CALM/arwiki huggingface dataset:
وادي الدحن هو أحد أودية منطقة جازان الواقعة جنوب غرب السعودية. ويقع في مركز الخشل؛ بالقرب من قرية اللقية شمال الخوبة، وتحديداً بين قرية السلب والخشل بمحافظة الحرث جنوب منطقة جازان. ويتميز الوادي بأشجارة الكثيفة التي شكلت عدداً من المتنزهات الطبيعية، كما يعدّ الوادي أحد أهم المواقع السياحية بالمنطقة.
الاستنساخ باستخدام TA هو استنساخ فرعي لا يحتاج إلى إنزيمات قاطعة مما يجعله أسهل وأيسر من الطريقة التقليدية في عملية الاستنساخ الفرعي. وتعتمد هذه الطريقة على قدرة كل من القواعد النووية الأدينين (يرمز له بالرمز A) والثايمين (يرمز له بالرمز T) حيث يختلط كلاهما مع مكملاتها من القواعد النووية الأخرى ى الجوانيين والأدينوسين في وجود إنزيم الربط الليجيز في أجزاء الحمض النووي المختلفة لكي يتحدا سويًا. وتتضاعف منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل عادة باستخدام بوليزميرات المستحرة المائية (Taq DNA polymerase) التي تضيف الأدينين (adenine) إلى نهاية المنتج من الطرف 3'. ويتم إدراجه إلى المنتج الذي يظهر في صورة متجهات خطية ويحمل عند الطرف 3' القاعدة النووية الثايمين التي تتكامل مع الأدينين. وتُزيد عَتائِد التجارية مع المتجهات المعدة مسبقًا وكاشفات تفاعل البوليميراز المتسلسل في سرعة العملية بشكل كبير.
عملية إنشاء المدرج.
يتم إنشاء المدرج باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل بمساعدة بُوليميِراز المستحرة المائية للحمض النووي. وهذا الإنزيم يفتقر من 3' إلى 5' في تصحيح الأخطاء ولكنه يمتلك قدرة فائقة على إضافة الأدينين عند نهاية كل طرف من المنتج. ومن الأفضل إذا كانت كبسولة تفاعل البوليميراز المتسلسل لديها القاعدة النووية الليجونين عند الطرف 5´، لأن ذلك يعمل على زيادة قدرة الإنزيم عند إضافة الأدينوسين عند هذا الطرف. ولا ينبغي أيضًا استخدام إنزيمنزيم السيرموستابل حيث إنه لا يترك الأدينين يتدلى عند الطرف 3'.
عملية إنشاء المتجه.
يظهر متجه الهدف في صورة خطية ويتم قطعه بواسطة الإنزيمات القاطعة للنهاية الحادة. ويتم بعد ذلك توصيل المتجه مع ديدوكسي ثيميدين ثلاثي الفوسفات (ddTTP) عن طريق استخدام ناقلة طرفية. وهذه العملية مهمة عند استخدام ديدوكسي ثيميدين ثلاثي الفوسفات (ddTTP) لضمان إضافة راسب الثايمين فقط. وتترك عملية التوصيل المتجه مع راسب الثيمين الناتئ الفردي 3' في كل نهاية كليلة. وعادةً ما تقوم الشركات المصنعة ببيع الاستنساخ باستخدام (TA) "kits" مع متجهات واسعة النطاق ومعد مسبقًا، بحيث تكون في صورة خطية ومربوطة مع راسب الثايمين الناتئ.
نظرًا لعدم الحاجة للإنزيمات القاطعة بهدف جعل المتجه في صورة خطية، لذلك تعتبر هذه الطريقة أسهل بكثير وأسرع وأبسط من الطرق الأخرى. وليس هناك حاجة لإضافة مواقع القطع عند تصميم المَشْرَع، وبالتالي يتم توفير الوقت والمال عند استخدام المشرع الأقصر. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام هذه التقنية كبديل للطرق التقليدية في الاستنساخ في النماذج التي لا توجد فيها مواقع القطع. ويعد الجانب الرئيسي السلبي لهذه التقنية هو عدم إمكانية توجيه الاستنساخ، مما يجعل هناك فرصة لنسبة قدرها 50 % من الجينات أن يتم استنساخها بطريقة عكسية.
تقنية FIND® هي تقنية تطور موجهة تستخدم إعادة تركيب الحمض الريبوزي النووي المنقوص الأكسجين لتحسين خصائص البروتينات. وهي تزيل الطفرات غير الهامة والضارة مع الحفاظ على والجمع بين الطفرات المفيدة التي من شأنها أن تعزز وظيفة البروتين.
