[en] Duchenne Muscular Dystrophy is a devastating and progressive disease that currently has no curative treatment and only palliative therapies can be offered. In recent years, new therapies have been developed to restore dystrophin expression, including those aimed at correcting nonsense mutations with read-through drugs such as PTC124 (ataluren) and RTC3 and RTC14. The results of PTC124 clinical trials in patients with DMD demonstrate great variability in response and call into question the efficacy of dystrophin restorative treatment and suggest that genetic factor (type and position in STOP codon RNA) and / or directionally from the drug to the muscle could be responsible for this variability. Analysis of the in vitro response to this type of therapy in human muscle from patients with different nonsense mutations could help to know its effectiveness. In order to be able to test the efficacy of new emerging drugs, it is necessary to have in vitro platforms for these pathologies that are robust and easy to replicate. In the first chapter of this thesis we set out to improve the method of differentiation of primary myoblasts derived from human muscles in order to have a reproducible in vitro and cost-effective platform for testing drugs in muscular dystrophies. In these platforms, the in vitro efficacy of read-through compounds in the mdx mouse model and myoblasts of patients with Duchenne Muscular Dystrophy has been analyzed. Congenital Muscular Dystrophy type 1A (MDC1A) is one of the most severe Congenital Muscular Dystrophies (DMC). It is caused by total or partial α2 laminin deficiency. The prevalence is not well known, but it is estimated at 1-9 / 1,000,000 people. MDC1A is an ultra-rare disease and accounts for about 30% of cases of congenital muscular dystrophy in European countries. In the second chapter of this thesis, the main objective is to evaluate a new gene therapy (TG) strategy for congenital muscular dystrophy type 1A (DMC1A) or merosin deficiency using strategies aimed at extramuscular tissues. This strategy is based on the notion that defective proteins can theoretically be synthesized and secreted from distant non-muscular tissues or organs such as the liver, from which, through circulation, they can reach the extracellular matrix. · Muscular muscle. The basis of this idea is that the liver is a more suitable target for secretion and conventional gene therapy vectors, compared to skeletal muscle.

[es] La Distrofia Muscular de Duchenne es una enfermedad devastadora y progresiva que actualmente no dispone de ningún tratamiento curativo y sólo se pueden ofrecer terapias paliativas. En los últimos años se han desarrollado nuevas terapias destinadas a restablecer la expresión de la Distrofina, entre ellas las dirigidas a corregir las mutaciones sin sentido con fármacos con actividad read through como son PTC124 (ataluren) y RTC3 y RTC14. Los resultados de los ensayos clínicos de PTC124 en pacientes con DMD demuestran una gran variabilidad de respuesta y ponen en duda la eficiencia del tratamiento restaurador de la Distrofina y sugieren que factor genéticos (tipo y posición en el ARN del codón STOP) y/o direccionalmente del fármaco en el músculo podrían ser responsables de esta variabilidad. El análisis de la respuesta in vitro a este tipo de terapias en músculo humano proveniente de pacientes con distintas mutaciones sin sentido podría contribuir a conocer su eficacia. Para poder testar la eficacia de nuevos fármacos emergentes, es necesario disponer de plataformas in vitro de estas patologías que sean robustas y de fácil replicación. En el primer capítulo de esta tesis nos hemos propuesto mejorar el método de diferenciación de mioblastas primarios derivados de músculos humanos para poder disponer de una plataforma in vitro reproducible y coste efectivo para testar fármacos en las distrofias musculares. En esta plataforma se ha analizado la eficacia in vitro de compuestos con actividad read-through en modelo de ratón mdx y mioblastas de pacientes con Distrofia Muscular de Duchenne. La Distrofia Muscular Congénita tipo 1A (MDC1A) es una de las Distrofias Musculares Congénitas (DMC) más severas. Está causada por la deficiencia total o parcial de laminina-α2. La prevalencia no es bien conocida, pero se estima entre 1-9/1.000.000 personas. MDC1A es una enfermedad ultra rara y representa alrededor del 30% de los casos de distrofia muscular congénita en los países europeos. En el segundo capítulo de esta tesis el principal objetivo es evaluar una nueva estrategia de terapia génica (TG) para la distrofia muscular congénita de tipo 1A (DMC1A) o deficiencia de merosina utilizando estrategias dirigidas a tejidos extramusculares. Esta estrategia se basa en la noción de que las proteínas defectuosas teóricamente pueden sintetizarse y secretarse a partir de tejidos u órganos no musculares distantes como es el hígado, desde los cuales, a través de circulación, podrán llegar a la matriz extracelular ·ular muscular. La base de esta idea es que el hígado es una diana más idónea por la secreción y por los vectores de terapia génica convencionales, en comparación con el músculo esquelético.