Projet ANR-14-CE14-0015 – CHIKV-Viro-Immuno : Multiplication et Relation avec l'hôte du virus Chikungunya
Programme : Une nouvelle représentation du vivant (DS0401) 2014
Année de financement : 2014
Coordinateur du projet : Monsieur Olivier Schwartz (INSTITUT PASTEUR - Unité Virus et Immunité)
Partenaires : Fondation de recherche; Fondation de recherche
Montant : 410000.0 euros
Date de début : 2014
Durée : 48 mois
Résumé : Le virus Chikungunya (CHIKV) est un pathogène ré-émergent transmis par les moustiques et responsable d’épidémies en Afrique, en Asie et récemment aux Antilles. Il provoque fièvres aigues, arthralgies et myalgies chroniques. Les protéines cellulaires permettant l’entrée, la multiplication et le passage viral de cellule à cellule restent inconnues. Comment les cellules de l’hôte réagissent in vivo, et déclenchent une réponse immunitaire antivirale et inflammatoire est également peu connu. Notre but est de caractériser la réplication du CHIKV et la réponse de l’hôte à l’infection. 
OBJECTIF 1. Identifier les protéines cellulaires permettant l’entrée et la multiplication du virus. Nous avons effectué un crible afin d’identifier les protéines cellulaires nécessaires à la réplication du CHIKV. Une protéine transmembranaire, que nous appelons « Hit-A » a retenu notre attention. Elle est présente aux jonctions intercellulaires dans les fibroblastes et cellules épithéliales, cibles naturelles de  CHIKV, et absente des cellules insensibles à l’infection. Nous souhaitons : 
(i) Analyser le rôle de Hit-A en tant que récepteur du CHIKV. Hit-A permet la fusion virale dans des cellules normalement insensibles à l’infection. Nous caractériserons les  mécanismes sous-jacents. Nous identifierons les régions extracellulaires de Hit-A nécessaires à son activité. Nous déterminerons si Hit-A se lie directement à l’enveloppe virale et comment le virus module la fonction de Hit-A. 
(ii) Etudier la transmission de cellule à cellule de CHIKV. La transmission directe de virus de cellule à cellule est un phénomène très efficace. Nous examinerons le rôle de Hit-A lors du transfert intercellulaire de CHIKV par différentes techniques, en particulier par vidéomicroscopie.
(iii) Etudier le rôle d’autres protéines cellulaires identifiées lors du crible. Des corécepteurs cellulaires sont probablement impliqués dans l’entrée du CHIKV. Nous caractériserons le rôle de protéines interagissant avec Hit-A, ou identifiées lors du crible. Nous étudierons leur effet lors de la multiplication du CHIKV.
OBJECTIF 2. Comprendre comment les composants du CHIKV se propagent entre cellules pour initier les réponses immunitaires. 
Nous avons observé que le cellules dendritiques plasmacytoides (pDCs) ne sont pas infectées par CHIKV, mais protègent les souris contre les infections sévères. Nous souhaitons définir les modalités de transfert de matériel viral aux pDCs et les senseurs cellulaires impliqués dans la réponse de l’hôte. Nous souhaitons:
(iv) Utiliser de nouveaux outils génétiques et cellulaires afin de caractérier les mécanismes protecteurs des pDCs. Nous avons mis au point des souris dans lesquelles l’IFN est produit uniquement par les pDCs. Nous étudierons chez ces souris « pDC-IFN »  les niveaux d’infection, la  réponse inflammatoire et la pathologie associée. Des techniques d’Elisa ultra sensibles, détectant des molécules uniques, seront utilisées pour mesurer la production d’IFN.
(v) Etudier le rôle du transfert intercellulaire de CHIKV. Les pDC murines ou humaines ne produisent pas d’IFN lorsqu’elles sont exposées au particules virales CHIKV. Cela suggère que les contacts entre cellules infectées et pDCs sont importants pour cette activation. Nous examinerons ces interactions dans des systèmes de coculture. Nous infecterons des lignées cellulaires dans lesquelles les niveaux de stress et de mort sont contrôlables génétiquement, afin d’étudier la nature des signaux activant les pDCs.
(vi) Déterminer les senseurs du CHIKV in vivo. Pour identifier les mécanismes de production d’IFN dans les souris « pDC-IFN » nous établirons des lignées de souris défectives pour certains senseurs (Rig-I/Mda5, TLR7). Ces souris seront infectées et  la charge virale, la physiopathologie et les réponses antivirales examinées.
Nos travaux devraient permettre de comprendre les mécanismes d’entrée et de passage intercellulaire du CHIKV, et la réponse immunitaire de l’hôte.