[ca] Tot i que la teràpia antiretroviral ha suposat un enorme avenç en quan a la cronificació de la infecció pel VIH-1, encara avui dia la malaltia és incurable. L'eficàcia de la TAR és indiscutible, però l'aturada del tractament es tradueix sistemàticament en un rebot de la càrrega viral plasmàtica que serà degut, principalment, a l'existència de reservoris latents que s'estableixen molt ràpidament en el moment de la infecció i que poden romandre en l'organisme llargs períodes de temps. S'han dissenyat diverses estratègies o aproximacions que tenen com a objectiu trobar la cura per la infecció causada pel VIH, ja sigui per una eliminació radical dels reservoris latents o bé, pel control de la replicació en absència de tractament acompanyat d'una millora de la funcionalitat del sistema immunitari de l'hoste. Així doncs, per a que aquesta aproximació tingui èxit és necessari que es reactivin els provirus competents de les cèl·lules infectades, actuant sobre un ampli ventall de subpoblacions; es produeixin efectes mínims sobre altres tipus cel·lulars evitant així possibles toxicitats off-target; s'estimulin mecanismes de mort en les cèl·lules infectades i s'eviti una activació global de les cèl·lules T. Per tots aquests motius és imprescindible una bona caracterització d'aquests reservoris virals per tal de poder dissenyar estratègies dirigides a eliminar-los. A més, és imperatiu trobar nous agents reversors de latència que permetin una reactivació dels virus a nivell de cèl·lules T CD4+ sense tenir un efecte negatiu sobre la resta de cèl·lules del sistema immunitari, com serien les cèl·lules T CD8+ citotòxiques. En la present tesi doctoral s'ha posat a punt una nova tècnica, anomenada RNA/FISH flow, en el context de la infecció pel VIH. Aquesta tècnica permet la detecció de molècules d'ARN mitjançant la hibridació in situ fluorescent (FISH) combinada amb un mètode d'amplificació de la senyal i, per l'altra banda, l'immunofenotipatge mitjançant anticossos conjugats amb fluorocrom contra proteïnes intracel·lulars i de superfície cel·lular. Totes aquestes dades seran posteriorment recollides i analitzades a través d'un citòmetre de flux. L'ús d'aquesta tècnica ha permès identificar les cèl·lules efectores de memòria (TEM) com la subpoblació cel·lular que suporta majoritàriament la transcripció viral activa tant en pacients virèmics com en aquells amb la càrrega viral suprimida. A més, l'estudi i caracterització de les subpoblacions cel·lulars que actuen com a reservori del virus i que poden respondre a l'estimulació exògena per part de diferents agents reversors de la latència (LRAs), fent ús d'aquesta nova tècnica, ha determinat que els agents reversors de la latència indueixen una resposta heterogènia en les diferents subpoblacions de cèl·lules T CD4+ de pacients infectats pel VIH; i s'ha identificat la combinació de Romidepsina i Ingenol com una de les més potents. Finalment, s'ha proposat i l'avaluat l'àcid làuric, un àcid gras de cadena mitjana, com a nou inductor de la reactivació viral. Els resultats obtinguts in vitro demostren la capacitat d'aquest compost natural per induir la transcripció i producció de proteïna viral al mateix temps que promou una reprogramació del metabolisme cel·lular sense afectar a la capacitat citotòxica de les cèl·lules T CD8+. En conclusió, el RNA/FISH flow es determina com una tècnica vàlida per estudiar el reservori transcripcionalment actiu i avaluar compostos que actuïn com a agents reversors de latència, entre d'altres; i es postula l'àcid làuric com un nou LRA prometedor per ser testat en futurs assajos clínics.

[en] Current antiretroviral drugs maintain the viral load under the limit of detection; however, the interruption of the treatment results in an immediate rebound of the virus. The presence of latent cell reservoirs that persist in antiretroviral treated HIV-infected patients is considered the main obstacle to cure HIV. Several strategies are investigated as an additional treatment despite ART, aimed to reduce or eliminate the HIV reservoirs. The "shock and kill" strategy is based on the reactivation of the latent virus using drugs called latency reversal agents (LRAs), and the killing of those reactivated cells by the cytopathic effects or the action of the immune system. To achieve a successful cure, it is needed to reactivate all the competent provirus of infected cells, to induce a broader reactivation in all subpopulations where HIV is hidden without affecting other cell types avoiding off-target toxicities; and to promote cell death of reactivated cells and without inducing a global activation of T cells. Therefore, it is essential to perform an in-deep characterization of the viral reservoir and to find new latency reversal agents able to induce HIV reactivation without impairing the cytotoxic capacity of immune cells. In this PhD thesis, a new technique, so-called RNA/FISH flow, has been developed in the context of the HIV infection. This technique allowed the detection of RNA molecules by fluorescent in situ hybridization (FISH) combined with a signal amplification method and the immunophenotyping of transcriptionally active cells using fluorochrome-conjugated antibodies against intracellular and cell surface proteins. All data were collected and analysed using a flow cytometer. Using this novel technique, we identified memory effector CD4+T cells (TEM) as the main cell population supporting the HIV-RNA transcription both in viremic patients and in those with suppressed viral load. Furthermore, the study and characterization by the RNA/FISH flow method of the cell subpopulations that are susceptible to HIV reactivation by different latency-reversing agents (LRAs) determined that LRAs induced a heterogeneous response in the different subpopulations of CD4+T cells of HIV-infected patients, and identified Romidepsin and Ingenol as one of the most potent combinations at reactivating HIV. Finally, lauric acid, a medium-chain fatty acid, has been proposed and evaluated as a new LRA. The results obtained in vitro demonstrated the ability of this natural compound to induce the HIV transcription and production of viral proteins. Moreover, lauric acid significantly reprogramed the metabolic signatures of host cells preserving the cytotoxic capacity of CD8+ T cells at killing viral-reactivated cells from primary cell reservoirs. In conclusion, the RNA/FISH flow method is determined as a valid technique to study the transcriptionally active HIV reservoir and to evaluate compounds with HIV latency reversal capacity (LRA). Furthermore, lauric acid is postulated, for the first time, as a promising new LRA to be tested in future clinical trials.