[en] When Schizosaccharomyces pombe cells are grown in nitrogen-rich medium, they divide with a large cell size after a long G2 phase. After division, cells possess the required size threshold to enter S phase. As a consequence, the G1/S checkpoint is cryptic under these conditions. In contrast, when cells are grown in nitrogen-poor media, the cell cycle is immediately reprogrammed, the G2 phase is shortened and cells divide with a smaller cell size. As a result, an extension of the G1 phase occurs, until cells reach the minimum size necessary for DNA duplication. In the total absence of nitrogen, cells divide twice without growth and undergo a cell cycle arrest in G1, before becoming quiescent cells. Quiescence is a cell cycle stage conserved in eukaryotes that is characterized by reversible cell cycle arrest in G1 phase, reduction in cell size, increased stress resistance, reduced transcription and translation, induction of autophagy and increased longevity. In nitrogen-poor media, when cells extend G1 phase, and in quiescence, when cells are blocked in G1 phase, the machinery that promotes the G1/S transition must be inactivated. In fission yeast, the transcription factor that activates the expression of S-phase genes is the MBF complex, the functional homologue of E2F in metazoans and MBF/SBF in S. cerevisiae. E2F and SBF-dependent transcription is inhibited by Rb in metazoans and Whi5 in S. cerevisiae, through recruitment of histone deacetylase complexes, HDAC1 or Rpd3, which deacetylate histones in the promoters of their target genes. In S. pombe the MBF complex consists of Cdc10, Res1, Res2 and Rep2 subunits. During meiosis, the MBF complex is disrupted and it consists of Cdc10, Res2, and Rep1 as a co-activator. The MBF complex is bound to its target genes promoters throughout the cell cycle and it is regulated to limit its activity during the G1/S transition. Nrm1 and Yox1 function as repressors at the end of S phase and during G2. Nevertheless, the repression mechanism of the MBF complex during G1 phase remains unclear. S. pombe possesses a protein, Whi5, predicted to act as a repressor of the G1/S transition. In this Doctoral Thesis we investigate the potential role of Whi5 in inhibiting MBF-dependent transcription. Specifically, this work focuses on: (1) examining the role of Whi5 as a repressor of the MBF complex in quiescent cells, (2) studying Whi5 function as a repressor of the G1/S transition under nitrogen-poor conditions, (3) identifying Whi5 interactors in quiescent cells, and (4) exploring the role of histone deacetylases in repressing MBF-dependent expression during quiescence. Our data suggest that Whi5 regulates the G1/S transition in cells cultured in nitrogen-poor media. Under these conditions, Whi5 localizes to the nucleus, and overexpression of whi5 mimics the deletions of MBF complex components, such as rep2 or res1, resulting in replicative stress and DNA damage, probably due to reduced MBF complex activity. In contrast, deletion of whi5 rescues the phenotypes associated with rep2? or res1?, probably due to an increase in MBF activity. After induction of quiescence by nitrogen starvation, Whi5 protein is localized to the nucleus and represses the expression of MBF-dependent genes, specifically early meiosis genes. Consistent with this finding, Whi5 physically interacts with the MBF complex composed of Cdc10 and Res2, although Res1 is also part of the complex in quiescent cells. Finally, it was determined that Whi5 has a role in maintaining transcriptional repression of MBF-dependent genes in quiescence by the recruitment of the Clr6-I complex to gene promoters, promoting their deacetylation in a conserved mechanism in S. cerevisiae and metazoans

