Projet ANR-07-MIME-0006 – EBORESISTANCE : Bases moléculaires de la résistance à l¿infection par le virus Ebola.
Programme : Microbiologie, immunologie et maladies émergentes (MIME) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION DE LYON (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION DE LYON)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 400000.0 euros
Durée : 48 mois
Résumé : L¿infection par le virus Ebola provoque chez l¿homme des fièvres hémorragiques sévères et rarement, des infections asymptomatiques comme chez la plupart des mammifères qui ne répliquent pas le virus. 
Les cobayes infectés par le virus Ebola développent une infection asymptomatique alors qu¿elle devient létale avec un virus adapté obtenu après plusieurs passages. La protéine structurale VP24 est l¿élément clé responsable de l¿acquisition de cette virulence. Nos résultats préliminaires montrent que le virus adapté, contenant des mutations de la protéine VP24 acquises au cours des passages successifs, est compétent pour la réplication chez l¿animal et sur culture de macrophages primaires de cobayes, alors que le virus sauvage ne l¿est pas. Notre programme de recherche consiste à caractériser les mécanismes moléculaires qui contrôlent la réplication du virus Ebola pour mieux comprendre les infections asymptomatiques humaines.
//Nos premiers résultats sur les cobayes indiquent que la réplication du virus Ebola est dépendante de l¿interaction de la protéine VP24 avec un ou des facteur (s) cellulaire(s) non encore identifié(s). Notre programme de recherche consiste à identifier le ou les facteurs cellulaires interagissant avec la VP24, ainsi que la ou les étapes du cycle viral impliquées dans ces interactions. Les macrophages semblent être les seules cellules à pouvoir discriminer les virus sauvage et adapté selon la nature de leur VP24. Des macrophages, ainsi que d¿autres cellules de cobayes seront analysées pour leur capacité à répliquer des virus Ebola sauvages ou mutés pour le gène VP24. Une série de virus recombinants mutés ponctuellement pour la VP24 sera générée par génétique inverse. La réplication de chaque mutant sera analysée par titrage viral, immuno blot, immunofluorescence, RT-PCR quantitative et microscopie électronique.
L¿identification des partenaires de la protéine VP24 sera réalisée par plusieurs approches : la co immunoprécipitation avec des agents pontants réversibles et le criblage par double hybride en levure. Cette approche par crible sera réalisée avec les protéines VP24 des virus Ebola Zaïre, Ebola Reston et Marburg contre une banque d¿ADN complémentaire de rate humaine. Les clones positifs seront identifiés après analyse des banques de données et l¿interaction sera confirmée par co-précipitation. Des mutations abolissant ces interactions seront également introduites dans les virus recombinants afin d¿étudier leur impact sur le cycle viral. 
Dans ce projet, l¿analyse détaillée de la structure sera réalisée par des techniques de mutagenèse. Nos tentatives de détermination de la structure cristallines étant bloquées par la formation d¿agrégats insolubles, d¿autres essais seront réalisés lorsque le ou les partenaires cellulaires de la VP 24 seront identifiés.
//Nous comptons sur ce programme pour élucider les mécanismes moléculaires impliqués dans la résistance au virus Ebola. Nous estimons que d¿importantes données seront obtenues sur le cycle réplicatif du virus et que les partenaires cellulaires intervenant dans la réplication du virus seront identifiés. Nous pensons que les virus recombinants générés nous permettrons de dresser une carte fonctionnelle de la VP24 et des partenaires cellulaire mais aussi nous permettrons de démontrer notre concept suggérant que les infections hautement pathogènes peuvent être converties en infection asymptomatique de façon similaire aux rares cas humains asymptomatiques. Ces résultats apporteront un éclairage nouveau dans le domaine de la biologie cellulaire et de la virologie et seront extrêmement important pour la caractérisation de cibles pouvant inhiber la propagation de cette infection et ainsi servir de base pour l¿élaboration d¿antiviraux.