[en] Artemia nauplii are widely used as live prey in marine fish hatcheries worldwide, due to their availability and digestibility, but their nutritional value is not adecuate for marine fish larvae, molluscs and marine crustaceans since they are largely deficiente in Essential Fatty Acids (EFA) for these organisms. In order to overcome the problem, Artemia nauplii are enriched through incubations in seawater containing dispersed EFA-rich products that are passively incorporate by the nauplii. Despite the many advances that have been made in this field, enrichment of Artemia nauplii in EFA remains an inefficient process. While arachidonic acid (20: 4n-6, ARA) and eicosapentaenoic acid (20: 5n-3, EPA) enrichment have been easily achieved, docosahexaenoic acid (22: 6n-3, DHA) enrichment remains difficult due to specific factors limiting their incorporation into Artemia nauplii, as autoxidation mechanisms of highly unsaturated fatty acids (HUFA) emulsion, which may be particularly severe with DHA compared to other HUFA due to long chain and high degree of unsaturation, and the existence of retroconversion processes. To overcome the adverse effects of enrichment process is necessary to develop new strategies to increase the DHA content of the brine shrimp Artemia. To address these problems during enrichment, the efficacy of a new lipid emulsion (M70) was investigated with 70% DHA in their composition. Different enrichment conditions were tested in order to establish an optimal use of M70 emulsion. Enrichment conditions tested were different regimes oxygenation, incubation temperatures, concentrations of enriching product and dosage and nauplial density. All these parameters have been considered as relevant during the process of enrichment of live prey. The results indicate that efficient use of M70 for Artemia nauplii emulsion is obtained with an incubation temperature of 28 ° C, a low / moderate aeration (1 l min-1) and a naupliar density of 300 individuals per mL as the enrichment efficiency did not vary between 150 and 300 individuals per mL. Moreover, the M70 emulsion may be administered to newly hatched nauplii by single dose up to 0.8 g L-1 at the beginning of the enrichment. The results in incorporation of DHA with M70 emulsion, although promising and higher than those achieved with commercial enriching, suggest the existence of some factor that prevents an efficient enrichment. Although M70 contains a fat-soluble antioxidant formulation can not reject the oxidation of DHA because of the limited incorporation of this fatty acid in the brine shrimp Artemia. The inclusion of a water soluble antioxidant, may be an option when avoid or prevent oxidation of the DHA for enrichment of Artemia. Hydroxytyrosol (3,4-dihydroxyphenylethanol) is a polar molecule found in the resulting aqueous fraction after the milling process of the olives, with a high antioxidant power greater than the antioxidant vitamins and some synthetic antioxidants. To the best of our knowledge, there are no data available concerning its potential role as protective agent of oil lipid emulsions used for live prey enrichments. The global aim of the study was to investigate the protective effect of the addition of an external water-soluble natural olive fruit extract, rich in the polyphenol hydroxytyrosol (HYT, Hytolive Protect (Genosa I+D S.I., Malaga, Spain) to the enrichment of Artemia nauplii with a DHA-rich oil emulsion (M70). For this purpose, the key enzymes (superoxide dismutase, catalase, glutathione peroxidase and glutathione-S-transferase) as biomarkers of antioxidant activity and lipid peroxidation (LPO) of enriched Artemia nauplii were determined. Using Hytolive improves the antioxidant defence of Artemia nauplii and decreases the level of the oxidative biomarker LPO. The addition of Hytolive makes the activity of all antioxidant enzymes in Artemia enriched with a DHA-rich oil emulsion resemble those of homoesotasis as defined by unenriched nauplii. Such an antioxidant protective role of hydroxytyrosol is refleted in the lipid profile of Artemia, since higher levels of DHA and higher DHA/EPA ratio were found in nauplii enriched in the presence of hydroxytyrosol. The results also show higher levels of DHA obtained in M70 enriched