[es] Cuando las c?lulas de Schizosaccharomyces pombe se cultivan en medios ricos en nitr?geno, el ciclo celular se caracteriza por tener una fase G2 larga, durante la cual las c?lulas crecen hasta alcanzar el tama?o necesario para entrar en mitosis. Tras la divisi?n, las c?lulas poseen el tama?o umbral m?nimo requerido para entrar en fase S, por lo que el punto de control G1/S es cr?ptico en estas condiciones. En contraste, cuando las c?lulas se cultivan en medios pobres en nitr?geno, su ciclo celular se reprograma inmediatamente, la fase G2 se acorta y las c?lulas se dividen con un tama?o menor. Como consecuencia, las c?lulas extienden la fase G1 hasta alcanzar el tama?o necesario para que se produzca la duplicaci?n del ADN, cobrando importancia el punto de control de tama?o G1/S. En ausencia total de nitr?geno, las c?lulas se dividen dos veces sin crecimiento y se bloquean en G1 para entrar en estado de quiescencia. La quiescencia es un estado reversible, conservado en eucariotas, que se caracteriza por una reducci?n del tama?o celular, un aumento de la resistencia a estr?s, inducci?n de la autofagia, menor tasa de transcripci?n y traducci?n y aumento de longevidad. Tanto en condiciones de medios pobres en nitr?geno como en quiescencia, cuando las c?lulas extienden la fase G1 o se bloquean en esta fase, respectivamente, la maquinaria que promueve la transici?n G1/S ha de inactivarse. En S. pombe, la transici?n G1/S depende del complejo MBF, el ort?logo funcional de E2F y SBF/MBF en metazoos y Saccharomyces cerevisiae, respectivamente. La transcripci?n dependiente de E2F y SBF es inhibida por Rb en metazoos y Whi5 en S. cerevisiae, mediante el reclutamiento de los complejos histonas deacetilasas, HDAC1 o Rpd3, que deacetilan histonas de los promotores de sus genes diana. En S. pombe, el factor de transcripci?n que activa la expresi?n de los genes de fase S se denomina complejo MBF, ort?logo funcional de E2F en metazoos, y est? compuesto por las subunidades Cdc10, Res1, Res2 y el co-activador Rep2. En meiosis, el complejo MBF se altera y se compone ?nicamente por Cdc10 y Res2, mientras que Rep1 se convierte en su co-activador. El complejo MBF est? unido a los promotores de sus genes diana a lo largo del ciclo, y est? regulado para restringir su actividad a la transici?n G1/S. Nrm1 y Yox1 act?an como represores al final de fase S y durante la fase G2. Sin embargo, se desconoce el mecanismo de represi?n del complejo MBF en situaciones en las que la fase G1 se extiende. Puesto que S. pombe posee una prote?na, Whi5, que ha sido predicha como un represor de la transici?n G1/S, en esta Tesis Doctoral se ha propuesto estudiar la posible implicaci?n de Whi5 en la inhibici?n de la transcripci?n dependiente del complejo MBF. Concretamente este trabajo se centra en: (1) estudiar el papel de Whi5 como represor del complejo MBF en c?lulas quiescentes, (2) estudiar el rol de Whi5 como represor de la transici?n G1/S en medios pobres en nitr?geno, (3) identificar las prote?nas que interaccionan con Whi5 en c?lulas quiescentes y (4) estudiar el papel de las histonas deacetilasas en la represi?n de la expresi?n dependiente de MBF en quiescencia. Nuestros datos sugieren que Whi5 regula la transici?n G1/S en c?lulas cultivadas en medios pobres en nitr?geno. En estas condiciones, Whi5 se localiza en el n?cleo y la sobreexpresi?n de whi5 mimetiza las deleciones de componentes del complejo MBF, como rep2 o res1, generando estr?s replicativo y da?o en el ADN, probablemente como consecuencia de una disminuci?n de la actividad del complejo MBF. En contraste, la deleci?n de whi5 rescata los fenotipos de rep2? o res1?, probablemente debido a un aumento de la actividad del complejo MBF. En c?lulas quiescentes, Whi5 se transloca al n?cleo y reprime la expresi?n de genes dependientes del complejo MBF, concretamente, de genes de meiosis temprana. Acorde con este resultado, Whi5 interacciona espec?ficamente con el complejo MBF formado por Cdc10 y Res2, aunque en quiescencia Res1 tambi?n forma parte del complejo. En ?ltimo lugar, se determin? que Whi5 media el reclutamiento del complejo HDAC Clr6-I hacia los promotores de los genes dependientes del complejo MBF, promoviendo su desacetilaci?n en un mecanismo conservado en S. cerevisiae y metazoo