列文虎克喺荷蘭嘅德爾夫特出世。佢喺年幼嗰陣失去咗佢嘅親生父親，之後佢媽媽改嫁俾畫家jacobjanszmolijn。當佢繼父喺1648年去世嗰陣，列文虎克就去咗阿姆斯特丹做一個亞麻布商嘅學徒。佢喺20歲嗰陣返返德爾夫特，開始賣亞麻布商同雜貨。