[ca] El desenvolupament de la tècnica de microinjecció intracitoplasmàtica d'espermatozous (ICSI) va suposar un gran avanç per als laboratoris de reproducció assistida. Aquesta tècnica és de gran utilitat en casos d'infertilitat masculina, gàmetes criopreservats i ovòcits de baixa qualitat. Els oòcits de baixa qualitat són un dels principals factors que afecten negativament la producció d'embrions in vitro tant d'humans com en animals. En aquesta tesi utilitzem els ovòcits de cabra prepúber com a model d'estudi d'ovòcits de baixa qualitat per a: 1) Estudiar l'efecte de la criopreservació de gàmetes masculins i femenins (Estudis 1 i 2) sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i 2) estudiar l'efecte de la suplementació amb un antioxidant natural, durant la maduració in vitro (MIV) dels oòcits, sobre el seu desenvolupament embrionari després de la ICSI. En el primer estudi comparem la utilització d'espermatozoides frescos i congelats per a la tècnica d'ICSI avaluant el seu efecte en el desenvolupament embrionari i la seva relació amb els paràmetres de capacitació dels espermatozoides. Els resultats van mostrar un nivell significativament més alt de capacitació en els espermatozoides congelats. No obstant això, aquestes diferències no es van traduir en diferències en formació pronuclear o desenvolupament embrionari després d'ICSI. El segon estudi va examinar l'efecte de la vitrificació en oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro en: el dany sobre els ovòcits avaluat mitjançant l'anàlisi de les espècies reactives d'oxigen (ROS) i el desenvolupament embrionari amb ICSI i l&#8217;activació partenogenètica (AP). Els resultats van mostrar que el grup dels ovòcits vitrificats tenien nivells de ROS més alts en comparació amb els ovòcits no vitrificats. Després de la ICSI la formació normal de zigots i de blastocists no presentava diferències entre els dos grups. No obstant això, després d'AP, la divisió dels ovòcits i la formació de blastocists van disminuir significativament després de la vitrificació. L'estudi 3 va tenir com a objectiu millorar la competència dels oòcits de cabres prepúbers suplementant el medi de maduració amb crocetina, un antioxidant natural. Vam avaluar l'efecte de la crocetina sobre paràmetres moleculars i cel·lulars relacionats amb la competència dels ovòcits (ROS, glutatió (GSH) i activitat mitocondrial) i el desenvolupament embrionari després de fecundació in vitro (FIV), ICSI, i AP. No es van observar diferències significatives en la formació de blastocists entre les diferents concentracions de crocetina 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM i 2 µM després de la FIV. No obstant això, vam demostrar que una concentració de 1 µM de crocetina en el medi de maduració va reduir significativament els nivells de ROS encara que no va modificar la concentració de GSH o l'activitat mitocondrial. Analitzant l'efecte de la crocetina sobre el desenvolupament embrionari després de la ICSI i l'AP no vam observar cap diferència estadísticament significativa en el percentatge de divisió dels ovòcits, la formació de blastocists o el nombre total de cèl·lules per blastòcit entre els grups. No obstant això, en el grup d'ICSI amb crocetina vam observar lleugeres millores com una major divisió dels ovòcits i major formació de blastocists que en els oòcits madurats sense antioxidant. En conclusió, en aquesta tesi vam demostrar que el semen congelat pot ser tan eficient com el semen fresc per produir embrions de oòcits de cabres prepúbers mitjançant ICSI. No obstant això, amb el protocol utilitzat, els oòcits de cabres prepúbers després de la vitrificació no es van poder desenvolupar fins a blastocist després de ser fertilitzats per ICSI. L'addició d'un antioxidant com la crocetina al medi de maduració redueix significativament els nivells de ROS, i pot millorar lleugerament el desenvolupament embrionari després d'ICSI.

[en] The development of the intracytoplasmic sperm microinjection technique (ICSI) was a great advance for assisted reproduction laboratories. This technique is very useful in cases of male infertility, cryopreserved gametes and low-quality oocytes. Low-quality oocytes are one of the main factors that negatively affect in vitro embryo production (IVEP) in both humans and animals. In this thesis we use prepubertal goat oocytes as a study model for low-quality oocytes to: 1) Study the effect of cryopreservation of male and female games (Studies 1 and 2) on embryonic development after ICSI and 2) To study the effect of supplementation with a natural antioxidant called Crocetin, during in vitro maturation (IVM) of oocytes, on their embryonic development after ICSI. In study 1, we compared the use of fresh and frozen sperm for the ICSI technique, evaluating its effect on embryonic development and its relationship with sperm capacitation parameters. The results showed significantly higher level of capacitated spermatozoa in frozen-thawed sample. However, these differences were not translated into differences in pronuclear formation or embryonic development after ICSI between groups. The second study examined the effect of vitrification on IVM prepubertal goat oocytes on: damage to oocytes assessed by analysis of reactive oxygen species (ROS) and embryonic development with ICSI and parthenogenetic activation (PA). The results showed that the group of vitrified oocytes had higher ROS levels compared to non-vitrified oocytes. After ICSI, the normal formation of zygotes and blastocysts did not show differences between both groups. However, after PA, oocyte division and blastocyst formation decreased significantly with vitrification process. Study 3 was aimed at improving the competence of prepubertal goat oocytes by supplementing the maturing medium with crocetin, a natural antioxidant. We evaluated the effect of crocetin on molecular and cellular parameters related to oocyte competence (ROS, glutathione (GSH) and mitochondrial activity) and embryonic development after in vitro fertilization (IVF), ICSI, and PA. No significant difference in blastocyst formation was observed between the different concentrations of crocetin 0 µM (control), 0.5 µM, 1 µM and 2 µM after IVF. However, we demonstrate that a 1 µM concentration of crocetin in the maturation medium significantly reduced ROS levels although it did not modify the GSH concentration or mitochondrial activity. Analyzing the effect of crocetin on embryonic development after ICSI and PA, we did not observe any statistically significant difference in the percentage of oocyte division, blastocyst formation or the total number of cells per blastocyst between groups. However, slight improvements such as increased oocyte division and greater blastocyst formation were observed in the crocetin ICSI group whose oocytes where matured with 1 µM crocetin. In conclusion, we have demonstrated that fresh and frozen-thawed semen can be useful for ICSI of prepubertal goat oocytes without compromising the results. However, with the protocol used, prepubertal goat oocytes after vitrification were not able to develop up to blastocyst after being fertilized by ICSI. The crocetin addition to IVM has not shown significant effects on embryo production from prepubertal goat oocytes in spite of the significant reduction on ROS level and slightly improvement on embryo development after ICSI.