Projet ANR-06-JCJC-0160 – ANGPTL4 : Role of ANGPTL4 during development and ischemic heart disease
Programme : Programme "Jeunes chercheuses et jeunes chercheurs" (JCJC) 2006
Année de financement : 2006
Coordinateur du projet : INST NAT SANTE ET LA RECHERCHE MEDICALE ADR PARIS XII (INST NAT SANTE ET LA RECHERCHE MEDICALE ADR PARIS XII)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 80000.0 euros
Date de début : 2006
Durée : 36 mois
Résumé : L'hypoxie, ou baisse de pression partielle en oxygène, est une caractéristique des pathologies ischémiques cardiovasculaires et de la majorité des tumeurs solides. Cette altération du micro-environnement devenant hypoxique entraine une reprogrammation de l'expression de nombreux gènes pouvant induire une meilleure vascularisation. L'hypoxie est donc un stimulus majeur de l'angiogenèse. L'induction de l'angiogenèse, ou « switch angiogénique », induite par deséquilibre de la balance entre facteurs pro-et anti-angiogéniques est essentielle au développment mais aussi à la croisance tumorale et la revascularisation post-ischémique. Aussi, inhiber cette angiogenèse lors des processus tumoraux, ou au contraire, l'activer dans les pathologies ischémiques cardiovasculaires, semble être une stratégie thérapeutique prometteuse bien que la stratégie optimale ne soit pas encore définie.  Dans ce contexte, l'identification et la caractérisation de nouveaux gènes induits par l'hypoxie nous sont apparues pertinentes, émettant l'hypothèse que chacun de ces gènes peut constituer un marqueur diagnostique et/ou une cible thérapeutique des processus ischémiques où l'angiogenèse est induite par l'hypoxie. Ce projet a donc été initié par un criblage différentiel systématique destiné à identifier des ARNm de cellules endothéliales surexprimés en réponse à l'hypoxie par rapport aux mêmes cellules cultivées en condition témoin (normoxie), par cDNA Representational Analysis. La preuve du concept a déjà été validée par la caractérisation de l'angiopoietin-like 4 (ANGPTL4). Nous avons montré qu'ANGPTL4 est : 1/ induite par l'hypoxie (ARNm et protéine), 2/ possède une activité pro-angiogénique dans le modèle de la membrane chorio-allantoïde de poulet, 3/ est exprimé lors des pathologies ischémiques et 4/ est un marqueur spécifique des cancers conventionnels du rein. Dans le cadre d'une collaboration avec la Société REGENERON, nous disposons maintenant au laboratoire d'une lignée de souris invalidée pour le gène angptl4 (substitution du gène angptl4 par ß-Galactosidase (knock-in lacZ)). Cette invalidation est létale à 95% pendant le développement dans le fond génétique C57/Bl6, nous allons donc nous intéresser à l'expression d' angptl4 au cours du développement, ainsi qu'à l'observation des défauts présents chez les embryons KO permettant d'établir ainsi le patron d'expression du gène au cours du développement embryonnaire. Nos observations récentes montrent une coloration LacZ dans les vaisseaux de la rétine mais surtout au niveau du cœur, dans l'épicarde où cheminent les vaisseaux coronaires, entre E8 et E17. Des études plus fines de colocalisation avec d'autres marqueurs d'identité cellulaire permettront de déterminer quelles sont les cellules vasculaires impliquées et ainsi déterminer si l'ANGPTL4 affecte la croissance et la mise en place de la vascularisation coronaire au cours des processus de vasculo/angiogenèse cardiaque. Une attention particulière sera portée sur la régulation de la prolifération et des processus apoptotiques.  Parallèlement, nous avons réussi à obtenir quelques animaux KO adultes pour étudier l'expression et le rôle d'ANGPTL4 dans des modèles d'ischémie-reperfusion cardiaque chez ces souris. Nous venons de montrer que les régions souffrant d'ischémie expriment l'ARNm angptl4 de façon très importante. De plus, dans une étude préliminaire, nous montrons que la taille de l'infarctus est plus importante chez le animaux KO pour angptl4. L'angiogenèse post-ischémique est-elle modulée ? Nous voulons non seulement caractériser les modifications histologiques au niveau cardiaque mais aussi étudier in vitro les mécanismes de réponse à l'ANGPTL4 au niveau des cellules endothéliales mais aussi des cardiomyocytes. La régulation de la prolifération et de l'apoptose sera étudiée en conditions hypoxiques et en hypoxie-réoxygénation. De plus, nous purifions ANPGTL4 au laboratoire et étudierons les voies de signalisation activées en réponse à ANGPT