[ca] A Europa, l'amenaça del ressorgiment i introducció de malalties transmeses per mosquits, com la malària i la febre de la vall del Rift, ha despertat un nou interès en l'estudi del microbioma associat amb mosquits autòctons per a una millor comprensió de les interaccions mosquit–patogen amb la finalitat de desenvolupar eines de vigilància vectorial i control ecològicament més adequades - En conseqüència, la tesi present es va enfocar en i) explorar la microbiota de l'Anopheles atroparvus, ii) avaluar la influencia de flavivirus insecto-específic en la competència vectorial del Culex pipiens i de l'Aedes vexans d' Europa per a la transmissió de RVFV, i iii) Aplicar metagenòmica a targetes FTA com a nou mètode per a la detecció de virus i vigilància d'arbovirus. Al primer capítol, es va establir una colònia de laboratori d' An. atroparvus del Delta de l' Ebre i es va actualitzar el seu protocol de cria. El seqüènciament del gen bacterià 1S rRNA va mostrar que l'ambient de cria, fisiologia i hàbits de farratge va influir en la microbiota tant de mosquits de camp com de laboratori. Addicionalment, els anàlisis de diversitat van mostrar variació entre els diferents estadis de desenvolupament silvestres i un declivi de la diversitat en el grup de femelles de la desena generació de laboratori F10, tot i això, van conservar una fracció significativa de la microbiota de les femelles silvestres. Finalment, proteobactèries Gram-negatives van predominar en la microbiota de l' An. atroparvus, entre les quals Pseudomonas, Asaia i Serratia van ser identificades com a candidates potencials per al control vectorial local. Per avaluar la influencia de ISFVs en la competència vectorial enfront de la transmissió de RVFV (Capítol 2), primer es va estudiar la infecció de Culex flavivirus (CxFV) a Cx. Pipiens a través d'exposició oral i inoculació intratoràcica. CxFV va infectar a Cx. Pipiens després d'inoculacions intratoràciques però no a través de l'exposició oral. Posteriorment, els assajos de competència vectorial enfront de RVFV es van realitzar en co-infecció amb CxFV i un flavivirus de mosquit de circulació natural, respectivament, en Cx. pipiens i Ae. vexans. Ambdues poblacions locals van mostrar ser competents per a RVFV després d'exposició oral. Per altra banda, ni CxFV ni RVFV van interferir en la seva respectiva infecció, mentre que el flavivirus de mosquit de circulació natural va modular la susceptibilitat d'infecció amb RVFV en Ae. vexans, suggerint el seu potencial ús com agent biològic per a la prevenció de la transmissió de RVFV. Finalment, per a avaluar noves alternatives per a la detecció de virus circulants i vigilància d'arbovirus (Capítol 3), targetes FTA amb esquer de mel van ser exposades a mosquits capturats en el camp durant jornades de vigilància entomològica per a la seva posterior anàlisi mitjançant seqüenciació de nova generació. Virus associats a artròpodes i plantes van ser identificats en les FTAs i es van obtenir genomes virals gairebé complets, el que suggereix una bona preservació d' ARN viral. Per a confirmar la presència de virus associats amb mosquits en els espècimens capturats, els pools de mosquits van ser analitzats utilitzant PCR de transcripció reversa i primers espècie-específics dissenyats a partir de les seqüències obtingudes de les FTAs. Virus relacionats amb Alphamesonivirus, Quaranjavirus i Bunyavirales no classificats van ser detectats en mosquits de Catalunya constituent el primer registre de distribució d'aquests virus en mosquits europeus. La detecció d' ISVs a la saliva de mosquits de forma silvestre demostra la viabilitat d'aquest mètode per a fer monitoreig de la fracció transmissible del viroma de mosquits i a seva utilitat en la vigilància d'arbovirus.

