CALM/arwiki huggingface dataset:
باول ترولوب هو مدرب كرة قدم ولاعب كرة قدم بريطاني في مركز الوسط، ولد في 3 يونيو 1972 في سويندون في المملكة المتحدة. شارك مع منتخب ويلز لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع ديربي كاونتي وسويندون تاون وغريمسبي تاون وكريستال بالاس وكوفنتري سيتي ونادي بريستول روفيرز ونادي توركي يونايتد ونادي فولهام ونورثامبتون تاون.
مطار إدنبرة ، هُو مطار دولي يقع في مدينة إدنبرة عاصمة اسكتلندا. خلال سنة 2019، احتل المطار المرتبة الأولى كأكثر المطارات ازدحاما في اسكتلندا، حيث مر عبره ما مجموعه 14.7 مليون مسافر. كما احتل أيضا خلال تلك السنة، المرتبة السادسة ضمن قائمة أكثر المطارات ازدحاما في المملكة المُتحدة. يبعد المطار بحوالي عن مركز المدينة. يتوفر المطار على مُدرج واحد وعلى محطة مُسافرين واحدة، كما يُشغل ما مجموعه 2,500 عاملا.
فيم يلي قائمة بخطوط وشركات الطيران التي تُسير رحلات جوية مُنتظمة أو مُستأجرة من وإلى مطار إدنبرة:
باولو فيريرا-مينديز هو لاعب كرة قدم برازيلي في مركز الوسط، ولد في 13 مايو 1990 في غويانيا في البرازيل. لعب مع أتلانتا سيلفرباكس.
الروابط المتدلية في الكيمياء هي توصيف لحالة تكافؤ غير مشبعة في ذرة غير متمركزة. تشكل الذرات في العادة روابط تساهمية مع الذرات الأخرى كي تملأ مداراتها الإلكترونية؛ ولكن في حال غياب تلك الذرات المجاورة فتدعى تلك الحالة بالرابطة المتدلية، وكذلك هو توصيف للجذور الحرة.
يستخدم هذا المصطلح عادة في مجال صناعة أشباه الموصلات لوصف حالة ذرات السيليكون.
إم سي مي هي ممثلة كورية جنوبية. ولدت في 29 مايو 1987 في سول، كوريا الجنوبية
بيدرو فيريرا-مينديز هو لاعب كرة قدم برازيلي في مركز الهجوم، ولد في 13 مايو 1990 في غويانيا في البرازيل. لعب مع أتلانتا سيلفرباكس وإندي إليفن.
تشوي هي سيو (هانغل: 최희서) هي ممثلة كورية جنوبية. ولدت في 24 ديسمبر 1986 في سول، كوريا الجنوبية. اشتهرت بالدور فوميكو كانيكو في الفيلم التاريخي لعام 2017.
بيير-أنطوان مارتيني هو لاعب كرة قدم فرنسي في مركز حراسة المرمى، ولد في 27 يونيو 1988 في مارسيليا في فرنسا. لعب مع نادي ليفينغستون ونادي نيس ويوفل تاون.
كيم إينا هي شاعرة غنائية كورية جنوبية ولدت في 27 أبريل 1979. اشتهرت بكتابة كلمات الأغاني بوب كوري، كانت نشطة منذ عام 2003.
ديسكوغرفي.
هذا هو جدول الأغاني التي كتبتها وشاركت في كتابتها، والتي بلغت ذروتها في المرتبة الأولى على مخطط غاون للموسيقى في كوريا الجنوبية.
بيير-هنري لامي هو لاعب كرة قدم فرنسي في مركز الدفاع، ولد في 17 أغسطس 1987 في في فرنسا. لعب مع ستاد لافال ونادي أنجيه ونادي لوهان كويسو ونادي نيور.
باول رودجرز هو لاعب كرة قدم بريطاني في مركز ، ولد في 6 أكتوبر 1989 في في المملكة المتحدة.&lt;ref name="List of Players under Written Contract Registered Between 01/05/2010 and 31/05/2010"&gt;&lt;/ref&gt; شارك مع منتخب إنجلترا تحت 16 سنة لكرة القدم ومنتخب إنجلترا تحت 17 سنة لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع سانت نيوتس تاون ونادي أرسنال ونادي بروملي ونادي فارنبوروه ونورثامبتون تاون ونيوبورت كونتي.
رفيع ليفي هو لاعب كرة قدم إسرائيلي في مركز الهجوم، ولد في 22 فبراير 1938 في إسرائيل، وتوفي بنفس المكان في 25 فبراير 2021. لعب مع .
جوردن ماكفرلين-ارتشر هو لاعب كرة قدم بريطاني في مركز الهجوم، ولد في 11 نوفمبر 1993 في والسول في المملكة المتحدة. لعب مع نادي ساوثبورت.
ريتشارد غودارد-كراولي هو لاعب كرة قدم بريطاني في مركز الوسط، ولد في 31 مارس 1978 في في المملكة المتحدة. لعب مع نادي أرسنال ونادي برينتفورد ونادي وكينغ.
