[en] Fibrosis and fistulas are frequent complications of Crohn's disease whose etiopathogenesis is unknown. The chronicity of inflammation ant the alterations in tissue repair after damage have been related to these complications. Macrophages are cells of the innate immune system widely involved in the regulation of both processes and as a consequence, in the development of fibrosis. These cells have high plasticity and a continuous spectrum of functional phenotypes that explain the diversity of functions they regulate. Recent studies have shown that macrophages, through Stat6-dependent signaling pathways, act as source of Wnt ligands and participate in the mechanisms of mucosal regeneration in acute murine colitis. The aim of the present doctoral thesis is to analyze the relevance of the macrophage as a source of Wnt ligands in the development of intestinal fibrosis and fistulas. For this purpose, we have used a murine model of chronic colitis and intestinal resections of patients with Crohn's disease with a stenosing and penetrating clinical pattern. Our results show that the weekly intrarectal administration of TNBS induces a chronic colitis that causes a fibrogenic response in Stat6 - / - mice, but not in wild type animals. This fibrosis is associated with a low proportion of positive CD206 macrophages, and with the accumulation of CD16 positive macrophages that produce Wnt6. In addition, the transfer of wild macrophages treated with IL4 to Stat6 - / - mice reduces the number of macrophages positive for CD16 and intestinal fibrosis. The accumulation of CD16 positive macrophages is also detected in the intestinal tissue surrounding the fistula tract in patients with penetrating CD and not in the fibrotic tissue of patients with stenosing CD. In both cases, accumulation of collagen and expression of epithelial-mesenchymal transition markers is detected, but the colocalization of E-CADHERIN and VIMENTIN is greater in the intestinal tissue of patients with a penetrating pattern. This tissue has a higher gene and protein expression of FZD4 and WNT2B, as well as a high number of positive CD16 / WNT2B macrophages. In addition, the immunoprecipitation of FZD4 allows to detect a higher expression of WNT2B bound to this receptor in the intestinal tissue surrounding the fistula. Finally, in isolated cells, WNT2B induces epithelial-mesenchymal transition through the activation of FZD4, which suggests that the WNT2B / FZD4 interaction may be involved in the pathogenesis of the fistula and points to a new pharmacological target to prevent the complications of the EC.

[es] La fibrosis y las fistulas son complicaciones frecuentes de la enfermedad de Crohn cuya etiopatogenia es desconocida. La cronicidad de la inflamación junto con alteraciones en la reparación tisular tras un daño, se han relacionado con estas complicaciones. Los macrófagos son células del sistema inmunitario innato ampliamente implicadas en la regulación de ambos procesos y como consecuencia en el desarrollo de la fibrosis. Estas células presentan elevada plasticidad y un continuo espectro de fenotipos funcionales que explican la diversidad de funciones que regulan. Recientes estudios han demostrado que los macrófagos, a través de vías de señalización dependientes de Stat6, actúan como fuentes de ligandos Wnt y participan en los mecanismos de regeneración mucosa en la colitis murina aguda. El objetivo de la presente tesis doctoral es analizar la relevancia del macrófago como fuente de ligandos Wnt en el desarrollo de fibrosis intestinal y fístulas. Para ello hemos utilizado un modelo murino de colitis crónica y resecciones intestinales de pacientes con enfermedad de Crohn con un patrón clínico estenosante y penetrante. Nuestros resultados muestran que la administración intrarectal semanal de TNBS induce una colitis crónica que provoca una respuesta fibrogénica en ratones Stat6 -/-, pero no en animales silvestres. Esta fibrosis se asocia con una baja proporción de macrófagos CD206 positivos, y con la acumulación de macrófagos CD16 positivos que producen Wnt6. Además, la transferencia de macrófagos silvestres tratados con IL4 a ratones Stat6-/- reduce el número de macrófagos positivos para CD16 y la fibrosis intestinal. La acumulación de macrófagos CD16 positivos es también detectada en el tejido intestinal que rodea el tracto de la fistula en pacientes con EC penetrante y no en el tejido fibrótico de pacientes con EC estenosante. En ambos casos se detecta acumulación de colágeno y expresión de marcadores de transición epitelial-mesenquimal, pero la colocalización de E-CADHERINA y VIMENTINA es mayor en el tejido intestinal de pacientes con patrón penetrante. Este tejido presenta una mayor expresión génica y proteica de FZD4 y de WNT2B, así como un elevado número de macrófagos CD16/WNT2B positivos. Además, la inmunoprecipitación de FZD4 permite detectar una mayor expresión de WNT2B unido a este receptor en el tejido intestinal que rodea la fístula. Por último, en células aisladas, WNT2B induce transición epitelial-mesenquimal a través de la activación de FZD4 lo que sugiere que la interacción WNT2B/FZD4 puede estar involucrada en la patogénesis de la fístula y apunta a una nueva diana farmacológica para prevenir las complicaciones de la EC.