Projet ANR-06-MRAR-0030 – platelet disorder : Etude de l'implication d'un facteur de transcription AML1 dans la mégacarypoïèse normale et pathologique liée à FDP
Programme : Programme Pluriannuel de Recherche sur les Maladies Rares (MRAR) (MRAR) 2006
Année de financement : 2006
Coordinateur du projet : INSERM - ADR PARIS XI - ADR 15 (INSERM - ADR PARIS XI - ADR 15)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 280000.0 euros
Durée : 36 mois
Résumé : Les mécanismes pathogéniques impliqués dans de nombreuses thrombopénies  constitutionnelles restent pour la plupart inconnus. Cependant, certaines caractéristiques biologiques peuvent être communes à ces pathologies: le faible taux de plaquettes associé à des anomalies morphologiques et la dysmégacaryopoïèse médullaire reflétée par la présence constante des micro-mégacaryocytes. Récemment, nous avons décrit un mécanisme original d'haplo-insuffisance liée à l'expression monoallélique d'un facteur de transcription  FLI1 dans la thrombopénie Paris Trousseau (PT). Le but de notre travail est maintenant de comprendre le mécanisme physiopathologique d'une autre maladie rare  « familial platelet disorder » (FDP) qui présente certaines similitudes avec le syndrome PT : thrombopénie ; dysmégacaryopoïèse; anomalies génétiques du facteur de transcription AML1. Une leucémie peut survenir tardivement chez quelques patients : l'étude des événements oncogéniques ne fait pas partie de notre projet. *******************Dans une première partie de ce projet, nous étudierons le mécanisme d'induction de la thrombopénie dans le FDP. Cette étude sera réalisée sur quatre familles françaises dont deux sont porteuses de mutation ponctuelle, une autre d'une courte délétion d'AML1 et la quatrième d'une délétion entière d'un allèle. Le(s) mécanisme(s) précis par lequel ces anomalies induisent une dysmégacaryopoïèse étant inexpliqué(s), nous allons sur-exprimer les trois mutants d'AML1 dans les progéniteurs mégacaryocytaires (MK) par des rétro/lentivirus et étudier l'effet de leur sur-expression sur la différenciation MK, le cycle cellulaire, l'apoptose et la production des proplaquettes. En parallèle, nous allons étudier la mégacaryopoïèse des malades. S'il s'avère que certaines mutations agissent comme un dominant négatif, nous développerons les siRNA d'AML1 qui inhiberont uniquement l'ARN généré à partir de l'allèle muté. Chez les malades porteurs d'une délétion d'un allèle entier, nous étudierons l'expression allélique d'AML1 au cours de la différenciation mégacaryocytaire.  
Un second objectif de ce projet, corollaire obligatoire, est l'identification des gènes cibles mégacaryocytaires régulés par AML1 en utilisant la méthode de microarray en collaboration avec la plateforme génomique de l'IGR. Pour l'étude des gènes régulés par AML1, nous développerons la technique d'immunoprécipitation chromatinienne pour étudier la fixation d'AML1 sur les promoteurs des gènes différentiellement exprimés sur les puces à 44K oligonucleotides. Nous étudierons l'implication de ces gènes dans la mégacaryopoïèse en transduisant les progéniteurs mégacaryocytaires par les lentivirus codant pour les shRNA des gènes en question. Cette étude est indispensable pour comprendre le mécanisme par lequel AML1 est impliqué dans la thrombopénie FDP et nécessitera l'emploi d'un post-doctorant à plein temps. 
*******************Nos résultats devraient ainsi contribuer à une meilleure connaissance du rôle d'AML1 dans la mégacaryopoïèse normale. Les gènes cibles régulés par ce facteur de transcription étant inconnus actuellement, leur identification est donc aussi un éclairage supplémentaire important pour la compréhension de la dysmégacaryopoïèse associée à FDP. Par ailleurs, ce travail nous permettra de comprendre non seulement les mécanismes précis (haplo-insuffisance, effet dominant négatif) impliqués mais aussi de décrire leurs conséquences physiopathologiques sur la mégacaryopoîese des malades atteints de cette maladie orpheline plaquettaire.