Projet ANR-07-PHYS-0009 – DCSPA : ROLE MOLÉCULAIRE DU HLA-B27 AU COURS DE LA SPONDYLARTHITE, DU MODÈLE ANIMAL À LA PATHOLOGIE HUMAINE
Programme : Physiopathologie des maladies humaines (PHYSIO) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION DE PARIS V (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION DE PARIS V)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale; Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 343836.0 euros
Durée : 48 mois
Résumé : Les spondylarthrites (SpA) combinent inflammation ostéo-articulaire et manifestations extra-articulaires. Leur association au HLA-B27 est l'une des plus fortes qui existe entre CMH et maladies, mais son mécanisme reste inconnu. Les rats transgéniques pour le HLA-B27 developpent une affection semblable aux SpA. Dans ce modèle, les lymphocytes T CD4+ sont pathogènes, contredisant les théories spécifiques d'antigène classiques, du "peptide arthritogène", et du "mimétisme moléculaire", qui demeurent non concluantes. Contrastant avec l'expansion de lymphocytes T CD4+, les cellules dendritiques (DCs) de rats HLA-B27 ont une capacité réduite à stimuler les lymphocytes T au repos, qui pourrait induire une rupture de tolérance. Nos objectifs sont d'élucider le mecanisme moléculaire responsable de l'anomalie fonctionelle des DC de rat HLA-B27, de déterminer si de telles anomalies existent chez les patients, et d'identifier des cibles permettant de corriger l'anomalie fonctionnelle.//Notre but est d'élucider par quel mécanisme moleculaire le HLA-B27 perturbe la fonction des DC chez le rat transgénique.
Nous avons montré que le HLA-B27 exprimé à la surface des DC, diminuait la formation d'une synapse immunologique indépendante d'antigène, en interférant avec l'organisation moléculaire de la membrane et/ou le cytoquelette. L'engagement de molécules de costimulation entre DC et cellules T naïves est perturbé, d'où pourrait résulter un déficit de stimulation des cellules T régulatrices (Treg). Nous étudierons la dynamique du cytosquelette et l'organisation moléculaire de la membrane des DC de rats transgénique HLA-B27 et de rats témoins (HLA-B7 et non trangéniques), par l'isolement des radeaux lipidiques, la coimmunoprécipitation, le pull-down de GTPases, la microscopie confocale, et la vidéomicroscopie. Nous étudierons le protéome et le transcriptome pour identifier les voies moléculaires specifiquement perturbées dans les DC de rat HLA-B27. Des "small inhibitory" (si) ARN serviront à valider les cibles. Nous étudierons les conséquences fonctionnelles sur les lymphocytes Treg chez le rat. Nous validerons les résultats obtenus sur les DC de rat HLA-B27, par des études chez l'homme. Nous caractériserons les populations de DC myéloïdes et plasmacytoïdes du sang par cytométrie de flux et comparerons la fonction des DC dérivés de monocytes, entre un groupe de SpA HLA-B27+ et deux groupes de témoins sains HLA-B27+ et HLA-B27-. Les études fonctionnelles consisteront en des stimulations syngéniques et allogéniques des cellules T. La synapse immunologique indépendante d'antigène sera étudiée par la formation de conjugués entre DC et cellules T en cytométrie, et l'induction d'un signal calcique dans les cellules T en vidéomicroscopie. Des études protéomiques et transcriptomqiues seront réalisées sur les échantillons de DC dérivées de monocytes, et les siRNA serviront à valider les resultats au niveau fonctionnel.//Les SpA sont l'une des maladies rhumatismales invalidantes les plus fréquentes. Leur association au HLA-B27 reste un mystère.
L'anomalie fonctionnelle des DC de rat transgénique HLA-B27, que nous avons mise en évidence devrait nous permettre d'identifier une voie moléculaire dont la perturbation est liée à l'expression du HLA-B27. Nos études systématiques utilisant des outils modernes et puissants, comme la transcriptomique et la protéomique, devraient déterminer si, comme nous le supposons, le HLA-B27 interfère avec la mobilisation du cytosquelette, peut-être en raison de son association particulière à des microdomaines mebranaires tels que les radeaux lipidiques. De plus, l'utilisation de siRNA, devrait nous permettre de corriger l'anomalie fonctionnelle due au HLA-B27, et conduire directement à de nouvelles approches thérapeutiques pour les SpA.