[ca] Després de l'evolució dels primers organismes pluricel·lulars, la Natura ha proporcionat tres tipus principals de transportadors d'oxigen presents als organismes vius: Hemoglobina (Hb), Hemeritrina (Hr) i Hemocianina (Hc). L'hemocianina és coneguda com el pigment respiratori present en diversos mol·luscs i artròpodes que permet la captació i posterior utilització de l'oxigen. Això és possible gràcies a la presència d'un centre binuclear de coure en el centre actiu (proteïna de coure de tipus-3), a la part interna de la proteïna. Cada àtom de Cu està envoltat de tres histidines (His) i cada centre actiu pot fixar reversiblement una molècula d'O2 formant un pont, inusual, de peròxid. A causa d'aquesta unió reversible es produeix una transició entre dos estats diferents de la proteïna: Deoxy-Hc i Oxy-Hc, que es realitza mitjançant una reacció redox en què el Cu(I) de la forma Deoxy-Hc s'oxida a Cu (II) (Oxy-Hc) i l'O2 es redueix a O22-. Cada estat ofereix prou trets característics per ser fàcilment identificat. Recentment, ens hem centrat a l'Hc de Cantareus aspersum. En aquesta mena de gasteròpode, la Hc consisteix en un didecàmer cilíndric amb una massa molecular de 8000 kDa. Cada decàmer està compost per cinc dímers de subunitats, i cada subunitat, que té una massa molecular de 400 kDa, està formada per 8 unitats funcionals (FU). Cada FU conté un centre binuclear de coure capaç d'unir una molècula de O2. Els gasteròpodes, i especialment els cargols, tenen dues isoformes de metal·lotioneïna (MT): una específica pel Cd (CdMT), i una per al Cu (CuMT). Diversos estudis bibliogràfics suggereixen que la Hc i la CuMT se sintetitzen a les cèl·lules dels rogòcits i això ha donat lloc a la hipòtesi que pot existir una relació entre la Hc i la CuMT en què aquesta última podria ser la font de Cu(I ) per a la Hc naixent. L'objectiu principal d'aquest projecte és esbrinar la implicació de les metal·lotioneïnes específiques de Cu (CuMTs) com a font de Cu(I) a la síntesi de la Hc al cargol Cantareus aspersum. Per assolir aquest objectiu, s'han utilitzat diverses tècniques analítiques per caracteritzar el comportament, l'estructuració i la composició de les diferents preparacions: espectroscòpia UV-Vis, espectroscòpia de fluorescència, SEC, TEM i ICP-OES. A més, s'han dissenyat diversos experiments amb l'objectiu de i) obtenir la forma apo-Hc i estudiar-ne el procés de reconstitució, primer mitjançant una transferència directa d'ions Cu(I) i després, amb una transferència de Cu(I) des de la CuMT, i ii) determinar com afecten les diferents etapes vitals dels cargols i la dieta que tenen a l'estat de la Hc d'aquests organismes.

[en] After the evolution of the first pluricellular organisms, Nature has provided three main types of oxygen transporters present in the living organisms: Hemoglobin (Hb), Hemerythrin (Hr) and Hemocyanin (Hc). Hemocyanin is known as the respiratory pigment present in several mollusks and arthropods that allows the caption and further use of oxygen. This is possible due to the presence of di-copper center in the active site (Type-3 copper protein), at the inner part of the protein. Each Cu atom is surrounded by three histidines (His) and each active site can reversibly bind one molecule of O2 forming an unusual peroxide bridge. Due to this reversible binding there is a transition between two different states of the protein: Deoxy-Hc and Oxy-Hc, which is performed through a redox reaction where the Cu(I) of Deoxy-Hc is oxidized to Cu(II) (Oxy-Hc) and O2 is reduced to O22-. Each state offers enough characteristic features to be easily identified. Recently, we have focused on the Hc of Cantareus aspersum. In this Gastropoda species, Hc consists on a cylindrical didecamer with a molecular mass of 8000 kDa. Each decamer is composed by five dimers of subunits, and each subunit, which has a molecular mass of 400 kDa, is made of 8 functional units (FUs). Each FU contains one di-copper center, able to bind one O2 molecule. Gastropoda, and specially snails, have two metallothionein (MT) isoforms: a CdMT which is Cd-specific, and a CuMT for Cu. Several literature studies suggest that Hc and CuMT are synthesized in the rhogocyte cells and this has given rise to the hypothesis that there can be a relationship between Hc and CuMT in which the latter could be the source of Cu(I) for the nascent Hc. The main objective of this project is to ascertain the involvement of Cu-specific metallothioneins (CuMTs) as the source of Cu(I) in the synthesis of Hemocyanin (Hc) in the snail Cantareus aspersum. To achieve this goal, several analytical techniques have been used to characterize the behavior, structuration and composition of the different preparations: UV-Vis spectroscopy, fluorescence spectroscopy, SEC, TEM and ICP-OES. Moreover, several experiments have been designed with the aim of i) obtaining the apo-Hc form and studying its reconstitution process, first through a direct transfer of Cu(I) ions and afterwards, with a Cu(I) transfer from the CuMT, and ii) determining how the different life stages of the snails and their diet affect the Hc status of these organisms.