Projet ANR-07-BLAN-0037 – prohemodroso : Hematopoietic progenitors in Drosophila. Micro-environment and fate studies in normal and following parasitism.
Programme : Blanc (BLANC) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : Madame Michèle CROZATIER (UNIVERSITE PAUL SABATIER TOULOUSE 3)
Partenaires : Université de Toulouse III - Paul Sabatier
Montant : 300000.0 euros
Date de début : 2007
Durée : 36 mois
Résumé : "L'immunité innée confère à tous les organismes multicellulaires une défense immédiate contre les pathogènes. La Drosophile s'est imposée ces dernières années comme un organisme modèle pour l'étude des processus d'hématopoïèse et de réponse immunitaire cellulaire, et de leur évolution au sein des métazoaires. L'hématopoïèse de la drosophile se déroule en deux phases distinctes, embryonnaire puis larvaire. L'hématopoïèse larvaire (définitive ) intervient au sein d'un organe spécifique appelé la glande lymphatique (LG). Les précurseurs (pro-hémocytes) embryonnaires et larvaires donnent naissance à des plasmatocytes (macrophages), qui possèdent des propriétés morphologiques et de phagocytose comparables aux monocytes et granulocytes des mammifères, et des cellules à cristaux impliquées dans le processus de mélanisation. Un troisième type cellulaire, les lamellocytes, sont produits uniquement par la LG, et sont impliqués dans l'encapsulation de corps étrangers trop gros pour être phagocytés. Les lamellocytes ne se différencient cependant pas dans des conditions de développement normal, mais uniquement en réponse à des pathogènes particuliers, tels que des guêpes parasites. -  Notre étude de l'hématopoïèse de la drosophile est issue de notre observation que le facteur de transcription Collier (Col), l'orthologue drosophile d' Early B-Cell factor (EBF) mammifère, est exprimé très tôt au cours de la formation de la LG dans l'embryon. Cette expression se restreint ensuite à un petit groupe de cellules préfigurant un centre dit « signalisateur » , le PSC, préalablement identifié dans les larves de troisième stade pour son expression de Serrate, un ligand de Notch, mais dont la fonction restait inconnue (Crozatier et al., 2004; Lebestky et al., 2003). Nous avons ensuite montré que l'activité de Col dans le PSC est nécessaire au contrôle de la balance entre précurseurs multipotents et hemocytes différenciés. Les cellules du PSC maintiennent, de façon non cellulaire autonome, l'activation de la voie JAK/STAT dans les pro-hemocytes, empêchant leur différenciation prématurée et le caractère multipotent nécessaire à leur différenciation en lamellocytes en réponse au parasitisme. -  Le rôle clé du PSC a révélé qu'il existe chez les insectes, comme chez les vertébrés, un micro-environnement spécifique (niche) maintenant la capacité des cellules multipotentes (souches) à s'auto-renouveler tout en assurant un taux de différenciation contrôlé(Krzemien, 2007). L'observation récente qu' EBF2 est exprimé dans les ostéoblastes immatures, une composante de la niche des cellules hématopoïétiques souches (HSC) (Calvi et al., 2003; Kieslinger et al., 2005; Wilson and Trumpp, 2006) et M. Kieslinger, communication personnelle) renforce le parallèle entre le PSC de Drosophile et la niche des HSC chez les mammifères. -  Les objectifs de notre programme de recherche comprennent : -  a)	Déterminer s'il existe des « cellules souches hématopoïétiques » dans la LG de drosophile, et si oui, s'il existe des « niches » secondaires chez l'adulte. -  b)	Décrypter le rôle de la signalisation JAK/STAT dans le maintien de l'homéostasie hemocytaire. -  c)	Identifier de nouveaux gènes spécifiques du PSC, des pro-hemocytes et des lamellocytes sélectionnés par des analyses de transcriptome et bio-informatiques.  -  d)	Etudier la fonction d'une sélection des nouveaux gènes identifiés, tenant compte des parallèles possibles avec la fonction d'EBF2 dans les ostéoblastes de souris, dans la communication entre PSC et précurseurs hématopoïétiques. -  e)	Développer une nouvelle méthode de ChiP on chip pour Identifier des cibles directes de Collier dans le PSC. -  Méthodologie : Le programme de recherche proposé met en ¿uvre les techniques les plus récentes de génétique inverse et transgénèse chez la drosophile - recombinaison homologue, interférence à l'ARN (dsRNA), transgénèse par recombinaison « site spécifique » et MARCM. Notre démarche expérimentale se base sur l'intégration sy