[en] Ticks and tick-borne diseases (TBDs) represent a burden for human and animal health worldwide. Currently, vaccines constitute the safest and most effective approach to control ticks and TBDs. Subolesin (SUB) has been identified as a vaccine antigen for the control of tick infestations and pathogen infection and transmission. The characterization of the molecular function of SUB and the identification of tick proteins interacting with SUB may provide the basis for the discovery of novel antigens and for the rational design of novel anti-tick vaccines. In the present study, we used the yeast two-hybrid system (Y2H) as an unbiased approach to identify tick SUB-interacting proteins in an Ixodes ricinus cDNA library, and studied the possible role of SUB as a chromatin remodeler through direct interaction with histones. The Y2H screening identified Importin-α as a potential SUB-interacting protein, which was confirmed in vitro in a protein pull-down assay. The sub gene expression levels in tick midgut and fat body were significantly higher in unfed than fed female ticks, however, the importin-α expression levels did not vary between unfed and fed ticks but tended to be higher in the ovary when compared to those in other organs. The effect of importin-α RNAi was characterized in I. ricinus under artificial feeding conditions. Both sub and importin-α gene knockdown was observed in all tick tissues and, while tick weight was significantly lower in sub RNAi-treated ticks than in controls, importin-α RNAi did not affect tick feeding or oviposition, suggesting that SUB is able to exert its function in the absence of Importin-α. Furthermore, SUB was shown to physically interact with histone 4, which was corroborated by protein pull-down and western blot analysis. These results confirm that by interacting with numerous tick proteins, SUB is a key cofactor of the tick interactome and regulome. Further studies are needed to elucidate the nature of the SUB-Importin-α interaction and the biological processes and functional implications that this interaction may have.

[es] Las garrapatas y las enfermedades transmitidas por garrapatas (TBD) representan una carga para la salud humana y animal en todo el mundo. Actualmente, las vacunas constituyen el enfoque más seguro y eficaz para el control de garrapatas y TBD. La subolesina (SUB) ha sido identificada como un antígeno vacunal para el control de las infestaciones por garrapatas y la infección y transmisión de patógenos. La caracterización de la función molecular de SUB y la identificación de proteínas de garrapatas que interactúan con SUB pueden servir de base para el descubrimiento de nuevos antígenos y para el diseño racional de nuevas vacunas contra las garrapatas. En el presente estudio, utilizamos el sistema de dos híbridos de levadura (Y2H) como un enfoque imparcial para identificar proteínas que interactúan con SUB de garrapatas en un Ixodes ricinus.biblioteca de cDNA, y estudió el posible papel de SUB como remodelador de la cromatina a través de la interacción directa con las histonas. El cribado Y2H identificó a Importin-α como una posible proteína que interactúa con SUB, lo que se confirmó in vitro en un ensayo desplegable de proteínas. Los niveles de expresión del subgen en el intestino medio y el cuerpo graso de la garrapata fueron significativamente más altos en las garrapatas hembras no alimentadas que en las alimentadas; sin embargo, los niveles de expresión de importina-α no variaron entre las garrapatas no alimentadas y las alimentadas, pero tendieron a ser más altos en el ovario en comparación con los de las garrapatas alimentadas . otros órganos. El efecto de importin-α RNAi se caracterizó en I. ricinus en condiciones de alimentación artificial. Tanto sub como importin-αSe observó una caída del gen en todos los tejidos de las garrapatas y, aunque el peso de la garrapata fue significativamente menor en las garrapatas tratadas con ARNi sub que en los controles, el ARNi de importina-α no afectó la alimentación ni la oviposición de las garrapatas, lo que sugiere que SUB es capaz de ejercer su función en ausencia de Importina-α. Además, se demostró que SUB interactúa físicamente con la histona 4, lo que se corroboró mediante el análisis de transferencia de proteínas y western blot. Estos resultados confirman que, al interactuar con numerosas proteínas de garrapata, SUB es un cofactor clave del interactoma y el reguloma de la garrapata. Se necesitan más estudios para dilucidar la naturaleza de la interacción SUB-Importin-α y los procesos biológicos y las implicaciones funcionales que puede tener esta interacción