[en] . Title: Analysis of Hereditary Thrombophilia: Contribution of Genetic Factors in the Predisposition of Venous Thromboembolism in the Spanish Population. Although there is little information on the prevalence of venous thromboembolism (VTE), data suggest a minimum lifetime prevalence of 5-10%. Thrombophilia is a complex disease that is caused by both environmental and genetic factors. There are well-characterised genetic defects that increase thrombotic risk such as Antithrombin (AT), Protein S (PS) and Protein C (PC). In the Spanish Multicentric Study on Thrombophilia (EMET-Study) we identified risk factors in 60% of thrombophilic families. The main objective of this doctoral thesis is the analysis of genetic risks factors of VTE in the Spanish population. We analyzed genetic factors using three different methodologies: genetic linkage analysis in families (GAIT Project: Genetic Analysis of Idiopathic Thrombophilia), a case-control and association family study. Finally, to improve the diagnosis of VTE we develop a rapid method for genotyping the 46C&#61664;T mutation using a new LightCycler PCR (Roche) protocol. The main results were: 1 - APC-resistant is a VTE risk factor independent of Factor V Leiden mutation (FVL). The mutant allele of the deletion 3997-40104EX13del in F5 is expressed and the resultant protein is functional. 2 - The prothrombin G20210A mutation is a functional polymorphism that jointly influences plasma prothrombin levels and susceptibility to VTE. 3 - The risk of VTE decreases in the following order: AT > PS > PC > FVL > PT20210A. 4 - The FVL increased the risk of VTE in families with AT, PS or PC deficiencies. 5 - The prothrombin G20210A mutation increased the risk of VT in families with AT, PS and FVL but no in families with PC deficiencies. 6 - The homozygosity (T/T) for the 46 C->T polymorphism in the F12 gene is a genetic risk factor for VTE. 7 - High levels of FVIII and non-O blood groups of ABO system, likely those with the A1 allele, are independent risk factors for VTE. 8 - The combination of linkage analysis coupled with association studies is an extremely valuable approach to identify DNA variants that affect to VTE.

[es] La trombosis es una de las causas más frecuentes de morbilidad y mortalidad en las sociedades desarrolladas. Se estima una prevalencia de un 5-10% para trombosis venosa profunda (TV). La trombofilia es una enfermedad multifactorial y compleja en la que interactúan múltiples genes entre sí y a la vez con factores ambientales. Han sido descritos algunos factores de riesgo genéticos bien caracterizados que incrementan el riesgo de trombosis: deficiencia de Antitrombina (AT), deficiencia de Proteína C (PC) y deficiencia de Proteína S (PS). Sin embargo los conocimientos sobre la base molecular de esta patología son aún escasos. En un estudio multicéntrico realizado en nuestro país, el estudio EMET (Estudio Multicéntrico Español de Trombofilia) se observó que los factores genéticos de riesgo trombótico sólo se identificaban, en el mejor de los casos y dependiendo de la población estudiada, en el 60% de las familias con trombofilia. El objetivo principal de esta tesis es el análisis de factores genéticos de riesgo tromboembólico (TV) en la población española. Para ello hemos analizado varios factores genéticos desde 3 estrategias diferentes: análisis de ligamiento genético en familias con trombofilia idiopática (Proyecto GAIT: Genetic Analysis of Idiophatic Thrombophilia), análisis de asociación en un estudio caso-control en población española y análisis de asociación en familias con trombofilia portadoras de defectos de la hemostasia conocidos. Finalmente para mejorar el diagnóstico de la trombofilia hereditaria hemos desarrollado un nuevo método analítico. Los principales resultados son: 1 - La RPCa es un factor de riesgo tromboembólico independiente de la mutación Factor V Leiden (FVL). La deleción en el dominio B del FV (3997-4104EX13del del F5) no parece alterar las propiedades funcionales del FV. 2 - La variante alélica PT20210A en el gen de la protrombina (PT), es un polimorfismo funcional que influye en los niveles de la PT y en la susceptibilidad al TV. 3 - El riesgo de TV, en familias con trombofilia asociadas con algún defecto conocido, muestra una disminución en el siguiente orden: AT> PS> PC> FVL> PT20210A. 4 - La asociación de la mutación FVL a las deficiencias AT, PC y PS incrementa el riesgo a la TV. 5 - La asociación de PT20210A a la deficiencia de AT, PS y a la mutación FVL incrementa el riesgo de TV. En el caso de la asociación de la PT20210A a la deficiencia de PC no incrementa el riesgo de TV. 6 - La homocigosis (T/T) para el polimorfismo C46T del gen F12 es un nuevo factor de riesgo TV en población española. Desarrollamos un método rápido y reproducible mediante un termociclador en tiempo real (LightCycler de Roche) para su genotipación. 7 - Los niveles elevados de FVIII y los grupos sanguíneos del sistema ABO tipo no-O, probablemente el alelo A1, son factores de riesgo independientes para el TV en población española. 8 - Bajo el punto de vista clínico, el estudio de la recurrencia de TV observada en el presente trabajo muestra como: - Los niveles de FVIII > 232% (percentil 90) incrementa hasta dos veces más el riesgo a padecer trombosis recurrentes. - Los pacientes de familias que asocian FVL y PT20210A presentan mayor frecuencia de recurrencia. 9 - Las mujeres portadoras de FVL o de PT20210A muestran una mayor tendencia a presentar clínica trombótica relacionada con el uso de anticonceptivos orales. 10 - La combinación del análisis de ligamiento, junto con el estudio de asociación caso-control, proporciona un sistema muy potente para identificar variantes del ADN que contribuyen a la susceptibilidad de la enfermedad tromboembólica.