[en] Losses to plant pathogens pose a major threat to food security, bringing about serious economic and societal burdens across the globe. with around 20-40% of crop production lost to plant diseases. In the face of climate change, rapidly evolving pathogens can easily overcome resistance provided by traditional pesticides. Consequently, a thorough understanding of the plant immune system is of paramount importance to breed disease-resistant crops. As a strategy to counteract pathogen invasion, infected plant cells elicit type of regulated cell death known as the hypersensitive response (HR). Tight regulation of HR is critical for confinement of the immune response exclusively to the pathogen ingress site. However, our understanding of how cell death zonation is achieved and how by-stander cells (neighbouring cells) respond to infection remains fragmentary. In the first chapter of my PhD thesis, I explored how HR is spatiotemporally regulated at the transcriptional level in the plant model Arabidopsis thaliana. These results allowed us to identify bona fide transcriptional indicators of HR. Moreover, we provide for the community a fluorescent reporter transgenic line that displays a strong spatiotemporally resolved signal specifically in cells destined to undergo HR. Use of this reporter line for specific and-or high-throughput techniques involving single-cell "omics" will enable further dissection of the spatial aspect of plant immunity. Over the last decade, accumulating evidence suggest that plant proteases play crucial roles during HR. In the second chapter of my PhD, I attempt to unravel the role of Arabidopsis metacaspase 1 (AtMC1), a type of cysteine protease, in plant immunity. Although originally described as a positive regulator of HR in young plants, adult plants lacking AtMC1 exhibit constitutive activation of immune responses under basal conditions, thus acting as a negative regulator of plant immunity. We report that mutating the catalytic cysteine of the protease causes severe autoimmunity. Through a combination of genetic, biochemical and cell biology experiments we show that catalytically inactive AtMC1 acts as a sticky docking site for immune-related components including immune receptors, possibly preventing their timely turnover. Based on this data and previous literature, we infer that AtMC1 might directly or indirectly control the homeostasis of immune receptors. Therefore, interfering with the wild-type function of the protease has negative impacts on plant growth. Finally, I actively participated in a second line of research in which we try to understand the function of AtMC1 upon proteotoxic stress. AtMC1 is dynamically recruited to highly conserved cytoplasmic condensates, known as stress granules, regulating senescence (Chapter 3). To biochemically characterize this function, we removed certain domains predicted to be high aggregation-prone and successfully expressed and isolated the protease. This major step forward allowed us to prove that AtMC1 exhibits a strong and evolutionary conserved capacity to clear protein aggregates, including those formed by pathological protein forms that cause a diversity of life-threatening pathologies in humans. The implementation of recombinant proteins with high aggregate-clearance activity may open new avenues for therapeutic intervention in diseases caused by misfolded proteins. In the last five years, the plant science community has particularly witnessed a quantum leap in our understanding of the plant immune system thanks to mechanistic studies on plant immune receptors and signalling pathways regulating and leading to HR. Leveraging this knowledge to engineer disease resistance in staples and economically important crops will be a priority in the years to come. I hope that the works herein and conclusions drawn from this thesis can contribute to future endeavours to achieve such ambitious goals.

[es] Los patógenos vegetales representan una gran amenaza para la seguridad alimentaria, causando alrededor del 20-40% de pérdidas en la producción de cultivos. En un contexto de cambio climático, los patógenos que evolucionan rápidamente pueden superar fácilmente la resistencia proporcionada por los pesticidas tradicionales. En consecuencia, comprender exhaustivamente el sistema inmune de las plantas es de suma importancia para generar cultivos resistentes. Como estrategia para contrarrestar la invasión de patógenos, las células vegetales infectadas desencadenan un tipo de muerte celular regulada conocida como la respuesta hipersensible (HR). La regulación de la HR es esencial para confinar la respuesta inmune exclusivamente al lugar de ingreso del patógeno. Sin embargo, nuestra comprensión de cómo se logra la zonificación de la muerte celular y cómo las células vecinas responden a la infección es fragmentaria. En el primer capítulo de mi tesis, exploro cómo la HR se regula espacio-temporalmente a nivel transcripcional en la planta modelo Arabidopsis thaliana. Estos resultados nos permitieron identificar indicadores transcripcionales genuinos de la HR. Además, proporcionamos a la comunidad una línea transgénica reportera fluorescente que muestra un fuerte señal espacio-temporal en células destinadas a sufrir HR. El uso de esta línea reportera para técnicas específicas que involucren estudios "ómicos" de células individuales permitirá una mayor disección del aspecto espacial de la inmunidad vegetal. En la última década, evidencias crecientes sugieren que las proteasas desempeñan papeles cruciales durante la HR. En el segundo capítulo de mi tesis, intento desentrañar el papel de la metacaspasa 1 (AtMC1) de Arabidopsis, un tipo de cisteína proteasa, en la inmunidad vegetal. Aunque originalmente se describió como un regulador positivo de la HR en plantas jóvenes, plantas adultas que carecen de AtMC1 exhiben una activación constitutiva de la inmunidad en condiciones basales, actuando por consiguiente como un regulador negativo de la inmunidad. Mutaciones en el sito catalítico de la proteasa desencadenan una autoinmunidad grave. A través de una combinación de experimentos genéticos, bioquímicos y de biología celular, mostramos que la versión cataliticamente inactiva de AtMC1 actúa como un sitio de acoplamiento pegajoso para componentes relacionados con la inmunidad, incluidos receptores inmunes, posiblemente evitando su oportuna degradación. En base a estos datos y a la literatura previa, inferimos que AtMC1 podría controlar directa o indirectamente la homeostasis de los receptores inmunes. Por lo tanto, interferir con la función de la proteasa wild-type tiene impactos negativos en el crecimiento de la planta. Finalmente, participé en una segunda línea de investigación en la que intentamos entender la función de AtMC1 ante el estrés proteotóxico. AtMC1 es dinámicamente reclutada a condensados citoplásmicos altamente conservados, conocidos como granulos de estrés, regulando la senescencia (Capítulo 3). Para caracterizar bioquímicamente esta función, eliminamos ciertos dominios previstos de ser altamente propensos a la agregación y logramos expresar e aislar la proteasa de forma recombinante. Esto nos permitió demostrar que AtMC1 tiene una gran capacidad, evolutivamente conservada, de limpiar agregados de proteínas, incluidos los formados por formas de proteínas patológicas que causan enfermedades mortales en los humanos. La implementación de proteínas recombinantes con alta actividad de limpieza de agregados puede abrir nuevas vías para la intervención terapéutica en enfermedades causadas por proteínas mal plegadas. En los últimos cinco años, la comunidad científica de plantas ha presenciado un gran avance en nuestra comprensión del sistema inmune vegetal gracias a estudios mecanísticos en receptores inmunes y vías de señalización que regulan y conducen a la HR. Aprovechar este conocimiento para lograr resistencia a enfermedades en cultivos básicos y económicamente importantes será una prioridad en los próximos años. Espero que los trabajos presentados en esta tesis puedan contribuir a futuros esfuerzos para lograr esos ambiciosos objetivos.