[en] Grapevine declines are a set of diseases caused by fungi that produce premature decline and dieback of grapevines. The aim of this work was the study of these diseases and their associated fungi in Castilla y Le?n. During the years 2003-2007, a follow-up was realized in 18 vineyards of 6 Geographic Appellations of Castilla y Le?n, taking samples for their later analysis in the laboratory. In all Geographic Appellations studied there was an increase of grapevine declines from 3% in 2003 until 10% in 2007. From the samples analyzed were isolated and identified Phaeoacremonium aleophilum, Phaeomoniella chlamydospora, Botryosphaeriaceae (mainly Diplodia seriata, Diplodia mutila, Botryosphaeria dothidea and Neofusicoccum parvum) and Cylindrocarpon spp. The ribosomal DNA sequences of Cylindrocarpon spp. revealed the presence of N. macrodidyma, C. liriodendri y C. olidum.The most frequently specie isolated was P. chlamydospora, in order that, the variability of 35 strains of P. chlamydospora was studied with RAPDs and sequence comparisons of ITS, ?-tubulina and Elongation Factor 1?, being confirmed that P. chlamydospora is a specie with few variability among different strains. An identification system based in RealTime- PCR to detect P. chlamydospora was designed in base of ITS sequences. The system detect until 1 fg of DNA or 1 spore of P. chlamydospora.Finally the effect of three fungicides (Escudo?, carbendazim y flusilazol) was studied in 14 fungal species associated with grapevine decline, the study revealed that these products had a fungistatic effect mainly.

[es] Los decaimientos de la vid son un conjunto de enfermedades producidas por hongos que provocan la podredumbre de la madera y consecuentemente la p?rdida de vigor o incluso la muerte prematura de la planta. El objetivo de este trabajo fue el estudio de estas enfermedades, y sus hongos asociados, en Castilla y Le?n. Para ello, durante los a?os 2003-2007, se realiz? un seguimiento en 18 parcelas de vid de 6 denominaciones de origen de Castilla y Le?n, tomando muestras de cada una de ellas para su posterior an?lisis en el laboratorio. En todas las denominaciones de origen estudiadas se produjo un aumento de la incidencia de estas enfermedades, pasando de un 3% de incidencia en el a?o 2003 a un 10% en 2007. De las plantas analizadas se aislaron e identificaron mayoritariamente: Phaeoacremonium aleophilum, Phaeomoniella chlamydospora, Botryosphaeriaceae (principalmente Diplodia seriata, Diplodia mutila, Botryosphaeria dothidea y Neofusicoccum parvum) y Cylindrocarpon spp. La secuenciaci?n del ADN ribos?mico de los aislados identificados como Cylindrocarpon spp. puso de manifiesto la existencia de: N. macrodidyma, C. liriodendri y C. olidum. Teniendo en cuenta que P. chlamydospora fue una de las especies aisladas con mayor frecuencia, se estudi? la variabilidad gen?tica de 35 aislados de P. chlamydospora mediante RAPDs y por comparaci?n de las secuencias de tres regiones del genoma: ITS, ?-tubulina y factor de elongaci?n 1?, confirm?ndose la escasa variabilidad gen?tica existente entre los aislados de esta especie. A partir de las secuencias de la regi?n ITS se dise?? un sistema de identificaci?n mediante RTi-PCR que permite detectar hasta 1 fg de ADN o 1 espora de P. chlamydospora. Finalmente se ensay? la actividad de 3 fungicidas (Escudo?, carbendazima y flusilazol) sobre 14 especies de hongos asociadas a estas enfermedades observ?ndose que en general el efecto producido es fungist?tico y no fungicida.