[ca] Els patògens vegetals representen una gran amenaça per la seguretat alimentària, causant al voltant del 20-40% de pèrdues en la producció de cultius. En el context actual de canvi climàtic, els patògens, que evolucionen ràpidament, poden superar fàcilment la resistència proporcionada pels pesticides tradicionals. Per tant, entendre exhaustivament el sistema immunitari de les plantes és de gran importància per generar cultius resistents. Com a estratègia per combatre la invasió de patògens, les cèl·lules vegetals infectades desencadenen un tipus de mort cel·lular regulada coneguda com a resposta hipersensible (HR). La regulació de la HR és essencial per confinar la resposta immunitària exclusivament al lloc d'entrada del patogen. Actualment, el nostre coneixement de com es produeix la zonació de la mort cel·lular i com responen les cèl·lules veïnes a l'infecció és escàs. En el primer capítol de la meva tesi, he explorat com la HR es regula de manera espaciotemporal a nivell transcripcional a la planta model Arabidopsis thaliana. Aquests resultats ens van permetre identificar marcadors transcripcionals específics de la HR. A més, proporcionem a la comunitat una línia transgènica reportera fluorescent que mostra una forta senyal espaciotemporal en cèl·lules destinades a patir HR. L'ús d'aquesta línia reportera per tècniques específiques que involucrin estudis "òmics" de cèl·lules individuals permetrà una major comprensió del caracter zonal de la immunitat vegetal. En la darrera dècada, un nombre creixent d'estudis suggereixen que les proteases desenvolupen papers fonamentals durant la HR. En el segon capítol de la meva tesi, he estudiat el paper de la metacaspasa 1 (AtMC1) d'Arabidopsis, un tipus de cisteïna proteasa, en la immunitat vegetal. Originalment, es va descriure a la AtMC1 com un regulador positiu de la HR en plantes joves, per contra, les plantes adultes que no tenen AtMC1 mostren una activació constitutiva de la immunitat en condicions basals, actuant així com un regulador negatiu de la immunitat. Les mutacions en el lloc catalític de la proteasa desencadenen una autoimmunitat greu. A través d'una combinació d'experiments genètics, bioquímics i de biologia cel·lular, mostrem que la versió catalíticament inactiva d'AtMC1 actua com una plataforma d'acoblament per a components relacionats amb la immunitat, inclosos receptors i.possiblement, evita la seva correcta degradació. Basant-nos en aquestes dades i en la literatura anterior, inferim que l'AtMC1 podria controlar directa o indirectament l'homeostasi dels receptors d'immunitat. Per tant, interferir amb la funció de la proteasa wild-type té un impacte negatiu en el creixement de la planta. Finalment, he participat en una segona línia d'investigació on hem intentat entendre la funció d'AtMC1 en condicions d'estrés proteotòxic. AtMC1 és dinàmicament reclutada a condensats citoplasmàtics, coneguts com granuls d'estrés, regulant la senescència (Capítol 3). Per caracteritzar bioquímicament aquesta funció, vam eliminar alguns dominis predits com a altament propensos a l'agregació i vam aconseguir expressar i aïllar la proteasa de forma recombinant. Això ens va permetre demostrar que AtMC1 té una gran capacitat, evolutivament conservada, de netejar agregats de proteïnes, inclosos els formats per formes de proteïnes patològiques que causen malalties mortals en humans. La implementació de proteïnes recombinants amb alta activitat de neteja d'agregats pot obrir noves vies per a la intervenció terapèutica en malalties causades per proteïnes mal plegades. En els darrers cinc anys, la comunitat científica de plantes ha presenciat un gran progrés en la nostra comprensió del sistema immunitari vegetal gràcies a estudis mecanístics dels receptors d'immunitat i vies de senyalització que regulen i condueixen la HR. Aprofitar aquest coneixement per aconseguir resistència a malalties en cultius bàsics i econòmicament importants serà una prioritat en els pròxims anys. Espero que els treballs presentats en aquesta tesi puguin contribuir a aconseguir aquests ambiciosos objectius.

