[en] The studies included in the present Doctoral Thesis are focused to increase the knowledge about epididymal sperm cryopreservation in domestic cat. The effect of different anaesthetic agents commonly used in cats (pentobarbital, ketamine HCl or isoflurane) on the fresh and frozen-thawed epididymal sperm were investigated. Fresh epididymal sperm was influenced by the drugs used, noting that motility features, i.e. vigor (p!0.05) and progressive motility (p!0.05), were higher for the inhalation anaesthetic while the others did not showed statistical differences. In frozen-thawed sperm samples, cats treated with barbiturics showed lower values for acrosome status (p!0.05) and integrity and functionality of membrane (p!0.05 and p!0.01, respectively) than in the others groups. Results suggested that drugs used for castration in cats could affect the sperm quality and this should be considered when implementing sperm cryopreservation in feline. Other study was conducted to evaluate the effect of testes and epididymides cool storage at 4°C during 12 h on cat spermatozoa cryopreservation capacity. Two groups were established: group A, immediately processed and frozen in 0.25-ml straws; group B, testes and epididymides were conserved for 12 h before freezing. Motility (subjective), morphology (Diff-Quick), acrosome status (PSA-FITC), sperm viability (SYBR-14) and DNA integrity (acridine orange) were assessed at the 3 times. Although values were lower in group B, initial and h0 values did not showed significant differences between groups in all parameters evaluated. However, significant differences (p<0.05) were observed at h6 post-thawing values between groups for total sperm motility (29.0±2.4% vs 13.0±4.6%, A vs B, respectively) and normal morphology (47.6±0.8% vs 40.0±2.1%, A vs B, respectively). In conclusion, these results support that tom genital storage during 12 h at 4°C prior cryopreservation did not affected the immediately post thawing sperm quality. The efficacy of various commercial and non-commercial freezing extenders for the cryopreservation of epididymal cat spermatozoa was evaluated thorough tw...

[es] Los estudios que se abordan en esta tesis van encaminados a aportar mejoras en el ámbito de la criopreservación del esperma de epidídimo de gato doméstico. Se estudió la influencia del anestésico empleado durante la orquiectomía. Para ello, diversas agentes o sustancias anestésicas como pentobarbital, ketamina e isofluorano fueron comparadas. Los resultados demostraron que el isofluorano es el anestésico de elección ya que mostró los mejores resultados de motilidad a la descongelación (p<0.05), mientras que tras el uso de pentobarbital se apreciaba un gran detrimento en la integridad del acrosoma (p<0.05), así como en la viabilidad celular y funcionalidad de membrana (p<0.05 y p<0.01 respectivamente). En otro experimento se comparó la calidad espermática de muestras de epidídimo procesadas inmediatamente tras la orquiectomía frente a muestras procesadas tras 12 horas de conservación bajo refrigeración. Aunque los valores fueron menores en el grupo de muestras refrigeradas, tanto en la evaluación inicial como a la descongelación, no hubo diferencias significativas entre los dos grupos. Sin embargo, tras 6 horas post-descongelación, se observaron diferencias en cuanto a la motilidad (p<0.05) y en la morfología (p<005), siendo menores en el grupo de muestras refrigeradas. Por tanto, se puede concluir que la congelabilidad de esperma felino mantenido 12h bajo condiciones de refrigeración se ve ligeramente afectado, reduciendo su longevidad de movimiento. Se hipotetizó con la posibilidad de que diluyentes comerciales destinados a bovino y equino pudieran ser de utilidad en la congelación de esperma epididimario felino y, de esta forma, se comparan Triladyl®, Gent® y Andromed®. Triladyl® mostró una mejor eficacia, ya que mantuvo una mayor calidad del esperma tras la descongelación, dando mejores resultados en motilidad e integridad de membrana (p<0.001). Tras esto, se comparó el diluyente comercial que mejores resultados había mostrado en gato, Triladyl®, con un diluyente preparado en nuestro laboratorio, a base de Trisyema de huevo, taurina, glicerol y pasta Equex. De este diluyente se elaboraron dos versiones: una con fructosa y otra con fructosa. Los resultados no mostraron diferencias significativas entre los diluyentes, aunque el preparado en el laboratorio conteniendo fructosa mostró mejores resultados tras 6 horas de incubación postdescongelación. De este trabajo se dedujo que el diluyente comercial Triladyl® es un buena opción para congelar esperma de epidídimo de gato. A la hora de evaluar la morfología espermática, comparamos dos tinciones: Diff-Quick® y Eosinanigrosina, esta última usada también para evaluar la integridad de la membrana espermática. Los resultados fueron que con eosina-nigrosina se podían detectar un mayor porcentaje de defectos morfológicos en la pieza media y la cola que con Diff-Quick® (p<0.05), mientras que Diff-Quick® reveló un mayor porcentaje de defectos en la cabeza espermática (p<0.05). En cuanto al porcentaje de espermatozoides con morfología normal, Diff-Quick® arrojó un mayor porcentaje (53.4 ±1.4) que eosina-nigrosina (46.4 ±1.7) (p=0.002). Otra de nuestras investigaciones se centró en el estudio de la variación de la calidad espermática del gato a lo largo del año. De esta forma, agrupamos a los animales que se orquiectomizaron durante los meses de fotoperíodo ascendente (21 de Diciembre- 20 de junio) y durante el fotoperíodo descendente (21 de junio-20 de diciembre)...