[es] En Europa, la amenaza del resurgimiento e introducción de enfermedades transmitidas por mosquitos, como la malaria y la fiebre del Valle de Rift, ha despertado un nuevo interés en el estudio del microbioma asociado con mosquitos autóctonos para un mejor entendimiento de las interacciones mosquito-patógeno con el fin de desarrollar herramientas de vigilancia vectorial y control ecológicamente más adecuadas. Consecuentemente, la presente tesis se enfocó en: i) explorar la microbiota de Anopheles atroparvus, ii) evaluar la influencia de flavivirus insecto-específico en la competencia vectorial de Culex pipiens y Aedes vexans de Europa para la transmisión de RVFV, y iii) Aplicar metagenómica en tarjetas FTA como un nuevo método para la detección de virus y vigilancia de arbovirus. En el primer capítulo, se estableció una colonia de laboratorio de An. atroparvus del Delta del Ebro y se actualizó su protocolo de cría. El secuenciamiento del gen bacteriano 16S rRNA mostró que el ambiente de cría, fisiología y hábitos de forrajeo influyeron en la microbiota de mosquitos tanto de campo como de laboratorio. Los análisis de diversidad mostraron variación entre los diferentes estadios de desarrollo silvestres y un declive de diversidad en hembras de la décima generación de laboratorio, sin embargo, una fracción significativa de la microbiota de hembras silvestres fue conservada. Finalmente, proteobacterias Gram-negativas predominaron en la microbiota de An. atroparvus, entre las cuales Pseudomonas, Asaia y Serratia fueron identificadas como candidatas potenciales para control vectorial local. Para evaluar la influencia de ISFVs en la competencia vectorial frente a la transmisión de RVFV (Capítulo 2), primero se estudió la infección de Culex flavivirus (CxFV) en Cx. pipiens a través de exposición oral e inoculación intratorácica. CxFV infectó a Cx. pipiens después de inoculaciones intratorácicas pero no a través de la exposición oral. Los ensayos de competencia vectorial frente a RVFV se realizaron en co-infección con CxFV y un flavivirus de mosquito de circulación natural, respectivamente, en Cx. pipiens y Ae. vexans. Ambas poblaciones mostraron ser competentes para RVFV después de exposición oral. Por otra parte, CxFV ni RVFV interfirieron con su respectiva infección, mientras que el flavivirus de mosquito moduló la susceptibilidad de infección con RVFV en Ae. vexans, sugiriendo su potencial uso como agente biológico para la prevención de la transmisión de RVFV. Finalmente, para evaluar nuevas alternativas para la detección de virus circulantes y vigilancia de arbovirus (Capítulo 3), tarjetas FTA con cebo de miel fueron expuestas a mosquitos capturados en el campo durante jornadas de vigilancia entomológica para su posterior análisis mediante NGS. Virus asociados a artrópodos y plantas fueron identificados en las FTAs y genomas virales casi completos fueron obtenidos, lo que sugiere una buena preservación de ARN viral. Para confirmar la presencia de virus asociados con mosquitos en los especímenes capturados, los pools de mosquitos fueron analizados usando RT-PCR y primers especie-específicos diseñados a partir de las secuencias obtenidas de las FTAs. Virus relacionados con Alphamesonivirus, Quaranjavirus y Bunyavirales no clasificados fueron detectados en mosquitos de Cataluña constituyendo el primer registro de distribución de estos virus en mosquitos europeos. La detección de ISVs en la saliva de mosquitos de forma silvestre demuestra la viabilidad de este método para monitorear la fracción transmisible del virroma de mosquitos y su utilidad en la vigilancia de arbovitus. El presente trabajo contribuye con información para un mejor entendimiento de los factores detrás de la estructura del microbioma de mosquitos locales y su potencial influencia en la competencia vectorial frente a arbovirus. Adicionalmente, provee un nuevo método para complementar la vigilancia de arbovirus en zonas susceptibles, así como, para la detección de nuevos virus circulantes y potencialmente patogénicos