[en] A plant can detect a possible situation of shade by perceiving changes in the ratio between Red light and Far Red light (R:FR ratio). When it detects it, a wide network of components is activated. If the plant is a shade-avoider, the action of these components triggers changes in its development including vertical growth promotion, branching inhibition and early flowering, among others. Altogether these responses are known as the Shade Avoidance Syndrome (SAS) and are detrimental for agriculture. A research group of the Centre for Research in Agricultural Genomics (CRAG) found the temporal and spatial action of three important components of this network. LONGHYPOCOTYL IN FAR-RED1 (HFR1), ELONGATED HYPOCOTYL 5 (HY5) and Phytochrome A (phyA) proteins act in the hypocotyl of Arabidopsis thaliana, mainly during the first stages of seedling development. Once this was determined, it remained to be seen whether these three genes were expressed in the same location where the proteins they encode act. This bachelor thesis is focused on the study of hypocotyl elongation as a SAS response. The ultimate objective is the analysis of the spatial distribution of the expression of HFR1, HY5 and PHYA in the different organs of the Arabidopsis seedling. To perform these experiments, Arabidopsis thaliana mutant plants deficient in each of these components were transformed with constructs containing the promoter of the gene fused to the coding sequence of the gene, fused to a reporter gene. We employed three binary plasmids: pHFR1:HFR1-GFP-3xHA (named pSP125), pHY5:HY5-YFP (named pB71) and pPHYA:PHYA-GFP (named pAPAG). After that, we followed a pipeline to identify homozygous lines expressing the transgenes. This pipeline involved selection of transformants by identifying resistant lines to selective antibiotics or herbicides, molecular analyses via PCR and complementation tests. It was possible to obtain segregating transgenic lines that showed partial complementation phenotypes for the pSP125 and the pAPAG constructs. Due to the situation of COVID-19 and some failed results, it was not possible to analyse the expression of the three genes in the seedlings.

[es] Una planta puede detectar una posible situación de sombra percibiendo los cambios en la relación entre la luz roja y la luz roja lejana (razón R:FR). Al detectarla, se activa una amplia red de componentes. Si la planta evita la sombra, la acción de estos componentes desencadena cambios en su desarrollo, incluyendo la promoción del crecimiento vertical, la inhibición de la ramificación y la floración temprana, entre otros. Estas respuestas se conocen como el síndrome de huida de la sombra (SAS; de sus siglas en inglés), y son perjudiciales para la agricultura. Un grupo de investigación del Centre for Research in Agricultural Genomics (CRAG) estudió la acción temporal y espacial de tres importantes componentes de esta red. Las proteínas LONGHYPOCOTYL IN FAR-RED1 (HFR1), ELONGATED HYPOCOTYL 5 (HY5) y Phytochrome A (phyA) actúan en el hipocótilo de la Arabidopsis thaliana, principalmente durante las primeras etapas del desarrollo de las plántulas. Una vez determinado esto, quedaba por ver si estos tres genes se expresaban en el mismo lugar donde actúan las proteínas que codifican. Este trabajo de fin de grado se centra en el estudio del alargamiento del hipocótilo como respuesta del SAS. El objetivo final es el análisis de la distribución espacial de la expresión de HFR1, HY5 y PHYA en los diferentes órganos de la plántula de Arabidopsis. Para realizar estos experimentos, las plantas mutantes de Arabidopsis thaliana deficientes en cada uno de estos componentes se transformaron con construcciones que contenían el promotor del gen fusionado a la secuencia codificante del gen, fusionado a un gen reportero. Empleamos tres plásmidos binarios: pHFR1:HFR1-GFP-3xHA (llamado pSP125), pHY5:HY5-YFP (llamado pB71) y pPHYA:PHYA-GFP (llamado pAPAG). Después seguimos un proceso para identificar las líneas homocigotas que expresan los transgenes. Este proceso implicaba la selección de transformantes mediante la identificación de líneas resistentes a antibióticos o herbicidas selectivos, análisis moleculares mediante PCR y pruebas de complementación. Fue posible obtener líneas transgénicas segregantes que mostraban fenotipos de complementación parcial para las construcciones pSP125 y pAPAG. Debido a la situación de COVID-19 y a algunos resultados fallidos, no fue posible analizar la expresión de los tres genes en las plántulas.