[en] Objectives The primary objective of this doctoral thesis is to investigate the impact of physical stress - as applied through the tail pinch technique - on relapses to withdrawal syndrome associated with morphine. Additionally, it will examine the involvement of β-adrenergic receptors and corticotropin-releasing factor 1 receptors (CRF1R) in this relapse by utilizing their antagonists, propranolol and CP-154,526. Methodology To achieve this, we used a conditioned place aversion (CPA) paradigm to induce morphine withdrawal syndrome and subsequently ensured the extinction of this conditioning to produce relapse in mice that we previously categorized into groups based on the application or not of the stress stimulus (TP or CTP), and based on the pharmacological treatment administered (Vehicle, propranolol, or CP-154,526). Furthermore, we measured the phosphorylation of ERK1/2 and CREB proteins in several brain nuclei (CeA, NAc, BNST, BLA, PVN, VTA, and DG) of the systems under study in order to observe how they changed according to the treatments received. Results The results obtained for relapse to morphine withdrawal syndrome show that the group that received the physical stimulus and was not administered an antagonist experienced a relapse, compared to the control group. However, animals that were stressed and previously treated with antagonists did not relapse. In contrast, in the study of ERK1/2 and CREB protein phosphorylation, we observed tan increase in phosphorylation in animals that received the physical stimulus and did not receive an antagonist treatment compared to those that did. At the CeA level, we observed an increase in ERK1/2 and CREB protein phosphorylation in this group. In the NAc, we noticed a rise in ERK2 phosphorylation, whereas this increase was not observed in ERK1 or CREB levels. In BNST study, we found an increase in ERK1/2 expression in all groups and a rise in CREB in mice treated with CP-154,526 and propranolol. A similar increase in CREB was not observed in mice without treatment compared to their control. However, the measurement of ERK1/2 and CREB phosphorylation in BLA revealed that no increase occurred in any of the groups following relapse to morphine withdrawal syndrome. Regarding PVN and VTA, there was an increase in ERK1/2 and CREB phosphorylation in the group that received the physical stimulus and was not treated compared to those that received the antagonist treatment. Finally, we have observed a significant increase in CREB phosphorylation at DG level. Conclusions Our results suggest that the administration of naloxone to chronically morphine-treated mice induced a withdrawal syndrome with an aversive effect. Additionally, we concluded that the application of a stressful stimulus (tail pinch) induces relapse into aversive behaviour in morphine-dependent animals that had previously extinguished dependence-associated behaviour and that the administration of CP-154,526 and propranolol antagonized this relapse. Furthermore, we observed that this relapse led to an increase in ERK and CREB phosphorylation in CeA, PVN, VTA, and DG and that both CP-154,526 and propranolol were able to antagonize this effect. However, we did not observe these changes at BLA and NAc levels. Ultimately, these findings suggest that CRF1R and the β-adrenergic receptors are part of the learning process associated with stress-induced relapse into aversive behaviours and that CP-154,526 and propranolol may be suitable treatments for the prevention of substance use in individuals who are addicted.

[es] Objetivos El objetivo principal de esta tesis doctoral consiste en estudiar la implicación del estrés físico, aplicado mediante la técnica del pinzamiento de cola, en la recaída al síndrome de abstinencia asociada a morfina, así como evaluar la implicación de los de los receptores β-adrenérgicos, y de los receptores del factor liberador de corticotropina (CRF1R) en esta recaída por medio de sus antagonistas propranolol y CP-154,526. Metodología Para ello, hemos aplicado un condicionamiento por aversión de plaza (CPA) con el fin de inducir un síndrome de abstinencia a morfina, así como, posteriormente, asegurar la extinción de dicho condicionamiento para poder provocar la recaída en el mismo a ratones que previamente hemos categorizado por grupos según la aplicación o no del estímulo estresante (TP o CTP), y según el tratamiento farmacológico administrado (Vehículo, propranolol o CP-154,526). Por otro lado, hemos medido la fosforilación de las proteínas ERK1/2 y CREB en distintos núcleos cerebrales (CeA, NAc, BNST, BLA, PVN, VTA y DG) de los sistemas objeto de estudio para comprobar cómo varían en función de los tratamientos recibidos. Resultados Los resultados obtenidos nos muestran que en el grupo que ha recibido el estímulo físico y que no ha sido administrado con ninguno de los antagonistas se produce una recaída con respecto a su grupo control, mientras que los animales que han sido estresados y previamente tratados con antagonistas, no la experimentan. Por otro lado, realizamos el estudio de la fosforilación de proteínas ERK1/2 y CREB en los animales que han recibido el estímulo físico y no han recibido el tratamiento antagonista con respecto a los que sí lo recibieron. En primer lugar, a nivel de CeA observamos un aumento en la fosforilación de las proteínas ERK1/2 y CREB en este grupo. En NAc observamos un aumento en la fosforilación de ERK2, mientras que no se observa este aumento en los niveles de ERK1 y CREB. En el estudio de BNST observamos un aumento en la expresión de ERK1/2 en todos los grupos y de CREB en los ratones tratados con CP-154,526 y propranolol. En cambio, la medición de la fosforilación de ERK1/2 y CREB en BLA nos muestra que no se experimenta aumento en ninguno de los grupos tras la recaída en el síndrome de abstinencia a morfina. En cuanto a PVN y a VTA, experimentan un aumento en la fosforilación de ERK1/2 y CREB en el grupo que recibió el estímulo físico y no fue tratado con respecto a los que recibieron el tratamiento antagonista. Por último, a nivel de DG, observamos un aumento significativo de la fosforilación de CREB. Conclusiones Nuestros resultados sugieren que la administración de naloxona a ratones tratados crónicamente con morfina indujo un síndrome de abstinencia con un efecto aversivo. También, llegamos a la conclusión de que la aplicación de un estímulo estresante (pinzamiento de cola) induce la recaída en el comportamiento aversivo en animales dependientes de morfina, que previamente habían extinguido el comportamiento asociado a dependencia, y que la administración de CP-154,526 y propranolol antagonizaron esta recaída. Por otro lado, observamos que esta recaída produce un aumento en la fosforilación de ERK y CREB en CeA, PVN, VTA y DG, y que tanto CP-154,526 como propranolol son capaces de antagonizarlo. No observamos, sin embargo, estos cambios a nivel de BLA y de NAc. Por último, de estos resultados se deduce que el CRF1R y el receptor β-adrenérgico forman parte del proceso de aprendizaje asociado a las recaídas en los comportamientos aversivos inducidos por estrés y que CP-154,526 y propranolol podrían ser tratamientos adecuados para la prevención en el consumo de sustancias en sujetos adictos.