Projet ANR-08-GENO-0006 – CHAT : Régulation de l'adressage ds canaux ioniques et excitabilité cardiaque normale et pathologique
Programme : Du gène à la physiopathologie, des maladies rares aux maladies communes (GENOPAT) 2008
Année de financement : 2008
Coordinateur du projet : INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - DÉLÉGATION RÉGIONALE PARIS 6 (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE - Délégation régionale Paris 6)
Partenaires : Institut national de la santé et de la recherche médicale; Institut national de la santé et de la recherche médicale
Montant : 328000.0 euros
Date de début : 2009
Durée : 36 mois
Résumé : Les arythmies cardiaques sont une des principales causes de mort subite, d'accident embolique et d'insuffisance cardiaque. Elles sont favorisées par le remodelage du myocarde qui survient au cours de la plupart des cardiopathies. La fibrillation auriculaire (FA) la plus fréquente des arythmies qui complique souvent le remodelage des oreillettes en est l'exemple. A l'étage cellulaire, les arythmies sont dues à des défauts d'expression et de fonctionnement des canaux ioniques. Récemment, il a été montré que des anomalies de l'adressage et du recyclage à la membrane des canaux sont impliquées aussi dans la survenue de plusieurs arythmies acquises ou familiales. Cependant, très peu de choses sont encore connues sur les étapes de sortie du réticulum des canaux, leur transport et insertion à la membrane et leur devenir après endocytose ainsi que sur la régulation de ces processus au cours du remodelage du myocarde et leur rôle dans la survenue d'arythmie.   Hypothèse. Les mécanismes qui régulent l'adressage et le recyclage des canaux ioniques à la membrane des myocytes cardiaques sont essentiels à l'excitabilité cardiaque et leurs altérations au cours du remodelage myocardique est un facteur arythmogène.
Objectifs:
- objetcif-1. Rôle des protéines Rab et du cholestérol membranaire dans l'insertion membranaire des canaux.
- objectif-2. Rôle des protéines d'accrochage MAGUK et dystrophine/syntrophine dans l'organisation membranaires des canaux.
- objectif-3.  Rôle de l'ubiquitylation dans le devenir des canaux ?
- objectif-4. Régulation de l'adressage des canaux au cours de la FA. 
Stratégie: 
- In vivo, dans un modèle de myocytes cardiaques en culture et in vitro grâce à des techniques de transfert de nucleotides dans le coeur, nous étudierons différentes protéines candidates à l'adressage et au recyclage des canaux à l'aide de plasmides et de siRNA.  
- Etude du rôle du complexe dystrophine/syntrophine dans un modèle de souris déficientes en dystrophine.
 - Dans des oreillettes de coeur humain et celles de souris transgéniques CREB/CREM qui développent une dilatation auriculaire et une FA, nous étudierons la régulation de ces processus d'adressage et de recyclage des canaux. 
Notre projet est constitué d'un réseau de trois laboratoires complémentaires et synergiques.
1. Paris: plasmides pour l'étude des protéines SAP97 et Rab, réalisation de siRNA et shRNA ; microscopie confocale et électronique; échantillon d'oreillettes humaine, modèle de souris transgeniques CREB/CREM. 
2. Nantes. Transfert dans le Coeur d'oligonucléotides; plasmide pour l'étude des canaux KCNQ1/KNE1 et de protéines chaperone; pull chase et de biotinylation pour l'étude de l'endocytose ; plateforme de transcriptomique, électrophysiologie cardiaque de la souris. 
3. Lausanne. « GST-pull-down" et co-immunoprecipitation pour l'étude des interactions protéiques; voie de l'ubiquiylation ; modèle de souris déficientes en dystrophine.
 Ce projet  permettra d'dentifier de nouveaux acteurs et mécanismes mise en jeu dans le fonctionnement des canaux ioniques et de comprendre leur rôle dans l¿excitabilité cardiaque. Notamment, il devrait déterminer dans quelle circonstance se produite le recrutement des canaux à la membrane, le rôle joué dans ce processus par le cholestérol membranaire et comment intervient l'ubiquitylation dans le devenir des canaux Ce projet contribuera aussi à comprendre comment se forment les complexes canalaires cardiaques, le rôle joué par les protéines d'échafaudage de type MAGUK ou syntrophine. Grâce à la possibilité d'étudier le myocarde d'oreillette humains et le développement de modèle expérimentaux de transgénèse, ce projet devrait contribuer à définir la place des défauts d'adressage et de recyclage des canaux dans la constitution du substrat des arythmies notamment pour la plus fréquente d'entre elle, la FA.