ماثيو لويس-جان هو لاعب كرة قدم فرنسي في مركز ، ولد في 22 فبراير 1976 في في فرنسا. شارك مع منتخب فرنسا تحت 21 سنة لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع نادي لوهافر ونوتينغهام فورست ونورويتش سيتي.
رسلان ميخايلوف هو لاعب كرة قدم روسي في مركز الوسط، ولد في 22 فبراير 1979 في نوفوروسيسك في روسيا. لعب مع دينامو ستافروبول ونادي فوستوك.
مخطط مبيعات الأغاني الرقمية العالمية هو مخطط قياسي أسبوعي تم تجميعه بواسطة Nielsen SoundScan ونشرته مجلة "Billboard." تم إنشاء المخطط في عام 2010 - كان واحدًا من 21 مخططًا للأغاني محددة النوع أطلقتها "بيلبورد في" ذلك العام - مع إصدار بتاريخ 23 يناير، ويصنف أفضل 25 أغنية رقمية مبيعًا في نوع الموسيقى العالمية. سيطر تسجيل " Somewhere Over the Rainbow " للمغني وكاتب الأغاني والموسيقي من هاواي Israel Kamakawiwoole حصل على الترتيب لمعظم فترات وجوده، حيث بلغ إجمالي عدد الأسابيع 345 في الصدارة، حيث ظهر في جميع الأعداد الـ 590 الأسبوعية من المخطط اعتبارًا من الإصدار بتاريخ 1 مايو 2021 ، بما في ذلك 116 أسبوعًا ممتدًا في المركز الأول من بداية المخطط حتى أبريل 2012. ومن بين المخططات البارزة الأخرى " جانج نام ستايل " من Psy ، والتي احتلت المرتبة الثانية لمعظم الأسابيع في المركز الأول بإجمالي 50 أسبوعًا بين عامي 2012 و 2014 ، والثالثة بشكل عام لإجمالي الأسابيع على المخطط بـ 362. على مر السنين، ظهر العديد من فناني البوب الكوري الآخرين على الرسم البياني، ووصل بعضهم إلى المركز الأول، وأبرزهم BTS ، الذين حققوا رقمًا قياسيًا مع 30 أغنية في المركز الأول، تليها فرقة الفتيات Blackpink ، مع سبعة اغاني في المركز الأول على المخطط.
تاباري سيلفا هو مدرب كرة قدم ولاعب كرة قدم أوروغواياني في مركز الدفاع، ولد في 30 أغسطس 1974 في في الأوروغواي. شارك مع منتخب الأوروغواي لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع ديفينسور سبورتينغ ورامبلا جونيورز وريفر بليت وسنترال إسبانيول ونادي إشبيلية ونادي إلتشي ونادي ليفانتي.
سكوت إم. تومسون هو لاعب كرة قدم بريطاني في مركز الدفاع، ولد في 29 يناير 1972 في أبردين في المملكة المتحدة. لعب مع دونفرملين أثلتيك وريث روفرز وشروزبري تاون ونادي أبردين ونادي إيست فيف ونادي بريتشين سيتي.
الفهم عبر التصميم (بالإنجليزية: Understanding by Design) أو UbD، هو نهج تخطيط تعليمي. UbD هو مثال على التصميم العكسي، وهو أسلوب النظر إلى أهداف التعلم من أجل تصميم وحدات المناهج وتقييمات الأداء والتعليم في الفصل. يركز نهج الفهم عبر التصميم على التدريس بهدف تحقيق الفهم. وقد دعا إليه جاي ماكتيجي وغرانت ويجينز في "الفهم عبر التصميم (1998)" الذي نشرته جمعية الإشراف وتطوير المناهج . يعد الفهم عبر التصميم علامة تجارية مسجلة لجمعية الإشراف وتطوير المناهج (ASCD).
التصميم العكسي.
يعتمد الفهم عبر التصميم على ما يسميه ويجينز وماكتيجي "التصميم العكسي" (المعروف أيضًا باسم "التخطيط العكسي"). وفقًا لمؤيدي UbD، يبدأ المعلمون تقليديًا في تخطيط المناهج الدراسية بالأنشطة والكتب المدرسية بدلاً من تحديد أهداف التعلم في الفصل أولاً ثم التخطيط لتحقيق هذه الأهداف. في التصميم العكسي، يبدأ المعلم بتحديد أهداف الفصل الدراسي ثم يخطط للمناهج الدراسية، حيث يختار الأنشطة والمواد التي تساعد في تحديد قدرة الطلاب وتعزيز تعلمهم.
