[en] Introduction Injection medialization laryngoplasty with difference substances has traditionally been one of the main surgical techniques for the treatment of dysphonia caused by glottic insufficiency. Generalization of the use of fat grafts in the field of reconstructive surgery, has brought its use as a filler in this type of infiltrations. Notwithstanding, until 2016, only 4 publications existed in which fat grafts were obtained through liposuction, and none of them used fat grafts processed through centrifugation. Although the field of fat grafts has brought great interest from plastic surgeons, there are still plenty of controversies related to the optimal extraction, processing and infiltration techniques, in order to achieve the best quality sample and the highest possible graft take. Regenerative medicine and the use of adipose derived mesenchymal stem cells are other fields that are calling for great interest. However, these areas of knowledge also possess many controversies, and it has not been determined already the best processing technique for obtaining the fat graft sample with the highest possible amount of stem cells. In our study, preoperatory and postoperatory voice parameters of a series of patients that suffered from glottic insufficiency dysphonia of any etiology, operated through injection laryngoplasty, were reviewed. Furthermore, an experimental study was performed, focused on evaluating characteristics of lipoaspirate samples after processing it with seven different techniques, evaluating proliferation index, cell counts, cell viability, and quantifying the amount of adipose derived stem cells present. Materials and methods A retrospective and prospective review of the clinical data of 25 patients operated through injection laryngoplasty with fat grafts for the treatment of dysphonia caused by glottic insufficiency, was performed. All patients were operated between January of 2015 and May of 2019 at the University and Polytechnic Hospital La Fe. The variables used for result measurement were the GARBS scale for evaluating of the degree of dysphonia, a validated survey for subjective voice evaluation (VHI-10, voice handicap index), maximum phonation time, jitter, shimmer and noise-to-harmonic ratio; before surgery, and 8 months later. The experimental study on processing methods of fat grafts was divided in two phases. Processing methods evaluated were: centrifugation at 300g for 3 minutes, centrifugation at 300g for 3 minutes and emulsification with 8 or 20 passes between syrinxes, centrifugation at 300g for 6 minutes, decantation during 15 minutes, decantation and three washes with physiological saline, and decantation with addition of lidocaine 2%. In the first phase, samples were studied after being processed, in order to quantify cells of the stromal vascular fraction, determining cell survival and proliferation index at 24 and 72 hours. On the second phase, a new evaluation of cell survival was performed through flow cytometry, and also quantification of adipose derived stem cells (CD34+, CD90+, CD105+, CD31-, CD45-) was performed Also, two systematic bibliographical reviews were performed on the two fields of knowledge approached in this study. Results Thirty injection laryngoplasties with fat grafts were performed in 25 patients during the reviewed period. 20 of the patients were males, and 5 females. Average age was 57,5 (sd 18). 23 of them accomplished with the whole follow-up period of 8 months. Average follow-up time was 21,3 months (sd 11,5). Etiology of dysphonia was scarring after tumor resection in 17 patients, sulcus vocalis in 4, vocal cord paralysis in 3, and dystonia in the last one. The affection was unilateral in 18 patients, and bilateral in the other 7. Five patients that suffered from severe dysphonia caused by scarring received an additional injection laryngoplasty, as results were consider unsatisfactory at 12 months follow-up. Voice quality of the patients improved, observing statistically significant improvements in all the parameters evaluated: GARBS scale, VHI-10 survey, maximum phonation time, jitter, shimmer and noise-to-harmonic ratio (p<0,05) As regards the study of fat graft processing techniques, 5 subjects participated in the first phase, with an average age of 53,2 (sd 18,7), average weight of 72,2kg (sd 10,5), height of 166,4cm (ds 6,3) and BMI of 26kg/m2 (sd 2,6). Two of them were male, and the remaining three, female. At 24 hours of culture, a higher number of cells was observed in decanted samples, but after 72 hours, proliferation index was much higher in centrifugated samples, reaching the same cell counts as decanted samples. No negative effect on survival and proliferation was observed in samples exposed to lidocaine. Eleven subjects participated on the second phase of the study, six females, and five males. Average age was 54,3 (sd 18,5) average weight 71kg (sd 8,9), height of 166,1cm (ds 6,9) and BMI of 25,7 (sd 3,1). Cell viability study performed through flow cytometry reported survival rates higher than 95% with all the processing techniques (p<0,05). Flow cytometry study performed on the 62 samples of the 11 patients, showed a higher amount of stem cells in samples processed through centrifugation at 300g for 3 minutes, followed by samples centrifugated and emulsified with 8 passes; decanted and washed samples; only decanted samples; samples decanted and exposed to lidocaine; samples centrifugated at 300g for 6 minutes, and finally, the sample centrifugated and emulsified with 20 passes between syrinxes. Notwithstanding, these differences were only statistically significant for three of the pairs of procedures compared (p<0,05) Conclusions Injection laryngoplasty with fat grafts processed through centrifugation and emulsification, es an effective technique for the treatment of glottic insufficiency dysphonia; having minimal complication rates. Its pioneer performance in our hospital, allowed our departments to achieve similar success rates as the ones reported in the series published during the las three years. In our study, fat graft processing through decantation obtained samples with a higher number of cells, but with lower proliferation rates than centrifuged samples. Moreover, samples centrifuged for a short period of time (3 minutes), presented the higher amount of stem cells among the other processing techniques (although differences observed were not statistically significant, probably because of the limited sample size). Therefore, a new research line remains open, and more studies with higher sample sizes should be performed in order to verify our results, and detect which processing techniques obtains the sample with the higher amount of stem cells. Furthermore, more research is required in order to verify which qualities of a fat graft are associated to better graft take.

