[en] Emerging contaminants, such as plastic additives, represent an environmental problem in aquatic ecosystems. Of particular concern is the evidence that their inhabitants, such as microalgae, are exposed, not to a single compound, but to heterogeneous mixtures of pollutants, and repeated discharges are common in coastal waters near urban and/or industrial centers. Based on this, in the present work the potential cytotoxicity on the marine microalga Dunaliella tertiolecta of a mixture of 5 organic phosphorus flame retardant (TiBP, TnBP, TCPP (Σisomers), TDCPP and TPPO), designed as alternative additives of lower toxicity to those used in recent years, was studied. For this purpose, cultures of the microalgae were exposed to concentrations of 8 (EC25) and 16 (EC50) μg/mL analyzing by flow cytometry different biomarkers of toxicity (viability, vitality, intracellular ROS levels, intracellular pH, mitochondrial membrane potential and cytoplasmic membrane potential). The assays were performed with a first exposure to 8 μg/mL of the OPRFs mixture, analyzing the results at 3 and 48 hours. In addition, the removal of the 5 contaminants from the medium by D. tertiolecta was studied, quantifying them by vortex-assisted liquidliquid microextraction performing separation and detection with programmable temperature vaporize-gas chromatography-mass spectrometry of triple quadrupole (VALLME-PTV-GC-MS-MS). Finally, to simulate a new contaminant discharge, the cultures previously treated at 8 μg/mL of the mixture were subjected to a second 48h exposure at 16 μg/mL, repeating the referred analyses. The results obtained show that exposure to the mixture of 5 OPRFs causes cytotoxicity on the microalga D. tertiolecta, significantly affecting all biomarkers tested and being the analysis of intracellular ROS levels the most affected. In addition, the removal of compounds from the microalgal culture medium is observed as early as 3 hours after exposure to the contaminant mixture, with chlorinated compounds (TCPP and TDCPP) showing the least removal. Finally, a second exposure to the contaminant mixture produces a more severe toxicity in the re-exposed microalgal cells compared to the alterations recorded in the microalgae exposed for the first time.

[es] Los contaminantes emergentes, como los aditivos de plásticos, representan un problema medioambiental en los ecosistemas acuáticos. Particularmente preocupante es la evidencia de que sus habitantes, como las microalgas, se encuentran expuestos, no a un único compuesto, si no a mezclas heterogéneas de contaminantes, siendo además habitual que se produzcan descargas repetidas en aguas costeras cercanas a núcleos urbanos y/o industriales. En base a esto, en el presente trabajo se estudió la potencial citotoxicidad sobre la microalga marina Dunaliella tertiolecta de una mezcla de 5 retardantes de llama organofosforados (TiBP, TnBP, TCPP (Σisómeros), TDCPP y TPPO), diseñados como aditivos alternativos de menor toxicidad a los utilizados en los últimos años. Para ello, se expusieron cultivos de la microalga a concentraciones de 8 (EC25) y 16 (EC50) μg/mL analizando mediante citometría de flujo diferentes biomarcadores de toxicidad (viabilidad, vitalidad, niveles intracelulares de ROS, pH intracelular, potencial de membrana mitocondrial y potencial de membrana citoplasmática). Los ensayos se realizaron con una primera exposición a 8 μg/mL de la mezcla de OPRFs, analizando los resultados a las 3 y 48 horas. Además, se estudió la retirada de los 5 contaminantes del medio por parte de D. tertiolecta, cuantificándolos mediante microextracción líquido-líquido asistida por vórtice realizando la separación y detección con cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas de triple cuadrupolo con inyección con temperatura programada (VALLME-PTV-GC-MS-MS). Finalmente, para simular una nueva descarga de contaminantes, los cultivos previamente tratados a 8 μg/mL de la mezcla se sometieron a una segunda exposición de 48h a 16 μg/mL, repitiéndose los análisis referidos. Los resultados obtenidos muestran que la exposición a la mezcla de 5 OPRFs provoca citotoxicidad sobre la microalga D. tertiolecta, afectando significativamente a todos los biomarcadores ensayados y el análisis de los niveles intracelulares de ROS ha sido el más afectado. Además, la retirada de los compuestos del medio de cultivo microalgal se observa ya a las 3 horas de la exposición a la mezcla de contaminantes, siendo los clorados (TCPP y TDCPP) los que presentan una menor retirada. Por último, una segunda exposición a la mezcla de contaminantes produce una toxicidad más severa en las células microalgales reexpuestas en comparación con las alteraciones registradas en las microalgas expuestas por primera vez.