بالنسبة للجين ذي الصلة، يلزم الحصول على مجموعة من قليل النوكليوتيد أحادي الجديلة ثم تغييرها باستخدام الطفرات العشوائية. ثم يتم إخضاع المجموعة المحولة حديثًا إلى نشاط نوكلياز خارجية، بحيث يتم خلق الأجزاء الشعورية والمضادة للإحساس. ثم يتم دمج مناطق الأجزاء المتداخلة جزءيًا وتمديدها باستخدام طريقة شبيهة بـ تفاعل البوليميريز المتسلسل. ثم يتم فرز هذه الطافرات ثنائية الجديلة للتحقق من الوظيفة المحسنة المطلوبة باستخدام المقايسة ذات الصلة. ويتم اختيار أفضل الطفرات لإجراء مزيد من نشاط نوكلياز الخارجية. يتم تكرار العملية (نوكلياز الخارجية وإعادة التركيب بطريقة مشابهة لتفاعل البوليميريز المتسلسل وفرز الطافرات)، عادة حوالي من 10 إلى 12 مرة، من أجل الحصول على أفضل الطافرات الممكنة مع الطفرات المفيدة فقط.
تشيبس (بالإنجليزية: CHIPS).
تشيبس هو بروتين يعمل على منع تنشيط الخلايا المناعية التي ترتبط عادة بالالتهاب. ويتمتع بروتين تشيبس بإمكانات كعامل مضاد للالتهابات، غير أن بروتين تشيب الأصلي ارتبط بالتنشيط والتفاعل مع الأجسام المضادة. وتم استخدام تقنية FIND® لخلق طافرة مبتورة ولكنها فعالة من هذا البروتين بتقليل تفاعل الأجسام المضادة.
تتمتع شركة أليجيتور بايوساينس (Alligator Bioscience) بحقوق الملكية الفكرية الخاصة بتقنية FIND وتستخدمها للتعاقد لتحسين البروتينات لصناعة المستحضرات الدوائية ولتطوير عقاقير البروتينات الخاصة بها.
بيكولو (من الإيطالية Piccolo بمعنى صغير ولكنه يسمى ottavino في إيطاليا) هي آلة موسيقية، وهي صنف صغير الحجم من آلة النفخ المسماة فلوت.
كانت أعياد روما القديمة (Festivals in ancient Rome) تمثل جزءًا هامًا من الحياة الدينية الرومانية خلال حقبتي الجمهورية والإمبراطورية، وإحدى السمات البدائية في التقويم الروماني. وكانت العطلات، "الفيرايي" (Feriae) ("العطلات" بمعنى "الأيام المقدسة"؛ ومفردها "فيراي" (feriae) أو ديس فيراياليس (dies ferialis)) إما عامة "(publicae)" أو خاصة " (privatus)". اعتاد الرومان الاحتفال بالعطلات الرسمية، وتلقت تلك العطلات تمويلًا عامًا. ولم تكن الألعاب (اللودي) "(ludi)"، مثل لودي أبوليناريس (Ludi Apollinares) أعيادًا، "فيراي"، بالمعنى المفهوم، ولكنها كانت تعد "ديس فيستي" (dies festi)، أي عطلات بالمعنى الحديث، أو أيام إجازة من العمل. كانت الدولة تمول الـ"فيرايي"، أما الـ"لودي" فكانت تُمول من الأثرياء في ذلك الوقت. أما الأعياد الخاصة "فيراي برايفتي"، فهي تلك التي تُقام تكريمًا لشخصٍ أو لعائلة. يُركز ذلك المقال على الأعياد العامة فقط، والتي تشمل الشعائر التي أقامها كهنة روما في المعابد، بالإضافة إلى الاحتفالات التي أقامتها العائلات في ذلك الوقت في روما.
تنقسم الـ"فرايي" إلى ثلاثة أنواع:
تعد قصيدة "فاستي" (Fasti) لـأوفيد (Ovid)، وهي قصيدة غير مكتملة تصف الأعياد في روما من يناير إلى يونيو في عهد أغسطس (إمبراطور) (Augustus)، واحدة من أهم المصادر عن الأعياد الرومانية القديمة.
مستقبل التاخيكينين 1 (TACR1) المعروف أيضا باسم مستقبل 1 للتاخيكينين (NK1R) أو مستقبل المادة ب (SPR) هو عبارة عن مستقبل مزدوج بالبروتين ج الموجود في النظام العصبي المركزي والنظام العصبي المحيطي. كما أن الربيطة الداخلية لهذا المستقبل عبارة عن المادة ب على الرغم من أنه يوجد صلة بين التاخيكينينات الأخرى. ويتم إنتاج البروتين بواسطة جين "TACR1".