nauplii supplemented with Hytolive. The chemometric data analysis strongly suggests that the protective action of hydroxytyrosol is taking place. The study on the use of the M70 emulsion was completed with the use of enriched Artemia with M70 emulsion to feed paralarvae of common octopus (Octopus vulgaris) in semi-industrial conditions. In recent years, the octopus has been targeted as a promising candidate for aquaculture, but, to date, paralarvae rearing is severely limited by the lack of success during the planktonic stage, with generalized mortalities occurring before the settlement of the juveniles. A lack of balance in the lipid and fatty acid composition of the food could be responsible for the high mortalities encountered in the rearing of the paralarval stages of O.vulgaris. O.vulgaris paralarvae were fed with on-grown Artemia using M70 emulsion or on-grown Artemia cultured with Isochrysis galbana and Nannochloropsis sp. (Nanno treatment). The results show that paralarvae fed with Artemia enriched with M70, had higher DHA levels in both total lipids and polar lipids. To date, the relationship between survival and qualitative composition of lipids diet paralarvae octopus is still unclear. This experiment found that the high amount of DHA in the lipid emulsion M70, moved to paralarvae octopus fed this treatment, demonstrating as an effective way to increase the content of DHA in the diet and in the final body composition of larvae O. vulgaris, and by extrapolation, other marine species. In conclusion, the use of M70 emulsion to enrich Artemia nauplii is a useful tool that produces excellent results in levels of DHA achieved, and even reverses the DHA/EPA ratio nauplii, making it more similar to the natural prey of larvae of marine organisms. It is also an effective means of transferring DHA larval organisms in culture.

[es] Los nauplios de Artemia se utilizan como presa viva en criaderos de organimos marinos de todo el mundo debido a su disponibilidad y digestibilidad, pero su valor nutricional no se ajusta a las demandas o necesidades de las larvas de peces, moluscos o crustáceos marinos, ya que carecen de los ácidos grasos esenciales (EFA, Essential Fatty Acids) para estos organismos. Por tanto, es indispensable llevar a cabo un enriquecimiento de los nauplios de Artemia. El enriquecimiento consiste en incubaciones en agua de mar en la que se dispersan productos ricos en EFA y que serán incorporados de forma pasiva por los nauplios debido a su naturaleza de filtradores. A pesar de los muchos avances que se han hecho en este campo, el enriquecimiento en EFA de nauplios de Artemia continúa siendo un proceso ineficaz. Mientras que el enriquecimiento en ácido araquidónico (20:4n-6, ARA) y ácido eicosapentaenoico (20:5n-3, EPA) se ha logrado fácilmente, el enriquecimiento en ácido docosahexaenoico (22:6n-3, DHA) sigue siendo dificultoso debido a factores específicos que limitan su incorporación a los nauplios de Artemia, como los mecanismos de autoxidación de los ácidos grasos altamente insaturados (HUFA) de la emulsión, que pueden ser especialmente severos con el DHA en comparación con otros HUFA debido a su larga cadena y alto grado de insaturación, y a la existencia de procesos de retroconversión. Para superar los efectos adversos del enriquecimiento es necesario desarrollar nuevas estrategias que permitan aumentar el contenido en DHA de los nauplios de Artemia. Con el fin de hacer frente a estos problemas durante el enriquecimiento, se investigó la eficacia de una nueva emulsión lipídica (M70), con un 70 % de DHA en su composición. Se probaron diferentes condiciones de enriquecimiento con el fin de establecer un uso óptimo de la emulsión M70. Las condiciones de enriquecimiento ensayadas fueron diferentes regímenes de oxigenación, temperaturas de incubación, concentraciones de producto enriquecedor y modos de dosificación, y de densidad naupliar. Todos estos parámetros se han considerado como relevantes durante el proceso de enriquecimiento de presas vivas. Los resultados indican que la utilización eficiente de la emulsión M70 para nauplios de Artemia se logra con una temperatura de incubación de 28°C, una aireación baja/moderada (1 L min-1) y una densidad naupliar de 300 individuos por mL, ya que la