[en] Malformations of cortical development (MCDs) comprise a set of malformative diseases of the cortical brain development, that can result into refractory epilepsy seizures in the childhood. Focal cortical dysplasia (FCD) is recognized as one of the most epileptogenic MCD and is classified in three subtypes depending of the type of dyslamination of the cortex (radial or tangential) and the presence or absence of cytologic alterations (dysmorphic neurons and/or ballon cells). Many proteins related to neuronal migration and neurogenesis such as Doublecortin (DCX) have been studied in these pathologies. DCX is a microtubule associated protein, which has been used widely to label radially and tangentially migrating neurons in development and immature neurons in the postnatal neurogenic niches in rodents and humans. In epilepsy patients, the presence of DCX- positive cells has been reported in FCD and in temporal lobe epilepsy. However, due to the lack of optimal fixation in human samples, the ultrastructure of these cells and the environment surrounding them remains elusive. The objective of our study is to analyze and describe the fine structure, specific contacts and surrounding environment of neuronal and glial cells in a group of eleven pediatric patients who presented FCD and tuberous sclerosis (TE) with partial complex epilepsy and underwent through surgery by craniotomy and lesion scission. Samples were fixed immediately after surgery and processed for histological analysis, immunohistochemistry, immunogold labeling and transmission electron microscopy (TEM). Immunohistochemistry was performed for neuronal lineage markers: DCX, NeuN, Parvalbumin (PV), synaptophysin and neurofilament (SMI32); and glial lineage markers: GFAP, Vimentin, Olig2, Iba1. Immunogold labelling was performed for DCX, GFAP, Olig2 and Iba1 for further TEM analysis. Moreover we counted synaptic contacts in dysplastic and control samples, in order to find differences between them. Our results suggest that the ultrastructure of DCX cells is quite heterogeneous and involves immature, mature and dysmorphic neurons, as well as balloon cells and astrocytes. Thus, exploring all these features through TEM can shed light on how the abnormal expression of DCX in certain cell types can be related to epilepsy.

[es] Las malformaciones del desarrollo cortical (MDC) comprenden un amplio grupo de enfermedades malformativas del desarrollo de la corteza cerebral, que pueden conducir a crisis epilépticas, habitualmente refractarias a tratamiento médico, en la infancia o la juventud. La displasia cortical focal (DCF) es reconocida como una de las MDC más epileptogénica y se clasifica en tres subtipos dependiendo del tipo de diseminación cortical (radial o tangencial) y la presencia o ausencia de alteraciones citológicas (neuronas dismórficas y/o células en balón). Muchas proteínas relacionadas con la migración neuronal y neurogénesis, como la Doblecortina (DCX) se han estudiado en este tipo de patologías. La DCX es una proteína asociada a microtúbulos ampliamente utilizada para marcar neuronas migratorias (radiales y tangenciales) durante el desarrollo cortical, así como neuronas inmaduras en nichos neurogénicos postnatales en roedores y humanos. En pacientes epilépticos, se ha descrito la presencia de células DCX positivas en casos de DCF y de epilepsia del lóbulo temporal. Sin embargo, debido a la dificultad de una fijación óptima de las muestras humanas, la ultraestructura de estas células y el medio que les rodea sigue siendo una incógnita. El objetivo de nuestro estudio es analizar y describir la estructura, contactos específicos y medio que envuelve a células neuronales y gliales en un grupo de once pacientes pediátricos diagnosticados de DCF y esclerosis tuberosa (ET) con epilepsia parcial compleja e intervenidos mediante craneotomía y exéresis de la lesión. Las muestras fueron fijadas inmediatamente después de la cirugía y se procesaron para estudios histológicos, de inmunohistoquímica, marcaje mediante inmuno-oro y examen al microscopio electrónico de transmisión (MET). En la IHQ se utilizaron marcadores de estirpe neuronal: DCX, NeuN, Parvalbúmina (PV), sinaptopfisina y neurofilamentos (SMI32); y marcadores de estirpe glial: GFAP, Vimentina, Olig2, Iba1. Las técnicas de inmuno-oro se realizaron con los marcadores DCX, GFAP, Olig2 e Iba1 para un análisis más exhaustivo al MET. Además, realizamos un recuento de conexiones sinápticas en las muestras de displasia y control, con el objetivo de encontrar diferencias entre ellos. Nuestros resultados sugieren que la ultraestructura de las células DCX positivas es bastante heterogénea y engloba a neuronas inmaduras, maduras y dismórficas, así como también células en balón y algunos astrocitos. De este modo, mediante el estudio de todos estos hallazgos bajo visión al MET podemos esclarecer cómo la expresión anómala de DCX por ciertos tipos celulares puede estar relacionada con la epilepsia.