[en] Nowadays, infertility affects 15% of couples of childbearing age. Its origin is difficult to determine, however, it is estimated that in 50% of cases the male factor is involved. Nevertheless, the only diagnostic tool to evaluate the fertility men status accepted by the World Health Organization (WHO) is basic semen analysis, which assesses exclusively standard semen parameters, such as motility, quantity and morphology. Similarly, the sperm selection for treatments is not based on molecular characteristics, but only on their mobility and morphology. In order to improve these aspects, scientific world is investing great efforts in finding molecular markers in the spermatozoa that could be used as a diagnostic and at the same time as a tool for sperm selection prior to an assisted reproduction treatment. In this line, the present project aims are to evaluate the potential use of 3 molecules as diagnostic or prognostic biomarkers of assisted reproduction techniques and their possible application in the enrichment of a sperm population in cells with the molecules of interest, using the immunomagnetic cell separation technique, MACS (magnetic activated cell sorting). The three candidate molecules -PLA2G2A, CD84, UBQ- have been selected from information obtained in previous studies of the group and from the available literature, due to their relationship with reproductive results, location in the spermatozoon (membrane) and function. In order to evaluate the potential use of candidates as markers of sperm quality, the relationships between their presences (through flow cytometry), in prepared sperm samples used for ART, and three different parameters were evaluated. These parameters were: the basic parameters of semen, the quality of the embryos generated after the ICSI treatments and the reproductive success of the treatments (measured as yes / no pregnancy). From these analyzes, it is concluded with respect to CD84 that it is not a good candidate to be a marker of seminal quality due to its limited presence in sperm samples and the absence of biologically important correlations with the parameters analyzed. With respect to PLA2G2A, inverse relationships have been found between its presence and prepared sperm samples quality, direct associations have also been described between some variables of good embryo development and the presence of the molecule in sperm, these relationships were very weak. According to UBQ it has been verified that there is an association between its presence in the spermatozoa and the basic parameters of seminal quality and also because of the associations found with the embryo quality it seems a good candidate to predict good embryo quality in treatments with own oocytes . Regarding the assessment of the use of these candidates as key molecule for sperm selection using the MACS technique, the correct separation of the two sperm populations (with and without the key molecule) has been verified by RT-PCR and it is concluded that this technique is not efficient. Therefore it is necessary to adjust the protocols, using for example other reagents, to be able to apply this technique in the enrichment of physiologically competent spermatozoa in order to improve the ART results.

[es] La infertilidad afecta hoy en día al 15% de las parejas en edad fértil. Su origen es difícil de determinar, no obstante, se estima que en un 50% el factor masculino está involucrado. Sin embargo, en la actualidad, los medios de los que se dispone en la clínica para evaluar el potencial fértil de un varón se limitan a una valoración cuantitativa y morfológica, en cierta medida subjetiva, de los espermatozoides. Del mismo modo, la selección de espermatozoides para los tratamientos, tampoco está basada en características moleculares, sino únicamente en su movilidad y morfología. Con tal de mejorar estos aspectos, se están buscando marcadores moleculares en el espermatozoide que puedan ser utilizados como diagnóstico y a la vez como herramienta para la selección espermática previa a un tratamiento de reproducción asistida. En esta línea, el presente proyecto tiene como objetivo evaluar el potencial uso de 3 moléculas como biomarcadores diagnósticos o pronósticos de las técnicas de reproducción asistida y su posible aplicación en el enriquecimiento de una población espermática en células con las moléculas de interés, utilizando la técnica de separación celular inmunomagnética MACS ("magnetic activated cell sorting"). Las tres moléculas candidatas -PLA2G2A, CD84, UBQ- han sido seleccionadas a partir de información obtenida en estudios previos del grupo y de la bibliografía disponible, por su relación con los resultados reproductivos, localización en el espermatozoide (membrana) y función. Con tal de evaluar el potencial uso de las candidatas como marcadores de calidad espermática se ha evaluado la relación entre su presencia (mediante citometría de flujo), en muestras capacitadas de espermatozoides utilizadas para TRA, con: los parámetros básicos del semen, la calidad de los embriones generados tras los tratamientos de ICSI y el éxito reproductivo de los tratamientos (medido como gestación si/no). De estos análisis se concluye con respecto al CD84 que no es un buen candidato a ser marcador de calidad seminal por su limitada presencia en las muestras espermáticas y la ausencia de correlaciones biológicamente importantes con los parámetros analizados. Con respecto a PLA2G2A, se han encontrado relaciones inversas entre su presencia y los parámetros de calidad seminal post capacitación, también se han descrito asociaciones directas entre algunas variables de buen desarrollo embrionario y la presencia de la molécula en espermatozoides, siendo estas relaciones muy poco robustas. En el caso de la UBQ se ha verificado que existe asociación entre su presencia en los espermatozoides y los parámetros básicos de calidad seminal y además por las asociaciones encontradas con la calidad embrionaria parece un buen candidato a predictor de buena calidad embrionaria en tratamientos con ovocitos propios. En cuanto a la valoración del uso de estas moléculas como base de la separación espermática con la técnica de MACS, se ha verificado la correcta separación de las dos poblaciones de espermatozoides (con y sin la molécula) mediante RT-PCR y se concluye que esta técnica no resulta eficiente, siendo necesaria la puesta a punto de los protocolos, con otros reactivos, para poder utilizar la técnica en el enriquecimiento de espermatozoides fisiológicamente competentes.