[es] La capacidad de diferenciación de las células madre mesenquimales (MSCs) hacia condrocitos, en un proceso conocido como condrogénesis, concede a estas células un gran potencial terapéutico para la reparación de los defectos del cartílago característicos de enfermedades reumáticas como la artrosis. Sin embargo los mecanismos moleculares que participan en este proceso de diferenciación no son del todo conocidos. las técnicas proteómicas posibilitan analizar globalmente la actividad celular, ya que permiten obtener perfiles proteicos que proporcionan Información sobre las conexiones existentes entre las proteínas y las rutas o procesos celulares en las que participan. En este trabajo se han empleado diferentes metodologías proteómicas para estudiar los mecanismos moleculares que participan en la diferenciación condrogénica de las MSCs obtenidas de médula ósea, con el fin de identificar nuevos marcadores condrogénicos que puedan emplearse en la monitorización de terapias celulares encaminadas a la reparación del cartílago. Inicialmente se estandarizó el marcaje metabólico SILAC en MSCs aisladas de médula ósea para llevar a cabo los estudios proteómicos cuantitativos. Una vez optimizado este método, su aplicación nos permitió describir las proteínas intracelulares cuya abundancia se altera durante el proceso de diferenciación de las MSCs. Los niveles de expresión de 65 proteínas se modularon significativamente entre los dos estadios celulares analizados (indiferenciado (día 2) y diferenciado (día 14)). La mayor parte de estas proteínas estaban involucradas en el metabolismo celular y en la glucólisis. En base a este trabajo, decidimos realizar otro estudio en el que aplicamos el doble marcaje SILAC seguido de un análisis nanolC-ESI-MS para identificar y cuantificar las proteínas secretadas por las MSCs a los dlas 2 y 14 del proceso condrogénico. Mediante esta estrategia, se detectaron cambios significativos en la abundancia de 34 proteínas entre los dos tiempos analizados. la mayor parte de las protelnas aumentadas a día 14 son proteínas relacionadas con la matriz extracelular del cartílago, y entre ellas validamos mediante inmunoensayo el incremento de proteoglicano 4 (PRG4)y TIMP1 como potenciales biomarcadores de diferenciación condrogénica.Finalmente, se comprobó la utilidad de las técnicas de imagen mediante espectrometría de masas (MS Imaging) para la caracterización de lipldos involucrados en el proceso de diferenciación. En este último estudio demostramos que las MSCs metabolizan la esfingomielina durante la diferenciación condrogénica, V que la fosfocolina V sus derivados son posibles marcadores de indiferenciación de MSCs

[gl] A capacidad e de diferenciación das células nai mesenquimais (MSCs) cara os condrocitos, nun proceso coñecido como condroxénese, outorga a estas célulasFinalmente, se comprobó la utilidad de las técnicas de imagen mediante espectrometría de masas (MS Imaging) para la caracterización de lipldos involucrados en el proceso de diferenciación. En este último estudio demostramos que las MSCs metabolizan la esfingomielina durante la diferenciación condrogénica, V que la fosfocolina V sus derivados son posibles marcadores de indiferenciación de MSCs. un gran potencial terapéutico para a reparación dos defectos da cartilaxe característicos de enfermidades reumáticas como a artrose. Non obstante, os mecanismos moleculares que participan neste proceso de diferenciación non son de todo coñecidos. As técnicas proteómicas posibilitan analizar globalmente a actividade celular, xa que permiten obter perfís proteicos que proporcionan información sobre as conexións existentes entre as prote(nas e as rutas ou ,procesos celulares nos que participan. Neste traballo empregáronse diferentes metodoloxías proteómicas para estudar os mecanismos moleculares que participan na diferenciación condroxénica das MSCs obtidas da medula ósea, ca fin de identificar novos marcadores condroxénicos que poidan empregarse na monitorización de terapias celulares encamiñadas á reparación da cartilaxe . Inicialmente estandarizouse a marcaxe metabólica SILAC nas MSCs iIIadas de medula ósea para levar a cabo os estudos proteómicos cuantitativos. Unha vez optimizado este método, a súa aplicación permitiunos describir as proteínas intracelulares cuxa abundancia altérase durante o proceso de diferenciación das MSCs. Os niveis de expresión de 65 proteínas moduláronse significativamente entre os dous estadios celulares analizados (indiferenciado (dia 2) e diferenciado (día 14)). A maior parte destas proteínas estaban implicadas no metabolismo celular e na glucólise. En base a este traballo, decidimos realizar outro estudo no que aplicamos a doble marcaxe SILAC seguido da análise nanoLC-ESI-MS para identificar e cuantificar as proteínas secretas palas MSCs ós días 2 e 14 do proceso de condroxénese. Mediante esta estratexia, detectáronse cambios significativos na abundancia de 34 proteínas entre os dous tempos analizados. A maior parte das proteínas aumentadas a día 14 son proteínas relacionadas coa matriz extracelular da cartilaxe, e entre elas validamos mediante inmunoensaios o incremento do proteoglicano 4 (PRG4) e TIMPl como potenciais biomarcadores da diferenciación condroxénica. Finalmente, comprobouse a utilidade das técnicas de imaxen mediante espectrometrla de masas (MS Imaging) para a caracterización de ¡¡pidos involucrados no proceso de diferenciación. Neste último estudo demostramos que as MSCs metabolizan a esfingomielina durante a diferenciación condroxénica, e que a fosfocoJina e os seus derivados son posibles marcadores de indiferenciación das MSCs.