[en] The importance of hematological and blood biochemistry testing in avian veterinary medicine is reflected in the increasing numbers of studies leading to the identification of reference intervals of Strigiformes. To conduct a proper clinical interpretation, a set of characteristic health values is required and the influence of the environmental, physiological and methodological factors should be understood. The age is an influential factor especially in the first time of life when the most rapid growth rate or increase in body mass occurs, and studies in other avian groups have shown the age significantly influences producing detectable changes in hematological and blood biochemistry parameters. The objective of this study was to determine baseline data of hematologic and blood biochemistry parameters of five species of Iberian Strigiformes in different age classes. 341 nocturnal birds of preys were sampled from wildlife health centers, 92 Tawny Owls, 88 Little Owls, 96 Scops Owls, 17 Long-eared Owls and 48 Barn Owls. Only the reference interval of cholesterol, albumin and plasmatic osmolality did not show inter-specific variability. The others hematologic and biochemical parameters varied between the species. Between the age classes considered, a common trend was observed. Into the Strigiforme Order no differences were observed between juveniles and adults in any hematologic and blood biochemistry parameter. The packed cell volume, red blood cell count and hemoglobin of chicks were significantly lower than juveniles and adults, and alkaline phosphatase activity and phosphorus concentrations were significantly higher. In the Strigidae family, sodium and gamma globulins increased with age and total WBC and calcium decreased. Our results evidenced the importance of considering age classes for the establishment of hematologic and biochemical reference intervals in the Strigiformes, and provide evidence that data from chicks of this Order were identified as unique group compared to older cohorts; therefore two hematologic and blood biochemical reference intervals by age have been defined. Based on the staining affinity of heterophils and eosinophils in the step 2 of Diff-Quick stain, it has been proposed to test a novel modified semi-direct method for total leukocyte count. The purpose of this study was compare this semi-direct Romanowskybased quick stain method with the direct method of Natt and Herrick and to study the intra and inter-observer imprecision in samples from two species of birds with a different differential leukocyte counts. 20 samples of tawny owl (Strix aluco) and griffon vulture (Gyps fulvus) were used to calculate the WBC by the two methods. A good correlation was observed, r = 0.89; no constant and/or proportional error was found. The Bias was 2.06 (95 % CI -6.44 to 10.57). The intra-observer imprecision of a semi-direct Romanowsky-based quick stain method was higher (in tawny owl CV = 18.3% and griffon vulture CV = 14.3%) than the Natt and Herrick method, but the inter-observer imprecision was lower (in tawny owl CV = 24% and griffon vulture = 7%) than the Natt and Herrick method. In conclusion, the techniques did not produce equivalent results, but the semi-direct Romanowsky-based quick stain method allowed reliable counting of both heterophils and eosinophils in tawny owl and griffon vultures blood samples and showed high precision and therefore could be used as an alternative of other semi-direct counting methods when direct hemocytomer method is not available.

[es] La importancia de la hematología y la bioquímica sanguínea en medicina aviar se refleja en el incremento de estudios destinados a la obtención de los intervalos de referencia en muchas especies de aves en general y en las Estrigiformesen particular. Para interpretar correctamente sus valores se requiere conocer la influencia que los factores ambientales, fisiológicos y metodológicos ejercen sobre los mismos. La edad es un factor muy relevante, especialmente en el primer periodo de vidalas aves donde acontece el proceso de crecimiento. Estudios realizados sobre otras especies de aves han demostrado que la edad influye sobre los parámetros hematológicos y bioquímicos produciendo cambios significativos en sus valores. El objetivo de esta tesis doctoral fue determinar los intervalos de referencia hematológicos en cinco especies de Estrigiformes en diferentes clases de edad. Se muestrearon 339 animales; 92 cárabo comunes (Strix aluco), 88 mochuelos europeos (Athene noctua), 96 autillos europeos (Otus scops), 17 búhos chicos (Asio otus) y 48 lechuzas comunes (Tyto alba), procedentes de dos centros de recuperación de fauna salvaje localizados en la región Nord-Este de España. De todos los parámetros analizados, únicamente las concentraciones de colesterol y albúmina junto a la osmolaridad plasmática no mostraron variabilidad inter específica. El resto de parámetros variaron entre especies. Respecto a la comparación entre clases de edad, los resultados de nuestro estudio muestran que dentro delorden de las Estrigiformes se produce un incremento con la edad en el recuento total de eritrocitos, valor hematocrito y en las concentraciones de hemoglobina. Por el contrario, la concentración de fósforo y la actividad de la fosfatasa alcalina disminuyeron con la edad. Adicionalmente, dentro de la familia Strigidae se observó un incremento en las concentraciones de gamma globulina y sodio, y un descenso de la cifra total de leucocitos y de la concentración de calcio con la edad. Esta tesis doctoral demuestra la importancia de considerar la edad como un factor relevante en la obtención de los intervalos de referencia hematológicos y bioquímicos en las Estrigiformes, y evidencia que los pollos de estas especies son como una cohorte independiente. En base a ello se han propuesto dos intervalos de referencia. En la segunda parte de este trabajo de tesis doctoral quisimos valorar la modificación propuesta por Arock et al., 2013 de un método semi-directo (MSDTLC) de recuento total leucocitario basado en el colorante eosinofílico del segundo paso de la tinción de Diff-Quick y determinar su grado de relación con el método directo hemocitométrico de Natt y Herrick, que tradicionalmente se emplea en la sangre aviar en los laboratorios. Se muestrearon 20 animales,10 cárabos comunes (Strix aluco) y 10 buitres leonados (Gyps fulvus). Se observó una buena correlación entre métodos (r=0.89), ausencia de errores de tipo constante o proporcional y Bias= 2.06 (95 % CI -6.44 a 10.57). El método semi-directo obtuvo unaimprecisión intra observador mayor (CV=16.3%) y una menor imprecisión entre observadores (CV= 8.5%) que la observada en el método de Natt y Herrick. En conclusión, el método modificado de recuento leucocitario total, MSDTLC recientemente propuesto, permite un recuento fiable tanto de heterófilos como de eosinófilos en las muestras sanguíneas de cárabo común y de buitre leonado, muestra una alta precisión y por tanto puede ser empleado como alternativa de otros métodos semi-directos, cuando el método hemocitométrico directo no está disponible.