تنتمي التاخيكينينات لعائلة النيوروببتيدات التي تشترك في نفس منطقة النهاية الكربونية الهيدروفوبي مع تسلسل الحمض الأميني، حيث يمثل X الراسب الهيدروفوبي والذي يكون إما عطريًا أو أليفاتيًا متفرعًا من بيتا. وتختلف منطقة النهاية النِتْروجينِيَّة في الأنواع المختلفة للتاخيكينينات.؛ وتشير لفظة التاخيكينين إلى البداية السريعة للفعل الناتج عن الببتيدات الموجودة في العضلات الملساء. ؛ وتعد المادة ب أكثر عناصر عائلة التاخيكينين تداولاً وقوة. وتعتبر ببتيد مكون من 11 راسب حمض أميني وفقًا لتسلسل [[الحمض الأميني أَرْجينين Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met NH2.؛ وترتبط المادة ب مع كل ثلاثة من مستقبلات التاخيكينين ولكنها ترتبط بشكل أقوى مع مستقبل NK1.؛
يتكون [[مستقبل التاخيكينين]] NK1 من 407 راسب حمض أميني، كما أن كتلة الجزيئية تساوي 58.000 . من مستقبل NK1 مثل بقية مستقبلات التاخيكينين الأخرى والتي تتكون من سبعة نطاقات عبر غشائية (TM) [[هيدروفوبية]] مع ثلاث عُرَى بَرَّانيّة وثلاث جَوَّانية ونهايات نِتْروجينِيَّة ونهايات كربونية هيولية. وتمتلك العرى مواقع وظيفية تتضمن الحمضين الأمينيين السيستئين المتعلقين بجِسْر ثُنائِيّ السُّلْفيد، حَمْضُ الأسبارتيك-Arg-Tyr، المسؤول عن الربط بين الأريستين و Lys/Arg-Lys/Arg -X-Lys/Arg، والذي يتفاعل مع البروتين ج.
التوزيع والوظيفة.
يتواجد مستقبل NK1 في كلا الجهازين العصبي المركزي والعصبي المحيطي. ويظهر المستقبل في الخلايا العصبية وجذع الدماغ والخلايا الباطنية الوعائية والعضلات والأجهزة الهضمية والأجهزة التناسلية البولية والنسيج الرئوي والغدة الدرقية وأنواع مختلفة من خلايا الدم البيضاء.؛ وتتصل عملية الربط بين المادة ب والمستقبل NK1 بنقل إشارات الإجهاد والألم وتقلص العضلات الملساء والالتهاب. وقد تم تجربة مضادات مستقبل NK1 في الصُّداع النِّصْفِيّ والقيء والأمراض العقلية. وفي الحقيقة، قد ثبتت فاعلية ابريببتانت (aprepitant) في العديد من نماذج الفيزيولوجية المرضية للقلق والاكتئاب. وكذلك بعض الأمراض التي يندرج فيها جهاز مستقبل NK1 مثل الربو والتهاب المفاصل الرثياني واضطرابات الجهاز الهضمي.
SP is synthesized by neurons and transported to synaptic vesicles; the release of SP is accomplished through the depolarizing action of calcium-dependent mechanisms.
When NK1 receptors are stimulated, they can generate various second messengers, which can trigger a wide range of effector mechanisms that regulate cellular excitability and function. One of those three well-defined, independent second messenger systems is stimulation, via phospholipase C, of phosphatidyl inositol, turnover leading to Ca mobilization from both intra- and extracellular sources. Second is the arachidonic acid mobilization via phospholipase A2 and third is the cAMP accumulation via stimulation of adenylate cyclase. It has also been reported that SP elicits interleukin-1 (IL-1) production in macrophages, is known to sensitize neutrophils and enhance dopamine release in the substantia nigra region in cat brain. From spinal neurons, SP is known to evoke release of neurotransmitters like acetylcholine, histamine and GABA. It is also known to secrete catecholamines and play a role in the regulation of blood pressure and hypertension. Likewise, SP is known to bind to N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptors by eliciting excitation with calcium ion influx, which further releases nitric oxide. Studies in frogs have shown that SP elicits the release of prostaglandin E2 and prostacyclin by the arachidonic acid pathway, which leads to an increase in corticosteroid output.
In combination therapy, NK1 receptor antagonists appear to offer better control of delayed emesis and post-operative emesis than drug therapy without NK1 receptor antagonists. NK1 receptor antagonists block responses to a broader range of emetic stimuli than the established 5-HT3 antagonist treatments. وأفادت التقارير بأن مضادات مستقبلات NK1 المركزية مثل CP-99994، تمنع القيء المستحثة بآبومُورْفين ولوبريميدين، حيث يؤثر المركبان على الآليات المركزية.
ويعد هذا المستقبل هدف دوائي جذابًا، خاصةً في حالة استخدامه كمسكن قوي ومضاد للاكتئاب. وفي عام 2008 قامت دراسة بتعيينه كأحد المرشحين لمسببات لاضطراب ثنائي القطب. وعلاوة على ذلك، فقد أعطت مضادات TACR1 الأمل في علاج إدمان المسكرات. وفي النهاية، فإنه يمكن أن يكون لمضادات TACR1 دور كمضاد للقيء جديد من نوعه.amp;lt;ref name="pmid16514255"&gt;&lt;/ref&gt;
لجينات منتقاة.
