[en] The yeast cell wall is composed of a series of layers, among which is chitin. This compound, although the minority, is essential to the viability of Saccharomyces cerevisiae. Is the catalytic subunit Chs3 activity Quit?n synthase III (QSIII) and is responsible for the synthesis of most of the chitin present in the cell wall. This protein has a highly complex regulation will allow localized in the neck during very discrete yeast cell cycle. Such regulation occurs at a post translational level and is mediated by a series of proteins which have been termed Chs (Chitin synthesis). In their absence Chs3 is unable to reach the plasma membrane, being retained in intracellular compartments secretory pathway depending mutant. This regulation so complex Chs3 has made has been widely studied as a model of regulated intracellular protein trafficking. In this paper we set as its first objective to deepen the study of the structure-function Chs3 different domains. Chs3 seen that a protein capable of forming dimers in the endoplasmic reticulum through its N-terminal. Acquiring by quaternary structure Chs3 is a highly regulated process, so that the monomers escaping the endoplasmic reticulum are reimbursed in COPI vesicles participating in this Rer1 protein quality control system. Furthermore, Chs3 oligomerization is important for proper conformation of chitin crystallization. Moreover, the C-terminal domain has three functions: it is necessary for interaction with the ex?mero Chs6 subunit, an engine output required for the Chs3 from the trans-Golgi Network (TGN) to the plasma membrane, half the return Chs3 the monomer from the cis-Golgi to the ER in COPI vesicles, and is essential for catalytic activity itself. Finally, the central globular domain, where resides the catalytic center is also involved in the regulation of intracellular trafficking Chs3. A second objective was to investigate the role of cHS4, the active protein that localizes to the plasma membrane Chs3. Previous work in the laboratory had shown that cHS4 Chs3 stabilizes the neck of the plasma membrane preventing their endocytosis. In this paper we described that this is possible thanks to the existence of a compartment in the neck, which resides Chs3 and where other plasma membrane proteins that are excluded are polarized. This compartment is defined by two concentric rings with the corresponding septin ring and a ring formed by the endocytic machinery which provides the first and peripherally in the form of patches. Chs3 be transported in a polarized manner into membrane region delimited between the two rings, cHS4 mediating anchoring to the septin. This anchor Chs3 prevent access of the endocytic machinery disposed at the periphery. Eventually occur release of molecules Chs3 septin so that could diffuse the compartment delimited by the collar, to contact patches endocytosis mediating internalization Chs3. Hyperpolarized growth during conjugation, however, there is a decoupling between the septin and endocytosis region, so that the polarization of Chs3 during conjugation is independent of endocytosis.

[es] La pared celular de levaduras est? compuesta por una serie de capas, entre las cuales se encuentra la quitina. Este compuesto, a pesar de ser minoritario, es esencial para la viabilidad de Saccharomyces cerevisiae. Chs3 es la subunidad catal?tica de la actividad Quit?n Sintasa III (QSIII) y es responsable de la s?ntesis de la mayor parte de la quitina presente en la pared celular. Esta prote?na presenta una regulaci?n muy compleja que va a permitir que se localice en el cuello de la levadura durante momentos muy discretos del ciclo celular. Dicha regulaci?n tiene lugar a nivel a nivel postraduccional y es mediada por una serie de prote?nas que se han denominado Chs (de Chitin synthesis). En ausencia de las mismas Chs3 es incapaz de alcanzar la membrana plasm?tica, quedando retenida en diferentes compartimentos intracelulares de la ruta de secreci?n dependiendo del mutante. Esta regulaci?n tan compleja de Chs3 ha hecho que haya sido ampliamente estudiada como modelo del tr?fico intracelular regulado de prote?nas. En este trabajo nos propusimos como primer objetivo profundizar en el estudio de la estructura-funci?n de los distintos dominios de Chs3. Hemos visto que Chs3 es una prote?na capaz de formar d?meros en el ret?culo endoplasm?tico a trav?s de su extremo N-terminal. La adquisici?n de la estructura cuaternaria por parte de Chs3 es un proceso altamente regulado, de manera que los mon?meros que se escapan del ret?culo endoplasm?tico son devueltos al mismo en ves?culas COPI, participando la prote?na Rer1 en este sistema de control de calidad. Adem?s, la oligomerizaci?n de Chs3 es una conformaci?n importante para la correcta cristalizaci?n de la quitina. Por otra parte, el dominio C-terminal desempe?a tres funciones: es necesario para la interacci?n con la subunidad Chs6 del ex?mero, una maquinaria necesaria para la salida de Chs3 desde el trans-Golgi Network (TGN) hacia la membrana plasm?tica; media el retorno de los mon?mero de Chs3 desde el cis-Golgi hacia el ret?culo endoplasm?tico en ves?culas COPI; y es imprescindible para la propia actividad catal?tica. Finalmente, el dominio globular central, donde reside el centro catal?tico, tambi?n est? implicado en la regulaci?n del tr?fico intracelular de Chs3. Un segundo objetivo ha sido profundizar en la funci?n de Chs4, la prote?na que activa y localiza a Chs3 en la membrana plasm?tica. Trabajo previo en el laboratorio hab?a demostrado que Chs4 estabiliza a Chs3 en el cuello de la membrana plasm?tica impidiendo su endocitosis. En este trabajo hemos descrito que esto es posible gracias a la existencia de un compartimento en el cuello, en el cual reside Chs3 y donde otras prote?nas de la membrana plasm?tica que no est?n polarizadas se encuentran excluidas. Este compartimento est? definido por dos anillos conc?ntricos, correspondientes con el anillo de septinas y un anillo constituido por la maquinaria endoc?tica que se dispone perifericamente al primero y en forma de parches. Chs3 ser?a transportada de forma polarizada hacia la regi?n de membrana delimitada entre ambos anillos, mediando Chs4 el anclaje a las septinas. Este anclaje prevendr?a el acceso de Chs3 a la maquinaria endoc?tica dispuesta en la periferia. Eventualmente, se producir?a la liberaci?n de las mol?culas Chs3 de las septinas, de manera que podr?an difundir por el compartimento delimitado en el cuello, hasta entrar en contacto con los parches de endocitosis que median la internalizaci?n de Chs3. Durante el crecimiento hiperpolarizado de conjugaci?n, sin embargo, hay un desacoplamiento entre las septinas y la regi?n de endocitosis, de manera que la polarizaci?n de Chs3 durante la conjugaci?n es independiente de endocitosis.