[ca] Tradicionalment en els laboratoris d'anàlisis de qualitat d'aigües s'utilitzen tècniques de microbiològica clàssica seguint els Reials decrets depenent del tipus d'aigües. Per a la detecció de microorganismes patògens destaca la sembra en medis de cultiu específics per a cadascun dels patògens. No obstant això, els temps d'incubació de les mostres i les posteriors confirmacions que s'han de dur a terme en algunes ocasions fa que sigui un procés llarg. En el cas de les aigües per al consum aquest temps que triga en poder tenir els resultats depenen del microorganismes a detectar, el mètode emprat, el tipus de mostra i l'ús previst, però en qualsevol cas supera les 24 hores. En aquest treball de final de grau es presenta, com a possible alternativa dels mètodes de microbiologia clàssica, l'aplicació de tècniques moleculars per a una ràpida detecció del bacteri Escherichia coli en aigües. En concret, l'aplicació de la reacció en cadena de la polimerasa (PCR) utilitzant encebadors específics per amplificar una seqüència específica de l'ADN en aquesta espècie. Per tal de dur-lo a terme es van utilitzar diferents mostres (inoculació en aigua MilliQ amb diferents concentracions d'E. coli i una aigua residual), es van fer extraccions d'ADN i posteriorment es van dur a terme les PCR amb dos parells d'encebadors: els que amplifiquen la regió V3-V4 del gen 16S rRNA, regió que contenen la gran majoria de microorganismes, i els que amplifiquen el gen ybbW que es específic d'E. coli. Per tal de comparar els resultats es van fer les anàlisis per mitjà de tècniques de microbiologia clàssica: filtració i sembra en placa tal com marca la ISO 9308-1. En les aigües on la càrrega microbiana es molt baixa no va haver detecció amb els encebadors específics d'E. coli, en canvi, en la mostra ambiental (aigua residual) hi va haver detecció amb els dos parells d'encebadors. A partir de soques d' Escherichia coli, Enterococcus faecium i Pseudomonas aeruginosa es va realitzar la tècnica de la PCR a partir d'una colònia (colony-PCR). Amb els encebadors que amplifiquen la regió 16S va haver amplificació en totes les colònies, en canvi, amb els encebadors específics d'E. coli només hi va haver amplificació de les colònies d'E. coli.

[es] Tradicionalmente en los laboratorios de análisis de calidad del agua se utilizan técnicas de microbiología clásica siguiendo los Reales decretos dependiendo del tipo de agua. Para la detección de microrganismos patógenos destaca la siembra en medios de cultivo específicos para cada uno de ellos. No obstante, el tiempo de incubación de las muestras y las posteriores confirmaciones que se deben de llevar a cabo en algunas ocasiones hace que sea un proceso largo. En el caso de las aguas para el consumo este tiempo que se tarda en poder obtener los resultados depende de los microrganismos a detectar, el método utilizado, el tipo de muestra y el uso previsto, pero en cualquier caso supera las 24 horas. En este trabajo de final de grado se presenta como posible alternativa a los métodos de microbiología clásica, la aplicación de técnicas moleculares para una rápida detección de la bacteria Eshcerichia coli en aguas. En concreto, la aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando cebadores específicos para amplificar una secuencia específica del ADN en esta especie. Con tal de llevarlo a cabo, se utilizaron diferentes muestras (inoculación en agua MilliQ con diferentes concentraciones de E. coli y agua residual) y se hicieron extracciones del ADN y posteriormente se llevaron a cabo las PCR con dos pares de cebadores. Los que amplifican la región V3-V4 del gen 16S rRNA, región que contienen la gran mayoría de microrganismo, i los que amplifican el gen ybbW que es específica de E. coli. Con tal de comparar los resultados se hicieron los análisis mediante técnicas de microbiología clásica: filtración y siembra en placa tal como marca la ISO 9308-1. En las aguas donde la carga microbiana es muy baja no hubo detección con los cebadores específicos de E. coli, sin embargo, en la muestra ambiental (agua residual) hubo detección con los dos pares de cebadores. A partir de cepas de Escherichia coli, Enterococcus faecium y Pseudomonas aeruginosa se realizó la técnica de la PCR a partir de una colonia (colony-PCR). Con los cebadores que amplifican la región 16S hubo amplificación en todas las colonias, en cambio, con los cebadores específicos de E. coli solo hubo amplificación en las colonias de E. coli.