تتم إتاحة العديد من اللجينات المختارة لمستقبل NK1 حيث تمت تجربة العديد منها كمضاد للقيء في الاستخدامات الإكلينيكيّة.
[[تصنيف:بيولوجيا الاضطراب ثنائي القطب]]
[[تصنيف:علوم عصبية جزيئية]]
[[تصنيف:مستقبلات مقترنة بالبروتين ج]]
[[تصنيف:وسواس قهري]]
القداسة أو الحرمة، هي حالة عامة لكون الشيء مشرفًا (ويتلقاها الأفراد المتدينون بوصفها كل ما يصحب الإله) أو مقدس (تعتبر أمرًا يستحق الاحترام الروحي أو التفاني؛ أو الرهبة الملهمة أو الخشوع في أوساط المؤمنين بمجموعة ما من الأفكار الروحانية). وفي بعض السياقات الأخرى، "غالبًا ما تعتبر الأشياء "شريفة" أو "مقدسة" إذا استخدمت من أجل أغراض روحانية"، مثل التعبد أو خدمة الآلهة. كما يمكن أن تستخدم تلك المصطلحات في سياقات غير روحانية أو شبه روحانية ("الحقائق المقدسة" في الدستور). وأحيانًا تنسب إلى الأشخاص ("رجل شريف" له مهنة دينية، "رسول كريم" يبجله متبعوه)، أو الأشياء ("القطع الأثرية المقدسة" والمبجلة والمباركة )، أو للأوقات ("أيام مباركة" لها استبطان روحاني، كما في عطلات الشتاء)، أو للأماكن ("الأرض المقدسة"، "المكان المبارك").
إشقيل بصيلي (الاسم العلمي:Scilla bulbosa) هو غير مؤكد من النباتات يتبع الإشقيل من ال الهليونية.
إشقيل بلغاري (الاسم العلمي:Scilla bulgarica) هو نباتي يتبع الإشقيل من الهليونية.
يوجد في الثدييات ثلاثة مستقبلات للتاخيكينين معروفة، يُرمز لها NK1, NK2 and NK3. وتندرج هذه المستقبلات الثلاثة ضمن عائلة المستقبلات المقترنة بالبروتين ج عبر الغشائية السبعة والتي تعمل على تنشيط إنزيم فُسْفُولِيباز سي لإنتاج ثلاثي فوسفات إينوزيتول (الذي يسمى مقترن Gq)
فيما يلي الجينات وربيطات المستقبلات:
الفن الديني أو الفن المقدس هو تصوير فني يستخدم الإيحاءات والدوافع الدينية وغالبًا ما يقصد به رفع العقل إلى الأجواء الروحانية المطلوبة. وينطوي الفن المقدس على الشعائر والممارسات الطقوسية والجوانب العملية والتنفيذية لمسار الإدراك الروحاني بحسب تقاليد الفنان الدينية.
ينتج الفن المسيحي المقدس لمحاولة توضيح، واستكمال، وتصوير مبادئ المسيحية بشكلٍ ملموس، على الرغم من ذلك فإن هناك بعض التعريفات الأخرى الممكنة. تستخدم معظم الجماعات المسيحية الفن إلى حدٍ ما أو تكون مجبرة على استخدامه، على الرغم من أن بعضهم كان لديه اعتراضات قوية على بعض أشكال التصوير الفني، وكان هناك فترات كبيرة من المروق (iconoclasm) في المسيحية. معظم الفن المسيحي تلميحي، أو مبني على أساس الرموز (theme) المألوفة للمشاهد المقصودة. وتعد واحدة من أكثر الرموز والأشكال شيوعًا هي صورة العذراء مريم وهي تحمل الطفل يسوع (infant Jesus). والأخرى هي صورة المسيح (Christ) معلق على الصليب (Cross). ولصالح الأميين، تم وضع نظام أيقوني (iconographic) محكم للتعرف بشكلٍ قاطع على المشاهد. على سبيل المثال، تصور القديسة أجنس (Saint Agnes) تحمل حملاً، ويصور القديس بطرس (Saint Peter) معه مفاتيح، والقديس باتريك (Saint Patrick) معه نبات الشامروك (shamrock). فكل قديس يكون بصحبة بعض الرموز أو الصفات التي تميزه في الفن المقدس.
أدى تحريم تجسيد الصور التمثيلية في الفن الديني، بالإضافة إلى الشكل الزخرفي الطبيعي للخط العربي، إلى استخدام الديكورات الخطية، التي غالبًا ما كانت تضم تكرار أنماط هندسية تعبر عن مُثُل النظام والطبيعة. وكانت تستخدم في العمارة الدينية، والسجاد، والوثائق المكتوبة بخط اليد. عكس الفن الإسلامي تلك النظرة المتوازنة، والمتناغمة للعالم. وركز على الجوهر الروحاني بشكلٍ أكبر من الهيئة الحسية الملموسة.
