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user: 2. 材料与方法 2.1. 试验材料 以从和田、阿图什、新和、喀什、阿拉尔等地采集的82份无花果种质的叶片为试验材料，采集地点及生境信息见表1，各材料的名称及来源情况见表2。 Table 1 Location and habitat information of fig germplas 采集地 经度 纬度 海拔(m) 取样数目 材料名称 阿图什市松塔克乡阿孜干村(无花果园) 76˚09'56.44“ 39˚41'51.48“ 1311 1 喀什1号 阿图什市松塔克乡塔克提云村 76˚09'04.81“ 39˚42'46.10“ 1332 1 喀什2号 喀什市浩罕乡夏本帕提夏(10村) 76˚03'46.70“ 39˚30'34.14“ 1317 1 喀什3号 喀什市浩罕乡沙普艾日克村 76˚04'08.09“ 39˚32'38.52“ 1340 1 喀什4号 喀什市浩罕乡夏本帕提夏(10村) 76˚02'44.76“ 39˚31'15.37“ 1336 1 喀什5号 喀什市佰什克热木乡4村 76˚07'21.81“ 39˚32'52.32“ 1289 1 喀什6号 阿图什市疏附县阿瓦提乡亚郎(2村) 76˚06'10.80“ 39˚30'10.48“ 1300 1 喀什7号 阿图什市北山戈壁产业科技示范区 76˚10'29.09“ 39˚43'58.37“ 1348 11 阿图什1-11 新和排先拜扎乡阿热买里村 82˚36'39.19“ 41˚31'08.75“ 1021 5 新和1-5 和田肖尔巴格乡 79˚53'46.59“ 37˚06'31.92“ 1376 10 和田1-10 和田拉依喀乡库目受木乡(无花果王) 79˚44'14.53“ 37˚04'27.99“ 1421 2 无花果王 塔里木大学园艺试验站 81˚17' 40˚32' 995 3 塔大1-3 塔里木大学园艺试验站 81˚17' 40˚32' 995 28 移栽1-1~5-7 塔里木大学园艺试验站 81˚17' 40˚32' 995 16 扦插 表1. 无花果采集地点和生境信息 Table 2 Name and source of test fig germplas 材料序号 DNA编号 材料名称 来源 材料序号 DNA编号 材料名称 来源 1 H1 和田1 和田 42 A16 和田不知道I 和田 2 H10 和田10 和田 43 A24 和田不知道II 和田 3 H11 塔大1 阿拉尔 44 A25 和田品种5 和田 4 H12 塔大2 阿拉尔 45 A29 B1011 阿图什 5 H13 塔大3 阿拉尔 46 A30 布兰瑞克 阿图什 6 H14 和田无花果王 和田 47 A31 青皮 阿图什 7 H15 和田拉依喀乡 和田 48 A32 日本紫果1 阿图什 8 H16 新和1 新和 49 A34 第4行1 阿图什 9 H17 新和2 新和 50 A36 美丽亚 阿图什 10 H18 新和3 新和 51 A37 第10行 阿图什 11 H19 新和4 新和 52 A38 和田品种2 和田 12 H2 和田2 和田 53 A43 和田品种8 和田 13 H20 新和5 新和 54 A44 和田品种8 和田 14 H21 喀什1 喀什 55 A48 移栽1-1 阿拉尔 15 H22 喀什2 喀什 56 A49 移栽1-2 阿拉尔 16 H23 喀什3 喀什 57 A50 移栽1-3 阿拉尔 17 H24 喀什4 喀什 58 A51 移栽1-4 阿拉尔 18 H25 喀什5 喀什 59 A52 移栽1-5 阿拉尔 19 H26 喀什6 喀什 60 A53 移栽1-6 阿拉尔 20 H27 喀什7 喀什 61 A54 移栽1-7 阿拉尔 21 H28 阿图什1 阿图什 62 A55 移栽2-1 阿拉尔 22 H29 阿图什2 阿图什 63 A56 移栽2-2 阿拉尔 23 H3 和田3 和田 64 A57 移栽2-3 阿拉尔 24 H30 阿图什3 阿图什 65 A58 移栽2-5 阿拉尔 25 H31 阿图什4 阿图什 66 A59 移栽2-6 阿拉尔 26 H32 阿图什5 阿图什 67 A60 移栽2-7 阿拉尔 27 H33 阿图什6 阿图什 68 A61 移栽3-3 阿拉尔 28 H34 阿图什7 阿图什 69 A62 移栽3-4 阿拉尔 29 H35 阿图什8 阿图什 70 A63 移栽3-5 阿拉尔 30 H36 阿图什9 阿图什 71 A64 移栽3-6 阿拉尔 31 H37 阿图什10 阿图什 72 A65 