Projet ANR-14-CE21-0008 – GENOTRACE : Traceurs de génotoxicité et traceurs biologiques pour un essai micronoyau en cellules vivantes
Programme : Améliorer la Santé par la médecine personnalisée, le diagnostic, la prévention et la thérapie, les stratégies palliatives, en concevant le vivant dans son environnement (DS0402) 2014
Année de financement : 2014
Coordinateur du projet : Madame Gladys MIREY (Toxalim INRA)
Partenaires : PME; Institut des Technologies Avancées en Sciences du Vivant; Laboratoire public
Montant : 495000.0 euros
Date de début : 2014
Durée : 48 mois
Résumé : Parmi les essais permettant d’évaluer à court terme la mutagénicité, la génotoxicité ou la carcinogénicité de composés chimiques, le test du micronoyau (MN) est largement reconnu comme une méthode fiable et précise pour détecter les lésions chromosomiques. Le test MN est en effet un critère d’évaluation multiple de la génotoxicité, permettant d’étudier des effets clastogènes et aneugènes. Cet essai se prête à l'automatisation et permet une bonne extrapolation des limites d'exposition, avec une mesure facile à la fois in vitro et dans les systèmes expérimentaux in vivo. Toutefois, dans sa configuration actuelle, le test MN ne permet pas une évaluation dynamique. Nous proposons d'apporter des innovations technologiques importantes pour élaborer un nouveau test MN in vitro destiné à l’évaluation des dangers et des risques potentiels liés aux substances mutagène/cancérogènes.
Le consortium public/privé GENOTRACE propose de développer un nouveau test MN permettant de suivre à la fois en temps réel et en parallèle, la production de lésions chromosomiques et le signal d'un rapporteur de génotoxicité. Pour atteindre cet objectif, le projet reposera sur l’utilisation de biotraceurs fluorescents nouvellement développés par les partenaires 1 et 2. Ces biotraceurs permettent de marquer le noyau, grâce à l’expression d’un chromobody dirigé contre le complexe histone H2A-H2B, laissant suivre la dynamique de la chromatine en temps réel, et d’évaluer l’activation de la voie des dommages à l'ADN (DDR pour DNA damage response) grâce à un gène rapporteur sous la dépendance du promoteur du gène p21. Ainsi, un test MN positif associé soit à un signal DDR positif soit à un signal DDR négatif fournira des indications sur l'origine des micronoyaux, induits respectivement par des mécanismes clastogènes ou aneugènes. Afin de prendre en compte le métabolisme de certains composés, ces biotraceurs seront exprimés de manière stable dans les cellules HepaRG, métaboliquement actives, optimisées pour le test MN par le partenaire 3. Ce nouvel essai MN sera adapté au moyen ou haut-débit, et les résultats obtenus seront aisément exploitables grâce à la mise en œuvre de protocoles à haut contenu informatif, l’utilisation d’outils d’analyse d'image et enfin de processus de classification. Notre projet permettra ainsi, in vitro et en temps réel, de déterminer et classer le potentiel génotoxique des substances/contaminants. Il apportera de nouvelles capacités au test MN classique et pourra conduire à des progrès substantiels dans les champs de la prévention et/ou du diagnostic de l'exposition aux substances génotoxiques.