على الرغم من أن التاريخ الإسلامي شهد نفورًا من العبادة المحتملة للأوثان، وهي النظرة التي تمثلها السُنّية الحديثة بوضوح. الا أن المنمنمات الفارسية (Persian miniature)، بالإضافة إلى تصوير محمد (depictions of Muhammad) والملائكة في الإسلام (angels in Islam) ظلت قائمة في القرون الوسطى كأمثلةٍ بارزة تتعارض مع التقاليد السُنيّة الحديثة. كما أن الشيعة (Shi'a) لم ينفروا بشكلٍ كبير من تصوير الشخصيات، بما في ذلك الأنبياء طالما أن التصوير محترم.
ينظر إلى الخط بشكلٍ كبير باعتباره العنصر الأساسي في الفن الإسلامي. ويدل تناقل القرآن وكتب الوحي الإلهي التي نزلت على محمد باللغة العربية، والمتأصلة بالخط العربي، على إمكانية تطوير مجموعةٍ متنوعةٍ من الأشكال المزيّنة. وتوظيف الخط في الزينة له نظرة جمالية واضحة ولكنه أيضًا حوى مكونًا سحريًّا كامنًا في حين أن معظم الأعمال الفنية ذات النقوش المقروءة، لا يستطيع كل المسلمين قراءتها. ومع ذلك ينبغي على الشخص أن يضع في اعتباره أن فن الخط بشكلٍ أساسي هو وسيلة لتوصيل النص، حتى وإن كان بشكلٍ زخرفي.
وقد رُسمت الحروف العربية بشكلٍ سريع مع صعود الإسلام في القرن السابع الميلادي إلى ما نراه من شكلٍ فني جميل، بعد شكله البسيط البدائي في القرنين الخامس والسادس. والعائلتان الأساسيتان في أنماط الخط هما النمط الجاف، والذي يعرف بالخط الكوفي، والنمط الليني المتصل، والذي يضم الخط النسخي، والنستعليق والعديد من الأنماط الأخرى.
في مجالات علم الأنسجة وعلم الأمراض وعلم الأحياء الخلوي، التثبيت (بالإنجليزية: fixation) هو عملية كيميائية يتم من خلالها المحافظة على الأنسجة البيولوجية من التحلل، وبالتالي منع التحلل الذاتي أو التعفن. وتقوم عملية التثبيت بإنهاء أي تفاعلات كيميائية حيوية جارية، وقد تزيد أيضًا من القوة الميكانيكية أو استقرار الأنسجة المعالجة.
أغراض التثبيت.
يتم إجراء تثبيت الأنسجة لأسباب عديدة. من بين هذه الأسباب قتل النسيج بحيث يتم منع تحلل ما بعد الوفاة (التحلل الذاتي والتعفن).
تحتفظ عملية التثبيت بعينة من المواد البيولوجية (النسيج أو الخلايا) قريبًا من حالتها الطبيعية قدر الإمكان في عملية إعداد الأنسجة لفحصها. ولتحقيق هذا، يجب تحقيق عادة عدة شروط.
أولاً: يعمل المثبت عادة على تعطيل الجزيئات حيوية المنشأ - لا سيما إنزيمات التحلل البروتيني —التي تهضم أو تتلف العينة.
ثانيًا: يعمل المثبت عادة على حماية العينة من التلف الخارجي. تُعتبر المثبتات سامة للكائنات الدقيقة الأكثر شيوعًا (البكتيريا بشكل خاص) التي قد توجد في عينة الأنسجة أو التي قد تستعمر الأنسجة المثبتة. علاوة على ذلك، تقوم العديد من المثبتات كيميائيًا بتغيير المواد المثبتة أقل مذاقًا (إما غير قابلة للهضم أو سامة) بالنسبة للكائنات الدقيقة الانتهازية.
وأخيرًا: غالبًا ما تقوم المثبتات بتغيير الخلايا أو الأنسجة على المستوى الجزيئي لزيادة قوتها الميكانيكية أو استقرارها. وهذه القوة والصلابة المتزايدة يمكن أن تساعد في المحافظة على مورفولوجيا (شكل وبنية) العينة عند معالجتها لإجراء مزيد من التحليل.
