[es] Las ß-galactosidasas son enzimas hidrolasas que catalizan la hidrólisis de ?-galactósidos en sus monosacáridos correspondientes. Debido a esta capacidad, estas proteínas son muy importantes en las industrias alimentaria, farmacéutica y clínica. En esta tesis, la ß-galactosidasa de K. lactis fue clonada en una cepa de Saccharomyces cerevisiae, expresada, purificada y cristalizada. Su estructura en estado libre y la su complejo con el producto galactosa fueron determinadas a 2,75 y 2,8 Å, respectivamente. La ß- galactosidasa de K. lactis está organizada en 5 dominios en un patrón que está conservado en otras enzimas procariotas de la familia GH2, aunque presenta dos inserciones largas en los dominios 2 (264-274) y 3 (420-443) que son únicas y parecen estar relacionadas con su oligomerización y especificidad. El tetrámero de la ß-galactosidasa de K. lactis está formado por un par de dímeros, presentando una mayor energía de disociación la forma de dímero que su forma tetramérica, lo que puede explicar el por qué existe un equilibrio en solución entre la forma dimérica y tetramérica de la enzima. Por otro lado, se ha construido, expresado y caracterizado una ß-galactosidasa híbrida entre las ß-galactosidasas de K. lactis - Aspergillus niger. La proteína híbrida entre las ß-galactosidasas de K. lactis - A. niger aumenta el rendimiento de la proteína secretada al medio y las modificaciones introducidas en la construcción le han conferido características bioquímicas de interés biotecnológico. Se estudió además la producción de esta proteína híbrida en un cultivo continuo inmovilizado utilizando "spent grains" (un subproducto de la industria cervecera) como material de inmovilización en un fermentador tipo "Airlift". Finalmente, se estudió la expresión y producción de la ß-galactosidasa de A. niger en una cepa de S. cerevisiae, y se usaron técnicas de evolución dirigida para modificar el pH óptimo de la proteína hacia un pH más neutro.

[gl] As ß-galactosidasas son hidrolasas, enzimas que catalizan a hidrólise dos ß-galactósidos nos seus monosacáridos correspondentes. Debido a esta capacidade, estas proteínas son moi importantes na industria alimentaria, farmacéutica e clínica. Nesta tese, a ß-galactosidasa de K. lactis foi clonada nunha cepa de Saccharomyces cerevisiae, expresada, purificada e cristalizada. As estruturas en estado libre e no complexo co produto galactosa foron determinadas a 2,75 e 2,8 Å, respectivamente. A ß-galactosidasa de K. lactis está organizada en 5 dominios nun patrón conservado noutras enzimas procariotas da familia GH2, pero ademáis presenta dúas insercións longas nos dominios 2 (264-274) e 3 (420-443) que son únicas e parecen estar relacionadas coa súa oligomerización e especificidade. O tetrámero da ß-galactosidasa de K. lactis está formado por un par de dímeros, tendo unha maior enerxía de disociación a forma de dímero que a súa forma tetramérica, o que pode explicar o por qué do equilibrio existente en solución entre a forma dimérica e a forma tetramérica. Por outra banda, construiuse unha proteína híbrida entre as ß-galactosidasas de K. lactis e Aspergillus niger, que foi expresada e caracterizada. A proteína híbrida entre as ß-galactosidasas de K. lactis – A. niger aumenta o rendemento da proteína secretada ao medio e coas modificacións introducidas na construción conseguíronse características bioquímicas de gran interese biotecnolóxico. Estudouse ademáis a produción da ß-galactosidasa híbrida K. lactis-A. niger nun cultivo continuo inmovilizado nun fermentador tipo "Airlift" usando como material de inmobilización "spent grains" (un subproduto da industria cervexeira). Finalmente, foi estudada a expresión e produción da ß-galactosidasa de A. niger nunha cepa de S. cerevisiae, e usáronse técnicas de evolución dirixida para modificar o pH óptimo da proteína hacia un pH máis neutro.