Projet ANR-07-MIME-0005 – DC TRANS : Etude de la régulation de la traduction et de la fonction des cellules dendritiques en réponse aux déterminants microbiens
Programme : Microbiologie, immunologie et maladies émergentes (MIME) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION PACA (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DELEGATION PACA)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 276000.0 euros
Durée : 36 mois
Résumé : Les cellules dendritiques (DCs) sont les seules cellules professionnelles de présentation antigénique aptes à stimuler les lymphocytes T naïfs. L'activation et l'inhibition de la synthèse protéique est nécessaire à assurer une activation correcte des DCs en réponse aux produits microbiens. Les DCs ont aussi une résistance unique au stress, incluant la détection d'ARN double brins. Comme l'inhibition de synthèse protéique est un mécanisme de défense innée contre les stress environementaux et les infections virales, nous nous proposons d'étudier les mécanismes moléculaires  et les conséquences de ce type de réponse en se focalisant sur la présentation antigénique restreinte par le CMH I et la production de cytokine qui dépendent de la néo-synthèse protéique dans les DCs en fonction des différents stimuli microbiens perçus.//Notre projet vise à mettre en evidence, les mécanismes contrôlant chez les DCs la résistance au stress menant à un arrêt traductionel et l'importance de la régulation de la traduction pour leur fonction. Nous avons développé une technologie permettant de mesurer l'intensité de la traduction par imagerie, immunoblot et FACs dans des cellules isolées ou dans une population. Cette technologie est basée sur l'utilisation de la puromycine et d'anticorps monoclonaux associés. Elle est transposable à la caractérisation de nombreux types cellulaires et sera développée pour permettre de mesurer l'état d'activation des DCs et d'autres cellules en fonction du contexte microbien. Notre deuxième but sera de définir pourquoi la traduction dans les DCs est régulée différemment en réponse à divers produits microbiens et quelle est la pertinence fonctionnelle de cette régulation. Nous nous concentrerons sur les conséquences de la détection des ARNdb et la phosphorylation d'eIF2-a. Nous établirons comment les voies de détection de ARNdb sont hierarchisées dans différentes cellules et comment l'inhibition de la traduction par l'activation de PKR est bloquée dans les DCs. Notre troisième but sera de comprendre les conséquences dans les DCs du contrôle de la traduction induit par les agonistes des TLRs, en particulier pour les interferons de type I. Nous évaluerons comment la présentation par le CMH de classe I, qui dépend fortement d'une neosynthèse active des protéines, est régulée pendant l'arrêt ou la diminution de traduction dans des fibroblastes soumis à un stress  (e.g. ARNdb) et dans des DCs activées. nous caractériserons les mARNs, qui sont contrôlés au niveau traductionnel pendant la maturation des DCs. Nous emploierons une stratégie de purification des ARNs messagers attachés aux polysomes pour analyser sur des puces géniques Affymetrix, les messagers étant engagés ou non en traduction par rapport à leur niveau de transcription. //Nous quantifierons les variations de  traduction dans les cellules en réponse au contexte environnemental. Nous décrirons les mécanismes moléculaires régulant la synthèse protéique, ainsi que certains effets encore non-décrits des différentes voies de signalisation innées détectant les produits microbiens. Nos travaux sur la régulation de la traduction dans le contexte de la présentation antigénique restreinte au CMH I, contribueront à optimiser la vaccination ciblée sur les DCs et fourniront des informations sur l'apprètement des antigènes endogènes pendant l'infection ou le stress. La définition des conditions exigées pour la production d'IFN I après détection des ARNdb devrait également avoir des conséquences importantes sur notre conception de l'immunité antivirale. Nous identifierons aussi des molécules, qui sont fortement régulées au niveau de la  traduction pendant l'activation des DCs et restent indétectable lors de caractérisation transcriptionnelle conventionnelle.