[en] Biological control has emerged as the most promising alternative to chemicals in controlling postharvest diseases of fruit and vegetables. The development of resistance to many fungicides by major postharvest pathogens and concern for public safety have been the main driving force in the search for new and safer methods. The research effort expended in this area has increased dramatically and this is beginning to be reflected in the number of biocontrol agents available in the marketplace or in study. Among them stands out the strain CPA-1 of the yeast Candida sake, which was isolated from the apple surface in the Pathology laboratory of the UdL-IRTA Centre. This strain has demonstrated to have antagonistic activity against the major postharvest pathogens of pome fruits. C. sake has been patented in Spain and in five other countries. However, for commercial application, this antagonist should be formulated in order to present the product in a usable form, with high viability, stability, safety, ease of distribution and application, and with retained biocontrol activity similar to that of fresh cells. The objectives of the present work were to carry out fundamental and applied studies to enable effective formulations of C. sake. Thus, dehydration of this biocontrol agent using freeze-drying was studied. The effect of freezing method and protectants was evaluated (Chapter 3), and the effect of rehydration media on viability examined (Chapter 4). Subsequently, the efficacy of such treatments against Pï¿½nicillium expansion on Golden Delicious apples, and stability of the freeze-dried C. sake cells was also investigated (Chapter 4). Because physiological manipulation of growth conditions can significantly affect quality of cells and ecological competence studies were carried out on the effect of different water activity (aw) treatments in molassesbased media on changes in internal water potentials (Chapter 5), and on growth parameters, accumulation of endogenous reserves and water stress tolerance identified (Chapter 6). Finally, based on these studies the potential for preserving C. sake cells in isotonic solutions to conserve viability and shelf-life were evaluated for the first time (Chapter 7). C. sake cells were very sensitive to the freeze-drying process. Powdered skimmed milk (SM) used at 10% concentration was shown to give good protection to cells of C. sake against freeze-drying, providing the freeze-dried product with a porous structure that made rehydration easier. The combination of 10% SM + 10% lactose was the best combination tested, with 40% of cells remaining viable after freeze-drying. The rehydration medium was shown to be a critical factor influencing the recovery of C. sake cells. Using 10% SM as a rehydration medium instead of potassium phosphate, cell viability increased from 40 to 85%. Freeze-dried C. sake cells reduced the incidence of decay caused by P. expansum in Golden Delicious apples. However, its efficacy was lower than that obtained with fresh cells. Stability of freeze-dried cells decreased during their preservation, and their viability was reduced to 10% after 2 months storage at 4ï¿½C. Water potential of C. sake cells grown in molasses-based media with modified aw decreased with decreasing aw of medium. Moreover, modification of the aï¿½ of the culture medium changed the concentration of endogenous sugars and polyols without affecting significantly its growth when the aw of the medium was 0.98. Cells grown for 48 h in the unmodified molasses-based medium, and in those modified to 0.98 aw with the addition of NaCl or glycerol showed high water stress resistance. The main solutes accumulated in C. sake cells in response to lowered aw of molasses media were glycerol and arabitol. Culture and preservation medium and temperature greatly influenced the viability of C. sake cells in isotonic liquid solutions. Unmodified molasses medium and those modified to 0.98 aw with the addition of glycerol or sorbitol were shown to be the best culture medium for cells of C. sake. This study enabled an isotonic liquid formulation of C. sake cells with retained viability and efficacy against P. expansum on Golden Delicious apples after 7 months of storage at 4ï¿½C to be achieved. This formulation was prepared by growing the cells in sorbitol-modified molasses medium (aw 0.98) and preserving them in an isotonic trehalose solution.