لنهج التصميم العكسي ثلاث مراحل. المرحلة الأولى تحتوي على تحديد النتائج المرجوة للطلاب. قد يتم استخدام معايير المحتوى أو معايير الدولة الأساسية. تحدد المرحلة الأولى: "سوف يفهم الطالب ..." وتسرد أسئلة أساسية توجه المتعلم إلى الفهم. المرحلة الثانية هي تقييم استراتيجيات التعلم. المرحلة الثالثة قائمة بالأنشطة التعليمية التي ستقود الطلاب إلى النتائج المرجوة.
التدريس بهدف الفهم.
يجادل سميث وسيجل في مقالهما عن تدريس العلوم "أن التعليم يهدف إلى نقل المعرفة: يتم تعليم الطلاب جزئيًا حتى يتمكنوا من معرفة الأمور". بينما يمكن للطالب معرفة الكثير حول موضوع معين، بدأ المعلمون على مستوى العالم في دفع طلابهم لتجاوز عملية الاسترجاع البسيطة. هذه هي النقطة التي يلعب بها الفهم دورًا مهمًا. الهدف من "التدريس بهدف الفهم" هو تزويد الطلاب بالأدوات اللازمة لأخذ ما يعرفونه فعلاً، وما سيعرفونه في النهاية، وإقامة روابط واعية بين الأفكار. في عالم مليء بالبيانات، لا يستطيع المعلمون سوى مساعدة الطلاب على تعلم عدد صغير من الأفكار والحقائق. لذا من المهم أن نوفر للطلاب الأدوات اللازمة لتحليل وفهم الأفكار. تكمن القدرة على نقل المهارات في صميم تقنية ماكتيجي و ويجينز. إذا كان الطلاب قادرون على نقل وتطبيق المهارات التي تعلموها في الفصل في مواقف غير مألوفة، سواء أكانت أكاديمية أو غير أكاديمية، فيُقال إنهم يفهمون الموضوع حقًا.
تم استخدام التدريس بهدف الفهم كإطار لتطوير تعليم القراءة والكتابة لطلاب اللغة الإنجليزية كلغة ثانية أو أجنبية (TESOL) ، انظر Pearson and Pellerine (2010)
جيمس جوستاف (جوس) سبيث (من مواليد 4 مارس 1942 في أورانجبورج، ساوث كارولينا ) هو محامٍ ومدافع عن البيئة أمريكي.
ولد في أورانجبورغ بولاية كارولاينا الجنوبية عام 1942. تخرج بامتياز مع مرتبة الشرف من جامعة ييل في عام 1964، والتحق بكلية باليول بأكسفورد بصفته باحثًا في منحة رودس وتخرج من كلية الحقوق بجامعة ييل، حيث كان عضوًا في "مجلة ييل للقانون" في عام 1969. خدم في عامي 1969 و 1970 ككاتب قانوني لدى قاضي المحكمة العليا الأمريكية هوغو إل. بلاك.
كان سبيث أحد مؤسسي مجلس الدفاع عن الموارد الطبيعية، حيث شغل منصب كبير المحامين من عام 1970 حتى عام 1977.
شارك بين عامي 1977 و 1981 كعضو ثم لمدة عامين كرئيس لمجلس جودة البيئة في المكتب التنفيذي للرئيس. بصفته رئيس مجلس جيمي كارتر لجودة البيئة كان مستشارًا رئيسيًا في الأمور التي تؤثر على البيئة وكان مسؤولاً بشكل عام عن تطوير وتنسيق البرنامج البيئي للرئيس. خلال عامي 1981 و 1982 كان أستاذًا للقانون في مركز القانون بجامعة جورج تاون، حيث قام بتدريس القانون البيئي والدستوري.
في عام 1982 أسس معهد الموارد العالمية وهو مركز أبحاث بيئي مقره واشنطن العاصمة، وشغل منصب رئيسه حتى يناير 1993. كان مستشارًا كبيرًا للفريق الانتقالي للرئيس المنتخب بيل كلينتون، وترأس المجموعة التي درست دور الولايات المتحدة في الموارد الطبيعية والطاقة والبيئة.
في عام 1991 ترأس فريق عمل أمريكي معني بالتنمية الدولية والأمن البيئي والذي أصدر تقرير "الشراكة من أجل التنمية المستدامة : أجندة أمريكية جديدة".
في عام 1990 قاد حوار نصف الكرة الغربي حول البيئة والتنمية الذي أنتج تقرير " "الاتفاق من أجل عالم جديد"".
من عام 1993 إلى 1999 شغل منصب مدير برنامج الأمم المتحدة الإنمائي؛ شغل منصب المنسق الخاص للشؤون الاقتصادية والاجتماعية تحت إشراف الأمين العام بطرس بطرس غالي، وقاد خطة الأمم المتحدة للمساعدة الإنمائية، كما شغل منصب رئيس مجموعة الأمم المتحدة الإنمائية.
في عام 1999 أصبح عميدًا لكلية ييل للغابات والدراسات البيئية في جامعة ييل في نيو هيفن (كونيتيكت). خلف سبيث في منصب عميد جامعة ييل السير بيتر كرين.
