[en] Gene silencing is a cellular mechanism by which gene expression is inhibited in eukaryotic organisms. It is present in both endogenous and exogenous control nucleic acids and is classified as transcriptional gene silencing (TGS) and posttranscriptional gene silencing (PTGS). In both cases, the main component responsible for giving the silencing machinery target specificity is the small RNA, and it can be classified into microRNA (miRNA) and small interfering RNA (siRNA). For plant viruses, the ability to access the phloem vascular system is essential in order to establish a successful infection, but this access is highly regulated. In this context, gene silencing is an important defense mechanism of plants against viruses. Previously, in other projects at the laboratory, the specific cell types which the pathogens preferentially target for the suppression of silencing in the infection were identified. In this project, we wanted to complement the information obtained and it was planned with the objective of studying the expression of seven genes (DCL3, RDR1, RDR2, RDR6, SDN1, SGS3 and NRPD1A) of the gene silencing machinery in Arabidopsis thaliana, determining the specificity of cell types. It was done by obtaining constructions with the GreenGate method to subsequently obtain transgenic plants and thus be able to observe the activity of the promoter and the 3'UTR region of the chosen genes, regulating the expression of the GUS reporter gene. Finally, with the study of gene expression at three timepoints (11, 13 and 31 days), positive results have been seen for 4 of the genes studied: RDR1, RDR6, NRPD1A and SDN1, where expression could be observed mainly in the vascular bundles, although expression was also seen in apical and lateral meristems, ovules and anthers. Therefore, it was confirmed that there is cell-type specificity for parts of the gene silencing machinery, mainly in the vasculature.

[es] El silenciamiento génico es un mecanismo celular mediante el cual se inhibe la expresión de genes en organismos eucariontes. Se encuentra presente en el control de ácidos nucleicos tanto endógenos como exógenos y se clasifica en silenciamiento génico transcripcional (transcriptional gene silencing, TGS) y postranscripcional (postranscriptional gene silencig, PTGS). En ambos casos, el componente principal encargado de dar la especificidad de diana a la maquinaria de silenciamiento es el RNA de pequeño tamaño, y se puede clasificar en microRNAs (miRNA) y RNA pequeño de interferencia (siRNA). Para los virus de plantas, la capacidad de acceder al floema vascular es esencial para poder establecer una correcta infección, pero este acceso está altamente regulado. En este contexto el silenciamiento génico es un mecanismo importante de defensa de las plantas contra virus. En proyectos anteriores al laboratorio, se identificaron los tipos celulares específicos a los cuales los patógenos se dirigen preferentemente para la supresión del silenciamiento en la infección. En este proyecto se quiso complementar la información obtenida y se planteó con el objetivo de estudiar la expresión de siete genes (DCL3, RDR1, RDR2, RDR6, SDN1, SGS3 y NRPD1A) de la maquinaria del silenciamiento génico en Arabidopsis thaliana, determinando la especificidad de tipos celulares. Se hizo mediante la obtención de construcciones con el método GreenGate para posteriormente obtener plantas transgénicas y así poder observar la actividad del promotor y la región 3'UTR de los genes elegidos regulando la expresión del gen reportero GUS. Finalmente, con el estudio de la expresión génica a los 11, 13 y 31 días de crecimiento, se han visto resultados positivos para 4 de los genes estudiados: RDR1, RDR6, NRPD1A y SDN1, donde se pudo observar principalmente expresión en los fajos vasculares, aunque también se vio expresión en meristemas apicales y laterales, óvulos y anteras. Por eso se confirmó que hay especificidad de tipo celular por partes de componentes de la maquinaria del silenciamiento génico, principalmente en vasculatura