وحتى التثبيت الأكثر حذرًا يغير العينة ويقدم أجزاء اصطناعية يمكنها أن تتداخل مع تفسير البنية المستدقة الخلوية. أحد الأمثلة البارزة هو "الجسيم المتوسط" البكتيري، الذي كان يُعتقد أن يكون عضي في البكتيريا موجبة الجرام في سبعينيات القرن الماضي، ولكنه تبين لاحقًا بواسطة التقنيات الجديدة التي تم تطويرها للمجهر الإلكتروني أنه مجرد جزء اصطناعي من التثبيت الكيميائي. وتوحيد التثبيت وغيره من إجراءات معالجة الأنسجة الأخرى يأخذ تقديم هذه الأجزاء الاصطناعية بعين الاعتبار من خلال تحديد الإجراءات التي تقدم هذه الأجزاء الاصطناعية وما هي أنواع هذه الأجزاء الاصطناعية. والباحثون الذين يعرفون أنواع الأجزاء الاصطناعية المتوقعة مع كل نوع من الأنسجة وأسلوب المعالجة يستطيعون تفسير الأقسام مع الأجزاء الاصطناعية بدقة أو اختيار تقنيات تقلل الأجواء الاصطناعية في المناطق محل الاهتمام.
عملية التثبيت.
عادة ما يكون التثبيت هو المرحلة الأولى في عملية متعددة المراحل لتحضير عينة من مادة بيولوجية للفحص المجهري أو غير ذلك من التحاليل. وبالتالي قد يتوقف اختيار المثبت وبروتوكول التثبيت على خطوات معالجة إضافية وتحليلات نهائية تم التخطيط لها. على سبيل المثال تستخدم الكيمياء الهيستولوجية المناعية أجسامًا مضادة تلتصق بهدف بروتيني محدد. ويمكن كيميائيًا للتثبيت المطول إخفاء هذه الأهداف ومنع التصاق الأجسام المضادة. وفي هذه الحالات، عادة ما يتم استخدام طريقة (تثبيت سريع) باستخدام الفورمالين لمدة 24 ساعة تقريبًا.
والمواد المستخدمة
هناك ثلاثة أنواع من عملية التثبيت بشكل عام:
التثبيت بالحرارة: بعد تجفيف اللطاخة في درجة حرارة الغرفة، يتم مسك الشريحة بملقط أو مشبك وتمريرها عبر شعلة الموقد عدة مرات للقتل بالحرارة ولصق الكائن الحي بالشريحة. ويُستخدم هذا النوع بشكل روتيني مع البكتيريا والعتائق. وعملية التثبيت بالحرارة عادة ما تحتفظ بالمورفولوجيا العامة ولكنها لا تحتفظ بمورفولوجيا الهياكل الداخلية.
وتعمل الحرارة على تغيير الخصائص الطبيعية الإنزيم الحال للبروتين ومنع التحلل الذاتي. ويتعذر استخدام التثبيت بالحرارة في طريقة اللطخة المحفظية نظرًا لأن التثبيت بالحرارة سوف يسبب انكماش الكبسولة أو تدميرها (الكنان السكري) ويتعذر رؤيته في اللطخات.
التثبيت بالإرواء: عبر تدفق الدم. يتم حقن المثبت في القلب بمقدار حقن يتوافق مع النتاج القلبي. وينتشر المثبت عبر الجسم كله، ولا يموت النسيج حتى يتم تثبيته. وهذه العملية تتميز بميزة المحافظة على المورفولوجيا الكاملة، ولكن يعيبها أن الخاضع للعملية يموت والتكلفة عالية (بسبب مقدار المثبت اللازم للكائنات الدقيق الأكبر حجمًا)
الغمر: يتم غمر عينة الأنسجة في مثبت بمقدار أكبر 20 مرة على الأقل من حجم النسيج المراد تثبيته. ويجب انتشار المثبت عبر النسيج المراد تثبيته، لذلك يجب الأخذ بعين الاعتبار حجم النسيج وكثافته وكذلك نوع المثبت. واستخدام عينة أكبر حجمًا يعني أن الأمر يستغرق وقتًا أطول حتى يصل المثبت إلى النسيج الأكثر عمقًا. هذه الطريقة هي الأفضل في حالة الفراغ الخفيف.
= التثبيت الكيميائي =
في هذه العملية، يتم الاحتفاظ بالهياكل في حالة (كيميائيًا وبنيويًا) قربية من الأنسجة الحية قدر الإمكان. وهذا يتطلب مثبتًا كيميائيًا يمكنه تحقيق الاستقرار للبروتينات والأحماض النووية والمواد المخاطية للأنسجة من خلال جعلها غير قابلة للذوبان.
أنواع المثبتات الكيميائية.
المثبتات التشابكية - ألدهيدات.
تعمل المثبتات التشابكية من خلال خلق الروابط الكيميائية التساهمية بين البروتينات في النسيج. وهذا يثبت البروتينات القابلة للذوبان بالهيكل الخلوي، ويضفي صلابة إضافية على الأنسجة.