في عام 2014 نشر مذكراته "الملائكة على ضفاف النهر". في ذلك العام كان أيضًا عضوًا في مجلس إدارة تحالف الاقتصاد الجديد.
يعمل سبيث حاليًا في مجلس شورى النواب "نحن" وهي منظمة غير حزبية لمكافحة الفساد.
كان سبيث قائدًا أو مشاركًا في العديد من فرق العمل واللجان التي تهدف إلى مكافحة التدهور البيئي بما في ذلك فريق عمل الرئيس المعني بالموارد العالمية والبيئة وحوار نصف الكرة الغربي حول البيئة والتنمية واللجنة الوطنية للبيئة.
من بين الجوائز التي حصل عليها جائزة الدفاع عن الموارد من الاتحاد الوطني للحياة البرية، وجائزة باربرا سوين الشرفية لمجلس الموارد الطبيعية الأمريكية، وجائزة التقدير الخاصة لعام 1997 من جمعية التنمية الدولية، وجائزة الإنجاز مدى الحياة من معهد القانون البيئي، وجائزة الكوكب الأزرق. وهو حاصل على درجات فخرية من جامعة كلارك وكلية الأطلسي وكلية الحقوق في فيرمونت وكلية ميدلبري وجامعة ماساتشوستس في بوسطن.
دنانير من ذهب هو مسلسل تلفزيوني عراقي عرض في عام 1986.
سونغ ها يون هي ممثلة كورية جنوبية ولدت في 2 ديسمبر 1986 في بتشون، كوريا الجنوبية. اشتهرت بدورها في الدراما
يو إن نا هي ممثلة ودي جي كورية جنوبية. ولدت في 5 يونيو 1982 في سونغنام، كوريا الجنوبية.
ألينور روجوت (مواليد 22 يناير 1999) ناشطة كندية في مجال عدالة مناخية. برزت روجوت على الصعيد الوطني في كندا كمنظم للإضراب المناخي. وهي قائدة في حركة( الإضراب المدرسي من أجل المناخ يوم الجمعة)في تورنتو، وهي حركة تدعو الطلاب للتغيب عن المدرسة أيام الجمعة لزيادة الوعي بتغير المناخ. في عام 2019 أدت إضراب مدرسة أيام الجمعة من أجل المستقبل من أجل المناخ في تورنتو والذي شارك فيه أكثر من 50000 شخص.
بدأت روجوت كناشطة محلية في سن مبكرة جدًا، حيث عملت على زيادة الوعي ب فقدان التنوع البيولوجي داخل مجتمعها. كما شاركت مع فرع منظمة العفو الدولية المحلي حيث قادت حملات لزيادة الوعي بأزمة اللاجئين والمطالبة بالعدالة للمهاجرين واللاجئين في أوروبا.
نشاط العدالة المناخية.
شاركت ألينور روجوت في تنظيم إضراب الشباب للمناخ وقادت "التدريس" الجماهيري الكندي في إضراب تورنتو الجماهيري للمناخ كجزء من الأسبوع الإضراب العالمي من أجل المناخ للمستقبل في سبتمبر 2019، وهو حدث جذب الآلاف من الناس إلى حدائق كوينز بارك.
ألينور متخصصة في الاقتصاد والسياسة العامة بجامعة تورنتو بكندا.
تم اختيار روجوت كواحدة من أكثر 50 شخصية نفوذاً من سكان تورتنو من قبل مجلة (Toronto Life) في عام 2019. كما تم تسميتها من قبل Corporate Knights ( فرسان الشركات ) كواحدة من 30 من قادة الاستدامة تحت سن 30 في عام 2019.
كيم سول جي هي ممثلة كورية جنوبية. ولدت في 10 أكتوبر 1991 في بوسان، كوريا الجنوبية. لعبت دور البطولة في العديد من الأعمال الدرامية الناقدة منها يا شبحي و و . وهي أيضًا عضو سابق في برنامج تي في إن الترفيهي ساترداي نايت لايف كوريا.
9 اغاني هو فيلم درامي رومانسي بريطاني في عام 2004 من تأليف وإخراج مايكل وينتربوتوم. نجوم الفيلم كيران اوبراين ومارجو ستيلى.
يحكي الفيلم قصة حب حديثة لزوجين شابين مات عالم المناخ وليزا طالبة التبادل الأمريكية يتم سرد القصة من منظور مات وهو يغادر إلى القارة القطبية الجنوبية. اهتمامهم المشترك الرئيسي هو شغفهم بالحفلات الموسيقية وكثيرًا ما يحضرون حفلات موسيقى الروك معًا ؛ الفيلم يصف الزوجين ، أو مات وحده ، يشاهد تسع أغنيات في هذه الحفلات. تُنهي ليزا علاقتهما القصيرة والمكثفة في النهاية عندما تعود إلى موطنها في الولايات المتحدة.
عزيزة هو مسلسل تلفزيوني عراقي عرض في عام 1993.
وجهة نظر هو مُسلسل تلفزيوني عراقي، عُرض في عام 1990. أخرجه سليم البصري، وألفه عماد بهجت.
