[en] The tomato has a huge agronomic interest, as well as being consumed all over the world. In this thesis, self-pruning (sp) and alcobaça (alc) mutations will be studied in two varieties of tomato ("penjar" or LC215 and industrial or LC854). The "penjar" tomato is a double mutant for the sp and alc genes, while the industrial tomato is a sp mutant. Prior to this work, these two varieties were used as parentals in a breeding program. They were crossed and their offspring generation F1 was obtained. The first objective of this thesis was to study whether the sp mutation that both parents have is the same. To address this, genomic DNA was extracted from both parents and the SP gene from each of them was specifically amplified by PCR. The amplified genes were cloned into a vector, sequenced, and their sequence was compared with the wild type available in the databases. The results have allowed us to conclude that, the mutation that causes the sp phenotype in both parental varieties is the same: a substitution from C to T that causes a change of proline (Pro) to a change of leucine (Leu) at position 76 of the protein sequence. Therefore, the F1 generation already has the sp mutation fixed in homozygosity. The second objective was to develop two protocols based on a PCR modification called tetra-primer ARMS-PCR to genotype the SNPs responsible for the alc and sp mutations in the LC215 and LC854 varieties and their progeny and use them in the breeding program to determine whether the plants of the different generations are wild homozygotes, mutant homozygotes or heterozygotes for each of the mutations. We could not optimize the genotyping of sp but it was optimized of alc. Since in this specific breeding program the sp mutation does not segregate, our alc genotyping protocol will allow progress in the selection of plants for this breeding program.

[es] El tomate tiene un enorme interés agronómico, además de ser consumido en todo el mundo. En este trabajo de fin de grado se estudiarán las mutaciones self-pruning (sp) y alcobaça (alc) en dos variedades de tomate ('penjar' o LC215 e industrial o LC854). El tomate de 'penjar' es un doble mutante para los genes sp y alc, mientras que el tomate industrial es mutante sp. Con anterioridad a este trabajo, estas dos variedades se emplearon como parentales en un programa de mejora. Se cruzaron y se obtuvo su generación filial F1. El primer objetivo de esta tesis fue estudiar si la mutación sp que tienen ambos parentales es la misma. Para abordarlo se extrajo ADN genómico de ambos parentales y se amplificó específicamente el gen SP de cada uno de ellos mediante PCR. Los genes amplificados se clonaron en un vector, secuenciaron y se comparó su secuencia con la silvestre disponible en las bases de datos. Los resultados han permitido concluir que la mutación que provoca el fenotipo sp en ambas variedades parentales es la misma: una sustitución de C a T que provoca un cambio de prolina (Pro) por un cambio de leucina (Leu) en la posición 76 de la secuencia de proteínas. Por tanto, la generación F1 ya tiene la mutación sp fijada en homocigosis. Como segundo objetivo se pretendía poner a punto dos protocolos basados en una modificación de la PCR llamada tetra-primer ARMS-PCR para genotipar a los SNPs responsables de las mutaciones alc y sp en las variedades LC215 y LC854 y su descendencia, y usarlos en el programa de mejora para determinar si las plantas de las diferentes generaciones son homocigotas silvestres, homocigotas mutantes o heterocigotas por cada una de las mutaciones. No hemos podido optimizar el genotipado de sp, pero sí de alc. Dado que en este programa específico de mejora la mutación sp no segrega, nuestro protocolo de genotipado alc ya permitirá avanzar en la selección de plantas de este programa de mejora.