Projet ANR-10-BLAN-1311 – CSR-D : Analyse moléculaire de la  commutation isotypique des immunoglobulines à travers l'étude de ses défauts chez l'homme
Programme : Sciences de la vie, de la santé et des écosystèmes : Microbiologie, immunologie, infectiosité (Blanc SVSE 3) 2010
Année de financement : 2010
Coordinateur du projet : Madame Anne DURANDY (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - Délégation régionale Paris V)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 129400.0 euros
Durée : 24 mois
Résumé : Résumé français
Notre projet s’inscrit dans la suite du projet financé par l’ANR n° R06212KS. Il a pour but la caractérisation des défauts héréditaires de la commutation isotypique des immunoglobulines (Ig) chez l’homme (CSR-D). Deux situations caractérisées au cours du projet R06212KS seront particulièrement étudiées: 
1) Un nouveau CSR-D caractérisé par un défaut isolé de la commutation isotypique des immunoglobulines sans anomalies de la génération des  mutations somatiques (SHM) des régions Variables des gènes des immunoglobulines, un phénotype très semblable au phénotype des patients portant des mutations de la partie C terminale de l’Activation-Induced cytidine Deaminase (AID). Notre hypothèse de travail est que ces patients souffrent d’un défaut d’un cofacteur de AID spécifique du CSR. Nous nous efforcerons de mieux définir cette pathologie en précisant le niveau de l’anomalie par la détection des cassures de l’ADN dans les régions de switch au cours du CSR et par l’étude de la localisation subcellulaire de AID. Nous avons d’ores et déjà entrepris une étude génétique et défini une région génétique coségrégeant avec la maladie dans deux familles consanguines. Tous les exons des gènes présents dans cette région chromosomique ont été séquencés et l'analyse est en cours. Si des mutations dans un gène candidat sont trouvées, nous les validerons par le séquençage de ce gène chez d’autres patients présentant le même phénotype et en étudiant la capacité de lignées B inductibles à subir le CSR après transduction de shRNA contrôles ou spécifiques. La fonction de cette nouvelle molécule sera déterminée : expression dans les cellules B au repos ou après activation, rôle dans la localisation nucléaire et cytoplasmique de AID, interaction directe avec AID, modélisation moléculaire et génération de souris déficientes pour cette molécule. 
2) Nous avons montré qu’un défaut d’une enzyme du mismatch repair (MMR), PMS2, entraine de façon variable en intensité mais constante chez tous les patients étudiés un CSR-D, sans affecter la génération des mutations somatiques des régions Variables de l’Ig (SHM). Nous avons montré que PMS2 agit en amont des cassures de l’ADN des régions S au cours du CSR. Nous chercherons à identifier le mécanisme d’action de PMS2 en proposant l’hypothèse du rôle de son domaine endonucléasique récemment identifié. Nous étudierons l’effet de différentes mutations affectant ou non ce domaine et permettant l’expression de la protéine. De plus, nous étudierons les capacités de CSR des lymphocytes B de souris déficientes en PMS2 transduites par PMS2 sauvage ou muté dans son domaine endonucléasique. Nous étudierons également les conséquences sur la maturation des anticorps (CSR et SHM) d’autres défauts du MMR: défaut en MLH1, partenaire de PMS2, et défauts en MSH2/MSH6. 
Ainsi, notre projet devrait contribuer à la dissection génétique et moléculaire des CSR-D chez l’homme dans une perspective scientifique (meilleure compréhension des mécanismes impliqués dans le CSR) et médicale.