يتضمن التقدير الكمي للفيروسات حساب عدد الفيروسات في حجم معين لتحديد تركيز الفيروس. يتم استخدامه في كل من البحث والتطوير (R &amp; D) في المختبرات التجارية والأكاديمية بالإضافة إلى حالات الإنتاج حيث تكون كمية الفيروس في خطوات مختلفة متغيرًا مهمًا.كان على سبيل المثال، يتطلب إنتاج اللقاحات الفيروسية والبروتينات المؤتلفة باستخدام ناقلات فيروسية ومستضدات فيروسية تحديدًا كميًا للفيروس لتكييف العملية ومراقبتها باستمرار من أجل تحسين عائدات الإنتاج والاستجابة للطلبات والتطبيقات المتغيرة باستمرار. تشمل الأمثلة على الحالات المحددة التي تحتاج فيها الفيروسات المعروفة إلى القياس الكمي فحص الاستنساخ وتعدد العدوى (MOI) وتعديل الأساليب مع ثقافة الخلية. تناقش هذه الصفحة التقنيات المختلفة المستخدمة حاليًا لتحديد كمية الفيروسات في العينات السائلة. تنقسم هذه الطرق إلى فئتين، الطرق التقليدية مقابل الطرق الحديثة. الأساليب التقليدية هي طرق قياسية في الصناعة تم استخدامها لعقود ولكنها بطيئة بشكل عام وكثيفة العمالة. الأساليب الحديثة هي منتجات ومجموعات جديدة نسبيًا متاحة تجاريًا تقلل بشكل كبير من وقت القياس الكمي. لا يُقصد بهذا أن يكون استعراضًا شاملاً لجميع الطرق المحتملة، بل هو مقطع عرضي تمثيلي للطرق التقليدية والطرق الجديدة المتاحة تجاريًا. بينما قد توجد طرق أخرى منشورة لتقدير حجم الفيروسات، لم تتم مناقشة الطرق غير التجارية هنا.
المقايسات القائمة على البلاك هي الطريقة القياسية المستخدمة لتحديد تركيز الفيروس من حيث الجرعة المعدية. تحدد فحوصات اللويحات الفيروسية عدد وحدات تشكيل البلاك (pfu) في عينة الفيروس، وهو أحد مقاييس كمية الفيروس. يعتمد هذا الاختبار على طريقة ميكروبيولوجية يتم إجراؤها في أطباق بتري أو لوحات متعددة الآبار. على وجه التحديد، يتم إصابة طبقة أحادية متكدسة من الخلايا المضيفة بالفيروسو بتخفيفات متفاوتة ومغطاة بوسط شبه صلب، مثل أجار أو كربوكسي ميثيل السليلوز، لمنع العدوى الفيروسية من الانتشار العشوائي. تتشكل اللويحة الفيروسية عندما يصيب الفيروس خلية داخل الطبقة أحادية الخلية الثابتة. سوف تتلاشى الخلية المصابة بالفيروس وتنشر العدوى إلى الخلايا المجاورة حيث تتكرر دورة العدوى إلى التحلل. ستخلق منطقة الخلية المصابة لوحة (منطقة عدوى محاطة بخلايا غير مصابة) يمكن رؤيتها بالمجهر البصري أو بصريًا (سكب وسط التراكب وإضافة محلول بنفسجي بلوري لمدة 15 دقيقة حتى يتم تلوين السيتوبلازم ، ستظهر إزالة الفائض بالماء برفق موقع الخلايا الميتة غير الملون). يمكنو أن يستغرق تكوين البلاك من 3 إلى 14 يومًا، اعتمادًا على الفيروس الذي يتم تحليله. تُحسب اللويحات يدويًا بشكل عام وتُستخدم النتائج، جنبًا إلى جنب مع عامل التخفيف المستخدم لتحضير اللوحة، لحساب عدد وحدات تشكيل البلاك لكل حجم وحدة عينة (pfu / mL). تمثل نتيجة pfu / mL عدد الجسيمات المعدية داخل العينة وتستند إلى افتراض أن كل لوحة مكونة تمثل جسيمًا فيروسيًا معديًا.
فحص تشكيل التركيز.
