[en] We set up a regeneration process for the elm hybrid 'Sapporo' resistant to Dutch Elm Disease, using leaf discs from in vitro grown plants and tested it in transformation experiments. Two steps were needed : bud induction (3 weeks) followed by bud elongation (4 weeks). Bud meristems initiated near the cut ribs, from several tissues (phloem, procambium, rib upper parenchyma) except epidermis. Regeneration depended on the use of agarose (6 g/l LSM) and diluted MS medium (1/2). The best results (11-14 buds/explant) were obtained in presence of 0.1 μM TDZ and 0.06 μM IAA and when maltose (55-110 mM) or sorbitol (110 mM) were used as carbohydrate sources. During shoot elongation TDZ should be decreased to 0.01 μM or replaced by 1-2 μM BAP and 1.4 μM of GA3 added. At this stage, a mixture of 55 mM sorbitol and 27.5 mM maltose was required. Up to 7 shoots / explant developed and were easily rooted (96%) and acclimatized when sorbitol (27.5 mM) and active charcoal (2 g/l) were added to the rooting medium. Transformation experiments were performed with Agrobacterium tumefaciens disarmed strain GV3101-pMP90 (pKyGUSintron). Regeneration zones exhibited stable GUS expression. However, all shoots grown in vitro died on a selective rooting medium (50 mg/l kanamycin). When attempts for in vitro selection were made (12.5 mg/l kanamycin), some buds were initiated but elongation was prevented. Susceptibility to neomycin seemed very high, therefore, selection markers and selection steps must be revised carefully.

[es] Se ha desarrollado un procedimiento para la regeneraci&oacute;n del olmo h&iacute;brido &laquo;Sapporo&raquo; resistente a la grafiosis mediante el uso de discos foliares procedentes de plantas cultivadas in vitro y examinadas en ensayos de transformaci&oacute;n. Para ello se requirieron dos pasos: inducci&oacute;n de las yemas (3 semanas), seguido de la elongaci&oacute;n de las yemas (4 semanas). Los meristemas que dieron origen a las yemas se formaron en la cercan&iacute;a de las costillas de corte a partir de diversos tejidos (floema, proc&aacute;mbium, par&eacute;nquima) excepto la epidermis. La regeneraci&oacute;n dependi&oacute; del uso de agarosa (6 g/l LSM) y de medio MS diluido (1/2). Los mejores resultados (11-14 yemas por explante) se obtuvieron en presencia de 0,1 &mu;M de TDZ y 0,06 &mu;M de IAA y cuando la maltosa (55-110 mM) o el sorbitol (110 mM) se usaron como fuente de carbohidratos. Durante la elongaci&oacute;n del tallo, el TDZ hubo de ser disminuido a 0,01 &mu;M o sustituido por 1-2 &mu;M de BAP y 1,4 &mu;M de GA3. En esta fase fue necesaria una mezcla de 55 mM de sorbitol y 27,5 mM de maltosa. Se desarrollaron al menos 7 tallos por explante que f&aacute;cilmente enraizaron (96%) y se aclimataron cuando se a&ntilde;adi&oacute; sorbitol (27,5 mM) y carb&oacute;n activo (2 g/l) al medio de enraizamiento. Los ensayos de transformaci&oacute;n se desarrollaron con las cepas GV3101-pMP90 (pKyGUSintron) de Agrobacterium tumefaciens. Las zonas de regeneraci&oacute;n presentaron una expresi&oacute;n GUS estable. No obstante, todas las yemas cultivadas in vitro murieron en un medio selectivo de enraizamiento (50 mg/l de kanamicina). Cuando se intent&oacute; la selecci&oacute;n in vitro (12,5 mg/l de kanamicina), algunas yemas se iniciaron pero la elongaci&oacute;n fue impedida. La susceptibilidad a la neomicina parece ser muy alta, por lo que los marcadores y los pasos de selecci&oacute;n deben ser cuidadosamente revisados.