[en] Traditionally in water quality analysis laboratories it is used classic microbiological techniques following the Reial decrets depending on the type of water. To detect pathogenic microorganisms stand out the seed in specifics culture media for each pathogen. However, the time of incubation of the samples and the subsequent confirmations that must be carried out in some occasions makes it a long process. In the case of water for consumption, the time it takes to obtain the results depends on the microorganism to be detected, the method used, the type of sample and the intended use. In no case exceeds 24 hours. In this TFG we give a possible alternative of the methods of classic microbiology, the application of molecular techniques for a rapid detection of the bacteria Escherichia coli in waters. Specifically, the application of the polymerase chain reaction (PCR) using specific primers to amplify a specific sequence of DNA in this specie. In order to carry the project out, different samples (MilliQ inoculation with different concentrations of E. coli and a residual water sample) were used. DNA extractions were made and the PCRs were then carried out with two pairs of primers. One amplifies the V3-V4 region of 16S rRNA gene, a region that contains the vast majority of microorganisms, and the other amplifies the ybbW gene that is specific to E. coli. In order to compare the results, the analysis was done using classic microbiology techniques: filtration and seed in culture media, as indicated by ISO 9308-1. Those waters whose microbial load was very low, there was no detection with the specific primers of E. Coli, on the other hand, in the environmental sample (residual water) there was a detection in the two pairs of primers. Based on strains of Escherichia coli, Enterococcus faecium and Pseudomonas aeruginosa, the PCR technique was performed from a colony (colony-PCR). With primers that amplified the 16S region, there was an amplification in all colonies, on the other hand, with the primers specific of E. coli there was only an amplification of colonies of E. coli.

[es] Tradicionalmente en los laboratorios de análisis de calidad del agua se utilizan técnicas de microbiología clásica siguiendo los Reales decretos dependiendo del tipo de agua. Para la detección de microrganismos patógenos destaca la siembra en medios de cultivo específicos para cada uno de ellos. No obstante, el tiempo de incubación de las muestras y las posteriores confirmaciones que se deben de llevar a cabo en algunas ocasiones hace que sea un proceso largo. En el caso de las aguas para el consumo este tiempo que se tarda en poder obtener los resultados depende de los microrganismos a detectar, el método utilizado, el tipo de muestra y el uso previsto, pero en cualquier caso supera las 24 horas. En este trabajo de final de grado se presenta como posible alternativa a los métodos de microbiología clásica, la aplicación de técnicas moleculares para una rápida detección de la bacteria Eshcerichia coli en aguas. En concreto, la aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizando cebadores específicos para amplificar una secuencia específica del ADN en esta especie. Con tal de llevarlo a cabo, se utilizaron diferentes muestras (inoculación en agua MilliQ con diferentes concentraciones de E. coli y agua residual) y se hicieron extracciones del ADN y posteriormente se llevaron a cabo las PCR con dos pares de cebadores. Los que amplifican la región V3-V4 del gen 16S rRNA, región que contienen la gran mayoría de microrganismo, i los que amplifican el gen ybbW que es específica de E. coli. Con tal de comparar los resultados se hicieron los análisis mediante técnicas de microbiología clásica: filtración y siembra en placa tal como marca la ISO 9308-1. En las aguas donde la carga microbiana es muy baja no hubo detección con los cebadores específicos de E. coli, sin embargo, en la muestra ambiental (agua residual) hubo detección con los dos pares de cebadores. A partir de cepas de Escherichia coli, Enterococcus faecium y Pseudomonas aeruginosa se realizó la técnica de la PCR a partir de una colonia (colony-PCR). Con los cebadores que amplifican la región 16S hubo amplificación en todas las colonias, en cambio, con los cebadores específicos de E. coli solo hubo amplificación en las colonias de E. coli.