[es] Los patógenos vegetales representan una gran amenaza para la seguridad alimentaria, causando alrededor del 20-40% de pérdidas en la producción de cultivos. En un contexto de cambio climático, los patógenos que evolucionan rápidamente pueden superar fácilmente la resistencia proporcionada por los pesticidas tradicionales. En consecuencia, comprender exhaustivamente el sistema inmune de las plantas es de suma importancia para generar cultivos resistentes. Como estrategia para contrarrestar la invasión de patógenos, las células vegetales infectadas desencadenan un tipo de muerte celular regulada conocida como la respuesta hipersensible (HR). La regulación de la HR es esencial para confinar la respuesta inmune exclusivamente al lugar de ingreso del patógeno. Sin embargo, nuestra comprensión de cómo se logra la zonificación de la muerte celular y cómo las células vecinas responden a la infección es fragmentaria. En el primer capítulo de mi tesis, exploro cómo la HR se regula espacio-temporalmente a nivel transcripcional en la planta modelo Arabidopsis thaliana. Estos resultados nos permitieron identificar indicadores transcripcionales genuinos de la HR. Además, proporcionamos a la comunidad una línea transgénica reportera fluorescente que muestra un fuerte señal espacio-temporal en células destinadas a sufrir HR. El uso de esta línea reportera para técnicas específicas que involucren estudios "ómicos" de células individuales permitirá una mayor disección del aspecto espacial de la inmunidad vegetal. En la última década, evidencias crecientes sugieren que las proteasas desempeñan papeles cruciales durante la HR. En el segundo capítulo de mi tesis, intento desentrañar el papel de la metacaspasa 1 (AtMC1) de Arabidopsis, un tipo de cisteína proteasa, en la inmunidad vegetal. Aunque originalmente se describió como un regulador positivo de la HR en plantas jóvenes, plantas adultas que carecen de AtMC1 exhiben una activación constitutiva de la inmunidad en condiciones basales, actuando por consiguiente como un regulador negativo de la inmunidad. Mutaciones en el sito catalítico de la proteasa desencadenan una autoinmunidad grave. A través de una combinación de experimentos genéticos, bioquímicos y de biología celular, mostramos que la versión cataliticamente inactiva de AtMC1 actúa como un sitio de acoplamiento pegajoso para componentes relacionados con la inmunidad, incluidos receptores inmunes, posiblemente evitando su oportuna degradación. En base a estos datos y a la literatura previa, inferimos que AtMC1 podría controlar directa o indirectamente la homeostasis de los receptores inmunes. Por lo tanto, interferir con la función de la proteasa wild-type tiene impactos negativos en el crecimiento de la planta. Finalmente, participé en una segunda línea de investigación en la que intentamos entender la función de AtMC1 ante el estrés proteotóxico. AtMC1 es dinámicamente reclutada a condensados citoplásmicos altamente conservados, conocidos como granulos de estrés, regulando la senescencia (Capítulo 3). Para caracterizar bioquímicamente esta función, eliminamos ciertos dominios previstos de ser altamente propensos a la agregación y logramos expresar e aislar la proteasa de forma recombinante. Esto nos permitió demostrar que AtMC1 tiene una gran capacidad, evolutivamente conservada, de limpiar agregados de proteínas, incluidos los formados por formas de proteínas patológicas que causan enfermedades mortales en los humanos. La implementación de proteínas recombinantes con alta actividad de limpieza de agregados puede abrir nuevas vías para la intervención terapéutica en enfermedades causadas por proteínas mal plegadas. En los últimos cinco años, la comunidad científica de plantas ha presenciado un gran avance en nuestra comprensión del sistema inmune vegetal gracias a estudios mecanísticos en receptores inmunes y vías de señalización que regulan y conducen a la HR. Aprovechar este conocimiento para lograr resistencia a enfermedades en cultivos básicos y económicamente importantes será una prioridad en los próximos años. Espero que los trabajos presentados en esta tesis puedan contribuir a futuros esfuerzos para lograr esos ambiciosos objetivos.