Projet ANR-06-BLAN-0065 – MELUV-PROFIL : Gene Expression Profiling if in Vivo Ultraviolet-irradiated Human Melanocytes
Programme : Programme blanc (BLANC) 2006
Année de financement : 2006
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONALE DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE ADR2 MARSEILLE (INSTITUT NATIONALE DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE ADR2 MARSEILLE)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 220000.0 euros
Date de début : 2006
Durée : 36 mois
Résumé : I-Justification du programme de recherche.  L'incidence des cancers cutanés augmente de 7% par an et double tous les 10 ans. Le rayonnement UV de la lumière solaire semble être le principal facteur étiologique dans l'apparition des carcinomes cutanés et des mélanomes malins.  La pigmentation cutanée est la conséquence d'un processus de différenciation mélanocytaire qui est caractérisé par une augmentation de la synthèse des pigments mélaniques, ou mélanogenèse. Dans des conditions physiologiques, la différenciation mélanocytaire et donc la pigmentation cutanée sont stimulées principalement par le rayonnement ultraviolet de la lumière solaire. Par ailleurs, les carcinomes et les mélanomes apparaissent beaucoup plus fréquemment chez les individus à peau claire, démontrant ainsi le rôle photo-protecteur fondamental de la pigmentation mélanique cutanée.  II-But du programme de recherche.  Notre projet a pour but de disséquer les événements moléculaires qui contrôlent la différenciation mélanocytaire et donc la synthèse des pigments photo-protecteurs que sont les mélanines.  III- Programme de Recherche.  Dans l'épiderme, les mélanocytes qui représentent seulement 2% de cellules épidermiques sont en contact étroit avec les kératinocytes au sein d'une structure tridimensionnelle bien définie qui joue un rôle clé dans la régulation de la mélanogenèse par les rayonnements UV de la lumière solaire. En effet, sur des monocultures de mélanocytes, il est impossible de reproduire les effets des UV sur la synthèse de pigments et sur la croissance cellulaire. Il nous est donc apparu nécessaire de développer un programme de recherche qui nous permettra d'étudier les effets des UV sur les mélanocytes, in situ, dans le cadre d'un épiderme intact. Dans ce but, des volontaires sains seront exposés ou non aux rayonnements UV. Les irradiations et les prélèvements se feront au Centre Pharmacologique Clinique Appliqué à la Dermatologie (CPCAD) de l'hôpital de l'Archêt. Des biopsies de 4 mm, des zones irradiées ou contrôles seront faites. Bien évidemment, ce protocole rentre dans le cadre de la loi Huriet. Il a reçu l'approbation du CCPPRB de Nice en Mai 2005 et est soutenu par le CHU de Nice sous la forme d'un contrat d'incitation à la recherche obtenu par le Dr Bahadoran.  Sur les biopsies, nous analyserons par immuno-histochimie l'activation des voies ERK, PI3 Kinase, cAMP et des « stress activated kinase », par immuno-marquage avec les anticorps phosphospécifiques suivants Phospho-ERK (voie erk), Phospho-AKT (voie PI3K), Phospho-CREB (voie cAMP), phospho-p38 et phospho-JNK (stress activated kinase). Les dommages à l'ADN seront évalués par des anticoprs specifique de p53, des dimers de pyrimidine (une signature UVB) ou du 8-hydroxy-2'-deoxyguanine (un marqueur des domage UVA).  Par ailleurs, sur les coupes d'épiderme humain, les mélanocytes seront (i) repérés par un marquage fluorescent avec un anticorps spécifique des mélanocytes (Tyrp1), puis (ii) capturés par microdissection laser. Les ARN seront isolés, amplifiés par la RNA polymérase T7, et analysés sur biopuces pan génomiques. Les biopuces seront fournies, hybridées et analysées par la Plate-forme microarrays/transcriptome de Nice/Sophia-Antipolis qui s'inscrit dans le cadre d'un projet national, dirigé par le Réseau National des Génopoles.  III- Faisabilité Nous avons déjà réalisé les irradiations et les prélèvements sur des volontaires de phototype III.Par ailleurs, les techniques d'immuno-marquage avec les anticorps pERK et pAKT sont déjà validées. Enfin, nous avons mis au point une technique rapide de marquage des mélanocytes dans l'épiderme qui n'affecte pas la qualité des ARNs. Dans les expériences préliminaires de microdissection, nous avons pu isolé jusqu'à 250 mélanocytes et obtenu entre 5 et 7 ¿g d'ARN d'excellente qualité.   IV-Conclusion  Ces projets permettront d'élucider les événements moléculaires induits, in vivo, par le rayonnement UV dans les mélanocytes épidermiques. Les inf