[en] We used manual macrodissection or laser capture microdissection (LCM) to isolate tissue sections of the hippocampus area of Ras-GRF1 wild type and knockout mice brains, and analyzed their transcriptional patterns using commercial oligonucleotide microarrays. Comparison between the transcriptomes of macrodissected and microdissected samples showed that the LCM samples allowed detection of significantly higher numbers of differentially expressed genes, with higher statistical rates of significance. These results validate LCM as a reliable technique for in vivo genomic studies in the brain hippocampus, where contamination by surrounding areas (not expressing Ras-GRF1) increases background noise and impairs identification of differentially expressed genes. Comparison between wild type and knockout LCM hippocampus samples revealed that Ras-GRF1 elimination caused significant gene expression changes, mostly affecting signal transduction and related neural processes. The list of 36 most differentially expressed genes included loci concerned mainly with Ras/G protein signaling and cytoskeletal organization (i.e. 14-3-3?/?, Kcnj6, Clasp2) or related, cross-talking pathways (i.e. jag2, decorin, strap). Consistent with the phenotypes shown by Ras-GRF1 knockout mice, many of these differentially expressed genes play functional roles in processes such as sensory development and function (i.e. Sptlc1, antiquitin, jag2) and/or neurological development/neurodegeneration processes affecting memory and learning. Indeed, potential links to neurodegenerative diseases such as Alzheimer disease (AD) or Creutzfeldt-Jacobs disease (CJD), have been reported for a number of differentially expressed genes identified in this study (Ptma, Aebp2, Clasp2, Hebp1, 14-3-3?/?, Csnk1?, etc.). These data, together with the previously described role of IRS and insulin (known Ras-GRF1 activators) in AD, warrant further investigation of a potential functional link of Ras-GRF1 to neurodegenerative processes.

[es] En este trabajo utilizamos macrodisecci?n manual o microdisecci?n por captura l?ser (LCM) para aislar secciones de tejido del ?rea del hipocampo de cerebros de ratones knockout Ras-GRF1 y controles silvestres, y analizamos sus patrones transcripcionales utilizandomicroarrays de oligonucle?tidos comerciales. Comparando los transcriptomas de macrodiseccionados y microdiseccionados, las muestras de LCM permitieron la detecci?n de un n?mero significativamente mayor de genes expresados diferencialmente, con tasas estad?sticas de significaci?n m?s altas. Estos resultados validan la LCM como una t?cnica fiable para estudios gen?micos in vivo en el hipocampo del cerebro, donde la contaminaci?n por ?reas circundantes (que no expresan Ras-GRF1) aumenta el ruido de fondo y perjudica la identificaci?n de genes expresados diferencialmente. La comparaci?n entre muestras de hipocampo LCM de tipo salvaje y knockout revel? que la eliminaci?n de Ras-GRF1 provoc? cambios significativos en la expresi?n gen?tica, que afectaron principalmente la transducci?n de se?ales y los procesos neuronales relacionados. La lista de 36 genes expresados de forma m?s diferencial inclu?a loci relacionados principalmente con la se?alizaci?n por Ras y la organizaci?n del citoesqueleto (14-3-3gamma/zeta, Kcnj6, Clasp2) o v?as de comunicaci?n cruzada relacionadas (como jag2, decorina, correa). De acuerdo con los fenotipos mostrados por los ratones knockout para Ras-GRF1, muchos de estos genes expresados diferencialmente desempe?an funciones funcionales en procesos como el desarrollo y la funci?n sensorial (Sptlc1, antiquitina, jag2) y/o procesos de desarrollo neurol?gico/neurodegeneraci?n que afectan la memoria y el aprendizaje. De hecho, se han informado v?nculos potenciales con enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer (EA) o la enfermedad de Creutzfeldt-Jacobs (CJD) para varios genes expresados diferencialmente identificados en este estudio (Ptma, Aebp2, Clasp2, Hebp1, 14-3- 3gamma/zeta, Csnk1-delta, etc.). Estos datos, junto con el papel previamente descrito de IRS y la insulina (conocidos activadores de Ras-GRF1) en la EA, justifican una mayor investigaci?n de un posible v?nculo funcional de Ras-GRF1 con los procesos neurodegenerativos.