移栽3-7 阿拉尔 32 H38 阿图什本地 阿图什 73 A66 移栽4-1 阿拉尔 33 H4 和田4 和田 74 A67 移栽4-2 阿拉尔 34 H5 和田5 和田 75 A68 移栽4-3 阿拉尔 35 H6 和田6 和田 76 A69 移栽4-4 阿拉尔 36 H7 和田7 和田 77 A70 移栽4-5 阿拉尔 37 H8 和田8 和田 78 A71 移栽4-6 阿拉尔 38 H9 和田9 和田 79 A72 移栽5-1 阿拉尔 39 A1 阿拉尔本地 阿拉尔 80 A75 移栽5-4 阿拉尔 40 A10 阿图什本地 阿图什 81 A77 移栽5-6 阿拉尔 41 A12 阿图什本地 阿图什 82 A78 移栽5-7 阿拉尔 表2. 试验种质名称及来源 2.2. DNA的提取 叶片DNA的提取分为研磨、裂解、萃取、沉淀、洗脱、干燥、溶解7个步骤，详细过程参考刘春艳等 [ 11 ] 的提取方法。 2.3. DNA的鉴定 核酸浓度用NanDrop2000 Spectrophotometer测定，根据A260/A280或 A260/A230值判断DNA纯度，DNA分子片段的长度及降解程度可通过0.8%琼脂糖凝胶电泳，电泳液为0.5 × TBE缓冲液进行检测，电泳结果在BIO-RAD ChemiDocTM XRS + 中观察照相。 2.4. PCR扩增反应与毛细管电泳 用8对引物对收集的82份材料进行分析，引物序列见表3。PCR体系由2.0 μL 10 × Buffer，0.4 μL 10 mmoldNTP，0.2 μL Primer-F，0.2 μL Primer-R，0.2 μL DNA聚合酶，5.0 μL模板DNA，7.0 μL ddH 2 O组成，总体系为15 μL。反应在C1000TMThermal Cycler中进行，PCR扩增程序为：94℃预变性4 min，94℃变性30 s，56℃复性30 s，72℃适温延伸40 s，34个循环，最后4℃保存 [ 11 ] 。DNA扩增片段通过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测，Bio-Rad ChemiDocTM XRS + 凝胶成像系统照相，选用Trans5K DNA Marker判断DNA扩增片段大小。 Table 3 Primer sequence and number of base 编号 Primer sequence (5’-3’) bp 退火温度(℃) 片段Size(bp) WHG-1-F ACTAGACTGAAAAAACATTGC 21 56 192 WHG-1-R TGAGATTGAAAGGAAACGAG 20 WHG-2-F GCTTCCGATGCTGCTCTTA 19 56 172 WHG-2-R TCGGAGACTTTTGTTCAAT 19 WHG-3-F GATATTTTCATGTTTAGTTTG 21 56 136 WHG-3-R GAGGATAGACCAACAACAAC 20 WHG-4-F CCAAACTTTTAGATACAACTT 21 56 218 WHG-4-R TTTCTCAACATATTAACAGG 20 WHG-5-F ACCAATCCAAATAATAATCC 20 56 140 WHG-5-R ACACGCTTACTAGAATTACC 20 WHG-6-F AGGCTACTTCAGTGCTACA 19 56 313 WHG-6-R GCCATAAGTAATAAAAACC 19 WHG-7-F CACAATCAAAATAGTTACCG 20 56 150 WHG-7-R AGCGAAGACAGTTACAAAGC 20 WHG-8-F GTGGCGTCGTCTCTAATAAT 20 56 179 WHG-8-R TATTCTATGCTGTCTTATGTCA 22 表3. 引物序列及碱基数目 PCR扩增产物用NGS Fragment Analyzer™进行毛细管电泳法检测，毛细管电泳所用胶根据样品数而定，若是1F + 7GP模式，即插入染料体积为1.25 μL，分离胶的体积为25 ml，结果用其配备的PRO Size™分析软件进行分析 [ 12 ] 。 2.5. 遗传相似系数计算与绘制DUPGMA聚类图 根据引物扩增得到的SSR标记信息，转化为“01”矩阵，有带记为1，无带为0，利用NTsys 2.10e聚类分析软件进行遗传多样性分析，计算各材料间的相似系数，聚类分析按基于Nei-Li遗传相似系数按不加权成对数算术平均法(Unweighted pair group method with arithmetic，UPGMA)进行，绘制聚类图 [ 13 ] 。