وإلى حد بعيد فإن المثبت الأكثر شيوعًا في الاستخدام في الأنسجة هو الفورمالديهايد. وعادة ما يُستخدم كفورمالين محمي محايد 10% أي حوالي الفورمالديهايد ما بين 3.7% و4% في دارئ الفوسفات الملحي. ونظرًا لأن الفورمالديهايد هو غاز في درجة حرارة الغرفة، يتحلل غاز فورمالين-الفورمالديهايد في الماء (~37% w/v) - يُستخدم عند إجراء مثبت سابق. بارافورمالدهيد هو شكل مبلمر من الفورمالديهايد، ، يتم الحصول عليه عادة على شكل مسحوق أبيض دقيق، الذي يزيل البلمرة ويعود إلى الفورمالين عند تسخينه. يقوم الفورمالديهايد بتثبيت الأنسجة بواسطة تشبيك البروتينات، وفي المقام الأول بقايا الحمض الأميني الأساسي ليزين. وآثاره قابلة للرد عن طريق الماء الزائد وهو يتجنب تصبغ الفورمالين. ومن بين الفوائد الأخرى: التخزين طويل المدى والاختراق الجيد للأنسجة. وهو جيد على نحو خاص لتقنيات الكيمياء الهيستولوجية المناعية. ويمكن أيضًا أن يُستخدم بخار الفورمالديهايد كمثبتات للطخات الخلية.
وهناك ألدهيد شائع آخر لعملية التثبيت وهو غلوتارالدهيد. وهو يعمل بطريقة مماثلة للفورمالديهايد من خلال التسبب في تشوه هياكل ألفا-الحلزوني في البروتينات. ومع ذلك غلوتارالدهيد هو جزيء أكبر حجمًا، ولذلك فإن معدل انتشاره عبر الأغشية أبطأ من الفورمالديهايد. وبالتالي قد تتم إعاقة تثبيت غلوتارالدهيد على عينات الأنسجة الأكثر سمكًا، ولكن يمكن التغلب على هذه المشكلة عن طريق تقليل حجم عينة الأنسجة. وإحدى مزايا التثبيت بالغلوتارالدهيد هو أنه قد يتيح منتجًا أكثر صلابة أو أكثر ارتباطًا وطوله الأكبر ومجموعتي الألدهيد يتيحان له ’إيصال‘ وربط أزواج جزيئات البروتين الأبعد. وإنه يسبب تغيرات سريعة غير قابلة للإعادة ويقوم بعملية التثبيت على نحو سريع ومناسب تمامًا للمجهر الإلكتروني، ويقوم بعملية التثبيت عند 4oC، ويعطي أفضل التفاصيل الهيولية والنووية العامة. ومع ذلك فإنه ليس مثاليًا لتلطيخ الكيمياء الهيستولوجية المناعية.
وبعض بروتوكولات التثبيت تدعو إلى الجمع بين الفورمالديهايد والغلوتارالدهيد بحيث تكمل قوة كل منهما الآخر.
وهذه المثبتات المتشابكة لا سيما الفورمالديهايد تميل للمحافظة على البنية الثانوية للبروتينات وربما تحمي كميات كبيرة من البنية الثالثة أيضًا.
المثبتات المرسبة - الكحولات.
تعمل المثبتات المرسبة (أو "المغيرة للطبيعة") من خلال تقليل قابلية ذوبان جزيئات البروتينات و(غالبًا) من خلال تعطيل التفاعلات الكارهة للماء التي تعطي الكثير من البروتينات بنيتها الثالثة. وعملية ترسيب وتجميع البروتينات هي عملية مختلفة بشكل كبير عن التشابك الذي يحدث مع مثبتات ألدهيد.
والمثبتات الترسبية الأكثر شيوعًا هي الإيثانول والميثانول. وتُستخدم عادة لتثبيت الأجزاء المجمدة واللطخات. ويُستخدم الأسيتون أيضًا وقد تبين أنه يعطي حماية هيستولوجية (الأنسجة) أفضل من الأجزاء المجمدة عند استخدامه في تقنية أسيتون ميثيل البنزوات الزيلين.(AMEX).
ونادرًا ما تُستخدم ممسخات البروتينات - الميثانول والإيثانول والأسيتون - وحدها كحواجز تثبيت ما لم تدرس الأحماض الأمينية.
حمض الخليك هو ممسخ يُستخدم أحيانًا جنبًا إلى جنب مع المثبتات الترسبية الأخرى. ومن المعروف أن الكحوليات -في حد ذاتها- تسبب انكماش وتصلب الأنسجة أثناء التثبيت في حين أن حمض الخليك وحده معروف بتسببه في انتفاخ الأنسجة؛ والجمع بين المركبين قد يؤدي إلى محافظة أفضل على مورفولوجيا الأنسجة.
العوامل المؤكسدة.
يمكن للمثبتات المؤكسدة التفاعل مع سلاسل جانبية مختلفة للبروتينات والجزيئات الحيوية الأخرى، مما يتيح تشكيل تشابكات تعمل على استقرار بنية الأنسجة. ومع ذلك، تسبب هذه المثبتات تمسخًا واسع النطاق على الرغم من المحافظة على نقاء بنية الخلية وتُستخدم بشكل رئيس كمثبتات ثانوية.
