Projet ANR-06-JCJC-0143 – TGFtolérance : Mechanisms of Immune tolerance by Transforming Growth Factor Beta Signaling
Programme : Programme "Jeunes chercheuses et jeunes chercheurs" (JCJC) 2006
Année de financement : 2006
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONALE DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE ADR5 LYON (INSTITUT NATIONALE DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE ADR5 LYON)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 150000.0 euros
Date de début : 2006
Durée : 48 mois
Résumé : Contexte scientifique  Le rôle crucial du transforming growth factor beta (TGF-?) dans le maintien de la tolérance a été mis en exergue dans les années 90 par la génération de souris déficientes pour cette cytokine. Les animaux TGF-?1-/- développent des symptômes auto-immuns sévères engendrant leur mort dès quatre semaines. Cependant, les effets pléïotropiques du TGF-? au sein, mais aussi en dehors, du système immunitaire, rendent l'étude des mécanismes d'action de cette cytokine très difficile. Par ailleurs l'activation lymphocytaire T est associée à chute d'expression membranaire du TGF-? RII, un de deux composants du récepteur au TGF-?, décrit comme essentiel à l'initialisation de la voie de signalisation du TGF-?. De ce fait, des animaux exprimant une forme dominante négative de TGF-?RII (DN TGF-?RII) sous le contrôle de promoteurs spécifiques des lymphocytes T ont été générés. Ces animaux ne développent qu'une très faible pathologie après 6 mois de vie. Cette différence de phénotype avec les souris TGF-?1-/-.peut s'expliquer Le maintien de l'expression de la forme sauvage du TGF-?RII chez ces animaux DN-TGF-?RII et donc d'un signal partiel via leTGF-?. Bien que ce modèle ne soit pas suffisant pour l'analyse des effets de la voie de signalisation du TGF-? sur les cellules T, néanmoins il suggère que le TGF-? pourrait jouer un rôle direct dans l'activation et homéostasie des cellules T. Fort de ces observations, nous venons de générer des souris présentant une ablation totale de la voie signalisation du TGF-? par une délétion spécifique et restreinte du TGF-?RII au niveau de leurs cellules T. Ces animaux, permettant d'adresser proprement le rôle du TGF-? au niveau des lymphocytes T CD4 et CD8, développent des symptômes auto-immuns sévères, similaires voire plus intenses que ceux des souris TGF-?1-/-, conduisant à leur mort à 3 semaines de vie. L'analyse des compartiments lT démontre une absence de cellules régulatrices Foxp3+ (TR) à la périphérie, et de cellules NKT CD1d thymiques et périphériques. Nous avons observé l'expansion d'une population de cellules T exprimant une large panoplie de marqueurs caractéristiques de cellules NK, mais présentant un développement CD1d indépendant. De façon intéressante, cette population NKT que nous qualifions de NKT non-conventionnels, présente une grande capacité à tuer des lignées tumorales. Enfin, nos premiers résultats suggèrent que la voie signalisation du TGF-? contrôle un programme de différentiation cytotoxique et pro-inflammatoire au niveau des lymphocytes T qui, lorsqu'il n'est pas réprimé, conduit à une rupture de tolérance au soi. Description du projet et méthodologie  En se basant sur ces observations, nous proposons d'analyser les mécanismes moléculaires et cellulaires responsables du large spectre des perturbations immunologiques engendré par l'absence de voie signalisation du TGF-? dans les cellules T. Notre groupe se focalisera sur les mécanismes responsables des changements d'homéostasie des cellules T Foxp3+, des NKT conventionnels en réalisant des expériences de délétion du TGF?-RII in vitro, via le système Tat-CRE, associées à des transferts soit, de moelle osseuse, soit de cellules T ou différents précurseurs de cellules T. Des analyses de type puce à ADN, protéiques ICAT et DIGE et immunoprécipitation chromatique seront parallèlement réalisées, permettant l'identification de facteurs protéiques dépendants du TGF-? essentiels au développement des TR et NKT. Nos travaux suggérant que le TGF-? pourrait contrôler le seuil d'activation du TCR, les voies de signalisation via le TCR, en l'absence ou présence de la signalisation via le TGF-? seront comparées, au moyen de souris exprimant un TCR spécifique d'antigène, OT-I et/ou OT-II, et des peptides de différentes affinités pour un même TCR. Enfin, des cellules NKT non- conventionnelles seront générées in-vitro; par le système Tat-CRE que nous avons développé; et leurs effets sur la croissance des tumeurs solides et/ou li