[en] INTRODUCTION Fibromyalgia syndrome (FMS) is a disease characterized by generalized or multifocal chronic muscular pain of unknown origin, with the co-existence of other clinical manifestations, such as mood disturbances, sleep disorders, fatigue, morning stiffness, cognitive dysfunctions, anxiety, recurrent headaches, dizziness, irritable bowel syndrome and/or urogenital pain. The high prevalence of this syndrome in the general population means an important socioeconomic problem. In addition, the complexity of its diagnosis and the lack of efficacy and effectiveness of pharmacological treatments evidences a lack of knowledge and understanding of its etiopathogenic origin. OBJECTIVES In order to advance in the knowledge of this syndrome, which would lead professionals into an improvement in the efficacy of pharmacological treatments, it is necessary to establish an animal model capable of reproducing not only the pain symptomatology, but also the main comorbid symptoms. Our research group has already provided, in previous studies, validity to the reserpine-induced FMS model in rat, proposed by Nagakura et al. in 2009, therefore, the overall objective of this study is a continuation of the effort in providing significant evidence to provide robust validity to this animal model. MATERIAL AND METHODS We have employed the most widely used pharmacological treatments in human patients, Pregabalin and Duloxetine, and have proved their efficacy both on alteration of pain thresholds and depressive symptomatology, which have been previously described in this FMS model. We used behavioral tests of tactile allodynia (Electrovonfrey test) and mechanical hyperalgesia (Randall and Selitto test) for the study of pain thresholds. The effect of the drugs on short-term depressive symptomatology was evaluated using the Forced Swimming test, and the long-term effect of drugs was evaluated by the Novelty-Suppressed Feeding test. We also used immunohistochemical fluorescence techniques to characterize the neurons that are modifying their activation patterns in the noradrenergic centers Locus Coeruleus, A7 and A5, in order to investigate the changes in the CNS caused by the implantation of the model, analyzing their evolution with the passage of the time since reserpine administration. We also evaluated immunofluorescence by modifying the activation patterns after applying an inflammatory pain in the rats submitted to the FMS model induced by reserpine. RESULTS The results obtained show, on the one hand, that the continuous treatment with duloxetine 30 mg/kg daily for 15 days reverses mechanical hyperalgesia and tactile allodynia in respect to the groups treated with vehicle, and improves the depressive symptomatology, in the submitted rats to the model of FMS induced by reserpine proposed by Nagakura et al. (2009). Also, an acute dose of 30 mg/kg duloxetine produces an improvement in tactile allodynia and depressive symptomatology, but not in mechanical hyperalgesia. On the other hand, continuous treatment with pregabalin at a daily dose of 30 mg/kg for 15 days in the rats submitted to the reserpine-induced FMS model, also produces an improvement in pain thresholds in respect to vehicle-treated groups, in both mechanical hyperalgesia and tactile allodynia, but does not produce any improvement in long-term depressive symptomatology. In contrast, after an acute dose of Pregabalin, an improvement in depressive symptoms has been observed. Finally, results obtained in the immunofluorescence study show, on the one hand, that the administration of reserpine in rat, following the model described by Nagakura and his collaborators, produces a high Fos expression in noradrenergic centers, within 6 hours of being administered the third dose of reserpine, while at 5 days and 15 days of the latter dose, the number of Fos-positive cells is drastically reduced. This same pattern is described between 6 hours, 5 and 15 days after the last administration of reserpine in the groups to which an inflammatory pain was introduced (through the application of the Formalin Test), before being perfused. The colocalization analysis of Fos-positive and Th-positive cells shows, in LC, a lower percentage of colocalization at 6 hours of implantation of the model than at days 5 and 15, contrary to what happens in areas A5 and A7. Finally, the application of inflammatory pain on the model does not modify noradrenergic cell activation patterns in the studied centers, at any of the times when compared to the non-formalin-administered reserpine group. The introduction of the Formalin Test produces an increase in the expression of Fos-positive cells in ipsilateral laminae I and II of the spinal cord. This increase is similar in all FT-condictions, regardless of the time elapsed between the period of reserpinization and administration of formalin. DISCUSSION AND CONCLUSIONS After the analysis of the results, we consider valid the model of FMS induced by reserpine in rat, proposed by Nagakura et al. in 2009, for the study of this syndrome, since we have obtained results congruent with those found in humans that have been treated with the drugs described. In the same way, we consider this model valid for the study of new drugs in development. We have also verified that there is an important and interesting alteration in the noradrenergic system, which not only influences in the modulation of pain but is related to the modulation of the mood states and, going beyond, in the regulation of the states of vigil. This opens a very important research window that takes us a step further in the knowledge of FMS, a syndrome that should not go unnoticed.