اختبار تشكيل التركيز (FFA) هو تباين في فحص البلاك، ولكن بدلاً من الاعتماد على تحلل الخلية من أجل الكشف عن تكوين اللويحة، يستخدم FFA تقنيات المناعة باستخدام الأجسام المضادة ذات العلامات الفلورية الخاصة بمستضد فيروسي للكشف عن الخلايا المضيفة المصابة والمعدية جزيئات الفيروس قبل تشكيل اللويحة الفعلية. يُعد FFA مفيدًا بشكل خاص في تحديد فئات الفيروسات التي لا تحلل أغشية الخلايا، لأن هذه الفيروسات لن تكون قابلة لاختبار البلاك. مثل اختبار البلاك، تُصاب الطبقات الأحادية للخلية المضيفة بتخفيفات مختلفة من عينة الفيروس ويُسمح لها بالاحتضان لفترة حضانة قصيرة نسبيًا (على سبيل المثال، 24-72 ساعة) تحت وسط تراكب شبه صلب يحد من انتشار الفيروس المعدي، مما يؤدي إلى تكوين موضعي. مجموعات (بؤر) من الخلايا المصابة. يتم فحص اللوحات لاحقًا باستخدام الأجسام المضادة التي تحمل علامات الفلورسنت ضد مستضد فيروسي، ويتم استخدام الفحص المجهري الفلوري لعد وتحديد عدد البؤر. ينتج عن طريقة FFA عادةً وقتًا أقل من مقايسات جرعة البلاك أو زراعة الأنسجة بنسبة خمسين بالمائة (TCID50)، ولكنها قد تكون أكثر تكلفة من حيث الكواشف والمعدات المطلوبة. يعتمد وقت إتمام الفحص أيضًا على حجم المنطقة التي يقوم المستخدم بحسابها. ستتطلب المساحة الأكبر مزيدًا من الوقت ولكن يمكن أن توفر تمثيلًا أكثر دقة للعينة. يتم التعبير عن نتائج FFA كوحدات تشكيل تركيز لكل مليلتر، أو FFU / مل.
مقايسة تخفيف نقطة النهاية.
الجرعة المعدية الخمسين في المائة من زراعة الأنسجة (TCID50) هي مقياس عيار الفيروس المعدي. يحدد اختبار التخفيف لنقطة النهاية كمية الفيروس المطلوبة لقتل 50٪ من العوائل المصابة أو لإنتاج تأثير اعتلال خلوي في 50٪ من خلايا زراعة الأنسجة الملقحة. قد يكون هذا الاختبار أكثر شيوعًا في تطبيقات الأبحاث السريرية حيث يجب تحديد الجرعة المميتة للفيروس أو إذا كان الفيروس لا يشكل لويحات. عند استخدامها في سياق زراعة الأنسجة، يتم طلاء الخلايا المضيفة وتضاف التخفيفات التسلسلية للفيروس. بعد الحضانة، يتم ملاحظة النسبة المئوية لموت الخلايا (أي الخلايا المصابة) يدويًا وتسجيلها لكل تخفيف فيروسي، وتستخدم النتائج لحساب نتيجة TCID50 رياضيًا. نظرًا للاختلافات المتميزة في طرق ومبادئ الفحص، فإن TCID50 و pfu / mL أو نتائج فحص العدوى الأخرى ليست مكافئة. قد تستغرق هذه الطريقة ما يصل إلى أسبوع بسبب وقت إصابة الخلايا.
هناك طريقتان تستخدمان بشكل شائع لحساب TCID50 (يمكن استخدامهما أيضًا لحساب أنواع أخرى من نقطة نهاية 50٪ مثل EC50 و IC50 و LD50) هما:
العلاقة النظرية بين TCID50 و PFU هي تقريبًا 0.69 PFU = 1 TCID50 استنادًا إلى توزيع Poisson، وهو توزيع احتمالي يصف عدد الأحداث العشوائية (جزيئات الفيروس) التي تحدث بمعدل متوسط معروف (عيار فيروسي) من المحتمل أن تحدث في ثابت الفضاء (كمية الفيروس المتوسطة في البئر). ومع ذلك، يجب التأكيد على أنه من الناحية العملية، قد لا تنطبق هذه العلاقة حتى على نفس تركيبة الفيروس + الخلية، حيث يتم إعداد نوعي المقايسة بشكل مختلف وأن العدوى الفيروسية حساسة للغاية لعوامل مختلفة مثل عمر الخلية، والوسائط المتراكبة، إلخ، لكن المرجع التالي يحدد العلاقة بشكل مختلف: بافتراض استخدام نفس النظام الخلوي، وأن الفيروس يشكل لويحات على تلك الخلايا، وأنه لم تتم إضافة أي إجراءات تمنع تكوين اللويحات، فمن المتوقع أن 1 مل من مخزون الفيروس لديها حوالي نصف عدد وحدات تشكيل البلاك (PFUs) مثل TCID50. هذا مجرد تقدير ولكنه يستند إلى الأساس المنطقي أن التخفيف المحدود الذي من شأنه أن يصيب 50٪ من طبقات الخلايا التي تم تحديها غالبًا ما يُتوقع منه في البداية إنتاج لوحة واحدة في طبقات الخلايا المصابة. في بعض الحالات، قد تكون لوحتان أو أكثر عن طريق الصدفة، وبالتالي يجب تحديد العدد الفعلي للوحات PFU بشكل تجريبي.
