Projet ANR-12-IS07-0001 – OligoSwitch : Développement d'outils de diagnostic reposant sur des changements conformationnels d'acides nucléiques
Programme : Blanc International II - SIMI 7 - Chimie moléculaire, organique, de coordination, catalyse et chimie biologique (Blanc Inter II - SIMI 7)
Année de financement : 2012
Coordinateur du projet : Monsieur Jean-Louis MERGNY (ARN: régulations naturelle et artificielle)
Partenaires : Acides Nucléiques : Régulations Naturelles et Artificielles; Hong Kong Baptist College
Montant : 261040.0 euros
Date de début : 2013
Durée : 48 mois
Résumé : Outils de diagnostic reposant sur un changement conformationnel d'oligonucleotidesNous propose de développer des plateformes de détection à base d'oligonucléotides «split-quadruplex» pour la détection des mutations de l'ADN et des biomarqueurs protéiques.
Le besoin de nouveaux outils de diagnosticLe développement de méthodes simples pour le diagnostic a émergé comme un problème critique dans la technologie du diagnostic in vitro. À ce jour, de nombreuses méthodes ont été développées pour la détection sélective de l'ADN, dont la réaction en chaîne de la polymérase (PCR) et l'amplification du cercle roulant (RCA). Cependant, ces méthodes ont tendance à prendre beaucoup de temps, et impliquent la préparation fastidieuse des échantillons et / ou opération complexe. Pour la détection des protéines, les techniques les plus couramment utilisés comprennent des dosages immuno-enzymatiques (ELISA), l'électrophorèse capillaire (CE) et la spectrométrie de masse (MS). Ces méthodes de détection impliquent généralement plusieurs étapes de préparation des échantillons et / ou des instruments coûteux. Plus important encore, les méthodes de détection ci-dessus nécessitent généralement l'équipement de laboratoire hors site, et ne se prêtent pas à l'analyse de point de soins en temps réel.
Approches méthodologiquesNous proposons de développer des plateformes de détection à base d'oligonucléotides «split-quadruplex» pour la détection des mutations de l'ADN et des biomarqueurs protéiques. En utilisant la réponse de fluorescence élevé d'oligonucléotides marqués ou les longues durées de vie de phosphorescence des complexes de métaux de transition, nous prévoyons que notre méthodologie pourrait être adaptée pour la détection in vitro de facteurs  dans les milieux biologiques tels que des extraits cellulaires et nucléaires de l'homme. Afin de maximiser la sélectivité, la sensibilité et la réponse de notre test, nous allons rigoureusement optimiser la séquence d'ADN et les paramètres expérimentaux de l'essai proposé.
Résumé de la soumission : see below
Résultats : Des résultats préliminaires démontrent l'intérêt de notre approche
Perspectives : Nos méthodologies proposées sont très simples, sensibles, rapides et sélectives, à faible coût, utilisables en temps réel et pour une analyse à haut débit. Nous prévoyons que la technologie proposée pourrait être très utile à la fois aux chercheurs universitaires et biomédicale  travaillant dans les domaines du diagnostic médical ou de la biochimie des biomarqueurs, et pourrait être potentiellement appliquées pour le diagnostic clinique des maladies humaines.
Publications et brevets : 3 articles communs entre les deux groupes