[es] En las últimas décadas, los métodos moleculares son cada vez más relevantes en la evaluación del sexo, la diferenciación del sexo y el estadiaje de la gametogénesis en peces teleósteos, ya que pueden proporcionar estimaciones más precisas que el análisis histológico o visual de las gónadas. Este es un requisito del Marco de Recogida de Datos de la UE como parte de la política de mejora de la gestión pesquera, en la que las estimaciones de fecundidad de las poblaciones de peces comerciales son de interés primordial. En este estudio, queríamos analizar la transcripción diferencial que distingue a los ovarios y a los testículos en los peces mediante el estudio de los niveles de transcripción de los ARN de transferencia (ARNt) específicos de los aminoácidos. Se planteó la hipótesis de que la expresión de los ARNt es mucho mayor en los ovarios que en los testículos, como ya se ha demostrado con el otro producto principal de la actividad de la ARN polimerasa III, el ARNr 5S. Las especies de teleósteos seleccionadas para este estudio fueron el pez cebra, Danio rerio, como especie modelo de laboratorio cuyo genoma ha sido completamente secuenciado, y el salmonete de labios gruesos, Chelon labrosus, como especie centinela de contaminación que en la costa vasca ha presentado casos de intersexualidad con ovocitos producidos en testículos debido a la exposición a xenoestrógenos. Se diseñaron cebadores para el análisis por PCR contra los múltiples genes que aparecen en el genoma del pez cebra dirigidos a aminoácidos específicos de los ARNt. Dichos cebadores permitieron cuantificar los niveles de transcripción de los ARNt de selenocisteína, supresor, fenilalanina, triptófano y alanina, mostrando mayores niveles de transcripción en los testículos que en los ovarios. Estos resultados contrarios a las expectativas podrían deberse a la diferente amplificación cruzada de los cebadores en los más de 50 genes por ARNt específico analizado o a las propiedades estructurales del ARNt que no permitieron un análisis adecuado por PCR. No se obtuvo ninguna amplificación en el caso de C. labrosus con la excepción del ARNt supresor. La electroforesis capilar de ARN pequeño del ARN total, que permite identificar fragmentos de ARN muy pequeños de hasta 200 pb de longitud, mostró una mayor producción de ARNt, así como de ARNr 5S, en los ovarios que en los testículos en ambas especies. El valor del índice ARNt/5S ARNr calculado no mostró diferencias entre las gónadas de ambos sexos, pero el índice ARNt/5.8S ARNr mostró claramente los niveles más altos en los ovarios que en los testículos. Estas diferencias sólo fueron significativas en el caso de C. labrosus (los ovarios de C. labrosus analizados eran todos previtelogénicos). Esto demuestra una elevada actividad de la ARN polimerasa III durante las fases tempranas de la oogénesis en C. labrosus que da lugar a altos niveles de ARNt y ARNr 5S. Por el contrario, la actividad de la ARN polimerasa I y la producción de ARNr 5,8S, 18S y 28S se inicia con la vitelogénesis, lo que explica los bajos niveles en las muestras de mújol estudiadas. Mientras tanto, los ovarios de pez cebra mostraban ovocitos en todas las etapas de la oogénesis y esto no permitió diferencias significativas en los valores del índice de ARNt/5,8S rRNA entre las gónadas. Se ha demostrado que la producción de ARNt en masa es un buen marcador para identificar el sexo en los peces teleósteos cuando se comparan las gónadas en las primeras etapas de la gametogénesis. Del mismo modo, el índice de ARNt/5,8S ha demostrado ser un indicador útil para identificar la fase de oogénesis en los ovarios de los peces. Es necesario seguir investigando para dilucidar la utilidad de cada ARNt específico en el seguimiento y la estadificación de la gametogénesis ovárica en los peces teleósteos.

[eu] Azken hamarkadetan, metodo molekularrak gero eta garrantzi handiagoa dute sexu desberdintzapen eta gametogenesiaren faseen identifikazioan arrain teleosteoetan, aurreikuspen zehatzagoak eskaini ahal baitituzte gonaden analisi histologiko edo bisualak baino. Hori EBko "Data Collection Framework" betebeharra da, arrantzaren kudeaketa hobetzeko politika aurrera eramateko, non arrain komertsialen emankortasunaren estimazioa interes handia duen. Ikerketa honetan arrainetan obarioak eta testikuluak bereizten dituen transkripzio diferentziala analizatu nahi genuen amino azido espezifiko transferentziako RNA (tRNA) transkripzio maila aztertuz. tRNAren adierazpena obarioetan testikuluetan baino askoz altuagoa izateko hipotesia zegoen, polimerasa III aktibitatearen beste produktu nagusiarekin, 5S rRNA, frogatu den bezala. Analisi honetarako aukeratutako teleosteo espezieak, hauek izan ziren: zebra arraina, Danio rerio, genoma guztiz sekuentziatuta duen laborategiko eredu espezie gisa, eta hondoetako korrokoia, Chelon labrosus, poluzioaren monitorizatzaile gisa, Euskal kostaldean intersex egoera aurkeztu baitu xenoestrogenoen ondorioz obozitoak ekoiztuz testikuluetan. PCR analisirako primerrak diseinatu ziren D. rerio genomako amino azido espezifiko tRNA geneak kontuan izanda. Primer horiek selenozisteina, supresorea, fenilalanina, triptofanoa eta alanina tRNA transkripzio mailak kuantifikatzea ahalbidetu zuten testikuloetan obarioetan baino transkripzio maila handiagoak erakutsiz. Hondoetako korrokoiaren kasuan ez zen anplifikaziorik lortu supresore tRNAan izan ezik. RNA totalaren RNA txikiko kapilare elektroforesia, 200bp-ko RNA kate txikien identifikazioa ahalbidetzen duena, 5S rRNA eta tRNA produkzio handiagoa erakutsi zuen obarioetan testikuloetan baino bi espezieetan. Kalkulatutako tRNA/5S rRNA indizearen balioak ez zuen ezberdintasunik erakutsi gonaden artean, baina, tRNA/5.8S rRNA indizeak maila altuagoa argi erakutsi zuen obarioetan testikuloetan baino. Ezberdintasun horiek soilik izan ziren esangarriak C. labrosus kasuan (aztertutako C. labrosus obario guztiak prebitelogenikoak ziren). Horrek egiaztatzen du RNA polymerasa IIIren aktibitate handia C. labrosus oogenesiaren fase goiztiarretan tRNA eta 5S rRNA sortzen duena. Alderantziz, RNA polimerasa I-ko aktibitatea eta 5,8S, 18S eta 28S RNAren ekoizpena vitellogenesiarekin batera hasten da, korrokoietan lortutako balio baxuak azaltzen duena. Bitartean, D. rerio obuluak fase oogenesi guztietako obozitoak erakutsi dituzte eta horrek ez du ahalbidetu ezberdintasun esangarririk gonaden arteko tRNA/5.8S rRNA indizean. tRNA produkzioa sexua identifikatzeko markatzaile ona dela frogatu da arrain teleosteoetan gonadak alderatzean gametogenesiaren fase goiztiarretan. Era berean, tRNA/5.8S rRNA indizea arrain obulutegietako oogenesi fasea identifikatzeko baliogarria dela erakutsi da. Ikerketa gehiago egin behar dira zehazteko tRNA espezifiko bakoitzaren erabilgarritasuna monitorizazioan eta arrain teleosteoen obulutegi gametogenesiaren faseen adierazpenean.