Projet ANR-07-MIME-0025 – TRANSANO : Développement d'une méthode nouvelle et efficace de transgénèse chez Anopheles gambiae pour l'étude fonctionnelle des interactions Plasmodium falciparum-Anophèles
Programme : Microbiologie, immunologie et maladies émergentes (MIME) 2007
Année de financement : 2007
Coordinateur du projet : INSTITUT PASTEUR (INSTITUT PASTEUR)
Partenaires : Institut Pasteur
Montant : 256000.0 euros
Durée : 36 mois
Résumé : Anopheles gambiae est le vecteur africain majeur de Plasmodium falciparum, responsable de 90% des cas mortels mondiaux de paludisme.
Le décrytage de son génome en 2002 a stimulé la production d¿une multitude de données génomique et protéomique avec pour objectif majeur une meilleure compréhension des interactions moustique/plasmodium devant permetttre d¿identifier de nouvelles stratégies de contrôle de la transmission du paludisme. 
L¿exploitation de ces données est encore limitée par l¿absence d¿une méthode efficace de transgénèse. En particulier, les analyses génétiques gain de fonction et inactivation génique tissue spécifique ne peuvent être développées.
La recombinaison site spécifique médiée par l¿intégrase du phage FC31 est très efficace chez de nombreux eucaryotes. Notre objectif est de développer un système performant de transformation d¿An. gambiae, basé sur les capacités intégratives de FC31 et de l¿appliquer à l¿analyse fonctionnelle de gènes cible d¿intérêt
//Une lignée transgénique réceptive « universelle » d¿An. gambiae «PigBat »sera produite par intégration génomique d¿un site d¿attachement (AttP) du phage FC31 par transgénèse conventionnelle en utilisant le transposon piggyBac. Par co-injection dans cette lignée d¿un plasmide contenant un site d¿intégration de FC31 et de l¿intégrase FC31 nous démontrerons que l¿intégrase FC31peut induire l¿intégration génomique à haute fréquence d¿un gène reporter.
Nous développerons alors un système UAS-Gal4. Trois plasmides« Gal4 driver », contenant chacun un site AttB seront construits pour une expression spécifique dans le tube digestif, les hémocytes ou les glandes salivaires, les tissus interagissant avec Plasmodium lors de son développement chez le moustique. Après injection dans la lignée universelle PigBat les lignées « Gal4 driver » seront produites. Les gènes d¿intérêt, ou des séquences Inversée Répétées seront clonées dans les plasmides « UAS respondeur ». Par croisement avec une lignée « Gal 4 driver » l¿expression ou l¿inactivation tissue-specifique d¿un gène sera alors obtenue dans la descendance d¿un tel croisement. La réceptivité au développement de P. falciparum  de celle ci sera testée. 
Nous appliquerons ce système pour effectuer l¿analyse fonctionnelle de deux carboxypeptidases dont l¿expression est modifiée chez des moustiques infectés par P. falciparum (Lavazec IAI, 2007)
//La force de la stratégie proposée, outre la facilité de produire des lignées transgéniques par simple construction et injection du plasmide « respondeur » est l¿accès à un nombre non restreint d¿individus pour les analyses phénotypiques par simple croisement. Ceci n¿est pas le cas avec la méthode actuelle du RNAi, qui nécessite l¿injection d¿un nombre conséquent d¿individus pour chaque analyse phénotypique. De plus, cette stratégie permet des analyses de gain de fonction, peu développées par la faible efficacité de transformation d¿An. gambiae par transposon. Associée à notre capacité à infecter au laboratoire An. gambiae par P. falciparum, la mise en place de cette méthodologie doit permettre d¿identifier les gènes essentiels dans la réceptivité d¿An. gambiae à P. falciparum