Projet ANR-10-BIOT-0003 – HIFI-ASSAYS : Analyses multiparamétriques haut débit par filtration d’échantillons biologiques : génotypage érythrocytaire et sérologie humaine.
Programme : Biotechnologie pour la Santé (BIOTECS)
Année de financement : 2010
Coordinateur du projet : Monsieur OTHELLO CHARTIER (AXO SCIENCE)
Partenaires : AXO SCIENCE; TPE; Etablissement français du sang; Etablissement français du sang; Institut Albert Bonniot - Ontogenèse et Oncogenèse Moléculaire; Institut de Chimie et Biochimie Moléculaires et Supramoléculaires
Montant : 799693.0 euros
Date de début : 2011
Durée : 36 mois
Résumé : HIFI-assaysAnalyses multiparamétriques haut débit par filtration d’échantillons biologiques : génotypage érythrocytaire et sérologie humaine
Validation d'un outil de diagnostic multiparametricL'objectif du projet est la mose au point d'un outil de diagnostic pour la caractérisation d'échantillons biologique a moyenne et grande échelle ( entre 1000 et 10000 échantillons). Cet outil d'analyse va être developpé selon les besoins des experts en diagnostic en terme de débit et de compléxité d'analyse. La présence de L'Etablissement Français du Sang et de l'institut Albert Bonniot INSERM UJF U823 au sein du consortium est la garantie que le projet suivra ce cahier des charges.
Recherche industrielleLa méthode employée consiste a utiliser une technologie de détection par colorimétrie beaucoup moins onéreuse. Les molécules déposée sous forme de sondes sont immobilisée adensité moyenne sur la face externe d'une microplaque, sur la membrane poreuse. Après incubation les échantillons sont ensuite filtrés au travers de la membrane ce qui permet d'optimiser l'interaction entre les molécules cibles et la sonde.
Résumé de la soumission : Le projet HiFi-assays s’est fixé comme objectif de développer un outil d’analyse multiparamétrique haut-débit pour la caractérisation d’échantillons biologiques. La technologie proposée utilise une architecture innovante de « microarrays » filtrantes (HiFi) associées à une méthode bas-coût de coloration des spots positifs (Brevet No. FR09356049.8 and US61/227 666). Dans ce concept, différentes sondes biologiques peuvent être immobilisées sous la forme de « microarrays » moyenne densité (100 spots). Cette immobilisation se fait à la surface externe de fonds de puits de microplaques de titration modifiées par une membrane polymère. Les échantillons sont alors incubés/filtrés à travers cette membrane, optimisant de fait les interactions entre molécules cibles et sondes.Les plus de la technologie sont :-  Une plateforme automatisée et générique pour les essais haut-débits multiplexés (ADN, Protéines, Peptides).- Une détection quantitative du niveau d’interaction entre cibles et sondes sur chaque spot (quantification des niveaux de gris des spots colorés).- Un protocole de filtration amplifiant les interactions sonde/cible et éliminant une grande partie du bruit de fond.Deux applications de cette technologie innovante, ayant un impact fort sur la santé publique et la sécurité, seront développées au cours de ce projet :- Un outil de type puce à ADN utilisé, dans le domaine de la transfusion, pour le génotypage érythrocytaire et la détermination approfondie de groupes sanguins.- Une plateforme de type puce à protéines/peptides pour le suivi sérologique des infections par les virus de l’hépatite (diagnostic) et leur évolution vers des cancers du foie (pronostic).Dans chaque cas, le projet tendra à développer une solution globale allant de la préparation de l’échantillon (par exemple extraction de l’ADN et PCR multiplex) jusqu’au traitement des données en passant par l’automatisation des protocoles.Chaque application sera validée, à moyenne échelle (1 000 à 10 000 échantillons), au cours d’une tache de démonstration/validation spécifique.Le projet est un projet de Recherche Industriel coordonné par l’entreprise AXO Science SAS et dont le but est la maturation d’un produit satisfaisant les standards du diagnostic in vitro.Comme livrable final et grâce à la coordination par l’entreprise, un prototype de produit nommé HiFi sera produit à une échelle préindustrielle et utilisé lors des phases de validation du projet. Le développement de deux produits différents nommés HiFi Blood 96 et HiFi Sero 96, respectivement pour le génotypage et la sérologie hépatite, est d’ores et déjà projeté dans la continuité du projet. Ici, la présence dans le consortium de deux utilisateurs finaux, l’Etablissement Français du Sang et l’Institut Albert Bonniot, permettra d’augmenter de manière significative l’impact du projet.
Résultats : Nous avons du lever quelques barrieres technologiques en modifiant le support de microplaque et en changeant certains module robotique. Aujourd'hui les résultats sont trés encourageant.
Perspectives : Nous préparons pour l'application de Genotypage erythrocytaire la mise en place d'une étude pilote sur site de l'EFS. Ceci permettra de mettre en action l'usage industrielle du produit et la validation du kit commercialisable.
Publications et brevets : Revues à comité de lecture	
1.	Mandon C.A., Berthuy O.I., Corgier B.P., Le Goff G.C., Faure P., Marche P.N., Blum L.J. and Marquette C.A., Polymer adhesive surface as flexible generic platform for multiplexed assays biochip production. Biosensors & Bioelectronics, in press.
Communications (conférence)	
1.	B.P. Corgier, Adhesive Microarrays: A New Integrative Solution. Advance Microarray technology, 28th – 29th march 2012, Edinburgh (Scotland). Oral Communication.
2.	Benjamin P. Corgier, Céline A. Mandon, Gaëlle C. Le Goff, Patrice Marche, Loïc J. Blum and Christophe A. Marquette (2012), Polymer adhesive surface as flexible generic platform for biochip production. Biosensors 2012, 16th - 19th May, Cancun (Mexico). Oral Communication.