Projet ANR-07-MIME-0016 – MYCOLANERGY : MÉCANISME D'ACTION ET INHIBITION D'UN MACROLIDE MYCOBACTÉRIEN CAPABLE D'ANERGISER LES LYMPHOCYTES T
Programme : Microbiologie, immunologie et maladies émergentes (MIME) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT PASTEUR (INSTITUT PASTEUR)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale; Institut Pasteur; Université de Haute-Alsace
Montant : 386000.0 euros
Durée : 36 mois
Résumé : L'ulcère de Buruli (UB), provoqué par Mycobacterium ulcerans, est la mycobactériose la plus commune après la tuberculose et la lèpre, et représente une menace croissante. La pathologie des UB est étroitement liée à la production d'une toxine lipidique appelée mycolactone. Bien que de nombreuses études révèlent les propriétés immunomodulatrices de la mycolactone, les mécanismes de son activité biologique demeurent mal compris. Récemment, nous avons pu démontrer que la mycolactone induisait une anergie des lymphocytes T, et altérait profondément leurs propriétés migratoires. Dans ce projet, nos objectifs spécifiques seront donc : (i) d'élucider les mécanismes moléculaires de l'action immunosuppressive de la mycolactone sur la signalisation des lymphocytes T ; (ii) de caractériser l'impact de la mycolactone sur les mouvements des cellules T dans un modèle murin ; et (iii) de réaliser des études structure-fonction, grâce à des variants naturels et synthétiques de la mycolactone.//Pour atteindre ces objectifs ambitieux, trois équipes proposent d'associer leurs compétences complémentaires en pathogénie de M. ulcerans, en analyse de la signalisation et des processus migratoires des lymphocytes T, et en chimie des polyketides mycobactériens. Notre étude de l'action immunosuppressive de la mycolactone repose sur des données préliminaires qui indiquent que les Src kinases sont activées par la toxine dans les lymphocytes T. Nous suivrons cette piste en examinant plusieurs voies possibles d'altération de l'activité des Src kinases, et notamment l'implication de la tyrosine kinase Csk et de l'adaptateur PAG, deux régulateurs majeurs de leur activation. Les conséquences biologiques de l'effet de la mycolactone sur les Src kinases dans les lymphocytes T, comme la réponse calcique et l'activation de la voie Ras-MAPK, seront également étudiées.
Nous avons établi que l'injection de mycolactone induisait une diminution importante de la taille des organes lymphoïdes secondaires dans le modèle souris, ce qui suggère que la toxine perturbe l'éotaxie lymphocytaire, par un mécanisme encore inconnu. Cet effet de la mycolactone sera étudié par plusieurs approches : analyse phénotypique des marqueurs de migration lymphocytaires, imagerie intravitale utilisant des ganglions intacts ou un nouveau procédé de suivi des mouvements des lymphocytes T dans des tranches de ganglions, analyse de leur réponse antigénique en environnement natif.
Notre accès à des variants structuraux naturels et la production de variants synthétiques de mycolactone nous permettront d'identifier les déterminants moléculaires responsables de son action biologique. En particulier, nous rechercherons les résidus importants pour les fonctions cytotoxiques sur différents types cellulaires. Les variants de mycolactone seront également comparés in vitro pour leur capacité à anergiser les lymphocytes T, et in vivo pour leur aptitude à altérer la recirculation lymphocytaire.
//En accord avec les objectifs de cet appel à candidatures, notre projet associe trois groupes présentant des compétences complémentaires et un intérêt commun pour la lutte contre l'ulcère de Buruli. Nos objectifs scientifiques consistent à caractériser au niveau moléculaire l'action immunosuppressive de la mycolactone. Comme pour la rapamycine, l'identification de la cible de la mycolactone pourrait mettre à jour de nouveaux aspects de la physiologie de l'activation lymphocytaire. De plus, nos travaux permettront une meilleure compréhension de la pathogénie de cette maladie émergente, étape indispensable à la définition d'approches thérapeutiques innovantes basées sur des inhibiteurs fonctionnels compétitifs de la mycolactone. Ces composés synthétiques, aux propriétés immunomodulatrices et potentiellement moins cytotoxiques, pourraient en outre constituer une nouvelle classe d'immunosuppresseurs.