رياضي، ستكون وحدات PFU المتوقعة أكبر إلى حد ما من نصف TCID 50، حيث أن الأنابيب السلبية في TCID 50 تمثل وحدات تشكيل صفرية للوحة والأنابيب الموجبة تمثل واحدة أو أكثر من وحدات تشكيل البلاك. يتم الحصول على تقدير أكثر دقة من خلال تطبيق توزيع بواسون. حيث P (o) هي نسبة الأنابيب السلبية و m هو متوسط عدد الوحدات المعدية لكل حجم (PFU / ml) ، P (o) = e (-m). لأي عيار معبر عنه كـ TCID 50 ، P (o) = 0.5. وهكذا فإن e (-m) = 0.5 و m = -ln 0.5 وهو ~ 0.7.
لذلك، يمكن للمرء أن يضرب عيار TCID50 (لكل مل) بمقدار 0.7 للتنبؤ بمتوسط عدد PFU / ml. عند تطبيق مثل هذه الحسابات فعليًا، تذكر أن المتوسط المحسوب لن يكون صالحًا إلا إذا كانت التغييرات في البروتوكول المطلوبة لتصور اللوحات لا تغير التعبير عن الفيروس المعدي مقارنة بالتعبير في ظل الظروف المستخدمة في TCID.
وبالتالي، كتقدير عملي، يمكن للمرء أن يفترض أن المادة ذات TCID 50 من 1 × 10 5 TCID 50 / ml ستنتج 0.7 × 10 5 PFUs / ml.
فحوصات البروتين.
هناك العديد من الاختلافات في فحوصات القياس الكمي للفيروسات القائمة على البروتين. بشكل عام، تحدد هذه الطرق إما كمية كل البروتين أو كمية بروتين فيروس معين في العينة بدلاً من عدد الخلايا المصابة أو جزيئات الفيروس. يعتمد التحديد الكمي بشكل شائع على الكشف عن التألق. تحدد بعض اختلافات المقايسة كمية البروتين مباشرة في عينة بينما تتطلب الاختلافات الأخرى عدوى الخلايا المضيفة وحضانة للسماح بنمو الفيروس قبل تحديد كمية البروتين. يعتمد الاختلاف المستخدم بشكل أساسي على كمية البروتين (أي الفيروس) في العينة الأولية وحساسية الفحص نفسه. إذا كانت الحضانة ونمو الفيروس مطلوبين، فغالبًا ما يتم إجراء تحليل / هضم الخلايا و / أو الفيروس قبل التحليل. معظم الطرق القائمة على البروتين سريعة وحساسة نسبيًا ولكنها تتطلب معايير جودة لمعايرة دقيقة، وقياس كمية البروتين، وليس تركيزات جزيئات الفيروس الفعلية. فيما يلي أمثلة محددة للمقايسات القائمة على البروتين المستخدمة على نطاق واسع.
مقايسة التراص الدموي.
مقايسة التراص الدموي (HA) هي مقايسة شائعة لتقدير كمية البروتين غير الفلورية الخاصة بالإنفلونزا. يعتمد على حقيقة أن الهيماجلوتينين، وهو بروتين سطحي لفيروسات الإنفلونزا، يتراكم خلايا الدم الحمراء (أي يتسبب في تكتل خلايا الدم الحمراء معًا). في هذا الاختبار، يتم تحضين التخفيفات لعينة الأنفلونزا بمحلول 1٪ من كريات الدم الحمراء لمدة ساعة واحدة ويتم تحديد تخفيف الفيروس الذي يحدث التراص لأول مرة بصريًا. ينتج الفحص نتيجة وحدات التراص الدموي (HAU)، مع نسب pfu إلى HAU النموذجية في النطاق 106. يستغرق هذا الاختبار حوالي ساعة إلى ساعتين حتى يكتمل ويمكن أن تختلف النتائج على نطاق واسع بناءً على الخبرة الفنية للمشغل.
مقايسة تثبيط التراص الدموي هو نوع شائع من مقايسة HA المستخدمة لقياس مستويات الأجسام المضادة الخاصة بالأنفلونزا في مصل الدم. في هذا الاختلاف، ستتداخل الأجسام المضادة لفيروس الأنفلونزا في المصل مع ارتباط الفيروس بخلايا الدم الحمراء. لذلك، يتم تثبيط التراص الدموي عند وجود الأجسام المضادة بتركيز كاف.
فحص حمض بيسينشونينيك.
يعتمد اختبار حمض البيسينشونينيك (BCA) على قياس لوني بسيط وهو أكثر مقايسة كمي للبروتين شيوعًا. يشبه BCA فحوصات بروتين Lowry أو Bradford، وقد تم توفيره تجاريًا لأول مرة بواسطة Pierce، والذي يمتلكه الآن Thermo Fisher Scientific. في اختبار BCA، تقلل روابط الببتيد الخاصة بالبروتين بشكل كمي من Cu2 + إلى Cu1 +، مما ينتج عنه لون أزرق فاتح. BCA مخلّب Cu1 + بنسبة 2: 1 مما ينتج عنه أنواع ملونة أكثر كثافة تمتص عند 562 نانومتر. يتم استخدام امتصاص عينة عند 562 نانومتر لتحديد تركيز البروتين بالجملة في العينة. تتم مقارنة نتائج الفحص مع المنحنيات القياسية المعروفة بعد التحليل باستخدام مقياس الطيف الضوئي أو قارئ اللوحة. إجمالي وقت الفحص هو 30 دقيقة إلى ساعة واحدة. في حين أن هذا الاختبار موجود في كل مكان وسريع، إلا أنه يفتقر إلى الخصوصية لأنه يحسب كل البروتين، يجب أن يحتوي تحضير الفيروس المراد قياسه على مستويات منخفضة جدًا من بروتينات الخلية المضيفة.
