[ca] L'atròfia muscular espinal (AME) és una malaltia neuromuscular causada per mutació o deleció en el gen SMN1, que codifica per la proteïna ubiqua SMN (de l'anglès survival motor neuron). L'AME es caracteritza per atròfia muscular i degeneració de les motoneurones (MN) de la medul·la espinal. Els esdeveniments moleculars que causen la vulnerabilitat específica de les MN amb nivells baixos de proteïna SMN encara no es coneixen. La via de l'NF-κB (nuclear factor-κB) ha destacat recentment ja que sembla jugar un paper cabdal en la supervivència de les MN i en les malalties neurodegeneratives. Els factors de transcripció NF-κB regulen gens relacionats amb molts processos cel·lulars. En aquest treball hem analitzat la capacitat dels membres de la via de l'NF-κB de regular la proteïna Smn i el seu possible rol en la patogènesi de l'AME. L'activació de la via de l'NF-κB està associada a la fosforilació de l'IKKα/IKKβ i la translocació nuclear del factor RelA/p50 (via canònica) o la fosforilació de l'homodímer d'IKKα i la translocació nuclear del factor RelB/p52 (via no canònica). La inhibició de diferents membres d'aquestes vies (tant la canònica com la no canònica) usant la metodologia de transducció amb lentivirus amb shRNA en cultius primaris de MN embrionàries aïllades de ratolí hem demostrat que una reducció selectiva del factor RelA provoca una reducció de la proteïna Smn, mentre que una reducció del factor RelB no té cap efecte en els nivells de l'Smn. En el nostre model cel·lular, la reducció dels nivells de l'IKKα o l'IKKβ provoca un efecte oposat en l'Smn. Mitjançant la tècnica de la RT-PCR hem observat que la transducció de les MN amb l'shIKKβ provoca un augment dels nivells de l'mRNA de Smn, mentre que la transducció amb l'shIKKα o l'shRelA no modifica l'expressió de Smn. El doble knockdown de l'IKKα i l'IKKβ a les MN mostra una reducció de l'Smn. El knockdown selectiu de l'IKKα o l'IKKβ presenta una reducció de la fosforilació del RelA, es coneix que aquesta fosforilació en permet l'alliberament del seu inhibidor al citosol i en facilita la translocació nuclear. També la proteïna CREB, un dels factors de transcripció coneguts de l'Smn, disminueix amb la transducció de les MN amb els shIKKα o amb l'IKKα i l'IKKβ alhora, així com amb l'shRelA. Ara bé, les motoneurones amb l'shIKKβ mostren una reducció de la fosforilació de RelA però un augment dels nivells de CREB. La transducció de les MN amb l'shCREB disminueix els nivells de l'Smn recolzant el paper regulador de CREB en l'Smn. Hem observat una reducció de l'IKKα, l'IKKβ i de la fosforilació de RelA amb la transducció de les MN amb l'shSmn i en les MN del model murí sever de l'AME. Els nostres resultats mostren l'habilitat de la via canònica de l'NF-κB de regular els nivells de l'Smn i que aquesta via també es troba alterada en les MN deficients en la proteïna Smn. En conjunt, aquestes observacions suggereixen que la via de l'NF-κB pot tenir un rol en la patogènesi i ser, a la vegada, una possible diana terapèutica per l'AME.

[es] La Atrofia Muscular Espinal (SMA) es un trastorno neuromuscular causado por la mutación o deleción del gen SMN1, el cual codifica para la proteína que se expresa ubicuamente SMN (del inglés Survival Motor Neuron). La AME se caracteriza por atrofia muscular y degeneración de las motoneuronas de la médula espinal (MN). Los eventos moleculares detrás de la vulnerabilidad selectiva de las MN con niveles bajos de la proteína SMN se desconocen. La vía del factor nuclear-kB (NF-kB) ha sido implicada recientemente en la supervivencia de las MNs, así como en trastornos neurodegenerativos. Los factores de transcripción NF-kB regulan genes relacionados con varios procesos celulares. En este trabajo hemos analizado la capacidad de los miembros de la vía del NF-κB de regular la proteína SMN y su posible rol en la patogénesis del AME. La activación de la vía del NF-κB está asociada a la fosforilación de IKKα / IKKβ y la translocación nuclear del factor RelA/ p50 (vía canónica) o la fosforilación del homodímero de IKKα y la translocación nuclear del factor RelB / p52 (vía no canónica). Hemos realizado la inhibición de diferentes miembros de estas vías (tanto la canónica como la no canónica) usando la metodología de shRNA, y la transducción mediante el uso de lentivirus, en cultivos primarios de MN embrionarias aisladas de ratón. Hemos demostrado que una reducción selectiva del factor RelA provoca una reducción de la proteína SMN, mientras que una reducción del factor RelB no tiene ningún efecto en los niveles de la SMN. En nuestro modelo celular, la reducción de las proteínas IKKα o IKKβ mostró efectos opuestos sobre la proteína Smn. Mediante la técnica de PCR, hemos observado que la transducción de las MN con el shIKKβ provoca un aumento de los niveles de mRNA de SMN, mientras que la transducción con el shIKKα o el shRelA no cambian los niveles de RNA de SMN. El doble knockdown de IKKα e IKKβ en las MN muestra una reducción de SMN. El knockdown selectivo de IKKα o IKKβ presenta una reducción de la fosforilación del RelA, esta fosforilación permite la liberación de su inhibidor en el citosol y facilita la translocación nuclear. La proteína CREB, uno de los factores de transcripción conocidos para SMN, disminuye con la transducción de las MN con shIKKα o con IKKα e IKKβ a la vez, así como con shRelA. Ahora bien, las motoneuronas transducidas con shIKKβ muestran una reducción de la fosforilación de RelA pero un aumento de los niveles de la proteína CREB. La transducción de las MN con el shCREB disminuyó los niveles de la proteína SMN apoyando el papel regulador de CREB sobre SMN.