[es] INTRODUCCIÓN El síndrome de fibromialgia (FMS) es una enfermedad que se caracteriza principalmente por dolor muscular crónico generalizado o multifocal de origen desconocido, y la co-existencia de otras manifestaciones clínicas, como las alteraciones del estado de ánimo, los trastornos del sueño, la fatiga, la rigidez matutina, las disfunciones cognitivas, la ansiedad, los dolores de cabeza recurrentes, los mareos, el síndrome de colon irritable y/o el dolor urogenital. La alta prevalencia de este síndrome en la población general plantea un problema social y económico, además, la complejidad de su diagnóstico y la falta de eficacia y efectividad de los tratamientos farmacológicos evidencia una falta de conocimiento y comprensión de su origen etiopatogénico. OBJETIVOS Para avanzar en el conocimiento de este síndrome, lo que se traduciría en una mejora de la eficacia de los tratamientos farmacológicos, es necesario el establecimiento de un modelo animal que sea capaz de reproducir no sólo la sintomatología de dolor, sino también los principales síntomas comórbidos. Nuestro grupo de investigación ya ha aportado validez al modelo de FMS inducido por reserpina en rata propuesto por Nagakura et al. en 2009 en anteriores trabajos, por ello, el objetivo general de este estudio es una continuación del esfuerzo en la aportación de evidencias significativas para proporcionar una validez robusta a este modelo animal. MATERIAL Y MÉTODOS Hemos utilizado los tratamientos farmacológicos que más ampliamente se usan en pacientes humanos, la pregabalina y la duloxetina, y hemos comprobado su eficacia tanto sobre la alteración de los umbrales de dolor como sobre la sintomatología depresiva, ambos síntomas descritos previamente en el modelo. Para el estudio de los umbrales del dolor empleamos pruebas conductuales de alodinia táctil (Electrovonfrey test) y de hiperalgesia mecánica (Randall y Selitto test). El efecto de los fármacos sobre la sintomatología depresiva a corto plazo se evaluó mediante Forced Swimming test, y el efecto a largo plazo se evaluó mediante Novelty-Suppressed Feeding test. Asimismo, para indagar en las alteraciones en el SNC causadas por la implantación del modelo, hemos empleado pruebas inmunohistoquímicas de fluorescencia para caracterizar las neuronas que modifican sus patrones de activación en los centros noradrenérgicos Locus Coeruleus, A7 y A5, analizando su evolución con el paso del tiempo desde la administración de reserpina. También mediante inmunofluorescencia evaluamos la modificación de los patrones de activación tras aplicar un dolor inflamatorio en las ratas sometidas al modelo de FMS inducido por reserpina. RESULTADOS Los resultados obtenidos muestran, por una parte, que el tratamiento con 30 mg/kg diarios de duloxetina durante 15 días revierte la hiperalgesia mecánica y la alodinia táctil con respecto a los grupos tratados con vehículo, y mejora la sintomatología depresiva, en las ratas sometidas al modelo de FMS inducido por reserpina propuesto por Nagakura et al. (2009). Asimismo, una dosis aguda de 30 mg/kg de duloxetina produce mejoras en la alodinia táctil y en la sintomatología depresiva, pero no en la hiperalgesia mecánica. Por otro lado, el tratamiento con pregabalina a dosis diaria de 30 mg/kg durante 15 días en las ratas sometidas al modelo de FMS inducido por reserpina también produce una mejora de los umbrales del dolor con respecto a los grupos tratados con vehículo, tanto en hiperalgesia mecánica como en alodinia táctil, pero no produce ninguna mejora en la sintomatología depresiva a largo plazo. En cambio, tras una dosis aguda de pregabalina, sí se observa una mejora de los síntomas depresivos. Por último, los resultados obtenidos en el estudio de inmunofluorescencia muestran, por una parte, que la administración de reserpina en rata siguiendo el modelo descrito por Nagakura y sus colaboradores produce una elevada expresión de Fos en los centros noradrenérgicos a las 6 horas de haber sido administrada la tercera dosis de reserpina, mientras que a los 5 días y a los 15 días de esta última dosis, el número de células Fos-positivas se reduce drásticamente. Este mismo patrón se describe entre las 6 horas, 5 y 15 días de la administración de reserpina en los grupos a los que se les introdujo un dolor inflamatorio (mediante la aplicación del test de formalina) antes de ser perfundidos. El análisis de colocalización de células Fos-positivas y Th-positivas muestra en LC un menor porcentaje de colocalización a las 6 horas de la implantación del modelo, que a los días 5 y 15, de forma contraria a lo que ocurre en las áreas A5 y A7. Por último, la aplicación del dolor inflamatorio no modifica los patrones de activación de células noradrenérgicas en los centros estudiados en ninguno de los tiempos en comparación con el grupo reserpinizado al que no se le administró formalina. La introducción del test de formalina sí produce un aumento en la expresión de Fos en las láminas ipsilaterales I y II de la médula espinal, y este aumento es similar independientemente del tiempo transcurrido entre el periodo de reserpinización y la administración de formalina. DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES Tras el análisis de los resultados obtenidos, consideramos válido el modelo de FMS inducido por reserpina en rata propuesto por Nagakura et al. en 2009 para el estudio de este síndrome, puesto que hemos obtenido resultados congruentes con los hallados en humanos que han sido tratado con los fármacos descritos. De la misma forma, consideramos este modelo válido para el estudio de nuevos fármacos en desarrollo. Asimismo, hemos comprobado que hay una importante alteración en el sistema noradrenérgico, sistema que no solo influye en la modulación del dolor, sino que está relacionada con la modulación de los estados de ánimo y, yendo más allá, en la regulación de los estados de vigilia. Esto abre una ventana de investigación muy importante que nos lleva un paso más allá en el conocimiento del FMS, un síndrome que no debería pasar desapercibido.