[en] Canine atopic dermatitis is a chronic imflammatory and pruritic skin disease characterized by an increase in the concentration of allergen specific IgE in the serum of the patients. Skin mast cells play an important role in the pathogenesis of this disease. The binding of IgE to the IgE-high affinity receptor (Fc&#61541;RI) on mast cells membrane, and its subsequent crosslinking by an allergen, is the first step in the cascade of reactions leading to the release of MC proinflammatory mediators, in part responsible for the development of the disease. In addition to its crucial role in mast cell activation, IgE has been shown to regulate the Fc&#61541;RI expression on human and murine mast cell surface. An increase in the concentration of IgE can, therefore, lead to an overexpression of the Fc&#61541;RI receptors, causing an increase in the mediators released by the sensitized mast cells, that can contribute to the development of the allergic process. Although dogs suffer with a high incidence allergic processes, this phenomenon mediated by IgE had not been studied in this specie yet. The main goal of the present study was to analyze whether an increase in the IgE concentration of canine mast cell microenvironment can influence the mast cells mediators release (histamine and TNF-&#61537;&#61481; through an IgE-dependent stimulation. This study was carried out in 3 phases: - The first part consisted in setting up the technique to sensitize and activate mast cells through the Fc&#61541;RI receptor, and to measure the different mediators(histamine and TNF-&#61537;) released by these cells. - We then investigated new methods to maintain viable mast cells in vitro. For this purpose, cells were cultured with Stem Cell Factor (SCF) an specific mast cell growth factor. We also investigated the usefulness of a mastocytoma cell line (C2) as an alternative cell source to perform the experiments. - Finally, we analyzed whether the addition of IgE serum in the culture medium may influence mast cells histamine release and TNF-&#61537; production after an IgE-dependent stimulation, and also the Fc&#61541;RI expresión in mast cell membrane. The main results of the present study are the following: - Cutaneous mast cells are able to release histamine and synthesize TNF-&#61537; after an IgE mediated activation. - Cutaneous mast cells can be maintained in vitro by the addition of SCF to the cellular culture medium, maintaining its secretory activity. - The co-stimulation of mast cells with SCF and anti-IgE significantly potentiates the release of histamine and TNF&#61485;&#61537;. - The in vitro exposure of skin mast cells to increased serum IgE concentrations enhances their ability to release TNF-&#61537;&#61472;upon immunological stimulation. - The significant increase in the number of Fc&#61541;RI positive cells (MC) cultured with IgE-rich serum may reflect an up-regulation of the Fc&#61541;RI on the surface of these cells.

[es] La dermatitis atópica canina es una enfermedad inflamatoria crónica de la piel que cursa con un incremento en la concentración sérica de IgE alérgeno-específicas. Una de las poblaciones celulares más implicadas en el inicio y el desarrollo de esta enfermedad son los mastocitos cutáneos. Los mastocitos son activados en el organismo tras la interacción de los alérgenos con las IgE unidas a su membrana y el consiguiente entrecruzamiento de los receptores de alta afinidad para las IgE (Fc&#61541;RI). De esta forma, se induce la desgranulación de los mastocitos y la liberación y síntesis de mediadores celulares que favorecen el desarrollo de la inflamación. En el hombre y en el ratón existen estudios que demuestran que las IgE tienen un papel regulador de la expresión de los receptores Fc&#61541;RI en la membrana de los mastocitos. Así, una concentración elevada de IgE induce la sobreexpresión de los receptores FceRI, y provoca la liberación por parte de los mastocitos de concentraciones mayores de mediadores inflamatorios que contribuyen al desarrollo de los procesos alérgicos. Hasta el momento, en el perro no existían datos al respecto, y sin embargo es una especie que sufre procesos alérgicos con una alta incidencia. Por ello, el presente estudio pretende evaluar de qué forma influyen las modificaciones en el nivel de IgE del microambiente del mastocito canino sobre su capacidad de liberación y síntesis de mediadores inflamatorios, en concreto de la histamina y el factor de necrosis tumoral (TNF-&#61537;). Durante este estudio se han llevado a cabo 3 fases: - En primer lugar, se ha conseguido la activación de los mastocitos cutáneos caninos a través de los receptores Fc&#61541;RI y se han desarrollado y puesto a punto técnicas para medir diferentes mediadores (histamina, TNF-a) liberados por estas células . - En segundo lugar se han investigado nuevos métodos para mantener viables los mastocitos caninos en cultivo, mediante la utilización de un factor de crecimiento (SCF) específico para estas células. Paralelamente, se ha evaluado la utilidad de la línea celular de mastocitos neoplásicos C2 como fuente celular alternativa en estos estudios. - Finalmente, se han analizado las consecuencias que presenta la exposición de los mastocitos a una concentración elevada de IgE sobre la liberación de la histamina y el TNF-a liberados, así como sobre la expresión de los receptores Fc&#61541;RI en su membrana. Los principales resultados fruto de la realización de este trabajo se pueden resumir en los siguientes puntos: - Los mastocito caninos cutáneos son capaces de liberar histamina y sintetizar TNF-a, tras su estimulación a través de los receptores Fc&#61541;RI. - Los mastocitos cutáneos caninos pueden ser mantenidos en cultivo mediante la adición de SCF como factor de crecimiento celular, conservando su capacidad secretora. - La co-estimulación de los mastocitos caninos con SCF y anti-IgE potencia de forma significativa la liberación de histamina y TNF-a. - La adición al medio de cultivo de los mastocitos de concentraciones altas de IgE provoca una sobreexpresión de los receptores Fc&#61541;RI en la membrana de estas células. Y ello se traduce en un aumento en la producción de TNF-a cuando estas células son estimuladas a través de sus receptores Fc&#61541;RI.