[en] Fruit shape, quality and ripening are important traits in melon (Cucumis melo L.). As melon displays a vast diversity and even climacteric and non-climacteric varieties coexist, it is a suitable model for the study of these traits. To identify candidate genes for important agronomic traits in melon, several projects to locate quantitative trait loci (QTL) using mapping populations have been performed. Among them, two majors QTLs, FSQS8.1 and ETHQV8.1, have been identified for fruit shape and ripening respectively. The candidate gene for FSQS8.1 is an ovate protein factor (OFP1) and for ETHQV8.1 is an ethylene responsive transcription factor (ERF024). CRISPR/Cas9, a novel genetic edition tool, will help to validate the function of identified genes. Therefore, we transferred the Cas9 gene along with a guide RNA specific for each gene via Agrobacterium and regenerated plants through tissue culture. The objective was to produce plants with a knock out mutation in the target genes. The fruits of these plants will be selfed to obtain mutations in homozygosis, then phenotyped to understand the function of the candidate genes. During this work we successfully produced transgenics and CRISPR/Cas9 edited plants. Some were biallelic editions that would save the efforts needed to obtain an individual with both alleles knocked out. However, tissue culture and the Agrobacterium transformation proved to be challenging. Six out of eight transformations were unsuccessful. Failure causes were mostly due to infection from an endogenous bacteria. The two transformations that produced plants only did so after 6 to 10 months of calli culture. Further, all plants obtained so far were tetraploid, a common issue in melon tissue culture. Though CRISPR/Cas9 remains a promising tool for research in melon, tissue culture and Agrobacterium transformation methods need to be improved and the difficulties of the protocol need to be studied.

[es] La forma, calidad y maduración del fruto son características importantes en melón (Cucumis melo L.). Ya que melón posee una gran diversidad fenotípica, incluyendo tanto variedades climatéricas como no climatéricas, es un sujeto adecuado para el estudio de estos rasgos. Para identificar genes candidatos para rasgos agronómicos importantes en el melón, se han iniciado varios proyectos para localizar quantitative trait loci (QTL) utilizando poblaciones de mapeo. Entre ellos, se han identificado dos QTL importantes, FSQS8.1 y ETHQV8.1, para la forma y la maduración del fruto, respectivamente. El gen candidato para FSQS8.1 es un OVATE FACTOR PROTEIN (OFP1) y para ETHQV8.1, un ETHYLENE RESPONSIVE TRANSCRIPTION FACTOR (ERF024). CRISPR/Cas9 es un método puntero de edición genética que podría ser una herramienta potente para ayudar a validar la función de genes identificados. Por lo tanto, para validar la función de los genes candidato, transferimos el gen Cas9 junto con un ARN guía específico para cada gen a través de Agrobacterium y regeneramos plantas mediante cultivo de tejidos. El objetivo era producir plantas con una mutación knock-out en dichos genes. Los frutos de estas plantas se autofecundarán para obtener mutaciones en homocigosis y luego se fenotiparán para comprender la función de los genes candidatos. Durante este trabajo, se produjeron con éxito transgénicos y plantas editadas con CRISPR/Cas9. Algunas eran ediciones bialélicas que ahorrarían los esfuerzos necesarios para obtener un individuo con ambos alelos eliminados. Sin embargo, el cultivo de tejidos y la transformación de Agrobacterium presentaron complicaciones. Seis de las ocho transformaciones no tuvieron éxito. Las causas de fallo fueron principalmente infecciones de una bacteria endógena. Las dos transformaciones que produjeron plantas solo lo hicieron después de 6 a 10 meses de cultivo de callos. Además, todas las plantas obtenidas hasta ahora eran tetraploides, un problema común en el cultivo de tejidos de melón. Aunque CRISPR/Cas9 sigue siendo una herramienta prometedora para la investigación en melón, los métodos de cultivo de tejidos y transformación con Agrobacterium deben mejorarse y las dificultades del protocolo deben estudiarse.