[es] El desarrollo de resistencias a los fungicidas por parte de muchos patógenos, conjuntamente con un creciente interés social sobre los riesgos medioambientales y para la salud que tienen estos pesticidas, han generado un gran interés en el desarrollo de métodos alternativos a los productos químicos de síntesis. El control biológico de las enfermedades de postcosecha en fruta de pepita se ha mostrado como una de las alternativas más prometedoras al control químico. El esfuerzo que la investigación dedica a esta área ha incrementado de manera espectacular, y eso se está empezando a reflejar en el número de agentes de biocontrol disponibles en el mercado o en fase de estudio. Entre ellos destaca la cepa CPA-1 de la levadura Candida sake aislada de la superfície de manzanas en el laboratorio de Patología del Centro UdL-IRTA. Esta cepa ha demostrado tener gran actividad antagónica contra los principales patógenos de fruta de pepita. Hasta el momento se ha patentado en España y cinco países más. Sin embargo, para su aplicación comercial, es necesario formular este agente de biocontrol, con la finalidad de presentar el producto, con una alta viabilidad y estabilidad a lo largo del tiempo y que facilite su distribución y aplicación con las técnicas ya existentes. Además, esta formulación ha de tener una efectividad comparable a la de las células frescas. El objetivo de la presente tesis ha sido el estudio de las bases para la formulación de este agente de biocontrol. En primer lugar se estudió la posibilidad de deshidratar este agente mediante liofilización, evaluando los diferentes factores que puedan contribuir a incrementar su viabilidad, como el método de congelación y la adición de sustancias protectoras (Capítulo 3), y el medio utilizado para la rehidratación de las células liofilizadas (Capítulo 4). Se evaluó la efectividad de las células liofilizadas contra Pínicillium expansion en manzanas "Golden Delicious" y su estabilidad en condiciones de almacenamiento (Capítulo 4). Como la manipulación fisiológica de las condiciones de crecimiento pueden influir significativamente en la calidad de las células y en su competencia ecológica, se llevaron a cabo estudios para evaluar el efecto que tiene la modificación de la actividad de agua (aw) de un medio de cultivo a base de melaza de azúcar de caña en el potencial hídrico de las células (Capítulo 5), en el crecimiento de C. sakï¿½, en la acumulación de reservas endígenas y en la resistencia al estrés hídrico (Capítulo 6). Finalmente, basándonos en estos resultados, se estudió por primera vez la posibilidad de conservar las células de C. sakï¿½ en soluciones líquidas isotónicas (Capítulo 7). Las células de C. sakï¿½ se mostraron muy sensibles al proceso de liofilización. La leche en polvo desnatada utilizada al 10% se presentó como un buen protector. Además el producto obtenido fue poroso y fácilmente rehidratable. Con la utilización de una solución protectora, que contenía el 10% de leche en polvo y el 10% de lactosa, se consiguió aumentar la viabilidad de las células hasta el 40%. El medio de rehidratación también se presentó como un factor importante para la reactivación de la levadura tras su Hofllización. Así, la viabilidad de las células de C. sake utilizando el 10% de leche en polvo como medio de rehidratación en vez de tampón fosfato, aumentódel 40 al 85%. Las células liofilizadas redujeron el porcentaje de podredumbre causado por P. expansum en manzanas "Golden Delicious". Sin embargo, su efectividad fue menor que la de las células frescas. La viabilidad del producto liofllizado disminuyó hasta el 10% después de dos meses de conservación a 4C. El potencial hídrico de las células crecidas en un medio a base de melaza con aw modificada y sin modificar, disminuyó al disminuir la aw del medio de cultivo. Además, esta modificación de la aw del medio de cultivo, provocó un cambio en las reservas endógenas de las células de C. sake sin afectar significativamente a su crecimiento cuando la aw del medio de cultivo fue 0,98. Las células que crecieron durante 48 h en el medio de melaza no modificado y en los modificados a aw 0,98 con glicerol o NaCl presentaron una gran resistencia al estrés hídrico. Los principales solutos acumulados en las células de C. sake cuando la aw del medio de cultivo se redujo fueron el glicerol y el arabitol. El medio de cultivo, el soluto utilizado para disminuir el potencial hídrico en las soluciones líquidas y la temperatura de conservación, influyeron en la viabilidad de C. sake conservada en medio líquido, siendo los mejores el medio de melaza no modificado y los modificados a aw 0,98 con glicerol o sorbito!. Se consiguió una formulación isotónica que, después de 7 meses de conservación a 4C, mantuvo su viabilidad y efectividad contra P. expansum en manzanas "Golden Delicious". Esta formulación se preparó haciendo crecer las células en el medio de melaza modificado con sorbitol (aw 0,98) y conservándolas con una solución isotónica de trealosa.