响应和耐受中起重要作用，该研究丰富了甘蓝型油菜适应高温胁迫的DNA甲基化调控机制。
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user: 6. 展望 在全球气温升高、高温胁迫灾害频现的大背景下，有关油菜高温热害的研究日益受到重视，经过国内外科学家的长期努力，已积累了诸多研究结果，初步了解了油菜对高温胁迫的反应和分子机制。但需要看到，这些结果多是零散的，距全面解析油菜耐热机理、在油菜育种、生产中发挥作用距离尚远。 油菜应答高温胁迫涉及复杂的生物学过程 [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] ，要切实有效的改良油菜耐热性状、提高高温条件下油菜产量和品种，仍有待于油菜高温胁迫分子遗传机制的深入探索。除此之外，建立高效精准的油菜生殖生长期耐热性鉴定技术、利用高通量测序技术等现代分子生物学手段大规模定位和克隆更多耐热基因、开发油菜耐热性状紧密连锁分子标记等都将为耐热油菜品种选育提供更为明确的方向。
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user: 摘 要 本文从菌源生境、防治效果、防病机制等方面对甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)在植物病害生物防治上的应用研究进展进行了综述，发现了目前研究中存在的问题，并提出了解决途径。 关键词 :甲基营养型芽胞杆菌，植物病害，生物防治 Copyright © 2018 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
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user: 1. 引言 Munusamy Madhaiyan [ 1 ] 等于2010年首次从水稻根际土壤中分离得到甲基营养型芽胞杆菌(Bacillus methylotrophicus)。甲基营养型芽胞杆菌严格好氧，革兰氏阳性，细胞呈杆状，宽0.63~0.64 μm，长1.8~2.7 μm，芽胞椭圆形，具运动性。甲基营养型芽胞杆菌为厚壁菌门，芽胞杆菌纲，芽胞杆菌目，芽胞杆菌科，芽胞杆菌属，广泛分布于自然界中，与枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的16S rRNA基因序列同源率为98.2%~99.2% [ 2 ]，是属于能利用甲醇等非C-C键低碳化合物的甲基营养菌(methylotrophy)中的一类细菌。 由于其抗病谱广、抗逆性强、对作物安全且环境友好，成为植物病害生防菌家族的后起之秀。华北制药集团爱诺有限公司于2016年获得农业部药检所首个甲基营养型芽胞杆菌9912母药及可湿性粉剂临时登记 [ 3 ]，登记对象为黄瓜灰霉病，9912是由沈阳生态所胡江春研究员为首的科研团队从辽宁渤海海域的海泥样品中成功筛选、分离出的一株海洋细菌，简称BAC-9912，多年田间试验证明BAC-9912对黄瓜灰霉病、番茄灰霉病、黄瓜晚疫病、番茄晚疫病、棉花黄枯萎病和苹果树腐烂病防治效果显著。 科研人员从不同生境分离筛选高拮抗菌株用于不同植物病害的防治试验，取得了较好的防治效果。
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user: 2. 菌源生境 2.1. 土壤生境 目前拮抗菌来源仍以土壤生境 [ 4 ] - [ 18 ] 为主，而且相对于植物根围等区域，植物根际结构更为复杂，其与植物根系通过物质交流而建立更加紧密的互作关系，根际土壤内细菌为争夺有利生态位点具有更强的竞争能力、生存能力和防病促生能力 [ 19 ]，因而有更好的生防应用潜力。 2.2. 植物内生 植物内生细菌按照它们的作用类型可分为两类：促进生长，该类细菌具有提高宿主植物潜在生长活性的特性 [ 20 ] [ 21 ] [ 22 ]，可开发成生物肥料；病害防治，它们可以抑制病原物的侵染 [ 23 ] - [ 29 ]，具有应用于植物病害生物防治的巨大潜力。 2.3. 水域生境 占地球面积71%的海洋环境非常复杂，生活在其中的微生物由于其生活环境异于陆生生物，造成其产生的活性物质与陆生微生物有明显的不同，其中许多海洋微生物的次级代谢产物对农业病虫害有很好的抑制作用 [ 3 ] [ 30 ] [ 31 ] 。 2.4. 其它生境 也有一些生防细菌是从植物组织表面、有机物料里分离筛选得到的 [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] 。
