Projet ANR-07-MIME-0030 – T-SIGCYTOPOL : Role du cytosquelette d'actine dans la signalisation et la polarization des lymphocytes T: de la reconnaissance de l'antigène à la dissemination des virus.
Programme : Microbiologie, immunologie et maladies émergentes (MIME) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT PASTEUR (INSTITUT PASTEUR)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale; Institut Pasteur
Montant : 400000.0 euros
Durée : 48 mois
Résumé : La réponse immune adaptative débute par la reconnaissance, par les lymphocytes T, des antigènes présentés par les cellules présentatrices d'antigène (CPA). Cette reconnaissance induit une profonde réorganisation de la cellule T, qui conditionne son activation et ses fonctions effectrices ultérieures. La cellule T se polarise, formant la "synapse immune" où s'effectuent les étapes initiales de l'activation cellulaire. Les mécanismes de formation de la synapse immune sont détournés par des rétrovirus humains (i.e. human T cell leukemia virus, HTLV-1) pour se transmettre de cellule à cellule.
Les mécanismes moléculaires qui traduisent l'activation cellulaire en réarrangements du cytosquelette et aboutissent à la formation de la synapse immune sont très complexes et restent peu connus. Leur utilisation par les rétrovirus humains pour se propager entre cellules sont encore plus énigmatiques. La compréhension de ces processus physiologiques et pathologiques font l'objet de ce projet.
//Nous effectuerons une analyse fonctionnelle de protéines impliquées dans la signalisation précoce du récepteur des cellules T (TCR), dont SLP-76, et nous étudierons leur relation avec les protéines associées au cytosquelette d'actine, comme l'ezrine. Par mutagénèse, biochimie (co-immunoprécipitation, immuno-empreinte phospho-spécifique, précipitation GST) et biologie cellulaire (microscopie confocale, interférence ARN, tests avec gènes reporteurs), nous corrèlerons dans le temps et dans l'espace, la formation de complexes protéiques spécifiques avec la signalisation, la polarisation et l¿activation du lymphocyte T. 
Nous analyserons la dynamique de récepteurs et de molécules de signalisation (tels TCR, SLP-76, Lck, LAT) à la membrane plasmique et dans des compartiments intracellulaires par des techniques de pointe d'imagerie cellulaire: microscopie confocale, TIRF (total internal refexion fluorescence), imagerie en temps réel, FRET (fluorescence recovery after photobleaching) ou FLIP (fluorescence loss in photobleaching). Ceci permettra de comprendre comment la dynamique moléculaire module  l'initiation et l'extinction de l'activation cellulaire.
Par des approches de biochimie et de biologie cellulaire (microscopie photonique et électronique, cytométrie de flux), nous étudierons comment HTLV-1 détourne les machineries de polarisation et de transport intracellulaire pour se transmettre de cellule à cellule.
Enfin, des souris génétiquement modifiées (souris déficientes en coronine-1 ou exprimant des formes mutantes de SLP76) permettront d'étudier le rôle du cytosquelette d¿actine et des régulateurs de signalisation in vivo. L'importance du "dialogue" entre les protéines de signalisation et le cytosquelette d'actine lors de l'activation et la différentiation des lymphocytes T, et dans la réponse immune à une infection, pourront ainsi être évalués. 
// La séquence d'évènements moléculaires qui suivent la reconnaissance antigénique et déterminent le devenir des lymphocytes T (expansion, différentiation, activation, mort ou tolérance) sont encore mal élucidés. Ce programme de recherche permettra d'approfondir la connaissance des relations existant entre signalisation médiée par le TCR et  cytosquelette d'actine. Il permettra de définir le rôle des boucles régulatrices, décrites dans nos laboratoires, et qui impliquent le complexe 14-3-3/SLP-76, l'ezrine (molécule de liaison au cytosquelette) ou  la coronine-1 (régulateur de polymérisation d'actine), dans le développement, l'activation des lymphocytes T, et dans la réponse immune. 
Ce travail devrait également apporter des connaissances nouvelles sur les processus d'infection, d'échappement à la réponse immune, et de dissémination intercellulaire de rétrovirus humains tel HTLV-1. Ces connaissances pourraient révéler de nouvelles cibles pour des thérapies anti-virales.