[en] In recent years, the genotoxicity of graphene-related materials (GRMs) and other 2D materials has been evaluated using different models to ensure their safety. The OECD TG 487 in vitro micronucleus (MNu) test is one of the most widely used methods to assess the genotoxicity of nanomaterials (NMs). However, the nature of NMs interferes with the standard MNu process, thus requiring an adaptation to assess this kind of compound. Improvements have been incorporated into the standard method to solve the interferences and build a modified, reliable protocol that can be used to test NMs further. The main interference observed was NM agglomeration, which hinders the correct visualization of micronuclei. Addition of 10% dextran to the culture medium reduced agglomeration but interfered with toxicity by reducing NM-induced cell death. Mechanical shaking during cell incubation with NMs minimized the size and number of agglomerates and avoided their rapid sedimentation and deposition onto cells, thus allowing accurate visualization of the micronucleate cells. Once set up, the proposed method was tested with graphene oxide (GO), few-layer graphene (FLG), molybdenum disulfide (MoS2), and boron nitride (hBN). The novel in vitro MNu test for NMs showed that GO (0.05–5 µg/ml) and hBN (0.05 µg/ml) were genotoxic at sublethal doses, inducing irreparable chromosomal damage. With these adaptations, the modified in vitro MNu test is strongly recommended to test the genotoxicity of NMs. The results obtained with this protocol indicate that GO and hBN represent a risk that should be considered.

[es] En los últimos años, la genotoxicidad de los materiales relacionados con el grafeno (GRM) y otros materiales 2D se ha evaluado utilizando diferentes modelos para garantizar su seguridad. El ensayo de micronúcleos in vitro (MNu) OCDE TG 487 es uno de los métodos más utilizados para evaluar la genotoxicidad de los nanomateriales (NMs). Sin embargo, la naturaleza de los NM interfiere con el proceso estándar de MNu, por lo que es necesaria una adaptación para evaluar este tipo de compuestos. Se han incorporado mejoras en el método estándar para resolver las interferencias y construir un protocolo modificado y fiable que pueda utilizarse para seguir ensayando NMs. La principal interferencia observada fue la aglomeración de NM, que dificulta la correcta visualización de los micronúcleos. La adición de un 10% de dextrano al medio de cultivo redujo la aglomeración, pero interfirió con la toxicidad al reducir la muerte celular inducida por NM. La agitación mecánica durante la incubación de las células con NMs minimizó el tamaño y número de aglomerados y evitó su rápida sedimentación y deposición sobre las células, permitiendo así una visualización precisa de los micronúcleos. Una vez configurado, el método propuesto se probó con óxido de grafeno (GO), grafeno de pocas capas (FLG), disulfuro de molibdeno (MoS2) y nitruro de boro (hBN). El novedoso ensayo in vitro MNu para NMs demostró que el GO (0,05-5 µg/ml) y el hBN (0,05 µg/ml) eran genotóxicos a dosis subletales, induciendo daños cromosómicos irreparables. Con estas adaptaciones, se recomienda encarecidamente el ensayo in vitro modificado de MNu para probar la genotoxicidad de los NM. Los resultados