[en] Apoptotic cell death is triggered by several different stimuli, among which death receptors. To induce apoptosis, TNF&#945; needs the cooperation of RNA transcription or protein synthesis inhibitor, i.e. ActD and CHX. In this study we demonstrate that ActD renders rat PC12 cells and primary mouse cortical neurons susceptible to the cytotoxic effect of TNF&#945; by the activation of the initiator caspase 8, generation of tBid and activation of pro-caspase-9 and -3. Proteins involved in TNF&#945; receptor signaling complex are not affected by TNF&#945;/ActD stimulation. However, the analysis of antiapoptotic proteins, e.g. FLIP, IAPs and Bcl-2 family members, demonstrates that Bcl-xL is the endogenous regulator of neuronal sensitivity to TNF&#945;-induced apoptosis and that it operates in a NF-&#954;B-independent manner. Bcl-xL overexpression completely protects against TNF&#945;/ActD-induced apoptosis, whereas its endogenous decrease sensitizes to TNF&#945; cytotoxic effect promoting JNK-dependent cell death. To point out the relevance of Bcl-xL in TNF&#945; signaling pathway, endogenous decrease of the main anti-apoptotic Bcl-2 family members, e.g. Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w and Mcl-1, was performed in HeLa cell line in which, contrarily to PC12, these proteins are expressed. The results obtained demonstrate that Bcl-xL is the most important Bcl-2-cytoprotective protein in regulating TNF&#945; cytotoxicity. Moreover, TNF&#945;-induced cell death is promoted by high levels of free heme accumulation. Heme sensitizes Hepa cell line to TNF&#945;-triggered apoptosis enhancing ROS production and ROS-mediated damage. This results in JNK and pro-caspase-3 activation. Oxidative stress-promoted apoptosis induced by heme/TNF&#945; treatment is inhibited by the overexpression of HO-1 and H-Ferritin cytoprotective proteins.

[es] La apoptosis puede ser inducida a través de numerosos estímulos, entre los cuales los receptores de muerte. Para promover la apoptosis, TNF&#945; necesita la colaboración de inhibidores de la trascripción del RNA o de la síntesis proteica, como ActD y CHX. En este estudio demostramos como la citotoxicidad de TNF&#945; en células PC12 y en neuronas corticales sensibilizadas con ActD ocurre a través de la activación de la caspasa iniciadora 8, la generación de tBid y la activación de las pro-caspasas-9 y -3. Además no se detectan diferencias de expresión, inducidas por TNF&#945;/ActD, de proteínas involucradas en la formación del complejo de señalización de TNF&#945;. El análisis de las principales proteínas antiapoptóticas, como FLIP, IAPs y miembros de la familia de Bcl-2, demuestra que Bcl-xL es la molécula endógena capaz de regular la apoptosis promovida por TNF&#945;, sin afectar la activación de la vía del factor de trascripción NF-&#954;B. La sobre-expresión de Bcl-xL confiere resistencia a la muerte apoptótica mediada por TNF&#945; y ActD, y su disminución forzada es capaz de inducir muerte celular únicamente tratando con TNF&#945; por activación de JNK. Para confirmar la relevancia de Bcl-xL en la señal promovida por TNF&#945;, la represión de proteínas antiapoptóticas como Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w y Mcl-1 ha sido evaluada en el modelo de células HeLa, donde estas se expresan fisiológicamente al contrario que en las células PC12, demostrando que Bcl-xL es la proteína anti-apoptótica más importante en la protección de la muerte inducida por TNF&#945;. Por otra parte, la apoptosis mediada por TNF&#945; puede ser promovida por la acumulación de elevados niveles del grupo hemo libre. El grupo hemo sensibiliza las células Hepa a la acción citotóxica de la citoquina TNF&#945; a través de la inducción de estrés oxidativo, cuyo daño resulta en la activación de la vía de JNK y de pro-caspasa- 3. La producción de ROS y el daño inducido por estrés oxidativo, así como la muerte inducida por elevados niveles del grupo hemo libre y de TNF&#945;, pueden inhibirse por la sobre-expresión de proteínas protectoras como HO-1 y H-Ferritina.