[en] The nematode Strongyloides stercoralis is the causative agent of human strongyloidiasis. Since the life cycle of this parasite allows autoinfections, strongyloidiasis can become a chronic disease in immunocompetent individuals, while in immunocompromised is not rare the evolution to a severe and even a fatal course of the infection. The region of La Safor valenciana has been considered an endemic focus of the parasite since more than a century ago, with hundreds of cases diagnosed since then; strongyloidiasis is a sanitary problem in this region. This Doctoral Thesis provides new information about the protein content of the infective stage of the parasite, L3i larvae, in order to identify new molecules that could be applied in diagnosis. An analysis of the most abundant transcripts of L3i larvae was performed, cloning 8 of them, and finally obtaining 5 fragments of recombinant proteins: Major antigen, 14-3-3 zeta protein, Puromycin-sensitive aminopeptidase, Ferritin 1 and Aspartic protease 4. Also, several assays to evaluate antigenicity of these fragments, as well as the capacity of recognition by antibodies in serum of infected patients were done. In the same way, polyclonal antibodies have been generated against 3 fragments of recombinant proteins: 14-3-3 zeta, Ferritin 1 and Aspartic protease, which were employed as a diagnostic tool for the identification of the parasite. With the same purpose, synthetic peptides from the proteins of L3i larvae, Metalloproteinase, Tropomyosin and Galectin, were produced. Immunoenzymatic assays using serum of infected patients demonstrate greater immunogenic potential in 2 of the 9 synthetic peptides, with good sensitivity (up to 93%). Finally, an immunolocalization study of 14-3-3 zeta, Ferritin 1 and Protease aspartic 4 proteins was performed on larvae L3i cuts of S. stercoralis, using the polyclonal antibodies produced previously at the laboratory, also it has contributed to the improvement of the morphological knowledge of the surface of the L3i larvae, carried on by analysis with Scanning Electron Microscopy (SEM).

[es] El nematodo Strongyloides stercoralis es el principal causante de la estrongiloidiasis humana. Debido a la capacidad del parásito de perpetuar un ciclo autoinfectivo la infección puede prolongarse durante años en el hospedador, dando lugar a una enfermedad crónica en personas inmunocompetentes, mientras que en condiciones de inmunosupresión puede desembocar en cuadros clínicos graves con elevadas tasas de mortalidad. La región de La Safor valenciana ha sido considerada foco endémico de este parásito desde hace más de un siglo, habiéndose diagnosticado cientos de casos desde entonces, suponiendo un problema sanitario en la región. La presente Tesis contribuye a la mejora en el conocimiento proteómico de la larva infectante del parásito, L3i, con el fin de identificar nuevas moléculas para el diagnóstico de la enfermedad. Para ello se ha realizado un análisis de los transcritos más abundantes de la larva L3i, clonándose 8 de ellos, y obteniendo finalmente 5 fragmentos de proteínas recombinantes: Antígeno principal-Major antigen, 14-3-3 zeta, Aminopeptidasa sensible a puromicina, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4. Se han realizado diferentes ensayos para valorar la antigenicidad de estos fragmentos proteicos y su capacidad de ser reconocidos por los anticuerpos presentes en los sueros de pacientes enfermos. Además, se generaron anticuerpos policlonales frente a fragmentos de las proteínas 14-3-3 zeta, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4, evaluándose su posible utilidad como herramienta diagnóstica específica para S. stercoralis. Con idéntico fin, se han producido péptidos sintéticos a partir de las proteínas 14-3-3, Metaloproteinasa, Tropomiosina y Galectina identificadas en larvas L3i de S. stercoralis. Los ensayos inmunoenzimáticos, utilizando sueros de pacientes de diversos orígenes, han demostrado mayor reconocimiento para 2 de los 9 péptidos sintetizados, obteniéndose buenos resultados en cuanto a sensibilidad (hasta del 93%). Finalmente se han realizado estudios de inmunolocalización de las proteínas 14-3-3 zeta, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4 en cortes de vermes utilizando los anticuerpos policlonales producidos, y se ha contribuido a mejorar el conocimiento morfológico de la L3i, realizando un estudio de la superficie del parásito mediante microscopia electrónica de barrido.