[es] Introducción Una de las principales técnicas quirúrgicas para el tratamiento de la disfonía por insuficiencia glótica ha sido tradicionalmente la laringoplastia de medialización mediante diversos procedimientos, entre ellos la infiltración de diversas sustancias. La generalización del uso de injertos grasos en el ámbito de la cirugía reconstructiva se ha traducido en los últimos años en el uso de este material autólogo como relleno para realizar estas infiltraciones. No obstante, hasta 2016, sólo existían 4 estudios en los que se empleara grasa obtenida mediante lipoaspiración, y ninguno de ellos utilizó injertos procesados mediante centrifugación. Por otra parte, aunque el campo de los injertos grasos es un área que ha despertado gran interés en el ámbito de la cirugía plástica, todavía existen múltiples controversias respecto a los métodos óptimos de obtención, procesamiento e infiltración para disponer de la muestra de mejor calidad y la máxima tasa de prendimiento. Otra área que está disfrutando de un desarrollo importante es el de la medicina regenerativa y empleo de células madre mesenquimales procedentes del tejido adiposo. No obstante, en esta área del conocimiento también existen muchas controversias, y tampoco se ha llegado a determinar qué tipo de procesamiento de los injertos grasos permite obtener una muestra con la mayor cantidad de células madre. En este estudio, hemos revisado y evaluado los parámetros de voz preoperatorios y postoperatorios de una serie de pacientes que padecían disfonía por déficit de cierre glótico de etiología principalmente cicatricial, intervenidos mediante laringoplastia de medialización con injertos de grasa autóloga procesados mediante centrifugación y emulsificación. Además, hemos realizado un estudio experimental destinado a evaluar las características de las muestras de lipoaspirado tras aplicar sobre ellas siete tipos de procesamientos distinto, evaluando índices de proliferación celular, porcentaje de viabilidad celular, y cuantificación de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo. Material y método Se realizó una revisión retrospectiva y prospectiva de los registros clínicos de 25 pacientes intervenidos mediante laringoplastia de medialización mediante infiltración de injertos grasos para el tratamiento de disfonía por déficit de cierre glótico, intervenidos en el Hospital La Fe entre enero de 2015 y mayo de 2019. Como variables de resultado, se evaluaron el grado de disfonía mediante la escala GRABS, una encuesta validada para valoración subjetiva de la voz VHI-10 (índice de incapacidad vocal), el tiempo máximo de fonación, jitter, shimmer y la razón armónico-ruido; antes de la intervención quirúrgica, y ocho meses tras ella. Los métodos de procesamiento de la grasa evaluados fueron: a) centrifugación a 300g durante 3 minutos; b) centrifugación a 300g durante 3 minutos con emulsificación realizando 8 o c) 20 pases entre jeringas; d) centrifugación a 300g durante 6 minutos, e) decantación durante 15 minutos, f) decantación y tres lavados con suero fisiológico, y g) decantación con adición de lidocaína 2%. El estudio experimental sobre los métodos de procesamiento de los injertos grasos se dividió en dos fases: En la primera fase, se evaluaron las muestras tras aplicar los procesamientos, realizándose cuantificación de células de la fracción vascular estromal, determinando la tasa de supervivencia celular tras el procesamiento (mediante evaluación a través de cámara de Neubauer) y evaluando la cinética de crecimiento mediante cultivo en medio celular y su estudio tras 24 y 72 horas. En la segunda fase, se realizó una nueva evaluación de la tasa de supervivencia celular tras cada procesamiento, y cuantificación de células madre mesenquimales procedentes de tejido adiposo (CD34+, CD90+, CD105+, CD31-, CD45-) mediante citometría de flujo. Además, se realizó una revisión bibliográfica sistematizada de las dos áreas de conocimiento incluidas en este estudio. Resultados 30 intervenciones de laringoplastia de medialización mediante infiltración de injertos grasos fueron realizadas en 25 pacientes en el periodo evaluado. De los 25 pacientes, 20 eran varones y 5 mujeres. La edad media fue de 57,5 (ds 18). 