Projet ANR-12-BSV1-0001 – TIF1GH : Rôle de TIF1gamma dans l’hématopoïèse
Programme : Blanc - SVSE 1 - Physiologie, physiopathologie, santé publique (Blanc SVSE 1) 2012
Année de financement : 2012
Coordinateur du projet : Monsieur Laurent DELVA (U866 Inserm)
Partenaires : Institut de Radiobiologie Cellulaire et Moléculaire; Lipides Nutrition Cancer
Montant : 467480.0 euros
Date de début : 2012
Durée : 36 mois
Résumé : Transcription Intermediary Factor 1 gamma (TIF1g), co-régulateur de la transcription et de l'élongation, interagit avec les Smads et a une activité ubiquitine ligase. Chez le Poisson-Zèbre et les cellules humaines CD34+, TIF1g relie les facteurs d'élongation positifs et les complexes de transcription spécifiques du sang, régulant la transcription durant l'érythropoïèse. Les deux équipes ont croisé les souris cFES-Cre ou Mx-Cre avec les souris TIF1g floxées, et montré que TIF1g était un modulateur clef du destin des cellules souches et progénitrices (CSP) adultes. Un défaut en TIF1g empêche la différenciation myélomonocytaire et favorise l'apparition d'une leucémie myélomonocytaire chronique (LMMC). L'étude de TIF1g chez les patients a montré que 35% en exprimaient peu (hyperméthylation de son promoteur). TIF1g est donc un gène suppresseur de tumeur régulé de façon épigénétique dans les cellules hématopoïétiques. 
Ce projet doit déterminer:
1- Les conséquences de la délétion sur le destin des cellules souches hématopoïétiques (CSH) selon le moment de la délétion, à l'instar des phénotypes hématopoïétiques ou leucémiques résultant des régions de régulation guidant l'expression de la recombinase Cre.
2- Les fonctions des domaines de TIF1g sur le destin des CSH. TIF1g est constitué d'un domaine N-terminal à motif tripartite (domaines RING, deux B Boxes et "coiled-coil"). Il possède une activité E3 ubiquitine ligase, un motif TSS qui n'est pas conservé chez les autres membres de la famille TIF1, une région centrale qui fixe Smad2/3 et une C-terminale (PHD adjacent à un Bromodomaine). Nous infecterons les CSP lin-c-kit+ triées à partir des cellules de moelle osseuse (m.o.) TIF1g-/- ou TIF1g+/+ avec des lentivirus contenant les mutants de TIF1g ou le TIF1g normal, reconstituerons l'hématopoïèse de souris irradiées létalement avec ces cellules, et analyserons l'hématopoïèse reconstituée.
3- Le ou les rôles de TIF1g dans la voie de signalisation TGF-b, régulateur majeur des CSP adultes. Un des deux modèles correspond au fait que TIF1g serait antagoniste de l'activité de Smad4 via sa fonction ubiquitine ligase. En plus des analyses des membres de TGF-b dans les CSP de la m.o. TIF1g-/- et l'injection des ligands TGF-b ou BMP, nous analyserons les souris DKO pour Smad4 et TIF1g et déterminerons le rôle de Smad4 dans les souris TIF1g-/-.
4- Le rôle de TIF1g durant la différenciation monocytaire. Un des phénotypes marquants des souris TIF1g-/- correspond à l'expansion des GMP au dépend des CMP et MEP. Nous avons observé une expansion importante des MDP et des cellules matures myéloïdes dérivées des MDP dans la m.o. et la rate des souris TIF1g-/-, et vu que les cellules myéloïdes dérivées des MDP TIF1g-/- n'exprimaient pas le récepteur au Csf-1. A partir de nos modèles, nous étudierons les gènes régulés par TIF1g et impliqués dans la monopoïèse (transcriptomique et ChiP-seq) en utilisant des populations purifiées de cellules myéloïdes progénitrices ou matures. Nous étudierons aussi la voie(s) de signalisation qui compense celle du Csf-1, permettant la différenciation monocytaire des précurseurs myéloïdes TIF1g-/-.
5- La contribution de la déficience de TIF1g dans la transformation par une perte du contrôle de la prolifération au niveau du stade CSP ou d'un lignage myéloïde déjà engagé. La prolifération monocytaire pourrait résulter de l'apparition d'anomalies épigénétiques ou génétiques secondaires. Nous rechercherons les gains et les pertes (nombre de copies au niveau de l'ADN) sur le génome complet, et d'autres aberrations génomiques dans les souris.
Les deux partenaires ont publié des études pionnières concernant le rôle de TIF1g dans l'hématopoïèse adulte. Ceux-ci sont hautement qualifiés dans le champ des CSH et de la leucémogenèse. Comme indiqué dans les objectifs du projet de recherche, ils travailleront sur des aspects différents mais complémentaires des nouveaux processus impliqués dans l'homéostasie et le contrôle de la différenciation.