eficacia del enriquecimiento no varió entre 150 y 300 individuos por mL. Por otra parte, la emulsión M70 se puede administrar a nauplios recién eclosionados mediante una única dosis de hasta 0,8 g L-1 al comienzo del enriquecimiento sin que la mortalidad naupliar sea evidente. Los resultados en incorporación de DHA con la emulsión M70, aunque prometedores y más elevados que los alcanzados con enriquecedores comerciales, sugieren la existencia de algún factor que impide un enriquecimiento eficiente. A pesar de que M70 contiene en su formulación un antioxidante liposoluble no se puede descartar la oxidación del DHA como causa de la limitada incorporación de este ácido graso en los nauplios de Artemia. La inclusión de un antioxidante soluble en agua, puede ser una opción a la hora de evitar o prevenir la oxidación del DHA durante el enriquecimiento de Artemia. El hidroxitirosol (3,4-dihidroxifeniletanol) es una molécula polar que se encuentra en la fracción acuosa resultantes tras el proceso de molienda de las olivas, con un alto poder antioxidante mayor que el de las vitaminas antioxidantes y el de algunos antioxidantes sintéticos. Teniendo en cuenta que no hay datos disponibles sobre su papel como agente protector de las emulsiones lipídicas empleadas para el enriquecimiento de presas vivas, se propuso investigar el efecto protector de la adición de dicho antioxidante utilizando el compuesto natural Hytolive Protect (Genosa I + D SI, Málaga, España) durante el enriquecimiento de nauplios de Artemia con M70. Para llevar a cabo este propósito, se determinaron las enzimas clave (superóxido dismutas, catalasa, glutatión peroxidasa y glutatión-S-transferasa) como biomarcadores de la actividad antioxidante, y la peroxidación lipídica (LPO) de los nauplios de Artemia enriquecidos. La utilización de Hytolive mejoró la actividad enzimática y la peroxidación lipídica de los nauplios de Artemia enriquecidos con M70 haciéndola más similar a la de los grupos control sin enriquecer. Asimismo, los resultados muestran que los niveles de DHA más elevados se obtuvieron en los nauplios enriquecidos con M70 suplementado con Hytolive. El análisis quimiométrico de los datos sugiere claramente, que la acción protectora del hidroxitirosol está teniendo lugar. El estudio sobre la utilización de la emulsión M70 se completó con la utilización de Artemia enriquecida con dicha emulsión para la alimentación de paralarvas de pulpo común (Octopus vulgaris) en condiciones semi-industriales. En los últimos años, el pulpo ha sido un candidato prometedor para la acuicultura, pero, hasta la fecha, la cría de paralarvas está severamente limitada por la falta de éxito en la fase planctónica, con mortalidades generalizadas que se producen antes del asentamiento de los juveniles, habiéndose apuntado la carencia de ácidos grasos esenciales del alimento como una de las posibles causas. Se comparó el uso de metanauplios enriquecidos con M70 frente a otros enriquecidos con Isochrysis galbana y Nannochloropsis sp. (tratamiento Nanno), analizando el efecto de dichas dietas sobre la composición de ácidos grasos de los lípidos totales, polares y neutros de las paralarvas. Los resultados muestran que las paralarvas alimentadas con Artemia enriquecida con M70 tenían niveles de DHA más elevados, tanto en los lípidos totales como en los polares. A fecha de hoy, la relación entre la supervivencia y la composición cualitativa de los lípidos de la dieta de las paralarvas de pulpo está aún por esclarecer. Este experimento constató que la elevada cantidad de DHA de la emulsión lipídica M70, se trasladó a las paralarvas de pulpo alimentadas con este tratamiento, evidenciándose como un medio eficaz de incrementar el contenido en DHA en la dieta y en la composición corporal final de larvas de O. vulgaris, y por extrapolación, de otras especies marinas. En conclusión, la utilización de la emulsión M70 para el enriquecimiento de nauplios de Artemia es una herramienta útil que produce unos excelentes resultados en cuanto a niveles de DHA alcanzados, y que incluso revierte la relación DHA/EPA de los nauplios, haciéndola más similar a la de las presas naturales de las larvas de organismos marinos. Asimismo es un medio eficaz de transferir DHA a organismos larvarios en cultivo.