رباعي أكسيد الأوزميوم يُستخدم في كثير من الأحيان كمثبت ثانوي عند تحضير العينات للمجهر الإلكتروني. (لا يتم استخدامه للفحص المجهري الضوئي حيث إنه يخترق الأجزاء السميكة للأنسجة بشكل ضعيف للغاية.)
يمكن استخدام ثاني كرومات البوتاسيوم وحامض الكروم وبرمنغنات البوتاسيوم في تحضيرات هيستولوجية معينة.
الزئبقيات.
تتمتع الزئبقيات مثل B-5 ومثبت زنكر بآلية غير معروفة تزيد سطوع اللطخة وتعطي تفاصيل نووية ممتازة. وعلى الرغم من سرعتها، فإن الزئبقيات تخترق بشكل ضعيف وتسبب انكماش الأنسجة. وأفضل تطبيق لها هو تثبيت الأنسجة المكونة للدم والأنسجة الشبكية البطانية. لاحظ أيضًا أنه نظرًا لأنها تحتوي على زئبق يجب توخي الحذر عند التخلص منها.
البيكرات.
تخترق البكرات الأنسجة بشكل جيد للتفاعل مع الهيستونات والبروتينات الأساسية لتكوين البكرات البلورية مع الأحماض الأمينية وترسيب جميع البروتينات. وهي تُعتبر مثبتًا جيدًا للأنسجة الضامة وتحفظ الجليكوجين بشكل جيد وتستخرج الدهون لإعطاء نتائج فائقة للفورمالديهايد في التلطيخ المناعي للهرمونات بيولوجية المنشأ وعديدة الببتيد. ومع ذلك، فإنها تسبب فقدان كثرة القعدات ما لم يتم غسل العينة جيدًا عقب التثبيت. من المساوئ لهذا النوع من المثبتات هي أنها لا تقوم بتثبيت الكرموسومات كما أنها تخترق النسيج بشكل بطيء وهذا يؤدي إلى انكماش النسيج ولكن تتم معالجة هذا النسيج بواسطة جلاسيل اسيتك اسد Glacial acetic acid
مثبت HOPE.
يعطي تأثير حماية حمض هيبس-غلوتاميك المذيب العضوي الدارئ (HOPE) مورفولوجيا شبيهة بالفورمالين ومحافظة ممتازة على المستضدات البروتينية المناعية للكيمياء الهيستولوجية المناعية والكيمياء النسيجية للإنزيمات ونتائج جيدة للحمض النووي (RNA) والحمض الريبي النووي المنزوع الأكسجين (DNA) وعدم وجود البروتينات المتشابكة.
الأقسام المجمدة.
توضع قطع صغيرة من الأنسجة (5×5×3مم) على وسيط واقٍ من البرد - OCT أو TBS أو كرايجول - ثم تُجمد في نظير البنتان يتم تبريده بواسطة النتروجين السائل. يتم بعد ذلك تقسيم الأنسجة في مشراح دقيق للتجميد أو ناظم البرد. يتم بعد ذلك تثبيت الأقسام في أحد المثبتات التالية:
الأسيتون الخالص لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة،
95% إيثانول لمدة تتراوح من 10 إلى 15 دقيقة أو
الأسيتون الخالص لمدة 10 دقائق يتبعه 95% إيثانول لمدة 10 دقائق
الأوامر والنواهي للمثبتات الكيميائية.
~ بكرات
العوامل المؤثرة على التثبيت.
الأس الهيدروجيني (pH).
يجب أن يظل في النطاق الفسيولوجي، بين 4 و9pH. يجب الاحتفاظ بالأس الهيدروجيني الخاص بحماية البنية المستدقة بين 7.2 و7.4.
الأسموزية.
تؤدي المحاليل مفرطة التوتر إلى انكماش الخلية.
وتؤدي المحاليل ناقصة التوتر إلى تورم الخلية وضعف التثبيت.
الفورمالين الدارئ المحايد هو 4% فورمالدهايد (1.33 أسمولي) في دارئ كبريتيد الرصاص الثنائي (0.3 أسمولي) ويصل إلى 1.63 أسمولي. وهذا محلول مفرط التوتر جدًا إلا أنه عمل بشكل جيد كعامل عام لتثبيت الأنسجة لسنوات عديدة في مختبرات علم الأمراض.
1-4مم سماكة
حجم المثبت.
أكبر 15 إلى 20 مرة على الأقل من حجم النسيج
إن زيادة درجة الحرارة يزيد من سرعة التثبيت. ومع ذلك، الأمر يتطلب عناية لتجنب طهي العينة. عادة ما يتم التثبيت في درجة حرارة الغرفة.
كقاعدة عامة ساعة واحدة لكل 1 مم