[en] Defects in human endometrial stromal cell (hESC) decidualization are related with trophoblast invasion alteration as a possible cause of preeclampsia. The aim of this work was to investigate the decidualization process in patients that have suffered severe preeclampsia and the implication of annexin A2 (ANXA2) as key regulator of defective trophoblast invasion. Methods: hESC of women that have suffered severe preeclampsia (PE) (N=13) and healthy patients (Non-PE) (N=13) were in vitro decidualized and PRL, IGFBP-1 and ANXA2 assessed. Trophoblast spreading was investigated in an in vitro model using hatched mouse embryos cocultured on decidual ANXA2 siRNA inhibited vs control hESCs. Trophoblast invasion was analyzed using JEG-3 cell line on collagen transwell invasion chambers. Results: In vitro decidualization was successful at a reduced extent in hESC obtained from PE compared to Non-PE patients. During decidualization, secreted PRL and IGFBP-1 were significantly reduced in PE vs non-PE (2,98±0,6 vs 15,3±4,6 ng/mL for PRL; and 5,5±1,7 vs 14,59±7,2 ng/mL for IGFBP1). ANXA2 protein significantly increased in decidual vs non-decidual hESCs obtained from non-PE patients (65,76±21,2 µg/mL vs 13,53±16,9; 7,8±4,1 vs 2,49±2 µg/mL intra- and extracellular levels, respectively). Interestingly, this regulation was abolished during decidualization compared with non-decidualizated hESC in PE patients. Trying to mimic the dynamics of ANXA2 in hESC from PE patients, ANXA2 siRNA transfected hESC showed a marked decrease in trophoblast spreading area compared to control cells (33,6%±15,3 vs 81,3%±13,5), as well as trophoblast invasion (49,2%±9,1 vs 86,5%±11,6). Conclusions: hESCs from patients that have suffered early severe PE showed a limited ability to decidualize and intra/extracellular ANXA2 regulation was abolished during decidualization. We further demonstrate in vitro that ANXA2 inhibition in hESC affects trophoblast spreading and invasion as a mechanism involved in the onset of the endometrial origin of PE.

[es] Los defectos en la decidualización de las células del estroma endometrial humanas (CEE) están relacionados con la alteración en la invasión trofoblástica y en las alteraciones fibrinolíticas, siendo una posible causa de la preeclampsia. El objetivo de esta tesis doctoral es investigar el proceso de decidualización en pacientes que han sufrido preeclampsia severa y la implicación de la anexina A2 (ANXA2) como regulador clave de la invasión defectuosa del trofoblasto y las alteraciones fibrinolíticas de esta enfermedad. Material y Métodos: CEE procedentes de mujeres que han sufrido preeclampsia grave (PE) (N = 13) y pacientes con antecedentes de embarazos sanos (Non-PE) (N = 13) fueron decidualizadas in vitro. La expresión de PRL, IGFBP-1 y ANXA2 fueron evaluadas. Se investigó el fenómeno de expansión trofoblástica en un modelo in vitro utilizando un co-cultivo heterólogo con blastocitos de ratón en CEE decidualizadas, silenciándose una de las líneas de cultivo para la expresión de ANXA2 con siRNA. La invasión del trofoblasto humando se analizó utilizando JEG-3 línea celular en cámaras de invasión de colágeno. Resultados: La dedidualización in vitro fue defectuosa en CEE procedentes de mujeres con antecedente de PE severa vs mujeres con antecedente de gestaciones sanas. Durante la decidualización, la PRL secretada y IGFBP-1 se redujeron significativamente en PE vs no-PE (2,98 ± 0,6 vs 15,3 ± 4,6 ng / ml para la PRL, y 5,5 ± 1,7 frente a 14 , 59 ± 7,2 ng / ml para IGFBP1). La proteína ANXA2 aumentó significativamente en cultivo decidual en mujeres sanas vs mujeres con PE (65,76 ± 21,2 mg / mL vs 13,53 ± 16,9; 7,8 ± 4,1 vs 2,49 ± 2 g / mL niveles intra y extracelulares, respectivamente). Tratando de imitar la dinámica de ANXA2 en CEE procedentes de pacientes con PE, ANXA2 siRNA se usó como silenciado, mostrando una marcada disminución en el área de difusión de trofoblasto en comparación con las células control (33,6% ± 15,3 vs 81,3 ± 13,5%), como así como la invasión del trofoblasto (49,2% ± 9,1 vs 86,5 ± 11,6%). Conclusiones: las CEE procedentes de pacientes que han sufrido PE severa en algunas de sus gestaciones mostraron una capacidad limitada para decidualizarse y una regulación a la baja en la producción de ANXA2 tanto intra como extracelular. Además, se valora que la inhibición in vitro de CEE silenciadas para la expresión de ANXA2, afecta a los fenómenos de difusión e invasión trofoblástica, como un mecanismo implicado en la participación endometrial en el origen de la preeclampsia.