[en] The main motivation of this PhD thesis is the assessment of small molecule biomarkers with relevance in the neonatal period, and more specifically, in situations of perinatal asphyxia and oxidative stress of the newborn. Novel analytical methods have been developed and tailored to deal with the limitations of sampling in the neonatal population, employing minimally invasive approaches and small sample amounts. Different sample pre-processing steps are implemented within the workflows for the analysis of urine, blood, and human milk including Solid Phase Extraction and different deproteinizations. The employed analytical methods are based on Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) for the analysis of phospholipid synthesis-related biomarkers, DNA & protein oxidative damage compounds, and lipid peroxidation products; Gas chromatography-Mass spectrometry (GC-MS) for the analysis of biomarkers of the energy metabolism; and Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS) for the analysis of glutathione. The different developed methods have been successfully applied in the early assessment of severity of perinatal asphyxia, the analysis of the energy metabolism-related compounds under therapeutic hypothermia treatment, the analysis of novel lipid peroxidation biomarkers after perinatal asphyxia, the analysis of oxidative stress in human milk, and the direct analysis of glutathione in blood microsamples. Therefore, it has been demonstrated the potential applicability of the advanced analytical technologies into the clinical decision-making.

[es] La principal motivación de esta tesis doctoral es el análisis de biomarcadores basados en moléculas pequeñas de relevancia en el periodo neonatal, específicamente, en situaciones de asfixia perinatal y estrés oxidativo. Se han desarrollado métodos analíticos novedosos y se han adaptado para lidiar con los retos que suponen las muestras en neonatología, empleando enfoques mínimamente invasivos y pequeñas cantidades de muestra. Se han implementado diferentes procesados de muestra para el análisis de orina, sangre y leche humana como la extracción en fase sólida y diferentes tipos de desprotenización. Los métodos analíticos desarrollados están basados en: cromatografía líquida acoplada a espectrometría de masas tándem (LC-MS/MS) para el análisis de biomarcadores relacionados con la síntesis de fosfolípidos, biomarcadores de daño oxidativo a ADN, proteínas y lípidos; cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS) para el análisis de biomarcadores del metabolismo energético; espectroscopía Raman amplificada por superficies (SERS) para el análisis de glutatión. Los diferentes métodos desarrollados se han aplicado con éxito en la evaluación temprana de la asfixia perinatal, el análisis de los compuestos relacionados con el metabolismo energético bajo tratamiento de hipotermia terapéutica, el análisis de nuevos biomarcadores de peroxidación lipídica después de la asfixia perinatal, el análisis del estrés oxidativo en leche materna, y el análisis directo de glutatión en micromuestras de sangre. Por tanto, se ha demostrado la aplicabilidad potencial de las tecnologías analíticas avanzadas en la toma de decisiones clínicas.