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user: 4. 主要生防作用机制 4.1. 抗生作用 抗生作用是指一种生物产生某些抗生物质或有毒代谢产物，对另一种生物具有直接的抑制作用而使其群体生长受到抑制，但本身不受负面影响的现象。刘伟 [ 43 ] 等从福建、四川、陕西等地耕作土壤中筛选对番茄灰霉病菌、稻瘟病菌、辣椒疫霉病菌、苹果轮纹病菌、小麦根腐病菌、棉花枯萎病菌有较强生防效果的甲基营养型芽胞杆菌菌株LW-6-1，该菌株无菌发酵液对番茄灰霉病菌和稻瘟病菌菌丝生长和孢子萌发都有很强的抑制效果。殷晓敏 [ 8 ] 等从西瓜根际分离获得一株甲基营养型芽胞杆菌菌株XG-1，研究发现XG-1培养液处理病原菌菌丝体和分生孢子培养液后，可使尖孢镰刀菌小型分生孢子由椭圆形致畸膨大数倍后成球形，使病原菌大型分生孢子由镰刀形畸变成葫芦串形，使菌丝体致畸膨大成串珠状，同时使分生孢子在合适的条件下不能萌发或萌发后生长缓慢，产生很短的芽管，而失去侵染力。 生防菌的抗生作用通常由其产生的抗生物质来实现，抗生物质是指微生物(尤其是放线菌)在生长过程中所产生的低分子质量的次生代谢产物，在较低浓度下能抑制其它生物的生长或将其杀死的活性物质。生防细菌产生的抗菌化合物可以分为抗生素、嗜铁素和细菌素三种类型。细菌素可以定义为非复制性的抗菌物质，这类物质对亲缘关系相似的细菌具有特异性的抑制效果。在形态和结构上，细菌素分高分子质量蛋白质颗粒和低分子量多肽类及核苷酸类似物两大类 [ 44 ] 。王玉霞 [ 45 ] 等从黑龙江省鹤岗地区玉米根围冻土中分离得到甲基营养型芽胞杆菌菌株wswshg-10，其能够分泌几丁质酶、纤维素酶、蛋白酶、嗜铁素、吲哚乙酸、抗菌蛋白等多种活性物质，抑制烟草角斑病菌、玉米茎基腐病菌、黄瓜枯萎病菌、大豆菌核病菌、水稻恶苗和稻曲病菌、番茄灰霉病菌以及刺五加根腐病菌生长，抑制率74.3%~89.2%。武利勤 [ 29 ] 等从霍山石斛中分离内生菌甲基营养芽胞杆菌菌株RA，其可以产生IAA、嗜铁素、蛋白酶、表面活性剂和生物膜。吕倩 [ 31 ] 等从南海深海分离得到甲基营养型芽胞杆菌菌株，并从菌株的摇瓶发酵液中分离纯化得到3个脂肽类化合物(bacillomycin Lc类脂肽)，其具有较强抑制黄瓜炭疽病菌、立枯丝核菌、黄瓜枯萎病菌等植物病原真菌的活性。魏新燕 [ 30 ] 等从海水中分离筛选得到甲基营养型芽胞杆菌菌株 BH21，通过排油圈法确定菌株BH21能够产生具有表面活性的代谢产物，以脂肽类物质相关基因的特异序列为引物进行菌株抑菌活性成分相关基因的扩增，确定该菌株中含有ituA、ituB、ituC、ituD、fenD、srfAB和yndJ等7种脂肽物质的合成基因；利用盐酸沉淀和甲醇抽提法获得了BH21发酵液中脂肽粗提物，通过牛津杯法确定该脂肽粗提物具有明显抑制灰霉菌菌丝生长的能力，抑制率达到73.9%。王洪梅 [ 13 ] 等从土壤中分离筛选出一株对番茄青枯病病原菌有较强抑菌效果的甲基营养型芽胞杆菌菌株N5，菌株N5具有产生铁载体、β-1，3-葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶以及多种脂肽类抗菌物质的能力。Abdulwareth Abdulkader Almoneafy (阿伯德尔) [ 18 ] 从番茄和马铃薯的根际土壤中分离得到甲基营养型芽胞杆菌菌株H8，在温室条件下，用该菌株处理的番茄植株，番茄青枯病(TBW)的发病率减少89.0%，并能有效抑制土传真菌赤霉病菌，瓜果腐霉菌和立枯丝核菌，番茄株高增加43.7%，干重增加91.55%。生物活性机制研究显示，H8菌株能能产生吲哚乙酸和铁载体，具有溶解磷的能力，具有合成脂肽的基因(bmyB，fenD，ituC，srfAA和bacA)，这些基因分别表达合成Bacillomycin，Fengycin，Iturin，Surfactin和Bacilysin。 4.2. 