[ca] El tractament actual pel càncer de bufeta (CB) no múscul invasiu consisteix en la resecció del tumor seguida d'instil·lacions intravesicals de la forma viva del Mycobacterium bovis Calmette-Guérin (BCG). Des del 1990, el M. bovis BCG és el tractament d'elecció i el més eficaç per evitar la recurrència i progressió de la malaltia, conduint a una millora de la taxa de supervivència dels pacients amb CB. No obstant, aquest tractament té algunes limitacions. El 30 % dels pacients no responen a la teràpia amb M. bovis BCG i al voltant del 70 % dels malalts pateixen efectes secundaris, fent que el 8 % d'ells hagin d'interrompre la teràpia. D'altra banda, diferents subsoques de M. bovis BCG que varien en el seu contingut lipídic, s'utilitzen sense distinció arreu del món. En la recerca d'una alternativa eficaç i segura, s'ha descrit l'efecte antitumoral de Mycolicibacterium brumae. El M. brumae és un micobacteri ambiental, no patògen i de creixement ràpid amb una activitat antitumoral in vitro i in vivo semblant a la del M. bovis BCG. El M. brumae es capaç d'aturar la proliferació tumoral in vitro, i a més, indueix una resposta immune tant local, a la bufeta, com sistèmica, favorable per l'eliminació del tumor in vivo. Un tema crític són els medis de cultiu utilitzats per al creixement dels micobacteris. A diferència de la majoria de laboratoris de recerca on el M. bovis BCG és crescut en medis Middlebrook, per la producció a escala industrial s'utilitza medi Sauton ja que no conté components d'origen animal. Actualment, es desconeix el mecanisme d'acció del M. bovis BCG i quin són els antígens implicats en l'efecte antitumoral. Per tant, la modificació del medi de cultiu utilitzat pel creixement dels micobacteris podria alterar el seu perfil antigènic i, en conseqüència, la seva resposta antitumoral, com ja s'ha vist amb M. bovis BCG quan s'utilitza com a vacuna contra la tuberculosi. Per tant, l'objectiu d'aquesta tesi va ser avaluar la influència dels medis de cultiu en l'activitat antitumoral del M. bovis BCG o del M. brumae. Primerament, es va optimitzar el creixement del M. brumae crescut en diferents formulacions del medi Sauton que variaven en la font d'aminoàcids i el contingut de glicerol. Després, es va analitzar el perfil antigènic del M. bovis BCG i del M. brumae crescuts en diferents medis de cultiu, i finalment, es va avaluar la seva activitat antitumoral in vitro i in vivo. D'altra banda, es va analitzar la resposta immunitaria sistèmica desencadenada per una vacunació subcutània amb el M. bovis BCG o el M. brumae prèvia al tractament intravesical en ratolins amb tumor. Es va observar que el M. bovis BCG i el M. brumae requereixen una composició específica de medi de cultiu per maximitzar la biomassa obtinguda, tot i que aquesta condició no sempre va implicar una millor activitat antitumoral in vitro i in vivo. D'altra banda, ambdós micobacteris van mostrar un perfil lipídic diferent en funció del medi de cultiu utilitzat pel seu creixement, sent aquestes modificacions en el perfil lipídic de M. bovis BCG corroborades en cinc subsoques més. El M. brumae crescut en el Sauton A60 i el M. bovis BCG crescut en el medi Sauton G15 van desencadenar una resposta antitumoral més eficient. Finalment, la vacunació subcutània prèvia al tractament intravesical va desencadenar una resposta sistèmica més robusta que la produïda pel tractament intravesical únicament. En conclusió, els medis de cultiu utilitzats pel creixement de micobacteris mostren un impacte sobre l'activitat antitumoral de M. bovis BCG i M. brumae. A més, la vacunació pot ser considerada una estratègia de reforç per millorar pel tractament intravesical

[es] El tratamiento actual para el cáncer de vejiga (CV) no músculo invasivo consiste en la resección del tumor seguida de instilaciones intravesicales de la forma viva de Mycobacterium bovis Calmette-Guérin (BCG). Des de 1990, M. bovis BCG es el tratamiento de elección y el más eficaz para evitar la recurrencia y progresión de la enfermedad, que conlleva a una mejora en la tasa de supervivencia de los pacientes con CV. No obstante, este tratamiento tiene algunas limitaciones. El 30 % de los pacientes no responden a la terapia con M. bovis BCG, y alrededor del 70 % de los enfermos sufren efectos adversos, haciendo que el 8 % de ellos se vean obligados a interrumpir el tratamiento. Además, distintas cepas de M. bovis BCG que difieren en el contenido lipídico son usadas indistintamente en el mundo. En la búsqueda de una alternativa eficaz y segura, se ha descrito el efecto antitumoral de Mycolicibacterium brumae. M. brumae es una micobacteria ambiental, no patógena y de crecimiento rápido que mostró una actividad antitumoral in vitro e in vivo similar a M. bovis BCG. M. brumae es capaz de parar la proliferación tumoral in vitro, y además, induce una respuesta inmunitaria tanto local, en la vejiga, como sistémica, favorable para la eliminación del tumor in vivo. Un tema crucial son los medios de cultivo utilizados para el crecimiento de las micobacterias. A diferencia de la mayoría de los laboratorios de investigación donde M. bovis BCG se cultiva en medios Middlebrook, para la producción a escala industrial se utiliza el medio Sauton ya que no contiene productos de origen animal. Actualmente, se desconoce el mecanismo de acción de M. bovis BCG y que antígenos están implicados en su actividad antitumoral. Motivo por el cual, la modificación del medio de cultivo utilizado para el crecimiento de las micobacterias podrá alterar su perfil antigénica y, en consecuencia, su efecto antitumoral, como ya se ha visto con M. bovis BCG cuando se usa como vacuna contra la tuberculosis. Por lo tanto, el objetivo de esta tesis consistió en evaluar la influencia de los medios de cultivo en la actividad antitumoral de M. bovis BCG o M. brumae crecidos en distintas formulaciones del medio Sauton en las que variaba la fuente de aminoácidos y la concentración de glicerol. Después se analizó el perfil antigénico de M. bovis BCG y de M. brumae crecidos en los diferentes medios de cultivo, y finalmente, se evaluó su actividad antitumoral in vitro e in vivo. Por otro lado, se analizó la respuesta inmunitaria sistémica desencadenada por una vacunación subcutánea con M. bovis BCG o M. brumae previa al tratamiento intravesical en ratones con tumor. Se observó que M. bovis BCG y M. brumae requieren una composición específica de medio de cultivo para maximizar la biomasa obtenida, a pesar de que esta condición no siempre implicó una mejor actividad antitumoral in vitro e in vivo. Por otro lado, ambas micobacterias mostraron un perfil antigénico diferente en función del medio de cultivo usado para su crecimiento, siendo estas modificaciones en el perfil antigénico de M. bovis BCG corroboradas en cinco subcepas más. M. brumae crecido en Sauton A60 y M. bovis BCG crecido en Sauton G15 desencadenaron una respuesta antitumoral más eficiente. Finalmente, la vacunación subcutánea previa al tratamiento intravesical desencadenó una respuesta sistémica más robusta que la producida por el tratamiento intravesical únicamente. En conclusión, los medios de cultivo utilizados para el crecimiento de micobacterias muestran un impacto sobre la actividad antitumoral de M. bovis BCG y M. brumae. Además, la vacunación puede ser considerada para mejorar los resultados del tratamiento intravesical.