[en] Dystrophinopathies are a group of neuromuscular disorders caused by a mutation in the dystrophin gene, which is X-linked and affects both the production and functionality of the dystrophin protein, essential for proper muscle function. Current diagnosis relies on genetic testing to identify causal mutations for these diseases. However, up to 7% of dystrophinopathy cases remain undiagnosed, or manifest a discrepancy between the mutation and the observed phenotype. The aim of the study is to identify cases where the disease phenotype is not justified by genetic analysis. Nine patients with a dystrophinopathy phenotype but without a genetic diagnosis were studied to perform a functional protein analysis using immunofluorescence and western blot techniques to evaluate dystrophin protein expression. Alterations in dystrophin expression levels were detected in eight out of nine patients. A mosaic expression pattern was observed in all female patients except for one that along with the male subject showed reduced expression. Protein quantification revealed altered expression in three female subjects for the C-terminal domain, and a considerable reduction in the central and C-terminal domains in the male subject. This study demonstrates the indispensability of functional protein analysis as a first step to confirm the presence of a dystrophin synthesis defect. It also highlights the value of combining immunofluorescence and western blot techniques for proper dystrophin expression analysis. However, the underlying molecular diagnosis will subsequently require mRNA analysis to identify the definitive molecular effect.

[es] Las distrofinopatías son un grupo de trastornos neuromusculares causados por una mutación en el gen de la distrofina, que se transmite ligado al cromosoma X y afecta a la producción y funcionalidad de la proteína distrofina, esencial para el correcto funcionamiento muscular. El diagnóstico actual se basa en pruebas genéticas para identificar las mutaciones causales de estas enfermedades. Sin embargo, hasta un 7% de los casos de distrofinopatía permanecen sin diagnosticar o existe una discrepancia entre la mutación y el fenotipo observado. El objetivo del estudio consiste en identificar aquellos casos en los cuáles el fenotipo de la enfermedad no es justificado por el análisis genético. Se estudiaron nueve pacientes con fenotipo de distrofinopatía pero sin diagnóstico genético a los que se les realizó un análisis funcional proteico, mediante técnicas de inmunofluorescencia y western blot para evaluar la expresión de la proteína distrofina. Se detectaron alteraciones de la expresión de la distrofina en ocho de los nueve pacientes. Se observó un patrón mosaico de expresión en todas las mujeres menos en una de ellas junto al sujeto masculino estudiado, quienes solamente mostraron reducción en dicha expresión. La cuantificación proteica reveló alteración de la expresión en tres sujetos femeninos en el dominio C-terminal y una considerable disminución en del dominio central y C-terminal en el paciente masculino. Este estudio demuestra la indispensabilidad del análisis de expresión a nivel proteico como primer paso para confirmar la existencia de un defecto en la síntesis de distrofina. Asimismo, resalta el valor de combinar las técnicas de inmunofluorescencia y western blot para el correcto análisis de la expresión proteica. No obstante, el diagnóstico molecular subyacente en sujetos sin diagnóstico con los métodos convencionales requerirá posteriormente del análisis de ARNm para identificar el efecto molecular definitivo.