竞争作用 竞争作用指拮抗细菌与植物病原菌在土壤中共同生存，拮抗细菌为了生存，与病原菌竞争营养物质、物理位点、生态位点及氧气等。植物根部病害发生与否及危害程度与根际微生物的群落结构有直接的关系，根际微生物是受植物根系影响最大的土壤微生物群体，也是反映作物生长状况的重要参考指标。例如细菌真菌比值(B/F)是土壤微生物生态的重要指标，常被用来指示微生物群落结构的变化 [ 46 ]，B/F与土壤肥力呈正相关，高B/F土壤的抑病能力更强 [ 47 ] [ 48 ] 。娄义 [ 49 ] 等通过种子萌发和盆栽促生试验研究3株芽胞杆菌Bs10、Ba12和Bl10对番茄根域微生物区系的调节作用，发现处理后土壤中细菌数量和比例显著增加，真菌数量和比例明显减少；与对照相比，土壤微生物区系优势菌数量发生改变，优势甲基营养型芽胞杆菌在番茄根区、根表土壤中和根内的数量大幅提高；病原真菌腐皮镰刀菌和尖孢镰刀菌在根区和根表土壤中的数量显著减少；推知芽胞杆菌对根系微生物区系的调节作用是其发挥防病促生作用的重要机制之一。 生防菌株发挥作用的第一步就是要建立起一定的种群密度 [ 50 ]，其定殖能力是其发挥作用的先决因素。周登博 [ 33 ] 等从天然饼肥发酵液中分离得到甲基营养型芽胞杆菌菌株4-L-16，该菌株在香蕉根际土壤和植株体内具有良好定殖能力，接种第10天土壤中菌量达到最大值为6.67 × 10 6 cfu/g，随时间延长，定殖数量逐渐降低，25天后数量趋于稳定，为2.05 × 10 6 cfu/g。香蕉植株内定殖以根系最多，为4.38 × 10 3 cfu/g。刘海洋 [ 5 ] 等将带四环素抗性的pGFP78质粒转入到甲基营养型芽胞杆菌菌株AL7中，分析了菌株AL7在棉花根围土壤中、根部组织内的定殖情况。结果表明菌株AL7能够在棉花根围土壤中及根系组织内长期定殖，接种5 d时定殖数量最高，达6 × 10 6 cfu/g土，接种80 d后根围土壤中的定殖数量仍维持在2 × 10 6 cfu/g，根系组织内的定殖量为6 × 10 4 cfu/g。利用激光共聚焦显微镜观察验证，接种7 d后菌株AL7已经进入到棉花根部的中柱鞘细胞，能够在棉花根内大量定殖。黄霄 [ 34 ] 等通过盆栽试验测定甲基营养型芽胞杆菌菌株BM-24菜籽饼发酵液对粉蕉苗期枯萎病的防效时发现菜籽饼能显著提高菌株BM-24定殖效果，接种45 d时活菌数量提高了5.0倍。刘伟 [ 17 ] 等从健康烟草根际土壤中分离得到1株抗烟草青枯病菌活性较好的甲基营养型芽胞杆菌菌株LW-4，其可定殖于烟草根际土壤，在灭菌混配营养土中，烟株接种20 d，40 d，定殖菌量分别为4.57 lg(cfu/g) (每克样品中含有的细菌菌落总数的对数)和5.23 lg(cfu/g)，60 d时达最高值5.69 lg(cfu/g)，60 d后根表土壤中的定殖菌量开始下降，至80 d时，定殖菌量为5.18 lg(cfu/g)，仍可维持一个较高水平。
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user: 5. 讨论 甲基营养型芽胞杆菌为最近几年生防细菌研究热点之一，目前的研究大多停留在实验室阶段，真正开发成产品应用到田间的比较少。也有研究显示室内平板对峙实验中的抑制率和田间防治效果并不成正相关 [ 32 ]，主要原因可能是受其在根围土壤或者根系、叶片等植物组织内外的定殖能力的制约，另外还可能因为实验室和田间是两个差异性很大的生境，不同生境下拮抗菌产生抗生物质的种类和数量可能有很大的不同，影响其防治效果。在诸多制约拮抗菌发挥抗病作用的因素中，营养条件可能是关键因素之一，研究人员发现将拮抗菌加入其赖以生存繁殖的营养物质可明显提高其防治效果 [ 34 ] 。这为我们生产更高效的生防菌剂或生物药肥指明了方向，就是在加入生防菌的同时加入其赖以生存繁殖的有机无机营养物质。然而，对添加哪些营养物质、添加数量及比例对生防菌功能发挥的影响研究较少，从某种程度上限制了生防产品在田间的推广应用，亟须加强这方面的研究。 另外，在某些定殖能力相对较差的生防菌株中转入与定殖相关的基因可使其定殖能力显著增强。例如在荧光假单胞菌株WCS307中转入SSS基因片段后，与野生型相比，其在番茄根尖定殖能力增强16~40倍 [ 51 ] 。对于定殖能力不强的菌株，通过基因工程方法增强其定殖能力，不失为提高生防菌防效的有效途径之一。