مقايسة الانتشار المناعي الشعاعي الفردي.
مقايسة الانتشار المناعي الشعاعي الفردي (SRID)، والمعروفة أيضًا باسم طريقة مانشيني، هي مقايسة البروتين التي تكتشف كمية المستضد الفيروسي المحدد عن طريق الانتشار المناعي في وسط شبه صلب (مثل أجار). يحتوي الوسط على مصل مضاد خاص بمولد الضد المعني ويوضع المستضد في مركز القرص. عندما ينتشر المستضد في الوسط، فإنه يخلق حلقة مترسبة تنمو حتى يتم الوصول إلى التوازن. يمكن أن يتراوح وقت الفحص من 10 ساعات إلى أيام اعتمادًا على وقت موازنة المستضد والجسم المضاد. يرتبط قطر المنطقة من الحلقة بشكل خطي بسجل تركيز البروتين ويتم مقارنته بأقطار المنطقة لمعايير البروتين المعروفة للتقدير الكمي. هناك مجموعات وأمصال متاحة تجاريًا لهذا الفحص (على سبيل المثال The Binding Site Inc.).
المجهر الإلكتروني للإرسال (TEM).
TEM هو نوع متخصص من الفحص المجهري يستخدم شعاعًا من الإلكترونات يركز على مجال مغناطيسي لتصوير عينة. يوفر TEM التصوير بدقة مكانية أكبر 1000 مرة من المجهر الضوئي (دقة تصل إلى 0.2 نانومتر). مطلوب عينة شديدة الرقة وسلبي البقع. تتضمن تحضيرات العينة إيداع العينات على شبكة TEM مطلية وتلطيخًا سلبيًا بسائل إلكترون معتم. يمكن أيضًا فحص عينات الأنسجة المدمجة إذا كانت مقطوعة بشكل رفيع. تختلف تحضيرات العينة اعتمادًا على البروتوكول والمستخدم ولكنها تتطلب عمومًا ساعات لإكمالها. يمكن أن تُظهر صور TEM جزيئات الفيروس الفردية ويمكن استخدام التحليل الكمي للصور لتحديد تركيزات الفيروس. توفر هذه الصور عالية الدقة أيضًا معلومات مورفولوجيا الجسيمات التي لا تستطيع معظم الطرق الأخرى القيام بها. غالبًا ما تكون نتائج TEM الكمية أكبر من نتائج المقايسات الأخرى حيث يتم تحديد كمية جميع الجسيمات، بغض النظر عن العدوى، في الجسيمات الشبيهة بالفيروسات المبلغ عنها لكل مل (vlp / mL) نتيجة. يعمل TEM الكمي بشكل عام بشكل جيد لتركيزات الفيروسات التي تزيد عن 106 جزيئات / مل. نظرًا لارتفاع تكلفة الأجهزة ومقدار المساحة ومرافق الدعم المطلوبة ، تتوفر معدات TEM في عدد محدود من المرافق.
الأساليب الحديثة.
استشعار النبض المقاوم القابل للضبط (TRPS).
يعد استشعار النبض المقاوم القابل للانضباط (TRPS) طريقة تسمح بقياسات الجسيمات المفردة عالية الإنتاجية لجزيئات الفيروس الفردية، حيث يتم دفعها من خلال ثقب نانوي قابل للضبط، واحدًا تلو الآخر. تتمتع هذه التقنية بميزة التحديد المتزامن لحجم وتركيز جزيئات الفيروس في محلول بدقة عالية. يمكن استخدام هذا في تقييم استقرار العينة ومساهمة الركام، وكذلك إجمالي تركيز الجسيمات الفيروسية (vp / mL).
يحدث القياس المستند إلى TRPS في المخزن المؤقت الأيوني، ولا يلزم إجراء تلطيخ مسبق للعينات قبل التحليل، وبالتالي فإن التقنية أسرع من تلك التي تتطلب معالجة مسبقة باستخدام الأصباغ الفلورية، مع وقت إعداد وقياس إجمالي أقل من 10 دقائق لكل عينة. يتوفر تحليل فيروسات TRPS-bases تجاريًا من خلال أنظمة qViro-X ، والتي لديها القدرة على إزالة التلوث كيميائيًا عن طريق التعقيم بعد إجراء القياس
التدفق الخلوي.