23 de ellos realizaron el seguimiento completo, sometiéndose a las pruebas de evaluación a los 8 meses del procedimiento. El tiempo medio de seguimiento en consulta fue de 21,3 meses (ds 11,5). La etiología de la disfonía fue: cicatricial por resección de lesiones en 17 pacientes; por sulcus vocalis en 4; por parálisis de cuerda vocal de largo tiempo de evolución en tres, y por distonía laríngea en uno. La afectación fue unilateral en 18 pacientes, y bilateral en los 7 restantes. Cinco pacientes que sufrían disfonía severa de etiología cicatricial recibieron un procedimiento adicional de infiltración de injertos grasos ante la existencia de resultados poco satisfactorios a los 12 meses de la intervención. La calidad de la voz de los pacientes intervenidos mejoró de forma estadísticamente significativa en todos los parámetros evaluados a los ocho meses después de la intervención: escala GRABS, encuesta VHI-10, tiempo máximo de fonación, jitter, shimmer y razón armónico-ruido (p<0,05). La estabilidad de las mejoras obtenidas fue objetivada durante el periodo de seguimiento. Respecto al estudio de métodos de procesamiento de injertos grasos, en la primera fase participaron 5 sujetos, con una edad media de 53,2 años (ds 18,7), peso medio de 72,2kg (ds 10,5), altura de 166,4cm (ds 6,3) e IMC de 26kg/m2 (ds 2,6). Dos de ellos eran varones, y tres mujeres. A las 24h, se observó una mayor cantidad de células en las muestras decantadas, pero a las 72 horas, se observó una mayor tasa de proliferación en las muestras centrifugadas, llegando a equipararse el número de células en las muestras de ambos tipos de procesamiento. No se observó una afectación negativa de la supervivencia ni proliferación celular de las muestras expuestas a lidocaína. En la segunda fase del estudio, participaron once sujetos, seis mujeres y cinco varones. La media de edad fue de 54,3 años (ds 18,5), peso medio de 71kg (ds 8,9), altura de 166,1cm (ds 6,9) e IMC de 25,7 (ds 3,1). En el estudio de viabilidad celular realizado por defecto por el citómetro de flujo, se observó una supervivencia superior al 95% (p<0,05) en todas las muestras. En el estudio mediante citometría de flujo de las 62 muestras de los 11 pacientes, se observó una mayor cantidad de células madre en las muestras procesadas mediante centrifugación a 300g durante 3 minutos, seguidas de la muestra centrifugada y emulsificada con 8 pases, la decantada y lavada, la decantada exclusivamente, la decantada y expuesta a lidocaína, la centrifugada a 300g durante 6 minutos, y la centrifugada y emulsificada mediante 20 pases entre jeringas. No obstante, las diferencias sólo fueron estadísticamente significativas para 3 de las parejas de procedimientos comparadas (p<0,05). Conclusiones La laringoplastia de medialización mediante injertos de grasa autóloga procesados mediante centrifugación y emulsificación, es una técnica efectiva para el tratamiento de la disfonía por déficit de cierre glótico, con una tasa de complicaciones mínima. Su realización pionera en nuestro hospital, ha permitido alcanzar unas tasas de éxito similares a las reportadas en los estudios sobre el uso del lipoaspirado en este ámbito publicados en los últimos 3 años. En nuestro estudio, el procesamiento de los injertos grasos mediante decantación obtuvo muestras con mayor cantidad de células, pero con índice de proliferación menor que las muestras centrifugadas. Además, las muestras centrifugadas durante una cantidad de tiempo limitada (3 minutos), presentaron una mayor cantidad de células madre derivadas de tejido adiposo que las procesadas utilizando el resto de métodos evaluados (aunque las diferencias observadas no fueron estadísticamente significativas debido al tamaño muestral limitado). Queda abierta de esta manera una línea de investigación, que deberá contar con nuevos proyectos específicos destinados a dilucidar el método de procesamiento que permita obtener una muestra con el mejor perfil en cuanto a cantidad de células madre presentes. Además, se precisan nuevos estudios que permitan comprobar qué características del lipoaspirado determinan su mayor prendimiento. Con la finalidad última de buscar los métodos de procesamiento que permitan obtener la muestra de injerto graso óptima.