[es] La proteína E3 ubiquitina-ligasa HAKAI fue el primer regulador post-traduccional descrito para la estabilidad de la E-cadherina. La E-cadherina es una proteína transmembrana con un papel destacado en funciones de especial relevancia como el mantenimiento de la morfología, polaridad y diferenciación celular, por lo que su pérdida en los contactos celulares conduce a un aumento en la capacidad migratoria e invasiva de las células. Tanto es así, que la expresión disminuida de E-cadherina es un marcador que se asocia a la transición de adenomas (tumores benignos) a carcinomas (tumores malignos). Mecanísticamente, HAKAI media la ubiquitinización de la E-cadherina que conduce a su internalización y posterior degradación y, en consecuencia, induce la invasión y la metástasis en algunos tipos de cáncer. HAKAI reconoce la E-cadherina fosforilada en tirosina y lo hace a través de un dominio de unión atípico, denominado HYB. El dominio HYB forma un homodímero coordinado en zinc, que ha sido propuesto como una diana terapéutica prometedora dado su papel en cáncer. El presente trabajo se planteó con el objetivo de diseñar una estrategia para la obtención del dominio HYB de HAKAI. Para ello, primero se describe el diseño experimental basado en el clonaje de la secuencia codificante para el dominio de interés, HAKAI (106aa-206aa), en un vector de expresión que incluye la proteína GST como etiqueta. Esta etiqueta nos permitirá posteriormente proceder a la purificación de la proteína de fusión por cromatografía de afinidad e, incluso, alcanzar un grado de purificación aún mayor si hace un uso combinado con cromatografía de exclusión molecular. En resumen, estos resultados permitirán explorar más a fondo el potencial del dominio HYB como diana terapéutica en el cáncer al proporcionar un modelo para probar la interacción con sustratos específicos de HAKAI.

[gl] A proteína E3 ubiquitina-ligasa HAKAI foi o primeiro regulador post-traducional descrito para a estabilidade da E-cadherina. A E-cadherina é una proteína transmembrana cun papel destacado en función de especial relevancia como o mantemento da morfoloxía, polaridade e diferenciación celular, polo que a súa perda nos contactos celulares conduce a un aumento da capacidade migratoria e invasiva das células. Tanto é así, que a expresión diminuída de E-cadherina é un marcador que se asocia coa transición de adenomas (tumores benignos) a carcinomas (tumores malignos). Mecanísticamente, HAKAI media a ubiquitinización da E-cadherina que conduce á súa internalización e posterior degradación e, en consecuencia, induce a invasión e a metástases nalgúns tipos de cancro. HAKAI recoñece a E-cadherina fosforilada en tirosina e faino a través dun dominio de unión atípico, denominado HYB. O dominio HYB forma un homodímero coordinado en zinc, que foi proposto como unha diana terapéutica prometedora dado o seu papel en cancro. O presente traballo planeouse có obxectivo de deseñar unha estratexia para a obtención do dominio HYB de HAKAI. Para elo, primeiro descríbese o deseño experimental baseado na clonaxe da secuencia codificante para o dominio de interese, HAKAI (106aa-206aa), nun vector de expresión que inclúe a proteína GST como etiqueta. Esta etiqueta permitirá posteriormente proceder á purificación da proteina de fusión por cromatografía de afinidade e, incluso, alcanzar un grado de purificación aínda maior se se fai un uso combinado con cromatografía de exclusión molecular. En resumo, estos resultados permitirán explorar máis a fondo o potencial do dominio HYB como diana terapéutica en cancro ao proporcionar un modelo para probar a interacción con sustratos específicos de HAKAI.